JPS6254307B2

JPS6254307B2 -

Info

Publication number: JPS6254307B2
Application number: JP54098770A
Authority: JP
Inventors: Hyuu Deibisu Deibitsudo; Raitofutsuto Furoido Norisu Jofurii
Original assignee: Imperial Chemical Industries Ltd
Current assignee: Imperial Chemical Industries Ltd
Priority date: 1978-08-03
Filing date: 1979-08-03
Publication date: 1987-11-13
Also published as: BG40659A3; NO792537L; DE2954593C2; SU1212328A3; MY8500754A; AT367450B; HK26185A; RO79259A; IL57919A; SE447910B; AU530316B2; ZW13679A1; BE878042A; YU42489B; ZA793772B; SE7906553L; FI66184B; CA1142107A; SG54784G; KE3433A

Description

【発明の詳細な説明】

本発明はストレプトマイセス・ロンジスポロフ
ラブス（Streptomyces longisporoflavus）の好
気性培養から得ることのできる、明らかに分子式
C₃₅H₅₃O₈Na構造式の新規化合物である代射生成物M.139603に関す
る。M.139603はナトリウム塩であり、本発明は
相応する“遊離酸”及びこれから誘導されること
のできる他のアルカリ金属塩にも関する。これら
化合物は反芻発酵におけるメタン生産の比を減少
させ、牛類動物の瘤胃液中のプロピオン酸の比を
増大させる効果を有し、それゆえに反芻動物の生
長促進特性を有すると思われており、瘤胃液中の
プロピオン酸の量を増加させる他の化合物は、牛
又は羊に与える時、結果的に生長速度を増加する
ことは良く知られている。本発明の新規化合物は
グラム陽性微生物に対し抗菌活性を有し、鶏球虫
（Eimeria tenella）に対しては抗球虫類活性を試
験管内試験において有する。本発明によれば、次の特徴： (a) 分子式C₃₅H₅₃O₈Na：質量624.361
（C₃₅H₅₃O₈Naの計算値＝624.364）の分子イオ
ン、M⁺を示す質量分析及び元素分析、Ｃ＝
67.5％、Ｈ＝8.8％（C₃₅H₅₃O₈・Naの計算値：
Ｃ＝67.3、Ｈ＝8.5％）； (b) ヌジヨール中での赤外線吸収スペクトルは第
１図に示すように3300，1725，1645，1565及び
915cm^-1に特徴的な吸収を有する； (c) ジユーテロクロロホルム中でのプロトン核磁
気共鳴スペクトルは第２図のようであり； (d) メタノール溶液中での紫外線吸収スペクトル
は234nm（ε＝12900）及び272nm（ε＝
10800）に特徴的な吸収を示し； (e) 融点 176〜178℃； (f) 〔α〕^２３ _Ｄ＝−82゜（ｃ＝0.2、メタノール
中）；を有する、構造式：の化合物M.139603及びシリカゲル（メルク社の
「キーゼルゲル（Kieselgel）60F―254」―商
標）、厚さ0.25mm上で、ジエチルエーテル、メタ
ノール及び蟻酸の容量比95：４：１の混合物を用
いて展開される薄層クロマトグラフイーにおける
Ｒ_f＝約0.55；エタノール中でのUV274nm（ε＝
13900）（幅広）；により特徴付けられる、分子式
C₃₅H₅₄O₈の該化合物の相応する遊離酸型及びこ
れから誘導することのできる他のアルカリ金属塩
が得られる。本発明のもう１つの実施態様によれば、
M.139603を生産するストレプトマイセス・ロン
ジスポロフラブス（Streptomyces longis―
poroflavus）、NCIB11426又はM.139603を生産す
るストレプトマイセス・ロンジスポロフラブスの
変異株又は突然変囲株を温度22〜32℃で好気性条
件で振盪下に、同化可能な炭素源を含有する水性
普通培地中で培養し、このようにして得られた発
酵混合物を常法で水と混じらない有機溶剤で抽出
し、溶剤を蒸発させ、その後、所望であればナト
リウム塩、M.139603を遊離酸に変換し、常法
で、この遊離酸をアルカリ金属塩に変換すること
よりなる本発明の前記化合物の製法が得られる。好適なM.139603を生産するストレプトマイセ
ス・ロンジスポロフラブス（Streptomyces
longisporoflavus）株はNCIB11426として同定さ
れているものであり、これはナシヨナル・コレク
シヨン・オブ・インダストリアル・バクテリア、
ミニストリー・オブ・アグリカルチヤー・フイツ
シエリーズ・アンド・フード、トリー・リサー
チ・ステーシヨン、135アベイ・ロード、アバデ
イーンAB98DG，スコツトランド（National
Collection of Industrial Bacteria，Ministry of
Agriculture Fisheres and Food，Torry
Research Station，135Abbey Road，Aberdeen
AB9 8DG，Scotland）から無制限に入手可能で
あり、これは次のように記載されている：― 〔使用培地は“インターナシヨナル・ストレプ
トマイセス・プロジエクト（Internnational
Streptomyces Project（ISP））”の処方箋により
つくられ、シイアリング（E.G.Shirling）及びゴ
ツトリーブ（D.Gottlieb）（Inter―national
Journal of Systematic Bacteriology、第16巻、
(3)、第313〜340頁、（1966年）参照）により記載
されているものである〕。恒温保持条件約25℃、日光中。ISP1 トリプトン酵母（寒天添加）５日後―薄い、僅かに湿潤、びろうど様、明淡黄
褐色。 ―裏面無着色。 13日後―薄い、びろうど状―僅かに顆粒状、明淡
黄褐色。 ―裏面無着色。ISP2 酵母エキス／麦芽エキス寒天５日後―薄い、びろうど様、明灰色。 ―裏面―非常にうすい淡黄褐色。 13日後―美しく、ひだが寄り隆起状、びろうど
様。淡黄色／褐色／灰色。 ―裏面―淡黄褐色。ISP3 オートミール寒天５日後―まばら〜薄い。びろうど様、淡黄色／灰
色。 ―裏面は見えない。 13日後―薄い、僅かに隆起、びろうど様、淡灰
色。 ―裏面は見えない。ISP4 無機塩―開始寒天５日後―薄い、うすい淡黄褐色、僅かに顆粒。 ―裏面無着色。 13日後―薄い、僅かに湿潤、淡黄褐色 ―裏面多少無着色。ISP5 グリセロール―アスパラギン寒天５日後―薄い、僅かに顆粒状、薄い淡黄褐色。 ―裏面無着色。 13日後―薄い、びろうど様、灰白色。 ―裏面無着色。ISP7 チロシン寒天５日後―まばら〜薄い、僅かに顆粒状、びろうど
様、薄い淡黄色／灰色。 ―裏面無着色。 13日後―薄い、びろうど様、僅かに隆起、淡黄褐
色。 ―裏面淡黄褐色／灰色。 ISP7において古くなると、一般にこの培地は
よりピンクの淡黄褐色となるが、より重い胞子形
成と組み合わさつた、より暗い着色の部分を示
す。

【表】褐色

【表】一般的にメラニンは生産されない。裏面色素は生産されない。可溶性色素は生産されない。胞子は気中に生じ、堅いらせん状であり、しば
しば主柄からよりまつすぐにささえられている
“菌子”又は多分胞子鎖が分かれている。胞子は
通常の顕微鏡では見にくく、非常に密着して連結
している。胞子壁はなめらかである（酢酸ウラニ
ル４％で調整）。更に、このストレプトマイセス・ロンジスポロ
フラブス（Streptomyces longisporoflavus）株
はCBS312.79としてセントラールビユロー・フオ
ル・シンメルカルチユレス（Centraalbureau
voor Schimmelcultures PO Box273、
Oosterstraat1、3740AG Baarn、オランダ）から
無制限に入手可能である。本発明のもう１つの実施態様によればストレプ
トマイセス・ロンジスポロフラブス
（Streptomyces longisporoflavus）NCIB11426、
及びこのM.139603生産菌の変異株及び突然変異
株も得られる。本発明のもう１つの実施態様によれば、
M.139603を生産するストレプトマイセス・ロン
ジスポロフラブス（Streptomyces
longisporoflavus）NCIB11426、又はこの
M.139603生産菌の変異株又は突然変異種を培養
することにより得られる発酵混合物が得られる。本発明のもう１つの実施態様によれば、
M.139603を生産するストレプトマイセス・ロン
ジスポロフラブスNCIB11426又はこのM.139603
生産菌の変異株又は突然変異株を前記のように培
養し、発酵混合物を水と混じらない有機溶剤、例
えば酢酸エチルで抽出することにより得られる抽
出物も得られる。本発明のもう１つ実施態様によれば、ストレプ
トマイセス・ロンジスポロフラブスNCIB11426又
はその変異株又は突然変異株を前記のように培養
し、又はこれと均等な方法で製造される化合物
M.139603が得られる。ナトリウム塩、M.139603に相応する“遊離
酸”は、M.139603の溶液を酸性とし、この酸溶
液を水と混じらない有機溶剤で抽出することによ
り得られ、他のアルカリ金属塩は“遊離酸”の溶
液を適当なアルカリ金属水酸化物、例えば水酸化
リチウム、水酸化カリウム、水酸化セシウム又は
水酸化ルビジウムで処理することにより得られ
る。水酸化ナトリウムを使用する場合、
M.139603が再び得られ、こうしてこの反応では
全く構造変化が伴なわないということが証明され
ている。前記のように、この化合物は瘤胃液中のプロピ
オン酸の割り合いを増加させる効果を有し、特に
メタン及び／又は酢酸を犠性にしてプロピオン酸
の割り合いを増加させる。このことは反芻動物の
栄養において望ましいことであることは公知であ
る。なぜならプロピオン酸は、酢酸より効果的な
動物がエネルギー及び生長をそれから得るグルコ
ースの先駆物質である、というのはメタンに変換
される動物のこの食物摂取分は、メタンがゲツプ
により排泄されてしまうので、動物にとつて単な
る損失であるからである。従つて、本発明の化合
物により得られる瘤胃の物質代謝の改良は非常に
重要な作用効果であり、反芻動物の生長速度や食
物変換率を増加させると思われる。従つて、本発明のもう１つの実施態様によれ
ば、家畜の反芻動物の生長速度を増加させ、及
び／又はその食物変換率を増加させるために家畜
の反芻動物の畜産業において使用する方法が得ら
れ、これは前記のような本発明の化合物、発酵生
成物又は抽出物を動物に経口投与することより成
る。この本発明方法においては、本発明の化合物を
それらの通常の飼料への添加物として経口的に、
すなわち正規の固体飼料と混合し、飼料ブロツク
又は塩―リツクスに、飲み水中に溶かし、又は子
羊又は子牛のような若い動物には全乳又は脱脂粉
乳中に溶かして投与するのが有利である。本発明
の化合物を、飼料、飼料ブロツク、塩―リツク
ス、飲み水、全乳又は脱脂粉乳に、それぞれの処
理される動物が１日当り、本発明の化合物0.01
mg／体重Kg〜30mg／体重Kg、有利に0.01mg／体重
Kg〜10mg／体重Kgを摂取する程度まで混合する。本発明の化合物を動物に、緩徐放出性の、瘤胃
内適用ペレツト又は巨丸薬の形で、動物が１日当
り本発明の化合物を同様な量で吸収するように経
口的に投与してもよい。本発明の化合物を、実質上その生長期全体、又
はその生長期の一時期のみ、例えば生長初期及
び／又は屠殺に向かう時期に与えてもよい。本発
明方法を実施することにより得られる生長速度の
増加は食肉用に飼育する物を、普通より短かい生
長期間で市販重量又は屠殺重量にすることを可能
にし、又はそれは通常の生長期間の終わりにより
重い動物を生産することを可能とする。本発明方
法を行なうことにより得られる増進した飼料変換
率は、未処理の動物が任意の所望重量に生長する
より少量の飼料を使用して、処理した動物を同じ
重量に達成させることを可能とする。最適な生長
促進含有量において、本発明の化合物による有毒
な微候は全く観察されない。本発明のもう１つの実施態様によれば、本発明
の化合物、発酵生成物又は抽出物と固体又は液体
の、食用無害の希釈剤又は担体から成る組成物が
得られる。好適な希釈液又は担体は、例えば飲み水、全乳
又は脱脂粉乳である。好適な固体の、食用無害な希釈剤又は担体は、
例えば、常用の栄養のバランスのとれた反芻動物
用飼料、例えば、穀物類、例えば大麦粉、とうも
ろこし粉又は小麦飼料、木の実及び種子類、例え
ば剥皮したピーナツケーキ又は綿種子ケーキ、又
は抽出された綿種子ケーキ、を少量の例えば羽毛
粉、海草粉、骨粉、骨細粉、白堊、食塩、尿素、
糖みつ、ビタミン及び痕跡量のミネラルから成る
典型的な牛又は羊の飼料であつてもよいし、又そ
れはエネルギー価値のない不活性固体希釈剤又は
担体、例えばカオリン、タルク、炭酸カルシウ
ム、フラー土（fuller′searth）、アタパルガス粘
土（attapulgus clay）、摩砕したカキの殻又は摩
砕した石灰石であつてもよいし、又はデンプン又
は乳糖であつてもよい。本発明の組成物は動物に直接与えるための添加
された飼料の形をとつてもよいし（この場合には
常用の反芻動物用飼料との混合物中に本発明の化
合物5ppm〜3000ppmを含有する）、又はこれは
常用の反芻動物用飼料で希釈し、直接飼料として
与えるのに好適な添加された飼料を生成するため
の濃縮予備混合物の形をとつてもよく、このよう
な予備混合物は常用の栄養のバランスのとれた反
芻動物用飼料、エネルギー価値のない不活性固体
希釈剤、例えば摩砕石灰石、又はデンプン又は乳
糖との混合物中に本発明の化合物0.3％ｗ／ｗ〜
50％ｗ／ｗ含有する。前記本発明の全組成物において、本発明の化合
物を、もちろん、相当量のM.139603を含有する
本発明の発酵混合物又は本発明の抽出物で変える
ことができる。本発明のもう１つの実施態様によれば、本発明
の固体組成物の製法が得られ、これは本発明の化
合物、発酵混合物又は抽出物を固体の食用無害希
釈剤又は担体と共に均一に混合することより成
る。式の化合物を連続的に希釈剤又は担体で２回
以上の連続した段階で希釈し、均一な混合を確実
にするのが有利である。前記のように、本発明の化合物は抗球虫類活性
を有する。このことは、ジヤーナル・オブ・パラ
シトロギー（Journal of Parasitology）第58巻、
第664〜668頁（1972年）、に記載されている標準
試験法に従がつて、鶏球虫（Eimeria tenella）
のスポロツオイトで接種されたひな鳥の腎臓細胞
における組織培養試験により証明される。この試
険において、M.139603はスポロツオイトの生成
を0.001ppm以下の濃度で妨げ、宿主細胞への毒
性は0.33ppm以上の濃度で示す。化合物M.139603はグラム陽性抗菌性を有し、
例えば、黄色葡萄球菌
（Staphyllococcusaureaus）、腸球菌
（Streptococcus faecalis）、クロストリジウム・
ベルヒー（Clostridium Welchii）及び座瘡菌
（Corynebacterium acne）の生長を10μｇ／mlの
濃度で妨げることを示しており、従つて反芻動物
でない動物、例えば家禽及び豚の生長促進剤とし
ても使用することができる。次に実施例につき本発明を詳細に説明する。例１常圧で20分間オートクレーブで予備滅菌してあ
る。トリプトン―“オキソイド（Oxoid）”L42
（商標）0.5％ｗ／ｖ酵母エキス―“オキソイド（Oxoid）”L21
（商標）0.3％ｗ／ｖを含むトリプトン―酵母寒天を有する500ml三角
フラスコ中でストレプトマイセス
（Streptomyces）株NCIB11426を培養した。媒体
のPHを約7.0とした。このフラスコを回転震盪器
上で25℃で120時間震盪した。次いでこのフラスコの内容物を他の同様なフラ
スコ10個に接種するために使用した。各々のフラ
スコは次の培地200mlを含有する：グルコースシロツプ 3.0％ｗ／ｖ炭酸カルシウム 0.25％ｗ／ｖ塩化ナトリウム 0.5％ｗ／ｖ硫酸マグネシウム・７水和物 0.05％ｗ／ｖ微量元素濃縮物 0.1％ｖ／ｖ細菌学用ペプトン（“Oxoid”L37―商標）
0.1％ｗ／ｖ牛エキス粉（“Oxoid”L29，“Lab Lemco”―
商標） 0.5％ｗ／ｖ脱イオン水全100 PHを7.2に調整し、この培地を120℃で20分間オ
ートクレーブで予備滅菌した。接種されたフラス
コを回転振盪器で25℃で120時間振盪し、次いで
フラスコの内容物を合し、0.1N塩酸を注意深く
添加して、PH３にした。培地を酢酸エチル（２×
600ml）で抽出し、抽出液を合わせ、硫酸ナトリ
ウム上で乾燥させ、溶剤を蒸発させると油状残分
（290mg）が得られた。酢酸エチル抽出物を、酢酸エチルを溶離剤とし
て使用してシリカプレート（メルク社の“キーゼ
ルゲル”60F―254―商標20×20cm、厚さ２mm）
２枚上での分取層クロマトグラフイーにより精製
した。Ｒ_f＝0.39の帯状の層をシリカプレートか
らはがし、酢酸エチルで抽出し、溶剤を蒸発させ
ると粘性のゴム状物（21mg）が得られ、これは試
験管中黄色葡萄球菌に対し抗菌活性を示す。この
活性な分画を、更に、シリカゲルプレート（メル
ク社の“キーゼルゲル”60F―254、20×20cm、
厚さ0.25mm）上でのジエチルエーテル、メタノー
ル及び蟻酸のそれぞれ95：４：１の容量比の混合
物を使用して分取層クロマトグラフイーにより精
製した。Ｒ_f＝0.55の帯状層をシリカプレートか
らはがし、酢酸エチルで抽出し、溶剤の留去後粘
性のゴム状物（９mg）が得られる。このゴム状物
のクロロホルム溶液を水酸化ナトリウム溶液
（0.1M）で振盪し、このゴム状物をナトリウム
塩、M.139603に変換した。このクロロホルム層
を分離し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、この溶
剤を蒸発させると、M.139603が融点129〜132℃
の白色固体（８mg）として得られ、その赤外線吸
収スペクトル（第１図）は次のピークを示した：
3300，1725，1645，1565及び915cm^-1；元素分
析：実測値Ｃ＝67.5、Ｈ＝8.8％；C₃₅H₅₃O₈Naの
計算値はＣ＝67.3、Ｈ＝8.5％。質量スペクト
ル：M⁺＝624.361、C₃₅H₅₃O₈・Naの計算値＝
624.364。Ｒ_f＝0.39（メルク社の60F―254、0.25
mm板上酢酸エチルで展開した薄層クロマトグラフ
イー、3N硫酸でスプレーし、100℃で加熱すると
褐色のスポツトとして可視となる）。ジユーテロ
クロロホルム中でのプロトン核磁気共鳴スペクト
ルは第２図に示すとおりである。例２反芻動物の瘤胃中のメタンの生産を阻害しかつ
生成揮発性脂肪酸中のアセテートの減少において
プロピオネート割合いを増加するＭ，139603の能
力は次のことから証明される。同じ干し草＋濃厚飼料食を与えている雄の子牛
２頭から通常の手順ベースで瘤胃液を集める。採
取時間は可能なだけ標準化し、２頭の動物からの
胃液を50/50の割合で合する。大きな粒状物質は
合した液を４枚重ねたモスリン布を通し濾過する
ことにより除去する。次いでこの濾液を濾液１容
量に対し人工瘤胃液３容量の割合で希釈し（この
人工瘤胃液はG.L.Bales等により、Journal of
Diary Science、1976年、第59巻、第1850頁に記
載されていると同様にし、しかし酢酸を除いて調
製する）、炭酸ナトリウム飽和水容液で混合物の
PHを6.9〜7.0に調整する。この混合物の１部分
（50ml）を、乾燥粉砕干し草（0.5ｇ）を有する
100ml三角フラスコ中に入れ、それぞれのフラス
コを、特定濃度の試験化合物を試験するために使
用する。試験化合物をエタノール溶液として三角フラス
コに加え、このフラスコを二酸化炭素ガスで洗浄
し、サバーシール（Suba―seal）で栓をし、39
℃で15〜16時間恒温保持する。１時間後、細い穴
のあいた針をサバーシールを通して差し込み、ガ
ス圧を除き、この針を恒温保持の終了30分前に引
きぬく、次いでフラスコを氷中に入れて発酵を止
め、15分間冷却の後、液体上のガスをメタンに関
してガスクロマトグラフイーにより分析する。フ
ラスコ内容物をあらかじめ乾燥させ半融させたガ
ラス漏斗で濾過する。濾液の三試料を揮発性脂肪
酸に関してガスクロマトグラフイーにより分析
し、あらかじめ測定された恒温保持前の揮発性脂
肪酸の量と比較し、恒温保持の間に生産された正
味の揮発性脂肪酸（アセテート及びプロピオネー
ト）を測定する。試験化合物を適用せずに得られた標準値のパー
センテージとして表わし、次の結果が得られた。
瘤胃に対する効果により作用する公知の生長促進
剤であるモネンジン（Monensin）を正の対照と
して含む。

【表】例３ストレプトマイセス・ロンジスポロフラブス
NCIB11426をISP―７寒天（45ml）上で傾斜培地
として30℃で７日間培養した。このような傾斜培
地３個を個々に滅菌水100mlで３個のフラスコ中
の掻き集め、このようにして得られた懸濁液を３
個の２フラスコを接種するのに使用した、各々
のフラスコはそれぞれ次の培地１を含んでい
る：― グリセロール 3.0％ｗ／ｖ細菌学用ペプトン（“Oxoid”Ｌ―37―商標）
2.0％ｗ／ｖ KH₂PO₄ 0.024％ｗ／ｖＭ_gSO₄・7H₂₀ 0.02％ｗ／ｖ微量元素濃縮物 0.1％ｖ／ｖ白堊 0.1％ｗ／ｖ脱イオン水全１これは常圧で1/2時間オートクレーブにより予
備―滅菌されており、PHは約6.7である。このように調製された２フラスコ３個を30℃
で回転振盪器上で３日間振盪した。３個のフラス
コ内容物を合し、グリセロール 3.0％ｗ／ｖ大豆粉BSP70 1.0％ｗ／ｖ白堊 0.25％ｗ／ｖセレロース（Cerelose） 3.0％ｗ／ｖ NaCl 0.5％ｗ／ｖ MgSO₄・7H₂O 0.05％ｖ／ｖ微量元素濃縮物 0.1％ｗ／ｖ蒸留水全30 から成る滅菌培地30を含むステンレススチール
製発酵器に接種するために使用した。発酵内容物を30℃で70時間４枚羽のタービンを
使用し、350rpmで回転し、撹拌し、１分間当
り、15の割合で空気を入れる。シリコン泡止め
剤“シルコラプス（Silcolapse）”（商標）30mlを
オートクレーブ処理の前にこの混合物に加えてお
いた。発酵の終りでPHは7.9であり、生じた発酵
混合物（22）を同容量の酢酸エチルと混合し、
撹拌した。30分後この混合物を遠心分離器中で分
離し、酢酸エチル抽出液（約18）を無水硫酸ナ
トリウム上で乾燥させ、濾過した。この濾液を減
圧下に濃縮し、油状残分（10.7ｇ）が得られた。 M.139603を次の方法で前記濃縮物から得た：油状残分（10.7ｇ）をなるべく少量の酢酸エチ
ルに溶かし、生じた溶液を、酢酸エチルで懸濁物
として作られた中性アルミナのカラム（Woelm
Ｎ、200ｇ18cm×４cm）の一番上に入れた。この
カラムを先ず酢酸エチルで溶離させ、次いで酢酸
エチル及びメタノールの50％ｖ／ｖ混合物で、最
後にメタノールで溶離させた。カラムから溶剤の
先端が現われた後次のフラクシヨンを集めた：

【表】

【表】フラクシヨン７〜11は、石油エーテル（沸点60
〜80℃）中アセトン20％ｖ／ｖで展開した、シリ
カゲルでの薄層クロマトグラフイーにより
M.139603（Ｒ_f＝約0.22）を含有することを示
し、これらを合し、溶剤を蒸発させると、粘性の
ゴム状物（840mg）が得られ、これらを更に石油
エーテル（沸点60〜80℃）中のアセトン20％ｖ／
ｖの混合物を溶離剤として使用してシリカプレー
ト（メルク社の“Kieselgel60F250”―商標40cm
×20cm厚さ２mm）上での分取層クロマトグラフイ
ーにより精製した。Ｒ_f＝約0.22の紫外線で見え
る吸収帯のところを二枚のプレートからはがし、
酢酸エチルで抽出し、抽出液を乾燥するまで蒸発
させると粘生のゴム状物（240mg）が得られ、こ
れに石油エーテル（沸点60〜80℃）を加えて晶出
させた。この物質を石油エーテル（沸点60〜80
℃）から再結晶させると、無色の結晶として
M.139603が得られ、これを濾別し乾燥させた
（210mg）、融点176〜178℃。エタノール中での紫
外線吸収スペクトルは234nm（ε＝12900）及び
272nm（ε＝10800）に吸収を示した。赤外線吸
収スペクトル及び核磁気共鳴スペクトルは、例１
の生産物から得られたものと同一であつた。例４ M.139603（40mg）をアセトン（10ml）及び水
（２ml）の混合物中に溶かし、2N塩酸１mlを加
え、この混合物を激しく５分間撹拌した。蒸留水
（20ml）を加え、混合物をジクロルメタン（２×
10ml）中に抽出した。有機相を分離し、2N塩酸
次いで蒸留水で洗浄した。次いてジクロルメタン
相を濃縮すると、M.139603の相応する“遊離
酸”である粘性ゴム状物（33mg）が得られた。元素分析実測値：Ｃ＝69.5、Ｈ＝9.1・C₃₅H₅₄O₈
の計算値：Ｃ＝69.8、Ｈ＝9.0；ヌジヨール中のI.R.スペクトルは第３図に示す
ように3500，1765，1685，1650，1575cm^-1に特徴
的な吸収を有する；デユーテロクロロホルム中の
プロトン核磁気共鳴を第４図に示す。例５ M.139603に相当する“遊離酸”（30mg）をテト
ラヒドロフラン（７ml）及び水（１ml）の混合物
中に溶かした。アルカリ金属水酸化物XOH
（2N、２ml）を水性テトラヒドロフラン混合物に
加え、次いで10分間強く撹拌した。水（10ml）を
加え、この溶液をエーテル（２×15ml）で抽出し
た。エーテル抽出液を合し、濃縮すると
M.139603に相応するアルカリ金属塩が得られ
た。Ｘがカリウムであるとき、融点146〜150℃のカ
リウム塩が生じ、これは質量640.335の分子イオ
ン、M⁺（C₃₅H₅₃O₈・Ｋの計算値＝640.338）を示
す質量分析スペクトル及び元素分析：実測値、Ｃ
＝65.7％、Ｈ＝8.5％、（C₃₅H₅₃O₈・Ｋの計算値：
Ｃ＝65.6％、Ｈ＝8.3％）により同定されるよう
に分子式C₃₅H₅₃O₈・Ｋである。Ｘがルビジウムであるとき、融点95〜120℃で
分子式C₃₅H₅₃O₈・Rbのルビジウム塩が形成され
る（質量686.279の分子イオン、M⁺を示す質量分
析スペクトル（C₃₅H₅₃O₈・Rbの計算値＝
686.286）により同定）。例６羊の瘤胃液中のアセテートの減少時のプロピオ
ネート割合を増加するM.139603の能力を次のよ
うに証明した：― 羊23頭を個々に収容し、１日当り動物１頭につ
き乾燥草１Kgの同じ飼料を１日に２回にわけて与
えた。動物13頭をでたらめに負の対照として割り
当て、公知の瘤胃処理剤であるモネンジンを使用
する正の対照として５頭、M.139603を投与する
ために５頭を割り当てる。処理動物に連続４日
間、毎日0.5mg／Kgの割合でモネンジン又は
M.139603を経口的に与え、瘤胃液の試料を４日
間の処理後瘤胃管で６時間集めた。瘤胃液試料を
次いでアセテート及びピロピオネートに関して例
２に記載してあると同様にして分析した。得られ
た結果は次のようであつた。

【表】 M.139603のアセテート反応は正の対照、モネ
ンジンと比較しＰ＜0.02で有効であり、
M.139603のプロピオネート反応は正の対照、モ
ネンジンと比較してＰ＜0.001で有効である。

【図面の簡単な説明】

第１図は、M.139603の赤外線吸収スペクト
ル、第２図はM.139603のプロトン核磁気共鳴ス
ペクトルを表わし、第３図はM.139603の相応す
る遊離酸の赤外線吸収スペクトル、第４図は
M.139603の相応する遊離酸のプロトン核磁気共
鳴スペクトルを表わす。

Claims

【特許請求の範囲】１次の特徴： (a) 分子式C₃₅H₅₃O₈Na：質量624.361
（C₃₅H₅₃O₈Naの計算値＝624.364）の分子イオ
ン、M⁺を示す質量分析及び元素分析、Ｃ＝
67.5％、Ｈ＝8.8％（C₃₅H₅₃O₈Naの計算値：Ｃ
＝67.3、Ｈ＝8.5％）； (b) ヌジヨール中での赤外線吸収スペクトルは第
１図に示すように3300，1725，1645，1565及び
915cm^-1に特徴的な吸収を有する； (c) ジユーテロクロロホルム中でのプロトン核磁
気共鳴スペクトルは第２図に示すとおりであ
り； (d) メタノール溶液中での紫外線吸収スペクトル
は234nm（ε＝12900）及び272nm（ε＝
10800）で特徴的な吸収を示し； (e) 融点176〜178℃； (f) ［α］^２３ _Ｄ＝−82゜（ｃ＝0.2、メタノール
中）；を有する、構造式：の化合物M.139603及びシリカゲル（メルク社の
「キーゼルゲル（Kieselgel）60F―254」―商
標）、厚さ0.25mm上でのジエチルエーテル、メタ
ノール及び蟻酸の容量比95：４：１の混合物を用
いて展開される薄層クロマトグラフイーにおける
Ｒ_f＝約0.55；エタノール中でのUV274nm（（ε
＝13900）（幅広）；により特徴付けられる、分子
式C₃₅H₅₄O₈の該化合物の相応する“遊離酸”型
及びこれから誘導することのできる他のアルカリ
金属塩。２次の特徴； (a) 分子式C₃₅H₅₃O₈Na：質量624.361
（C₃₅H₅₃O₈Naの計算値＝624.364）の分子イオ
ン、M⁺を示す質量分析及び元素分析、Ｃ＝
67.5％、Ｈ＝8.8％（C₃₅H₅₃O₈Naの計算値：Ｃ
＝67.3、Ｈ＝8.5％）； (b) ヌジヨール中での紫外線吸収スペクトルは第
１図に示すように3300，1725，1645，1565及び
915cm^-1に特徴的な吸収を有する； (c) ジユーテロクロロホルム中でのプロトン核磁
気共鳴スペクトルは第２図のようであり； (d) メタノール溶液中での紫外線吸収スペクトル
は234nm（ε＝12900）及び272nm（ε＝
10800）に特徴的な吸収を示し； (e) 融点176〜178℃； (f) ［α］^２３ _Ｄ＝−82゜（ｃ＝0.2、メタノール
中）；を有する。構造式：の化合物M.139603及びシリカゲル（メルク社の
「キーゼルゲル（Kieselgel）60―254」―商標）、
厚さ0.25mm上でのジエチルエーテル、メタノール
及び蟻酸の容量比95：４：１の混合物を用いて展
開される薄層クロマトグラフイーにおけるＲ_f＝
約0.55；エタノール中でのUV274nm（ε＝
13900）（幅広）；により特徴付けられる、分子式
C₃₅H₅₄O₈の該化合物の相応する遊離酸型及びこ
れから誘導することのできる他のアルカリ金属塩
を製造する方法において、M.139603を生産する
ストレプトマイセス・ロンジスポロフラブス
（Streptomyces Iongisporoflavus）NCIB11426
を、温度22〜32℃で好気性条件で振蘯下に、同化
可能な炭素源を含有する水性普通培地中で培養
し、このようにして得られた発酵混合物を、常法
で水と混じらない有機溶剤で抽出し、溶剤を蒸発
させ、その後、所望であればナトリウム塩、
M.139603を遊離酸に変換し、常法でこの遊離酸
を他アルカリ金属塩に変換することを特徴とす
る、新規ストレプトマイセス属の代謝生成物の製
法。３ストレプトマイセス・ロンジスポロフラブス
（Streptomyces longisporoflavus）NCIB11426及
びM.139603を生産する変異株及び突然変異株を
使用する、特許請求の範囲第２項記載の方法。