JPH0228132A - ２―ケト―ｌ―グロン酸の精製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、Ｌ−アスコルビン酸の合成中間体として有用
な２−ケト−Ｌ−グロン酸の精製法に関する。

従来の技術 ２−ケト−Ｌ−グロン酸からＬ−アスコルビン酸を製造
する方法としては、２−ケト−Ｌ〜グロン酸をメタノー
ルとジアゾメタン、ジメチル硫酸等でエステル化しこれ
をメタノール中でメチレートと反応させてＮａ塩とし、
さらに塩酸で分解する方法（ビタミン学の進歩、第２集
、日本ビタミン学会編（１９６０）、ｐ１２３〜１２４
）、または、２−ケＩ−−Ｌ−グロン酸に不活性溶媒及
び界面活性剤の存在下に鉱酸を作用させ、２−ケト−−
Ｌグロン酸ヲ直接エノール化し、Ｌ−アスコルビン酸と
一４゛る方法（特公昭４８−１５９３１）等が知られて
いる。これらのし−アスコルビン酸の合成反応は、２−
ケト−Ｌ−グロン酸が遊離酸、ま！−はナトリウム塩、
カルシウム塩のような金属塩のいずれであっても一応進
行するが、金属塩を用いた場合は遊離酸を用いた場合に
比べて、鉱酸及びそれを中和するアルカリの使用量が多
くなること、さらにその副生塩を分離するために複雑な
工程が必要（特公昭５８−１７７９８６）なだめ、Ｌ−
アスコルビン酸の収率低下が避けれないことなどの短所
がある。従って、Ｌ−アスコルビン酸を工業的有利に製
造するためには、合成中間体である２−ケドーＬ−グロ
ン酸は遊離酸であることが最も好ましい。以後、２−ケ
ト−Ｌ−グロン酸の遊離酸を２ＫＧＡと略称することも
ある。

このような観点から従来の技術を概観すると、醗酵液に
含有される２−ケト−Ｌ−グロン酸の分離に関する技術
としては、２ＫＧＡナトリウム塩を分離する方法（特公
昭５２−６６６８４、特公昭５２−６６６８５、特公昭
５３−６２８９４）および２ＫＧＡに関して以下に示す
ものがある。

（１）醗酵液をろ過し、ろ液を濃縮して析出した２ケ１
−−Ｌ−グロン酸のカルシウム塩を分離し、硫酸で処理
して石こうを除去したあと、濃縮し析出する２ＫＧＡを
分離する方法（米国特許第２．４２１，６１１号および
米国特許第２，４２１．６１２号） （２）醗酵液をろ過し、ろ液をカチオン交換樹脂（Ｈ形
）で処理したあと、濃縮し析出する２ＫＧＡを分離する
方法（特公昭４ｌ−５９０７）（３）醗酵液をろ過し、
ろ液をアンバーライト−２００（Ｈ形）の樹脂に通し、
通過液をアンバーライトＸＥ−１６８に通して、２ＫＧ
Ａを吸着させる。次いで、ＩＮ−アンモニア水を用いて
２ＫＧＡを溶出し、溶出液を減圧濃縮し、活性炭を加え
て脱色後、アンバーライト−２００で処理し、ｐＨ約１
．５前後にしたのち、水酸化カルシウムを加えて、ｐＨ
６，０〜６．５にしてろ過する。ろ液を再びアンバーラ
イト−２００の樹脂で処理し、ｐＨ約１．５にして２Ｋ
ＧＡをアンバーライトＸＥ−１６８に吸着させたのち、
０、ＩＮアンモニア水で溶出し、溶出液をアンバーライ
トＩＲ−２００（Ｈ形）で脱アンモニアしたのち、減圧
濃縮して２ＫＧＡを分離する方法（特公昭５ｌ−４０１
５４）。

発明が解決しようとする課題 本発明の目的は、Ｌ−アスコルビン酸の合成に有利な高
品質の２ＫＧＡを、醗酵液から高収率で分離することに
ある。

この目的に照らして、前記した従来の２　ＫＧＡ分離技
術について考察すると、 （１）の方法は、醗酵液のろ過以外にカルシウム塩の析
出と分離、石こうの析出と分離、更に、２ＫＧＡの析出
と分離など複雑な工程からなり、収率の低下が避けられ
ない。また、カルシウム塩の溶解度が高いため高濃度に
濃縮して析出しようとすると、析出液の粘度が高くなり
、結晶の成長が悪くなり、微細な結晶としかなり得ず、
結晶の分離が著しく困難になる。更に、石こうを除去し
たあとのる液になお溶解している石こうが濃縮で析出す
るため、２ＫＧＡの結晶の分離を阻害し、品質の低下が
避けられない。以上のように（１）の方法は工業的有利
な方法とは云い難い。

（２）の方法は、醗酵液には菌体のような不溶性不純物
、金属イオン、そのほかに各種の不純物が混在している
ので、醗酵液をろ過し、カチオン交換樹脂（Ｈ形）で処
理をするのみではこれら不純物の除去が不十分なため析
出液が高粘度になり、結晶の成長が阻害されて微細な結
晶にしかなり得ないことなどから結晶の分離が著しく困
難になり、結晶の品質および収率の低下が避けられない
。以上のように、（２）の方法は工業的有利な方法とは
云い難い。

（３）の方法は、醗酵液のろ過とアンバーライト−２０
０（Ｈ形）による処理以外にあまりにも複雑な工程を必
要とするため側底工業的有利に実施し得る方法とは云い
難い。

課題を解決する手段 本発明者らは、このような事情に鑑みて、２ＫＧＡまた
はその水溶性塩を含有する醗酵液から高品質の２ＫＧＡ
を高収率で分離することを目的に鋭意研究した結果、２
ＫＧＡの析出においてアニオン性不純物の混在量をある
一定基準量以下に抑えておくことが極めて重要かつ必須
なことを見出し、本発明を完成するに至った。

すなわち本発明は、２−ケＩ−−Ｌ−グロン酸よりも酸
性度の高い酸性不純物を含有する２−ケト１、−グロン
酸またはその水溶性塩の水溶液をアニオ〉交換樹脂に接
触させ上記酸性不純物を吸着させて得られる処理液から
２−ケト−Ｌ−グロン酸またはその水溶性塩を析出さゼ
ることを特徴とする２−ケト−Ｌ−グロン酸またはその
水溶性塩の精製法に関する。

２ＫＧＡの水溶性塩としては、たとえばすトリウム塩、
カリウム塩、カルシウム塩が挙げられる。

本発明において、アニオン交換樹脂に接触させる２ＫＧ
Ａまたはその水溶性塩の水溶液（以下、「原料液」と省
略することもある）としては、たとえば特開昭６ｌ−２
２８２８８（ヨヘロッパ特許公開第０２２１７０７号）
に記載された方法、ｒなわち微生物の醗酵により得られ
る２ＫＧＡまたはその水溶性塩を含有してなる醗酵液、
またはたとえば「ビタミン学の進歩、第２集、日本ビタ
ミン学会編（１９６０）、Ｉ）１２１Ｊに記載された方
法、すなわち自戒法により得られる２ＫＧＡまたはその
水溶性塩を含有してなる水溶液が挙げられ、本発明の精
製法は、特に醗酵液に対して有利に適用される。

該醗酵液には菌体などの不溶性不純物、有機酸やアミノ
酸などの有機性塩類、各種の無機性塩類および色素など
種々の不純物が含有されている。

これらの不純物の中で菌体などの不溶性不純物や蓚酸カ
ルシウム、りん酸カルシウム及び硫酸カルシウムのよう
な難溶性塩類は自体公知の方法、たとえば遠心分離、ろ
過等によりあらかじめ除去することが好ましい。また、
金属イオンやそのほかのカチオン性の不純物はカチオン
交換樹脂（Ｈ形）に接触させて脱カチオンすることが好
ましい。

特に、該醗酵液をろ過または遠心分離に付し、不溶性不
純物および難溶性塩類を除去し、ついでカチオン交換樹
脂に接触させた原料液をアニオン交換樹脂に接触させる
ことが好ましい。

上記アニオン交換樹脂およびカチオン交換樹脂に接触さ
せる方法としては、カラム法およびバッチ法のいずれで
もよいが、本発明を工業的に実施する際にはカラム法が
より好ましい。

次に本発明で用いられるイオン交換樹脂について述べる
。

アニオン交換樹脂としては、強塩基性、中塩基性および
弱塩基性のいずれでもよいが、一般に弱塩基性のものを
用いるのが好ましく、その例としてはダイヤイオンＷＡ
−３０（ＯＨ形）、ＷＡ−２１（ＯＨ形）、ＰＡ−４１
２（ＯＨ形）［三菱化成社製１．アンバーライｌ−Ｉ　
ＲＡ−３５（ＯＦ−Ｈ形）、アンバーライトＩＲＡ−９
４（ＯＨ形）［米国ローム・アンド・ハース社製］、ダ
ウエックス６６（ＯＨ形）、ダウエックスＭＷＡ−１（
ＯＨ形）［米国ザ・ダウ・ケミカル・カンパニー製ｊ等
が挙げられる。

カチオン交換樹脂としては、強酸性および弱酸性のいず
れでもよいが、一般に強酸性のものを用いるのが好まし
く、その例としてはアンバーライト２００Ｃ（Ｈ形）Ｃ
米国ローム・アンド・ハース社製］、ダイヤイオン５Ｋ
ＩＢ（ＩＮ形）、ＰＫ２１６（Ｈ形）［三菱化成社製］
、ダウエックス５０Ｗ（Ｈ形）、ダウエックス８８（Ｈ
形）およびＭＳＣ−１（ｌ］形）［米国ザ・ダウ・ケミ
カル・カンパニー製ｊ等が挙げられる。

以後、アニオン交換樹脂（ＯＨ形）に接触させに液を処
理液、アニオン性不純物をＡＩとそれぞれ略称する。ま
た、ＡＩ及びその２ＫＧＡに対する混在比率Ｒを以下の
ように定義する。２−ケトＬ−グロン酸を含有する醗酵
液をろ過または遠心分離し得られた２ＫＧＡまたはその
水溶性塩の水溶液をカチオン交換樹脂（！（形）で脱カ
チオンした原料液について、中和滴定法で求めた酸の当
量を総酸当量濃度［Ｔ　Ａ　］（ｇ　−ｅｑ／　Ｑ）と
し、同じ溶液についてＨＰＬＣ法で測定した２ＫＧＡ量
から算出した２ＫＧＡの酸当量濃度をｆ２　Ｋ　ＧＡ］
Ｃｇ−ｅｑ／Ｑ）とする。ＡＩの当量濃度［Ａ　Ｉ　］
　（ｇ−ｅｑ／　Ｑ’）及びＡ　Ｉの２ＫＧＡに対する
混在比率Ｒをそれぞれ以下のように表す。

ＥＡＮ＝ｆＴＡ］　　ｆ２ＫＧＡ］　　Ｃｇ−ｅｑ／ｆ
２）Ｒ−（［Ａ　Ｉ］／［２ＫＧＡ］ｌＸ１００　　（
％）すなわち、Ｒは２ＫＧＡに対する酸性不純物の等量
比を示す。

一般に２ＫＧＡまたはその水溶性塩を含有する醗酵液を
ろ過または遠心分離に付し、菌体等の不溶性不純物およ
び難溶性塩類を除去した水溶液のＲは３０％以上であり
、本発明においては該醗酵液をそのまま原料液として用
いることができる。

また、処理液のＲは、一般に約３０（％）以下となるよ
うに原料液をアニオン交換樹脂に接触させればよい。

本発明において該醗酵液のＲは、通常約４０〜７０％で
ある。また該酸性不純物のうち、２ＫＧＡよりも酸性度
の高い酸性不純物が、Ｒに対して約５０〜９０％の割合
で占める。したがって、本発明においては２ＫＧＡより
も酸性度の高い酸性不純物を、アニオン交換樹脂に接触
させることにより吸着する。

次に本発明において用いられるアニオン交換樹脂の樹脂
量について説明する。該樹脂量は、原料液中のＲ１原料
液の容量、用いられる樹脂のアニオン交換能等の条件に
より異なるが、たとえばＲが約３０〜２００（％）であ
る原料液を弱塩基性アニオン交換樹脂（ダイヤイオンＷ
Ａ−３０（ＯＨ形）。

交換容量：　１．５（ｍｅｑ／顧）以上）に樹脂ｌαあ
たりのＡＩ当量が約２〜５Ｃｇ　　ｅｑｌＱ−ｒｅｓｉ
ｎ）となるように接触させればよい。なお、処理液のＲ
はその値が小さい程、析出工程における２ＫＧＡ収率は
高くなるがＲが約１０％以下になると２ＫＧＡがアニオ
ン交換樹脂に吸着され該樹脂接触時の２ＫＧＡ収率が悪
くなるので一般にＲは１０％〜２５％であることが好ま
しい。

またＲが約３０％未満である原料液を用いた場合におい
ても、アニオン交換樹脂に接触させることにより、Ｒは
樹脂接触前のそれ以下となり、より結晶純度の高い２Ｋ
ＧＡ結晶を得ることが可能である。

かくして得られる処理液は、必要に応じて活性炭または
脱色樹脂を用いて脱色処理してもよい。

衷真男 以下、参考例、実験例及び実施例により本発明をさらに
詳しく説明するが、ここで用いた醗酵液はいずれも以下
の参考例に示す方法で製造されたものである。

参考例１ グルコース２．０％、ペプトン１．０％、乾燥酵母１．
０％、炭酸カルシウム２．０％、およびアクトコール（
消泡剤、武田薬品工業製）０．０１％からなる前培養培
地５００戒を２Ｑ容の坂ロフラスコに分注し、１２０℃
で２０分間蒸気滅菌した。

この坂ロフラスコに２−ケト−Ｌ−グロン酸生産菌ンユ
ードグルコノバクター・サツ力ロケトゲネスＴＨ１４−
８６株（ＩＦＯ１４４６６、ＦＥＲＭＢＰ−１１２８）
を接種し、２８°０．３日間往復振盪（８５ｓｐｉｎ）
培養して前培養液を得た。

グルコース３．０％、Ｃ３Ｌ　　１．０％、乾燥酵母０
．５％、チオ硫酸ナトリウム０．０５％、硫酸第１鉄０
．１％、炭酸力ルンウム２．０％およびアクトコール０
．０３％からなる種培養培地３０１２（ｐＨ６，５）を
５０４容の醗酵槽に仕込み、１２５°Ｃで３０分間蒸気
滅菌した。この醗酵槽に上記で得られた前培養液５００
−を移植し、撹拌２００ｒｐｍ　、通気３０Ｑ／ｌ１ｉ
ｎ、内圧１　、０　ｋｇ／ｃｍ２Ｇ、　３０°Ｃの条件
下で３日間培養して種培養液を得た。一方混合菌バチル
ス・メガテリウムＩＦ０　１２１０８株を上記の前培養
培地５００−を含む２Ｑの坂ロフラスコに接種し、２８
°Ｃ１２日間往復振盪（８５ｓｐｍ）培養してバチルス
・メガテリウムの種培養液を得た。

Ｌ−ソルボース３　ｋｇ（別に滅菌して加えた）、炭酸
カルシウム７ｋｇ、　ＣＳ　Ｌ　　２ｋｇ、乾燥酵母３
００ｇ、ｉ酸アンモニウム３００ｇ、チオ硫酸ナトリウ
ム５０ｇ１硫酸第１鉄１００ｇおよびアクトコール３０
ｇに水を加えて得られた培地６５Ｑを２００Ｑ容醗酵槽
に仕込み、１２５°Ｃで３０分間蒸気滅菌した。この醗
酵槽に前記したシュードグルコノバクタ−・サツ力ロケ
トゲネスＴＨ１４−８６株の種培養液１０１２および混
合菌バチルス・メガテリウムＩＦ０　１２１０８株の種
培養液５００威を移植し、撹拌数２００　ｒｐｍ、通気
８Ｑ４／ｍｉｎ、内圧１　、０　ｋｇ／　ｃｍ２Ｇ、　
３０００で培養を開始した。一方、Ｌ−ソルボース１５
ｋｇを水に溶解して３０Ｑ、とし、１２０°Ｃで２０分
間蒸気滅菌しソルボース水溶液を、培養６時間口から連
続的に醗酵槽に加え、３６時間で全量添加した。ソルボ
ース添加終了後さらに２８時間前記条件下で培養し、合
計７０時間培養して、２−ケト−Ｌ−グロン酸含有醗酵
液を得た。

参考例２ Ｌ−ソルボース１１．５％（別に滅菌して加えた）、乾
燥酵母０．３％、Ｃ５Ｌ　　３．０％、チオ硫酸すｌ−
ＩＪウム０．１％、硫酸第１鉄０．２％、炭酸カルシウ
ム１．０％からなる醗酵培地１００Ｉ２を２００Ｑ容醗
酵槽に仕込み、１２５℃で３０分間蒸気滅菌した。この
醗酵槽に参考例１に用いたシュードグルコノバクタ−・
サツ力ロケトゲネスＴＨ１４−８６株の種培養液１０Ｑ
を移植した。２０％苛性ソーダで醗酵液のｐＨを６，５
に調節しながら、撹拌２０　Ｏｒｐｍ、通気８０Ｑ／ｍ
ｉｎ、内圧１．Ｏｋｇ／ｃｍ”Ｇの条件下で３０°Ｃ４
日間培養して２−ケト−Ｌ−グロン酸含有醗酵液を得た
。

参考例３ グルコース２．０％、ペプトン１．０％、ＦｕａＪｙル
シウム２．０％およびアクトコール（消泡剤。

武田薬品玉業製）０．０１％からなる前培養培地各５０
０顧を２Ｑ容の坂ロフラスコに分注し、１２０°Ｃで２
０分間蒸気滅菌した。該坂ロフラスコに２−ケト−Ｌ−
グロン酸生産菌シュードグルコノバクタ−・サツ力ロケ
トゲネスＴＨ１４−８６株（ＩＦＯ１４４６６、ＦＥＲ
Ｍ　ＢＰ−１１２８）を接種し、２８°Ｃ，３日間往復
振盪（８５ｓｐｍ）培養して前培養液を得た。

グルコース３．０％、ＣＳＬ　　１．０％、乾燥酵母０
．５％、チオ硫酸ナトリウム０．０５％、硫酸第１鉄Ｏ
９１％、炭酸カルシウム２．０％およびアクトコール０
．０３％からなる種培養培地３６０Ｑ　　（ｐＨ６，５
）を５ＯＯＱ容の培養槽に仕込み、１２５℃、３０分間
蒸気滅菌した。この培養ＦＪこ上記で得られた前培養液
ＩＱを移植し、撹拌２００ｒｐｍ、通気１８０Ｑ　／１
１１ｉｎ、内圧１　、０　ｋｇ／　ｃｍ”Ｇ。

３０°Ｃの条件下で３日間培養して種培養液を得た。

一方、混合菌バチルス・メガテリウムＩＦ０１２１０８
株を上記の前培養培地５００顧紮含む２１２容の坂ロフ
ラスコに接種し、２８°０．　２日間往復振盪（８５ｓ
ｐｍ）培養してバチルス・メガテリウムの前培養液を得
た。

上記の前培養培地３０（２を５０Ｑ容の培養槽に仕込み
、１２５°Ｃ２３０分間蒸気滅菌した。この培ＩＩ槽に
上記で得られたバチルス・メガテリウムの前培養液５０
０−を移植し、撹拌２５Ｏｒｐｍ。

通気１５Ｑ　／ｍｉｎ、内圧１．０　ｋ　ｇ／　ｃ　ｍ
”Ｇ、　２８℃の条件下で２日間培養してバチルス・メ
ガテリウムの種培養液を得た。

Ｌ−ソルボースｌ０８ｋｇ　（別に滅菌して加えた）、
炭酸力ルンウム２５２ｋｇ、Ｃ５Ｌ　　７２ｋｇ、乾燥
酵母１０．８ｋｇ、チオ硫酸すトリウム１．８ｋｇ、硫
酸第１鉄３．６ｋｇおよびアクトコール１．、Ｏｋｇに
水を加えて得られた培地２２００Ｑを６　ｍ　３容醗酵
槽に仕込み、＋２５°Ｃで３０分間蒸気滅菌した。この
醗酵槽に前記したシュドグルコノベクター・ザンカロケ
トゲ不スＴ　ＨＩ３−８６株の種培養液３６０ｆ２およ
び混合菌バチルス・メガテリウムＩＦ０　１２１０８株
の種培養液２０Ｑを移植し、撹拌９０ｒｐｍ、通気１８
００　Ｑ　／ｗｉｎ、内圧１．０　ｋ　ｇ／ｅｍ２Ｇ、
　３　Ｑ℃で培養を開始した。一方、Ｌ−ソルボース水
溶液を、培養６時間口から連続的に醗酵槽に加え、３６
時間で全量添加した。ソルボース添加終了後さらに３０
時間前記条件下で培養し、合計７２時間培養して、２−
ケト−Ｌ−グロン酸を１４２　ｇ／Ｑ含有する醗酵液を
得た。

参考例４ 醗酵槽の初期内圧を約Ｏｋｇ／ａｍ’Ｇにして、参考例
３と同様の方法で醗酵を開始し、醗酵の進行とともに内
圧を徐々に高め最終的に内圧を１゜０ｋｇｃｍ２Ｇにし
て６６時間培養し、参考例３と同等の２−ケト−Ｌ−グ
ロン酸を含有する醗酵液を得た。

実験例 参考例１に示す方法で得られた醗酵液６０Ｑに硫酸を加
えてｐＨを１．５に調整後、不溶物をろ過して除き、ろ
液をアンバーライト２００　Ｃ（Ｈ形）５１２を充填し
た塔に通過させた。水押し出し液と合わせて７７．５Ｑ
の原料液が得られた。２ＫＧＡが８，１５６ｇ（４２，
０ｇ−ｅｑ）、ＡＩが２３．５ｇｅｑそれぞれ含有され
、Ｒは５６．０％であった。この原料液を５区分に分割
し、以下のようにそれぞれ処理して２ＫＧＡを分離した
。

（１）第１区分二原料液４．０ＱＣ２ＫＧＡを４２１゜
０ｇ含有）を３９〜４１°Ｃで撹拌しながら２ＫＧＡと
して７５％（ｗ／ｖ％）になるまで減圧濃縮したあと１
２時間かけて５℃まで冷却した。次に、ナイロン製のろ
布を付した遠心分離機（国産遠心機（株）、Ｔｙｐｅ　
Ｈ−１１０Ａ、　３．ＯＯＯｒｐｍ）を用いて、結晶と
母液を分離し、次いで５°Ｃの水８０ｍＱを噴霧して結
晶を洗浄しｔ；。母液の粘度は６５センチポイズ（２０
℃）、ｐＨは０．４であった。湿結晶を３０°Ｃで減圧
乾燥して３８８．２ｇの第１結晶が得られた。該第１結
晶中の２ＫＧＡの含有量は３３２．６ｇであり、無水物
あたりの純度（以下、単に純度と略す）は９３．３％で
あった。母液と結晶の洗浄液を合わせて３９〜４１’Ｃ
で撹拌しなから２ＫＧＡとして５５％（Ｗ／Ｖ％）にな
るまで減圧濃縮したあと１２時間かけて５°Ｃまで冷却
した。次に、上記した遠心分離機を用いて、結晶と母液
を分離し、次いで５°Ｃの水２０−を噴霧して結晶を洗
浄した。母液の粘度は３２０センチポイズ（２０°Ｃ）
、ｐＨは０．１であった。湿結晶を３０℃で減圧乾燥し
て３７．８ｇの第２結晶が得られた。該第２結晶中の２
ＫＧＡの含有量は２９．９ｇであり、純度は８５．９％
であった。第１結晶と第２結晶を合わせると、析出収率
は８６．１％、結晶純度は９２゜６％であった。

（２）第２区分：　原料液２７．２１２（２ＫＧＡを２
゜８６２ｇ含有）をダイヤイオンＷＡ−３０（ＯＨ形）
１．７１２を充填した塔に通過させた。水押し出し液と
合わせて３０．６１２の処理液が得られた。該処理液中
には２ＫＧＡが２．８６０ｇ（１４，７ｇ−ｅｑ）、Ａ
Ｉが４．３０ｇ−ｅｑそれぞれ含有され、Ｒは２９゜３
％であった。次に、処理液４．５０ｆｆ（２ＫＧＡを４
２１．０ｇ含有）を取り、以下（１）と同様に操作した
。第１結晶３７３．８ｇ（２ＫＧＡを３３１゜７ｇ含有
、純度９６．８％）が得られ、母液の粘度は３０センチ
ポイズ（２０℃）、ｐＨは０．９であった。また第２結
晶５２．１ｇ（２ＫＧＡを４３．８ｇ含有、純度９１．
７％）が得られ、母液の粘度は６０センチポイズ（２０
°Ｃ）、ｐＨは０．７であった。

第１結晶と第２結晶を合わせると、析出収率は８９．２
％、結晶純度は９６．２％であった。

（３）第３区分：　原料液２２．１Ｑ（２ＫＧＡを２゜
３２６ｇ含有）を（２）と同様にダイヤイオンＷＡ−３
０（ＯＨ形）で処理して２５．５αの処理液が得られた
。該処理液中には、２ＫＧＡが２，３０３ｇ（１１，９
ｇ−ｅｑ）、ＡＩが２．８６ｇ−ｅｑそれぞれ含有され
、Ｒは２４．０％であった。次に、処理液４．６６１２
（２ＫＧＡを４２１．０ｇ含有）を取り、以下（１）と
同様に操作して、第１結晶３６５．０ｇ（２ＫＧＡを３
２８．８ｇ含有、純度９８．３％）が得られ、母液の粘
度は１５センチポイズ（２０°Ｃ）、ｐＨは１．ｌであ
った。また第２結晶６３．５ｇ（２ＫＧＡを５４．７ｇ
含有、純度９４．２％）が得られ、母液の粘度は３２セ
ンチポイズ（２０℃）、ｐＨはｌ、０であった。第１結
晶と第２結晶を合わせると、析出収率は９１．１％、結
晶純度は９７゜７％であった。

（４）第４区分：　原料液１３．ｆｌ（２ＫＧＡを１゜
４３１ｇ含有）を（２）と同様にダイヤイオンＷＡ−３
０（ＯＨ形）で処理してｌ　７．ＯＱの処理液が得られ
た。該処理液中には、２ＫＧＡが１，３７４ｇ（７，０
８ｇ−ｅｑ）、ＡＩが０．８８５ｇ−ｅｑそれぞれ含有
され、Ｒは１２．５％であった。次に、処理液５．２１
４（２ＫｃＡを４２１．０ｇ含有）を取り、以下（１）
と同様に操作して、第１結晶３５７．４ｇ（２ＫＧＡを
３２７．１ｇ含有、純度１００％）が得られ、母液の粘
度は１０センチポイズ（２０℃）、ｐＨは１．４であっ
た。また第２結晶７４．６ｇ（２ＫＧＡを６６．５ｇ含
有、純度９７．２％）が得られ、母液の粘度は１９セン
チボイズ（２０°Ｃ）、ｐＨは１．３であった。第１結
晶と第２結晶を合わせると、析出収率は９３．５％、結
晶純度は９９．７％であった。

（５）第５区分：Ｗｌ、料液６．８０ｆ２（２ＫＧＡを
７１５，６ｇ含有）を（２）と同様ｌ、′ダイヤイオン
ＷＡ３０（ＯＨ形）で処理して１０．２Ｑの処理液が得
られた。該処理液中には、２ＫＧＡが５６６．８ｇ（２
，９２ｇ−ｅｑ）、ＡＩがＯ，１６２’ｇ−ｅｑそれぞ
れ含有され、Ｒは５４５５％であった。次に、処理液７
．５８４（２ＫＧＡを４２１．２ｇ含有）を取り、以下
（１）と同様に操作して、第１結晶３５５．０ｇ（２Ｋ
ＧＡを３２４．３ｇ含有、純度１００％）が得られ、母
液の粘度は７センチポイズ（２０°Ｃ）、ｐＨはｌ　４
であった。また第２結晶８７．！ｂ；（２ＫＧＡを７８
．４ｇ含有、純度９７．５％）が得られ、母液の粘度は
１１センチポイズ（２０℃）、ｐＨは１．３であった。

第１結晶七第２結晶を合わせると、析出収率は９５６％
、結晶純度は９９．５％であった。

これらの結果を第１表にまとめた。

第１表 区分 原料液　ア・才、・交換　　処理液　　析　出２）樹脂
処理 Ｒ（％）処理量　収率（％）Ｒ（％）収率（％）結晶純
度（％） 第２　５６．０　　４．８５　　９９゜９　　２９，３
　　８９．２第３　５６．０　３゜９４　９９．０　２
４．０　９１．１第４　５６．０　　２．４２　　９６
．０　　１２．５　　９３．５９６．２ ９７．７ ９９．７ 注　１）アニオン交換樹脂（０）（形）１０．あたりに
供給した原料液中のＡＩ量（単位：Ａ　ｒ　　ｇ−ｅ＋
ｑ／Ｒｅ５ｉｎ）を示す。

２）第１結晶と第２結晶を合わせて析出収率及び無水物
あたりの結晶純度を示す。

第１表から明らかなように第１区分では、醗酵液をろ過
し、カチオン交換樹脂（Ｈ形）で処理して得られた原料
液をそのまま濃縮して２ＫＧＡを晶析させｊ−が、結晶
と母液の分離性が著しく困難であるうえに、析出収率及
び結晶純度が低かった。

第２〜５区分においては、原料液をアニオン交換樹脂（
ＯＨ形）で処理して、ＡＩを部分的に除去した処理液と
なした後、濃縮して２ＫＧＡを析出させた。第２、第３
、及び第４区分では、アニオン交換樹脂に対する処理量
を少なくするほど、ｌの２ＫＧＡに対する混在比率が減
少し、結晶と母液の分離性が改善され、それに伴って析
出収率及び結晶純度が向上した。しかし、第５区分のよ
うに処理量を更に少なくすると、処理液のＡＩの２ＫＧ
Ａに対する混在比率は、更に減少するが、アニオン交換
樹脂処理の際に、２ＫＧＡが一部吸着さｔ″ＬＬ損失た
め、？ニオン交換樹脂処理と析出を合わせた収率が低下
した。

以上のことから、ＡＩの２ＫＧＡに対する混在比率が高
い原料液をそのまま濃縮して２ＫＧＡを析出させると、
結晶と母液の分離性が著【７く困がであるうえに、析出
収率及び結晶純度が低くなるｊ二め、工業的方法として
望ましくないが、原料液をアニオン交換樹脂（ＯＨ）で
２ＫＧＡの吸着損失がほとんどない範囲処理を行い、か
つ、ＡＩの２Ｋ　Ｇ　Ａに対する混在比率を一般に約３
０°６以下、好ましくは約２０％以下になるように抑制
すれば、高品質の２ＫＧＡを高収率で分離できることが
明らかである。

実施例１ 参考例１に示す方法で得られた醗酵液７．０１２（２Ｋ
ＧＡを１．００６ｇ含有）をろ過して不溶物を除き、洗
浄液と合わせたろ液８．４５０をアンパライト２００　
Ｃ（Ｈ形）を６．０Ｑ充填した塔に通過させ、水押し出
し液とあわせて１６．Ｏｆ２の原料液が得られた。該原
料液中には２ＫＧＡが９２２゜８ｇ（４，７５ｇ−ｅｑ
）、ＡＩが２．５４ｇ−ｅｑそれぞれ含有され、Ｒは５
３．５％であった。該原料液１２．８４Ｑを２分割し、
それぞれ以下のように処理した。

（１）　　原料液６．４２ａ、（２ＫＧＡを３７０．０
ｇ含有）をダイヤイオンＷＡ−３０（ｏＩｉ形）を０．
３５Ｑ充填した塔に通過（ＡＩと１２で２．９１ｇ−ｅ
ｑｌｏＲｅｓｉｎ）させ、水押し出し液と自わせで７１
２Ｑの処理液が得られた。該処理液中には２ＫＧＡが３
６　８．０ｇ（１，９０ｇ　−（川）、　　、八　■　
が　０．３７０ｇｅｑそれぞれ含有され、Ｒは１９．５
％であった。

この処理液を撹拌しながら３９〜４１℃で２ＫＧＡとし
て約７０％（ｗ／ｖ）になるまで減圧濃縮して２ＫＧＡ
を析出させ、さらに撹拌しながら１２時間で５°Ｃまで
冷却した。実験例と同じ遠心分離機を用いて結晶と母液
を分離し、５°Ｃの水７〇−を噴霧して結晶を洗浄した
。湿結晶を３０℃で減圧乾燥し、３０４．３ｇの第１結
晶が得られた。該第１結晶中の２ＫＧＡの含有量は２７
７．８ｇであり、純度は９９．９％であった。母液と結
晶洗浄液を合わせた液を３９〜４１°Ｃで２ＫＧＡとし
て約５０％Ｗ／Ｖになるまで減圧濃縮して２ＫＧＡを析
出させ、さらに撹拌しながら１２時間で５°Ｃまで冷却
した。実験例と同じ遠心分離機を用いて結晶と母液を分
離し、５°Ｃの水２０顧を噴霧して結晶を洗浄した。湿
結晶を３０°Ｃで減圧乾燥し、６８．１ｇの第２結晶が
得られた。該第２結晶中の２ＫＧＡの含有量は６１．１
ｇであり、純度は９８゜１％であった。

（２）原料液６．４２ｆｆ（２ＫＧＡを３７０．０ｇ含
有）を（１）と同様に濃縮析出及び結晶分離を行い２Ｋ
ＧＡを採取した。第１結晶は３２９．４ｇ（２ＫＧＡを
２８４．２ｇ含有、純度９４．１％）および第２結晶は
３３．８ｇ（２ＫＧＡを２７．０ｇ含有、純度８６．２
％）であった。

実施例２ 参考例２に示す方法で得られた醗酵液４０Ｑをセラミッ
クスフィルター（東芝セラミックス（株）、ＭＥＭＢＲ
ＡＬＯＸ　？　ルチタイプメディアＰ１９ＸＬ７５０ｍ
ｍ、　０．２　ｐ）で不溶物をのぞき、５６Ｑの澄明な
る液が得られた。ろ液８．３５１２を取り、ダイヤイオ
ン５ＫＩＢ（Ｈ形）５．５（２を充填した塔に通過させ
、水押し出し液と合わせて１９．１の原料液が得られた
。該原料液中には２ＫＧＡが８４８゜０ｇ（４，３７ｇ
−ｅｑ）、ＡＩが２．５４ｇ−ｅｑそれぞれ含有され、
Ｒは５８．１％であった。該原料液１８．３ｆｆを２分
割し、それぞれ以下のように処理した。

（１）原料液９．１５Ｑ（２ＫＧＡを４００．０ｇ含有
）をダイヤイオンＰＡ３１８（ｏＨ形）を０．３０Ｑ充
填した塔に通過（ＡＩとして３　、９９　ｇ　−ｅｑ／
Ｑ−Ｒｅｓｉｎ）させ、水押し出し液と合わせて９．７
５１２の処理液が得られた。該処理液中には２ＫＧＡが
３９９．０ｇ（２，０６ｇ−ｅｑ）、ＡＩが０．４９３
ｇ−ｅｑそれぞれ含有され、Ｒは２４．０％であった。

以下、この処理液を実施例１（１）と同様に濃縮析出及
び結晶分離を行い２ＫＧＡを採取した。

第１結晶は３２５．２ｇ（２ＫＧＡを２９６．５ｇ含有
、純度９９．６％）および第２結晶は８３．４ｇ（２Ｋ
ＧＡを７５．０ｇ含有、純度９８．３％）であった。（
２）原料液９．１５１２（２ＫＧＡを４００．０ｇ含有
）を実施例１（１）と同様にして濃縮析出及び結晶分離
を行い２ＫＧＡを採取した。

第１結晶は３５２．０ｇ（２ＫＧＡを３０４．０ｇ含有
、純度９３．９％）および第２結晶は４４．６ｇ（２Ｋ
ＧＡを３５．２ｇ含有、純度８５．２％）であった。

実施例３ 参考例３に示す方法で得られた醗酵液１８２０Ｑに硫酸
を加えてｐＨを１．５に調整後、不溶物を予めハイクロ
ス−パーセルを４０ｋｇとスタンダードスーパーセル２
０ｋｇをコートしたオリバー型ドラムフィルター（大機
ゴム工業株式会社製、濾過面積４．５ｍ”）で濾過して
除き、洗浄液と合わせて２１６０（２の濾液が得られた
。該濾液のうち１４００Ｉ２をダイヤイオンＰＫ２１６
（Ｈ形）（三菱化成株式会社製３５ｉＸ２２００Ｈ）１
４０Ｑを充填した塔（内径３５ｃｍ、高さ２２０ｃｍ）
に通過させた。水押し出し液と合わせて１７ＩｃＩＱの
原料液が得られた。２ＫＧＡが１３６゜８ｋｇ（７０５
ｇ−ｅｑ）、ＡＩが４１９ｇ−ｅｑそれぞれ含有され、
Ｒは５９．５％であった。この原料液を以下のように処
理して２ＫＧＡを分離した。

（１）原料液８００Ｑ　（２ＫＧＡを６４．０ｋｇ含有
）を撹拌しながら約７５％ｗ／ｖになるまで減圧濃縮し
て２ＫＧＡを析出させ、さらに撹拌しながら１２時間で
５°Ｃまで冷却した。ナイロン製の濾布を付した遠心分
離機（松本機械製作新製Ｔｙｐｅ　　ＫＭ　　３０）を
用いて結晶と母液を分離し、５°Ｃの水７．０（２を噴
霧して結晶を洗浄した。　湿結晶を３０°Ｃで減圧乾燥
し、５９．５ｋｇの第１結晶が得られた。該第１結晶注
の２ＫＧＡの含有量は５１．３ｋｇであり、純度は９３
゜８％であった。母液と結晶洗浄液を合わせた液を３８
〜４１°Ｃで２ＫＧＡとして焼く５５％ｗ／ｖになるま
で減圧濃縮して２ＫＧＡを析出さセ、さらに撹拌しなが
ら１２時間で５°Ｃまで冷却した。

ナイロン製の濾布を付した遠心分離機（田辺鉄工新製、
直径４８ｃｍ）を用いて結晶と母液を分離し、５°Ｃの
水０．５１２を噴霧して結晶を洗浄した。

湿結晶を３０°Ｃで減圧乾燥し、４．５０ｋｇの第２結
晶が得られた。該第２結晶中の２ＫＧＡの含有量は３．
５０ｋｇであり、純度は８２．４％であった。

（２）原料液８００Ｑ　（２ＫＧＡを６４−０ｋｇ含を
）をダイヤイオンＰＡ−４１２（ＯＨ形）を６５ｆ２充
填した塔に通過（ＡＩとして３．０２ｇ−ｅ　ｑ　／　
Ｑ　Ｒｅ５ｉｎ）させ、水押し出し液と合わせて９１０
Ｑの処理液が得られた。該処理液中には２ＫＧＡが６３
．４ｋｇ　（３２７ｇ−ｅｑ）、ＡＩが７０．２ｇ−ｅ
ｑそれぞれ含有され、Ｒは２１．５％であった。

該処理液を（１）と同様に濃縮析出及び結晶分離を行い
２ＫＧＡを採取した。第１結晶は５３゜８ｋｇ　（２Ｋ
ＧＡを４８．８ｋｇ含有、純度９９゜１％）および第２
結晶は１０．４ｋｇ　（２ＫＧＡを９．３０ｋｇ含有、
純度９８．０％）であった。

発明の効果 本発明の精製法によると、従来法に比較して少ない工程
で酸性不純物を含有する２ＫＧＡまたはその水溶性塩の
水溶液から高収率で高純度の２ＫＧＡまたはその水溶性
塩を分離することが可能である。

代理人　　弁理士　岩　１）　　弘

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. （１）２−ケト−Ｌ−グロン酸よりも酸性度の高い酸性
   不純物を含有する２−ケト−Ｌ−グロン酸またはその水
   溶性塩の水溶液をアニオン交換樹脂に接触させ、上記酸
   性不純物を吸着させて得られる処理液から２−ケト−Ｌ
   −グロン酸またはその水溶性塩を析出させることを特徴
   とする２−ケト−Ｌ−グロン酸またはその水溶性塩の精
   製法。
2. （２）原料液としてあらかじめカチオン交換樹脂に接触
   させて脱カチオンした２−ケト−Ｌ−グロン酸水溶液を
   用いる請求項１の精製法。
3. （３）原料液として酸性不純物量が当量比で２−ケト−
   Ｌ−グロン酸量の３０％以上である水溶液を用いる請求
   項１または２の精製法。
4. （４）アニオン交換樹脂に接触させて得られる処理液中
   の酸性不純物量を当量比で２−ケト−Ｌ−グロン酸量の
   ３０％以下とする請求項１または２の精製法。