KR102078283B1 - 갱년기 증상의 개선 기능이 있는 엉겅퀴 추출물 및 이의 제조방법 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 갱년기 증상의 개선 기능이 있는 엉겅퀴 추출물 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는 에스트로겐 수용체 전사활성이 뛰어난 봄 수확 엉겅퀴 잎과 가을 수확 엉겅퀴 잎을 3:2의 비율로 혼합한 혼합 엉겅퀴를 이용하여 엉겅퀴 추출물을 제조함으로써 히스피둘린(hispidulin), 시르시마리틴(cirsimaritin) 및 시르시마린(cirsimarin)을 유효성분으로 하고, 체중 조절 효과, 비만 개선 효과, 여성 호르몬 개선 효과, 간기능 개선 효과, 골밀도 개선 효과 및 우울증 개선 효과가 월등히 탁월하여 갱년기에 나타나는 증상들을 현저히 개선할 수 있는 갱년기 증상의 개선 기능이 있는 엉겅퀴 추출물 및 이의 제조방법에 관한 것이다.
본 발명인 갱년기 증상의 개선 기능이 있는 엉겅퀴 추출물 및 이의 제조방법은 엉겅퀴를 준비하되, 봄 수확 엉겅퀴 잎과 가을 수확 엉겅퀴 잎을 3:2의 비율로 혼합하여 준비하고, 상기 준비된 엉겅퀴를 에탄올 20~40%로 환류냉각 추출방법으로 2~4회 반복하여 추출한 뒤, 감압 농축기로 농축하여 제조한다.
본 발명인 갱년기 증상의 개선 기능이 있는 엉겅퀴 추출물 및 이의 제조방법은 엉겅퀴를 준비하되, 봄 수확 엉겅퀴 잎과 가을 수확 엉겅퀴 잎을 3:2의 비율로 혼합하여 준비하고, 상기 준비된 엉겅퀴를 에탄올 20~40%로 환류냉각 추출방법으로 2~4회 반복하여 추출한 뒤, 감압 농축기로 농축하여 제조한다.
Description
본 발명은 갱년기 증상의 개선 기능이 있는 엉겅퀴 추출물 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는 에스트로겐 수용체 전사활성이 뛰어난 봄 수확 엉겅퀴 잎과 가을 수확 엉겅퀴 잎을 3:2의 비율로 혼합한 혼합 엉겅퀴를 이용하여 엉겅퀴 추출물을 제조함으로써 히스피둘린(hispidulin), 시르시마리틴(cirsimaritin) 및 시르시마린(cirsimarin)을 유효성분으로 하고, 체중 조절 효과, 비만 개선 효과, 여성 호르몬 개선 효과, 간기능 개선 효과, 골밀도 개선 효과 및 우울증 개선 효과가 월등히 탁월하여 갱년기에 나타나는 증상들을 현저히 개선할 수 있는 갱년기 증상의 개선 기능이 있는 엉겅퀴 추출물 및 이의 제조방법에 관한 것이다.
갱년기란 폐경기라고도 하는데, 난소의 기능으로 보아 여성으로서의 성숙기에서 노년기로 이행하는 시기를 말한다. 갱년기의 연령은, 체질 ·영양상태 ·분만의 횟수 등에 따라 개인차가 있으나, 통계적으로 40~55세로 본다. 평균수명의 연장으로 폐경기가 약간 늦어지는 경향이 있다. 그리고 경산부(經産婦)는 늦고 미혼여성은 비교적 빠른 경향인데, 초조나 결혼연령의 차이와는 무관한 것 같다.
갱년기를 맞으면 난소 기능의 실조로 월경의 양이나 주기가 불규칙하게 되고, 수개월에서 3년에 걸친 여포호르몬(에스트로겐)의 분비저하로 월경은 마침내 폐지되며, 간뇌(間腦)의 자율신경중추에 작용하여 자율신경계의 실조를 일으켜 갱년기장애의 원인이 된다. 또 뇌하수체전엽의 기능실조도 일으켜 부신피질자극호르몬(ACTH)의 이상 분비에서 대상성 일과성(代償性一過性)으로 부신피질 기능을 항진시켜 부신의 성호르몬 분비로 남성화를 보이는 것 외에, 갑상선호르몬(TSH)도 영향을 받아 갑상선 기능에 이상을 가져와 비만을 초래하는 등 갱년기 특유의 기능실조가 나타난다. 성기(性器)의 위축, 혈압변화 등 신체적 변화와 정신면에서도 갱년기장애라고 하는 일련의 증후군이 나타난다. 즉, 일과성열감(一過性熱感) ·동계(動悸:심장의 고동이 보통 때보다 심하여 가슴이 울렁거리는 일) ·현기 ·이명(耳鳴) ·고혈압 ·소화기장애 ·두통 ·기억력감퇴 ·우울증 등인데, 증세의 정도에는 개인차가 심하여, 일상생활에 지장이 없을 정도의 가벼운 것에서 아주 자리에 눕게 될 정도의 중증까지 각양각색이다. 약 30%가 치료를 받고 있으나 대개는 1~2년 동안에 저절로 낫고, 치료는 주로 호르몬을 보충한다.
한편 엉겅퀴(Cirsium japonicum var. maackii (Maxim))는 국화과에 속하는 여러해살이풀로, 한국, 일본, 중국 북동부에 분포하며, 가시나물 혹은 항가새라고도 한다. 높이 50~100 ㎝이고 전체에 흰털과 더불어 거미줄과 같은 털이 있다. 뿌리 잎은 꽃필 때까지 남아있고 줄기 잎보다 크다. 줄기 잎은 피침상 타원형으로 깃처럼 갈라지고 밑은 원대를 감싸며 갈라진 가장자기가 다시 갈라지고 결각상의 톱니와 더불어 가시가 있다. 꽃은 6~8월에 피고 자주색에서 적색이다. 총포의 포편은 7~8열로 배열하고 안쪽일수록 길어진다. 열매는 수과이며 관모는 길이 16~19 ㎜이다. 잎이 좁고 녹색이며 가시가 다소 많은 것을 좁은 잎 엉겅퀴, 가시가 많은 것을 가시엉겅퀴라 한다.
이러한 엉겅퀴는 약재로서는 대계라고 불리며 양혈지혈(凉血止血), 활혈해독(活血解毒) 및 소염의 효능이 있는 것으로 알려진 바 있다(육창수 외, 1998; 박종희 외, 2000). 특히 엉겅퀴는 지혈작용이 우수한 것으로 알려져 있는데 지혈작용을 나타내는 주성분은 펙토리나린(pectolinarin)이라는 성분인데 마우스를 이용한 실험에서 용량 의존적으로 출혈시간의 단축이 관찰된다는 내용이 보고되었다(Ishida et al., 1987). 또한, 엉겅퀴는 림프구의 증식을 촉진시킴과 동시에 NK 세포의 활성을 증가시키고 종양을 억제하는 활성이 있어 항암 및 면역 증강 효
과를 가지고 있는 것으로 여겨지며(Liu et al., 2006), 이 외에도 감기, 백일해, 장염, 신장염, 토혈, 혈뇨, 혈변 또는 산후에 출혈이 멎지 않을 때나 대하증 및 종기와 같은 증상의 치료에도 사용된다고 알려진 바 있다(Lee, 2002; Kim, 1997).
또한, 이와 같이 다양한 생리활성을 가지고 있는 성분들이 엉겅퀴로부터 분리 및 정제되고 있는데, 지금까지 밝혀진 엉겅퀴의 생리활성 성분들로는 아플로탁센(aplotaxene), 디하이드로아플로탁센(dihydroaplotaxene), 테트라하이드로아플로탁센(tetrahydroaplotaxene), 헥사하이드로아플로탁센(hexahydroaplotaxene), 사이페린(cyperene), 카리오필렌(caryophyllene), 쓰요푸센(thujopsene), 알파-히마칼렌(α-himachalene)과 같은 정유 화합물들이 분리되어 있고, 알파-아미린α-amyrin) 및 베타-아미린(β-amyrin)과 같은 트리터펜의 화합물들이 분리된 바 있으며, 또한 최근에는 폴리아세틸렌(polyacetylene) 화합물이 분리되었다.
하지만 엉겅퀴 추출물을 에스트로겐 수용체 전사활성이 뛰어난 봄 수확 엉겅퀴와 가을 수확 엉겅퀴를 3:2의 비율로 혼합하되, 또한 엉겅퀴의 부위 중에서도 에스트로겐 수용체 전사활성이 뛰어난 잎 부분을 사용한 혼합 엉겅퀴를 이용하여 제조함으로써 갱년기 증상을 현저히 개선시킬 수 있는 연구는 현재 이루어지지 않은 실정이다.
본 발명은 상기와 같은 종래 기술의 문제점을 해결하기 위하여 발명된 것으로서, 에스트로겐 수용체 전사활성이 뛰어난 봄 수확 엉겅퀴 잎과 가을 수확 엉겅퀴 잎을 3:2의 비율로 혼합한 혼합 엉겅퀴를 이용하여 엉겅퀴 추출물을 제조함으로써 히스피둘린(hispidulin), 시르시마리틴(cirsimaritin) 및 시르시마린(cirsimarin)을 유효성분으로 하고, 체중 조절 효과, 비만 개선 효과, 여성 호르몬 개선 효과, 간기능 개선 효과, 골밀도 개선 효과 및 우울증 개선 효과가 월등히 탁월하여 갱년기에 나타나는 증상들을 현저히 개선할 수 있는 갱년기 증상의 개선 기능이 있는 엉겅퀴 추출물 및 이의 제조방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
상기와 같은 목적을 달성하기 위해 본 발명인 갱년기 증상의 개선 기능이 있는 엉겅퀴 추출물 및 이의 제조방법은 엉겅퀴를 준비하되, 봄 수확 엉겅퀴 잎과 가을 수확 엉겅퀴 잎을 3:2의 비율로 혼합하여 준비하고, 상기 준비된 엉겅퀴를 에탄올 20~40%로 환류냉각 추출방법으로 2~4회 반복하여 추출한 뒤, 감압 농축기로 농축하여 제조를 완료하고,
상기 제조가 완료된 엉겅퀴 추출물은 히스피둘린(hispidulin), 시르시마리틴(cirsimaritin) 및 시르시마린(cirsimarin)을 유효성분으로 하는 것을 특징으로 한다.
상기와 같이 제시된 본 발명에 의한 갱년기 증상의 개선 기능이 있는 엉겅퀴 추출물 및 이의 제조방법은 에스트로겐 수용체 전사활성이 뛰어난 봄 수확 엉겅퀴 잎과 가을 수확 엉겅퀴 잎을 3:2의 비율로 혼합한 혼합 엉겅퀴를 이용하여 엉겅퀴 추출물을 제조함으로써 갱년기 증상의 개선 기능을 현저히 증진시킬 수 있다는 효과가 있다.
보다 구체적으로 상기 엉겅퀴 추출물은 히스피둘린(hispidulin), 시르시마리틴(cirsimaritin) 및 시르시마린(cirsimarin)을 유효성분으로 하고, 체중 조절 효과, 비만 개선 효과, 여성 호르몬 개선 효과, 간기능 개선 효과, 골밀도 개선 효과 및 우울증 개선 효과가 월등히 탁월하여 갱년기에 나타나는 증상들을 현저히 개선할 수 있다는 효과가 있다.
도 1은 본 발명의 일실시예에 따른 갱년기 증상의 개선 기능이 있는 엉겅퀴 추출물의 제조방법을 나타내는 순서도.
도 2는 본 발명의 일실시예에 따른 에탄올 0%, 30%, 50%, 70%, 100%를 포함하는 물+에탄올 추출용매를 이용하여 추출한 엉겅퀴 추출물의 에스트로겐 수용체 전사활성을 나타내는 그래프.
도 3은 본 발명의 일실시예에 따른 에탄올 30%를 포함하는 물+에탄올 추출용매를 이용하여 추출한 엉겅퀴 부위별(FL: 꽃, Le: 잎, Wh: 전체, R: 뿌리) 추출물의 에스트로겐 수용체 전사활성을 나타내는 그래프.
도 4는 본 발명의 일실시예에 따른 에탄올 0%, 30%를 포함하는 물+에탄올 추출용매를 이용하여 추출한 수확시기(CJL1: 봄 수확, CJL3: 가을 수확)에 따른 엉겅퀴 추출물의 에스트로겐 수용체 전사활성을 나타내는 그래프.
도 5는 본 발명의 일실시예에 따른 에탄올 30%를 포함하는 물+에탄올 추출용매를 이용하여 추출한 수확시기(CJL1: 봄 수확, CJL3: 가을 수확)의 비율에 따른 엉겅퀴 추출물의 에스트로겐 수용체 전사활성을 나타내는 그래프.
도 6은 본 발명의 일실시예에 따른 엉겅퀴 성분들의 에스트로겐 수용체 전사활성을 나타내는 그래프.
도 2는 본 발명의 일실시예에 따른 에탄올 0%, 30%, 50%, 70%, 100%를 포함하는 물+에탄올 추출용매를 이용하여 추출한 엉겅퀴 추출물의 에스트로겐 수용체 전사활성을 나타내는 그래프.
도 3은 본 발명의 일실시예에 따른 에탄올 30%를 포함하는 물+에탄올 추출용매를 이용하여 추출한 엉겅퀴 부위별(FL: 꽃, Le: 잎, Wh: 전체, R: 뿌리) 추출물의 에스트로겐 수용체 전사활성을 나타내는 그래프.
도 4는 본 발명의 일실시예에 따른 에탄올 0%, 30%를 포함하는 물+에탄올 추출용매를 이용하여 추출한 수확시기(CJL1: 봄 수확, CJL3: 가을 수확)에 따른 엉겅퀴 추출물의 에스트로겐 수용체 전사활성을 나타내는 그래프.
도 5는 본 발명의 일실시예에 따른 에탄올 30%를 포함하는 물+에탄올 추출용매를 이용하여 추출한 수확시기(CJL1: 봄 수확, CJL3: 가을 수확)의 비율에 따른 엉겅퀴 추출물의 에스트로겐 수용체 전사활성을 나타내는 그래프.
도 6은 본 발명의 일실시예에 따른 엉겅퀴 성분들의 에스트로겐 수용체 전사활성을 나타내는 그래프.
이하, 본 발명의 바람직한 실시예에 대하여 상세히 설명한다. 이들 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 권리범위는 이들 실시예에만 한정되는 것은 아니다.
본 발명인 갱년기 증상의 개선 기능이 있는 엉겅퀴 추출물 및 이의 제조방법은 봄 수확 엉겅퀴와 가을 수확 엉겅퀴가 3:2의 비율로 혼합되어 사용된다.
상기 엉겅퀴는 국화과에 속하는 여러해살이풀로, 한국, 일본, 중국 북동부에 분포하며, 가시나물 혹은 항가새라고도 하고, 주로 어린순은 식용으로 쓰이며, 잎, 줄기 및 뿌리는 약용으로 이용된다.
본 발명에서 엉겅퀴 추출물 제조시, 봄 수확 엉겅퀴와 가을 수확 엉겅퀴를 3:2의 비율로 혼합하여 사용하는 이유는 하기 실험예에서 구체적으로 설명하겠지만, 봄 수확 엉겅퀴와 가을 수확 엉겅퀴를 같은 조건에서 추출하였을 때, 에스트로겐 수용체 전사활성에 있어, 가을 수확 엉겅퀴에 비해 봄 수확 엉겅퀴의 활성도가 양성대조군인 에스트라디올(estradiol)과 유사한 효과를 나타내었고, 봄 수확 엉겅퀴와 가을 수확 엉겅퀴의 비율을 각각 1:1, 2:3, 3:2, 1:4, 4:1로 하여 에스트로겐 수용체 전사활성을 측정해봤을 때, 3:2의 비율로 혼합한 추출물이 양성대조군인 에스트라디올(estradiol)보다 높은 효과를 나타내었기 때문이다. 따라서 봄 수확 엉겅퀴의 비율이 더 낮아지거나 가을 수확 엉겅퀴의 비율이 더 높아질 경우 에스트로겐 수용체 전사 활성 효과가 저하될 수 있다는 문제점이 있다.
또한 상기 봄 수확 엉겅퀴와 가을 수확 엉겅퀴는 각각 봄 수확 엉겅퀴의 잎 부분과 가을 수확 엉겅퀴의 잎 부분을 사용하는 것을 특징으로 하는데, 이 또한 엉겅퀴의 꽃, 잎, 전체, 뿌리 각각의 추출물로 에스트로겐 수용체 전사활성을 측정해봤을 때, 엉겅퀴의 잎 추출물이 양성대조군인 에스트라디올(estradiol)보다 높은 효과를 나타내었기 때문이다(하기 실험예 참조).
또한 상기 엉겅퀴 추출물은 20~40%의 에탄올을 이용하여 추출하는 것을 특징으로 하는데, 엉겅퀴를 각각 에탄올 0%, 30%, 50%, 70%, 100%를 포함하는 물+에탄올 추출용매를 이용하여 추출한 엉겅퀴 추출물의 에스트로겐 수용체 전사활성을 측정한 결과, 30%의 에탄올 추출물이 양성대조군인 레드클로버와 유사한 효과를 나타내었기 때문이다(하기 실험예 참조). 따라서 에탄올의 함량이 20% 미만이거나 40%를 초과할 경우 에스트로겐 수용체 전사활성 효과가 저하될 수 있다는 문제점이 있다.
이때 상기 추출은 환류냉각 추출방법을 2~4회 반복하는 것을 특징으로 하는데, 상기 반복횟수가 2회 미만일 경우 추출이 충분히 이루어지지 않을 수 있고, 4회를 초과할 경우 추출횟수는 증가하지만 그에 비해 추출물의 양이나 유효성분의 양의 변화는 현저한 차이가 없어 추출의 효율성이 저하된다는 문제점이 있다.
아울러, 에탄올을 이용하여 환류냉각 추출 후, 감압 농축기로 농축하여 엉겅퀴 추출물의 제조를 완료한다.
이렇게 제조가 완료된 엉겅퀴 추출물은 히스피둘린(hispidulin), 시르시마리틴(cirsimaritin) 및 시르시마린(cirsimarin)을 유효성분으로 한다. 구체적으로 엉겅퀴 추출물의 각각의 성분들을 에스트로겐 수용체 전사활성을 측정해봤을 때, 상기 히스피둘린(hispidulin), 시르시마리틴(cirsimaritin) 및 시르시마린(cirsimarin) 성분이 양성대조군인 에스트라디올(estradiol)보다 높은 효과를 나타내었다(하기 실험예 참조).
이러한 엉겅퀴 추출물은 체중 조절 효과, 비만 개선 효과, 여성 호르몬 개선 효과, 간기능 개선 효과, 골밀도 개선 효과 및 우울증 개선 효과가 월등히 탁월하여 갱년기에 나타나는 증상들을 현저히 개선할 수 있다는 효과가 있다(하기 실험예 참조).
갱년기란 폐경기라고도 하는데, 난소의 기능으로 보아 여성으로서의 성숙기에서 노년기로 이행하는 시기를 말한다. 갱년기의 연령은, 체질 ·영양상태 ·분만의 횟수 등에 따라 개인차가 있으나, 통계적으로 40~55세로 본다. 갱년기를 맞으면 난소 기능의 실조로 월경의 양이나 주기가 불규칙하게 되고, 수개월에서 3년에 걸친 여포호르몬(에스트로겐)의 분비저하로 월경은 마침내 폐지되며, 간뇌(間腦)의 자율신경중추에 작용하여 자율신경계의 실조를 일으켜 갱년기장애의 원인이 된다. 또 뇌하수체전엽의 기능실조도 일으켜 부신피질자극호르몬(ACTH)의 이상 분비에서 대상성 일과성(代償性一過性)으로 부신피질 기능을 항진시켜 부신의 성호르몬 분비로 남성화를 보이는 것 외에, 갑상선호르몬(TSH)도 영향을 받아 갑상선 기능에 이상을 가져와 비만을 초래하는 등 갱년기 특유의 기능실조가 나타난다. 성기(性器)의 위축, 혈압변화 등 신체적 변화와 정신면에서도 갱년기장애라고 하는 일련의 증후군이 나타난다. 즉, 일과성열감(一過性熱感) ·동계(動悸:심장의 고동이 보통 때보다 심하여 가슴이 울렁거리는 일) ·현기 ·이명(耳鳴) ·고혈압 ·소화기장애 ·두통 ·기억력감퇴 ·우울증 등인데, 증세의 정도에는 개인차가 심하여, 일상생활에 지장이 없을 정도의 가벼운 것에서 아주 자리에 눕게 될 정도의 중증까지 각양각색이다.
이하, 본 발명인 갱년기 증상의 개선 기능이 있는 엉겅퀴 추출물의 제조방법에 대해 보다 구체적으로 설명하면 다음과 같다.
먼저 엉겅퀴를 준비한다.
이때 상기 엉겅퀴는 봄 수확 엉겅퀴와 가을 수확 엉겅퀴를 3:2의 비율로 혼합하여 준비하되, 각각 봄 수확 엉겅퀴의 잎 부분과 가을 수확 엉겅퀴의 잎 부분을 준비한다.
다음으로 상기에서 준비된 엉겅퀴를 추출한다.
이때 상기 추출은 20~40%의 에탄올(주정)을 이용하여, 환류냉각 추출방법으로 2~4회 반복하여 추출한다.
마지막으로 상기에서 추출된 엉겅퀴를 감압 농축기를 이용하여 농축한다.
제조가 완료된 엉겅퀴 추출물은 히스피둘린(hispidulin), 시르시마리틴(cirsimaritin) 및 시르시마린(cirsimarin)을 유효성분으로 한다.
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실시예
1> 갱년기 증상의 개선 기능이 있는 엉겅퀴 추출물의 제조
엉겅퀴를 준비한다.
이때 상기 엉겅퀴는 봄 수확 엉겅퀴와 가을 수확 엉겅퀴를 3:2의 비율로 혼합하여 준비하되, 각각 봄 수확 엉겅퀴의 잎 부분과 가을 수확 엉겅퀴의 잎 부분을 준비한다.
상기에서 준비된 엉겅퀴를 추출한다.
이때 상기 추출은 30%의 에탄올을 이용하여, 환류냉각 추출방법으로 3회 반복하여 추출한다.
상기에서 추출된 엉겅퀴를 감압 농축기를 이용하여 농축한다.
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실험예
1> 엉겅퀴 추출물, 분획과 성분의 에스트로겐 수용체 전사활성 시험
엉겅퀴(Cirsium japonicum var. maackii)의 추출용매로서 에탄올 함량이 각각 0%, 30%, 50%, 70%인 물-에탄올 추출용매를 이용하여 추출한 엉겅퀴 추출물에 대해 CV-2세포주에서 에스트로겐 수용체(hER)를 매개한 전사활성을 측정하였다. Monkey kidney cell line인 CV-1 세포를 Dulbecco's modified Eagle's medium(without phenol red, Hyclone)에 10% charcoal dextran treated fetal bovine serum (Hyclone) 및 1% penicillin/streptomycin(Hyclone) 이 포함된 배지를 사용하여 37℃, 5% CO2 조건 하에서 배양하였다. CV-1 세포를 7x104cells/well의 농도로 24 well plate에 seeding하였다. 24시간 배양 뒤, 유니버셜 프로모터 뒤에 ERα 유전자를 지닌 플라스미드, ERα가 결합하여 활성화 되는 ERE(Ers response element)를 프로모터로 가지고 뒤에 리포터로서 역할을 하는 반디불 루시퍼라아제 유전자를 지닌 플라스미드, 그리고 레퍼런스로 사용될 유니버셜 프로모터에 레닐라 루시퍼라아제 유전자가 결합된 플라스미드를 세포에 TransFastTransfection Reagent(promega)를 사용하여 transfection 하였다. 24시간 동안 배양한 후 PBS로 washing한 뒤 시료들을 농도별로 처리하고 24시간 배양하였다. 이 후 PBS로 washing 후 lysis buffer로 세포를 깬 후 dual-Luciferase Reporter Assay System kit(promega)를 사용하여 루시퍼라아제 활성을 측정하였다. 양성대조군으로서 석류추출물과 레드클로버 추출물(광동제약 퀸즈원정)을 사용하였다.
(1) 에탄올 0%, 30%, 50%, 70%, 100%를 포함하는 물+에탄올 추출용매를 이용하여 추출한 엉겅퀴 추출물의 에스트로겐 수용체 전사활성
실험(1)에 사용한 에탄올 0%, 30%, 50%, 70%, 100% 추출물을 만들기 위해 봄에 수확한 엉겅퀴 지상부를 각 에탄올 0%, 30%, 50%, 70%, 100%를 이용하여 환류냉각 추출방법으로 3회 반복하여 추출 하였고, 감압 농축기로 농축하여 추출물(에탄올 0% 추출물, 에탄올 30% 추출물, 에탄올 50% 추출물, 에탄올 70% 추출물, 에탄올 100% 추출물)을 얻었다.
도 2에서 보는 바와 같이 각각의 추출물에 대해 10, 30, 100 ug/ml의 농도로 처리한 결과 추출조건에 상관없이 농도 의존적으로 에스트로겐 수용체 전사활성이 나타났다. 특히, 30% 에탄올 추출물은 100ug/ml에서 양성대조군인 레드클로버와 유사한 효과를 나타내었다. 따라서 CV-2를 이용한 in vitro 실험에서는 30%에탄올 추출물이 적절한 것으로 판단되었다.
(2) 에탄올 30%를 포함하는 물+에탄올 추출용매를 이용하여 추출한 엉겅퀴 부위별(FL: 꽃, Le: 잎, Wh: 전체, R: 뿌리) 추출물의 에스트로겐 수용체 전사활성
실험(2)에 사용한 에탄올 30% 추출물은 엉겅퀴 부위별(FL: 꽃, Le: 잎, Wh: 전체, R: 뿌리)로 에탄올 30%로 환류냉각 추출방법으로 3회 반복하여 추출 하였고, 감압 농축기로 농축하여 부위별 추출물(에탄올 30% 꽃 추출물, 에탄올 30% 잎 추출물, 에탄올 30% 전초 추출물, 에탄올 30% 뿌리 추출물)을 얻었다.
도 3에서 보는 바와 같이 각각의 부위별 추출물에 대해 10, 30, 100 ug/ml의 농도로 처리한 결과 부위에 상관없이 농도 의존적으로 에스트로겐 수용체 전사활성이 나타났다. 특히, 엉겅퀴 잎 추출물은 100ug/ml에서 양성대조군인 estradiol (E2) 보다 높은 효과를 나타내었다.
(3) 에탄올 0%, 30%를 포함하는 물+에탄올 추출용매를 이용하여 추출한 수확시기(CJL1: 봄 수확, CJL3: 가을 수확)에 따른 엉겅퀴 추출물의 에스트로겐 수용체 전사활성
실험(3)에 사용한 에탄올 0%, 30% 추출물은 엉겅퀴 수확시기(CJL1: 봄 수확, CJL3: 가을 수확)에 따른 엉겅퀴 추출물로 같은 방법으로 환류냉각 추출방법으로 3회 반복하여 추출 하였고, 감압 농축기로 농축하여 추출물(에탄올 0% 봄수확 추출물, 에탄올 30% 봄수확 추출물, 에탄올 0% 가을수확 추출물, 에탄올 30% 가을수확 추출물)을 얻었다.
도 4에서 보는 바와 같이 수확시기와 에탄올 농도에 따른 엉겅퀴 잎 추출물에 대해 10, 30, 100 ug/ml의 농도로 처리한 결과 시기와 농도에 상관없이 농도 의존적으로 에스트로겐 수용체 전사활성이 나타났다. 특히, 봄 수확 엉겅퀴 잎을 30% 에탄올농도에서 추출한 추출물은 100ug/ml에서 양성대조군인 estradiol (E2)과 유사한 효과를 나타내었다.
(4) 에탄올 30%를 포함하는 물+에탄올 추출용매를 이용하여 추출한 수확시기(CJL1: 봄 수확, CJL3: 가을 수확)의 비율에 따른 엉겅퀴 추출물의 에스트로겐 수용체 전사활성
실험(4)에 사용한 에탄올 추출물은 수확시기(CJL1: 봄 수확, CJL3: 가을 수확)의 비율에 따른 엉겅퀴 추출물로 같은 방법으로 환류냉각 추출방법으로 3회 반복하여 추출 하였고, 감압 농축기로 농축하여 추출물(에탄올 30% 봄수확:가을수확(1:1) 추출물, 에탄올 30% 봄수확:가을수확(2:3) 추출물, 에탄올 30% 봄수확:가을수확(3:2) 추출물, 에탄올 30% 봄수확:가을수확(1:4) 추출물, 에탄올 30% 봄수확:가을수확(4:1) 추출물)을 얻었다.
도 5에서 보는 바와 같이 수확시기의 비율에 따른 엉겅퀴 잎 추출물에 대해 10, 30, 100 ug/ml의 농도로 처리한 결과 CJL1(봄 수확)과 CJL3(가을 수확)의 비율(1:1, 2:3, 3:2, 1:4, 4:1)로 추출하였을 때 농도 의존적으로 에스트로겐 수용체 전사활성이 나타났다. 특히, 봄 수확 엉겅퀴 잎과 가을 수확 엉겅퀴 잎을 3:2의 비율로 30% 에탄올농도에서 추출한 추출물은 100ug/ml에서 양성대조군인 estradiol (E2)보다 높은 효과를 나타내었다.
(5) 엉겅퀴 성분들의 에스트로겐 수용체 전사활성
도 6에서 보는 바와 같이 엉겅퀴 성분을 10, 30, 100 uM의 농도로 처리한 결과 apigenin, hispidulin, cirsimaritin, cirsimarin를 처리하였을 때 농도 의존적으로 에스트로겐 수용체 전사활성이 나타났다. 특히, 엉겅퀴 성분 hispidulin, cirsimaritin, cirsimarin는 100uM에서 양성대조군인 estradiol (E2)보다 높은 효과를 나타내었다.
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실험예
2> 엉겅퀴 추출물의 여성갱년기 기능성
전임상
시험
체중이 130 내지 150g인 5주령의 암컷 랫트(Rat)를 대상으로 실험실에서 1주일간 적응시킨 뒤, 일부는 난소절제술을 실시하여 폐경 모델을 유도하고, 나머지는 복부 절개 후 봉합시키는 Sham-operation을 실시하여 비폐경 모델을 유도하였다. 그리고 각 모델을 1주일간 고형 사료를 주어 상처를 회복시킨 뒤, 난소가 절제되지 않은 대조군과 난소가 절제된 대조군으로 분류하였다. 난소가 절제된 실험군은 10마리씩 5개의 그룹으로 나누어 각각의 그룹에 50, 100, 200, 500 mg/kg의 농도로 생리식염수에 용해시킨 엉겅퀴 추출물과 양성대조군인 Red clover 추출물(3.3 mg/kg)을 경구 투여하였다. 정상대조군과 음성대조군은 동일 양의 생리식염수를 경구 투여하였다. 참고로, 투여기간은 10주이고, 사육 조건은 온도 24±2℃, 습도 50 내지 55%, 물과 식이는 제한 없이 제공하였다.
실험동물을 12시간 이상 절식 시킨 후, CO2 가스로 호흡마취하고, 혈액은 복대동 맥에서 채혈하여 EDTA가 처리된 튜브와 별도의 처리가 없는 튜브에 넣어 4oC, 3,500 rpm, 10분동안 원심분리한 후 혈장과 혈청을 -80oC에 보관하여 분석에 이용하였다. 실험 동물의 간, 근육 및 지방조직은 적출하고 생리식염수로 세척 후 여분의 수분을 제거하고 무게를 측정한 뒤 액체질소로 급속 동결시켜 분석 시까지 -80oC에 보관하였다.
갱년기 모델 유도 흰 쥐에서 감소한 혈액중의 에스트로겐 양을 측정하여 갱년기 기능성 바이오 마커로 사용하였다. 측정하는 여성 호르몬의 종류는 estradiol 이며, 하기 효소면역분석법(ELISA)을 사용하였다. ELISA는 항체에 효소를 결합시켜 항원-항체 반응을 확인하는 방법으로, 그 방법이 간단하고 비용이 많이 들지 않으며 다량 분석이 가능하여 현재 가장 널리 쓰이고 있는 항원-항체 분석법의 하나이다. 흰쥐 혈청과 BSA를 PBS를 이용하여 100 μg/ml되게 만들고, 37도에서 1시간 반응하여 plate에 각 항원(ghrelin과 cholescystokinin)을 붙였다. Blocking solution를 well에 250 ml 넣고 37도에서 1시간 반응시킨 후, blocking solution을 버리고 PBS로 2번 세척하였다. 항원 용액을 버리고 PBS로 2번 세척 후, blocking solution으로 적절하게 희석된 항체 100 ml 를 아래와 같이 첨가한 후 37도에서 1시간 반응시켰다. Wash solution 200 ml 를 넣고 3번 세척 후, 기질 반응 용액을 각 well에 100μl씩 넣었다. 37도에서 30분간 반응시켜 색깔 변화를 유도한 다음, ELISA reader를 이용하여 450 nm에서 흡광도를 측정하였다.
다음으로, 갱년기 상태에서 여성호르몬의 감소와 상호관계가 잘 알려진 혈장 총 콜레스테롤 (TC), 중성지질 (TG), HDL-콜레스테롤 (HDL-C) 농도는 측정용 kit (Asan Pharmaceutical, Seoul, Korea)를 사용하여 측정하였다. 혈장 LDL-콜레스테롤 (LDL-C) 농도는 LDL-C = TC-HDL-C-(TG/5)의 Freidewald19의 방법에 따라 계산하였다. 기타 골다공증 관련 마커 농도는 측정용 kit (Asan Pharmaceutical, Seoul, Korea 및 Mercodia, Uppsala, Sweden)을 사용하여 측정하였다.
(1) 갱년기 동물모델에서 봄 수확 엉겅퀴 잎과 가을 수확 엉겅퀴 잎을 3:2의 비율로 30% 주정농도에서 추출한 추출물의 농도(50, 100 mg/kg)에 따른 체중 변화와 식이효율
| Normal | Control | Red Clover | ICF-1 50 mg/kg | ICF-1 100 mg/kg | |
| 0 | 150.6±2.1 | 158.3±1.4 | 159.5±2.1 | 156.6±1.9 | 157.6±2.6 |
| 10w | 286.3±7.3 | 382.8±7.7 | 368.6±7.4 | 358.7±8.8 | 361.0±7.9 |
| Gain | 135.7±5.9* | 224.5±7.6 | 209.1±6.8 | 202.1±7.5* | 203.4±6.7* |
| 섭취량 | 16.7±1.1* | 20.7±0.9 | 19.6±1.2 | 18.5±1.4 | 18.9±1.3 |
| 식이효율 | 8.1±0.8* | 10.9±1.0 | 10.6±0.9 | 10.9±0.8 | 10.8±0.8 |
(*p < 0.05, compared with the control)
표 1에서 보는 바와 같이 갱년기 동물모델에서 엉겅퀴를 50, 100 mg/kg의 농도로 10주간 경구 투여한 결과 엉겅퀴를 투여한 군의 체중이 control보다 감소하였다. 특히, 엉겅퀴 50, 100 mg/kg의 농도로 투여한 군이 양성대조군인 red clover보다 높은 효과를 나타내었다.
(2) 갱년기 동물모델에서 봄 수확 엉겅퀴 잎과 가을 수확 엉겅퀴 잎을 3:2의 비율로 30% 주정농도에서 추출한 추출물의 농도(50, 100 mg/kg)에 따른 비만 개선 효과
| 총 콜레스테롤 (mg/dL) | Triglyceride (mg/dL) | HDL-콜레스테롤 (mg/dL) | LDL-콜레스테롤 (mg/dL) | 간 무게 (g) | |
| Normal | 77.2±1.9* | 81.5±19.9* | 42.5±1.1* | 7.5±0.5 | 9.2±0.1* |
| Control | 106.6±1.0 | 108.6±9.8 | 49.9±0.8 | 9.3±0.2 | 11.1±0.8 |
| Red Clover | 100.6±1.3* | 125.6±15.8 | 46.3±0.6* | 7.1±0.1* | 10.2±0.9* |
| ICF-1 50 mg/kg | 98.4±1.7* | 77.6±10.2* | 45.5±0.6* | 8.9±0.2 | 9.8±1.1* |
| ICF-1 100 mg/kg | 102.7±1.7 | 90.7±11.9 | 45.8±0.4* | 8.4±0.2* | 9.5±0.7* |
(*p < 0.05, compared with the control)
표 2에서 보는 바와 같이 갱년기 동물모델에서 엉겅퀴를 50, 100 mg/kg의 농도로 10주간 경구 투여한 결과 엉겅퀴를 투여한 군의 총콜레스테롤, 중성지방(triglyceride), HDL-콜레스테롤과 LDL-콜레스테롤이 control보다 감소하였다. 특히, 엉겅퀴 50 mg/kg의 농도로 투여한 군이 양성대조군인 red clover와 유사하거나 보다 우수한 효과를 나타내었다.
(3) 갱년기 동물모델에서 봄 수확 엉겅퀴 잎과 가을 수확 엉겅퀴 잎을 3:2의 비율로 30% 주정농도에서 추출한 추출물의 농도(50, 100 mg/kg)에 따른 여성 호르몬 개선 효과
| 에스트라디올 (pg/mL) | 자궁 무게 | |
| Normal | 142.4±2.9* | 0.76±0.2* |
| Control | 19.1±9.1 | 0.10±0.02 |
| Red Clover | 194.9±6.9* | 0.09±0.01 |
| ICF-1 50 mg/kg | 19.6±3.5 | 0.08±0.01 |
| ICF-1 100 mg/kg | 35.5±6.9* | 0.08±0.02 |
(*p < 0.05, compared with the control)
표 3에서 보는 바와 같이 갱년기 동물모델에서 엉겅퀴를 50, 100 mg/kg의 농도로 10주간 경구 투여한 결과 엉겅퀴를 투여한 군의 estradiol이 control보다 농도 의존적으로 증가하였다.
(4) 갱년기 동물모델에서 봄 수확 엉겅퀴 잎과 가을 수확 엉겅퀴 잎을 3:2의 비율로 30% 주정농도에서 추출한 추출물의 농도(50, 100 mg/kg)에 따른 간기능 개선 효과
| AST (SGOT) (U/L) | ALT (SGOT) (U/L) | |
| Normal | 51.2±1.9* | 26.2±0.8* |
| Control | 66.0±1.6 | 33.7±0.7 |
| Red Clover | 62.0±1.5 | 30.3±0.6 |
| ICF-1 50 mg/kg | 64.6±1.4 | 32.2±0.9 |
| ICF-1 100 mg/kg | 62.3±1.0 | 31.1±0.7 |
(*p < 0.05, compared with the control)
표 4에서 보는 바와 같이 갱년기 동물모델에서 엉겅퀴를 50, 100 mg/kg의 농도로 10주간 경구 투여한 결과 엉겅퀴를 투여한 군의 AST와 ALT가 control보다 감소하였다.
(5) 갱년기 동물모델에서 봄 수확 엉겅퀴 잎과 가을 수확 엉겅퀴 잎을 3:2의 비율로 30% 주정농도에서 추출한 추출물의 농도(50, 100 mg/kg)에 따른 골밀도, Bone alkaline phosphatase, Calcitonin 및 Osteocalcin 개선 효과
| 골밀도 (BMD, g/cm2) | Bone alkaline phosphatase (ng/mL) | Calcitonin (pg/mL) | Osteocalcin (ng/mL) | |
| Normal | 0.125±0.005* | 0.1221±0.001 | 74.1±2.1 | 0.094±0.003 |
| Control | 0.118±0.007 | 0.1202±0.002 | 63.1±3.4 | 0.091±0.002 |
| Red Clover | 0.117±0.004 | 0.1225±0.001 | 62.3±3.8 | 0.092±0.001 |
| ICF-1 50 mg/kg | 0.120±0.003* | 0.1213±0.001 | 62.3±3.5 | 0.092±0.001 |
| ICF-1 100 mg/kg | 0.120±0.005* | 0.1214±0.001 | 60.9±2.8 | 0.092±0.002 |
(*p < 0.05, compared with the control)
표 5에서 보는 바와 같이 갱년기 동물모델에서 엉겅퀴를 50, 100 mg/kg의 농도로 10주간 경구 투여한 결과 엉겅퀴를 투여한 군의 골밀도가 control보다 증가하였다. 특히, 엉겅퀴 50, 100 mg/kg의 농도로 투여한 군이 양성대조군인 red clover 보다 높은 효과를 나타내었다. 하지만 골질 알카린 인산분해 효소(Bone alkaline phosphatase), 칼시토닌(Calcitonin) 및 오스테오칼신(Osteocalcin)의 개선 효과는 나타나지 않았다.
(6) 갱년기 동물모델에서 봄 수확 엉겅퀴 잎과 가을 수확 엉겅퀴 잎을 3:2의 비율로 30% 주정농도에서 추출한 추출물의 농도(50, 100 mg/kg)에 따른 우울증 개선 효과
| Time to stay dark side (sec) | # of transition between dark and light side |
|
| Normal | 428.2±98.4* | 6.6±1.6 |
| Control | 358.7±68.2 | 6.3±1.4 |
| Red Clover | 215.7±67.2* | 10.0±1.1* |
| ICF-1 50 mg/kg | 331.6±75.8 | 4.0±1.5 |
| ICF-1 100 mg/kg | 254.3±68.2* | 10.9±1.9* |
(*p < 0.05, compared with the control)
표 6에서 보는 바와 같이 갱년기 동물모델에서 엉겅퀴를 50, 100 mg/kg의 농도로 10주간 경구 투여한 결과 엉겅퀴를 투여한 군의 우울증 개선효과가 있었다. 특히, 엉겅퀴 100 mg/kg의 농도로 투여 한 군이 양성대조군인 red clover와 유사한 효과를 나타내었다.
Claims (6)
- 봄 수확 엉겅퀴와 가을 수확 엉겅퀴가 3:2의 비율로 혼합되어 사용되고,
상기 봄 수확 엉겅퀴와 가을 수확 엉겅퀴는,
각각 봄 수확 엉겅퀴의 잎 부분과 가을 수확 엉겅퀴의 잎 부분을 사용하고,
은, 상기 봄 수확 엉겅퀴와 가을 수확 엉겅퀴를 3:2의 비율로 혼합한 뒤, 20~40%의 에탄올을 이용하여 2-4회 추출하는 것을 특징으로 하는 갱년기 증상의 개선 기능이 있는 엉겅퀴 추출물.
- 삭제
- 제 2항에 있어서, 상기 추출은 30%의 에탄올을 이용하며,
환류냉각 추출방법을 3회 반복하고, 상기 엉겅퀴 추출물은, 에탄올을 이용하여 추출 후, 감압 농축기로 농축하여 제조하며, 상기 엉겅퀴 추출물은, 히스피둘린(hispidulin), 시르시마리틴(cirsimaritin) 및 시르시마린(cirsimarin)을 유효성분으로 하는 갱년기 증상의 개선 기능이 있는 엉겅퀴 추출물.
- 삭제
- 삭제
- 엉겅퀴를 준비하는 단계(S10);
상기 엉겅퀴를 추출하는 단계(S20);
상기 추출된 엉겅퀴를 농축하는 단계(S30);를 포함하고,
상기 엉겅퀴를 준비하는 단계(S10)는 봄 수확 엉겅퀴와 가을 수확 엉겅퀴를 3:2의 비율로 혼합하여 사용하며,
제조가 완료된 엉겅퀴 추출물은 히스피둘린(hispidulin), 시르시마리틴(cirsimaritin) 및 시르시마린(cirsimarin)을 유효성분으로 하고,
상기 엉겅퀴를 준비하는 단계(S10)는, 봄 수확 엉겅퀴의 잎 부분과 가을 수확 엉겅퀴의 잎 부분을 사용햐며,
상기 엉겅퀴를 추출하는 단계(S20)는, 20~40%의 에탄올을 이용하며,
상기 추출된 엉겅퀴를 농축하는 단계(S30)는, 감압 농축기를 이용하여 농축하는 것을 특징으로 하는 갱년기 증상의 개선 기능이 있는 엉겅퀴 추출물.
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|---|---|---|---|
| KR1020170022484A KR102078283B1 (ko) | 2017-02-20 | 2017-02-20 | 갱년기 증상의 개선 기능이 있는 엉겅퀴 추출물 및 이의 제조방법 |
Applications Claiming Priority (1)
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| KR1020170022484A KR102078283B1 (ko) | 2017-02-20 | 2017-02-20 | 갱년기 증상의 개선 기능이 있는 엉겅퀴 추출물 및 이의 제조방법 |
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| KR1020170022484A KR102078283B1 (ko) | 2017-02-20 | 2017-02-20 | 갱년기 증상의 개선 기능이 있는 엉겅퀴 추출물 및 이의 제조방법 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| KR20220063978A (ko) | 2020-11-11 | 2022-05-18 | 박노흥 | 파인애플을 이용한 엉겅퀴와 솔잎, 마늘, 양파, 머위, 모과, 석류, 백하수오, 민들레, 은행 발효물의 제조방법 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| WO2015022978A1 (ja) * | 2013-08-13 | 2015-02-19 | 株式会社アミノアップ化学 | 脂肪蓄積抑制剤、医薬品、脂肪肝の予防剤又は治療剤及び飲食品並びに脂肪蓄積抑制剤の製造方法 |
| KR101563577B1 (ko) * | 2014-07-03 | 2015-10-27 | 주식회사 파미니티 | 갱년기 여성의 에스트로겐 저하증의 개선 및 예방용 기능성 조성물 |
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| KR101765246B1 (ko) | 2015-10-14 | 2017-08-04 | 주식회사 파미니티 | 갱년기 관련 질환 또는 증상의 예방 및 개선용 조성물 |
| KR101653678B1 (ko) | 2016-01-12 | 2016-09-02 | 주식회사 프롬바이오 | 포도씨 추출물, 발레리안 추출물 및 홍화씨 추출물을 함유하는 여성 갱년기 증상 예방 및 개선용 식품 조성물 |
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