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KR101701382B1 - 페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체 - Google Patents

페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체 Download PDF

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KR101701382B1
KR101701382B1 KR1020150013519A KR20150013519A KR101701382B1 KR 101701382 B1 KR101701382 B1 KR 101701382B1 KR 1020150013519 A KR1020150013519 A KR 1020150013519A KR 20150013519 A KR20150013519 A KR 20150013519A KR 101701382 B1 KR101701382 B1 KR 101701382B1
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dihydrocholesterol
mmol
pegylated
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방성식
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김명수
정민욱
정인화
김용수
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주식회사 휴메딕스
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Abstract

본 발명은 페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체 및 그를 포함하는 주름개선 및 노화방지용 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체는 물에 대한 용해도 및 안정성이 개선되어, 우수한 비타민 D의 공급원으로서 주름개선 및 노화방지용 화장료 조성물, 약제학적 조성물, 건강기능식품 등에 효과적으로 사용될 수 있다.

Description

페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체 {Pegylated 7-Dehydrocholesterol Derivatives}
본 발명은 페길레이션(PEGylation)된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 안정성 및 용해도가 증가하고, 체내에서 가수분해되어 비타민 D를 공급하는 페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체 및 그를 포함하는 주름개선 및 노화방지용 조성물에 관한 것이다.
비타민 D의 주요 형태로는 비타민 D2(에르고칼시페롤)와 비타민 D3(콜레칼시페롤, 화합물 B)가 있으며, 이 두 물질은 간과 콩팥에서 대사를 거치면서 활성형(칼시트리올, 화합물 C)으로 전환되게 된다. 7-디하이드로콜레스테롤(7-dehydrocholesterol: 7-DHC, 화합물 A)은 비타민 D3의 프로비타민(provitamin) 형태로, 햇빛에 의해 비타민 D3로 전환된다.
Figure 112015009429824-pat00001
Figure 112015009429824-pat00002
Figure 112015009429824-pat00003
A B C
비타민 D3는 일반적으로 칼슘 흡수를 자극하여 뼈의 밀도를 강화시키는 작용으로 골다공증 환자의 치료제로 사용되고 있고, 노인이나 일조량이 부족한 북위도 지역의 거주자들에 대한 보충제로 사용되고 있다.
비타민 D의 전구물질로 알려진 7-디하이드로콜레스테롤은 강력한 피부노화 억제 기능과 항산화 효능 및 자외선 방어효과를 가지고 있어 기능성화장품의 소재로서 활용되고 있다[참조: 대한민국 공개특허 제2001-0002281호]. 또한 미국 공개특허 제2013-0017234호에서는 뼈의 생성과 관련 있는 Col-1, ALP, OSX, OC, BMP-2, IL-5 등의 인자들을 발현시켜 관절치료 의약품으로 가능성을 보여준 바 있으며, 대한민국 등록특허 제10-0568600호에는 임상실험을 통하여 모발 보호 효과 또한 뛰어나다고 보고되어 있다.
따라서 표피층에 지속적으로 7-디하이드로콜레스테롤을 보충하여 줌으로써 자외선 흡수차단 및 노화방지는 물론, 콜레칼시페롤의 생산을 증가시켜 골다공증의 예방과 이상각질로 인한 건선 및 아토피성 피부염과 같은 피부질환을 예방할 수 있는 기능이 기대된다.
그러나 7-디하이드로콜레스테롤은 피부 외에서는 매우 불안정하여 빛에 의해 여러 물질로 전환되며, 상기 변환체들은 부작용은 없으나 비타민 D3로의 전환이 매우 어렵게 된다. 또한 피부 이외의 장소에서는 7-디하이드로콜레스테롤이 피로칼시페롤이나 루미스테롤, 이소피로칼시페롤로 전환되어 활성이 떨어지는 문제점이 있다.
이와 같은 문제점을 해결하기 위해 미국 특허 제5,342,833호에는 새로운 물성을 가진 신규 콜레칼시페롤, 즉 활성형 비타민 D 유도체를 사용하여 피부질환과 건선치료에 사용한 예를 보이고 있으며, 미국 특허 제5,747,478호에는 산화마그네슘과 소듐시트레이트를 사용하여 활성화된 콜레칼시페롤을 안정화시킨 예를 보이고 있다.
하지만 7-디하이드로콜레스테롤에 대한 안정화 연구는 매우 미진한 편이며, 이러한 이유는 7-디하이드로콜레스테롤이 자외선과 온도에 의해 쉽게 다른 물질로 전이되고, 공기중의 산소와 반응하여 변성을 나타내는 구조적인 단점을 가지고 있기 때문이다.
또한 위에서 살펴본 바와 같이, 기존 특허는 제형적으로 7-디하이드로콜레스테롤의 안정화에 관한 내용만 있거나, 활성형인 콜레칼시페롤에 관한 연구만 보고되어 있으며, 7-디하이드로콜레스테롤을 합성적으로 안정화시킨 예는 보고되어 있지 않다.
대한민국 공개특허 제2001-0002281호 미국 공개특허 제2013-0017234호 대한민국 등록특허 제10-0568600호 미국 특허 제5,342,833호 미국 특허 제5,747,478호
본 발명자들은 상기한 7-디하이드로콜레스테롤의 문제점인 화학적인 불안정성, 자외선, 온도 및 공기와의 접촉에 의한 불안정성과 물에 대한 난용성 문제를 개선하기 위해 예의 연구 검토한 결과, 7-디하이드로콜레스테롤을 폴리에틸렌글리콜로 컨쥬게이트화하여 유기용매 또는 수용액에 대한 용해도를 증가시키고, 피부 내 세포로의 전달 효과를 증가시키며, 물성개선을 통한 효능의 증대를 유도함으로써, 용해도가 개선되고 장기 보관에도 안정성을 유지할 수 있음을 발견하고 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서, 본 발명의 목적은 용해도와 안정성이 향상된 페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체를 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체를 포함하는 주름개선 및 노화방지용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 일 실시형태는 하기 화학식 I의 페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체에 관한 것이다.
[화학식 I]
Figure 112015009429824-pat00004
상기 식에서,
R은 수소 또는 C1-C6의 알킬기이고,
G는 -XCOCH2(CH2)mCO-, -XCH2(CH2)mCO-, -XCONHCYCO-, -XCOCYNHCO(CH2)mCH2CO- 또는 -XCH2(CH2)mCONHCYCO-이며,
X는 O, NH 또는 S이고,
Y는 수소, C1-C6의 알킬기, (CH2)m'CH2NHCO(CH2)mCH2(OCH2CH2)nOR, (CH2)m'CH2NHCOCH2(CH2)mCO(OCH2CH2)nOR 또는 (CH2)m'CH2NHCOCH2(CH2)mCO-DHC이며,
n은 1 내지 700의 정수, 바람직하게는 3 내지 200의 정수이고,
m 및 m’는 각각 독립적으로 1 내지 3의 정수, 바람직하게는 1이다.
본 명세서에서 사용되는 C1-C6의 알킬기는 탄소수 1 내지 6개로 구성된 직쇄형 또는 분지형 탄화수소를 의미하며, 예를 들어 메틸, 에틸, n-프로필, i-프로필, n-부틸, i-부틸, s-부틸, t-부틸, n-펜틸, n-헥실 등이 포함되나 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 일 실시형태에 따른 페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체는 하기 화학식 1A의 화합물일 수 있다.
[화학식 1A]
Figure 112015009429824-pat00005
상기 식에서,
R은 수소 또는 C1-C6의 알킬기이고,
X는 O 또는 NH이며,
n은 1 내지 700의 정수, 바람직하게는 3 내지 200의 정수이고,
m은 1 내지 3의 정수, 바람직하게는 1이다.
본 발명의 일 실시형태에 따른 페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체는 하기 화학식 1B의 화합물일 수 있다.
[화학식 1B]
Figure 112015009429824-pat00006
상기 식에서,
R은 수소 또는 C1-C6의 알킬기이고,
n은 1 내지 700의 정수, 바람직하게는 3 내지 200의 정수이며,
m은 1 내지 3의 정수, 바람직하게는 1이다.
본 발명의 일 실시형태에 따른 페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체는 하기 화학식 2A의 화합물일 수 있다.
[화학식 2A]
Figure 112015009429824-pat00007
상기 식에서,
R은 수소 또는 C1-C6의 알킬기이고,
X는 O 또는 NH이며,
n은 1 내지 700의 정수, 바람직하게는 3 내지 200의 정수이고,
Y1은 C1-C6의 알킬기이다.
본 발명의 일 실시형태에 따른 페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체는 하기 화학식 2B의 화합물일 수 있다.
[화학식 2B]
Figure 112015009429824-pat00008
상기 식에서,
R은 수소 또는 C1-C6의 알킬기이고,
X는 O 또는 NH이며,
n은 1 내지 700의 정수, 바람직하게는 3 내지 200의 정수이고,
m은 1 내지 3의 정수, 바람직하게는 1이며,
Y1은 C1-C6의 알킬기이다.
본 발명의 일 실시형태에 따른 페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체는 하기 화학식 2C의 화합물일 수 있다.
[화학식 2C]
Figure 112015009429824-pat00009
상기 식에서,
R은 수소 또는 C1-C6의 알킬기이고,
n은 1 내지 700의 정수, 바람직하게는 3 내지 200의 정수이며,
m은 1 내지 3의 정수, 바람직하게는 1이고,
Y1은 C1-C6의 알킬기이다.
본 발명의 일 실시형태에 따른 페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체는 하기 화학식 2D의 화합물일 수 있다.
[화학식 2D]
Figure 112015009429824-pat00010
상기 식에서,
R은 수소 또는 C1-C6의 알킬기이고,
X는 O 또는 NH이며,
n은 1 내지 700의 정수, 바람직하게는 3 내지 200의 정수이고,
m 및 m’는 각각 독립적으로 1 내지 3의 정수, 바람직하게는 1이다.
본 발명의 일 실시형태에 따른 페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체는 하기 화학식 2E의 화합물일 수 있다.
[화학식 2E]
Figure 112015009429824-pat00011
상기 식에서,
R은 수소 또는 C1-C6의 알킬기이고,
X는 O 또는 NH이며,
n은 1 내지 700의 정수, 바람직하게는 3 내지 200의 정수이고,
m 및 m’는 각각 독립적으로 1 내지 3의 정수, 바람직하게는 1이다.
본 발명의 일 실시형태에 따른 페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체는 하기 화학식 2F의 화합물일 수 있다.
[화학식 2F]
Figure 112015009429824-pat00012
상기 식에서,
R은 수소 또는 C1-C6의 알킬기이고,
X는 O 또는 NH이며,
n은 1 내지 700의 정수, 바람직하게는 3 내지 200의 정수이고,
m 및 m’는 각각 독립적으로 1 내지 3의 정수, 바람직하게는 1이다.
본 발명의 일 실시형태에 따른 페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체는 하기 화학식 2G의 화합물일 수 있다.
[화학식 2G]
Figure 112015009429824-pat00013
상기 식에서,
R은 수소 또는 C1-C6의 알킬기이고,
X는 O 또는 NH이며,
n은 1 내지 700의 정수, 바람직하게는 3 내지 200의 정수이고,
m 및 m’는 각각 독립적으로 1 내지 3의 정수, 바람직하게는 1이다.
본 발명에 따른 페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체는 하기 반응식 1 내지 5에 나타낸 방법에 따라 제조될 수 있다. 하기 반응식에 기재된 방법은 본 발명에서 대표적으로 사용된 방법을 예시한 것일 뿐 단위조작의 순서, 반응시약, 반응조건 등은 경우에 따라 얼마든지 변경될 수 있다.
[반응식 1]
Figure 112015009429824-pat00014
상기 반응식에서,
R, X, n 및 m은 화학식 I에서 정의한 바와 같다.
상기 반응식 1에 따르면, 상기 화학식 4의 화합물과 화학식 5의 화합물을 각각 화학식 7a의 화합물 또는 화학식 6의 화합물과 축합반응시켜 상기 화학식 1A의 페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체를 제조할 수 있다. 또한, 상기 화학식 4의 화합물을 화학식 7b의 화합물과 축합반응시켜 상기 화학식 1B의 페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체를 제조할 수 있다.
상기 화학식 5의 화합물과 화학식 7a의 화합물은 각각 화학식 4의 화합물 또는 화학식 6의 화합물에 산 무수물을 반응시켜 제조하고, 화학식 7b의 화합물은 X가 O인 화학식 6의 화합물을 출발물질로 하여 공지된 방법으로 제조하거나, 상업적으로 구매할 수 있다[참고문헌: J.M. Harris et.al, Advanced Drug Delivery Reviews, 2002, 54 , 459-476].
또한 화학식 6의 화합물은 상업적으로 구매하거나 공지된 방법으로 제조할 수 있다[참고문헌: Sandler and Karo, Polymer Synthesis, Academic Press, New York, Vol.3, pages 138-161].
[반응식 2]
Figure 112015009429824-pat00015
상기 반응식에서,
R, X, n 및 m은 화학식 I에서 정의한 바와 같고,
Zb 및 Zc는 보호기이며,
Y1은 수소, C1-C6의 알킬기 또는 아미노산 잔기이다.
상기 반응식 2에 따르면, 상기 화학식 6의 화합물을 활성화하여 제조된 상기 화학식 8의 화합물과 상기 화학식 9의 화합물을 반응시켜 상기 화학식 10의 폴리에틸렌글리콜 유도체를 제조할 수 있다. 그리고 상기 화학식 10의 화합물을 상기 화학식 4의 화합물과 축합반응시켜 상기 화학식 2A의 페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체를 제조할 수 있다.
또한 상기 화학식 6의 화합물을 화학식 12의 화합물과 축합반응시켜 상기화학식 13의 화합물을 얻을 수 있다. 그런 다음, 상기 화학식 13의 화합물의 탈보호 반응을 통해 상기 화학식 14의 화합물을 수득하고, 상기 화학식 14의 화합물을 상기 화학식 5의 화합물과 축합반응시켜 상기 화학식 2B의 페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체를 얻을 수 있다.
또한 경우에 따라 화학식 11의 화합물과 같은 보호기로 치환되어 있는 화합물을 선택하여 사용하고, Y1이 아미노산 잔기인 경우 필요에 따라 보호기로 치환하거나 자유기로 사용할 수 있다.
[반응식 3]
Figure 112015009429824-pat00016
상기 반응식에서,
R, n 및 m은 화학식 I에서 정의한 바와 같고,
L은 할로겐, 숙신이미드 또는 이미다졸이며,
Y1은 수소, C1-C6의 알킬기 또는 아미노산 잔기이다.
상기 반응식 3에 따르면, 상기 화학식 7b의 화합물을 활성화하여 제조된 상기 화학식 15b의 화합물과 상기 화학식 9의 화합물을 반응시켜 상기 화학식 16의 폴리에틸렌글리콜 유도체를 제조할 수 있다. 그리고 상기 화학식 16의 화합물을 상기 화학식 4의 화합물과 축합반응시켜 상기 화학식 2C의 페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체를 제조할 수 있다.
[반응식 4]
Figure 112015009429824-pat00017
상기 반응식에서,
R, X, n, m 및 m’는 화학식 I에서 정의한 바와 같고,
L은 할로겐, 숙신이미드 또는 이미다졸이고,
Za 및 Zb는 보호기이다.
상기 반응식 4에 따르면, 상기 화학식 6의 화합물을 보호기로 치환되어 있거나 자유기인 화학식 17의 화합물과 반응시켜 상기 화학식 18의 화합물을 제조하고, 상기 화학식 18의 화합물을 탈보호 반응시켜 제조된 화학식 19의 화합물과 화학식 7b의 화합물을 반응시켜 곁가지 형태의 폴리에틸렌글리콜 유도체인 화학식 20의 화합물을 제조할 수 있다. 상기 화학식 20의 화합물을 탈보호 반응시켜 제조된 화학식 21의 화합물과 화학식 5의 화합물을 축합반응시켜 상기 화학식 2D의 페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체를 제조할 수 있다.
[반응식 5]
Figure 112015009429824-pat00018
상기 반응식에서,
R, X, n, m 및 m’는 화학식 I에서 정의한 바와 같고,
Za는 보호기이다.
상기 반응식 5에 따르면, 상기 화학식 8의 화합물을 보호기로 치환되어 있거나 자유기인 화학식 22의 화합물과 반응시켜 상기 화학식 23의 화합물을 제조하고, 상기 화학식 23의 화합물의 탈보호 반응을 통하여 제조된 화학식 24의 화합물과 상기 화학식 15b의 화합물을 반응시켜 상기 화학식 25b의 화합물을 제조하고, 상기 화학식 25b의 화합물과 상기 화학식 4의 화합물을 축합반응시켜 상기 화학식 2E의 페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체를 제조할 수 있다.
또한, 상기 화학식 24의 화합물과 상기 화학식 7a의 화합물을 활성화하여 제조된 상기 화학식 15a의 화합물을 반응시켜 상기 화학식 25a의 화합물을 제조하고, 상기 화학식 25a의 화합물과 상기 화학식 4의 화합물을 축합반응시켜 상기 화학식 2F의 페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체를 제조할 수 있다.
[반응식 6]
Figure 112015009429824-pat00019
상기 반응식에서,
R, X, n, m 및 m’는 화학식 I에서 정의한 바와 같고,
Za는 보호기이다.
상기 반응식 6에 따르면, 상기 화학식 8의 화합물을 보호기로 치환되어 있거나 자유기인 화학식 22의 화합물과 반응시켜 상기 화학식 23의 화합물을 제조하고, 상기 화학식 23의 화합물을 상기 화학식 4의 화합물과 축합반응시켜 제조된 상기 화학식 26의 화합물을 탈보호 반응시켜 상기 화학식 27의 화합물을 제조하고, 상기 화학식 27의 화합물과 화학식 5의 화합물을 축합반응시켜 상기 화학식 2G의 페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체를 제조할 수 있다.
상기 반응식들에서 축합반응은 용매 중에서 축합제 및 유기아민 촉매의 존재 하에 수행하는 것이 바람직하다.
상기 축합제로는 N,N,N',N'-테트라메틸-(벤조트리아졸-1-일)-우로니움테트라플루오로보레이트(TBTU), N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸-카보디이미드(EDC), N,N'-디이소프로필카보디이미드(DIC), N,N‘-디사이클로헥실카보디이미드 (DCC) 등을 사용할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
또한, 유기아민 촉매로는 디이소프로필에틸아민(DIPEA), 4-디메틸아미노피리딘(DMAP) 등을 사용할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 용매로는 무수 유기용매, 예를 들어 디클로로메탄, 벤젠, 톨루엔, 테트라하이드로푸란 및 디에틸에테르 중에서 선택된 1종 이상을 사용할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 물, 완충용액, 또는 아세트니트릴(Acetonitrile), 디메틸포름아미드(Dimethylformamide) 등의 물에 섞이는 유기용매와 물을 병행하여 사용할 수도 있다.
상기 반응은 냉각 내지 가온된 상태에서 진행될 수 있다.
한편, 상기 보호기로는 Boc, Fmoc, CBz, tBuCO, Trt, Me, Et 등을 사용할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
또한, 상기 탈보호 반응은 유기용매 중에서 산 또는 염기의 존재 하에 수행할 수 있다. 상기 유기용매로는 테트라히드로푸란(THF), 디클로로메탄(DCM), 메탄올(Methanol), 디메틸포름아미드(DMF) 등을 사용할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 상기 산 또는 염기로는 트리플루오로아세트산(TFA), 염산, 황산, 아세트산, 피페리딘, 수산화나트륨 등을 사용할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 반응식 3 및 5에서 활성화 이탈기의 치환 반응은 무수 유기용매 하에서 필요에 따라 유기아민 촉매를 사용하여 티오닐클로라이드(Thionylchloride), 옥살릴클로라이드(Oxalylchloride), N-히드록시숙신이미드(N-Hydroxysuccinimide), 카보닐이미다졸(Carbonyldiimidazole) 등과 반응시켜 수행할 수 있다.
본 발명에 따른 상기 화학식 I의 페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체는 7-디하이드로콜레스테롤(DHC)과 비교하여 수용액에 대한 용해도가 증가되었으며, 빛과 열에 대한 안정성이 현저하게 개선되었다.
따라서, 본 발명에 따른 상기 화학식 I의 페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체는 체내에서 가수분해되어 비타민 D 전구체인 7-디하이드로콜레스테롤을 공급할 수 있는 비타민 D 전구체의 공급원으로서, 주름개선 및 노화방지용 화장료 조성물, 약제학적 조성물 및 건강기능식품에 효과적으로 사용될 수 있다.
본 발명의 일 실시형태는 상기 화학식 I의 페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체를 포함하는 주름개선 및 노화방지용 화장료 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 따른 화장료 조성물은 상기 화학식 I의 페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체를 유효성분으로서 약 0.0001 내지 10 중량%, 바람직하게는 0.01 내지 1 중량%로 포함한다. 유효성분의 함량은 그의 사용 목적에 따라 적절하게 결정될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 유효성분으로서 상기 화학식 I의 페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 사용되는 성분들, 예를 들어 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.
본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 사용되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 파우더, 스프레이 등으로 제형화될 수 있다.
본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트, 폴리아미드 파우더 등이 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로 히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제, 예를 들어 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방산 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜, 소르비탄의 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 또는 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가, 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 스킨, 로션, 크림, 에센스, 팩, 파운데이션, 색조화장품, 선크림, 투웨이케이크, 페이스파우더, 콤팩트, 메이크업베이스, 스킨커버, 아이쉐도우, 립스틱, 립글로스, 립픽스, 아이브로우 펜슬 등의 화장품에 적용될 수 있다.
본 발명의 일 실시형태는 상기 화학식 I의 페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체를 포함하는 주름개선 및 노화방지용 약제학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 따른 약제학적 조성물은 경구적으로(예를 들면, 복용 또는 흡입) 또는 비경구적으로(예를 들면, 주사, 경피흡수, 직장투여) 투여될 수 있으며, 주사는 예를 들면, 정맥주사, 피하주사, 근육내주사 또는 복강내주사일 수 있다. 본 발명에 따른 약제학적 조성물은 투여 경로에 따라, 정제, 캡슐제, 과립제, 파인 서브틸래(fine subtilae), 분제, 설하 정제, 좌약, 연고, 주사제, 유탁액제, 현탁액제, 시럽제, 분무제 등으로 제형화될 수 있다. 상기 여러 가지 형태의 본 발명에 따른 약제학적 조성물은 각 제형에 통상적으로 사용되는 약제학적으로 허용되는 담체(carrier)를 사용하여 공지기술에 의해 제조될 수 있다. 약제학적으로 허용되는 담체의 예는 부형제, 결합제, 붕해제(disintegrating agent), 윤활제, 방부제, 항산화제, 등장제(isotonic agent), 완충제, 피막제, 감미제, 용해제, 기제(base), 분산제, 습윤제, 현탁화제, 안정제, 착색제 등을 포함한다.
본 발명에 따른 약제학적 조성물은 약제의 형태에 따라 다르지만, 상기 화학식 I의 페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체를 약 0.1 내지 10 중량%, 바람직하게는 0.1 내지 1 중량%로 포함한다.
본 발명의 약제학적 조성물의 구체적인 투여량은 치료되는 사람을 포함한 포유동물의 종류, 체중, 성별, 질환의 정도, 의사의 판단 등에 따라 다를 수 있다. 바람직하게는, 경구투여의 경우에는 하루에 체중 60 kg 기준 5 ug 내지 60 ug이 투여된다. 상기 총 일일 투여량은 질환의 정도, 의사의 판단 등에 따라 한번에 또는 수회로 나누어 투여될 수 있다.
본 발명의 일 실시형태는 상기 화학식 I의 페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체를 포함하는 주름개선 및 노화방지용 건강기능식품에 관한 것이다.
본 발명에 따른 건강기능식품의 종류에는 특별한 제한이 없으며, 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액제, 에멀젼, 시럽제 등의 경구형 제제 형태이거나, 캔디, 과자, 껌, 아이스크림, 면류, 빵, 음료 등 일반적인 식품에 첨가될 수 있다.
본 발명의 건강기능식품은 형태에 따라 통상적인 방법으로 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 감미제, 방향제, 보존제, 계면활성제, 윤활제, 부형제 등 식품학적으로 허용되는 담체를 적절히 사용하여 제조될 수 있다.
상기 건강기능식품의 제조에 있어서 상기 화학식 I의 페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체의 함량은 건강기능식품의 형태에 따라 다르지만, 약 0.0001 내지 10 중량%, 바람직하게는 0.1 내지 1 중량%의 농도이다.
본 발명에 따른 페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체는 물에 대한 용해도 및 안정성이 개선되고, 독성감소 효과를 가진다.
따라서, 본 발명에 따른 페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체는 우수한 비타민 D의 공급원으로서, 주름개선 및 노화방지용 화장료 조성물, 약제학적 조성물, 건강기능식품 등에 효과적으로 사용될 수 있다.
아울러, 본 발명에 따른 페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체는 생체 내에서 여러 효소들에 의해 활성 비타민 D로 전환되어 항산화, 주름개선, 미백 등의 생리활성을 지속적으로 나타낼 수 있다.
도 1은 실시예 1의 화합물(MP350DHC)과 7-디하이드로콜레스테롤(DHC)의 40℃ 항온조건에서의 열 안정성을 비교한 그래프이다.
도 2는 실시예 1의 화합물(MP350DHC)과 7-디하이드로콜레스테롤(DHC)의 70℃ 항온조건에서의 열 안정성을 비교한 그래프이다.
도 3은 실시예 1의 화합물(MP350DHC)과 7-디하이드로콜레스테롤(DHC)의 빛 안정성을 비교한 그래프이다.
이하, 실시예에 의해 본 발명을 보다 구체적으로 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오직 본 발명을 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 국한되지 않는다는 것은 당업자에게 있어서 자명하다.
실시예 1: mPEG350-S-DHC 에스테르 (R은 메틸기이고, X는 O이고, n은 7.25(평균)이고, m은 1인 화학식 1A의 화합물)의 제조
실시예 1-1: 7-디하이드로콜레스테롤 숙신산 (m이 1인 화학식 5의 화합물)의 제조
화학식 4의 7-디하이드로콜레스테롤(DHC) 6.45 g(16.8 mmol)을 디클로로메탄 120 ml에 용해하고 트리에틸아민 3.39 g(33.5 mmol)과 4-디메틸아미노피리딘 0.82 g(6.7 mmol)을 첨가한 용액에 무수 숙신산(m이 1인 화학식 3의 화합물) 3.35 g(33.5 mmol)을 첨가하고 실온에서 12시간 교반하였다. 이 반응 용액을 3.5% 염산 수용액과 포화 탄산수소나트륨 수용액 그리고 포화 염화나트륨 수용액으로 순차적으로 세척하고, 유기층을 무수 황산마그네슘으로 처리하고, 여과하고 감압 농축한 후 에틸아세테이트와 헥산 1:2의 용매로 실리카겔컬럼크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물 7.2 g을 얻었다.
1H NMR 400 MHz(CDCl3) δ 5.59(dd, 1H), 5.41(dd, 1H), 4.75(m, 1H), 2.72(dt, 2H), 2.64(dt, 2H), 2.52(d, 1H), 2.39(t, 1H), 2.18-1.85(m, 6H), 1.82-1.50(m, 6H), 1.48-0.93(m, 11H), 0.97(s, 6H), 0.90(d, 3H), 0.89(d, 3H) 0.64(s, 3H)
실시예 1-2: mPEG350-S-DHC 에스테르 (R은 메틸기이고, X는 O이고, n은 7.25(평균)이고, m은 1인 화학식 1A의 화합물)의 제조
상기 실시예 1-1에서 수득한 7-디하이드로콜레스테롤 숙신산(m이 1인 화학식 5의 화합물) 1.1 g(2.30 mmol)과 mPEG350-OH(R이 메틸기이고, n이 7.25(평균)이고, X가 O인 화학식 6의 화합물) 0.8 g(2.30 mmol)을 디클로로메탄 10 ml에 용해하고, 4-디메틸아미노피리딘 0.42 g(3.44 mmol)을 첨가하였다. 그리고 N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸-카르보디이미드 0.88 g(4.59 mmol)을 천천히 가한 후 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 1.0 N 염산 수용액, 포화 탄산수소나트륨 수용액, 포화 염화나트륨 수용액으로 순차적으로 세척하고, 유기층을 무수 황산마그네슘으로 처리한 후 여과하여 감압 농축하고, 진공 건조하여 표제 화합물 1.77 g을 얻었다.
1H NMR 400 MHz(CDCl3) δ 5.59(dd, 1H), 5.40(dd, 1H), 4.74(m, 1H), 4.27(t, 2H), 3.72(t, 2H), 3.67(PEG backbone), 3.57(t, 2H), 3.40(s, 3H), 2.67(dt, 2H), 2.62(dt, 2H), 2.52(d, 1H), 2.38(t, 1H), 2.12-1.89(m, 6H), 1.75-1.53(m, 6H), 1.43-0.95(m, 11H), 0.97(s, 6H), 0.90(d, 3H), 0.88(d, 3H) 0.64(s, 3H)
실시예 2: mPEG2K-S-DHC 에스테르 (R은 메틸기이고, X는 O이고, n은 44.3(평균)이고, m은 1인 화학식 1A의 화합물)의 제조
상기 실시예 1-1에서 수득한 7-디하이드로콜레스테롤 숙신산 82.8 mg(0.22 mmol), mPEG2K-OH(R이 메틸기이고, n이 44.3(평균)이고, X가 O인 화학식 6의 화합물) 452 mg(0.22 mmol), 디클로로메탄 5 ml, 4-디메틸아미노피리딘 65.7 mg(0.54 mmol) 그리고 N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸-카르보디이미드 123.8 mg(0.65 mmol)을 사용하여 상기 실시예 1-2와 동일한 제조 방법으로 표제 화합물 462 mg을 얻었다.
1H NMR 400 MHz(CDCl3) δ 5.57(m, 1H), 5.40(m, 1H), 4.72(m, 1H), 4.25(t, 2H), 3.83-3.45(PEG backbone), 3.38(s, 3H), 2.70-2.56(m, 5H), 2.48(dt, 1H), 2.38(dt, 1H), 2.12-1.89(m, 6H), 1.75-1.53(m, 6H), 1.43-0.95(m, 11H), 0.95(s, 6H), 0.88(d, 3H), 0.84(d, 3H) 0.62(s, 3H)
실시예 3: mTrEG-S-DHC 에스테르 (R은 메틸기이고, X는 O이고, n은 3이고, m은 1인 화학식 1A의 화합물)의 제조
화학식 4의 7-디하이드로콜레스테롤 0.54 g(1.40 mmol)과 메톡시 트리에틸렌글리콜 숙신산(R이 메틸기이고, n이 3이고, X가 산소이고, m은 1인 화학식 7a의 화합물; mTrEG-succinic acid) 0.37 g(1.40 mmol)을 디클로로메탄 8 ml에 용해하고, 4-디메틸아미노피리딘 0.26 g(2.11 mmol)을 첨가하였다. 그리고 N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸-카르보디이미드 0.67 g(3.51 mmol)을 천천히 가한 후 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 1.0 N 염산 수용액, 포화 탄산수소나트륨 수용액, 포화 염화나트륨 수용액으로 순차적으로 세척하고, 유기층을 무수 황산마그네슘으로 처리한 후 여과하여 감압 농축하고, 진공 건조하여 표제 화합물 0.69 g을 얻었다.
1H NMR 400 MHz(CDCl3) δ 5.58(dd, 1H), 5.40(dd, 1H), 4.74(m, 1H), 4.28(t, 2H), 3.72(t, 2H), 3.68(m, 6H), 3.59(t, 2H), 3.40(s, 3H), 2.65(m, 4H), 2.52(dd, 1H), 2.39(t, 1H), 2.12-1.89(m, 6H), 1.75-1.53(m, 6H), 1.43-0.95(m, 11H), 0.97(s, 6H), 0.90(d, 3H), 0.88(d, 3H) 0.64(s, 3H)
실시예 4: mPEG350-S-DHC 아마이드 (R은 메틸기이고, X는 NH이고, n은 7.25(평균)이고, m은 1인 화학식 1A의 화합물)의 제조
상기 실시예 1-1에서 수득한 7-디하이드로콜레스테롤 숙신산 346.2 mg (0.714 mmol)과 mPEG350-NH2(R이 메틸기이고, n이 7.25(평균)이고, X가 NH인 화학식 6의 화합물; 평균분자량 350) 250 mg(0.714 mmol)을 디클로로메탄 6 ml에 용해하고, 4-디메틸아미노피리딘 87.3 mg(0.714 mmol)을 첨가하였다. 그리고 N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸-카르보디이미드 410.8 g(2.14 mmol)을 천천히 가한 후 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 1.0 N 염산 수용액, 포화 탄산수소나트륨 수용액, 포화 염화나트륨 수용액으로 순차적으로 세척하고, 유기층을 무수 황산마그네슘으로 처리한 후 여과하여 감압 농축하고, 진공 건조하여 표제 화합물 508 mg을 얻었다.
1H NMR 400 MHz(CDCl3) δ 6.35(s, 1H), 5.57(dd, 1H), 5.39(dd, 1H), 4.72(m, 1H), 3.66(PEG back-bone), 3.47(t, 2H), 3.39(s, 3H), 2.65(dt, 2H), 2.48(d, 1H), 2.37(t, 1H), 2.08-1.89(m, 6H), 1.74-1.50(m, 6H), 1.42-0.96(m, 11H), 0.96(s, 6H), 0.88(d, 3H), 0.87(s, 3H), 0.63(s, 3H)
실시예 5: mPEG2K-P-DHC (R은 메틸기이고, n은 44.3(평균)이고, m은 1인 화학식 1B의 화합물)의 제조
화학식 4의 7-디하이드로콜레스테롤 0.32 g(0.84 mmol)과 mPEG2K-프로피온산(R이 메틸기이고, n이 44.3(평균)이고, m이 1인 화학식 7b의 화합물; 평균분자량 2,000) 1.68 g(0.84 mmol)을 디클로로메탄 100 ml에 용해하고, 4-디메틸아미노피리딘 0.154 g(1.26 mmol)을 첨가하였다. 그리고 N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸-카르보디이미드 0.322 g(1.68 mmol)을 천천히 가한 후 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 1.0 N 염산 수용액, 포화 탄산수소나트륨 수용액, 포화 염화나트륨 수용액으로 순차적으로 세척하고, 유기층을 무수 황산마그네슘으로 처리한 후 여과하여 감압 농축하고, 진공 건조하여 표제 화합물 1.57g을 얻었다.
1H NMR 400 MHz(CDCl3) δ 5.58(m, 1H), 5.40(m, 1H), 4.74(m, 1H), 3.84-3.47(PEG backbone), 3.39(s, 3H), 2.67(dt, 2H), 2.60(dt, 2H), 2.52(d, 1H), 2.38(t, 1H), 2.12-1.89(m, 6H), 1.75-1.53(m, 6H), 1.43-0.95(m, 11H), 0.96(s, 6H), 0.89(d, 3H), 0.87(d, 3H) 0.63(s, 3H)
실시예 6: mPEG2K-O-A-DHC (R은 메틸기이고, X 는 O이고, n은 44.3(평균)이고, Y 1 은 메틸기인 화학식 2A의 화합물)의 제조
실시예 6-1: mPEG2K-NPC (R이 메틸기이고, X가 O이고, n은 44.3(평균)인 화학식 8의 화합물)의 제조
건조된 mPEG2K-OH(R이 메틸기이고, n이 44.3(평균)이고, X가 O인 화학식 6의 화합물) 30 g(14.9 mmol)을 디클로로메탄 120 ml에 용해한 용액에 4-니트로페닐클로로포메이트 12 g(59.7 mmol), 피리딘 5.9 ml(74.6 mmol)을 가하고 실온에서 20시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 1N 염산 수용액, 포화 염화나트륨 수용액 각각 150 ml로 순차적으로 세척하고, 유기층을 무수 황산마그네슘으로 처리한 후 여과하여 감압 농축하였다. 생성된 혼합물을 디에틸에테르로 침전하여 백색 고체 형태의 표제 화합물 33.5 g을 얻었다.
실시예 6-2: mPEG2K-Ala-OH (R이 메틸기이고, X가 O이고, n은 44.3(평균)이고, Y 1 은 메틸기인 화학식 10의 화합물)의 제조
상기 실시예 6-1에서 수득한 mPEG2K-NPC 16 g(7.2 mmol)을 아세토니트릴 100 ml, 증류수 60 ml에 용해한 용액에 H-Ala-OH(Y1이 메틸기인 화학식 9의 화합물) 1.9 g(21.7 mmol), 디이소프로필에틸아민 1.5 ml(21.7 mmol)을 가하고 실온에서 8시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 디클로로메탄 300 ml로 추출하고 1N 염산 수용액, 포화 염화나트륨 수용액 각각 300 ml로 순차적으로 세척한 후, 유기층을 무수 황산마그네슘으로 처리하여 여과하여 감압 농축하였다. 생성된 혼합물을 디에틸에테르로 침전하여 백색 고형의 표제 화합물 18.8 g(36.4 mmol)을 얻었다.
실시예 6-3: mPEG2K-O-A-DHC (R은 메틸기이고, X는 O이고, n은 44.3(평균)이고, Y 1 은 메틸기인 화학식 2A의 화합물)의 제조
화학식 4의 7-디하이드로콜레스테롤 0.2 g(0.48 mmol)과 상기 실시예 6-2에서 수득한 mPEG2K-Ala-OH 0.10 g(0.23 mmol)을 디클로로메탄 100 ml에 용해하고, 4-디메틸아미노피리딘 0.14 g(1.14 mmol)을 첨가하였다. 그리고 N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸-카르보디이미드 0.2 g(1.14 mmol)을 천천히 가한 후 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 1.0 N 염산 수용액, 포화 탄산수소나트륨 수용액, 포화 염화나트륨 수용액으로 순차적으로 세척하고, 유기층을 무수 황산마그네슘으로 처리한 후 여과하여 감압 농축하고, 진공 건조하여 표제 화합물 1.06g을 얻었다.
1H NMR 400 MHz(CDCl3) δ 5.59(dd, 1H), 5.44(dd, 1H), 5.41(bs, 1H), 4.36(q, 1H), 4.22(t, 2H), 3.83(t, 2H), 3.77-3.52(PEG back-bone), 3.48(t, 2H), 3.39(s, 3H), 2.80(dt, 2H), 2.55(d, 2H), 2.41(d, 2H), 2.19-1.77(m, 6H), 1.74-1.52(m, 6H), 1.43-1.08(m, 11H), 0.96(s, 6H), 0.89(d, 3H), 0.88(d, 3H), 0.63(s, 3H)
실시예 7: mPEG2K-NH-A-DHC (R은 메틸기이고, n은 44.3(평균)이고, X는 NH이고, Y 1 은 메틸기이고, m은 1인 화학식 2B의 화합물)의 제조
실시예 7-1: mPEG2K-NH-Ala-Fmoc(R은 메틸기이고, n은 44.3(평균)이고, X는 NH이고, Y 1 은 메틸기이고, Z b 가 Fmoc인 화학식 13의 화합물)의 제조
mPEG2K-NH2(R은 메틸기이고, n은 44.3이고, X가 NH인 화학식 6의 화합물) 280 mg(0.14 mmol), HOBt 94.6 mg(0.70 mmol), 디이소프로필에틸아민 90.5 mg(0.70 mmol)을 디메틸포름아마이드(DMF)에 용해하고 10분간 교반한 용액에, Fmoc-Ala-OH(Zb가 Fmoc이고, Y1이 메틸기인 화학식 12의 화합물) 218.0 mg(0.70 mmol)과 PyBOP 364.5 mg(0.70 mmol)을 용해하고 10분간 교반한 용액을 넣고 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 1N 염산 수용액, 포화 염화나트륨 수용액 각각 150ml로 순차적으로 세척하고, 유기층을 무수 황산마그네슘으로 처리한 후 여과하여 감압 농축하였다. 생성된 혼합물을 디에틸에테르로 침전하여 백색 고형의 표제 화합물 301.1 mg을 얻었다.
실시예 7-2: mPEG2K-NH-Ala-H (R은 메틸기이고, n은 44.3(평균)이고, X는 NH이고, Y 1 은 메틸기인 화학식 14의 화합물)의 제조
상기 실시예 7-1에서 수득한 mPEG2K-NH-Ala-Fmoc 300 mg(0.13 mmol)을 피페리딘이 25% 포함되어 있는 DMF 용액 6 ml에 용해하고 실온에서 3 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 디에틸에테르 100 ml에 넣고 침전하여 백색의 고체 표제 화합물 0.26 mg을 얻었다.
실시예 7-3: mPEG2K-NH-A-DHC (R은 메틸기이고, n은 44.3(평균)이고, X는 NH이고, Y 1 은 메틸기이고, m은 1인 화학식 2B의 화합물)의 제조
상기 실시예 1-1에서 수득한 7-디하이드로콜레스테롤 숙신산 120 mg(0.24 mmol)과 mPEG2K-NH-Ala-H 250 mg(0.12 mmol)을 디클로로메탄 5 ml에 용해하고, 4-디메틸아미노피리딘 17.7 mg(0.14 mmol)을 첨가하였다. 그리고 N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸-카르보디이미드 69.5 mg(0.36 mmol)을 천천히 가한 후 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 1.0 N 염산 수용액, 포화 탄산수소나트륨 수용액, 포화 염화나트륨 수용액으로 순차적으로 세척하고, 유기층을 무수 황산마그네슘으로 처리한 후 여과하여 감압 농축하고, 진공 건조하여 표제 화합물 283 mg을 얻었다.
1H NMR 400 MHz(CDCl3) δ 5.59(dd, 1H), 5.44(m, 3H), 4.33(q, 1H), 4.23(m, 1H), 3.66(PEG backbone), 3.48(t, 2H), 3.39(s, 3H), 2.72(dt, 2H), 2.64(dt, 2H), 2.52(d, 1H), 2.48(d, 3H), 2.39(t, 1H), 2.18-1.85(m, 6H), 1.82-1.50(m, 6H), 1.48-0.93(m, 11H), 0.97(s, 6H), 0.90(d, 3H), 0.89(d, 3H) 0.64(s, 3H)
실시예 8: mPEG2K-P-Ala-DHC (R은 메틸기이고, n은 44.3(평균)이고, m은 1이고, Y 1 은 메틸기인 화학식 2C의 화합물)의 제조
실시예 8-1: mPEG2K-P-NHS (R은 메틸기이고, n은 44.3(평균)이고, m은 1이고, L이 숙신이미드인 화학식 15b의 화합물)의 제조
mPEG-PA(R은 메틸기이고, n은 44.3(평균)이고, m이 1인 화학식 7b의 화합물) 1 g(0.476 mmol)을 디클로로메탄 7 ml에 용해한 용액에 N-히드록시숙신이미드 0.27 g(2.38 mmol), 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드 0.45 g(2.38 mmol), 디메틸아미노피리딘 0.18 g(1.198 mmol)을 가하고 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 디클로로메탄 100 ml로 추출하고 1N 염산 수용액, 포화 탄산수소나트륨 수용액, 포화 염화나트륨 수용액 각각 100 ml로 순차적으로 세척한 후, 유기층을 무수 황산마그네슘으로 처리하고 여과하여 감압 농축하였다. 생성된 혼합물을 디에틸에테르로 침전하여 흰색 고형의 표제 화합물 0.94 g을 얻었다.
실시예 8-2: mPEG2K-P-Ala-OH (R은 메틸기이고, n은 44.3(평균)이고, m은 1이고, Y 1 은 메틸기인 화학식 16의 화합물)의 제조
상기 실시예 8-1에서 수득한 mPEG2K-P-NHS 450 mg(0.21 mmol)을 디클로로메탄 5 ml에 용해한 용액을 H-Ala-OH 92.4 mg(1.04 mmol)과 트리에틸아민 115.5 mg(1.14 mmol)을 디클로로메탄 2.5 ml과 디메틸포름아미드 2.5 ml에 용해한 용액에 천천히 적가하고 실온에서 3 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 1.0 N 염산 수용액, 포화 탄산수소나트륨 수용액, 포화 염화나트륨 수용액으로 순차적으로 세척하고, 유기층을 무수 황산마그네슘으로 처리한 후 여과하여 감압 농축하고, 진공 건조하여 표제 화합물 478 mg을 얻었다.
실시예 8-3: mPEG2K-P-Ala-DHC (R은 메틸기이고, n은 44.3(평균)이고, m은 1이고, Y 1 은 메틸기인 화학식 2C의 화합물)의 제조
화학식 4의 7-디하이드로콜레스테롤 90.4 mg(0.24 mmol)과 상기 실시예 8-2에서 수득한 mPEG2K-P-Ala-OH 420 mg(0.19 mmol)을 디클로로메탄 10 ml에 용해하고, 4-디메틸아미노피리딘 35.9 mg(0.29 mmol)을 첨가하였다. 그리고 N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸-카르보디이미드 93.9 mg(0.49 mmol)을 천천히 가한 후 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 1.0 N 염산 수용액, 포화 탄산수소나트륨 수용액, 포화 염화나트륨 수용액으로 순차적으로 세척하고, 유기층을 무수 황산마그네슘으로 처리한 후 여과하여 감압 농축하고, 진공 건조하여 표제 화합물 457 mg을 얻었다.
1H NMR 400 MHz(CDCl3) δ 5.59(dd, 1H), 5.44(m, 3H), 4.26(q, 1H), 4.23(m, 1H), 3.66(PEG backbone), 3.39(s, 3H), 2.60(t, 2H), 2.52(d, 1H), 2.39(t, 1H), 2.18-1.85(m, 6H), 1.82-1.50(m, 6H), 1.50(d, 3H), 1.48-0.93(m, 11H), 0.97(s, 6H), 0.90(d, 3H), 0.89(d, 3H) 0.64(s, 3H)
실시예 9: α-mPEG2K-NH-γ-mPEG2K-P-Dab-DHC (R은 메틸기이고, n은 44.3(평균)이고, X는 NH이고, m과 m’은 각각 1인 화학식 2D의 화합물)의 제조
실시예 9-1: α-mPEG2K-NH-Dab(tBoc)-Fmoc (R은 메틸기이고, n은 44.3(평균)이고, X는 NH이고, m’이 1이고, Z a 는 tBoc 보호기이고, Z b 가 Fmoc 보호기인 화학식 18의 화합물)의 제조
mPEG2K-NH2 400 mg(0.20 mmol), HOBt 135.2 mg(1.00 mmol), 디이소프로필에틸아민 129.3 mg(1.00 mmol), Fmoc-Dab(tBoc)-OH(m’이 1이고, Za는 tBoc 보호기이고, Zb가 Fmoc 보호기인 화학식 17의 화합물) 264.4 mg(0.60 mmol)과 PyBOP 520.6 mg(1.00 mmol), DMF 40 ml을 사용하여 상기 실시예 7-1과 동일한 제조 방법으로 백색 고형의 표제 화합물 473 mg을 얻었다.
실시예 9-2: α-mPEG2K-NH-Dab-Fmoc (R은 메틸기이고, n은 44.3(평균)이고, X는 NH이고, m’이 1이고, Z b 가 Fmoc 보호기인 화학식 19의 화합물)의 제조
상기 실시예 9-1에서 수득한 α-mPEG2K-NH-Dab(tBoc)-Fmoc 450 mg(0.47 mmol)을 디클로로메탄 5 ml에 용해한 용액에 트리플루오로아세트산 5 ml을 가하고 실온에서 3시간 교반하였다. 반응용액에 디클로로메탄 50 ml를 가하고 포화 탄산수소나트륨 수용액, 포화 염화나트륨 수용액 각각 50 ml로 세척한 후, 유기층을 무수 황산마그네슘으로 처리하고 여과하여 감압 농축하였다. 생성된 혼합물을 디에틸에테르로 침전하여 흰색 고체 형태의 표제 화합물 428 mg을 얻었다.
실시예 9-3: α-mPEG2K-NH-γ-mPEG2K-P-Dab-Fmoc (R은 메틸기이고, n은 44.3(평균)이고, X는 NH이고, m과 m’은 각각 1이고, Z b 가 Fmoc 보호기인 화학식 20의 화합물)의 제조
상기 실시예 9-2에서 수득한 α-mPEG2K-NH-Dab-Fmoc 420 mg(0.18 mmol)을 디클로로메탄 8 ml에 용해하고, mPEG2K-PA 374.9 mg(0.18 mmol), 4-디메틸아미노피리딘 33.2 mg(0.27 mmol)을 첨가하였다. 그리고 N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸-카르보디이미드 69.4 mg(0.36 mmol)을 천천히 가한 후 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 1.0 N 염산 수용액, 포화 탄산수소나트륨 수용액, 포화 염화나트륨 수용액으로 순차적으로 세척하고, 유기층을 무수 황산마그네슘으로 처리한 후 여과하여 감압 농축하고, 진공 건조하여 표제 화합물 750 mg을 얻었다.
실시예 9-4: α-mPEG2K-NH-γ-mPEG2K-P-Dab-H (R은 메틸기이고, n은 44.3(평균)이고, X는 NH이고, m과 m’은 각각 1인 화학식 21의 화합물)의 제조
상기 실시예 9-3에서 수득한 α-mPEG2K-NH-γ-mPEG2K-P-Dab-Fmoc 700 mg(0.16 mmol)을 피페리딘이 25% 포함되어 있는 DMF 용액 14 ml에 용해하고 실온에서 3 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 디에틸에테르 100 ml에 넣고 침전하여 백색의 고체 표제 화합물 651 mg을 얻었다.
실시예 9-5: α-mPEG2K-NH-γ-mPEG2K-P-Dab-DHC (R은 메틸기이고, n은 44.3(평균)이고, X는 NH이고, m과 m’은 각각 1인 화학식 2D의 화합물)의 제조
상기 실시예 1-1에서 수득한 7-디하이드로콜레스테롤 숙신산 64.2 mg(0.13 mmol)과 상기 실시예 9-4에서 수득한 α-mPEG2K-NH-γ-mPEG2K-P-Dab-H 550 mg(0.13 mmol)을 디클로로메탄 10 ml에 용해하고, 4-디메틸아미노피리딘 24.3 mg(0.20 mmol)을 첨가하였다. 그리고 N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸-카르보디이미드 50.8 mg(0.26 mmol)을 사용하여 실시예 7-3과 동일한 제조 방법으로 표제 화합물 587 mg을 얻었다.
1H NMR 400 MHz(CDCl3) δ 5.74(m, 2H), 5.59(d, 1H), 5.44(m, 2H), 4.35(m, 1H), 4.23(m, 3H), 3.84-3.66(PEG back-bone), 3.57(m, 6H), 3.48(t, 2H), 3.39(s, 6H), 2.72(dt, 2H), 2.64(dt, 2H), 2.62(t, 2H), 2.53-2.39(m, 4H), 2.20-1.52(m, 16H), 1.41-1.06(m, 11H), 0.96(s, 6H), 0.89(d, 3H), 0.88(d, 3H), 0.63(s, 3H)
실시예 10: α-mPEG2K-γ-mPEG2K-P-Dab-DHC (R은 메틸기이고, n은 44.3(평균)이고, X는 O이고, m과 m’은 각각 1인 화학식 2E의 화합물)의 제조
실시예 10-1: mPEG2K-Dab(tBoc)-OH (R은 메틸기이고, n은 44.3(평균)이고, X는 O이고, m’이 1이고, Z a 가 tBoc인 화학식 23의 화합물)의 제조
상기 실시예 6-1에서 수득한 mPEG2K-NPC 2 g(0.91 mmol)을 아세토니트릴 15 ml, 증류수 10 ml에 용해한 용액에 H-Dab(tBoc)-OH (m’이 1이고, Za가 tBoc인 화학식 22의 화합물) 0.59 g(2.72 mmol), 디이소프로필에틸아민 0.46 ml(2.72 mmol)을 사용하여 상기 실시예 6-2와 동일한 제조 방법으로 표제 화합물 1.67 g을 얻었다.
실시예 10-2: mPEG2K-Dab-OH (R은 메틸기이고, n은 44.3(평균)이고, X는 O이고, m’이 1인 화학식 24의 화합물)의 제조
상기 실시예 10-1에서 수득한 mPEG2K-Dab(tBoc)-OH 1 g(0.47 mmol)을 디클로로메탄 10 ml에 용해한 용액에 트리플루오로아세트산 10 ml(0.13 mmol)을 가하고 상기 실시예 9-2와 동일한 제조 방법으로 표제 화합물 0.76 g을 얻었다.
실시예 10-3: α-mPEG2K-γ-mPEG2K-P-Dab-OH (R은 메틸기이고, n은 44.3(평균)이고, X는 O이고, m과 m’은 각각 1인 화학식 25b의 화합물)의 제조
상기 실시예 10-2에서 수득한 mPEG2K-Dab-OH 0.34 g(0.16 mmol)과 실시예 8-1에서 수득한 mPEG2K-P-NHS 0.35 g(0.16 mmol)을 디클로로메탄 5 ml에 용해한 용액에 트리에틸아민 87 ㎕를 가하고 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 용액에 디클로로메탄 100 ml를 가하고 1N 염산 수용액, 포화 염화나트륨 수용액 각각 100 ml로 순차적으로 세척한 후, 유기층을 무수 황산마그네슘으로 처리하고 여과하여 감압 농축하였다. 생성된 혼합물을 디에틸에테르로 침전하여 흰색 고체 형태의 표제 화합물 0.54 g을 얻었다.
실시예 10-4: α-mPEG2K-γ-mPEG2K-P-Dab-DHC (R은 메틸기이고, n은 44.3(평균)이고, X는 O이고, m과 m’은 각각 1인 화학식 2E의 화합물)의 제조
화학식 4의 7-디하이드로콜레스테롤 38.0 mg(0.098 mmol)과 상기 실시예 10-3에서 수득한 α-mPEG2K-γ-mPEG2K-P-Dab-OH 0.10 g(0.049 mmol)을 디클로로메탄 50 ml에 용해하고, 4-디메틸아미노피리딘 6.0 mg(0.247 mmol)을 첨가하였다. 그리고 N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸-카르보디이미드 95 mg(0.494 mmol)을 천천히 가한 후 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 1.0 N 염산 수용액, 포화 탄산수소나트륨 수용액, 포화 염화나트륨 수용액으로 순차적으로 세척하고, 유기층을 무수 황산마그네슘으로 처리한 후 여과하여 감압 농축하고, 진공 건조하여 표제 화합물 0.48 g을 얻었다.
1H NMR 400 MHz(CDCl3) δ 6.85(bs, 1H), 5.74(m, 1H), 5.59(d, 1H), 5.32(d, 1H), 4.35(m, 1H), 4.23(m, 3H), 3.84-3.66(PEG back-bone), 3.49(t, 2H), 3.39(s, 6H), 2.53-2.39(m, 4H), 2.20-1.52(m, 8H), 1.41-1.06(m, 11H), 0.96(s, 6H), 0.89(d, 3H), 0.88(d, 3H), 0.63(s, 3H)
실시예 11: α-mPEG5K-γ-mPEG5K-S-Dab-DHC (R은 메틸기이고, n은 113.0(평균)이고, X는 O이고, m과 m’은 각각 1인 화학식 2F의 화합물)의 제조
실시예 11-1: mPEG5K-S-NHS (R은 메틸기이고, n은 113.0(평균)이고, X는 O이고, m은 1이고, L이 NHS인 화학식 15a의 화합물)의 제조
mPEG5K-SA(R은 메틸기이고, n은 113.0(평균)이고, X는 O이며, m이 1인 화학식 7a의 화합물) 1.0 g(0.20 mmol)을 사용하고, N-히드록시숙신이미드 0.16 g(1.4 mmol), 디메틸아미노피리딘 73 mg(0.6 mmol), 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드 0.27 g(1.4 mmol), 디클로로메탄 7 ml을 넣고, 상기 실시예 8-1과 동일한 제조 방법으로 백색 고형의 표제 화합물 0.93 g을 얻었다.
실시예 11-2: mPEG5K-Dab(tBoc)-OH (R은 메틸기이고, n은 113.0(평균)이고, X는 O이고, m’은 1이고, Z a 가 tBoc인 화학식 23의 화합물)의 제조
mPEG5K-NPC 2 g(0.384 mmol)을 아세토니트릴 10 ml, 증류수 10 ml에 용해한 용액에 H-Dab(tBoc)-OH 0.17 g(0.768 mmol), 디이소프로필에틸아민 0.2 ml(1.15 mmol)을 가하고 상기 실시예 10-1과 동일한 제조 방법으로 표제 화합물 1.7 g을 얻었다.
실시예 11-3: mPEG5K-Dab-OH (R은 메틸기이고, n은 113.0(평균)이고, X는 O이고, m’은 1인 화학식 24의 화합물)의 제조
상기 실시예 11-2에서 수득한 mPEG5K-Dab(tBoc)-OH 1.3 g(0.254 mmol), 트리플루오로아세트산 13 ml, 디클로로메탄 13 ml을 사용하여 실시예 9-2와 동일한 제조 방법으로 표제 화합물 1.2 g을 얻었다.
실시예 11-4: α-mPEG5K-γ-mPEG5K-S-Dab-OH (R은 메틸기이고, n은 113.0(평균)이고, X는 O이고, m과 m’은 각각 1인 화학식 25a의 화합물)의 제조
상기 실시예 11-3에서 수득한 mPEG5K-Dab-OH 0.79 g(0.15 mmol)과 상기 실시예 11-1에서 수득한 mPEG5K-S-NHS 0.8 g(0.15 mmol)을 디클로로메탄 15 ml에 용해한 용액에 트리에틸아민 0.1 ml를 가하고 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 용액에 디클로로메탄 50 ml를 가하고 1N 염산 수용액, 포화 염화나트륨 수용액 각각 50 ml로 순차적으로 세척한 후, 유기층을 무수 황산마그네슘으로 처리하고 여과하여 감압 농축하였다. 생성된 혼합물을 디에틸에테르로 침전하여 흰색 고체 형태의 표제 화합물 1.35 g을 얻었다.
실시예 11-5: α-mPEG5K-γ-mPEG5K-S-Dab-DHC (R은 메틸기이고, n은 113.0(평균)이고, X는 O이고, m과 m’은 각각 1인 화학식 2F의 화합물)의 제조
화학식 4의 7-디하이드로콜레스테롤 38.0 mg(0.098 mmol)과 상기 실시예 11-4에서 수득한 α-mPEG5K-γ-mPEG5K-S-Dab-OH 0.5 g(0.049 mmol)을 디클로로메탄 10 ml에 용해하고, 4-디메틸아미노피리딘 6.0 mg(0.247 mmol)을 첨가하였다. 그리고 N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸-카르보디이미드 95 mg(0.494 mmol)을 천천히 가한 후 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 1.0 N 염산 수용액, 포화 탄산수소나트륨 수용액, 포화 염화나트륨 수용액으로 순차적으로 세척하고, 유기층을 무수 황산마그네슘으로 처리한 후 여과하여 감압 농축하고, 진공 건조하여 표제 화합물 0.49 g을 얻었다.
1H NMR 400 MHz(CDCl3) δ 6.79(bs, 1H), 5.69(m, 1H), 5.53(d, 1H), 5.30(d, 1H), 4.29(m, 1H), 4.17(m, 3H), 3.91-3.50(PEG backbone), 3.45(t, 4H), 3.34(t, 4H), 3.34(s, 6H), 2.55-2.48(m, 8H), 2.1-1.62(m, 14H), 1.42-1.14(m, 11H), 0.95(s, 6H), 0.84(d, 3H), 0.82(d, 3H), 0.59(s, 3H)
실시예 12: α-mPEG350-γ-DHC-Dab-DHC (R은 메틸기이고, n은 7.25(평균)이고, X는 O이고, m과 m’은 각각 1인 화학식 2G의 화합물)의 제조
실시예 12-1: mPEG350-NPC (R이 메틸기이고, X가 O이고, n은 7.25(평균)인 화학식 8의 화합물)의 제조
건조된 mPEG350-OH(R이 메틸기이고, n이 7.25(평균)이고, X가 O인 화학식 6의 화합물) 15 g(42.86 mmol)을 디클로로메탄 200 ml에 용해한 용액에 4-니트로페닐클로로포메이트 12.9 g(64.29 mmol), 피리딘 5.0 ml(64.29 mmol)을 가하고 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 1N 염산 수용액, 포화 염화나트륨 수용액 각각 150 ml로 순차적으로 세척하고, 유기층을 무수 황산마그네슘으로 처리한 후 여과하여 감압 농축하였다. 생성된 혼합물을 메탄올과 디클로로메탄으로 실리카겔 컬럼크로마토그래피하여 무색 오일 형태의 표제 화합물 18.8 g을 얻었다.
실시예 12-2: α-mPEG350-Dab(tBoc)-OH (R이 메틸기이고, X가 O이고, n은 7.25(평균)이고, m’은 1이고, Z a 가 tBoc 보호기인 화학식 23의 화합물)의 제조
상기 실시예 12-1에서 수득한 mPEG350-NPC 1.0 g(1.94 mmol)을 아세토니트릴 20 ml, 증류수 20 ml에 용해한 용액에 H-Dab(tBoc)-OH 0.64 g(2.91 mmol), 디이소프로필에틸아민 0.50 g(3.88 mmol)을 사용하여 상기 실시예 6-2와 동일한 제조 방법으로 얻은 혼합물을 실리카겔 컬럼크로마토그래피하여 표제 화합물 0.98 g을 얻었다.
실시예 12-3: α-mPEG350-Dab(tBoc)-DHC (R이 메틸기이고, X가 O이고, n은 7.25(평균)이고, m’은 1이고, Z a 가 tBoc 보호기인 화학식 26의 화합물)의 제조
화학식 4의 7-디하이드로콜레스테롤 582.6 mg(0.098 mmol)과 상기 실시예 12-2에서 수득한 α-mPEG350-Dab(tBoc)-OH 900 mg(1.51 mmol)을 디클로로메탄 10 ml에 용해하고, 4-디메틸아미노피리딘 208.2 mg(1.70 mmol)을 첨가하였다. 그리고 N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸-카르보디이미드 435.5 mg(2.27 mmol)을 사용하여 상기 실시예 6-3과 동일한 제조 방법으로 얻은 혼합물을 실리카겔 컬럼크로마토그래피하여 표제 화합물 1.23 g을 얻었다.
실시예 12-4: α-mPEG350-Dab-DHC (R이 메틸기이고, X가 O이고, n은 7.25(평균)이고, m’은 1 인 화학식 27의 화합물)의 제조
상기 실시예 12-3에서 수득한 α-mPEG350-Dab(tBoc)-DHC 250 mg(0.26 mmol)을 디클로로메탄 2.5 ml에 용해한 용액에 트리플루오로아세트산 2.5 ml을 가하고 실시예 9-2와 동일한 제조 방법으로 얻은 혼합물을 실리카겔 컬럼크로마토그래피하여 표제 화합물 194 mg을 얻었다.
실시예 12-5: α-mPEG350-γ-DHC-Dab-DHC (R은 메틸기이고, n은 7.25(평균)이고, X는 O이고, m과 m’은 각각 1인 화학식 2G의 화합물)의 제조
상기 실시예 1-1에서 수득한 7-디하이드로콜레스테롤 숙신산 56.3 mg(0.12 mmol)과 상기 실시예 12-4에서 수득한 α-mPEG350-Dab-DHC 100 mg(0.12 mmol)을 디클로로메탄 5 ml에 용해하고, 4-디메틸아미노피리딘 21.3 mg(0.17 mmol)을 첨가하였다. 그리고 N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸-카르보디이미드 44.5 mg(0.23 mmol)을 사용하여 실시예 7-3과 동일한 제조 방법으로 표제 화합물 141 mg을 얻었다.
1H NMR 400 MHz(CDCl3) δ 6.85(bs, 1H), 5.74(m, 1H), 5.59(d, 2H), 5.44(m, 2H), 4.35(t, 2H), 4.33(m, 2H), 4.22(m, 1H), 3.84-3.66(PEG back-bone), 3.39(s, 3H), 2.72(dt, 2H), 2.64(dt, 2H), 2.53-2.39(m, 6H), 2.23-1.51(m, 14H), 1.41-1.06(m, 22H), 0.97(s, 12H), 0.88(d, 6H), 0.87(d, 6H), 0.63(s, 6H)
상기 실시예 1 내지 12에서 수득한 본 발명에 따른 페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체의 화학 구조식을 하기 표 1에 나타내었다.
Figure 112015009429824-pat00020
실험예 1: 용해도 시험
증류수 100 ml에 실시예 1 및 실시예 5의 화합물과 비교 물질로 7-디하이드로콜레스테롤을 각각 100 mg씩 넣고, 상온에서 1 시간 정도 교반하였다. 용해되지 않을 때까지 계속 반복하고, 용해되지 않은 물질은 여과하여 상기 화합물의 포화 수용액을 각각 제조하였다.
그런 다음, 측량한 빈 용기(A)에 포화 수용액을 넣고 측량(B)한 후, 감압 농축하고 진공 건조하여 측량(C)하고, 하기 수학식 1에 의해 용해도를 산출하였다. 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다.
[수학식 1]
Figure 112015009429824-pat00021
7-디하이드로콜레스테롤 실시예 1의 화합물 실시예 5의 화합물
용해도 불용성 0.02889
(0.289 mg/ml)		 22.783
(227.8 mg/ml)
상기 표 2에서 보듯이, 실시예 1 및 5에서 수득한 페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체가 7-디하이드로콜레스테롤보다 물에 대한 용해도가 현저히 우수함을 확인하였다.
실험예 2: 열 안정성 시험
상기 실시예 1의 화합물을 디메틸설폭사이드에 10 mM의 농도로 용해하여 용액을 제조하였다. 비교 물질로 7-디하이드로콜레스테롤을 디메틸설폭사이드와 메탄올(9:1)에 10 mM의 농도로 용해하여 용액을 제조하였다. 제조한 용액을 각각 1.5 ml씩 분획하여 넣어 빛을 차단하고 각각 40℃, 70℃ 항온에 방치하고, 일정 시간 후에 회수한 후, 시험 용액을 메탄올로 희석하여 검액 농도를 1 mM로 하여 HPLC로 분석하였다. 그 결과를 도 1 및 도 2에 나타내었다.
HPLC의 분석 조건은 다음과 같다.
분석기기명: Agilent HPLC 1260
컬럼: C18 (150 x 4.6 mm/5 um)
전개용매: 아세토니트릴: 메탄올= 6: 4
컬럼 온도: 30 oC
분해율(%) = [Ctx/Ct0] X 100(%)
Ct0 = 0 시간의 실시예 1의 피크 면적
Ctx = X 시간의 실시예 1의 피크 면적
도 1 및 도 2에서 보듯이, 실시예 1에서 수득한 페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체가 7-디하이드로콜레스테롤보다 열에 대한 안정성이 우수함을 확인하였다.
실험예 3: 빛 안정성 시험
상기 실시예 1의 화합물을 디메틸설폭사이드에 10 mM의 농도로 용해하여 용액을 제조하였다. 비교 물질로 7-디하이드로콜레스테롤을 디메틸설폭사이드와 메탄올(9:1)에 10 mM의 농도로 용해하여 용액을 제조하였다. 제조한 용액을 플레이트 웰에 150 ㎕ 분획하여 UV(중파장, 315 nm, width: 12 cm)로 조사하였다. 일정 시간 후에 회수하고, 메탄올로 희석하여 시험 용액을 1 mM 농도로 제조하여 HPLC로 분석하였다. 그 결과를 도 3에 나타내었다.
HPLC의 분석 조건은 다음과 같다.
분석기기명: Agilent HPLC 1260
컬럼: C18 (150 x 4.6 mm/5 um)
전개용매: 아세토니트릴: 메탄올= 6: 4
컬럼 온도: 30 oC
분해율(%) = [Ctx/Ct0] X 100(%)
Ct0 = 0 시간의 실시예 1의 피크 면적
Ctx = X 시간의 실시예 1의 피크 면적
도 3에서 보듯이, 실시예 1에서 수득한 페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체가 7-디하이드로콜레스테롤보다 빛에 대한 안정성이 우수함을 확인하였다.

Claims (16)

  1. 하기 화학식 I의 페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체:
    [화학식 I]
    Figure 112016083414887-pat00022

    상기 식에서,
    R은 C1-C6의 알킬기이고,
    G는 -XCONHCYCO-, -XCOCYNHCO(CH2)mCH2CO- 또는 -XCH2(CH2)mCONHCYCO-이며,
    X는 O, NH 또는 S이고,
    Y는 수소, C1-C6의 알킬기, (CH2)m'CH2NHCO(CH2)mCH2(OCH2CH2)nOR, (CH2)m'CH2NHCOCH2(CH2)mCO(OCH2CH2)nOR 또는 (CH2)m'CH2NHCOCH2(CH2)mCO-DHC이며,
    n은 1 내지 700의 정수이고,
    m 및 m’는 각각 독립적으로 1 내지 3의 정수이다.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 제1항에 있어서, 하기 화학식 2A의 화합물인 페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체:
    [화학식 2A]
    Figure 112016015688975-pat00025

    상기 식에서,
    R은 C1-C6의 알킬기이고,
    X는 O 또는 NH이며,
    n은 1 내지 700의 정수이고,
    Y1은 C1-C6의 알킬기이다.
  5. 제1항에 있어서, 하기 화학식 2B의 화합물인 페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체:
    [화학식 2B]
    Figure 112016015688975-pat00026

    상기 식에서,
    R은 C1-C6의 알킬기이고,
    X는 O 또는 NH이며,
    n은 1 내지 700의 정수이고,
    m은 1 내지 3의 정수이며,
    Y1은 C1-C6의 알킬기이다.
  6. 제1항에 있어서, 하기 화학식 2C의 화합물인 페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체:
    [화학식 2C]
    Figure 112016015688975-pat00027

    상기 식에서,
    R은 C1-C6의 알킬기이고,
    n은 1 내지 700의 정수이며,
    m은 1 내지 3의 정수이고,
    Y1은 C1-C6의 알킬기이다.
  7. 제1항에 있어서, 하기 화학식 2D의 화합물인 페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체:
    [화학식 2D]
    Figure 112016015688975-pat00028

    상기 식에서,
    R은 C1-C6의 알킬기이고,
    X는 O 또는 NH이며,
    n은 1 내지 700의 정수이고,
    m 및 m’는 각각 독립적으로 1 내지 3의 정수이다.
  8. 제1항에 있어서, 하기 화학식 2E의 화합물인 페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체:
    [화학식 2E]
    Figure 112016015688975-pat00029

    상기 식에서,
    R은 C1-C6의 알킬기이고,
    X는 O 또는 NH이며,
    n은 1 내지 700의 정수이고,
    m 및 m’는 각각 독립적으로 1 내지 3의 정수이다.
  9. 제1항에 있어서, 하기 화학식 2F의 화합물인 페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체:
    [화학식 2F]
    Figure 112016015688975-pat00030

    상기 식에서,
    R은 C1-C6의 알킬기이고,
    X는 O 또는 NH이며,
    n은 1 내지 700의 정수이고,
    m 및 m’는 각각 독립적으로 1 내지 3의 정수이다.
  10. 제1항에 있어서, 하기 화학식 2G의 화합물인 페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체:
    [화학식 2G]
    Figure 112016015688975-pat00031

    상기 식에서,
    R은 C1-C6의 알킬기이고,
    X는 O 또는 NH이며,
    n은 1 내지 700의 정수이고,
    m 및 m’는 각각 독립적으로 1 내지 3의 정수이다.
  11. 제1항 및 제4항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서,
    n은 3 내지 200의 정수인 페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체.
  12. 제1항 및 제7항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서,
    m 및 m’는 1인 페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체.
  13. 제5항 및 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
    m은 1인 페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체.
  14. 제1항 및 제4항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체를 포함하는 주름개선용 화장료 조성물.
  15. 제1항 및 제4항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체를 포함하는 주름개선용 약제학적 조성물.
  16. 제1항 및 제4항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 페길레이션된 7-디하이드로콜레스테롤 유도체를 포함하는 주름개선용 건강기능식품.
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