KR100981443B1

KR100981443B1 - 염기성 선유 아세포 증식 인자 함유 치과용 점조 제제

Info

Publication number: KR100981443B1
Application number: KR1020047015407A
Authority: KR
Inventors: 후쿠나가카즈히로; 오가타유지; 후루카와아키히코; 콘노요시히로
Original assignee: 가켄 세야쿠 가부시키가이샤
Priority date: 2002-04-01
Filing date: 2003-04-01
Publication date: 2010-09-13
Also published as: EP1498135B1; KR20040093489A; EP1498135A1; AU2003221125A1; WO2003082321A1; JP4250087B2; CA2481214A1; ES2401575T3; US20050142076A1; EP1498135A4; JPWO2003082321A1

Abstract

본 발명은 염기성 선 유아세포 증식 인자(bFGF)를 유효 성분으로 하여 함유하고, 또한 증점제를 함유하는 치과용 점조 제제와, 이 치과용 점조 제제를 조제하기 위한 키트와, 상기 치과용 점조 제제를 조제하는 방법을 제공하는 것이다.

Description

염기성 선유 아세포 증식 인자 함유 치과용 점조 제제{DENTAL VISCOUS PHARMACEUTICAL CONTAINING BASIC FIBROBLAST GROWTH FACTOR}

본 발명은 치주병 등의 각종 치주 질환의 처치에 사용할 수 있는 염기성 선유(線維) 아세포 증식 인자 함유 치과용 점조(粘稠) 제제에 관한 것이다.

bFGF, 즉 염기성 선유 아세포 증식 인자는 선유 아세포의 증식을 현저하게 촉진하는 단백질로서 밝혀졌다. 그 후, 생체외에 있어서 선유 아세포의 증식을 촉진할 뿐만 아니라, 혈관 내피 세포, 혈관 평활근 세포, 상피 세포 등의 여러 가지 세포에 대하여도 그 증식이나 유주(游走), 분화에 대한 촉진 작용을 가지고 있는 것으로 밝혀졌다. 또한, 생체내에 있어서도, 강력한 혈관 생성 작용을 가지고 있는 것으로 밝혀졌다. bFGF는 이와 같은 약리 작용을 가지고 있는 것이므로, 난치성 피부 궤상의 치료제로서 개발이 진행되고 있고, 임상 연구에 있어서 우수한 치료 효과와 안전성이 확인되어, 현재 시판되고 있다. 또한, bFGF는 골조직에 대하여도 유용한 작용을 나타내고, 골절 치유를 촉진한다. 또한, 투여한 국소 부위에 있어서 골조직의 형성을 유발하는 새로운 유형의 골형성 촉진제로서, 골절을 비롯하여 골형성이 요구되는 여러 가지 골질환에 대한 임상 응용이 기대되고 있다. bFGF는 또한 치주 조직 결손 부위에 투여되면, 치조골 형성(골밀도, 치조골 면적, 골량 면적)을 촉진하고, 노출된 치근면에서의 시멘트질 형성 및 치근막 재생을 촉진함으로써, 치주 조직을 균형 있게 재생하는 것으로 밝혀졌다. 이로써, 치주병 치료의 최종 목적인 재생 치유, 신부착(新付着) 치유를 유도하는 데 유효한 것으로 인정되었다. 또한, 발치 후 및 낭포 또는 구강암 적출 후의 치주 조직 복원, 임플란트재의 정착 촉진, 우식에 의한 결손된 상아질의 재생 등, 각종 치주 질환의 처치에 유용한 것으로 생각되어 왔다. 그 중에서도 만성적인 조직 결손인 치주병에 대한 적용을 생각할 수 있다 (WO 95/05840).

한편, bFGF는 강력하고도 다양한 약리 작용을 가지는 것을 고려하면, bFGF의 작용을 필요로 하는 환부에만 직접 투여하는 것이 좋다. bFGF를 각각의 질환에 효율적으로 적용하려면, 각각 적합한 제제 설계가 필요하다. 실제로, 난치성 피부 궤상에는 분무 제제, 골질환에 대하여는 겔 제제와 같이 질환에 적합한 제제화가 이루어지고 있다. 그러나, 치주병 등의 각종 치주 질환에 직접적이고 효율적으로 적용할 수 있는 유용한 bFGF 제제는 지금까지 개발되지 못하였다.

한편, 일반적으로 치과용 제제의 제형으로서는 페이스트제, 물약, 연고제 및 겔제 등이 알려져 있다. 그러나, bFGF는 물리화학적으로 불안정하고, 또한 약효 용량이 저함량이어서, 그 제형이나 제조 조건에 제약을 받으며, 특히 페이스트제나 연고제의 개발은 곤란한 것으로 생각되어 왔다. 한편, bFGF를 함유하는 물약 및 겔제는 사용시 조제형의 제제로 하면, 개발 가능할 것으로 생각되어 왔다. 각종 치주 질환, 특히 치주병 치료에 있어서의 bFGF의 임상 응용에 있어서는 플랩(flap) 수술 시(잇몸을 벌려 치석 등을 제거하는 시술 방법)에 치조골 재생을 기대하여 잇몸 내 에 투여하는 것을 예상할 수 있다. 그러나, 물약으로는 윗턱부에 대하여 투여하는 경우, 액이 흘러내려 환부에서 제제가 충분한 시간 유지되지 않아 환부에 효율적으로 투여할 수 없을 것으로 우려된다. 이에, 그 결점을 보충하는 제제로서 젤리상의 겔 제제가 생각되었다. 겔 제제는 저함량의 약제를 정량적으로 다양한 형상으로 이루어지는 환부에 균일하게 도포하는 데에 있어서 바람직한 제형이라고는 할 수 없다. 특히, 겔 제제의 경우, 그 기제가 환부에 장기간 잔존하면 조직의 복원을 저해할 것이 예상되고, 또한 환자가 이물질로서의 불쾌감을 호소하는 것도 예상된다. 그 때문에, 그 기제는 투여 후 일정 시간 환부에 유지된 후에는 조속히 분해 또는 소실되는 고기능성의 것으로 할 필요가 있지만, 이와 같은 기제는 가격이 고가라는 결점이 있다.

따라서, bFGF를 치주병 등의 각종 치주 질환의 치료제로서 개발하려면, bFGF를 안정적으로 유지하고, 저함량의 bFGF를 작은 용적으로 이루어지는 환부에 액이 흘러내리는 것을 억제하면서, 다양한 형상으로 균일하게 도포할 수 있는 것이 좋다. 또한, 도포 후에는 조직의 복원을 저해하지 않는 정도로 저류(貯留)된 후에는 조속히 분해 또는 소실되고, 보다 효율적으로 도포할 수 있는 저렴한 재료로 이루어지는 치과용 제제의 개발이 요망되어 왔다.

본원 발명자들은 상기 과제를 해결하기 위하여 예의 연구한 결과, bFGF를 용액으로 한 경우에 일정한 점도를 유지할 수 있는 증점제와 배합하여 점조성 제제로 함으로써, bFGF를 안정적으로 유지하고, 저함량의 bFGF를 정량적 그리고 다양한 형상의 환부에 균일하게 도포할 수 있으며, 국소 저류성이 우수한 제제를 얻을 수 있 는 것을 발견하고, 본 발명을 완성하기에 이르렀다.

본 발명은 염기성 선유 아세포 증식 인자(bFGF)를 유효 성분으로서 함유하고, 또한 추가로 증점제를 함유하는 치과용 점조 제제에 관한 것이다.

본 발명의 치과용 점조 제제에 있어서는, 일정 점도의 증점제를 배합함으로써, 점조 제제의 적당한 점성과 국소 저류성이 확보되고, 이에 의하여 환부에 대한 bFGF 투여를 보다 확실한 것으로 할 수 있다.

본 발명은 또한 본 발명의 치과용 점조 제제를 조제하기 위한 키트로서, bFGF, 증점제, 필요한 경우 불활성이며 무독성인 첨가제 및 용해액을 포함하는 키트 및 본 발명의 치과용 점조 제제를 조제하는 방법으로서, bFGF, 증점제 및 필요한 경우 불활성이고 무독성인 첨가제를 용해액에 용해하는 것을 특징으로 하는 방법에 관한 것이기도 하다.

도1은 본 발명의 치과용 점조 제제 및 bFGF 수용액으로부터의 bFGF의 방출 곡선을 나타내는 도면이다.

도2는 본 발명의 치과용 점조 제제 및 bFGF 수용액을 쥐에게 근육내 투여 후의 조직 중 ¹²⁵I 라벨화 bFGF의 잔존율을 나타내는 도면이다.

도3은 본 발명의 치과용 점조 제제 및 bFGF 수용액을 토끼의 아래 턱뼈 결손 부위에 투여한 경우의 투여 직후에 대한 투여 6 시간 후의 ¹²⁵I 라벨화 bFGF의 잔존율(%)을 나타내는 도면이다.

발명을 실시하기 위한 최선의 상태

본 발명의 치과용 점조 제제는 bFGF를 유효 성분으로서 함유하고, 또한 추가로 증점제를 함유하는 치과용 점조 제제이다. 이 때, 점조 제제란 25℃에서 E형 점도계를 사용하여 측정한 경우에, 약 20 내지 25,000 mPaㆍs의 점도를 나타내는 제제를 의미한다. 본 발명의 치과용 점조 제제는 좋기로는 약 1,000 내지 20,000 mPaㆍs, 특히 좋기로는 약 3,OOO 내지 15,000 mPaㆍs의 점도를 가진다.

본 발명의 치과용 점조 제제에 함유되는 bFGF로서는 포유 동물 유래의 것을 들 수 있다. 포유 동물로서는 사람, 원숭이, 돼지, 소, 양, 말 등을 들 수 있다. 이들 포유 동물로부터는 공지의 방법에 의하여 bFGF를 얻을 수 있고, 또한 동물 유래의 bFGF, 예를 들면 소 bFGF는 여러 회사에 의하여 시약으로서 시판되어 왔다.

또한, 상기 bFGF로서는, DNA 조작 기술에 의하여 제조된 것을 사용할 수도 있다. DNA 조작 기술에 의하여 bFGF를 제조하려면, 예를 들면 특공표 63-500843호에 기재된 기술을 사용할 수 있다. 또한, DNA 조작 기술에 의하여 제조된 인간 bFGF는 시약으로서 판매되고 있는데, 일반명: 트라펠민(유전자 조작)을 양호하게 사용할 수 있다.

본원의 치과용 점조 제제의 bFGF 농도는 그 치주 질환에 대한 효과를 고려하면, 제제의 총중량에 대하여, 좋기로는 약 0.000l 내지 20 중량%, 보다 좋기로는 약 0.001 내지 10 중량%, 가장 좋기로는 약 O.0l 내지 1 중량%이다.

본 발명의 치과용 점조 제제에 함유되는 증점제로서는 용액으로 한 경우에, 상기 점도(약 20 내지 25,000 mPaㆍs)를 나타낼 수 있고, bFGF의 안정성에 악영향을 미치지 않으며, 또한 약학적으로 허용할 수 있는 증점제이면 임의의 것을 임의의 농도로 사용할 수 있다. 구체적으로는, 히드록시프로필셀룰로스, 알긴산나트륨, 알긴산프로필렌글리콜에스테르, 카르복시비닐폴리머, 카르멜로스나트륨, 히알루론산, 히알루론산나트륨, 히드록시에틸셀룰로스, 히드록시에틸메틸셀룰로스, 히드록시프로필메틸셀룰로스, 폴리아크릴산, 폴리아크릴산나트륨, 폴리아크릴산 부분 중화제, 폴리비닐알코올, 메틸셀룰로스, 크산탄 검, 콘드로이트산 및 콘드로이틴 황산나트륨 등을 사용할 수 있다. 그 중에서도, bFGF의 안정성에 대한 영향을 고려하면, 히드록시프로필셀룰로스(HPC), 히알루론산나트륨, 크산탄 검 및 콘드로이틴 황산나트륨을 양호하게 사용할 수 있지만, 특히 히드록시프로필셀룰로스를 양호하게 사용할 수 있다.

이러한 증점제 이외에도, 아라비아 고무, 아라비아 고무 분말, 구아 검, 글루코노-δ-락톤, 젤라틴, 덱스트란 7O, 덱스트린, 트라간트, 트라간트 분말, 포비돈, 물엿, 로진, 폴리옥시에틸렌 (160) 폴리옥시프로필렌 (30) 글리콜, 폴리옥시에틸렌 (200) 폴리옥시프로필렌글리콜 (70) 및 메틸 비닐에테르와 무수말레인산과의 공중합체 등의 증점제도 사용할 수 있다.

본 발명의 치과용 점조 제제에 있어서 증점제로서 특히 양호하게 사용할 수 있는 히드록시프로필셀룰로스는 셀룰로스의 히드록시프로필에테르 유도체이고, 건조한 것을 정량할 때, 히드록시프로필기 53.4 내지 77.5%를 포함하는 것(일본 약국방 제l4 개정 D)이 좋다. HPC는 물에 용해하면 점조성의 액이 되지만, 수용액으로 한 경우에 25℃에서 E형 점도계를 사용하여 측정한 경우에, 약 20 내지 25,O00 mPaㆍs의 점도를 나타내는 HPC이면, 임의의 분자량의 HPC를 상기 점도를 나타내는 농도로 사용할 수 있다. 그러나, 저농도로 높은 증점성을 나타내는 분자량 약 100,O00 내지 500,000의 것을 양호하게 사용할 수 있으며, 더욱 좋기로는 110,000 내지 400,000의 것을 사용할 수 있다. 예를 들면, 분자량 약 110,000 내지 150,000의 HPC를 사용하는 경우에는, 닛본 소다(주) 제품인 HPC-M을 제제 전체에 대하여, 좋기로는 약 2 내지 18 중량%의 비율로, 보다 좋기로는 약 3 내지 10 중량%의 비율로 사용할 수 있다. 또한, 분자량 약 250,000 내지 400,000의 HPC를 사용하는 경우에는, 닛본 소다(주)제의 HPC-H를, 제제 전체에 대하여, 좋기로는 약 l 내지 9 중량%의 비율로, 더 좋기로는 약 2 내지 6 중량%의 비율로 사용할 수 있다. 상기 점도를 달성할 수 있는 범위에서, 다른 분자량의 HPC를 적당량 혼합하여 사용할 수도 있다.

또한, 히알루론산나트륨, 크산탄 검 및 콘드로이틴황산나트륨을 증점제로서 사용하는 경우에도, 상기 점도를 달성할 수 있는 범위의 농도로 사용할 수 있다. 예를 들면, 히알루론산 나트륨을 사용하는 경우, 분자량 약 60만 내지 90만의 것이면, 약 1 중량%의 농도로 사용할 수 있다. 크산탄 검을 사용하는 경우, 분자량 약 200만의 것이면, 약 1 중량%의 농도로 사용할 수 있다. 기타의 증점제에 관하여도, 상기 점도를 달성할 수 있는 범위의 농도로 사용할 수 있다.

본 발명의 치과용 점조 제제에는, 필요에 따라 다시 당류, pH 조절제, 보존제, 킬레이트제, 유화제, 현탁화제, 안정제, 착색료 등의 약학적으로 허용할 수 있는 첨가제를 각종 함유시킬 수 있다. 당류로서는, 수크로스, 트레할로스 등을 들 수 있고, 특히 수크로스를 양호하게 사용할 수 있다. 또한, 본 발명의 치과용 점조 제제의 pH는 약 4.5 내지 8, 특히 4.5 내지 6.5로 유지하는 것이 좋고, 이 pH를 유지하기 위한 pH 조제제로서는, 구연산과 구연산나트륨 또는 질산과 질산나트륨으로 이루어지는 완충액을 들 수 있다. 방부제 및 킬레이트제로서는 각각 염화벤잘코늄 및 에데트산나트륨을 들 수 있다.

본 발명의 치과용 점조 제제는 bFGF에 상기 증점제를 배합하고, 용해액에 용해하여 소정의 점도를 가지는 용액으로 함으로써 조제할 수 있다. 제제 전체에 대한 bFGF의 비율은 전술한 바와 같이, 좋기로는 약 0.0001 내지 20 중량%, 더 좋기로는 약 0.001 내지 l0 중량%, 가장 좋기로는 약 0.01 내지 1 중량%이고, 이와 같은 비율이 되도록 bFGF를 배합한다. 또한, 용해액으로서는 물을 양호하게 사용할 수 있다. 제제 전체에 대한 증점제의 사용 비율은 사용하는 증점제의 종류에 따라 다르지만, 용액의 상태에서 약 20 내지 25,000 mPaㆍs의 점도를 나타내는 범위로 결정할 수 있다. 예를 들면, 증점제로서 분자량 약 1l0,000 내지 150,000의 HPC를 사용하는 경우, 약 2 내지 18 중량%의 비율, 좋기로는 약 3 내지 10 중량%의 비율이 되도록 증점제를 용해액에 용해한다. 또한, 분자량 약 250,000 내지 400,000의 HPC를 사용하는 경우이면, 약 1 내지 9 중량%의 비율, 좋기로는 약 2 내지 6 중량%의 비율이 되도록 증점제를 용해액에 용해한다.

본 발명의 치과용 점조 제제를 조제하려면, 예를 들면 분말상의 HPC에 bFGF의 수용액을 첨가하여 혼합함으로써 또는 HPC를 물에 용해함으로써 HPC 점조 수용액을 얻고, 이것에 bFGF의 수용액을 혼합하는 등의 방법을 사용하여 적당량을 필요에 따라 조제할 수 있다. 구체적인 조제 방법에 관하여는, 아래의 실시예에 각종 방법을 구체적으로 기재하겠지만, 이들에 한정되는 것은 아니며, 당업계의 기술 상식의 범위 내에서 적당하게 조제할 수 있다. 또한, 전술한 바와 같이 하여 조제한 본 발명의 치과용 점조 제제는 bFGF의 장기 안정성을 확보하기 위하여 그 제제를 동결 건조하고, 사용시에 물을 가하여 재조제하는 것도 가능하다. 또, bFGF는 동결 건조 상태로 보존하여 두고, 사용시에 HPC의 점조 수용액을 가하여 조제하여도 된다.

따라서, 본 발명은 또한 본 발명의 치과용 점조 제제를 조제하기 위한 키트로서, bFGF, 증점제, 필요할 경우 불활성이고 무독성인 첨가제 및 용해액을 포함하는 키트 및 본 발명의 치과용 점조 제제를 조제하는 방법으로서, bFGF, 증점제 및 필요할 경우 불활성이며 무독성인 첨가제를 용해액에 용해하는 것을 특징으로 하는 방법에도 관한 것이기도 하다.

또한, 본 발명의 치과용 점조 제제는 적용법에 따라서는 무균 상태일 필요가 있기 때문에, 조제하는 데 있어서 미리 bFGF 용액을 여과 살균하거나 HPC 분말을 방사선 멸균이나 건열 멸균하거나, 또는 HPC 점조액을 오토클레이브 멸균하는 등의 방법에 의하여 무균 상태를 확보할 수 있다.

상기 방법에 의하여 조제한 본 발명의 치과용 점조 제제는 연고제, 겔제, 페이스트제 및 물약 등으로 동일한 방법에 의하여 각종 치주 질환의 환부에 직접 투여할 수 있다. 예를 들면, l8G 정도의 두께의 주사침을 끼운 2 ml의 주사통에 점조 제제를 적당량 충전하여, 환부에 넓게 그리고 대량으로 투여하는 경우에는, 주사침은 l8G인 그대로 두고 투여한다. 또한, 치주 포켓과 같이 작은 틈새에 투여하는 경우에는 26G 정도의 주사침으로 교체하여 투여할 수도 있다. 간이형 주사 기구와 같은 키트 제품의 저장통 부분에 사전에 충전하여 두고 투여하는 것도 가능하다.

또한, 환부에 직접 또는 주걱 등으로 별도로 덜어 바르는 것도 가능하다. 그밖에도, 가압식 정량 펌프 등으로 필요량을 취하여 환부에 직접 또는 주걱 등으로 따로 덜어 바르는 것이 가능하다.

본 발명의 치과용 점조 제제를 투여하는 양은 적용하는 치주 질환의 종류, 중증의 정도, 나환 범위, 환자의 성별, 체중 등에 따라 적당하게 변경할 수 있지만, 일반적으로는, 사람인 경우, 1회 투여로 약 0.1 내지 3000 ㎍, 좋기로는 l 내지 1500 ㎍의 bFGF가 환부에 적용되는 양의 제제를 적용하는 것이 좋다.

본 발명의 치과용 점조 제제는 전술한 바와 같이 치주병을 비롯하여 발치 후 및 낭포 또는 구강암 적출 후의 치주 조직 복원, 임플란트재의 정착 촉진, 우식에 의하여 결손된 상아질의 재생 등 치주 질환의 치료 또는 예방을 목적으로 하여 적용할 수 있다. 예를 들면, 치주병의 경우는 직접 환부에 투여할 수 있지만, 플랩 수술에 있어서 치근면을 노출시키는 경우에는, 그 노출면에 본 발명의 치과용 점 조제제를 도포ㆍ주입한다. 투여 횟수는 치주 질환의 종류, 중증 정도 등에 따라 다르지만, 예를 들면 치주병에서의 플랩 수술에 있어서 사용할 때에는, 치근면 등의 환부에 투여한 후 환부를 봉합하기 때문에, 본 제제는 1회만 투여한다.

이하, 본 발명의 치과용 점조 제제에 대하여 더욱 상세하게 설명하나, 본 발명은 이들에 한정되는 것은 아니다. 또한, 이하의 실시예 및 시험예에서 사용하는 인간 bFGF로서는 트라페민(유전자 조작)을 사용하였다.

실시예 l

물 485 ml에 HPC [HPC-H(닛본 소다제), l5.0 g]를 서서히 첨가하고, 입자가 완전히 분산 용해될 때까지 교반을 계속하여, HPC 점조액을 얻었다. 앰플에 2 ml씩 나누어 따른 후 용융 밀봉하고, 오토클레이브 멸균하였다. 얻은 HPC 점조액의 점도는 10082.0 mPaㆍs이었다 (25℃에서 E형 점도계를 사용하여 측정하였다. 또한, 이후의 실시예 및 시험예에 있어서는 특별히 정하지 않는 한, 점도는 실시예 1과 같은 조건으로 측정하였다). 별도로, 각각 0.89 또는 2.67 mg/ml의 인간 bFGF를 함유하는 구연산염/수크로스 완충액(pH 5.1; 1.0 ml)을 여과 멸균하고, 바이알 중에서 동결 건조하였다. 이들 동결 건조품에, 상기 멸균한 HPC 점조액(1.0 ml)을 첨가하여 교반하고, 정치 탈포 (靜置脫泡)를 행하여, 본 발명의 치과용 점조 제제를 얻었다 [각각 제제예 1a (0.89 mg/ml), 제제예 1b (2.67 mg/ml)으로 한다].

실시예 2

물 87 m1에 HPC [HPC-H (닛본 소다제), 3.0 g] 및 수크로스 9.0 g을 서서히 첨가하고, 입자가 완전히 분산 용해될 때까지 교반을 계속하여 HPC 점조액을 얻었다. 이 HPC 점조액을 냉각, 교반하면서, 10.l mg/ml의 인간 bFGF를 함유하는 구연산염 완충액(pH 5.l; l.0 ml)을 서서히 첨가하고, 균일하게 될 때까지 교반하여, 본 발명의 치과용 점조 제제를 얻었다.

실시예 3

0.89, 2.67, 또는 8.00 mg/ml의 인간 bFGF를 함유하는 구연산염/수크로스 완충액 (pH 5.l, l.0 ml)을 여과 멸균하고, 바이알 중에서 동결 건조하였다. 이 동결 건조품에 주사용수 1 ml를 첨가하여 용해한 후, HPC [HPC-H(닛본 소다제), 30 mg]를 서서히 첨가하고 용해하여, 본 발명의 치과용 점조 제제를 얻었다.

실시예 4

0.89, 2.67, 또는 8.00 mg/ml의 인간 bFGF를 함유하는 구연산염/수크로스 완충액 (pH 5.1; 1.0 ml)을 여과 멸균하고, HPC [HPC-H(닛본 소다제), 30 mg]를 서서히 가하여 용해한 후, 바이알 중에서 동결 건조하였다. 이 동결 건조품에 물 (l ml)을 가하여, 본 발명의 치과용 점조 제제를 얻었다.

실시예 5

0.89, 2.67, 또는 8.00 mg/m1의 인간 bFGF를 함유하는 구연산염/수크로스 완충액 (pH 5.1; 1.0 ml)을 여과 멸균하고, 바이알 중에서 동결 건조하였다. 별도로, HPC [HPC-H(닛본 소다제), 30 mg]를 서서히 물(l ml)에 용해한 후, 바이알 중에서 동결 건조하였다. 이들 동결 건조품에 물(O.5 m1씩)을 첨가하여 용해하고, 양자를 혼합하여, 본 발명의 치과용 점조 제제를 얻었다.

실시예 6

0.89, 2.67, 또는 8.00 mg/ml의 인간 bFGF를 함유하는 구연산염/수크로스 완충액 (pH 5.1; 1.0 ml)을 여과 멸균하고, HPC [HPC-H(닛본 소다제), 30 mg]를 서서히 첨가하여 용해하여, 본 발명의 치과용 점조 제제를 얻었다.

실시예 7

HPC [HPC-H(닛본 소다제), 60 mg]에 물(l ml)을 가하여 용해하고, 이것을 여과 멸균한 5.34 mg/ml의 인간 bFGF를 함유하는 구연산염/수크로스 완충액 (pH 5.1; 1.0 ml)을 첨가하고 용해하여, 본 발명의 치과용 점조 제제를 얻었다.

실시예 8

HPC [HPC-H(닛본 소다제), 30 mg]를 서서히 물(l ml)에 용해한 후 바이알 중에서 동결 건조하였다. 이 동결 건조품에 여과 멸균한 0.89, 2.67, 또는 8.00 mg/m1의 인간 bFGF를 함유하는 구연산염/수크로스 완충액(pH 5.1; l.0 ml)을 첨가하고 용해하여, 본 발명의 치과용 점조 제제를 얻었다.

실시예 9

HPC [HPC-H(닛본 소다제), 60 mg]를 서서히 물(l ml)에 용해한 후, 바이알 중에서 동결 건조하였다. 이 동결 건조품에 물(l ml)을 첨가하여 용해하고, 여과 멸균한 0.89, 2.67, 또는 8.00 mg/ml의 인간 bFGF를 함유하는 구연산염/수크로스 완충액(pH 5.1; 1.0 ml)을 가하고 혼합하여, 본 발명의 치과용 점조 제제를 얻었다.

시험예 l

본 발명의 치과용 점조 제제 중의 bFGF의 안정성을 검토하였다.

실시예 1에서 얻은 제제(la,1b)를 25℃의 항온실에 보존하고, 경시적 (經時的)으로 HPLC법에 의하여 bFGF의 잔존율을 측정하였다. 그 결과를 표 1에 나타낸다.

시간 (hr)	bFGF 잔존율 (%)
시간 (hr)	제제 1a	제제 1b
8	98.7	98.6
24	98.1	99.6
42	99.1	98.9

표1에 나타나 있는 결과로부터, 본 발명의 치과용 점조 제제는 조제 42 시간 후에도, bFGF를 안정적으로 유지하고 있는 것이 확인되었다.

시험예 2

프란츠형 확산 셀을 사용하여, 실시예 l에서 얻은 제제(lb)의 약물 방출성을, 대조로서 bFGF의 수용액(bFGF 농도: 0.267 중량%)를 사용하고, 그 확산 셀의 리셉터상으로의 bFGF 방출율을 검토하였다. 셀룰로오스제의 막을 통과한 리셉터상의 bFGF의 분량을 경시적으로 HPLC법으로 정량하여, bFGF 방출율을 구하였다. 리셉터액에는 구연산염/수크로스 완충액을 사용하였다. 그 결과를 도 l에 도시하였다.

도 1에 나타나 있는 결과에 의하면, 본 발명의 치과용 점조 제제는, bFGF 수용액보다 장시간에 걸쳐 bFGF를 국소 부위에 저류 (貯留)시키는 경향을 나타내고, 장시간에 걸쳐 일정 속도로 bFGF를 방출하는 패턴을 나타내었다.

시험예 3

SD계 수컷 래트(7주)의 왼쪽 뒷다리의 비골 근방에, ¹²⁵I 라벨화 bFGF를 함유하는 본 발명의 치과용 점조 제제 (bFGF 농도: 0.97 mg/ml; HPC농도: 3%; 점도:10423 mPaㆍs) 또는 ¹²⁵I 라벨화 bFGF 수용액을 근육내 투여(50μl)하였다. bFGF 투여량은 래트 1 마리당 48.52 ㎍, 방사 라벨화 bFGF로서는 1 마리당 264.29 kBq이었다. 투여 15분 후, 30분 후 및 6 시간 후에 투여 부위에서의 ¹²⁵I 라벨화 bFGF를 측정하였다. 투여한 조직 중의 방사능 잔존율을 도 2에 나타내었다. 각 값은 3가지 예의 평균±표준 편차를 나타낸다.

도 2에 나타나 있는 결과에 의하면, 본 발명의 치과용 점조 제제를 근육내 투여하면, bFGF 수용액을 투여한 경우에 비하여, bFGF의 혈중에의 이행이 늦고, 본 발명의 점조 제제가 투여된 래트에서는, 투여 15분 후에도 방사 라벨화 bFGF의 90.6%가 투여 부위에 잔존하여 있고, bFGF 수용액을 투여하는 경우에 비하면, 본 발명 제제를 투여하는 것이 투여 부위에 있어서 bFGF 잔존율이 유의하게 높았다 (0.0l<p≤0.05, Student의 t 검정). 또한, 투여 6 시간 후까지 수용액보다도 본 발명의 제제가 투여 부위에서의 bFGF의 잔존율이 높았다.

시험예 4

비방사능 (比放射能) 약 25 kBq/㎍의 ¹²⁵I 라벨화 bFGF를 사용하고, 토끼의 우측 아래 턱뼈의 결손 부위에 아래의 표 2에 나타나 있는 조성의 본 발명의 치과용 점조 제제 또는 ¹²⁵I라벨화 bFGF 수용액 50 ㎕를 투여하고, 투여 6 시간 후의 ¹²⁵I 라벨화 bFGF의 잔존율을 측정하였다.

	¹²⁵I 라벨화 bFGF 농도	HPC 농도	점도 (mPaㆍs)	bFGF 투여량(㎍)
¹²⁵I 라벨화 bFGF 수용액	0.99 mg/ml	0	0	49.5
본 발명의 점조 제제 1	1.67 mg/ml	1%	53	83.5
본 발명의 점조 제제 2	1.71 mg/ml	2%	1126	85.5
본 발명의 점조 제제 3	1.05 mg/ml	3%	7898	52.5

구체적으로는, 토끼를 넴부탈 마취(50 mg/m1 용액을 약 3 m1 투여)하에, 엎드린 자세로 유지하여, 크실로카인에 의하여 국소 마취하고 (약 20 mg/m1 용액을 약 1 ml 투여), 송곳니로부터 어금니를 향하여 오른쪽 아래 턱뼈를 따라서 잇몸을 절개하고, 골막을 박리하여 우측 아래 턱뼈의 아래턱 체절 치부에 2개의 벽성(壁性) 결손을 만들었다(협설폭: 약 4 mm; 근원 심폭: 약 8 mm; 깊이: 약 4 mm). 지혈 후, 본 발명의 치과용 점조 제제 또는 ¹²⁵I 라벨화 bFGF 수용액 50 ㎕를 오른쪽 아래 턱뼈의 결손 부위에 투여하고, 30초간 정지하고 나서 절개한 잇몸을 결손 부위에 씌워 봉합하였다. 투여 6 시간 후에 전채혈 (全埰血) 후, 오른쪽 아래 턱뼈(결손 부위를 포함하는 오른쪽 송곳니로부터 앞어금니의 앞까지) 및 절개ㆍ봉합한 잇몸을 적출하고, γ카운터로 방사 활성을 측정하였다. 투여 직후에 대한 투여 6 시간 후의 ¹²⁵I 라벨화 bFGF의 잔존율(%)을 표 3에 나타냄과 동시에, 도 3에 나타낸다.

토끼의 아래 턱뼈 결손 부위에 있어서¹²⁵I 라벨화 bFGF의 잔존율(%)
¹²⁵I 라벨화 bFGF 수용액	본 발명의 점조 제제 1	본 발명의 점조 제제 2	본 발명의 점조 제제 3
27.2	50.7	54.0	73.0

상기 결과로부터, bFGF 수용액을 투여한 경우에 비하여, 본 발명의 점조 제제를 투여한 경우, 투여 6 시간 후에도, 투여 부위, 특히 오른쪽 잇몸에 bFGF가 고농도로 잔존하고 있는 것으로 인정되고, 이 잔존율은 본 발명의 점조 제제에 포함되는 HPC 농도가 높을수록 높았다. 이러한 결과부터, 본 발명의 점조 제제는 bFGF 수용액에 비하여, 투여 후에도 장시간에 걸쳐 투여 부위에 고농도로 bFGF를 잔존시키는 것으로 나타났다.

본 발명의 치과용 점조 제제는 염기성 선유 아세포 증식 인자(bFGF)를 유효 성분으로서 함유하고, 또한 증점제를 함유함으로써 일정의 점도를 가진다. 그 결과, 유효 성분의 bFGF가 물리화학적으로 안정적으로 유지되고, 치주병 등의 각종 치주 질환의 처치제로서 환부에 적용할 때에는, 질환 부위에 균일하게 도포할 수 있고, 환부에 대한 자극이나 이물질감이 적으며, 적용된 제제가 적용 부위로부터 흘러내리지 않고, 비교적 장시간 저류됨으로써 제제에 포함되는 bFGF가 안정적으로 환부로 방출되며, 그 결과 우수한 치료 효과가 얻게 된다. 또한, 본 발명의 제제는 유동성이 있어 질환부의 요철이나 틈새 등에도 대응하여 정확하게 투여하는 것이 가능하다.

Claims

염기성 선유 아세포 증식 인자(bFGF)를 유효 성분으로서 함유하고, 또한 증점제로서 히드록시프로필셀룰로스를 함유하는 치과용 점조 제제.
제1항에 있어서, 치주병의 처치용인 것인 치과용 점조 제제.
제1항에 있어서, 상기 bFGF의 함유량은 제제의 총중량에 대하여 0.000l 내지 20 중량%인 것인 치과용 점조 제제.
제1항 내지 제3항 중 어느 하나의 항에 기재된 치과용 점조 제제를 조제하기 위한 키트로서, bFGF 및 히드록시프로필셀룰로스를 포함하는 키트.
제4항에 있어서, 불활성이며 무독성인 첨가제 및 용해액을 더 포함하는 키트.
제l항 내지 제3항 중 어느 하나의 항에 기재된 치과용 점조 제제를 조제하는 방법으로서, bFGF 및 히드록시프로필셀룰로스를 용해액에 용해하는 것을 특징으로 하는 치과용 점조 제제를 조제하는 방법.
제6항에 있어서, 불활성이며 무독성인 첨가제를 용해액에 용해시키는 것을 더 포함하는 것인 치과용 점조 제제를 조제하는 방법.
제6항에 있어서, 상기 용해액은 물인 것인 치과용 점조 제제를 조제하는 방법.