JPH0286789A - 微生物によるアラキドン酸含有油脂の製造方法 - Google Patents
微生物によるアラキドン酸含有油脂の製造方法Info
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Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
(産業上の利用分野)
本発明は、生体内で重要な調節因子であるプロスタグラ
ンジン類及びロイコトリエン類の前駆体として注目され
ているアラキドン酸を、微生物を用い、迅速かつ安価に
大量生産させる方法に関するものである。
ンジン類及びロイコトリエン類の前駆体として注目され
ているアラキドン酸を、微生物を用い、迅速かつ安価に
大量生産させる方法に関するものである。
(従来の技術)
通常アラキドン酸は生体内で細胞膜のリン脂質のβ位に
組み込まれているが、物理的、化学的、または免疫学的
刺激により、ホスホリパーゼA2で切り出される。次い
で、リポキシゲナーゼ、シクロオキシゲナーゼあるいは
プロスタグランジンシンテターゼにより、順次プロスタ
グランジン類あるいはロイコトリエン類に変換され、各
々の生理活性を発揮する。
組み込まれているが、物理的、化学的、または免疫学的
刺激により、ホスホリパーゼA2で切り出される。次い
で、リポキシゲナーゼ、シクロオキシゲナーゼあるいは
プロスタグランジンシンテターゼにより、順次プロスタ
グランジン類あるいはロイコトリエン類に変換され、各
々の生理活性を発揮する。
これらプロスタグランジン類及びロイコトリエン類は、
現代病として社会問題になっているアレルギー、ウィル
ス疾病及び老人性痴呆症などの治療薬として大いに期待
され、急激に研究が進展している。従って、プロスタグ
ランジン類及びロイコトリエン類の前駆体であるアラキ
ドン酸は、生体に必須なメツセンジャーであり、その重
要性は測り知れない。
現代病として社会問題になっているアレルギー、ウィル
ス疾病及び老人性痴呆症などの治療薬として大いに期待
され、急激に研究が進展している。従って、プロスタグ
ランジン類及びロイコトリエン類の前駆体であるアラキ
ドン酸は、生体に必須なメツセンジャーであり、その重
要性は測り知れない。
以上のような、生体内で重要な役割を担っているプロス
タグランジン類の前駆体であるアラキドン酸は、生体内
では、例えば、肺、脳、心臓及び血液もしくは卵黄中に
含有されている。ここから、抽出し、カラムクロマトグ
ラフィーあるいは、蒸留などにより分離精製が試みられ
た。また、いくつか全化学合成方法も試みられている。
タグランジン類の前駆体であるアラキドン酸は、生体内
では、例えば、肺、脳、心臓及び血液もしくは卵黄中に
含有されている。ここから、抽出し、カラムクロマトグ
ラフィーあるいは、蒸留などにより分離精製が試みられ
た。また、いくつか全化学合成方法も試みられている。
(発明が解決しようとする課題)
アラキドン酸の含有されている物質は、脳、肺あるいは
血液などといった特定部位に存在するのみであり、また
11食品中の卵黄中にも含有されているが、いずれも極
微量含有されているにすぎない。
血液などといった特定部位に存在するのみであり、また
11食品中の卵黄中にも含有されているが、いずれも極
微量含有されているにすぎない。
しかも、上記の物質では、サンプル収集にきわめて制限
を受ける上に、物質自体が非常に腐敗し易く大量生産は
困難であった。また、合成においてもアラキドン酸の構
造上きわめて困難であるので、いずれも工業的に応用す
るには至っていないのが現状である。
を受ける上に、物質自体が非常に腐敗し易く大量生産は
困難であった。また、合成においてもアラキドン酸の構
造上きわめて困難であるので、いずれも工業的に応用す
るには至っていないのが現状である。
本発明は、微生物を利用し、アラキドン酸を高濃度含有
する油脂を安価に製造する方法を提供することを目的と
する。
する油脂を安価に製造する方法を提供することを目的と
する。
(課題を解決するための手段)
本発明は、エントモフトラ属(Entomo htho
rasp、)糸状菌を、有機多塩基酸を添加した培地中
で培養することにより、アラキドン酸を菌体内に高濃度
で蓄積させ、これを採取することを特徴とするアラキド
ン酸含有油脂の製造方法である。
rasp、)糸状菌を、有機多塩基酸を添加した培地中
で培養することにより、アラキドン酸を菌体内に高濃度
で蓄積させ、これを採取することを特徴とするアラキド
ン酸含有油脂の製造方法である。
はえかび属微生物の一種であるエントモフトラ属は、菌
体中にアラキドン酸を蓄積することが知られており、こ
のときアラキドン酸は少量蓄積される。
体中にアラキドン酸を蓄積することが知られており、こ
のときアラキドン酸は少量蓄積される。
これに対して、本発明は、エントモフトラ属の菌体中に
多量のアラキドン酸を含有した油脂を蓄積させるもので
ある。
多量のアラキドン酸を含有した油脂を蓄積させるもので
ある。
本発明の使用菌株は、エントモフトラ属のエキスタリス
rATcc14290.32890Jであり、いずれも
ATCCカタログ(菌株目録)に記載されている糸状菌
である。
rATcc14290.32890Jであり、いずれも
ATCCカタログ(菌株目録)に記載されている糸状菌
である。
上記糸状菌は、炭素源として、グルコース、シュクロー
ス、フラクトース、マルトース、グリセリン、廃糖蜜、
澱粉、コーンスチープリカー、オリーブ油、やし油など
、窒素源として、イーストエキストラクト、ペプトン、
肉エキス、大豆粉、脱脂大豆粉、グルテン、ゼラチンな
どの有機体窒素中で生育する。この時、炭素源は、3〜
20%にして用いるが、好ましくは、5〜15%が良い
。
ス、フラクトース、マルトース、グリセリン、廃糖蜜、
澱粉、コーンスチープリカー、オリーブ油、やし油など
、窒素源として、イーストエキストラクト、ペプトン、
肉エキス、大豆粉、脱脂大豆粉、グルテン、ゼラチンな
どの有機体窒素中で生育する。この時、炭素源は、3〜
20%にして用いるが、好ましくは、5〜15%が良い
。
本発明において、培地中に添加する有機多塩基酸は、例
えばクエン酸、イソクエン酸、コハク酸、フマル酸、リ
ンゴ酸などがあり、添加量は0.01〜1%好ましくは
063〜1%である。他に無基塩として、例えば、硫酸
鉄、硫酸マグネシウム、硫酸亜鉛、塩化カリウム、燐酸
−カリウム、燐酸二カリウムなどが用いられる。そのほ
か必要に応じ、微量要素を添加してもよい。
えばクエン酸、イソクエン酸、コハク酸、フマル酸、リ
ンゴ酸などがあり、添加量は0.01〜1%好ましくは
063〜1%である。他に無基塩として、例えば、硫酸
鉄、硫酸マグネシウム、硫酸亜鉛、塩化カリウム、燐酸
−カリウム、燐酸二カリウムなどが用いられる。そのほ
か必要に応じ、微量要素を添加してもよい。
上記糸状菌の培養は、通常、通気攪拌で液体培養が行わ
れる。攪拌速度は、300〜900 rpm 、通気量
は0.5〜2νvmで、通気を充分行う(kla =6
00〜1000hr−’ )ことが必要であり、空気あ
るいは純酸素を用いてもよい。培養温度は、20〜33
℃で培養期間は3〜7日間である。この時pHは弱酸性
がよく、好ましくは5〜6に調節する。培養終了後、濾
過もしくは遠心分離などで菌体を分離し、十分菌体を洗
浄した後、クロロホルム、メタノール、エタノール、プ
ロパツール、ブタノール、ヘキサン、アセトン及びそれ
らの混液で菌体から油脂を抽出する。さらに、フォルテ
(Folch)等の分配法などで、粗脂質を分離した後
、メチルエステル化し、ガスクロマド付質量分析計(G
C−MS)などで分析した。
れる。攪拌速度は、300〜900 rpm 、通気量
は0.5〜2νvmで、通気を充分行う(kla =6
00〜1000hr−’ )ことが必要であり、空気あ
るいは純酸素を用いてもよい。培養温度は、20〜33
℃で培養期間は3〜7日間である。この時pHは弱酸性
がよく、好ましくは5〜6に調節する。培養終了後、濾
過もしくは遠心分離などで菌体を分離し、十分菌体を洗
浄した後、クロロホルム、メタノール、エタノール、プ
ロパツール、ブタノール、ヘキサン、アセトン及びそれ
らの混液で菌体から油脂を抽出する。さらに、フォルテ
(Folch)等の分配法などで、粗脂質を分離した後
、メチルエステル化し、ガスクロマド付質量分析計(G
C−MS)などで分析した。
本発明によれば、例えば、菌体40g/ 1、脂質16
g1ll?:!、7−7−F−)’ン酸は4.8g/
l! (30%アラキドン酸/総脂質)にも達した。
g1ll?:!、7−7−F−)’ン酸は4.8g/
l! (30%アラキドン酸/総脂質)にも達した。
含有脂肪酸は、分枝脂肪酸はまったく含有されておらず
、不飽和脂肪酸として、アラキドン酸以外にCl611
% Cl1ll+が主として含有されていた。
、不飽和脂肪酸として、アラキドン酸以外にCl611
% Cl1ll+が主として含有されていた。
(発明の効果)
本発明によれば、微生物を用いるので、アラキドン酸を
高濃度に含有する油脂が容易に得られ、医薬品、健康食
品、化粧品などの原料として、工業的に安価にしかも大
量に供給することが可能である。
高濃度に含有する油脂が容易に得られ、医薬品、健康食
品、化粧品などの原料として、工業的に安価にしかも大
量に供給することが可能である。
(実施例)
以下実施例に基づいて本発明を具体的に説明するが、本
発明はこれに限定されるものではない。
発明はこれに限定されるものではない。
実施例1
グルコース5g、酵母エキス2.4g、硫酸鉄0.05
g、硫酸マグネシウム0.01g、塩化カリウム0.1
g、燐酸−カリウム0.1g、コハク酸0.5gを10
0−の脱塩水にとかし、液体培地とした。これを500
−坂ロコルベンに仕込み、120℃、20分間加圧蒸気
滅菌し、pHを5.4に調節した。あらかじめ、ポテト
寒天培地で培養したエントモフトラ・エキスタリス(E
ntomo hthora exitalis) A
T CC14290の胞子のみを殺菌水に懸濁し、これ
をグルコースを5gに変えた前述の液体培地100−入
りの坂ロコルベンに植菌し、28°Cで3日間振盪培養
したものを種菌とした。新たに前述の液体培地1001
n1入りの坂ロコルベンにこの種菌を植菌し、28℃で
4日間振盪培養した。
g、硫酸マグネシウム0.01g、塩化カリウム0.1
g、燐酸−カリウム0.1g、コハク酸0.5gを10
0−の脱塩水にとかし、液体培地とした。これを500
−坂ロコルベンに仕込み、120℃、20分間加圧蒸気
滅菌し、pHを5.4に調節した。あらかじめ、ポテト
寒天培地で培養したエントモフトラ・エキスタリス(E
ntomo hthora exitalis) A
T CC14290の胞子のみを殺菌水に懸濁し、これ
をグルコースを5gに変えた前述の液体培地100−入
りの坂ロコルベンに植菌し、28°Cで3日間振盪培養
したものを種菌とした。新たに前述の液体培地1001
n1入りの坂ロコルベンにこの種菌を植菌し、28℃で
4日間振盪培養した。
培養終了後、集菌して、クロロホルム−メタノール(1
: 2)系の溶媒で攪拌しながら脂質を2回抽出した。
: 2)系の溶媒で攪拌しながら脂質を2回抽出した。
抽出液を併せてフォルテの方法で水溶性物質を除き、ク
ロロホルム層を濃縮して総脂質を得た。この時の乾燥菌
体量は30g/ /lであり、総脂質量は乾燥菌体の約
30%である9g/βであつた。この総脂質の一部をと
りメタノール−BF3を加え、メチル化して、ガスクロ
マトグラフで分析した。その結果、目的とするアラキド
ン酸は、総脂質量の約20%含有されていた。
ロロホルム層を濃縮して総脂質を得た。この時の乾燥菌
体量は30g/ /lであり、総脂質量は乾燥菌体の約
30%である9g/βであつた。この総脂質の一部をと
りメタノール−BF3を加え、メチル化して、ガスクロ
マトグラフで分析した。その結果、目的とするアラキド
ン酸は、総脂質量の約20%含有されていた。
実施例2
オリーブ油6g、脱脂大豆粉3.6g、硫化鉄0.05
g、硫酸マグネシウム0.01g、塩化カリウムO,I
g、燐酸−カリウムO,Ig、イソクエン酸0.2gを
、5Qmlの脱塩水にとかし、液体培地とした。これを
500m1坂ロコルベンに仕込み、以下実施例1に基づ
いて培養し分析を行った。この時の乾燥菌体は35g/
lであり、総脂質は乾燥菌体の約30%である10.5
g/lであった。この総脂質の一部をとりメタノール−
BF、を加え、煮沸しながらメチル化して、ガスクロマ
トグラフで分析した。その結果、目的とするアラキドン
酸は、総脂質量の約30%含有されていた。
g、硫酸マグネシウム0.01g、塩化カリウムO,I
g、燐酸−カリウムO,Ig、イソクエン酸0.2gを
、5Qmlの脱塩水にとかし、液体培地とした。これを
500m1坂ロコルベンに仕込み、以下実施例1に基づ
いて培養し分析を行った。この時の乾燥菌体は35g/
lであり、総脂質は乾燥菌体の約30%である10.5
g/lであった。この総脂質の一部をとりメタノール−
BF、を加え、煮沸しながらメチル化して、ガスクロマ
トグラフで分析した。その結果、目的とするアラキドン
酸は、総脂質量の約30%含有されていた。
実施例3
グルコース300g、脱脂大豆粉216g、硫酸鉄3g
、硫酸マグネシウム0.6g、塩化カリウム3g、燐酸
−カリウム6g、クエン酸20gを6βの脱塩水にとか
し、液体培地とした。これを101ジャーファーメンタ
−に仕込み、120℃、20分間加圧蒸気滅菌し、pn
を5.4に調節した。あらかじめ、ポテト寒天培地で培
養したエントモフトラ・エキスタリス(Entomo
hthora exitalis) A T CC32
890の胞子のみを殺菌水に懸濁し、これを実施例1の
液体培地100−入りの坂ロコルベンに植菌し、28℃
で3日間振盪培養したものを種菌とした。新たに前述の
液体培地10j2ジャーファーメンタ−にこの種菌を植
菌し、28℃、600rpm、 1 vvmで4日間培
養した。この間グルコース濃度は一定に保ち、最終的に
は、グルコース濃度は120g/ lにも達した。
、硫酸マグネシウム0.6g、塩化カリウム3g、燐酸
−カリウム6g、クエン酸20gを6βの脱塩水にとか
し、液体培地とした。これを101ジャーファーメンタ
−に仕込み、120℃、20分間加圧蒸気滅菌し、pn
を5.4に調節した。あらかじめ、ポテト寒天培地で培
養したエントモフトラ・エキスタリス(Entomo
hthora exitalis) A T CC32
890の胞子のみを殺菌水に懸濁し、これを実施例1の
液体培地100−入りの坂ロコルベンに植菌し、28℃
で3日間振盪培養したものを種菌とした。新たに前述の
液体培地10j2ジャーファーメンタ−にこの種菌を植
菌し、28℃、600rpm、 1 vvmで4日間培
養した。この間グルコース濃度は一定に保ち、最終的に
は、グルコース濃度は120g/ lにも達した。
培養終了後、集菌して、ヘキサン及びクロロホルムで脂
質を2回抽出した。抽出液を併せて濃縮、水洗した後、
クロロホルム層を濃縮して総脂質を得た。この時の乾燥
菌体量は40g/ lであり、総脂質量は乾燥菌体の約
35%である14g/ 1であった。
質を2回抽出した。抽出液を併せて濃縮、水洗した後、
クロロホルム層を濃縮して総脂質を得た。この時の乾燥
菌体量は40g/ lであり、総脂質量は乾燥菌体の約
35%である14g/ 1であった。
この総脂質の一部をとりメタノール−BFffを加え、
煮沸しながらメチル化して、ガスクロマトグラフで分析
した。その結果、目的とするアラキドン酸は、総脂質量
の約25%含有されていた。
煮沸しながらメチル化して、ガスクロマトグラフで分析
した。その結果、目的とするアラキドン酸は、総脂質量
の約25%含有されていた。
実施例4
実施例3の中で、回転数を60Orpm 、空気を純酸
素に変え、通気量を1シシmで4日間培養した。
素に変え、通気量を1シシmで4日間培養した。
培養終了後、上記の方法で脂質を抽出した。この時の乾
燥菌体量は50g/ lであり、総脂質量は乾燥菌体の
約40%である20g/ lであった。脂質分析をした
ところ、目的とするアラキドン酸は、総脂質量の約30
%含有されており、空気のみに比べて乾燥菌体、脂質含
量及びアラキドン酸生産量が増加した。
燥菌体量は50g/ lであり、総脂質量は乾燥菌体の
約40%である20g/ lであった。脂質分析をした
ところ、目的とするアラキドン酸は、総脂質量の約30
%含有されており、空気のみに比べて乾燥菌体、脂質含
量及びアラキドン酸生産量が増加した。
実施例5
実施例4の中で、クエン酸を0.5%に増加して3日間
培養した。培養終了後、上記の方法で脂質を抽出した。
培養した。培養終了後、上記の方法で脂質を抽出した。
この時の乾燥菌体量は50g/ lであり、総脂質量は
乾燥菌体の約40%である20g/βであった。脂質分
析をしたところ、目的とするアラキドン酸は、総脂質量
の約35%含有されており、菌体の成長が著しく良く、
アラキドン酸生産量が増加した。
乾燥菌体の約40%である20g/βであった。脂質分
析をしたところ、目的とするアラキドン酸は、総脂質量
の約35%含有されており、菌体の成長が著しく良く、
アラキドン酸生産量が増加した。
比較例
実施例1においてクエン酸を添加せずに同様に行った。
このとき得られた乾燥菌体量は25g/ lであり、総
脂質量は乾燥菌体の約20%である5g/lであった。
脂質量は乾燥菌体の約20%である5g/lであった。
脂質分析をしたところ、目的とするアラキドン酸総脂質
の約15%であり、全体のアラキドン酸収量が著しく低
下した。
の約15%であり、全体のアラキドン酸収量が著しく低
下した。
Claims (1)
- エントモフトラ属(¥Entomophthora¥s
p.)糸状菌を、有機多塩基酸を添加した培地中で培養
することにより、アラキドン酸を菌体内に高濃度で蓄積
させ、これを採取することを特徴とするアラキドン酸含
有油脂の製造方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP63237531A JP2730081B2 (ja) | 1988-09-24 | 1988-09-24 | 微生物によるアラキドン酸含有油脂の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP63237531A JP2730081B2 (ja) | 1988-09-24 | 1988-09-24 | 微生物によるアラキドン酸含有油脂の製造方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH0286789A true JPH0286789A (ja) | 1990-03-27 |
JP2730081B2 JP2730081B2 (ja) | 1998-03-25 |
Family
ID=17016716
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP63237531A Expired - Fee Related JP2730081B2 (ja) | 1988-09-24 | 1988-09-24 | 微生物によるアラキドン酸含有油脂の製造方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP2730081B2 (ja) |
Cited By (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH0759540A (ja) * | 1993-08-26 | 1995-03-07 | Tokiwa Yakuhin Kogyo Kk | アラキドン酸含有健康食品 |
JPH10139673A (ja) * | 1996-11-06 | 1998-05-26 | F Hoffmann La Roche Ag | 製 剤 |
WO1998029558A1 (fr) * | 1996-12-27 | 1998-07-09 | Suntory Limited | Milieu destine a la culture de micro-organismes et procede permettant de produire des acides gras insatures ou des lipides renfermant ceux-ci |
EP0707487A4 (en) * | 1993-06-09 | 1998-09-02 | Martek Biosciences Corp | METHOD AND PHARMACEUTICAL PREPARATIONS FOR THE TREATMENT OF NEUROLOGICAL DISORDERS |
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EP1801226A3 (en) * | 1991-01-24 | 2007-09-19 | Martek Biosciences Corporation | Arachidonic acid and methods for the production and use thereof |
JP2008167721A (ja) * | 2007-01-15 | 2008-07-24 | Suntory Ltd | 高度不飽和脂肪酸及びこれを含有する脂質の製造方法 |
US7863024B2 (en) | 2002-04-26 | 2011-01-04 | Suntory Holdings Limited | Process for producing highly unsaturated fatty acid-containing lipid |
-
1988
- 1988-09-24 JP JP63237531A patent/JP2730081B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (19)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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EP1787532A3 (en) * | 1991-01-24 | 2010-03-31 | Martek Biosciences Corporation | Microbial oil mixtures and uses thereof |
EP1961312A3 (en) * | 1991-01-24 | 2010-03-31 | Martek Biosciences Corporation | Microbial oil mixture and uses thereof |
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EP1419780A1 (en) * | 1993-06-09 | 2004-05-19 | Martek Biosciences Corporation | Use of docosahexaenoic acid for the manufacture of a medicament for the treatment of senile dementia and Alzheimer's disease |
EP2140863A1 (en) * | 1993-06-09 | 2010-01-06 | Martek Biosciences Corporation | Use of docosahexaenoic acid for the manufacture of a medicament for the treatment of neurological disorders |
JPH0759540A (ja) * | 1993-08-26 | 1995-03-07 | Tokiwa Yakuhin Kogyo Kk | アラキドン酸含有健康食品 |
JP2677949B2 (ja) * | 1993-08-26 | 1997-11-17 | 常盤薬品工業株式会社 | アラキドン酸含有健康食品 |
JPH10139673A (ja) * | 1996-11-06 | 1998-05-26 | F Hoffmann La Roche Ag | 製 剤 |
US6746857B2 (en) | 1996-12-27 | 2004-06-08 | Suntory Limited | Media for culturing microorganisms and process for producing unsaturated fatty acids or lipids containing the same |
WO1998029558A1 (fr) * | 1996-12-27 | 1998-07-09 | Suntory Limited | Milieu destine a la culture de micro-organismes et procede permettant de produire des acides gras insatures ou des lipides renfermant ceux-ci |
US7863024B2 (en) | 2002-04-26 | 2011-01-04 | Suntory Holdings Limited | Process for producing highly unsaturated fatty acid-containing lipid |
JP2008167721A (ja) * | 2007-01-15 | 2008-07-24 | Suntory Ltd | 高度不飽和脂肪酸及びこれを含有する脂質の製造方法 |
WO2008087921A1 (ja) * | 2007-01-15 | 2008-07-24 | Suntory Holdings Limited | 高度不飽和脂肪酸及びこれを含有する脂質の製造方法 |
US8945886B2 (en) | 2007-01-15 | 2015-02-03 | Suntory Holdings Limited | Methods for producing polyunsaturated fatty acid and lipid containing polyunsaturated fatty acid |
US11525150B2 (en) | 2007-01-15 | 2022-12-13 | Suntory Holdings Limited | Methods for producing polyunsaturated fatty acid and lipid containing polyunsaturated fatty acid |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2730081B2 (ja) | 1998-03-25 |
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Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
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