JPH1192364A - 糖尿病治療剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】有効かつ安全な糖尿病治療剤を提供すること。 【解決手段】式（Ｉ）： 【化１】 で表わされるデフォスタチンまたはその薬理的に許容し
得る塩を有効成分とすることを特徴とする糖尿病治療
剤、および式（II）： 【化２】 で表わされる３，４−ジヒドロキシデフォスタチン異性
体またはその薬理的に許容し得る塩を有効成分とするこ
とを特徴とする糖尿病治療剤。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、糖尿病治療剤に関
する。

【０００２】

【従来の技術】糖尿病は、罹患人数の多い病気であり、
その数は年毎に増加している。また、慢性合併症として
網膜症、腎不全、心筋梗塞等の重篤な症状に進行する可
能性があり、早期に診断、治療を行う必要がある。

【０００３】前記糖尿病の治療剤としては、例えば、イ
ンスリン、合成血糖降下薬等があげられる。

【０００４】しかしながら、前記インスリンは、胃等で
分泌されるペプシン等のタンパク質分解酵素により失活
するため、該インスリンを経口投与することができない
という欠点がある。また、前記インスリンおよび合成血
糖降下薬の過剰投与は低血糖等の人体に有害な症状を引
き起こすという欠点がある。

【０００５】また、わが国の糖尿病患者の95％以上をし
めるインスリン非依存型糖尿病（NIDDM ）の治療剤とし
ては、スルホニル尿素薬、ビグアナイド薬、α- グルコ
シダーゼ阻害剤等の合成薬剤等があげられる。しかしな
がら、前記合成薬剤には、治療効果、安全性等の面で満
足できるものではないという欠点がある。

【０００６】また、前記インスリン非依存型糖尿病に対
する新しい治療薬として、細胞表面にあるインスリン受
容体の活性化をおこない、インスリンの効果を増強する
ことを特徴とするインスリン作用の改善剤が近年開発さ
れており、チアゾリジン誘導体が有効成分として認めら
れているが、糖尿病治療剤として活性がより強くかつ安
全な物質の開発が望まれている。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、前記従来技
術に鑑みてなされたものであり、有効かつ安全な糖尿病
治療剤を提供することを目的とする。

【０００８】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、チロシン
ホスファターゼを阻害する物質が直接的にインスリン受
容体のチロシンキナーゼの活性化を行なうことが期待さ
れ、糖尿病治療剤として有用であると考え、鋭意研究を
重ねた。その結果、従来、チロシンホスファターゼ阻害
活性（基質拮抗阻害）を有する免疫調節剤、抗腫瘍剤等
として知られるデフォスタチン（特開平６−２５６２８
１号公報）が、糖尿病、特にインスリン非依存型糖尿病
に対して優れた糖尿病治療作用を呈するという、まった
く新しい事実を見出した。本発明は、かかる事実に基づ
いて完成されたものである。

【０００９】即ち、本発明は、〔１〕 式（Ｉ）：

【００１０】

【化３】

【００１１】で表わされるデフォスタチンまたはその薬
理的に許容し得る塩を有効成分とすることを特徴とする
糖尿病治療剤、および〔２〕 式（II）：

【００１２】

【化４】

【００１３】で表わされる３，４−ジヒドロキシデフォ
スタチン異性体またはその薬理的に許容し得る塩を有効
成分とすることを特徴とする糖尿病治療剤に関する。

【００１４】

【発明の実施の形態】

本発明の式（Ｉ）：

【００１５】

【化５】

【００１６】で表わされるデフォスタチンは、公知の化
合物であり、特開平６−２５６２８１号公報やJ. Antib
iot.,1995, 46, 9, 1342-1346 に記載のストレプトミセ
ス属に属するストレプトミセス・エスピーＭＪ７４２−
ＮＦ５株（ＦＥＲＭ Ｐ−１３２２３）の培養により得
ることができる。また、培養物から回収された天然のデ
フォスタチンと同等のチロシンホスファターゼ阻害活性
を有するデフォスタチンを合成法により製造することも
できる（J. Chem. Soc. Commun. 1994, pp.437）。

【００１７】また、本発明の式（II）：

【００１８】

【化６】

【００１９】で表わされる３，４−ジヒドロキシデフォ
スタチン異性体は、デフォスタチンより培養液中での安
定性に優れた公知の化合物であり、J. Antibiot., 199
5, 48,12, 1460-1466 に記載の方法により製造すること
ができる。

【００２０】前記デフォスタチンまたは前記３，４−ジ
ヒドロキシデフォスタチン異性体の薬理的に許容し得る
塩は、例えば、J. Antibiot., 1995, 48, 12, 1460-146
6 に記載の方法により製造することができる。

【００２１】前記デフォスタチンまたは前記３，４−ジ
ヒドロキシデフォスタチン異性体の薬理的に許容し得る
塩としては、例えばリチウム塩、ナトリウム塩、カリウ
ム塩等のアルカリ金属塩等があげられる。該薬理的に許
容し得る塩は、単独で又は２種以上を混合して用いるこ
とができる。これらの中では、生体適合性の観点から、
フェノール性水酸基のアルカリ金属塩が好ましく、特に
ナトリウム塩およびカリウム塩が好ましい。

【００２２】前記デフォスタチンまたは前記３，４−ジ
ヒドロキシデフォスタチン異性体は、後述の実験例にお
けるマウス胎児由来の３Ｔ３−Ｌ１細胞を用いた実験結
果で示されるように、細胞障害を伴わない培養脂肪細胞
からのエピネフリン刺激による遊離脂肪酸の放出に対し
て顕著な抑制効果を示す。このことから、哺乳動物（ヒ
ト、ウマ、イヌ、ネコ等）の糖尿病治療剤として有用で
ある。また、前記デフォスタチンまたは前記３，４−ジ
ヒドロキシデフォスタチン異性体は、従来の薬剤より、
副作用が少なく、毒性が低く、安全性が高い化合物であ
り、例えば、デフォスタチンのＬＤ₅₀（５０％致死量）
は、血液内投与で１００ｍｇ／ｋｇ以上（ＩＣＲマウ
ス）であり、３，４−ジヒドロキシデフォスタチン異性
体のＬＤ₅₀（５０％致死量）は、血液内投与で１００ｍ
ｇ／ｋｇ以上（ＩＣＲマウス）である。

【００２３】前記デフォスタチン、３，４−ジヒドロキ
シデフォスタチン異性体またはそれらの薬理的に許容し
得る塩は、単独で又は２種以上を混合して用いることが
できる。

【００２４】前記デフォスタチン、３，４−ジヒドロキ
シデフォスタチン異性体またはそれらの薬理的に許容し
得る塩の投与量は、患者の症状、体重、年齢等により変
わりうるが、通常、成人１日あたり０．０１〜１０００
ｍｇ／ｋｇ程度が好ましく、これを１回または数回に分
けて投与することができる。

【００２５】本発明の糖尿病治療剤が適用される糖尿病
としては、インスリン非依存性糖尿病において特に有効
であり、治療効果は顕著である。

【００２６】本発明の糖尿病治療剤の剤型は、通常、治
療剤として用いるものであれば特に限定がない。かかる
剤型としては例えば、経口剤、注射剤、座剤、ハップ剤
等があげられるが、患者に対する身体的な負担の面か
ら、経口剤が望ましい。

【００２７】また、本発明の糖尿病治療剤には、デフォ
スタチン、３，４−ジヒドロキシデフォスタチン異性体
またはその薬理的に許容し得る塩以外にも必要により、
経口、経腸、その他非経口的に投与するために適した有
機または無機の固体または液体の任意の成分を含有する
ことができる。

【００２８】前記任意の成分としては、例えば、結晶性
セルロース、ゼラチン、乳糖、ショ糖、澱粉、コーンス
ターチ、デキストリン、マンニット、ステアリン酸マグ
ネシウム、タルク、植物性および動物性脂肪ならびに
油、ガム、ポリアルキレングリコール、アラビアゴム、
ペクチン等の賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、矯味矯
臭剤、増量剤、着色剤、安定剤、等張剤、可溶化剤、分
散剤、溶解補助剤、乳化剤、保湿剤、酸化防止剤等があ
げられる。

【００２９】製剤中の前記デフォスタチン、３，４−ジ
ヒドロキシデフォスタチン異性体またはその薬理的に許
容し得る塩の含有量は、剤型や基剤成分等によって異な
るので、一概には限定することができないが通常、製剤
中０．０１〜１００重量％であることが好ましい。

【００３０】本発明の糖尿病治療剤は、一般に採用され
ている薬剤の調製方法によって製造することができる。

【００３１】以上説明したように本発明の糖尿病治療剤
は、患者のインスリン感受性を改善する効果を有してお
り、糖尿病の中でも、特にインスリン非依存性糖尿病に
顕著な治療効果を呈する。

【００３２】

【実施例】以下、実施例により本発明をさらに詳しく説
明するが、本発明はかかる実施例のみに限定されるもの
ではない。

【００３３】製造例１〔３，４−ジヒドロキシデフォス
タチン異性体の製造〕 J. Antibiot. 1995, 48,12, pp.1460-1466に記載の方法
に従って３，４−ジヒドロキシデフォスタチン異性体を
製造した。

【００３４】まず、３，４−ジメトキシアニリン（アル
ドリッチ社製）５．０２ｇ（３３ｍｍｏｌ) をジクロロ
メタン１００ｍＬに溶解した後、該ジクロロメタン溶液
にピリジン２．９ｍＬ（３６ｍｍｏｌ）とトリフルオロ
酢酸（和光純薬工業（株）製）５．０ｍＬ（３６ｍｍｏ
ｌ）を０℃条件下で添加して、２時間攪拌した。

【００３５】ジクロロメタン１００ｍＬを該反応液に添
加し、有機層を１Ｎ塩酸１００ｍＬで洗浄後、硫酸ナト
リウムで乾燥させて真空エバポレーターを用いて乾固し
た。

【００３６】シリカゲル（和光純薬工業（株）製、商品
名：ワコーゲルＣ−２００）を装着したカラム（４ｃｍ
φ×２０ｃｍ、展開液：ヘキサン／酢酸エチル＝１／１
（容量比：ｖ／ｖ））で精製し、薄い黄色の粉末（１）
３，４−ジメトキシ−Ｎ−トリフルオロアセチルアニリ
ン４．５３ｇ（１７．８ｍｍｏｌ）を得た（収率５３．
５％）。

【００３７】（１）３，４−ジメトキシ−Ｎ−トリフル
オロアセチルアニリン４．５３ｇをジメチルホルムアミ
ド１０ｍＬに溶解し、６０％水素化ナトリウム（アルド
リッチ社製）０．７ｇとジメチルホルムアミド５ｍＬと
の混合液に−２３℃で滴下した後、０℃下で１時間該混
合液を攪拌した。ヨウ化メチル２．０ｍＬを−２３℃で
添加し、さらに２０℃程度の室温下で１時間、攪拌し
た。

【００３８】反応液全量を４℃に冷却した１Ｎ塩酸１０
０ｍＬに滴下し、酢酸エチル１００ｍＬで２回抽出し
た。生成したＮ−メチル化体をシリカゲル（和光純薬工
業（株）製、商品名：ワコーゲルＣ−２００）を装着し
たカラム（３ｃｍφ×３０ｃｍ、展開液：ヘキサン／酢
酸エチル＝ 3／1 〜1 ／1 （容量比：ｖ／ｖ）) で精製
し、（２）３，４−ジメトキシ−Ｎ−メチル−Ｎ−トリ
フルオロアセチルアニリン２．９６ｇ（１１．０ｍｍｏ
ｌ）を得た。その収率は６１．８％であった。

【００３９】塩化アルミニウム（和光純薬工業（株）
製）２．５３ｇ（１９．０ｍｍｏｌ)とエタンチオール
１９．０ｍＬをジクロルメタン３０ｍＬに溶解し、0 ℃
で（２）３，４−ジメトキシ−Ｎ−メチル−Ｎ−トリフ
ルオロアセチルアニリン１．０ｇを添加し、5 時間攪拌
して（２）３，４−ジメトキシ−Ｎ−メチル−Ｎ−トリ
フルオロアセチルアニリンのメトキシ基を水酸基に変換
した。該溶液を真空エバポレーターを用いて乾固し、シ
リカゲル（和光純薬工業（株）製、商品名：ワコーゲル
Ｃ−２００）を装着したカラム（３ｃｍφ×３０ｃｍ、
展開液：ヘキサン／酢酸エチル＝５：１（容量比：ｖ／
ｖ））で精製し、（３）３，４−ジヒドロキシ−Ｎ−メ
チル−Ｎ−トリフルオロアセチルアニリンを得た。

【００４０】アミノ基のニトロソ化を実行する前に、穏
やかな条件ではずすことのできるＴＢＳＯ化により、
（３）３，４−ジヒドロキシ−Ｎ−メチル−Ｎ−トリフ
ルオロアセチルアニリンの水酸基の保護を行なった。

【００４１】前記（３）３，４−ジヒドロキシ−Ｎ−メ
チル−Ｎ−トリフルオロアセチルアニリン５０７ｍｇ
（２．１５ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン１５ｍＬに溶
解し、２，６−ルチジン（和光純薬工業（株）製）１．
９０ｍＬ（１６．３ｍｍｏｌ)ｔｅｒｔ−ブチルジメチ
ルシリル硫酸トリフルオロメタン（アルドリッチ社製）
１．７８ｍＬ（７．７４ｍｍｏｌ) とを０℃下で添加し
た後、室温で１２時間攪拌した。

【００４２】反応液に４℃の冷水５０ｍＬを添加し、酢
酸エチル１００ｍＬで２回抽出した。シリカゲル（和光
純薬工業（株）製、商品名：ワコーゲルＣ−２００）を
装着したカラム（３ｃｍφ×３０ｃｍ、展開液：ヘキサ
ン／酢酸エチル＝２０／１〜１０／１（容量比：ｖ／
ｖ））で精製し、（４）３，４−ビス〔（ｔｅｒｔ−ブ
チルジメチルシリル）オキシ〕−Ｎ−メチル−Ｎ−トリ
フルオロアセチルアニリン３９０ｍｇ（１．０ｍｍｏ
ｌ）を得た。

【００４３】（４）３，４−ビス〔（ｔｅｒｔ−ブチル
ジメチルシリル）オキシ〕−Ｎ−メチル−Ｎ−トリフル
オロアセチルアニリンのアミノ基のトリフルオロアセチ
ル基による保護を炭酸カリウムではずした。生成物
（４）３，４−ビス〔（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリ
ル）オキシ〕−Ｎ−メチル−Ｎ−トリフルオロアセチル
アニリンを１０ｍＬの炭酸カリウム水−メタノール溶液
(７％炭酸カリウム：メタノール＝２：５（容量比：ｖ
／ｖ）) に溶解し、室温で３時間攪拌した。反応液はジ
クロロメタンで抽出し、シリカゲル（和光純薬工業
（株）製、商品名：ワコーゲルＣ−２００）を装着した
カラム（３ｃｍφ×３０ｃｍ、ヘキサン／酢酸エチル＝
１５／１〜１０／１（容量比：ｖ／ｖ））で精製し、
（５）３，４−ビス〔（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリ
ル）オキシ〕−Ｎ−メチルアニリン１９６ｍｇ（０．６
５ｍｍｏｌ）を得た（収率６５．０％）。

【００４４】次に、硝酸ナトリウムを用いて、（５）
３，４−ビス〔（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オ
キシ〕−Ｎ−メチルアニリンのアミノ基のニトロソ化を
おこなった。（５）３，４−ビス〔（ｔｅｒｔ−ブチル
ジメチルシリル）オキシ〕−Ｎ−メチルアニリン１９６
ｍｇをテトラヒドロフラン１５ｍＬに溶解し、１Ｎ塩酸
３ｍＬと等モルの硝酸ナトリウム４５ｍｇとを０℃で添
加した。反応液を０℃で３時間攪拌した後、ジクロロメ
タン１００ｍＬで抽出、シリカゲル（和光純薬工業
（株）製、商品名：ワコーゲルＣ−２００）を装着した
カラム（３ｃｍφ×３０ｃｍ、展開液：ヘキサン／酢酸
エチル＝１５／１〜１０：１（容量比：ｖ／ｖ））で精
製し、（６）３，４−ビス〔（ｔｅｒｔ−ブチルジメチ
ルシリル）オキシ〕−Ｎ−メチル−Ｎ−ニトロソアニリ
ン１８２ｍｇ（０．５ｍｍｏｌ）を得た（収率８５．０
％）。

【００４５】得られた（６）３，４−ビス〔（ｔｅｒｔ
−ブチルジメチルシリル）オキシ〕−Ｎ−メチル−Ｎ−
ニトロソアニリンを６ｍＬのテトラヒドロフランに溶解
し、１．５ｍＬのフッ化ナトリウム−フッ化水素酸緩衝
液（ｐＨ４．９８）を０℃で加え、室温で２４時間攪拌
した。反応液はクロロホルムで３回抽出し、有機層を硫
酸ナトリウムで乾燥したのち乾固した。シリカゲル（和
光純薬工業（株）製、商品名：ワコーゲルＣ−２００）
を装着したカラム（展開液：ヘキサン／酢酸エチル＝３
／１〜１／１（容量比：ｖ／ｖ））で精製し、３，４−
ジヒドロキシデフォスタチン９２．１ｍｇ（０．５ｍｍ
ｏｌ）を得た（収率９９．０％）。

【００４６】また、デフォスタチンは、J.Chem.Soc.,Ch
em.Commun. 1994 pp.437に記載の方法で合成されたもの
を使用した。

【００４７】実験例１〜３ デフォスタチンおよび３，４−ジヒドロキシデフォスタ
チンの糖尿病に対する効果を試験するための系として、
エピネフリン処理された培養脂肪細胞からの遊離脂肪酸
の放出抑制を調べる試験系を使用した( B.B.R.C._, 995
_, 14_, No.3, pp.1095-1099) 。この系は、糖尿病に対す
る試験管レベルでの効果判定の系として感受性が高く、
放射性グルコースを使わない簡便な血糖降下の予測試験
法として知られている( Biol.Pharm.Bull. 1995, 18, p
p.719-722)。

【００４８】細胞は、ヒューマンサイエンス研究資源バ
ンクより入手した３Ｔ３−Ｌ１細胞（ＨＳＲＲＢ ＪＣ
ＲＢ９０１４）を用い、１０％牛血清を添加したダルベ
ッコ変法ＭＥＭ培地で、３７℃、５％ＣＯ₂ 環境下で培
養継続したものを試験に使用した。

【００４９】2 ×10⁶ ／ｍＬの３Ｔ３−Ｌ１細胞を、牛
血清アルブミン（和光純薬工業（株）製）２０ｍｇおよ
びＫＲＢバッファー（１２０ｍＭ ＮａＣｌ、１．２７
ｍＭＣａＣｌ₂ 、１．２ｍＭ ＭｇＳＯ₄ 、４．７５ｍ
Ｍ ＫＣｌ、１．２ｍＭＫＨ₂ ＰＯ₄ 、２４ｍＭ Ｍａ
ＨＣＯ₃ 、ｐＨ７．４）に溶解した薬剤（実験例１：デ
フォスタチン２０μｇ／ｍＬ（１０^-4Ｍ）、実験例２：
３，４−ジヒドロキシデフォスタチン異性体２μｇ／ｍ
Ｌ、実験例３：３，４−ジヒドロキシデフォスタチン異
性体２０μｇ／ｍＬ）とともに、３７℃，３０分間前培
養した。

【００５０】前記培養液に１０^-5Ｍのエピネフリンを加
え、さらに３７℃で３時間培養し、氷冷水０．５ｍＬを
添加して反応を止めた。遠心分離機を用いて１２００ｒ
ｐｍ. で１０分間遠心分離し、ＦＦＡキット・ワコー
（和光純薬工業（株）製、商品名：ＮＥＦＡ−Ｃテスト
ワコー）を用い、細胞外液の遊離脂肪酸濃度の指標とし
て５５０ｎｍの吸光度をタイターテック・マルチスキャ
ンモニター（フロー・ラボラトリー（株）製、商品名：
マルチスキャン・プラスＭＫII）で測定した。また、デ
フォスタチンおよび３，４−ジヒドロキシデフォスタチ
ン異性体のかわりにチロシンホスファターゼ阻害剤（リ
ンの類似体）として知られている酸化硫酸バナジウム
（和光純薬工業（株）製）を５×１０^-4Ｍで用いたもの
を陽性対照とし、細胞外液の５５０ｎｍの吸光度を測定
した。結果を表１に示す。

【００５１】

【表１】

【００５２】実験例１〜３の結果より、デフォスタチン
および３，４−ジヒドロキシデフォスタチン異性体の添
加により、エピネフリン単独時（薬剤なし）と比べ、３
Ｔ３−Ｌ１細胞からの遊離脂肪酸の放出が顕著に抑制さ
れた。

【００５３】また、実験例１〜３および陽性対照の結果
より、実験例１〜３では約５分の１〜１０分の１の濃度
で酸化硫酸バナジウムと同等の効果が発現されたことか
ら、デフォスタチンおよび３，４−ジヒドロキシデフォ
スタチン異性体の作用は、酸化硫酸バナジウムに比べは
るかに強いものであった。

【００５４】尚、実験例１〜３における３Ｔ３−Ｌ１細
胞を顕微鏡観察したところ、いずれも細胞障害が生じて
おらず、実験例１〜３に見られる脂肪酸放出抑制が、細
胞障害性によるものではないことを確認した。

【００５５】以上のことから、デフォスタチンおよび
３，４−ジヒドロキシデフォスタチン異性体が糖尿病に
よる高血糖を改善するのに有効であることが強く示唆さ
れた。

【００５６】

【発明の効果】本発明により糖尿病、特にインスリン非
依存型糖尿病に対する糖尿病治療剤が提供された。本発
明のデフォスタチンおよびその薬理的に許容し得る塩な
らびに３，４−ジヒドロキシデフォスタチン異性体およ
びその薬理的に許容し得る塩は、安全かつ有効に糖尿
病、特にインスリン非依存型糖尿病に対して治療効果を
有し、糖尿病による高血糖を改善することができる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 山下 敬 兵庫県加古川市別府町別府899−１−101 (72)発明者 北原 幹郎 兵庫県神戸市北区鈴蘭台西町１−８−10

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 式（Ｉ）： 【化１】 で表わされるデフォスタチンまたはその薬理的に許容し
   得る塩を有効成分とすることを特徴とする糖尿病治療
   剤。
2. 【請求項２】 式（II）： 【化２】 で表わされる３，４−ジヒドロキシデフォスタチン異性
   体またはその薬理的に許容し得る塩を有効成分とするこ
   とを特徴とする糖尿病治療剤。