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JPS6115695A - 発酵法によるl−イソロイシンの製造方法 - Google Patents

発酵法によるl−イソロイシンの製造方法

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Publication number
JPS6115695A
JPS6115695A JP13446084A JP13446084A JPS6115695A JP S6115695 A JPS6115695 A JP S6115695A JP 13446084 A JP13446084 A JP 13446084A JP 13446084 A JP13446084 A JP 13446084A JP S6115695 A JPS6115695 A JP S6115695A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
isoleucine
corynebacterium
brevibacterium
strain
resistance
Prior art date
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Granted
Application number
JP13446084A
Other languages
English (en)
Other versions
JPH0362394B2 (ja
Inventor
Takayasu Tsuchida
隆康 土田
Noboru Otsuka
昇 大塚
Hiroshi Sonoda
薗田 洋
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Ajinomoto Co Inc
Original Assignee
Ajinomoto Co Inc
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Publication date
Application filed by Ajinomoto Co Inc filed Critical Ajinomoto Co Inc
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Priority to DE8585108049T priority patent/DE3585052D1/de
Priority to EP85108049A priority patent/EP0167132B1/en
Priority to US06/750,289 priority patent/US4656135A/en
Publication of JPS6115695A publication Critical patent/JPS6115695A/ja
Publication of JPH0362394B2 publication Critical patent/JPH0362394B2/ja
Granted legal-status Critical Current

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  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 L−4ソロイシンはアミノ酸輸液及び総合アミノ酸製剤
の重要な成分である。本発明はこのL−イソロイシンを
発酵法で製造する方法を改良するものである。
〔従来の技術〕
ブレビバクテリウム属及びコリネバクテリウム属の微生
物がL−イソロイシン生産能を有するためには、α−ア
ミノ−β−ヒドロキシ吉草m(以下AHVと略す)等へ
の耐性を付右せしめれば良いことがわかっている。更に
、前記の薬剤耐性に加えてO−メチルスレオニン耐性、
β−ヒドロキシロイシン耐性又fd )リクロロアラニ
ン耐性を付与すること、及びプリン系物質又はリジン等
の要求性を付与することによりL−イソロイシンの生産
能が向上することは知られている。
〔発明が解決しようとする問題点〕
L−イソロイシン発酵収率及び蓄積を向上させることは
工業生産上に於て、重要な問題である。
〔問題点を解決するための手段〕
本発明は上記問題点を解決するためになされたものであ
り従来より知られているブレビバクテリウム属及びコリ
ネバクテリウム属に属するL−イソロイシン生産能を有
する微生物を【゛くC良して1Wに発酵収率の向上した
菌株を見いだすべく研究した結果、α−ケトマロン酸(
以下α−KMと略す。)に耐性を付与した菌株の中に、
従来のし一イソロイシン生産菌よシも晶収率でL−イソ
ロイシンを生産する菌株が存在することを発見した。
即ち、本発明はブレビバクテリウム属又はコリネバクテ
リウム属に属し、α−双耐性を有し、且つL−イソロイ
シン生産能を有する微生物を液体培地中で培養し、培地
中に生成蓄積したL−イソ本発明において用いられる微
生物はブレビバクテリウム属又はコリネバクテリウム属
に属し、α−店耐性を有し、かつL−イソロイシン生産
能を有する変異株である。
本発明の変異株を得るには、下記の野生株に先にL−イ
ソロイシン生産能を付与し、次いでα−個耐性を付与し
ても良いし、又先にα−KM 耐性を付与し、次いで4
ンロイシン生産能を付与しても良い。
本変異株の親株となる野生株は、ブレビバクテリウム属
又はコリネバクテリウム属等のコリネホA、 ムI、−
グルタミン酸生産菌として知られているものであシ、例
えば以下のものがある。
ブレビバクテリウム・ラクトフェルメンタムATCC1
3869ブレビバクテリウム・デイパリカタム    
ATCC14020ブレビバクテリウム・す、カロリテ
ィカム  ATCC14066ゾレビパクテリウム・フ
ラバム       ATCC14067コリネバクテ
リウム・グルラミ1ム     ATCC13032コ
リネバクテリウム アセトアミドフィラム ATCC1
3870これらの親株よう本発明の変異株を得る方法は
、N−メチル−N′−二トローN−ニトロソグアニジン
処理する等の通常の変異誘導方法が適用できる。
変異処理した菌液から本発明の変異株を分離する方法は
α−個を含む培地で生育するような菌株を採取すること
によって行われる。
本発明に示す変異株の具体的な変異誘導方法とα−KM
に対する菌株の生育度の関係を以下に示す。
〔変異誘導方法〕
ブイヨン寒天スラント上に30℃で24時間生育させた
ブレビバクテリウム・フラバムAJ 3686FERM
−P 2433(ATCC14067,1: !J誘導
したAI(v耐性株)及びコリネバクテリウム・グルタ
ミクムAJ12150  FERM−P  r76r7
4(ATCC13032,lニジ誘導したAHV耐性株
)の菌体をM/ 30 ’)ン酸緩衝液に懇濁し菌体濃
度108〜109/mlの菌体懸濁液に500μg−/
rniのN−メチA −N’−ニドo −N −ニトロ
ソグアニジンを加え30℃に20分間保持した。ついで
遠心分離して菌体を集め、M/30 リン酸緩衝液で良
く洗滌した後、下記組成の培地に接種[2,315℃で
2〜10日間培善した7、グルコース      1.
0    f/−/di尿     素       
 0.2KH2PO40,1 MgSO4・7.H2O0,I    P7dlF e
 SO4・7H200−002”MnSO4・7H20
0,002# ビオチン      100  μ9−/lサイアーン
塩酸塩  100  # α−KM        O,2’;!/di寒  天
           2.0寒天培地に生育した菌株
の中からL−イソロイシン生産能の高い苗株としてブレ
ビバクテリウム・7 ラバA ki 12152 、 
FERM−P ワ6r7g   (AJ(v耐性α−個
耐性)及びコリネバクテリウム・グルタミクA AJ 
12153 、 FERM−P r76ワ6(AIrV
耐性a、 α−個耐性)を得た。
このようにしてイ!tられた変異株のα1讃耐性度を親
株と比較した。
グルコース0.5 F//di 、尿素0.2fild
i、硫安0、15’ 9/di 、 K2HO4’0.
39/de  、  K2HPO40,19/dl 、
 MgSO4・7H200,01g/de  、  C
aC42’2H200,1m9/de、ビオチy100
ttl/l 、fイ7ミy塩酸塩100 fig/11
 、 FeSO4−7H200,0021/di。
MnSO4’7H20o、o O21!/dll 、お
よび表に示す量のα−藷を含み、PI(7,0に調節し
た培地に天然培地(−!!母 プトン1 g/de 、酵箇エキス11i /di 、
 NaC60,5Ii/dl 、 pH7,0)スラン
トで24時間培養した菌体を殺菌水に懸濁して接種し、
24時間培養して生育度を一度で測定した。
第  1  表 上述の変異株にO−メチルスレオニン耐性、β−ヒドロ
キシロイシン耐性又はトリフロロアラニン耐性のように
すてにL−イソロイシンの生産性を向上せしめることが
知られている性質を更に付加することによシ、収率が向
上する場合が多い。
〔作用〕
このような変異株を培養する際に用いる培地は、炭素源
、窒素源、無機イオン、上記要求性を満足させるべき物
質及び必要に応じビタミン等その他の有機微量栄養素を
含有する通常の培地である。
炭素源としてはグルコース、シュクロース等の炭水化物
、酢酸等の有機酸等が、窒素源としてはアンモニア水、
アンモニアガス、アンモニウム塩等が好適である。無機
イオンとしてはカリイオン。
ナトリウムイオン、マグネシウムイオン、リン酸イオン
その他が必要に応じ適宜培地に添加される。
培養は好気的条件が望ましく、培誉の間培地のPHを4
ないし8に温度を25℃ないし37℃に調節しつつ行え
ばよシ好ましい結果が得られる。かくして1ないし7日
間も培養すれば培地中に著量のL−イソロイシンが生成
蓄積される。培養液よpL−イノロイシンを採取する方
法はイオン交換樹脂による方法等通常の方法で採取でき
る。
以下実施例にて説明する。
実施例1 グルコース10g/di、  (NH4)2S0471
1/di、KH2PO40,111/di、 MgSO
4・7H200,04g/di、 FeSO4・7H2
01m9/d1. MnSO4’4H201m9/dl
、サイアミン−HCL100μ!i/l、ビチオン10
0μI/l、大豆蛋白酸加水分解液60ダ/dj(全箪
素として)炭酸カルシウム5yZdec別殺菌)を含む
培地をPI(7,0に調節し、その20rnlを500
 nll容肩伺フラスコに入れ加熱殺菌した。これに第
1表に示す菌株を一白金耳接種し、31.5℃に保ちつ
つ4日間振逼した。各菌株の培養液中には第2表に示す
量のL−イソロイシンが蓄積した。AJ12152  
を上記の方法で培養して培養液11を得、これより遠心
分離にて菌体を除き、上滑を、強酸性イオン交換樹脂[
ダイヤイオンj 5K−IB (N1(4+型)に通過
させた。樹脂を水洗後、2N−アンモニア水にて溶出し
ついで溶出液を濃縮し、これよりL−イソロイシンの粗
結晶16.0.9を得た。
第2表 菌   株                性 質 
   し−イソロイシン(9Ahブレビバクテリウム・
フラバム AJ 3686 (FERM−P 2433) AHt
”    ’    0.6プレビバクテリウム・フラ
バム

Claims (1)

    【特許請求の範囲】
  1. ブレビバクテリウム属又はコリネバクテリウム属に属し
    α−ケトマロン耐性を有し、且つL−イソロイシン生産
    能を有する微生物を液体培地中で培養し、培地中に生成
    蓄積したL−イソロイシンを採取することを特徴とする
    L−イソロイシンの製造方法。
JP13446084A 1984-06-29 1984-06-29 発酵法によるl−イソロイシンの製造方法 Granted JPS6115695A (ja)

Priority Applications (4)

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JP13446084A JPS6115695A (ja) 1984-06-29 1984-06-29 発酵法によるl−イソロイシンの製造方法
DE8585108049T DE3585052D1 (de) 1984-06-29 1985-06-28 Verfahren zur herstellung von l-isoleucin durch fermentation.
EP85108049A EP0167132B1 (en) 1984-06-29 1985-06-28 Process for producing l-isoleucine by fermentation
US06/750,289 US4656135A (en) 1984-06-29 1985-07-01 Process for producing L-isoleucine by fermentation

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JP13446084A JPS6115695A (ja) 1984-06-29 1984-06-29 発酵法によるl−イソロイシンの製造方法

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JPS6115695A true JPS6115695A (ja) 1986-01-23
JPH0362394B2 JPH0362394B2 (ja) 1991-09-25

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