JPH02174797A

JPH02174797A - ペプチド誘導体およびその用途

Info

Publication number: JPH02174797A
Application number: JP1056350A
Authority: JP
Inventors: Masataka Ooba; 大場　優孝; Hiromichi Kumagai; 博道熊谷; Shunsaku Harie; 俊策針江; Keiichi Uchida; 内田　啓一
Original assignee: Asahi Glass Co Ltd
Current assignee: AGC Inc
Priority date: 1988-09-09
Filing date: 1989-03-10
Publication date: 1990-07-06
Anticipated expiration: 2014-09-06
Also published as: DE68921469T2; EP0406428A1; DE68921469D1; JP2945680B2; EP0406428B1; EP0406428A4; WO1990002751A1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】［産業上の利用分野］本発明は新規な合成環状ペプチドあるいはその塩からな
るペプチド誘導体、およびそれを有効成分とする動物細
胞の接着阻害剤に関するものである。

［従来の技術］動物細胞の細胞外基質に対する接着性に関与する因子と
して、フィブロネクチンやビトロネクチンが知られてい
る。これらの細胞接着因子は−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ
−なる接着部位を有する。従って、この接着部位と同じ
トリペプチド残基な有する化合物は細胞接着因子による
接着性を阻害する。即ち、この細胞接着阻害因子は細胞
接着因子が結合する被接着部位に結合するためその後に
細胞接着因子が結合することを阻害する。

このような細胞接着阻害因子としてはたとえばＧｌｙ−
Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏが知られてい
る。細胞接着阻害因子は動物細胞の接着性に関連する研
究用の試薬として用いられている他、癌細胞の転移の抑
制（転移光での接着固定化の阻止）のための薬剤として
期待されている。

［発明の解決しようとする課題］従来公知の細胞接着阻害因子は線状ペプチドであるため
溶液中で特定の立体構造が安定的に存在し難くその効果
を充分に発揮し難い場合があった。また、アミノ末端や
カルボキシル末端が存在しているためアミノペンタン酸
やカルボキシペブチターゼなどの酵素による加水分解を
受は易（、これら酵素の存在する液中での安定性が不充
分であった。

細胞接着阻害因子の構造安定性を向上すべ（、前記トリ
ペプチド残基の他にシスティン残基を有するポリペプチ
ドを合成し、ジスルフィド結合で環化した化合物が知ら
れている（Ｍ、Ｄ。

Ｐｉｅｒｓｃｈｂａｄｈｅｎ他、Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅ
ｍ、　、　２６２．１７２９４−１７２９８（１９８７
））、　Ｌ、かしながら、ジスルフィド結合を有する細
胞接着阻害因子も上記問題を充分に解決するまでには至
っていない。

［課題を解決するための手段］本発明は、前記課題を解決した新規なペプチド誘導体、
およびそれを有効成分とする細胞接着阻害活性を有する
薬剤に関する下記発明である。

下記式［Ｉ］で表わされる合成環状ペプチド、またはそ
の塩、からなるペプチド誘導体。

口＝冒７π「フ　　　　・・・［Ｉ］ただし、Ｒは、アミノ酸残基あるいはオリゴ−ポリペプ
チド残基下記式［Ｉ］で表わされる合成環状ペプチドまたはその
塩からなるペプチド誘導体を有効成分とする動物細胞の
接着を阻害する薬剤。

−■コアη１フ　　　　・・・［１］ただし、Ｒは、アミノ酸残基あるいはオリゴ−ポリペプ
チド残基本発明において、アミノ酸とはα−アミノ酸は勿論他の
アミノ酸（β−アミノ酸、γ−アミノ酸など）をも意味
する。α−アミノ酸以外のアミノ酸としては、８２Ｎ　
（ＣＩ（−）　−ＣＯＯＨ（ｍは２以上の整数）で表わ
されるアミノ酸が適当であり、たとえば、３−アミノプ
ロピオン酸、４−アミノブタン酸、５−アミノペンタン
酸、６−アミノカプロン酸、７−アミノペンタン酸、８
−アミノカプリル酸などがある。好ましくは、ｍは８以
下の整数である。また、α−アミノ酸としては、Ｌ−ア
ミノ酸は勿論、Ｄ−アミノ酸やり、Ｌ−アミノ酸であっ
てもよい０本発明における好ましいアミノ酸はα−アミ
ノ酸であり、特にその内のし一アミノ酸である（以下、
特に言及しない限りアミノ酸はこのし一アミノ酸を意味
する）。アミノ酸残基とはアミノ基の水素原子１個とカ
ルボキシル基のヒドロキシ基を除いた残基ないう。

本発明において、Ｒにおけるオリゴ−ポリペプチドとは
上記のようなアミノ酸が２以上ペプチド結合で連結した
ものをいう。好ましいアミノ酸残基数は１６以下である
。アミノ酸としてはα−アミノ酸が好ましい。特にオリ
ゴ−ポリペプチドの全アミノ酸残基がα−アミノ酸であ
ることが好ましい。しかし、一部のアミノ酸残基は上記
Ｈ２Ｎ　（ＣＨ２）−ＣＯＯＨやβ−アミノ酸などのα
−アミノ酸以外の残基あるいはＤ−アミノ酸残基であっ
てもよい。オリゴ−ポリペプチドにおけるアミノ酸残基
の数は、特に２〜１１が好ましい。オリゴ〜ポリペプチ
ド残基とはアミノ末端側のアミノ基の水素原子１個とカ
ルボキシル末端側のカルボキシル基のヒドロキシ基を除
いた残基をいう。

本発明における合成環状ペプチドは後述細胞接着阻害効
果を発揮するためには、−Ａｒｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−の
ペプチドブロックが必要である。しかし、このペプチド
ブロックのみの環状ペプチドでは効果の発揮が充分では
なく、それ以外に少なくとも１つのアミノ酸残基の存在
が必要である。より好ましくは、このペプチドブロック
の前後（アミノ末端側とカルボキシ末端側）に少なくと
も１個のα−アミノ酸残基が存在することが好ましく、
特にアミノ末端側にグリシン残基が存在すること（即ち
、Ｈのカルボキシ末端がｃｔｙであること）が好ましい
、この合成環状ペプチドは下記式［Ｉ］］で表わされる
。

Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｒ’−Ｇｌｙ　　　　　−［
ＩＴ　］式［Ｉ］］において、Ｒ１はカルボキシ末端側
がグリシン残基であるＲのグリシン残基以外の部分を示
す。好ましいＲ１はアミノ酸残基、あるいはアミノ酸残
基数１０以下のオリゴペプチド残基である。

また、前記必須の−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−のベブ・
チドブロックのカルボキシル側はセリン残基またはアス
パラギン残基であることが好ましい。それに続（２番目
のアミノ酸残基はプロリン残基あるいはグリシン残基で
あることが好ましい。さらに、３番目のアミノ酸残基は
アラニン残基であることが好ましい。従って、また好ま
しいＲは次の式［Ｉ１１］で表わされるオリゴ−ポリペ
プチドである。

一３ｅｔ　（又はＡｓｎ）４Ｐｒｏ（又はＧｌｙ）（Ａ
ｌａＦ−Ｊｆ＋Ｒ”　）・・・［Ｉ］１］なお、式［ｍｌ内の３個の【　１は存在することが好ま
しい（場合によっては存在しなくてもよい）残基を示し
、Ｒ２はＲがら式［Ｉ］で示した具体的アミノ酸残基を
除いたオリゴ−ポリアミノ酸残基あるいはアミノ酸残基
な示す、特に好ましいＲは下記式［ＩＶ］で表わされる
オリゴ〜ポリペプチド残基である。

一５ｅｒ（又はＡｓｎ）　−Ｐｒｏ（Ａｌａ　）（−Ｒ
”　）　Ｇｌｙ−・・・［ＩＶ］式［ＩＶ　］において２個の［］は存在することが好ま
しい（場合によっては存在しなくともよい）残基を示す
ｍ　Ｒ”としてはアミノ酸残基、あるいはアミノ酸残基
数２〜７のオリゴペプチド残基であることが好ましい　
ＨｓのあるいはＲ３中のアミノ酸残基の種類には制約が
少なく、その一部は前記したようにＤ−アミノ酸残基や
α−アミノ酸以外のアミノ酸の残基であってもよい。

式［Ｉ］で表わされる環状ペプチドはＲのカルボキシル
末端とアルギニンのアミノ末端とがペプチド結合で連結
したものである。ただし、式［Ｉ］で表わされる環状ペ
プチドはその合成経路を示すものではない、即ち、この
環状ペプチドはＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｒを合成した
後にそれを環化する方法は勿論、他の任意の位置のペプ
チド結合部分を形成することによって環化する方法で合
成できるものである。たとえば、Ａｒｇ−Ｇｌｙ−。

Ｇｌｙ−ＡｓｐあるいはＡｓｐ−Ｒ間のペプチド結合は
勿論Ｒ内の任意のペプチド結合部分を形成して環化する
ことができる。以下に本発明環状ペプチドを具体的に例
示するが、これらに限られるものではない。

なお、下記の環状ペプチドにおけるα−アミノ酸残基は
、−文字記号で表示する。

７゜Ｒ−Ｇ　−Ｄ　−Ｓ　−Ｐ　−Ａ　−Ｇ上記ペプチドの
塩としては、酢酸、酒石酸、クエン酸、トリフルオロ酢
酸、メタンスルホン酸、塩駿、硫酸、硝酸、リン酸など
との有機酸塩または無機酸塩類あるいはナトリウム、カ
リウムなどのアルカリ金属塩類カルシウム塩等のアルカ
リ土類金属塩類、アンモニウム、エタノールアミン、ト
リエチルアミン、ジシクロヘキシルアミンなどの有機ア
ミン類などの様な無機塩基、有機塩基との塩類を意味す
る。

本発明の環状ペプチドは通常のペプチド合成法によって
合成できる。前記のように、環化は線状のペプチド合成
後に環化反応で行なわれるが、その環化を行う部分は隣
接アミノ酸残基間の任意のペプチド結合を形成すること
によって行うことができる。

本発明の上記合成環状ペプチドは動物細胞の接着を阻害
するための薬剤として有効である。

動物細胞としては補乳動物細胞が好ましく、さらに通常
の体細胞や生殖細胞は勿論、癌細胞などがある。また、
血小板などの無核細胞の接着阻害にも有効である。特に
対象となる動物細胞は各種癌細胞である。癌の転移は癌
細胞の他の細胞や細胞外基質に対する接着が関与してい
る。従って、癌細胞の接着を阻害することは癌の転移防
止に有効であると考えられる。また、血小板の血管内壁
への付着を阻害することができれば血栓などの発生を防
止することが可能となると考えられる。本発明の合成環
状ペプチドは後述実施例に示すように動物細胞の接着阻
害効果が優れているばかりでな（、酸素による加水分解
を受は難く生体内安定性に優れている。

しかも、たとえ加水分解を受けたとしても前記必須のペ
プチドブロック部分やその近傍が加水分解を受けない限
り加水分解により生じる線状ペプチドもまたある程度の
細胞接着阻害効果を有する。

以下、本発明を実施例によって具体的に説明するが、本
発明はこの実施例に限られるものではない。

なお、以下の実施例においては、アミノ酸、保護基、活
性基などについてＩＬＪＰＡＣ−ＩＵＢ　Ｃｏｍｍ１ｓ
−ｓｉｏｎ　ｏｎ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｎｏｍｅｎ
ｃｌａｔｕｒｅに基づ（略号および当該分野における慣
用略号で表示する場合があり、それらを例示すると下記
の通りである。

Ａｌａ：アラニンＡｓｎ　：アスパラギンＡｓｐ：アスパラギン酸Ａｒｇ　：アルギニンＧｌｙニゲリシンＴｈｒ：スレオニン１１ｅ：イソロイシンＬｅｕ　：ロイシンＬｙｓ　：リジンＰｒｏ　ニブロリンＶａｔ：バリンＳｅｒ：セリンＢｏｃ　：　ｔ−ブトキシカルボニル０Ｂｚｌ　：ベンジルエステルＨＯＢｔ：ｐ−ヒドロキシベンゾトリアゾールＯＳｕ：
Ｎ−ヒドロキシスクイシンイミドエステル０Ｐａｃ　：
フエナシルエステルＮ５Ｃ−ＨＣＩ：ｌ−エチル−３−（３−ジメチルアミ
ノプロピル）カルボジイミド塩酸塩ＴＦＡ：）リフルオロ酢酸０ＰＦＰ：ペンタフルオロフェニルエステルＤＣＣニジ
シクロへキシルカルボジイミドＤＣａｒｅａニジクロへ
キシルウレア０ｃｌ（ｅｘ　ニジクロヘキシルエステルＴｏｓ：ｐ−
トルエンスルホニル基実施例１Ａ、環状ペプチド（ロコ石青古資−口）ノ合成（１）ＢｏｃＡｌａ　０ＰａｃのＡＢｏｃＡｌａ　９．５ｇ（５０ｍｍｏｌ）をメタノール
１００ｍ１に溶解したのち２５％（Ｗ／Ｖ）Ｃ３，ＣＯ
，水溶液を３３ｍ１加えた。これを減圧濃縮したのち、
トルエン３０ｍ１を加え再び減圧下で乾固した。この操
作を３回行なって水分を除いてから、ＤＭＦを１５０ｍ
１加えて固型分を溶解し、そこへフェナシルプロミド１
０ｇ（５０ｍｍｏｌ）を加え、室温にて１時間撹はんし
た。沈殿物（ＣｓＢｒ）を濾過して除いたのち減圧下で
ＤＭＦを留去してから酢酸エチル２００ｍ１を加えつい
で水２００ｍ１．　Ｉ　Ｎ塩酸２００ｍ１　（２回）水
２０００１１゜５％炭酸水素ナトリウム水溶液２００ｏ
＋１　（２回）、水２００ｍ１の順で酢酸エチル層を洗
浄した。無水硫酸ナトリウムを加えて乾燥してから減圧
乾固すると白色結晶１３．４ｇ（１４３，６ｍｍｏｌ、
収率８７．２％）を得た。

（２））１．Ｎ　Ａｌａ　０Ｐａｃ　ＴＦＡのＡＢｏａ
　Ａｌａ　０Ｐａｃ　１３ｇ（４２，３ａ＋ｍｏｌ）を
３００ｍ１ナスフラスコに入れ、トリフルオロ酢酸（Ｔ
ＦＡ）　７０ｍ１を加え室温で２０分撹拌したのち減圧
濃縮した。ここへエーテル３００ｍ１を加えると白色結
晶が析出したので濾過し、エーテルでよく洗浄したのち
乾燥したところＨＪ　Ａｌａ　０Ｐａｃ−ＴＦＡ　１３
．２ｇ（４１，１ａ＋ｍｏ１．収率９７．１％）を得た
。

（３）Ｂｏａ　Ｐｒｏ　ＡＬａ　０ＰａｃのＡＢｏｃＰ
ｒｏ　６．４５ｇ（３０ｍ＋５ｏｌ）、ＮＨｚＡ１ａＯ
Ｐａｃ４ＦＡ　９．２１ｇ（３０ｍｍｏｌ）をＤＭＦ６
０ｍｌに溶解し、水冷下Ｎ−メチルモルホリンでｐＨ６
にした。ここへＨＯＢｔ　４．６ｇ、ＷＳＣ−）ＩＣ１
５，８ｇを加え再びＮ−メチルモルホリンでｐＨ６にし
て、終夜撹拌した。減圧下でＤＭＦを留去したのち酢酸
エチル１０（１ｍｌを加え、水１００ｍ１、ｌＮｌＣｌ
　１００ｍ１　（２回）、水１００ｍ１水５％炭酸水素
ナトリウム水溶液１００＋ａｌ　（２回）、水１００ｍ
１の順に酢酸エチル層を洗浄し、無水硫酸ナトリウムを
加え乾燥した。減圧濃縮してからヘキサンを加えたとこ
ろ、白色結晶が析出したので濾取しこれを酢酸エチル−
ヘキサンから再結晶し、ＢｏｃＰｒ。

Ａｌａ　０Ｐａｃ　６．５ｇ（１６，１ｍｍｏ１．収率
５４％）を得た。

アミノ酸分析値　Ａｌａ　１．ＯＰｒｏ　０．９６（４
）ＢｏｃＳｅｒ　Ｂｚｌ　　−Ｐｒｏ　Ａｌａ　０Ｐａ
ｃのＡＢｏｃ　Ｐｒｏ　Ａｌａ　０Ｐａｃ　６．５ｇ（
１６ｍｍｏｌ）を３０ｍ１　ＴＦＡに加えて、３０分間
室温で攪拌したのち、減圧下でＴＦＡを留去しオイルを
得た。このオイルをエーテル２００ｍ１で３回洗ったの
ち、減圧下でエーテルを除いた。そこへＤＭＦ　４０ｍ
１を加え氷冷してＮ−メチルモルホリンでｐＨ６に合わ
せた。

Ｂｏｃ　５ｅｒ（Ｂｚｌ）　４．７２ｇ（１６＋ａｍｏ
ｌ）、ＨＯＢｔ　２．４ｇ、ＷＳＣ・ＨＣｌ　３．１ｇ
の順に加え、再びＮ−メチルモルホリンでｐＨ６に合わ
せて、終夜撹拌した。減圧下でＤＭＦを除いたのち、酢
酸エチル１００ｍ１に溶解し、酢酸エチル層を水１００
ｍ１．１ＮＨＣ１１００ｍ１　（２回）、水１００ｍ１
．５％炭酸水素ナトリウム水溶液１００ｍ１（２回）水
１００ｍ１の順で洗浄し、無水硫酸ナトリウムを加えて
乾燥した。減圧下で酢酸エチルを留去して白色粉末７．
８８ｇ（１３，５ｍｍｏｌ、収率８４．４％）を得た。

アミノ酸分析：　Ｓｅｒ　０．９０　　Ｐｒｏ　Ｏ，９
４Ａｌａ　１．０（５）Ｂｏｃ　Ａｓ　　０Ｂｚｌ　Ｓ
ｅｒ　Ｂｚｌ　Ｐｒｏ　Ａｌａ　０ＰａｃのＡＢｏｃＳ
ｅｒ（Ｂｚｌ）Ｐｒｏ　Ａｌａ　０Ｐａｃ　７．５ｇ（
１３ｍｍｏｌ）を３０ｍ１ＴＦＡに加えて室温にて３０
分間撹拌したのち、減圧下でＴＦＡを留去してオイル７
、６６ｇを得た。このオイルにエーテルを加えよく洗い
エーテルをデカンテーションして除く操作を３回行ない
、減圧下でエーテルを除いたのち、ＤＭＦ３０ｍｌに溶
解し氷冷した。そこへＢｏＣＡｓｐ（ＯＢｚｌ）４．２
ｇ（１３ｍｍｏｌ）ＨＯＢｔ　２ｇ　ＷＳＣ−ＨＣＩ　
３ｇを加えＮ−メチルモルホリンでｐＨ６にして終夜撹
拌した。減圧下でＤＭＦを留去して得たオイルを酢酸エ
チル１００ｍ１に溶解し、その酢酸エチル層を水１００
ｍ１゜ｌＮＨＣｌ　ｌｏｏｍｌ　（２回）、水１００ｍ
１．５％炭酸水素ナトリウム水溶液１００ｍ１　（２回
）、水１００ｍ１の順に洗浄し、無水硫酸ナトリウムを
加えて乾燥した。

減圧下で酢酸エチルを除き得られた粉末を酢酸エチル／
エーテル／ヘキサンから再結晶したところ白色粉末８．
８６ｇ（１１，３ｍｍｏｌ、収率８６．９％）を得た。

アミノ酸分析：　Ａｓｐ　１．０２　　Ｓｅｒ　０．８
４　　Ｐｒｏ　０．９７Ａｌａ　　１．０（６）Ｂｏｃ　Ａｒ　　Ｔｏｓ　ＧＩ　　０Ｂｚｌの人
Ｂｏｃ　Ａｒｇ（Ｔｏｓ）１１．３ｇ（２６，３ｍｍｏ
ｌ）をＴＨＦ　５０ｍ１に溶解し氷冷した。そこへＧｌ
ｙ　ＱＢｚｌ−Ｔｏｓ　ＯＨ８，９ｇ（２６，４ｍａ＋
ｏｌ）、ＨＯＢｔ　４．Ｏｇ　ＷＳＣ−ＨＣＩ　５．１
ｇを加え、トリエチルアミンでｐ）１６に合わせ、終夜
撹拌した。減圧下でＴＨＦを留去して得たオイルを酢酸
エチル１００ｍ１に溶解し、その酢酸エチル層を水１０
０ｍ１．ｌＮＨＣｌ　１００ｍ１　（２回）、水１００
ａ＋１に溶解し、その酢酸エチル層を水１００ｍ１．Ｉ
Ｎ）ＩｃＩ　１００ｍ１　（２回）、水ｌθＯｍ１５％
炭酸水素ナトリウム水溶液１００ｍ１　（２回）、水１
００ｍ１５％　炭酸水素ナトリウム水溶液１００ｍ１　
（２回）、水１００ｍ１の順で洗浄し、無水硫酸ナトリ
ウムを加えて乾燥した。減圧下で酢酸エチルを留去した
のち、ヘキサンを加えて白色沈殿１３．３ｇ（２２，５
ａ＋ｍｏ１．収率８５．５％）を得た。

アミノ酸分析　Ａｌａ　Ｏ，９９Ｇｌｙ　１．０（７）
Ｂｏａ　ＧＩ　　Ａｒ　　Ｔｏｓ　ＧＩ　　０Ｂｚｌの
ＡＢｏｃ　Ａｒｇ　（Ｔｏｓ）Ｇｌｙ　０Ｂｚ１１３ｇ
（２２ｍｍｏｌ）にＴＦＡ８０ｍｌを加え室温で１５分
間撹拌したのち減圧下でＴＦＡを留去したのち、エーテ
ルを加え沈殿をよく洗浄した。減圧下でエーテルを除い
たのちＴＨＦ　１００ｍ１に溶解し、水冷下Ｂｏｃ　Ｇ
ｌｙ　　３．８５ｇ（２２ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ　３．
４ｇ　ＷＳＣ−ＨＣＩ　４．２２ｇを加えトリエチルア
ミンでｐ）＋６に合わせて、終夜撹拌した。減圧下でＴ
ｌ４Ｆを留去して得たオイルを酢酸エチル１００ｍ１に
溶解し、酢酸エチル層を水１００ｍ１．ＩＮＨｃＩ　１
００ｍ１　（２回）、水１００ｍ１．５％炭酸水素ナト
リウム水溶液１００ｍ１　（２回）、水１００ｍ１の順
で洗浄し、無水硫酸ナトリウムを加えて乾燥した。

減圧下で酢酸エチルを留去して白色粉末１３．５ｇ（２
１，３ｍｍｏｌ、収率９６．８％）を得た。

アミノ酸分析　Ａｌａ　Ｏ，９９Ｇｌｙ　２．０（８）
Ｂｏｃ　ＧＩ　　Ａｒ　　Ｔｏｓ　Ｇｌ　　Ｏ）１のＡ
Ｂｏｃ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ（Ｔｏｓ）Ｇｌｙ　０Ｂｚ１１
３．５ｇ（２１，３ｍｍｏｌ）をメタノール１００ｍ１
に溶解し酢酸５０ｍ１、水２０１１１．５％パラジウム
炭素を加え水素を３時間通じた。５％パラジウム炭素を
濾過して除いて溶媒を減圧下で留去したのち酢酸エチル
ｌＱＯｍｌに溶解し硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過
したのち、減圧下で酢酸エチルを留去して、白色粉末９
．７６ｇ　（１９，４ｍｍｏ１．９１％）を得た。

（９））ｌｚＮ　Ａｓ　　０Ｂｚｌ　Ｓｅｒ　Ｂｚｌ　
Ｐｒｏ　Ａｌａ　０Ｐａｃ−ＴＦＡの前記（５）で合成
したＢｏｃ　Ａｓｐ　（ＯＢｚｌ）Ｓｅｔ（Ｂｚｌ）Ｐ
ｒｏ　Ａｌａ　０Ｐａｃ　８ｇ（ｌｏｍｍｏｌ）に５０
ｍ１　ＴＦＡを加え室温にて３０分撹拌したのち、減圧
下でＴＦＡを留去した。エーテルを加え一２０℃に保温
すると、白色結晶が析出したので上清をデカンテーショ
ンで除き残査をメタノール／エーテルから再結晶した。

７．９ｇ（９，９ｍｍｏｌ、収率９９％）Ｈ２Ｎ　　Ａ
ｓｐ（ＯＢｚｌ）Ｓｅｔ（Ｂｚｌ）Ｐｒｏ　　Ａｌａ　
　０Ｐａｃ−ＴＦＡｌ、５ｇ（２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ　
１０ｍ１に溶解し、そこへ前記（８）で合成したＢｏｃ
　Ｇｌｙ　Ａｒｇ（Ｔｏｓ）Ｇｌｙ　ＯＨ１，２ｇ（２
ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ　Ｏ，３ｇ　ＷＳＣ−ＨＣｌ　０
．５ｇを加え、Ｎ−メチルモルホリンでｐＨ６に合わせ
て終夜撹拌した。減圧下でＤＭＦを留去して得たオイル
を酢酸エチル５０ｍ１に溶解し、水５０ｍ１．１ＮＨＣ
１５０ｍ１（２回）、水５０ｍ１．５％炭酸水素ナトリ
ウム水溶液５０ｍ１（２回）、水５０ｍ１の順に洗浄し
たのち、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下で酢酸
エチルを留去して得た白色粉末をエーテルでよく洗い乾
燥して１．３６ｇ（１，０６ｍｍｏｌ、収率５０％）を
得た。

アミノ酸分析　Ｇｌｙ　２．ＯＡｒｇ　Ｏ，９７Ａｓｐ
　Ｏ，９８Ｓｅｒ　Ｏ，８５Ｐｒｏ　Ｏ，８９Ａｌａ　
１．０ＢｏｃＧｌｙ　Ａｒｇ（Ｔｏｓ）Ｇｌｙ　Ａｓｐ
（ＯＢｚｌ）Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）Ｐｒ。

Ａｌａ　０Ｐａｃ　１．Ｏｇ（０，８＋＋ｕｏｏｌ）を
９０％酢酸３０ｍ１に溶解し、そこへ亜鉛末３．３ｇ（
４０ｍｎ＋ｏｌ）を水冷下加え、０℃で３時間撹拌した
。濾過して亜鉛末を除いたのち、減圧下で溶媒を留去し
残渣にｌＮＨＣｌ　３０ｍ１を加え、酢酸エチル５Ｇ＋
ａｌで抽出した。ＩＨＭＣＩ５０ｍ１．水５０ｍ１の順
で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下で酢
酸エチルを減圧濃縮したのちエーテルを加えて、白色粉
末０．８５ｇ（０，７２ｍｍｏｌ、９０％）を得た。

Ｂｏｃ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ（Ｔｏｓ）Ｇｌｙ　Ａｓｐ（Ｏ
Ｂｚｌ）Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）ＰｒｏＡｌａ　ＯＨＯ，８５
ｇ（０，７２ｍｍｏｌ）を５ａ＋ＩＤＭＦに溶解したの
ち、ＨＯＳｕ　Ｏ，１５ｇ（１，３ｍｍｏｌ）　ＷＳＣ
−１（Ｃ１０，２５ｇを加え、Ｎ−メチルモルホリンで
ｐＨ６に合わせ終夜撹拌した。減圧下ＤＭＦを留去した
のち水を加えて得たオイルをよく洗い分離して減圧下で
乾燥した。そこへＴＦＡ　２０ｍ１を加え室温で１０分
間撹拌したのち減圧下でＴＦＡを留去した。エーテルを
加えて析出した白色粉末を濾取した。０．７９ｇ　（０
，６１ｍａ＋ｏ１．８４％）これを５ｍｌＤＭＦに溶解
し、６０℃に保温したピリジン中に撹拌しながら３０分
間で滴下した。５時間６０℃に保ち、その後終夜３０℃
で攪拌した。減圧下ピリジンを留去し、エーテルを加え
て得た白色粉末をアセトン／エーテルから再結晶して、
０．６１ｇ　（０，５７ｍｍｏ１．９３５）を得た。

０、６ｇ（０，５７ｍｎ＋ｏｌ）にアニソールｌ　ｍｌ
、クレゾール１ｍｌを加え、■５０ｍ１を加えてＯ℃１
時間撹拌したのち、減圧下で留去してエーテルを加え、
濾取して白色粉末を得た。これを水１００ｍ１に溶解し
、凍結乾燥して、０．４０ｇを得た。０．１％ＴＦＡ水
溶液１０ｍ１に溶解し、セミ分取ＯＤＳカラムを用いた
１（ＰＬＣに供しアセトニトリルｌＯ％の画分を集め、
凍結乾燥し４０ｍｇの目的物を得た。

アミノ酸分析：　Ｇｌｙ　１．９６　　Ａｒｇ　Ｏ，９
５Ａｓｐ　Ｏ，９７Ｓｅｒ　０．８２　　Ｐｒｏ　０．
８？　　Ａｌａ　１．０（１４）　　　ペプチド　ＧＲ
ＧＤＳＰＡ　　のＡ（１１）で合成した生成物を（１３
）と同様の方法で脱保護し精製してＧｌｙＡｒｇＧｌｙ
ＡｓｐＳｅｒＰｒｏＡｌａを得た。

Ｂ、ペプチドマツプ（１３）で合成したペプチドをトリプシンで分解し、環
状ペプチドであることを確認した。

ペプチドを蒸留水で１０ｍｇ／ｍｌに溶解し、２０μｍ
にＢｕｆｆｅｒ、　（Ｔｒｉｓ−ＨＣＩ　１００ｍＭ、
ｐＨ８，５）　１８０μｍを加え希釈する。これにトリ
ブ溶液（１ｍｇ／ｍ１５Ｍ１（Ｃ１，ＣａＣ１＊　ｌＯ
ｍＭ）　５　ｕ　ｌを加え３７℃に２４時間保温した。

２ＮＨＣ１を１０μｌ添加し、反応を終了させた。その
うち５０μｌを高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬ
Ｃ）に供し分析を行った。

分析条件　ＨＰＨＰＬＣ：　　　ウォーターズ　モデル　５１０カラム
：　　ＹＭＣ−ＯＤＳ検　　出　：　Ａ２、溶　出：Ａ液０．１％ＴＦＡ水溶液Ｂ液　０．１％　ＴＦＡ　　　７セトニトリル溶液０％
Ｂ−３０％Ｂ直線濃度勾配（０分）（３０分）第１図は実施例で合成した環状ペプチドの分析結果を示
すグラフである。また、（１４）で合成した線状ペプチ
ド（ＧＲＧＤＳＰＡ）を上記と同一条件で試験した。そ
の分析結果を第２図に示す。

第１図および第２図の結果が示すように、実施例１　　
（１３）で得られたペプチドは環状であり、かつ線状ペ
プチドと比較してトリプシン処理により開環するがそれ
以上に分解を受けにくいことが確認された。

実施例２Ａ、環状ヘブチ）’（ＲＧＤＳＰＡＡＶＴＧの合成実施例１と同様に環状ペプチドを合成した。

以下に、その合成法の概略を示す。

（１）　Ｂｏｃ　Ｔｈｒ　Ｂｚｌ　Ｇｌ　ｏＢｚｌの人
Ｂｏｃ　Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）　　６．１８ｇ　　２０ｍｍ
ｏｌＧｌｙｏＢｚｌ−ＴｏｓＯＨ６，７４ｇ　　２０ｍ
ｍｏｌ　　ＤＭＦ　４０ｍ１ＷＳＣ−ＨＣＩ　　　　　
３．８４ｇ　　　　　　ｐｉ（７ＨＯＢｔ　　　　　　
　　　　　　３．０６ｇ　　　　　　　　　　　Ｎ−メ
チルモルホリン↓ ＢｏｃＴｈｒ（Ｂｚｌ）ＧｌｙｏＢｚ１７．３２ｇ（１
６ｍｍｏｌ）　　８０％（２）　Ｂｏｃ　ＶａｌＴｈｒ
　Ｂｚｌ　Ｇｌ　ｏＢｚｌの人上記（１）の生成物　６
．０ｇ　（１３＋＋ｍｏｌ）ＴＦＡＢｏｃ　　ＶａｌＷＳＣ・ＨＣＩＨＯＢｔ０ｍ１２．８ｇ（１３ｍｍｏｌ）２．５ｇ２．０ｇ　　　　　　　ＤＭＦ　　３０ｍ１Ｈ６ ↓　　　　　　　　　Ｎ−メチルモルホリンＢｏｃＶａ
ｌＴｈｒ（Ｂｚｌ）ＧｌｙｏＢｚ１６．７５ｇ（１２，
２ｍｍｏ１　　９４％）（３）Ｂｏｃ　　Ａｌａ　Ｔｈ
ｒ　　Ｂｚｌ上記（２）の生成物ＴＦＡＢｏｃ　ＡｌａＷＳＣ−ＨＣＩ０ＢｔＧｌ　ｏＢｚｌのＡ３．４ｇ（６，１ｍｍｏｌ）０ｍ１１．２ｇ（６，３ｍｍｏｌ）１、２ｇ０．９４ｇ　　　　　　ＤＭＦ　　１５ｍ１Ｈ６ ↓　　　　　　　　Ｎ−メチルモル本リンＢｏｃＡ１ａ
ＶａｌＴｈｒ（Ｂｚｌ）Ｇ１ｙｏＢｚ１３．１８ｇ（５
，１ｍｎｏｌ　　　ｇ３．６％）（４）　　ＢｏｃＡｌ
ａＶａｌＴｈｒ　Ｂｚｌ　ＧＩ　ＯＨのＡ上記（３）の
生成物２．８ｇ（４，５ｍＩＩＩｏｌ）ル２０ｍ１に懸
濁し、水浴中にして、１溶液９ｍｌを滴下した。３時間
撹拌しＮ　ＨＣｌ　１２ｍ１を加えて、減圧下でメをメタノＮ　ＮａＯＨ水たのち、１タノールを留去したところ白色結晶が析出した。結晶を濾過しよ（
水洗したのち乾燥した。２．２ｇ（４，２ｍｍｏ１９３
％）（５）　　ＢｏｃＡｌａＶａｌＴｈｒ　　Ｂｚｌ上記（
４）の生成物ＨｔＮＡｒｇＧｌｙｏＢｚｌ−ＴＦＡＷＳＣ−ＨＣＩ０Ｂｔ０．８ｇ　　　　　ＤＭＦ　　１５ｍ１ｐ）ｌ　　６ ↓　　　　　　　　　　Ｎ−メチルモル本リンＭｅＯＨ
／ｅｌｈｅｒより再結晶３．３９ｇ（３，５１１＋ｍｏｌ　　８７％）ＧＩ　　
Ａｒ　　　Ｔｏｓ　　Ｇ１２、Ｉｇ（４ｍｍｏｌ）２．３ｇ（４ｍｍｏｌ）０．６ｇｏＢｚｌの１（６）　　ＢｏｃＡｌａＶａｌＴｈｒ　Ｂｅ１）ＧＩ　
Ａｒ　　Ｔｏｓ　Ｇｌ　Ｏ）１のＡ上記（５）の生成物
　３．２ｇ（３，３ｍｍｏｌ）メタノール　２０ｍ１アセトン　　１０ｍ１ＩＮ　ＮａＯＨ５ｍｌ　　水浴中にて、３時間撹拌Ｌ　
←　ＩＮ　ＨＣｌ　５ｍｌ減圧濃縮、濾過、水洗、乾燥２．８１ｇ（３，２ｎ＋ｍｏｌ、　９７％）ＢｏｃＡｌ
ａＶａｌＴｈｒ　　Ｂｚｌ　　ＧＩ　　Ａｒ　　Ｔｏｓ
　　ＧＩ　　ＡｓＢｚｌ上記（６）の生成物　　　　　１．８　ｇ　（２ｍｍｏ
ｌ）Ｈ２ＮＡＳＩ）（ＯＢｚｌ）Ｓｅｎ（Ｂｚｌ）Ｐｒ
ｏＡｌａＯＰａｃ−ＴＦＡ　　　　１．５　ｇ　　（２
ｍｏ＋ｏｌ）［前記実施例１（９）の生成物］ＨＯＢｔ　　　　　　　　　　　　Ｏ，３ｇＮＳＣ−）
ＩＣＩ　　　　　　　　　　Ｏ，５ｇＤＭＦ　１０　ｍ
ｌ　ｐＨ６Ｎ−メチルモルホリン↓ 反応接水を加えて白色粉末 ↓ 水、ＩＮ　）ｔｅｌ　、水、５％ＮａＨＣＯｓ　＋水で
よ（洗浄乾　　燥　　２．８　　ｇ　　（１，８ｍｍｏ
ｌ　　９０％）上記（７）の生成物　　　　１．８　ｇ
　（１，１６ｍｍｏｌ）９０％酢酸４０ｍ１　、亜鉛末
　４．５ｇ↓ 水浴中で２時間撹拌 ↓ 濾過して、亜鉛末を除去した後、減圧下で酢酸を除去したのちｌＮＨＣｌを加えて、白色沈殿を得た。

↓ 濾過してよく水洗した。

１．６３　ｇ　（１，＋２ｍｍｏｌ　、　９６％）上記
（８）０ＳｕＷＳＣ−ＨＣＩの生成物　　　１．５　ｇ　（１，０３ｍｍｏｌ）０．
１２ｇ０．３　ｇＤＭＦ　５ｍｌ　ｐＨ６Ｎ−メチルモルホリン１．４７
　　ｇ１　　−ＴＦＡ　　２０ｍ１減圧濃縮ＤＭＦ　３０ｍ１に溶解後、５５℃に保温したｌｌピリ
ジンに撹拌しながら滴下した。

５５℃で５時間、室温で終夜反応させたのち、減圧下で
ピリジンを留去した。

水を加えて、白色沈殿を析出させ、濾過してよく水洗したのち、乾燥した。

１．６１　ｇ、（０，９８ｍｍｏｌ　９５％）上記（９
）の生成物　　　１．６１　ｇ　（０，９８ｍｍｏｌ）
ＨＦ　　　　　　　　　　　　　　　　　　１００　　
ｍｌアニソール　　　　　　　５　ｍｌクレゾール　　　　　　　５　ｍｌ ↓ Ｏ℃１時間、減圧下にＩＰを留去したのち、エーテルを
加えて、白色沈殿を得た。濾過したのち、水に溶解し凍結乾燥した。凍結乾燥粉末１．０１　ｇ精製は、実施例１　　（１３）と同じ条件で行った。

Ｂ、ペプチドマツプ実施例１％Ｂと同じ条件で環状ペプチドの分解試験を行
った０分析条件は下記の通りである。

分析条件！（ＰＬＣ：シマズ　ＬＣ−６Ａカラム：　ＹＭＣＯＤＳ検　　出：Ａ＊＋＋溶　出：Ａ液　０．１％ＴＦＡ水溶液Ｂ液　　０．１％　ＴＦＡ　１士トニトリル溶液５％Ｂ
−８０％Ｂ（０分）（３０分）曲線濃度勾配（Ｂ　ｃｕｒｖｅ　３）結果を第５図に示す、また、対応する線状ペプチド（Ａ
ＶＴＧＲＧＤＳＰＡ）を合成し、同じ試験をおこなった
結果を第６図に示す。

実施例３Ａ、環状ペプチド（ＲＧＤＮＰＡＧ　　）の合成（１）
　蝕厨旦岨肛ｌ以姦滅ＢｏｃＡｓｎ　２３．２ｇ（１００ｍｍ＋ｏｌ）をＤＭ
Ｆ　２００ａ＋１に溶解し水冷下ペンタフルオロフェノ
ール２２．１ｇ（１２０ｍｍｏｌ）　、　ＤＣＣ２４，
７ｇ（１２０ｍｍｏｌ）を加えて、３０分間撹拌した。

さらに常温で１時間撹拌したのち、減圧下でＤＭＦを留
去した。残渣を酢酸エチルに溶解し濾過してＤＯａｒｅ
ａを除いたのち、水洗し、無水硫酸ナトリウムを加えて
乾燥した。減圧下で濃縮したのち、エーテルを加えて結
晶化した。１６．２６ｇ　（収率４０．８％）。

（２）　ＢｏｃＡｓｎＰｒｏＡｌａＯＢｚｌのＡＢｏｃ
ＰｒｏＡｌａＯＢｚｌ　３．７６ｇ（１０ｍｍｏｌ）に
ＴＦＡ　２０ｍ１を加えて室温で２０分間反応させたの
ち減圧下でＴＦＡを留去したのち、エーテルを加えて得
た白色沈殿を濾取し、乾燥した。これをＤＭＦ　２０ｍ
１に溶解し水冷下ＨＯＢｔ　１．５ｇを加え、Ｎ−メチ
ルモルホリンでｐＨを６に合わせた。そこへ、ＢｏｃＡ
ｓｎＯＰＦＰ　４ｇを加え、再びＮ−メチルモルホリン
でｐＨを７に合わせ、終夜撹拌した。減圧下でＤＭＦを
留去したのち、残渣を酢酸エチルに溶解し、水、ｌＮＨ
Ｃｌ、水、５％ＮａＨＣＯｓ　＋水の順に洗浄し、無水
硫酸ナトリウムを加えて乾燥した。減圧下で酢酸エチル
を留去したのち、エーテル−ヘキサンから結晶化させ、
目的物３．３ｇ（６７、３％）を得た。

アミノ酸分析：　Ａｓｘ　１．０１　　Ａｌａ　１．０
３　　Ｐｒｏ　０．９５（３）　ＢｏｃＡｓ　　０ｃＨ
ｅｘ　ＡｓｎＰｒｏＡｌａＯＢｚｌの人ＢｏｃＡｓｎＰ
ｒｏＡｌａＯＢｚｌ　３ｇ　（６，１ｍｍｏｌ）にＴＦ
Ａ　２０ｍ１を加え、室温で２０分間攪拌したのち、減
圧下でＴＦＡを留去した。エーテルを加えて得られた白
色沈殿を濾取し乾燥したのち、ＤＭＦ　１５ｍ１に溶解
した。水冷下Ｎ−メチルモルホリンでｐＨを６に合わせ
、そこへＢｏｃＡｓｐ（ＯｃＨｅｘ）Ｏ３ｕ　４．１２
ｇ　（１０ｍｍｏｌ）を加え、再びＮ−メチルモルホリ
ンでｐＨを７に合わせて、終夜撹拌した。減圧下でＤＭ
Ｆを留去したのち、残渣を酢酸エチルに溶解し、１．３
−ブパンジアミンを加えて、室温で１時間撹拌した。酢
酸エチル層を水、ｌＮＨＣｌ、水、５％Ｎａ）ＩＣＯ，
、水の順に洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶
媒を減圧下で濃縮し、酢酸エチル−ヘキサンから結晶化
して、目的物３．６３ｇ（８７％）を得た。

アミノ酸分析：　Ａｓｘ　１．９８　　Ａｌａ　Ｏ，９
８Ｐｒｏ　１．０２ＢｏｃＡｓｐ（ＯｃＨｅｘ）Ａｓｎ
ＰｒｏＰｒｏＡｌａＯＢｚｌ　　３．４３ｇ　　（５ｍ
Ｉｏｏｌ）にＴＦＡ　２０ｍ１を加えて室温で２０分間
撹拌した。減圧下でＴＦＡを留去したのち、エーテルを
加えて得た白色沈殿を濾取し、乾燥した。ここにＤＭＦ
　２０ｍ１を加え溶解させたのち、水冷下ＢｏｃＧ１ｙ
Ａｒｇ（Ｔｏｓ）ＧｌｙＯ）１３ｇ　（４，９ｍｍｏｌ
）、ＨＯＢｔ　Ｏ，９２ｇ　。

ＷＳＣ・ＨＣｌ　１．２ｇを加えた。Ｎ−メチルモルホ
リンでｐ）Ｉを６に合わせて終夜攪拌した。減圧下Ｄ）
ＩＩＦを留去したのち、残渣を酢酸エチルに溶解し、水
、ｌＮ１（Ｃ１，水、５％ＮａＨＣＯｓ　、水の順に洗
浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下溶媒を留
去して目的物の白色粉末４．４ｇ（収率７５％）を得た
。

アミノ酸分析　Ａｓｘ　１．８４　　Ｇｌｙ　２．１７
　　Ａｌａ　Ｏ，９６Ａｒｇ　１．０４　　Ｐｒｏ　０
．９７（５）　　ＢｏｃＧＩ　　Ａｒ　　Ｔｏｓ　　Ｇ
Ｉ　　Ａｓ　　０ｃＨｅｘ　　ＡｓｎＰｒｏＡｌａＯＨ
ＢｏｃＧｌｙＡｒｇ（Ｔｏｓ）ＧｌｙＡｓｐ（ＯＣｔ（
ｅｘ）ＡｓｎＰｒｏＡｌａＯＢｚｌ４．４ｇ　（７５％
）をメタノール５０ｍ１　、水０．５ｍｌ　。

酢酸０．５ｍｌに溶解し、５％Ｐｄ−ＣＩｇを加えて、
水素を５時間通気した。濾過したのち、濾液を減圧下で
留去し、残渣にエーテルを加えて固化させ、濾取し乾燥
した。　４．５ｇ　（４，１ｍｍｏｌ）１．５１に３０
分間で滴下し、５３℃で９時間、室温で終夜撹拌した。

ピリジンを減圧下で留去したのち、よ（水洗して乾燥し
、目的物１．０５ｇ　（６３％）を得た。

アミノ酸分析　Ａｓｘ　２．０９　　Ｇｌｙ　２．６　
　Ａｌａ　１．０６Ａｒｇ　１．２１　　Ｐｒｏ　０．
９８ＢｏｃＧｌｙＡｒｇ（Ｔｏｓ）ＧｌｙＡｓｐ（Ｏｃ
Ｈｅｘ）ＡｓｎＰｒｏＡｌａＯＨ３ｇ　（２，７ｍｍｏ
ｌ）をＤＭＦ　１０ｍ１に溶解し、水冷下ＨＯ３ｕＯ，
６ｇ　、ＷＳＣ−ＨＣＩ　Ｉｇを加え終夜撹拌した。減
圧下でＤＭＦを留去したのち、残渣に水を加えて固化さ
せ、よく水洗して濾取した。減圧下で乾燥したのち、Ｔ
ＦＡ　１５ｍ１を加えて、室温で１５分間撹拌した。減
圧下でＴＦＡを留去したのち、エーテルを加えて固化さ
せ濾取し、乾燥した。これをＤＭＦ　３０ｍ１に溶解し
、５３℃に加熱したピリジン１．０３ｇにアニソール５
ｍｌ、）リフレゾール２ｍｌを加えたのちＨＦ　６０ｍ
１を加えて０℃で１時間反応させた。減圧下で肝を留去
したのち、エーテルを加えて固化させ、その沈殿をエー
テルでよ（洗浄した。これを１０％酢酸に溶解させたの
ち、凍結乾燥し、粗ペプチド０．９８ｇを得た。実施例
１　　（１３）と同じ条件で精製を行い、精製物１３０
ｍｇを得た。

ＢｏｃＧｌｙＡｒｇ（Ｔｏｓ）ＧｌｙＡｓｐ（ＯｃＨｅ
ｘ）ＡｓｎＰｒｏＡｌａＯＢｚｌ１．３ｇにアニソール
２ｍｌ　、クレゾール２ｍｌを加えたのち、ＨＦ　６０
ｍ１を加えて、０℃で１時間反応させた。減圧下でＨＦ
を除いたのち、エーテルを加えて固化゛させ、エーテル
でよく洗浄した。

この白色粉末を１０％酢酸に溶解させたのち、凍結乾燥
し粗ペプチド０．９９ｇを得た。これを実施例１　　（
１３）と同様に精製し、精製物６４ｍｇを得た。

実施例４Ａ、環状ペプチド（ＲＧＤＳＰＡＶＴＧ　　）の合成（１）　ＢｏｃＶａｌＴｈｒ　Ｂｚｌ　ＧＩ　Ａｒ　　
Ｔｏｓ　ＧＩ　ＯＨのＢｏｃＶａｌＴｈｒ（Ｂｚｌ）Ｇ
ｌｙＡｒｇ（Ｔｏｓ）ＧｌｙＯＢｚｌ　　２．９ｇ（２
，８６ｍｍｏｌ）を５ａ＋１メタノールに溶解し、ｌＮ
ＮａＯＨ４，３ｍｌを滴下して、１時間撹拌した。　ｌ
ＮＨＣｌ　５ｍｌを加えて減圧濃縮し、酢酸エチル５０
ｍ１で抽出した。酢酸エチル層を水５０１ｍ１で２回洗
浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥したのち、減圧で溶媒
を留去し白色粉末２．３ｇ　（２，８ｍｍｏｌ）を得た
。

（２）ＢｏｃＶａｌＴｈｒ　　Ｂｚｌ　　ＧＩ　　Ａｒ
　　Ｔｏｓ　　ＧＩ　　Ａｓ　　ＯＢｚｌＢｏｃＶａｌ
Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）ＧｌｙＡｒｇ（Ｔｏｓ）ＧｌｙＯＨｌ
、６３ｇ　　（２ｍｍｏｌ）ＨＪＡｓｐ（ＯＢｚｌ）Ｓｅｔ（Ｂｚｌ）ＰｒｏＡｌａ
ＯＰａｃｌ、５ｇ　　（１，９ｍｍｏｌ）ＤＭＦ　　１０ｍ１に溶解ＨＯＢｔ　０．３ｇ　、ｌ！ｌ５ｃ−）ＩＣ１０，５ｇ
を加えて終夜撹拌減圧で溶媒を留去したのち、水を加え
て固化、濾過したのち、水、ＩＮ）ＩＣＩ、水、５％Ｎ
ａＨＣＯｓ　＃水の順に洗浄、真空で乾燥して、２．６
６ｇ　（１，７９ｍｍｏｌ　、９４％）を得た。

アミノ酸分析　Ａｓｐ　Ｏ，９８Ｔｈｒ　Ｏ，７０Ｓｅ
ｒ　０．８２Ｇｌｙ　１．８１　　Ａｌａ　１．　　　
Ｖａｔ　Ｏ，８５Ａｒｇ　Ｏ，７１Ｐｒｏ　０．９１ＢｏｃＶａｌＴｈｒ（Ｂｚｌ）ＧｌｙＡｒｇ（Ｔｏｓ）
ＧｌｙＡｓｐ（ＯＢｚｌ）Ｓｅｔ（Ｂｚｌ）ＰｒｏＡｌ
ａＯＰａｃ　１．８ｇ　（１，２ｍｍｏｌ）を９０％酢
酸に溶解し亜鉛末４．５ｇを加え１時間撹拌した。濾過
したのち、濾液を減圧で　固した。ｌＮＨＣｌを加えた
のち、クロロホルムで抽出し、有機相を水で洗浄した。

減圧濃縮したのち、エーテルを加えて一２０℃に保温し
た。析出した白色粉末を濾取し乾燥して１．５９ｇ　＜
１．１５ｍｎ＋ｏｌ　、９６％）を得た。

ＢｏｃＶａｌＴｈｒ（Ｂｚｌ）ＧｌｙＡｒｇ（Ｔｏｓ）
ＧｌｙＡｓｐ（ＯＢｚｌ）Ｓｅｔ（Ｂｚｌ）ＰｒｏＡｌ
ａＯＨ１，４ｇ　（１！１１１０１）をＤＭＦ　５ａ＋
１に溶解した。水冷下ＨＯＳｕ　０．１５ｇ　、ＷＳＣ
−ＨＣＩ　０．２５ｇ’ｉ’加え、Ｎ−メチルモルホリ
ンを加えてｐＨ６にして終夜撹拌、水を加えて生じた白
色粉末を酢酸エチルで抽出し減圧濃縮した。エーテルを
加えて白色粉末を得た。これを水洗し、乾燥したのち、
ＴＦＡ　２０ａ＋１を加えて室温で２０分間撹拌、減圧
下でＴＦＡを除いたのち、ＤＭＦ　２０ｍ１を加え溶解
し、これを５５℃に保温したピリジン１１中に滴下した
。

５５℃で５時間、３０℃で終夜反応させたのち、減圧濃
縮した。残渣にエーテルを加え生じた白色粉末な濾取、
乾燥して、１．１２ｇ　（８９％）を得た。

（４）の生成物１．１２ｇを用い、実施例１　　（１３
）と同様の方法で肝で脱保護し、粗生成物０．７４ｇを
得、さらに実施例１　　（１３）と同じ条件で精製を行
ない、精製環状ペプチド１８５ｍｇを得た。

アミノ酸分析：　Ａｓｐ　１．０４　、Ｔｈｒ　Ｏ，８
８、Ｓｅｒ　０．８９Ｇｌｙ　２　　　、Ａｌａ　１，
０　　、Ｖａｌ　Ｏ，９７Ａｒｇ　１．０　　、Ｐｒｏ
　Ｏ，９３上記（１）〜（３）と同様にして（３）の生
成物を合成し、その１．１ｇを実施例１　　（１３）と
同様の方法で肝で脱保護し、粗生成物０．７ｇを得、さ
らに同様に精製して線状ペプチド１４０ｍｇを得た。

アミノ酸分析：　Ａｓｐ　１，０　　、Ｔｈｒ　Ｏ，８
０、Ｓｅｒ　０．８０Ｇｌｙ　　２　　　　、Ａｌａ　
　１．０５　　、Ｖａｌ　　Ｏ，９６Ａｒｇ　　Ｏ，９
３、Ｐｒｏ　　１．１３実施例５Ａ、細胞接着阻害活性の測定（１）合成した環状ペプチドが細胞のフィブロネクチン
やビトロネクチンに対する接着を阻害する活性を測定し
た。

フィブロネクチンあるいはビトロネクチンをＰＢＳ−（
ＮａＨｉＰＯ４０，００５Ｍ　＋　ＮａＣｌ　０．０７
５Ｍ　）で各々１．０　、ｕｌ　／ｍｌ　、２．０　μ
ｌ　／ｍｌに希釈し、その希釈液０．５ｍｌを２４ｗｅ
ｌｌのプラスチックプレートに入れ、３７℃で４時間保
温して、コーティングした。次にプラスチックに対する
非特異的接着を防ぐ為、１％ＢＳＡ　（牛血清アルブミ
ン）を加え、３７℃で１時間保温した。そののち、　Ｐ
ＢＳ−で洗浄し、充分に水切りしたのち、Ｄ−ＭＥＭ培
地ＣＧＩＢＣＯ社製）で希釈したペプチド溶液を０．２
５ｍ１加え、そこへ４Ｘ　ｌＯ’ｃｅｌｌｓ／　ｍｌの
ヒト扁平上皮ガンＡ４３１細胞懸濁を０．２５＋＋１加
え、３７℃で１時間保温し、細胞を接着させた。Ｄ−Ｍ
ＥＭ培地で３回洗浄し、未接着の細胞を除いたのち、０
．０２５％＋０．０２５％ＥＤＴＡ　トリプシン溶液で
接着した細胞をはがし、トリバンブルーで染色して細胞
数を計測した。結果を下記第１表に示す。

第１表フィブロネクチンに対する接着阻害（ｃｅｌｌｓ／　ｗｅｌｌ）（ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ）上記結果を接着阻害パーセントで表わしたグラフを第３
図と第４図に示す。第４図はフィブロネクチンコートの
場合、第５図はビトロネクチンコートの試験結果を表わ
したものである。

（２）上記と同じ阻害活性試験（ただし、フィブロネク
チンのみ使用）を実施例２で合成した環状ペプチドに対
して行った。その結果を下記第２表と第７図に示す。

第２表接着細胞数　（ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ）血小板血漿（Ｐ
ＲＰ）として分取した。ＰＲＰ　２００μｌに被検薬２
５μｌを加え、３分間３７℃でインキュベートしたのち
、２０〜５０μＭ　ＡＤＰ溶液あるいは５０〜２００μ
ｇ／ｍｌのコラーゲン溶液を２５μｍ加えて、凝集の様
子をアブリボメーターで透過度を測定した。

凝集阻害率　（１−Ｔ／Ｔ、）ＸＩＱＯ％Ｔｏ：被検薬
非添加時の透過度Ｔ　：被検薬添加時の透過度表　血小板凝集阻害Ｂ、血小板凝集阻害活性試験被検薬のｉｎ　ｖｉｔｒｏ血小板凝集阻害作用をヒト冨
血小板血漿を用いて検定した。採血したヒト血液に１／
９量の３．８％クエン酸ナトリウムを加え遠心（１００
０ｒｐｍ　、１０分間）し、上層を富ｑ−玉ｉ］ｑπｉ示ｉコ声■朦邪野フＱ肩−ｉコ３．８６．６Ｃ１がん転移阻害活性試験マウスにおけるＢ１６メラノーマ細胞の肺への転移に対
する；」の効果を調べた。１群６〜１０匹のＣ５７ＢＬマウスの尾静脈にＢ１Ｇメラ
ノーマ細胞２ＸｌＯ’個を注入し、３週間後に肺を摘出
し、転移結節数を測定した。被検ペプチドは、細胞注入
時に同時に投与した。

結果を下表に示す。

ＧＲＧＤＳＰＡ　　　　　　　　１　　ｍｇ　　　　　
　　　　４２　　％−庁−ｉコ　　０．１　ｍｇ　　　
　　　９４％図は実施例２で合成した環状ペプチドの分
解試験結果を示すＨＰＬＣ分析結果のグラフである。第
６図は比較のための線状ペプチドの同じ＜　ＨＰＬＣ分
析結果を示すグラフである。第７図は実施例２で合成し
た環状ペプチドの細胞接着阻害試験の結果を示すグラフ
である。

【図面の簡単な説明】

第１図は、実施例１で合成した環状ペプチド（コントロ
ール実線）およびそれをトリプシンで２４時間処理した
もの（破線）の高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬ
Ｃ）分析結果を示すグラフである。第２図は、比較のた
めの線状ペプチドの同じ＜　ＨＰＬＣ分析結果を示すグ
ラフである。第３図は実施例ＩＣの細胞接着阻害試験の
結果（フィブロネクチンコートの場合）を示すグラフで
あり、第４図は同じくビトロネクチンコートの場合の試
験結果を示すグラフである。第５第　１　図冷　２　図１１ｑ　聞　ｌノ陀トノＲアチ）：（、ＩＡＩ／密り第　５　図第７　口第　ム　口へ’７′＋）″　（割、ｙ／−潜ノリ手続補正書平成１年　８月　ｑ日

Claims

【特許請求の範囲】１、下記式［ I ］で表わされる合成環状ペプチド、ま
たはその塩、からなるペプチド誘導体。 ▲数式、化学式、表等があります▼・・・［ I ］ただし、Ｒは、アミノ酸残基あるいはオリゴ〜ポリペプチド残基２、Ｒがアミノ酸残基数１６以下のオリゴ〜ポリペプチ
ド残基である、請求項１記載のペプチド誘導体。３、合成環状ペプチドが下記式［II］で表わされるもの
である、請求項１記載のペプチド誘導体。 ▲数式、化学式、表等があります▼・・・［II］ただし、Ｒ＾１はアミノ酸残基あるいはオリゴ〜ポリペ
プチド残基。４、Ｒが下記［IV］で表わされるオリゴペプチド残基で
ある請求項１記載のペプチド誘導体。 ▲数式、化学式、表等があります▼・・・［IV］ただし、［］は存在するかあるいは存在しない残基を示し、Ｒ＾３が存在する場合、Ｒ＾３はアミ
ノ酸残基あるいはアミノ酸残基数７以下のオリゴペプチ
ド残基を示す。５、請求項１記載のペプチド誘導体を有効成分とする動
物細胞の接着を阻害する薬剤。６、動物細胞が哺乳動物の体細胞である、請求項５記載
の薬剤。７、動物細胞が癌細胞である、請求項５記載の薬剤。