KR101619730B1 - Ｐｃｖ2 항원을 이용한 돼지의 치료 - Google Patents

Abstract

a) 항-PCV2 항체를 보유하거/하거나 b) 1 내지 22일령의 어린 새끼돼지인 동물에서 PCV2 감염에 대한 또는 PCV2 감염과 관련이 있거나 PCV2 감염에 의해 유발된 임상 증상의 감소를 위한 치료 또는 예방 방법으로서, 상기 치료를 필요로 하는 동물에게 PCV2 항원의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다. 상기 동물은 돼지 또는 어린 새끼돼지인 것이 바람직하다.

돼지 써코바이러스 2형, PCV2 감염, 항-PCV2 항체 역가, PCV2 항원, 바이러스혈증

Description

ＰＣＶ2 항원을 이용한 돼지의 치료{Treatment of pigs with PCV2 antigen}

관련 출원

본 출원은 2006년 12월 15일에 출원된 미국 특허원 제60/870,311호에 대해 우선권을 주장하며, 상기 특허원의 교시와 내용은 본원에 참고인용된다.

서열 목록

본 출원은 서면 형식과 컴퓨터 판독형태의 서열목록을 포함하며, 이 목록의 교시와 내용은 본원에 참고인용된다. 또한, 이 서열목록은 WO 06/072065에 포함된 것과 동일하다.

본 발명은 항-PCV2 특이적 항체를 보유한 동물에서, 임상 징후의 예방, 증증도 감소, 감염 및/또는 임상 징후의 빈도 감소 및 여러 임상 소견 (질환)을 치료하기 위한, 돼지 써코바이러스 2형 (PCV2) 항원을 포함하는 면역원성 조성물의 용도에 관한 것이다. 항-PCV2 특이적 항체는 모계 항체인 것이 바람직하다.

돼지 써코바이러스 2형 (PCV2)은 소형 (17-22 ㎚ 직경)의 다면체형 비-외피 DNA 바이러스인데, 이는 일본쇄 원형 게놈을 보유한다. PCV2는 돼지 써코바이러스 1형 (PCV1)과 대략 80% 서열 동일성을 공유한다. 하지만, 일반적으로 비-병독성인 PCV1과 대조적으로, PCV2에 의한 돼지 감염은 통합적으로 돼지 써코바이러스 관련 질환 (PCVAD) (돼지 써코바이러스 질환 (PCVD)이라고도 불림)으로 지칭되는 다수의 질환 증후군과 관련이 있었다 (Allan et al., 2006, IPVS Congress). 이유후 전신 소모성 증후군 (Post-weaning Multisystemic Wasting Syndrome, PMWS)이라고 하는 공통적인 증상을 보인다 (Harding et al., 1997, Swine Health Prod; 5: 201-203; Kennedy et al., 2000, J Comp Pathol; 122: 9-24). PMWS는 임상적으로, 소모 (wasting), 피부의 창백함, 수척, 호흡 곤란, 설사, 황달 (icterus), 황달 (jaundice)로 특성화된다. 일부 병든 돼지에서는 모든 증상의 조합이 나타나는 반면, 다른 돼지에서는 이들 증상 중에서 한두 가지만 나타난다 (Muirhead, 2002, Vet. Rec.; 150: 456). 부검 시에, 현미경적 병소와 거시적 병소 역시 다수의 조직과 장기에서 나타났는데, 림프계 장기 (lymphoid organ)가 병소의 가장 공통적인 부위이다 (Allan and Ellis, 2000; J Vet. Diagn. Invest., 12: 3-14). PCV2 핵산 또는 항원의 양과 현미경적 림프계 병소의 중증도 사이에 강한 상관관계가 관찰되었다. PCV2로 감염된 돼지에 대한 치사율은 80%에 육박할 수 있다. PMWS 이외에, PCV2는 가성 광견병 (pseudorabies), 돼지 생식기및 호흡기 증후군 (porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS), 글래서씨병 (Glasser's disease), 연쇄구균성 수막염 (streptococcal meningitis), 살모넬라증 (salmonellosis), 이유후 대장균증 (postweaning colibacillosis), 식이요법성 간증 (dietetic hepatosis), 화농성 기관지폐렴 (suppurative bronchopneumonia)을 비롯한 여러 다른 감염에도 관여하였다. 하지만, 지금까지의 연구에서는 이러한 모든 임상 증후군들이 실제로 PCV2 감염의 직접적인 결과인지가 확인된 바 없다. 더욱이, 이러한 모든 임상 증후군이 PCV2에 대해 지향성인 활성제에 의해 효과적으로 경감되거나 치유될 수 있는지도 알려진 바가 없다.

DNA 백신을 기초로 한 PCV2 감염의 치료 시도는 미국 특허 6,703,023에 기술되어 있다. WO 03/049703에는 키메릭 생백신의 생산으로서, 병원성 PCV2 균주의 면역원성 유전자를 PCV-1 골격의 유전자 대신에 대체한 PCV-1 골격을 함유하는 생백신의 생산에 대해 기술되어 있다. WO 99/18214는 PCV2 사백신의 제조 절차와 여러 PCV2 균주를 제공했다. 하지만, 효능 데이터는 보고된 것이 없다. 효과적인 ORF-2 기반의 서브유닛 백신은 WO 06/072065 및 WO 2007/028823에 보고되어 있다. 이러한 백신은 모두 3주령 초과의 돼지를 백신접종/치료하기 위한 목적으로 사용되었다. 이러한 백신이 3주령 또는 2주령 미만의 어린 돼지에 사용되는지에 대해서는 기술된 바가 없다.

모계 유래의 면역성은 PCV2 감염 및 PCV2 감염과 관련된 임상 질환에 대하여 어느 정도의 예방성을 부여하는 것으로 밝혀져 있다. 이러한 예방성은 역가 의존적인 것으로, 역가가 높으면 일반적으로 예방성이고, 역가가 낮으면 예방성이 아닌 것으로 밝혀져 있다 (McKeown et al., 2005; Clin. Diagn. Lab. Immunol.; 12: 1347-1351). 이유 돼지에서의 평균 항체 반감기는 19.0일인 것으로 추정되었고, 한 집단에서 PCV2 수동 항체 붕괴 (decay)의 창은 비교적 광범하다 (Opriessnig et al. 2004, J. Swine Health Prod. 12: 186-191). 10 내지 12일령의 돼지에 존재하는 낮은 역가의 PCV 수동 획득 항체는 약 4.9 ± 1.2 주령까지 붕괴하고, 중간 수준의 항체는 약 8.1 ± 1.9주령까지 붕괴하며, 높은 수준의 항체는 약 11.1 ± 2.5주령까지 붕괴하는 것으로 밝혀졌다 (Opriessnig et al., 2006, 37^th Annual Meeting of the American Association of Swine Veterinarians). 감퇴성 항체의 시간에 따른 긴밀 상관관계에서, 역가는 새끼돼지가 약 5주령 및 12주령일 때 나타나는 PCVAD의 1차 임상 징후의 발생을 나타낸다 (Allan et al., 2000, Vet. Diagn. Investigation, 12: 3-14). 더욱이, PCV2는 신생 새끼돼지의 림프절에서도 분리되었고 (Hirai et al., 2001, Vet. Record; 148: 482-484), 이는 어린 새끼돼지들도 보호적 모계 항체 역가가 없다면 PCVAD에 걸릴 수 있음을 시사한다. 항체 역가와 보호 간에 분명한 상관관계는 스페인 현장 연구, 즉 항체 역가가 낮은 7주령 돼지 (평균 항체 역가 1:100, 0 내지 1:320 범위)는 항체 역가가 높은 동물보다 이후 5주 동안 훨씬 높은 치사율을 나타냈다 (Rodriguez-Arrioja et al., 2002, Am. J. Vet. Res. 63: 354-357).

모계 유래의 항체의 존재는 당연하지는 않지만 바이러스 감염에 대한 어느 정도의 보호 효과를 부여할 수 있을 뿐만 아니라 면역화의 효능을 손상시키는 것으로 알려져 있다. 예를 들어, 고전적 돼지열바이러스 (CSFV)에 대한 모계 유래 항체의 높은 역가는 CSFV 백신에 대한 세포매개 면역반응 및 체액성 면역반응을 모두 억제하지만, 낮은 역가는 유의적인 영향을 미치지 않았다 (Suradhat and Damrongwatanapokin, 2003, Vet. Microbiol; 92: 187-194). 또한, PCV2 생백신은 7주령 또는 8주령 이상의 새끼돼지에게 제공했을 때 가장 효과적으로 작용할 것으로 예측되었는데, 그 이유는 이 시기에 모계 항체가 대부분 감퇴되었기 때문이다. 모계 항체 간섭은 백신의 종류, 항원의 종류, 보강제의 종류뿐만 아니라 투여된 항원의 양에 의존적인 (다른 무엇보다) 유인된 면역 반응의 종류 (Th1 대 Th2)에 따라서 영향을 받는다. 결과적으로, 가능한 모계 항체의 간섭은 동일한 병원체에 대하여 보호할지라도 백신마다 달라질 수 있다. 이와 함께, 모계 유래의 항-PCV2 항체는 PCV2에 대하여 어느 정도의 보호 효과를 부여할 수 있지만, 이 항체는 다른 한편으로는 임의의 PCV2 백신의 효능을 손상시킬 수 있다.

능동 면역화에 의한 동물의 보호는 a) 모계 유래 항체 (MDA)의 붕괴 시간이 동물마다 다르고, b) 항체 붕괴 직후에 많은 질환이 생길 수 있다는 사실로 인해 더욱 복잡하다. 이러한 문제를 직시하기 위해, 여러 백신접종 전략은 어린 동물의 2회 (two shot) 백신접종 요법을 예견한다: 1차 백신접종은 MDA가 낮은 동물을 보호하기 위해 어릴 때에 제공한다. 이러한 1차 백신접종은 백신 항원의 간섭으로 인해 MDA 역가가 높은 동물에서는 비효과적일 수 있는 것으로 인정되고 있다. 또한, 이러한 동물을 보호하기 위해서는 높은 MDA 수준이 감퇴한 것으로 예상되는 때에 2차 백신접종이 필요하다. 이러한 종류의 백신접종 계획은 많은 작은 동물의 백신 (예컨대, 개의 파보바이러스병, 개 간염 등에 대한 백신), 말 백신 (예컨대, 말 인플루엔자에 대한 백신) 및 돼지 백신 (예컨대, 악티노바실러스 플루로뉴모니에 (Actinobacillus pleuropneumoniae), 헤모필러스 파라수이스 (Haemophilus parasuis)에 대한 백신)에 사용된다. 5주령 이상의 동물에서 PCVAD의 발병은 4 내지 11주령의 동물에서 일어나는 것으로 보고된 PCV2 항체 붕괴와 연관이 있는 것으로 보이므로, 가능한 모계 항체 간섭을 우회하기 위해 2차 백신접종 요법을 이용하는 PCVAD에 대한 여러 백신의 접근법이 기술된 바 있다. WO 2007/028823에는 모계 유래 항-PCV2 항체를 보유한 새끼돼지에 2회 백신접종 요법을 이용한 20㎍/용량 이상의 항원에 의한 백신접종이 기술되어 있다. 1차 백신접종은 1주령과 4주령 사이에 투여되었다. 모든 동물은, 1차 백신접종 3주 후 (1차 백신접종 시에 높은 MDA 수준을 가졌던 동물에서 모계 유래 항체가 감퇴하거나 중지되는 시기) 다시 백신접종되었다. 따라서, 모계 유래 항-PCV2 항체의 보호 또는 간섭 정도에 대한 정확한 영향을 설명하는 정보는 어디에도 없다. 이러한 이유 때문에, 3주령 이전의 새끼돼지는 1차 백신 요법으로 백신접종하는 것이 권장되지 않는다. 3주령 전의 백신접종은 면역화 효능과 관련하여 어느 정도의 불확실성을 안고 있다. 다른 한편, 모계 유래의 항-PCV2 항체 수준이 낮은 새끼돼지는, 낮은 수준이 정확히 의미하는 바를 알 수는 없지만, 3주령 전의 PCV2 감염에 대하여 충분한 보호를 받지는 못한다. 즉, 3주령 전에 백신접종을 받지 못한 MDA 역가가 낮은 가축떼는 충분한 면역 상태의 부족으로 인하여 PCV2 감염의 내재적인 위험을 갖고 있다.

또한, 이러한 백신이 이미 항-PCV2 항체를 보유하고 있는, 바람직하게는 모계의 항-PCV2 항체를 보유하고 있는 돼지에서 PCV2 감염에 대한 보호 면역성을 부여하거나, 또는 PCV2 감염과 관련된 임의의 임상 증상을 감소시키거나, 그 증상의 중증도를 경감시키거나, 그 증상의 빈도를 줄이거나 또는 그 증상을 치유한다는 것이 기술된 적은 없다.

도 1은 백신접종 시에 항-PCV2 항체 역가 클래스들의 그래프이다.

도 2는 항-PCV2 항체 역가가 낮은 (<1:100) 및 높은 (>1:1000) 백신접종된 동물의 생체중을 비교한 그래프이다.

도 3은 위약 처리된 대조 동물 (CP)과 비교했을 때 백신접종된 동물 (IVP)의 채중 차이를 도시한 그래프이다.

본 발명은 종래 기술에 내재된 문제를 해소하고 당해 기술 수준의 분명한 진보를 제공한다. 일반적인 관점에 따르면, 본 발명은 항-PCV2 항체를 보유한 동물에서 PCV2 감염을 치료 또는 예방하는 방법, 또는 PCV2 감염과 관련이 있거나 PCV2 감염에 의한 임상 증상을 감소시키는 치료 또는 예방 방법으로서, 이러한 치료를 필요로 하는 동물에게 PCV2 항원 또는 PCV2 항원을 함유하는 면역원성 조성물의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 항-PCV2 항체, 특히 모계 기원의 항-PCV2 항체의 존재가 PCV2 항원을 함유하는 백신의 효능을 손상시키지 않는다는 것은 예측할 수 없는 놀라운 발견이었다.

본 명세서에 사용된 "백신" 또는 "면역원성 조성물" (이 두 용어는 동의어로 사용된다)은 PCV2 항원을 함유하는 모든 약제학적 조성물을 의미하며, 이 조성물은 피검체의 PCV2 감염과 관련된 질환 또는 병태를 예방하거나 치료하는데 사용될 수 있다. 바람직한 면역원성 조성물은 PCV2에 대한 면역반응을 유도, 자극 또는 증강시킬 수 있다. 따라서, 이 용어는 이하에 기술된 바와 같은 서브유닛 면역원성 조성물 뿐만 아니라 완전 사멸, 약독화 및/또는 불활성화된 PCV2를 함유하는 조성물도 포함한다.

다른 관점에 따르면, 본 발명은 항-PCV2 항체, 특히 모계 유래의 항-PCV2 항체를 보유한 동물에서 PCV2 감염에 대한 또는 PCV2 감염과 관련이 있거나 PCV2 감염에 의한 임상 증상을 감소시키기 위한 치료 또는 예방 방법으로서, 이러한 치료를 필요로 하는 동물에게 PCV2 항원 또는 PCV2 항원을 함유하는 면역원성 조성물의 유효량을 투여하는 단계를 포함하고, 상기 면역원성 조성물이 서브유닛 면역원성 조성물, 완전 사멸, 약독화 및/또는 불활성화된 PCV2를 함유하는 조성물인 방법을 제공한다.

본 명세서에 사용된 "서브유닛 면역원성 조성물"이란 용어는 PCV2 유래의 적어도 하나의 면역원성 폴리펩타이드 또는 항원 (그러나, 모든 항원은 아니다) 또는 PCV2 유래의 항원과 상동성인 적어도 하나의 면역원성 폴리펩타이드 또는 항원을 함유하는 조성물을 의미한다. 이러한 조성물은 온전한 PCV2가 실질적으로 없는 것이다. 즉, "서브 유닛 면역원성 조성물"은 PCV2로부터 적어도 부분적으로 정제되거나 또는 분별된 (바람직하게는 실질적으로 정제된) 면역원성 폴리펩타이드, 또는 이의 재조합 유사체로 제조된다. 서브유닛 면역원성 조성물은 PCV2 유래의 다른 항원 또는 폴리펩타이드가 실질적으로 없는, 또는 분별된 형태의 당해의 서브유닛 항원 또는 항원들을 포함할 수 있다. 바람직한 면역원성 서브유닛 조성물은 이하에 기술되는 PCV2 ORF-2 단백질을 포함한다. 특히, 본원에 전문이 참고인용되는 WO 06/072065에 제공된 모든 PCV2 항원을 포함하는 면역원성 서브유닛 조성물이 가장 바람직하다.

"면역 반응"은 당해 조성물 또는 백신에 대한 세포 및/또는 항체 매개의 면역반응을 숙주에서 발생시키는 것을 의미하지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 보통, "면역 반응"은 당해의 조성물이나 백신에 포함된 항원 또는 항원들에 특이적으로 지향성인 항체, B 세포, 헬퍼 T 세포, 억제인자 T 세포 및/또는 세포독성 T 세포의 생산 또는 활성화와 같은 효과 중 하나 이상을 포함하지만, 이에 국한되는 것은 아니다. 숙주는 새로운 감염에 대한 저항성이 증강되고/되거나 질환의 임상 중증도가 감소되도록 치료적 또는 보호적 면역 (기억) 반응을 나타내는 것이 바람직하다. 이러한 보호는 PCV 감염과 관련된 하나 이상의 증상의 수 또는 중증도의 감소 또는 결여, 바이러스혈증의 개시 지연, 바이러스 지속성 저하, 바이러스 총 부하량의 감소 및/또는 바이러스 배출 감소에 의해 입증될 것이다.

본 명세서에 사용된 "항원"이란 용어는 전술한 면역학적 반응을 유도하는 아미노산 서열을 의미한다. 본 명세서에 사용된 항원은 임의의 PCV 단백질의 전장의 서열, 이의 유사체 또는 이의 면역원성 단편을 포함한다. "면역원성 단편"이란 용어는 하나 이상의 에피토프를 포함하여 전술한 면역 반응을 유도하는 단백질의 단편을 의미한다. 이러한 단편은 당업계에 공지된 임의의 수의 에피토프 맵핑 기술을 사용하여 동정할 수 있다[예컨대, Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology, Vol. 66 (Glenn E. Morris, Ed., 1996) Humana Press, Totowa, New Jersey]. 예를 들어, 선형 에피토프는 예를 들어 단백질 분자의 부분에 해당하는 다수의 펩타이드를 고체 지지체에서 동시에 합성하는 단계, 및 이 펩타이드들이 지지체에 부착되어 있는 동안 항체와 펩타이드를 반응시키는 단계를 통해 측정할 수 있다. 이러한 기술은 당업계에 공지되어 있고 문헌[미국 특허 4,708,871; Geysen et al. (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81: 3998-4002; Geysen et al. (1986) Molec. Immunol. 23: 709-715]에 기술되어 있다.

이와 마찬가지로, 입체형태 에피토프는 x선 결정학 및 2차원 핵자기 공명 등에 의해 아미노산의 공간적 입체형태를 측정함으로써 쉽게 동정할 수 있다[예컨대, Epitope Mapping Protocols, 상기 문헌 참조].

또한, 합성 항원은 예컨대 폴리에피토프, 인접 에피토프 및 다른 재조합 또는 합성 유래의 항원의 정의에도 포함된다[예컨대 Bergmann et al. (1993) Eur. J. Immunol. 23: 2777-2781; Bergmann et al. (1996), J.Immunol. 157: 3242-3249; Suhrbier, A. (1997), Immunol. and Cell Biol. 75: 402-408; Gardner et al., (1998) 12th World AIDS Conference, Geneva, Switzerland, June 28-July 3, 1998].

또 다른 관점에 따르면, 본 명세서에 사용된 면역원성 조성물은 PCV2의 ORF-2에 의해 발현된 폴리펩타이드 또는 이의 단편을 포함하는 것이 가장 바람직하다. 당해 조성물을 제조하기 위해 본 발명에 사용되고 본 발명에서 제공되는 방법들에 사용된 PCV2 ORF-2 DNA 및 단백질은 PCV2 분리물 중에서 고도로 보존적인 도메인으로서, 임의의 PCV2 ORF-2는 여기에 사용된 PCV ORF-2 DNA 및/또는 폴리펩타이드의 근원으로서 효과적일 것이다. 바람직한 PCV2 ORF-2 단백질은 본 명세서 및 WO 06/072065에서 서열번호 11로 표시된 것이다. 또 다른 바람직한 PCV ORF-2 폴리펩타이드는 본 명세서 및 WO 06/072065에서 서열번호 5로서 제공된 것이다. 하지만, 당업자라면 이러한 서열이 면역원성 조성물을 유용하게 하는 항원 특성은 그대로 보유하면서 서열 상동성이 6 내지 10% 만큼 달라질 수 있다는 것을 잘 알고 있을 것이다. 면역 조성물의 항원 특성은 예컨대 WO 06/072065의 실시예 4에서 제시한 바와 같은 시험감염 (challenge) 실험으로 추정될 수 있다. 더욱이, 변형 항원은 본 명세서에 제시되고 WO 06/072065에 제시된 서열번호 3 또는 서열번호 4의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 PCV2 ORF-2 단백질과 비교했을 때 적어도 70%, 바람직하게는 80%, 더욱 바람직하게는 90%의 보호 면역성을 부여할 때 변형 항원의 항원 특성이 그대로 유지된다.

따라서, 추가 관점에 따르면, 본 발명은 항-PCV2 항체, 특히 모계 유래의 항-PCV2 항체를 보유한 동물에서 PCV2 감염과 관련이 있거나 PCV2 감염에 의한 임상 증상을 감소시키기 위한 또는 PCV2 감염에 대한 치료 또는 예방 방법으로서, 이러한 치료를 필요로 하는 동물에게 PCV2 항원 또는 PCV2 항원을 함유하는 면역원성 조성물의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공하며, 여기서 상기 PCV2 항원은 본 명세서에 제시되고 WO 06/072065에 제시된 서열번호 3 또는 서열번호 4의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 PCV2 ORF-2 단백질과 비교했을 때 적어도 70%, 바람직하게는 80%, 더욱 바람직하게는 90%의 보호 면역성을 나타내는 PCV2 ORF-2 단백질의 항원이다. 상기 PCV2 ORF-2 서열은 본 명세서에 제시되고 WO 06/072065에 제시된 서열번호 11 또는 서열번호 5의 서열을 보유하는 것이 바람직하다.

일부 형태에서, PCV2 ORF-2 단백질의 면역원성 부분은 PCV2 항원을 포함하는 면역원성 조성물에서 항원 성분으로서 사용된다. 본 명세서에 사용된 "면역원성 부분"이란 용어는 PCV2 ORF-2 단백질 및/또는 폴리뉴클레오타이드 각각의 절두형 및/또는 치환형, 또는 단편을 의미한다. 이러한 절두형 및/또는 치환형, 또는 단편은 전장의 ORF-2 폴리펩타이드로부터 적어도 6개의 연속적 아미노산을 포함하는 것이 바람직하다. 더욱 바람직하게는, 절두형 또는 치환형, 또는 단편은 전장의 PCV ORF-2 폴리펩타이드로부터 적어도 10개, 더욱 바람직하게는 적어도 15개, 더욱 더 바람직하게는 적어도 19개의 연속적 아미노산을 보유하는 것이다. 이러한 관점에서 바람직한 2개의 서열은 본 명세서와 WO 06/072065에서 서열번호 9 및 서열번호 10으로 제공한 것이다. 또한, 이러한 서열들이 더 큰 단편이나 절두형의 일부분일 수 있다는 것은 당연하다.

위에서 언급한 바와 같이, 더욱 바람직한 PCV2 ORF-2 폴리펩타이드는 서열번호 3 또는 서열번호 4의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 모든 폴리펩타이드이다. 하지만, 이 서열이 서열 상동성이 6 내지 20%만큼 상이할 수 있으면서 항원 특성을 그대로 보유하여 면역원성 조성물에 유용하게 사용될 수 있다는 것을 당업자라면 잘 알고 있을 것이다. 일부 형태로서, 이 PCV2 ORF-2 폴리펩타이드의 절두형 또는 치환형, 또는 단편은 조성물의 항원 성분으로서 사용된다. 이러한 절두형 또는 치환형, 또는 단편은 서열번호 3 또는 서열번호 4와 같은 전장의 PCV2 ORF-2 뉴클레오타이드 서열로부터 적어도 18개의 연속적 뉴클레오타이드를 포함하는 것이 바람직하다. 더욱 바람직하게는, 절두형 또는 치환형, 또는 단편은 서열번호 3 또는 4와 같은 전장의 PCV2 ORF-2 뉴클레오타이드 서열의 적어도 30개, 더욱 바람직하게는 적어도 45개, 더욱 더 바람직하게는 적어도 57개의 연속적 뉴클레오타이드를 보유하는 것이다.

당업계에 공지된 바와 같은, "서열 동일성"은 2개 이상의 폴리펩타이드 서열 또는 2개 이상의 폴리뉴클레오타이드 서열, 즉 참고 서열 및 이 참고 서열과 비교할 주어진 서열 간에 관계를 의미한다. 서열 동일성은 주어진 서열과 참고 서열을 이 서열들의 줄 간에 정합도 (match)로 측정되는 서열 유사성이 최고가 되도록 최적으로 정렬한 후 두 서열을 비교하여 결정한다. 이러한 정렬 시에, 서열 동일성은 위치마다 확인하며, 예컨대 특정 위치에서 뉴클레오타이드 또는 아미노산 잔기가 동일하다면 그 위치의 서열은 "동일한" 것이다. 그 다음, 이러한 위치의 총 수를 참고 서열의 총 뉴클레오타이드 또는 잔기의 수로 나누면 서열 동일성%가 수득된다. 서열 동일성은 공지의 방법, 예컨대 문헌[Computational Molecular Biology, Lesk, A. N., ed., Oxford University Press, New York (1988), Biocompuling: Informatics and Genome Projects. Smith, D, W., ed., Academic Press, New York (1993); Computer Analysis of Sequence Data, Part I, Griffin, A.M., and Griffin. H. G., eds.. Humana Press, New Jersey (1994); Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinge, G., Academic Press (1987): Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. and Devereux, J.t eds., M. Stockton Press, New York (1991); 및 Carillo, H., and Lipman, D., SlAM J. Applied Math., 48: 1073 (1988), 이 교시들은 본원에 참고 인용되었다]에 기술된 방법 등, 이에 국한되지 않는 방법으로 쉽게 계산할 수 있다. 서열 동일성을 측정하는 바람직한 방법은 검사된 서열 간에 최대 정합성을 제공하도록 설계되는 것이다. 서열 동일성을 측정하는 방법은 주어진 서열 간에 서열 동일성을 측정하는 공개적으로 이용가능한 컴퓨터 프로그램으로 명문화된다. 이러한 프로그램의 예에는 GCG 프로그램 패키지 (Devereux, J., et al.. Nucleic Acids Research, 12 (1):387 (1984)), BLASTP, BLASTN 및 FASTA (Altschul, S. F. et al., J. Molec. Biol., 215:403-410 (1990)를 포함하나, 이에 국한되는 것은 아니다. BLASTX 프로그램은 NCBI 및 다른 소스로부터 공개적으로 이용가능하다 (BLAST Manual, Altschul, S. F. et al , J. Molec. Biol., 215:403-410 (1990), 이 교시들은 본 발명에 참고인용된다). 이 프로그램들은 주어진 서열과 참고 서열 간에 서열 동일성을 최고 수준으로 만들기 위하여 디폴트 갭 가중치를 이용해서 서열을 최적으로 정렬한다. 일 예로서, 참고 뉴클레오타이드 서열과 "서열 동일성"이 예컨대, 적어도 85%, 바람직하게는 90%, 더욱 바람직하게는 95%인 뉴클레오타이드 서열을 보유하는 폴리뉴클레오타이드란, 주어진 폴리뉴클레오타이드의 뉴클레오타이드 서열이 참고 서열과 동일하되, 단 주어진 폴리뉴클레오타이드 서열이 참고 뉴클레오타이드 서열의 100개 뉴클레오타이드마다 15개 이하, 바람직하게는 10개 이하, 더욱 바람직하게는 5개 이하의 점 돌연변이를 포함할 수 있다는 것을 의미한다. 다른 말로 하면, 참고 뉴클레오타이드 서열에 비해 뉴클레오타이드 서열의 동일성이 적어도 85%, 바람직하게는 90%, 더욱 바람직하게는 95%인 폴리뉴클레오타이드에서, 참고 서열의 뉴클레오타이드 중의 15% 이하, 바람직하게는 10%, 더욱 바람직하게는 5%가 다른 뉴클레오타이드로 치환되거나 결실될 수 있고, 또는 참고 서열의 총 뉴클레오타이드 중 15% 이하, 바람직하게는 10%, 더욱 바람직하게는 5%의 뉴클레오타이드 수가 참고 서열에 삽입될 수 있다. 이러한 참고 서열의 돌연변이는 참고 뉴클레오타이드 서열의 5' 또는 3' 말단 위치에서 일어나거나 또는 이러한 말단 위치 사이에 모든 위치, 참고 서열의 뉴클레오타이드들 중에서 개별적으로 산재하거나 또는 참고 서열 내에서 하나 이상의 연속적 그룹으로서 산발적으로 일어날 수 있다. 이와 유사하게, 참고 아미노산 서열과 서열 상동성이 예컨대 적어도 85%, 바람직하게는 90%, 더욱 바람직하게는 95%인 폴리펩타이드란, 폴리펩타이드의 주어진 아미노산 서열이 참고서열과 동일하되, 단 주어진 폴리펩타이드 서열이 참고 아미노산 서열의 100개 아미노산마다 15개 이하, 바람직하게는 10개 이하, 더욱 바람직하게는 5개 이하의 아미노산 변경을 포함할 수 있다는 것을 의미한다. 다른 말로 하면, 참고 아미노산 서열과 서열 동일성이 적어도 85%, 바람직하게는 90%, 더욱 바람직하게는 95%인 폴리뉴펩타이드 서열을 수득하기 위해, 참고 서열의 아미노산 잔기 중의 15% 이하, 바람직하게는 10% 이하, 더욱 바람직하게는 5% 이하가 다른 아미노산으로 치환되거나 결실될 수 있고, 또는 참고 서열의 총 아미노산 수 중 15% 이하, 바람직하게는 10% 이하, 더욱 바람직하게는 5% 이하의 아미노산 수가 참고 서열에 삽입될 수 있다. 이러한 참고 서열의 변경은 참고 아미노산 서열의 아미노 또는 카르복시 말단에서 일어나거나 또는 이러한 말단 위치 사이에 모든 위치, 참고 서열의 잔기들 중에서 개별적으로 산재하거나 또는 참고 서열 내에서 하나 이상의 연속적 그룹으로서 산발적으로 일어날 수 있다. 동일하지 않은 잔기 위치는 보존적 아미노산 치환에 의해 달라지는 것이 바람직하다. 하지만, 보존적 치환은 서열 동일성을 결정할 때 정합성에 포함되지 않는다.

본 명세서에 사용된 "서열 상동성"은 두 서열의 관계성을 측정하는 방법을 의미한다. 서열 상동성을 측정하기 위해, 2개 이상의 서열은 최적으로 정렬하고, 필요하다면 갭을 도입시킨다. 하지만, "서열 동일성"과는 반대로, 보존적 아미노산 치환은 서열 상동성을 측정할 때 정합성으로 계산된다. 다른 말로 하면, 참고 서열과 서열 상동성이 95%인 폴리펩타이드 또는 폴리뉴클레오타이드를 수득하기 위해서, 참고 서열의 아미노산 잔기 또는 뉴클레오타이드 중 85%, 바람직하게는 90%, 더욱 바람직하게는 95%가 정합성이거나 다른 아미노산 또는 뉴클레오타이드로의 보존적 치환을 포함해야 하고, 또는 참고 서열에 존재하는, 보존적 치환을 제외한 총 아미노산 잔기 또는 뉴클레오타이드 중 15% 이하, 바람직하게는 10% 이하, 더욱 바람직하게는 5% 이하의 아미노산 또는 뉴클레오타이드 수가 참고 서열에 삽입될 수 있다. 상동 서열은 적어도 50개, 더욱 바람직하게는 적어도 100개, 더욱 바람직하게는 적어도 250개, 더욱 더 바람직하게는 적어도 500개의 일련의 뉴클레오타이드를 포함하는 것이 바람직하다.

"보존적 치환"은 전체 기능성이 유의적으로 변화하지 않도록 아미노산 잔기 또는 뉴클레오타이드가 크기, 소수성 등을 비롯한 성질이나 특성이 유사한 다른 아미노산 잔기 또는 뉴클레오타이드로 치환하는 것을 의미한다.

"분리된"은 자연 상태로부터 "사람의 수작업에 의해" 변경된 것으로 의미하며, 즉 자연에서 일어난다면 최초 환경으로부터 변화 또는 제거되거나, 변화 및 제거된 것을 의미한다. 예를 들어, 생물체에 자연적으로 존재하는 폴리뉴클레오타이드 또는 폴리펩타이드는 "분리된" 것이 아니지만, 자연 상태의 공존 물질로부터 분리된 동일 폴리뉴클레오타이드 또는 폴리펩타이드는 본 명세서에 이용된 바와 같은 "분리된" 것이다.

즉, 다른 관점에 따르면, 본 발명은 항-PCV2 항체, 특히 모계 유래의 항-PCV2 항체를 보유한 동물에서 PCV2 감염과 관련이 있거나 PCV2 감염에 의한 임상 증상을 감소시키기 위한 또는 PCV2 감염에 대한 치료 또는 예방 방법으로서, 이러한 치료를 필요로 하는 동물에게 PCV2 항원 또는 PCV2 항원을 함유하는 면역원성 조성물의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공하며, 여기서 상기 PCV2 ORF-2 단백질은 전술한 것 중 어느 하나이다. 바람직하게는 상기 PCV2 ORF-2 단백질은

i) 본 명세서에 또는 WO 06/072065에 제시된 서열번호 5, 서열번호 6, 서열번호 9, 서열번호 10 또는 서열번호 11의 서열을 포함하는 폴리펩타이드;

ii) 상기 i)의 폴리펩타이드와 적어도 80% 상동성인 임의의 폴리펩타이드;

iii) 상기 i) 및/또는 ii)의 폴리펩타이드의 임의의 면역원성 부분;

iv) 본 명세서에 또는 WO 06/072065에 제시된 서열번호 5, 서열번호 6, 서열번호 9, 서열번호 10 또는 서열번호 11의 서열에 포함된 적어도 10개의 연속적 아미노산을 포함하는 상기 iii)의 면역원성 부분;

v) 본 명세서에 또는 WO 06/072065에 제시된 서열번호 3 또는 서열번호 4의 서열을 포함하는 DNA에 의해 암호화된 폴리펩타이드;

vi) 상기 v)의 폴리뉴클레오타이드와 적어도 80% 상동성인 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된 임의의 폴리펩타이드;

vii) 상기 v) 및/또는 vi)의 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된 폴리펩타이드의 임의의 면역원성 부분;

viii) 상기 면역원성 부분을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드가 본 명세서에 제시되고 WO 06/072065에 제시된 서열번호 3 또는 서열번호 4의 서열에 포함된 적어도 30개의 연속적 뉴클레오타이드를 포함하는, 상기 vii)의 면역원성 부분인 것이 바람직하다.

상기 임의의 면역원성 부분은 본 명세서에 또는 WO 06/072065에 제시된 서열번호 3 또는 서열번호 4의 서열에 의해 암호화된 PCV2 ORF-2 단백질의 면역원성 특성을 보유하는 것이 바람직하다.

추가의 관점에 따르면, PCV2 ORF-2 단백질은 원하는 면역반응의 유도, 즉 PCV2 감염과 관련있거나 그 감염으로 초래되는 하나 이상의 임상 증상을 예방하거나 감소시키거나, 또는 그 증상의 빈도를 저하시키거나 또는 그 증상의 중증도를 경감시키는데 효과적인 항원 내포 수준으로 면역원성 조성물에 제공된다. PCV2 ORF-2 단백질의 내포 수준은 최종 면역원성 조성물 1ml당 적어도 0.2㎍ 항원 (㎍/ml), 더욱 바람직하게는 약 0.2 내지 약 400㎍/ml, 더욱 더 바람직하게는 약 0.3 내지 약 200㎍/ml, 더욱 더 바람직하게는 약 0.35 내지 약 100㎍/ml, 더욱 더 바람직하게는 약 0.4 내지 약 50㎍/ml, 더욱 더 바람직하게는 약 0.45 내지 약 30㎍/ml, 더욱 더 바람직하게는 약 0.5 내지 약 18㎍/ml, 더욱 더 바람직하게는 약 0.6 내지 약 15㎍/ml, 더욱 더 바람직하게는 약 0.75 내지 약 8㎍/ml, 더욱 더 바람직하게는 약 1.0 내지 약 6㎍/ml, 더욱 더 바람직하게는 약 1.3 내지 약 3.0㎍/ml, 더욱 더 바람직하게는 약 1.4 내지 약 2.5㎍/ml, 더욱 더 바람직하게는 약 1.5 내지 약 2.0㎍/ml, 가장 바람직하게는 약 1.6㎍/ml인 것이 바람직하다.

추가의 관점에 따르면, PCV ORF-2 항원 내포 수준은 최종 항원 조성물 용량당 전술한 바와 같은 PCV2 ORF-2 단백질 적어도 0.2㎍ (㎍/용량), 더욱 바람직하게는 약 0.2 내지 약 400㎍/용량, 더욱 더 바람직하게는 약 0.3 내지 약 200㎍/용량, 더욱 더 바람직하게는 약 0.35 내지 약 100㎍/용량, 더욱 더 바람직하게는 약 0.4 내지 약 50㎍/용량, 더욱 더 바람직하게는 약 0.45 내지 약 30㎍/용량, 더욱 더 바람직하게는 약 0.5 내지 약 18㎍/용량, 더욱 더 바람직하게는 약 0.6 내지 약 15㎍/용량, 더욱 더 바람직하게는 약 0.75 내지 약 8㎍/용량, 더욱 더 바람직하게는 약 1.0 내지 약 6㎍/용량, 더욱 더 바람직하게는 약 1.3 내지 약 3.0㎍/용량, 더욱 더 바람직하게는 약 1.4 내지 약 2.5㎍/용량, 더욱 더 바람직하게는 약 1.5 내지 약 2.0㎍/용량, 가장 바람직하게는 1.6㎍/용량이다. 놀랍게도, PCV2 ORF-2 단백질 내포 수준 (항원 함량)은 20㎍/용량 미만, 바람직하게는 약 0.5 내지 18㎍/용량인 것이 PCV2 항체에 양성인, 특히 항-PCV2 모계 유래 항체에 양성인 어린 동물 및/또는 동물에 면역성을 부여하기에 적합하다는 것을 발견했다. 즉, 추가의 관점에 따르면, 본 발명은 항-PCV2 항체, 특히 모계 유래의 항-PCV2 항체를 보유한 동물에서 PCV2 감염과 관련이 있거나 PCV2 감염에 의한 임상 증상을 감소시키기 위한 또는 PCV2 감염에 대한 치료 또는 예방 방법으로서, 이러한 치료를 필요로 하는 동물에게 PCV2 항원 또는 PCV2 항원을 함유하는 면역원성 조성물을 20㎍/용량 미만, 바람직하게는 약 0.5 내지 18㎍/용량으로 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 상기 PCV2 항원은 본 특허원에 기술된 모든 항원이다. 상기 PCV2 항원은 모든 PCV2 ORF-2 단백질, 더욱 바람직하게는 본 명세서에 기술된 모든 PCV2 ORF-2 단백질인 것이 바람직하다.

본 발명에 따른 면역원성 조성물에 사용된 PCV2 ORF-2 폴리펩타이드는 PCV2 ORF2의 분리 및 정제, 표준 단백질 합성 및 재조합 방법론을 비롯한 모든 방식에서 유도될 수 있다. PCV2 ORF-2 폴리펩타이드를 수득하는 바람직한 방법은 WO 06/072065 (그 교시와 내용은 전문이 참고인용되고 있다)에 제공되어 있다. 간략히 설명하면, 민감성 세포를 PCV2 ORF-2 DNA 암호화 서열을 함유하는 재조합 바이러스 벡터로 감염시키고, 이 재조합 바이러스로 PCV2 ORF-2 폴리펩타이드를 발현시킨 뒤, 발현된 PCV2 ORF-2 폴리펩타이드를 상청액으로부터 여과하여 회수하고, 임의의 통상의 방법, 바람직하게는 2원성 에틸렌이민으로 불활성화시킨 뒤, 불활성화 과정을 정지시키기 위해 중화시킨다.

본 명세서에 사용된 면역원성 조성물은 i) 전술한 모든 PCV2 ORF-2 단백질을, 바람직하게는 전술한 농도로 포함하고, ii) 상기 PCV2 ORF-2 단백질을 발현하는 바이러스 벡터, 바람직하게는 재조합 배큘로바이러스의 적어도 일부를 포함하는 조성물을 의미한다. 더욱이, 면역원성 조성물은 i) 전술한 모든 PCV2 ORF-2 단백질을, 바람직하게는 전술한 농도로 포함하고, ii) 상기 PCV2 ORF-2 단백질을 발현하는 바이러스 벡터, 바람직하게는 재조합 배큘로바이러스의 적어도 일부를 포함하며, iii) 세포 배양물 상청액의 일부를 포함할 수 있다.

따라서, 추가 관점에 따르면, 본 발명은 항-PCV2 항체, 특히 모계 유래의 항-PCV2 항체를 보유한 동물에서 PCV2 감염과 관련이 있거나 PCV2 감염에 의한 임상 증상을 감소시키기 위한, 또는 PCV2 감염에 대한 치료 또는 예방하는 방법으로서, 이러한 치료를 필요로 하는 동물에게 PCV2 항원 또는 PCV2 항원을 함유하는 면역원성 조성물의 유효량을 투여하는 단계를 포함하되, 상기 PCV2 항원이 재조합 PCV2 ORF-2, 바람직하게는 배큘로바이러스에 의해 발현된 PCV2 ORF-2인 방법을 제공한다. 이러한 재조합체 또는 배큘로바이러스는 전술한 바와 같은 서열을 보유하는 PCV2 ORF-2를 발현하는 것이 바람직하다.

또한, 본 명세서에 사용된 면역원성 조성물은 i) 전술한 모든 PCV2 ORF-2 단백질을 바람직하게는 전술한 농도로 포함하고, ii) 상기 PCV2 ORF-2 단백질을 발현하는 바이러스 벡터의 적어도 일부, 바람직하게는 재조합 배큘로바이러스의 적어도 일부를 포함하며, iii) 세포 배양물의 일부를 포함하되, 이 성분들의 약 90%가 1㎛ 미만의 크기인 조성물을 의미한다.

또한, 본 명세서에 사용된 면역원성 조성물은 i) 전술한 모든 PCV2 ORF-2 단백질을 바람직하게는 전술한 농도로 포함하고, ii) 상기 PCV2 ORF-2 단백질을 발현하는 바이러스 벡터의 적어도 일부를 포함하며, iii) 세포 배양물의 일부를 포함하고, iv) 재조합 바이러스 벡터를 불활성화시키는 불활성화제, 바람직하게는 BEI를 포함하되, 상기 성분 i) 내지 iii)의 약 90%는 1㎛ 미만의 크기인 조성물을 의미한다. BEI는 배큘로바이러스를 불활성화시키기에 효과적인 농도로 존재하고, 바람직하게는 2 내지 약 8mM BEI의 양, 더욱 바람직하게는 약 5mM BEI 양으로 존재하는 것이 바람직하다.

또한, 본 명세서에 사용된 면역원성 조성물은 i) 전술한 모든 PCV2 ORF-2 단백질을 바람직하게는 전술한 농도로 포함하고, ii) 상기 PCV2 ORF-2 단백질을 발현하는 바이러스 벡터의 적어도 일부를 포함하며, iii) 세포 배양물의 일부를 포함하고, iv) 재조합 바이러스 벡터를 불활성화시키는 불활성화제, 바람직하게는 BEI를 포함하며, v) 상기 불활성화제에 의해 매개된 불활성화를 정지시키는 중화제를 포함하되, 상기 성분 i) 내지 iii)의 약 90%는 1㎛ 미만의 크기인 조성물을 의미한다. 불활성화제가 BEI이면, 이 조성물은 소듐 티오설페이트를 BEI와 등량으로 포함하는 것이 바람직하다.

당해 폴리펩타이드는 PCV2 감염에 민감한 동물에게 투여할 수 있는 조성물에 포함된다. 바람직한 양태로, 당해 조성물은 추가로 당업자에게 공지된 부가 성분을 포함할 수도 있다 (예컨대, Remington's Pharmaceutical Sciences (1990). 18th ed. Mack Publ., Easton). 또한, 이 조성물은 1종 이상의 수의학적으로 허용되는 담체를 포함할 수 있다. 본 명세서에 사용된, "수의학적으로 허용되는 담체"는 임의의 모든 용매, 분산 매질, 코팅제, 보강제, 안정제, 희석제, 보존제, 항세균제 및 항진균제, 등장제, 흡수지연제 등을 포함한다. 바람직한 양태에서, 면역원성 조성물은 여기에 제공된 PCV2 ORF-2 단백질을, 바람직하게는 전술한 농도로 포함하고, 이는 보강제, 바람직하게는 카르보폴 (Carbopol) 및 생리식염수와 혼합된다.

당업자는 본 명세서에 사용된 조성물이 공지된 주사가능한 생리학적으로 허용되는 멸균 용액을 포함할 수 있다는 것을 알고 있을 것이다. 비경구 주사 또는 주입을 위한 즉석제조 용액의 제조 시에는 등장성 수용액, 예컨대 식염수 또는 대응하는 혈장 단백질 용액을 쉽게 이용할 수 있다. 또한, 본 발명의 면역원성 조성물 및 백신 조성물은 희석제, 등장제, 안정제 또는 보강제를 포함할 수 있다. 희석제는 물, 식염수, 덱스트로스, 에탄올, 글리세롤 등을 포함할 수 있다. 등장제는 염화나트륨, 덱스트로스, 만니톨, 소르비톨 및 락토스 등을 포함할 수 있다. 안정제는 알부민 및 에틸렌디아민테트라아세트산의 알칼리염 등을 포함한다.

본 명세서에 사용된 "보강제"는 수산화알루미늄 및 인산알루미늄, 사포닌, 예컨대 Quil A, QS-21 (Cambridge Biotech Inc., Cambridge MA), GP1-0100 (Galenica Pharmaceuticals, Inc., Birmingham, AL), 유중수형 에멀젼, 수중유형 에멀젼, 수중유중수형 에멀젼을 포함할 수 있다. 에멀젼은 특히 경질 액체 파라핀 오일 (유럽 약전 타입); 알켄의 올리고머화, 특히 이소부텐 또는 데센의 올리고머화에 의해 수득되는 스쿠알란 또는 스쿠알렌 오일과 같은 이소프레노이드 오일; 선형 알킬기를 함유하는 산 또는 알콜의 에스테르, 구체적으로 식물 오일, 에틸 올레에이트, 프로필렌 글리콜 디-(카프릴레이트/카프레이트), 글리세릴 트리-(카프릴레이트/카프레이트) 또는 프로필렌 글리콜 디올레에이트; 분지형 지방산 또는 알콜의 에스테르, 특히 이소스테아르산 에스테르를 주성분으로 할 수 있다. 오일은 유화제와 함께 사용되어 에멀젼을 형성한다. 유화제는 비이온성 계면활성제, 특히 소르비탄의 에스테르, 만나이드의 에스테르 (예: 안하이드로만니톨 올레에이트), 글리콜의 에스테르, 폴리글리세롤의 에스테르, 프로필렌 글리콜의 에스테르 및 올레산, 이소스테아르산, 리시놀레산 또는 하이드록시스테아르산의 에스테르 (이것은 경우에 따라 에톡시화된다), 및 폴리옥시프로필렌-폴리옥시에틸렌 공중합체 블록, 특히 플루로닉 (Pluronic) 제품, 특히 L121인 것이 바람직하다[Hunter et al., The Theory and Practical Application of Adjuvants (Ed. Stewart-Tull, D. E. S.). JohnWiley and Sons, NY, p51-94 (1995) and Todd et al., Vaccine 15: 564-570 (1997)].

예를 들어, 문헌["Vaccine Design, The Subunit and Adjuvant Approach" edited by M. Powell and M. Newman, Plenum Press, 1995]의 147쪽에 기술된 SPT 에멀젼 및 동 문헌의 183쪽에 기술된 에멀젼 MF59를 사용하는 것이 가능하다.

또 다른 보강제의 예는 아크릴산 또는 메타크릴산의 중합체 및 말레산 무수물과 알케닐 유도체의 공중합체 중에서 선택되는 화합물이다. 유리한 보강제 화합물은 특히 폴리알콜이나 당의 폴리알케닐 에테르와 가교된 아크릴산 또는 메타크릴산의 중합체이다. 이 화합물들은 카르보머 (carbomer) (Phameuropa Vol. 8, No. 2, June 1996)란 용어로 공지되어 있다. 당업자는 또한 하이드록시 기가 적어도 3개, 바람직하게는 8개 이하이고 이 적어도 3개의 하이드록시의 수소 원자가 탄소원자 2개 이상의 불포화 지방족 라디칼로 치환되어 있는, 폴리하이드록시화된 화합물과 가교된 상기 아크릴계 중합체를 기술하는 미국 특허 2,909,462를 참고할 수 있다. 바람직한 라디칼은 탄소원자 2 내지 4개인 것이며, 그 예로는 비닐, 알릴 및 다른 에틸렌계 불포화 기가 있다. 불포화 라디칼은 자체에 다른 치환체, 예컨대 메틸을 포함할 수 있다. 상표명 Carbopol (BF Goodrich, Ohio, USA)로 시판되는 제품이 특히 적당하다. 이것은 알릴 슈크로스 또는 알릴 펜타에리트리톨과 가교되어 있다. 이들 중에서, Carbopol 974P, 934P 및 971P를 예로 들 수 있다. 가장 바람직한 것은 Carbopol의 사용, 특히 Carbopol 971P의 사용이며, 바람직하게는 약 500㎍ 내지 약 5mg/용량의 양, 더욱 더 바람직하게는 약 750㎍ 내지 약 2.5mg/용량의 양, 가장 바람직하게는 약 1mg/용량의 양으로 사용하는 것이다.

또 다른 적당한 보강제는 RIBI 보강제 시스템 (Ribi Inc.), 블록 공중합체 (CytRx, Atlanta GA), SAF-M (Chiron, Emeryville CA), 모노포스포릴 지질 A, Avridine 지질-아민 보강제, 이.콜라이 (재조합제 또는 기타) 유래의 열불안정성 내독소, 콜레라 독소, IMS 1314 또는 뮤라밀 디펩타이드 등을 포함하지만, 이에 국한되는 것은 아니다.

보강제는 바람직하게는 약 100㎍ 내지 약 10mg/용량의 양으로 첨가한다. 더욱 더 바람직하게는 보강제는 약 100㎍ 내지 약 10mg/용량의 양으로 첨가한다. 더욱 더 바람직하게는 보강제는 약 500㎍ 내지 약 5mg/용량의 양으로 첨가한다. 더욱 더 바람직하게는 보강제는 약 750㎍ 내지 약 2.5mg/용량의 양으로 첨가한다. 가장 바람직하게는 보강제는 약 1mg/용량의 양으로 첨가한다.

또한, 조성물은 1종 이상의 약제학적으로 허용되는 담체를 포함할 수 있다. 본 명세서에 사용된 "약제학적으로 허용되는 담체"는 임의의 모든 용매, 분산 매질, 코팅제, 보강제, 안정제, 희석제, 보존제, 항세균제 및 항진균제, 등장제, 흡수지연제 등을 포함한다. 가장 바람직하게는, 여기에 제공된 조성물은 시험관내 배양된 세포의 상청액으로부터 회수된 PCV2 ORF-2 단백질을 포함하고, 여기서 세포는 PCV2 ORF-2 DNA를 함유하여 PCV2 ORF-2 단백질을 발현하는 재조합 바이러스 벡터로 감염되었고, 상기 세포 배양물은 바이러스 벡터를 불활성화시키기 위한 약 2 내지 약 8mM의 BEI, 바람직하게는 약 5mM BEI, 및 동등 농도의 중화제, 바람직하게는 최종 농도가 약 2 내지 약 8mM, 바람직하게는 약 5mM인 소듐 티오설페이트 용액으로 처리되었다.

또한, 본 발명은 i) 전술한 모든 PCV2 ORF-2 단백질을 바람직하게는 전술한 농도로 포함하고, ii) 상기 PCV2 ORF-2 단백질을 발현하는 바이러스 벡터의 적어도 일부를 포함하며, iii) 세포 배양물의 일부를 포함하고, iv) 재조합 바이러스 벡터를 불활성화시키는 불활성화제, 바람직하게는 BEI를 포함하며, v) 상기 불활성화제에 의해 매개된 불활성화를 정지시키는 중화제를 포함하고, vi) 전술한 양의 적당한 보강제, 바람직하게는 Carbopol 971을 포함하되, 상기 성분 i) 내지 iii)의 약 90%는 1㎛ 미만의 크기인 조성물에 관한 것이다. 또 다른 관점에 따르면, 이 면역원성 조성물은 추가로 약제학적으로 허용되는 염, 바람직하게는 인산염을 생리학적으로 허용되는 농도로 포함한다. 이러한 면역원성 조성물의 pH는 약 6.5와 7.5 사이를 의미하는 생리적 pH로 조정되는 것이 바람직하다.

본 발명에 사용된 면역원성 조성물은 또한 1ml 당 i) 전술한 PCV2 ORF-2 단백질 1.6㎍ 이상, 바람직하게는 20㎍ 미만, ii) 상기 PCV2 ORF-2 단백질을 발현하는 배큘로바이러스의 적어도 일부, iii) 세포 배양물의 일부를 포함하고, iv) 약 2 내지 8mM의 BEI, v) BEI와 동등한 양의 소듐 티오설페이트, vi) 약 1mg의 Carbopol 971 및 vii) 생리학적으로 허용되는 농도의 인산염을 포함하되, 상기 성분 i) 내지 iii)의 약 90%는 1㎛ 미만의 크기인 조성물을 의미하고, 이 면역원성 조성물의 pH는 약 6.5 내지 7.5로 조정된다.

면역원성 조성물은 추가로 1종 이상의 다른 면역조절제, 예컨대 인터루킨, 인터페론 또는 다른 사이토카인을 포함할 수도 있다. 또한, 면역원성 조성물은 젠타미신 (Gentamicin) 및 머티올레이트 (Merthiolate)를 포함할 수도 있다. 본 발명의 상황에서 유용한 보강제 및 첨가제의 양과 농도는 당업자라면 쉽게 결정할 수 있지만, 본 발명은 약 50㎍ 내지 약 2000㎍의 보강제를 함유하는 조성물, 바람직하게는 백신조성물의 1ml 용량당 약 250㎍을 포함하는 조성물을 고찰한다. 또한, 본 명세서에 사용된 면역원성 조성물은 약 1㎍/ml 내지 약 60㎍/ml의 항생제, 더욱 바람직하게는 약 30㎍/ml의 항생제를 포함하는 조성물을 의미한다.

본 명세서에 사용된 면역원성 조성물은 또한 i) 바람직하게는 전술한 농도인, 전술한 모든 PCV2 ORF-2 단백질, ii) 상기 PCV2 ORF-2 단백질을 발현하는 바이러스 벡터의 적어도 일부, iii) 세포 배양물의 일부, iv) 재조합 바이러스 벡터를 불활성화시키는 불활성화제, 바람직하게는 BEI, v) 상기 불활성화제에 의해 매개된 불활성화를 정지시키는 중화제, 바람직하게는 BEI와 동등한 양의 소듐 티오설페이트를 포함하고, vi) 전술한 양의 적당한 보강제, 바람직하게는 Carbopol 971, vii) 약제학적으로 허용되는 농도의 식염수 완충액, 바람직하게는 인산염, 및 viii) 항미생물성 활성제를 포함하되, 상기 성분 i) 내지 iii)의 약 90%는 1㎛ 미만의 크기인 조성물을 의미한다.

또한, 본 명세서에 사용된 면역원성 조성물은 인겔백 (Ingelvac®) 써코플렉스 (CircoFLEX™) (Boehringer Ingelheim Vetmedica Inc., St Joseph, MO, USA), 써코백 (CircoVac®) (Merial SAS, Lyon, France), 써코벤트 (CircoVent) (Intervet Inc., Millsboro, DE, USA) 또는 수백신 (Suvaxyn) PCV-2 One Dose® (Fort Dodge Animal Health, Kansas City, KA, USA)를 의미한다.

또 다른 관점에 따르면, 본 발명은 항-PCV2 모계 항체를 보유한 동물에서 PCV2 감염과 관련이 있거나 PCV2 감염에 의한 임상 증상을 감소시키기 위한 또는 PCV2 감염에 대한 치료 또는 예방 방법으로서, 이러한 치료를 필요로 하는 동물에게 PCV2 항원의 유효량을 투여하는 단계를 포함하되, 상기 면역원성 조성물이 CircoFLEX®, CircoVac®, CircoVent 또는 Suvaxyn PCV-2 One Dose®인 방법을 제공한다. 가장 바람직하게는, 면역원성 조성물이 Ingelvac® CircoFLEX™이고/이거나 PCV2 항원이 PCV2 ORF-2, 바람직하게는 배큘로바이러스에 의해 발현된 PCV2 ORF-2이고, 가장 바람직하게는 Ingelvac® CircoFLEX™에 포함된 것과 같은 것이다.

모계 항체에 의한 PCV2 항원의 가능한 간섭을 조사하기 위하여, 연구 동물의 항체를 역가를 백신접종 시에 측정하여, 항체 역가별로 저 항체 클래스, 중간 항체 클래스 및 고 항체 클래스로 그룹화했다: <1:100의 기하평균 역가는 낮은 항체 역가로 간주했고, 1:100 내지 1:1000의 역가는 중간 항체 역가로 간주했으며, >1:1000 역가는 고 항체 역가로 간주했다. 이러한 그룹화 패턴은 1:80의 항체 역가를 저 항체 역가, 1:640의 항체 역가를 중간 항체 역가, >1:1280의 항체 역가를 고 항체 역가로 간주한 캐나다 현장 연구 (Larochelle et al., 2003, Can.J.Vet.Res.; 67: 114-120) 시의 그룹화 패턴과 비슷하다. 바이러스혈증에 대하여 백신접종 시의 저 항체 역가, 중간 항체 역가 및 고 항체 역가가 미치는 영향을 분석하기 위해서, 백신접종된 동물과 위약처리된 동물을 바이러스혈증의 개시, 종료 및 지속기간, 양성 샘플링 일수 및 바이러스 부하량에 관해 비교했다. 놀랍게도, 항-PCV2 항체의 존재, 특히 모계 유래 항체의 존재가 상기 모든 파라미터들에 거의 영향을 미치지 않은 것으로 발견되었다. 다른 말로 하면, 동물에서 PCV2 감염의 예방 및 치료 또는 PCV2 감염과 관련이 있거나 PCV 감염에 의해 유발된 임상 증상의 감소에 있어서 PCV2 항원의 효능은 놀랍게도 백신접종일에 항-PCV2 항체의 존재로 인한, 바람직하게는 1:100 이하의 항-PCV2 항체 역가로 인한, 바람직하게는 1:100 초과, 더욱 바람직하게는 1:250 초과, 더욱 더 바람직하게는 1:500 초과, 더욱 더 바람직하게는 1:640 초과, 더욱 더 바람직하게는 1:750 초과, 가장 바람직하게는 1:1000 초과의 항체 역가로 인한 영향을 받지 않는 것으로 발견되었다. 이러한 효과는 1회 백신접종 실험에서 확인할 수 있었고, 이것은 PCV2 항원을 임의의 후속 투여없이 1회만 투여했음을 의미한다.

항-PCV2 항체를 검출 및 정량하는 방법은 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, PCV2 항체의 검출 및 정량은 문헌[Magar et al., 2000, Can.J.Vet Res.: 64: 184-186 또는 Magar et al., 2000, J.Comp.Pathol.; 123: 258-269]에 기술된 간접 면역형광법으로 수행할 수 있다. 항-PCV2 항체를 정량하는 추가 분석법은 문헌[Opriessnig et al., 2006, 37th Annual Meeting of the American Association of Swine Veterinarians]에도 기술되어 있다. 더욱이, 실시예 2는 당업자가 사용할 수 있는 간접 면역형광법을 기술한다. 논쟁의 여지가 있는 결과인 경우 및 의심의 여지가 있는 모든 질문에서, 본 명세서에서 언급한 항-PCV2 역가는 실시예 2에 기술된 분석법으로 추정될 수 있고 추정되는 값을 의미한다.

또 다른 관점에 따르면, 본 발명은 항-PCV2 항체, 특히 모계 항체를 보유한 동물에서 PCV2 감염과 관련이 있거나 PCV2 감염에 의한 임상 증상을 감소시키기 위한, 또는 PCV2 감염에 대한 치료 또는 예방 방법으로서, 이러한 치료를 필요로 하는 동물에게 PCV2 항원의 유효량을, 바람직하게는 20㎍/용량 미만으로 투여하는 단계를 포함하되, 상기 동물에서 검출가능한 항-PCV2 항체 역가는 1:100 이하, 바람직하게는 1:100 초과, 더욱 바람직하게는 1:250 초과, 더욱 바람직하게는 1:500 초과, 더욱 더 바람직하게는 1:640 초과, 더욱 더 바람직하게는 1:750 초과, 가장 바람직하게는 1:1000 초과인 방법을 제공한다. 이러한 항-PCV2 항체 역가는 특정 항-PCV2 면역분석법, 바람직하게는 실시예 2에 기술된 분석법에서 검출 및 정량가능한 것이 바람직하다. 더욱 바람직하게는 항-PCV2 항체는 모계 유래의 항체인 것이다. 가장 바람직하게는 PCV2 항원은 바람직하게는 20㎍/용량 미만의 용량으로 1회만 투여되는 것이 좋다.

모계 유래의 항-PCV2 항체의 역가가 낮거나 (<1:100) 중간 (<1:1000) 정도인 새끼돼지는 3주령 전에 발생하는 PCV2 감염에 대하여 충분히 보호되지 못한다. 따라서, 극히 어린 시기의 백신접종이 바람직하다. 본 명세서에 제시되고 PCV2 항원에 의한 항-PCV2 항체의 간섭 부족을 입증하는 예측할 수 없고 예상치못한 결과로 인하여, 3주령 전의 동물에 대한 백신접종/치료는 현실화되고 있다. 더욱이, 1:1000이 넘는 항-PCV2 항체 역가는 기존의 초기 항체 역가의 수준에 관계없이 PCV2 백신의 효능에 어떠한 영향도 미치지 않는다는 것이 놀랍게도 발견되었다. 예를 들어, 고역가 동물 (항-PCV2 항체 역가 >1:1000)의 백신접종은 백신접종되지 않은 대조 동물에 비해 바이러스혈증의 지속기간을 9.5일 더 단축시키고, 바이러스혈증의 종료도 11.9일 더 조기 종료시켰으며, 바이러스혈증 샘플링 일수도 1.9일 더 저하시켰고, 게놈 당량의 합계/ml도 약 2배 감소시켰다. 백신접종된 "고역가", "중간 역가" 및 "저역가" 동물의 비교 시에, PCV2 바이러스혈증의 다른 파라미터와 관련하여 관찰되는 차이는 거의 없었다. 이러한 결과는, 고 항-PCV2 항체 역가의 존재 하에서도, 백신접종에 사용된 PCV2 항원이 혈액의 바이러스혈증을 유의적으로 감소 (바이러스혈증의 종료, 바이러스혈증의 지속기간, 바이러스 부하량)시킬 수 있다는 것을 시사한다. 이러한 발견과 마찬가지로, 백신접종된 그룹의 저역가 및 고역가 동물을 비교해볼 때 체중에 관한 차이는 전혀 관찰할 수 없었다. 더욱이, 백신접종/치료 시에 고 항-PCV2 항체 역가 (>1:1000)인 백신접종된 동물도 초기 항체 역가가 높은 위약처리된 동물에 비해 바이러스혈증 개시 후에 체중 증가가 훨씬 높은 것으로 관찰되었다 (도 3 참조). 결과적으로, 1일령 이상의 동물에 대한 PCV2 항원의 백신접종/치료도 가능하다. 하지만, 백신접종은 처음 8주령 내에, 바람직하게는 처음 7주령 내에 이루어져야 한다. 따라서, 추가 관점에 따르면, 본 발명은 동물의 PCV2 감염과 관련이 있거나 PCV2 감염에 의한 임상 증상을 감소시키기 위한, 또는 PCV2 감염에 대한 치료 또는 예방 방법으로서, 이러한 치료를 필요로 하는 1일령 이후의 동물, 바람직하게는 8주령 이하의 동물에게 PCV2 항원의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 바람직한 양태에 따르면, 20㎍/용량 미만의 PCV2 항원이 상기 동물에 면역성을 부여하는데 필요로 된다. 더욱 바람직한 양태에 따르면, PCV2 항원, 바람직하게는 20㎍/용량 미만은 상기 치료를 필요로 하는 동물에게 1회만 투여되는 것이 좋다.

또 다른 더욱 일반적인 관점에 따르면, 본 발명은 어린 동물에서 PCV2 감염과 관련이 있거나 PCV2 감염에 의한 임상 증상을 감소시키기 위한 또는 PCV2 감염에 대한 치료 또는 예방 방법으로서, 이러한 치료를 필요로 하는 동물에게 PCV2 항원의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다.

본 명세서에 사용된, "어린 동물"이란 용어는 1 내지 22일령의 동물을 의미한다. 바람직하게는, 어린 동물이란 용어는 1 내지 20일령의 동물을 의미한다. 더욱 바람직하게는, 어린 동물이란 용어는 1 내지 15일령의 동물, 더욱 더 바람직하게는 1 내지 14일령의 동물, 더욱 더 바람직하게는 1 내지 12일령의 동물, 더욱 더 바람직하게는 1 내지 10일령의 동물, 더욱 더 바람직하게는 1 내지 8일령의 동물, 더욱 더 바람직하게는 1 내지 7일령의 동물, 더욱 더 바람직하게는 1 내지 6일령의 동물, 더욱 더 바람직하게는 1 내지 5일령의 동물, 더욱 더 바람직하게는 1 내지 4일령의 동물, 더욱 더 바람직하게는 1 내지 3일령의 동물, 더욱 더 바람직하게는 1 또는 2일령의 동물, 가장 바람직하게는 1일령의 동물을 의미한다. 또 다른 관점에 따르면, 본 발명은 어린 동물에서 PCV2 감염과 관련이 있거나 PCV2 감염에 의한 임상 증상을 감소시키기 위한 또는 PCV2 감염에 대한 치료 또는 예방 방법으로서, 이러한 치료를 필요로 하는 1 내지 22일령의 동물, 바람직하게는 1 내지 20일령의 동물, 더욱 바람직하게는 1 내지 15일령의 동물, 더욱 더 바람직하게는 1 내지 14일령의 동물, 더욱 더 바람직하게는 1 내지 12일령의 동물, 더욱 더 바람직하게는 1 내지 10일령의 동물, 더욱 더 바람직하게는 1 내지 8일령의 동물, 더욱 더 바람직하게는 1 내지 7일령의 동물, 더욱 더 바람직하게는 1 내지 6일령의 동물, 더욱 더 바람직하게는 1 내지 5일령의 동물, 더욱 더 바람직하게는 1 내지 4일령의 동물, 더욱 더 바람직하게는 1 내지 3일령의 동물, 더욱 더 바람직하게는 1 또는 2일령의 동물, 가장 바람직하게는 1일령의 동물에게 PCV2 항원의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 예를 들어, 19 내지 22일령의 동물에 대한 백신접종/치료가 백신접종의 높은 효능을 나타낸다는 증거가 제시된다. 또한, 12 내지 18일령, 바람직하게는 12 내지 14일령의 동물에 대한 백신접종/치료도 PCV2 감염과 관련 있는 임상 증상의 감소, 총 바이러스 부하량의 감소, 바이러스혈증의 지속기간의 감소, 바이러스혈증의 개시 지연 및 체중 증가에 매우 효과적인 것으로 관찰되었다. 또한, 1주령째의 백신접종 역시 PCV2 감염과 관련 있는 임상 증상의 감소, 총 바이러스 부하량의 감소, 바이러스혈증의 지속기간의 감소, 바이러스혈증의 개시 지연 및 체중 증가에 매우 효과적인 것으로 관찰되었다. 이러한 어린 동물에 면역성을 부여하는 데 필요한 PCV2 항원은 20㎍/용량 미만인 것이 바람직하다. 더욱 바람직한 양태에 따르면, PCV2 항원, 바람직하게는 20㎍ 미만은 이러한 치료를 필요로 하는 어린 동물에게 1회만 투여되는 것이 좋다.

야생에서 PCV2의 편재성 때문에, 어린 새끼돼지의 대부분은 PCV2에 대한 혈청양성이다. 또 다른 관점에 따르면, 본 발명은 백신접종일에 항-PCV2 항체를 보유하는 어린 동물에서 PCV2 감염과 관련이 있거나 그 감염에 의해 유발된 임상 증상을 감소시키기 위한 또는 PCV2 감염에 대한 치료 또는 예방 방법으로서, 1 내지 22일령의 동물, 바람직하게는 1 내지 20일령의 동물, 더욱 바람직하게는 1 내지 15일령의 동물, 더욱 더 바람직하게는 1 내지 14일령의 동물, 더욱 더 바람직하게는 1 내지 12일령의 동물, 더욱 더 바람직하게는 1 내지 10일령의 동물, 더욱 더 바람직하게는 1 내지 8일령의 동물, 더욱 더 바람직하게는 1 내지 7일령의 동물, 더욱 더 바람직하게는 1 내지 6일령의 동물, 더욱 더 바람직하게는 1 내지 5일령의 동물, 더욱 더 바람직하게는 1 내지 4일령의 동물, 더욱 더 바람직하게는 1 내지 3일령의 동물, 더욱 더 바람직하게는 1 또는 2일령의 동물, 가장 바람직하게는 1일령의 동물에게 PCV2 항원의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 상기 백신접종/치료일에 어린 동물은 검출가능한 항-PCV2 항체 역가가 1:100 이하, 바람직하게는 1:100 이상, 더욱 바람직하게는 1:250 이상, 더욱 더 바람직하게는 1:500 이상, 더욱 더 바람직하게는 1:640 이상, 더욱 더 바람직하게는 1:750 이상, 가장 바람직하게는 1:1000 이상인 것이 바람직하다. 이러한 어린 동물에 충분한 면역성을 부여하는 데 필요한 PCV2 항원은 20㎍/용량 미만인 것이 바람직하다. 더욱 바람직한 양태에 따르면, PCV2 항원, 바람직하게는 20㎍ 미만은 이러한 치료를 필요로 하는 어린 동물에게 1회만 투여되는 것이 좋다.

전술한 바와 같이, PCV2 항원을 이용한 어린 동물의 백신접종/치료는 백신접종되지 않은 대조 동물과 비교했을 때 바이러스혈증기의 단축을 초래했다. 평균 단축 시간은 동일한 종의 백신접종되지 않은 대조 동물과 비교했을 때 9.5일이었다. 따라서, 추가 관점에 따르면, 본 발명은 어린 동물에서 PCV2 감염과 관련이 있거나 PCV2 감염에 의해 유발된 임상 증상을 감소시키기 위한 또는 PCV2 감염에 대한 치료 또는 예방 방법으로서, 이러한 치료를 필요로 하는 상기 동물에게 PCV2 항원의 유효량을 투여하는 단계를 포함하되, 상기 치료 또는 예방으로 인해 동일 종의 비-치료 대조 그룹의 동물에 비해 바이러스혈증기가 5일 이상, 바람직하게는 6일 이상, 더욱 바람직하게는 7일 이상, 더욱 더 바람직하게는 8일 이상, 더욱 더 바람직하게는 9일 이상, 더욱 더 바람직하게는 10일 이상, 더욱 더 바람직하게는 12일 이상, 더욱 더 바람직하게는 14일 이상, 가장 바람직하게는 16일 이상 단축되는 방법을 제공한다. 몇몇 경우에, 바이러스혈증기는 20일 이상 단축되기도 한다. 일반적으로, 어린 새끼돼지의 백신접종은 체중 증가 저하의 경감, 바이러스혈증의 지속기간의 단축, 바이러스혈증의 조기 종결 및 바이러스 부하량 저하를 유도했다. 따라서, 추가 관점에 따르면, 본 발명은 어린 동물에서 PCV2 감염과 관련이 있거나 PCV2 감염에 의해 유발된 임상 증상을 감소시키기 위한 또는 PCV2 감염에 대한 치료 또는 예방 방법으로서, 이러한 치료를 필요로 하는 상기 동물에게 PCV2 항원의 유효량을 투여하는 단계를 포함하되, 이러한 PCV2 감염의 치료 또는 예방이 동일한 종의 비-치료 대조 그룹의 동물과 비교했을 때, 체중 증가 저하의 경감, 바이러스혈증의 지속기간의 단축, 바이러스혈증의 조기 종결, 바이러스 부하량 저하 또는 이들의 조합으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 백신 효능의 파라미터의 개선을 유도하는 방법을 제공한다. 전술한 임의의 개선된 백신 효능 파라미터를 유도하는 데 필요한 PCV2 항원은 20㎍/용량 미만인 것이 바람직하다. 더욱이, 이러한 개선된 백신 효능 파라미터(들)는 단지 단일 용량을 1회 투여함으로써 달성된다.

본 명세서에 사용된 "유효량"이란 용어는 PCV2 항원의 상기 유효량이 투여된 동물에서 면역 반응을 유도하거나 유도할 수 있는 항원의 양을 의미하지만, 이에 국한되는 것은 아니다. 유효량은 적어도 10주, 바람직하게는 적어도 12주, 더욱 바람직하게는 적어도 15주, 가장 바람직하게는 적어도 20주의 면역 지속기간 (DOI)을 부여하는 항원의 양으로서 정의되는 것이 바람직하다.

효과적인 양은 백신의 성분 및 투여 계획에 따라 달라진다. 통상적으로, 불활성화된 바이러스 또는 변형된 생 바이러스 제제가 조합 백신에 사용될 때, 백신의 양은 약 10^2.0 내지 약 10^9.0 TCID₅₀/용량, 바람직하게는 약 10^3.0 내지 약 10^8.0 TCID₅₀/용량, 더욱 바람직하게는 약 10^4.0 내지 약 10^8.0 TCID₅₀/용량을 함유하는 양으로 사용된다. 특히, 변형된 생 PCV2가 백신에 사용될 때, 민감한 동물에게 투여하도록 권장되는 용량은 바람직하게는 약 10^3.0 TCID₅₀ (조직 배양물 감염 용량 50% 종말점)/용량 내지 약 10^6.0 TCID₅₀/용량, 더욱 바람직하게는 약 10^4.0 TCID₅₀/용량 내지 약 10^5.0 TCID₅₀/용량이다. 일반적으로, 항원의 양은 0.2 내지 5000 마이크로그램이고, 10^2.0 내지 10^9.0 TCID₅₀, 바람직하게는 10^3.0 내지 10^6.0 TCID₅₀, 더욱 바람직하게는 10^4.0 내지 10^5.0 TCID₅₀ (정제된 항체로 사용될 때)이다.

서브유닛 백신은 보통 용량당 적어도 0.2㎍ 항원의 항원 내포 수준으로 투여되고, 바람직하게는 약 0.2 내지 약 400㎍/용량, 더욱 더 바람직하게는 약 0.3 내지 약 200㎍/용량, 더욱 더 바람직하게는 약 0.35 내지 약 100㎍/용량, 더욱 더 바람직하게는 약 0.4 내지 약 50㎍/용량, 더욱 더 바람직하게는 약 0.45 내지 약 30㎍/용량, 더욱 더 바람직하게는 약 0.5 내지 약 18㎍/용량, 더욱 더 바람직하게는 약 0.6 내지 약 16㎍/용량, 더욱 더 바람직하게는 약 0.75 내지 약 8㎍/용량, 더욱 더 바람직하게는 약 1.0 내지 약 6㎍/용량, 더욱 더 바람직하게는 약 1.3 내지 약 3.0㎍/용량으로 투여된다.

예상치않게도, 전술한 면역원성 조성물의 예방학적 용도가 바람직하게는 치료일에 PCV2에 대한 수동 면역성이 있는 동물 및/또는 어린 동물에서 PCV2 감염과 관련이 있거나 PCV 감염에 의해 유발된 임상 증상을 감소시키는데 효과적이라는 것을 발견했다. 특히, 본 명세서에 기술된 면역원성 조성물, 구체적으로 PCV2 ORF-2 항원을 함유하는 조성물의 예방학적 용도가 PCV2로 감염되어 치료/백신접종일에 모계의 항-PCV2 항체를 보유하는 동물에서 림프절병증, 림프구 부족 (depletion) 및/또는 다핵/거대 조직구를 감소시키는데 효과적인 것으로 발견되었다. 더욱이, 본 명세서에 기술된 면역원성 조성물, 구체적으로 PCV2 ORF-2 항원을 함유하는 조성물의 예방학적 용도가 (1) 소엽사이 부종 (interlobular edema)이 있는 간질성 폐렴 (interstitial pneumonia), (2) 창백한 피부 (cutaneous pallor) 또는 황달 (icterus), (3) 얼룩덜룩한 위축성 간 (mottled atrophic liver), (4) 위궤양 (gastric ulcer), (5) 신장염 (nephritis), (6) 생식기 장애, 예컨대 유산, 사산, 미라 등, (7) 일반적으로 로소니아 인트라셀룰라리스 (Lawsonia intracellularis) 감염 (회장염)과 관련이 있는 것으로 알려진 연막계 (Pia like) 병변, (8) 림프절병증, (9) 림프구 부족 및/또는, (10) 다핵/거대 조직구, (11) 돼지 피부염 및 신장병 증후군 (PDNS), (12) PCVAD 관련 사망률, (13) PCVAD 관련 체중 감소, (14) 감퇴된 성장 변동성, (15) 감소된 빈도의 '왜소병', (16) 감소된 돼지 생식기 및 호흡기 질환 합병증 (PRRSV)으로의 공동감염을 저감시키는데 효과적인 것으로 발견되었다. 이러한 면역원성 조성물은 또한 경제적으로 중요한 성장 파라미터, 예컨대 도살까지의 시간, 사체 중량 및/또는 살코기 비 등에도 효과적이다. 즉, 본 명세서에 사용된 "임상 증상"이란 용어는 (1) 소엽사이 부종이 있는 간질성 폐렴, (2) 창백한 피부 또는 황달, (3) 얼룩덜룩한 위축성 간, (4) 위궤양, (5) 신장염, (6) 생식기 장애, 예컨대 유산, 사산, 미라 등, (7) 일반적으로 로소니아 인트라셀룰라리스 감염 (회장염)과 관련이 있는 것으로 알려진 연막계 병변, (8) 림프절병증, (9) 림프구 부족 및/또는 (10) 다핵/거대 조직구, (11) 돼지 피부염 및 신장병 증후군 (PDNS), (12) PCVAD 관련 사망률, (13) PCVAD 관련 체중 감소, (14) 감퇴된 성장 변동성, (15) 감소된 빈도의 '왜소병' 및 (16) 감소된 돼지 생식기 및 호흡기 질환 합병증 (PRRSV)으로의 공동감염을 의미하지만, 이에 국한되는 것은 아니다. 더욱이, 본 명세서에 기술된 항원성 조성물은 어린 동물, 특히 백신접종일에 항-PCV2 항체를 보유하는 동물에서 개시 지연, 지속기간 단축, 바이러스혈증의 조기 종결, 바이러스 부하량 저하 및 이의 면역억제 효과 저하를 비롯하여 써코바이러스의 총 부하량을 감소시킴으로써 PCV2 관련 질환 및 증상의 빈도를 감소시키고 일반 질환의 저항성 수준을 높일 수 있다.

따라서, 또 다른 관점에 따르면, 본 발명은 어린 동물 및/또는 항-PCV2 항체를 보유한 동물에서 PCV2 감염과 관련이 있거나 PCV2 감염에 의해 유발된 임상 증상을 감소시키기 위한, 또는 PCV2 감염에 대한 치료 또는 예방 방법으로서, 이러한 치료가 필요한 상기 동물에게 PCV2 항원 또는 PCV2 항원을 함유하는 면역원성 조성물을 유효량으로 투여하는 단계를 포함하되, 상기 임상 증상이 (1) 소엽사이 부종이 있는 간질성 폐렴, (2) 창백한 피부 또는 황달, (3) 얼룩덜룩한 위축성 간, (4) 위궤양, (5) 신장염, (6) 생식기 장애, 예컨대 유산, 사산, 미라 등, (7) 일반적으로 로소니아 인트라셀룰라리스 감염 (회장염)과 관련이 있는 것으로 알려진 연막계 병변, (8) 림프절병증, (9) 림프구 부족 및/또는 (10) 다핵/거대 조직구, (11) 돼지 피부염 및 신장병 증후군 (PDNS), (12) PCVAD 관련 사망률, (13) PCVAD 관련 체중 감소, (14) 감퇴된 성장 변동성, (15) 감소된 빈도의 '왜소병' 및 (16) 감소된 돼지 생식기 및 호흡기 질환 합병증 (PRRSV)으로의 공동감염으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 방법을 제공한다. 또 다른 관점에 따르면, 본 발명은 어린 동물에서 PCV2 감염과 관련이 있거나 PCV2 감염에 의해 유발된 임상 증상을 감소시키기 위한 또는 PCV2 감염에 대한 치료 또는 예방 방법으로서, 이러한 치료가 필요한 상기 동물에게 PCV2 항원의 유효량을 투여하는 단계를 포함하되, 상기 임상 증상이 (1) 소엽사이 부종이 있는 간질성 폐렴, (2) 창백한 피부 또는 황달, (3) 얼룩덜룩한 위축성 간, (4) 위궤양, (5) 신장염, (6) 생식기 장애, 예컨대 유산, 사산, 미라 등, (7) 일반적으로 로소니아 인트라셀룰라리스 감염 (회장염)과 관련이 있는 것으로 알려진 연막계 병변, (8) 림프절병증, (9) 림프구 부족 및/또는 (10) 다핵/거대 조직구, (11) 돼지 피부염 및 신장병 증후군 (PDNS), (12) PCVAD 관련 사망률, (13) PCVAD 관련 체중 감소, (14) 감퇴된 성장 변동성, (15) 감소된 빈도의 '왜소병' 및 (16) 감소된 돼지 생식기 및 호흡기 질환 합병증 (PRRSV)으로의 공동감염으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 방법을 제공한다.

본 발명에 따른 조성물은 경구, 피내, 기관내 또는 질내로 투여 또는 적용될 수 있다. 이러한 조성물은 바람직하게는 근육내 또는 비내, 가장 바람직하게는 근육내로 투여 또는 적용될 수 있다. 동물 신체의 경우, 전술한 바와 같은 약제학적 조성물은 정맥내를 통해 또는 목표 조직 내로의 직접 주사를 통해 적용하는 것이 유익한 것으로 입증되었다. 전신 적용 시에는, 정맥내, 혈관내, 근육내, 비내, 동맥내, 복강내, 경구 또는 경막내 경로가 바람직하다. 더욱 국소적인 적용은 피하, 피내, 피부내, 심장내, 소엽내, 골수내, 폐내로 또는 치료할 조직 (결합조직, 뼈조직, 근육조직, 신경조직, 상피조직)내 또는 부근으로 직접 실시할 수도 있다. 원하는 치료 기간 및 효과에 따라서, 본 발명의 조성물은 예컨대 1일 기준으로 수일 동안, 수주 동안, 수개월 동안 다른 투여량으로 1회 또는 수회, 또한 간헐적으로 투여될 수 있다.

바람직하게는, 전술한 면역원성 조성물의 1회 용량은 치료를 필요로 하는 피검체에게 근육내로 투여되는 것이 좋다. 또 다른 관점에 따르면, PCV2 항원 또는 본 명세서에 기술된 바와 같은 그러한 모든 PCV2 항원을 함유하는 면역원성 조성물은 병에 담겨있고 용량당 1ml씩 투여된다. 따라서, 또 다른 관점에 따르면, 본 발명은 어린 동물에서 PCV2 감염과 관련이 있거나 PCV2 감염에 의해 유발된 임상 증상을 감소시키기 위한 또는 PCV2 감염에 대한 치료 또는 예방을 위해, 이러한 치료를 필요로 하는 동물에게 PCV2 항원의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는 방법에 사용되는, 본 명세서에 기술된 PCV-2 항원을 포함하는 1ml 면역원성 조성물을 제공한다. 또 다른 관점에 따르면, 본 발명은 항-PCV2 항체를 보유하는 동물에서 PCV2 감염과 관련이 있거나 PCV2 감염에 의해 유발된 임상 증상을 감소시키기 위한 또는 PCV2 감염에 대한 치료 또는 예방을 위해 이러한 치료를 필요로 하는 상기 동물에게 PCV2 항원 또는 PCV2 항원을 함유하는 면역원성 조성물의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는 방법에 사용되는, 본 명세서에 기술된 PCV2 항원을 포함하는 1ml 면역원성 조성물을 제공한다.

또 다른 관점에 따르면, 전술한 면역원성 조성물의 적어도 1회 용량의 1회 이상의 추가 투여가 치료를 필요로 하는 피검체에게 제공되고, 여기서 제2 투여 또는 임의의 추가 투여는 1차 투여 또는 모든 이전 투여 후에 적어도 14일이 지난 후 제공한다. 바람직하게는, 면역원성 조성물은 면역 자극제와 함께 투여한다. 이러한 면역 자극제는 적어도 2회 제공하는 것이 바람직하다. 바람직하게는 적어도 3일째, 더욱 바람직하게는 적어도 5일째, 더욱 바람직하게는 적어도 7일째에 면역자극제의 1차와 2차 투여 사이 또는 임의의 추가 투여 사이에 제공한다. 바람직하게는 면역자극제는 본 명세서에 제공된 면역원성 조성물의 1차 투여 후 적어도 10일, 바람직하게는 15일, 더욱 바람직하게는 20일, 더욱 더 바람직하게는 적어도 22일이 지나서 제공되는 것이 좋다. 바람직한 면역자극제는 예컨대 키홀 림펫 헤모시아닌 (KLH), 바람직하게는 불완전 프로인트 보조제로 유화된 KLH (KLH/ICFA)이다. 하지만, 여기서는 당업자에게 잘 알려진 임의의 다른 면역자극제도 사용될 수 있는 것으로 이해되어야 한다. 본 명세서에 사용된 "면역자극제"란 용어는 바람직하게는 특정 병원체에 대한 면역반응과 같이 특정 면역반응을 개시 또는 증가시킴이 없이, 면역반응을 자극할 수 있는 임의의 제제 또는 조성물을 의미한다. 또한, 면역자극제는 적당한 용량으로 투여해야 한다.

본 명세서에 사용된 "동물"은 돼지 (swine), 돼지 (pig) 또는 새끼돼지를 의미한다.

이하 실시예는 본 발명에 따른 바람직한 재료와 절차를 설명한다. 본 발명의 실시 또는 검사 시에는 본 명세서에 기술된 것과 유사하거나 동등한 모든 방법과 재료가 사용될 수 있지만, 바람직한 방법, 장치 및 재료가 이하에 설명된다. 하지만, 이러한 실시예들은 단지 예시하기 위한 것일 뿐이며, 본 발명의 전반적인 범위를 제한하려는 것으로 간주되어서는 안된다.

실시예 1

PCV2 ORF -2 항원의 제조

액체 질소 저장된 1차 SF+ 세포 배양물은 멸균 스피너 플라스크에서 Excell 420 배지 (JRH Biosciences, Inc., Lenexa, KS)에 현탁시켜 일정한 교반 하에 증식시켰다. 배양물은 Excell 420 무혈청 배지 25 내지 150ml가 담긴 100ml 내지 250ml 스피너 플라스크에서 증식시켰다. 세포가 1.0 내지 8.0 x 10⁶ 세포/ml의 세포 밀도까지 증식되었을 때, 새로운 용기에 0.5 내지 1.5 x 10⁶ 세포/ml의 접종 밀도로 분할시켰다. 이후 확장 배양물은 스피너 플라스크에서 36리터 규모 이하로 또는 스테인리스 스틸 생물반응기에서 300리터 이하로 25 내지 29℃에서 2 내지 7일 동안 증식시켰다.

접종 후에, 플라스크는 27℃에서 4시간 동안 항온배양했다. 이어서, 각 플라스크에는 PCV2 ORF-2 유전자 (서열번호 4)를 함유하는 재조합 배큘로바이러스를 접종했다. PCV2 ORF-2 유전자를 함유하는 재조합 배큘로바이러스는 WO 06/072065에 기술된 바와 같이 작제했다. 배큘로바이러스가 접종된 후, 플라스크는 그 다음 27±2℃에서 7일 동안 항온배양하고, 이 배양 동안 100rpm으로 교반했다. 이 플라스크에는 공기가 흐르도록 통기성 캡을 사용했다.

항온배양 후, 수득되는 상청액을 수거하고, 여과하여 세포 파편을 제거하고 불활성화시켰다. 상청액은 37±2℃로 승온시켜 불활성화시키고 이 상청액에 2원 에틸렌이민 (BEI)을 5mM의 최종 농도로 첨가한다. 그 다음, 샘플을 72 내지 96시간 동안 연속해서 교반했다. 임의의 잔류 BEI를 중화시키기 위해 1.0M 소듐티오설페이트 용액을 5mM의 최종 최소 농도로 첨가했다. 불활성화 후, 인산염 완충액과 카르보폴로 완충화된 PCV2 ORF-2를 약 0.5 내지 2.5mg/용량으로 첨가했다. 최종 용량은 약 16㎍의 PCV2 ORF-2 항원을 포함하고 있었다.

실시예 2

항 PCV -2 면역분석법

WO 02/07721에 기술된 PK15 (예: ATCC CCL-33) 또는 VIDO R1 세포는 96웰 플레이트에 접종했다 (웰당 약 20,000 내지 60,000 세포). 단층이 약 65 내지 85% 융합성일 때 세포를 PCV2 분리물로 감염시켰다. 감염된 세포는 48시간 동안 항온배양했다. 배지는 제거하고 웰은 PBS로 2회 세척했다. 세척 완충액은 제거하고 세포는 저온의 50/50 메탄올/아세톤 고정제 (약 100㎕/웰)로 약 -20℃에서 약 15분 동안 처리했다. 고정제를 제거하고, 플레이트를 공기 건조했다. 돼지 혈청 샘플은 PBS에 연속 희석물로 제조하고 플레이트에 첨가한 뒤, 항체가 혈청 샘플에 존재한다면 36.5±1℃에서 약 1시간 동안 결합하도록 항온배양했다. 또한, 항-PCV2 양성 및 음성 대조 샘플 (양성 대조 및 음성 대조 샘플)의 연속 희석물도 동시에 항온배양했다. 그 다음, 플레이트를 PBS로 3회 세척했다. PBS는 제거했다. 그 다음, 플레이트는 PBS에 1:100으로 희석한 시판 염소 항-돼지 FITC 접합체로 염색하고, 36.5±1℃에서 약 1시간 동안 항온배양했고, 이로써 감염된 세포에 결합된 항체를 검출했다. 항온배양이 완료된 후, 항온배양기에서 마이크로플레이트를 꺼내고, 접합체를 분리한 후, 플레이트를 PBS로 2회 세척했다. 플레이트를 UV 검경으로 판독하고, 각 웰을 양성 또는 음성으로 기록했다. 양성 대조 샘플과 음성 대조 샘플을 검사 시스템의 모니터에 사용했다. 대조군이 예상 범위 이내이면, 검사 결과는 검사 방법 파라미터와 관련하여 용인되는 결과이다. 혈청 항체 역가는 특이적인 IFA 반응성을 최고 희석율과 희석물당 양성 웰 수를 사용하여 계산했고, 또는 적당한 리드-뮌히 (Reed-Muench) 식을 이용하여 50% 종말점을 계산했다.

실시예 3

항-PCV2 항체가 적거나 많은 어린 동물에서 PCV2 ORF-2 (Ingelvac® CircoFLEX™)의 효능

모계 항체에 의해 가능한 백신 간섭을 연구하기 위하여, 백신 접종 시에 모든 연구 동물의 항체 역가를 측정하여 낮은 항체 클래스, 중간 항체 클래스 및 높은 항체 클래스로 그룹화하여 연구를 수행했다. 즉, 기하 평균 역가 <1:100는 낮은 항체 역가로, 1:100 내지 1:1000 사이의 역가는 중간 항체 역가로, >1:1000의 역가는 높은 항체 역가로 간주했다.

연구 수행

본 연구에는 약 500마리의 동물을 사용했다. 연구 동물은 초기 체중과 새끼 배정과 관련하여 처리 그룹 간에 균형을 맞추어 동등하게 배분했다. 20일령째, 모든 연구 동물에게 PCV2 백신 (Investigational Veterinary Product, IVP) 1회 용량 (1ml) 또는 위약을 함유하는 보강제 첨가된 세포 배양 상청액 (Control Product, CP) 1회 (1ml) 용량을 목의 우측으로 근육내 주사를 통해 투여했다. 연구 동물은 비육화 말기까지 조사했다. 연구 동물의 혈액 샘플은 수집해서, 백신접종 시의 항체 역가를 측정하기 위하여 IFAT로 분석했다. 이후, 초기 항체 역가는 체중 증가와 상관관계가 있었다. 또한, 초기 항체 역가에 따라서 동물을 세 클래스 (저, 중 및 고 초기 항체 역가)로 나누고, 두 처리 그룹의 '고 역가' 동물을 체중 증가 및 바이러스혈증에 관한 가능한 차이를 비교했다.

결과

초기 항체 역가

백신접종 시에 대부분의 동물은 중간 항체 역가 (1:100 내지 1:1000으로 정의됨) 또는 고 항체 역가 (>1:1000으로 정의됨)를 갖고 있었다. 동물의 약 13% 정도만이 저 항체 역가 (<1:100으로 정의됨)를 갖고 있었다. 연구 초기에는 PCV2 감염의 부재로 인해, 연구 0일 시의 항체 역가가 아마도 모계에서 유래되었다고 결론지을 수 있다. 연구 0일 시의 항체 역가는 두 처리 그룹 간에 유의적인 차이가 전혀 관찰되지 않았다. 역가 클래스마다 대략적인 동물의 백분율을 도 1에 제시했다.

혈액 중의 바이러스혈증과 백신접종 시의 항체 역가의 상관관계

백신접종 시에 고 항체 역가 (>1:1000)가 바이러스혈증에 영향을 미치는지를 측정하기 위하여, 초기 항체 역가가 높은 백신접종된 동물과 위약 처리된 동물을 바이러스혈증의 개시, 종결, 지속기간, 양성 샘플링 일수 및 바이러스 부하량에 관하여 비교했다. 표 1은 두 처리 그룹으로부터 수득된 '고역가 동물'의 바이러스혈증 파라미터의 비교 결과를 정리한 것이다.

위약 처리된 고역가 동물과 비교할 때, 백신접종된 고역가 동물은 바이러스혈증의 지속기간이 9.5일 더 짧았고, 바이러스혈증의 종결도 11.9일 더 단축시켰으며, 바이러스혈증 샘플링 일수도 1.9일 적었고, 연구 과정 동안의 게놈 당량의 합계가 1ml당 약 2배 감소했다. 이러한 결과는 고 모계 항체 역가의 존재에서도 IVP가 혈액의 바이러스혈증 (바이러스혈증의 종결, 바이러스혈증의 지속기간, 바이러스 부하량)을 유의적으로 감소시킬 수 있음을 시사한다.

백신접종 시의 항체 역가와 체중 증가의 상관관계

다음으로, 초기 항체 역가가 연구 과정 동안의 체중 증가에 어떠한 영향을 미치는지를 조사했다. 표 2는 스피어맨 (Spearman) 랭크 계수와 p값의 계산을 통해 측정된, 여러 시점에서의 체중 증가와 초기 항체 역가의 상관관계를 나타낸다.

연구 0주 내지 7주 시의 두 처리 그룹에서는 높은 모계 항체 역가가 사육기의 체중 증가에 영향을 미치지 않음을 시사하는, 항체 역가와 체중 증가의 통계적으로 유의적인 음의 상관관계가 관찰되었다. 다른 시간 간격 동안에도 초기 항체 역가와 체중 증가 간에 다른 통계적으로 유의적인 상관관계가 전혀 관찰되지 않았다. 따라서, 모계 항체 역가의 수준은 백신접종된 동물이나 위약 처리된 동물 모두에서 10주령 (연구 7주차) 이후부터의 체중 증가에 전혀 영향을 미치지 않는 것으로 결론지을 수 있다.

이 발견과 일맥상통하는 것으로, 백신접종된 그룹의 고 역가 동물과 저 역가 동물을 비교했을 때 체중에 관한 차이는 전혀 발견할 수 없었다. 도 2는 바이러스혈증의 개시 후 체중 (연구 17주 내지 22주)이 초기 항체 역가의 수준에 관계없이 비슷하다는 것을 보여준다.

더욱이, 백신접종 시에 항체 역가가 높은 백신접종된 동물 (>1:1000)은 초기 항체 역가가 높은 위약 처리된 동물에 비해 바이러스혈증 개시 후 체중이 유의적으로 증가된 것으로 확인되었다. 도 3에서 확인할 수 있듯이, 연구 17주 및 22주째의 체중 (LSMean)은 위약 처리된 '고역가동물'보다 백신접종된 '고역가동물' (연구 17주: 1.55kg, p = 0.0328; 연구 22주: 3.06kg, p = 0.0007)에서 훨씬 더 증가했다. 이러한 발견들을 종합해 볼 때, 백신접종 시의 항체 역가에 의한 IVP 간섭은 전혀 없다는 것이 증명된다.

결론

가능한 모계 항체 간섭을 분석하기 위해 초기 항체 역가를 2가지 효능 파라미터인 혈액중의 바이러스혈증 및 체중과 상관지었다. 위약 처리된 '고역가 동물'과 비교했을 때, 다음과 같은 통계적으로 유의적인 발견이 백신접종된 '고역가 동물'에서 관찰되었다:

- 체중 증가 저하의 감소

- 바이러스혈증의 지속기간 단축 및 바이러스혈증의 조기 종결

- 낮은 바이러스 부하량

실시예 4

항-PCV2 항체를 보유한 어린 동물에서 림프구 부족, 림프구 염증 및 림프구 면역조직화학 (IHC)에 대한 PCV2 ORF-2 (Ingelvac® CircoFLEX™)의 효능

본 실시예의 백신접종-시험감염 맹검 연구의 목적은 돼지 써코바이러스 2형 (PCV2) 모계 유래의 항체의 존재 하에 돼지 써코바이러스 백신, 2형, 배큘로바이러스 사멸 벡터로 백신접종을 받은 어떠한 연령의 돼지가 면역성을 나타내는지를 평가하기 위한 것이었다. 시험감염 이후에 다음과 같은 3가지 기본 파라미터를 분석했다. 즉 3가지 파라미터는 림프구 부족, 림프구 염증 및 림프구 면역조직화학 (IHC)을 포함했다. PCV 모계 유래 항체의 존재 하에 면역성을 입증하기 위해서는 3주령 또는 8주령째 PCV2 백신으로 백신접종된 통상적으로 사육된 돼지가 3주령째 대조물로 처리된 시험감염 대조 돼지에 비해, 림프구 부족, 림프구 염증 및 림프구 IHC의 통계적으로 유의적인 차이 (p<0.05)가 있음을 입증해야 한다.

연구 수행

연구 0일 (D0)째 21일령인 120마리의 통상적으로 사육된 돼지를 완전 무작위로 5개의 처리 그룹으로 분류했다. D0에, 모든 돼지로부터 혈액 샘플을 수집했다.

· 그룹 1a는 3주령째 조사 수의학적 산물 (IVP; PCV2 참고 백신)으로 처리했다.

· 그룹 1b는 8주령째 조사 수의학적 산물 (IVP; PCV2 참고 백신)으로 처리했다.

· 그룹 2는 3주령째 대조 산물 (CP)로 처리했다.

D-1부터 D59까지 백신접종 후의 임상 평가를 위해 돼지를 관찰했다. 또한, 시험감염 전의 혈액 샘플을 D14, D28, D42, D56 및 D63에 수집했다. 시험감염전의 그룹 PCV2 혈청학적 기하 평균 역가 (GMT)는 이하 표 3에 정리했다.

나머지 모든 돼지에게는 D60 (시험감염후 일수 (DPC)-3) 및 D66 (DPC3)째에 불완전 프로인트 보강제 (ICFA)에 유화시킨 키홀 림펫 헤모시아닌 (KLH) 2.0ml를 투여했다. D63 (DPC 0)째에는 나머지 돼지에게 1.0ml의 PCV2 아이오와 스테이트 유니버시티 수의학 진단 실험실 (ISUVDL)의 시험감염물 (4.75 log₁₀ TCID₅₀/ml) IM 및 1.0ml의 동일물 IN을 투여했다. 체중, 직장 온도, 임상 관찰, 혈액 샘플 및 비측 면봉채취물을 시험감염일 및 시험감염 후 주기적인 날에 수집했다. 각 돼지의 부검 시에, 육안 병변이 관찰되었고, 폐와 림프구 조직 샘플을 수집했다. 폐와 림프구 조직은 ISUVDL에 의해서 병변에 대해서는 현미경검사로, PCV2 항원의 존재에 대해서는 IHC 검사로 조사되었다. 본 연구에서 시험감염 단계에 대한 일반적인 설명은 이하 표 4에 제시했다.

D86에, 기하 평균 역가는 각각 906.6, 2447.1, 2014.9였다.

결과

D63에 PCV2 시험감염 노출 및 이어서 부검 후에 그룹 1a는 그룹 2에 비해 림프구 부족 양성인 돼지의 비율이 통계적으로 유의적으로 낮았고 (p=0.0084), 림프구 염증 양성 돼지의 비율이 낮았으며 (p=0.0079), IHC 림프구 양성 조직을 보유한 돼지 비율이 낮았다 (p=0.0031). PCV2 시험감염 후에, 그룹 1b는 그룹 2에 비해 림프구 부족 양성인 돼지의 비율이 통계적으로 유의적으로 낮았고 (p=0.0148), 림프구 염증 양성 돼지의 비율이 낮았으며 (p=0.0036), IHC 림프구 양성 조직을 보유한 돼지 비율이 낮았다 (p=0.0013). 그룹 1a, 1b 및 2의 주요 효능 파라미터 결과는 이하 표 5에 정리했다.

현미경적 폐 염증은 그룹 2와 비교된 그룹 1a 및 1b 간에 유의적인 차이가 있었지만 (p≤0.0407), IHC 검사에 의한 PCV2 항원 양성인 폐조직 검사에서는 1a 및 1b 그룹 간에 유의적인 차이가 없었다 (p≥0.2317). 백신접종 후의 임상 평가, ADG, 시험감염 후의 임상 징후, 발열, PCV2의 비강 배출, 총 폐 스코어% 및 림프절병증에 있어서, 그룹 2와 비교된 그룹 1a와 1b 사이에 유의적인 차이가 없었다.

결론적으로, 3주령째 백신접종되고 백신접종 시에 GMT가 556.6인 그룹 1a는 그룹 2에 비해 림프구 부족, 림프구 염증, IHC 검사에 의한 PCV2 항원에 대해 양성인 림프구 조직으로부터 상당히 보호된 것으로 관찰되었다. 8주령째 백신접종되고 백신접종 1주전에 GMT가 151.6인 그룹 1b는 그룹 2에 비해 림프구 부족, 림프구 염증, IHC 검사에 의한 PCV2 항원에 대한 림프구 조직 양성 검사를 통해 상당히 보호된 것으로 관찰되었다. 즉, PCV2 모계 유래 항체를 보유한 돼지들은 3주령만큼 초기에 백신접종되었을 때 돼지 써코바이러스 관련 질환 (PCVAD)으로부터 보호되었다.

<110> Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. <120> Treatment of pigs with PCV2 antigen <130> P01-2169 <150> US 60/870,311 <151> 2006-12-15 <160> 11 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 8 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> This is a modified Kozak's sequence. <400> 1 ccgccatg 8 <210> 2 <211> 6 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> This is a recombinant Eco R1 sequence. <400> 2 gaattc 6 <210> 3 <211> 713 <212> DNA <213> Porcine circovirus <400> 3 cagctatgac gtatccaagg aggcgttacc gcagaagaag acaccgcccc cgcagccatc 60 ttggccagat cctccgccgc cgcccctggc tcgtccaccc ccgccaccgc taccgttgga 120 gaaggaaaaa tggcatcttc aacacccgcc tctcccgcac cttcggatat actgtggaga 180 aggaaaaatg gcatcttcaa cacccgcctc tcccgcacct tcggatatac tgtgacgact 240 ttgttccccc gggagggggg accaacaaaa tctctatacc ctttgaatac tacagaataa 300 gaaaggttaa ggttgaattc tggccctgct cccccatcac ccagggtgat aggggagtgg 360 gctccactgc tgttattcta gatgataact ttgtaacaaa ggccacagcc ctaacctatg 420 acccatatgt aaactactcc tcccgccata caatccccca acccttctcc taccactccc 480 gttacttcac acccaaacct gttcttgact ccactattga ttacttccaa ccaaataaca 540 aaaggaatca gctttggctg aggctacaaa cctctagaaa tgtggaccac gtaggcctcg 600 gcactgcgtt cgaaaacagt aaatacgacc aggactacaa tatccgtgta accatgtatg 660 tacaattcag agaatttaat cttaaagacc ccccacttaa accctaaatg aat 713 <210> 4 <211> 713 <212> DNA <213> Porcine circovirus <400> 4 ccgccatgac gtatccaagg aggcgttacc gcagaagaag acaccgcccc cgcagccatc 60 ttggccagat cctccgccgc cgcccctggc tcgtccaccc ccgccaccgc taccgttgga 120 gaaggaaaaa tggcatcttc aacacccgcc tctcccgcac cttcggatat actgtcaagg 180 ctaccacagt cacaacgccc tcctgggcgg tggacatgat gagatttaat attgacgact 240 ttgttccccc gggagggggg accaacaaaa tctctatacc ctttgaatac tacagaataa 300 gaaaggttaa ggttgaattc tggccctgct cccccatcac ccagggtgat aggggagtgg 360 gctccactgc tgttattcta gatgataact ttgtaacaaa ggccacagcc ctaacctatg 420 acccatatgt aaactactcc tcccgccata caatccccca acccttctcc taccactccc 480 gttacttcac acccaaacct gttcttgact ccactattga ttacttccaa ccaaataaca 540 aaaggaatca gctttggctg aggctacaaa cctctagaaa tgtggaccac gtaggcctcg 600 gcactgcgtt cgaaaacagt aaatacgacc aggactacaa tatccgtgta accatgtatg 660 tacaattcag agaatttaat cttaaagacc ccccacttga accctaagaa ttc 713 <210> 5 <211> 233 <212> PRT <213> Porcine circovirus <400> 5 Met Thr Tyr Pro Arg Arg Arg Tyr Arg Arg Arg Arg His Arg Pro Arg 1 5 10 15 Ser His Leu Gly Gln Ile Leu Arg Arg Arg Pro Trp Leu Val His Pro 20 25 30 Arg His Arg Tyr Arg Trp Arg Arg Lys Asn Gly Ile Phe Asn Thr Arg 35 40 45 Leu Ser Arg Thr Phe Gly Tyr Thr Val Lys Ala Thr Thr Val Thr Thr 50 55 60 Pro Ser Trp Ala Val Asp Met Met Arg Phe Asn Ile Asp Asp Phe Val 65 70 75 80 Pro Pro Gly Gly Gly Thr Asn Lys Ile Ser Ile Pro Phe Glu Tyr Tyr 85 90 95 Arg Ile Arg Lys Val Lys Val Glu Phe Trp Pro Cys Ser Pro Ile Thr 100 105 110 Gln Gly Asp Arg Gly Val Gly Ser Thr Ala Val Ile Leu Asp Asp Asn 115 120 125 Phe Val Thr Lys Ala Thr Ala Leu Thr Tyr Asp Pro Tyr Val Asn Tyr 130 135 140 Ser Ser Arg His Thr Ile Pro Gln Pro Phe Ser Tyr His Ser Arg Tyr 145 150 155 160 Phe Thr Pro Lys Pro Val Leu Asp Ser Thr Ile Asp Tyr Phe Gln Pro 165 170 175 Asn Asn Lys Arg Asn Gln Leu Trp Leu Arg Leu Gln Thr Ser Arg Asn 180 185 190 Val Asp His Val Gly Leu Gly Thr Ala Phe Glu Asn Ser Lys Tyr Asp 195 200 205 Gln Asp Tyr Asn Ile Arg Val Thr Met Tyr Val Gln Phe Arg Glu Phe 210 215 220 Asn Leu Lys Asp Pro Pro Leu Lys Pro 225 230 <210> 6 <211> 233 <212> PRT <213> Porcine circovirus <400> 6 Met Thr Tyr Pro Arg Arg Arg Tyr Arg Arg Arg Arg His Arg Pro Arg 1 5 10 15 Ser His Leu Gly Gln Ile Leu Arg Arg Arg Pro Trp Leu Val His Pro 20 25 30 Arg His Arg Tyr Arg Trp Arg Arg Lys Asn Gly Ile Phe Asn Thr Arg 35 40 45 Leu Ser Arg Thr Phe Gly Tyr Thr Val Lys Ala Thr Thr Val Thr Thr 50 55 60 Pro Ser Trp Ala Val Asp Met Met Arg Phe Asn Ile Asp Asp Phe Val 65 70 75 80 Pro Pro Gly Gly Gly Thr Asn Lys Ile Ser Ile Pro Phe Glu Tyr Tyr 85 90 95 Arg Ile Arg Lys Val Lys Val Glu Phe Trp Pro Cys Ser Pro Ile Thr 100 105 110 Gln Gly Asp Arg Gly Val Gly Ser Thr Ala Val Ile Leu Asp Asp Asn 115 120 125 Phe Val Thr Lys Ala Thr Ala Leu Thr Tyr Asp Pro Tyr Val Asn Tyr 130 135 140 Ser Ser Arg His Thr Ile Pro Gln Pro Phe Ser Tyr His Ser Arg Tyr 145 150 155 160 Phe Thr Pro Lys Pro Val Leu Asp Ser Thr Ile Asp Tyr Phe Gln Pro 165 170 175 Asn Asn Lys Arg Asn Gln Leu Trp Leu Arg Leu Gln Thr Ser Arg Asn 180 185 190 Val Asp His Val Gly Leu Gly Thr Ala Phe Glu Asn Ser Lys Tyr Asp 195 200 205 Gln Asp Tyr Asn Ile Arg Val Thr Met Tyr Val Gln Phe Arg Glu Phe 210 215 220 Asn Leu Lys Asp Pro Pro Leu Glu Pro 225 230 <210> 7 <211> 756 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> This sequence is from porcine circovirus type 2, open reading frame 2, together with a portion from the pGEM T-easy vector. <400> 7 gcggccgcgg gaattcgatc cgccatgacg tatccaagga ggcgttaccg cagaagaaga 60 caccgccccc gcagccatct tggccagatc ctccgccgcc gcccctggct cgtccacccc 120 cgccaccgct accgttggag aaggaaaaat ggcatcttca acacccgcct ctcccgcacc 180 ttcggatata ctgtcaaggc taccacagtc acaacgccct cctgggcggt ggacatgatg 240 agatttaata ttgacgactt tgttcccccg ggagggggga ccaacaaaat ctctataccc 300 tttgaatact acagaataag aaaggttaag gttgaattct ggccctgctc ccccatcacc 360 cagggtgata ggggagtggg ctccactgct gttattctag atgataactt tgtaacaaag 420 gccacagccc taacctatga cccatatgta aactactcct cccgccatac aatcccccaa 480 cccttctcct accactcccg ttacttcaca cccaaacctg ttcttgactc cactattgat 540 tacttccaac caaataacaa aaggaatcag ctttggctga ggctacaaac ctctagaaat 600 gtggaccacg taggcctcgg cactgcgttc gaaaacagta aatacgacca ggactacaat 660 atccgtgtaa ccatgtatgt acaattcaga gaatttaatc ttaaagaccc cccacttgaa 720 ccctaagaat tctatcacta gtgaattcgc ggccgc 756 <210> 8 <211> 10387 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> This is the porcine circovirus type 2, ORF-2construct, which includes baculovirus and pGEM T-easy coding sequences. <400> 8 aagctttact cgtaaagcga gttgaaggat catatttagt tgcgtttatg agataagatt 60 gaaagcacgt gtaaaatgtt tcccgcgcgt tggcacaact atttacaatg cggccaagtt 120 ataaaagatt ctaatctgat atgttttaaa acacctttgc ggcccgagtt gtttgcgtac 180 gtgactagcg aagaagatgt gtggaccgca gaacagatag taaaacaaaa ccctagtatt 240 ggagcaataa tcgatttaac caacacgtct aaatattatg atggtgtgca ttttttgcgg 300 gcgggcctgt tatacaaaaa aattcaagta cctggccaga ctttgccgcc tgaaagcata 360 gttcaagaat ttattgacac ggtaaaagaa tttacagaaa agtgtcccgg catgttggtg 420 ggcgtgcact gcacacacgg tattaatcgc accggttaca tggtgtgcag atatttaatg 480 cacaccctgg gtattgcgcc gcaggaagcc atagatagat tcgaaaaagc cagaggtcac 540 aaaattgaaa gacaaaatta cgttcaagat ttattaattt aattaatatt atttgcattc 600 tttaacaaat actttatcct attttcaaat tgttgcgctt cttccagcga accaaaacta 660 tgcttcgctt gctccgttta gcttgtagcc gatcagtggc gttgttccaa tcgacggtag 720 gattaggccg gatattctcc accacaatgt tggcaacgtt gatgttacgt ttatgctttt 780 ggttttccac gtacgtcttt tggccggtaa tagccgtaaa cgtagtgccg tcgcgcgtca 840 cgcacaacac cggatgtttg cgcttgtccg cggggtattg aaccgcgcga tccgacaaat 900 ccaccacttt ggcaactaaa tcggtgacct gcgcgtcttt tttctgcatt atttcgtctt 960 tcttttgcat ggtttcctgg aagccggtgt acatgcggtt tagatcagtc atgacgcgcg 1020 tgacctgcaa atctttggcc tcgatctgct tgtccttgat ggcaacgatg cgttcaataa 1080 actcttgttt tttaacaagt tcctcggttt tttgcgccac caccgcttgc agcgcgtttg 1140 tgtgctcggt gaatgtcgca atcagcttag tcaccaactg tttgctctcc tcctcccgtt 1200 gtttgatcgc gggatcgtac ttgccggtgc agagcacttg aggaattact tcttctaaaa 1260 gccattcttg taattctatg gcgtaaggca atttggactt cataatcagc tgaatcacgc 1320 cggatttagt aatgagcact gtatgcggct gcaaatacag cgggtcgccc cttttcacga 1380 cgctgttaga ggtagggccc ccattttgga tggtctgctc aaataacgat ttgtatttat 1440 tgtctacatg aacacgtata gctttatcac aaactgtata ttttaaactg ttagcgacgt 1500 ccttggccac gaaccggacc tgttggtcgc gctctagcac gtaccgcagg ttgaacgtat 1560 cttctccaaa tttaaattct ccaattttaa cgcgagccat tttgatacac gtgtgtcgat 1620 tttgcaacaa ctattgtttt ttaacgcaaa ctaaacttat tgtggtaagc aataattaaa 1680 tatgggggaa catgcgccgc tacaacactc gtcgttatga acgcagacgg cgccggtctc 1740 ggcgcaagcg gctaaaacgt gttgcgcgtt caacgcggca aacatcgcaa aagccaatag 1800 tacagttttg atttgcatat taacggcgat tttttaaatt atcttattta ataaatagtt 1860 atgacgccta caactccccg cccgcgttga ctcgctgcac ctcgagcagt tcgttgacgc 1920 cttcctccgt gtggccgaac acgtcgagcg ggtggtcgat gaccagcggc gtgccgcacg 1980 cgacgcacaa gtatctgtac accgaatgat cgtcgggcga aggcacgtcg gcctccaagt 2040 ggcaatattg gcaaattcga aaatatatac agttgggttg tttgcgcata tctatcgtgg 2100 cgttgggcat gtacgtccga acgttgattt gcatgcaagc cgaaattaaa tcattgcgat 2160 tagtgcgatt aaaacgttgt acatcctcgc ttttaatcat gccgtcgatt aaatcgcgca 2220 atcgagtcaa gtgatcaaag tgtggaataa tgttttcttt gtattcccga gtcaagcgca 2280 gcgcgtattt taacaaacta gccatcttgt aagttagttt catttaatgc aactttatcc 2340 aataatatat tatgtatcgc acgtcaagaa ttaacaatgc gcccgttgtc gcatctcaac 2400 acgactatga tagagatcaa ataaagcgcg aattaaatag cttgcgacgc aacgtgcacg 2460 atctgtgcac gcgttccggc acgagctttg attgtaataa gtttttacga agcgatgaca 2520 tgacccccgt agtgacaacg atcacgccca aaagaactgc cgactacaaa attaccgagt 2580 atgtcggtga cgttaaaact attaagccat ccaatcgacc gttagtcgaa tcaggaccgc 2640 tggtgcgaga agccgcgaag tatggcgaat gcatcgtata acgtgtggag tccgctcatt 2700 agagcgtcat gtttagacaa gaaagctaca tatttaattg atcccgatga ttttattgat 2760 aaattgaccc taactccata cacggtattc tacaatggcg gggttttggt caaaatttcc 2820 ggactgcgat tgtacatgct gttaacggct ccgcccacta ttaatgaaat taaaaattcc 2880 aattttaaaa aacgcagcaa gagaaacatt tgtatgaaag aatgcgtaga aggaaagaaa 2940 aatgtcgtcg acatgctgaa caacaagatt aatatgcctc cgtgtataaa aaaaatattg 3000 aacgatttga aagaaaacaa tgtaccgcgc ggcggtatgt acaggaagag gtttatacta 3060 aactgttaca ttgcaaacgt ggtttcgtgt gccaagtgtg aaaaccgatg tttaatcaag 3120 gctctgacgc atttctacaa ccacgactcc aagtgtgtgg gtgaagtcat gcatctttta 3180 atcaaatccc aagatgtgta taaaccacca aactgccaaa aaatgaaaac tgtcgacaag 3240 ctctgtccgt ttgctggcaa ctgcaagggt ctcaatccta tttgtaatta ttgaataata 3300 aaacaattat aaatgctaaa tttgtttttt attaacgata caaaccaaac gcaacaagaa 3360 catttgtagt attatctata attgaaaacg cgtagttata atcgctgagg taatatttaa 3420 aatcattttc aaatgattca cagttaattt gcgacaatat aattttattt tcacataaac 3480 tagacgcctt gtcgtcttct tcttcgtatt ccttctcttt ttcatttttc tcctcataaa 3540 aattaacata gttattatcg tatccatata tgtatctatc gtatagagta aattttttgt 3600 tgtcataaat atatatgtct tttttaatgg ggtgtatagt accgctgcgc atagtttttc 3660 tgtaatttac aacagtgcta ttttctggta gttcttcgga gtgtgttgct ttaattatta 3720 aatttatata atcaatgaat ttgggatcgt cggttttgta caatatgttg ccggcatagt 3780 acgcagcttc ttctagttca attacaccat tttttagcag caccggatta acataacttt 3840 ccaaaatgtt gtacgaaccg ttaaacaaaa acagttcacc tcccttttct atactattgt 3900 ctgcgagcag ttgtttgttg ttaaaaataa cagccattgt aatgagacgc acaaactaat 3960 atcacaaact ggaaatgtct atcaatatat agttgctgat atcatggaga taattaaaat 4020 gataaccatc tcgcaaataa ataagtattt tactgttttc gtaacagttt tgtaataaaa 4080 aaacctataa atattccgga ttattcatac cgtcccacca tcgggcgcgg atcagatctg 4140 cagcggccgc gggaattcga tccgccatga cgtatccaag gaggcgttac cgcagaagaa 4200 gacaccgccc ccgcagccat cttggccaga tcctccgccg ccgcccctgg ctcgtccacc 4260 cccgccaccg ctaccgttgg agaaggaaaa atggcatctt caacacccgc ctctcccgca 4320 ccttcggata tactgtcaag gctaccacag tcacaacgcc ctcctgggcg gtggacatga 4380 tgagatttaa tattgacgac tttgttcccc cgggaggggg gaccaacaaa atctctatac 4440 cctttgaata ctacagaata agaaaggtta aggttgaatt ctggccctgc tcccccatca 4500 cccagggtga taggggagtg ggctccactg ctgttattct agatgataac tttgtaacaa 4560 aggccacagc cctaacctat gacccatatg taaactactc ctcccgccat acaatccccc 4620 aacccttctc ctaccactcc cgttacttca cacccaaacc tgttcttgac tccactattg 4680 attacttcca accaaataac aaaaggaatc agctttggct gaggctacaa acctctagaa 4740 atgtggacca cgtaggcctc ggcactgcgt tcgaaaacag taaatacgac caggactaca 4800 atatccgtgt aaccatgtat gtacaattca gagaatttaa tcttaaagac cccccacttg 4860 aaccctaaga attctatcac tagtgaattc gcggccgccg gccgctccag aattctagaa 4920 ggtacccggg atcctttcct gggacccggc aagaaccaaa aactcactct cttcaaggaa 4980 atccgtaatg ttaaacccga cacgatgaag cttgtcgttg gatggaaagg aaaagagttc 5040 tacagggaaa cttggacccg cttcatggaa gacagcttcc ccattgttaa cgaccaagaa 5100 gtgatggatg ttttccttgt tgtcaacatg cgtcccacta gacccaaccg ttgttacaaa 5160 ttcctggccc aacacgctct gcgttgcgac cccgactatg tacctcatga cgtgattagg 5220 atcgtcgagc cttcatgggt gggcagcaac aacgagtacc gcatcagcct ggctaagaag 5280 ggcggcggct gcccaataat gaaccttcac tctgagtaca ccaactcgtt cgaacagttc 5340 atcgatcgtg tcatctggga gaacttctac aagcccatcg tttacatcgg taccgactct 5400 gctgaagagg aggaaattct ccttgaagtt tccctggtgt tcaaagtaaa ggagtttgca 5460 ccagacgcac ctctgttcac tggtccggcg tattaaaaca cgatacattg ttattagtac 5520 atttattaag cgctagattc tgtgcgttgt tgatttacag acaattgttg tacgtatttt 5580 aataattcat taaatttata atctttaggg tggtatgtta gagcgaaaat caaatgattt 5640 tcagcgtctt tatatctgaa tttaaatatt aaatcctcaa tagatttgta aaataggttt 5700 cgattagttt caaacaaggg ttgtttttcc gaaccgatgg ctggactatc taatggattt 5760 tcgctcaacg ccacaaaact tgccaaatct tgtagcagca atctagcttt gtcgatattc 5820 gtttgtgttt tgttttgtaa taaaggttcg acgtcgttca aaatattatg cgcttttgta 5880 tttctttcat cactgtcgtt agtgtacaat tgactcgacg taaacacgtt aaataaagct 5940 tggacatatt taacatcggg cgtgttagct ttattaggcc gattatcgtc gtcgtcccaa 6000 ccctcgtcgt tagaagttgc ttccgaagac gattttgcca tagccacacg acgcctatta 6060 attgtgtcgg ctaacacgtc cgcgatcaaa tttgtagttg agctttttgg aattatttct 6120 gattgcgggc gtttttgggc gggtttcaat ctaactgtgc ccgattttaa ttcagacaac 6180 acgttagaaa gcgatggtgc aggcggtggt aacatttcag acggcaaatc tactaatggc 6240 ggcggtggtg gagctgatga taaatctacc atcggtggag gcgcaggcgg ggctggcggc 6300 ggaggcggag gcggaggtgg tggcggtgat gcagacggcg gtttaggctc aaatgtctct 6360 ttaggcaaca cagtcggcac ctcaactatt gtactggttt cgggcgccgt ttttggtttg 6420 accggtctga gacgagtgcg atttttttcg tttctaatag cttccaacaa ttgttgtctg 6480 tcgtctaaag gtgcagcggg ttgaggttcc gtcggcattg gtggagcggg cggcaattca 6540 gacatcgatg gtggtggtgg tggtggaggc gctggaatgt taggcacggg agaaggtggt 6600 ggcggcggtg ccgccggtat aatttgttct ggtttagttt gttcgcgcac gattgtgggc 6660 accggcgcag gcgccgctgg ctgcacaacg gaaggtcgtc tgcttcgagg cagcgcttgg 6720 ggtggtggca attcaatatt ataattggaa tacaaatcgt aaaaatctgc tataagcatt 6780 gtaatttcgc tatcgtttac cgtgccgata tttaacaacc gctcaatgta agcaattgta 6840 ttgtaaagag attgtctcaa gctcgccgca cgccgataac aagccttttc atttttacta 6900 cagcattgta gtggcgagac acttcgctgt cgtcgacgta catgtatgct ttgttgtcaa 6960 aaacgtcgtt ggcaagcttt aaaatattta aaagaacatc tctgttcagc accactgtgt 7020 tgtcgtaaat gttgtttttg ataatttgcg cttccgcagt atcgacacgt tcaaaaaatt 7080 gatgcgcatc aattttgttg ttcctattat tgaataaata agattgtaca gattcatatc 7140 tacgattcgt catggccacc acaaatgcta cgctgcaaac gctggtacaa ttttacgaaa 7200 actgcaaaaa cgtcaaaact cggtataaaa taatcaacgg gcgctttggc aaaatatcta 7260 ttttatcgca caagcccact agcaaattgt atttgcagaa aacaatttcg gcgcacaatt 7320 ttaacgctga cgaaataaaa gttcaccagt taatgagcga ccacccaaat tttataaaaa 7380 tctattttaa tcacggttcc atcaacaacc aagtgatcgt gatggactac attgactgtc 7440 ccgatttatt tgaaacacta caaattaaag gcgagctttc gtaccaactt gttagcaata 7500 ttattagaca gctgtgtgaa gcgctcaacg atttgcacaa gcacaatttc atacacaacg 7560 acataaaact cgaaaatgtc ttatatttcg aagcacttga tcgcgtgtat gtttgcgatt 7620 acggattgtg caaacacgaa aactcactta gcgtgcacga cggcacgttg gagtatttta 7680 gtccggaaaa aattcgacac acaactatgc acgtttcgtt tgactggtac gcggcgtgtt 7740 aacatacaag ttgctaacgt aatcatggtc atagctgttt cctgtgtgaa attgttatcc 7800 gctcacaatt ccacacaaca tacgagccgg aagcataaag tgtaaagcct ggggtgccta 7860 atgagtgagc taactcacat taattgcgtt gcgctcactg cccgctttcc agtcgggaaa 7920 cctgtcgtgc cagctgcatt aatgaatcgg ccaacgcgcg gggagaggcg gtttgcgtat 7980 tgggcgctct tccgcttcct cgctcactga ctcgctgcgc tcggtcgttc ggctgcggcg 8040 agcggtatca gctcactcaa aggcggtaat acggttatcc acagaatcag gggataacgc 8100 aggaaagaac atgtgagcaa aaggccagca aaaggccagg aaccgtaaaa aggccgcgtt 8160 gctggcgttt ttccataggc tccgcccccc tgacgagcat cacaaaaatc gacgctcaag 8220 tcagaggtgg cgaaacccga caggactata aagataccag gcgtttcccc ctggaagctc 8280 cctcgtgcgc tctcctgttc cgaccctgcc gcttaccgga tacctgtccg cctttctccc 8340 ttcgggaagc gtggcgcttt ctcatagctc acgctgtagg tatctcagtt cggtgtaggt 8400 cgttcgctcc aagctgggct gtgtgcacga accccccgtt cagcccgacc gctgcgcctt 8460 atccggtaac tatcgtcttg agtccaaccc ggtaagacac gacttatcgc cactggcagc 8520 agccactggt aacaggatta gcagagcgag gtatgtaggc ggtgctacag agttcttgaa 8580 gtggtggcct aactacggct acactagaag gacagtattt ggtatctgcg ctctgctgaa 8640 gccagttacc ttcggaaaaa gagttggtag ctcttgatcc ggcaaacaaa ccaccgctgg 8700 tagcggtggt ttttttgttt gcaagcagca gattacgcgc agaaaaaaag gatctcaaga 8760 agatcctttg atcttttcta cggggtctga cgctcagtgg aacgaaaact cacgttaagg 8820 gattttggtc atgagattat caaaaaggat cttcacctag atccttttaa attaaaaatg 8880 aagttttaaa tcaatctaaa gtatatatga gtaaacttgg tctgacagtt accaatgctt 8940 aatcagtgag gcacctatct cagcgatctg tctatttcgt tcatccatag ttgcctgact 9000 ccccgtcgtg tagataacta cgatacggga gggcttacca tctggcccca gtgctgcaat 9060 gataccgcga gacccacgct caccggctcc agatttatca gcaataaacc agccagccgg 9120 aagggccgag cgcagaagtg gtcctgcaac tttatccgcc tccatccagt ctattaattg 9180 ttgccgggaa gctagagtaa gtagttcgcc agttaatagt ttgcgcaacg ttgttgccat 9240 tgctacaggc atcgtggtgt cacgctcgtc gtttggtatg gcttcattca gctccggttc 9300 ccaacgatca aggcgagtta catgatcccc catgttgtgc aaaaaagcgg ttagctcctt 9360 cggtcctccg atcgttgtca gaagtaagtt ggccgcagtg ttatcactca tggttatggc 9420 agcactgcat aattctctta ctgtcatgcc atccgtaaga tgcttttctg tgactggtga 9480 gtactcaacc aagtcattct gagaatagtg tatgcggcga ccgagttgct cttgcccggc 9540 gtcaatacgg gataataccg cgccacatag cagaacttta aaagtgctca tcattggaaa 9600 acgttcttcg gggcgaaaac tctcaaggat cttaccgctg ttgagatcca gttcgatgta 9660 acccactcgt gcacccaact gatcttcagc atcttttact ttcaccagcg tttctgggtg 9720 agcaaaaaca ggaaggcaaa atgccgcaaa aaagggaata agggcgacac ggaaatgttg 9780 aatactcata ctcttccttt ttcaatatta ttgaagcatt tatcagggtt attgtctcat 9840 gagcggatac atatttgaat gtatttagaa aaataaacaa ataggggttc cgcgcacatt 9900 tccccgaaaa gtgccacctg acgtctaaga aaccattatt atcatgacat taacctataa 9960 aaataggcgt atcacgaggc cctttcgtct cgcgcgtttc ggtgatgacg gtgaaaacct 10020 ctgacacatg cagctcccgg agacggtcac agcttgtctg taagcggatg ccgggagcag 10080 acaagcccgt cagggcgcgt cagcgggtgt tggcgggtgt cggggctggc ttaactatgc 10140 ggcatcagag cagattgtac tgagagtgca ccatatgcgg tgtgaaatac cgcacagatg 10200 cgtaaggaga aaataccgca tcaggcgcca ttcgccattc aggctgcgca actgttggga 10260 agggcgatcg gtgcgggcct cttcgctatt acgccagctg gcgaaagggg gatgtgctgc 10320 aaggcgatta agttgggtaa cgccagggtt ttcccagtca cgacgttgta aaacgacggc 10380 cagtgcc 10387 <210> 9 <211> 20 <212> PRT <213> Porcine circovirus <400> 9 Ser Tyr Pro Arg Arg Arg Tyr Arg Arg Arg Arg His His Pro Pro Ser 1 5 10 15 His Leu Gly Gln 20 <210> 10 <211> 19 <212> PRT <213> Porcine circovirus <400> 10 Pro Arg His His Tyr Arg Pro Arg Arg Lys Asn Gly Ile Phe Asn Thr 1 5 10 15 Thr Leu Ser <210> 11 <211> 233 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> This is an amino acid sequence for porcine circovirus type 2, open reading frame 2. <400> 11 Met Thr Tyr Pro Arg Arg Arg Tyr Arg Arg Arg Arg His Arg Pro Arg 1 5 10 15 Ser His Leu Gly Gln Ile Leu Arg Arg Arg Pro Trp Leu Val His Pro 20 25 30 Arg His Arg Tyr Arg Trp Arg Arg Lys Asn Gly Ile Phe Asn Thr Arg 35 40 45 Leu Ser Arg Thr Phe Gly Tyr Thr Val Lys Ala Thr Thr Val Arg Thr 50 55 60 Pro Ser Trp Ala Val Asp Met Met Arg Phe Asn Ile Asp Asp Phe Val 65 70 75 80 Pro Pro Gly Gly Gly Thr Asn Lys Ile Ser Ile Pro Phe Glu Tyr Tyr 85 90 95 Arg Ile Lys Lys Val Lys Val Glu Phe Trp Pro Cys Ser Pro Ile Thr 100 105 110 Gln Gly Asp Arg Gly Val Gly Ser Thr Ala Val Ile Leu Asp Asp Asn 115 120 125 Phe Val Thr Lys Ala Thr Ala Leu Thr Tyr Asp Pro Tyr Val Asn Tyr 130 135 140 Ser Ser Arg His Thr Ile Pro Gln Pro Phe Ser Tyr His Ser Arg Tyr 145 150 155 160 Phe Thr Pro Lys Pro Val Leu Asp Ser Thr Ile Asp Tyr Phe Gln Pro 165 170 175 Asn Asn Lys Arg Asn Gln Leu Trp Leu Arg Leu Gln Thr Ser Arg Asn 180 185 190 Val Asp His Val Gly Leu Gly Thr Ala Phe Glu Asn Ser Ile Tyr Asp 195 200 205 Gln Asp Tyr Asn Ile Arg Val Thr Met Tyr Val Gln Phe Arg Glu Phe 210 215 220 Asn Leu Lys Asp Pro Pro Leu Lys Pro 225 230

Claims (16)

1. PCV (돼지 써코바이러스)-특이적 간접 면역형광분석법에서 측정된 1:1000 초과의 항-PCV2 항체 역가를 갖는 항-PCV2 (돼지 써코바이러스 2형) 모계 항체를 보유하는 사람을 제외한 동물에서의

   a) PCV2 감염의 치료 또는 예방; 또는

   b) PCV2 감염에 의해 유발되거나 PCV2 감염과 관련된 임상 증상의 감소를 위한 치료 또는 예방 방법으로서,

   상기 처치를 필요로 하는 사람을 제외한 동물에게 단지 단일 용량의 배큘로바이러스 발현된 재조합 PCV2 ORF-2 단백질 유효량을 1회 투여하는 것으로 이루어지는, 방법.
2. 삭제
3. 삭제
4. 삭제
5. 삭제
6. 제1항에 있어서, 상기 배큘로바이러스 발현된 재조합 PCV2 ORF-2 단백질이 7일령 이후에 투여되는, 방법.
7. 제1항에 있어서, 상기 배큘로바이러스 발현된 재조합 PCV2 ORF-2 단백질이 14일령 이후에 투여되는, 방법.
8. 제1항에 있어서, 상기 배큘로바이러스 발현된 재조합 PCV2 ORF-2 단백질이 7주령 이전에 투여되는, 방법.
9. 제1항에 있어서, 상기 치료 또는 예방으로 바이러스혈증기가 동일한 종의 비-치료 대조군 동물에 비해 5일 이상 단축되는, 방법.
10. 삭제
11. 제1항에 있어서, 상기 배큘로바이러스 발현된 재조합 PCV2 ORF-2 단백질이 인겔백 (Ingelvac®) 써코플렉스 (CircoFLEX™)에 포함된 PCV2 항원인, 방법.
12. 제1항에 있어서, 0.5 내지 18㎍/용량의 상기 배큘로바이러스 발현된 재조합 PCV2 ORF-2 단백질이 상기 처치를 필요로 하는 사람을 제외한 동물에게 투여되는, 방법.
13. 제1항에 있어서, 상기 PCV2 감염의 치료 또는 예방이, 동일한 종의 비-치료 대조군 동물에 비해, 체중 증가 저하의 감소, 바이러스혈증 지속기간의 단축, 바이러스혈증의 조기 종결, 낮은 바이러스 부하량 또는 이들의 조합으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 백신 효능 파라미터를 개선시키는, 방법.
14. 제1항에 있어서, 상기 사람을 제외한 동물이 돼지인, 방법.
15. 제1항에 있어서, 상기 사람을 제외한 동물이 1 내지 22일령인, 방법.
16. 삭제

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