KR100479925B1

KR100479925B1 - 길항 미생물 바실러스속 비아이지21003과 그것을 함유한 펠릿 종자의 제조방법

Info

Publication number: KR100479925B1
Application number: KR10-2002-0025289A
Authority: KR
Inventors: 정종상; 김판경; 김용욱; 문선주; 박종철; 차광호; 오세찬; 조광국; 장희수; 윤태호
Original assignee: 주식회사 비아이지
Priority date: 2002-05-08
Filing date: 2002-05-08
Publication date: 2005-04-06
Also published as: KR20030087289A

Abstract

본 발명은 무사마귀병 방제에 우수한 길항효과를 나타내는 미생물 바실러스속 BIG21003과 그것을 함유한 펠릿 종자의 제조방법에 관한 것이다.

본 발명에 의해, 역병, 입고병, 시들음병 등 토양병원균과 특히 무사마귀병균에 우수한 길항효과를 나타내는 바실러스속 BIG21003이 제공된다.

또한, 발아율이 높고, 근권 정착 능력이 높으며, 토양병원균에 대한방제효과가 큰 바실러스속 BIG21003을 함유한 펠릿 종자가 제공된다.

본 발명에 의해, 농업 생산성을 높이고 환경오염을 방지하는 효과를 가져온다.

Description

길항 미생물 바실러스속 비아이지21003과 그것을 함유한 펠릿 종자의 제조방법{THE ANTAGONISTIC MICROORGANISM BACILLUS SP. BIG21003 AND THE PREPARATION METHOD OF PELLETED SEED INCLUDING THEREOF}

본 발명은 무사마귀병균에 우수한 길항효과를 나타내는 미생물 바실러스속 BIG21003과 그것을 함유한 펠릿 종자의 제조방법에 관한 것이다.

무사마귀병균(Plsamodiophora brassicae)은 십자화과 작물의 토양 전염병균의 하나이다. 이 병균에 감염된 식물체는 처음에는 정상적인 활력을 보이나 점차 지상부가 시들게 된다. 어린 식물체는 짧은 시간 내에 고사하며, 발병이 지연되어 생육이 지속된 식물체는 살아있기는 하나, 결구가 되지 않아 상품 가치가 크게 떨어진다.

무사마귀병균은 방제처리를 하여도 토양 내에서 10 년 이상 생존하므로 이 병원균이 오염된 토양에서 십자화과 작물의 재배는 가급적 피해야 하는 실정이다.

무사마귀병균은, 유럽, 북미, 아시아 등 십자화과 작물이 재배되고 있는 세계 각 지역에서 큰 피해를 입히고 있으며, 한국에서 무사마귀병균에 의한 배추무사마귀병은 1990년대 이후 경기도, 강원도, 전북 등 전국의 배추 재배 단지에서 발생하여 배추 재배농가에 막대한 피해를 초래하고 있다.

무사마귀병균의 방제법으로, 석회 시용을 통한 토양 pH의 조절이 알려져 있으나, 이 병균은 넓은 pH 스펙트럼에서 병을 일으키는 것으로 보고되어 토양의 pH 조절만으로는 방제에 한계가 있다.

또한, 무사마귀병균을 방제하기 위해 methyl bromide, chloropicrin, dazomet 등을 이용한 토양훈증 방법이 있으나, 이 경우 과도한 농약의 사용으로 인한 토양 생태계의 파괴 및 환경오염 등의 문제점이 있다.

또한, Fluazinam이나 Flusulfamide 분제의 토양처리는 방제 비용이 많이 들고, 유용한 미생물에게도 광범위한 살균 작용을 발휘함으로써 토양생태계 파괴에 의한 토질의 악화를 초래하는 문제점이 있었다.

토양병을 방제하기 위한 길항 미생물에 관한 것으로, 한국특허출원 10-1999-0043807(비티함유 미생물 살충제), 한국특허출원 10-1999-0002239(병해충에 길항작용을 갖는 미생물을 포함하는 농약조성물), 한국특허출원 10-2000-0041858(신규한 바실러스속 균주 및 이를 이용한 토양 미생물 제제), 한국특허출원 10-1999-0034872(식물병해 길항미생물 제제), 한국특허출원 10-1988-0001416(고추역병 방제용 길항미생물 및 이 길항미생물을 이용한 고추역병의 방제 방법)등이 있으나, 무사마귀병균에는 길항 효과가 미약한 점이 있다.

한편, 배추 종자 등을 펠렛팅 하면, 펠렛팅 하지 않은 종자에 비해 발아율과 발아세가 떨어지는 문제점이 있다.

본 발명은 무사마귀병균에 길항 효과가 높은 신규의 미생물 바실러스속 BIG21003을 제공하는데 있다.

또한, 본 발명의 바실러스속 BIG21003을 함유하면서도 발아율이 높고 발아세가 센 펠릿 종자를 제공하는데 그 목적이 있다.

본 발명에 의해, 역병, 입고병, 시들음병 등 토양병원균에 길항 효과를 나타내며, 특히 무사마귀병에 우수한 길항효과를 나타내는 바실러스속 BIG21003이 제공된다.

또한, 무사마귀병균에 우수한 길항효과를 나타내면서도 발아율이 높고 발아세가 센 펠릿 종자의 제조방법이 제공된다.

바실러스속 BIG21003을 배양하여 포자원제를 만들고, 탄산칼슘, 카올린, 계면활성제, 규조토, 점토로 만든 증량제에 포자원제를 혼합하여 증량원제를 만들고, 결합제인 아라빅껌 등을 물에 용해하여 제조한 슬러리액을 만든 다음, 펠렛팅 기계 내에 있는 종자에, 증량원제와 슬러리액을 반복 분무하여 구형의 펠릿종자를 만든 다음, 일정 크기로 선별하고 저온 건조하여, 본 발명의 바실러스속 BIG21003을 함유한 펠릿종자를 제조한다.

한편, 본 발명의 펠릿 종자 제조시, 길항 미생물로는 바실러스속 BIG21003은 물론, Agrobacterium sp., Bacillus sp., Pseudomonas sp., Stereptomyces sp., Burkholderia sp. 등의 세균류와 Gliocladium sp., Trichoderma sp. 및 비병원성 Fusarium 과 Pythium 등으로부터 유래한 길항미생물을 사용할 수 있다. 또한 길항 미생물을 1 종 또는 2 종 이상을 동시에 첨가하여 시너지 효과를 높일 수도 있다.

또한, 본 발명의 펠릿 종자 제조시, 종자로는 배추종자는 물론, 무, 당근, 양배추, 시금치, 상추, 양상추, 수박, 참외, 오이, 호박, 토마토, 고추, 양파, 파, 더덕, 잔디, 담배, 산채류, 화훼류, 수목 종자, 목초 종자 등을 사용할 수도 있다.

이하, 실시예와 실험예를 통하여 본 발명에 대하여 상세히 설명하나, 이들이 본 발명의 범위를 제한하는 것은 아니다.

<실시예 1> 토양으로부터 길항 미생물 바실러스속 BIG21003의 선발 과 동정

전국 20 개 지역의 논, 밭, 임야 의 토양 시료를 채취하였다.

배양 온도 30℃, pH 6.5에서 다양한 배지(Nutrient agar, Psedomonas 분리용 배지: EMB, 방선균분리용 배지)를 사용하여 항진균 활성을 보이는 세균 100 종을 1차 선발하였다.

1차 선발된 100 종 중에서 역병, 입고병, 시들음병에 특히 우수한 균주를 2 차에 걸쳐 선별하여 13종을 선발하였다.

선발된 13 종의 균주를 상토에 처리하고 배추를 파종한 후 무사마귀병균을 접종하여, 배추의 생장촉진 효과가 뛰어나고 무사마귀병 방제효과가 우수한 균주 1 종을 선발하고 BIG21003으로 명명하였다.

선발된 BIG21003 균주는 그람 염색 결과 G(+)균주로 판명되었고 탄소원이 고갈 되었을 때 내생포자를 형성하는 특징을 가지고 있으며 바실러스속으로 동정되었다.

바실러스속 BIG21003 의 생태적, 생화학적 특성은 아래 표 1 과 같다.

<표 1> 바실러스속 BIG21003 균주의 형태적, 생화학적 특성

형태적 특성	결 과
형태	단간균
그람염색	양성
포자형성유무	내성포자형성
운동성	있음
생화학적 특성
생육온도범위	6∼40
최적 생육 온도	30℃
생육pH범위	5.0∼8.0
최적생육 pH	6.5
산소요구성	호기성

<실험예 1> 토양전염성 병원균에 대한 바실러스속 BIG21003 의 항균활성 조사

바실러스속 BIG21003을 처리한 배지에, 대표적인 식물 병원균인 PG:Pyricularia grisea, PU:Pythium ultimum, RS:Rhizoctonia solani, BD:Botryosphaeria dothidea, BC:Botrytis cinerea, CG:Colletotrichum gloeosporioides, MM:Mycosphaerella melonis, PC:Phytophthora capsici, AS:Alternaria solani, FO:Fusarium oxysporum 를 접종하여 항균 활성을 조사하였다.

그 결과, 본 발명의 바실러스속 BIG21003은 10 종의 식물 병원균 중 PG 등 9 종에 대해 매우 우수한 항균 활성을 보였고, 나머지 1 종(PU)에 대해서도 우수한 항균 활성을 보였다.

<실험예 2> 고추역병균에 대한 바실러스속 BIG21003의 길항효과 대비 조사

무사마귀병과 유사한 생태를 가지며, 대표적인 토양병원균인 고추역병균(Phytophthora capsisi:PC)에 대해 본 발명의 바실러스속 BIG 21003의 길항효과를 대비 조사하였다.

대조균으로 농업과학기술원에서 개발하였으며, 토양전염성 병원균에 대해 넓은 스펙트럼을 가지는 AC-1 균주를 사용하였다.

바실러스속 BIG21003과 고추역병균 및 AC-1 균주를 PDA와 NA를 1 : 1로 섞은 배지에 접종하고 배양하여, 균사 성장억제 범위를 확인하고 그 결과를 도 1에 사진으로 나타냈다.

도 1 사진 A 는 바실러스속 BIG21003과 고추역병균 및 대조균 AC-1을 동시에 접종하고 배양하여 조사한 것이다.

본 발명의 바실러스속 BIG21003이 왕성하게 성장하여 고추역병균 쪽으로 퍼져 가는 것을 볼 수 있다.

도 1 사진 B 는 대조균 AC-1과 고추역병균을 동시에 접종하고 배양한 것이다. 대조균 AC-1이 고추역병균에 의해 길항력이 떨어지는 것을 볼 수 있다.

이와 같이 본 발명의 바실러스속 BIG21003은 대표적인 토양 병원균인 고추역병균에 대해서도 우수한 길항효과를 나타냈다.

본 발명의 바실러스속 BIG21003(Bacillus sp. BIG21003)을 2002. 4. 20 특허출원을 위한 국제미생물기탁기관인 유전자은행(KCTC)에 기탁번호 KCTC 10236BP 로 기탁하였다.

한편, 펠릿 종자는 일반적으로 펠렛팅을 하지 않은 종자에 비해 발아율이 떨어지는 경향이 있다.

펠릿 종자의 발아율은 증량제에 영향을 크게 받으므로, 본 발명자들은 증량제의 최적 성분과 조성비율을 알아내기 위해 아래 실험예 3 과 같이수 많은 실험을 반복하였다.

<실험예 3> 증량제의 성분과 조성비율에 따른 발아율 조사

펠릿종자 제조시, 증량제의 최적 조성 성분과 조성비율을 알아내기 위해 배추 종자의 발아율 조사 실험을 하였다.

종자시료는 동부한농에서 판매하고 있는 산촌배추를 사용하였다.

아래 표 2와 같이 증량제의 성분과 조성 비율을 달리하고, 나머지 조건과 방법은 다음에 설명하는 실시예 2와 동일하게 하여 배추의 펠릿종자를 제조하였다.

<표 2> 증량제 조성비 제조표

조성비(%)	탄산칼슘	질석	석회석	벤토나이트	목분	카올린	계면활성제	카보네이트	규조토	점토	탈크	황토	세라믹
1	30			20		20					30
2	30				10		10		30		20
3		30			10			30	10			20
4		30		20		20	10			20
5			10		10	50			10			20
6			10	20			10		10		50
7	30					40	10		10	10
8						40	10		10		20		20
9				20				30		20	20		10
10		30			20		20		20			10
11			20		20	40				20
12				20		20		30			20	20

제조된 각 배추 종자 펠릿에 대해 발아율을 조사하고 그 결과를 아래 표 3 에 나타냈다.

<표 3> 증량제의 조성에 따른 배추 펠릿종자의 발아율 조사결과

조성비	발아율(%) 2반복
조성비	무처리	펠릿종자
1	100	60
2	98	86
3	98	70
4	98	88
5	96	65
6	96	50
7	100	98
8	100	90
9	96	56
10	98	92
11	100	66
12	98	62

표 3에서와 같이, 2,4,7,8,10 번에서 좋은 발아율을 보였고, 가장 좋은 발아율은 7 번으로 나타났다.

또한, 강도와 분진 면에서는 1번과 6번이 가장 좋게 나타났으나, 발아율은 높지 않았고, 모양 만들기가 용이한 조건은 2번과 7번 조건인 것으로 나타났다.

이상과 같은 결과로 모양 만들기가 용이하고 좋은 발아율을 나타내는 조건인 7 번 조성비가 가장 우수한 것으로 나타났다.

본 발명의 바실러스속 BIG21003을 함유한 펠릿종자의 제조 공정은 다음과 같다.

<제 1 공정> 바실러스속 BIG21003 포자원제의 제조

온도 30 ℃, pH 6.5로 하고 발효조 내 용존산소를 20 % 이상 유지하도록 조절하면서 바실러스속 BIG21003을 배양한다.

GYS 배지를 사용하여 배양하며, 배지 조성은 아래와 같다.

Glucose 0.15%, Yeast extract 0.2 %, K₂HPO₄ 0.05 %, (NH₄)₂SO ₄ 0.2 %, MgSO₄ 0.002 %, MnSO₄·4H₂O 0.005 %, CaCl₂ 0.008 %

배양 시작 5 ∼6 시간이 경과하면 배지 중의 탄소원인 Glucose가 소진되면서 포자를 형성하기 시작하여 발효 30 시간 경과하면 모든 균주는 포자로 전환된다(도 2 참조).

배양 30 시간 후 배양액을 원심분리하여 상층액을 제거 하고, 보존제인 Sucrose 1 %, CaCl₂0.2 % 첨가한 다음, in let temp. 110℃, out let temp.는 95℃로 분무건조하여 포자원제를 생산한다.

<제 2 공정> 증량원제의 제조

탄산칼슘 30 중량 %, 카올린 40 중량 %, 계면활성제 10 중량 %, 규조토 10 중량 %, 점토 10 중량 %를 혼합하여 증량제를 제조한다.

제조된 증량제에 제1공정에서 제조한 포자원제(10¹¹ cfu/g 이상)를 0.1 ~ 10.0 중량 %를, 바람직하게는 1.0 ~ 3.0 중량 % 를 혼합하여 증량원제를 제조한다.

한편, 증량제 제조시, 탈크, 칼슘 카보네이트, 석회석, 소석회, 목분, 질석, 벤토나이트, 점토, 운모, 티타늄 옥사이드, 탄산칼슘, 지올라이트, peat, clay류를 혼합하여 사용할 수도 있다.

또한, 증량제 제조시, 기능성 물질인 성장조절제, 생장촉진제, 조류기피제 등을 첨가하여 제조할 수도 있다.

이때 첨가되는 성장조절제로는, IAA, NAA, 카이네틴, 사이토키닌, 지베렐린, 에틸렌, 아브시스산. 에테폰, 아세트아미드, 말레산, 하이드라자이드, 디미노자이드 등을 첨가할 수 있다.

생장촉진제로는, 탄수화물, 필수 아미노산, 비타민류, 키틴, 키토산, 스테로이트 사포닌, 면역증진제 등이 사용될 수 있다.

작물에 따라 생리적 특성에 차이가 있으므로, 작물별로 증량제의 성분과 배합비를 선택적으로 적용한다.

<제3공정> 결합제용 슬러리액의 제조

결합제용 슬러리액 제조에는 메틸 셀룰로오스, 에틸 셀룰로오스, 덱스트란, 아라빅껌, 잔탄껌, 파라핀 오일, 젤라틴, 스타치, 폴리비닐알콜, 폴리에틸린 글리콜, 카복시메틸 셀룰로오스 등에서 선택된 1 종 이상을 사용하며, 기타 중합체와 공중합체도 사용할 수 있다.

결합제로 사용되는 아라빅껌 등을 물에 용해하여 3 % 의 슬러리액을 제조한다.

<제4공정> 종자의 펠렛팅

펠렛팅 기계 내부에 종자를 넣고, 증량원제를 분무한 다음, 슬러리액을 반복 분무하여 구형의 펠릿을 형성한다.

일정 크기로 선별한다.

저온건조하여 본 발명의 종자펠릿을 제조한다.

< 실시예 2 > 바실러스속 BIG21003을 함유한 배추 펠릿종자의 제조

1. 온도 30 ℃, pH 6.5로 하고 발효조 내 용존산소를 20 % 이상 유지하도록 조절하면서 GYS배지를 사용하여 바실러스속 BIG21003을 배양하였다.

배양 30 시간 후 배양액을 원심분리하여 상층액을 제거 하였다.

보존제로 Sucrose 1 %, CaCl₂0.2 % 첨가하였다.

in let temp. 110℃, out let temp. 95℃로 분무건조하여 포자원제를 생산하였다.

포자원제는 10¹¹ cfu/g 이상이었다.

2. 탄산칼슘 3 kg, 카올린 4 kg, 계면활성제 1 kg, 규조토 1 kg, 점토 1 kg을 혼합하여 증량제 10 kg을 제조하였다.

제조된 증량제 10 kg에 포자원제 0.03 kg을 혼합하여 증량원제를 제조하였다.

3. 아라빅껌을 물에 용해하여 3 % 의 슬러리액을 제조하고 5 ℓ를 준비하였다.

4. 펠렛팅 기계 내부에 배추종자 1 ℓ(200,000 립)를 넣었다.

증량원제를 분무한 다음, 슬러리액을 분무하는 과정을 반복하여 구형의 펠릿을 형성하였다.

직경 3.5 mm 의 펠릿 190,000 개를 선별하였다.

저온건조하여 본 발명의 바실러스속 BIG21003을 함유한 배추 종자펠릿을 제조하였다.

<실험예 4> 바실러스속 BIG21003의 근권 정착능력 조사

실시예 2에서 제조한 본 발명의 바실러스속 BIG21003을 함유한 배추 펠릿 종자의 바실러스속 BIG21003의 근권 정착능력을 조사하였다.

(1) 직경 10 cm 페트리디쉬에 거름종이 2 장을 깔고, 흥농바이오상토 추출액 4 ml을 뿌렸다.

거름종이 가장자리에 실시예 2에서 제조한 본 발명의 바실러스속 BIG 21003을 함유한 배추 펠릿 종자(5.6 x 10⁵ cfu/seed)를 5 개를 올려 놓았다.

암상태의 28 ℃ 배양기에서 5 일간 배양하였다.

(2) 16 구 연결포트에 흥농바이오상토를 3/4 정도 담았다.

실시예 2에서 제조한 바실러스속 BIG21003을 함유한 배추 펠릿 종자(2.8 x 10⁴ cfu/seed)를 2 립 파종하였다.

7 일간 25 ℃ (16 시간 light, 8 시간 dark)에서 육묘 하면서, 파종 3 일 후 1 주만 남겨두고 솎아내기 하였다.

상기 (1) In vivo 와, (2) in vitro에서 육묘한 배추 뿌리를 각각 6 개 부위로 자른 후 6 주의 같은 부위를 함께 모아 10 ml 멸균 수에서 30 분 동안 진탕한 후 100 ml씩 뉴트리언트 아가 배지(nutrient agar medium)상에 스프레딩(spreading)하여 콜로니(colony)수를 조사하였다.

조사결과를 아래 표 4에 나타냈다.

<표 4> 바실러스속 BIG21003의 근권 정착능력 조사결과

뿌리부위	In vitro(파종 5일후)		In vivo(파종 7일후)
뿌리부위	cfu/root	root weight(mg)	cfu/root	root weight(mg)
1	2.0*10⁴	0.40	2.7*10³	3.9
2	5.9*10³	0.30	1.0*10³	1.9
3	4.3*10³	0.23	4.2*10²	1.3
4	6.8*10³	0.20	8.3*10²	0.9
5	1.0*10⁴	0.19	2.9*10²	1.0
6	3.4*10⁴	0.14	2.5*10³	0.4

일반적으로 근권 정착 능력이 우수한 토양미생물은 식물체의 지제부와 뿌리의 근단 부위에서 균의 밀도가 높고 중간 부위에는 밀도가 낮은 경향이 있다.

표 4 에서 보는 바와 같이 바실러스속 BIG21003 또한 뿌리 지제부와 근단에서 균의 밀도가 높아지는 경향을 보이므로 근권 정착 능력이 우수한 것으로 판단된다.

<실험예 5> 바실러스속 BIG21003 배추 펠릿종자의 포장실험

실시예 2와 같이 제조하되, 배추의 품종을 달리하여 제조된 바실러스속 BIG21003을 함유한 펠릿종자에 대해 포장실험을 하였다.

강원도 평창과 경기도 양성에서 실시하였다.

강원도 평창 시험은 동부한농종묘의 산촌배추를 사용하였다.

상업용 육묘상토인 흥농바이오상토를 사용하여 파종하여 20 일 육묘 후에 정식하였다.

총 시험면적은 150 평이었으며, 재배 방법은 농가 관행에 따랐다.

정식 후 4 주 째에 발병조사를 하였다.

경기도 양성 시험은 동부한농종묘의 흑진주배추를 사용하였다.

총 시험면적은 50 평이었으며, 재배 방법은 농가 관행에 따랐다.

정식 후 4 주 째에 발병조사를 하였다.

평창, 양성 의 시험 결과를 아래 표 5에 나타냈다.

<표 5> 배추 펠릿종자의 발병 시험 결과

구분	발병도(%)		방제가(%)
구분	무처리	처리구	방제가(%)
평창	83.3	19.4	77
양성	82	18	78

평창, 양성 시험포 모두에서 본 발명의 바실러스속 BIG21003을 함유한 펠릿 종자는 배추무사마귀병에 대해 높은 방제 효과를 나타냈다.

본 발명에 의해 무사마귀병균 등 토양병원균에 우수한 길항효과를 나타내는 미생물 바실러스속 BIG21003이 제공된다.

또한, 발아율이 높고, 근권 정착 능력이 높으며, 토양병원균에 대한 방제효과가 큰 바실러스속 BIG21003을 함유한 펠릿 종자가 제공된다.

도 1 은 고추역병균에 대한 AC-1 균주와 본 발명의 바실러스속 BIG21003의 길항 효과를 대비하여 나타낸 사진

도 2 는 바실러스속 BIG21003의 배양시 Glucose 농도에 따른 포자 생성을 나타낸 그래프.

Claims

토양병원균에 대한 길항 미생물 바실러스속 BIG21003 (Bacillus sp. BIG21003)(기탁번호 KCTC 10236BP).
제 1 항의 길항 미생물 바실러스속 BIG21003을 함유한 펠릿종자.
제1항의 길항 미생물 바실러스속 BIG21003을 배양하여 포자원제를 만들고, 탄산칼슘, 카올린, 계면활성제, 규조토, 점토로 제조된 증량제에 포자원제를 혼합하여 증량원제를 만들고, 결합제인 메틸 셀룰로오스, 에틸 셀룰로오스, 덱스트란, 아라빅껌, 잔탄껌, 파라핀 오일, 젤라틴, 스타치, 폴리비닐알콜, 폴리에틸렌글리콜, 카복시메틸 셀룰로오스에서 선택된 1 종 이상을 물에 용해하여 슬러리액을 만든 다음, 펠렛팅 기계 내에 있는 종자에, 증량원제와 슬러리액을 반복 분무하여 구형의 펠릿종자를 만든 다음, 일정 크기로 선별하고, 저온 건조하는 것으로 구성된, 길항 미생물을 함유한 펠릿종자의 제조방법.
삭제
제 3 항에 있어서, 종자는 무, 당근, 배추, 양배추, 시금치, 상추, 양상추, 수박, 참외, 오이, 호박, 토마토, 고추, 양파, 파, 더덕, 잔디, 담배, 산채류, 화훼류, 수목 종자, 목초 종자 에서 선택된 1 종인 것이 특징인 길항 미생물을 함유한 펠릿종자의 제조방법.
바실러스속 BIG21003을 배양하여 포자원제를 만들고, 탄산칼슘, 카올린, 계면활성제, 규조토, 점토로 제조된 증량제에 포자원제를 혼합하여 증량원제를 만들고, 결합제인 아라빅껌을 물에 용해하여 슬러리액을 만든 다음, 펠렛팅 기계 내에 있는 종자에, 증량원제와 슬러리액을 반복 분무하여 구형의 펠릿종자를 만든 다음, 일정 크기로 선별하고 저온 건조하는 것으로 구성된, 바실러스속 BIG21003을 함유한 펠릿종자의 제조방법.
제 3 항 내지 제 6 항에 있어서,

증량제는 탄산칼슘 30 중량 %, 카올린 40 중량 %, 계면활성제 10 중량 %, 규조토 10 중량 %, 점토 10 중량 %를 혼합하여 제조된 것이 특징인, 펠릿종자의 제조방법.