KR100888889B1 - 비스파틴을 유효성분으로 함유하는 혈관신생 촉진제 - Google Patents

Abstract

본 발명은 비스파틴을 유효성분으로 함유하는 혈관신생 촉진제에 관한 것으로, 보다 구체적으로는, 비스파틴이 혈관신생을 유도하고, 혈관신생과 관련된 혈관내피세포의 이동, 침윤 및 세포의 관 형성을 활성화시켜 혈관신생을 촉진한다는 신규 용도에 관한 것이다.

본 발명에 따른 비스파틴을 함유하는 약학 조성물은 혈관신생을 유도하므로 만성궤양, 지연성 상처 치유, 허혈성 뇌졸중, 심근경색, 협심증 및 뇌혈관성 치매 등과 같은 혈관신생 질환의 치료에 유용하다.

비스파틴, 혈관신생

Description

비스파틴을 유효성분으로 함유하는 혈관신생 촉진제{Pharmaceutical Composition for Angiogenesis Stimulation Comprising Visfatin As an Active Ingredient}

본 발명은 비스파틴을 유효성분으로 함유하는 혈관신생 촉진제에 관한 것으로, 보다 구체적으로는, 비스파틴이 혈관신생을 유도하고, 혈관신생과 관련된 혈관내피세포의 이동, 침윤 및 세포의 관 형성을 활성화시켜 혈관신생을 촉진한다는 신규 용도에 관한 것이다.

혈관신생(angiogenesis)은 기존 혈관의 내피세포가 세포 외 기질을 분해하고, 이동, 분열 및 분화하여 새로운 모세혈관을 형성하는 현상으로, 상처 수복, 배아 발생, 종양 형성, 만성염증, 비만 등 여러 가지 생리적, 병리적 현상에 관여한다.

혈관신생 과정은 혈관내피세포의 증식 및 혈관벽으로부터 자극이 있는 방향의 주변조직으로 이동하는 과정을 거친다. 이어서 다양한 단백질 분해효소가 활성 화되어 혈관내피세포가 기저막을 침윤시키고 루프를 형성하며, 형성된 루프들이 분화되어 관 형성을 하게 된다. 이러한 혈관신생 과정은 여러 종류의 촉진인자 및 억제인자에 의해 엄격히 조절되는 것으로 알려져 있다.

최근 혈관신생을 유도 또는 억제하는 인자를 이용하여 암, 류마티스 관절염, 건선, 궤양, 허혈, 동맥경화증, 심근경색, 협십증, 뇌혈관성 질환 등 혈관신생에 의존하는 질병을 치료하고자 하는 시도가 활발히 이루어지고 있다 (Folkman J., J. Nat . Med., 1:27, 1995; Jackson J.R., et al ., FASEB J., 11:457, 1997; Risau W., Nature, 386:671, 1997; Bussolino, F., et al ., Trends Biochem . Sci., 22:251, 1997; Hanahan D., et al ., Cell, 86:353, 1996).

정상 성인의 경우, 혈관을 이루고 있는 내피세포의 교체 시간은 일반적으로 47일에서 20,000일로 다양하며, 매우 엄격한 조절을 받고 있다. 일반적으로 트롬보스폰딘-1(thrombospondin-1), 혈소판 인자-4(platelet factor-4), 엔지오스타틴(angiostatin) 등의 혈관신생 억제인자와, 혈관내피 성장인자(vascular endothelial growth factor), 섬유아세포 성장인자(basic fibroblast growth factor) 등과 같은 혈관신생 촉진인자가 평상시에는 양적 평형 상태를 유지하여 혈관신생이 일어나지 않지만, 상처나 암이 발생한 경우 상처난 조직의 재생 및 암의 성장을 위하여 혈관신생 억제인자와 촉진인자의 양적 평형상태가 깨어지고 새로운 혈관이 형성되는데, 이때 혈관신생 촉진인자의 과다 발현이 관여하게 된다.

과다한 혈관 형성은 질병 악화의 주원인이 되기도 하지만, 혈관의 미형성 또한 심각한 질병의 원인이 되고 있다. 혈관신생은 상처 치유나 조직 재생에 필수적 인 현상이라 할 수 있는데, 예를 들어 혈관 형성이 미발달된 태반은 유산의 중요한 원인이 되며, 혈관의 미형성으로 인한 괴사, 궤양 및 허혈의 경우 조직이나 기관의 기능 이상을 유발하거나, 사망의 원인이 될 수 있다. 또한, 동맥경화증, 심근경색 및 협심증과 같은 질병도 원활하지 못한 혈액 공급이 원인이 되고 있다. 따라서, 혈관의 미형성으로 인한 저산소 상태 또는 저영양 상태의 유발로 인한 조직 손상을 감소시키고, 원활한 조직 재생을 위해 새로운 혈관 형성을 유도하거나 촉진시키고자 하는 치료법 개발이 필요하다.

특히, 혈관신생은 상처받은 피부 조직이 재생되기 위한 필수적인 상처 회복 과정에 반드시 수반되어야 한다. 상처의 초기 단계에는 세포의 괴사와 혈관의 파괴로 인한 염증 반응이 일어나게 되고, 이 염증 반응 이후에 혈액 성분의 탈혈관 현상, 혈소판의 활성화 및 혈액 응고와 함께, 칼리크레인, 트롬빈 및 플라스민 등과 같은 생물학적 매개 물질이 형성되는 일련의 과정을 거치게 된다.

혈관신생을 이용한 생체 질환의 치료를 혈관신생 치료라 하고, 이미 혈관내피 성장인자와 같은 혈관신생 촉진인자는 중증의 국소 빈혈을 위한 치료제로 사용되고 있다. 또한 섬유아세포 성장인자, 표피 성장인자(epidermal growth factor) 및 혈소판 유도 내피 성장인자(platelet-derived epidermal growth factor) 등의 혈관신생 촉진인자들도 임상 치료를 위하여 연구되고 있다. 그러나, 상기 인자들은 단백질로서 분리·정제하기 어렵고, 고가이므로 임상 적용에 어려움이 있다.

지방조직은 혈관이 잘 발달된 조직이며, 지방덩어리의 성장에도 혈관신생과정이 요구된다. 비스파틴은 지방조직에서 분비되는 분비성 단백질로써, 인슐린과 유사한 기능을 갖는 것으로 보고되고 있고, 최근에는 비스파틴이 혈관 평활근 세포의 기능적 성숙에 관여하는 것으로 알려져 있다. 그러나, 비스파틴이 혈관내피세포의 혈관신생에 미치는 영향에 대해서는 알려져 있지 않았다.

이에 본 발명자들은 혈관신생 촉진제를 개발하고자 예의 노력한 결과, 비스파틴이 혈관신생을 유도하고, 혈관신생과 관련된 혈관내피세포의 이동, 침윤 및 관 형성을 활성화시켜 혈관신생을 촉진한다는 것을 확인하고 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명의 주된 목적은 비스파틴(visfatin)을 유효성분으로 함유하는 혈관신생 촉진제를 제공하는데 있다.

본 발명의 다른 목적은 비스파틴(visfatin)을 유효성분으로 함유하는 혈관신생 의존성 질환의 치료용 약학 조성물을 제공하는데 있다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 비스파틴(visfatin)을 유효성분으로 함유하는 혈관신생 촉진제를 제공한다.

본 발명은 또한, 비스파틴(visfatin)을 유효성분으로 함유하는 혈관신생 의존성 질환의 치료용 약학 조성물을 제공한다.

본 발명에 있어서, 상기 혈관신생 질환은 만성궤양, 지연성 상처치유, 허혈성 뇌졸중, 심근경색, 협심증 및 뇌혈관성 치매로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 할 수 있다.

본 발명은 비스파틴을 유효성분으로 함유하는 혈관신생 촉진제를 제공하는 효과가 있다.

본 발명에 따르면, 비스파틴을 처리하여 혈관신생을 유도할 수 있으므로 만 성궤양, 지연성 상처 치유, 허혈성 뇌졸중, 심근경색, 협심증 및 뇌혈관성 치매 등과 같은 혈관신생 질환의 치료에 이용할 수 있다.

본 발명의 일 양태는 비스파틴을 유효성분으로 함유하는 혈관신생 촉진제 및 비스파틴을 유효성분으로 함유하는 혈관신생 의존성 질환의 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 일 실시예에서는 비스파틴이 성인조직에서 유일하게 혈관신생이 끊임없이 활발히 일어나는, 지방조직에서 분비되는 단백질이라는 점에 착안하여, 비스파틴이 혈관신생을 유도할 수 있는지 확인하였다. 비스파틴의 혈관신생 활성을 조사하기 위하여, 인간 탯줄 정맥 내피세포(human umbilical vein endothelial cell, HUVEC)의 이동 및 침윤(invasion), 세포의 관 형성(tube formation)에 비스파틴이 미치는 영향을 측정하였다. 그 결과, 비스파틴이 HUVEC 세포의 이동 및 침윤을 증가시키고, HUVEC 세포의 관 형성을 촉진시킨다는 것을 알 수 있었다.

비스파틴의 혈관신생능을 알아보기 위하여 쥐의 대동맥 고리(rat aortic ring)를 이용한 스프라우팅 어세이(sprouting assay)를 실시한 결과, 비스파틴이 쥐의 대동맥 고리에서 스프라우팅 형성을 촉진시킨다는 것을 확인할 수 있었다. 또한, 융모 요막(chorioallantoic membrane, CAM) 및 마트리젤 플러그(matrigel plug)를 이용하여 생체 내(in vivo)에서의 혈관신생 여부를 확인한 결과, 비스파틴이 혈관신생을 촉진함을 알 수 있었다.

본 발명의 약학 조성물은 이미 사용되고 있는 항히스타민제, 소염진통제, 항암제 및 항생제 등의 약제와 함께 제제화하거나 병용하여 사용될 수 있다.

본 발명의 조성물의 약학적 투여 형태는 이들의 약학적 허용 가능한 염의 형태로도 사용될 수 있고, 또한 단독으로 또는 타 약학적 활성 화합물과 결합뿐만 아니라 적당한 집합으로 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 약학 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.

제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되 는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁 내 경막 또는 뇌혈관 내 주사에 의해 투여될 수 있다.

본 발명에 따른 조성물은 주사용 조성물과 혼합하여 포유동물의 혈관신생을 유도하고자 하는 부위에 주사 형태로 투여할 수 있고, 주사용 조성물은 등장성 수용액 또는 현탁액이 바람직하며, 상기 약학 조성물은 멸균되거나 방부제, 안정화제, 습윤제, 유화제 용액 촉진제, 삼투압 조절을 위한 염 및/또는 완충제와 같은 보조제 또는 기타 치료적으로 유용한 물질을 함유할 수 있다.

본 발명의 약학 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나, 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 조성물은 1일 0.5mg/kg 내지 10mg/kg으로 투여할 수 있으며, 반감기에 따라 일일 수회 내지 일주일에 1회 투여할 수 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.

실시예 1: 재조합 비스파틴의 제조

인간 비스파틴(visfatin) 유전자의 전체 cDNA(서열번호 1)를 서열번호 2 및 서열번호 3의 프라이머를 사용하여 PCR을 수행한 후, 상기 PCR 산물을 발현벡터인 pET 플라스미드에 클로닝한 다음, 상기 재조합 벡터를 대장균(E. coli)에 도입하여 형질전환체를 제조하였다. 상기 형질전환체를 배양하여 비스파틴 단백질을 수득하여 정제하였다.

서열번호 2: 5'-atgaatcctg cggcagaagc-3'

서열번호 3: 5'-atgatgtgctgcttccagttc-3'

실시예 2: 비스파틴의 세포 이동에 미치는 영향

인간 탯줄 정맥 내피세포(human umbilical vein endothelial cell, HUVEC, Clonetics사)를 성장배지(M199; 20% FBS, 100unit/㎖ 페니실린, 10㎍/㎖ 스트립토 마이신, 3ng/㎖ 섬유아세포 성장인자(basic fibroblast growth factor, bFGF), 5units/㎖ 헤파린)에서 37℃, 95%(v/v) CO₂, 5%(v/v) 공기의 조건으로 배양하였다. 상기에서 배양된 세포를 젤라틴으로 코팅한 60㎜ 플레이트에서 세포가 약 90% 채워질 때까지 배양한 후, 면도날을 수직으로 세워 중심선이 표시되게끔 해 준 뒤, 면도날을 가볍게 눕혀 아래로 약 5㎜ 정도 그어 내려 상처(wounding)를 주었다. 상기 세포를 혈청이 제거된 배지로 세척한 후, 배지에 1mM 티미딘(thymidine) 및 상기 실시예 1에서 수득한 비스파틴(visfatin, 10ng/㎖, 100ng/㎖)을 첨가하여 24시간 배양한 다음, 고정하고 Giemsa 염색하여 광학현미경 상으로 관찰·계수하였다 (도 1). 양성 대조군으로는 기존에 혈관신생 인자로 알려진 혈관내피 성장인자(vascular endothelial growth factor, VEGF)를 처리하였다. 그 결과, 비스파틴의 농도가 증가할수록 이동하는 세포 수가 증가한다는 것을 알 수 있었다.

실시예 3: 비스파틴의 세포 침윤에 미치는 영향

공극 크기(pore size)가 8㎛인 폴리카보네이트 필터가 있는 트랜스웰(transwell)의 삽입 챔버를 사용하여 비스파틴이 세포 침윤에 미치는 영향을 측정하였다.

챔버 필터의 아랫부분은 타입 IV 콜라겐(type IV collagen) 5㎍으로 코팅하고, 필터의 윗부분은 25㎍의 마트리젤로 코팅하였다. 메인 챔버에 배지 600㎕를 첨가하고, 삽입 챔버에는 HUVEC(2×10⁵ cells/well) 세포를 포함하는 배지 400㎕과 비 스타틴(100ng/㎖)을 넣은 후, 삽입 챔버를 메인 챔버에 집어넣어, 37℃ 배양기에서 16시간 동안 배양하였다. 상기 배양한 삽입 챔버의 폴리카보네이트 필터를 떼어내어 고정한 후, 헤마토실린-에오신(hematoxylin-eosin)으로 염색하여 마트리젤을 분해하고, 필터를 통과한 세포의 수를 광학현미경 상에서 계수하였다 (도 2). 그 결과, 비스파틴에 의해 필터를 통과한 HUVEC 세포 수가 증가한다는 것을 알 수 있었다.

실시예 3: 비스파틴의 관 형성에 미치는 영향

10㎎/㎖ 농도의 마트리젤 300㎕를 24 웰 플레이트에 떨어뜨려 젤화 되도록 37℃에서 30분간 방치하였다. 젤이 형성된 후 바닥이 보이지 않을 정도로 배양된 HUVEC 세포를 트립신 처리하여 수득한 후, 성장배지(M199)에 4×10⁵ cells/well이 되도록 분주하고, 비스파틴(100ng/㎖ 및 1000ng/㎖)이 첨가된 1㎖의 배지에서 배양한 다음, 세포가 젤 속을 파고 들어가 혈관과 유사한 모양을 형성하는지 광학현미경으로 관찰하였다 (도 3). 그 결과, 비스파틴을 넣어준 경우 HUVEC 세포의 관 형성이 촉진된다는 것을 알 수 있었다.

실시예 4: 쥐의 대동맥 고리 조직에서 비스파틴의 스프라우팅에 미치는 영향

6주된 Sprague Dawley 쥐로부터 획득한 대동맥 고리 조직을 마트리젤 110㎕로 코팅된 48 웰 플레이트에 분주하고, 다시 마트리젤 50㎕로 코팅한 다음, 각각 100ng/㎖ 비스파틴이 최종 부피가 200㎕가 되도록 첨가된 혈청 제거 배지를 각 웰에 넣어 주고, 5일 후에 각 고리로부터 뻗어 나온 스프라우팅(sprout) 정도를 광학이미지 기술로 촬영하였다 (도 4). 그 결과, 비스파틴에 의해 쥐의 대동맥 고리 조직에서 스프라우팅이 증가된다는 것을 확인할 수 있었다.

실시예 5: CAM 을 이용한 비스파틴의 혈관신생 촉진에 미치는 영향 측정

융모 요막(chorioallantoic membrane, CAM)을 이용하여 비스파틴이 생체(in vivo) 내에서 혈관신생을 유도하는지 확인하였다.

혈관 형성이 종료된 3일령 닭의 수정란의 계란 알부민 2㎖를 제거하여 난황을 껍질막과 분리하고, CAM이 관찰되도록 투명테이프로 밀봉하였다. 1일이 경과한 후, 음성 대조군, 0.1㎍/㎖의 PMA(양성 대조군) 및 여러 농도의 비스파틴을 놓고 건조시킨 커버 슬라이드를 CAM에 처리하였다. 8일 경과 후, 10% 지방 에멀젼(fat emulsion)을 CAM 막 안쪽에 주입하여 해부현미경(8배율)으로 혈관신생이 촉진되었는지 관찰하였다. 그 결과, 음성 대조군에 비하여 PMA 또는 비스파틴을 처리한 경우, 혈관신생이 현저히 촉진됨을 알 수 있었다 (도 5).

실시예 6: 마트리젤을 이용한 비스파틴의 혈관신생 촉진에 미치는 영향 측정

헤파린(40units/㎖)을 포함하는 마트리젤 500㎕와 비스파틴(10㎍/㎖)을 4℃에서 섞은 후, 6~7주된 생쥐(C57BL/6) 복부의 피부와 복강막 사이로 주사하였다. 양성 대조군으로는 혈관내피 성장인자(vascular endothelial growth factor, VEGF) 를 처리하였다. 5~7일 경과 후, 쥐의 피부를 벗겨내고 형성된 마트리젤 플러그(matrigel plug)를 생쥐에서 꺼내어, 헤모글로빈 분석법을 수행하여 전체적인 혈관 형성 정도를 측정하였다 (도 6). 그 결과, 음성 대조군에서는 새로운 혈관이 거의 형성되지 않았으나, VEGF 처리군 및 비스파틴 처리군에서는 새로이 혈관이 형성되었고, 농도 의존적으로 현저히 증가한다는 것을 확인할 수 있었다. 따라서, 비스파틴을 이용할 경우, 혈관신생을 효과적으로 유도할 수 있다는 것을 알 수 있었다.

이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

도 1은 비스파틴(visfatin)의 처리 농도에 따라 이동한 혈관내피세포를 나타낸 것이다.

도 2는 트랜스웰을 사용하여 혈관내피세포성장인자(VEGF) 및 비스파틴의 혈관내피세포의 전이촉진 효과를 나타낸 것이다.

도 3은 혈관내피세포를 마트리젤 위에서 배양하여 비스파틴을 처리한 경우 혈관 형성 여부를 확인한 것이다.

도 4a은 비스파틴에 의한 스프라우팅 정도의 변화를 관찰한 것이다 (A: 쥐의 대동맥 고리에서 비스파틴에 의한 스프라우팅 정도의 변화를 관찰한 사진; B: 쥐의 대동맥 고리에서 비스파틴의 혈관 스프라우팅 촉진 작용을 정량화한 그래프).

도 5는 비스파틴의 혈관신생 작용을 나타낸 것이다. (A: 계배 융모막에서 비스파틴의 혈관신생 작용을 나타내는 현미경사진; B: 계배 융모막에서 전체 CAM의 수에 대한 혈관신생을 나타내는 CAM의 수를 정량화한 그래프).

도 6은 마트리젤을 이용한 비스파틴의 혈관신생 촉진에 미치는 영향 측정한 것이다 (A: 생쥐를 이용한 마트리젤 플러그(matrigel plug) 실험방법에 따른 음성대조군, 양성대조군(VEGF) 및 비스파틴의 혈관형성작용을 나타낸 사진; B: 생쥐를 이용한 마트리젤 플러그 실험방법에 따라 음성대조군, 양성대조군(VEGF) 및 비스파틴에서 생성된 혈관을 헤모글로빈 분석법을 이용하여 정량분석한 그래프).

<110> Technology LicensingCenter Pusan University <120> PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR ANGIOGENESIS STIMULATION COMPRISING VISFATIN AS AN ACTIVE INGREDIENT <160> 3 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 1476 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1 atgaatcctg cggcagaagc cgagttcaac atcctcctgg ccaccgactc ctacaaggtt 60 actcactata aacaatatcc acccaacaca agcaaagttt attcctactt tgaatgccgt 120 gaaaagaaga cagaaaactc caaattaagg aaggtgaaat atgaggaaac agtattttat 180 gggttgcagt acattcttaa taagtactta aaaggtaaag tagtaaccaa agagaaaatc 240 caggaagcca aagatgtcta caaagaacat ttccaagatg atgtctttaa tgaaaaggga 300 tggaactaca ttcttgagaa gtatgatggg catcttccaa tagaaataaa agctgttcct 360 gagggctttg tcattcccag aggaaatgtt ctcttcacgg tggaaaacac agatccagag 420 tgttactggc ttacaaattg gattgagact attcttgttc agtcctggta tccaatcaca 480 gtggccacaa attctagaga gcagaagaaa atattggcca aatatttgtt agaaacttct 540 ggtaacttag atggtctgga atacaagtta catgattttg gctacagagg agtctcttcc 600 caagagactg ctggcatagg agcatctgct cacttggtta acttcaaagg aacagataca 660 gtagcaggac ttgctctaat taaaaaatat tatggaacga aagatcctgt tccaggctat 720 tctgttccag cagcagaaca cagtaccata acagcttggg ggaaagacca tgaaaaagat 780 gcttttgaac atattgtaac acagttttca tcagtgcctg tatctgtggt cagcgatagc 840 tatgacattt ataatgcgtg tgagaaaata tggggtgaag atctaagaca tttaatagta 900 tcgagaagta cacaggcacc actaataatc agacctgatt ctggaaaccc tcttgacact 960 gtgttaaagg ttttggagat tttaggtaag aagtttcctg ttactgagaa ctcaaagggt 1020 tacaagttgc tgccacctta tcttagagtt attcaagggg atggagtaga tattaatacc 1080 ttacaagaga ttgtagaagg catgaaacaa aaaatgtgga gtattgaaaa tattgccttc 1140 ggttctggtg gaggtttgct acagaagttg acaagagatc tcttgaattg ttccttcaag 1200 tgtagctatg ttgtaactaa tggccttggg attaacgtct tcaaggaccc agttgctgat 1260 cccaacaaaa ggtccaaaaa gggccgatta tctttacata ggacgccagc agggaatttt 1320 gttacactgg aggaaggaaa aggagacctt gaggaatatg gtcaggatct tctccatact 1380 gtcttcaaga atggcaaggt gacaaaaagc tattcatttg atgaaataag aaaaaatgca 1440 cagctgaata ttgaactgga agcagcacat cattag 1476 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 2 atgaatcctg cggcagaagc 20 <210> 3 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 3 atgatgtgct gcttccagtt c 21

Claims (3)

1. 비스파틴(visfatin)을 유효성분으로 함유하는 혈관신생 촉진제.
2. 비스파틴(visfatin)을 유효성분으로 함유하는 만성궤양, 지연성 상처치유, 허혈성 뇌졸중, 심근경색, 협심증 및 뇌혈관성 치매로 구성된 군에서 선택되는 혈관신생 의존성 질환의 치료용 약학 조성물.
3. 삭제

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