JPS5889200A - Ｎａｄ依存性コレステロール脱水素酵素を使用するコレステロールの定量法およびその定量用試薬 - Google Patents
Ｎａｄ依存性コレステロール脱水素酵素を使用するコレステロールの定量法およびその定量用試薬Info
- Publication number
- JPS5889200A JPS5889200A JP56186184A JP18618481A JPS5889200A JP S5889200 A JPS5889200 A JP S5889200A JP 56186184 A JP56186184 A JP 56186184A JP 18618481 A JP18618481 A JP 18618481A JP S5889200 A JPS5889200 A JP S5889200A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- nad
- cholesterol
- nocardia
- reagent
- proteus
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、ＮＡＤ［Ｆ］依存性コレステロール脱水素酵
素（Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａ
ｓｅ ：以下ｒＮＡＤ［Ｆ］−ＣＤＨＪと略す）に関す
る。さらに詳しく説明すると、微生物を好気的条件下で
培養し、その菌体もしくは培養液から製造したＮＡＤ［
Ｆ］−ＣＤＩ（を使用するコレステロールの定量法およ
びＮＡＤ［Ｆ］−ＣＤＨを含有するコレステロールの定
量用試薬に関する。ここでいうＮＡＤ［Ｆ］−ＣＤＨと
は、補酵素としてＮＡＤにコチンアミドアデニン、ジヌ
クレオチド）、ＮＡＤＰにコチンアミドアデニン、ジヌ
クレオチドリン酸）を要求し、電子供与体（コレステロ
ール）から水素をうばい、電子受容体（ＮＡＤ又はＮＡ
ＤＰ）に付加する反応を触媒する酩素をいう。
素（Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａ
ｓｅ ：以下ｒＮＡＤ［Ｆ］−ＣＤＨＪと略す）に関す
る。さらに詳しく説明すると、微生物を好気的条件下で
培養し、その菌体もしくは培養液から製造したＮＡＤ［
Ｆ］−ＣＤＩ（を使用するコレステロールの定量法およ
びＮＡＤ［Ｆ］−ＣＤＨを含有するコレステロールの定
量用試薬に関する。ここでいうＮＡＤ［Ｆ］−ＣＤＨと
は、補酵素としてＮＡＤにコチンアミドアデニン、ジヌ
クレオチド）、ＮＡＤＰにコチンアミドアデニン、ジヌ
クレオチドリン酸）を要求し、電子供与体（コレステロ
ール）から水素をうばい、電子受容体（ＮＡＤ又はＮＡ
ＤＰ）に付加する反応を触媒する酩素をいう。
従来好気性微生物が、コレステロールオキシダーゼ、コ
レステロールオキシダ−ゼを生産することは既に知られ
ている。またノカルジア・エリスロポリスがコレステロ
ールの酸化を触媒する間・素を生産するとの報告（Ａｎ
ｎ、 ｃｌ ｉｎ、 Ｂｉｏｃｈｅｍ、 。
レステロールオキシダ−ゼを生産することは既に知られ
ている。またノカルジア・エリスロポリスがコレステロ
ールの酸化を触媒する間・素を生産するとの報告（Ａｎ
ｎ、 ｃｌ ｉｎ、 Ｂｉｏｃｈｅｍ、 。
員
１０巻、７９号ト、１９７３年）がある。この酵素の場
合は、ＮＡＤ［Ｆ］への依存性は認められない。また、
チリウム・ステロリカム（特装＊昭４８ １１９０）に
ついても同様のことがいえる。さらには、絶対嫌気性微
生物である、オイバクテリウムｓｐ。
合は、ＮＡＤ［Ｆ］への依存性は認められない。また、
チリウム・ステロリカム（特装＊昭４８ １１９０）に
ついても同様のことがいえる。さらには、絶対嫌気性微
生物である、オイバクテリウムｓｐ。
ＡＴＣＣ２１４０８がＮＡＤ（Ｐ）−ＣＤＨを生産する
との報告（特開昭５３−５６０９０）も廿が、酵素学的
性質等の記載はほとんどなされていないばかりか、ＮＡ
Ｄ（Ｐ）依存性の記載があるにもかかわらず、ＮＡＤ（
Ｐ）の存在なしにも反応が進行する例が記載されている
。したがってこの酵素は、本発明でいうステロールオキ
シダーゼを使用する方法が広く用いられているが、発色
系に導くためにパーオキシダーゼ等が必要であり、操作
が繁雑である。しかも血中のビリルビン、アスコルビン
酸等により影響をうけ、これにより誤差が生じやすいと
いう欠点を有している。コレステロールの定量において
、ＮＡＤ［Ｆ］の存在なしには反応が進行しないＮＡＤ
［Ｆ］−ＣＤＨを用い、下記反応式に示される反応によ
り生ずるＮ Ａ Ｄ（ＰＩＨを直接光度計で測定できれ
ば、操作が簡単であり、前記のコレステロールオキシダ
ーゼを用いる方法の種々の問題も解決される。
との報告（特開昭５３−５６０９０）も廿が、酵素学的
性質等の記載はほとんどなされていないばかりか、ＮＡ
Ｄ（Ｐ）依存性の記載があるにもかかわらず、ＮＡＤ（
Ｐ）の存在なしにも反応が進行する例が記載されている
。したがってこの酵素は、本発明でいうステロールオキ
シダーゼを使用する方法が広く用いられているが、発色
系に導くためにパーオキシダーゼ等が必要であり、操作
が繁雑である。しかも血中のビリルビン、アスコルビン
酸等により影響をうけ、これにより誤差が生じやすいと
いう欠点を有している。コレステロールの定量において
、ＮＡＤ［Ｆ］の存在なしには反応が進行しないＮＡＤ
［Ｆ］−ＣＤＨを用い、下記反応式に示される反応によ
り生ずるＮ Ａ Ｄ（ＰＩＨを直接光度計で測定できれ
ば、操作が簡単であり、前記のコレステロールオキシダ
ーゼを用いる方法の種々の問題も解決される。
コレステロール＋ＮＡＤ［Ｆ］＝コレステノン＋ＮＡＤ
■Ｈ 本発明者等は、上記反応に適した酵素すなわち、コレス
テロールに特異性が高（、ＮＡＤ■依存性である脱水素
酵素を広く自然界に求めたところ、意外にも好気的条件
下に生育する微生物が、著量のＮＡＤ（Ｐ）−ＣＤＨを
生産することを見い出した。
■Ｈ 本発明者等は、上記反応に適した酵素すなわち、コレス
テロールに特異性が高（、ＮＡＤ■依存性である脱水素
酵素を広く自然界に求めたところ、意外にも好気的条件
下に生育する微生物が、著量のＮＡＤ（Ｐ）−ＣＤＨを
生産することを見い出した。
ネスｓｐ、Ｎｎ ４ （Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｓｐ
、Ｎａ ４ ）およびプロテウス−ブルガリＸ ＩＡＭ
１０２５ （Ｐｒｏｔｅｕｓｖｕｌｇａｒｉｓ ＩＡＭ
１０２５）が例示される。
、Ｎａ ４ ）およびプロテウス−ブルガリＸ ＩＡＭ
１０２５ （Ｐｒｏｔｅｕｓｖｕｌｇａｒｉｓ ＩＡＭ
１０２５）が例示される。
次にノカルジアｓｐ４．ｃｉ１ およびアルカリゲネス
Ｈｐ−Ｎｎ４の菌学的性質を以下に述べる。
Ｈｐ−Ｎｎ４の菌学的性質を以下に述べる。
（１）ノカルジアｓｐ、嵐ｃｈ２−１
キ（Ｎｏｃａｒｄｉａ ｓｐ、 ！’！１ｃｈ２ １
）の菌学的性質に生育し分岐を生する。その後、不規則
な分断が生じ細胞は、桿菌状となる。大きさは０．８〜
１゜０μ×１．５〜４．０μ位である。
）の菌学的性質に生育し分岐を生する。その後、不規則
な分断が生じ細胞は、桿菌状となる。大きさは０．８〜
１゜０μ×１．５〜４．０μ位である。
気菌糸を形成せず胞子のう胞子も形成しない。
２）ダラム染色性二陽性
３）抗酸性：陽性
４）運動性：無し
０ 化学的組成分析
ジアミノピメリン酸、グリシンは含まない。
（Ｑ 各培地における生育状態
１）肉汁寒天平板培地＝３０°Ｃで４日培養後、直径０
．５〜１．Ｑｍｍの円形コロニーを形成する。。周辺は
金縁もしくは、波状である。
．５〜１．Ｑｍｍの円形コロニーを形成する。。周辺は
金縁もしくは、波状である。
表面、は平滑で半球状であり、中心部が凸状に隆起する
場合もある。色調は薄いクリーム色で不透明である。培
地中に色素は出さない。
場合もある。色調は薄いクリーム色で不透明である。培
地中に色素は出さない。
２）シ、−クロース硝酸塩寒天培地
生育中程度で集落の色は白色ないし薄クリーム色である
。水溶性色素は出さない。
。水溶性色素は出さない。
３）グルコース・アスパラギン寒天培地生育中程度で集
落の色はクリーム色である。水溶性色素は出さない。
−４）グリセリン・アスパラギン寒天培地生育
中程度で集落の色は泊色ないし薄クリーム色である。水
−溶性色素は出さない。
落の色はクリーム色である。水溶性色素は出さない。
−４）グリセリン・アスパラギン寒天培地生育
中程度で集落の色は泊色ないし薄クリーム色である。水
−溶性色素は出さない。
５）スターチ無機塩寒天培地
生育中程度で集落の色は白色ないし薄クリーム色である
。水溶性色素は出さない。
。水溶性色素は出さない。
６）チロシン寒天培地
生育中程度で集落の色は白色ないし薄クリーム色である
。水溶性色素は出さない。
。水溶性色素は出さない。
７）栄養寒天培地
生育良好で集落の色はクリーム色である。
水溶性色素は出さない。
８）イースト麦芽寒天培地
生育良好で集落の色はクリーム色である。
水溶性色素は出さない。
９）オートミール寒天培地
生育中程度で集落の色は白色ないし薄クリーム色である
。水溶性色素は出さない。
。水溶性色素は出さない。
０ 生理的性質
１）生育温度：１５°Ｃ〜４３°Ｃで生育する。
１０°Ｃ１４５°Ｃで生育しな（，１゜最適温度は３０
〜３５°Ｃであ る。
〜３５°Ｃであ る。
２）硝酸塩還元性：陽性
３）カタラーゼ：陽性
４）オキシ−１−ゼ：陰性
５）ウレアーゼ：陽性
６）デンプン加水分解：陰性
７）ゼラチン液化：陰性
１０）キサンチン加水分解：陰性
１１） ＤＮＡの分解：陰性
１２）リドマスミルク：アルカリ性、ペプトン化凝固共
にしない。
にしない。
１３）メラニン様色素の生成：無し
１４）エスクリン加水分解：陽性。
１５） Ｔｗｅｅｎ２０−４０−６０−８０加水分解
：すべて陽性 １６）ペニシリン耐性試験：耐性 １７）酸素に対する態度：好気性 １８）無機窒素源の利用：アンモニウム塩、硝酸塩共に
利用する。
：すべて陽性 １６）ペニシリン耐性試験：耐性 １７）酸素に対する態度：好気性 １８）無機窒素源の利用：アンモニウム塩、硝酸塩共に
利用する。
α
１９） Ｎａｉ生育範囲＝θ〜６％で生育する。
７％で生育しない。
２０）各種炭素源の同化性（プリドハム、ゴドリーブ寒
天培地） Ｄ−グルコース、Ｄ−フラクトース、 マンノース、グリセリン、トレハロー し スを同化する。←−アラビノース、Ｄ −キシロース、す↓カロース、イノシ し フト、敬−ラムノース、ラフィノース、Ｄ−ガラクトー
ス、Ｄ−マンニット、〜マルトース、ソルビットを同化
しない。
天培地） Ｄ−グルコース、Ｄ−フラクトース、 マンノース、グリセリン、トレハロー し スを同化する。←−アラビノース、Ｄ −キシロース、す↓カロース、イノシ し フト、敬−ラムノース、ラフィノース、Ｄ−ガラクトー
ス、Ｄ−マンニット、〜マルトース、ソルビットを同化
しない。
２１）各稲穂から酸の生成
り−グルコース、マンノース、Ｄ−フ
ラクトース、トレハロース、グリセリ
し
ンから酸を生成する。トーアラビノー
ス、Ｄ−キシロース、Ｄ−ガラクトー
ス、マルトース、サッカロース、ラフ
−ドース、Ｄ−ソルビット、Ｄ−マンニット、イノシフ
ト、デンプンから酸を 生成しない。
ト、デンプンから酸を 生成しない。
以上の菌学的性質をＢｅｒｇｅｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ
ｏｆＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ
ｏｇｙ第８版を参考に検討した結果、細胞壁中にｍｅｓ
ｏ−ジアミノピメリン酸、アラビノース、ガラクトース
を含み、騰−ジアミノピメリン酸、グリシンが含まれな
いこと、好気性で菌糸状によく生育し、後に分断して桿
菌状となること、抗酸性であること、胞子のる胞子お゛
よび気菌糸を着生しないこと等から本菌はＮｏｃａｒｄ
ｉａに属する菌である。
ｏｆＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ
ｏｇｙ第８版を参考に検討した結果、細胞壁中にｍｅｓ
ｏ−ジアミノピメリン酸、アラビノース、ガラクトース
を含み、騰−ジアミノピメリン酸、グリシンが含まれな
いこと、好気性で菌糸状によく生育し、後に分断して桿
菌状となること、抗酸性であること、胞子のる胞子お゛
よび気菌糸を着生しないこと等から本菌はＮｏｃａｒｄ
ｉａに属する菌である。
よって本菌は、本発明音らがノカルジアｓｐ。
（Ｎｏｃａｒｄｉａ ｓｐ、 ） Ｎ１１Ｃｈ２−１と
命名し、工業技術院微生物工業技術研究所に菌寄第６２
１７号（ＦＥＲＭ−Ｐ嵐６２１７）として寄託されてい
る。
命名し、工業技術院微生物工業技術研究所に菌寄第６２
１７号（ＦＥＲＭ−Ｐ嵐６２１７）として寄託されてい
る。
（ｚ）アルカリケネスＳｐ、Ｎ１１４
爆Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｓｐ、 Ｎ［１４の菌学的
性質■形 態 １）細胞の形および大きさ：０．４〜０．６μ×０．８
〜１．２μの桿菌である。
性質■形 態 １）細胞の形および大きさ：０．４〜０．６μ×０．８
〜１．２μの桿菌である。
２）細胞の多形性の有無：多形性は認められ４）胞子の
有無：胞子は形成しない。
有無：胞子は形成しない。
５）ダラム染色性：陰性
６）抗酸性：陰性
（ロ）各培地における生育状態
１）肉汁寒天平板培養
円形コロニーで表面は平滑、半レンズ状の隆起、全縁状
で薄クリーム色、半透明、光沢あり ２）肉汁寒天斜面培養 生育中程度、糸状に生育、薄クリーム色で半透明 ３）肉汁液体培養 菌膜をつくらない、やや濁り洗上も少しある。
で薄クリーム色、半透明、光沢あり ２）肉汁寒天斜面培養 生育中程度、糸状に生育、薄クリーム色で半透明 ３）肉汁液体培養 菌膜をつくらない、やや濁り洗上も少しある。
４）肉汁ゼラチン穿刺培養：ゼラチンは液化しない。
５）リドマスミルク培養：アルカリ性になるがペプトン
化し−ない、凝固しない。
化し−ない、凝固しない。
０ 生理的性質
１）硝酸塩の還元：陽性
２）脱窒反応：陰性
５）インドールの生成：陰性
６）硫化水素の生成：間隔性
７）デンプン加水分解：陰性
８）り・エン酸塩の利用： Ｋｏｓｅｒの培地とＣｈｒ
ｉｓｔｅｎｓｅｎの培地で共に利用する。
ｉｓｔｅｎｓｅｎの培地で共に利用する。
９）無機窒素源の利用：硝酸塩およびアンモ′三）ム塩
を利用する。
を利用する。
１０）色素の生成：水溶性色素を生成しない。
１１）ウレアーゼ：陰性、間隔性
１２）オキシダーゼ：陽性
１３）カタラーゼ：陽性
１４）生育範囲ＰＨ：ＰＨ５，０〜１０．０テ生育する
。
。
温度：５°Ｃ〜３７°Ｃで生育す
る。
４２°Ｃで生育しない。
１５）酸素に対する態度：好気性
１６） ＯＦテスト（Ｈｕｇｈ −Ｌｅ ｉ ｆ ｓ
ｏｎ法）：フラクトースから好気的に酸を生成する。
ｏｎ法）：フラクトースから好気的に酸を生成する。
・１７）糖類から酸およびガスの生成の有無Ａｙｅｒｓ
、 Ｒｕｐｐ ａｎｄ Ｊｏｈｎｓｏｎの培地でフラク
トースとグリセリンから酸を生成 ス、マンノース、ガラクトース、麦芽 糖、シロ糖、乳糖、トレハロース、ソ ルビット、マンニット、イノシフト、 デンプンからは酸もガスも生成しない。
、 Ｒｕｐｐ ａｎｄ Ｊｏｈｎｓｏｎの培地でフラク
トースとグリセリンから酸を生成 ス、マンノース、ガラクトース、麦芽 糖、シロ糖、乳糖、トレハロース、ソ ルビット、マンニット、イノシフト、 デンプンからは酸もガスも生成しない。
１８）独立栄養的生育：水素ガス、炭酸ガス、酸素ガス
を含有する気体中で生育し ない。
を含有する気体中で生育し ない。
１ｇ） Ｔｗｅｅｎ ８０ ノ分解性： 陽性２０）
資化性： Ｄ−フラクトース、曝−フェニルアラニ
ン、レブリン酸カルシ ラム、参−スレオニンを資化ス る。マンノース・、マルトース、 マンニット、ベタインを資化し ない。
資化性： Ｄ−フラクトース、曝−フェニルアラニ
ン、レブリン酸カルシ ラム、参−スレオニンを資化ス る。マンノース・、マルトース、 マンニット、ベタインを資化し ない。
以上の菌学的諸性質からＢｅｒｇｃｙ’ｓ ｍａｎｕａ
ｌ、 ｏｆ −Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ Ｂａｃｔ
ｅｒｉｏｌｏｇｙ （第８版）の記載に照合して検討す
ると短桿菌で周ペン毛により運動ること、カゼインおよ
びゼラチンを分解しないこと、オキシダーゼ陽性である
こと等からＡｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ属に分類される。
ｌ、 ｏｆ −Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ Ｂａｃｔ
ｅｒｉｏｌｏｇｙ （第８版）の記載に照合して検討す
ると短桿菌で周ペン毛により運動ること、カゼインおよ
びゼラチンを分解しないこと、オキシダーゼ陽性である
こと等からＡｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ属に分類される。
生育の点で異なる。またＡ、ｆａｅｃａｌｉｓとは主に
４２０Ｃにおける生育、Ｄ−７ラクトースの資化性で古 Ａ、ａ＠ｖａｍａｒｉｎｅｓとは主にデンプンの分解性
、マルトースの資化性で、Ａ、ｐａｃｉｆｉｃｕｓとは
主にスレオニンζ′ｒ”４％インの資化性で、Ａ、ｃｕ
ｐｉｄｕｓとは主にニン、ベタインの資化性で、Ａ、ａ
ｅｓｔｕｓとは主にマンニット、スレオニン、フェニル
アラニンの資化性で異なる。
４２０Ｃにおける生育、Ｄ−７ラクトースの資化性で古 Ａ、ａ＠ｖａｍａｒｉｎｅｓとは主にデンプンの分解性
、マルトースの資化性で、Ａ、ｐａｃｉｆｉｃｕｓとは
主にスレオニンζ′ｒ”４％インの資化性で、Ａ、ｃｕ
ｐｉｄｕｓとは主にニン、ベタインの資化性で、Ａ、ａ
ｅｓｔｕｓとは主にマンニット、スレオニン、フェニル
アラニンの資化性で異なる。
よって本菌は本発明者がアルカリゲネスｓｐ。
（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｓｐ、）％４と命名し、工
業技術院微生物工業技術研究所に菌寄第６２１６号（Ｆ
ＥＲＭＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ （第８版）■ Ｊ、
Ｂａｃｔ、１１０Ｑ）４０２ ４２９（１９７２）■
坂崎和−訳：医学細菌同定の手びき（２版）近代出版、
東京、１９７４ 次にこれらの菌を用いてＮＡＤ（Ｐｉ−ＣＤＨを製造す
る方法について詳述する。これらの菌はいづれも構成的
にＮＡＤ（Ｐ） −ＣＤＨを生産する能力を有し、通常
のペプトン、酵母エキス又は硫酸アンモニウム等のチッ
ソ源及びグルコース、グリセロール等の炭素源、その他
無機塩等を含有する培地でもＮＡＤ■−ＣＤＨを生産す
るが、コレステロールを培地に添加することによりさら
に多量にＮＡＤ（Ｐｉ−ＣＤＨを生産する。この際コレ
ステロールの添加は、培養開始時あるいは途中からのい
ずれでもよい。またその他培養条件に関しては、通常行
なわれる範囲で実施できる。これらの菌によ素を回収す
ることができる。これらの培養濾液又は菌体抽出液を硫
酸アンモニウム等による塩析又は、アセトン、エタノー
ル等の溶剤沈澱して得た粗酵素は、そのままコレステロ
ールの定量に使用す衣か、あるいは更に精製して使用す
ることもてマ の方法により可能である。
業技術院微生物工業技術研究所に菌寄第６２１６号（Ｆ
ＥＲＭＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ （第８版）■ Ｊ、
Ｂａｃｔ、１１０Ｑ）４０２ ４２９（１９７２）■
坂崎和−訳：医学細菌同定の手びき（２版）近代出版、
東京、１９７４ 次にこれらの菌を用いてＮＡＤ（Ｐｉ−ＣＤＨを製造す
る方法について詳述する。これらの菌はいづれも構成的
にＮＡＤ（Ｐ） −ＣＤＨを生産する能力を有し、通常
のペプトン、酵母エキス又は硫酸アンモニウム等のチッ
ソ源及びグルコース、グリセロール等の炭素源、その他
無機塩等を含有する培地でもＮＡＤ■−ＣＤＨを生産す
るが、コレステロールを培地に添加することによりさら
に多量にＮＡＤ（Ｐｉ−ＣＤＨを生産する。この際コレ
ステロールの添加は、培養開始時あるいは途中からのい
ずれでもよい。またその他培養条件に関しては、通常行
なわれる範囲で実施できる。これらの菌によ素を回収す
ることができる。これらの培養濾液又は菌体抽出液を硫
酸アンモニウム等による塩析又は、アセトン、エタノー
ル等の溶剤沈澱して得た粗酵素は、そのままコレステロ
ールの定量に使用す衣か、あるいは更に精製して使用す
ることもてマ の方法により可能である。
ここで得られるＮＡＤ■−ＣＤＨは、コレステロール含
有物質中のコレステロールの定量に使用でき、例えば、
血液、血中のコレステロール定量等に有利に使用できる
。
有物質中のコレステロールの定量に使用でき、例えば、
血液、血中のコレステロール定量等に有利に使用できる
。
本発明に使用するＮＡＤ（Ｐｉ−ＣＤＨの活性測定法を
以下に示す。
以下に示す。
ＮＡＤ（Ｐ）−ＣＤＨの酵素活性は、コレステロ−と
ルとＮＡＤ［Ｆ］Ｎ基質として反応した場合のＮＡＤ（
ＰＩＨの生成量−を、３４０Ｑｍにおける吸光度の増加
として、分光光度計で測定し算出する。すなわち、０．
１Ｍトリス・塩酸緩衝液（ＰＨ８，６）２．６５ ｍｌ
。
ＰＩＨの生成量−を、３４０Ｑｍにおける吸光度の増加
として、分光光度計で測定し算出する。すなわち、０．
１Ｍトリス・塩酸緩衝液（ＰＨ８，６）２．６５ ｍｌ
。
２８ｍＭＮＡＤ溶液０．１ｍｌ、（８％トリト＞Ｘ−１
００溶液０−１５ｍＪ ）、１％コレステロール溶液０
．０５ ｍｌ及びＮＡＤ（Ｐ） −ＣＤＨ水溶液０．０
５ｍＺを混合し、３０°Ｃで反応させ、反応開始後１分
間の３４０ｍｍにおける吸光度の増加を測定する。
００溶液０−１５ｍＪ ）、１％コレステロール溶液０
．０５ ｍｌ及びＮＡＤ（Ｐ） −ＣＤＨ水溶液０．０
５ｍＺを混合し、３０°Ｃで反応させ、反応開始後１分
間の３４０ｍｍにおける吸光度の増加を測定する。
対照として上記組成でコレステロールの代りに水を用い
同様の操作を行ない、対照液の３４０ｍｍにおける吸光
度の増加を試験液のそれから差し引く。得られた値から
ＮＡＤ（Ｐ）Ｈの生成量を求め、これより試料中のＮＡ
Ｄ（Ｐ）−ＣＤＨ活性を算出する。
同様の操作を行ない、対照液の３４０ｍｍにおける吸光
度の増加を試験液のそれから差し引く。得られた値から
ＮＡＤ（Ｐ）Ｈの生成量を求め、これより試料中のＮＡ
Ｄ（Ｐ）−ＣＤＨ活性を算出する。
酵素活性の表示は、ＰＨ８，６，３００Ｃの条件下で１
分間に１μｍｏ１６のＮＡＤ■Ｈを生成する酵素を１単
位とした。
分間に１μｍｏ１６のＮＡＤ■Ｈを生成する酵素を１単
位とした。
次に本発明に使用するＮＡＤ（Ｐ）−ＣＤＨの作用を示
す。
す。
コレステロール＋ＮＡＤ（Ｐ）−：コレステノン＋ＮＡ
Ｄ（ＰｌＨ 本発明におけるＮＡＤ■−ＣＤＨは全てこの反応を触媒
する。
Ｄ（ＰｌＨ 本発明におけるＮＡＤ■−ＣＤＨは全てこの反応を触媒
する。
以下に本発明に使用するＮＡＤ（Ｐ）％ＣＤＨの一般的
性質をノカルジアｓｐ、 ＮｎＣｈ２−１（Ｎｏｃａｒ
ｄｉａｓｐ、ＮｎＣｈ２７１）及びにルヵリゲネス８１
）−Ｎａ４（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｓｐ、 Ｎａ４
） の生産するものについて示す。
性質をノカルジアｓｐ、 ＮｎＣｈ２−１（Ｎｏｃａｒ
ｄｉａｓｐ、ＮｎＣｈ２７１）及びにルヵリゲネス８１
）−Ｎａ４（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｓｐ、 Ｎａ４
） の生産するものについて示す。
≠母系４゜
１）至適ＰＨ
第１図に３０°ＣにおけるＰＨと活性の関係を示した。
２）ＰＨ安定性
第２図に３７°ＣにおけるＰＨと安定性の関係を示した
。
。
３）至適温度
第３図にＰＨ８，５における温度と活性の関係を示した
。
。
４）熱安定性
第４図にＰＨ７，Ｑにおける温度と安定性の関係を示し
た。
た。
５）基質特異性
本酵素は、３ｐ位に水酸基をもつステロイドに反応し、
コレステロールを１００とスルテ とスティグマスチロール３５、β−シトステロール２５
、ソの他デヒドロエピアン、トロステロン、エルゴステ
ロール等にわずかに作用する。
コレステロールを１００とスルテ とスティグマスチロール３５、β−シトステロール２５
、ソの他デヒドロエピアン、トロステロン、エルゴステ
ロール等にわずかに作用する。
６）補酵素
ＮＡＤを要求する。
■ アルカリゲネスｓｐ、Ｎｎ４ （Ａｌｃａｌｉｇｅ
ｎｅｓ ８ｐ。
ｎｅｓ ８ｐ。
隘４）の生産するＮＡＤ（Ｐｉ−ＣＤＨＵ 至適ＰＨ
第５図に３０８ＣにおけるＰＨと活性の関係を示した。
２ ＰＨ安定性
第６図に３７°Ｃに１．けるＰＨと安定性の関係を示し
た。
た。
３ 至適温度
第７図にＰＨ８，６における温度と活性の関係を示した
。
。
４ 熱安定性
第８図にＰ Ｈ７，９における温度と安定性の関係を示
した。
した。
５ 基質特異性
本酵素は３ｐ位に水酸性をもつステロイドに反応し、コ
レステロールを１００とするとβ−シトステロール３６
、スチグマステロール２０．その他デヒドロエピアンド
ロステロン、エルゴステロール等にわずかに作用する。
レステロールを１００とするとβ−シトステロール３６
、スチグマステロール２０．その他デヒドロエピアンド
ロステロン、エルゴステロール等にわずかに作用する。
６ 補酵素
ＮＡＤを要求する。
次に本発明のＮＡＤ（Ｐ）−ＣＤＨを使用したコレステ
ロールの定量について詳述する。
ロールの定量について詳述する。
コレステロールを定量する場合、実際には緩衝液、Ｎ
Ａ Ｄ （Ｐｉ、基質（血清、コレステロール等）及び
ＮＡＤ（Ｐ）−ＣＤＨを混合し、一定時間反応し、生成
するＮ Ａ Ｄ（ＰＩＨの増加を吸光度３４０λｍで測
定する。また必要に応じて、生成したＮＡＤ［Ｆ］Ｈの
水素を７エナジンメソサルフエート（ＰＭＳ ）、ジア
フォラーゼ等により、ホルマザン色素等の発び安定化剤
等の添加も可能である。反応時のＰＨは６〜１０の範囲
で実施できるが、優れているＰＨ範囲は７〜９である。
Ａ Ｄ （Ｐｉ、基質（血清、コレステロール等）及び
ＮＡＤ（Ｐ）−ＣＤＨを混合し、一定時間反応し、生成
するＮ Ａ Ｄ（ＰＩＨの増加を吸光度３４０λｍで測
定する。また必要に応じて、生成したＮＡＤ［Ｆ］Ｈの
水素を７エナジンメソサルフエート（ＰＭＳ ）、ジア
フォラーゼ等により、ホルマザン色素等の発び安定化剤
等の添加も可能である。反応時のＰＨは６〜１０の範囲
で実施できるが、優れているＰＨ範囲は７〜９である。
次にＮＡＤ（Ｐ）−ＣＤ？Ｉによるコレステロール定量
用試薬の量的組成についての１例を述べれば、反応系３
ｍ／当り、ＮＡＤ（Ｐ）−Ｃ，ＤＨｏ、１〜１０単２ｏ
ｏｒｐｍ）Ｌ／ながら４０時間培養した。
用試薬の量的組成についての１例を述べれば、反応系３
ｍ／当り、ＮＡＤ（Ｐ）−Ｃ，ＤＨｏ、１〜１０単２ｏ
ｏｒｐｍ）Ｌ／ながら４０時間培養した。
菌体を破砕した。この菌体破砕液を遠心分離（１１００
０ｒｐ、 １９分間）し、清澄な菌体抽出液を得た。得
られた清澄液に硫酸アンモニウムを３５％飽和になるよ
うに加え酵素を沈澱せしめた。
０ｒｐ、 １９分間）し、清澄な菌体抽出液を得た。得
られた清澄液に硫酸アンモニウムを３５％飽和になるよ
うに加え酵素を沈澱せしめた。
沈澱を遠心分離（８０００ｒｐｍ １０分間）で集め２
０ｍＭリン酸緩衝液ＰＨ７，０，１００ｍＺに溶かし、
セロファンチューブで、２０ｍＭリン酸緩衝液ＰＨ７，
０に対して２４時間透析した。
０ｍＭリン酸緩衝液ＰＨ７，０，１００ｍＺに溶かし、
セロファンチューブで、２０ｍＭリン酸緩衝液ＰＨ７，
０に対して２４時間透析した。
次に得られた透析液を２０ｍＭＩＪン酸緩衝液ＰＨ７，
０で平衡化したＤＥＡＥ・セルロース２００ｍｘを充填
したカラムに通し、酵素を吸着せしめた。同様の緩衝液
でカラムを洗浄後、緩衝液濃度を０．１Ｍに上げてＮＡ
Ｄ■−ＣＤＨを溶出した。ＮＡＤ［Ｆ］−ＣＤＨを含む
両分を集め、これを濃縮後２０ｍＭリン酸緩衝液Ｐ ’
Ｈ７，０に対して透析した。これを同様の緩衝液で平衡
化したヘキシルセフ１０−ス２９ ｍ ｌを充填したカ
ラムに通し、吸着せしめた。
０で平衡化したＤＥＡＥ・セルロース２００ｍｘを充填
したカラムに通し、酵素を吸着せしめた。同様の緩衝液
でカラムを洗浄後、緩衝液濃度を０．１Ｍに上げてＮＡ
Ｄ■−ＣＤＨを溶出した。ＮＡＤ［Ｆ］−ＣＤＨを含む
両分を集め、これを濃縮後２０ｍＭリン酸緩衝液Ｐ ’
Ｈ７，０に対して透析した。これを同様の緩衝液で平衡
化したヘキシルセフ１０−ス２９ ｍ ｌを充填したカ
ラムに通し、吸着せしめた。
このカラムを２０ｍＭリン酸緩衝波緩衝液７．９で洗浄
び した。次に０−５ＭＮａ−を含む同様の緩衝液でＮＡＤ
（Ｐ）−ＣＤＨを溶出し、活性画分を集め、濃縮し、５
０単位／ｍ ｌのＮＡＤ（Ｉ’ｊ−ＣＤＨ溶液５．Ｑｍ
Ｚを得た。全体の活性収率は３０％であった。
び した。次に０−５ＭＮａ−を含む同様の緩衝液でＮＡＤ
（Ｐ）−ＣＤＨを溶出し、活性画分を集め、濃縮し、５
０単位／ｍ ｌのＮＡＤ（Ｉ’ｊ−ＣＤＨ溶液５．Ｑｍ
Ｚを得た。全体の活性収率は３０％であった。
実施例２
Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｇｐ、Ｎｂ２ （ＦＥＲＭ−
ＰＮｏ６２１６）をコレステロール’１０ｇ／ｌ、グリ
セロール２ｇ／’ｓ コーンスチープリカ−５ｇ／ｌ
、 ＫＨｚ ＰＯ４５ｇ／ｌ １Ｍｇ５Ｃ）４７ Ｈ２
Ｏ９，２ｇ７ ｔ 、消泡剤０．５ｇ／ｌの組成よりな
る培地に培養し、実施例１と同様の操作を行ない、４０
単位／ｍｌのＮＡＤ（Ｐ）−ＣＤＨ溶液を５．ＱｍＺ得
た。全体の活性収率は４０％であった。
ＰＮｏ６２１６）をコレステロール’１０ｇ／ｌ、グリ
セロール２ｇ／’ｓ コーンスチープリカ−５ｇ／ｌ
、 ＫＨｚ ＰＯ４５ｇ／ｌ １Ｍｇ５Ｃ）４７ Ｈ２
Ｏ９，２ｇ７ ｔ 、消泡剤０．５ｇ／ｌの組成よりな
る培地に培養し、実施例１と同様の操作を行ない、４０
単位／ｍｌのＮＡＤ（Ｐ）−ＣＤＨ溶液を５．ＱｍＺ得
た。全体の活性収率は４０％であった。
実施例３
Ｐｒｏｔｅｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ ＩＡＭ１０２５を
用い、実施例１に準する操作を行ない、３７単位／ｍ／
のＮＡＤ（Ｐ）−ＣＤＨ溶液溶液４憂ｌた。全体の活性
収率は５２％であった。
用い、実施例１に準する操作を行ない、３７単位／ｍ／
のＮＡＤ（Ｐ）−ＣＤＨ溶液溶液４憂ｌた。全体の活性
収率は５２％であった。
実施例４
実施例１で得られたＮＡＤ（Ｐｌ−ＣＤＨを用い、標準
血清におけるコレステロールの定量を行なった。
血清におけるコレステロールの定量を行なった。
０．１Ｍトリス塩酸緩衝液Ｐ Ｈ８，６，２，７１ｍＪ
１禾８％トリトンＸ−１０００，１ｍ／％ ＮＡＤ２
００ｍｇ／ｍｌ 溶液０．１ｍ／Ｎコレステロールエス
テラーゼ（°ベーリンガー社製）１００単位７’ｍ！溶
液０−０５ｍ／。
１禾８％トリトンＸ−１０００，１ｍ／％ ＮＡＤ２
００ｍｇ／ｍｌ 溶液０．１ｍ／Ｎコレステロールエス
テラーゼ（°ベーリンガー社製）１００単位７’ｍ！溶
液０−０５ｍ／。
標準血清ｏ、ｏ２ｍｔを混合し、３０°Ｃで反応させ、
３４０ｎｍにおける吸光度の増加を測定した。反応は３
分以内に終点に達した。
３４０ｎｍにおける吸光度の増加を測定した。反応は３
分以内に終点に達した。
対照として上記反応組成物のＮＡＤ（Ｐ）−ＣＤＨの代
りに水を用い同様の操作を行ない対照液の３４０ｎｍに
おける吸光度の増加を試験液のそれから差し引いた。
りに水を用い同様の操作を行ない対照液の３４０ｎｍに
おける吸光度の増加を試験液のそれから差し引いた。
この標準血清における総コレステロール量は、あらかじ
め作成した検量線より、コレステロール２８９ ｍｇ
／１３’ｔの値が得られた。 コレステロールオキシダ
ーゼを含む、市販の測定用試薬を用い行なった比較測定
からは、コレステロール２９０ｒｒｇＡｘ ｌの値が得
られた。
め作成した検量線より、コレステロール２８９ ｍｇ
／１３’ｔの値が得られた。 コレステロールオキシダ
ーゼを含む、市販の測定用試薬を用い行なった比較測定
からは、コレステロール２９０ｒｒｇＡｘ ｌの値が得
られた。
実施例５
実施例２〜実施例３で得られたＮＡＤ■−ＣＤＨを用い
、実施例゛４に準じた操作を行ない、実質的には同じ結
果が得られた。
、実施例゛４に準じた操作を行ない、実質的には同じ結
果が得られた。
実施例６
実施例１で得られたＮＡＤ（Ｐ）−ＣＤＨを使用し、実
施例４と同様の操作により、各種血清サンプルのコレス
テロールを定量１ハ以下の結果を得た。
施例４と同様の操作により、各種血清サンプルのコレス
テロールを定量１ハ以下の結果を得た。
１ ２８９ ｍｇ／ｄｌ ２９０ ｍｇ／
ｄ１２ １５０ １４６ ３ ２１９ ２２１ ４ １４３ １４３ ５ １７３ １７０
ｄ１２ １５０ １４６ ３ ２１９ ２２１ ４ １４３ １４３ ５ １７３ １７０
第１図はノカルジアｓｐ、陥Ｃｈ２−ＩＦＥＲＭ−ＰＮ
［１６２１７の生産するＮＡＤ（Ｐ）−ＣＤＨの３０°
Ｃにおける至適ＰＨを示す図であり、第２図は本ＮＡＤ
の−ＣＤＨの３７°ＣにおけるＰＨ安定性を示す図であ
り、第３図は本ＮＡＤ（Ｐ）−ＣＤＨの至適温度を示す
図であり、第４図は本ＮＡＤ（Ｐ）−ＣＤＨの熱安定性
を示す図である。 第５図はアルカリゲネスｓｐ、 Ｎ１１４ ＦＥＲＭ−
Ｐ尚６２１６の生産するＮＡＤ（Ｐ）−ＣＤＨの３０℃
における至適ＰＨを示す図であり、第６−図は本ＮＡＤ
［Ｆ］−ＣＤＨの至適温度を示す図であり、第８図は本
ＮＡＤ［Ｆ］−ＣＤＨの熱安定性を示す図である。 第１図 ７ ８ ９ Ｈ 第２図 第８図 温度 第４図 温度 Ｄ ｔ ７ １５ ９ １０ １１Ｈ 第７図 温度 第８図 温度 手続補正書（方式） ％式％ ！、事件の表示 昭和５６年特許願第１８６１８４号 ２、発明の名称 ＮＡＤ（Ｐ）依存性コレステロール脱水素酵素を使用す
るコレステロールの定量法およびその定量用試薬 ３、補正をする者 事件との関係 特許出願人 住所 愛知県名古屋市中区錦−丁目２番７号６、補正の
内容 明細書第２９ページ第７行「・・・・・・至適ｐＨを示
す図であり、」の後に次の文を加入する。 ［第７図は本ＮＡＤ（Ｐ）−ＣＤＨの３７℃におけるｐ
Ｈ安定性を示す図であり、」
［１６２１７の生産するＮＡＤ（Ｐ）−ＣＤＨの３０°
Ｃにおける至適ＰＨを示す図であり、第２図は本ＮＡＤ
の−ＣＤＨの３７°ＣにおけるＰＨ安定性を示す図であ
り、第３図は本ＮＡＤ（Ｐ）−ＣＤＨの至適温度を示す
図であり、第４図は本ＮＡＤ（Ｐ）−ＣＤＨの熱安定性
を示す図である。 第５図はアルカリゲネスｓｐ、 Ｎ１１４ ＦＥＲＭ−
Ｐ尚６２１６の生産するＮＡＤ（Ｐ）−ＣＤＨの３０℃
における至適ＰＨを示す図であり、第６−図は本ＮＡＤ
［Ｆ］−ＣＤＨの至適温度を示す図であり、第８図は本
ＮＡＤ［Ｆ］−ＣＤＨの熱安定性を示す図である。 第１図 ７ ８ ９ Ｈ 第２図 第８図 温度 第４図 温度 Ｄ ｔ ７ １５ ９ １０ １１Ｈ 第７図 温度 第８図 温度 手続補正書（方式） ％式％ ！、事件の表示 昭和５６年特許願第１８６１８４号 ２、発明の名称 ＮＡＤ（Ｐ）依存性コレステロール脱水素酵素を使用す
るコレステロールの定量法およびその定量用試薬 ３、補正をする者 事件との関係 特許出願人 住所 愛知県名古屋市中区錦−丁目２番７号６、補正の
内容 明細書第２９ページ第７行「・・・・・・至適ｐＨを示
す図であり、」の後に次の文を加入する。 ［第７図は本ＮＡＤ（Ｐ）−ＣＤＨの３７℃におけるｐ
Ｈ安定性を示す図であり、」
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、ＮＡＤ［Ｆ］依存性コレステロール脱水素酵素を使
用することを特徴とするコレステロールの定量法。 ２、好気的条件下で生育する微生物の培養物から得られ
るＮＡ’Ｄ［Ｆ］依存性コレステロール脱水４素酵素を
使用する特許請求の範囲第１項記載のコレステロールの
定量法０ ３、好気的条件下で生育する微生物がノカルジア属、ア
ルカリ土類金属、プロテウス属の少くとも１種以上であ
る特許請求の範囲第２項記載のコレステロールの定量法
。 ４、 ノカルジア属に属する菌株がノカルシアｓｐ、
Ｎｈ Ｃｈ ２−１ （Ｎｏｃａｒｄｉａ ｓＰ、 ｈ
Ｃｈ２−１ ）ＦＥＲＭ−Ｐ Ｉｋ６２１７である特
許請求の範囲第３項記載のコレステロールの定量法。 ５、 アルカリ土類金属に属する菌株がアルカリゲネス
ｓｐ、 ｈ ４ （Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｓｐ、
Ｎ＆１４ ）ＦＥＲＭ−Ｐ Ｉ’１ｈ６２１６である特
許請求の範囲第３項記載のコレステロールの定量法。 ６、プロテウス属に属する菌株がプロテウス・ブルガリ
スＩＡＭ１０２５（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｖｕ１ｇａｒｉｓ
ＩＡＭ１０２５）である特許請求の範囲第３項記載のコ
レステロールの定量法。 ７、ＮＡＤ［Ｆ］依存性コレステロール脱水素酵素、Ｎ
ＡＤ又はＮＡＤＰを含有するか又はそれらから成ること
を特徴とするコレステロールの定量用試薬。 ８、好、気的条件下で生育する微生物の培養物から得ら
れるＮＡＤ［Ｆ］依存性コレステロール脱水素酵素を含
有する特許請求の範囲第７項記載のコレステロールの定
量用試薬０ ９、好気的条件下で生育する微生物がノカルジア属、ア
ルカリ土類金属、プロテウス属の少くとも１種以上であ
る特許請求の範囲第８項記載のコレステロールの定量用
試薬。 １０． ノカルジア属に属する菌株がノカルジアｓｐ
、 Ｎｏ Ｃｈ ２−１ （Ｎｏｃａｒｄｉａ ８ｐ、
Ｎｈ Ｃｈ ２−１ ）ＦＥＲＭ−Ｐ ＩＶ＆１６２
１７である特許請求の範囲第９項記載のコレステロール
の定量用試薬。 １１、 アルカリ土類金属に属する菌株がアルカリゲ
ネスｓｐ、 Ｎｏ ４ （Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｓ
ｐ、 Ｉｊｈ ４ ）ＦＥＲＭ−Ｐ ＩＶ＆１６２１６
である特許請求の範囲第９項記載のコレステロールの定
量用試薬。 １２、 プロ、テラス属に属する菌株がプロテウス・
ブルガリスＩ ＡＭＩ ０２５ （Ｐｒｏｔｅｕｓ ｖ
ｕｌｇａｒｉ ｓＩＡＭ１０２５）である特許請求の範
囲第９項記載のコレステロールの定量用試薬。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56186184A JPS5889200A (ja) | 1981-11-19 | 1981-11-19 | Ｎａｄ依存性コレステロール脱水素酵素を使用するコレステロールの定量法およびその定量用試薬 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56186184A JPS5889200A (ja) | 1981-11-19 | 1981-11-19 | Ｎａｄ依存性コレステロール脱水素酵素を使用するコレステロールの定量法およびその定量用試薬 |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP16228392A Division JPH08154698A (ja) | 1992-05-27 | 1992-05-27 | コレステロール脱水素酵素を使用するコレステロールの定量法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5889200A true JPS5889200A (ja) | 1983-05-27 |
| JPH0249720B2 JPH0249720B2 (ja) | 1990-10-31 |
Family
ID=16183853
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP56186184A Granted JPS5889200A (ja) | 1981-11-19 | 1981-11-19 | Ｎａｄ依存性コレステロール脱水素酵素を使用するコレステロールの定量法およびその定量用試薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5889200A (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4892816A (en) * | 1984-10-31 | 1990-01-09 | Amano Pharmaceutical Co., Ltd. | Method for the determination of cholesterol |
| US5156966A (en) * | 1989-10-13 | 1992-10-20 | Toyo Jozo Kabushiki Kaisha | L-carnitine dehydrogenase and process for its production |
| WO1998020150A1 (fr) * | 1996-11-07 | 1998-05-14 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Procede de preparation d'un compose destine a baisser le taux de cholesterol |
| DE112007002921T5 (de) | 2006-12-06 | 2009-09-24 | Hemocue Ab | Vorrichtung und Verfahren zur Cholesterinbestimmung |
| WO2015013515A2 (en) | 2013-07-24 | 2015-01-29 | Boston Heart Diagnostics Corporation | Driving patient compliance with therapy |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5661652A (en) * | 1979-10-10 | 1981-05-27 | Miles Lab | Indicator composition of cofactors |
-
1981
- 1981-11-19 JP JP56186184A patent/JPS5889200A/ja active Granted
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5661652A (en) * | 1979-10-10 | 1981-05-27 | Miles Lab | Indicator composition of cofactors |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4892816A (en) * | 1984-10-31 | 1990-01-09 | Amano Pharmaceutical Co., Ltd. | Method for the determination of cholesterol |
| US5156966A (en) * | 1989-10-13 | 1992-10-20 | Toyo Jozo Kabushiki Kaisha | L-carnitine dehydrogenase and process for its production |
| WO1998020150A1 (fr) * | 1996-11-07 | 1998-05-14 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Procede de preparation d'un compose destine a baisser le taux de cholesterol |
| US6485931B2 (en) | 1996-11-07 | 2002-11-26 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Cholesterol dehydrogenase, coprostan-3-one dehydrogenase and 4-cholesten-3-one dehydrogenase, compositions containing the dehydrogenases, and method for reducing amount of cholesterol using the compositions |
| DE112007002921T5 (de) | 2006-12-06 | 2009-09-24 | Hemocue Ab | Vorrichtung und Verfahren zur Cholesterinbestimmung |
| WO2015013515A2 (en) | 2013-07-24 | 2015-01-29 | Boston Heart Diagnostics Corporation | Driving patient compliance with therapy |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0249720B2 (ja) | 1990-10-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPH031949B2 (ja) | ||
| US4317878A (en) | Test composition containing acidic uricase used for quantitative determination of uric acid in sample | |
| JPH0671425B2 (ja) | ウリカ−ゼおよびその製造法 | |
| JPS5889200A (ja) | Ｎａｄ依存性コレステロール脱水素酵素を使用するコレステロールの定量法およびその定量用試薬 | |
| CA1130739A (en) | Lactate oxidase, process for manufacture thereof and analytical method and kit for the use of the same | |
| JPS61128887A (ja) | ペルオキシダ−ゼの製造法 | |
| WO1997031103A1 (fr) | Methode de determination du 1,5-anhydroglucitol | |
| SE432265B (sv) | Sett att framstella sarkosinoxidas genom odling av bacillus sp. nrrl b-11380 | |
| US4753882A (en) | Urease and process for preparation thereof | |
| JP2788174B2 (ja) | 新規なクレアチンアミジノハイドロラーゼ及びその製造法 | |
| JPH05227954A (ja) | 新規なグリセロールデヒドロゲナーゼ、その製法及びその用途 | |
| JPH06169764A (ja) | ソルビトールオキシダーゼ、その製法及びその用途 | |
| US4275161A (en) | Process for the manufacture of L-α-glycerophosphate oxidase | |
| JPS5889183A (ja) | Ｎａｄ（ｐ）依存性コレステロ−ル脱水素酵素の製造法 | |
| JPH1118762A (ja) | １，５−アンヒドログルシトール脱水素酵素及びその製造法 | |
| JPH1118760A (ja) | １，５−アンヒドログルシトール脱水素酵素を産生する細菌株及びその大量増殖方法 | |
| JPH08154698A (ja) | コレステロール脱水素酵素を使用するコレステロールの定量法 | |
| CA1163217A (en) | Process for obtaining glycerol dehydrogenase | |
| JPH0127714B2 (ja) | ||
| JP3778603B2 (ja) | ソルビトールオキシダーゼ、その製造法およびその用途 | |
| JPH0638756B2 (ja) | ピルビン酸オキシダーゼを用いるピルビン酸の測定法およびその試薬 | |
| JPS58129973A (ja) | コレステロ−ルオキシダ−ゼの製造法 | |
| JPH02107186A (ja) | Ｎａｄｈオキシダーゼの製造法 | |
| JP2886846B2 (ja) | １，５−アンヒドログルシトール脱水素酵素及びその製造法 | |
| JPH07265074A (ja) | 新規なクレアチンアミジノハイドロラーゼおよびその用途 |