KR101870878B1

KR101870878B1 - Ｃ―ＭＥＴ 억제제로서의 이미다조〔１，２―ｂ〕〔１，２，４〕트리아진

Info

Publication number: KR101870878B1
Application number: KR1020127021395A
Authority: KR
Inventors: 진콩 주오; 춘홍 헤; 웬칭 야오
Original assignee: 인사이트 홀딩스 코포레이션
Priority date: 2010-02-03
Filing date: 2011-02-02
Publication date: 2018-06-25
Also published as: US20180370977A1; EP2531509A1; MX2012008898A; EA201290744A1; US10472367B2; KR20120125301A; US20130345224A1; BR112012019302B1; JP2013518887A; CN102812027A; BR112012019302A2; US9221824B2; AU2011269788A1; US10919901B2; WO2011162835A1; CN102812027B; CA2788398C; ES2608329T3; EA025304B1; CA2788398A1

Abstract

본 발명은, c-Met의 억제제이고 암을 포함하는 c-Met 관련 질환의 치료에 유용한, 이미다조[1,2-b][1,2,4]트리아진에 관한 것이다.

Description

Ｃ―ＭＥＴ 억제제로서의 이미다조〔１，２―ｂ〕〔１，２，４〕트리아진 {IMIDAZO[1,2-b][1,2,4]TRIAZINES AS C-MET INHIBITORS}

본 출원은 2010년 2월 3일자로 출원되고 발명의 명칭이 "c-Met 억제제로서의 이미다조[1,2-b][1,2,4]트리아진"인 미국 가출원 번호 제61/300,946호를 우선권으로 주장한다. 본 명세서 전체에 걸쳐 인용된 모든 특허, 특허출원 및 참조문헌의 내용은 이들의 전체가 본원에서 참고로 포함된다.

발명의 배경

본 발명은 c-Met의 억제제이고 암을 포함한 c-Met 관련 질환의 치료에 유용한 이미다조[1,2-b][1,2,4]트리아진에 관한 것이다.

단백질 키나제 (PK)는 그 중에서도 세포 성장, 생존 및 분화, 기관 형성 및 형태형성, 신혈관형성, 조직 복구 및 재생을 포함하는 다양한 중요 생물학적 프로세스를 조절하는 효소 그룹이다. 단백질 키나제는 단백질 (또는 기질)의 인산화를 촉매하고 이에 의해 다양한 생물학적 환경에서 기질의 세포 활성을 조절함으로써 이들의 생리학적 기능을 나타낸다. 정상 조직/기관에서의 기능 이외에, 다수의 단백질 키나제는 또한 암을 포함하는 인간 질환의 숙주에서 보다 특별한 역할을 담당한다. 단백질 키나제의 서브세트는, 이상 조절되는 경우, 종양 형성 및 성장을 유발할 수 있고, 추가로 종양 유지 및 진행에 관여할 수 있다[참조: Blume-Jensen P et al., Nature 2001, 411 (6835): 355-365]. 지금까지, 발암성 단백질 키나제는 암 시술 (intervention) 및 약물 개발을 위한 단백질 표적의 최대 및 가장 매력적인 그룹 중의 하나를 나타낸다.

c-Met (프로토-온코진)은 Met, Ron 및 Sea를 포함하는 이종이량체성 수용체 티로신 키나제의 독특한 서브패밀리의 구성원이다[참조: Birchmeier, C. et al., Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2003, 4(12):915-925; Christensen, J. G. et al., Cancer Lett. 2005, 225(1):1-26]. c-Met에 대한 유일한 고친화성 리간드는 산란 인자 (SF)로서 공지된 간세포 성장 인자 (HGF)이다. c-Met에 대한 HGF의 결합은 자가포스포릴화를 통해 수용체의 활성화를 유도하여 수용체 의존성 신호를 증가시킨다. c-Met 및 HGF는 둘 다 다양한 기관에서 광범위하게 발현되지만, 이들의 발현은 통상 각각 상피 및 간엽 기관의 세포로 한정된다. 정상 조직 및 암 등의 인간 악성종양에서 c-Met (또는 c-Met 신호전달 경로)의 생물학적 기능은 문헌[참조: Christensen, J.G. et al., Cancer Lett. 2005, 225(1):1-26; Corso, S. et al., Trends in Mol. Med. 2005, 11(6):284-292]에 잘 기록되어 있다.

HGF 및 c-Met는 각각 정상 포유동물 발생에 요구되고, HGF- 및 c-Met-null 마우스 둘 다에서 보고된 이상은 기관 형태형성 동안 배아 발현과 상피-간엽 변이 결함과 관련하여 일치한다[참조: Christensen, J.G. et al., Cancer Lett. 2005, 225(1):1-26]. 이들 발견과 일치하여, HGF/c-Met 경로의 신호의 변환 및 후속 생물학적 효과는 발달 동안 상피-간엽 상호작용 및 세포 이동, 침입, 세포 증식 및 생존, 혈관형성, 형태형성 및 3차원 관상 구조체의 조직화 (예: 신장 관상 세포, 분비선 형성)의 조절에 중요한 것으로 밝혀졌다. 소정의 세포/조직에서 c-Met 경로 활성화의 특이적 결과는 고도로 환경 의존적이다.

이상조절된 c-Met 경로는 종양 형성, 성장, 유지 및 진행에서 중요하고 종종 원인적 (유전자 변이의 경우) 역할을 담당한다[참조: Birchmeier, C. et al., Nat. Rev. Mol. Cell. Biol. 2003, 4(12):915-925; Boccaccio, C. et al., Nat. Rev. Cancer 2006, 6(8):637-645; Christensen, J.G. et al., Cancer Lett. 2005, 225(1):1-26]. HGF 및/또는 c-Met는 대부분의 인간 암의 중요한 부분에서 과발현되고, 종종 보다 공격적 질환, 질환 진행, 종양 전이 및 환자 생존 단축 등의 불량한 임상적 결과와 관련된다. 추가로, 고도의 HGF/c-Met 단백질을 갖는 환자는 화학치료 및 방사선치료에 더욱 내성이 있다. 이상 HGF/c-Met 발현과 함께, c-Met 수용체는 또한 유전자 돌연변이 (생식세포 및 체세포 둘 다) 및 유전자 증폭을 통해 암 환자에서 활성화될 수 있다. 유전자 증폭 및 돌연변이는 환자에서 보고된 가장 통상적인 유전자 변이이지만, 수용체는 또한 이상 수용체 프로세싱 및 불완전 네가티브 조절 메카니즘 뿐만 아니라 결실, 절단 및 유전자 재배열에 의해 활성화될 수 있다.

c-Met가 관련되는 다양한 암은, 이로써 한정되는 것은 아니지만, 암종 (예: 방광, 유방, 자궁경부, 간내담관암, 결장직장, 식도, 위장, 두경부, 신장, 간, 폐, 비인두, 난소, 췌장, 전립선, 갑상선); 골격근 육종 (예: 골육종, 활막육종, 횡문근육종); 연조직 육종 (예: MFH/섬유육종, 평활근육종, 카포시 육종); 조혈 악성종양 (예: 다발성 골수종, 림파종, 성인 T 세포 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병); 및 기타 신생물 (예: 악성신경교종, 성상세포종, 흑색종, 중피종 또는 빌름 종양 (Wilm's tumor))을 포함한다[참조: www.vai.org/met/; Christensen, J.G. et al., Cancer Lett. 2005, 225(1):1-26].

활성화된 c-Met 경로가 종양 형성 및 진행에 관여하고 효과적인 암 간섭을 위한 우수한 표적일 수 있다는 개념은 다수의 전임상 연구에 의해 추가로 굳어졌다[참조: Birchmeier, C. et al., Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2003, 4(12):915-925; Christensen, J.G. et al., Cancer Lett. 2005, 225(1):1-26; Corso, S. et al., Trends in Mol. Med. 2005, 11(6):284-292]. 예를 들면, 연구들은 tpr-met 융합 유전자, c-met의 과발현 및 활성화된 c-met 돌연변이는 모두 다양한 모델 세포주의 발암성 형질전환을 유발하고 마우스에서 종양 형성 및 전이를 유발하는 것을 밝혀냈다. 보다 중요하게는, 유의미한 항-종양 (종종 종양 퇴화) 및 항-전이 활성은 HGF/c-Met 신호를 특이적으로 손상시키고/시키거나 차단하는 제제에 의해 시험관내 및 생체내에서 입증되었다. 이들 제제는 항-HGF 및 항-c-Met 항체, HGF 펩티드 길항제, 유인 c-Met 수용체, c-Met 펩티드 길항제, 우성 네가티브 c-Met 돌연변이, c-Met 특이적 안티센스 올리고뉴클레오티드 및 리보자임, 및 선택적 소분자 c-Met 키나제 억제제를 포함한다[참조: Christensen, J.G. et al., Cancer Lett. 2005, 225(1):1-26].

암에서의 확립된 역할과 함께, 이상 HGF/c-Met 신호는 또한 아테롬성 동맥경화증, 폐 섬유증, 신장 섬유증 및 신생, 간 질환, 알러지 질환, 염증 및 자가면역 질환, 뇌혈관 질환, 심혈관 질환, 기관 이식과 관련된 증상에 연루되어 있다[참조: Ma, H. et al., Atherosclerosis. 2002, 164(1):79-87; Crestani, B. et al., Lab. Invest. 2002, 82(8):1015-1022; Sequra-Flores, A.A. et al., Rev. Gastroenterol. Mex. 2004, 69(4)243-250; Morishita, R. et al., Curr. Gene Ther. 2004, 4(2)199-206; Morishita, R. et al., Endocr. J. 2002, 49(3)273-284; Liu, Y., Curr. Opin. Nephrol. Hypertens. 2002, 11(1):23-30; Matsumoto, K. et al., Kidney Int. 2001, 59(6):2023-2038; Balkovetz, D.F. et al., Int. Rev. Cytol. 1999, 186:225-250; Miyazawa, T. et al., J. Cereb. Blood Flow Metab. 1998, 18(4)345-348; Koch, A.E. et al., Arthritis Rheum. 1996, 39(9):1566-1575; Futamatsu, H. et al., Circ. Res. 2005, 96(8)823-830; Eguchi, S. et al., Clin. Transplant. 1999, 13(6)536-544].

c-Met 등의 키나제를 억제하는 기존 제제의 신규 또는 개선된 형태는 암 및 기타 질환을 치료하기 위한 보다 효과적인 약제를 개발하기 위해 지속적으로 요구되고 있다.

본원에 기술된 화합물 및 염은 이들 및 기타 요구에 의한 것이다.

본 발명은 특히 c-Met 억제제인 하기 화합물:

2-플루오로-N-[(2R)-2-하이드록시프로필]-4-[7-(퀴놀린-6-일메틸)이미다조[1,2-b][1,2,4]트리아진-2-일]벤즈아미드 (화학식 I);

2-클로로-N-메틸-4-(7-(퀴놀린-6-일메틸)이미다조[1,2-b][1,2,4]트리아진-2-일)벤즈아미드 (화학식 II);

2-클로로-N-[(1S)-1-(5-메틸-1,2,4-옥사디아졸-3-일)에틸]-4-[7-(퀴놀린-6-일메틸)이미다조[1,2-b][1,2,4]트리아진-2-일]벤즈아미드 (화학식 III);

N-메틸-5-[7-(퀴놀린-6-일메틸)이미다조[1,2-b][1,2,4]트리아진-2-일]피리딘-2-카복스아미드 (화학식 IV); 및

N,2-디메틸-4-[7-(퀴놀린-6-일메틸)이미다조[1,2-b][1,2,4]트리아진-2-일]벤즈아미드 (화학식 V)를 제공한다.

본 발명은 추가로 상술한 화합물 중의 어느 하나의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다.

본 발명은 추가로 c-Met 키나제를 본 발명의 화합물 또는 염과 접촉시키는 단계를 포함하는, c-Met 키나제의 활성을 억제하는 방법을 제공한다.

본 발명은 세포를 본 발명의 화합물 또는 염과 접촉시키는 단계를 포함하는, 세포에서 HGF/c-Met 키나제 신호전달 경로를 억제하는 방법을 제공한다.

본 발명은 추가로 세포를 본 발명의 화합물 또는 염과 접촉시키는 단계를 포함하는, 세포의 증식 활성을 억제하는 방법을 제공한다.

본 발명은 추가로 환자에게 치료학적 유효량의 본 발명의 화합물 또는 염을 투여하는 단계를 포함하는, 환자에서 종양 성장을 억제하는 방법을 제공한다.

본 발명은 추가로 환자에게 치료학적 유효량의 본 발명의 화합물 또는 염을 투여하는 단계를 포함하는, 환자에서 종양 전이를 억제하는 방법을 제공한다.

본 발명은 추가로 환자에게 치료학적 유효량의 본 발명의 화합물 또는 염을 투여하는 단계를 포함하는, 환자에서 HGF/c-MET 신호전달 경로의 이상조절과 관련되는 질환을 치료하는 방법을 제공한다.

본 발명은 추가로 환자에게 치료학적 유효량의 본 발명의 화합물 또는 염을 투여하는 단계를 포함하는, 환자에서 암을 치료하는 방법을 제공한다.

본 발명은 치료요법에 사용하기 위한 본 발명의 화합물을 제공한다.

본 발명은 치료요법에 사용하기 위한 의약을 제조하기 위한 본 발명의 화합물의 용도를 제공한다. 한 가지 양태에서, 본 발명은 암의 치료에 사용하기 위한 의약을 제조하기 위한 화학식 I, II, III, IV, 또는 V의 화합물 중의 어느 하나의 용도를 제공한다.

본 발명은 특히 c-MET 억제제인 하기 화합물:

N,2-디메틸-4-[7-(퀴놀린-6-일메틸)이미다조[1,2-b][1,2,4]트리아진-2-일]벤즈아미드 (화학식 V)을 제공한다.

(화학식 I)

(화학식 II)

(화학식 III)

(화학식 IV)

(화학식 V)

본원과 기타 곳에서, 화합물의 명칭과 화합물의 구조 사이에 불일치가 존재하는 경우, 화학 구조가 조정할 것이다.

본 발명은 추가로 상술한 화합물의 어느 하나의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다.

본원에 기재된 화합물은 비대칭 (예: 하나 이상의 입체중심을 갖는)일 수 있다. 달리 명시하지 않는 한, 모든 입체이성체, 예를 들면, 에난티오머 및 부분입체이성체가 의도된다. 비대칭적으로 치환된 탄소원자를 함유하는 본 발명의 화합물은 광학 활성 또는 라세미체 형태로 분리할 수 있다.

본 발명의 화합물은 호변이성질체 형태를 포함한다. 호변이성질체 형태는 양자의 동시 이동과 함께 단일 결합을 인접한 이중 결합으로 교환함으로써 발생한다. 호변이성질체 형태는 동일한 실험 화학식 및 총 전하를 갖는 이성체형 양성자화 상태인 양성자성 호변이성질체를 포함한다. 예시적 양성자성 호변이성질체는 케탄 - 엔올 쌍, 아미드 - 이미드산 쌍, 락탐 - 락팀 쌍, 아미드 - 이미드산 쌍, 엔아민 - 이민 쌍, 및 양성자가 헤테로사이클릭 시스템의 2개 이상의 위치를 점유할 수 있는 환상 형태, 예를 들면, 1H- 및 3H-이미다졸, 1H-, 2H- 및 4H-1,2,4-트리아졸, 1H- 및 2H-이소인돌, 및 1H- 및 2H-피라졸을 포함한다. 호변이성질체 형태는 평형으로 존재할 수 있거나, 적절한 치환에 의해 하나의 형태로 입체적으로 고정될 수 있다.

본 발명의 화합물은 또한 중간체 또는 최종 화합물에서 발생하는 원자의 모든 동위원소를 포함한다. 동위원소는 동일한 원자수를 갖지만 상이한 질량수를 갖는 원자를 포함한다. 예를 들면, 수소의 동위원소는 트리튬 및 듀테륨을 포함한다.

일부 양태에서, 본 발명의 화합물 또는 이들의 염은 실질적으로 분리된다. "실질적으로 분리된"이란, 상기 화합물 또는 염이, 형성되거나 탐지된 환경으로부터 적어도 부분적으로 또는 실질적으로 분리되어 있음을 의미한다. 부분 분리는, 예를 들면, 본 발명의 화합물이 풍부한 조성물을 포함할 수 있다. 실질적 분리는 본 발명의 화합물 또는 이의 염을 적어도 약 50중량%, 적어도 약 60중량%, 적어도 약 70중량%, 적어도 약 80중량%, 적어도 약 90중량%, 적어도 약 95중량%, 적어도 약 97중량%, 또는 적어도 약 99중량% 함유하는 조성물을 포함할 수 있다.

본 발명은 또한 본원에 기재된 화합물의 약제학적으로 허용되는 염을 포함한다. 본원에 사용된 바와 같이, "약제학적으로 허용되는 염"은 본 발명의 화합물이 종래의 산 또는 염기 잔기를 이의 염 형태로 전환시킴으로써 변형되는 개시된 화합물의 유도체를 지칭한다. 약제학적으로 허용되는 염의 예에는, 이로써 한정되는 것은 아니지만, 아민 등의 염기성 잔기의 무기 또는 유기 산 염; 카복실산 등의 산성 잔기의 알칼리 또는 유기 염 등이 포함된다. 본 발명의 약제학적으로 허용되는 염은, 예를 들면, 무독성 무기 또는 유기 산으로부터 형성된 모 화합물의 통상의 무독성 염을 포함한다. 본 발명의 약제학적으로 허용되는 염은 통상의 화학적 방법에 의해 염기성 또는 산성 잔기를 함유하는 모 화합물로부터 합성할 수 있다. 일반적으로, 이러한 염은 이들 화합물의 유리 산 또는 염기 형태를 화학양론적 양의 적절한 염기 또는 산과 물 또는 유기 용매 속에서 또는 이들 둘의 혼합물 속에서 반응시켜 제조할 수 있고; 일반적으로, 에테르, 에틸 아세테이트, 에탄올, 이소프로판올 또는 아세토니트릴과 같은 비수성 매질이 바람직하다. 적합한 염의 목록은 문헌[참조: Remington's Pharmaceutical Sciences, 17^th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985, p. 1418 and Journal of Pharmaceutical Science, 66, 2 (1977), 각각은 이의 전체가 참조로 본원에 포함된다]에서 발견된다.

문구 "약제학적으로 허용되는"은, 타당한 의학적 판단의 범위 내에서, 합리적인 이익/위험 비 (benefit/risk ratio)를 갖고, 과도한 독성, 자극, 알러지 반응 또는 기타 문제 또는 합병증 없이 인간 및 동물의 조직에 접촉하여 사용하기에 적합한 화합물, 물질, 조성물 및/또는 투여 형태를 의미하는 것으로 본원에서 사용된다.

사용 방법

본 발명의 화합물은 c-Met의 억제제로서 작용할 수 있다. 본 발명의 화합물을 사용한 c-Met를 발현하는 세포의 치료 (시험관내 또는 생체내)는 리간드/키나제 신호전달 경로를 억제시킬 수 있고 세포 증식 및 증가된 세포 운동성 등의 신호전달 경로와 관련된 다운스트림 이벤트를 억제시킬 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 화합물은, 이로써 한정되는 것은 아니지만, c-Met 키나제 활성화 (예: c-Met 포스포릴화) 및 신호 (Gab1, Grb2, Shc 및 c-Cb1 등의 세포 기질의 활성화 및 보충, PI-3 키나제, PLC-γ, STATs, ERK1/2 및 FAK를 포함하는 다수의 신호 유도인자의 활성화), 세포 증식 및 생존, 세포 이동성, 이동 및 침입, 전이, 혈관형성 등을 포함하는 c-Met 경로 활성화를 발생시키는 생화학적 및 생물학적 과정을 차단 및/또는 손상시킬 수 있다. 따라서, 본 발명은 추가로 세포를 본 발명의 화합물과 접촉시킴으로써 세포에서 HGF/c-Met 키나제 신호전달 경로 등의 리간드/키나제 신호전달 경로를 억제하는 방법을 제공한다. 본 발명은 추가로 세포를 본 발명의 화합물과 접촉시킴으로써 세포의 증식 활성을 억제시키거나 세포 이동성을 억제하는 방법을 제공한다.

본 발명은 추가로 치료를 필요로 하는 개체에게 치료학적 유효량 또는 투여량의 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적 조성물을 투여함으로써 개체 (예: 환자)에서 c-Met의 이상 활성 및/또는 과발현을 포함하는 이상조절된 c-Met 키나제 신호전달 경로와 관련된 질환을 치료하는 방법을 제공한다. 일부 양태에서, 이상조절된 키나제는 환자의 발병 조직에서 과발현된다. 일부 양태에서, 이상조절된 키나제는 환자의 발병 조직에서 비정상적으로 활성적이다. c-Met 및 HGF/c-Met 신호전달 경로의 이상조절은, 이로써 한정되는 것은 아니지만, 이상 c-Met 수용체 프로세싱 및 불완전 네가티브 조절 메카니즘 뿐만 아니라, HGF-의존성 오토크린 및 파라크린 활성화, c-met 유전자 과발현 및 증폭, 점 돌연변이, 결실, 절단, 재배열을 포함하는, 다양한 메카니즘을 통한 효소의 활성화를 포함하는 의미이다.

일부 양태에서, 본 발명의 화합물은 아테롬성 동맥경화증, 폐 섬유증, 신장 섬유증 및 재생, 간 질환, 알러지 질환, 염증 질환, 자가면역 질환, 뇌혈관 질환, 심혈관 질환, 또는 기관 이식과 관련된 증상의 치료에 유용하다. 추가의 양태에서, 본 발명의 화합물은 환자에서 종양 성장 또는 종양의 전이를 억제하는 방법에 유용할 수 있다.

본원의 방법에 의해 치료가능한 암의 예로 방광암, 유방암, 자궁경부암, 담관암종암, 결장직장암, 식도암, 위암, 두경부암, 신장암, 간암, 폐암, 비인두암, 난소암, 췌장암, 전립선암, 갑상선암, 골육종, 활막육종, 횡문근육종, MFH/섬유육종, 평활근육종, 카포시 육종, 다발성 골수종, 림파종, 성인 T 세포 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 악성신경교종, 성상세포종, 흑색종, 중피종 또는 빌름 종양 등이 포함된다.

따라서, 한 가지 양태에서, 2-플루오로-N-[(2R)-2-하이드록시프로필]-4-[7-(퀴놀린-6-일메틸)이미다조[1,2-b][1,2,4]트리아진-2-일]벤즈아미드, 또는 약제학적으로 허용되는 이의 염을 암이 치료되도록 피험체에게 투여하는 단계를 포함하는, 피험체에서 암을 치료하는 방법이 본원에서 제공된다.

또 다른 양태에서, 2-클로로-N-메틸-4-(7-(퀴놀린-6-일메틸)이미다조[1,2-b][1,2,4]트리아진-2-일)벤즈아미드, 또는 약제학적으로 허용되는 이의 염을 암이 치료되도록 피검에게 투여하는 단계를 포함하는, 피험체에서 암을 치료하는 방법이 본원에서 제공된다.

또 다른 양태에서, 2-클로로-N-[(1S)-1-(5-메틸-1,2,4-옥사디아졸-3-일)에틸]-4-[7-(퀴놀린-6-일메틸)이미다조[1,2-b][1,2,4]트리아진-2-일]벤즈아미드, 또는 약제학적으로 허용되는 이의 염을 암이 치료되도록 피험체에게 투여하는 단계를 포함하는, 피험체에서 암을 치료하는 방법이 본원에서 제공된다.

또 다른 양태에서, N-메틸-5-[7-(퀴놀린-6-일메틸)이미다조[1,2-b][1,2,4]트리아진-2-일]피리딘-2-카복스아미드, 또는 약제학적으로 허용되는 이의 염을 암이 치료되도록 피험체에게 투여하는 단계를 포함하는, 피험체에서 암을 치료하는 방법이 본원에서 제공된다.

또 다른 양태에서, N,2-디메틸-4-[7-(퀴놀린-6-일메틸)이미다조[1,2-b][1,2,4]트리아진-2-일]벤즈아미드, 또는 약제학적으로 허용되는 이의 염을 암이 치료되도록 피험체에게 투여하는 단계를 포함하는, 피험체에서 암을 치료하는 방법이 본원에서 제공된다.

따라서, 한 가지 양태에서, 2-플루오로-N-[(2R)-2-하이드록시프로필]-4-[7-(퀴놀린-6-일메틸)이미다조[1,2-b][1,2,4]트리아진-2-일]벤즈아미드, 또는 약제학적으로 허용되는 이의 염을 피험체에게 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 피험체에서 종양 성장을 억제하는 방법이 본원에서 제공된다.

또 다른 양태에서, 2-클로로-N-메틸-4-(7-(퀴놀린-6-일메틸)이미다조[1,2-b][1,2,4]트리아진-2-일)벤즈아미드, 또는 약제학적으로 허용되는 이의 염을 피험체에게 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 피험체에서 종양 성장을 억제하는 방법이 본원에서 제공된다.

또 다른 양태에서, 2-클로로-N-[(1S)-1-(5-메틸-1,2,4-옥사디아졸-3-일)에틸]-4-[7-(퀴놀린-6-일메틸)이미다조[1,2-b][1,2,4]트리아진-2-일]벤즈아미드, 또는 약제학적으로 허용되는 이의 염을 피험체에게 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 피험체에서 종양 성장을 억제하는 방법이 본원에서 제공된다.

또 다른 양태에서, N-메틸-5-[7-(퀴놀린-6-일메틸)이미다조[1,2-b][1,2,4]트리아진-2-일]피리딘-2-카복스아미드, 또는 약제학적으로 허용되는 이의 염을 암이 치료되도록 피험체에게 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 피험체에서 종양 성장을 억제하는 방법이 본원에서 제공된다.

또 다른 양태에서, N,2-디메틸-4-[7-(퀴놀린-6-일메틸)이미다조[1,2-b][1,2,4]트리아진-2-일]벤즈아미드, 또는 약제학적으로 허용되는 이의 염을 피험체에게 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 피험체에서 종양 성장을 억제하는 방법이 본원에서 제공된다.

본원에 사용된 바와 같이, 용어 "세포"는 시험관내, 생체외 또는 생체내에 존재하는 세포를 지칭하는 의미이다. 일부 양태에서, 생체외 세포는 포유동물 등의 생물체로부터 추출된 조직 시료의 일부일 수 있다. 일부 양태에서, 시험관내 세포는 세포 배양물 중의 세포일 수 있다. 일부 양태에서, 생체내 세포는 포유동물 등의 생물체에서 살아 있는 세포이다.

본원에 사용된 바와 같이, 용어 "접촉"은 시험관내 시스템 또는 생체내 시스템에서 명시된 잔기와 함께 모이도록함을 지칭한다. 예를 들면, 본 발명의 화합물을 단백질 키나제와 "접촉시키는"은, 예를 들면, 본 발명의 화합물을 단백질 키나제의 세포 또는 정제된 제제를 함유하는 샘플 내로 도입하는 것 뿐만 아니라 인간 등의 개체 또는 환자에게 본 발명의 화합물을 투여하는 것을 포함한다.

본원에 사용된 바와 같이, 서로 교대로 사용되는 용어 "개체" 또는 "환자"는 포유동물, 바람직하게는 마우스, 랫트, 기타 설치류, 래빗, 개, 고양이, 돼지, 소, 양, 말 또는 영장류, 및 가장 바람직하게는 인간을 포함하는 임의의 동물을 지칭한다.

본원에 사용된 바와 같이, 문구 "치료학적 유효량"은 연구자, 수의사, 의사 또는 기타 임상의에 의해 조직, 시스템, 동물, 개체 또는 인간에서 원하는 생물학적 또는 의학적 반응을 제거하는 활성 화합물 또는 약제학적 제제의 양을 지칭하고, 이는 다음 중의 하나 이상을 포함한다: (1) 질환의 예방, 예를 들면, 질환, 증상 또는 장애에 걸리기 쉽지만 아직 질환의 병리 또는 증상을 경험하지 않거나 나타내지 않는 개체에서 질환, 증상 또는 장애를 예방하는 것; (2) 질환의 억제, 예를 들면, 질환, 증상 또는 장애의 병리 또는 증상을 경험하거나 나타내는 개체에서 질환, 증상 또는 장애를 억제하는 것; 및 (3) 중증 질환의 경감 등과 같이 질환, 증상 또는 장애의 병리 또는 증상을 경험하거나 나타내는 개체에서 질환, 증상 또는 장애를 완화시키는 것 (즉, 병리 및/또는 증상을 역전시키는 것).

용어 "치료된", "치료하는" 또는 "치료"는 c-Met 키나제의 활성, HGF/c-Met 키나제 신호전달 경로, 및/또는 세포의 증식 활성과 관련된 하나 이상의 징후의 경감 또는 완화를 포함한다. 질환 또는 증상과 관련하여 사용된 바와 같은 용어 "치료된", "치료하는" 또는 "치료"는 이러한 질환 또는 증상을 간섭하여 질환 또는 증상의 발달을 예방 또는 지연시키거나, 질환 또는 증상의 진행을 예방 또는 지연시키거나, 질환 또는 증상의 진행을 중지시키거나, 질환 또는 증상을 제거하는 것을 의미한다.

용어 "용도"는 각각 본 발명의 하기 양태 중의 하나 이상을 포함한다: 장애 치료에서의 사용; 장애 치료에 사용하기 위한 약제학적 조성물을 제조, 예를 들면, 의약을 제조하기 위한 사용; 이들 장애의 치료에서 본 발명의 화합물의 사용방법; 및 달리 언급하지 않는 한, 적절하게 및 편의적으로, 이들 질환의 치료에 사용하기 위한 본 발명의 화합물. 특히, 본 발명의 화합물의 사용에 바람직한 치료되는 질환은 c-Met 키나제의 활성, HGF/c-Met 키나제 신호전달 경로, 및/또는 세포의 증식 활성 및 암과 관련된 질환으로부터 선택된다.

병용 치료

하나 이상의 추가의 약제학적 제제 또는 치료 방법, 예를 들면, 화학치료, 항암제, 세포독성제, 또는 항암 치료제 (예: 방사선, 호르몬 등)는 본원에 기재된 질환, 장애 또는 증상을 치료하기 위한 본 발명의 화합물 및 염과 병용하여 사용될 수 있다. 제제 또는 치료제는 본 발명의 화합물 또는 염과 함께 투여될 수 있거나 (예: 단일 용량 형태로 배합하여), 상기 제제 또는 치료제는 별개의 투여 경로에 의해 동시에 또는 순차로 투여될 수 있다.

적합한 항암제는, 예를 들면, 국제 출원 공개 WO 2005/004808, WO 2005/004607, WO 2005/005378, WO 2004/076412, WO 2005/121125, WO 2005/039586, WO 2005/028475, WO 2005/040345, WO 2005/039586, WO 2003/097641, WO 2003/087026, WO 2005/040154, WO 2005/030140, WO 2006/014325, WO 2005/ 070891, WO 2005/073224, WO 2005/113494, 및 미국 특허 출원 공개 번호 2005/0085473, 2006/0046991 및 2005/0075340에 기재된 트라스투주맵 (Herceptin), 이마티닙 (Gleevec), 게피티닙 (Iressa), 에르로티닙 하이드로클로라이드 (Tarceva), 세툭시냅 (Erbitux), 베바시주맵 (Avastin), 소라페닙 (Nexavar), 수니티닙 (Sutent) 및 RTK 억제제를 포함한다.

적합한 화학치료제 또는 기타 항암제는 추가로, 예를 들면, 알킬화제 (이로 한정되는 것은 아니지만, 질소 머스타드, 에틸렌이민 유도체, 알킬 설포네이트, 니트로소우레아 및 트리아젠을 포함함), 예를 들면, 우라실 머스타드, 클로르메틴, 사이클로포스파미드 (Cytoxan^TM), 이소스파미드, 멜팔란, 클로람부실, 피포브로만, 트리에틸렌-멜라민, 트리에틸렌티오포스포르아민, 부설판, 카르무스틴, 로무스틴, 스트렙토조신, 다카르바진, 및 테모졸로미드를 포함한다.

적합한 화학치료제 또는 기타 항암제는 추가로, 예를 들면, 대사길항물질 (이로써 한정되는 것은 아니지만, 엽산 길항제, 피리미딘 동족체, 푸린 동족체 및 아데노신 데아미나제 억제제), 예를 들면, 메토트렉세이트, 5-플루오로우라실, 플록스우리딘, 사이타라빈, 6-머캅토푸린, 6-티오구아닌, 플루다라빈 포스페이트, 펜토스타틴 및 겜시타빈을 포함한다.

적합한 화학치료제 또는 기타 항암제는 추가로, 예를 들면, 특정한 천연 생성물 및 이들의 유도체 (예: 빈카 알칼로이드, 항종양 항생제, 효소, 림포카인 및 에피포도필로톡신), 예를 들면, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신, 블레오마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 독소루비신, 에피루비신, 이다루비신, 아라-C, 파클리탁셀 (Taxol^TM), 미트라마이신, 데옥시코-포르마이신, 미토마이신-C, L-아스파라기나제, 인터페론 (특히 IFN-α), 에토포사이드 및 테니포사이드를 포함한다.

다른 세포독성제는 나벨벤, CPT-11, 아나스트라졸, 레트라졸, 카페시타빈, 렐록사핀, 사이클로포스파미드, 이포스아미드, 및 드롤록사핀을 포함한다.

세포독성제, 예를 들면, 에피도필로톡신; 항종양성 효소; 토포이소머라제 억제제; 프로카바진; 미토크산트론; 백금 배위 착물, 예를 드면, 시스-플라틴 및 카보플라틴; 생물학적 반응 변형제; 성장 억제제; 항호르몬 치료제; 류코보린; 테가푸르; 및 조혈 성장 인자가 또한 적합하다.

다른 항암제(들)은 항체 치료제, 예를 들면, 트라스투주맵 (Herceptin), 동시자극 분자에 대한 항체, 예를 들면, CTLA-4, 4-1BB 및 PD-1, 또는 사이토킨에 대한 항체 (IL-10, TGF-β, 등)를 포함한다, 추가로, 항체 치료제는 티로신 키나제 및/또는 이들의 리간드에 대한 항체, 예를 들면, 항-HGF 항체 및/또는 항-c-Met 항체를 포함한다. 용어 "항체"는 항원 결합 단편 뿐만 아니라 전체 항체 (예: 모노클로날, 폴리클로날, 키메라, 인간화, 인간 등)을 포함한다.

기타 항암제는 또한 CCR2 및 CCR4를 포함하는, 케모킨 수용체에 대한 길항제 등의 면역 세포 이동을 차단하는 것들을 포함한다.

다른 항암제는 또한 애주번트 또는 적응 T 세포 전이제 등의 면역계를 증가시키는 것들을 포함한다.

기타 항암제는 수지상 세포, 합성 펩티드, DNA 백신 및 재조합체 바이러스 등의 항암 백신을 포함한다.

상기 제제 대부분의 안전한 및 효과적인 투여 방법은 당해 기술분야의 통상의 지식을 가진 자에게 공지되어 있다. 또한, 이들의 투여는 표준 문헌에 기재되어 있다. 예를 들면, 화학치료제 다수의 투여는 문헌[참조: the "Physicians' Desk Reference" (PDR, e.g., 1996 edition, Medical Economics Company, Montvale, NJ), 이의 개시는 이의 전체가 기재된 것과 같이 본원에서 참조로서 도입된다.]에 기재되어 있다.

약제학적 제형 및 투여 형태

약제로서 사용되는 경우, 본 발명의 화합물 또는 염은 본 발명의 화합물 (또는 이의 염)과 약제학적으로 허용되는 담체의 배합물에 상응하는 약제학적 조성물 형태로 투여할 수 있다. 이들 조성물은 약제학적 분야에 공지된 방식으로 제조할 수 있고, 국소 또는 전신 치료가 요구되는지에 따라 및 치료되는 부분에 따라 다양한 경로에 의해 투여할 수 있다. 투여는 국소 투여 (예: 눈 및 비내, 질내 및 직장 전달을 비롯한 점막 포함), 폐 (예: 네뷸라이저 등을 사용하여 분말 또는 에어로졸을 흡입 또는 통기; 기관지내, 비내, 상피 및 경피), 안내, 경구 또는 비경구 투여일 수 있다. 안과 전달 방법은 국소 투여 (눈 점액), 결막하, 결막 낭에 외과적으로 배치된 볼룬 카테터 또는 안용 삽입체에 의한 안주위 또는 유리체내 주입 및 도입을 포함할 수 있다. 비경구 투여는 정맥내, 동맥내, 피하, 복강내, 근육내 또는 주사 또는 주입; 또는 뇌내, 예를 들면, 척수강내 또는 뇌실내 투여를 포함할 수 있다. 비경구 투여는 단일 볼러스 (bolus) 투여의 형태이거나, 예를 들면, 연속 관류 펌프에 의한 투여일 수 있다. 국소 투여용 약학 조성물 및 제제는 경피 패치, 연고, 로션, 크림, 겔, 점적액, 좌약, 분무제, 액체 및 분말을 포함할 수 있다. 통상의 약학적 담체, 수성, 분말 또는 오일 기재, 증점제 등이 필요하거나 요구될 수 있다.

또한, 본 발명은 활성 성분으로서의 하나 이상의 본 발명의 화합물을 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체와 함께 함유하는 약제학적 조성물을 포함한다. 본 발명의 조성물을 제조함에 있어서, 상기 활성 성분을 일반적으로 부형제와 혼합하거나, 부형제로 희석하거나, 예를 들면, 캡슐, 향낭, 종이 또는 다른 용기 형태의 담체 내부에 봉입한다. 상기 부형제가 희석제로서 작용할 경우에, 부형제는 고형, 반고형, 또는 액상 물질일 수 있으며, 활성 성분에 대한 비히클 (vehicle), 담체 또는 매질로서 작용한다. 따라서, 상기 조성물은 정제, 환약, 분말, 로젠지제, 향낭, 카세제 (cachet), 엘릭시르 (elixir), 현탁액, 에멀젼, 용액, 시럽, 에어로졸 (고체로서 또는 액상 매질 중), 예를 들면, 10 중량％ 이하의 활성 화합물을 함유하는 연고, 연질 및 경질 젤라틴 캡슐, 좌약, 멸균 주사용액, 및 멸균 포장 분말의 형태로 존재할 수 있다.

제형을 제조함에 있어서, 활성 화합물을 분쇄하여, 다른 성분과 혼합하기 전에 적절한 입자 크기를 제공할 수 있다. 활성 화합물이 실질적으로 불용성인 경우, 200 메쉬 미만의 입자 크기로 분쇄할 수 있다. 활성 화합물이 실질적으로 수용성인 경우, 분쇄를 통해서 입자 크기를 조정하여 제형에 실질적으로 균일한 분포, 예를 들면, 약 40 메쉬를 제공할 수 있다.

상기 부형제의 몇가지 예로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 소르비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산칼슘, 알기네이트, 트라가칸트, 젤라틴, 칼슘 실리케이트, 미소결정질 셀룰로즈, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로즈, 물, 시럽 및 메틸 셀룰로오스를 들 수 있다. 제형은 다음과 같은 성분을 추가로 포함할 수 있다: 윤활제, 예를 들면, 탈크, 스테아르산마그네슘, 및 미네랄 오일; 습윤제; 유화제 및 현탁액; 방부제, 예를 들면, 메틸- 및 프로필하이드록시벤조에이트; 감미제; 및 방향제. 본 발명의 조성물은 당해 기술분야에 공지된 공정을 사용하여 환자에게 투여한 후에 활성 성분을 신속 방출, 서방출 또는 지연 방출하도록 제형화할 수 있다.

상기 조성물은 단위 투여 제형으로 제형화될 수 있으며, 각 제형은 활성 성분을 약 5 내지 약 500 mg, 더욱 일반적으로는 약 10 내지 약 100 mg 함유한다. 용어 "단위 투여 형태"는 인간 피험체 및 다른 포유류에게 1회분 투약량으로 적합한 물리적으로 불연속인 단위를 지칭하며, 각 단위는 바람직한 치료 효과를 생성하도록 계산된 소정량의 활성 물질을 적당한 약학적 부형제와 함께 함유한다.

활성 화합물은 넓은 용량 범위에 걸쳐서 효과적일 수 있으며, 일반적으로 약학적 효과량으로 투여된다. 그러나, 실제로 투여되는 화합물의 양은 관련된 환경, 예를 들면, 치료하고자 하는 증상, 선택된 투여 경로, 투여되는 실제 화합물, 연령, 체중 및 각 환자의 반응, 환자의 증상의 중증도 등에 따라서 전문의에 의해 결정될 것이다.

정제와 같은 고형 조성물을 제조하기 위해서, 주요 활성 성분을 약학적 부형제와 혼합하여 본 발명의 화합물의 균일한 혼합물을 함유하는 고형 예비제형 조성물을 제조한다. 이러한 예비제형 조성물을 균일한 것으로 언급한 경우, 활성 성분이 일반적으로 조성물 전체에 걸쳐 균일하게 분산됨으로써 조성물이 정제, 환약 및 캡슐과 같은 동등한 유효 단위 용량 형태로 용이하게 분할될 수 있다는 것을 의미한다. 이어서, 이러한 고형 예비제형을, 예를 들면, 본 발명의 활성 성분 약 0.1 내지 약 500 mg을 함유하는 전술한 유형의 단위 투여 형태로 분할한다.

본 발명의 정제 또는 환약은 서방 작용의 장점을 제공하는 투여 제형을 제공하도록 코팅되거나 다른 방식으로 배합될 수 있다. 예를 들면, 정제 또는 환약은 내부 용량 및 외부 용량 성분을 포함할 수 있으며, 외부 용량 성분은 내부 용량 성분 위의 엔벨로프 형태로 존재한다. 이러한 두 가지 성분들은 장용성 층에 의해 분리될 수 있으며, 이 층은 위에서의 분해를 저지하고 내부 성분을 그대로 십이지장내로 통과시키거나 방출을 지연시키는 역할을 할 수 있다. 다양한 물질을 이와 같은 장용성 층 또는 코팅에 사용할 수 있으며, 이러한 물질로서는 다수의 중합체 산 및 중합체 산과 쉘락, 세틸 알코올, 및 셀룰로즈 아세테이트 등의 물질과의 혼합물이 포함된다.

본 발명의 화합물과 조성물이 경구 투여 또는 주사에 의해 투여되도록 포함될 수 있는 액상 형태로는 수용액, 적당하게는 가향 (flavored) 시럽, 수성 또는 오일 현탁액, 및 식용유, 예를 들면, 면실유, 참깨유, 코코넛유 또는 땅콩유를 사용한 가향 에멀젼, 및 엘릭시르 및 유사한 약제학적 담체가 포함된다.

흡입 또는 통기용 조성물로서는, 약제학적으로 허용되는 수성 또는 유기 용매, 또는 이들의 혼합물 중의 용액 및 현탁액, 및 분말이 포함된다. 상기 액상 또는 고형 조성물은 전술한 바와 같은 적당한 약제학적으로 허용되는 부형제를 함유할 수 있다. 일부 양태에서, 조성물은 경구 또는 비내 호흡 경로를 통해 국소 또는 전신 효능을 위해 투여된다. 조성물은 비활성 기체를 사용하여 분무될 수도 있다. 분무된 용액은 네뷸라이저 장치로부터 직접 호흡되거나, 네뷸라이저 장치를 안면 마스크 텐트 또는 간헐적 양압 (positive pressure) 호흡 기기에 부착시킬 수 있다. 용액, 현탁액 또는 분말 조성물은 적절한 방식으로 제형을 전달하는 장치로부터 경구 또는 코를 경유해서 투여할 수 있다.

환자에게 투여되는 화합물 또는 조성물의 양은 무엇을 투여하는지, 투여 목적이 무엇인지, 예를 들면, 예방인지 치료인지, 환자의 상태, 투여 방식 등에 따라 달라질 것이다. 치료 용도에 있어서, 조성물은 이미 질병에 걸린 환자에게 그 질병 및 합병증의 증상을 치유하거나 적어도 부분적으로 억제하는데 충분한 양으로 투여될 수 있다. 유효 용량은 치료하고자 하는 질환에 따를 뿐만 아니라 질환의 중증도, 환자의 연령, 체중 및 전반적인 상태와 같은 요인들에 따라 담당 전문의의 판단에 의해 결정될 것이다.

환자에게 투여되는 조성물은 전술한 바와 같은 약제학적 조성물의 형태로 존재할 수 있다. 이러한 조성물은 통상의 멸균 기술에 의해 멸균되거나, 멸균 여과될 수 있다. 수용액은 그대로 또는 동결 건조해서 사용을 위해 포장될 수 있으며, 이때 동결 건조된 제제는 투여하기 전에 멸균 수성 담체와 혼합된다. 화합물 제제의 pH는 일반적으로 3 내지 11, 더욱 바람직하게는 5 내지 9, 가장 바람직하게는 7 내지 8일 것이다. 전술한 부형제, 담체, 또는 안정화제 중의 일부를 사용하여 약제학적 염을 형성할 수 있음을 잘 알 것이다.

본 발명의 화합물의 치료 투여량은, 예를 들면, 치료가 이루어지는 특정의 용도, 화합물의 투여 방식, 환자의 건강 및 상태, 및 처방 전문의의 판단에 따라 달라질 수 있다. 약제학적 조성물 중의 본 발명의 화합물의 분율 또는 농도는 다양한 요인, 예를 들면, 용량, 화학적 특성 (예: 소수성), 및 투여 경로에 따라 달라질 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 화합물은 비경구 투여의 경우 본 발명의 화합물 약 0.1 내지 약 10％ w/v를 함유하는 생리학적 완충 수용액에 제공될 수 있다. 몇 가지 전형적인 용량 범위는 1일당 약 1 ㎍/kg (체중) 내지 약 1 g/kg이다. 일부 양태에서, 투여 범위는 1일당 약 0.01 mg/kg (체중) 내지 약 100 mg/kg이다. 용량은 질병 또는 질환의 진행 형태 및 정도, 특정 환자의 전반적인 건강 상태, 선택된 화합물의 상대적인 생물학적 효능, 부형제의 제형화 및 이의 투여 경로와 같은 변수들에 의존할 것이다. 유효 투여량은 시험관내 또는 동물 모델 시험 시스템으로부터 유래된 투여량-반응 곡선으로부터 추론할 수 있다.

본 발명의 조성물은 또한 하나 이상의 추가의 활성 성분과 배합하여 제형화될 수 있고, 이는 임의의 약제, 예를 들면, 항바이러스제, 백신, 항체, 면역 증강제, 면역 억제제, 소염제 등을 포함할 수 있다.

명확히 하기 위해 분리된 양태와 관련하여 기재되어 있는 본 발명의 특정한 특징은 또한 단일 양태와 함께 제공될 수 있음이 추가로 인정된다. 반대로, 간단히 하기 위해 단일 양태와 관련하여 기재되어 있는 본 발명의 다양한 특징은 또한 개별적으로 또는 임의의 적합한 부차 조합으로 제공될 수 있다.

본 발명은 특정한 실시예에 의해 보다 상세히 기재될 것이다. 하기 실시예는 설명을 위해 제공되며, 어떠한 방식으로든 본 발명을 제한하는 것으로 의도되지 않는다. 당해 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본질적으로 동일한 결과를 수득하기 위해 변화 또는 변형시킬 수 있는 중요하지 않은 다양한 파라미터를 용이하게 인지할 것이다. 실시예의 화합물은 본원에 제공된 하나 이상의 분석에 따라 c-Met의 억제제인 것으로 밝혀졌다.

실시예

본 발명의 화합물의 실험 공정은 하기에 제공되어 있다. 일반적으로, 생성물은 실시예에 지시된 바와 같이 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC) 또는 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔)에 의해 실험 규모로 정제했다. 통상의 분취용 역상 고성능 액체 크로마토그래피 (RP-HPLC) 컬럼 조건은 다음과 같다:

pH = 2 정제: 워터 선파이어 (Waters Sunfire^TM) C₁₈ 5 Tm, 19 × 100 mm 컬럼, 이동상 A: 수중 0.1% TFA (트리플루오로아세트산) 및 이동상 B: 아세토니트릴 중의 0.1% TFA으로 용출; 유속 30 ml/분; 분리 구배는 문헌[참조: "Preparative LCMS Purification: Improved Compound Specific Method Optimization", K. Blom, B. Glass, R. Sparks, A. Combs, J. Comb. Chem., 6, 874-883 (2004)]에 기재된 바와 같이 화합물 특이적 방법 최적화 프로토콜을 사용하여 각 화합물에 대해 최적화된다.

pH = 10 정제: 물 XBridge C₁₈ 5 Tm, 19 × 100 mm 컬럼, 이동상 A: 수중 0.15% NH₄OH 및 이동상 B: 아세토니트릴 중의 0.15% NH₄OH으로 용출; 유속 30 ml/분; 분리 구배는 문헌[참조: "Preparative LCMS Purification: Improved Compound Specific Method Optimization", K. Blom, B. Glass, R. Sparks, A. Combs, J. Comb. Chem., 6, 874-883 (2004)]에 기재된 바와 같이 화합물 특이적 방법 최적화 프로토콜을 사용하여 각 화합물에 대해 최적화된다.

분리된 이성체는 통상 하기 조건하의 정제를 위해 분석 액체 크로마토그래피 질량 분석법 (LCMS)으로 처리했다: 장치: 아길런트 (Agilent) 1100 시리즈, LC/MSD, 컬럼: 워터 선파이어 (Waters Sunfire^TM) C₁₈ 5 Tm, 2.1 × 5.0 mm, 완충제: 이동상 A: 수중 0.025% TFA 및 이동상 B: 아세토니트릴 중의 0.025% TFA; 유속 1.5 mL/분으로 3분 내에서 B의 2% 내지 80% 구배.

실시예 1

2-플루오로-N-[(2 R )-2-하이드록시프로필]-4-[7-(퀴놀린-6-일메틸)이미다조[1,2-b][1,2,4]트리아진-2-일] 벤즈아미드

단계 1: 4- 브로모 -3- 플루오로 -N- 메톡시 -N- 메틸벤즈아미드

옥살릴 클로라이드 (38.1 mL, 450 mmol)를 디클로로메탄 (300 mL) 중의 4-브로모-3-플로오로벤조산 (49.3 g, 225 mmol) (Alfa Aesar, Cat.# B25475)의 혼합물에 서서히 첨가했다. 이어서, N,N-디메틸포름아미드 (1.0 mL)를 첨가하고, 반응 혼합물을 주위 온도에서 2시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 감압하에 농축시키고, 톨루엔으로 3회 공증발시켰다. 이어서, 잔사를 디클로로메탄 (100 mL)에 용해시켰다. 용액을 디클로로메탄 (300 mL) 및 물 (300 mL) 중의 N,O-디메틸하이드록실아민 하이드로클로라이드 (30.7 g, 315 mmol) 및 탄산칼륨 (120 g, 900 mmol)의 혼합물에 적가했다. 반응 혼합물을 주위 온도에서 2시간 동안 교반시켰다. 유기 층을 분리했다. 수성 층을 디클로로메탄 (2×50 mL)로 추출했다. 합한 유기 추출물을 염수로 세척하고, 황산마그네슘으로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켜 생성물을 수득했다. (58.5 g) LCMS (M+H)⁺: m/z = 261.9/263.9.

단계 2: 1-(4-브로모-3-플루오로페닐)에탄온

테트라하이드로푸란 (500 mL) 중의 4-브로모-3-플루오로-N-메톡시-N-메틸벤즈아미드 (단계 1, 58.5 g, 223 mmol)의 용액에 THF (125 mL, 380 mmol) 중의 3M 메틸마그네슘 클로라이드를 0℃에서 첨가했다. 반응 혼합물을 1시간 동안 0℃에서 교반시키고, 차가운 염화암모늄 수용액 (150 mL)로 퀀칭시켰다. 유기 층을 분리하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 에틸 아세테이트 (100 mL)에 재용해시켰다. 수성 층을 물 (100 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (3×50 mL)로 추출했다. 유기 추출물을 합하고, 염수로 세척하고, 황산마그네슘으로 건조시켰다. 여과하고 감압하에 농축시켜 생성물 (48.4 g)을 수득하고, 이를 추가의 정제 없이 다음 반응 단계에 사용했다.

단계 3: (4-브로모-3-플루오로페닐)(옥소)아세트알데히드 및 1-(4-브로모-3-플루오로페닐)-2,2-디하이드록시에탄온

디메틸 설폭사이드 (40 mL) 중의 1-(4-브로모-3-플루오로페닐)에탄온 (단계 2, 9.0 g, 41 mmol)의 용액에 브롬화 수소의 48% 수용액을 서서히 첨가했다. (14 mL) 반응 혼합물을 60℃에서 밤새 교반시킨 다음, 주위 온도로 냉각시키고, 빙수에 부어 넣었다. 침전물을 여과하고, 물로 세척하고, 고체를 진공하에 밤새 건조시켜 목적 생성물 8.1 g을 수득했다. 수성 층을 에틸 아세테이트로 3회 추출했다. 합한 추출물을 물 및 염수로 세척하고, 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 추가의 목적 생성물 2.2 g (총 10.3 g)을 수득했다.

단계 4: 1-(4-브로모-3-플루오로페닐)-2,2-디메톡시에탄온

톨루엔 (50 mL) 중의 1-(4-브로모-3-플루오로페닐)-2,2-디하이드록시에탄온 및 4-브로모-3-플루오로페닐)(옥소)아세트알데히드 (단계 3의 조 생성물, 7.0 g, 28 mmol)의 혼합물에 에틸 오르토포르메이트 (12 mL, 70 mmol) 및 p-톨루엔설폰산 (200 mg, 1 mmol)을 첨가했다. 반응 혼합물을 4시간 동안 환류시켰다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 에틸 아세테이트로 세척하고, 수성 중탄산나트륨, 물 및 염수로 세척하고, 황산마그네슘으로 건조시켰다. 감압하에 농축시켜 목적 생성물을 수득하고, 이를 추가의 정제 없이 다음 단계에서 사용했다.

단계 5: 6-(4-브로모-3-플루오로페닐)-1,2,4-트리아진-3-아민

에탄올 (200 mL) 및 물 (4 mL) 중의 1-(4-브로모-3-플루오로페닐)-2,2-디에톡시에탄온 (단계 4, 15.2 g, 50 mmol), 아미노구아니딘 바이카보네이트 (10.2 g, 75 mmol) 및 수산화칼륨 (6.6 g, 100 mmol)의 혼합물을 밤새 환류시켰다. 용매를 감압하에 제거하고, 잔사를 아세토니트릴로 세척하고, 여과했다. 여액을 감압하에 농축시켰다. 잔사를 디클로로메탄 (100 mL)에 용해시키고, 물 및 염수로 세척하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 에탄올 (50 mL)에 용해시켰다. 용액에 0.2N 염산 (50 mL)을 첨가했다. 생성된 혼합물을 110℃로 8시간 동안 가열시키고, 빙수 욕으로 냉각시켰다. 형성된 침전물을 여과하여 수집하고, 이소프로판올로 세척하여 목적 생성물을 수득했다. (5.5 g, 41%) LCMS: (M+H)= 286.8/288.8. ¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃): 8.60 (s, 1H), 7.79 (dd, J = 8.6, 2.0 Hz, 1H), 7.68 (dd, J = 8.3, 7.0 Hz, 1H), 7.61 (dd, J = 8.3, 2.0 Hz, 1H), 5.43 (s, 2H).

단계 6: 3-퀴놀린-6-일프로판알

플라스크 중의 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐 (480 mg, 0.52 mmol) (Aldrich, Cat. # 328774) 및 트리-3급-부틸-포스포늄 테트라플루오로보레이트 (300mg, 1.0 mmol)를 배기시키고, 질소로 재충전시켰다 (2회). 1,4-디옥산 (31 mL)를 첨가한 다음, 6-브로모퀴놀린 (7.2 g, 35 mmol) (TCI, Cat. #B2015), 2-프로판-1-올 (4.7 mL, 69 mmol) 및 N-사이클로헥실-N-메틸-사이클로헥산아민 (8.9 mL, 42 mmol)을 연속 첨가했다. 반응 용기를 배기시키고, 질소로 재충전시켰다 (2회). 반응 혼합물을 30℃에서 24시간 동안 교반시켰다. 유기 추출물을 감압하에 농축시켰다. 잔사를, 헥산 (0-50%) 중의 에틸 아세테이트로 용출시키는 플래쉬 크로마토그래피로 정제하여 목적 생성물을 수득했다. (~55%) LCMS (M+H)⁺: m/z = 186.0; (M+H₂O+H)⁺: m/z= 204.0.

단계 7: 1-(2-클로로-1-하이드록시-3-퀴놀린-6-일프로필)피롤리딘-2,5-디온

클로로포름 (5 mL) 중의 3-퀴놀린-6-일프로판알 (단계 6, 2.3 g, 0.012 mol)의 용액에 L-프롤린 (0.4 g, 0.004 mol)을 첨가했다. 이어서, 반응 혼합물에 N-클로로석신이미드 (1.74 g, 0.0130 mol)를 0℃에서 첨가했다. 반응물을 실온으로 가온하고, 밤새 교반시켰다. 반응물은 농후한 슬러리였다. 고체를 여과하고, 클로로포름으로 세척하여 순수한 생성물 (2 g, 50.5%)을 수득했다. ¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃): 8.90 (dd, J = 4.0, 2.0 Hz, 1H), 8.13 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.05 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.65 (dd, J = 8.0, 2.0 Hz, 1H), 7.40 (dd, J = 8.4, 4.0 Hz, 1H), 5.46 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 4.95 (ddd, J = 9.4, 8.0, 3.1 Hz, 1H), 3.73 (dd, J = 14.3, 3.1 Hz, 1H), 3.19 (dd, J = 14.3, 8.0 Hz, 1H), 2.75 (s, 4H).

단계 8: 6-[2-(4-브로모-3-플루오로페닐)이미다조[1,2-b][1,2,4]트리아진-7-일]메틸퀴놀린

밀봉 튜브에서 이소프로필 알콜 (7.4 mL) 및 물 (0.11 mL) 중의 6-(4-브로모-3-플루오로페닐)-1,2,4-트리아진-3-아민 (단계 5, 200 mg, 0.743 mmol) 및 1-(2-클로로-1-하이드록시-3-퀴놀린-6-일프로필)피롤리딘-2,5-디온 (단계 7, 284 mg, 0.892 mmol)의 혼합물을 105℃에서 5일 동안 가열시켰다. 반응 혼합물을 주위 온도로 냉각시킨 후, 침전물을 여과하여 수집하고, 이소프로파닐 알콜로 세척하고, 진공하에 건조시켜 목적 생성물 (180 mg, 55%)을 수득했다. LCMS (M+H)⁺: m/z = 433.9/436.0.

단계 9: 2-플루오로-4-[7-(퀴놀린-6-일메틸)이미다조[1,2-b][1,2,4]트리아진-2-일]벤조니트릴

시안화아연 (131 mg, 1.11 mmol), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (35 mg, 0.038 mmol) (Aldrich, Cat. # 328774), (9,9-디메틸-9H-크산텐-4,5-디일)비스-(디페닐포스핀) (78.5 mg, 0.136 mmol) (Aldrich, Cat. # 526460) 및 N,N,N',N'-테트라메틸에틸렌디아민 (0.22 mL, 1.4 mmol)을 마이크로파 튜브에서 N,N-디메틸포름아미드 (8.7 mL) 중의 6-[2-(4-브로모-3-플루오로페닐)이미다조[1,2-b][1,2,4]-트리아진-7-일]메틸퀴놀린 (단계 8, 480 mg, 1.10 mmol)의 혼합물에 연속 첨가했다. 튜브를 밀봉하고, 3회 탈기시키고, 500초 동안 마이크로파 조사하에 160℃로 가열시켰다. 대부분의 용매를 감압하에 제거하고, 잔사를 에틸 아세테이트에 용해시키고, 수성 중탄산나트륨, 물 및 염수로 세척하고, 황산마그네슘으로 건조시켰다. 여과 및 농축시켜 잔사를 수득하고, 이를 디클로로메탄 (0-6%) 중의 메탄올로 실리카겔 컬럼 상에서 정제하여 목적 생성물을 수득했다. (90%) LCMS (M+H)⁺: m/z = 381.0.

단계 10: 2-플루오로-4-[7-(퀴놀린-6-일메틸)이미다조[1,2-b][1,2,4]트리아진-2-일]벤조산

염산 (5.0 mL, 53 mmol) 및 물 (1.0 mL)의 농축 용액 중의 2-플루오로-4-[7-(퀴놀린-6-일메틸)이미다조[1,2-b][1,2,4]트리아진-2-일]벤조니트릴 (단계, 9, 750 mg, 2 mmol)를 105℃에서 밤새 교반시켰다. 용매를 감압하에 제거하고, 생성 잔사를 물로 세척하고, 여과하여 조 생성물을 HCl 염으로 수득하고, 이를 추가의 정제 없이 후속 반응 단계에 직접 사용했다. LCMS (M+H)⁺: m/z = 400.0.

단계 11: 2- 플루오로 -N-[(2R)-2- 하이드록시프로필 ]-4-[7-(퀴놀린-6- 일메틸)이미다조[ 1,2-b][1,2,4]트리아진 -2-일] 벤즈아미드

N,N-디메틸포름아미드 (9.0 mL) 중의 2-플루오로-4-[7-(퀴놀린-6-일메틸)이미다조[1,2-b][1,2,4]트리아진-2-일]벤조산 HCl 염 (180.0 mg, 0.381 mmol, 단계 10) 및 벤조트리아졸-1-일옥시트리스(디메틸아미노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트 (220 mg, 0.50 mmol) (Aldrich, Cat. #226084)의 혼합물을 실온에서 3분 동안 교반시켰다. 이어서, (2R)-1-아미노프로판-2-올 (57 mg, 0.76 mmol)을 서서히 첨가한 다음, 트리에틸아민 (318.7 μL, 2.287 mmol)를 첨가했다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반시킨 다음, 물을 첨가했다. 침전물을 여과하여 수집하고, 수성 아세토니트릴로 세척했다. 침전물을 1N HCl 수용액에 용해시킨 다음, 동결건조에 의해 건조시켜 목적 생성물을 HCl 염으로서 수득했다. LCMS (M+H)⁺: m/z = 457.3. ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d ₆): 9.30 (s, 1H), 9.20 (dd, J = 5.0, 1.5 Hz, 1H), 9.02 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.37 (s, 1H), 8.35 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.28 (s, 1H), 8.16 (dd, J = 8.5, 1.5 Hz, 1H), 8.08 (s, 1H), 8.04 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 8.00 (dd, J = 8.5, 5.0, Hz, 1H), 7.80 (t, J = 8.0 Hz, 1 H), 4.75 (s, 2H), 3.79 (m, 1H), 3.21 (m, 2H), 1.09 (d, J = 7.0 Hz, 3H).

S 에난티오머는 (2S)-1-아미노프로판-2-올을 사용하여 상기 공정에 따라 제조하거나, 생성물을 라세미체화하고 표준 키랄 분리 기술(예: 키랄 컬럼)을 사용하여 에난티오머를 분리하여 제조할 수 있다.

실시예 2

2-클로로-N-메틸-4-(7-(퀴놀린-6-일메틸)이미다조[1,2-b][1,2,4]트리아진-2-일)벤즈아미드

단계 1: 6- 브로모 -1,2,4- 트리아진 -3-아민

아세토니트릴 (40 mL) 중의 1,2,4-트리아진-3-아민 (3.84 g, 40.0 mmol) (Aldrich, Cat. # 100625)의 현탁액에 물 (60 mL)을 첨가하고, 투명한 용액이 형성될 때까지 교반시켰다. 이 용액에 N-브로모석신이미드 (7.48 g, 42.0 mmol)를 0℃에서 첨가하고, 생성 혼합물을 10분 동안 교반시켰다. 냉각 욕을 제거하고, 혼합물을 실온으로 가온시켰다. 이어서, 혼합물을 에틸 아세테이트 (150 mL)로 희석시키고, 0℃ (빙수 욕)로 냉각시켰다. Na₂CO₃(3.0 g)을 첨가하고, 10분 동안 교반시켰다. 2개 층을 분리하고, 수성 상을 에틸 아세테이트 (150 mL)로 추출했다. 합한 유기 층을 포화 NaHCO₃ 및 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과했다. 여액을 감압하에 농축시켜 목적 생성물 (4 g, 57.15%)을 수득했다. LCMS (M+H)⁺: m/z =175.2/177.2.

단계 2: 메틸 4-(3-아미노-1,2,4-트리아진-6-일)-2-클로로벤조에이트

1,4-디옥산 (22 mL) 중의 6-브로모-1,2,4-트리아진-3-아민 (단계 1, 1.0 g, 5.7 mmol) 및 [3-클로로-4-(메톡시카보닐)페닐]보론산 (1.5 g, 6.8 mmol) (VMR, Cat. # 100013-404)의 혼합물에 물 (5.1 mL) 중의 인산칼륨 (2.4 g, 11 mmol)의 용액을 첨가했다. 혼합물은 질소를 10분 동안 퍼징하여 탈기시켰다. 혼합물에 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(O) (0.20 g, 0.17 mmol)을 첨가하고, 다시 질소로 퍼징시켰다. 혼합물을 교반하고, 82℃ (오일 욕)에서 1시간 동안 가열시켰다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물로 희석시키고, 30분 동안 교반시키고, 회색 고체를 형성했다. 고체를 여과하여 분리하고, 물로 수회 세정하고, 공기로 건조시켰다. 이어서, 고체를 헥산, 디클로로메탄-헥산 (1:1) 및 헥산으로 순차 연마하여 목적 생성물 (840 mg, 55.54%)을 수득했다. LCMS (M+H)⁺: m/z = 264.9/267.0.

단계 3: 메틸 2-클로로-4-[7-(퀴놀린-6-일메틸)이미다조[1,2-b][1,2,4]트리아진-2-일]벤조에이트

1-부탄올 (11.6 mL) 중의 메틸 4-(3-아미노-1,2,4-트리아진-6-일)-2-클로로벤조에이트 (단계 2, 0.840 g, 3.17 mmol) 및 1-(2-클로로-1-하이드록시-3-퀴놀린-6-일프로필)피롤리딘-2,5-디온 (1.11 g, 3.49 mmol, 실시예 1, 단계 7)의 혼합물을 110℃에서 22시간 동안 교반시켰다. 용매를 감압하에 제거했다. 잔사를 에틸 아세테이트로 연마했다. 침전물을 여과하여 수집하고, 에틸 아세테이트 및 헥산으로 세척하여 목적 생성물 (0.908 g)을 수득했다. 모액을 절반 용적으로 농축시켰다. 침전물을 여과하여 수집하고, 에틸 아세테이트 및 헥산으로 세척하여 추가의 목적 생성물 (0.342 g)을 수득했다. 수득된 총 생성물은 1.10 g (80.6%)이었다. LCMS (M+H)⁺: m/z = 430.0/431.9.

단계 4: 2-클로로-4-[7-(퀴놀린-6-일메틸)이미다조[1,2-b][1,2,4]트리아진-2-일]벤조산

테트라하이드로푸란 (7.0 mL) 및 메탄올 (5.0 mL) 중의 메틸 2-클로로-4-[7-(퀴놀린-6-일메틸)이미다조[1,2-b][1,2,4]트리아진-2-일]벤조에이트 (단계 3, 1.10 g, 2.56 mmol)의 용액에 물 (3.0 mL) 중의 수산화리튬 (0.245 g, 10.2 mmol)의 용액을 첨가했다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시키고, 감압하에 약 3 mL의 용적으로 농축시켰다. 잔사를 물 (3 mL)로 희석하고, 1N HCl로 pH 약 4-5로 조정했다. 침전물을 여과 제거하고, 물로 수회 세척하고, 공기로 밤새 건조시켰다. 이어서, 침전물을 에테르 및 디클로로메탄 (DCM)-헥산 (1:1)로 순차 연마했다. 목적 생성물 (638 mg, 60%)을 수득했다. LCMS (M+H)⁺: m/z = 415.9/417.9.

단계 5: 2-클로로-N-메틸-4-(7-(퀴놀린-6-일메틸)이미다조[1,2-b][1,2,4]트리아진-2-일)벤즈아미드

N,N-디메틸포름아미드 (0.5 mL) 중의 2-클로로-4-[7-(퀴놀린-6-일메틸)이미다조[1,2-b][1,2,4]트리아진-2-일]벤조산 (단계 4, 5.0 mg, 0.012 mmol) 및 (벤조트리아졸-1-일옥시)트리필로리디노포스포늄 헥사클루오로포스페이트 (10.0 mg, 0.020 mmol) (Aldrich, Cat. #226084)를 실온에서 3분 동안 교반시켰다. 이어서, 테트라하이드로푸란 (0.012 mL, 0.023 mmol) 중의 2.0M 메틸아민을 서서히 0℃에서 첨가한 다음, 트리에틸아민 (6.4 μL, 0.046 mmol)을 첨가했다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시키고, RP-HPLC (pH = 2)로 정제하여 목적 생성물을 트리플루오로아세테이트 (TFA) 염으로서 수득했다. LCMS (M+H)⁺: m/z = 429.3.

실시예 3

2-클로로-N-[(1 S )-1-(5-메틸-1,2,4-옥사디아졸-3-일)에틸]-4-[7-(퀴놀린-6-일메틸)이미다조[1,2-b][1,2,4]트리아진-2-일]벤즈아미드

단계 1: 3급-부틸 [(1S)-2-아미노-1- 메틸 -2- 옥소에틸 ] 카바메이트

THF 중의 (2S)-2-[(3급-부톡시카보닐)아미노]프로판산 (1 g, 0.005 mol)의 교반 용액에 0℃에서 4-메틸모프롤린 (0.588 g, 0.00581 mol)을 첨가한 다음, 이소부틸 클로로포르메이트 (0.794 g, 0.00581 mol)를 2분에 걸쳐 적가했다. 반응물을 0℃에서 30분 동안 교반시키고, 이어서 반응물에 30중량% 수산화암모늄 (12.0 mL, 0.0925 mol)의 용액을 신속하게 부어 넣었다. 반응물을 실온으로 가온하고, 5시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 농축시켰다. 물을 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출했다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 조 생성물을 수득하고, 추가의 정제 없이 후속 반응 단계에서 직접 사용했다 (800 mg, 80%). ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆): 12.40 (s, 1H), 7.10 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 3.88 (m, 1H), 1.35 (s, 9H), 1.20 (d, J = 7.3 Hz, 3H).

단계 2: 3급-부틸 [(1S)-1-시아노에틸]카바메이트

N,N-디메틸포름아미드 (5 mL) 중의 3급-부틸[(1S)-2-아미노-1-메틸-2-옥소에틸]카바메이트 (단계 1, 0.7 g, 0.004 mol)의 교반 용액에 시아누르산 클로라이트 (0.00186 mol) 343 mg을 한번에 첨가했다. 반응 혼합물을 4시간 동안 교반시켰다. 물을 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출했다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 헥산 (30-50%) 중의 EtOAc로 실리카겔 컬럼 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 목적 생성물 (400 mg, 63%)을 수득했다. ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆): 7.74 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 4.48 (m, 1H), 1.40 (s, 9H), 1.35 (d, J = 7.0 Hz, 3H).

단계 3: 3급-부틸 [(1S,2Z)-2-아미노-2-(하이드록시이미노)-1-메틸에틸]카바메이트

에탄올 (3 mL)중의 3급-부틸 [(1S)-1-시아노에틸]카바메이트 (단계 2, 250 mg, 1.5 mmol)의 혼합물에 트리에틸아민 (0.41 mL, 2.9 mmol) 및 하이드록시아민 (58 mg, 1.8 mmol)을 첨가했다. 혼합물을 50℃에서 밤새 교반시켰다. 반응 혼합물을 농축시켜 목적 조 생성물 (300 mg)을 수득하고, 이를 추가의 정제 없이 후속 단계에서 직접 사용했다. ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆): 8.94 (s, 1H), 6.80 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 5.24 (s, 2H), 4.01 (m, 1H), 1.36 (s, 9H), 1.15 (d, J = 7.0 Hz, 3H).

단계 4: 3급-부틸 {(1S,2Z)-2-[(아세틸옥시)이미노]-2-아미노-1-메틸에틸}카바메이트

0℃에서 냉각시킨 메틸렌 클로라이드 (2 mL) 중의 3급-부틸 [(1S,2Z)-2-아미노-2-(하이드록시이미노)-1-메틸에틸]카바메이트 (단계 3, 100 mg, 0.5 mmol)의 혼합물에 트리에틸아민 (0.10 mL, 0.74 mmol)을 첨가했다. 이어서, 혼합물에 아세틸 클로라이드 (42 mg, 0.54 mmol)를 적가하고, 반응물을 실온까지 가온시켰다. 실온에서 1시간 동안 교반시킨 후, 반응물을 농축시켰다. 잔사를 디클로로메탄 (DCM)에 용해시키고, 물 및 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 목적하는 조 생성물 (100 mg, 82.8%)을 수득하고, 이를 추가의 정제 없이 후속 단계 반응에서 직접 사용했다. ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d ₆): 6.90 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 6.22 (s, 2H), 4.05 (m, 1H), 2.01 (s, 3H), 1.36 (s, 9H), 1.20 (d, J = 7.0 Hz, 3H).

단계 5: (1S)-1-(5-메틸-1,2,4-옥사디아졸-3-일)에탄아민

에탄올 (3 mL) 중의 3급-부틸 {(1S,2Z)-2-[(아세틸옥시)이미노]-2-아미노-1-메틸에틸}카바메이트 (단계 4, 80 mg, 0.3 mmol)의 용액에 물 (1 mL) 중의 나트륨 아세테이트 삼수화물 (49 mg, 0.36 mmol)의 용액을 첨가했다. 혼합물을 85℃에서 3시간 동안 가열시켰다. 에탄올을 증발시키고; 물을 첨가하고, EtOAc로 추출했다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과하여 농축시켰다. 잔사를 메틸렌 클로라이드 (1 mL)에 용해시켰다. 용액에 트리플루오로아세트산 (1 mL)을 첨가했다. 30분 동안 교반시킨 후, 반응 혼합물을 농축시켜 목적 생성물을 TFA 염로서 수득하고, 이를 추가의 정제 없이 후속 단계 반응에서 직접 사용했다.

단계 6: 2-클로로-N-[(1S)-1-(5-메틸-1,2,4-옥사디아졸-3-일)에틸]-4-[7-(퀴놀린-6-일메틸)이미다조[1,2-b][1,2,4]트리아진-2-일]벤즈아미드

N,N-디메틸포름아미드 (2 mL, 20 mmol) 중의 2-클로로-4-[7-(퀴놀린-6-일메틸)이미다조[1,2-b][1,2,4]트리아진-2-일]벤조산 (50 mg, 0.1 mmol, 실시예 2, 단계 4)의 용액에 N,N,N',N'-테트라메틸-O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)우로늄 헥사플루오로포스페이트 (68 mg, 0.18 mmol) (Aldrich, Cat. #226084) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (42 μL, 0.24 mmol)을 첨가했다. 용액을 15분 동안 교반시킨 후, (1S)-1-(5-메틸-1,2,4-옥사디아졸-3-일)에탄아민 TFA 염 (18 mg, 0.14 mmol, 단계 5)을 첨가하고, 밤새 교반시켰다. 혼합물을 RP-HPLC (pH = 10)에 의해 정제하여 목적 생성물을 수득하고, 이를 RP-HPLC (pH = 2)로 추가로 정제하여 목적 생성물을 TFA 염으로서 수득했다. LCMS (M+H)⁺: m/z = 525.0/427.0. ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d ₆): 9.22 (s, 1H), 8.98 (dd, J = 5.0, 1.5 Hz, 1H), 9.15 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.56 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.16 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.14 (dd, J = 8.0, 1.5 Hz, 1H), 8.06 (s, 1H), 8.04 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.90 (dd, J = 9.0, 2.0 Hz, 1H), 7.68 (dd, J = 8.5, 5.0 Hz, 1H), 7.60 (d, J = 8.0 Hz, 1 H), 5.24 (m, 1H), 4.66 (s, 2H), 2.60 (s, 3H), 1.51 (d, J = 7.0 Hz, 3H).

R 에난티오머는 (1R)-1-(5-메틸-1,2,4-옥사디아졸-3-일)에탄아민을 사용하여 상기 공정에 따라 제조하거나, 생성물을 라세미체화하고 표준 키랄 분리 기술(예: 키랄 컬럼)을 사용하여 에난티오머를 분리하여 제조할 수 있다.

실시예 4

N-메틸-5-[7-(퀴놀린-6-일메틸)이미다조[1,2-b][1,2,4]트리아진-2-일]피리딘-2-카복스아미드

단계 1: 5-(3-아미노-1,2,4- 트리아진 -6-일)-N- 메틸피리딘 -2- 카복스아미드

톨루엔 (1.3 mL), 에탄올 (0.66 mL) 및 물 (0.66 mL) 중의 N-메틸-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘-2-카복스아미드 (200 mg, 0.80 mmol) (VWR, Cat. # 200068-640), 6-브로모-1,2,4-트리아진-3-아민 (130 mg, 0.76 mmol, 실시예 2, 단계 1), 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0) (40 mg, 0.04 mmol) 및 탄산칼륨 (0.32 g, 2.3 mmol)의 혼합물을 120℃에서 1.5시간 동안 가열시켰다. 혼합물을 여과하고, 메탄올로 세척했다. 여액을 RP-HPLC (pH = 10)로 정제하여 목적 생성물 (80 mg, 45.54%)을 수득했다. LCMS (M+H)⁺: m/z = 231.4; LCMS (M+H+H₂O)⁺: m/z = 249.3.

단계 2: N-메틸-5-[7-(퀴놀린-6-일메틸)이미다조[1,2-b][1,2,4]트리아진-2-일]피리딘-2-카복스아미드

1,2-에탄디올 (100 mL) 중의 5-(3-아미노-1,2,4-트리아진-6-일)-N-메틸피리딘-2-카복스아미드 (단계 1, 6.5 g, 0.022 mol) 및 1-(2-클로로-1-하이드록시-3-퀴놀린-6-일프로필)피롤리딘-2,5-디온 (8.71 g, 0.0273 mol, 실시예 1, 단계 7)의 혼합물을 120℃에서 밤새 교반시켰다. 반응 혼합물을 농축시켰다. 혼합물을 THF 용액 (2.0M) 중의 메틸아민으로 pH=10까지 중화시킨 다음, 디클로로메탄 중의 5% MeOH로 실리카겔 컬럼 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여, 일부 출발 물질로 오염된 목적 생성물을 수득했다. 생성물을 디클로로메탄 중의 10% MeOH에 용해시키고, 약 2 mL의 용적으로 농축시켰다. 수득된 고체를 여과하고, MeOH (2 mL)로 세척하여 순수한 생성물 (4.50 g, 50%)을 수득했다. 생성물을 2N HCl (수성) 및 아세토니트릴로 처리하고, 동결건조시켜 건조시켜 목적 생성물을 HCl 염으로 수득했다. LCMS (M+H)⁺: m/z = 396.4. ¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆): 9.40 (s, 1H), 9.27 (s, 1H), 9.20 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 9.10 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.64 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.26 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.20 (d, J = 8.0, Hz, 1H), 8.19 (s, 1H), 8.17 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.03 (dd, J = 8.0, 5.5 Hz, 1 H), 4.76 (s, 2H), 2.81 (s, 3H).

실시예 5

N,2-디메틸-4-[7-(퀴놀린-6-일메틸)이미다조[1,2-b][1,2,4]트리아진-2-일]벤즈아미드

단계 1: 4- 브로모 -N,2- 디메틸벤즈아미드

N,N-디메틸포름아미드 (10 μL)를 옥살릴 클로라이드 (2.0 mL, 23 mmol) 중의 4-브로모-2-메틸벤조산 (1.0 g, 4.6 mmol)의 혼합물에 첨가했다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반시켰다. 혼합물을 농축시켜 조 카보닐 클로라이드를 수득하고, 이를 메틸렌 클로라이드 (2 mL)에 용해시켰다. 용액을 테트라하이드로푸란 (THF) (2.0 M, 0.465 mL, 9.3 mmol) 중의 메틸아민 및 DCM (10 mL) 중의 트리에틸아민 (1.3 mL, 9.3 mmol)의 혼합물에 서서히 첨가했다. 30분 후, 반응 혼합물을 포화 탄산나트륨 (10 mL)으로 퀀칭시키고, DCM (3x20 mL)로 추출했다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켜 조 생성물 (980 mg, 92%)을 수득했다. LCMS (M+H)⁺: m/z = 228.1/230.2.

단계 2: N,2-디메틸-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)벤즈아미드

1,4-디옥산 (5.28 mL) 중의 4-브로모-N,2-디메틸벤즈아미드 (단계 1, 0.50 g, 2.2 mmol) 및 4,4,5,5,4',4',5',5'-옥타메틸-[2,2']바이[[1,3,2]디옥사보롤란일] (0.67 g, 2.6 mmol) (Aldrich, Cat. # 473294)의 용액에 디클로로메탄 (1:1) (0.09 g, 0.1 mmol) (Aldrich, Cat. # 379670)과의 [1,1'-비스(디페닐포스피노)-페로센]디클로로팔라듐 (II) 착물, 칼륨 아세테이트 (0.64 g, 0.0066 mol) 및 1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센 (0.06 g, 0.1 mmol) (Aldrich, Cat. # 177261)을 질소 분위기하에 첨가했다. 반응 혼합물을 80℃에서 밤새 교반시켰다. 실온으로 냉각시킨 후, 혼합물을 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 디클로로메탄 중의 10% 메탄올로 실리카겔 컬럼 상에서 플래쉬 크로마토그래피로 정제하여 목적 생성물을 수득했다. LCMS (M+H)⁺: m/z = 276.4.

단계 3: 4-(3-아미노-1,2,4-트리아진-6-일)-N,2-디메틸벤즈아미드

톨루엔 (1.9 mL), 에탄올 (0.94 mL) 및 물 (0.94 mL) 중의 N,2-디메틸-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)벤즈아미드 (단계 2, 0.3 g, 0.001 mol), 6-브로모-1,2,4-트리아진-3-아민 (0.21 g, 1.2 mmol, 실시예 2, 단계 1), 테트라키스(트리페닐포스핀)팔랴듐(0) (0.06 g, 0.05 mmol) 및 탄산칼륨 (0.45 g, 3.3 mmol)의 혼합물. 생성 혼합물을 130℃에서 2.5시간 동안 가열시켰다. 혼합물을 MeOH로 희석시키고, 여과하고, DCM/메탄올 (90%)로 세척했다. 여액을 농축시켰다. 잔사를 DCM 중의 10% MeOH로 실리카겔 컬럼 상에서 플래쉬 크로마토그래피로 정제하여 목적 생성물 (110 mg, 41%)을 수득했다. LCMS (M+H)⁺: m/z = 244.3.

단계 4: 2-클로로-3-퀴놀린-6-일프로판알

L-프롤린 (410 mg, 3.5 mmol)을 클로로포름 (39 mL) 중의 3-퀴놀린-6-일프로판알 (3.27 g, 17.6 mmol, 실시예 1, 단계 6)의 용액에 0℃에서 첨가한 다음, N-클로로석신이미드 (2.48 g, 18.5 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 주위 온도로 서서히 가온하고, 1시간 동안 교반시켜 LCMS로 모니터링했다. 용매를 감압하에 농축시키고, 잔사를 헥산 (0-50%) 중의 에틸 아세테이트로 실리카겔 컬럼 상에서 정제하여 목적 생성물을 수득했다. (95%) LCMS: (M+H+H₂O)= 237.9/239.9.

단계 5: N,2-디메틸-4-[7-(퀴놀린-6-일메틸)이미다조[1,2-b][1,2,4]트리아진-2-일]벤즈아미드

밀봉 튜브에서 에탄올 (2.5 mL) 중의 4-(3-아미노-1,2,4-트리아진-6-일)-N,2-디메틸벤즈아미드 (단계 3, 0.30 g, 1.2 mmol) 및 2-클로로-3-퀴놀린-6-일프로판알 (단계 4, 0.32 g, 1.5 mmol)의 혼합물을 120℃에서 밤새 교반시켰다. 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 RP-HPLC (pH = 2)로 정제하여 목적 생성물 (150 mg)을 TFA 염으로서 수득했다. LCMS (M+H)⁺: m/z = 409.3.¹H-NMR (400 MHz, CD₃OD): 9.64 (s, 1H), 9.21 (d, J = 5.0, 1H), 9.18 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.44 (s, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.32 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 8.27 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.12 (dd, J = 9.0, 5.0, Hz, 1H), 8.05 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.57 (d, J = 8.0 Hz, 1 H), 4.86 (s, 2H), 2.92 (s, 3H), 2.48 (s, 3H).

실시예 A

시험관내 c-Met 키나제 효소 분석

본 발명의 화합물을 c-Met 키나제 활성을 억제하는 이들의 능력에 대해 시험관 내에서 스크리닝했다. c-Met 키나제의 억제에 대한 IC₅₀ 값은 일부 변형과 함께 문헌[참조: Wang, X. et al, Mol. Cancer Ther. 2003, 2(11):1085-1092; Calic, M. et al., Croatica Chemical ACTA. 2005, 78(3):367-374]에 기재된 바와 같이 측정했다. 요약하면, 히스티딘-태그 c-Met 촉매 도메인 융합 단백질 (Invitrogen, #PV3143)을 분석에 사용했다. IC₅₀ 측정은 96-웰 마이크로플레이트 (R&D systems, #DY990) 상에 피복된 (0.01 mg/웰당) 폴리 Glu-Tyr (Sigma-Aldrich, #P0275)의 포스포릴화 정도에 기반했다. 반응은 50 mM HEPES (pH 7.5), 10 mM MnCl₂, 10 mM MgCl₂, 0.5 mM DTT, 100 μM Na₃VO₄, 5 μM ATP (Cell Signaling Technology, #9804) 및 시험 화합물의 일련의 연속 희석물을 함유하는 50 μL 용액에서 수행했다. 반응은 25분 동안 30℃에서 지속했다. 반응이 완결된 후, 플레이트의 내용물을 버렸다. 이어서, 플레이트를 TBS-T (250 μL/웰, 5x)로 세척한 다음, 1% BSA를 함유하는 TBS-T로 2시간 동안 차단시켰다. 플레이트의 내용물을 버린 다음, TBS-T를 함유하는 1% BSA에 희석 (1:60,000)시킨 100 μL (웰당)의 퍼옥시다제 표지된 항-포스포-티로신 항체 (Sigma, #A5964)를 첨가하고, 1시간 동안 배양했다. 플레이트를 TBS-T (250 μL/웰, 5x)로 세척하고, 100 μL (1:1 혼합물)의 H₂O₂ 및 테트라메틸벤지딘 (R&D Systems, #DY999)를 사용하여 착색 반응시켰다. 반응을 수분 내에 100 μL 2N H₂SO₄로 중지시켰다. 광학 밀도는 540 nm에서 파장 보정과 함께 450nm에서 마이크로플레이트 판독기를 사용하여 즉시 측정했다. IC₅₀ 값은 그래프패드 프리즘 소프트웨어로 계산했다. 선형 범위 (즉, 속도가 초기 속도와 동일한 상태로 유지되는 기간)를 당해 키나제에 대해 측정하고, IC₅₀ 측정을 이 범위 내에서 수행했다.

문헌[참조: Wang, X., et al. Potent and selective inhibitors of the Met [hepatocyte growth factor/scatter factor (HGF/SF) receptor] tyrosine kinase block HGF/SF-induced tumor cell growth and invasion. Mol. Cancer Ther. 2003, 2(11):1085-1092]

문헌[참조: Calic, M., et al. Flavonoids as inhibitors of Lck and Fyn kinases. Croatica Chemica ACTA. 2005, 78(3):367-374]

본 발명의 화합물에 대한 IC₅₀ 결과는 하기에 제시되어 있다:

실시예 B

세포 증식/생존률 분석

다양한 인간 암 (SNU-1 및 SUN-5 위장, A549 및 HCI-H441 폐, U-87 교아종, HT-29 결장, 786-O 신장, PC-3 췌장)을 나타내는 세포주는 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션 (American Type Culture Collection)으로부터 입수하고, ATCC가 권장하는 배양 배지 조건에서 통상적으로 유지시킬 수 있다. 증식/생존률 분석에 사용된 광학 세포 밀도를 개개 세포주에 대해 사전 측정할 수 있다. 화합물은 세포 증식/생존률을 억제하는 이들의 능력에 대해 스크리닝하고, IC₅₀ 값을 측정한다. 하기는 SNU-5 및 SNU-1 세포 증식/생존률 분석을 위한 샘플 프로토콜이다. SNU-5 및 SNU-1 세포는, 2% FBS를 함유하는 적절한 배지에서 각각 4000 세포/웰 및 2000 세포/웰로 96웰 세포 배양 플레이트에 씨딩하고, 최종 용적 100 μL/웰로 개개 화합물의 일련의 희석물을 보충한다. 72시간 배양한 후, 24 μL의 CellTiter 96^® AQueous One Solution 시약 (Promega, # G3581)을 각 웰 (최종 농도 = 333 μg/mL)에 첨가하고, 플레이트를 37℃ 배양기에서 2시간 이상 동안 배양한다. 광학 밀도는 650 nm에서의 파장 보정과 함께 490 nm에서 마이크로플레이트 판독기를 사용하여 선형 범위로 측정한다. IC₅₀ 값은 그래프패드 프리즘 (GraphPad Prism) 소프트웨어로 계산한다. A549, NCI-H441, U-87, HT-29, 786-0 및 PC-3 세포를 사용한 증식 분석에 있어서, 세포를 먼저 저혈청 조건 (적절한 배양 배지 증의 0.1-0.5% FBS)에서 48시간 동안 고갈시킨 다음, 상이한 농도의 화합물로 2시간 동안 처리했다. 세포를 HGF (50 ng/mL) (R&D, #294-HGN)으로 24시간 동안 처리한 후, CellTiter 96^® AQueous One Solution 시약을 첨가하고, 플레이트를 2시간 동안 배양한다. 결과는 플레이트 판독기로 기록한다.

실시예 C

세포 기반 c-Met 포스포릴화 분석

관련 세포주 (SNU-5 위, A549 및 NCI-H441 폐, U-87 교아종, HT-29 결장, 786-O 신장 및 PC-3 췌장암 세포주 및 HUVEC 세포주)에서 c-Met 포스포릴화에 대한 화합물의 억제 효과는 면역블롯팅 분석 및 ELISA 기반 c-Met 포스포릴화 분석을 사용하여 분석할 수 있다. 세포를 적절한 배양 배지에서 성장시키고, 다양한 농도의 개개 화합물로 처리한다. SNU-5, HT-29, 786-O 세포의 경우, 세포를 0.2% 또는 2% FBS로 보충된 적절한 배지에서 성장시키고, 화합물로 3 내지 4시간 동안 처리한다. 전체 세포 단백질 추출물은 바이오소스 인터네셔널 (BioSource International)로부터 입수하여 약간 변형시킨 시약 및 프로토콜 (# FNN0011)을 사용하여 제조한다. 요약하면, 단백질 추출물은 4℃에서 프로테아제 및 포스파타제 억제제[50 mM HEPES (pH 7.5), 100 mM NaCl, 1.5 mM MgCl₂, 10% 글리세롤, 1% 트리톤 X-100, 1 mM 나트륨 오르토바나데이트, 1 mM 불화나트륨, 아프로티닌 (2 μg/mL), 류펩틴 (2 μg/mL), 펩스타틴 A (2 μg/mL) 및 페닐메틸설포닐 플루오라이드 (1 mM)]과 함께 용해 완충제에서 배양하여 제조한다. 단백질 추출물을 20분 동안 14,000×g으로 원심분리하여 세포 파편을 제거한다. A549, H441, U-87 및 PC-3 세포의 경우, 세포는 적어도 24시간 동안 고갈시킨 혈청 (0.2% FBS)이고, 이어서 다양한 농도의 화합물로 1시간 동안 전처리한다. 전체 세포 추출물은 세포를 HGF (50 ng/mL)로 10분 동안 처리한 후에 제조한다.

면역블롯팅 분석

관련 항체는 시판 공급원으로부터 입수한다: 래빗 폴리클로날 항체는 항-인간 c-Met (Santa Cruz Biotechnology, #sc-161) 및 항-포스포릴화-c-Met (Biosource International, pY1230/4/5 및 pY1003)을 포함한다. 면역블롯팅을 위해, 개개 처리 조건으로부터 10 내지 20 μg의 단백질 추출물을 10% SDS-PAGE 겔 상에서 전기영동에 의해 용해시키고, 니트로셀룰로즈 (또는 PVDF) 막으로 전기이동시킨다. 막은 3% 밀크 및 0.1% 트윈-20을 함유하는 PBS에서 1시간 동안 차단시킨 다음, 차단 용액 중의 1차 항-c-Met 항체와 함께 1시간 동안 배양한다. 3회 세척한 후, 막을 적절한 호세라디쉬-접합된 2차 항체와 함께 1시간 동안 배양한다. 최종 세척 후, 블롯을 5분 동안 화학발광 검출 시약과 함께 배양하고, X-선 필름에 노출시킨다. 이미지를 스캐닝하고, 정량화하고, 전체 c-Met로 보정하고, IC₅₀ 값을 계산한다. IC₅₀이 10 μM 이하인 화합물을 활성인 것으로 간주한다.

ELISA

세포 단백질 추출물은 제조업자의 지시 (R&D Systems, #DYC2480)에 따라 인간 포스포-c-Met ELISA 키트를 사용하여 분석한다. 단백질 추출물의 최적량은 개개 세포주에 대해 사전 측정한다. 요약하면, 분석을 위해, 적절한 양의 단백질 추출물을 2시간 동안 96웰 마이크로플레이트에서 포착 항-인간 c-Met 항체로 포착한다. 세척 후, 검출 항체 (HRP-접합된 항-포스포-티로신 항체)를 첨가하고, 2시간 동안 배양한다. 추가로 세척한 후, 100 μM의 기질 용액 (H₂O₂와 테트라메틸벤지딘의 1:1 혼합물)을 각 웰에 첨가하고, 반응은 착색 현상 동안 적절한 시간 내에 2N H₂SO₄로 중단시킨다. 광학 밀도는 540 nm에서의 파장 보정과 함께 450 nm에서의 마이크로플레이트 판독기를 사용하여 선형 범위에서 측정한다. IC₅₀ 값은 그래프패드 프리즘 소프트웨어로 계산한다.

본 발명의 다양한 변형은, 본원에 기재된 것들과 함께, 상기 기재로부터 당해 기술분야의 통상의 지식을 가진 자에게 명백해질 것이다. 이러한 변형은 또한 첨부된 특허청구범위의 범위에 포함되는 것으로 의도된다. 모든 특허, 특허원 및 공보를 포함하여 본원에서 인용된 각각의 참조문헌은 이의 전체가 참조로서 본원에 포함된다.

Claims

2-플루오로-N-[(2R)-2-하이드록시프로필]-4-[7-(퀴놀린-6-일메틸)이미다조[1,2-b][1,2,4]트리아진-2-일]벤즈아미드; 또는
2-클로로-N-[(1S)-1-(5-메틸-1,2,4-옥사디아졸-3-일)에틸]-4-[7-(퀴놀린-6-일메틸)이미다조[1,2-b][1,2,4]트리아진-2-일]벤즈아미드인 화합물
또는 상기 화합물 중 어느 하나의 약제학적으로 허용되는 염.
2-클로로-N-[(1S)-1-(5-메틸-1,2,4-옥사디아졸-3-일)에틸]-4-[7-(퀴놀린-6-일메틸)이미다조[1,2-b][1,2,4]트리아진-2-일]벤즈아미드 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
2-플루오로-N-[(2R)-2-하이드록시프로필]-4-[7-(퀴놀린-6-일메틸)이미다조[1,2-b][1,2,4]트리아진-2-일]벤즈아미드 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
제1항의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 및 적어도 하나의 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는, HGF/c-MET 신호전달 경로의 조절이상과 관련된 질환의 치료용 약제학적 조성물로서,
상기 질환은 암, 아테롬성 동맥경화증, 폐 섬유증, 신장 섬유증, 간 질환, 알러지 질환, 염증 질환, 자가면역 질환, 뇌혈관 질환, 또는 심혈관 질환인 것인, 약제학적 조성물.
c-Met 키나제를 제1항의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염과 접촉시키는 단계를 포함하는, 시험관 내에서 c-Met 키나제의 활성을 억제하는 방법.
비 인간 세포를 제1항의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염과 접촉시키는 단계를 포함하는, 비 인간 세포에서 HGF/c-Met 키나제 신호전달 경로를 억제하는 방법.
비 인간 세포를 제1항의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염과 접촉시키는 단계를 포함하는, 비 인간 세포의 증식성 활성을 억제하는 방법.
제1항의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 포함하는, 종양 성장의 억제용 약제학적 조성물.
제1항의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 포함하는, 종양 전이의 억제용 약제학적 조성물.
치료학적 유효량의 제1항의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 포함하는, HGF/c-MET 신호전달 경로의 조절이상과 관련된 질환의 치료용 약제학적 조성물로서,
상기 질환은 암, 아테롬성 동맥경화증, 폐 섬유증, 신장 섬유증, 간 질환, 알러지 질환, 염증 질환, 자가면역 질환, 뇌혈관 질환, 또는 심혈관 질환인 것인, 약제학적 조성물.
삭제
제1항의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 포함하는, 암의 치료용 약제학적 조성물.
제12항에 있어서, 상기 암이 암종, 근골격계 육종, 연조직 육종 또는 조혈 악성종양인, 약제학적 조성물.
제12항에 있어서, 상기 암이 방광암, 유방암, 자궁경부암, 담관암종암, 결장직장암, 식도암, 위암, 두경부암, 신장암, 간암, 폐암, 비인두암, 난소암, 췌장암, 전립선암, 갑상선암, 골육종, 활막육종, 횡문근육종, 악성섬유조직구종(MFH, malignant fibrous histiocytoma), 섬유육종, 평활근육종, 카포시 육종, 다발성 골수종, 림파종, 성인 T 세포 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 교아종, 성상세포종, 흑색종, 중피종, 또는 빌름 종양인, 약제학적 조성물.