BR112012019302B1 - Imidazo[1,2-b] [1,2,4]triazinas como inibidores de c-met, composição que as compreende e métodos in vitro de inibir a atividade de c-met cinase, de inibir a via de sinalização da hgf/c-met cinase em uma célula e de inibir a atividade proliferativa de uma célula - Google Patents

Abstract

IMIDAZO[1,2-b][1,2,4]TRIAZINAS COMO INIBIDORES DE C-MET. A presente invenção refere-se às imidazo[1,2- b][1,2,4]triazinas que são inibidores de c-Met e são úteis no tratamento de doenças associadas a c-Met incluindo câncer.

Description

PEDIDO DE PATENTE RELACIONADO

[001] Este pedido de patente reivindica prioridade para o Pedido provisório US 61/300.946, depositado em 3 de fevereiro de 2010, titulado "IMIDAZO[1,2-b][1,2,4]TRIAZINAS COMO INIBIDORES DE C- MET". Os conteúdos de quaisquer patentes, pedidos de patente, e referências citadas ao longo deste relatório descritivo são por este meio incorporados por referência em suas totalidades.

CAMPO DA INVENÇÃO

[002] A presente invenção diz respeito às imidazo[1,2- b][1,2,4]triazinas que são inibidores de c-Met e são úteis no tratamento de doenças associadas a c-Met incluindo câncer.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[003] Proteína cinases (PKs) são um grupo de enzimas que regulam diversos processos biológicos importantes incluindo crescimento, sobrevivência e diferenciação das células, formação e morfogenia dos órgãos, neovascularização, reparo e regeneração dos tecidos, entre outros. Proteína cinases exercem suas funções fisiológicas catalisando a fosforilação das proteínas (ou substratos) e assim modulando as atividades celulares dos substratos em vários contextos biológicos. Além das funções em tecidos/órgãos normais, muitas proteína cinases também representam papéis mais especializados em hospedeiro de doenças humanas incluindo câncer. Um subconjunto das proteína cinases (também referidas como proteína cinases oncogênicas), quando des- reguladas, podem causar a formação e o crescimento de tumor, e ain- da contribuem para a manutenção e progressão do tumor (Blume- Jensen P et al, Nature 2001, 411(6835):355-365). Até agora, as proteína cinases oncogênicas representam um dos maiores e mais atrativos grupos alvos de proteína para intervenção de câncer e desenvolvimento de fármaco.

[004] c-Met, um proto-oncogene, é um membro de uma subfamí- lia distinta das tirosina cinases de receptor heterodimérico que incluem Met, Ron, e Mar (Birchmeier, C. et al., Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2003, 4(12):915-925; Christensen, J. G. et al., Cancer Lett. 2005, 225(1):1- 26). O único ligante de afinidade alta para c-Met é o fator de crescimento de hepatócitos (HGF), também conhecido como fator de espalhamento (SF). Ligação do HGF a c-Met induz ativação do receptor por meio de autofosforilação que resulta em um aumento da sinalização dependente do receptor. C-Met e HGF são amplamente expressados em uma variedade de órgãos, mas sua expressão é normalmente confinada às células de origem epitelial e mesenquimal, respectivamente. As funções biológicas de c-Met (ou via de sinalização de c-Met) em tecidos normais e malignidades humanas tais como câncer foram bem documentadas (Christensen, J. G. et al., Cancer Lett. 2005, 225(1):1- 26; Corso, S. et al., Trends in Mol. Med. 2005, 11(6):284-292).

[005] HGF e c-Met são cada requeridos para o desenvolvimento mamífero normal, e as anormalidades relatadas em camundongos isentos de HGF e de c-Met são consistentes com a proximidade de expressão embrionária e defeitos da transição epitelial-mesenquimal durante a morfogenia dos órgãos (Christensen, J. G. et al., Cancer Lett. 2005, 225(1):1-26). Consistente com estes achados, a transdução de sinalização e efeitos biológicos subsequentes da via HGF/c-Met foram mostrados ser importantes para a interação epitelial-mesenquimal e a regulação da migração celular, invasão, proliferação e sobrevivência celulares, angiogênese, morfogenia e organização das estruturas tubula- res tridimensionais (por exemplo, células tubulares renais, formação de glândulas) durante o desenvolvimento. As consequências específicas da ativação da via de c-Met em uma célula/tecido dado são altamente dependentes do contexto.

[006] A via de c-Met desregulada representa papéis importantes e às vezes causativos (no caso de alterações genéticas) na formação, crescimento, manutenção e progressão do tumor (Birchmeier, C. et al., Nat. Rev. Mol. Cell. Biol. 2003, 4(12):915-925; Boccaccio, C. et al., Nat. Rev. Cancer 2006, 6(8):637-645; Christensen, J. G. et al., Cancer Lett. 2005, 225(1):1-26). HGF e/ou c-Met são supraexpressados em porções significativas da maioria dos cânceres humanos, e são frequentemente associados com resultados clínicos ruins tais como doença mais agressiva, progressão da doença, metástase tumoral e sobrevivência encurtada do paciente. Ainda, pacientes com níveis altos de proteínas de HGF/c-Met são mais resistentes à quimioterapia e ra-dioterapia. Além da expressão anormal de HGF/c-Met, o receptor de c- Met pode também ser ativado em pacientes de câncer por meio de mutações genéticas (linhagem germinal e somática) e amplificação gênica. Embora a amplificação gênica e mutações sejam as alterações genéticas mais comuns que foram relatadas em pacientes, o receptor pode também ser ativado por meio de deleções, truncamentos, rear- ranjo de gene, como também processamento anormal do receptor e mecanismos reguladores negativos defeituosos.

[007] Os vários cânceres nos quais c-Met está implicado incluem, mas não são limitados a: carcinomas (por exemplo, bexiga, mama, cervical, colangiocarcinoma, colorretal, esofagiano, gástrico, cabeça e pescoço, rim, fígado, pulmão, nasofaríngeo, ovariano, pâncreas, próstata, tiróide); sarcomas musculoesqueléticos (por exemplo, osteossar- coma, sarcoma sinovial, rabdomiossarcoma); sarcomas de tecido macio (por exemplo, MFH/fibrossarcoma, leiomiossarcoma, sarcoma de Kapo si); malignidades hematopoiéticas (por exemplo, mieloma múltiplo, linfo- mas, leucemia de células T adultas, leucemia mielogenosa aguda, leucemia mielóide crônica); e outros neoplasmas (por exemplo, glioblastomas, astrocitomas, melanoma, mesotelioma e tumor de Wilm (www.vai.org/met/; Christensen, J. G. et al., Cancer Lett. 2005, 225(1):1-26).

[008] A noção que a via c-Met ativada contribui para a formação e progressão do tumor poderia ser um alvo bom para intervenção efetiva de câncer foi ainda solidificada por numerosos estudos pré- clínicos (Birchmeier, C., et al., Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2003, 4(12):915-925; Christensen, J. G. et al., Cancer Lett. 2005, 225(1):1- 26; Corso, S., et al., Trend in Mol. Med. 2005, 11(6):284-292). Por exemplo, estudos mostraram que o gene de fusão tpr-met, supraex- pressão de c-met e mutações ativadas de c-met todos causaram trans-formação oncogênica de várias linhagens celulares modelos e resultaram em formação de tumor e metástase em camundongos. Mais importantemente, atividades significativas antitumorais e antimetástase (às vezes regressão do tumor) foram demonstradas in vitro e in vivo com agentes que especificamente prejudicam e/ou bloqueiam a sinalização de HGF/c-Met. Aqueles agentes incluem anticorpos anti-HGF e anti-c- Met, antagonistas peptídicos de HGF, receptor de c-Met "decoy", antagonistas de peptídeo de c-Met, mutações de c-Met dominantes negativas, oligonucleotídeos e ribozimas antissentidos específicos de c-Met, e inibidores de c-Met cinase de moléculas pequenas (Christensen, J. G. et al., Cancer Lett. 2005, 225(1):1-26).

[009] Além do papel estabelecido em câncer, a sinalização de HGF/c-Met anormal também implicou em aterosclerose, fibrose pulmonar, fibrose renal e regeneração, doenças do fígado, distúrbios alérgicos, distúrbios inflamatórios e autoimunes, doenças cerebrovas- culares, doenças cardiovasculares, condições associadas com trans- plantação de órgãos (Ma, H. et al., Atherosclerosis. 2002, 164(1):79- 87; Crestani, B. et al., Lab. Invest. 2002, 82(8):1015-1022; Sequra- Flores, A. A. et al., Rev. Gastroenterol. Mex. 2004, 69(4)243-250; Mo- rishita, R. et al., Curr. Gene Ther. 2004, 4(2)199-206; Morishita, R. et al., Endocr. J. 2002, 49(3)273-284; Liu, Y., Curr. Opin. Nephrol. Hyper- tens. 2002, 11(1):23-30; Matsumoto, K. et al., Kidney Int. 2001, 59(6):2023-2038; Balkovetz, D. F. et al., Int. Rev. Cytol. 1999, 186:225250; Miyazawa, T. et al., J. Cereb. Blood Flow Metab. 1998, 18(4)345348; Koch, A. E. et al., Arthritis Rheum. 1996, 39(9):1566-1575; Futa- matsu, H. et al., Circ. Res. 2005, 96(8)823-830; Eguchi, S. et al., Clin. Transplant. 1999, 13(6)536-544).

[0010] Formas novas ou melhoradas dos agentes existentes que inibem as cinases, tais como c-Met, são continuamente necessárias para desenvolver farmacêuticos mais efetivos para tratar câncer e outras doenças. Os compostos e sais descritos aqui são direcionados a estas necessidades e outros propósitos.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[0011] A presente invenção fornece, inter alia, os seguintes compostos que são inibidores de c-Met:

[0012] 2-fluoro-N-[(2R)-2-hidroxipropil]-4-[7-(quinolin-6- ilmetil)imidazo[1,2-b][1,2,4] triazin -2-il]benzamida (fórmula I);

[0013] 2-cloro-N-metil-4-(7-(quinolin-6-ilmetil)imidazo[1,2-b][1,2,4]triazin-2-il) benzamida (fórmula II);

[0014] 2-cloro-N-[(1S)-1-(5-metil-1,2,4-oxadiazol-3-il)etil]-4-[7-(quinolin-6-ilmetil) imidazo [1,2-b][1,2,4]triazin-2-il]benzamida (fórmula III);

[0015] N-metil-5-[7-(quinolin-6-ilmetil)imidazo[1,2-b][1,2,4]triazin-2-il]piridino-2-carboxamida (fórmula IV); e

[0016] N,2-dimetil-4-[7-(quinolin-6-ilmetil)imidazo[1,2-b][1,2,4]triazin-2-il]benzamida (fórmula V).

[0017] A presente invenção ainda fornece um sal farmaceutica- mente aceitável de qualquer um dos compostos acima mencionados.

[0018] A presente invenção ainda fornece um método de inibir a atividade da c-Met cinase compreendendo contatar a cinase com um composto ou sal da invenção.

[0019] A presente invenção ainda fornece um método de inibir a via de sinalização de HGF/c-Met cinase em uma célula compreendendo contatar a célula com um composto ou sal da invenção.

[0020] A presente invenção ainda fornece um método de inibir a atividade proliferativa de uma célula compreendendo contatar a célula com um composto ou sal da invenção.

[0021] A presente invenção ainda fornece um método de inibir o crescimento de tumor em um paciente compreendendo administrar ao paciente uma quantidade terapeuticamente efetiva de um composto ou sal da invenção.

[0022] A presente invenção ainda fornece um método de inibir me- tástase tumoral em um paciente compreendendo administrar ao paciente uma quantidade terapeuticamente efetiva de um composto ou sal da invenção.

[0023] A presente invenção ainda fornece um método de tratar uma doença em um paciente, em que a doença está associada com desregulação da via de sinalização de HGF/c-Met, compreendendo administrar ao paciente uma quantidade terapeuticamente efetiva de um composto ou sal da invenção.

[0024] A presente invenção ainda fornece um método de tratar câncer em um paciente compreendendo administrar ao paciente uma quantidade terapeuticamente efetiva de um composto ou sal da invenção.

[0025] A presente invenção fornece um composto da invenção para o uso em terapia.

[0026] A presente invenção fornece o uso de um composto da invenção para a preparação de um medicamento para o uso em terapia. Em um modalidade, a presente invenção fornece o uso de qualquer um dos compostos da fórmula I, II, III, IV, ou V para a preparação de um medicamento para o uso no tratamento de câncer.

DESCRIÇÃO DETALHADA

[0027] A presente invenção fornece, inter alia, os seguintes compostos que são inibidores de c-met:

[0028] 2-fluoro-N-[(2R)-2-hidroxipropil]-4-[7-(quinolin-6-ilmetil)imidazo[1,2-b][1,2,4] triazin-2-il]benzamida (fórmula I);

[0029] 2-cloro-N-metil-4-(7-(quinolin-6-ilmetil)imidazo[1,2-b][1,2,4]triazin-2-il) benzamida (fórmula II);

[0030] 2-cloro-N-[(1S)-1-(5-metil-1,2,4-oxadiazol-3-il)etil]-4-[7-(quinolin-6-ilmetil) imidazo[1,2-b][1,2,4]triazin-2-il]benzamida (fórmula III);

[0031] N-metil-5-[7-(quinolin-6-ilmetil)imidazo[1,2-b][1,2,4]triazin-2-il]piridino-2-carboxamida (fórmula IV); e

[0032] N,2-dimetil-4-[7-(quinolin-6-ilmetil)imidazo[1,2-b][1,2,4]triazin-2-il]benzamida (fórmula V).

[0033] Aqui e em outro lugar, onde discrepâncias existirem entre o nome de um composto e a estrutura de um composto, a estrutura química prevalecerá.

[0034] A presente invenção ainda fornece sais farmaceuticamente aceitáveis de quaisquer dos compostos acima mencionados.

[0035] Os compostos descritos aqui podem ser assimétricos (por exemplo, tendo um ou mais estereocentros). Todos os estereoisôme- ros, tais como enantiômeros e diastereômeros, são intencionados a menos que do contrário indicados. Os compostos da presente invenção que contém átomos de carbono assimetricamente substituídos podem ser isolados em formas opticamente ativas ou racêmicas.

[0036] Os compostos da invenção também incluem formas tauto- méricas. Formas tautoméricas resultam da troca de uma ligação sim ples com uma ligação dupla adjacente junto com a migração concomi-tante de um próton. Formas tautoméricas incluem tautômeros proto- trópicos que são estados de protonação isomérica tendo a mesma fór-mula empírica e carga total. Tautômeros prototrópicos exemplares inclu-em pares de cetona-enol, pares de amida-ácido imídico, pares de lacta- ma-lactima, pares de amida-ácido imídico, pares de enamino-imina, e formas anulares onde um próton pode ocupar duas ou mais posições de um sistema heterocíclico, por exemplo, 1H- e 3H-imidazol, 1H-, 2H- e 4H-1,2,4-triazol, 1H- e 2H-isoindol, e 1H- e 2H-pirazol. Formas tauto- méricas podem estar em equilíbrio ou estericamente travadas em uma forma por substituição apropriada.

[0037] Os compostos da invenção também incluem todos os isótopos de átomos que ocorrem nos compostos intermediários ou finais. Isótopos incluem aqueles átomos que têm o mesmo número atômico, mas números de massa diferentes. Por exemplo, isótopos de hidrogênio incluem trítio e deutério.

[0038] Em algumas modalidades, os compostos da invenção, ou seus sais, são substancialmente isolados. Por "substancialmente isolados" é significado que o composto ou sal é pelo menos parcial ou substancialmente separado do ambiente em que foi formado ou detec-tado. Separação parcial pode incluir, por exemplo, uma composição enriquecida no composto da invenção. Separação substancial pode incluir composições que contêm pelo menos cerca de 50%, pelo menos cerca de 60%, pelo menos cerca de 70%, pelo menos cerca de 80%, pelo menos cerca de 90%, pelo menos cerca de 95%, pelo menos cerca de 97%, ou pelo menos cerca de 99% em peso do composto da invenção, ou sal dos mesmos.

[0039] A presente invenção também inclui sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos descritos aqui. Como aqui usado, "sais far- maceuticamente aceitáveis" refere-se aos derivados dos compostos revelados em que o composto de origem é modificado convertendo uma metade de ácido ou de base existente na sua forma de sal. Exemplos de sais farmaceuticamente aceitáveis incluem, mas não são limitados a, sais de ácido mineral ou orgânico de resíduos básicos tais como aminas; sais de álcali ou orgânicos de resíduos acídicos tais como ácidos carboxílicos; e outros. Os sais farmaceuticamente aceitáveis da presente invenção incluem os sais não tóxicos convencionais do composto de origem formados, por exemplo, de ácidos inorgânicos ou orgânicos não tóxicos. Os sais farmaceuticamente aceitáveis da presente invenção podem ser sintetizados a partir do composto de origem que contém uma metade básica ou acídica através de métodos químicos convencionais. Em geral, tais sais podem ser preparados reagindo a forma de ácido ou base livre destes compostos com uma quantidade estequiométrica da base ou ácido apropriados em água ou em um solvente orgânico, ou em uma mistura dos dois; em geral, meios não aquosos como éter, acetato de etila, etanol, isopropanol, ou acetonitrila, são preferidos. Listas dos sais adequados são encontradas em Remington’s Pharmaceutical Sciences, 17a ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985, pág., 1418 e Journal of Pharmaceutical Science, 66, 2 (1977), cada uma destas é aqui incorporada por referência em sua totalidade.

[0040] A frase "farmaceuticamente aceitável" é empregada aqui para referir-se àqueles compostos, materiais, composições, e/ou formas de dosagem que são, dentro do escopo de julgamento médico legal, adequados para o uso em contato com os tecidos de seres humanos e animais sem toxicidade excessiva, irritação, resposta alérgica, ou outro problema ou complicação, comensurável com uma razão de benefício/risco razoável.

MÉTODOS DE USO

[0041] Os compostos da presente invenção podem atuar como inibidores de c-Met. Tratamento de uma célula (in vitro ou in vivo) que expressa c-Met com um composto da invenção pode resultar na inibição da via de sinalização de ligante/cinase e inibição a jusante dos eventos relacionados à via de sinalização tal como proliferação celular e motilidade celular aumentada. Por exemplo, os compostos da invenção podem bloquear e/ou prejudicar os processos bioquímicos e biológicos resultantes da ativação da via de c-Met, incluindo, mas não limitados a, ativação da c-Met cinase (por exemplo, fosforilação de c-Met) e sinalização (ativação e recrutamento de substratos celulares tais como Gab1, Grb2, Shc e c-Cbl e ativação subsequente de vários transdutores de sinal incluindo PI-3 cinase, PLC-Y, STATs, ERK1/2 e FAK), proliferação e sobrevivência celulares, motilidade, migração e invasão das células, metástase, angiogênese, e outros. Desse modo, a presente invenção ainda fornece métodos de inibir uma via de sinalização de ligante/cinase tal como a via de sinalização de HGF/c-Met cinase em uma célula contatando a célula com um composto da invenção. A presente invenção ainda fornece métodos de inibir a atividade proliferativa de uma célula ou inibir a motilidade das células contatando a célula com um composto da invenção.

[0042] A presente invenção ainda fornece métodos de tratar doenças associadas com uma via de sinalização da c-Met cinase desregu- lada, incluindo atividade anormal e/ou supraexpressão do c-Met, em um indivíduo (por exemplo, paciente) administrando ao indivíduo em necessidade de tal quantidade terapeuticamente efetiva de tratamento ou dose de um composto da presente invenção ou uma composição farmacêutica do mesmo. Em algumas modalidades, a cinase desregula- da é supraexpressada no tecido doente do paciente. Em algumas moda-lidades, a cinase desregulada é anormalmente ativa no tecido doente do paciente. Desregulação de c-Met e da via de sinalização de HGF/c- Met é significada incluir ativação da enzima através de vários meca- nismos incluindo, mas não limitados a, ativação autócrina e parácrina HGF-dependente, supraexpressão e amplificação do gene c-met, mu-tações de ponto, deleções, truncamento, rearranjo, como também pro-cessamento anormal do receptor c-Met e mecanismos reguladores negativos defeituosos.

[0043] Em algumas modalidades, os compostos da invenção são úteis em tratar doenças tais como câncer, aterosclerose, fibrose pulmonar, fibrose renal e regeneração, doença do fígado, distúrbio alérgico, doença inflamatória, distúrbio autoimune, doença cerebrovascular, doença cardiovascular, ou condição associada com transplantação de órgãos. Em outras modalidades, os compostos da invenção podem ser úteis em métodos de inibir crescimento de tumor ou metástase de um tumor em um paciente.

[0044] Cânceres exemplares tratáveis pelos métodos aqui incluem câncer de bexiga, câncer de mama, câncer cervical, câncer colangio- carcinoma, câncer colorretal, câncer esofagiano, câncer gástrico, câncer da cabeça e pescoço, câncer renal, câncer de fígado, câncer pulmonar, câncer nasofaríngeo, câncer ovariano, câncer pancreático, câncer de próstata, câncer da tiróide, osteossarcoma, sarcoma sinovi- al, rabdomiossarcoma, MFH/fibrossarcoma, leiomiossarcoma, sarcoma de Kaposi, mieloma múltiplo, linfoma, leucemia de célula T adulta, leucemia mielogenosa aguda, leucemia mielóide crônica, glioblastoma, astrocitoma, melanoma, mesotelioma, ou tumor de Wilm, e outros.

[0045] Desse modo, em uma modalidade, fornecido aqui é um método de tratar câncer em um sujeito, compreendendo administrar ao sujeito 2-fluoro-N-[(2R)-2-hidroxipropil]-4-[7-(quinolin-6-ilmetil)imidazo[1,2-b][1,2,4]triazin -2-il]benzamida, ou um sal farmaceu- ticamente aceitável do mesmo, de modo que o câncer é tratado.

[0046] Em outra modalidade, fornecido aqui é um método de tratar câncer em um sujeito, compreendendo administrar ao sujeito 2-cloro- N-metil-4-(7-(quinolin-6-ilmetil)imidazo[1,2-b][1,2,4]triazin-2- il)benzamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, de modo que o câncer é tratado.

[0047] Em outra modalidade, fornecido aqui é um método de tratar câncer em um sujeito, compreendendo administrar ao sujeito 2-cloro- N-[(1S)-1-(5-metil-1,2,4-oxadiazol-3-il)etil]-4-[7-(quinolin-6- ilmetil)imidazo[1,2-b][1,2,4] triazin-2-il] benzamida, ou um sal farma- ceuticamente aceitável do mesmo, de modo que o câncer é tratado.

[0048] Em outra modalidade, fornecido aqui é um método de tratar câncer em um sujeito, compreendendo administrar ao sujeito N-metil- 5-[7-(quinolin-6-ilmetil)imidazo[1,2-b][1,2,4]triazin-2-il]piridino-2- carboxamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, de modo que o câncer é tratado.

[0049] Em outra modalidade, fornecido aqui é um método de tratar câncer em um sujeito em necessidade do mesmo, compreendendo administrar ao sujeito N,2-dimetil-4-[7-(quinolin-6-ilmetil)imidazo[1,2- b][1,2,4]triazin-2-il] benzamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, de modo que o câncer é tratado.

[0050] Desse modo, em uma modalidade, fornecido aqui é um método de inibir crescimento de tumor em um sujeito em necessidade do mesmo, compreendendo administrar o sujeito 2-fluoro-N-[(2R)-2- hidroxipropil]-4-[7-(quinolin-6-ilmetil)imidazo[1,2-b][1,2,4]triazin-2- il]benzamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[0051] Em outra modalidade, fornecido aqui é um método de inibir crescimento de tumor em um sujeito em necessidade do mesmo, compreendendo administrar ao sujeito 2-cloro-N-metil-4-(7-(quinolin-6- ilmetil)imidazo[1,2-b] [1,2,4] triazin-2-il)benzamida, ou um sal farmaceu- ticamente aceitável do mesmo.

[0052] Em outra modalidade, fornecido aqui é um método de inibir crescimento de tumor em um sujeito em necessidade do mesmo, compreendendo administrar ao sujeito 2-cloro-N-[(1S)-1-(5-metil-1,2,4- oxadiazol-3-il)etil]-4-[7-(quinolin-6-ilmetil)imidazo[1,2-b][1,2,4]triazin-2- il]benzamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[0053] Em outra modalidade, fornecido aqui é um método de inibir crescimento de tumor em um sujeito em necessidade do mesmo, compreendendo administrar ao sujeito N-metil-5-[7-(quinolin-6- ilmetil)imidazo[1,2-b][1,2,4] triazin-2-il]piridino-2-carboxamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, de modo que o câncer é tratado.

[0054] Em outra modalidade, fornecido aqui é um método de inibir crescimento de tumor em um sujeito em necessidade do mesmo, compreendendo administrar ao sujeito N,2-dimetil-4-[7-(quinolin-6- ilmetil)imidazo[1,2-b][1,2,4] triazin-2-il]benzamida, ou um sal farmaceu- ticamente aceitável do mesmo.

[0055] Como aqui usado, o termo "célula" é significado referir-se a uma célula que é in vitro, ex vivo ou in vivo. Em algumas modalidades, uma célula ex vivo pode ser parte de uma amostra de tecido excisada de um organismo tal como um mamífero. Em algumas modalidades, uma célula in vitro pode ser uma célula em uma cultura de células. Em algumas modalidades, uma célula in vivo é uma célula que vive em um organismo tal como um mamífero.

[0056] Como aqui usado, o termo "contatando" refere-se ao contato das metades indicadas em um sistema in vitro ou um sistema in vivo. Por exemplo, "contatando" um composto da invenção com uma proteína cinase inclui a administração de um composto da presente invenção a um indivíduo ou paciente, tal como um humano, como também, por exemplo, introduzindo um composto da invenção em uma amostra contendo uma preparação celular ou purificada da proteína cinase.

[0057] Como aqui usados, os termos "indivíduo" ou "paciente", usados alternadamente, referem-se a qualquer animal, incluindo ma-míferos, preferivelmente camundongos, ratos, outros roedores, coelhos, cães, gatos, suínos, bois/vacas, ovelhas, cavalos, ou primatas, e mais preferivelmente humanos.

[0058] Como aqui usado, a frase "quantidade terapeuticamente eficaz" refere-se à quantidade de composto ativo ou agente farmacêutico que suscita a resposta biológica ou medicinal que está sendo buscada em um tecido, sistema, animal, indivíduo ou humano pelo investigador, veterinário, médico ou outro clínico, que inclui um ou mais dos seguintes: (1) impedir a doença; por exemplo, impedir uma doença, condição ou distúrbio em um indivíduo que pode estar predisposto à doença, condição ou distúrbio, mas pode ainda não ter exibido ou passado pela patologia ou sintomatologia da doença; (2) inibir a doença; por exemplo, inibir uma doença, condição ou distúrbio em um indivíduo que esteja exibindo ou passando pela patologia ou sintomatologia da doença, condição ou distúrbio; e (3) melhorar a doença; por exemplo, melhorar uma doença, condição ou distúrbio em um indivíduo que esteja exibindo ou passando pela patologia ou sintomatologia da doença, condição ou distúrbio (isto é, inverter a patologia e/ou sintomatologia) tal como diminuir a severidade da doença.

[0059] Os termos "tratado," "tratando" ou "tratamento" incluem a diminuição ou alívio de pelo menos um sintoma associado com a ativi-dade de c-Met cinase, a via de sinalização de HGF/c-Met cinase, e/ou a atividade proliferativa de uma célula. Os termos "tratado," "tratando" ou "tratamento" como usados em referência a uma doença ou condição significarão intervir em tal doença ou condição para impedir ou reduzir o desenvolvimento, impedir ou reduzir a progressão, deter a progressão, ou eliminar a doença ou condição.

[0060] O termo "uso" inclui qualquer uma ou mais das modalidades seguintes da invenção, respectivamente: o uso no tratamento de um distúrbio; o uso para a fabricação das composições farmacêuticas para o uso no tratamento de um distúrbio, por exemplo, na fabricação de um medicamento; métodos de uso dos compostos da invenção no tratamento destas doenças; preparações farmacêuticas tendo os com-postos da invenção para o tratamento destas doenças; e os compostos da invenção para o uso no tratamento destas doenças; como apropriado e expediente, se do contrário não declarado. Em particular, as doenças a serem tratadas e são desse modo preferidas para o uso de um composto da presente invenção são selecionadas de doenças associadas com a atividade de c-Met cinase, a via de sinalização de HGF/c-Met cinase, e/ou a atividade proliferativa de uma célula, e câncer.

TERAPIA DE COMBINAÇÃO

[0061] Um ou mais agentes farmacêuticos adicionais ou métodos de tratamento tais como, por exemplo, quimioterapêutica, agentes an- ticânceres, agentes citotóxicos, ou terapias anticâncer (por exemplo, radiação, hormônio, etc.), podem ser usados em combinação com os compostos e sais da presente invenção para o tratamento das doenças, distúrbios ou condições descritos aqui. Os agentes ou terapias podem ser administrados juntos com os compostos ou sais da invenção (por exemplo, combinados em uma forma de dosagem única), ou os agentes ou terapias podem ser administrados simultânea ou sequencialmente por rotas separadas de administração.

[0062] Agentes anticânceres adequados incluem agentes inibidores da cinase incluindo inibidores de trastuzumab (Herceptin), imatinib (Gleevec), gefitinib (Iressa), cloridrato de erlotinib (Tarceva), cetuximab (Erbitux), bevacizumab (Avastin), sorafenib (Nexavar), sunitinib (Sutent), e de RTK descritos, por exemplo, em WO 2005/004808, WO 2005/004607, WO 2005/005378, WO 2004/076412, WO 2005/121125, WO 2005/039586, WO 2005/028475, WO 2005/040345, WO 2005/039586, WO 2003/097641, WO 2003/087026, WO 2005/040154, WO 2005/030140, WO 2006/014325, WO 2005 / 070891, WO 2005/073224, WO 2005/113494, e Pub. Ped. Pat. U. S. 2005/0085473, 2006/0046991, e 2005/0075340.

[0063] Agentes anticânceres quimioterapêuticos ou outros adequados ainda incluem, por exemplo, agentes de alquilação (incluindo, sem limitação, mostardas de nitrogênio, derivados de etilenimina, sulfonatos de alquila, nitrosoureias e triazenos) tais como mostarda de uracila, clormetina, ciclofosfamida (Cytoxan®), ifosfamida, melfalano, clorambucila, pipobroman, trietileno-melamina, trietilenotiofosforamina, bussulfano, carmustina, lomustina, estreptozocina, dacarbazina, e te- mozolomida.

[0064] Agentes anticânceres quimioterapêuticos ou outros adequados ainda incluem, por exemplo, antimetabólitos (incluindo, sem limitação, antagonistas de ácido fólico, análogos de pirimidina, análogos de purina e inibidores de adenosina deaminase) tais como meto- trexato, 5-fluorouracila, floxuridina, citarabina, 6-mercaptopurina, 6- tioguanina, fosfato de fludarabina, pentostatina, e gencitabina.

[0065] Agentes anticânceres quimioterapêuticos ou outros adequados ainda incluem, por exemplo, certos produtos naturais e seus derivados (por exemplo, alcalóides de vinca, antibióticos antitumorais, enzimas, linfocinas e epipodopilotoxinas) tais como vinblastina, vincris- tina, vindesina, bleomicina, dactinomicina, daunorrubicina, doxorrubici- na, epirrubicina, idarrubicina, ara-C, paclitaxel (Taxol®), mitramicina, deoxico-formicina, mitomicina-C, L-asparaginase, interferonas (especi-almente IFN-a), etoposide, e teniposide.

[0066] Outros agentes citotóxicos incluem navelbeno, CPT-11, anastrazol, letrazol, capecitabina, reloxafina, ciclofosfamida, ifosamida, e droloxafina.

[0067] Também adequados são os agentes citotóxicos tais como epidopilotoxina; uma enzima antineoplástica; um inibidor de topoiso-merase; procarbazina; mitoxantrona; complexos de coordenação de platina tais como cis-platina e carboplatina; modificadores de respostas biológicas; inibidores de crescimento; agentes terapêuticos anti- hormonais; leucovorina; tegafur; e fatores de crescimento hematopoié- ticos.

[0068] Outro(s) agente(s) anticâncer(es) incluem terapêuticas de anticorpo tais como trastuzumab (Herceptin), anticorpos para moléculas coestimuladoras tais como CTLA-4, 4-1BB e PD-1, ou anticorpos para citocinas (IL-10, TGF-a, etc.). Terapêuticas de anticorpo ainda incluem anticorpos para as tirosina cinases e/ou seus ligantes tais como anticorpos anti-HGF e/ou anticorpos anti-c-Met. O termo "anticorpo" é significado incluir anticorpos inteiros (por exemplo, monoclonais, policlonais, quiméricos, humanizados, humanos, etc.) como também seus fragmentos de ligação de antígeno.

[0069] Outros agentes anticânceres também incluem aqueles que bloqueiam a migração das células imunes tais como antagonistas para receptores de quimocina, incluindo CCR2 e CCR4.

[0070] Outros agentes anticânceres também incluem aqueles que aumentam o sistema imune tais como adjuvantes ou transferência de células T adotivas.

[0071] Outros agentes anticânceres incluem vacinas anticânceres tais como células dendríticas, peptídeos sintéticos, vacinas de DNA e vírus recombinantes.

[0072] Métodos para a administração segura e efetiva da maioria dos agentes acima são conhecidos àqueles versados na técnica. Além disso, sua administração é descrita na literatura padrão. Por exemplo, a administração de muitos dos agentes quimioterapêuticos é descrita no "Physicians’ Desk Reference" (PDR, por exemplo, edição de 1996, Medical Economics Company, Montvale, NJ), a revelação desta é aqui incorporada por referência como se exposta em sua totalidade.

FORMULAÇÕES FARMACÊUTICAS E FORMAS DE DOSAGEM

[0073] Quando empregados como farmacêuticos, os compostos ou sais da invenção podem ser administrados na forma de composições farmacêuticas que correspondem a uma combinação de um composto da invenção (ou sal do mesmo) e um veículo farmaceutica- mente aceitável. Estas composições podem ser preparadas de uma maneira bem conhecida nas técnicas farmacêuticas, e podem ser administradas por uma variedade de rotas, dependendo se tratamento local ou sistêmico é desejado e da área a ser tratada. Administração pode ser tópica (incluindo oftálmica e para membranas mucosas incluindo liberação intranasal, vaginal e retal), pulmonar (por exemplo, por inalação ou insuflação de pós ou aerossóis, incluindo através de nebu- lizador; intratraqueana, intranasal, epidérmica e transdérmico), ocular, oral ou parenteral. Métodos para liberação ocular podem incluir administração tópica (colírios), injeção subconjuntival, periocular ou intraví- trea ou introdução por cateter de balão ou inserções oftálmicas cirurgicamente colocadas no saco conjuntival. Administração parenteral inclui injeção ou infusão intravenosa, intra-arterial, subcutânea, intraperitoneal ou intramuscular; ou intracraniana, por exemplo, administração intratecal ou intraventricular. Administração parenteral pode ser na forma de uma dose de bolo simples, ou pode ser, por exemplo, por uma bomba de perfusão contínua. Composições e formulações farmacêuticas para administração tópica podem incluir emplastros transdér- micos, unguentos, loções, cremes, géis, gotas, supositórios, pulverizações, líquidos e pós. Veículos farmacêuticos convencionais, bases aquosas, em pó ou oleosas, espessantes e outros podem ser necessários ou desejáveis.

[0074] Esta invenção também inclui composições farmacêuticas que contêm, como o ingrediente ativo, um ou mais dos compostos da invenção acima em combinação com um ou mais veículos farmaceuti- camente aceitáveis. Fazendo as composições da invenção, o ingrediente ativo é tipicamente misturado com um excipiente, diluído por um excipiente ou incluso dentro de um tal veículo na forma, por exemplo, de uma cápsula, sachê, papel, ou outro recipiente. Quando o excipien- te servir como um diluente, pode ser um sólido, semissólido, ou material líquido que atua como um veículo, carreador ou meio para o ingrediente ativo. Desse modo, as composições podem ser na forma de tabletes, pílulas, pós, pastilhas, sachês, sinetes, elixires, suspensões, emulsões, soluções, xaropes, aerossóis (como um sólido ou em um meio líquido), unguentos contendo, por exemplo, até 10% em peso do composto ativo, cápsulas de gelatina macias e duras, supositórios, soluções injetáveis estéreis, e pós empacotados estéreis.

[0075] Na preparação de uma formulação, o composto ativo pode ser moído para fornecer o tamanho de partícula apropriado antes de combinar com os outros ingredientes. Se o composto ativo for subs-tancialmente insolúvel, pode ser moído para um tamanho de partícula de menos de 200 malhas. Se o composto ativo for substancialmente solúvel em água, o tamanho de partícula pode ser ajustado por moagem para fornecer uma distribuição substancialmente uniforme na formulação, por exemplo, cerca de 40 malhas.

[0076] Alguns exemplos de excipientes adequados incluem lactose, dextrose, sacarose, sorbitol, manitol, amidos, goma acácia, fosfato de cálcio, alginatos, tragacanto, gelatina, silicato de cálcio, celulose microcristalina, polivinilpirrolidona, celulose, água, xarope, e metila ce-lulose. As formulações podem adicionalmente incluir: agentes lubrifi-cantes tais como talco, estearato de magnésio, e óleo mineral; agentes umectantes; agentes emulsificantes e de suspensão; agentes preser- vantes tais como metil- e propil-hidróxi-benzoatos; agentes adoçantes; e agentes aromatizantes. As composições da invenção podem ser formuladas para fornecer liberação rápida, contínua ou atrasada do ingrediente ativo após administração ao paciente empregando proce-dimentos conhecidos na técnica.

[0077] As composições podem ser formuladas em uma forma de dosagem de unidade, cada dosagem contendo de cerca de 5 a cerca de 500 mg, mais usualmente cerca de 10 a cerca de 100 mg, do ingrediente ativo. O termo "forma de dosagem de unidade" refere-se às unidades fisicamente distintas adequadas como dosagens unitárias para os sujeitos humanos e outros mamíferos, cada unidade contendo uma quantidade predeterminada de material ativo calculado para produzir o efeito terapêutico desejado, em associação com um excipiente farmacêutico adequado.

[0078] O composto ativo pode ser efetivo em uma ampla faixa de dosagem e pode ser em geral administrado em uma quantidade far- maceuticamente efetiva. Porém, será entendido que de fato a quantidade do composto administrado é usualmente determinada pelo médico, de acordo com as circunstâncias relevantes, incluindo a condição a ser tratada, a rota de administração escolhida, o composto atual admi-nistrado, a idade, peso, e a resposta do paciente individual, a severidade dos sintomas do paciente, e outros.

[0079] Para preparar composições sólidas tais como tabletes, o ingrediente ativo principal é misturado com um excipiente farmacêutico para formar uma composição de pré-formulação sólida contendo uma mistura homogênea de um composto da presente invenção. Ao referir- se a estas composições de pré-formulação como homogêneas, o in-grediente ativo é tipicamente disperso de modo uniforme em toda a composição de modo que a composição pode ser facilmente subdividida em forma de dosagem de unidade igualmente efetiva tal como tabletes, pílulas e cápsulas. Esta pré-formulação sólida é depois subdividida em forma de dosagem de unidade do tipo descrita acima con- tendo, por exemplo, de 0,1 a cerca de 500 mg do ingrediente ativo da presente invenção.

[0080] Os tabletes ou pílulas da presente invenção podem ser revestidos ou do contrário compostos para fornecer uma forma de dosagem que forneça a vantagem de ação prolongada. Por exemplo, o tablete ou pílula podem compreender um componente de dosagem interna e um de dosagem externa, o segundo na forma de um envelope sobre o primeiro. Os dois componentes podem ser separados por uma camada entérica que serve para resistir à desintegração no estômago e permitir o componente interno passar intacto no duodeno ou ser retardado na liberação. Uma variedade de materiais pode ser usada para tais camadas entéricas ou revestimentos, tais materiais incluindo vários ácidos poliméricos e misturas de ácidos poliméricos com tais materiais como goma-laca, álcool cetílico, e acetato de celulose.

[0081] As formas líquidas em que os compostos e as composições da presente invenção podem ser incorporados para administração oral ou através de injeção incluem soluções aquosas, adequadamente xaropes aromatizados, suspensões aquosas ou oleosas, e emulsões aromatizadas com óleos comestíveis tais como óleo de caroço de al-godão, óleo de gergelim, óleo de coco, ou óleo de amendoim, como também elixires e veículos farmacêuticos similares.

[0082] As composições para inalação ou insuflação incluem soluções e suspensões em solventes farmaceuticamente aceitáveis, aquosos ou orgânicos, ou misturas dos mesmos, e pós. As composições líquidas ou sólidas podem conter excipientes farmaceuticamente aceitáveis adequados como supra descritos. Em algumas modalidades, as composições são administradas pela rota oral ou respiratória nasal para efeito local ou sistêmico. As composições podem ser nebulizadas mediante o uso de gases inertes. As soluções nebulizadas podem ser respiradas diretamente do dispositivo de nebulização ou o dispositivo de nebulização pode ser prendido a uma máscara facial, ou máquina de respiração de pressão positiva intermitente. As composições de solução, suspensão, ou em pó podem ser administradas oral ou nasalmente a partir dos dispositivos que liberam a formulação de uma maneira apropriada.

[0083] A quantidade de composto ou composição administrada a um paciente variará, dependendo do que está sendo administrado, o propósito da administração, tal como profilaxia ou terapia, o estado do paciente, a maneira de administração, e outros. Em aplicações tera-pêuticas, as composições podem ser administradas a um paciente que já sofre de uma doença em uma quantidade suficiente para curar ou pelo menos parcialmente deter os sintomas da doença e suas complicações. Doses efetivas dependerão da condição de doença sendo tratada como também pelo julgamento do clínico assistente dependendo dos fatores, tais como a severidade da doença, a idade, peso e condição geral do paciente, e outros.

[0084] As composições administradas a um paciente podem ser na forma das composições farmacêuticas descritas acima. Estas composições podem ser esterilizadas através de técnicas de esterilização convencionais, ou podem ser filtradas estéreis. As soluções aquosas podem ser empacotadas para o uso como se encontram, ou liofiliza- das, a preparação liofilizada sendo combinada com um veículo aquoso estéril antes da administração. O pH das preparações do composto tipicamente será entre 3 e 11, mais preferivelmente de 5 a 9 e o mais preferivelmente de 7 a 8. Será entendido que uso de certos dos exci- pientes anteriores, veículos, ou estabilizantes resultará na formação de sais farmacêuticos.

[0085] A dosagem terapêutica dos compostos da presente invenção pode variar de acordo com, por exemplo, o uso particular para o qual o tratamento é feito, a maneira de administração do composto, a saúde e condição do paciente, e o julgamento do médico prescreven- te. A proporção ou concentração de um composto da invenção em uma composição farmacêutica pode variar, dependendo de vários fatores incluindo dosagem, características químicas (por exemplo, hidrofo- bicidade), e a rota de administração. Por exemplo, os compostos da invenção podem ser fornecidos em uma solução de tampão fisiológica aquosa contendo cerca de 0,1 a cerca de 10% p/v do composto para administração parenteral. Algumas faixas de dose típicas são de cerca de 1 μg/kg a cerca de 1 g/kg do peso do corpo por dia. Em algumas modalidades, a faixa de dose é de cerca de 0,01 mg/kg a cerca de 100 mg/kg do peso do corpo por dia. A dosagem provavelmente depende de tais variáveis como o tipo e a extensão da progressão da doença ou distúrbio, o estado de saúde geral do paciente particular, a eficácia biológica relativa do composto selecionado, formulação do excipiente, e sua rota de administração. As doses efetivas podem ser extrapoladas a partir das curvas de dose-resposta derivadas dos sistemas de teste in vitro ou de modelo animal.

[0086] Os compostos da invenção podem também ser formulados em combinação com um ou mais ingredientes ativos adicionais que podem incluir qualquer agente farmacêutico tal como agentes antivi- rais, vacinas, anticorpos, intensificadores imunes, supressores imunes, agentes anti-inflamatórios e outros.

[0087] É ainda apreciado que certas características da invenção, que são, para clareza, descritas no contexto das modalidades separadas, podem também ser fornecidas em combinação com uma modalidade simples. Inversamente, várias características da invenção que são, para brevidade, descritas no contexto de uma modalidade simples, podem ser também fornecidas separadamente ou em qualquer subcombinação adequada.

[0088] A invenção será descrita em maior detalhe por via de exemplos específicos. Os exemplos seguintes são oferecidos para propósitos ilustrativos, e não são intencionados a limitar a invenção de forma alguma. Aqueles de habilidade na técnica facilmente reconhecerão uma variedade de parâmetros não críticos que podem ser alterados ou modificados para render essencialmente os mesmos resultados. Os compostos dos Exemplos foram descobertos ser inibidores de c-Met de acordo com um ou mais dos ensaios fornecidos aqui.

EXEMPLOS

[0089] Procedimentos experimentais para os compostos da invenção são fornecidos abaixo. Em geral, o produto foi purificado em uma escala preparativa através de cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC) ou cromatografia instantânea (sílica-gel) como indicado nos Exemplos. Condições da coluna da cromatografia líquida de alto desempenho de fase reversa preparativa típica (RP-HPLC) foram como segue:

[0090] pH = 2 purificações: coluna Waters Sunfire® C18 5 Tm, 19 x 100 mm, eluindo com fase móvel A: 0,1% TFA (ácido trifluoroacético) em água e fase móvel B: 0,1% TFA em acetonitrila; a taxa de fluxo é 30 ml/m; o gradiente de separação é otimizado para cada composto usando o protocolo de Otimização de Método Específico para o Composto como descrito na literatura ["Preparative LCMS Purification: Improved Compound Specific Method Optimization", K. Blom, B. Glass, R. Sparks, A. Combs, J. Comb. Chem., 6, 874-883 (2004)].

[0091] pH = 10 purificações: coluna Waters XBridge C18 5 Tm, 19 x 100 mm, eluindo com fase móvel A: 0,15% NH4OH em água e fase móvel B: 0,15% NH4OH em acetonitrila; a taxa de fluxo foi 30 ml/m; o gradiente de separação é otimizado para cada composto usando o protocolo de Otimização de Método Específico para o Composto como descrito na literatura ["Preparative LCMS Purification: Improved Compound Specific Method Optimization", K. Blom, B. Glass, R. Sparks, A. Combs, J. Comb. Chem., 6, 874-883 (2004)].

[0092] Os isômeros separados foram tipicamente submetidos à espectrometria de massa de cromatografia líquida analítica (LCMS) para pureza sob as seguintes condições: Instrumento; Agilent 1100 série, LC/MSD, Coluna: Waters Sunfire® C18 5 Tm, 2,1 x 5,0 mm, Tampões: fase móvel A: 0,025% TFA em água e fase móvel B: 0,025% TFA em acetonitrila; gradiente 2% a 80% de B em 3 min com taxa de fluxo de 1,5 mL/min.EXEMPLO 1 2-FLUORO-N-[(2R)-2-HIDROXIPROPIL]-4-[7-(QUINOLIN-6-ILMETIL) IMIDAZO [1,2-B][1,2,4]TRIAZIN-2-IL]BENZAMIDA

ETAPA 1: 4-BROMO-3-FLUORO-N-METÓXIN-METILBENZAMIDA

[0093] Cloreto de oxalila (38,1 ml, 450 mmol) foi lentamente acrescentado a uma mistura de ácido 4-bromo-3-fluorobenzoico (49,3 g, 225 mmol) (Alfa Aesar, Cat. # B25475) em diclorometano (300 ml). Subse-quentemente, N,N-dimetilformamida (1,0 ml) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente por 2 h. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida e co-evaporada com to- lueno 3 vezes. O resíduo foi depois dissolvido em diclorometano (100 ml). A solução foi acrescentada a gotas a uma mistura de cloridrato de N,O-dimetil-hidroxilamina (30,7 g, 315 mmol) e carbonato de potássio (120 g, 900 mmol) em diclorometano (300 ml) e água (300 ml). A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente por 2 horas. A camada orgânica foi separada. A camada aquosa foi extraída com di- clorometano (2x50 ml). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura, secados em sulfato de magnésio, filtrados e concentrados sob pressão reduzida para dar o produto. (58,5 g) LCMS (M+H)+: m/z = 261,9/263,9.ETAPA 2: 1-(4-BROMO-3-FLUOROFENIL)ETANONA

[0094] A uma solução de 4-bromo-3-fluoro-N-metóxi-N- metilbenzamida (Etapa 1, 58,5 g, 223 mmol) em tetraidrofurano (500 ml) foram adicionados 3M de cloreto de metilmagnésio em THF (125 ml, 380 mmol) a 0°C. A mistura de reação foi agitada por 1 hora a 0°C, e extinta com solução de cloreto de amônio aquosa fria (150 ml). A camada orgânica foi separada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi redissolvido em acetato de etila (100 ml). A camada aquosa foi diluída com água (100 ml) e extraída com acetato de etila (3x50 ml). Os extratos orgânicos foram combinados, lavados com salmoura, e secados em sulfato de magnésio. Filtração e concentração sob pressão reduzida deram o produto (48,4 g) que foi usado na próxima etapa de reação sem outra purificação.ETAPA 3: (4-BROMO-3-FLUOROFENIL)(OXO)ACETALDEÍDO E 1-(4- BROMO -3-FLUOROFENIL)-2,2-DI-HIDROXIETANONA

[0095] A uma solução de 1-(4-bromo-3-fluorofenil)etanona (Etapa 2, 9,0 g, 41 mmol) em sulfóxido de dimetila (40 ml) foi adicionada lentamente uma solução aquosa a 48% de brometo de hidrogênio (14 ml). A mistura de reação foi agitada a 60°C durante a noite e depois esfriada para temperatura ambiente, e vertida em água de gelo. O precipitado foi filtrado e lavado com água e o sólido foi secado sob vácuo du- rante a noite para obter 8,1 g do produto desejado. A camada aquosa foi extraída com acetato de etila 3 vezes. Os extratos combinados foram lavados com água, salmoura, secados, filtrados, e concentrados para dar um adicional de 2,2 g do produto desejado (total de 10,3 g).ETAPA 4: 1-(4-BROMO-3-FLUOROFENIL)-2,2-DIETOXIETANONA

[0096] A uma mistura de 1-(4-bromo-3-fluorofenil)-2,2-di- hidroxietanona e 4-bromo-3-fluorofenil)(oxo)acetaldeído (produto bruto da Etapa 3, 7,0 g, 28 mmol) em tolueno (50 ml) foi adicionado ortofor- mato de etila (12 ml, 70 mmol) e ácido p-toluenossulfônico (200 mg, 1 mmol). A mistura de reação foi refluxada por 4 h. A mistura de reação foi esfriada para RT, diluída com acetato de etila, lavada com bicarbonato de sódio aquoso, água, salmoura, e secada em sulfato de magnésio. Concentração sob pressão reduzida deu o produto desejado que foi usado na próxima etapa sem outra purificação.ETAPA 5: 6-(4-BROMO-3-FLUOROFENIL)-1,2,4-TRIAZIN-3-AMINA

[0097] Uma mistura de 1-(4-bromo-3-fluorofenil)-2,2- dietoxietanona (Etapa 4, 15,2 g, 50 mmol), bicarbonato de aminogua- nidina (10,2 g, 75 mmol) e hidróxido de potássio (6,6 g, 100 mmol) em etanol (200 ml) e água (4 ml) foi refluxada durante a noite. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida e o resíduo foi lavado com aceto- nitrila e filtrado. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em diclorometano (100 ml), lavado com água, salmoura, e concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em etanol (50 ml). À solução a 0,2N foi adicionado ácido clorídrico (50 ml). A mistura resultante foi aquecida a 110°C por 8 h, e esfriada com um banho de água gelada. O precipitado que se formou foi colhido através de filtração e lavado com isopropanol para dar o produto dese-jado. (5,5 g, 41%) LCMS: (M+H) = 286,8/288,8, 1H-RMN (400 MHz, CDCl3): 8,60 (s, 1H), 7,79 (dd, J = 8,6, 2,0 Hz, 1H), 7,68 (dd, J = 8,3, 7,0 Hz, 1H), 7,61 (dd, J = 8,3, 2,0 Hz, 1H), 5,43 (s, 2H).ETAPA 6: 3-QUINOLIN-6-ILPROPANAL

[0098] Tris(dibenzilidenoacetona)dipaládio (480 mg, 0,52 mmol) (Aldrich, Cat. #328774) e tetrafluoroborato de tri-terc-butil-fosfônio (300 mg, 1,0 mmol) em um frasco foi evacuado e reenchido com nitrogênio (2 vezes). 1,4-dioxano (31 ml) foi adicionado seguido por adição sucessiva de 6-bromoquinolina (7,2 g, 35 mmol) (TCI, Cat. #B2015), 2- propen-1-ol (4,7 ml, 69 mmol) e N-cicloexil-N-metil-cicloexanamina (8,9 ml, 42 mmol). O vaso de reação foi evacuado e reenchido com nitrogênio (2 vezes). A mistura de reação foi agitada a 30°C por 24 h. Éter dietílico (30 ml) foi acrescentado à mistura de reação e depois filtrado e lavado com éter dietílico. O extrato orgânico foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia instantânea eluindo com acetato de etila em hexanos (0-50%) para fornecer o produto desejado. (~55%) LCMS (M+H)+: m/z = 186,0; (M+H2O+H)+: m/z = 204,0. ETAPA 7: 1-(2-CLORO-1-HIDRÓXI3-QUINOLIN-6-ILPROPIL) PIRRO- LIDINA-2,5-DIONA

[0099] A uma solução de 3-quinolin-6-ilpropanal (Etapa 6, 2,3 g, 0,012 mol) em clorofórmio (5 ml) esfriada para 0°C foi adicionada L- prolina (0,4 g, 0,004 mol). À mistura foi depois adicionada N- clorossuccinimida (1,74 g, 0,0130 mol) a 0°C. A reação foi aquecida em t.a. e agitada durante a noite. A reação era pasta grossa. O sólido foi filtrado e lavado com clorofórmio para dar o produto puro (2 g, 50,5%). 1H-RMN (300 MHz, CDCl3): 8,90 (dd, J = 4,0, 2,0 Hz, 1H), 8,13 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 8,05 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,73 (s, 1H), 7,65 (dd, J = 8,0, 2,0 Hz, 1H), 7,40 (dd, J = 8,4, 4,0 Hz, 1H), 5,46 (d, J = 9,4 Hz, 1H), 4,95 (ddd, J = 9,4, 8,0, 3,1 Hz, 1H), 3,73 (dd, J = 14,3, 3,1 Hz, 1H), 3,19 (dd, J = 14,3, 8,0 Hz, 1H), 2,75 (s, 4H).ETAPA 8: 6-[2-(4-BROMO-3-FLUOROFENIL)IMIDAZO[1,2-B][1,2,4]TRIAZIN -7-IL]METILQUINOLINA

[00100] Uma mistura de 6-(4-bromo-3-fluorofenil)-1,2,4-triazin-3- amina (Etapa 5, 200 mg, 0,743 mmol) e 1-(2-cloro-1-hidróxi-3-quinolin- 6-ilpropil) pirrolidino-2,5-diona (Etapa 7, 284 mg, 0,892 mmol) em álcool isopropílico (7,4 ml) e água (0,11 ml) em um tubo vedado foi aquecida a 105°C por 5 d. Após a mistura de reação ter sido esfriada para temperatura ambiente, o precipitado foi colhido por filtração, lavado com álcool isopropanílico, e secado a vácuo para dar o produto desejado (180 mg, 55%) LCMS (M+H)+: m/z = 433,9/436,0.ETAPA 9: 2-FLUORO-4-[7-(QUINOLIN-6-ILMETIL)IMIDAZO[1,2- B][1,2,4] TRIAZIN-2-IL]BENZONITRILA

[00101] Cianeto de zinco (131 mg, 1,11 mmol),tris(dibenzilidenoacetona) dipaládio(0) (35 mg, 0,038 mmol) (Aldrich, Cat. #328774), (9,9-dimetil-9H-xanteno-4,5-diil)bis-(difenilfosfina) (78,5 mg, 0,136 mmol) (Aldrich, Cat. #526460), e N,N,N’,N’- tetrametiletilenodiamina (0,22 ml, 1,4 mmol) foi acrescentado sucessivamente a uma mistura de 6-[2-(4-bromo-3-fluorofenil) imidazo [1,2- b][1,2,4]-triazin-7-il]metilquinolina (Etapa 8, 480 mg, 1,10 mmol) em N,N-dimetilformamida (8,7 ml) em um tubo de micro-onda. O tubo foi vedado e desgasificado três vezes e aquecido a 160°C sob irradiação de micro-onda por 500 s. A maioria do solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi dissolvido em acetato de etila, lavado com bicarbonato de sódio aquoso, água e salmoura, e secado em sulfato de magnésio. Filtração e concentração forneceram um resíduo que foi purificado em uma coluna de sílica-gel com metanol em diclorometano (0-6%) para dar o produto desejado. (90%) LCMS (M+H)+: m/z = 381,0.ETAPA 10: ÁCIDO 2-FLUORO-4-[7-(QUINOLIN-6-ILMETIL) IMI- DAZO[1,2-B] [1,2,4]TRIAZIN-2-IL]BENZOICO

[00102] 2-Fluoro-4-[7-(quinolin-6-ilmetil)imidazo[1,2-b][1,2,4]triazin-2- il]benzonitrila (Etapa, 9, 750 mg, 2 mmol) em uma solução concentrada de ácido clorídrico (5,0 ml, 53 mmol) e água (1,0 ml) foi agitada a 105°C durante a noite. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo resultante foi lavado com água e filtrado para fornecer o produto bruto como o sal de HCl que foi diretamente usado na próxima etapa de reação sem outra purificação. LCMS (M+H)+: m/z = 400,0.ETAPA 11: 2-FLUORO-N-[(2R)-2-HIDROXIPROPIL]-4-[7-(QUINOLIN-6- ILMETIL)IMIDAZO[1,2-B][1,2,4]TRIAZIN-2-IL]BENZAMIDA

[00103] Uma mistura de sal de HCl de ácido 2-fluoro-4-[7-(quinolin- 6-ilmetil) imidazo[1,2-b][1,2,4]triazin-2-il]benzoico (180,0 mg, 0,381 mmol, Etapa 10) e hexafluorofosfato de benzotriazol-1- iloxitris(dimetilamino)fosfônio (220 mg, 0,50 mmol) (Aldrich, Cat. #226084) em N,N-dimetilformamida (9,0 ml) foi agitada em t.a. por 3 min. (2R)-1-Aminopropan-2-ol (57 mg, 0,76 mmol) foi depois lentamente adicionado seguido por trietilamina (318,7 μl, 2,287 mmol). A mistura foi agitada a t.a. por 3 h., e depois água foi adicionada. O precipitado foi colhido através de filtração e lavado com acetonitrila aquosa. O precipitado foi dissolvido em 1 N de solução aquosa de HCl, e depois secado através de liofilização para dar o produto desejado como o sal de HCl. LCMS (M+H)+: m/z = 457,3, 1H-RMN (500 MHz, DMSO-d6): 9,30 (s, 1H), 9,20 (dd, J = 5,0, 1,5 Hz, 1H), 9,02 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 8,37 (s, 1H), 8,35 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 8,28 (s, 1H), 8,16 (dd, J = 8,5, 1,5 Hz, 1H), 8,08 (s, 1H), 8,04 (s, 1H), 8,02 (s, 1H), 8,00 (dd, J = 8,5, 5,0, Hz, 1H), 7,80 (t, J = 8,0 Hz, 1 H), 4,75 (s, 2H), 3,79 (m, 1H), 3,21 (m, 2H), 1,09 (d, J = 7,0 Hz, 3H).

[00104] O enantiômero S pode ser feito de acordo com o procedimento acima usando (2S)-1-aminopropan-2-ol ou racemizando o produto e separando os enantiômeros usando as técnicas de separação de quiral padrões (por exemplo, uma coluna de quiral).EXEMPLO 2 2-CLORO-N-METIL-4-(7-(QUINOLIN-6-ILMETIL)IMIDAZO[1,2-B][1,2,4] TRIAZIN -2-IL)BENZAMIDA

ETAPA 1: 6-BROMO-1,2,4-TRIAZIN-3-AMINA

[00105] A uma suspensão de 1,2,4-triazin-3-amina (3,84 g, 40,0 mmol) (Aldrich, Cat. #100625) em acetonitrila (40 ml) foi adicionada água (60 ml) e agitada até que uma solução clara fosse formada. A esta solução foi adicionada N-bromossuccinimida (7,48 g, 42,0 mmol) a 0°C e a mistura resultante foi agitada por 10 min. O banho refrescante foi removido, e a mistura foi permitida aquecer-se para temperatura ambiente. A mistura foi depois diluída com acetato de etila (150 ml) e esfriada para 0°C (banho de água gelada). Na2CO3 (3,0 g) foi adicionado e agitado por 10 min. As duas camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída com acetato de etila (150 ml). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com NaHCO3 saturado, salmoura, secadas em MgSO4, e filtradas. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para fornecer o produto desejado (4 g, 57,15%). LCMS (M+H)+: m/z =175,2/177,2.ETAPA 2: 4-(3-AMINO-1,2,4-TRIAZIN-6-IL)-2-CLOROBENZOATO DE METILA

[00106] A uma mistura de 6-bromo-1,2,4-triazin-3-amina (Etapa 1, 1,0 g, 5,7 mmol) e ácido [3-cloro-4-(metoxicarbonil)fenil]borônico (1,5 g, 6,8 mmol) (VMR, Cat. #100013-404) em 1,4-dioxano (22 ml) foi adi- cionada uma solução de fosfato de potássio (2,4 g, 11 mmol) em água (5,1 ml). A mistura foi desgasificada purgando nitrogênio por 10 min. À mistura foi adicionado tetraquis(trifenilfosfino)paládio(0) (0,20 g, 0,17 mmol) e foi novamente desgasificada com nitrogênio. A mistura foi agitada e aquecida a 82°C (um banho de óleo) por 1 h. A mistura foi esfriada para t.a., diluída com água, agitada por 30 min, e um sólido cinzento formou-se. O sólido foi isolado por filtração, várias vezes en-xaguado com água e secado em ar. O sólido foi depois triturado se-quencialmente com hexanos, diclorometano-hexanos (1:1), e hexanos para fornecer o produto desejado (840 mg, 55,54%). LCMS (M+H)+: m/z = 264,9/267,0.ETAPA 3: 2-CLORO-4-[7-(QUINOLIN-6-ILMETIL)IMIDAZO[1,2- B][1,2,4] TRIAZIN-2-IL]BENZOATO DE METILA

[00107] A mistura de 4-(3-amino-1,2,4-triazin-6-il)-2-clorobenzoato de metila (Etapa 2, 0,840 g, 3,17 mmol) e 1-(2-cloro-1-hidróxi-3- quinolin-6-ilpropil) pirrolidino-2,5-diona (1,11 g, 3,49 mmol, Exemplo 1, Etapa 7) em 1-butanol (11,6 ml) foi agitada a 110°C por 22 h. O solvente foi removido sob pressão reduzida. O resíduo foi triturado com acetato de etila. O precipitado foi colhido através de filtração e lavado com acetato de etila e hexano para render o produto desejado (0,908 g). O licor mãe foi concentrado para a metade do volume. O precipitado foi colhido através de filtração e lavado com acetato de etila e hexano para fornecer o produto adicional desejado (0,342 g). O produto total obtido foi 1,10 g (80,6%). LCMS (M+H)+: m/z = 430,0/431,9. ETAPA 4: ÁCIDO 2-CLORO-4-[7-(QUINOLIN-6-ILMETIL)IMIDAZO[1,2-B] [1,2,4] TRIAZIN-2-IL]BENZOICO

[00108] A uma solução de 2-cloro-4-[7-(quinolin-6- ilmetil)imidazo[1,2-b] [1,2,4]triazin-2-il]benzoato de metila (Etapa 3, 1,10 g, 2,56 mmol) em tetraidrofurano (7,0 ml) e metanol (5,0 ml) foi adicionada uma solução de hidróxido de lítio (0,245 g, 10,2 mmol) em água (3,0 ml). A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 2 h e concentrada sob pressão reduzida para um volume de cerca de 3 ml. O resíduo foi diluído com água (3 ml), e ajustado com 1N de HCl em pH de cerca de 4-5. O precipitado foi filtrado, lavado várias vezes com água e secado em ar durante a noite. O precipitado foi depois triturado sequencialmente com éter e diclorometano (DCM)-hexano (1:1). O produto desejado (638 mg, 60%) foi obtido. LCMS (M+H)+: m/z = 415,9/417,9.ETAPA 5: 2-CLORO-N-METIL-4-(7-(QUINOLIN-6-ILMETIL) IMI- DAZO[1,2-B] [1,2,4]TRIAZIN-2-IL)BENZAMIDA

[00109] Ácido 2-cloro-4-[7-(quinolin-6-ilmetil)imidazo[1,2-b][1,2,4]triazin-2-il]benzoico (Etapa 4, 5,0 mg, 0,012 mmol) e (hexafluo- rofosfato de benzotriazol-1-ilóxi)tripirrolidinofosfônio (10,0 mg, 0,020 mmol) (Aldrich, Cat. #226084) em N,N-dimetilformamida (0,5 ml) foram agitados em t.a. por 3 min. 2,0 M de Metilamina em tetraidrofurano (0,012 ml, 0,023 mmol) foram depois lentamente adicionados a 0°C seguido por trietilamina (6,4 μl, 0,046 mmol). A mistura foi agitada para t.a. por 2 h., e purificada por RP-HPLC (pH = 2) para fornecer o produto desejado como o sal de trifluoroacetato (TFA). LCMS (M+H)+: m/z = 429,3.EXEMPLO 3 2-CLORO-N-[(1S)-1-(5-METIL-1,2,4-OXADIAZOL-3-IL)ETIL]-4-[7- (QUINOLIN-6-ILMETIL)IMIDAZO[1,2-B][1,2,4]TRIAZIN-2- IL]BENZAMIDA

ETAPA 1: [(1S)-2-amino-1-metil-2-OXOETIL]CARBAMATO DE TERC-BUTILA

[00110] A uma solução agitada de ácido (2S)-2-[(terc- butoxicarbonil) amino]propanoico (1 g, 0,005 mol) em THF a 0°C foi adicionada 4-metilmorfolina (0,588 g, 0,00581 mol) seguido pela adição em gotas de cloroformato de isobutila (0,794 g, 0,00581 mol) por 2 min. A reação foi agitada a 0°C por 30 min após os quais uma solução de 30 % p. de hidróxido de amônio (12,0 ml, 0,0925 mol) foi vertida rapidamente na reação. A reação foi aquecida para temperatura ambiente e agitada por 5 h. A mistura de reação foi concentrada. Água foi adicionada e a mistura extraída com acetato de etila. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em MgSO4, filtradas e concentradas para fornecer o produto bruto que foi diretamente usado na próxima etapa de reação sem outra purificação (800 mg, 80%). 1H-RMN (300 MHz, DMSO-d6): 12,40 (s, 1H), 7,10 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 3,88 (m, 1H), 1,35 (s, 9H), 1,20 (d, J = 7,3 Hz, 3H).ETAPA 2: [(1S)-1-CIANOETIL]CARBAMATO DE TERC-BUTILA

[00111] A uma solução agitada de [(1S)-2-amino-1-metil-2-oxoetil] carbamato de terc-butila (Etapa 1, 0,7 g, 0,004 mol) em N,N- dimetilformamida (5 ml) foram adicionados 343 mg de cloreto cianúrico (0,00186 mol) imediatamente. A mistura de reação foi agitada por 4 h. Água foi adicionada e a mistura foi extraída com acetato de etila. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em MgSO4, filtradas, e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado através de cromatografia instantânea em uma coluna de sílica-gel com EtOAc em hexano (30-50%) para render o produto desejado (400 mg, 63%). 1H-RMN (300 MHz, DMSO-d6): 7,74 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 4,48 (m, 1H), 1,40 (s, 9H), 1,35 (d, J = 7,0 Hz, 3H).ETAPA 3: [(1S,2Z)-2-AMINO-2-(HIDRÓXI-IMINO)-1-METILETIL] CARBAMATO DE TERC-BUTILA

[00112] A uma mistura de [(1S)-1-cianoetil]carbamato de terc-butila (Etapa 2, 250 mg, 1,5 mmol) em etanol (3 ml) foram adicionadas trieti- lamina (0,41 ml, 2,9 mmol) e hidroxilamina (58 mg, 1,8 mmol). A mistura foi agitada a 50°C durante a noite. A mistura de reação foi concentrada para fornecer o produto bruto desejado (300 mg) que foi diretamente usado na próxima etapa de reação sem outra purificação. 1H- RMN (300 MHz, DMSO-d6): 8,94 (s, 1H), 6,80 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 5,24 (s, 2H), 4,01 (m, 1H), 1,36 (s, 9H), 1,15 (d, J = 7,0 Hz, 3H).ETAPA 4: {(1S,2Z)-2-[(ACETILÓXI)IMINO]-2-AMINO-1-METILETIL} CARBAMATO DE TERC-BUTILA

[00113] A uma mistura de [(1S,2Z)-2-amino-2-(hidróxi-imino)-1- metiletil] carbamato de terc-butila (Etapa 3, 100 mg, 0,5 mmol) em cloreto de metileno (2 ml) esfriada para 0°C foi adicionada trietilamina (0,10 ml, 0,74 mmol). À mistura foi depois adicionado cloreto de acetila (42 mg, 0,54 mmol) a gotas e a reação foi aquecida para temperatura ambiente. Após agitar em temperatura ambiente por 1 h, a reação foi concentrada. O resíduo foi dissolvido em diclorometano (DCM), lavado com água e salmoura, secado em MgSO4, filtrado e concentrado para fornecer o produto bruto desejado (100 mg, 82,8%) que foi diretamente usado na próxima etapa de reação sem outra purificação. 1H-RMN (300 MHz, DMSO-d6): 6,90 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 6,22 (s, 2H), 4,05 (m, 1H), 2,01 (s, 3H), 1,36 (s, 9H), 1,20 (d, J = 7,0 Hz, 3H).ETAPA 5: (1S)-1-(5-metil-1,2,4-OXADIAZOL-3-IL)ETANAMINA

[00114] A uma solução de {(1S,2Z)-2-[(acetilóxi)imino]-2-amino-1- metiletil} carbamato de terc-butila (Etapa 4, 80 mg, 0,3 mmol) em eta- nol (3 ml) foi adicionada uma solução de triidrato de acetato de sódio (49 mg, 0,36 mmol) em água (1 ml). A mistura foi aquecida a 85°C por 3 h. Etanol foi evaporado; água foi adicionada e extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em MgSO4, filtradas e concentradas. O resíduo foi dissolvido em cloreto de metileno (1 ml). À solução foi adicionado ácido trifluoroacéti- co (1 ml). Após agitar 30 min, a mistura de reação foi concentrada para fornecer o produto desejado como sal de TFA que foi diretamente usado na próxima etapa de reação sem outra purificação. ETAPA 6: 2-CLORO-N-[(1S)-1-(5-METIL-1,2,4-OXADIAZOL-3-IL)ETIL]-4-[7-(QUINOLIN-6-ILMETIL)IMIDAZO[1,2-B][1,2,4]TRIAZIN-2-IL]BENZAMIDA

[00115] A uma solução de ácido 2-cloro-4-[7-(quinolin-6- ilmetil)imidazo [1,2-b][1,2,4]triazin-2-il]benzoico (50 mg, 0,1 mmol, Exemplo 2, Etapa 4) em N,N-dimetilformamida (2 ml, 20 mmol) foi adicionado hexafluorofosfato de N,N,N’,N’-tetrametil-O-(7- azabenzotriazol-1-il)urônio (68 mg, 0,18 mmol) (Aldrich, Cat. #226084) e N,N-di-isopropiletilamina (42 μl, 0,24 mmol). Após agitar a solução por 15 min, sal de TFA de (1S)-1-(5-metil-1,2,4-oxadiazol-3- il)etanamina (18 mg, 0,14 mmol, Etapa 5) foi adicionado e agitado durante a noite. A mistura foi purificada por RP-HPLC (pH = 10) para dar o produto desejado que foi ainda purificado por RP-HPLC (pH = 2) para fornecer o produto puro desejado como o sal de TFA. LCMS (M+H)+: m/z = 525,0/427,0. 1H-RMN (500 MHz, DMSO-d6): 9,22 (s, 1H), 8,98 (dd, J = 5,0, 1,5 Hz, 1H), 9,15 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 8,56 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 8,16 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,14 (dd, J = 8,0, 1,5 Hz, 1H),8,06 (s, 1H), 8,04 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 8,02 (s, 1H), 7,90 (dd, J = 9,0,2,0 Hz, 1H), 7,68 (dd, J = 8,5, 5,0 Hz, 1H), 7,60 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 5,24 (m, 1H), 4,66 (s, 2H), 2,60 (s, 3H), 1,51 (d, J = 7,0 Hz, 3H).

[00116] O enantiômero R pode ser feito de acordo com o procedimento acima usando (1R)-1-(5-metil-1,2,4-oxadiazol-3-il)etanamina ou por meio de racemização do produto e separação dos enantiômeros usando técnicas de separação de quiral padrões (por exemplo, uma coluna de quiral). EXEMPLO 4 N-METIL-5-[7-(QUINOLIN-6-ILMETIL)IMIDAZO[1,2-B][1,2,4]TRIAZIN-2-IL] PIRIDINO-2-CARBOXAMIDA

ETAPA 1: 5-(3-AMINO-1,2,4-TRIAZIN-6-IL)-N-METILPIRIDINO-2-CARBOXAMIDA

[00117] Uma mistura de N-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)piridino-2-carboxamida (200 mg, 0,80 mmol) (VWR, Cat. #200068-640), 6-bromo-1,2,4-triazin-3-amina (130 mg, 0,76 mmol, Exemplo 2, Etapa 1), tetraquis(trifenilfosfino)paládio(0) (40 mg, 0,04 mmol) e carbonato de potássio (0,32 g, 2,3 mmol) em tolueno (1,3 ml), etanol (0,66 ml) e água (0,66 ml) foi aquecida a 120°C por 1,5 h. A mistura foi filtrada e lavada com metanol. O filtrado foi purificado por RP-HPLC (pH = 10) para fornecer o produto desejado (80 mg, 45,54%). LCMS (M+H)+: m/z = 231,4; LCMS (M+H+H2O)+: m/z = 249,3.ETAPA 2: N-METIL-5-[7-(QUINOLIN-6-ILMETIL)IMIDAZO[1,2-B][1,2,4]TRIAZIN -2-IL]PIRIDINO-2-CARBOXAMIDA

[00118] Uma mistura de 5-(3-amino-1,2,4-triazin-6-il)-N- metilpiridino-2-carboxamida (Etapa 1, 6,5 g, 0,022 mol) e 1-(2-cloro-1- hidróxi-3-quinolin-6-ilpropil) pirrolidino-2,5-diona (8,71 g, 0,0273 mol, Exemplo 1, Etapa 7) em 1,2-etanodiol (100 ml) foi agitada a 120°C durante a noite. A mistura de reação foi concentrada. A mistura foi neutralizada a pH=10 com metilamina em solução de THF (2,0M), e depois purificada por cromatografia instantânea em uma coluna de sílica- gel com 5% MeOH em diclorometano para fornecer o produto desejado que foi contaminado com algum material de partida. O produto foi dissolvido em 10% MeOH em diclorometano, e concentrado para um volume de cerca de 2 ml. O sólido resultado foi filtrado, lavado com MeOH (2 ml) para fornecer o produto puro (4,50 g, 50%). O produto foi tratado com 2N de HCl (aquoso) e acetonitrila, e secado por meio de liofilização para dar o produto desejado como o sal de HCl. LCMS (M+H)+: m/z = 396,4, 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): 9,40 (s, 1H), 9,27 (s, 1H), 9,20 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 9,10 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 8,64 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 8,30 (s, 1H), 8,26 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 8,20 (d, J = 8,0, Hz, 1H), 8,19 (s, 1H), 8,17 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,03 (dd, J = 8,0, 5,5 Hz, 1 H), 4,76 (s, 2H), 2,81 (s, 3H).EXEMPLO 5 N,2-DIMETIL-4-[7-(QUINOLIN-6-ILMETIL)IMIDAZO[1,2- B][1,2,4]TRIAZIN-2-IL] BENZAMIDA

ETAPA 1: 4-BROMO-N,2-DIMETILBENZAMIDA

[00119] N,N-Dimetilformamida (10 μl) foi acrescentada a uma mistura de ácido 4-bromo-2-metilbenzoico (1,0 g, 4,6 mmol) em cloreto de oxalila (2,0 ml, 23 mmol). A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi concentrada para fornecer um cloreto de carbonila bruto que foi dissolvido em cloreto de metileno (2 ml). A solução foi adicionada lentamente a uma mistura de metilamina em tetraidrofurano (THF) (2,0 M, 0,465 ml, 9,3 mmol) e trietilamina (1,3 ml, 9,3 mmol) em DCM (10 ml). Após 30 min, a mistura de reação foi ex-tinguida com carbonato de sódio sat. (10 ml) e extraída com DCM (3x20 ml). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4, filtradas, concentradas sob pressão reduzida dar um produto bruto (980 mg, 92%). LCMS (M+H)+: m/z = 228,1/230,2.ETAPA 2: N,2-DIMETIL-4-(4,4,5,5-TETRAMETIL-1,3,2- DIOXABORO- LAN-2-IL) BENZAMIDA

[00120] A uma solução de 4-bromo-N,2-dimetilbenzamida (Etapa 1, 0,50 g, 2,2 mmol) e 4,4,5,5,4’,4’,5’,5’-octametil-[2,2’] bi[[1,3,2]dioxaborolanil] (0,67 g, 2,6 mmol) (Aldrich, Cat. #473294) em 1,4-dioxano (5,28 ml) foi adicionado complexo de [1,1’- bis(difenilfosfino)-ferroceno]dicloropaládio(II) com diclorometano (1:1) (0,09 g, 0,1 mmol) (Aldrich, Cat. #379670), acetato de potássio (0,64 g, 0,0066 mol), e 1,1’-bis(difenilfosfino)ferroceno (0,06 g, 0,1 mmol) (Aldrich, Cat. #177261) sob uma atmosfera de nitrogênio. A mistura de reação foi agitada a 80°C durante a noite. Após esfriar para temperatura ambiente, a mistura foi filtrada, e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado através de cromatografia instantânea em uma coluna de sílica-gel com 10% metanol em diclorometano para fornecer o produto desejado. LCMS (M+H)+: m/z = 276,4.ETAPA 3: 4-(3-AMINO-1,2,4-TRIAZIN-6-IL)-N,2-DIMETILBENZAMIDA

[00121] Uma mistura de N,2-dimetil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)benzamida (Etapa 2, 0,3 g, 0,001 mol), 6-bromo- 1,2,4-triazin-3-amina (0,21 g, 1,2 mmol, Exemplo 2, Etapa 1), tetra- quis(trifenilfosfino)paládio(0) (0,06 g, 0,05 mmol) e carbonato de potássio (0,45 g, 3,3 mmol) em tolueno (1,9 ml), etanol (0,94 ml) e água (0,94 ml). A mistura resultante foi aquecida a 130°C por 2,5 h. A mistura foi diluída com MeOH, filtrada, e lavada com DCM/metanol (90%). O filtrado foi concentrado. O resíduo foi purificado através de cromato- grafia instantânea em uma coluna de sílica-gel com 10% MeOH em DCM para fornecer o produto desejado (110 mg, 41%). LCMS (M+H)+: m/z = 244,3.ETAPA 4: 2-CLORO-3-QUINOLIN-6-ILPROPANAL

[00122] L-prolina (410 mg, 3,5 mmol) foi acrescentada a uma solução de 3-quinolin-6-ilpropanal (3,27 g, 17,6 mmol, Exemplo 1, Etapa 6) em clorofórmio (39 ml) a 0°C seguido por adição de N-clorossuccinimida (2,48 g, 18,5 mmol) e a mistura de reação foi lentamente aquecida para temperatura ambiente e agitada por 1 h, monitorando por LCMS. O sol-vente foi concentrado sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado em uma coluna de sílica-gel com acetato de etila em hexano (0-50%) para dar o produto desejado. (95%) LCMS: (M+H+H2O) = 237,9/239,9.ETAPA 5: N,2-DIMETIL-4-[7-(QUINOLIN-6-ILMETIL)IMIDAZO[1,2- B][1,2,4] TRIAZIN-2-IL]BENZAMIDA

[00123] Uma mistura de 4-(3-amino-1,2,4-triazin-6-il)-N,2- dimetilbenzamida (Etapa 3, 0,30 g, 1,2 mmol) e 2-cloro-3-quinolin-6- ilpropanal (Etapa 4, 0,32 g, 1,5 mmol) em etanol (2,5 ml) em um tubo vedado foi agitada a 120°C durante a noite. Após esfriar, a mistura de reação foi purificada por RP-HPLC (pH = 2) para fornecer o produto desejado (150 mg) como o sal de TFA. LCMS (M+H)+: m/z = 409,3, 1H- RMN (400 MHz, CD3OD): 9,64 (s, 1H), 9,21 (d, J = 5,0, 1H), 9,18 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 8,44 (s, 1H), 8,39 (s, 1H), 8,32 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 8,27 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 8,12 (dd, J = 9,0, 5,0, Hz, 1H), 8,05 (s, 1H), 8,03 (s, 1H), 7,57 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 4,86 (s, 2H), 2,92 (s, 3H), 2,48 (s, 3H).

EXEMPLO A ENSAIOS DA ENZIMA c-MET CINASE IN VITRO

[00124] Os compostos da invenção foram triados in vitro para sua habilidade para inibir a atividade de c-Met cinase. Os valores de IC50 para a inibição de c-Met cinase foram determinados como descrito na literatura com algumas modificações (Wang, X., et al., Mol. Cancer Ther. 2003, 2(11):1085-1092; Calic, M., et al., Croatica Chemical ACTA. 2005, 78(3):367-374). Brevemente, proteína de fusão do domínio catalítico de c-Met marcado com histidina (Invitrogen, #PV3143) foi usado para o ensaio. Medições de IC50 foram com base no grau de fosforilação de poli Glu-Tyr (Sigma-Aldrich, #P0275) que foi revestido (0,01 mg/por poço) em microplaca de 96 poços (R&D Systems, #DY990). A reação foi realizada em uma solução de 50 μl contendo 50 mM HEPES (pH 7,5), 10 mM MnCl2, 10 mM MgCl2, 0,5 mM DTT, 100 μM Na3VO4, 5 μM ATP (Cell Signaling Techonology, #9804) e diluições seriais do composto de teste. A reação durou durante 25 minutos a 30°C. Após a reação ter sido completada, os conteúdos das placas foram descartados. As placas foram depois lavadas com TBS-T (250 μL/poço, 5x) e depois bloqueadas com TBS-T contendo 1% de BSA por 2 horas. O conteúdo das placas foi descartado, e 100 μl (por poço) de anticorpo anti-fosfo-tirosina marcado com peroxidase (Sigma, #A5964) diluído (1:60.000) em 1% de BSA contendo TBS-T foram depois adicionados e incubados por 1 hora. As placas foram lavadas com TBS-T (250 μL/poço, 5x) e seguido pela reação de cor usando 100 μl (1:1 mistura) de H2O2 e tetrametilbenzidina (R&D Systems, #DY999). A reação foi parada em minutos com 100 μl de 2 N de H2SO4. A densidade óptica foi imediatamente medida usando uma leitora de micro- placa a 450 nm com correção de comprimento de onda a 540 nm. Os valores de IC50 foram calculados com o software GraphPad Prism. A faixa linear (isto é, o período de tempo no qual a taxa permaneceu equivalente à taxa inicial) foi determinada para a cinase e as determinações de IC50 foram executadas dentro desta faixa.

[00125] Wang, X., et al. Potent and selective inhibitors of the Met [hepatocyte growth factor/scatter factor (HGF/SF) receptor] tyrosine kinase block HGF/SF-induced tumor cell growth and invasion. Mol. Cancer Ther. 2003, 2(11):1085-1092.

[00126] Calic, M., et al. Flavonoids as inhibitors of Lck and Fyn kinases. Croatica Chemica ACTA. 2005, 78(3):367-374.

[00127] Os resultados de IC50 para os compostos da invenção são mostrados abaixo:

EXEMPLO B ENSAIOS DE PROLIFERAÇÃO/SOBREVIVÊNCIA CELULAR

[00128] Linhagens celulares representando vários cânceres humanos (gástrico SNU-1 e SUN-5, pulmonar A549 e NCI-H441, glioblastoma U-87, cólon HT-29, renal 786-O, pancreático PC-3) podem ser obtidas da American Type Culture Collection e habitualmente mantidas em meios de cultura e condições recomendadas pela ATCC. Densidade celular ótima usada no ensaio de proliferação/sobrevivência pode ser predeterminada para linhagens celulares individuais. Os compostos são triados para sua habilidade de inibir proliferação/sobrevivência das células, e os valores de IC50 são determinados. Abaixo estão os protocolos de amostra para ensaios de proliferação/sobrevivência celular de SNU-5 e SNU-1. Células de SNU-5 e SNU-1 são semeadas em placas de cultura de células de 96 poços a 4000 células/poço e 2000 células/poço respectivamente em meios apropriados contendo 2% de FBS e suplementado com diluições seriais de compostos individuais em um volume final de 100 μL/poço. Após 72 horas de incubação, 24 μl de reagente de CellTiter 96® AQueous One Solution (Pro- mega, #G3581) é adicionado a cada poço (concentração final = 333 μg/ml), e as placas são incubadas por 2 mais horas em uma incubadora a 37°C. A densidade óptica é medida na faixa linear usando uma leitora de microplaca a 490 nm com correção de comprimento de onda a 650 nm. Os valores de IC50 são calculados com o software GraphPad Prism. Para os ensaios de proliferação usando células A549, NCI-H441, U-87, HT-29, 786-0 e PC-3, as células são primeiro privadas por 48 horas em condição de soro baixa (0,1-0,5% de FBS em meios de cultura apropriados), depois tratadas com concentrações diferentes de compostos por 2 horas. Após as células serem tratadas com HGF (50 ng/mL) (R&D, #294-HGN) por 24 horas, reagente CellTiter 96® AQueous One Solution é adicionado e as placas são incubadas por 2 horas. Os resultados são registrados com uma leitora de placa.

EXEMPLO C ENSAIOS DE FOSFORILAÇÃO DE C-MET BASEADOS EM CÉLULA

[00129] O efeito inibidor dos compostos em fosforilação c-Met em linhagens celulares relevantes (linhagens celulares de câncer gástrico SNU-5, pulmonar A549 e NCI-H441, glioblastoma U-87, cólon HT-29, rim 786-O e pancreático PC-3 e linhagem celular de HUVEC) pode ser avaliado usando a análise de imunotingimento e ensaios de fosforila- ção de c-Met com base em ELISA. As células são crescidas em meios de cultura apropriados e tratadas com várias concentrações de compostos individuais. Para as células SNU-5, HT-29, 786-0, as células são crescidas em meios apropriados suplementares com 0,2% ou 2% de FBS e tratadas com compostos por 3-4 horas. Extratos de proteína de células inteiras são preparados usando reagentes e um protocolo (#FNN0011) obtido de Biosource International com modificações leves. Brevemente, extratos de proteína são feitos através de incubação em tampão de lise com inibidores de protease e de fosfatase [50 mM HEPES (pH 7,5), 100 mM NaCl, 1,5 mM MgCl2, 10% Glicerol, 1% Triton X-100, 1 mM ortovanadato de sódio, 1 mM fluoreto de sódio, apro- tinina (2 μg/ml), leupeptina (2 μg/ml), pepstatina A (2 μg/ml), e fluoreto de fenilmetilsulfonila (1 mM)] a 4°C. Os extratos de proteína são limpados dos restos celulares através de centrifugação a 14.000 x g durante 20 minutos. Para as células A549, H441, U-87 e PC-3, as células são privadas de soro (0,2% de FBS) por pelo menos 24 horas, depois pré-tratadas com várias concentrações de compostos por 1 hora. Extratos de células inteiras são preparados após as células serem tratadas com HGF (50 ng/mL) durante 10 minutos.

ANÁLISE DE IMUNOTINGIMENTO

[00130] Anticorpos relevantes são obtidos de fontes comerciais: an-ticorpos policlonais de coelho incluíram c-Met anti-humano (Santa Cruz Biotechnology, #sc-161) e c-Met antifosforilado (Biosource Inter-national, pY1230/4/5 e pY1003). Para imunotingimento, 10-20 μg de extratos de proteína de condições de tratamento individuais são resol-vidos através de eletroforese em 10% gel de SDS-PAGE, e eletro- transferido para uma membrana de nitrocelulose (ou PVDF). A membrana é bloqueada em PBS contendo 3% de leite e 0,1% de Tween-20 por 1 hora, e depois incubada com anticorpos anti-c-Met primários por meio de solução de bloqueio por 1 hora. Após 3 lavagens, a membrana é incubada com anticorpos secundários conjugados com raiz forte apropriados por 1 hora. Após lavagem final, o borrão é incubado com reagente de detecção de quimiluminescência durante 5 minutos e ex-posto a filme de Raio X. As imagens são varridas, quantificadas e cor-rigidas com c-Met total, e os valores de IC50 são calculados. Os com-postos tendo um IC50 de 10 μM ou menos são considerados ativos.

ELISA

[00131] Extratos proteicos celulares são analisados usando um kit de ELISA de fosfo-c-Met humano de acordo com as instruções do fabricante (R&D Systems, #DYC2480). Quantidades ótimas dos extratos de proteína são predeterminadas para linhagens celulares individuais. Brevemente, para o ensaio, as quantidades apropriadas de extratos de proteína são capturadas com um anticorpo de c-Met anti-humano de captura por 2 horas em uma microplaca de 96 poços. Após as lavagens, um anticorpo de detecção (anticorpo anti-fosfo-tirosina conjugado com HRP) é adicionado e incubado por 2 horas. Após as lavagens adicionais, 100 μl de solução de substrato (mistura de H2O2 e tetrame- tilbenzidina 1:1) são adicionados em cada bem e a reação é interrompida com 2 N de H2SO4 dentro de uma quantidade apropriada de tempo durante o desenvolvimento da cor. A densidade óptica é medida na faixa linear usando uma leitora de microplaca a 450 nm com correção de comprimento de onda a 540 nm. Os valores de IC50 são calculados com o software GraphPad Prism.

[00132] Várias modificações da invenção, além daquelas descritas aqui, serão evidentes àqueles versados na técnica a partir da descrição anterior. Tais modificações são também intencionadas cair dentro do escopo das reivindicações em anexo. Cada referência, incluindo todas patentes, pedidos de patente, e publicações, citados no presente pedido de patente, é aqui incorporada por referência em sua totalidade.

Claims (6)

1. Composto, caracterizado pelo fato de que é:2-fluoro-N-[(2R)-2-hidroxipropil]-4-[7-(quinolin-6- ilmetil)imidazo[1,2-b][1,2,4] triazin -2-il]benzamida; ou 2-cloro-N-[(1S)-1-(5-metil-1,2,4-oxadiazol-3-il)etil]-4-[7- (quinolin-6-ilmetil)imidazo [1,2-b][1,2,4]triazin-2-il]benzamida; ou um sal farmaceuticamente aceitável de qualquer um dos mencionados acima.

2. Composto, caracterizado pelo fato de que é 2-fluoro-N- [(2R)-2-hidroxipropil]-4-[7-(quinolin-6-ilmetil)imidazo[1,2-b][1,2,4] triazin-2- il]benzamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

3. Composição, caracterizada pelo fato de que compreende um composto como definido na reivindicação 1, ou um sal farmaceuti- camente aceitável do mesmo, e pelo menos um veículo farmaceutica- mente aceitável.

4. Método in vitro de inibir a atividade de c-Met cinase, ca-racterizado pelo fato de que compreende contatar a dita cinase com um composto como definido na reivindicação 1, ou um sal farmaceutica- mente aceitável do mesmo.

5. Método in vitro de inibir a via de sinalização da HGF/c- Met cinase em uma célula, caracterizado pelo fato de que compreende contatar a dita célula com um composto como definido na reivindicação 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

6. Método in vitro de inibir a atividade proliferativa de uma célula, caracterizado pelo fato de que compreende contatar a dita célula com um composto como definido na reivindicação 1, ou um sal farma- ceuticamente aceitável do mesmo.