KR102090969B1 - Ｂ 세포-매개 염증 질환의 치료 방법 - Google Patents

Abstract

본원에서는, 소정의 자가면역 질환 및 쇼그렌 증후군과 같은 염증 질환을 비롯하여, CXCL13 발현과 관련된 질환을 치료하는 방법을 제공한다. 본 방법은 CXCL13 활성을 저해하는 제제를 유효량으로 이를 필요로 하는 개체에게 투여하는 단계를 포함한다. 본원에서 예시되는 본 발명의 측면에 따르면, CXCL13에 특이적으로 결합하는 분리된 결합 분자를 유효량으로 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 개체에서 B-세포-매개의 염증 병태를 치료, 예방 또는 악화를 저하하는 방법을 제공하며, 상기 분자는 CXCL13 활성을 방지하거나 또는 저해한다.

Description

Ｂ 세포-매개 염증 질환의 치료 방법{METHODS FOR THE TREATMENT OF B CELL-MEDIATED INFLAMMATORY DISEASES}

EFS-WEB를 통해 텍스트 파일로 제출한 서열 목록에 대한 언급

서열 목록의 공식 복사본은, 2013년 2월 28일에 만들어진 크기 41,282 바이트의 파일명 430529SEQLIST.TXT의 ASCII 포맷의(formatted) 서열 목록으로서, EFS-Web을 통해 전자적으로 제출되며, 명세서와 함께 출원된다. 상기 ASCII 포맷의 문서에 포함된 서열 목록은 본 명세서의 일부이며, 그 전체가 원용에 의해 본 명세서에 포함된다.

기술 분야

본 발명은 일반적으로 염증 질환, 상세하게는 B 세포-매개의 염증 질환의 치료에 관한 것이다.

자가항체 (자가-항원에 대한 항체)를 생산하는 잠재력을 가진 B-세포의 생성은 정상적인 생리학적 조건 하에서는 보편적이다. 그러나, 이러한 천연적인 자가항체는, 세포 표면의 항원보다는 가용성 자가 항원에 대해 스펙트럼이 넓은 반응성과 강한 선호도를 나타내는 저 친화성 IgM 항체이다 (예를 들어, Dichiero et al ., J. Immunol. 134(2):765-771 (1985); Cote et al ., Proc . Natl . Acad . Sci 83:2959-2963 (1986) 참조). 자가반응성 저-친화성 B-세포는 세포자살을 겪게 되며, 따라서, 건강한 개체를 위협할 가능성은 없을 것이다.

일부 경우, 자가항체를 생산하는 B 세포의 수적 증가, 이들의 특정 영역으로의 동원, 또는 생산되는 자가항체의 친화성 증가는 자가면역 질환의 발병을 유도할 수 있다. 소정의 자가면역 질환들은, 이러한 질환의 발병 및 질병 상태의 유지에 기여하는 것으로 여겨지는 특정 자가항체의 존재가 특징적이다.

쇼그렌 증후군(Sjoegren's syndrome; SS)은 희귀한 자가면역 질환으로서, 일반 개체군에서 대략 0.2% 내지 0.7%로 발병한다. 전형적으로, 이는 40세 내지 60세 사이에 그 증상이 나타나며, 약 9:1의 비율로 여성에게서 두드러진다. 특히, 이 질환은 원발성 형태(primary from) 및 속발성 형태(secondary form) 모두 발생한다. 원발성 형태는 침샘과 눈물샘에서 주로 나타나며, 속발성 형태는 류마티스 관절염 (RA) 및 전신 홍반성 낭창 (SLE)과 같은 다른 자가면역 결합 조직 장애와 함께 발생한다. 원발성 및 속발성 SS (각각 pSS 및 sSS)를 둘 다 앓고 있는 환자는 구강 및 눈 모두에 상기 질환의 징후를 가질 수 있다. SS 유도성 구강 건조 (구강 건조증) 및 안구 건조 (안구건조증)는 환자의 삶의 질에 상당한 악영향을 미치지만, 증가하는 문헌들은 근골격, 폐, 및 신장의 징후, 피부 병변, 백혈구 파열성 맥관염(leukocytoclastic vasculitis), 레이노이드 현상(Raynaud's phenomenon), 혈액학적 합병증(hematologic complication), 간 연관 질환(liver involvement), 및 B 세포 림프종을 비롯하여, 질환의 건강 약화 측면들을 추가로 기술하고 있다. 따라서, 두 가지 형태의 질환들은 병에 걸린 환자의 이환율(morbidity) 및 사망률에 유의한 영향을 미친다. Voulgarelis et al., Arthritis Rheum (1999) 42:1765-1772; Garcia-Carrasco et al., J Rheumatol (2002)29:726-730; Ramos-Casals et al., Medicine (Baltimore) (2002) 81:281-292; Fox, Lancet (2002) 366:321-331; Ekstroem et al, Blood (2008) 111:4029-4038; 및 Delalande et al., Medicine (Baltimore) (2008) 83:280-291을 참조한다. 이에, 쇼그렌 증후군, 및 기타 염증 질환과 같은 자가면역 질환의 치료 방법에 대한 개발이 요구되고 있다.

본원에서는, 소정의 자가면역 질환 및 염증 질환을 비롯하여 CXCL13 발현과 관련된 질환의 치료 방법을 제공한다. 본원에서 예시되는 본 발명의 측면에 따라, CXCL13의 활성을 방지하거나 또는 저해하는 제제를 유효량으로 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 개체에서 B-세포-매개의 염증 병태를 치료하거나, 예방하거나, 또는 악화를 저하하는 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 상기 제제는 CXL13과 이의 수용체 (예를 들어, CXCR5 또는 CXCR3) 간의 상호작용을 저해한다. 소정의 구현예에서, 상기 제제는 CXCL13에 특이적으로 결합하는 분리된 결합 분자이다. 다른 구현예에서, 상기 제제는, CXCL13 수용체 (예를 들어, CXCR5 또는 CXCR3)에 특이적으로 결합하거나 또는 가용성 형태의 CXCL13 수용체 (예를 들어, CXCR5 또는 CXCR3)인 분리된 결합 분자이다.

본원에서 예시되는 소정의 측면에서, CXCL13의 활성을 예방하거나 또는 저해하는 제제의 투여를 통해 치료되는 B-세포 매개 염증 병태는 쇼그렌 증후군이다.

하기의 구현예들은 본 발명에 포함된다:

1. CXCL13 활성을 저해하는 제제를 유효량으로 이를 필요로 하는 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 개체에서 쇼그렌 증후군을 치료하는 방법.

2. 구현예 1에 있어서, 상기 제제가 CXCR5에 특이적으로 결합하는 결합 분자인 것을 특징으로 하는, 방법.

3. 구현예 1에 있어서, 상기 제제가 CXCL13에 특이적으로 결합하는 결합 분자인 것을 특징으로 하는, 방법.

4. 구현예 2 또는 3에 있어서, 상기 결합 분자가 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법.

5. 구현예 4에 있어서, 상기 항체가 키메라 항체, 인간 항체, 또는 인간화된 항체인 것을 특징으로 하는, 방법.

6. 구현예 4 또는 5에 있어서, CXCL13에 특이적으로 결합하는 상기 항체 또는 항원-결합 단편이, 서열 번호 10 또는 14로 표시된 아미노산 서열과 90% 이상의 서열 동일성을 가지는 가변 중쇄 (VH) 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법.

7. 구현예 4 또는 5에 있어서, CXCL13에 특이적으로 결합하는 상기 항체 또는 항원-결합 단편이, 20개 이하의 보존적 아미노산 치환을 제외하고는, 서열 번호 10 또는 14로 표시된 서열과 동일한 아미노산 서열을 가지는 가변 중쇄 (VH) 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법.

8. 구현예 6 또는 7에 있어서, CXCL13에 특이적으로 결합하는 상기 항체 또는 항원-결합 단편이, 서열 번호 14로 표시된 서열을 가지는 VH 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법.

9. 구현예 4 내지 8 중 어느 한 구현예에 있어서, CXCL13에 특이적으로 결합하는 상기 항체 또는 항원-결합 단편이, 서열 번호 15, 19, 또는 21로 표시된 아미노산 서열과 90% 이상의 서열 동일성을 가지는 가변 경쇄 (VL) 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법.

10. 구현예 4 내지 8 중 어느 한 구현예에 있어서, CXCL13에 특이적으로 결합하는 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편이, 20개 이하의 보존적 아미노산 치환을 제외하고는, 서열 번호 15, 19, 또는 21로 표시된 서열과 동일한 아미노산 서열을 가지는 가변 경쇄 (VL) 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법.

11. 구현예 9 또는 10에 있어서, CXCL13에 특이적으로 결합하는 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편이, 서열 번호 19로 표시된 서열을 가지는 VL 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법.

12. 구현예 4 또는 5에 있어서, CXCL13에 특이적으로 결합하는 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편이, 하기 서열들로 이루어진 군으로부터 선택되는 VH 및 VL 서열과 90% 이상 동일한 아미노산 서열을 가지는 가변 중쇄 (VH) 도메인 및 가변 경쇄 (VL) 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법:

a) 각각 서열 번호 14 및 서열 번호 19;

b) 각각 서열 번호 14 및 서열 번호 21;

c) 각각 서열 번호 10 및 서열 번호 15.

13. 구현예 4 또는 5에 있어서, CXCL13에 특이적으로 결합하는 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편이, 각각 20개 이하의 보존적 아미노산 치환을 제외하고는, 하기 서열들로 이루어진 군으로부터 선택되는 VH 및 VL 서열과 동일한 아미노산 서열을 가지는 가변 중쇄 (VH) 도메인 및 가변 경쇄 (VL) 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법:

a) 각각 서열 번호 14 및 서열 번호 19;

b) 각각 서열 번호 14 및 서열 번호 21;

c) 각각 서열 번호 10 및 서열 번호 15.

14. 구현예 4 또는 5에 있어서, CXCL13에 특이적으로 결합하는 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편이, 하기 서열들로 이루어진 군으로부터 선택되는 VH 및 VL 서열과 동일한 아미노산 서열을 가지는 가변 중쇄 (VH) 도메인 및 가변 경쇄 (VL) 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법:

a) 각각 서열 번호 14 및 서열 번호 19;

b) 각각 서열 번호 14 및 서열 번호 21;

c) 각각 서열 번호 10 및 서열 번호 15.

15. 제9항에 있어서, CXCL13에 특이적으로 결합하는 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편이, 서열 번호 14로 표시된 서열을 가지는 VH 도메인 및 서열 번호 19로 표시된 서열을 가지는 VL 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법.

16. 구현예 4 또는 5에 있어서, CXCL13에 특이적으로 결합하는 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편이, 하기 상보성 결정 영역 (CDR)들 중 하나 이상을 가지는 VH 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법:

a) 서열 번호 11과 90% 이상의 서열 동일성을 가지는 CDR1;

b) 서열 번호 12와 90% 이상의 서열 동일성을 가지는 CDR2; 및

c) 서열 번호 13과 90% 이상의 서열 동일성을 가지는 CDR3.

17. 구현예 4 또는 5에 있어서, CXCL13에 특이적으로 결합하는 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편이, 하기 상보성 결정 영역 (CDR)들 중 하나 이상을 가지는 VH 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법:

a) 서열 번호 11과, 2개 이하의 아미노산 치환을 제외하고는, 동일한 아미노산 서열을 가지는 CDR1;

b) 서열 번호 12와, 4개 이하의 아미노산 치환을 제외하고는, 동일한 아미노산 서열을 가지는 CDR2;

c) 서열 번호 13과, 4개 이하의 아미노산 치환을 제외하고는, 동일한 아미노산 서열을 가지는 CDR3.

18. 구현예 16 또는 17에 있어서, CXCL13에 특이적으로 결합하는 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편이, 서열 번호 11로 표시된 서열을 가지는 CDR1, 서열 번호 12로 표시된 서열을 가지는 CDR2, 및 서열 번호 13으로 표시된 서열을 가지는 CDR3을 포함하는 VH 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법.

19. 구현예 4, 5, 또는 16 내지 18 중 어느 한 구현예에 있어서, CXCL13에 특이적으로 결합하는 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 하기 상보성 결정 영역 (CDR)들 중 하나 이상을 가지는 VL 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법:

a) 서열 번호 17 또는 20과 90% 이상의 서열 동일성을 가지는 CDR1;

b) 서열 번호 17과 90% 이상의 서열 동일성을 가지는 CDR2; 및

c) 서열 번호 18과 90% 이상의 서열 동일성을 가지는 CDR3.

20. 구현예 4, 5, 또는 16 내지 18 중 어느 한 구현예에 있어서, CXCL13에 특이적으로 결합하는 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 하기 상보성 결정 영역 (CDR)들 중 하나 이상을 가지는 VL 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법:

a) 서열 번호 17 또는 20과, 4개 이하의 아미노산 치환을 제외하고는, 동일한 아미노산 서열을 가지는 CDR1;

b) 서열 번호 17과, 2개 이하의 아미노산 치환을 제외하고는, 동일한 아미노산 서열을 가지는 CDR2;

c) 서열 번호 18과, 2개 이하의 아미노산 치환을 제외하고는, 동일한 아미노산 서열을 가지는 CDR3.

21. 구현예 19 또는 20에 있어서, CXCL13에 특이적으로 결합하는 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편이, 서열 번호 20으로 표시된 서열을 가지는 CDR1, 서열 번호 17로 표시된 서열을 가지는 CDR2, 및 서열 번호 18로 표시된 서열을 가지는 CDR3을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법.

22. 구현예 4 내지 21 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 항체가 IgG1 카파(kappa) 항체인 것을 특징으로 하는, 방법.

23. 구현예 22에 있어서, 상기 항체가, VH 도메인 내에 인간 IgG1 불변부, 및 VL 도메인의 상기 불변부 내에 인간 카파 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법.

24. 구현예 4에 있어서, CXCL13에 특이적으로 결합하는 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는, 방법:

a) 모노클로날 항체 5261;

b) 모노클로날 항체 5378;

c) 모노클로날 항체 5080;

d) 모노클로날 항체 1476;

e) 모노클로날 항체 3D2;

f) 상기 a)-e) 중 임의의 하나의 모노클로날 항체의 키메라 형태 또는 인간화된 형태;

g) 상기 a)-e)로 이루어진 군으로부터 선택되는 기준 모노클로날 항체(reference monoclonal antibody)와 동일한 CXCL13 에피토프에 결합하는 항체 또는 항원-결합 단편 ;

h) 상기 a)-e)로 이루어진 군으로부터 선택되는 기준 모노클로날 항체를 경쟁적으로 저해하는 항체 또는 항원-결합 단편; 및

i) 상기 a)-h) 중 임의의 하나의 항원-결합 단편.

25. 구현예 24에 있어서, CXCL13에 특이적으로 결합하는 상기 항체가 모노클로날 항체 5261, 모노클로날 항체 5378, 모노클로날 항체 5080, 모노클로날 항체 1476, 및 모노클로날 항체 3D2로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는, 방법.

26. 구현예 25에 있어서, CXCL13에 특이적으로 결합하는 상기 항체가 모노클로날 항체 5378인 것을 특징으로 하는, 방법.

27. 구현예 4 내지 24 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 항원-결합 단편이 Fab, F(ab')₂, Fv, 및 scFv로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는, 방법.

28. 구현예 1에 있어서, 상기 제제가 CXCR5 또는 CXCR3의 가용성 형태인 것을 특징으로 하는, 방법.

29. 구현예 1 내지 28 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 제제가 CXCL13과 CXCL13 수용체의 상호작용을 저해하는 것을 특징으로 하는, 방법.

30. 구현예 29에 있어서, 상기 CXCL13 수용체가 CXCR5 또는 CXCR3인 것을 특징으로 하는, 방법.

31. 구현예 1 내지 30 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 방법이 상기 개체에서 쇼그렌 증후군을 예방하는 것을 특징으로 하는, 방법.

32. 구현예 1 내지 31 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 제제가 약학적으로 허용가능한 담체와 함께 투여되는 것을 특징으로 하는, 방법.

33. 개체에서 쇼그렌 증후군을 치료하는 방법으로서,

CXCL13에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 유효량으로 이를 필요로 하는 개체에게 투여하는 단계를 포함하며,

상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 CXCL13 활성을 저해하는 것을 특징으로 하는, 방법.

34. 구현예 33에 있어서, CXCL13에 특이적으로 결합하는 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편이, 서열 번호 14로 표시된 서열을 가지는 가변 중쇄 도메인 및 서열 번호 19로 표시된 서열을 가지는 가변 경쇄 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법.

35. 구현예 33에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 CXCL13과 CXCR5의 상호작용을 저해하는 것을 특징으로 하는, 방법.

36. 구현예 1 내지 35 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 개체가 동물인 것을 특징으로 하는, 방법.

37. 구현예 33에 있어서, 상기 동물이 포유류인 것을 특징으로 하는, 방법.

38. 구현예 37에 있어서, 상기 포유류가 인간인 것을 특징으로 하는, 방법.

본 발명의 이들 및 다른 측면들은 후술하는 본 발명의 상세한 설명에 보다 상세히 개시되어 있다.

도 1a는, 4주령에 시작하여 매주 3회씩 12주간 이소타입의 대조군 항체 (좌측 패널) 또는 항-CXCL13 항체 (우측 패널)로 처리한 암컷 NOD/ShiLtJ (NOD) 마우스의 침샘 샘플을 헤마톡실린 및 에오신 (H&E)으로 염색한 것이다. 16주령에 안락사시키고, 분석을 위해 타액 조직을 적출하였다. 도 1b는, 이소타입 대조군 및 항-CXCL13 항체로 처리한 샘플에서 계수한, 턱밑샘 조직(submandibular tissue) 내 림프구 병소(lymphocytic foci)의 수를 도시한 것이다.
도 2는, 상기와 같이 이소타입의 대조군 항체 또는 항-CXCL13 항체로 처리한 후, 마우스의 타액 조직에서의 CXCR5 mRNA의 발현을 도시한 것이다.
도 3은, 상기와 같이 이소타입의 대조군 항체 또는 항-CXCL13 항체로 처리한 후, 마우스의 타액 조직에서의 CD19 mRNA의 발현을 도시한 것이다.
도 4는, 상기와 같이 이소타입의 대조군 항체 또는 항-CXCL13 항체로 처리한 후, 마우스의 타액 조직에서의 CD4 mRNA의 발현을 도시한 것이다.

CXCL13 (또는 ANGIE, BLC, BLR1L, ANGIE2, 또는 Scyb13)으로도 알려져 있는 항상성 B 세포-유인성 케모카인 1 (B Cell-Attracting Chemokine 1; BCA-1)은 여포성 수지상 세포 (FDC) 및 대식세포에 의해 2차 림프 기관 (예를 들어, 비장, 림프절, 및 페이에르판(Peyer's patches))에서 구성적으로 발현된다. 이에 대해서는, Gunn et al ., Nature 391:799-803 (1998) 및 Carlsen et al ., Blood 104(10):3021-3027 (2004)를 참조한다. CXCL13은 주로 G-단백질-연결된 CXCR5 수용체 (버킷 림프종 수용체 1)를 통해 작용한다. CXCR5는 예를 들어, 성숙 B 림프구, CD4+ 여포성 헬퍼 T 세포 (Thf 세포), CD8+ T 세포의 마이너 서브셋(minor subset), 및 활성화된 편도선(tonsillar) Treg 세포 상에 발현된다. Legler et al ., J. Exp . Med . 187:655-660 (1998); Foester et al ., Blood 84:830-840 (1994); Fazilleau et al ., Immunity 30:324-335 (2009); Ansel et al ., J. Exp . Med . 190:1123-1134 (1999); Lim et al ., J. Clin . Invest . 114(11):1640-1649 (2004); 및 R. Foester, Chapter in Academic Press Cytokine Reference, Aug. 2000을 참조하며; 각각은 그 전체가 원용에 의해 본 명세서에 포함된다. CXCL13은 또한, 또 다른 케모카인 수용체인 CXCR3를 통해 신호전달할 수 있으며, 이는 예를 들어, 활성화된 T 세포, 자연 살해 (NK) 세포, 수지상 세포, 및 중간 크기 내지 큰 크기의 혈관의 내피 세포에 의해 발현된다 (Jenh et al ., Cytokine 15:113-121 (2001); Garcia-Lopez et al., Laboratory Investigation 81:409-418 (2001), 각각은 그 전체가 원용에 의해 본 명세서에 포함됨).

본원에서, 용어 "CXCL13" 및 "CXCL13 폴리펩타이드"는 상호호환적으로 사용된다. 소정의 구현예에서, CXCL13은 전장 CXCL13 또는 이의 단편, 또는 CXCL13 변이체 폴리펩타이드를 포함할 수 있으며, 여기서, CXCL13의 단편 또는 CXCL13 변이체 폴리펩타이드는 전장 CXCL13의 기능적 특성을 일부 또는 모두 보유한다. 인간 CXCL13 폴리펩타이드 및 폴리뉴클레오타이드 서열 (각각 서열 번호 1 및 2)은 개시되어 있으며, 예를 들어, Legler, et . al ., J. Exp . Med . 187(4):655-660 (1998)을 참조한다. 마우스 CXCL13 폴리펩타이드 및 폴리뉴클레오타이드 서열 (각각 서열 번호 3 및 4)은 개시되어 있으며, 예를 들어, Gunn, et . al ., Nature 391(6669):799-803 (1998)을 참조한다. 나아가, 시아노몰구스 원숭이(cynomolgus monkey) CXCL13 폴리펩타이드 서열은 서열 번호 5로 나타낸 바와 같이, 개시되어 있다.

본원에서, 용어 "CXCR5" 및 "CXCR5 폴리펩타이드"는 상호호환적으로 사용된다. 소정의 구현예에서, CXCR5는 전장 CXCR5 또는 이의 단편, 또는 CXCR5 변이체 폴리펩타이드를 포함할 수 있으며, 여기서, CXCR5의 단편 또는 CXCR5 변이체 폴리펩타이드는 전장 CXCR5의 기능적 특성을 일부 또는 모두 보유한다. 용어 "CXCR5" 및 "CXCR5 폴리펩타이드"는 또한, CXCR5의 가용성 형태를 포함한다. 본원에서, 용어 "CXCR5의 가용성 형태"는 CXCR5의 혈장 막에 결합되지 않은 형태이다. 전장 CXCR5는 7번 막을 관통하는 수용체이다. 따라서, CXCR5의 가용성 형태의 비-제한적인 예로는, 본질적으로 세포외 도메인 (예를 들어, 약 처음 60개의 아미노산)으로 구성된 CXCR5의 단편을 포함한다. 인간 CXCR5 폴리뉴클레오타이드 및 폴리펩타이드 서열은 당해 기술분야에 알려져 있으며, 각각 서열 번호 6 및 7로서 본원에 제공된다. 쥣과 CXCR5 폴리뉴클레오타이드 및 폴리펩타이드 서열은 당해 기술분야에 알려져 있으며, 각각 서열 번호 8 및 9로서 제공된다.

본원에서, 용어 "CXCR3" 및 "CXCR3 폴리펩타이드"는 상호호환적으로 사용된다. 소정의 구현예에서, CXCR3는 전장 CXCR3 또는 이의 단편, 또는 CXCR3 변이체 폴리펩타이드를 포함할 수 있으며, 여기서, CXCR3의 단편 또는 CXCR3 변이체 폴리펩타이드는 전장 CXCR3의 기능적 특성을 일부 또는 모두 보유한다. 용어 "CXCR3" 및 "CXCR3 폴리펩타이드"는 또한, CXCR3의 가용성 형태를 포함한다. 본원에서, 용어 "CXCR3의 가용성 형태"는 CXCR3의 혈장 막에 결합되지 않은 형태이다. 전장 CXCR3는 7번 막을 관통하는 수용체이다. 따라서, CXCR3의 가용성 형태의 비-제한적인 예로는, 본질적으로 세포외 도메인으로 구성된 CXCR3의 단편을 포함한다. 인간 CXCR35 서열은 당해 기술분야에 알려져 있으며, 각각 서열 번호 23 및 24로서 본원에 제공되고, 각각 인간 CXCR3 변이체 1 및 변이체 3이다.

본원에서 기술되는 바와 같이, CXCL13 활성의 저해는 쇼그렌 증후군의 쥣과 모델에서 침샘 염증을 저하하며, 침샘에 존재하는 B 세포의 수를 감소시킨다. 임의의 이론 또는 작용 기전으로 결부시키고자 하는 것은 아니지만, CXCL13은 쇼그렌 증후군에서 B 세포의 타액 조직으로의 이동을 관장하는 것으로 여겨진다. 따라서, CXCL13 활성을 저해하는 제제를 이를 필요로 하는 개체에게 투여함으로써, 쇼그렌 증후군을 포함하지만 이로 한정되지 않는 염증 질환, 상세하게는 B 세포-매개의 염증 질환의 치료 방법을 제공한다.

본원에 개시되는 방법은 CXCL13 발현 세포와 관련된 염증 질환 및 면역계의 결핍증 또는 장애의 치료 또는 예방에 관한 것이다. "CXCL13-발현 세포"는 CXCL13 항원을 발현하는 정상 세포 및 악성 세포를 의미한다. 세포에서 CXCL13 발현을 검출하는 방법은 당해 기술분야에 잘 알려져 있으며, PCR 기술, 면역조직화학, 유세포분석, 웨스턴 블롯, ELISA 등을 포함하지만, 이들로 한정되는 것은 아니다.

염증 질환은 염증 및 조직 파괴, 또는 이들의 조합을 특징으로 한다. "항-염증 활성"은 염증의 저하 또는 예방을 의도한다. "염증 질환"은 면역 반응의 초기 사건 또는 표적이 예를 들어, 동종항원, 이종항원, 바이러스 항원, 박테리아 항원, 미공지 항원, 또는 알레르기원을 비롯한 비-자가 항원(들)을 포함하는 임의의 염증 면역-매개 과정을 포함한다.

일 구현예에서, 염증 질환은 말초 신경계 또는 중추 신경계의 염증 장애이다.

일부 구현예에서, 염증 질환은 B 세포-매개의 염증 질환이다. 본원에서, 용어 "B 세포-매개의 염증 질환"은 본원에서 기술되는 염증 질환으로서, 상기 질환의 발병, 진행, 또는 발병과 진행 둘 다는 주로 B 세포의 활성에 의존한다. B 세포-매개의 염증 질환의 비-제한적인 예로는, 자가항체의 생성을 특징으로 하는 질환들을 포함한다.

"B 세포"는 골수 내에서 성숙하는 림프구로서, 네이브(naive) B 세포, 기억 B 세포, 또는 효과기 B 세포 (혈장 세포)를 포함한다. 본원에서, B 세포는 정상 B 세포 또는 비-악성 B 세포일 수 있다.

본원에서, "B-세포 표면 마커" 또는 "B-세포 표면 항원"은 B 세포의 표면에서 발현되는 항원으로서, 이에 결합하는 길항제를 이용해 표적화될 수 있다. 예시적인 B-세포 표면 마커로는, 예를 들어, CD10, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD24, CD37, CD40, CD53, CD72, CD73, CD74, CDw75, CDw76, CD77, CDw78, CD79a, CD79b, CD80, CD81, CD82, CD83, CDw84, CD85 및 CD86, 및 CXCR5를 포함한다. 특히 흥미로운 B-세포 표면 마커는 포유류의 다른 비-B-세포 조직과 비교해 B 세포에서 선호적으로 발현되며, 전구체 B 세포 및 성숙 B 세포 모두에서 발현될 수 있다. 본원에서 바람직한 B-세포 표면 마커는 CD19 및 CXCR5이다. 본 발명의 목적을 위해, 용어 "염증 질환(들)"으로는 "자가면역 질환(들)"을 포함하지만, 이들로 한정되는 것은 아니다. 본원에서, 용어 "자가면역성"은 일반적으로 "자가" 항원과 관련된 염증 면역-매개 과정을 포함하는 것으로 이해된다. 자가면역 질환에서, 자가 항원(들)은 숙주의 면역 반응을 유도한다.

일 구현예에서, 본 발명의 항-CXCL13 결합 분자, 예를 들어, 항체 또는 항원 결합 단편은 쇼그렌 증후군을 치료하거나 또는 예방하는 데 사용된다.

본원에서, 시카 증후군(Sicca syndrome)으로도 알려져 있는 "쇼그렌 증후군"은, 면역 세포가 눈물 및 침을 생성하는 샘(gland)을 공격하는 자가면역 질환 또는 장애이다. 이러한 장애의 특징적인 증상은 구강 건조 및 안구 건조이다. 또한, 쇼그렌 증후군은 피부, 코, 및 질 건조를 야기할 수 있으며, 신장, 혈관, 폐, 간, 췌장, 및 뇌를 비롯한 신체의 다른 기관들에도 영향을 미칠 수 있다. 쇼그렌 증후군은 원발성 장애 ("원발성 쇼그렌 증후군"), 또는 류마티스 관절염과 같은 류마티스 장애, 전신성 낭창, 다발성근염, 경피증, 및 자가면역성 간염, 비-호지킨 림프종과 같은 림프종, 및 갑상선염과 같은 내분비 장애를 비롯하여 다른 자가면역 장애와 관련이 있거나 및/또는 이에 대해 속발성인 속발성 장애 ("속발성 쇼그렌 증후군")로서 존재할 수 있으다. 본원에서, 용어 "쇼그렌 증후군"은, 단계와 무관하게 그리고 그 증상과 무관하게 원발성 쇼그렌 증후군 및 속발성 쇼그렌 증후군 둘 다를 포함하는 쇼그렌 증후군을 지칭하되, 진단은 이루어진다. 상기 증후군에 대한 진단은 후술한 것들을 포함한다. 이는 또한, 전신 증상을 동반하지 않는 중간 단계-중증 시카 증후군 환자 뿐만 아니라 전신 증상을 동반하는 환자를 포함한다.

소정의 구현예에서, 제제는, 비정상적 림프 여포(ectopic lymphoid follicle) 또는 배중심(germinal center)의 존재 또는 B 세포의 병소로의 보충을 특징으로 하는 염증 질환의 치료가 필요한 개체에게 투여된다. 이들 구현예 중 일부에서, CXCL13 활성을 저해하는 제제는 비정상적 림프 여포 또는 배중심의 형성을 저해한다.

일 구현예에서, 치료는, CXCL13 활성을 저해하는 제제 (예를 들어, 항-CXCL13, 항-CXCR5, 또는 항-CXCR3 결합 분자)를 환자에게 적용 또는 투여, 또는 상기 제제를 환자로부터 분리한 조직 또는 세포주에 적용 또는 투여하는 것을 포함하며, 상기 환자는 질환, 질환의 증상, 또는 질환에 걸리기 쉬운 소인을 가진다. 또 다른 구현예에서, 치료는 또한, CXCL13 활성을 저해하는 제제 (예를 들어, 항-CXCL13, 항-CXCR5, 또는 항-CXCR3 결합 분자)를 포함하는 약제학적 조성물을 환자에게 적용 또는 투여, 또는 상기 제제를 포함하는 약제학적 조성물을 환자로부터 분리한 조직 또는 세포주에 적용 또는 투여하는 것을 포함하는 것으로 의도되며, 환자는 질환, 질환의 증상, 또는 질환에 걸리기 쉬운 소인을 가진다.

본 발명의 방법에 따르면, CXCL13 활성을 저해하는 1종 이상의 제제 (예를 들어, 항-CXCL13, 항-CXCR5, 또는 항-CXCR3 결합 분자)는 자가면역 질환 및/또는 염증 질환의 치료 또는 예방에 관해 긍정적인 치료학적 반응을 촉진하는 데 사용된다. 자가면역 질환 및/또는 염증 질환에 관한 "긍정적인 치료학적 반응"이란, 투여되는 제제의 항-염증 활성, 항-혈관신생 활성, 항-세포자멸사 활성 등과 같이 질환의 개선, 및/또는 질환과 관련된 증상의 개선을 의도하는 것이다. 즉, 항-증식 효과, CXCL13-발현 세포의 추가 증식의 방지, 염증 사이토카인, 부착 분자, 프로테아제, 면역글로불린 (CXCL13-포함 세포가 B 세포인 경우), 이들의 조합 등의 분비 저하를 포함하지만 이들로 한정되지 않는 염증 반응의 저하, 항-염증 단백질의 생성 증가, 자가반응성 세포 수의 감소, 면역 관용의 증가, 자가반응성 세포 생존의 저해, 세포자멸사의 감소, 내피 세포 이동 저하, 자발적인 단핵구 이동의 증가, 비정상적 림프 여포 수의 감소, 병소에 존재하는 B 세포 수의 감소, B 세포의 병소로의 이동 저하, CXCL13-발현 세포의 자극에 의해 매개되는 1종 이상의 증상의 감소 및/또는 저하가 관찰될 수 있다. 이러한 긍정적인 치료학적 반응은 투여 경로에 한정되지 않으며, 공여자, 공여자의 조직 (예컨대, 기관 삼출(organ perfusion)), 숙주, 및 이들의 조합 등에의 투여를 포함할 수 있다. 임상적 반응은, 자기 공명 영상 (MRI) 스캔, x-방사선촬영 영상, 컴퓨터 단층 촬영 (CT) 스캔, 유세포분석 또는 형광-활성화된 세포 소터 (FACS) 분석, 조직학, 일반 병리학(gross pathology), 및 혈액 화학과 같은 스크리닝 기술을 이용해 평가될 수 있으며, ELISA, RIA, 크로마토그래피 등에 의해 검출가능한 변화를 포함하지만 이들로 한정되는 것은 아니다. 이러한 긍정적인 치료학적 반응들 외에도, CXCL13 활성을 저해하는 제제 (예를 들어, 항-CXCL13, 항-CXCR5, 또는 항-CXCR3 결합 분자)로 치료를 받는 개체는 질환과 관련된 증상들의 개선이라는 유익한 효과를 경험할 수 있다.

본원에서, 용어 "치료하다" 또는 "치료"는 치료학적 치료와 예방적 또는 방지적 조치 모두를 지칭하며, 여기서, 목적은 쇼그렌 증후군의 진행과 같은 바람직하지 못한 생리학적 변화 또는 장애를 늦추거나 (약화시키거나), 이의 악화를 저하하거나, 또는 이의 재발을 방지하는 것이다. 유익하거나 또는 바람직한 임상적 결과로는, 증상의 완화, 검출가능하거나 또는 검출불가능하든, 질환 범위의 축소, 질환의 안정화된 (즉, 악화되지 않는) 상태, 질환 진행의 지연 또는 서행, 질환 상태의 완화 또는 진정, 및 차도(remission) (부분적이든 또는 전체적이든)를 포함하지만, 이들로 한정되는 것은 아니다. "치료"는 또한, 치료를 받지 않는 경우에 예상되는 생존율과 비교 시 연장된 생존율을 의미할 수도 있다. 치료가 필요한 개체는, 병태 또는 장애를 이미 앓고 있는 개체, 뿐만 아니라 병태 또는 장애에 걸리기 쉬운 개체 또는 병태 또는 장애가 예방되는 개체를 포함한다.

"개체" 또는 "대상" 또는 "동물" 또는 "환자" 또는 "포유류"란, 진단, 예후, 또는 치료가 바람직한 임의의 개체, 상세하게는 포유류 개체를 의미한다. 포유류 개체는 인간, 가축, 농경용 가축, 및 동물원, 스포츠, 또는 애완 동물, 예컨대 개, 고양이, 기니아 피그, 토끼, 마우스, 말, 소 등을 포함한다.

본원에서, "CXCL13 활성을 저해하는 제제의 투여를 통해 이득을 얻을 개체" 및 "치료가 필요한 동물"과 같은 표현은, 질환의 치료, 즉 진정 또는 예방용의 CXCL13 활성 저해 제제 (예를 들어, 항-CXCL13, 항-CXCR5, 또는 항-CXCR3 항체)를 투여함으로써 이득을 얻을 개체, 예컨대 포유류 개체를 포함한다. 본원에서 상세히 기술되는 바와 같이, 항-CXCL13, 항-CXCR5, 또는 항-CXCR3 항체는 비-컨쥬게이트 형태로 사용될 수 있거나, 또는 예를 들어, 약물, 프로드럭, 또는 동위원소에 컨쥬게이트될 수 있다.

CXCL13 활성의 저해에 유용한 제제로는, 소분자, 폴리펩타이드, 및 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 소정의 구현예에서, 상기 제제는 CXCL13이 이의 수용체에 결합하는 것을 방해한다. 일부 구현예에서, 상기 제제는 CXCL13과 CXCR5 간의 상호작용을 방해한다. 다른 구현예에서, 상기 제제는 CXCL13과 CXCR3의 상호작용을 방해한다. 특정한 구현예에서, 상기 제제는 CXCL13, CXCR5, 또는 CXCR3에 특이적으로 결합하는 특이적 결합 분자이다. 이들 구현예 중 일부에서, 상기 제제는 항-CXCL13, 항-CXCR5 항체, 또는 항-CXCR3 항체이다. 다른 구현예에서, 상기 제제는 CXCR5 또는 CXCR3의 가용성 형태이다.

본원에서, 용어 "폴리펩타이드"는 단수형 "폴리펩타이드" 및 복수형 "폴리펩타이드"를 포함하는 것으로 의도되며, 아미드 결합 (펩타이드 결합으로도 알려져 있음)에 의해 선형 연결된 모노머 (아미노산)로 구성된 분자를 지칭한다. 용어 "폴리펩타이드"는 2개 이상의 아미노산의 임의의 사슬 또는 사슬들을 지칭하며, 특정 길이의 생성물을 지칭하는 것은 아니다. 따라서, 2개 이상의 아미노산의 사슬 또는 사슬들을 지칭하는 데 사용되는 펩타이드, 다이펩타이드, 트리펩타이드, 올리고펩타이드, "단백질," "아미노산 사슬," 또는 임의의 다른 용어는 "폴리펩타이드"의 정의에 포함되며, 용어 "폴리펩타이드"는 이들 용어들 중 임의의 용어 대신에 또는 이와 상호호환적으로 사용될 수 있다. 용어 "폴리펩타이드"는 또한, 글리코실화, 아세틸화, 인산화, 아미드화, 공지된 보호/차단 기에 의한 유도체화, 단백분해성 절단, 또는 자연적으로 존재하지 않는(non-naturally occuring) 아미노산에 의한 변형을 포함하지만 이들로 한정되지 않는 폴리펩타이드의 발현-후 변형 생성물을 지칭하는 것으로 의도된다. 폴리펩타이드는 천연 생물학적 소스로부터 유도되거나 또는 재조합 기술에 의해 생성될 수 있지만, 본질적으로는 지정된 핵산 서열로부터 번역되지 않는다. 이는 화학적 합성을 비롯한 임의의 방식으로 생성될 수 있다.

본원에 개시되는 방법에 유용한 폴리펩타이드는 약 3개 이상, 5개 이상, 10개 이상, 20개 이상, 25개 이상, 50개 이상, 75개 이상, 100개 이상, 200개 이상, 500개 이상, 1,000개 이상, 또는 2,000개 이상의 아미노산 크기일 수 있다. 폴리펩타이드는 한정된 3-차원 구조를 가질 수 있지만, 이들이 본질적으로 이러한 구조를 가지는 것은 아니다. 한정된 3-차원 구조를 가진 폴리펩타이드는 접혀진 폴리펩타이드로 지칭되며, 한정된 3-차원 구조를 가지지 않지만 다수의 서로 다른 입체 형태를 채택할 수 있는 폴리펩타이드는 접혀지지 않은 폴리펩타이드로 지칭된다. 본원에서, 용어 당단백질은, 세린 잔기 또는 아스파라긴 잔기와 같은 아미노산 잔기의 산소-함유 또는 질소-함유 측쇄를 통해 단백질에 부착되는 하나 이상의 탄수화물 부분에 연결된 단백질을 지칭한다.

"분리된" 폴리펩타이드 또는 이의 단편, 변이체, 또는 이의 유도체란, 이의 자연 환경에 존재하지 않는 폴리펩타이드를 의미한다. 특정한 정제 수준은 요구되지 않는다. 예를 들어, 분리된 폴리펩타이드는 이의 본래의 또는 자연 환경으로부터 제거될 수 있다. 숙주 세포에서 발현되는, 재조합으로 생성되는 폴리펩타이드 및 단백질은 본 발명의 목적을 위해 분리되는 것으로 생각되며, 천연 폴리펩타이드, 또는 임의의 적절한 기술에 의해 분리, 분획화, 또는 부분적으로 또는 실질적으로 정제된 재조합 폴리펩타이드이다.

또한, 본원에 개시되는 방법에 유용한 폴리펩타이드는 폴리펩타이드의 단편, 유도체, 유사체, 변이체, 및 이들의 임의의 조합을 포함한다. 항-CXCL13, 항-CXCR5, 또는 항-CXCR3 항체 또는 항체 폴리펩타이드를 지칭하는 경우, 용어 "단편," "변이체," "유도체," 및 "유사체"는 상응하는 항체 또는 항체 폴리펩타이드의 항원-결합 특성 중 적어도 일부를 보유하는 임의의 폴리펩타이드를 포함한다. 폴리펩타이드의 단편은 본원에서 언급되는 특정한 항체 단편 외에도 단백분해성 단편 뿐만 아니라 결실 단편을 포함한다. 항-CXCL13, 항-CXCR5, 또는 항-CXCR3 항체의 변이체는 전술한 단편을 포함하며, 아미노산 치환, 결실, 또는 삽입으로 인해 아미노산 서열이 변경된 폴리펩타이드도 포함한다. 변이체는 천연적으로 존재하거나 또는 천연적으로 존재하지 않을 수 있다. 천연적으로 존재하지 않는 변이체는 당해 기술분야에 공지된 돌연변이 기술을 이용해 생성될 수 있다. 변이체 폴리펩타이드는 보존적 또는 비-보존적 아미노산 치환, 결실, 또는 첨가를 포함할 수 있다. 변이체 폴리펩타이드는 또한, 본원에서 "폴리펩타이드 유사체"로 지칭될 수도 있다. 본원에서, 항-CXCL13, 항-CXCR5, 또는 항-CXCR3 항체 또는 항체 폴리펩타이드의 "유도체"는, 관능성 측기(functional side group)의 반응에 의해 화학적으로 유도체화된 잔기를 하나 이상 가지는 폴리펩타이드를 지칭한다. 또한, 20개의 표준 아미노산의 자연적으로 존재하는 아미노산 유도체를 하나 이상 포함하는 펩타이드가 "유도체"로서 포함된다. 예를 들어, 4-하이드록시프롤린은 프롤린 대신에 치환될 수 있으며; 5-하이드록시라이신은 라이신 대신에 치환될 수 있으며; 3-메틸히스티딘은 히스티딘 대신에 치환될 수 있으며; 호모세린은 세린 대신에 치환될 수 있고; 오르니틴은 라이신 대신에 치환될 수 있다. 항-CXCL13, 항-CXCR5, 및 항-CXCR3 항체 및 항체 폴리펩타이드의 유도체는, 대조군 항체 또는 항체 폴리펩타이드 상에서 발견되지 않는 부가적인 특징들을 나타내도록 변형된 폴리펩타이드를 포함할 수 있다.

폴리펩타이드의 맥락에서, "선형 서열" 또는 "서열"은 아미노 말단에서 카르복실 말단 방향으로의, 폴리펩타이드 내 아미노산 서열이며, 서열에서 서로 이웃하는 잔기들은 1차 구조의 폴리펩타이드에서 연속적이다.

용어 "폴리뉴클레오타이드"는 단수형 핵산 뿐만 아니라 복수형 핵산을 포함하는 것으로 의도되며, 분리된 핵산 분자 또는 구축물, 예를 들어, 메신저 RNA (mRNA) 또는 플라스미드 DNA (pDNA)를 지칭한다. 폴리뉴클레오타이드는 통상적인 포스포다이에스테르 결합 또는 비-통상적인 결합 (예를 들어, 펩타이드 핵산 (PNA)에서 발견되는 것과 같은 아미드 결합)을 포함할 수 있다. 용어 "핵산"은 폴리뉴클레오타이드에 존재하는 임의의 하나 이상의 핵산 단편, 예를 들어, DNA 또는 RNA 단편을 지칭한다. "분리된" 핵산 또는 폴리뉴클레오타이드란, 천연 환경으로부터 제거된 핵산 분자, DNA 또는 RNA를 의도한다. 예를 들어, 항-CXCL13, 항-CXCR5, 또는 항-CXCR3 결합 분자를 코딩하는 재조합 폴리뉴클레오타이드, 예를 들어, 벡터에 포함된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 본 발명의 목적을 위해 분리되는 것으로 생각된다. 분리된 폴리뉴클레오타이드의 추가적인 예로는, 이종성 숙주 세포에서 유지되는 재조합 폴리뉴클레오타이드 또는 (부분적으로 또는 실질적으로) 정제된 폴리뉴클레오타이드를 용액에 포함한다. 분리된 RNA 분자는 본 발명의 폴리뉴클레오타이드의 생체 내 또는 시험관 내 RNA 전사체를 포함한다. 본 발명에 따른 분리된 폴리뉴클레오타이드 또는 핵산은 합성에 의해 생성되는 이러한 분자를 추가로 포함한다. 또한, 폴리뉴클레오타이드 또는 핵산은 프로모터, 리보좀 결합 부위, 또는 전사 종결자와 같은 조절 구성원일 수 있거나 또는 이들을 포함할 수 있다.

본원에서, "코딩 영역"은, 아미노산으로 번역되는 코돈으로 구성된 핵산의 일부이다. "정지 코돈" (TAG, TGA, 또는 TAA)은 아미노산으로 번역되지 않지만,코딩 영역의 일부로 여겨질 수 있으며, 그러나 임의의 플랭킹(flanking) 서열, 예를 들어 프로모터, 리보좀 결합 부위, 전사 종결자, 인트론 등은 코딩 영역의 일부가 아니다. 본원에 개시되는 방법에 유용한 2개 이상의 코딩 영역은, 예를 들어, 단일 벡터 상에서 단일 폴리뉴클레오타이드 구축물에 존재할 수 있거나, 또는 개별 (서로 다른) 벡터 상에서 별개의 폴리뉴클레오타이드 구축물에 존재할 수 있다. 나아가, 임의의 벡터는 단일 코딩 영역을 포함할 수 있거나, 또는 2개 이상의 코딩 영역을 포함할 수 있으며, 예를 들어, 단일 벡터는 면역글로불린 중쇄 가변부 및 면역글로불린 경쇄 가변부를 개별적으로 코딩할 수 있다. 또한, 본원에 개시되는 방법에 유용한 벡터, 폴리뉴클레오타이드, 또는 핵산은 항-CXCL13, 항-CXCR5, 또는 항-CXCR3 항체 또는 이의 단편, 변이체, 또는 이의 유도체를 코딩하는 핵산에 융합되거나 또는 비융합된 이종성 코딩 영역을 코딩할 수 있다. 이종성 코딩 영역은, 분비 신호 펩타이드 또는 이종성 기능성 도메인과 같은 특수화된 구성원 또는 모티프를 포함하지만, 이들로 한정되는 것은 아니다.

소정의 구현예에서, 본원에 개시되는 방법에 유용한 폴리뉴클레오타이드 또는 핵산은 DNA이다. DNA의 경우, 폴리펩타이드를 코딩하는 핵산을 포함하는 폴리뉴클레오타이드는 통상, 하나 이상의 코딩 영역과 작동적으로 연관된 프로모터 및/또는 기타 전사 또는 번역 조절 구성원을 포함할 수 있다. 작동적 연관성(operable association)은, 유전자 생성물, 예를 들어, 폴리펩타이드에 대한 코딩 영역이 조절 서열(들)의 영향 또는 조절 하에 유전자 생성물을 발현하도록 하나 이상의 조절 서열과 연관되어 있는 경우이다. 2개의 DNA 단편 (예컨대, 폴리펩타이드 코딩 영역 및 이와 연관된 프로모터)은, 프로모터 기능의 유도가 원하는 유전자 생성물을 코딩하는 mRNA를 전사시키고, 2개의 DNA 단편들 간의 연결의 특성이 유전자 생성물의 발현을 지시하는 발현 조절 서열의 능력을 방해하지 않거나 또는 전사되는 DNA 주형의 능력을 방해하지 않는 경우, "작동적으로 연관되어" 있다. 따라서, 프로모터 영역은, 프로모터가 폴리펩타이드를 코딩하는 핵산의 전사에 영향을 미칠 수 있는 한, 이 핵산과 작동적으로 연관되어 있을 것이다. 프로모터는, 예정된 세포에서만 DNA의 실질적인 전사를 지시하는 세포-특이적 프로모터일 수 있다. 프로모터 이외의 다른 전사 조절 구성원, 예를 들어 인핸서, 오퍼레이터, 리프레서(repressor), 및 전사 종결 신호는 세포-특이적 전사를 지시하도록 폴리뉴클레오타이드와 작동적으로 연관될 수 있다. 적절한 프로모터 및 기타 전사 조절 영역은 본원에 개시되어 있다.

다양한 전사 조절 영역은 당해 기술분야의 당업자에게 알려져 있다. 이들로는, 척추동물 세포에서 기능하는 전사 조절 영역을 포함하지만 이들로 한정되는 것은 아니며, 예컨대, 사이토메갈로바이러스(cytomegaloviruse) (인트론-A와 함께 전 초기(immediate early) 프로모터), 유인원 바이러스 40(simian virus 40) (초기 프로모터), 및 레트로바이러스 (예컨대, 라우스 육종 바이러스(Rous sarcoma virus)) 유래의 프로모터 및 인핸서 단편이지만 이들로 한정되는 것은 아니다. 다른 전사 조절 영역으로는, 액틴, 열 쇼크 단백질, 소 성장 호르몬 및 토끼 β-글로빈과 같은 척추동물 유전자 유래의 것들, 뿐만 아니라 진핵 세포에서 유전자 발현을 조절할 수 있는 기타 서열을 포함한다. 부가적인 적절한 전사 조절 영역으로는, 조직-특이적 프로모터 및 인핸서, 뿐만 아니라 림포카인-유도성 프로모터 (예를 들어, 인터페론 또는 인터루킨에 의해 유도가능한 프로모터)를 포함한다.

유사하게는, 다양한 번역 조절 구성원은 당해 기술분야의 당업자에게 알려져 있다. 이들로는, 리보좀 결합 부위, 번역 개시 코돈 및 종결 코돈, 및 피코나 바이러스(picornavirus) 유래의 구성원 (상세하게는 내부 리보좀 유입 부위(internal ribosome entry site), 또는 IRES, 이는 CITE 서열이라고도 지칭됨)을 포함하지만, 이들로 한정되는 것은 아니다.

다른 구현예에서, 본원에 개시되는 방법에 유용한 폴리뉴클레오타이드는 예를 들어, 메신저 RNA (mRNA) 형태의 RNA이다.

본원에 개시되는 방법에 유용한 폴리뉴클레오타이드 및 핵산 코딩 영역은, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드에 의해 코딩되는 폴리펩타이드의 분비를 지시하는 분비 펩타이드 또는 신호 펩타이드를 코딩하는 부가적인 코딩 영역과 연관될 수 있다. 신호 가정에 따르면, 조면 소포체를 가로질러 성장중인 단백질 사슬의 유출(export)이 일단 개시되고 나면, 포유류 세포에 의해 분비되는 단백질은 성숙 단백질로부터 절단되는 신호 펩타이드 또는 분비 리더(leader) 서열을 가진다. 당해 기술분야의 당업자는, 척추동물에 의해 분비되는 폴리펩타이드가 일반적으로 폴리펩타이드의 N-말단에 융합된 신호 펩타이드를 가지며, 이는 완전한 또는 "전장" 폴리펩타이드로부터 절단되어, 분비된 형태 또는 "성숙한" 형태의 폴리펩타이드를 생성함을 알고 있다. 소정의 구현예에서, 천연 신호 펩타이드, 예를 들어, 면역글로불린 중쇄 또는 경쇄 신호 펩타이드가 사용되거나, 또는 작동적으로 연관된 폴리펩타이드의 분비를 지시하는 능력을 보유한 해당 서열의 기능적 유도체가 사용된다. 다른 예로, 이종성 포유류 신호 펩타이드, 또는 이의 기능적 유도체가 사용될 수 있다. 예를 들어, 야생형 리더 서열은 인간 조직 플라스미노겐 활성자(TPA) 또는 마우스 β-글루쿠로니다제의 리더 서열로 치환될 수 있다.

본원에서, 용어 "발현"은 유전자가 폴리펩타이드와 같은 생화학물질을 생성하는 과정을 지칭한다. 이 과정은, 유전자 녹다운(gene knockdown) 뿐만 아니라 일시적 발현 및 안정한 발현 둘 다를 포함하지만 이들로 한정되지 않는, 세포 내 유전자의 기능성의 존재의 임의의 징후(manifestation)를 포함한다. 이로는, 유전자가 메신저 RNA (mRNA)로 전사되는 것, 및 이러한 mRNA가 폴리펩타이드(들)로 번역되는 것을 포함하지만, 이들로 한정되는 것은 아니다. 최종의 바람직한 생성물이 생화학물질인 경우, 발현은 해당 생화학물질 및 임의의 전구체의 생성을 포함한다. 유전자의 발현은 "유전자 생성물"을 생성한다. 본원에서, 유전자 생성물은 핵산, 예를 들어, 유전자의 전사에 의해 생성되는 메신저 RNA, 또는 전사체로부터 번역되는 폴리펩타이드일 수 있다. 본원에서 기술되는 유전자 생성물로는, 폴리아데닐화와 같은 전사후 변형이 수행된 핵산, 또는 메틸화, 글리코실화, 지질 첨가, 다른 단백질 서브유닛과의 연관, 단백분해성 절단 등과 같은 번역후 변형이 수행된 폴리펩타이드를 추가로 포함한다.

"결합 분자" 또는 "항원 결합 분자"는 광의에서, 항원 결정 부위에 특이적으로 결합하는 분자를 지칭한다. 일 구현예에서, 결합 분자는 CXCL13에 특이적으로 결합한다 (BCA-1라고도 함). 또 다른 구현예에서, 결합 분자는 CXCR5에 특이적으로 결합한다. 또 다른 구현예에서, 결합 분자는 CXCR3에 특이적으로 결합한다. 보다 다른 구현예에서, 본원에 개시되는 방법에 유용한 결합 분자는 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 예를 들어, 항-CXCL13, 항-CXCR5, 또는 항-CXCR3 항체이다. 또 다른 구현예에서, 결합 분자는 항체 분자의 하나 이상의 중쇄 또는 경쇄 CDR을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 결합 분자는 하나 이상의 항체 분자 유래의 CDR을 2개 이상 포함한다. 또 다른 구현예에서, 결합 분자는 하나 이상의 항체 분자 유래의 CDR을 3개 이상 포함한다. 또 다른 구현예에서, 결합 분자는 하나 이상의 항체 분자 유래의 CDR을 4개 이상 포함한다. 또 다른 구현예에서, 결합 분자는 하나 이상의 항체 분자 유래의 CDR을 5개 이상 포함한다. 또 다른 구현예에서, 결합 분자는 하나 이상의 항체 분자 유래의 CDR을 6개 이상 포함한다. 소정의 구현예에서, 하나 이상의 CDR은 MAb 5261, MAb 5378, MAb 5080, MAb 1476, 또는 3D2 유래이다.

일부 구현예에서, 본원에 개시되는 방법은 소정의 항-CXCL13, 항-CXCR5, 또는 항-CXCR3 항체, 또는 항원-결합 단편, 변이체, 또는 이들의 유도체를 수반한다. 자연적으로 존재하는 항체와 같은 전장 항체를 구체적으로 지칭하지 않는 한, 용어 "항-CXCL13 항체," "항-CXCR5 항체" 및 "항-CXCR3 항체"라는 용어는 전장 항체 뿐만 아니라 이러한 항체의 항원-결합 단편, 변이체, 유사체, 또는 유도체, 예를 들어, 자연적으로 존재하는 항체 또는 면역글로불린 분자 또는 항체 분자와 유사한 방식으로 항원에 결합하는 조작된(engineered) 항체 분자 또는 단편을 포함한다.

본원에서, "인간" 또는 "완전 인간" 항체는 인간 면역글로불린의 아미노산 서열을 가진 항체를 포함하며, 인간 면역글로불린 라이브러리 또는 하나 이상의 인간 면역글로불린에 대해 유전자 도입(transgenic)된 동물로부터 분리되는 항체를 포함하며, 내인성 면역글로불린을 발현하지 않으며, 후술되며, 예를 들어, Kucherlapati 등의 미국 특허 5,939,598에 기술되어 있다. "인간" 또는 "완전 인간" 항체는 또한, 적어도 중쇄 가변 도메인, 또는 적어도 중쇄 및 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항체를 포함하며, 여기서, 가변 도메인(들)은 인간 면역글로불린 가변 도메인(들)의 아미노산 서열을 가진다.

"인간" 또는 "완전 인간" 항체는 또한, 공지된 항-CXCL13, 항-CXCR5, 또는 항-CXCR3 항체 분자 (예를 들어, VH 영역 및/또는 VL 영역)의 변이체 (유도체 포함)를 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 또는 이로 이루어진 전술한 바와 같은 "인간" 또는 "완전 인간" 항체를 포함하며, 항체 또는 이의 단편은 CXCL13, CXCR5, 또는 CXCR3 폴리펩타이드 또는 이의 단편 또는 변이체에 면역특이적으로 결합한다. 당해 기술분야의 당업자에게 공지된 표준 기술은 인간 항-CXCL13, 항-CXCR5, 또는 항-CXCR3 항체를 코딩하는 뉴클레오타이드 서열에 돌연변이를 도입하는 데 사용될 수 있으며, 아미노산 치환을 생성하는 부위-특이적(site-directed) 돌연변이 및 PCR-매개 돌연변이를 포함하지만, 이들로 한정되는 것은 아니다. 바람직하게는, 변이체 (유도체 포함)는 대조군 VH 영역, VHCDR1, VHCDR2, VHCDR3, VL 영역, VLCDR1, VLCDR2, 또는 VLCDR3에 대해, 50개 미만의 아미노산 치환, 40개 미만의 아미노산 치환, 30개 미만의 아미노산 치환, 25개 미만의 아미노산 치환, 20개 미만의 아미노산 치환, 15개 미만의 아미노산 치환, 10개 미만의 아미노산 치환, 5개 미만의 아미노산 치환, 4개 미만의 아미노산 치환, 3개 미만의 아미노산 치환, 또는 2개 미만의 아미노산 치환을 코딩한다.

소정의 구현예에서, 아미노산 치환은 추가로 후술하는 보존적 아미노산 치환이다. 다른 예로, 돌연변이는 예컨대 포화 돌연변이에 의해 코딩 서열의 전부 또는 일부를 따라 무작위로 도입될 수 있으며, 생성되는 돌연변이는 활성 (예를 들어, CXCL13, CXCR5, 또는 CXCR3 폴리펩타이드, 예를 들어, 인간, 쥣과, 또는 인간 및 쥣과 둘 다의 CXCL13, CXCR5, 또는 CXCR3에 결합하는 능력)을 가진 돌연변이체를 확인하는 생물학적 활성에 대해 스크리닝될 수 있다. "인간" 또는 "완전 인간" 항체의 이러한 변이체 (또는 이들의 유도체)는 또한, "최적화된" 또는 "항원 결합에 최적화된" 인간 또는 완전 인간 항체로 지칭될 수 있으며, 항원에 대한 친화성을 향상시킨 항체를 포함한다.

용어 "항체" 및 "면역글로불린"은 본원에서 상호호환적으로 사용된다. 항체 또는 면역글로불린은 적어도 중쇄 가변 도메인을 포함하며, 통상 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인을 적어도 포함한다. 척추동물 시스템에서 기본적인 면역글로불린 구조는 비교적 잘 이해되고 있다. 예를 들어, Harlow et al. (1988) ANtibodies: A Laboratory Manual (2nd ed.; Cold Spring Harbor Laboratory Press)을 참조한다.

보다 상세히 후술되는 바와 같이, 용어 "면역글로불린"은 생화학적으로 구별이 가능한 다양한 부류의 폴리펩타이드를 포함한다. 당해 기술분야의 당업자는, 중쇄가 감마, 뮤(mu), 알파, 델타, 또는 입실론 (γ, μ, α, δ, ε)으로서 분류되되, 이들 사이에 일부 서브클래스 (예를 들어, γ1 내지 γ4)가 존재함을 알 것이다. 이는, 항체의 "부류"를 각각 IgG, IgM, IgA IgG, 또는 IgE로 결정하는 이러한 사슬의 성질이다. 면역글로불린 서브클래스 (이소타입) 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 등은 잘 특징화되며 기능성 특수화를 부여하는 것으로 알려져 있다. 이들 부류 및 이소타입의 각각의 변형된 버전은 본 개시내용의 면에서 당해 기술분야의 당업자에게 잘 이해될 수 있으며, 따라서, 본 발명의 범위에 포함된다. 모든 면역글로불린 부류는 본 발명의 범위에 명확하게 포함되어 있으며, 하기의 설명은 일반적으로 면역글로불린 분자의 IgG 부류에 관한 것이다. IgG와 관련하여, 표준 면역글로불린 분자는 분자량이 약 23,000 달톤인 2개의 동일한 경쇄 폴리펩타이드, 및 분자량이 53,000-70,000 달톤인 2개의 동일한 중쇄 폴리펩타이드를 포함한다. 4개의 사슬은 전형적으로 "Y" 배열에서 이황화 결합에 의해 조합되어 있으며, 여기서, 경쇄는 "Y"의 개구(mouth)에서 시작하는 중쇄를 브라킷(bracket)하며, 가변부를 통해 계속된다.

경쇄는 카파 또는 람다 (κ, λ)로 분류된다. 각각의 중쇄 부류는 카파 경쇄 또는 람다 경쇄에 결합될 수 있다. 일반적으로, 경쇄 및 중쇄는 서로 공유 결합되고, 면역글로불린이 하이브리도마, B-세포 또는 유전적으로 조작된 숙주 세포에 의해 생성되는 경우, 2개의 중쇄의 "꼬리" 부분은 공유 이황화 연결 또는 비-공유 연결에 의해 서로 결합된다. 중쇄에서, 아미노산 서열은 Y 배열의 포크형 말단에 있는 N-말단으로부터 각각의 사슬의 하부에 있는 C-말단까지 진행된다.

경쇄 및 중쇄 둘 다 구조적 동종성 및 기능적 동종성 영역으로 구분된다. 용어 "불변" 및 "가변"은 기능적으로 사용된다. 이러한 면에서, 경쇄 (VL 또는 VK) 및 중쇄 (VH) 부분의 가변 도메인은 항원 인지 및 특이성을 결정하는 것으로 이해될 것이다. 반대로, 경쇄 (CL) 및 중쇄 (CH1, CH2 또는 CH3)의 불변 도메인은 분비, 태반경유 이동성, Fc 수용체 결합, 보체 결합 등과 같은 중요한 생물학적 특성을 부여한다. 협약상 불변부 도메인이 항체의 항원 결합 부위 또는 아미노-말단으로부터 보다 멀어짐에 따라 이의 넘버링은 증가한다. N-말단 부위는 가변부이며, C-말단 부위는 불변부이며; CH3 및 CL 도메인은 사실상 중쇄 및 경쇄의 카르복시-말단을 각각 포함한다.

본원에서 기술하는 바와 같이, 가변부는 항체가 항원 상의 에피토프를 선택적으로 인지하고 특이적으로 결합할 수 있게 한다. 즉, 항체의 VL 도메인 및 VH 도메인, 또는 이들 가변 도메인 내의 상보성 결정 영역 (CDR)의 서브셋은 조합되어, 3차원 항원 결합 부위를 규정하는 가변부를 형성한다. 이러한 4차 항체 구조는 Y의 각각의 팔의 말단에 존재하는 항원 결합 부위를 형성한다. 보다 구체적으로는, 항원 결합 부위는 VH 및 VL 사슬 각각의 3개의 CDR에 의해 규정된다. 일부 경우, 예를 들어, 낙타과(camelid) 종으로부터 유래되거나 또는 낙타과 면역글로불린을 기재로 조작된 소정의 면역글로불린 분자, 완전한 면역글로불린 분자는 경쇄 없이 중쇄만으로 구성될 수 있다. 예를 들어, Hamers-Casterman et al., Nature 363:446-448 (1993)을 참조한다.

자연적으로 존재하는 항체에서, 각각의 항원 결합 도메인에 존재하는 6개의 "상보성 결정 영역" 또는 "CDR"은 항원 결합 도메인을 형성하도록 특이적으로 위치된 아미노산의 짧고 비-연속적인 서열로서, 항체는 이의 3차원 배열을 수성 환경에서 취한다. 항원 결합 도메인 내 나머지 아미노산은 "프레임워크(framework)" 영역으로 지칭되며 분자간 가변성이 덜 한 것으로 나타난다. 프레임워크 영역은 대체로 β-시트 구조를 취하며, CDR들은 연결되는 루프를 형성하며, 일부 경우에는 β-시트 구조의 일부를 형성하기도 한다. 따라서, 프레임워크 영역은 사슬간 비-공유 상호작용에 의해 CDR을 올바른 배향으로 위치시키는 스캐폴드(scaffold)를 형성하도록 작용한다. 위치된 CDR에 의해 형성된 항원 결합 도메인은 면역반응성 항원 상의 에피토프에 상보적인 표면을 규정한다. 이 상보적 표면은 항체가 이의 동족성(cognate) 에피토프에 결합하도록 촉진한다. CDR 및 프레임워크 영역을 각각 포함하는 아미노산은 정확하게 규정되어 있기 때문에, 당해 기술분야의 당업자에 의해 임의의 주어진 중쇄 가변 도메인 또는 경쇄 가변 도메인으로 쉽게 확인될 수 있다 (이하 참조).

당해 기술분야에서 사용되며 및/또는 수용되는 용어의 정의가 2가지 이상 존재하는 경우, 본원에서의 용어의 정의가 예시적으로 다르게 언급되지 않는 한, 모든 이러한 의미들을 포함하는 것으로 의도된다. 구체적인 예는, 중쇄 폴리펩타이드 및 경쇄 폴리펩타이드 둘 다의 가변부 내에서 발견되는 비-연속성 항원 조합 부위들을 기술하기 위해 용어 "상보성 결정 영역" ("CDR")을 사용하는 것이다. 이러한 특정 영역은 Kabat et al. (1983) U.S. Dept. of Health and Human Services, "Sequences of Proteins of Immunological Interest" 및 Chothia and Lesk, J. Mol. Biol . 196:901-917 (1987)에 의해 기술되어 있으며, 이들은 그 전체가 원용에 의해 본 명세서에 포함되어 있으며, 여기서 정의는 서로 비교 시 중복 아미노산 또는 아미노산 잔기의 서브셋을 포함한다. 그럼에도, 항체 또는 이의 변이체의 CDR을 지칭하기 위한 정의의 적용은 본원에서 정의되고 사용되는 대로 용어의 범위에 포함되는 것으로 의도된다. CDR을 상기 언급한 참조문헌 각각에 의해 정의되는 대로 포함하는 적절한 아미노산 잔기는 비교로서 표 1에 후술한다. 특정 CDR을 포함하는 정확한 잔기의 수는 CDR의 서열 및 크기에 따라 다를 것이다. 당해 기술분야의 당업자는 항체의 가변부 아미노산 서열로 주어진 특정 CDR을 포함하는지 통상적으로 결정할 수 있다.

CDR 정의1
	Kabat	Chothia
VH CDR1	31-35	26-32
VH CDR2	50-65	52-58
VH CDR3	95-102	95-102
VL CDR1	24-34	26-32
VL CDR2	50-56	50-52
VL CDR3	89-97	91-96
1표 1에서 모든 CDR 정의의 넘버링은 Kabat 등에 의한 넘버링 협약에 따른 것임 (이하 참조).

또한, Kabat 등은 임의의 항체에 적용가능한 가변 도메인 서열에 대한 넘버링 시스템을 규정한다. 당해 기술의 당업자는, 서열 자체 이외의 어떠한 실험 데이타에 의존하지 않고도, 임의의 가변 도메인 서열에 "Kabat 넘버링" 시스템을 자명하게 부여할 수 있다. 본원에서, "Kabat 넘버링"은 Kabat et al. (1983) U.S. Dept. of Health and Human Services, "Sequence of Proteins of Immunological Interest"에 기술된 넘버링 시스템을 지칭한다. 구체적으로 언급되어 있지 않은 한, 본 발명의 항-CXCL13 항체 또는 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체에서의 특정 아미노산 잔기 위치에 대한 넘버링에 대한 언급에서는 Kabat 넘버링 시스템을 따른다.

본원에서 개시되는 방법에 유용한 항체, 또는 그의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유사체는, 다클론 항체, 단일클론 항체, 다중특이 (multispecific) 항체, 인간 항체, 인간화 항체(humanized antibody), 영장류화 항체(primatized antibody) 또는 키메라 항체(chimeric antibody), 단쇄 항체, 에피토프-결합 단편, 예컨대, Fab, Fab' 및 F(ab')₂, Fd, Fvs, 단쇄 Fvs(scFv), 이황화 연결된 Fvs(sdFv), VL 또는 VH 도메인 중 어느 하나를 포함하는 단편, Fab 발현 라이브러리에서 제조된 단편, 및 항-이디오타입(항-Id) 항체(예, 본원에 기술된 항-CXCL13 항체, 항-CXCR5 항체, 또는 항-CXCR3 항체에 대한 항-Id 항체 포함)를 포함하나, 이들로 한정되는 것은 아니다. ScFv 분자는 당업계에 공지되어 있으며, 예컨대 미국 특허 5,892,019에 언급되어 있다. 본 발명의 면역글로불린 또는 항체 분자는 면역글로불린 분자의 임의 타입(예, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA, 및 IgY), 클래스(예, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, 및 IgA2, 등) 또는 서브클래스일 수 있다.

본원에서, 용어 "중쇄 부분"은 면역글로불린 중쇄로부터 유래된 아미노산 서열을 포함한다. 중쇄 부분을 포함하는 폴리펩타이드는 CH1 도메인, 힌지(예, 상, 중 및/또는 하위 힌지 영역) 도메인, CH2 도메인, CH3 도메인, 또는 그의 변이체 또는 단편 중 하나 이상을 포함한다. 예컨대, 본 발명에 사용하기 위한 결합 폴리펩타이드는 CH1 도메인을 포함하는 폴리펩타이드 사슬; CH1 도메인, 힌지 도메인의 적어도 일부분 및 CH3 도메인을 포함하는 폴리펩타이드 사슬; CH1 도메인과 CH3 도메인을 포함하는 폴리펩타이드 사슬; CH1 도메인, 힌지 도메인의 적어도 일부분 및 CH3 도메인을 포함하는 폴리펩타이드 사슬, 또는 CH1 도메인, 힌지 도메인의 적어도 일부분, CH2 도메인 및 CH3 도메인을 포함하는 폴리펩타이드 사슬을 포함할 수 있다. 다른 구현예에서, 본원에서 개시되는 방법에 유용한 폴리펩타이드는 CH3 도메인을 포함하는 폴리펩타이드 사슬을 포함한다. 아울러, 본원에서 개시되는 방법에 사용하기 위한 결합 폴리펩타이드는 CH2 도메인의 적어도 일부분 (예, CH2 도메인의 전체나 일부)이 없을 수 있다. 전술한 바와 같이, 당업자라면, 이들 도메인 (예, 중쇄 부분들)이, 천연 면역글로불린 분자 유래 아미노산 서열을 수정하도록 변형시킬 수 있음을 알 것이다.

본원에 기술된 임의 항-CXCL13 항체, 항-CXCR5 항체, 또는 항-CXCR3 항체, 또는 그의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체에 있어서, 다량체의 하나의 폴리펩타이드 사슬에서 중쇄 부분은 다량체의 제2 폴리펩타이드 사슬의 중쇄 부분과 동일하다. 다른 예로, 본 발명의 중쇄 부분-함유성 단량체들은 동일하지 않다. 예컨대, 각 단량체는 여러가지 표적 결합부를 포함하여, 예컨대 2중 특이적인 항체를 형성할 수 있다.

본 발명에 기술된 치료 방법에 사용하기 위한 결합 분자의 중쇄 부분은 상이한 면역 분자들로부터 유래될 수 있다. 예컨대, 폴리펩타이드의 중쇄 부분은 IgG1 분자로부터 유래된 C_H1 도메인과 IgG3 분자로부터 유래된 힌지 영역을 포함할 수 있다. 다른 예로, 중쇄 부분은 부분적으로 IgG1 분자로부터, 그리고 부분적으로 IgG3 분자로부터 유래된 힌지 영역을 포함할 수 있다. 다른 예로, 중쇄 부분은 부분적으로 IgG1 분자로부터, 그리고, 부분적으로 IgG4 분자로부터 유래된 키메라 힌지를 포함할 수 있다.

본원에서, 용어 "경쇄 부분"은 면역글로불린 경쇄로부터 유래된 아미노산 서열, 예컨대 카파 또는 람다 경쇄를 포함한다. 바람직하기로는, 경쇄 부분은 VL 또는 CL 도메인 중 하나 이상을 포함한다.

본원에서 개시되는 방법에 유용한 항-CXCL13 항체, 항-CXCR5 항체, 또는 항-CXCR3 항체, 또는 그의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체는, 항원, 예컨대 인지하여 특이적으로 결합하는 본원에 기술된 표적 폴리펩타이드(예, CXCL13, CXCR5, 또는 CXCR3)의 에피토프(들) 또는 일부분(들)이라는 측면으로 기술되거나 구체적으로 명시될 수 있다. 항체의 항원 결합 도메인과 특이적으로 상호작용하는 표적 폴리펩타이드의 부분이 "에피토프" 또는 "항원 결정기"이다. 표적 폴리펩타이드는 하나의 에피토프를 포함할 수 있지만, 전형적으로는 2 이상의 에피토프를 포함하며, 항원의 크기, 구조 및 타입에 따라 임의 갯수의 에피토프를 포함할 수 있다. 아울러, 표적 폴리펩타이드 상의 "에피토프"는 비-폴리펩타이드 요소이거나 이를 포함할 수 있으며, 예컨대 에피토프는 탄수화물 측쇄를 포함할 수 있다.

항체의 펩타이드 또는 폴리펩타이드 에피토프의 최소 크기는 아미노산 약 4 내지 5개인 것으로 생각된다. 펩타이드 또는 폴리펩타이드 에피토프는 바람직하게는 적어도 7개, 더 바람직하게는 적어도 9개, 가장 바람직하게는 적어도 약 15개 내지 약 30개의 아미노산을 포함한다. CDR은 이의 3차 구조에서 항원성 펩타이드 또는 폴리펩타이드를 인지할 수 있기 때문에, 에피토프를 구성하는 아미노산들은 인접한 아미노산일 필요는 없으며, 어떤 경우에는 동일한 펩타이드 사슬 상에 있지 않을 수도 있다. 본원에서 개시되는 방법에 유용한 항-CXCL13 항체, 항-CXCR5 항체, 또는 항-CXCR3 항체에 의해 인지되는 펩타이드 또는 폴리펩타이드 에피토프는, CXCL13, CXCR5, 또는 CXCR3의 적어도 4개, 적어도 5개, 적어도 6개, 적어도 7개, 더 바람직하게는 적어도 8개, 적어도 9개, 적어도 10개, 적어도 15개, 적어도 20개, 적어도 25개, 또는 약 15개 내지 약 30개의 연속적인 또는 비연속적인 아미노산들로 구성된 서열을 포함할 수 있다.

"특이적으로 결합한다"는 것은 일반적으로 항체가 이의 항원 결합 도메인을 통해 에피토프에 결합하고, 이 결합이 항원 결합 도메인과 에피토프 간에 일부 상보성을 수반함을 의미한다. 이러한 정의에 따라, 항체는 랜덤한, 관련없는 에피토프에 결합하는 것 보다는 훨씬 용이하게 이의 항원 결합 도메인을 통해 에피토프에 결합할 때, 에피토프에 "특이적으로 결합한다"라고 한다. 용어 "특이성"은 본원에서 특정 에피토프에 특정 항체가 결합하는 상대적인 친화성을 나타내는 것이다. 예컨대, 항체 "A"는 항체 "B" 보다 소정의 에피토프에 대해 보다 높은 특이성을 가지는 것으로 판단할 수 있거나, 또는 항체 "A"가 동족 에피토프 "D" 보다 높은 특이성으로 에피토프 "C"에 결합할 수 있다고 할 수 있다.

"선호적으로 결합한다"는, 항체가 관련된, 비슷한, 상동적인 또는 유사한 에피토프에 결합하는 것 보다 훨씬 용이하게 에피토프에 특이적으로 결합하는 것을 의미한다. 즉, 소정의 에피토프에 "선호적으로 결합하는" 항체는 이러한 항체가 동족의 에피토프와 교차-반응할 수 있더라도, 동족 에피토프 보다 상기 에피토프에 결합할 가능성이 더 높을 것이다.

비제한적인 예로서, 항체가 제2 에피토프의 항체의 해리 상수(K_D) 보다 낮은 K_D로 제1 에피토프에 결합한다면, 항체가 제1 에피토프에 선호적으로 결합하는 것으로 간주할 수 있다. 다른 비제한적인 예로, 항체가 제2 에피토프에 대한 항체의 K_D 보다 적어도 10 정도로 낮은 K_D로 제1 에피토프에 결합한다면, 항체는 제1 항원에 선호적으로 결합하는 것으로 생각할 수 있다. 다른 비제한적인 예로, 항체가 제2 에피토프에 대한 항체의 K_D 보다 적어도 100 수준으로 낮은 K_D로 제1 에피토프에 결합한다면, 항체는 제1 항원에 선호적으로 결합하는 것으로 생각할 수 있다.

다른 비제한적인 예로, 항체가 제2 에피토프에 대한 항체의 오프율 (off rate, k(off)) 보다 낮은 k(off)로 제1 에피토프에 결합한다면, 항체는 제1 에피토프에 선호적으로 결합하는 것으로 생각할 수 있다. 다른 비제한적인 예로, 항체가 제2 에피토프에 대한 항체의 k(off) 보다 적어도 10 이하의 k(off)로 제1 에피토프에 결합한다면, 항체는 제1 항원에 선호적으로 결합하는 것으로 생각할 수 있다. 다른 비제한적인 예로, 항체가 제2 에피토프에 대한 항체의 k(off) 보다 적어도 100배 이하의 k(off)로 제1 에피토프에 결합한다면, 항체는 제1 항원에 선호적으로 결합하는 것으로 생각할 수 있다. 본원에 기술된 항체, 또는 그의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체는 5 X 10^-2 sec^-1, 10^-2 sec^-1, 또는 5 X l0^-3 sec^-1 이하의 오프율 (k(off))로, 본원에 기술된 표적 폴리펩타이드 (예, CXCL13, CXCR5, 또는 CXCR3, 예컨대, 인간, 쥣과 또는 인간 및 쥣과의 CXCL13, CXCR5, 또는 CXCR3) 또는 그의 단편이나 변이체에 결합하다고 칭할 수 있다. 특정 구현예에서, k(off)는 약 3 X 10^-2 이하이며, 예컨대, 항체는 3D2이고 CXCL13은 인간 또는 마우스 유래이다. 다른 구현예에서, k(off)는 약 3 X 10^-3이하이며, 예컨대, 항체는 MAb 5261이고, CXCL13은 인간 또는 마우스 유래이다. 다른 구현예에서, k(off)는 약 4 X 10^-3 이하이며, 예컨대, 항체는 MAb 5378이고, CXCL13은 인간 또는 마우스 유래이다. 일 구현예에서, 본 발명의 항체는 본원에 기술된 표적 폴리펩타이드 (예, CXCL13, 예컨대, 인간 CXCL13, 쥣과 CXCL13, 또는 인간 및 쥣과 CXCL13), 또는 이의 단편 또는 변이체에, 5 X 10^-4 sec^-1, 10^-4 sec^-1, 5 X 10^-5 sec^-1, 또는 10^-5 sec^-1, 5 X 10^-6 sec^-1, 10^-6 sec^-1, 5 X 10^-7 sec^-1 또는 10^-7 sec^-1 이하의 오프율(off rate) (k(off))로 결합하는 것일 수 있다.

본원에서 개시되는 방법에 유용한 항체, 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체는, 본원에 기술된 표적 폴리펩타이드 (예, CXCL13, CXCR5, 또는 CXCR3, 예컨대, 인간 CXCL13, CXCR5, 또는 CXCR3, 쥣과 CXCL13, CXCR5, 또는 CXCR3, 또는 인간 및 쥣과 CXCL13, CXCR5, 또는 CXCR3) 또는 이의 단편 또는 변이체에, 10³ M^-1 sec^-1, 5 X 10³ M^-1 sec^-1, 10⁴ M^-1 sec^-1, 5 X 10⁴ M^-1 sec^-1, 10⁵ M^-1 sec^-1, 5 X 10⁵ M^-1 sec^-1, 10⁶ M^-1 sec^-1 또는 5 X 10⁶ M^-1 sec^-1의 온율(on rate) (k(on))로 결합하는 것일 수 있다. 특정 구현예에서, k(on)은 약 5 X 10⁵ 이상이며, 예컨대, 항체는 3D2이고, CXCL13은 인간 유래이거나; 또는 k(on)은 약 1 X 10⁵ 이상이며, 예컨대, 항체는 3D2이고, CXCL13은 마우스 유래이다. 다른 구현예에서, k(on)은 약 1 X 10⁶ 이상이며, 예컨대, 항체는 MAb 5261이고, CXCL13은 인간 또는 마우스 유래이다. 다른 구현예에서, k(on)은 약 1 X 10⁶ 이상이며, 예컨대, 항체는 MAb 5378이고, CXCL13은 인간 또는 마우스이다. 일 구현예에서, 본 발명의 항체는 본원에 기술된 표적 폴리펩타이드 (예, CXCL13, 예컨대, 인간 CXCL13, 쥣과 CXCL13, 또는 인간 및 쥣과 CXCL13), 또는 이의 단편 또는 변이체에, 10⁵ M^-1 sec^-1, 5 X 10⁵ M^-1 sec^-1, 10⁶ M^-1 sec^-1, 5 X 10⁶ M^-1 sec^-1 또는 10⁷ M^-1 sec^-1의 온율 (k(on))로 결합하는 것일 수 있다.

에피토프에 대한 기준 항체의 결합을 어느 정도 차단하는 수준으로 소정의 에피토프에 선호적으로 결합한다면, 항체가, 소정의 에피토프에 대한 기준(reference) 항체의 결합을, 예컨대 항-CXCL13 항체, 항-CXCR5 항체, 또는 항-CXCR3 항체의 결합을 경쟁적으로 저해한다고 한다. 경쟁적인 저해는 당업계에 공지된 모든 방법, 예컨대 경쟁적인 ELISA 분석으로 측정할 수 있다. 항체는, 소정의 에피토프에 대한 기준 항체의 결합성을 적어도 90%, 적어도 80%, 적어도 70%, 적어도 60%, 또는 적어도 50%로 경쟁적으로 저해하는 것일 수 있다.

본원에서, 용어 "친화성"은 면역글로불린 분자의 CDR과 각 에피토프의 결합 세기의 값이다. 예컨대, Harlow et al. (1988) Antibodies: A Laboratory Manual(Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed.) pages 27-28을 참조한다. 본원에서, 용어 "화합성(avidity)"은 면역글로불린 집단과 항원 간의 복합체의 전체적인 안정성, 즉, 면역글로불린 혼합물과 항원의 기능적인 조합 세기를 의미한다. 예로, Harlow 문헌의 29-34 페이지를 참조한다. 화합성은 특이적인 에피토프를 가진 집단에서의 개별 면역글로불린 분자들의 친화성과, 또한 면역글로불린과 항원의 결합가(valency) 둘다와 관련있다. 예를 들어, 이가 단일클론 항체와 반복성이 높은 에피토프 구조를 가진 항원, 예컨대 폴리머 간의 상호작용이 한가지의 높은 화합성일 것이다.

본원에서 개시되는 방법에 유용한 항-CXCL13 항체, 항-CXCR5 항체, 또는 항-CXCR3 항체, 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체는 그것의 교차-반응성 측면에서 기술되거나 또는 명시될 수 있다. 본원에서, 용어 "교차-반응성"은 하나의 항원에 특이적인 항체가 제2 항원과 반응하는 능력을 의미하며, 2개의 다른 항원성 물질들 간의 관련성의 척도이다. 따라서, 항체가 이의 형성을 유도한 것이 아닌 다른 에피토프에 결합한다면, 항체는 교차 반응성인 것이다. 교차 반응성 에피토프는 일반적으로 유도성 에피토프와 동일한 상보적인 구조적 특징을 다수 포함할 수 있으며, 어떤 경우에는 오리지널 보다 실제 더 잘 맞을 수 있다.

예를 들어, 어떤 항체는 어느 정도의 교차-반응성을 가지며, 즉, 이는, 동족이지만 동일하진 않은 에피토프, 예컨대 참조 에피토프에 대해 적어도 95%, 적어도 90%, 적어도 85%, 적어도 80%, 적어도 75%, 적어도 70%, 적어도 65%, 적어도 60%, 적어도 55%, 및 적어도 50% 이상의 동일성 (당업계에 공지된 방법과 본원에 기술된 방법을 이용하여 계산함)을 가진 에피토프에 결합한다. 항체가 참조 에피토프에 대해 95% 미만, 90%% 미만, 85% 미만, 80% 미만, 75% 미만, 70% 미만, 65% 미만, 60% 미만, 55% 미만, 50% 미만의 동일성 (당업계에 공지된 방법과 본원에 기술된 방법을 이용하여 계산함)을 가진 에피토프에 결합하지 않는다면, 항체는 교차-반응성이 거의 또는 전혀 없다고 할 수 있다. 항체가 특정 에피토프의 임의의 다른 유사체, 오소로그 (ortholog) 또는 상동체에 결합하지 않는다면, 항체는 상기 에피토프에 "고특이적인" 것으로 간주될 수 있다.

본원에서 개시되는 방법에 유용한 항-CXCL13 항체, 항-CXCR5 항체, 또는 항-CXCR3 항체, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체는, 본 발명의 폴리펩타이드, 예컨대, CXCL13, CXCR5, 또는 CXCR3, 예컨대, 인간 CXCL13, CXCR5, 또는 CXCR3, 쥣과 CXCL13, CXCR5, 또는 CXCR3, 또는 인간 및 쥣과 CXCL13, CXCR5, 또는 CXCR3에 대한 이들의 결합 친화성 측면에서 기술되거나 또는 명시될 수 있다. 특정 구현예에서, 본 발명의 결합 친화성은 해리 상수 또는 Kd가 5 x 10^-2 M, 10^-2 M, 5 x 10^-3 M, 10^-3 M, 5 x 10^-4 M, 10^-4 M, 5 x 10^-5 M, 10^-5 M, 5 x 10^-6 M, 10^-6 M, 5 x 10^-7 M, 10^-7 M, 5 x 10^-8 M, 10^-8 M, 5 x 10^-9 M, 10^-9 M, 5 x 10^-10 M, 10^-10 M, 5 x 10^-11 M, 10^-11 M, 5 x 10^-12 M, 10^-12 M, 5 x 10^-13 M, 10^-13 M, 5 x 10^-14 M, 10^-14 M, 5 x 10^-15 M, 또는 10^-15 M 이하인 것을 포함한다. 일 구현예에서, 본 발명의, 항-CXCL13 결합 분자, 항-CXCR5 결합 분자, 또는 항-CXCR3 결합 분자, 예컨대, 항원 또는 이의 항원 결합 단편은, 인간 CXCL13, CXCR5, 또는 CXCR3에, Kd 약 5 x 10^-9 M - 약 5 x 10^-10 M으로 결합하며, 예로, 항체는 MAb 5261이고, Kd는 약 5 x 10^-9 M 이하이다. 다른 구현예에서, 본 발명의, 항-CXCL13 결합 분자, 항-CXCR5 결합 분자, 또는 항-CXCR3 결합 분자, 예컨대, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 쥣과 CXCL13, CXCR5, 또는 CXCR3에 Kd 약 5 x 10^-7 M - 약 9 x 10^-9 M으로 결합하며, 예로, 항체는 MAb 5261이고, Kd는 약 8 x 10^-9 M 이하이다.

본원에서 개시되는 방법에 유용한 항-CXCL13 항체, 항-CXCR5 항체, 또는 항-CXCR3 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체는 "다중 특이적", 예컨대 2중 특이적, 3중 특이적 또는 그 이상의 다중 특이적일 수 있으며, 이는 동시에 하나 이상의 다른 항원 (예, 단백질)에 존재하는 2 이상의 상이한 에피토프를 인지하여 결합하는 것을 의미한다. 즉, 항-CXCL13 항체, 항-CXCR5 항체, 또는 항-CXCR3 항체가 "단일 특이적"이거나 또는 "다중 특이적", 예컨대 "2중 특이적"인지는, 결합 폴리펩타이드와 반응하는 상이한 에피토프의 수를 나타낸다. 다중 특이적인 항체는 본원에 기술된 표적 폴리펩타이드의 여러가지 에피토프에 대해 특이적일 수 있거나, 또는 이는 표적 폴리펩타이드 뿐만 아니라 이종의 폴리펩타이드나 또는 고형 지지 물질 등의 이종의 에피토프에 대해 특이적일 수 있다.

본원에서, 용어 "결합가(valency)"는 결합 펩타이드 또는 CXCL13 결합 분자, CXCR5 결합 분자, 또는 CXCR3 결합 분자, 예컨대 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 존재하는 잠재적인 결합 도메인의 수, 예컨대 항원 결합 도메인의 수를 나타낸다. 각 결합 도메인은 하나의 에피토프에 특이적으로 결합한다. 결합 폴리펩타이드 또는 CXCL13 결합 분자, CXCR5 결합 분자, 또는 CXCR3 결합 분자가 1 보다 많은 수의 도메인을 포함한다면, 각 결합 도메인은 2개의 결합 도메인을 가진 "2가 단일 특이적"인 항체에서는 동일한 에피토프에 특이적으로 결합할 수 있거나, 또는 2개의 결합 도메인을 가진, 즉 "2가 이중 특이적"인 항체에서는 상이한 에피토프들에 특이적으로 결합할 수 있다. 또한, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 각 특이성에 대해 2중 특이적이며 2가일 수 있다 ("2중 특이적인 4가 항체"라 함). 다른 구현예에서, 4가 미니바디(minibody) 또는 도메인이 결손된 항체가 제조될 수 있다.

2중 특이적인 2가 항체 및 이의 제조 방법은, 예컨대 미국 특허 5,731,168; 5,807,706; 5,821,333; 및 미국 출원 공개번호 2003/020734와 2002/0155537에 설명되어 있으며, 이들 문헌 모두 원용에 의해 본 발명에 포함된다. 2중 특이적인 4가 항체 및 이의 제조 방법은, 예컨대 WO 02/096948과 WO 00/44788에 설명되어 있으며, 이들 문헌 모두 원용에 의해 본 발명에 포함된다. 일반적으로, PCT 공개공보 WO 93/17715; WO 92/08802; WO 91/00360; WO 92/05793; Tutt et al. (1991) J. Immunol. 147:60-69 (1991); 미국 특허 4,474,893; 4,714,681; 4,925,648; 5,573,920; 5,601,819; Kostelny et al. (1992) J. Immunol . 148:1547-1553 (1992)을 참조한다.

전술한 바와 같이, 다양한 면역글로불린 클래스의 서브유닛 구조와 불변부의 3차 구조는 잘 알려져 있다. 본원에서, 용어 "VH 도메인"은 면역글로불린 중쇄의 아미노 말단의 가변 도메인을 포함하며, 용어 "CH1 도메인"은 면역글로불린 중쇄의 첫번째 (아미노 최말단) 불변부 도메인을 포함한다. CH1 도메인은 VH 도메인과 인접하며, 면역글로불린 중쇄 분자의 힌지 영역에 아미노 말단이다.

본원에서, 용어 "CH2 도메인"은 예컨대 통상적인 넘버링 체계로 항체의 약 244번 잔기에서 360번 잔기까지 이어지는 중쇄 분자의 일부 (잔기 244 - 360, Kabat numbering system; 및 잔기 231-340, EU 넘버링 시스템; Kabat EA et al. 참조)을 포함한다. CH2 도메인은 다른 도메인과 밀접하게 쌍을 이루지 않은 유일한 것이다. 오히려, 2개의 N-연결된 분지형 탄수화물 사슬이 온전한 천연 IgG 분자의 2개의 CH2 도메인 사이에 끼여 있다. CH3 도메인이 CH2 도메인에서 IgG 분자의 C-말단까지 연장되고 약 108개의 잔기를 포함하는 것으로 잘 알려져 있다.

본원에서, 용어 "힌지 영역"은 CH1 도메인과 CH2 도메인을 연결하는 중쇄 분자의 일부분이다. 힌지 영역은 약 25개의 잔기를 포함하며, 유연하므로, 따라서 2개의 N-말단 항원 결합 영역들이 독립적으로 움직일 수 있도록 해준다. 힌지 영역은 3개의 구별되는 도메인, 상위, 중위 및 하위 힌지 도메인으로 다시 나눌 수 있다 (Roux et al. J. Immunol . 161:4083 (1998)).

본원에서, 용어 "이황화 결합"은 2개의 황 원자 사이에 형성된 공유 결합을 포함한다. 아미노산 시스테인은 2번째 티올기와 이황화 결합 또는 브릿지를 형성할 수 있는 티올기를 포함하고 있다. 대부분의 천연 IgG 분자들의 경우, CH1과 CL 영역들은 이황화 결합에 의해 연결되어 있으며, 2개의 중쇄는 Kabat 넘버링 시스템에 따른 239 및 242에 대응되는 위치 (226 또는 229번 위치, EU 넘버링 시스템)에서 이황화 결합에 의해 연결되어 있다.

본원에서, 용어 "키메라 항체"는 면역반응성 영역 또는 부위가 제1 종으로부터 수득 또는 유래되었고, 불변부 (온전한, 부분적인 또는 본 발명에 따라 변형될 수 있음)은 제2 종으로부터 수득되는, 임의의 항체를 의미한다. 특정 구현예에서, 표적 결합 영역 또는 부위는 인간을 제외한 소스 (예, 마우스 또는 영장류)로부터 유래될 것이며, 불변부는 인간 유래 (예, 본원에 기술된 단일클론 항체 (MAb) 1475)이다.

본원에서, 용어 "조작된 항체"는, 중쇄, 경쇄 또는 이 둘다 중 어느 하나에 있는 가변 도메인으로 공지 특이성을 구비한 항체로부터 하나 이상의 CDR을 적어도 부분적으로 치환함으로써, 필요에 따라서는, 프레임워크 영역의 적어도 부분적인 치환 및 서열 변동에 의해, 변이된, 항체를 의미한다. CDR은 프레임워크 영역이 유래된 항체와 동일한 클래스 또는 심지어는 서브클래스의 항체로부터 유래될 수도 있지만, CDR은 상이한 클래스의 항체로부터, 바람직하게는 상이한 종으로부터 유래된 항체로부터 유래될 수 있다. 공지된 특이성의 인간 이외의 종에 대한 항체로부터 유래된 하나 이상의 "공여" CDR이, 인간 중쇄 또는 경쇄의 프레임워크 영역에 그래프트된 조작된 항체를, 본원에서는 "인간화 항체"라고 한다. 반드시, 모든 CDR을 공여체의 가변 도메인 유래의 전체 CDR로 치환하여, 하나의 가변 도메인이 다른 것에 항원 결합하는 능력을 전달할 필요는 없을 수 있다. 오히려, 표적 결합 부위의 활성을 유지하는데 필수적인 잔기를 전달하는 것만 필요할 수도 있다. 특정 구현예에서, 인간화 항체는 공여체의 가변 중쇄 도메인 유래의 CDR 1, 2 또는 3개를 포함한다. 다른 구현예에서, 인간화 항체는 공여체의 가변성 경쇄 모데인 유래의 CDR 1, 2 또는 3개를 포함한다.

인간화 항체의 프레임워크 영역을 "전체 인간 프레임워크 영역"이라고 칭하는 경우, 인간화 항체의, 경쇄, 중쇄 또는 이 둘다에서, 가변 도메인내 프레임워크 영역은, 인간 기원의 잔기만 포함할 수 있다는 것으로 이해된다. 다른 예로, 공여체의 가변 도메인의 프레임워크 영역(들)을 구성하는 하나 이상의 잔기는, 필요에 따라 CXCL13, CXCR5, 또는 CXCR3 항원에 대한 결합성을 강화하거나 또는 적절한 결합성을 유지하기 위해, 인간화 항체의 중쇄, 경쇄 또는 이 둘다의 가변 도메인의 인간 프레임워크 영역(들)에서의 대응되는 위치로 조작할 수 있다. 이러한 방식으로 조작된 인간 프레임워크 영역은, 따라서, 인간 및 공여체의 프레임워크 잔기들의 혼합을 포함할 것이며, 이를 본원에서는 "부분적인 인간 프레임워크 영역"이라고 한다.

예를 들어, 항-CXCL13, 항-CXCR5 항체, 또는 항-CXCR3 항체의 인간화는 윈터 및 동료에 의해 기술된 방법 (Jones et al. Nature 321:522-525 (1986); Riechmann et al. Nature 332:323-327 (1988); Verhoeyen et al. Science 239:1534-1536 (1988))으로, 설치류나 돌연변이 설치류의 CDR 또는 CDR 서열을 인간 항-CXCL13, 항-CXCR5 항체, 또는 항-CXCR3 항체의 대응되는 서열로 치환함으로써, 기본적으로 수행할 수 있다. 예로, 미국 특허 5,225,539; 5,585,089; 5,693,761; 5,693,762; 및 5,859,205를 참조하며, 원용에 의해 본 명세서에 포함된다. 제조되는 인간화 항-CXCL13, 항-CXCR5 항체, 또는 항-CXCR3 항체는 인간화 항체의 중쇄 및/또는 경쇄의 가변 도메인의 전체 인간 프레임워크 영역내에 위치된 하나 이상의 설치류 또는 돌연변이 설치류의 CDR을 포함하게 될 것이다. 어떤 경우에는, 인간화 항-CXCL13, 항-CXCR5 항체, 또는 항-CXCR3 항체의 하나 이상의 가변 도메인의 프레임워크 영역내 잔기가 대응되는 비-인간계(예, 설치류) 잔기로 치환되며 (예, 미국 특허 5,585,089; 5,693,761; 5,693,762; 및 6,180,370), 이 경우, 제조되는 인간화 항-CXCL13, 항-CXCR5 항체, 또는 항-CXCR3 항체는 중쇄 및/또는 경쇄의 가변 도메인에 부분적인 인간 프레임워크 영역을 포함할 수 있다.

아울러, 인간화 항체는 수여 항체 또는 공여 항체에서 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 이러한 변형은 항체 성능 (예, 원하는 친화성을 얻기 위해)을 추가로 강화한다. 일반적으로, 인간화 항체는 적어도 하나 이상 및 전형적으로, 전체 또는 실질적으로 전체 CDR이 비-인간 면역글로불린의 것에 대응되고, 전체 또는 실질적으로 전체 프레임워크 영역이 인간 면역글로불린 서열의 프레임워크 영역인, 2개의 가변 도메인 전체를 실질적으로 포함할 것이다. 또한, 인간화 항체는 면역글로불린 불변부(Fc)의 일부를 적어도, 전형적으로 인간 면역글로불린의 면역글로불린 불변부(Fc)를 포함할 것이다. 추가적인 내용은, Jones et al. Nature 331:522-525 (1986); Riechmann et al. Nature 332:323-329 (1988); 및 Presta Curr. Op . Struct . Biol . 2:593-596 (1992)을 참조하며, 원용에 의해 본 명세서에 포함된다. 따라서, 이러한 "인간화" 항체는 전체 인간 가변 도메인 보다는 실질적으로 작은 부분이 비-인간 종 유래의 대응 서열로 치환된, 항체를 포함할 수 있다. 실제, 인간화 항체는 일부 또는 전체 CDR 잔기들과, 어쩌면 일부 골격 잔기들이 설치류 항체내 유사한 부위로부터 유래된 잔기로 치환된, 전형적인 인간 항체이다. 예로, 미국 특허 5,225,539; 5,585,089; 5,693,761; 5,693,762; 5,859,205를 참조한다. 또한, 미국 특허 6,180,370 및 국제 공개번호 WO 01/27160을 참조하며, 여기에는 미리 결정된 항원에 대해 향상된 친화성을 가진 인간화 항체를 제조하기 위한 기법과 인간화 항체가 기술되어 있다.

CXCL13에 결합하는 상업적인 항체들, 예컨대 래트 항-마우스 MAb 470 (R & D Systems) 및 마우스 항-인간 MAb 801 (R & D Systems)이 당해 기술 분야에 개시되어 있다. 또한, 미국 공개번호 2008 0227704 A1에 쥣과 항-CXCL13 항체가 개시되어 있으며, 이는 그 전체가 원용에 의해 본 명세서에 포함되어 있다. 모노클로날 항-CXCL13 항체 MAb 5261, MAb 5378, MAb 5080, MAb 1476, 및 3D2는 2011년 9월 1일에 출원된 "Anti-CXCL13 Antibodies and Methods of Using the Same" 명칭의 국제 출원 PCT/US2011/050177에 개시되어 있으며, 이는 2011년 5월 2일에 출원된 미국 가출원 시리얼 넘버 61/481,645, 및 2011년 9월 2일에 출원된 미국 가출원 시리얼 넘버 61/379,672를 우선권으로 주장하며, 이들은 각각 그 전체가 원용에 의해 본 명세서에 포함되어 있다.

모노클로날 항체 5261은 서열 번호 14로 표시된 서열을 가진 가변 중쇄 (VH) 도메인 및 서열 번호 19로 표시된 서열을 가진 가변 경쇄 (VL) 도메인을 포함한다. MAb 5261은 이의 중쇄 내에 인간 IgGamma1-F 알로타입 불변부 및 이의 경쇄 내에 인간 카파 불변부를 포함한다. 모노클로날 항체 5378은 서열 번호 14로 표시된 서열을 가진 가변 중쇄 (VH) 도메인 및 서열 번호 19로 표시된 서열을 가진 가변 경쇄 (VL) 도메인을 포함한다. MAb 5378은 이의 중쇄 내에 쥣과 IgG2a 불변부 및 이의 경쇄 내에 쥣과 카파 불변부를 포함한다. MAb 5080은 서열 번호 14로 표시된 서열을 가진 VH 도메인 및 서열 번호 21로 표시된 서열을 가진 VL 도메인을 포함한다. MAb 5080은 이의 중쇄 내에 인간 IgG1 불변부 및 이의 경쇄 내에 인간 카파 불변부를 포함한다. 모노클로날 항체 1476은 서열 번호 10으로 표시된 서열을 가진 VH 도메인 및 서열 번호 15로 표시된 서열을 가진 VL 도메인을 포함한다. MAb 1476은 이의 중쇄 내에 인간 IgG1 불변부 및 이의 경쇄 내에 인간 카파 불변부를 포함한다. 모노클로날 항체 3D2는 서열 번호 10으로 표시된 서열을 가진 VH 도메인 및 서열 번호 15로 표시된 서열을 가진 VL 도메인을 포함한다. MAb 3D2는 이의 중쇄 내에 쥣과 IgG1 불변부 및 이의 경쇄 내에 쥣과 카파 불변부를 포함한다.

일부 구현예에서, 본원에 개시되는 방법은 MAb 5261, MAb 5378, MAb 5080, MAb 1476, 또는 3D2 항-CXCL13 모노클로날 항체를 이용한다.

일부 구현예에서, 본원에 개시되는 방법에 사용되는 항체는 항-CXCL13 항체, 또는 CXCL13에 결합하는, 항원-결합 단편, 이의 단편, 변이체 또는 유도체를 포함한다. 특정 구현예에서, 항-CXCL13 항체는 인간 CXCL13, 영장류 CXCL13, 쥣과 CXCL13 또는 인간 및 쥣과 CXCL13 둘다에 결합한다. 특정 구현예에서, 본 발명의 항-CXCL13 항체는 인간화된다. 다른 구현예에서, 항-CXCL13 항체는 CXCL13가 이의 수용체, 예컨대, CXCR5 또는 CXCR3에 결합하는 것을 차단한다. 특정 구현예에서, 본 발명의 항-CXCL13 항체는 MAb 5261, MAb 5378, MAb 5080, MAb 1476, 또는 3D2, 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이다. 일 구현예에서, 본원에서 개시되는 방법은, 기준 항체와 동일한 CXCL13, CXCR5, 또는 CXCR3 에피토프에 특이적으로 결합하는, 분리된 결합 분자, 예컨대 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 변이체 및 유도체, 예컨대, MAb 5261, MAb 5378, MAb 5080, MAb 1476, 또는 3D2를 제공한다. 다른 구현예에서, 본원에서 개시되는 방법은, CXCL13에 특이적으로 결합하며, CXCL13, 예컨대 인간 CXCL13, 영장류 CXCL13, 쥣과 CXCL13 또는 인간과 쥣과의 CXCL13 둘다와의 특이적인 결합에 대해 기준 항체, 예컨대, MAb 5261, MAb 5378, MAb 5080, MAb 1476, 또는 3D2를 경쟁적으로 저해하는, 분리된 결합 분자, 예컨대 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공한다.

소정의 구현예에서, 본원에서 개시되는 방법에 유용한 결합 분자는 기준 항-CXCL13 항체 분자에 대해 적어도 약 80%, 약 85%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94% 또는 약 95%의 아미노산 서열 동일성을 가진 아미노산 서열을 가진다. 다른 구현예에서, 결합 분자는 기준 항체와 적어도 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 100%의 서열 동일 동일성을 공유한다. 특정 구현예에서, 기준 항체는 MAb 5261, MAb 5378, MAb 5080, MAb 1476, 또는 3D2이다.

다른 구현예에서, 본원에서 개시되는 방법은, 면역글로불린 중쇄 가변 도메인 (VH 도메인)을 포함하거나, 이로 필연적으로 이루어지거나, 또는 이로 이루어지되, 상기 VH 도메인의 CDR들 중 적어도 하나가 서열번호: 10 또는 14의 CDR1, CDR2 또는 CDR3와 적어도 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%이거나 또는 동일한 아미노산 서열을 가진, 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다.

다른 구현예에서, 본 발명은, 면역글로불린 중쇄 가변 도메인 (VH 도메인)을 포함하거나, 이로 필연적으로 이루어지거나, 또는 이로 이루어지되, 상기 VH 도메인의 CDR들 중 적어도 하나가 서열번호: 11, 12 또는 13과 적어도 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%이거나 또는 동일한 아미노산 서열을 가진, 분리된 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다.

다른 구현예에서, 본원에서 개시되는 방법은, 면역글로불린 중쇄 가변 도메인 (VH 도메인)을 포함하거나, 이로 필연적으로 이루어지거나, 또는 이로 이루어지되, 상기 VH 도메인은 서열번호: 10 또는 14와 적어도 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%이거나 또는 동일한 아미노산 서열을 가진, 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다.

또 다른 구현예에서, 본원에 개시되는 방법은, 면역글로불린 중쇄 가변 도메인 (VH 도메인)을 포함하거나, 이로 필연적으로 이루어지거나, 또는 이로 이루어지되, 상기 VH 도메인의 CDR들 중 적어도 하나가 서열번호: 10 또는 14의 CDR1, CDR2 또는 CDR3와, 1, 2, 3, 4 또는 5개의 보존적인 아미노산 치환을 제외하고는, 동일한 아미노산 서열을 가진, 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 이용한다.

또 다른 구현예에서, 본원에 개시되는 방법은, 면역글로불린 중쇄 가변 도메인 (VH 도메인)을 포함하거나, 이로 필연적으로 이루어지거나, 또는 이로 이루어지되, 상기 VH 도메인의 CDR들 중 적어도 하나가 서열번호: 11, 12 또는 13과, 1, 2, 3, 4 또는 5개의 보존적인 아미노산 치환을 제외하고는, 동일한 아미노산 서열을 가진, 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 이용한다.

또 다른 구현예에서, 본원에 개시되는 방법은, 면역글로불린 경쇄 가변 도메인 (VL 도메인)을 포함하거나, 이로 필연적으로 이루어지거나, 또는 이로 이루어지되, 상기 VL 도메인의 CDR들 중 적어도 하나가 서열번호: 15, 19 또는 21의 CDR1, CDR2 또는 CDR3와 적어도 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%이거나 또는 동일한 아미노산 서열을 가진, 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 이용한다.

또 다른 구현예에서, 본원에 개시되는 방법은, 면역글로불린 경쇄 가변 도메인 (VL 도메인)을 포함하거나, 이로 필연적으로 이루어지거나, 또는 이로 이루어지되, 상기 VL 도메인의 CDR들 중 적어도 하나가 서열번호: 16, 17, 18, 또는 20과 적어도 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%이거나 또는 동일한 아미노산 서열을 가진, 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 이용한다.

또 다른 구현예에서, 본원에 개시되는 방법은, 면역글로불린 경쇄 가변 도메인 (VL 도메인)을 포함하거나, 이로 필연적으로 이루어지거나, 또는 이로 이루어지되, 상기 VL 도메인의 CDR들 중 적어도 하나가 서열번호: 15, 19 또는 21과 적어도 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%이거나 또는 동일한 아미노산 서열을 가진, 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 이용한다.

또 다른 구현예에서, 본원에 개시되는 방법은, 면역글로불린 경쇄 가변 도메인 (VL 도메인)을 포함하거나, 이로 필연적으로 이루어지거나, 또는 이로 이루어지되, 상기 VL 도메인의 CDR들 중 적어도 하나가 서열번호 15, 19 또는 21의 CDR1, CDR2 또는 CDR3와, 1, 2, 3, 4 또는 5개의 보존적인 아미노산 치환을 제외하고는, 동일한 아미노산 서열을 가진, 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다.

다른 구현예에서, 본원에 개시되는 방법은, 면역글로불린 경쇄 가변 도메인 (VL 도메인)을 포함하거나, 이로 필연적으로 이루어지거나, 또는 이로 이루어지되, 상기 VL 도메인의 CDR들 중 적어도 하나가 서열번호 16, 17, 18, 또는 20과, 1, 2, 3, 4 또는 5개의 보존적인 아미노산 치환을 제외하고는, 동일한 아미노산 서열을 가진, 분리된 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다.

추가적인 구현예에서, 본 발명은, 서열번호 15, 19 또는 21과 적어도 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 가진 VL 도메인을 포함하거나, 이로 필연적으로 이루어지거나, 또는 이로 이루어지되, 코딩된 VL 도메인을 포함하는 항-CXCL13 항체가 CXCL13에 특이적으로 또는 선호적으로 결합하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 이용한다.

소정의 구현예에서, 본원에 개시되는 방법은, 아미노산 서열 번호 14로 표시된 서열을 가진 VH 도메인 및 아미노산 서열 번호 19로 표시된 서열을 가진 VL 도메인을 포함하거나, 본질적으로 이로 구성되거나, 또는 이로 구성된 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 이용한다. 이들 구현예 중 일부에서, 항체는 이의 중쇄 내에 인간 IgG1 불변부 및 이의 경쇄 내에 인간 카파 불변부를 포함한다.

특정 구현예에서, 본원에 개시되는 방법은, 아미노산 서열 번호 11로 표시된 서열을 가진 CDR1, 아미노산 서열 번호 12로 표시된 서열을 가진 CDR2, 및 아미노산 서열 번호 13으로 표시된 서열을 가진 CDR3를 포함하는 VH 도메인; 및 서열 번호 20로 표시된 서열을 가진 CDR1, 서열 번호 17로 표시된 서열을 가진 CDR2, 및 서열 번호 18로 표시된 서열을 가진 CDR3를 포함하는 VL 도메인을 포함하거나, 본질적으로 이로 구성되거나, 또는 이로 구성된 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 이용한다. 이들 구현예 중 일부에서, 항체는 이의 중쇄 내에 인간 IgG1 불변부 및 이의 경쇄 내에 인간 카파 불변부를 포함한다.

항-CXCL13 항체, 항-CXCR5 항체, 또는 항-CXCR3 항체에 대한 생물학적으로 활성 형태의 적정 변이체를 본 발명의 방법에 사용할 수 있다. 이러한 변이체는 모체 항-CXCL13 항체, 항-CXCR5 항체, 또는 항-CXCR3 항체의 바람직한 결합 특성을 보유할 것이다. 항체 변이체의 제조 방법은 당업계에서 일반적으로 이용가능하다.

돌연변이 유발 및 뉴클레오티드 서열 변형 방법들이 당해 기술 분야에 잘 알려져 있다. 예로, Walker and Gaastra, eds. (1983) Techniques in Molecular Biology (MacMillan Publishing Company, New York); Kunkel, Proc. Natl . Acad . Sci. USA 82:488-492 (1985); Kunkel et al ., Methods Enzymol . 154:367-382 (1987); Sambrook et al . (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor, N.Y.); 미국 특허 4,873,192; 및 문헌의 참조문헌을 참조하며, 이들 문헌은 원용에 의해 본 명세서에 포함된다. 대상 폴리펩타이드의 생물학적 활성에 영향을 미치지 않는 적절한 아미노산 치환에 대한 가이드는 Dayhoff et al. (1978) in Atlas of Protein Sequence and Structure (Natl. Biomed. Res. Found., Washington, D.C.), pp. 345-352에 기재된 모델에서 확인할 수 있으며, 상기 문헌은 그 전체가 원용에 의해 본 명세서에 포함된다. Dayhoff 등의 모델에서는, PAM (Point Accepted Mutation) 아미노산 유사성 매트릭스 (PAM 250 matrix)를 사용하여, 적합한 보존적인 아미노산 치환을 결정한다. 하나의 아미노산을 특성이 유사한 다른 아미노산으로 교체하는 등의 보존적인 치환이 바람직할 수 있다. Dayhoff 등의 PAM 250 매트릭스에 의해 기술된 보존적인 아미노산 치환의 예로는 Gly ↔ Ala, Val ↔ Ile ↔ Leu, Asp ↔ Glu, Lys ↔ Arg, Asn ↔ Gln, 및 Phe ↔ Trp ↔ Tyr이 있으나, 이들로 한정되는 것은 아니다.

대상 항-CXCL13 결합 분자, 항-CXCR5 결합 분자, 또는 항-CXCR3 결합 분자의 변이체, 예컨대, 대상 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 또는 폴리펩타이드를 구축함에 있어, 변이체가 계속적으로 원하는 특성, 예컨대 CXCL13, CXCR5, 또는 CXCR3, 예로, 인간, 영장류, 쥣과, 또는 인간 및 쥣과 CXCL13, CXCR5, 또는 CXCR3에 특이적으로 결합할 수 있는 특성을 가지도록, 변형이 이루어진다. 명백하게는, 변이체 폴리펩타이드를 코딩하는 DNA에 행해지는 모든 돌연변이들은 리딩 프레임 이외 서열에 위치되어서는 안되며, 바람직하게는 mRNA의 이차 구조를 형성할 수 있는 상보적인 영역을 형성해서는 안될 것이다. 유럽 특허 번호 EP0075444 B1을 참조한다.

항-CXCL13 결합 분자, 항-CXCR5 결합 분자, 또는 항-CXCR3 결합 분자, 예컨대 항체 또는 항원-결합 단편, 결합 특이성을 측정하는 방법은, 비제한적인 예로서, 표준 경쟁 결합 분석, T 세포 또는 B 세포에 의한 면역글로불린 분비 모니터링 분석, T 세포 증식 분석, 세포자살 분석, ELISA 분석 등을 포함한다. 예를 들어, WO 93/14125; Shi et al ., Immunity 13:633-642 (2000); Kumanogoh et al ., J Immunol 169:1175-1181 (2002); Watanabe et al., J Immunol 167:4321-4328 (2001); Wang et al., Blood 97:3498-3504 (2001); 및 Giraudon et al., J Immunol 172(2):1246-1255 (2004)에 기술된 상기한 분석들을 참조하며, 이들 문헌은 원용에 의해 본 명세서에 포함된다.

대조군 폴리펩타이드의 불변부, CDR, VH 또는 VL 도메인을 포함하여, 임의의 특정 폴리펩타이드가, 다른 폴리펩타이드와 적어도 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%, 또는 100%의 동일성을 가지는 지에 대해 본원에서 기술되는 경우, 동일성 %는 비제한적인 예로서 BESTFIT 프로그램 (Wisconsin Sequence Analysis Package, Version 8 for Unix, Genetics Computer Group, University Research Park, 575 Science Drive, Madison, Wis. 53711) 등의 당해 기술 분야에 공지된 컴퓨어 프로그램/소프트웨어와 방법을 이용하여 결정할 수 있다. BESTFIT는 Smith 및 Waterman (1981)(Adv . Appl . Math . 2:482-489)의 국소 상동성 알고리즘을 이용하여, 2개의 서열 간의 최상의 상동성 세그먼트를 검색한다. BESTFIT 또는 임의의 다른 서열 정렬 프로그램을 이용하여 특정 서열이 본 발명에 따른 기준 서열과 예컨대 95% 동일한지를 결정하는 경우, 자명하게, 동일성%가 기준 폴리펩타이드 서열의 전장에 대해 계산되고, 기준 서열에서 아미노산 총 수에 대한 최대 5%로 상동성 갭을 허용하도록, 파라미터가 설정된다.

본 발명의 목적에서, 서열 동일성%는 갭 오픈 패널티 12, 갭 연장 패널티 2, BLOSUM 매트릭스 62의 어파인 갭 검색(affine gap search)을 이용한 Smith-Waterman 상동성 검색 알고리즘으로 결정할 수 있다. Smith-Waterman 상동성 검색 알고리즘은 Smith 및 Waterman (1981) Adv. Appl. Math. 2:482-489에 기재되어 있다. 예컨대, 변이체는 기준 항-CXCL13 항체(예, MAb 5261, MAb 5378, MAb 5080, MAb 1476, 또는 3D2), 항-CXCR5 항체 또는 항-CXCR3 항체와, 적게는 1-15개의 아미노산 잔기가, 적게는 1-10개의 아미노산 잔기가, 예컨대 6-10, 적게는 5개, 적게는 4, 3, 2 또는 심지어 1개의 아미노산 잔기가 다를 수 있다.

CXCL13, CXCR5, 또는 CXCR3에 특이적으로 결합할 수 있으며 바람직한 CXCL13 차단 활성을 보유하고 있는, 폴리펩타이드의 정확한 화학 구조는, 여러가지 인자에 의해 결정된다. 이온화가능한 아미노기와 카르복시기가 분자에 존재하기 때문에, 특정 폴리펩타이드는 산성 염 또는 염기성 염, 또는 중성 형태로서 수득할 수 있다. 적정 환경 조건에 놓여졌을 때 그것의 생물학적 활성을 유지하는 그러한 모든 조제물은, 본원에 기술된 항-CXCL13 항체, 항-CXCR5 항체 또는 항-CXCR3 항체의 정의에 포함된다. 아울러, 폴리펩타이드의 1차 아미노산 서열은 당 모이어티를 이용한 유도체화에 의해 (당화) 또는 그외 지질, 인산, 아세틸기 등의 추가적인 분자에 의해 늘어날 수 있다. 또한, 사카라이드와의 접합에 의해서도 커질 수 있다. 이러한 증대에 대한 임의 측면은 생산 숙주의 번역 후 프로세싱 시스템을 통하여 달성되며, 그외 그러한 변형은 시험관내에서 도입될 수 있다. 임의 경우에, 이러한 변형은 항-CXCL13 항체, 항-CXCR5 항체 또는 항-CXCR3 항체의 바람직한 특성이 파괴되지 않는 한 본원에 사용되는 항-CXCL13 항체, 항-CXCR5 항체 또는 항-CXCR3 항체의 정의에 포함된다. 이러한 변형은 다양한 분석에서 폴리펩타이드의 활성 강화 또는 약화에 의해, 활성에 정량적으로 또는 질적으로 영향을 미칠 수 있을지가 예측된다. 또한, 사슬내 개개 아미노산 잔기들은 산화, 환원 또는 그외 유도체화에 의해 변형될 수 있으며, 폴리펩타이드를 잘라 활성을 보유한 단편을 수득할 수 있다. 원하는 활성 (즉, CXCR5, 또는 CXCR3에 대한 결합 특이성, 결합 친화성, 및/또는 항-CXCL13 차단 활성)을 파괴하지 않는 이러한 변형은, 본원에 기술된 대상 항-CXCL13 항체, 항-CXCR5 항체 또는 항-CXCR3 항체의 정의로부터 폴리펩타이드 서열을 배제하지 않는다.

당업계에서는 폴리펩타이드 변이체의 제조 및 이용에 대한 실질적인 지침을 제공한다. 항-CXCL13 결합 분자, 항-CXCR5 결합 분자 또는 항-CXCR3 결합 분자, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체의 제조에 있어, 당업자는 천연 단백질의 뉴클레오타이드 또는 아미노산 서열에 대한 변형으로 본 발명의 방법에 사용되는 약학 조성물의 치료학적 활성 성분으로서 사용하기 적합한 변이체를 만들 수 있을지를 쉽게 결정할 수 있다.

대조군 항-CXCL13 항체, 항-CXCR5 항체 또는 항-CXCR3 항체의 불변부는 여러가지 방식으로 작동자 기능을 변형시키도록 변형할 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 6,737,056B1 및 미국 출원 공개번호 2004/0132101A1을 참조하며, 이들 문헌에는 Fc 수용체에 해단 항체 결합성을 최적화한 Fc 돌연변이들이 기술되어 있다.

임의의 항-CXCL13 항체, 항-CXCR5 항체 또는 항-CXCR3 항체에서, Fc 부분은 당업계에 공지된 기법으로 작동자의 기능이 감소되도록 돌연변이시킬 수 있다. 예컨대, 불변부 도메인의 결손 또는 불활성화 (점 돌연변이나 그외 수단을 통해)는 순환성 변형 항체의 Fc 수용체 결합성을 떨어뜨려, 따라서 종양 국지화(tumor localization)를 높일 수 있다. 다른 경우에, 본 발명에 상응하는 불변부 변형이 보체 결합성을 완화하여, 따라서 혈청 반감기와 접합된 세포독소의 비특이적인 조합을 낮출 수 있다. 불변부에 대해 또다른 변형을 적용하여, 항원 특이성 또는 항체 가용성 증가로 인한 국지화를 높일 수 있는 이황화 결합 또는 올리고사카라이드 모이어티를 변형시킬 수 있다. 변형에 대한, 종양 국지화, 생물분배 (biodistribution) 및 혈청 반감기 등의, 수득되는 생리학적 프로파일, 생체이용성 및 그외 생화학적 효과는 쉽게 측정할 수 있으며, 과도한 실험없이도 잘 알려져 있는 면역학적 기법을 이용하여 정량할 수 있다.

일반적으로, 본원에서 개시되는 방법에 유용한 CXCR5 결합 분자 또는 CXCR3 결합 분자는 CXCR5 수용체 또는 CXCR3 수용체를 활성화하지 않는다 (즉, 수용체의 작용자가 아님).

본 발명의 항-CXCL13 항체, 항-CXCR5 항체 또는 항-CXCR3 항체는, 또한, 예컨대 공유 부착이 항체가 이의 동족 에피토프(cognate epitope)에 특이적으로 결합하도록 방지하지 못하도록, 항체에 임의 타입의 분자를 공유 부착함으로써, 변형되어진 유도체를 포함한다. 예컨대, 비제한적으로, 항체 유도체는, 예컨대 당화, 아세틸화, 페길화, 인산화, 아미드화, 공지된 보호/차단기에 의한 유도체화, 단백질분해성 절단, 세포 리간드 또는 그외 단백질로의 연결 등에 의해 변형되어진 항체를 포함한다. 임의의 다수 화학적 변형은, 비제한적으로, 특이적인 화학적 절단, 아세틸화, 포르밀화 등의 공지 기법으로 수행할 수 있다. 또한, 유도체는 하나 이상의 비-고전적인 아미노산을 포함할 수 있다.

"보존적인 아미노산 치환"은 아미노산 잔기가 유사한 전하를 띤 측쇄를 가진 아미노산 잔기로의 치환이다. 유사한 전하를 띄는 측쇄를 가진 아미노산 잔기 패밀리는 당업계에 명시되어 있다. 이들 패밀리는, 염기성 측쇄를 가진 아미노산 (예, 라이신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄를 가진 아미노산 (예, 아스파르트산, 글루탐산), 비하전된 극성 측쇄를 가진 아미노산 (예, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 타이로신, 시스테인), 무극성 측쇄를 가진 아미노산 (예, 알라닌, 발린, 루신, 이소루신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌, 트립토판), 베타-분지형 측쇄를 가진 아미노산 (예, 트레오닌, 발린, 이소루신) 및 방향족 측쇄를 가진 아미노산 (예, 타이로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)을 포함한다. 다른 예로, 포화 돌연변이 유발 (saturation mutagenesis) 등에 의해 코딩 서열의 전체 또는 일부에 무작위로 돌연변이를 도입할 수 있으며, 제조되는 돌연변이는 생물학적 활성에 대해 스크리닝하여, 활성 (즉, CXCL13, CXCR5, 또는 CXCR3에 대한 결합 특이성, 결합 친화성, 및/또는 CXCL13 차단 활성)을 가진 돌연변이를 동정할 수 있다.

예를 들어, 돌연변이를 항체 분자의 프레임워크 영역에만 또는 CDR 영역에만 도입하는 것도 가능한다. 도입된 돌연변이는 침묵 또는 중성의 미스센스 돌연변이 (neutral missense mutation), 즉 항체의 항원 결합력에 대해 효과가 없거나 또는 거의 없을 수 있다. 이러한 타입의 돌연변이는 코돈 용법(codon usage)을 최적화하거나 또는 하이브리도마의 항체 생산을 향상시키는데 유용할 수 있다. 또는, 비-중성의 미스센스 (non-neutral missense) 돌연변이는 항체의 항원 결합력을 변형시킬 수 있다. 대부분의 침묵 및 중성의 미스센스 돌연변이의 위치는 프레임워크 영역내일 가능성이 있지만, 대부분의 비-중성의 미스센스 돌연변이의 위치는 절대적인 요건은 아니지만 CDR내일 수 있다. 당업자는, 항원 결합 활성에 대한 비변형 또는 결합 활성에 대한 변형 없음 (예, 항원 결합 활성 개선 또는 항체 특이성 변화) 등의 바람직한 특성을 가진 돌연변이 분자를 제작 및 테스트할 수 있을 것이다. 돌연변이 유발 후, 코딩된 단백질을 통상적으로 발현시킬 수 있으며, 코딩된 단백질의 기능적 및/또는 생물학적 활성 (예, CXCL13, CXCR5, 또는 CXCR3 폴리펩타이드의 하나 이상의 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 능력)을 본원에 기술된 기법을 이용하거나 또는 당업계에 공지된 기법으로 통상적으로 변형시켜, 확인할 수 있다.

특정 구현예에서, 본원에서 개시되는 방법에 유용한 항-CXCL13 항체, 항-CXCR5 항체 또는 항-CXCR3 항체는 대조군 항-CXCL13 항체, 항-CXCR5 항체 또는 항-CXCR3 항체와 비교해 상보성 결정 영역 (CDR) 하나 이상을 포함한다. "최적화된 CDR"은, CDR이 최적화된 CDR을 포함하는 항-CXCL13 항체, 항-CXCR5 항체 또는 항-CXCR3 항체에 부여되는, 지속된 또는 개선된 결합 친화성 및/또는 항-CXCL13 활성을 토대로, CDR이 서열 변형되고 최적화되었다는 것이다.

다양한 면역 세포들 (예, B 세포, 여포성 헬퍼 T 세포 및 방금 활성화된 T 세포)에서 발견되는, 이의 수용체인 CXCR5를 통해, CXCL13은 면역 시스템 항상성 유지, 림프성 기관 형성(lymphoid organogenesis), 백혈구 이동(leukocyte trafficking) 및 주화성 이동 뿐만 아니라 2차 림프 조직 (예, 배중심)의 발생에 필연적인 세포내 변화를 유도한다. 따라서, "항-CXCL13 활성" 또는 "CXCL13 차단 활성"은 CXCL13와 관련된 하기 활성들 중 한가지 이상을 조절하는 활성을 포함할 수 있다: CXCL13가 이의 수용체 (예, CXCR5 또는 CXCR3)와의 상호작용을 차단, B 세포와 여포 B-헬퍼 T 세포가 염증이 발생된 조직으로 이동하는 것을 저해, 배중심 (germinal center) 형성의 저해 (예, 자가면역 질환의 경우), 속발성 또는 비정상적 림프 여포의 저해; 암 세포 증식 및 종양 장애 전파력의 저해; 또는 CXCL13-발현 세포와 관련된 그외 임의 활성. 항-CXCL13 활성은 CXCL13 발현과 관련된 질환, 비제한적인 예로서, 소정의 유형의 자가면역 질환 (예, 다발성 경화증, 관절염 (예, 류마티스 관절염), 만성 위염, 위성 림프종, 이식 거부 반응, 쇼그렌 증후군 (SS), 전신 루푸스 홍반증 (SLE), C형 간염 바이러스 감염에서의 활성형의 혼성 한랭글로불린혈증 (active mixed cryoglobulinemia) (MC) 혈관염, 소아기 피부근염 및 중증 근무력증) 및 특정 암 (예, 버킷 림프종, 비-호지킨 림프종, MALT 림프종 (예, 위성 MALT 림프종), 암종 (예, 대장, 전립선, 유방, 위, 식도 및 췌장), 및 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 뿐만 아니라 헬리코박터 감염 유발성 염증 질환 등의 기타 염증 질환, 예컨대 위염, 궤양 및 위 점막 병변의 발병 또는 중증도 감소의 원인일 수 있다. 본원 도처에서 보다 상세하게 논의되어 있는 바와 같이, 본 발명의 항-CXCL13 결합 분자, 항-CXCR5 결합 분자, 또는 항-CXCR3 결합 분자, 또는 가용성 CXCR5 또는 CXCR3은, 추가로 N-또는 C- 말단에 이종의 폴리펩타이드가 재조합으로 융합하거나, 또는 폴리펩타이드나 그외 조성물에 화학적으로 접합 (공유 및 비-공유 접합 포함)할 수 있다. 예를 들어, 항-CXCL13 항체, 항-CXCR5 항체, 또는 항-CXCR3 항체 또는 가용성 CXCR5 또는 CXCR3를 검출 분석에서 표지물질로 이용가능한 분자 및 이종의 폴리펩타이드, 약물, 방사성 핵종 또는 독소 등의 작동자 분자에 재조합으로 융합 또는 접합시킬 수 있다. 예컨대, PCT 공개공보 WO 92/08495; WO 91/14438; WO 89/12624; 미국 특허 5,314,995; 및 EP 396,387을 참조한다.

본원에서, 용어 "연결된", "융합된" 또는 "융합"은 상호 호환적으로 사용된다. 이들 용어는 화학적 접합 또는 재조합 수단 등의 어떠한 수단에 의해 2 이상의 요소나 구성을 함께 연결하는 것을 의미한다. "프래임내 융합(in-frame fusion)"은 오리지날 ORF의 정확한 번역 리딩 프래임을 유지하는 방식으로 연속적으로 2 이상의 폴리펩타이드 오픈 리딩 프래임(ORF)의 연결하여 보다 긴 ORF를 형성하는 것을 의미한다. 따라서, 재조합 융합 단백질은 오리지날 ORF에 의해 코딩되는 폴리펩타이드에 대응되는 2 이상의 세그먼트를 포함하는 (세그먼트들이 통상적으로 그렇게 본래 연결되지 않은) 단일 단백질이다. 즉, 리딩 프래임은 융합된 세그먼트들 전체가 연속적으로 생성되지만, 세그먼트는 예컨대 프래임내 링커 서열에 의해 물리적으로 또는 구조적으로 분리될 수 있다. 예컨대, 면역글로불린 가변부의 CDR을 코딩하고 있는 폴리뉴클레오타이드는 프래임내로 융합되지만, "융합된" CDR이 연속적인 폴리펩타이드의 일부분으로서 함께 번역되는 한, 하나 이상의 면역글로불린 프레임워크 영역 또는 추가적인 CDR 영역을 코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 의해 분리되어 있을 수 있다.

본원에 개시되는 방법에 유용한 항-CXCL13 항체, 항-CXCR5 항체, 또는 항-CXCR3 항체는, 즉 공유 부착이 CXCL13, CXCR5, 또는 CXCR3의 항체 결합성을 방해하지 않도록 항체에 임의 타입의 분자를 공유 부착함으로써, 변형된 유도체를 포함한다. 예컨대, 비제한적으로, 항체 유도체는 예컨대 당화, 아세틸화, 페길화, 인산화, 아미드화, 공지된 보호/차단기에 의한 유도체화, 단백질분해성 절단, 세포 리간드나 다른 단백질에 연결 등에 의해, 변형된 항체를 포함한다. 임의의 다수 화학 변형을 공지된 기법으로 수행할 수 있으며, 그 예로는 비제한적으로 특이적인 화학 절단, 아세틸화, 포르밀화 등을 포함한다. 부가적으로, 유도체는 하나 이상의 비-고전적인 아미노산을 포함할 수 있다.

항-CXCL13 결합 분자, 항-CXCR5 결합 분자, 또는 항-CXCR3 결합 분자, 예컨대 항체, 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체는 펩타이드 결합 또는 변형된 펩타이드 결합에 의해 서로 연결되는 아미노산, 즉 펩타이드 이소스테르(peptide isostere)로 구성될 수 있으며, 20개의 유전자-코딩 아미노산를 제외한 다른 아미노산을 포함할 수 있다. 항-CXCL13 항체, 항-CXCR5 항체, 또는 항-CXCR3 항체는 번역후 프로세싱 등의 자연적인 프로세스, 또는 당업계에 잘 알려져 있는 화학 변형 기법에 의해 변형시킬 수 있다. 이러한 변형은, 기초 문헌에 잘 기술되어 있으며, 전공 논문과 다양한 연구 논문에 상세하게 기재되어 있다. 변형은, 펩타이드 벡본, 아미노산 측쇄 및 아미노 또는 카르복시 말단이나 탄화수소 등의 모이어티 등의 항-CXCL13 항체, 항-CXCR5 항체, 또는 항-CXCR3 항체의 모든 부위에서도 이루어질 수 있다. 동일한 타입의 변형이 소정의 항-CXCL13 결합 분자, 항-CXCR5 결합 분자, 또는 항-CXCR3 결합 분자의 여러 부위에 동일하거나 다양한 수준으로 존재할 수 있음을 인지할 것이다. 또한, 수종의 항-CXCL13 결합 분자, 항-CXCR5 결합 분자, 또는 항-CXCR3 결합 분자는 수많은 타입의 변형을 포함할 수 있다. 항-CXCL13 결합 분자, 항-CXCR5 결합 분자, 또는 항-CXCR3 결합 분자는 예컨대 유비퀴닌화의 결과로서 분지 형성될 수 있으며, 이는 분지가 있거나 없는 환형일 수 있다. 환형, 분지형 및 분지형의 환형 항-CXCL13 결합 분자, 항-CXCR5 결합 분자, 또는 항-CXCR3 결합 분자가 번역 후 천연 프로세스로부터 만들어질 수 있거나, 또는 합성 방법에 의해 제조될 수 있다. 변형은, 아세틸화, 아실화, ADP-리보실화, 아미드화, 플라빈의 공유 부착, 헴 모이어티의 공유 부착, 뉴클레오타이드 또는 뉴클레오타이드 유도체의 공유 부착, 지질 또는 지질 유도체의 공유 부착, 포스포티딜이노시톨의 공유 부착, 교차 연결, 환화, 이황화 결합 형성, 탈메틸화, 공유 교차 연결 형성, 시스테인의 형성, 피로글루타메이트의 형성, 포르밀화, 감마-카르복시화, 당화, GPI 앵커 형성, 수산화, 요오드화, 메틸화, 미리스토일화, 산화, 페길화, 단백질분해 과정, 인산화, 프레닐화, 라세미화, 셀레노일화, 설페이트화, 단백질에 수송-RNA 매개 아미노산 부가, 예컨대 아르지닐화 및 유비퀴틴화를 포함한다 (예, Proteins--Structure and Molecular Properties, T. E. Creighton, W. H. Freeman and Company, NY; 2nd ed. (1993); Johnson, ed. (1983) Posttranslational Covalent Modification of Proteins (Academic Press, NY), pgs. 1-12; Seifter et al ., Meth . Enzymol . 182:626-646 (1990); Rattan et al ., Ann. NY Acad . Sci . 663:48-62 (1992)).

또한, 본원에서 개시되는 방법은 항-CXCL13 항체, 항-CXCR5 항체, 또는 항-CXCR3 항체, 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체, 및 이종의 폴리펩타이드를 포함하는 융합 단백질의 용도를 포함한다. 항체가 융합된 이종의 폴리펩타이드는, 기능적으로 유용할 수 있거나, 또는 항-CXCL13 폴리펩타이드, 항-CXCR5 폴리펩타이드, 또는 항-CXCR3 폴리펩타이드를 발현하는 세포을 표적화하는데 유용하다.

일 구현예에서, 본 발명의 융합 단백질은, 항-CXCL13 항체, 항-CXCR5 항체, 또는 항-CXCR3 항체의 VH 도메인 중 임의의 하나 이상의 아미노산 서열 또는 항-CXCL13 항체, 항-CXCR5 항체, 또는 항-CXCR3 항체의 VL 도메인 중 임의의 하나 이상의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드, 또는 그의 단편이나 변이체, 및 이종의 폴리펩타이드 서열을 포함하거나, 이로 필수적으로 구성되거나, 또는 이로 구성된다.

다른 구현예로, 본원에 기술된 치료 방법에서 사용하기 위한 융합 단백질은, 항-CXCL13 항체, 항-CXCR5 항체, 또는 항-CXCR3 항체, 또는 그의 단편, 변이체 또는 유도체의 VH 도메인의 CDR들 중 임의의 1, 2, 3 개의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드, 또는 항-CXCL13 항체, 항-CXCR5 항체, 또는 항-CXCR3 항체, 또는 그의 단편, 변이체 또는 유도체의 VL 도메인의 CDR들 중 임의의 1, 2, 3개의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드, 및 이종의 폴리펩타이드 서열을 포함하거나, 이로 필수적으로 구성되거나, 또는 이로 구성된다. 일부 구현예에서, 융합 단백질의 VH 도메인 및 VL 도메인은, CXCL13, CXCR5 또는 CXCR3의 하나 이상의 에피토프에 특이적으로 결합하는 단일 소스의 항체 (또는 scFv 또는 Fab 단편)에 대응된다. 일부 구현예에서, VH 도메인 또는 VL 도메인의 2, 3, 4, 5 또는 6개 이상의 CDR(들)은 본 발명의 단일 소스의 항체 (또는 scFv 또는 Fab 단편)에 대응된다.

문헌에 보고된 융합 단백질의 예로는, T 세포 수용체의 융합 (Gascoigne et al., Proc . Natl . Acad . Sci . USA 84:2936-2940 (1987)); CD4 (Capon et al., Nature 337:525-531 (1989); Traunecker et al., Nature 339:68-70 (1989); Zettmeissl et al., DNA Cell Biol . USA 9:347-353 (1990); 및 Byrn et al ., Nature 344:667-670(1990)); L-셀렉틴(homing receptor)(Watson et al., J. Cell . Biol. 110:2221-2229 (1990); 및 Watson et al ., Nature 349:164-167 (1991)); CD44 (Aruffo et al ., Cell 61:1303-1313 (1990)); CD28 및 B7(Linsley et al ., J. Exp. Med . 173:721-730 (1991)); CTLA-4 (Lisley et al ., J. Exp . Med . 174:561-569 (1991)); CD22 (Stamenkovic et al ., Cell 66:1133-1144 (1991)); TNF receptor (Ashkenazi et al ., Proc . Natl . Acad . Sci . USA 88:10535-10539 (1991); Lesslauer et al ., Eur . J. Immunol . 27:2883-2886 (1991); 및 Peppel et al ., J. Exp. Med . 174:1483-1489 (1991)); 및 IgE 수용체 a(Ridgway and Gorman, J. Cell. Biol. Vol. 115, Abstract No. 1448 (1991))를 포함한다.

본원에 도처에서 논의된 바와 같이, 항-CXCL13 결합 분자, 항-CXCR5 결합 분자, 또는 항-CXCR3 결합 분자, 예컨대, 항체, 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체를 이종의 폴리펩타이드에 융합시켜, 폴리펩타이드의 생체내 반감기를 증가시키거나, 또는 당업계에 공지된 방법을 이용하여 면역 분석에 사용할 수 있다. 예컨대, 일 구현예로, PEG를 본 발명의 항-CXCL13 항체, 항-CXCR5 항체, 또는 항-CXCR3 항체에 접합시켜, 이의 생체내 반감기를 증가시킬 수 있다. Leong et al., Cytokine 16:106 (2001); Adv. in Drug Deliv. Rev. 54:531 (2002); or Weir et al ., Biochem . Soc . Transactions 30:512 (2002)를 참조한다.

아울러, 항-CXCL13 결합 분자, 항-CXCR5 결합 분자, 또는 항-CXCR3 결합 분자, 예컨대 항체, 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체를, 이의 정제 또는 검출을 용이하게 하는 펩타이드 등의 마커 서열에 융합시킬 수 있다. 특정 구현예에서, 마커 아미노산 서열은 상업적으로 구입가능한 다수의 물질들 중에서도, pQE 벡터 (QIAGEN, Inc., 9259 Eton Avenue, Chatsworth, Calif., 91311)에 제시된 테그(tag) 등의 헥사-히스티딘 펩타이드이다. 예컨대, Gentz et al. Proc . Natl . Acad . Sci . USA 86:821-824 (1989)에 기재된 바와 같이, 헥사-히스티딘이 융합 단백질의 용이한 정제를 제공한다. 정제에 사용가능한 그외 펩타이드 테그로는, 인플루엔자 헴어글루티닌 단백질로부터 유래된 에피토프에 해당하는 "HA" 테그 (Wilson et al. Cell 37:767 (1984)) 및 "flag" 테그가 있으나, 이것으로 한정되는 것은 아니다.

융합 단백질은 당업계에 잘 공지된 방법으로 제조할 수 있다 (예, 미국 특허 5,116,964 및 5,225,538). 융합이 이루어지는 정확한 부위는 융합 단백질의 분비 또는 결합 특성을 최적화하기 위해 실험을 통해 선정될 수 있다. 그런 후, 융합 단백질을 코딩하는 DNA를 발현용 숙주 세포에 형질감염시킨다.

항-CXCL13 결합 분자, 항-CXCR5 결합 분자, 또는 항-CXCR3 결합 분자, 예컨대 항체, 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체는 비-접합된 형태로 사용하거나, 또는 예컨대 분자의 치료 특성을 향상시키기 위해, 표적 검출을 용이하게 하기 위해, 또는 환자에서의 영상화 또는 치료를 위해, 다양한 분자들 중 적어도 하나과 접합시킬 수 있다. 항-CXCL13 결합 분자, 항-CXCR5 결합 분자, 또는 항-CXCR3 결합 분자, 예컨대 항체, 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체는, 정제 전, 후, 또는 정제시 표지 또는 접합시킬 수 있다.

특히, 항-CXCL13 항체, 항-CXCR5 항체, 또는 항-CXCR3 항체, 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체를, 치료 물질, 프로드럭, 펩타이드, 단백질, 효소, 바이러스, 지질, 생물학적 반응 변형제, 약학적 물질 또는 PEG에 접합시킬 수 있다.

당업자는, 접합체를, 접합되는 선택 물질에 따라 다양한 기법을 이용하여 조립할 수 있음을 인지할 것이다. 예컨대, 결합성 폴리펩타이드를 바이오틴 N-하이드록시숙신이미드 에스테르 등의 바이오틴의 활성화된 에스테르와 반응시켜, 바이오틴이 접합된 접합체를 제조한다. 이와 유사하게, 플루오레센트 마커가 있는 접합체는, 커플링제, 예컨대 본원에 기재된 물질의 존재하에 또는 이소티오시아네이트, 바람직하게는 플루오레세인-이소티오시아네이트와의 반응에 의해 제조할 수 있다. 항-CXCL13 항체, 항-CXCR5 항체, 또는 항-CXCR3 항체, 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체의 접합체는 유사한 방식으로 제조한다.

항-CXCL13 결합 분자, 항-CXCR5 결합 분자, 또는 항-CXCR3 결합 분자, 예컨대, 항체, 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체를, 세포독소, 치료성 물질 또는 방사성 금속 이온과 같은 치료 모이어티에 접합시킬 수 있다. 세포독소 또는 세포독성 물질로는 세포에 유해한 모든 물질을 포함한다.

항체, 예컨대, 항-CXCL13 항체, 항-CXCR5 항체, 또는 항-CXCR3 항체, 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체에 다양한 모이어티를 접합하는 기법들은 잘 공지되어 있으며, 예컨대, Amon et al. (1985) "Monoclonal Antibodies for Immunotargeting of Drugs in Cancer Therapy," in Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, ed. Reisfeld et al. (Alan R. Liss, Inc.), pp. 243-56; Hellstrom et al. (1987) "Antibodies for Drug Delivery," in Controlled Drug Delivery, ed. Robinson et al. (2nd ed.; Marcel Dekker, Inc.), pp. 623-53); Thorpe (1985) "Antibody Carriers of Cytotoxic Agents in Cancer Therapy: A Review," in Monoclonal Antibodies '84: Biological and Clinical Applications, ed. Pinchera et al., pp. 475-506; "Analysis, Results, and Future Prospective of the Therapeutic Use of Radiolabeled Antibody in Cancer Therapy," in Monoclonal Antibodies for Cancer Detection and Therapy, ed. Baldwin et al ., Academic Press, pp. 303-16 (1985); 및 Thorpe et al . , Immunol . Rev . 62:119-58 (1982)을 참조한다.

CXCL13 활성을 저해하는 제제 (예를 들어, 항-CXCL13 결합 분자, 항-CXCR5 결합 분자, 또는 항-CXCR3 결합 분자)의 제조 방법 및 필요한 개체에게 투여하는 방법은 당업자에 잘 알려져 있거나 또는 당업자가 쉽게 결정할 수 있다. CXCL13 활성을 저해하는 제제 (예를 들어, 항-CXCL13 결합 분자, 항-CXCR5 결합 분자, 또는 항-CXCR3 결합 분자)의 투여 경로는, 예컨대, 구강, 비경구, 흡입 또는 국소일 수 있다. 본원에서 용어 "비경구"는 예컨대, 정맥내, 동맥내, 복막내, 근육내, 피하, 직장, 또는 질 투여를 포함한다. 이들 모든 형태의 투여는 본 발명의 범위내인 것으로 명백히 인지되지만, 투여 형태의 예는 주사용, 특히 정맥내 또는 동맥내 주사용 용액, 또는 드립(drip) 용액일 수 있다. 통상, 주사하기에 적합한 약학 조성물은 완충제 (예, 아세테이트, 포스페이트 또는 시트레이트 완충제), 계면활성제 (예, 폴리소르베이트), 선택적으로 안정제 (예, 인간 알부민) 등을 포함할 수 있다. 그러나, 본원에 기술된 방법과 상용가능한 다른 방법에 있어서, CXCL13 활성을 저해하는 제제 (예를 들어, 항-CXCL13 결합 분자, 항-CXCR5 결합 분자, 또는 항-CXCR3 결합 분자)를 직접 유해한 세포 집단 부위에 전달하여, 병에 걸린 조직을 치료제에 대한 노출을 높일 수 있다.

본원에 언급한 바와 같이, CXCL13 활성을 저해하는 제제 (예를 들어, 항-CXCL13 결합 분자, 항-CXCR5 결합 분자, 또는 항-CXCR3 결합 분자)는, 쇼그렌 증후군을 비롯하여 B-세포 매개의 염증 질환과 같이 CXCL13-발현 세포-매개 질환의 생체내 치료를 위해 약학적 유효량으로 투여할 수 있다. 이런 점에서, CXCL13 활성을 저해하는 제제는 활성제의 투여를 쉽게하고 안정성을 강화하도록 제형화된다는 것은 인지할 것이다. 특정 구현예에서, 본 발명에 따른 약학 조성물은 제약학적으로 허용가능한, 무독성, 무균 담체, 예컨대 생리 식염수, 무독성 완충제, 보존제 등을 포함한다. 본 발명의 목적에서, 접합되거나 접합되지 않은, CXCL13 활성을 저해하는 제제 (예를 들어, 항-CXCL13 결합 분자, 항-CXCR5 결합 분자, 또는 항-CXCR3 결합 분자)의 약학적 유효량은, 표적에 대한 효과적인 결합을 달성하여 이로운 효과를 성취, 예컨대 질병이나 장애의 증상을 완화시키거나 또는 물질이나 세포를 검출하는데 충분한 함량을 의미하는 것으로 사용될 것이다.

본 발명에 사용되는 약학 조성물은, 예컨대, 이온 교환제, 알루미나, 알루미늄 스테아레이트, 레시틴, 인간 혈청 알부민과 같은 혈청 단백질, 포스페이트와 같은 완충제 물질, 글리신, 소르브산, 포타슘 소르베이트, 포화 식물성 지방산의 부분 글리세라이드 혼합물, 물, 염 또는 포타민 설페이트와 같은 전해질, 디소듐 하이드로겐 포스페이트, 포타슘 하이드로겐 포스페이트, 소듐 클로라이드, 아연 염, 콜로이드형 실리카, 마그네슘 트리실리케이트, 폴리비닐 피롤리돈, 셀룰로스계 물질, 폴리에틸렌 글리콜, 소듐 카르복시메틸셀룰로스, 폴리아크릴레이트, 왁스, 폴리에틸렌-폴리옥시프로필렌-블록 폴리머, 폴리에틸렌 글리콜 및 양모지 등을 비롯한 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함한다.

비경구 투여용 조제물은 무균 수계 또는 비수계 용액, 현탁액 및 에멀젼을 포함한다. 비수계 용매의 예로는, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 오일, 에틸 올레이트와 같은 주사용 유기 에스테르가 있다. 수계 담체로는, 염수 및 완충화된 매질을 비롯한, 물, 알콜성/수계 용액, 에멀젼 또는 현탁액을 포함한다. 본 발명에서, 약제학적으로 허용가능한 담체로는, 0.01-0.1　M의, 예컨대 0.05　M의 포스페이트 완충액 또는 0.8% 염수가 있으나, 이들로 한정되는 것은 아니다. 그외 통상적인 비경구 비히클로는, 소듐 포스페이트 용액, 링거 덱스트로스, 덱스트로스 및 소듐 클로라이드, 락테이트화된 링거 또는 고정유를 포함한다. 정맥내 비히클로는, 유체 및 영양 보충제, 전해질 보충제, 예컨대 링거 덱스트로스를 기본으로 한 비히클 등을 포함한다. 예컨대 항미생물제, 항산화제, 킬레이트화제, 및 불활성 가스 등과 같은 보존제 및 그외 첨가제도 존재할 수 있다.

보다 구체적으로는, 주사용으로 적합한 약학 조성물은 무균 수용액 (수용성) 또는 분산액 및 무균 주사용액이나 분산액의 즉석 제조용 무균 분말을 포함한다. 그러한 경우에서, 조성물은 무균성이어야 하며, 주사성이 용이한 범위로 유동적이어야 한다. 제조 및 저장 조건 하에서 안정적이어야 하며, 바람직하게는 박테리아 및 진균과 같은 미생물의 오염이 방지될 것이다. 담체는, 예컨대 물, 에탄올, 폴리올 (예, 글리세롤, 프로필렌 글리콜 및 폴리에틸렌 글리콜 용액 등), 및 이들의 적정 혼합물을 포함하는 용매 또는 분산 매질일 수 있다. 예컨대, 레시틴과 같은 코팅제의 이용에 의해, 분산액의 경우 필수 입자 크기의 유지에 의해, 그리고 계면활성제의 사용에 의해, 적절한 유동성을 유지할 수 있다. 본원에 기술된 치료 방법에 사용하기에 적합한 제형들은 Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Co.) 16th ed. (1980)에 기재되어 있다.

미생물의 작동 예방은, 다양한 항세균제 및 항진균제, 예컨대, 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 아스코르브산, 티메로살 등에 의해 달성할 수 있다. 어떤 경우들에서는, 등장성 물질, 예컨대 당, 만니톨과 같은 폴리알코올, 소르비톨 또는 소듐 클로라이드를 조성물내에 포함시키는 것이 바람직할 것이다. 주사용 조성물의 장기 흡수는, 조성물에 흡수를 지연시키는 물질, 예컨대 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴을 포함시킴으로써, 이룰 수 있다.

임의 경우에, 무균 주사용액은 활성 화합물 (예, 항-CXCL13 항체, 항-CXCR5 항체, 또는 항-CXCR3 항체, 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체, 그 자체 또는 다른 활성 물질과의 조합)을 적절한 용매 중에 필요한 함량으로, 본원에 기재된 하나의 성분이나 성분들의 조합과 함께 병합하고, 필요에 따라 여과 멸균이 후속됨으로써, 제조할 수 있다. 일반적으로, 분산액은, 활성 화합물을, 염기성의 분산 매질과 전술한 성분들 중 그외 필요한 성분이 포함된, 무균 비히클에 병합함으로써, 제조한다. 무균 주사용액의 제조를 위한 무균 분말의 경우에, 바람직한 제조 방법은 진공 건조 및 동결 건조이며, 이러한 방법으로 활성 성분과 미리 멸균-여과한 용액 유래 임의의 추가적인 바람직한 성분들로 구성된 분말이 제조된다. 당업계에 공지된 방법에 따라, 주사용 조제물을 가공하고, 앰플, 백, 병, 주사기 또는 바이얼 등의 용기에 충진한 다음, 무균 조건하에서 밀봉한된다. 아울러, 조제물은 미국 특허 출원번호 09/259,337에 개시된 바와 같이, 키트 형태로 포장 및 판매할 수 있다. 이러한 제조 물품에는, 바람직하게는, 첨부된 조성물이 질병 또는 장애를 앓고 있거나 소인이 있는 개체를 치료하는데 유용함을 기재한 라벨 또는 패키지 삽입물이 포함될 것이다.

비경구 제형은 1회 볼루스 투약, 주입 또는 부하 볼루스 투약 (loading bolus dose) 후 유지 용량 투여일 수 있다. 이들 조성물은 특정 고정된 또는 가변적인 간격으로, 예컨대 하루에 1회 또는 "필요할 때" 투여할 수 있다.

본 발명에 사용되는 임의의 약학 조성물은, 예컨대 캡슐, 정제, 수성 현탁액 또는 수용액 등의, 허용가능한 투약 형태로 경구 투여할 수 있다. 또한, 임의의 약학 조성물은 코 에어로졸 또는 흡입에 의해 투여할 수 있다. 이러한 조성물은 생체이용성을 증진시키기 위해 벤질 알코올 또는 그외 적합한 보존제, 흡수 촉매제 및/또는 그외 통상적인 가용화제 또는 분산제를 사용하여, 염수 중의 용액으로서 제조할 수 있다.

담체 물질과 조합하여 단일 투약 형태(single dosage form)로 제조할 수 있는, CXCL13 활성을 저해하는 제제 (예를 들어, 항-CXCL13 결합 분자, 항-CXCR5 결합 분자, 또는 항-CXCR3 결합 분자)의 함량은, 치료되는 숙주와 특정 투여 방식에 따라 달라질 것이다. 조성물은 1회 투약, 다회 용량으로 투여하거나, 또는 주입시 정해진 기간동안 투여할 수 있다. 또한, 투약 요법은 바람직한 최적 반응 (예, 치료 반응 또는 예방 반응)을 제공하도록 조정될 수 있다.

본 명세서의 범위내에서, CXCL13 활성을 저해하는 제제 (예를 들어, 항-CXCL13 항체, 항-CXCR5 항체, 또는 항-CXCR3 항체, 또는 이의 항원-결합성 단편, 변이체 또는 유도체)는 치료 효과를 형성하는데 충분한 함량으로 전술한 치료 방법으로 인간 또는 그외 동물에 투여할 수 있다. CXCL13 활성을 저해하는 제제 (예를 들어, 항-CXCL13 항체, 항-CXCR5 항체, 또는 항-CXCR3 항체, 또는 이의 항원-결합성 단편, 변이체 또는 유도체)는 활성 제제를 통상적인 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제와 공지 기법에 따라 조합하여 제조한 통상적인 투약 형태로 인간 또는 그외 동물에게 투여할 수 있다. 당업자라면, 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제의 형태 및 특징이 조합되는 활성 성분의 양, 투여 경로 및 그외 잘 알려져 있는 변수에 의해 지정된다는 것을 인지할 것이다. 당업자는, CXCL13 활성을 저해하는 제제 (예를 들어, 항-CXCL13 결합 분자, 항-CXCR5 결합 분자, 또는 항-CXCR3 결합 분자) 중 하나 이상을 포함하는 칵테일이 특히 효과적임을 입증할 수 있다는 것을 잘 알 것이다.

"치료학적 유효량 또는 치료학적 양" 또는 "유효량"은 투여하였을 때 치료할 질환을 앓고 있는 환자의 치료에 대해 긍정적인 치료 반응을 일으키는, CXCL13 활성을 저해하는 제제 (예를 들어, 항-CXCL13 결합 분자, 항-CXCR5 결합 분자, 또는 항-CXCR3 결합 분자)의 양이다.

쇼그렌 증후군과 같은 B-세포 매개의 염증 질환 등의 CXCL13-발현 세포-매개 질환을 치료하기 위한, CXCL13 활성을 저해하는 제제의 치료학적 유효량은, 투여, 표적 부위, 환자의 생리 상태, 환자가 인간 또는 동물인지, 다른 약제의 투여, 및 치료가 예방학적이거나 치료학적인지 등의 수단을 비롯한 다수의 여러 인자들에 따라 달라진다. 일반적으로, 환자는 인간이나, 형질전환 포유류 등의 비-인간 포유류도 치료될 수 있다. 치료 용량은 안전성과 효능을 최적화하기 위해 당해 기술 분야의 당업자에게 공지된 일반적인 방법으로 적정할 수 있다.

CXCL13 활성을 저해하는 하나 이상의 제제 (예를 들어, 항-CXCL13 결합 분자, 항-CXCR5 결합 분자, 또는 항-CXCR3 결합 분자)의 투약량은 과도한 실험없이도 본 발명의 개시 내용을 고여하여 당해 기술 분야의 당업자가 쉽게 결정한다. 투여 방식 및 CXCL13 활성을 저해하는 하나 이상의 제제 (예를 들어, 항-CXCL13 결합 분자, 항-CXCR5 결합 분자, 또는 항-CXCR3 결합 분자)의 각 함량에 영향을 미치는 인자로는, 질환의 중증도, 병력 및 치료 중인 개체의 연령, 키, 체중, 체중 및 신체 상태를 포함하나, 이로 한정되지 않는다. 마찬가지로, CXCL13 활성을 저해하는 제제 (예를 들어, 항-CXCL13 결합 분자, 항-CXCR5 결합 분자, 또는 항-CXCR3 결합 분자)의 투약량은, 개체가 이들 물질을 1회 투여받거나 다회 투여받을지와 투여 방식에 따라 결정될 것이다.

일부 구현예에서, 투여되는 CXCL13 활성을 저해하는 제제 (예를 들어, 항-CXCL13 결합 분자, 항-CXCR5 결합 분자, 또는 항-CXCR3 결합 분자)의 투약량의 범위는 약 0.1 mg/kg 내지 약 100 mg/kg, 약 0.1 mg/kg, 약 0.2 mg/kg, 약 0.3 mg/kg, 약 0.4 mg/kg, 약 0.5 mg/kg, 약 0.6 mg/kg, 약 0.7 mg/kg, 약 0.8 mg/kg, 약 0.9 mg/kg, 약 1 mg/kg, 약 1.5 mg/kg, 약 2 mg/kg, 약 2.5 mg/kg, 약 3 mg/kg, 약 3.5 mg/kg, 약 4 mg/kg, 약 4.5 mg/kg, 약 5 mg/kg, 약 5.5 mg/kg, 약 6 mg/kg, 약 6.5 mg/kg, 약 7 mg/kg, 약 7.5 mg/kg, 약 8 mg/kg, 약 8.5 mg/kg, 약 9 mg/kg, 약 9.5 mg/kg, 및 약 10 mg/kg을 포함하지만, 이들로 한정되는 것은 아니다. 소정의 구현예에서, 투여되는 투약량의 범위는 약 1 mg/kg 내지 약 10 mg/kg이다. 특정 구현예에서, CXCL13 활성을 저해하는 제제 (예를 들어, 항-CXCL13 결합 분자, 항-CXCR5 결합 분자, 또는 항-CXCR3 결합 분자) 약 4 mg/kg 내지 약 5 mg/kg이 이를 필요로 하는 개체에게 투여된다. 이들 구현예 중 일부에서, 상기 제제는 복강내 주사를 통해 투여된다.

또한, 본 발명은, 쇼그렌 증후군을 비롯한 B-세포 매개의 염증 질환을 치료하기 위한 약제의 제조에 있어서의, CXCL13 활성을 저해하는 제제 (예를 들어, 항-CXCL13 결합 분자, 항-CXCR5 결합 분자, 또는 항-CXCR3 결합 분자)의 용도를 제공한다.

본 발명의 실시는, 별도의 언급이 없는 한, 세포 생물학, 세포 배양, 분자 생물학, 형질전환 생물학, 미생물학, 재조합 DNA 및 면역학 등의, 당업계의 기술내에 있는 통상적인 기술을 이용할 것이다. 이러한 기법들은 문헌에 충분히 설명되어 있다. 예로, Sambrook et al., ed. (1989) Molecular Cloning A Laboratory Manual (2nd ed.; Cold Spring Harbor Laboratory Press); Sambrook et al ., ed. (1992) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, (Cold Springs Harbor Laboratory, NY); D. N. Glover ed., (1985) DNA Cloning, Volumes I and II; Gait, ed. (1984) Oligonucleotide Synthesis; Mullis et al. U.S. Pat. No. 4,683,195; Hames and Higgins, eds. (1984) Nucleic Acid Hybridization; Hames and Higgins, eds. (1984) Transcription And Translation; Freshney (1987) Culture Of Animal Cells (Alan R. Liss, Inc.); Immobilized Cells And Enzymes (IRL Press) (1986); Perbal (1984) A Practical Guide To Molecular Cloning; the treatise, Methods In Enzymology (Academic Press, Inc., N.Y.); Miller and Calos eds. (1987) Gene Transfer Vectors For Mammalian Cells, (Cold Spring Harbor Laboratory); Wu et al ., eds., Methods In Enzymology, Vols. 154 and 155; Mayer and Walker, eds. (1987) Immunochemical Methods In Cell And Molecular Biology (Academic Press, London); Weir and Blackwell, eds., (1986) Handbook Of Experimental Immunology, Volumes I-IV; Manipulating the Mouse Embryo, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., (1986); 및 Ausubel et al. (1989) Current Protocols in Molecular Biology (John Wiley and Sons, Baltimore, Md.)를 참조한다.

항체 조작의 일반적인 원칙은 Borrebaeck, ed. (1995) Antibody Engineering (2nd ed.; Oxford Univ. Press)에 기술되어 있다. 단백질 조작에 대한 일반적인 원칙은 Rickwood et al ., eds. (1995) Protein Engineering, A Practical Approach (IRL Press at Oxford Univ. Press, Oxford, Eng.)에 기술되어 있다. 항체 및 항체-헵텐 결합에 대한 일반적인 원칙은 Nisonoff (1984) Molecular Immunology (2nd ed.; Sinauer Associates, Sunderland, Mass.); 및 Steward (1984) Antibodies, Their Structure and Function (Chapman and Hall, New York, N.Y.)에 기술되어 있다. 또한, 당업계에 공지되어 있으며 구체적으로 기술되지 않은, 면역학과 관련된 표준 방법들은, 일반적으로, Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons, New York; Stites et al ., eds. (1994) Basic and Clinical Immunology (8th ed; Appleton & Lange, Norwalk, Conn.) and Mishell and Shiigi (eds) (1980) Selected Methods in Cellular Immunology (W.H. Freeman and Co., NY)를 따른다.

면역학의 일반적인 원칙이 기재되어 있는 표준 참조 문헌으로는, Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons, New York; Klein (1982) J., Immunology: The Science of Self-Nonself Discrimination (John Wiley & Sons, NY); Kennett et al., eds. (1980) Monoclonal Antibodies, Hybridoma: A New Dimension in Biological Analyses (Plenum Press, NY); Campbell (1984) "Monoclonal Antibody Technology" in Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology, ed. Burden et al., (Elsevere, Amsterdam); Goldsby et al., eds. (2000) Kuby Immunnology (4th ed.; H. Freemand & Co.); Roitt et al. (2001) Immunology (6th ed.; London: Mosby); Abbas et al. (2005) Cellular and Molecular Immunology (5th ed.; Elsevier Health Sciences Division); Kontermann and Dubel (2001) Antibody Engineering (Springer Verlan); Sambrook and Russell (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Press); Lewin (2003) Genes VIII (Prentice Hall2003); Harlow and Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Press); Dieffenbach and Dveksler (2003) PCR Primer (Cold Spring Harbor Press)가 있다.

용어 단수형 ("a" 또는 "an" 전체)는 그 전체 중 하나 이상을 지칭하는 것으로 주지해야 한다: 예를 들어, "항-CXCL13 항체"는 하나 이상의 항-CXCL13 항체를 표시하는 것으로 이해된다. 이와 같이, 용어 단수형 ("a" (또는 "an")), "하나 이상" 및 "적어도 하나"는 본원에서 상호호환적으로 사용될 수 있다.

본원에서 사용되는 모든 기술적 및 과학적 용어는 동일한 의미를 가진다. 사용되는 숫자 (예를 들어, 함량, 온도 등)에 대해 정확성을 확인하려는 노력들이 이루어지지만, 일부 실험적 오차 및 편차는 설명되어야 한다.

본 명세서 및 청구항 전체에서, 단어 "~을 포함하다", "~을 포함한다", 및 "~을 포함하는"은 문맥상 다르게 필요로 하지 않는 한, 비-배제적인 의미로 사용된다.

본원에서, 값을 지칭할 때 용어 "약"은 구체적인 양으로부터 일부 구현예에서 ±50%, 일부 구현예에서 ±20%, 일부 구현예에서 ±10%, 일부 구현예에서 ±5%, 일부 구현예에서 ±1%, 일부 구현예에서 ±0.5%, 및 일부 구현예에서 ±0.1%의 변화를 포함하는 것으로 의미되며, 이러한 변화는 개시되는 방법을 수행하거나 또는 개시되는 조성물을 적용하기에 적절하다.

값의 범위가 제공되는 경우, 문맥상 명확하게 다르게 지시되지 않는 한, 범위 및 그 언급된 범위 내의 임의의 다른 언급되거나 개입적인 값의 상한과 하한 사이에서 하한 단위의 1/10까지인 각각의 개입값(intervening value)은 본 발명에 포함되는 것으로 이해된다. 독립적으로 보다 작은 범위에 포함될 수 있는 이들 소 범위의 상한 및 하한 또한 본 발명에 포함되며, 언급된 범위에서 구체적으로 배제된다. 언급된 범위가 한계 중 하나 또는 둘 다를 포함하는 경우, 이들 포함된 한계 중 하나 또는 둘 다를 배제하는 범위 또한 본 발명에 포함된다.

실시예

실시예 1

마우스 모델에서 쇼그렌 증후군에 대한 항- CXCL13 항체의 평가

쇼그렌 증후군의 쥣과 모델. 암컷 NOD/ShiLtJ (NOD) 마우스를 이용하여, 쇼그렌 증후군에서 항-CXCL13 항체의 효과를 평가하였다. 마우스에게 100 ㎍의 쥣과 항-CXCL13 모노클로날 항체 (MAb) 5378 (n= 9) 또는 대조군 IgG2a (n=8)를 4주령째에 시작하여 주 3회로 12주간 처리하였다. 항체는 복강내 주사로 투여하였다. 모든 마우스는 16주령째에 안락사하였다.

NOD 마우스의 혈청을 치료 전에 수집하고, 초기 항-CXCL13 또는 대조군 IgG2a 주사 후 50일 간격으로 수집하였다. 타액 조직은 안락사 후에 수집하였다. 간략하게는, 마우스를 안락사하고, 타액 조직을 적출하였다. 모든 조직은 수술적으로 적출하고, 5% 태아 소 혈청, 및 세포 소팅(sorting)용 1% 페니실린 및 스트렙토마이신이 보충된 RPMI 1640 배지 (Mediatech Cellgro)에 두었다. 조직은 각각 면역조직화학 (IHC) 및 mRNA 분석을 위해 포르말린에 고정하거나 또는 냉동시켰다.

RNA는 RNeasy plus Mini kits (Qiagen)를 사용해 전체 턱밑샘 조직으로부터 분리하였다. cDNA 합성은 iScript kit (BioRad)를 사용해 수행하였다. 전사체의 수준을 정량화하기 위해, qPCR을 전술한 바와 같이 SYBR 그린을 사용해 쥣과 타액 조직에서 수행하였다 (Lee, B.P., et al ., (2006) J Immunol 176:5276-5283; Zhong, X., et al., (2007) Eur J Immunol 37:2405-2410.). 프라이머는 하기와 같았다:

CXCL13: 정방향: 5' TGG CTG CCC CAA AAC TGA 3', 역방향: TGG CAC GAG GAT TCA CAC AT 3',

CXCR5: 정방향 5' TGG GCT CCA TCA CAT ACA AT 3', 역방향: 5' GGG AAT CTC CGT GCT GTT AC 3' (Schiffer, L., et al ., (2008) J Immunol 180:1938-1947.)

CD19: 정방향 5' ACC AGT ACG GGA ATG TGC TC 3', 역방향: 5' GAC TTG AAT GCG TGG ATT T 3', 및

CD4: 정방향: 5' TTC GCC TTC GCA GTT TGA TC 3', 역방향: 5' CAC CCA CAA CTC CAC CTC CT 3'.

모든 샘플은 이중으로 수행하였으며, 발현은 액틴에 대해 정상화하였다(normalized). 스튜던츠 T-테스트(Student's T-Test)를 이용하여, 통계학적 유의성을 결정하였다.

항- CXCL13 항체 치료는 마우스에서 침샘 염증을 저하한다. 도 1a는 16주령째에 안락사한, 3개의 대표적인 이소타입 대조군 (좌측 패널) 및 3개의 대표적인 항-CXCL13 항체 (우측 패널) 처리 마우스의 타액 조직의 H&E 염색 이미지를 도시한 것이다. 턱밑샘 조직에서의 림프구 병소를 이소타입 대조군 및 항-CXCL13 항체 샘플에서 계수하였다. 그 결과는 도 1b에 도시한다. 이들 결과는, H&E 염색으로 확인 시, 대조군 항체로 처리한 마우스와 비교해 항-CXCL13 항체로 처리한 마우스에서 턱밑샘 조직 내 림프구 병소의 수가 줄어들었음을 보여준다. 그 차이는 통계학적으로 유의하다 (p<0.05).

마우스의 턱밑샘 침색 조직에서 CXCR5 발현. 항-CXCL13 항체로 처리한 마우스 및 이소타입 대조군에서 CXCR5의 mRNA 발현은 도 2에 도시되어 있다. 항-CXCL13 항체로 처리한 마우스는 대조군 수여 군과 비교해 턱밑샘 침샘 조직에서 CXCR5 수용체의 수가 줄어들었음을 보여준다. 그 차이는 통계학적으로 유의하다 (p<0.05). CXCR5가 B 세포 마커이기 때문에, 항-CXCL13 항체로 처리한 후 CXCR5의 발현 감소는, CXCL13이 쇼그렌 증후군에서 B 세포를 타액 조직으로 다이렉팅하는 데 있어 중요한 역할을 할 수 있음을 제시한다.

마우스의 턱밑샘 침색 조직에서 CD19 발현. 항-CXCL13 항체로 처리한 마우스 및 이소타입 대조군에서 CD19의 mRNA 발현은 도 3에 도시되어 있다. 항-CXCL13 항체로 처리한 마우스는 이소타입 대조군과 비교해 CD19 발현이 유의하게 (p<0.05) 줄어들었음을 보여준다. 이들 결과는, 항-CXCL13 항체로 처리한 후 B 세포 침윤이 타액 조직에서 줄어든다는 것을 보여준다. CD19가 B 세포 마커이기 때문에, 항-CXCL13 항체로 처리한 후 CD19의 발현 감소는, CXCL13이 쇼그렌 증후군에서 B 세포를 타액 조직으로 다이렉팅하는 데 있어 중요한 역할을 할 수 있음을 제시한다.

마우스의 턱밑샘 침색 조직에서 CD4 발현. 항-CXCL13 항체로 처리한 마우스 및 이소타입 대조군에서 CD4의 mRNA 발현은 도 4에 도시되어 있다. 항-CXCL13 항체로 처리한 마우스는 이소타입 대조군과 비교해 CD4 발현이 유의하게 변경되지 않음을 보여준다. 이들 결과는, CD4 전사체 수준으로 확인 시, 턱밑샘 조직의 T 세포 침윤이 항-CXCL13 항체의 존재 하에 유의하게 저하되지 않음을 제시한다.

구체적인 구현예에 대한 전술한 설명들은 본 발명의 전반적인 특성을 충분히 나타냄으로써, 당해 기술 분야의 당업자 수준에서의 지식을 적용하여, 과도한 실험없이도, 본 발명의 포괄적인 개념으로부터 이탈되지 않는 범위내에서, 제3자가 상기한 구체적인 구현예와 같은 다양한 용도를 쉽게 변형 및/또는 적응시킬 수 있을 것이다. 따라서, 이러한 적응 및 변형은 본원에 제시된 교시 내용과 지침을 토대로 기술된 구현예와 등가의 의미와 범위에 포함되는 것으로 의도된다. 본원의 표현 또는 용어는, 본 발명의 용어나 표현이 교시 내용과 지침에 비추어 당해 기술 분야의 당업자에게 이해되도록, 설명하기 위한 목적일 뿐 제한하고자 하는 것은 아니다.

본 발명의 범위와 규모는 전술한 예시적인 임의의 구현들로 한정되지 않으며, 첨부된 청구항과 이의 등가의 내용으로만 한정되어야 한다.

명세서에서 언급되는 모든 공개 및 특허 출원은 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자에게 알려진다. 모든 공개 및 특허 출원은, 각각의 개별 공개 또는 특허 출원이 그 전체가 원용에 의해 구체적으로 그리고 개별적으로 포함되는 것과 동일한 범위로 본 명세서에 원용에 의해 포함된다.

SEQUENCE LISTING <110> Smith, Ernest Zauderer, Maurice <120> Methods for the Treatment of B Cell-Mediated Inflammatory Diseases <130> 50827-430529 <150> 61/606,049 <151> 2012-03-02 <160> 31 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 1201 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (79)...(408) <400> 1 gagaagatgt ttgaaaaaac tgactctgct aatgagcctg gactcagagc tcaagtctga 60 actctacctc cagacaga atg aag ttc atc tcg aca tct ctg ctt ctc atg 111 Met Lys Phe Ile Ser Thr Ser Leu Leu Leu Met 1 5 10 ctg ctg gtc agc agc ctc tct cca gtc caa ggt gtt ctg gag gtc tat 159 Leu Leu Val Ser Ser Leu Ser Pro Val Gln Gly Val Leu Glu Val Tyr 15 20 25 tac aca agc ttg agg tgt aga tgt gtc caa gag agc tca gtc ttt atc 207 Tyr Thr Ser Leu Arg Cys Arg Cys Val Gln Glu Ser Ser Val Phe Ile 30 35 40 cct aga cgc ttc att gat cga att caa atc ttg ccc cgt ggg aat ggt 255 Pro Arg Arg Phe Ile Asp Arg Ile Gln Ile Leu Pro Arg Gly Asn Gly 45 50 55 tgt cca aga aaa gaa atc ata gtc tgg aag aag aac aag tca att gtg 303 Cys Pro Arg Lys Glu Ile Ile Val Trp Lys Lys Asn Lys Ser Ile Val 60 65 70 75 tgt gtg gac cct caa gct gaa tgg ata caa aga atg atg gaa gta ttg 351 Cys Val Asp Pro Gln Ala Glu Trp Ile Gln Arg Met Met Glu Val Leu 80 85 90 aga aaa aga agt tct tca act cta cca gtt cca gtg ttt aag aga aag 399 Arg Lys Arg Ser Ser Ser Thr Leu Pro Val Pro Val Phe Lys Arg Lys 95 100 105 att ccc tga tgctgatatt tccactaaga acacctgcat tcttccctta 448 Ile Pro tccctgctct ggattttagt tttgtgctta gttaaatctt ttccaggaaa aagaacttcc 508 ccatacaaat aagcatgaga ctatgtaaaa ataaccttgc agaagctgat ggggcaaact 568 caagcttctt cactcacagc accctatata cacttggagt ttgcattctt attcatcagg 628 gaggaaagtt tctttgaaaa tagttattca gttataagta atacaggatt attttgatta 688 tatacttgtt gtttaatgtt taaaatttct tagaaaacaa tggaatgaga atttaagcct 748 caaatttgaa catgtggctt gaattaagaa gaaaattatg gcatatatta aaagcaggct 808 tctatgaaag actcaaaaag ctgcctggga ggcagatgga acttgagcct gtcaagaggc 868 aaaggaatcc atgtagtaga tatcctctgc ttaaaaactc actacggagg agaattaagt 928 cctactttta aagaatttct ttataaaatt tactgtctaa gattaatagc attcgaagat 988 ccccagactt catagaatac tcagggaaag catttaaagg gtgatgtaca catgtatcct 1048 ttcacacatt tgccttgaca aacttctttc actcacatct ttttcactga ctttttttgt 1108 ggggggcggg gccgggggga ctctggtatc taattcttta atgattccta taaatctaat 1168 gacattcaat aaagttgagc aaacatttta ctt 1201 <210> 2 <211> 109 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Met Lys Phe Ile Ser Thr Ser Leu Leu Leu Met Leu Leu Val Ser Ser 1 5 10 15 Leu Ser Pro Val Gln Gly Val Leu Glu Val Tyr Tyr Thr Ser Leu Arg 20 25 30 Cys Arg Cys Val Gln Glu Ser Ser Val Phe Ile Pro Arg Arg Phe Ile 35 40 45 Asp Arg Ile Gln Ile Leu Pro Arg Gly Asn Gly Cys Pro Arg Lys Glu 50 55 60 Ile Ile Val Trp Lys Lys Asn Lys Ser Ile Val Cys Val Asp Pro Gln 65 70 75 80 Ala Glu Trp Ile Gln Arg Met Met Glu Val Leu Arg Lys Arg Ser Ser 85 90 95 Ser Thr Leu Pro Val Pro Val Phe Lys Arg Lys Ile Pro 100 105 <210> 3 <211> 1162 <212> DNA <213> Mus musculus <220> <221> CDS <222> (33)...(362) <400> 3 gagctaaagg ttgaactcca cctccaggca ga atg agg ctc agc aca gca acg 53 Met Arg Leu Ser Thr Ala Thr 1 5 ctg ctt ctc ctc ctg gcc agc tgc ctc tct cca ggc cac ggt att ctg 101 Leu Leu Leu Leu Leu Ala Ser Cys Leu Ser Pro Gly His Gly Ile Leu 10 15 20 gaa gcc cat tac aca aac tta aaa tgt agg tgt tct gga gtg att tca 149 Glu Ala His Tyr Thr Asn Leu Lys Cys Arg Cys Ser Gly Val Ile Ser 25 30 35 act gtt gtc ggt cta aac atc ata gat cgg att caa gtt acg ccc cct 197 Thr Val Val Gly Leu Asn Ile Ile Asp Arg Ile Gln Val Thr Pro Pro 40 45 50 55 ggg aat ggc tgc ccc aaa act gaa gtt gtg atc tgg acc aag atg aag 245 Gly Asn Gly Cys Pro Lys Thr Glu Val Val Ile Trp Thr Lys Met Lys 60 65 70 aaa gtt ata tgt gtg aat cct cgt gcc aaa tgg tta caa aga tta tta 293 Lys Val Ile Cys Val Asn Pro Arg Ala Lys Trp Leu Gln Arg Leu Leu 75 80 85 aga cat gtc caa agc aaa agt ctg tct tca act ccc caa gct cca gtg 341 Arg His Val Gln Ser Lys Ser Leu Ser Ser Thr Pro Gln Ala Pro Val 90 95 100 agt aag aga aga gct gcc tga agccactatc atctcaaaag acacacctgc 392 Ser Lys Arg Arg Ala Ala 105 accttttttt ttatccctgc tctgaatttt agatatgttc ttagttaaag aatttccaag 452 aaaataactc ccctctacaa acaaacatga ctgtaggtaa aacaaagcaa aaacaaacaa 512 gcaaacaaac aaactaaaaa aaacccaatc ctgcaggagc tgagagggaa tgctcaagct 572 ccgttgcata cccaacccac atccttgttc cttaagaaag gctatttgag aacaggcatt 632 tagtgacaac ccacttcaga tgcatgtggt aatagatctg ttgtttaatg ttaaactatc 692 ctagattgtc gaggaatgaa aaacctacat gtcaaatgtg aacttgtagc tcgtactaac 752 aagaggtttg cgagatggac ttcagttatt ttgcaccctt gtaaaacgca ggcttccaaa 812 atagtctcca gaaggttcct gggaagctgg tgcaatgcca tcatgaggtg gtgcaaagca 872 ggtctccttt agagaaaagc ttcctggggg aaacagtcct actttgaaag gttgcttgta 932 taagatttat tgtcttgcat taaaaccagt aacaattgaa agatcctcag cttaaaggtc 992 caggctcttc agcagtatac aaatatattc ctttgcactg tgaccctgat gatctatttt 1052 tattattcat atctttcaca cagacaaaat accagcctct tgtatcagat tctttaatgt 1112 ttcctattca tctggtgtca ttcaataaat gtaatcaaat gttttgctta 1162 <210> 4 <211> 109 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 4 Met Arg Leu Ser Thr Ala Thr Leu Leu Leu Leu Leu Ala Ser Cys Leu 1 5 10 15 Ser Pro Gly His Gly Ile Leu Glu Ala His Tyr Thr Asn Leu Lys Cys 20 25 30 Arg Cys Ser Gly Val Ile Ser Thr Val Val Gly Leu Asn Ile Ile Asp 35 40 45 Arg Ile Gln Val Thr Pro Pro Gly Asn Gly Cys Pro Lys Thr Glu Val 50 55 60 Val Ile Trp Thr Lys Met Lys Lys Val Ile Cys Val Asn Pro Arg Ala 65 70 75 80 Lys Trp Leu Gln Arg Leu Leu Arg His Val Gln Ser Lys Ser Leu Ser 85 90 95 Ser Thr Pro Gln Ala Pro Val Ser Lys Arg Arg Ala Ala 100 105 <210> 5 <211> 82 <212> PRT <213> Macaca fascicularis <400> 5 Val Leu Glu Val Tyr Tyr Thr His Leu Arg Cys Arg Cys Val Gln Glu 1 5 10 15 Ser Ser Val Phe Ile Pro Arg Arg Phe Ile Asp Arg Ile Gln Ile Ser 20 25 30 Pro Arg Gly Asn Gly Cys Pro Arg Lys Glu Ile Ile Val Trp Lys Lys 35 40 45 Asn Lys Ser Val Val Cys Val Asp Pro Gln Ala Glu Trp Ile Gln Arg 50 55 60 Ile Met Glu Met Leu Arg Lys Lys Ser Ser Ser Thr Pro Pro Val Pro 65 70 75 80 Val Phe <210> 6 <211> 2902 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (177)...(1295) <400> 6 aaaaaaaaaa agtgatgagt tgtgaggcag gtcgcggccc tactgcctca ggagacgatg 60 cgcagctcat ttgcttaaat ttgcagctga cggctgccac ctctctagag gcacctggcg 120 gggagcctct caacataaga cagtgaccag tctggtgact cacagccggc acagcc atg 179 Met 1 aac tac ccg cta acg ctg gaa atg gac ctc gag aac ctg gag gac ctg 227 Asn Tyr Pro Leu Thr Leu Glu Met Asp Leu Glu Asn Leu Glu Asp Leu 5 10 15 ttc tgg gaa ctg gac aga ttg gac aac tat aac gac acc tcc ctg gtg 275 Phe Trp Glu Leu Asp Arg Leu Asp Asn Tyr Asn Asp Thr Ser Leu Val 20 25 30 gaa aat cat ctc tgc cct gcc aca gag ggg ccc ctc atg gcc tcc ttc 323 Glu Asn His Leu Cys Pro Ala Thr Glu Gly Pro Leu Met Ala Ser Phe 35 40 45 aag gcc gtg ttc gtg ccc gtg gcc tac agc ctc atc ttc ctc ctg ggc 371 Lys Ala Val Phe Val Pro Val Ala Tyr Ser Leu Ile Phe Leu Leu Gly 50 55 60 65 gtg atc ggc aac gtc ctg gtg ctg gtg atc ctg gag cgg cac cgg cag 419 Val Ile Gly Asn Val Leu Val Leu Val Ile Leu Glu Arg His Arg Gln 70 75 80 aca cgc agt tcc acg gag acc ttc ctg ttc cac ctg gcc gtg gcc gac 467 Thr Arg Ser Ser Thr Glu Thr Phe Leu Phe His Leu Ala Val Ala Asp 85 90 95 ctc ctg ctg gtc ttc atc ttg ccc ttt gcc gtg gcc gag ggc tct gtg 515 Leu Leu Leu Val Phe Ile Leu Pro Phe Ala Val Ala Glu Gly Ser Val 100 105 110 ggc tgg gtc ctg ggg acc ttc ctc tgc aaa act gtg att gcc ctg cac 563 Gly Trp Val Leu Gly Thr Phe Leu Cys Lys Thr Val Ile Ala Leu His 115 120 125 aaa gtc aac ttc tac tgc agc agc ctg ctc ctg gcc tgc atc gcc gtg 611 Lys Val Asn Phe Tyr Cys Ser Ser Leu Leu Leu Ala Cys Ile Ala Val 130 135 140 145 gac cgc tac ctg gcc att gtc cac gcc gtc cat gcc tac cgc cac cgc 659 Asp Arg Tyr Leu Ala Ile Val His Ala Val His Ala Tyr Arg His Arg 150 155 160 cgc ctc ctc tcc atc cac atc acc tgt ggg acc atc tgg ctg gtg ggc 707 Arg Leu Leu Ser Ile His Ile Thr Cys Gly Thr Ile Trp Leu Val Gly 165 170 175 ttc ctc ctt gcc ttg cca gag att ctc ttc gcc aaa gtc agc caa ggc 755 Phe Leu Leu Ala Leu Pro Glu Ile Leu Phe Ala Lys Val Ser Gln Gly 180 185 190 cat cac aac aac tcc ctg cca cgt tgc acc ttc tcc caa gag aac caa 803 His His Asn Asn Ser Leu Pro Arg Cys Thr Phe Ser Gln Glu Asn Gln 195 200 205 gca gaa acg cat gcc tgg ttc acc tcc cga ttc ctc tac cat gtg gcg 851 Ala Glu Thr His Ala Trp Phe Thr Ser Arg Phe Leu Tyr His Val Ala 210 215 220 225 gga ttc ctg ctg ccc atg ctg gtg atg ggc tgg tgc tac gtg ggg gta 899 Gly Phe Leu Leu Pro Met Leu Val Met Gly Trp Cys Tyr Val Gly Val 230 235 240 gtg cac agg ttg cgc cag gcc cag cgg cgc cct cag cgg cag aag gca 947 Val His Arg Leu Arg Gln Ala Gln Arg Arg Pro Gln Arg Gln Lys Ala 245 250 255 gtc agg gtg gcc atc ctg gtg aca agc atc ttc ttc ctc tgc tgg tca 995 Val Arg Val Ala Ile Leu Val Thr Ser Ile Phe Phe Leu Cys Trp Ser 260 265 270 ccc tac cac atc gtc atc ttc ctg gac acc ctg gcg agg ctg aag gcc 1043 Pro Tyr His Ile Val Ile Phe Leu Asp Thr Leu Ala Arg Leu Lys Ala 275 280 285 gtg gac aat acc tgc aag ctg aat ggc tct ctc ccc gtg gcc atc acc 1091 Val Asp Asn Thr Cys Lys Leu Asn Gly Ser Leu Pro Val Ala Ile Thr 290 295 300 305 atg tgt gag ttc ctg ggc ctg gcc cac tgc tgc ctc aac ccc atg ctc 1139 Met Cys Glu Phe Leu Gly Leu Ala His Cys Cys Leu Asn Pro Met Leu 310 315 320 tac act ttc gcc ggc gtg aag ttc cgc agt gac ctg tcg cgg ctc ctg 1187 Tyr Thr Phe Ala Gly Val Lys Phe Arg Ser Asp Leu Ser Arg Leu Leu 325 330 335 acg aag ctg ggc tgt acc ggc cct gcc tcc ctg tgc cag ctc ttc cct 1235 Thr Lys Leu Gly Cys Thr Gly Pro Ala Ser Leu Cys Gln Leu Phe Pro 340 345 350 agc tgg cgc agg agc agt ctc tct gag tca gag aat gcc acc tct ctc 1283 Ser Trp Arg Arg Ser Ser Leu Ser Glu Ser Glu Asn Ala Thr Ser Leu 355 360 365 acc acg ttc tag gtcccagtgt ccccttttat tgctgctttt ccttggggca 1335 Thr Thr Phe 370 ggcagtgatg ctggatgctc cttccaacag gagctgggat cctaagggct caccgtggct 1395 aagagtgtcc taggagtatc ctcatttggg gtagctagag gaaccaaccc ccatttctag 1455 aacatccctg ccagctcttc tgccggccct ggggctaggc tggagcccag ggagcggaaa 1515 gcagctcaaa ggcacagtga aggctgtcct tacccatctg cacccccctg ggctgagaga 1575 acctcacgca cctcccatcc taatcatcca atgctcaaga aacaacttct acttctgccc 1635 ttgccaacgg agagcgcctg cccctcccag aacacactcc atcagcttag gggctgctga 1695 cctccacagc ttcccctctc tcctcctgcc cacctgtcaa acaaagccag aagctgagca 1755 ccaggggatg agtggaggtt aaggctgagg aaaggccagc tggcagcaga gtgtggcctt 1815 cggacaactc agtccctaaa aacacagaca ttctgccagg cccccaagcc tgcagtcatc 1875 ttgaccaagc aggaagctca gactggttga gttcaggtag ctgcccctgg ctctgaccga 1935 aacagcgctg ggtccacccc atgtcaccgg atcctgggtg gtctgcaggc agggctgact 1995 ctaggtgccc ttggaggcca gccagtgacc tgaggaagcg tgaaggccga gaagcaagaa 2055 agaaacccga cagagggaag aaaagagctt tcttcccgaa ccccaaggag ggagatggat 2115 caatcaaacc cggcggtccc ctccgccagg cgagatgggg tggggtggag aactcctagg 2175 gtggctgggt ccaggggatg ggaggttgtg ggcattgatg gggaaggagg ctggcttgtc 2235 ccctcctcac tcccttccca taagctatag acccgaggaa actcagagtc ggaacggaga 2295 aaggtggact ggaaggggcc cgtgggagtc atctcaacca tcccctccgt ggcatcacct 2355 taggcaggga agtgtaagaa acacactgag gcagggaagt ccccaggccc caggaagccg 2415 tgccctgccc ccgtgaggat gtcactcaga tggaaccgca ggaagctgct ccgtgcttgt 2475 ttgctcacct ggggtgtggg aggcccgtcc ggcagttctg ggtgctccct accacctccc 2535 cagcctttga tcaggtgggg agtcagggac ccctgccctt gtcccactca agccaagcag 2595 ccaagctcct tgggaggccc cactggggaa ataacagctg tggctcacgt gagagtgtct 2655 tcacggcagg acaacgagga agccctaaga cgtccctttt ttctctgagt atctcctcgc 2715 aagctgggta atcgatgggg gagtctgaag cagatgcaaa gaggcaagag gctggatttt 2775 gaattttctt tttaataaaa aggcacctat aaaacaggtc aatacagtac aggcagcaca 2835 gagacccccg gaacaagcct aaaaattgtt tcaaaataaa aaccaagaag atgtcttcac 2895 atattgt 2902 <210> 7 <211> 372 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 7 Met Asn Tyr Pro Leu Thr Leu Glu Met Asp Leu Glu Asn Leu Glu Asp 1 5 10 15 Leu Phe Trp Glu Leu Asp Arg Leu Asp Asn Tyr Asn Asp Thr Ser Leu 20 25 30 Val Glu Asn His Leu Cys Pro Ala Thr Glu Gly Pro Leu Met Ala Ser 35 40 45 Phe Lys Ala Val Phe Val Pro Val Ala Tyr Ser Leu Ile Phe Leu Leu 50 55 60 Gly Val Ile Gly Asn Val Leu Val Leu Val Ile Leu Glu Arg His Arg 65 70 75 80 Gln Thr Arg Ser Ser Thr Glu Thr Phe Leu Phe His Leu Ala Val Ala 85 90 95 Asp Leu Leu Leu Val Phe Ile Leu Pro Phe Ala Val Ala Glu Gly Ser 100 105 110 Val Gly Trp Val Leu Gly Thr Phe Leu Cys Lys Thr Val Ile Ala Leu 115 120 125 His Lys Val Asn Phe Tyr Cys Ser Ser Leu Leu Leu Ala Cys Ile Ala 130 135 140 Val Asp Arg Tyr Leu Ala Ile Val His Ala Val His Ala Tyr Arg His 145 150 155 160 Arg Arg Leu Leu Ser Ile His Ile Thr Cys Gly Thr Ile Trp Leu Val 165 170 175 Gly Phe Leu Leu Ala Leu Pro Glu Ile Leu Phe Ala Lys Val Ser Gln 180 185 190 Gly His His Asn Asn Ser Leu Pro Arg Cys Thr Phe Ser Gln Glu Asn 195 200 205 Gln Ala Glu Thr His Ala Trp Phe Thr Ser Arg Phe Leu Tyr His Val 210 215 220 Ala Gly Phe Leu Leu Pro Met Leu Val Met Gly Trp Cys Tyr Val Gly 225 230 235 240 Val Val His Arg Leu Arg Gln Ala Gln Arg Arg Pro Gln Arg Gln Lys 245 250 255 Ala Val Arg Val Ala Ile Leu Val Thr Ser Ile Phe Phe Leu Cys Trp 260 265 270 Ser Pro Tyr His Ile Val Ile Phe Leu Asp Thr Leu Ala Arg Leu Lys 275 280 285 Ala Val Asp Asn Thr Cys Lys Leu Asn Gly Ser Leu Pro Val Ala Ile 290 295 300 Thr Met Cys Glu Phe Leu Gly Leu Ala His Cys Cys Leu Asn Pro Met 305 310 315 320 Leu Tyr Thr Phe Ala Gly Val Lys Phe Arg Ser Asp Leu Ser Arg Leu 325 330 335 Leu Thr Lys Leu Gly Cys Thr Gly Pro Ala Ser Leu Cys Gln Leu Phe 340 345 350 Pro Ser Trp Arg Arg Ser Ser Leu Ser Glu Ser Glu Asn Ala Thr Ser 355 360 365 Leu Thr Thr Phe 370 <210> 8 <211> 2614 <212> DNA <213> Mus musculus <220> <221> CDS <222> (44)...(1168) <400> 8 cgacatcaga cagtgaccag cctggtgacg cagagctgca gct atg aac tac cca 55 Met Asn Tyr Pro 1 cta acc ctg gac atg ggc tcc atc aca tac aat atg gat gac ctg tac 103 Leu Thr Leu Asp Met Gly Ser Ile Thr Tyr Asn Met Asp Asp Leu Tyr 5 10 15 20 aag gaa ctg gcc ttc tac agt aac agc acg gag att ccc cta cag gac 151 Lys Glu Leu Ala Phe Tyr Ser Asn Ser Thr Glu Ile Pro Leu Gln Asp 25 30 35 agt aac ttc tgc tct aca gtc gag gga ccc tta ctg acg tcc ttt aag 199 Ser Asn Phe Cys Ser Thr Val Glu Gly Pro Leu Leu Thr Ser Phe Lys 40 45 50 gcg gta ttc atg cct gtg gcc tac agc ctc atc ttc ctc ctg ggt atg 247 Ala Val Phe Met Pro Val Ala Tyr Ser Leu Ile Phe Leu Leu Gly Met 55 60 65 atg gga aac atc ctg gtg ctg gta atc ctg gag agg cac cgg cac act 295 Met Gly Asn Ile Leu Val Leu Val Ile Leu Glu Arg His Arg His Thr 70 75 80 cgg agc tca acc gag acc ttc ctg ttc cac ctc gca gta gcc gac ctt 343 Arg Ser Ser Thr Glu Thr Phe Leu Phe His Leu Ala Val Ala Asp Leu 85 90 95 100 ctc tta gtc ttc atc ctg cct ttt gca gtg gct gag ggc tct gtg ggt 391 Leu Leu Val Phe Ile Leu Pro Phe Ala Val Ala Glu Gly Ser Val Gly 105 110 115 tgg gtc cta ggg acc ttc ctc tgc aaa act gtg atc gct ctg cac aag 439 Trp Val Leu Gly Thr Phe Leu Cys Lys Thr Val Ile Ala Leu His Lys 120 125 130 atc aat ttc tac tgc agc agc ctg ctg ctg gcc tgt ata gct gta gac 487 Ile Asn Phe Tyr Cys Ser Ser Leu Leu Leu Ala Cys Ile Ala Val Asp 135 140 145 cgg tac cta gcc atc gtc cat gct gtt cac gcc tac cgc cgc cgt cga 535 Arg Tyr Leu Ala Ile Val His Ala Val His Ala Tyr Arg Arg Arg Arg 150 155 160 ctc ctc tcc atc cac atc acc tgc acg gcc att tgg ctg gcc ggc ttc 583 Leu Leu Ser Ile His Ile Thr Cys Thr Ala Ile Trp Leu Ala Gly Phe 165 170 175 180 ctg ttc gcc tta ccg gaa ctc ctc ttt gcc aag gtt ggc caa cct cat 631 Leu Phe Ala Leu Pro Glu Leu Leu Phe Ala Lys Val Gly Gln Pro His 185 190 195 aac aac gac tcc tta cca cag tgc acc ttc tcc cag gaa aac gaa gcg 679 Asn Asn Asp Ser Leu Pro Gln Cys Thr Phe Ser Gln Glu Asn Glu Ala 200 205 210 gaa act aga gcc tgg ttc acc tcc cgt ttc ctc tac cac atc ggg ggc 727 Glu Thr Arg Ala Trp Phe Thr Ser Arg Phe Leu Tyr His Ile Gly Gly 215 220 225 ttc cta cta ccg atg ctt gtg atg gga tgg tgt tac gtg ggc gtg gtc 775 Phe Leu Leu Pro Met Leu Val Met Gly Trp Cys Tyr Val Gly Val Val 230 235 240 cac agg cta ctg cag gcc cag cgg cgc cct cag cgg cag aag gcg gtc 823 His Arg Leu Leu Gln Ala Gln Arg Arg Pro Gln Arg Gln Lys Ala Val 245 250 255 260 agg gtg gcc att tta gtg aca agc att ttc ttc ctc tgc tgg tcg ccc 871 Arg Val Ala Ile Leu Val Thr Ser Ile Phe Phe Leu Cys Trp Ser Pro 265 270 275 tac cac att gtc atc ttc cta gat aca ctg gag agg ctg aag gct gtg 919 Tyr His Ile Val Ile Phe Leu Asp Thr Leu Glu Arg Leu Lys Ala Val 280 285 290 aat agc agc tgc gag ctg agt ggc tat ctc tct gtg gcc atc acc ttg 967 Asn Ser Ser Cys Glu Leu Ser Gly Tyr Leu Ser Val Ala Ile Thr Leu 295 300 305 tgt gaa ttc ctg ggc ctg gca cac tgc tgt ctc aat ccc atg ctc tac 1015 Cys Glu Phe Leu Gly Leu Ala His Cys Cys Leu Asn Pro Met Leu Tyr 310 315 320 acc ttc gct ggc gta aag ttc cgc agt gac ctc tct cgg ctt ctg acc 1063 Thr Phe Ala Gly Val Lys Phe Arg Ser Asp Leu Ser Arg Leu Leu Thr 325 330 335 340 aag ctg ggc tgt gct ggc ccg gcc tcc ctt tgc caa ctt ttc ccc aac 1111 Lys Leu Gly Cys Ala Gly Pro Ala Ser Leu Cys Gln Leu Phe Pro Asn 345 350 355 tgg cgc aag agt agt ctc tct gag tca gag aat gct act tcc ctc acc 1159 Trp Arg Lys Ser Ser Leu Ser Glu Ser Glu Asn Ala Thr Ser Leu Thr 360 365 370 acc ttc tag atcccggaag tctcggggcc cctgtctgtt tctgttttcc 1208 Thr Phe ttgggaggat aaagtggtgg cggaacccat ccaactcgag cttgggccag tgtccccaga 1268 tgggaaagct agataaactc tctcaaactt tcccaaaggg gaaagcagcc caaaggcaaa 1328 gcaagctata tccaggccac ctgtatcacc ttagatgaag agaactccat acacctccca 1388 tcctaaccag ctaaagctaa gctcagcttt atttcttcct ggccataggg acaaccacct 1448 ctgctgtggc ccacagtctc atcttcctcc tgattatgag cccagactct cctcccagaa 1508 tgtattccat catcttaaag actactggct gccacagcta cccaccactc ctataccaca 1568 gaggaatagc cagctggcgg cggcagacta tggccttaat gtgcctgtct cataaataca 1628 gacttcatgc cagaccttca accgtgcctt tctcttaacc aagcagaaag ctgaaaccga 1688 tctactttag gtagctgtct ggttccaacc taaccagcat tgggtcagcc ccatgttact 1748 ggatcttgga ttacagactg agggcaagtt ccagaaggtt ctggaagcta gccagtatcc 1808 taagaagagt aaagggcaag ccagcaggaa agaggcccag tggaaaagtg gaaagacacc 1868 ttttccaggc tctaaggaag aacaagtaaa aatcaaaccc agctgtcttc tccacccaat 1928 gtaccaaagc ttacagactg gtggggaaat gagatccagg gccctcgtgg attctacgca 1988 ccaatgggga aggaagccaa cttgcctggg gaaagcaaga tagcaaagtg gtcctagcct 2048 cgagagaggg gacacctagc taagagaatg acgacagagg ttcctgtctt cattaggcag 2108 aggcaatata agaagccaac ctgggcaggc aagtcctcaa accccaggaa ggcagtaccc 2168 tgcccctggg agggtaccac tcacatggaa ccagaggaag ctgctccatg catacatagg 2228 ggaagttagc aggcaattct gagctcggct tcctcccagc caccgatctg ggggcgtggg 2288 ggtaggaagc agagttgcct agtaccactc aagccaaccg tacaagctcc ctgggggatc 2348 ccactgggga aaccaatgct atagcttcag agactgtatc ctcattgcag aaccgtgaag 2408 acacctgggg accccctttt ctgctcccag catccaacaa ccagctggga agaggcaaac 2468 cgggcacaga aataaaaatg caagagatgg catttttgaa ttttctcttt ttaataaaaa 2528 ggcacctata aaacaggtca atacaggcag agacccccgg aacaagccta aaaagtgttt 2588 caaaataaaa acaggaagat gtcttc 2614 <210> 9 <211> 374 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 9 Met Asn Tyr Pro Leu Thr Leu Asp Met Gly Ser Ile Thr Tyr Asn Met 1 5 10 15 Asp Asp Leu Tyr Lys Glu Leu Ala Phe Tyr Ser Asn Ser Thr Glu Ile 20 25 30 Pro Leu Gln Asp Ser Asn Phe Cys Ser Thr Val Glu Gly Pro Leu Leu 35 40 45 Thr Ser Phe Lys Ala Val Phe Met Pro Val Ala Tyr Ser Leu Ile Phe 50 55 60 Leu Leu Gly Met Met Gly Asn Ile Leu Val Leu Val Ile Leu Glu Arg 65 70 75 80 His Arg His Thr Arg Ser Ser Thr Glu Thr Phe Leu Phe His Leu Ala 85 90 95 Val Ala Asp Leu Leu Leu Val Phe Ile Leu Pro Phe Ala Val Ala Glu 100 105 110 Gly Ser Val Gly Trp Val Leu Gly Thr Phe Leu Cys Lys Thr Val Ile 115 120 125 Ala Leu His Lys Ile Asn Phe Tyr Cys Ser Ser Leu Leu Leu Ala Cys 130 135 140 Ile Ala Val Asp Arg Tyr Leu Ala Ile Val His Ala Val His Ala Tyr 145 150 155 160 Arg Arg Arg Arg Leu Leu Ser Ile His Ile Thr Cys Thr Ala Ile Trp 165 170 175 Leu Ala Gly Phe Leu Phe Ala Leu Pro Glu Leu Leu Phe Ala Lys Val 180 185 190 Gly Gln Pro His Asn Asn Asp Ser Leu Pro Gln Cys Thr Phe Ser Gln 195 200 205 Glu Asn Glu Ala Glu Thr Arg Ala Trp Phe Thr Ser Arg Phe Leu Tyr 210 215 220 His Ile Gly Gly Phe Leu Leu Pro Met Leu Val Met Gly Trp Cys Tyr 225 230 235 240 Val Gly Val Val His Arg Leu Leu Gln Ala Gln Arg Arg Pro Gln Arg 245 250 255 Gln Lys Ala Val Arg Val Ala Ile Leu Val Thr Ser Ile Phe Phe Leu 260 265 270 Cys Trp Ser Pro Tyr His Ile Val Ile Phe Leu Asp Thr Leu Glu Arg 275 280 285 Leu Lys Ala Val Asn Ser Ser Cys Glu Leu Ser Gly Tyr Leu Ser Val 290 295 300 Ala Ile Thr Leu Cys Glu Phe Leu Gly Leu Ala His Cys Cys Leu Asn 305 310 315 320 Pro Met Leu Tyr Thr Phe Ala Gly Val Lys Phe Arg Ser Asp Leu Ser 325 330 335 Arg Leu Leu Thr Lys Leu Gly Cys Ala Gly Pro Ala Ser Leu Cys Gln 340 345 350 Leu Phe Pro Asn Trp Arg Lys Ser Ser Leu Ser Glu Ser Glu Asn Ala 355 360 365 Thr Ser Leu Thr Thr Phe 370 <210> 10 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> H1609; VH domain of 3D2 antibody <400> 10 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Asn Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Phe 20 25 30 Gly Met Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Leu Ala His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Arg Arg Tyr Asn Pro Ala 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Glu Thr Ser Lys Asn Gln Val 65 70 75 80 Phe Leu Lys Ile Ala Asn Val Asp Thr Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95 Cys Thr Arg Ile Ala Gly Tyr Tyr Gly Ser Arg Asp Trp Phe Ala Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 11 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> H1609-CDR1 <400> 11 Thr Phe Gly Met Gly Val Gly 1 5 <210> 12 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> H1609-CDR2 <400> 12 His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Arg Arg Tyr Asn Pro Ala Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 13 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> H1609-CDR3 <400> 13 Ile Ala Gly Tyr Tyr Gly Ser Arg Asp Trp Phe Ala Tyr 1 5 10 <210> 14 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> H5188/H2177; VH domain from MAb 5378 and 5261 <400> 14 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Phe 20 25 30 Gly Met Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Ile Ala His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Arg Arg Tyr Asn Pro Ala 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe 65 70 75 80 Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Ile Ala Gly Tyr Tyr Gly Ser Arg Asp Trp Phe Ala Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 15 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> L0293; VL domain from MAb 3D2 <400> 15 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Ser 20 25 30 Gly Ile Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Phe Arg Ala Ser Asp Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Val Asn 65 70 75 80 Pro Val Glu Thr Asp Asp Val Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Asn 85 90 95 Lys Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 16 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> L0293-CDR1 <400> 16 Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Ser Gly Ile Ser Phe Met His 1 5 10 15 <210> 17 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> L0293-CDR2 <400> 17 Arg Ala Ser Asp Leu Glu Ser 1 5 <210> 18 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> L0293-CDR3 <400> 18 Gln Gln Ser Asn Lys Asp Pro Trp Thr 1 5 <210> 19 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> L5153/L5140; VL domains from MAb 5378 and 5261 <400> 19 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Met 20 25 30 Gly Ile Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Phe Arg Ala Ser Asp Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn 85 90 95 Lys Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 20 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> L5153-CDR1 <400> 20 Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Met Gly Ile Ser Phe Met His 1 5 10 15 <210> 21 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> L5055; VL domain of MAb 5080 <400> 21 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Ser 20 25 30 Gly Ile Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Phe Arg Ala Ser Asp Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser 50 55 60 Gly Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn 85 90 95 Lys Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 22 <211> 368 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 22 Met Val Leu Glu Val Ser Asp His Gln Val Leu Asn Asp Ala Glu Val 1 5 10 15 Ala Ala Leu Leu Glu Asn Phe Ser Ser Ser Tyr Asp Tyr Gly Glu Asn 20 25 30 Glu Ser Asp Ser Cys Cys Thr Ser Pro Pro Cys Pro Gln Asp Phe Ser 35 40 45 Leu Asn Phe Asp Arg Ala Phe Leu Pro Ala Leu Tyr Ser Leu Leu Phe 50 55 60 Leu Leu Gly Leu Leu Gly Asn Gly Ala Val Ala Ala Val Leu Leu Ser 65 70 75 80 Arg Arg Thr Ala Leu Ser Ser Thr Asp Thr Phe Leu Leu His Leu Ala 85 90 95 Val Ala Asp Thr Leu Leu Val Leu Thr Leu Pro Leu Trp Ala Val Asp 100 105 110 Ala Ala Val Gln Trp Val Phe Gly Ser Gly Leu Cys Lys Val Ala Gly 115 120 125 Ala Leu Phe Asn Ile Asn Phe Tyr Ala Gly Ala Leu Leu Leu Ala Cys 130 135 140 Ile Ser Phe Asp Arg Tyr Leu Asn Ile Val His Ala Thr Gln Leu Tyr 145 150 155 160 Arg Arg Gly Pro Pro Ala Arg Val Thr Leu Thr Cys Leu Ala Val Trp 165 170 175 Gly Leu Cys Leu Leu Phe Ala Leu Pro Asp Phe Ile Phe Leu Ser Ala 180 185 190 His His Asp Glu Arg Leu Asn Ala Thr His Cys Gln Tyr Asn Phe Pro 195 200 205 Gln Val Gly Arg Thr Ala Leu Arg Val Leu Gln Leu Val Ala Gly Phe 210 215 220 Leu Leu Pro Leu Leu Val Met Ala Tyr Cys Tyr Ala His Ile Leu Ala 225 230 235 240 Val Leu Leu Val Ser Arg Gly Gln Arg Arg Leu Arg Ala Met Arg Leu 245 250 255 Val Val Val Val Val Val Ala Phe Ala Leu Cys Trp Thr Pro Tyr His 260 265 270 Leu Val Val Leu Val Asp Ile Leu Met Asp Leu Gly Ala Leu Ala Arg 275 280 285 Asn Cys Gly Arg Glu Ser Arg Val Asp Val Ala Lys Ser Val Thr Ser 290 295 300 Gly Leu Gly Tyr Met His Cys Cys Leu Asn Pro Leu Leu Tyr Ala Phe 305 310 315 320 Val Gly Val Lys Phe Arg Glu Arg Met Trp Met Leu Leu Leu Arg Leu 325 330 335 Gly Cys Pro Asn Gln Arg Gly Leu Gln Arg Gln Pro Ser Ser Ser Arg 340 345 350 Arg Asp Ser Ser Trp Ser Glu Thr Ser Glu Ala Ser Tyr Ser Gly Leu 355 360 365 <210> 23 <211> 415 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 23 Met Glu Leu Arg Lys Tyr Gly Pro Gly Arg Leu Ala Gly Thr Val Ile 1 5 10 15 Gly Gly Ala Ala Gln Ser Lys Ser Gln Thr Lys Ser Asp Ser Ile Thr 20 25 30 Lys Glu Phe Leu Pro Gly Leu Tyr Thr Ala Pro Ser Ser Pro Phe Pro 35 40 45 Pro Ser Gln Val Ser Asp His Gln Val Leu Asn Asp Ala Glu Val Ala 50 55 60 Ala Leu Leu Glu Asn Phe Ser Ser Ser Tyr Asp Tyr Gly Glu Asn Glu 65 70 75 80 Ser Asp Ser Cys Cys Thr Ser Pro Pro Cys Pro Gln Asp Phe Ser Leu 85 90 95 Asn Phe Asp Arg Ala Phe Leu Pro Ala Leu Tyr Ser Leu Leu Phe Leu 100 105 110 Leu Gly Leu Leu Gly Asn Gly Ala Val Ala Ala Val Leu Leu Ser Arg 115 120 125 Arg Thr Ala Leu Ser Ser Thr Asp Thr Phe Leu Leu His Leu Ala Val 130 135 140 Ala Asp Thr Leu Leu Val Leu Thr Leu Pro Leu Trp Ala Val Asp Ala 145 150 155 160 Ala Val Gln Trp Val Phe Gly Ser Gly Leu Cys Lys Val Ala Gly Ala 165 170 175 Leu Phe Asn Ile Asn Phe Tyr Ala Gly Ala Leu Leu Leu Ala Cys Ile 180 185 190 Ser Phe Asp Arg Tyr Leu Asn Ile Val His Ala Thr Gln Leu Tyr Arg 195 200 205 Arg Gly Pro Pro Ala Arg Val Thr Leu Thr Cys Leu Ala Val Trp Gly 210 215 220 Leu Cys Leu Leu Phe Ala Leu Pro Asp Phe Ile Phe Leu Ser Ala His 225 230 235 240 His Asp Glu Arg Leu Asn Ala Thr His Cys Gln Tyr Asn Phe Pro Gln 245 250 255 Val Gly Arg Thr Ala Leu Arg Val Leu Gln Leu Val Ala Gly Phe Leu 260 265 270 Leu Pro Leu Leu Val Met Ala Tyr Cys Tyr Ala His Ile Leu Ala Val 275 280 285 Leu Leu Val Ser Arg Gly Gln Arg Arg Leu Arg Ala Met Arg Leu Val 290 295 300 Val Val Val Val Val Ala Phe Ala Leu Cys Trp Thr Pro Tyr His Leu 305 310 315 320 Val Val Leu Val Asp Ile Leu Met Asp Leu Gly Ala Leu Ala Arg Asn 325 330 335 Cys Gly Arg Glu Ser Arg Val Asp Val Ala Lys Ser Val Thr Ser Gly 340 345 350 Leu Gly Tyr Met His Cys Cys Leu Asn Pro Leu Leu Tyr Ala Phe Val 355 360 365 Gly Val Lys Phe Arg Glu Arg Met Trp Met Leu Leu Leu Arg Leu Gly 370 375 380 Cys Pro Asn Gln Arg Gly Leu Gln Arg Gln Pro Ser Ser Ser Arg Arg 385 390 395 400 Asp Ser Ser Trp Ser Glu Thr Ser Glu Ala Ser Tyr Ser Gly Leu 405 410 415 <210> 24 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic CXCL13 forward primer <400> 24 tggctgcccc aaaactga 18 <210> 25 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic CXCL13 reverse primer <400> 25 tggcacgagg attcacacat 20 <210> 26 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic CXCR5 forward primer <400> 26 tgggctccat cacatacaat 20 <210> 27 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic CXCR5 reverse primer <400> 27 gggaatctcc gtgctgttac 20 <210> 28 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic CD19 forward primer <400> 28 accagtacgg gaatgtgctc 20 <210> 29 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic CD19 reverse primer <400> 29 gacttgaatg cgtggattt 19 <210> 30 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic CD4 forward primer <400> 30 ttcgccttcg cagtttgatc 20 <210> 31 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic CD4 reverse primer <400> 31 cacccacaac tccacctcct 20

Claims (38)

1. 개체에서 쇼그렌 증후군을 치료 또는 예방하기 위한 약제학적 조성물로서,
   CXCL13에 특이적으로 결합하여 CXCL13 활성을 저해하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하며,
   상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 기준 항체와 동일한 에피토프에 결합하며,
   상기 기준 항체가, a) 서열 번호 14로 표시된 서열을 가진 가변 중쇄 (VH) 도메인 및 서열 번호 19로 표시된 서열을 가진 가변 경쇄 (VL) 도메인; b) 서열 번호 14로 표시된 서열을 가진 VH 도메인 및 서열 번호 21로 표시된 서열을 가진 VL 도메인; 또는 c) 서열 번호 10으로 표시된 서열을 가진 VH 도메인 및 서열 번호 15로 표시된 서열을 가진 VL 도메인을 포함하는, 약제학적 조성물.
2. 제1항에 있어서,
   상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편이, a) 서열 번호 14의 3개의 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함하는 중쇄 및 서열번호 19의 3개의 CDR을 포함하는 경쇄; b) 서열번호 14의 3개의 CDR을 포함하는 중쇄 및 서열번호 21의 3개의 CDR을 포함하는 경쇄; 및 c) 서열번호 10의 3개의 CDR을 포함하는 중쇄 및 서열번호 15의 3개의 CDR을 포함하는 경쇄로 이루어진 군으로부터 선택되는 중쇄 및 경쇄를 포함하는, 약제학적 조성물.
3. 제2항에 있어서,
   상기 중쇄 및 경쇄가 a) 내지 f)로 이루어진 군으로부터 선택되는, 약제학적 조성물:
   a) 서열번호 14의 아미노산 잔기 31-35를 포함하는 상보성 결정 영역 (CDR)1, 서열번호 14의 아미노산 잔기 50-65를 포함하는 CDR2 및 서열번호 14의 아미노산 잔기 95-102를 포함하는 CDR3를 포함하는 중쇄, 및 서열번호 19의 아미노산 잔기 24-34를 포함하는 CDR1, 서열번호 19의 아미노산 잔기 50-56을 포함하는 CDR2 및 서열번호 19의 아미노산 잔기 89-97을 포함하는 CDR3를 포함하는 경쇄로서, 여기서 CDR 잔기들은 Kabat에 따라 넘버링됨;
   b) 서열번호 14의 아미노산 잔기 26-32를 포함하는 CDR1, 서열번호 14의 아미노산 잔기 52-68을 포함하는 CDR2 및 서열번호 14의 아미노산 잔기 95-102를 포함하는 CDR3를 포함하는 중쇄, 및 서열번호 19의 아미노산 잔기 26-32를 포함하는 CDR1, 서열번호 19의 아미노산 잔기 50-52를 포함하는 CDR2 및 서열번호 19의 아미노산 잔기 91-96을 포함하는 CDR3를 포함하는 경쇄로서, 여기서 CDR 잔기들은 Chothia에 따라 넘버링됨;
   c) 서열번호 14의 아미노산 잔기 31-35를 포함하는 CDR1, 서열번호 14의 아미노산 잔기 50-65를 포함하는 CDR2 및 서열번호 14의 아미노산 잔기 95-102를 포함하는 CDR3를 포함하는 중쇄, 및 서열번호 21의 아미노산 잔기 24-34를 포함하는 CDR1, 서열번호 21의 아미노산 잔기 50-56을 포함하는 CDR2 및 서열번호 21의 아미노산 잔기 89-97을 포함하는 CDR3를 포함하는 경쇄로서, 여기서 CDR 잔기들은 Kabat에 따라 넘버링됨;
   d) 서열번호 14의 아미노산 잔기 26-32를 포함하는 CDR1, 서열번호 14의 아미노산 잔기 52-68을 포함하는 CDR2 및 서열번호 14의 아미노산 잔기 95-102를 포함하는 CDR3를 포함하는 중쇄, 및 서열번호 21의 아미노산 잔기 26-32를 포함하는 CDR1, 서열번호 21의 아미노산 잔기 50-52를 포함하는 CDR2 및 서열번호 21의 아미노산 잔기 91-96을 포함하는 CDR3를 포함하는 경쇄로서, 여기서 CDR 잔기들은 Chothia에 따라 넘버링됨;
   e) 서열번호 10의 아미노산 잔기 31-35를 포함하는 CDR1, 서열번호 10의 아미노산 잔기 50-65를 포함하는 CDR2 및 서열번호 10의 아미노산 잔기 95-102를 포함하는 CDR3를 포함하는 중쇄, 및 서열번호 15의 아미노산 잔기 24-34를 포함하는 CDR1, 서열번호 15의 아미노산 잔기 50-56을 포함하는 CDR2, 서열번호 15의 아미노산 잔기 89-97을 포함하는 CDR3를 포함하는 경쇄로서, 여기서 CDR 잔기들은 Kabat에 따라 넘버링됨; 및
   f) 서열번호 10의 아미노산 잔기 26-32를 포함하는 CDR1, 서열번호 10의 아미노산 잔기 52-68을 포함하는 CDR2 및 서열번호 10의 아미노산 잔기 95-102를 포함하는 CDR3를 포함하는 중쇄, 및 서열번호 15의 아미노산 잔기 26-32를 포함하는 CDR1, 서열번호 15의 아미노산 잔기 50-52를 포함하는 CDR2 및 서열번호 15의 아미노산 잔기 91-96을 포함하는 CDR3를 포함하는 경쇄로서, 여기서 CDR 잔기들은 Chothia에 따라 넘버링됨.
4. 제2항에 있어서,
   상기 중쇄가 서열번호 11에 기재된 서열을 가진 CDR1, 서열번호 12에 기재된 서열을 가진 CDR2 및 서열번호 13에 기재된 서열을 가진 CDR3를 포함하고,
   상기 경쇄가 서열번호 20에 기재된 서열을 가진 CDR1, 서열번호 17에 기재된 서열을 가진 CDR2 및 서열번호 18에 기재된 서열을 가진 CDR3를 포함하는, 약제학적 조성물.
5. 제2항에 있어서,
   상기 중쇄가 서열번호 11에 기재된 서열을 가진 CDR1, 서열번호 12에 기재된 서열을 가진 CDR2 및 서열번호 13에 기재된 서열을 가진 CDR3를 포함하고,
   상기 경쇄가 서열번호 16에 기재된 서열을 가진 CDR1, 서열번호 17에 기재된 서열을 가진 CDR2 및 서열번호 18에 기재된 서열을 가진 CDR3를 포함하는, 약제학적 조성물.
6. 제1항에 있어서,
   CXCL13에 특이적으로 결합하는 상기 항체 또는 항원-결합 단편이, 하기 a) 내지 c)로 이루어진 군으로부터 선택되는 VH 및 VL 서열과 동일한 아미노산 서열을 가진 가변 중쇄 (VH) 도메인 및 가변 경쇄 (VL) 도메인을 포함하는, 약제학적 조성물:
   a) 각각 서열번호 14 및 서열번호 19;
   b) 각각 서열번호 14 및 서열번호 21;
   c) 각각 서열번호 10 및 서열번호 15.
7. 제6항에 있어서,
   CXCL13에 특이적으로 결합하는 상기 항체 또는 항원-결합 단편이, 서열번호 14에 기재된 서열을 가진 VH 도메인과 서열번호 19에 기재된 서열을 가진 VL 도메인을 포함하는, 약제학적 조성물.
8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
   상기 항체가 키메라 항체, 인간 항체, 또는 인간화된 항체인, 약제학적 조성물.
9. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
   상기 항체가 IgG1 카파(kappa) 항체인, 약제학적 조성물.
10. 제9항에 있어서,
    상기 항체가 인간 IgG1 불변부 및 인간 카파 불변부를 포함하는, 약제학적 조성물.
11. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항원-결합 단편이 Fab, F(ab')₂, Fv 및 scFv로 이루어진 군으로부터 선택되는, 약제학적 조성물.
12. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체 또는 항원-결합 단편이 CXCL13와 CXCL13 수용체와의 상호작용을 저해하는, 약제학적 조성물.
13. 제12항에 있어서,
    상기 CXCL13 수용체가 CXCR5 또는 CXCR3인, 약제학적 조성물.
14. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 개체가 동물인, 약제학적 조성물.
15. 제14항에 있어서,
    상기 동물이 포유류인, 약제학적 조성물.
16. 제15항에 있어서,
    상기 포유류가 인간인, 약제학적 조성물.
    
17. 삭제
18. 삭제
19. 삭제
20. 삭제
21. 삭제
22. 삭제
23. 삭제
24. 삭제
25. 삭제
26. 삭제
27. 삭제
28. 삭제
29. 삭제
30. 삭제
31. 삭제
32. 삭제
33. 삭제
34. 삭제
35. 삭제
36. 삭제
37. 삭제
38. 삭제

Images