KR101797567B1 - 큰땅빈대 또는 애기땅빈대의 추출물 또는 분획물을 유효성분으로 포함하는 피부 주름 예방 또는 개선용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 큰땅빈대 또는 애기땅빈대의 추출물 또는 분획물을 유효성분으로 포함하는 피부 주름 예방 또는 개선용 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 큰땅빈대 또는 애기땅빈대의 추출물 및 분획물은 피부 조직 및 이의 탄력과 상관관계가 있는 콜라게네이즈 및 엘라스테이즈를 억제하는 효과를 가지며, 특히 피부 자극에 의하여 주름 발생에 관여하는 것으로 알려진 효소인 MMP-1을 억제하는 효과를 가지고 있어 피부 주름 예방 또는 개선 효과를 가진다. 더욱이 세포 독성을 가지지 않는 바, 본 발명의 큰땅빈대 또는 애기땅빈대의 추출물 및 분획물은 화장료, 식품, 의외약품 등으로 다양하게 활용될 수 있다는 이점이 있다.

Description

큰땅빈대 또는 애기땅빈대의 추출물 또는 분획물을 유효성분으로 포함하는 피부 주름 예방 또는 개선용 조성물{Composition for preventing or improving of skin wrinkle comprising a extracts or fractions of Euphorbia maculata or Euphorbia supina}

본 발명은 큰땅빈대 또는 애기땅빈대의 추출물 또는 분획물을 유효성분으로 포함하는 피부 주름 예방 또는 개선용 조성물에 관한 것이다.

나이가 들면 피부노화현상으로 주름이 지게 된다. 피부 노화의 원인은 크게 노령화 등의 내적 요인과 환경적 요인으로 분류할 수 있으며, 생기는 부위에 따라 목주름, 이마주름, 미간주름, 눈밑 잔주름, 입술주위 잔주름, 얼굴 전체에 생기는 미세한 주름 등이 있다. 피부 주름은 진피 내에 있는 콜라겐 섬유의 감소와 변성으로 생긴다. 또, 탄력 섬유의 변성도 피부의 탄력성을 떨어뜨려 피부의 주름을 악화시킨다.

대부분 잔주름은 20대 후반에서 30대에 접어들면서 생기기 시작해 웃을 때 점점 뚜렷이 나타나며 40대에 접어들면서 더욱 뚜렷해져 굵은 주름이 된다. 이러한 주름 생성의 예방 및 완화를 위한 광범위한 연구가 발전되면서 피부에 있어서 콜라겐의 중요한 기능들이 밝혀지고 있으며 피부 내 콜라겐의 합성 촉진 및 원천적으로 콜라겐 층의 붕괴를 방지하여 나이가 들며 생기는 피부주름을 억제하고자 하는 연구가 진행되고 있다.

아울러, 환경 요인, 특히 자외선으로부터 유도된 MMPs에 의해 과도하게 기질이 분해되면서 조직의 손상에 의하여 피부 주름이 지게 된다. UV_A는 진피의 섬유모세포에서 MMP-1, MMP-2 및 MMP-3의 발현을 유도하며, UV_B는 정상 각질형성세포에서 MMP-1, MMP-3 및 MMP-9의 발현을 유도한다. 최근 노화에 따른 MMPs의 증가와 관련된 세포 신호 전달 경로는 주로 MAP (stress-activated mitogen-activated protein) kinase pathway가 관여한다고 보고되어 있다. 따라서, 자외선으로부터 노출된 피부는 MAPK signal을 활성화 시켜, AP-1의 발현을 유도하게 되고, 이러한 과정 중에서 교원질 분해효소인 MMPs의 발현을 증가시켜 콜라겐의 분해와 합성이 감소되면서 반복된 자외선 노출에 의해 주름이 형성된다.

한편, 큰땅빈대(Euphorbia maculata)는 대극과에 속하는 일년생 초본으로 약간 적자색을 띠고 한쪽 방향으로 짧은 털이 있다. 식물체에 상처가 나면 유약이 나오고 가지는 보통 2개씩 갈라진다. 잎은 마주나며 수평으로 퍼지면서 2줄로 배열한다. 가장자리에 잔 톱니가 있고 표면은 청록색, 뒷면은 회록색이다. 앞바닥이 비대칭하고, 아주 드물게 붉은 반점이 있기도 하다. 꽃은 8~9월에 줄기 끝부분에서 연한 적자색 잔모양 꽃차례로 핀다. 큰땅빈대는 우리나라 전국에 귀화되어 자라고, 유럽, 아시아, 북미 등에 널리 분포되어 있다.

또한, 애기땅빈대(Euphorbia supina)는 대극과(Euphorbiaceae)에 속하는 일년생 초본으로, 원줄기는 지면을 따라 퍼지며 길이는 10~25㎝이고, 잎과 더불어 털이 다소 있고, 중앙부에는 붉은빛이 도는 갈색 반점이 있으며 백색의 유액이 함유되어 있다. 잎은 길이 5~10㎜, 너비 4~6㎜의 긴 타원형으로 마주나며 가장자리에 가는 톱니가 있고 수평으로 퍼져서 두 줄로 배열된다. 잎의 윗면은 진한 녹색으로 윤이 나고 뒷면은 녹백색이며, 잎자루는 몹시 짧다. 애기땅빈대는 우리나라와 중국, 일본, 동남아시아, 남북미 등 온대와 열대지방에 널리 분포되어 있다.

이에 본 발명자들은 천연물인 큰땅빈대 및 애기땅빈대를 활용하여 피부 상태를 개선하기 위하여 다양한 약리효과에 대하여 실험을 수행하던 중 큰땅빈대 및 애기땅빈대의 추출물 및 분획물이 우수한 주름 예방 또는 개선 효과를 가짐을 확인하고 본 발명을 완성하였다.

KR등록특허공보 제10-0553174호 KR등록특허공보 제10-0893912호

본 발명의 목적은 큰땅빈대 또는 애기땅빈대의 추출물 또는 분획물을 유효성분으로 포함하는 주름 예방 또는 개선용 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또다른 목적은 큰땅빈대 또는 애기땅빈대의 추출물 또는 분획물을 유효성분으로 포함하는 주름 예방 또는 개선용 피부 외용제를 제공하는 것이다.

상기 과제를 달성하기 위하여, 본 발명은 큰땅빈대 또는 애기땅빈대의 추출물 또는 분획물을 유효성분으로 포함하는 주름 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 큰땅빈대 또는 애기땅빈대의 추출물 또는 분획물을 유효성분으로 포함하는 주름 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 큰땅빈대 또는 애기땅빈대의 추출물 또는 분획물을 유효성분으로 포함하는 주름 예방 또는 개선용 피부 외용제를 제공한다.

본 발명의 큰땅빈대 또는 애기땅빈대의 추출물 및 분획물은 피부 조직 및 이의 탄력과 상관관계가 있는 콜라게네이즈 및 엘라스테이즈를 억제하는 효과를 가지며, 특히 피부 자극에 의하여 주름 발생에 관여하는 것으로 알려진 효소인 MMP-1을 억제하는 효과를 가지고 있어 피부 주름 예방 또는 개선 효과를 가진다. 더욱이 세포 독성을 가지지 않는 바, 본 발명의 큰땅빈대 또는 애기땅빈대의 추출물 및 분획물은 화장료, 식품, 의외약품 등으로 다양하게 활용될 수 있다는 이점이 있다.

도 1은 본 발명의 큰땅빈대 추출물 및 분획물을 제조하는 과정을 도식화하여 나타낸 도이다.
도 2는 본 발명의 애기땅빈대 추출물 및 분획물을 제조하는 과정을 도식화하여 나타낸 도이다.
도 3은 큰땅빈대 추출물 및 분획물의 콜라게네이즈(collagenase) 활성 억제 효과를 확인한 결과를 나타낸 도이다. 구체적으로 도 3a는 큰땅빈대 추출물에 대한 결과를 나타낸 도이고, 도 3b는 큰땅빈대 분획물에 대한 결과를 나타낸 도이다.
도 4는 애기땅빈대 추출물 및 분획물의 콜라게네이즈 활성 억제 효과를 확인한 결과를 나타낸 도이다. 구체적으로 도 4a는 애기땅빈대 추출물에 대한 결과를 나타낸 도이고, 도 4b는 애기땅빈대 분획물에 대한 결과를 나타낸 도이다.
도 5는 큰땅빈대 추출물 및 분획물의 엘라스테이즈(elastase) 활성 억제 효과를 확인한 결과를 나타낸 도이다. 구체적으로는 도 5a는 큰땅빈대 추출물에 대한 결과를 나타낸 도이고, 도 5b는 큰땅빈대 분획물에 대한 결과를 나타낸 도이다.
도 6은 애기땅빈대 추출물 및 분획물의 엘라스테이즈 활성 억제 효과를 확인한 결과를 나타낸 도이다. 구체적으로는 도 6a는 애기땅빈대 추출물에 대한 결과를 나타낸 도이고, 도 6b는 애기땅빈대 분획물에 대한 결과를 나타낸 도이다.
도 7은 MTT 분석을 통한 큰땅빈대 추출물 및 분획물의 세포 독성을 확인한 결과를 나타낸 도이다. 구체적으로 도 7a는 큰땅빈대 추출물에 대한 결과를 나타낸 도이고, 도 7b는 큰땅빈대 분획물에 대한 결과를 나타낸 도이다.
도 8은 MTT 분석을 통한 애기땅빈대 추출물 및 분획물의 세포 독성을 확인한 결과를 나타낸 도이다. 구체적으로 도 8a는 애기땅빈대 추출물에 대한 결과를 나타낸 도이고, 도 8b는 애기땅빈대 분획물에 대한 결과를 나타낸 도이다.
도 9는 ELISA를 통한 큰땅빈대 추출물 및 분획물의 MMP-1 생성 억제 효과를 확인한 결과를 나타낸 도이다. 구체적으로 도 9a는 큰땅빈대 추출물에 대한 결과를 나타낸 도이고, 도 9b는 큰땅빈대 분획물에 대한 결과를 나타낸 도이다.
도 10은 ELISA를 통한 애기땅빈대 추출물 및 분획물의 MMP-1 생성 억제 효과를 확인한 결과를 나타낸 도이다. 구체적으로 도 10a는 애기땅빈대 추출물에 대한 결과를 나타낸 도이고, 도 10b는 애기땅빈대 분획물에 대한 결과를 나타낸 도이다.

본 발명은 큰땅빈대 또는 애기땅빈대의 추출물 또는 분획물을 유효성분으로 포함하는 주름 예방 또는 개선용 조성물을 제공한다.

이하 본 발명을 상세히 설명한다.

일례로 본 발명은 큰땅빈대 또는 애기땅빈대의 추출물 또는 분획물을 유효성분으로 포함하는 주름 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명에 있어서, '추출물'은 천연물로부터 어떤 활성 성분을 적당한 용매로 분리한 것을 모두 포함하는 개념으로, 즉, 본 발명에서 사용되는 추출물은 추출 또는 정제의 각 단계에서 얻어지는 모든 추출물 및 정제물, 그들의 희석액, 농축액 또는 건조물을 모두 포함하는 개념이다.

본 발명에 있어서, '분획물'은 상기 추출물에 추가로 적당한 용매를 이용하여 분획한 것을 모두 포함하는 개념이다.

본 발명에 있어서, 큰땅빈대 추출물 및 애기땅빈대 추출물은 다양한 수확시기에 수확한 큰땅빈대나 애기땅빈대 및 이의 다양한 부위로부터 추출 또는 분획될 수 있으며, 바람직하게는 가을경에 수확한 큰땅빈대나 애기땅빈대로부터 추출 또는 분획될 수 있다. 또한, 상기 큰땅빈대 추출물 및 애기땅빈대 추출물은 큰땅빈대나 애기땅빈대의 꽃, 잎, 줄기, 뿌리 또는 전초로부터 추출 또는 분획될 수 있고, 바람직하게는 큰땅빈대의 전초, 애기땅빈대의 전초로부터 추출 또는 분획될 수 있으나, 이제 제한되는 것은 아니다.

상기 추출물 또는 분획물은 당업계에 공지된 추출, 분리 및 분획하는 방법을 사용하여 천연으로부터 추출, 분리 및 분획하여 수득한 것을 사용할 수 있으며, 다양한 추출 또는 분획 용매와 추출 또는 분획 방법에 따라 추출될 수 있다는 것이 특징이다.

상기 추출물은 큰땅빈대 또는 애기땅빈대의 조추출물, 극성용매 가용 추출물 또는 비극성용매 가용 추출물을 모두 포함하며, 그 중에서도 극성용매 가용 추출물인 것이 바람직하다. 더욱이 상기 극성용매 가용 추출물은 물 또는 유기용매, 예를 들어 상기 용매로는 물, 메탄올(methanol), 에탄올(ethanol), 프로판올(propanol), 이소프로판올(isopropanol), 부탄올(butanol) 등의 탄소수 1 내지 4의 알코올 등을 단독으로 또는 2종 이상 혼합한 것일 수 있고, 바람직하게는 에탄올이며, 보다 바람직하게는 50 내지 80%의 에탄올일 수 있으며, 가장 바람직하게는 70%의 에탄올일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

상기 분획물은 헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부탄올, 물 또는 이들의 혼합용매일 수 있으며, 특히 클로로포름, 에틸아세테이트 및 물을 이용하여 순차적으로 분획하여 얻어지는 분획물인 것이 바람직하다.

본 발명에 있어서, 상기 추출물의 추출 온도는 50~100 ℃인 것이 바람직하나, 이에 제한되지 않는다. 또한 추출방법으로는 열수추출법, 냉침추출법, 환류냉각추출법, 용매추출법, 수증기증류법, 초음파추출법, 용출법, 압착법 등의 방법이 사용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

상기와 같이 물 또는 유기용매를 이용하여 추출물을 얻은 이후에는 당업계에서 알려진 통상의 방법으로 상온에서 냉침, 가열 및 여과하여 액상물을 얻을 수 있으며, 또는 추가로 용매를 증발, 분무건조 또는 동결건조할 수도 있다. 아울러, 상기와 같이 추출된 추출물을 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조할 수도 있다.

또한 본 발명에 있어서, 상기 추출물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(silica gel column chromatography), 박층크로마토그래피(thin layer chromatography), 고성능 액체 크로마토그래피(high performance liquid chromatography) 등과 같은 다양한 크로마토그래피를 이용하여 추가로 정제된 분획으로도 얻을 수 있다.

본 발명에 있어서, '주름'은 피부가 쇠하여 생긴 잔줄을 지칭하는 개념으로, 햇빛을 포함한 다양한 원인에 의하여 진피 속의 콜라겐 섬유, 탄력섬유 등에 변성이 일어나고, 피부 수분이 감소하여 피부의 탄력이 떨어져 피부가 접히게 되면서 주름이 만들어지는 것이 특징이다. 이에 일부 피하 지방이 흡수되어 주름을 더욱 악화시킨다.

본 발명에 있어서, '예방'은 조성물의 투여에 의해 주름 발생을 억제시키거나 주름의 발생을 지연시키는 모든 행위를 의미한다.

본 발명에 있어서, '개선'은 조성물의 투여에 의해 주름의 개수가 줄거나 피부 표면이 보다 탄력성 있도록 하는 모든 행위를 의미한다.

이에 본 발명의 '주름 예방 또는 개선'은 피부가 쇠하여 생긴 잔줄을 억제시키거나 이의 발생을 지연시키고, 피부가 보다 탄력적으로 보이도록 하는 모든 행위를 의미하는 것으로, 본 발명의 큰땅빈대 및 애기땅빈대는 단순한 자외선 노출에 의한 건조, 피부 탄력 약화에 의한 개선 효과 외에도 그 외 발생할 수 있는 다양한 요인들에 의한 콜라겐 또는 엘라스틴의 분해를 억제함으로써 우수한 주름 개선 효과를 가지는 것을 특징으로 한다.

본 발명에 있어서, '화장료 조성물'은 인체의 외관을 아름답게 하는 모든 물건을 포함하는 개념으로, 상기 화장료 조성물은 큰땅빈대 추출물 또는 분획물과 애기땅빈대 추출물 또는 분획물 외에 화장료 조성물에 통상적으로 사용되는 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료, 향료 등과 같은 통상적인 보조제 및 담체가 더 포함될 수 있다. 예를 들어, 상기 화장료 조성물에는 글리세린, 부틸렌 글라이콜, 폴리옥시에칠렌 경화피마자유, 토코페릴 아세테이트, 시트릭산, 판테놀, 스쿠알란, 소듐 시트레이트, 알란토인 등의 보조성분이 추가로 더 포함될 수 있다.

본 발명에 있어서, 화장료 조성물은 기본적으로 피부에 도포되는 것이므로, 당업계의 화장료 조성물을 참조하여 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있다. 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 아이크림, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 마스크팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는, 담체 성분으로 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화아연 등이 포함될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는, 담체 성분으로 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트, 폴리아미드 파우더 등이 포함될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄, 디메틸 에테르 등의 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는, 담체 성분으로 용매, 용해화제, 유탁화제 등이 포함될 수 있고, 구체적으로 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜, 소르비탄의 지방산 에스테르 등이 포함될 수 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는, 담체 성분으로 물, 에탄올, 프로필렌글리콜 등의 액상 희석제; 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르 등의 현탁제; 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가, 트라칸트 등이 포함될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는, 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성유, 라놀린유도체, 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 포함될 수 있다.

일례로, 본 발명은 큰땅빈대 또는 애기땅빈대 추출물 또는 분획물을 유효성분으로 포함하는 주름 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.

본 발명에 있어서, '건강기능식품'이란 식품에 물리적, 생화학적, 생물공학적 수법 등을 이용하여 해당 식품의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 식품군이나 식품 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병 방지와 회복 등에 관한 체내조절기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계하여 가공한 식품으로, 장기적으로 복용하였을 때 인체에 무해하여야 한다.

상기 건강기능식품에는 식품학적으로 허용 가능한 식품 보조 첨가제를 포함할 수 있으며, 건강기능식품의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더욱 포함할 수 있다.

본 발명의 건강기능식품 조성물을 식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조 시에 본 발명의 조성물은 원료에 대하여 15 중량% 이하, 바람직하게는 10 중량% 이하의 양으로 첨가된다. 그러나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.

상기 건강기능식품의 종류에 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 건강기능식품의 예로는 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 해당 식품의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 식품군이나 식품 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병 방지와 회복 등에 관한 체내조절기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계된 식품을 모두 포함한다.

상기 외에 본 발명의 건강기능식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 포함할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 식품 조성물은 천연 과일주스, 과일주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 포함할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0.01 내지 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

일례로, 본 발명은 큰땅빈대 또는 애기땅빈대의 추출물 또는 분획물을 유효성분으로 포함하는 주름 예방 또는 개선용 피부 외용제를 제공한다.

본 발명에 있어서, 상기 피부 외용제는 상기 큰땅빈대 또는 애기땅빈대의 추출물 또는 분획물과 함께 주름의 예방 또는 치료 효과를 갖는 공지의 유효성분을 1종 이상 더 함유할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 피부 외용제는 목적하는 신체 부위에 따라 그 제형이 특별히 한정되지 않으며, 당업계의 공지기술을 참조하여 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있다. 예를 들어, 액제, 연고제, 크림제, 로션제, 스프레이제, 패취제, 오일제, 왁스제, 유탁액제, 현탁액제, 겔제 또는 에어로졸제 등 형태로 사용될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명에 있어서, 상기 피부 외용제는 통상적인 첨가제, 예를 들어 보존제, 의약 침투를 보조하는 용매, 연고 및 크림의 경우 연화제 등을 포함할 수 있으며, 에탄올 또는 올레일 알코올과 같은 통상적 담체를 함유할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 피부 외용제는 상술한 성분에 한정되지 않고, 필요에 따라 통상의 피부 외용제에 배합되는 다른 성분을 포함할 수 있다. 예를 들어, 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면활성제, 유기 또는 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 등을 포함할 수 있다.

중복되는 내용은 본 명세서의 복잡성을 고려하여 생락하며, 본 명세서에서 달리 정의되지 않은 용어들은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상적으로 사용되는 의미를 갖는 것이다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예, 실험예 및 제조예를 들어 상세하게 설명하기로 한다. 다만 하기의 실시예, 실험예 및 제조예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범위가 하기 실시예, 실험예 및 제조예에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 실시예, 실험예 및 제조예는 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.

실시예 1. 큰땅빈대 추출물 및 분획물의 제조

10월경에 수확한 후 공기 중에서 건조시킨 큰땅빈대(Euphorbia maculata, EM) 전초 500g을 환류추출장치를 이용하여 70%(v/v) 에탄올 또는 물로 50~100℃에서 2회 반복 추출하여 큰땅빈대 에탄올 추출물 71.45 g(EMEE, 수율 14.29%) 및 큰땅빈대 물 추출물 152.00 g(EMDE, 수율 30.40%)을 수득하였다.

이 후 큰땅빈대 분획물을 얻기 위하여 추가적인 분획과정을 거쳤고, 구체적으로는 다음과 같다. 상기에서 얻은 큰땅빈대 에탄올 추출물 50g을 물 500㎖에 녹인 다음, 클로로포름(Chloroform, CHCl₃) 층을 분리하는 과정을 3회 반복하였다. 이렇게 얻어진 클로로포름 층을 합하여 감압 농축하여 분말 형태의 큰땅빈대 클로로포름 분획물 7.745g(EMDM, 수율 15.49%)을 얻었다. 이 후 남은 물 층에 에틸아세테이트(ethyl acetate, CH₃COOC₂H₅)를 가하여 상기와 동일한 방법으로 분획하였으며, 감압 농축 후 동결건조하여 분말형태의 큰땅빈대 에틸아세테이트 분획물 12.635g(EMEA, 수율 25.27%)과 물 분획물 17.095g(EMH₂O, 수율 34.19%)을 얻었다. 상기 일련의 과정을 도식화하여 도 1에 나타내었다.

실시예 2. 애기땅빈대 추출물 및 분획물의 제조

10월경에 수확한 후 공기 중에서 건조시킨 애기땅빈대(Euphorbia supina, ES) 전초 250g을 환류추출장치를 이용하여 70%(v/v) 에탄올 또는 물로 50~100℃에서 2회 반복 추출하여 애기땅빈대 에탄올 추출물 60g(ESEE, 수율 24%) 및 애기땅빈대 물 추출물 152.00 g(ESDE, 수율 30.40%)을 수득하였다.

이 후 애기땅빈대 분획물을 얻기 위하여 추가적인 분획과정을 거쳤고, 구체적으로는 다음과 같다. 상기에서 얻은 애기땅빈대 에탄올 추출물 50g을 물 500㎖에 녹인 다음 클로로포름(Chloroform, CHCl₃) 층을 분리하는 과정을 3회 반복하였다. 이렇게 얻어진 클로로포름 층을 합하여 감압 농축하여 분말 형태의 애기땅빈대 클로로포름 분획물 9.6g(ESDM, 수율 19.2%)을 얻었다. 이 후 남은 물 층에 에틸아세테이트(ethyl acetate, CH₃COOC₂H₅)를 가하여 동일한 방법으로 분획하였으며, 감압 농축 후 동결건조하여 분말형태의 애기땅빈대 에틸아세테이트 분획물 25.6g(ESEA, 수율 51.2%)과 애기땅빈대 물 분획물 14.8g(ESH₂O, 수율 29.6%)을 얻었다. 상기 일련의 과정을 도식화하여 도 2에 나타내었다.

실험예 1. 콜라게네이즈 ( collagenase ) 활성 억제 효과 확인

1-1. 큰땅빈대 추출물 및 분획물의 콜라게네이즈 활성 억제 효과 확인

큰땅빈대 추출물 및 분획물의 피부 주름 개선 효과를 확인하기 위하여 콜라겐을 분해하는 것으로 알려진 콜라게네이즈의 큰땅빈대 추출물 및 분획물 처리에 따른 활성 변화를 확인하였다.

먼저 실시예 1에서 수득한 큰땅빈대 추출물을 5% DMSO에 녹여 각각 40, 200㎍/㎖의 농도로 총 4개의 시료를 제조하고, 실시예 1에서 수득한 큰땅빈대 클로로포름 분획물, 에틸아세테이트 분획물 및 물 분획물을 5% DMSO에 녹여 각각 20, 100㎍/㎖의 농도로 총 4개의 시료를 제조하였다. 한편, 음성대조군에는 상기 추출물 또는 분획물을 처리하지 않았고, 양성대조군에는 상기 추출물 또는 분획물 대신 0.04% 아데노신만을 처리하였다.

이 후 96-웰 플레이트 각각에 상기에 준비한 시료 5 uL를 첨가하였고, 그 외 HCl(0.1 M, pH 7.5) 및 CaCl₂₍4 mM)에 4-phenylazobenzyloxycarbonyl-Prp-Leu-Gly-Pro-D-Arg(0.3 mg/ml)을 녹인 기질액 12.5 uL와 7.5 uL의 콜라게나제(0.2 mg/ml)를 더 첨가하였다. 이 후 이를 상온 조건에서 20분 동안 배양하였다. 20분이 경과한 후에 25 uL의 6% 시트르산을 넣어 반응을 정지시켰고, 150 uL의 에틸 아세트산을 더 첨가하여 320 nm에서 흡광도를 측정하였다. 그 결과는 도 3에 나타내었다.

도 3에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 유효성분인 큰땅빈대 추출물 및 분획물은 농도 의존적으로 콜라게네이즈 활성을 억제함을 확인하였다. 특히, 큰땅빈대 에탄올 추출물(EMEE)에서 현저한 콜라게네이즈 활성 억제 효과가 나타남을 확인하였다.

1-2. 애기땅빈대 추출물 및 분획물의 콜라게네이즈 활성 억제 효과 확인

애기땅빈대 추출물 및 분획물의 피부 주름 개선 효과를 확인하기 위하여 콜라겐을 분해하는 것으로 알려진 콜라게네이즈의 애기땅빈대 추출물 및 분획물 처리에 따른 활성 변화를 확인하였다.

먼저 실시예 2에서 수득한 애기땅빈대 추출물을 5% DMSO에 녹여 각각 40, 200㎍/㎖의 농도로 총 4개의 시료를 제조하고, 실시예 2에서 수득한 애기땅빈대 클로로포름 분획물, 에틸아세테이트 분획물 및 물 분획물을 5% DMSO에 녹여 각각 20, 100㎍/㎖의 농도로 총 4개의 시료를 제조하였다. 한편, 음성대조군에는 상기 추출물 또는 분획물을 처리하지 않았고, 양성대조군에는 상기 추출물 또는 분획물 대신 0.04% 아데노신만을 처리하였다. 이 후 사용한 시료만을 달리하여 상기 실험예 1-1과 동일한 방법으로 실험을 실시하였다. 실험 결과는 475 nm 파장에서 흡광도를 측정하였으며, 이는 도 4에 나타내었다.

도 4에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 유효성분인 애기땅빈대 추출물 및 분획물은 농도 의존적으로 콜라게네이즈 활성을 억제함을 확인하였다. 특히, 애기땅빈대 에탄올 추출물(ESEE)에서 현저한 콜라게네이즈 활성 억제 효과가 나타남을 확인하였다.

실험예 2. 엘라스테이즈 ( elastase ) 활성 억제 효과 확인

2-1. 큰땅빈대 추출물 및 분획물의 엘라스테이즈 활성 억제 효과 확인

큰땅빈대 추출물 및 분획물의 피부 주름 개선 효과를 확인하기 위하여, 혈관의 탄력성을 유지하는 물질인 엘라스틴을 분해하는 효소인 엘라스테이즈의 큰땅빈대 추출물 및 분획물 처리에 따른 활성 변화를 확인하였다.

먼저, 실시예 1에서 수득한 큰땅빈대 추출물을 5% DMSO에 녹여 각각 40, 200㎍/㎖의 농도로 총 4개의 시료를 제조하고, 실시예 1에서 수득한 큰땅빈대 클로로포름 분획물, 에틸아세테이트 분획물 및 물 분획물을 5% DMSO에 녹여 각각 20, 100㎍/㎖의 농도로 총 6개의 시료를 제조하였다. 한편, 음성대조군에는 상기 추출물 또는 분획물을 처리하지 않았고, 양성대조군에는 상기 추출물 또는 분획물 대신 10 ㎍/㎖의 올레아놀산(oleanolic acid)만을 처리하였다.

이 후 96-웰 플레이트에 각각에 상기에 준비한 시료 40 uL를 첨가하였고, 그 외 트리스-HCL 버퍼(50 mM)에 녹여 2.5 U/ml 농도의 돼지 췌장 엘라스테이즈(procine pancrase elastase) 40 uL와 트리스-HCL 버퍼(50 mM)에 녹여 만든 0.5 mg/ml 농도의 N-succinyl-(L-Ala)3-p-nitroanilide 80 uL을 더 첨가하였다. 이 후 37 ℃ 온도의 조건에서 30분 동안 배양하였다. 30분이 경과한 후, 생성되는 p-니트로아닐리드(p-nitroanilide)량을 확인하기 위하여 445 nm의 파장에서 흡광도를 측정하였다. 그 결과는 도 5에 나타내었다.

도 5에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 유효성분인 큰땅빈대 추출물 및 분획물은 농도 의존적으로 엘라스테이즈 활성을 억제함을 확인하였다. 특히, 큰땅빈대 에탄올 추출물(EMEE)에서 현저한 엘라스테이즈 활성 억제 효과가 나타남을 확인하였다.

2-2. 애기땅빈대 추출물 및 분획물의 엘라스테이즈 활성 억제

애기땅빈대 추출물 및 분획물의 피부 주름 개선 효과를 확인하기 위하여 혈관의 탄력성을 유지하는 물질인 엘라스틴을 분해하는 효소인 엘라스테이즈의 애기땅빈대 추출물 및 분획물 처리에 따른 활성 변화를 확인하였다.

먼저, 실시예 2에서 수득한 애기땅빈대 추출물을 5% DMSO에 녹여 각각 40, 200㎍/㎖의 농도로 총 4개의 시료를 제조하고, 실시예 2에서 수득한 애기땅빈대 클로로포름 분획물, 에틸아세테이트 분획물 및 물 분획물을 5% DMSO에 녹여 각각 20, 100㎍/㎖의 농도로 총 6개의 시료를 제조하였다. 한편, 음성대조군에는 상기 추출물 또는 분획물을 처리하지 않았고, 양성대조군에는 상기 추출물 또는 분획물 대신 10 ㎍/㎖의 올레아놀산(oleanolic acid)만을 처리하였다. 이 후 사용한 시료만을 달리하여 상기 실험예 2-1과 동일한 방법으로 실험을 실시하였다. 실험 결과는 475 nm에서 흡광도를 측정하였으며, 이는 도 6에 나타내었다.

도 6에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 유효성분인 애기땅빈대 추출물 및 분획물은 농도 의존적으로 엘라스테이즈 활성을 억제함을 확인하였다. 특히, 애기땅빈대 에탄올 추출물(ESEE)에서 현저한 엘라스테이즈 활성 억제 효과가 나타남을 확인하였다.

실험예 3. MTT 분석을 통한 세포 독성 확인

3-1. 큰땅빈대 추출물 및 분획물의 세포 독성 확인

MTT(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide) 분석을 통한 큰땅빈대 추출물 및 분획물의 세포 독성을 확인하였다. 이를 위하여 먼저, 미국세포주은행으로부터 멜라닌세포주를 공급받았고, 이 후 이를 10%의 소 태아 혈청 및 1%의 페니실린이 첨가된 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Medium)배지에서 배양하였다. 이 후 상기 세포를 실험 수행 전까지 37℃ 온도 및 5% CO₂ 조건에서 배양하였으며 2회 이상의 계대배양을 거쳐 세포를 안정화시켰다.

이 후에는 실시예 1에서 수득한 큰땅빈대 추출물을 5% DMSO에 녹여 각각 40, 200㎍/㎖의 농도로 총 4개의 시료를 제조하고, 실시예 1에서 수득한 큰땅빈대 클로로포름 분획물, 에틸아세테이트 분획물 및 물 분획물을 5% DMSO에 녹여 각각 20, 100㎍/㎖의 농도로 총 6개의 시료를 제조한 후 이 기술분야에서 일반적으로 사용되는 MTT 분석법과 동일한 방식으로 실험을 수행하였다. 모든 실험 과정은 기준 시료 및 샘플을 3세트로 실험하였으며, 음성대조군에는 상기 추출물 또는 분획물을 처리하지 않았다. 이 후 실험 결과는 하기 수학식 1에 따라 계산하여 도 7에 나타내었다.

도 7에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 큰땅빈대 추출물 및 분획물은 고농도에서도 세포 독성을 나타내지 않음을 확인하였다. 이는 본 발명의 큰땅빈대 추출물 및 분획물은 화장료뿐만 아니라 약품 또는 식품 등으로 생체에 투여될 수 있는 안전한 물질임을 나타낸다.

3-2. 애기땅빈대 추출물 및 분획물의 세포 독성 확인

MTT 분석을 통한 애기땅빈대 추출물 및 분획물의 세포 독성을 확인하였다. 사용한 시료는 실시예 2에서 수득한 애기땅빈대 추출물을 5% DMSO에 녹여 각각 40, 200㎍/㎖의 농도로 제조한 총 4개의 시료와 실시예 2에서 수득한 애기땅빈대 클로로포름 분획물, 에틸아세테이트 분획물 및 물 분획물을 5% DMSO에 녹여 각각 20, 100㎍/㎖의 농도로 제조한 총 6개의 시료를 사용한 것 외에는 상기 실험예 3-1에서 사용한 세포를 사용하여 동일한 방식으로 실험을 수행하였다. 그 결과는 도 8에 나타내었다.

도 8에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 애기땅빈대 추출물 및 분획물은 고농도에서도 세포 독성을 나타내지 않음을 확인하였다. 이는 본 발명의 애기땅빈대 추출물 및 분획물은 화장료뿐만 아니라 약품 또는 식품 등으로 생체에 투여될 수 있는 안전한 물질임을 나타낸다.

실험예 4. ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)를 통한 MMP -1(matrix metalloproteinase -1) 생성 억제 효과 확인

4-1. 큰땅빈대 추출물 및 분획물의 MMP -1 생성 억제 효과 확인

큰땅빈대 추출물 및 분획물의 피부 주름 개선 효과를 확인하기 위하여, ELISA를 수행하여 피부 주름 발생에 관여하는 단백질분해효소인 MMP-1의 큰땅빈대 추출물 및 분획물 처리에 따른 활성 변화를 확인하였다.

먼저 실시예 1에서 수득한 큰땅빈대 추출물을 5% DMSO에 녹여 각각 40, 200㎍/㎖의 농도로 총 4개의 시료를 제조하고, 실시예 1에서 수득한 큰땅빈대 클로로포름 분획물, 에틸아세테이트 분획물 및 물 분획물을 5% DMSO에 녹여 각각 20, 100㎍/㎖의 농도로 총 6개의 시료를 제조하였다. 이 후 CCD-986sk 세포(ATCC CRL-1947)를 96-웰 플레이트에 1×10⁴ cell/웰로 분주하고 37℃의 온도 및 5% CO2 조건에서 24시간 동안 안정화시킨 후, 상기 10개의 시료를 각각 처리하였다. 처리 후 48시간이 경과한 후에 MMP-1 ELISA 키트(ENZO, BML-AK404-0001)에서 제공하는 항체를 이용하여 이 기술분야에서 ELISA를 수행하는 통상적인 방식으로 MMP-1의 활성을 측정하였다. 그 결과는 도 9에 나타내었다.

도 9에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 큰땅빈대 추출물 및 분획물이 MMP-1 활성을 감소시킴을 확인하였다. 특히, 큰땅빈대 에탄올 추출물(EMEE)에서 현저한 MMP-1 활성 억제 효과가 나타남을 확인하였다. 이는 큰땅빈대 추출물 및 분획물이 외부 자극으로 대표되는 TNF-α로 증가된 MMP-1 활성이 억제되어 피부 주름 발생을 억제 및 개선하는 효과를 가짐을 나타낸다.

4-2. 애기땅빈대 추출물 및 분획물의 MMP -1 생성 억제 효과 확인

애기땅빈대 추출물 및 분획물의 피부 주름 개선 효과를 확인하기 위하여, ELISA를 수행하여 피부 주름 발생에 관여하는 단백질분해효소인 MMP-1의 애기땅빈대 추출물 및 분획물 처리에 따른 활성 변화를 확인하였다.

먼저 실시예 2에서 수득한 애기땅빈대 추출물을 5% DMSO에 녹여 각각 40, 200㎍/㎖의 농도로 총 4개의 시료를 제조하고, 실시예 2에서 수득한 애기땅빈대 클로로포름 분획물, 에틸아세테이트 분획물 및 물 분획물을 5% DMSO에 녹여 각각 20, 100㎍/㎖의 농도로 총 6개의 시료를 제조하였다. 이 후 상기 사용한 시료 외에는 실험예 4-1에서 수행한 방식과 동일하게 실험을 수행하였다. 그 결과는 도 10에 나타내었다.

도 10에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 애기땅빈대 추출물 및 분획물이 MMP-1 활성을 감소시킴을 확인하였다. 특히, 애기땅빈대 에탄올 추출물(ESEE)에서 현저한 MMP-1 활성 억제 효과가 나타남을 확인하였다. 이는 애기땅빈대 추출물 및 분획물이 외부 자극으로 대표되는 TNF-α로 증가된 MMP-1 활성이 억제되어 피부 주름 발생을 억제 및 개선하는 효과를 가짐을 나타낸다.

종합적으로, 본 발명의 큰땅빈대 추출물 및 분획물과 애기땅빈대 추출물 및 분획물은 피부 조직 및 이의 탄력과 상관관계가 있는 콜라게네이즈 및 엘라스테이즈를 억제하는 효과를 가지며, 특히 피부 섬유아 세포에서 피부 주름 발생에 관여하는 것으로 알려진 효소인 MMP-1을 억제하는 효과를 가지고 있어 피부 주름 예방 또는 개선 효과를 가진다. 더욱이 세포 독성을 가지지 않는 바, 본 발명의 큰땅빈대 추출물 및 분획물과 애기땅빈대 추출물 및 분획물은 화장료, 식품, 의외약품 등으로 다양하게 활용될 수 있다는 이점이 있다.

이하 본 발명의 큰땅빈대 또는 애기땅빈대의 추출물 또는 분획물을 포함하는 화장료 조성물 또는 건강기능식품 조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명을 한정하고자 함이 아니고 단지 이를 구체적으로 설명하고자 함이다.

제제예 1. 화장료 제제의 제조

1-1. 유연화장수 제조-1

큰땅빈대 추출물 또는 분획물 0.1중량%, 1,3-부틸렌글리콜 5.2중량%, 올레일알코올 1.5중량%, 에탄올 3.2중량%, 폴리솔베이트 20 3.2중량%, 벤조페논-9 2.0중량%, 카르복실비닐폴리머 1.0중량%, 글리세린 3.5중량%, 미량의 향, 미량의 방부제 및 잔량의 정제수를 혼합하여 통상의 방법으로 유연화장수를 제조하였다.

1-2. 유연화장수 제조-2

큰땅빈대 추출물 또는 분획물을 대신하여 애기땅빈대 추출물 또는 분획물을 사용한 것을 제외하고는 상기 제제예 1-2와 동일한 방법으로 실시하였다.

1-3. 밀크로션 제조-1

큰땅빈대 추출물 또는 분획물 0.1중량%, 글리세린 5.1중량%, 프로필렌글리콜 4.2중량%, 토코페릴아세테이트 3.0중량%, 유동파라핀 4.6중량%, 트리에탄올아민 1.0중량%, 스쿠알란 3.1중량%, 마카다미아너트오일 2.5중량%, 폴리솔베이트 60 1.6중량%, 솔비탄세스퀴롤레이트 1.6중량%, 프로필파라벤 0.6중량%, 카르복실비닐폴리머 1.5중량%, 미량의 향, 미량의 방부제, 잔량의 정제수를 혼합하여 통상의 방법으로 밀크로션을 제조하였다.

1-4. 밀크로션 제조-2

큰땅빈대 추출물 또는 분획물을 대신하여 애기땅빈대 추출물 또는 분획물을 사용한 것을 제외하고는 상기 제제예 1-3과 동일한 방법으로 실시하였다.

1-5. 영양크림 제조-1

큰땅빈대 추출물 또는 분획물 0.5중량%, 글리세린 4.0중량%, 바셀린 3.5중량%, 트리에탄올아민 2.1중량%, 유동파라핀 5.3중량%, 스쿠알란 3.0중량%, 밀납 2.6중량%, 토코페릴아세테이트 5.4중량%, 폴리솔베이트 60 3.2중량%, 카르복실비닐폴리머 1.0중량%, 솔비탄세스퀴올레이트 3.1중량%, 미량의 향, 미량의 방부제 및 잔량의 정제수를 혼합하여 통상의 방법으로 영양크림을 제조하였다.

1-6. 영양크림 제조-2

큰땅빈대 추출물 또는 분획물을 대신하여 애기땅빈대 추출물 또는 분획물을 사용한 것을 제외하고는 상기 제제예 1-5와 동일한 방법으로 실시하였다.

1-7. 마사지크림 제조-1

큰땅빈대 추출물 또는 분획물 0.5중량%, 글리세린 4.0중량%, 바셀린 3.5중량%, 트리에탄올아민 0.5중량%, 유동파라핀 24.0중량%, 스쿠알란 3.0중량%, 밀납 2.1중량%, 토코페릴아세테이트 0.1중량%, 폴리솔베이트 60 2.4중량%, 카르복실비닐폴리머 1.0중량%, 솔비탄세스퀴올레이트 2.3중량%, 미량의 향, 미량의 방부제 및 잔량의 정제수를 혼합하여 통상의 방법으로 마사지크림을 제조하였다.

1-8. 마사지크림 제조-2

큰땅빈대 추출물 또는 분획물을 대신하여 애기땅빈대 추출물 또는 분획물을 사용한 것을 제외하고는 상기 제제예 1-7과 동일한 방법으로 실시하였다. 잔량의 정제수를 혼합하여 통상의 방법으로 마사지크림을 제조하였다.

1-9. 세정용 바디클렌저 제조-1

큰땅빈대 추출물 또는 분획물 1g, 음이온계면활성제 18g, 비이온계면활성제 5g, 글리세린 7g, 소듐클로라이드 3g, 천연올리브액상비누 1.5g, 향료 1g 및 물 100g을 혼합하여 통상의 방법으로 세정용 바디클렌저를 제조하였다.

1-10. 세정용 바디클렌저 제조-2

큰땅빈대 추출물 또는 분획물을 대신하여 애기땅빈대 추출물 또는 분획물을 사용한 것을 제외하고는 상기 제제예 1-9와 동일한 방법으로 실시하였다.

제제예 2. 식품 제제의 제조

2-1. 건강식품 제조-1

큰땅빈대 추출물 또는 분획물 100㎎, 비타민 혼합물 적량, 비타민 A 아세테이트 70g, 비타민 E 1.0㎎, 비타민 B1 0.13㎎, 비타민 B2 0.15㎎, 비타민 B6 0.5㎎, 비타민 B12 0.2g, 비타민 C 10㎎, 비오틴 10g, 니코틴산아미드 1.7㎎, 엽산 50g, 판토텐산 칼슘 0.5㎎, 무기질 혼합물 적량, 황산제1철 1.75㎎, 산화아연 0.82㎎, 탄산마그네슘 25.3㎎, 제1인산칼륨 15㎎, 제2인산칼슘 55㎎, 구연산칼륨 90㎎, 탄산칼슘 100㎎ 및 염화마그네슘 24.8㎎을 혼합한 다음, 과립을 제조하고 통상의 방법에 따라 건강식품을 제조하였다. 이때, 상기 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

2-2. 건강식품 제조-2

큰땅빈대 추출물 또는 분획물을 대신하여 애기땅빈대 추출물 또는 분획물을 사용한 것을 제외하고는 상기 제제예 2-1과 동일한 방법으로 실시하였다.

2-3. 건강음료 제조-1

통상의 건강음료 제조방법에 따라 큰땅빈대 추출물 또는 분획물 100㎎, 비타민 C 15g, 비타민 E(분말) 100g, 젖산철 19.75g, 산화아연 3.5g, 니코틴산아미드 3.5g, 비타민 A 0.2g, 비타민 B1 0.25g, 비타민 B2 0.3g 및 정량의 물을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2L 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관하여 건강음료를 제조하였다. 이때, 상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

2-4. 건강음료 제조-2

큰땅빈대 추출물 또는 분획물을 대신하여 애기땅빈대 추출물 또는 분획물을 사용한 것을 제외하고는 상기 제제예 2-2와 동일한 방법으로 실시하였다.

Claims (9)

1. 큰땅빈대(Euphorbia maculata) 또는 애기땅빈대(Euphorbia supina)의 70% 에탄올 추출물을 유효성분으로 포함하는, 주름 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
   
2. 제1항에 있어서,
   상기 큰땅빈대의 추출물은 꽃, 잎, 줄기, 뿌리 및 전초로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상으로부터 추출되는 것을 특징으로 하는, 주름 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
   
3. 제1항에 있어서,
   상기 애기땅빈대의 추출물은 꽃, 잎, 줄기, 뿌리 및 전초로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상으로부터 추출되는 것을 특징으로 하는, 주름 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
   
4. 삭제
5. 제1항에 있어서,
   상기 추출물은 핵산, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부탄올 및 물로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 용매로 추가적으로 분획되는 것을 특징으로 하는, 주름 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
   
6. 제1항에 있어서,
   상기 추출물은 50 내지 100 ℃에서 추출되는 것을 특징으로 하는, 주름 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
   
7. 제1항에 있어서,
   상기 추출물은 엘라스타아제, 콜라게네이즈 또는 MMP-1 활성을 억제하는 것을 특징으로 하는, 주름 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
   
8. 큰땅빈대(Euphorbia maculata) 또는 애기땅빈대(Euphorbia supina)의 70% 에탄올 추출물을 유효성분으로 포함하는, 주름 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
9. 삭제

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