JPS60146832A

JPS60146832A - ＩｇＧ単量体

Info

Publication number: JPS60146832A
Application number: JP44484A
Authority: JP
Inventors: Yatsuhiro Kamimura; 上村　八尋
Original assignee: Green Cross Corp Japan; Green Cross Corp Korea
Current assignee: Mitsubishi Tanabe Pharma Corp; GC Biopharma Corp
Priority date: 1984-01-05
Filing date: 1984-01-05
Publication date: 1985-08-02
Anticipated expiration: 2011-03-13
Also published as: JPH0825901B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】本発明は、静注可能なＩｇＧに関する。さらに詳しくは
、ヒト由来１ｇＧを、特定条件下で酸処理することによ
ってＩｇＧの二量体および／または重合体（以下、これ
らをＩｇＧ凝集型と総称することもある）を除去して得
られる静脈投与可能なＩｇＧに関する。

冷エタノール分画法や硫安分画法等で製造されたＩｇＧ
製剤中には、７ＳＩｇＧの他に１０〜４０％のＩｇＧ凝
集型が含まれている。このものは、抗補体活性化作用や
、ときには抗原性を示すために静脈内投与を行うことは
できない。静注用ＩｇＧを製するためにはこれらＩｇＧ
凝集型を除く必要がある。

ＩｇＧ凝集型を除去する方法に関して、酸処理法に関す
る先行技術としては以下のものがある。

ミエローマＩｇＧの凝集型が、ｐ１１４処理で解離する
ことはＫｏｃｈｗａら（１９６６）により観察されてい
るが、ミエローマＩｇＧであるためか、又はｐＨ調整時
の界面変性によるものか、中性に戻すと再重合すると報
告されている。

１１ａｎｓｓｏｎ　（１９６８）は、正常人のＩｇＧを
透析しながらｐＨ３，０に調整すると、そこに含まれて
いたＩｇＧ凝集型は解離するが、再度中性に戻すと不溶
物が生じると報告している。このように酸処理でＩｇＧ
凝集型が解離することは知られていたが、特に単量体１
ｇＧを効率よく得る方法についての詳細な報告はみられ
ない。

他方ヒトＩｇＧの酸変性については、Ｊｉｒｇｅｎｓｏ
ｎら（１９５４）やＤｏｔら（１９７０）にょる旋光性
や円偏光二色性等の観察報告はあるが、その他の生物学
的性状がどのように変化しているかに関しては報告され
ていない。一方、５ｔｏｌｌａｒら（１９７６）や−１
ｎｋｅｌｈａｋｅら（１９８０）はウサギＩｇＧを用い
て酸変性の研究を行い、ＩｇＧの重要な生物活性の−っ
である補体結合能がρ１１３．５より酸性側で減弱する
こと、抗原結合能はｐＨ２，５〜３．０でも安定である
こと等の成績を報告した。しかし、ウサギＩｇＧはヒト
ＩｇＧと性状が異なるため、かかる知見がヒトＩｇＧに
も適用されるとは言い難い。

ヒｌ−１ｇＧ凝集型を、ヒト単量体を変性させることな
く、解離さセる方法を見いだすことができれば、従来の
筋注用グロブリンから単量体ｒｉｃｈの静注用グロブリ
ンを効率よく製造することが可能となる。

従って、本発明の第一の目的は静注可能なヒトＩｇＧを
提供することである。

本発明の第二の目的は重合型１ｇＧの含量が可及的に少
ないヒ）ＩｇＧの製造方法を提供することである。一本発明の第三の目的は中性においてもＩｇＧ凝集型の生
じることのないヒトＩｇＧを提供することである。

本発明の第四の目的は安定な、静注可能ヒト■ｇＧを提
供することである。

本発明は、ヒトＩｇＧ重合体を含有するヒト１ｇＧの０
．２〜２０Ｗ／Ｖ％溶液をｐＨ３，７−４，３で３０分
〜２０時間処理してヒトＩｇＧ重合体を単量体へ解離さ
せて得られた静脈投与可能なＩｇＧからなる。

原料となるし）ＩｇＧは、ＩｇＧ凝集型を含むものが選
ばれる。高度精製されたものであれば本発明処理後ただ
ちに医薬品として調製できるし、又、粗製段階であれば
既知の精製法と組合せられる。原料ヒトＩｇＧの潤製法
としては、冷エタノールによるアルコール分画法が好適
に利用される（ジャーナル　オブ　クリニカル　インベ
スチゲイション、２３，４１７．１９４４年）（ジャー
ナル　オブ　ジ　アメリカン　ケミカル　ソサイエティ
、６８，４７９．１９４６年）。

酸処理は、原料をｐＨ３，７〜４．３に保ち行う。処理
温度は１〜１０℃、好ましくは３〜６℃であり、処理時
間は３０分〜２０時間、好ましくは６０分〜４時間、更
に好ましくは１２０分〜２００分である。ここでｐ　Ｉ
Ｉ　ｉ１ｍ整に用いられる酸としては、上記ｐｉｔに調
整可能なもので、かつＩｇＧに悪影響を及ぼさないもの
であればよく、たとえば塩酸などの無機酸、酢酸などの
有機酸があげられる。酸処理時におけるＩｇＧの濃度は
、０．２〜２０Ｗ／Ｖ％、好ましくは１−０〜１８ｗ／
ｖ％である。

この酸処理に際し、ＩｇＧの変性を防ぐためには無機塩
、糖類、蛋白質および有機酸塩から選ばれる化合物の単
独、又は複数を添加することが好ましい。無機塩として
は塩化ナトリウム、塩化カリウムなどのハロゲンとアル
カリ金属との塩など、糖類としてはグルコース、フラク
トース、ソルビトール、マンニット、サッカロースなど
、蛋白質としてはアルブミン、ゼラチンなど、有機酸塩
としてはシュウ酸塩、クエン酸塩（特にこれら有機酸の
ナトリウム塩、カリウム塩などのアルカリ金属塩）等が
好適に例示される。その添加量は総量として５〜２０ｗ
／ｖ％である。

当該安定化剤は、本発明１ｇＧ製造後もそのまま存在さ
せておくことがＩｇＧの保存安定性の観点から、好まし
い。

かくして得られる酸処理１ｇＧは、医薬品製造の常套手
段に準じて、除菌濾過及び凍結乾燥処理などを行うこと
により、凍結乾燥製剤とすることも可能である。

本発明によって特定条件下に調整された静脈投与可能Ｉ
ｇＧは、ＴｇＧ車量体が変性されておらず、またこれを
中性に戻してもＩｇＧＭ集型が生ずることがないので、
極めて有用なものである。

以下に本発明の実験例と実施例を示す。

実験例１５．７ｍｇ／ｍｌのＩｇＧ凝集型を含む水溶液を各種ｐ
＋１に調整し、２８℃で６０分間１ｎｃｕｂａｔｅ後、
Ｎａ０Ｉｌを加え中和した。更にリン酸緩衝液を等量加
え、高速液体クロマトグラフィーによる残存１ｇＧ凝集
型の量およびプラスミン消化の程度を測定した。ここで
用いた試料溶液中には７Ｓが３８％、二量体が１１％お
よび１％の重合体が１まれでいた。このものを酸処理す
ると、ρ１１３．８の処理において７８の量がピークに
なった。二量体１ｇＧも処理ｐＨの低下とともに減少し
たが、ｐｌ＋３．８以下での処理では重合体の量が増加
した。

プラスミン消化の程度は、ｐＨ４付近の処理の場合に最
もおそく、重合体の増加する処理領域および二量体が残
存する処理領域では、プラスミンによる消化が早かった
。

以上のことから、本発明の処理によって得られたものは
単量体の含量が多く、中和にすることによってＩｇＧ凝
集型に戻ることがないことが明らかである。

実験例２１．４ｍｇ／ｍｌのＩｇＧ凝集型を含む水溶液（７Ｓが
３８％、二量体が６１％、重合体が１％）に各種安定剤
を添加し、ｐ■を３．８に調整し、２８℃で６０分間１
ｎｃｕｂａｔｅ後、Ｎａ０ｉ（を加え中和した。その後
、ＩｇＧの麻疹抗体価をＨｅｍａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉ
ｏｎ　１ｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｔｅｓｔ法により測定し
、国際単位（ＩＵ／１００　ｍｇ）で表し、安定剤の効
果をみた。その結果は次の通りである。

・　：　Ｗ　ｖ％　エ麻１」買本価− す　シ　７アルブミン　：１５　１０同上　：　１　１０ゼラチン　ｉ　１０　１ＯＮａＣＩ　：１５　１０同上　＝１９グルコース　：１５　１０同上　：１９サッカロース：　１０　１０マンニトール：　１５　１０同上　：　１　ｔ。

クエン酸Ｎａ：１５　１０同」二　二　１　９ＮａＣ１：５＋　フルクトース：５　１０実施例１アルコール分画法で得たヒトＩｇＧの１５Ｗ／Ｖ％溶液
を、０．１規定塩酸を用いてｐｕ４．ｏに調整し、４℃
で３時間静置した。その後、０．１規定カセイソーダを
用いてｐＨ６，５に修正した。その後、ＮａＣｌをＩＯ
Ｗ／Ｖ％およびグルコースを５　ｗ　／　ｖ％濃度にな
るように加え、除菌濾過して静注用グロブリンとした。

特許出願人　株式会社　ミドリ十字手　Ｕ５　ネ市　ＪＪ二　￥ｙ３：（自発）昭和５９年
３月８１コ特許庁長官　殿１、事件の表示昭和５９年持重願第０００４４４号２、発明の名称ＩｇＧｆｆｉ量体３、？＃正をする者事件との関係　特許出願人氏名（名称）　株式会社　ミドリ十字４、代理人　■５４１住　所　大阪市東区平野町４丁目５３番池３ニューライ
フ平野町４０６号電話（０６）　２２７−１１５６６、補正の対象明細書の「特許請求の範囲」の欄および「発明の詳細な説明」の欄７、補正の内容（１）明細刊の「特許請求の範囲」を別紙の通りに訂正
する。

（２）明細店第５Ｎ、第１９行の「酢酸」の次に「、ク
エン酸、シ１つ酸」を加入する。

（３）同書第６頁、第６行の「金属との塩」の次に１−
およびリン酸ナトリウム」を加入する。

（４）同書第８頁、第１０行のｒ　ＮａＯＨを加え」を
削除する。

（５）同書第８頁、第１７行の「アルブミン＝１５Ｊを
「アルブミン：５」に訂正する。

（６）同書第９頁、第５行の［マンニトール；１５」を
「マンニトール：５」に訂正する。

（７）同書第９頁、第１０行と第１１行の間に「アルブ
ミン：１＋　グリシン１．５．　１０ｊを加入する。

（８）同書第９頁、第１３行の「０．１規定塩酸」をｒ
　０．　Ｉ　Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ３，５）　Ｊに訂正す
る。

（９）同書第９頁、第１４〜１５行の「０．１規定カセ
イソーダ」をｒ１Ｍグリソン緩衝？（Ｑ−（ｐＨ９，５
）Ｊに訂正する。

（１０）同書第９頁、第１５行の「その後、」の次に「
アルブミンを１ｗ／ｖ％、」を加入する。

（１１）同書第９頁、第１６行のｒｌｏｗ／ｖ％」をｒ
３ｗ／ｖ％」に訂正する。

（別紙）特許請求の範囲（１）　ヒトＩｇＧの二量体および／または重合体を夾
雑するヒｌ−１ｇ　Ｇの０．２〜２０Ｗ／Ｖ％溶液をｐ
１１３．７〜４．３で３０分〜２０時間処理してヒトＩ
ｇＧ二量体および重合体を単量体へ解＾１ｔさせて得ら
れた静脈投与可能なＩｇＧ。

（２）無機塩、１Ｍ類、蛋白質及び有機酸塩から選ばれ
る少なくとも一種の安定化剤０．５〜２０Ｗ／Ｖ％濃度
の存在下に解離されたことを特徴とする特許請求の範囲
第（１）項記載の静脈投与可能なＩｇＧ０（３）無機塩が塩化ナトリウム、リン酸ナトリウムまた
は塩化カリウムであり、糖類がグルコース、フラクトー
ス、サッカロース、ソルビトールまたはマンニトールで
あり、蛋白質がアルブミンまたはゼラチンであり、有機
酸塩がシｊ−ウ酸塩、クエン酸塩であることを特徴とす
る特許請求の範囲第（２）°　の静脈投与可能なＩｇＧ
。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）　ヒ）ＩｇＧの二量体および／または重合体を夾
雑するヒトＩｇＧの０．２〜２０Ｗ／Ｖ％溶液をｐ１１
３．７〜４．３で３０分〜２０時間処理してヒトＩｇＧ
二量体および重合体を単量体へ解離させて得られた静脈
投与可能なＩｇＧ。
（２）無機塩、糖類、蛋白質及び有機酸塩から選ばれる
少なくとも一種の安定化剤０．５〜２０Ｗ／Ｖ％濃度の
存在下に解離されたことを特徴とする特許請求の範囲第
（１）項記載の静脈投与可能なＩｇＧ０
（３）無機塩が塩化ナトリウムまたは塩化カリウムであ
り、ｉｓ　類がグルコース、フラクトース、サッカロー
ス、ソルビトールまたはマンニトールであり、蛋白質が
アルブミンまたはゼラチンであり、有機酸塩がシュウ酸
塩、クエン酸塩であることを特徴とする特許請求の範囲
第（１）項記載の方法。