JPH0989896A

JPH0989896A - 光散乱によるアマドリ化合物の測定方法

Info

Publication number: JPH0989896A
Application number: JP20900496A
Authority: JP
Inventors: Yoshinori Yamaguchi; 佳則山口; Giyoumei Toku; 暁鳴竇; Masayuki Yagi; 雅之八木; Seizo Uenoyama; 晴三上野山
Original assignee: KDK Corp; Kyoto Daiichi Kagaku KK
Current assignee: Arkray Inc
Priority date: 1995-07-19
Filing date: 1996-07-18
Publication date: 1997-04-04
Anticipated expiration: 2016-07-18
Also published as: JP3738789B2

Abstract

(57)【要約】【目的】光散乱を利用した簡便な光学的方法により、
アマドリ化合物を定量測定する。【構成】セル３中のアマドリ化合物を含む試料にＨｅ
−Ｎｅレーザ１からの励起光を照射してその試料からの
散乱光を受光し分光して光散乱スペクトルを得、その光
散乱スペクトルのうち、励起波長に対するシフト波数に
して８２０〜８４０ｃｍ^-1、１６５５〜１６６０ｃ
ｍ^-1、２０００〜２０２０ｃｍ^-1、２０８０〜２１００
ｃｍ^-1、２４６０〜２４７０ｃｍ^-1又は２５３０〜２６
００ｃｍ^-1に存在する光散乱ピークを検出器２３により
検出する。その光散乱ピークのピーク強度又はピーク積
分値を用いて、検量線によりアマドリ化合物の糖化物濃
度又は糖化率を測定する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は糖化アルブミン、糖化ヘ
モグロビン、糖化グロブリンなどのアマドリ化合物の定
量測定を行なう方法に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】アマドリ化合物は、タンパク質、ペプチ
ド又はアミノ酸のようなアミノ基を有する物質（以下、
タンパク質等という）と、アルドースのような還元性の
糖が共存する場合、一部のアミノ基とアルデヒド基が非
酵素的に、かつ非可逆的に結合し、アマドリ転移するこ
とにより生成される。アマドリ化合物の生成速度は、反
応性物質の濃度、接触時間、温度などの関数で表わされ
る。したがって、その生成量からそれらの反応性物質を
含有する物質に関する様々な情報を得ることができると
考えられている。アマドリ化合物を含有する物質として
は、醤油などの食品や、血液などの体液がある。

【０００３】例えば、生体ではグルコースとアミノ酸が
結合し、アマドリ化合物であるフルクトシルアミン誘導
体が生成している。血液中のヘモグロビンが糖化された
フルクトシルアミン誘導体はグリコヘモグロビン、アル
ブミンが糖化されたフルクトシルアミン誘導体はグリコ
アルブミン、血液中のタンパク質が糖化されたフルクト
シルアミン誘導体はフルクトサミンと呼ばれる。これら
のフルクトシルアミン誘導体の血中濃度は、過去の一定
期間の平均血糖値を反映しており、その測定値は糖尿病
の病状の診断及び病状の管理の重要な指標となりうるた
め、アマドリ化合物の測定手段の確率は、臨床上、きわ
めて有用である。また、食品中のアマドリ化合物を定量
することにより、その食品の製造後の保存状況や期間を
知ることができ、品質管理に役立つと考えられる。この
ように、アマドリ化合物の定量分析は、医学及び食品を
含む広範な分野で有用である。

【０００４】従来、アマドリ化合物の定量法としては、
高速液体クロマトグラフィーを利用する方法（Chromato
gr. Sci., 10, 659 (1979)参照）、ホウ酸を結合させた
固体をつめたカラムを用いる方法（Clin. Chem., 28, 2
088 (1982)参照）、電気泳動（Clin. Chem., 26, 1598
(1980)参照）、抗原−抗体反応を利用する方法（JJCLA,
18, 620 (1993)，機器・試薬, 16, 33-37 (1993)参
照）、フルクトサミンの測定法（Clin. Chem. Acta, 12
7, 87-95 (1982)参照）、チオバルビツール酸を用いて
酸化後に比色定量する方法（Clin. Chem. Acta, 112, 1
79-204 (1981)参照）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩ
Ａ）法などが知られている。

【０００５】電気泳動法やクロマトグラフィー法は測定
に時間がかかり、操作が煩雑であるうえ、タンパク質の
絶対量の測定値が混在物質の中の親和力の大きさの近い
物質の影響を受け、正確に定量測定するのが難しい。Ｒ
ＩＡ法は感度、特異性及び再現性に優れているが、標識
する過程が複雑で煩雑である。フルクトサミン測定法は
フルクトサミンのアルカリ溶液中での還元力を利用する
方法であるが、他の還元物質の影響を受け、測定誤差を
生じやすい欠点がある。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】光を物質に照射してそ
の光散乱スペクトルを用いて糖化タンパクなどのアマド
リ化合物を定量できれば、簡便で有効であるが、そのよ
うな光散乱スペクトルを利用してアマドリ化合物を測定
した例は報告されていない。そこで、本発明は光散乱を
利用した簡便な光学的方法により、アマドリ化合物を定
量測定する方法を提供することを目的とするものであ
る。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明では、アマドリ化
合物を含む試料に単一波長の励起光を照射してその試料
からの散乱光を受光し分光して光散乱スペクトルを得、
その光散乱スペクトルのうち、励起波長に対するシフト
波数にして８２０〜８４０ｃｍ^-1、１６５５〜１６６０
ｃｍ^-1、２０００〜２０２０ｃｍ^-1、２０８０〜２１０
０ｃｍ^-1、２４６０〜２４７０ｃｍ^-1又は２５３０〜２
６００ｃｍ^-1に存在する光散乱ピークを用いてアマドリ
化合物の定量測定を行なう。

【０００８】アマドリ化合物を含む試料に単一波長の励
起光を照射して得られる光散乱スペクトルは、光散乱ピ
ークと蛍光スペクトルとが重なったものとなる。その蛍
光スペクトル部分を除去する演算操作を施すと、光散乱
ピークのいずれかのピークのピーク強度又は積分値を求
めるのが容易になる。このようにして求めた光散乱ピー
クのピーク強度又は積分値に基づいてアマドリ化合物を
定量測定することができる。ここでの定量測定は、試料
中のアマドリ化合物の量を測定する場合も、試料中のタ
ンパク質等の糖化率を測定する場合も含んでいる。糖化
率は（アマドリ化合物）／（アマドリ化合物＋タンパク質
等）と定義される。いずれの測定値も検量線を用いて求める
ことができる。

【０００９】得られた光散乱スペクトルのうち、蛍光ス
ペクトルは（アマドリ化合物＋タンパク質等）の総和を
反映したものである。そこで、タンパク質等の糖化率を
測定する好ましい方法では、光散乱スペクトルの光散乱
ピークのいずれかのピークのピーク強度又は積分値Ｉ
と、光散乱スペクトルのうち、励起波長に対するシフト
波数にして８２０〜８４０ｃｍ^-1、１６５５〜１６６０
ｃｍ^-1、２０００〜２０２０ｃｍ^-1、２０８０〜２１０
０ｃｍ^-1、２４６０〜２４７０ｃｍ^-1及び２５３０〜２
６００ｃｍ^-1を除いて任意に定めた波数領域の積分値Ｓ
との比Ｉ／Ｓを用いることにより正確に測定することが
できる。

【００１０】図１に示す光散乱スペクトルは、濃度が１
０ｍｇ／ｄｌのヒト血清アルブミン水溶液にＨｅ−Ｎｅ
レーザ装置（日本科学エンジニアリング株式会社の製
品、出力７ｍＷ）のレーザ光（波長６３２.８ｎｍ）を
照射して励起して得たものである。（Ａ）は糖化率が２
４.１％、（Ｂ）は糖化率が５８.２％のヒト血清アルブ
ミン水溶液である。横軸はＨｅ−Ｎｅレーザ光の波長か
らの光散乱シフトを波数で表わしたもの、縦軸は散乱光
強度である。

【００１１】（Ａ）と（Ｂ）の両光散乱スペクトルで、
同じ光散乱シフトの位置に鋭いピークが現われており、
それらのピーク強度は糖化率が大きいものほど大きくな
っている。また、図１の試料と同程度の濃度のグルコー
ス水溶液の光散乱スペクトルを測定したが、ピークらし
いものは観測されなかった。グルコース水溶液の濃度を
１００００ｍｇ／ｄｌという高濃度にしてその光散乱ス
ペクトルを測定すると、図２に示されるスペクトルが得
られ、そこにはいくつかのピークが現われているが、図
１に示された鋭いピークとは位置が異なっている。その
結果、図１の鋭い光散乱ピークは、グルコースによる光
散乱ピークではなく、糖化アルブミンによる光散乱ピー
クであることがわかる。図１のスペクトルで、山形の大
きくてなだらかなピークはアルブミンと糖化アルブミン
からの螢光であり、糖化アルブミンによる光散乱ピーク
はその大きな蛍光ピークと重なって蛍光ピークから突出
して現れている。

【００１２】糖化アルブミンによる光散乱ピークはＨｅ
−Ｎｅレーザ光の波長からのシフト波数にして、８３０
ｃｍ^-1、１６５８ｃｍ^-1、２００９ｃｍ^-1、２０８２ｃ
ｍ^-1、２４６３ｃｍ^-1及び２５４４ｃｍ^-1の付近に存在
している。図１の光散乱スペクトルから螢光スペクトル
部分をバックグラウンド信号として除去したものを図３
に示す。（Ａ），（Ｂ）はそれぞれ図１の（Ａ），
（Ｂ）に対応したものである。このように、螢光スペク
トル部分を除去することにより、光散乱ピークのピーク
強度やピーク積分値（面積）を求めるのが容易になる。

【００１３】図４は、糖化率の異なるヒト血清アルブミ
ン水溶液の標準試料について、糖化率と、図３のように
螢光スペクトル部分を除去した後のピーク高さとの関係
を示したものである。測定を行ったピークは、Ｈｅ−Ｎ
ｅレーザ光の波長からのシフト波数にして１６５８ｃｍ
^-1付近のピークである。標準試料のヒト血清アルブミン
水溶液は、糖化率が２４.１％のものと５８.２％のもの
が市販品として入手できる。その他の糖化率の標準試料
は、それらの市販の標準試料を調合することにより調製
したものである。図４に示されている標準試料の糖化率
は、２４.１％、３１.３％、３８.７％、４５.５％、５
１.９％及び５８.２％である。これらの標準試料の糖化
率の数値は、全自動グリコアルブミン分画定量装置ＧＡ
Ａ−２０００（株式会社京都第一科学の製品）で測定し
た値である。

【００１４】図４によれば、糖化率と光散乱ピークのピ
ーク強度との間には直線関係があるので、この結果を糖
化率の検量線として用いることができる。また、この検
量線用のデータを測定した標準試料の（糖化アルブミン
＋アルブミン）濃度は一定であるので、この検量線を糖
化アルブミン濃度と光散乱ピークのピーク強度との関係
を表わす検量線に転用することもできる。したがって、
この検量線を用いると、未知試料について光散乱スペク
トルのピーク強度を測定して糖化率又は糖化アルブミン
濃度を求めることができる。

【００１５】同じ標準試料による光散乱スペクトルの同
じピークの積分値を用いて、糖化率と光散乱ピーク積分
値の関係を測定した結果を図５に示す。この場合も糖化
率とピーク積分値の間に直線関係が得られ、この関係も
検量線として利用することができる。そのため、未知試
料について光散乱スペクトルのピークのピーク強度の測
定に代えてピーク積分値を測定しても、糖化率又は糖化
アルブミン濃度を求めることができる。

【００１６】図４及び図５の直線関係は、図３に示され
た他の光散乱ピークについても同様に成立している。図
４又は図５に示された糖化率に対するピーク強度又はピ
ーク積分値の関係の検量線から未知試料の糖化率を求め
るには、未知試料の（糖化アルブミン＋アルブミン）濃
度を標準試料の（糖化アルブミン＋アルブミン）濃度と
同一になるように未知試料の濃度を調製するか、又は
（糖化アルブミン＋アルブミン）濃度が同一になるよう
に測定値を換算しなければならない。一方、図１の光散
乱スペクトルでは、光散乱ピークの他に螢光スペクトル
も同時に検出されている。図６は、この螢光スペクトル
のうち、Ｈｅ−Ｎｅレーザ光の波長からのシフト波数に
して４１６.５０８〜１４３４.７４ｃｍ^-1の領域の積分
値（縦軸の強度）を（糖化アルブミン＋アルブミン）濃
度の異なる標準試料について測定した結果を表わしたも
のである。（糖化アルブミン＋アルブミン）濃度と螢光
スペクトルの積分値との間には直線関係が得られている
ので、螢光スペクトルの積分値に基づいて（糖化アルブ
ミン＋アルブミン）濃度を求めることによって、糖化ア
ルブミンの光散乱ピークのピーク強度やピーク積分値か
ら得られた糖化率を補正することができる。螢光スペク
トルの積分を行なう波数領域は、螢光スペクトルが現わ
れている領域であれば任意に選ぶことができ、上記の一
例に限定されるものではない。

【００１７】また、光散乱ピークのいずれかのピークの
ピーク強度又は積分値Ｉと、光散乱スペクトルの蛍光ス
ペクトル部分の任意に定めた波数領域の積分値Ｓとの比
Ｉ／Ｓをパラメータとし、糖化率の異なる複数の標準試
料について糖化率とＩ／Ｓ値との関係を示す検量線を求
めておき、未知試料について検量線作成時に使用した光
散乱ピークのＩ／Ｓ値を測定し、その検量線に当てはめ
ると、アルブミン濃度による補正のなされた糖化率を求
めることができる。

【００１８】以上の例は糖化タンパクのうちの糖化アル
ブミンについて測定を行ったものであるが、これらの光
散乱ピークは、他の糖化タンパクを初め、糖化ペプチド
や糖化アミノ酸などのアマドリ化合物で共通して観測さ
れる。アマドリ化合物の中で臨床的に重要なものは、糖
化タンパクの糖化アルブミン、糖化ヘモグロビン及びフ
ルクトサミンであるが、本発明は他のアマドリ化合物に
も同様に適用することができる。

【００１９】例として、ヒト血中ヘモグロビン水溶液
（糖化率は不明）にＨｅ−Ｎｅレーザ光を照射して光散
乱スペクトルを得、蛍光スペクトル部分をバックグラウ
ンドとして除去したものを図１２（Ａ）に示す。図３
（Ａ），（Ｂ）と同じラマンシフトの位置に鋭いピーク
が見られる。ヘモグロビンについても、図６と同様にし
て、蛍光スペクトルの適当な領域の積分値（縦軸の強
度）をヘモグロビン濃度の異なる標準試料について測定
した結果を図１２（Ｂ）に示す。ここでも、蛍光スペク
トルの積分値とヘモグロビン濃度の間に直線関係が見ら
れる。

【００２０】図１の６個の光散乱ピークがアマドリ化合
物に特有のピークであることを示す例として、グルコー
スとアミノ酸の結合部位（フルクトース構造）に特異的
に反応する酵素フルクトシルアミノ酸オキシダーゼなど
を用いてアマドリ化合物である糖化アミノ酸を分解し、
それらのピークの変化を調べた結果を図７（Ａ）と
（Ｂ）に示す。図７（Ａ）はそのような酵素を反応させ
る前の糖化アミノ酸であるN^ε-Fructosyl-N^α-Z-lysine
（ＦＺＬ）水溶液のＨｅ−Ｎｅレーザ励起による光散乱
スペクトルである。その試料溶液に糖化アミノ酸分解酵
素を反応させた後の光散乱スペクトルは（Ｂ）に示され
るものであり、（Ａ）のスペクトルと比べるとアマドリ
化合物に特有のピークのピーク強度が減少している。Ｆ
ＺＬが糖化アミノ酸分解酵素により分解して生成するア
ミノ酸であるN^α-Z-lysine（αＺＬ）の標準試料にＨｅ
−Ｎｅレーザ光を照射し励起して得た光散乱スペクトル
は、図８に示されるものであり、図７に現れている特異
的な光散乱ピークは観測されない。

【００２１】図７において、糖化アミノ酸分解酵素を添
加してからの時間に対し、Ｈｅ−Ｎｅレーザ波長からの
シフト波数１６５８ｃｍ^-1のピークのピーク強度の変化
を測定した結果が図９である。時間の経過にともなって
分解酵素による糖化アミノ酸の分解が起こり、ピーク強
度が減少している。このことによって、これらの特徴的
な光散乱ピークは、糖とアミノ酸との結合によるピーク
であることがわかる。

【００２２】他のアミノ酸としてのバリンと、その糖化
アミノ酸としての糖化バリンの光散乱スペクトルをそれ
ぞれ図１３Ａ，図１３Ｂに示す。糖化バリンのスペクト
ルもアマドリ化合物に特有のピークを備えている。

【００２３】

【実施例】図１０に本発明で光散乱スペクトルを測定す
る装置の一例を説明する。１は励起光源であり、例えば
レーザ装置が用いられる。レーザ装置としては、連続発
振をするＡｒイオンレーザ、Ｋｒイオンレーザ、Ｈｅ−
Ｎｅレーザ、Ｈｅ−Ｃｄレーザ、Ｎｄ：ＹＡＧレーザ、
又はパルスレーザを用いることができ、近紫外域から近
赤外域に渡る広い波長範囲のレーザから選択して利用す
ることができる。レーザ装置以外の光源としてハロゲン
ランプなどを用いることもできる。ここでは光源１とし
てＨｅ−Ｎｅレーザを用いるものとする。２は光源１の
出力を制御する電源装置である。

【００２４】４はバンドパスフィルタで、光源１から発
生するレーザ光１２からそのサイドバンドをカットする
ためのものである。レーザ光１２はハーフミラー５によ
って試料側の励起光１２ｓと対照側の対照光１２ｒに分
離され、励起光１２ｓはハーフミラー５により発生する
波長光をカットするためのバンドパスフィルタ７を経て
レンズ９でセル３に集光して入射させられる。

【００２５】セル３は石英製の角筒状の散乱光セルであ
り、反応溶液が収容され、一定温度、例えば２５℃に保
たれている。セル３の反応溶液から発生する散乱光を増
強するために、励起光１２ｓの入射方向にはミラー１１
ａが配置されており、励起光１２ｓがセル３を透過した
後、ミラー１１ａで反射されて再びセル３に入射するこ
とにより光散乱が増強される。また、励起光１２ｓの入
射方向と９０°方向で、分光器２２側に反射する方向に
ミラー１１ｂが配置されており、セル３から発生する散
乱光はミラー１１ｂで反射されたものも含めて励起光及
びレイリ散乱光とともに集光レンズ１６，２０で集光さ
れ、フィルタ２１を経て分光器２２に集光される。フィ
ルタ２１は励起光及びレイリ散乱光の成分をカットして
励起波長から波長シフトした散乱光や蛍光成分のみを分
光器２２に入射させるためのものである。分光器２２と
検出器２３としては、分光器２２の分散方向に沿って複
数の検出素子を配置したポリクロメータによるマルチチ
ャネル検出方式のものを用いる。２４はマルチチャネル
検出器２３から波長ごとに出力を取り出すための検出器
制御部である。

【００２６】分光器２２としては走査型分光器を用い、
検出器２３として単一の検出素子を備えた検出器とする
こともできる。その際、分光器２２を波長走査するため
に、分光器制御部２５が必要になる。一方、ハーフミラ
ー５で励起光１２ｓと分割された対照光１２ｒはミラー
６で検出器３０方向に折り曲げられ、ミラー６で発生す
る波長光をカットするためのバンドパスフィルタ８を経
て検出器３０に入射し、光源強度が検出される。

【００２７】データ処理演算・出力部３１は分光器２２
と検出器２３による光散乱光検出値を光源強度を示す対
照光側の検出器３０の検出値で補正して光散乱スペクト
ルを得る。定量測定を行なうときは、データ処理演算・
出力部３１は予め測定して作成された検量線データを保
持しており、未知試料を測定して得られたピーク強度も
しくはピーク面積、又はそれらを蛍光スペクトルの面積
値で補正した値から、検量線に基づいて糖化物濃度又は
糖化率を算出して出力する。分光器２２が波長走査を行
なう場合にはデータ処理演算・出力部３１は分光器制御
部２５を介して波長走査を行なう。

【００２８】励起光による光散乱の増強をさらに効果的
に行なうためのセルの例を図１１（Ａ），（Ｂ）に示
す。（Ａ）では、セル３ａはガラス、石英又はポリエチ
レンテトラフタレートなどの透明な材料により作られた
丸底フラスコ状のセルであり、試料溶液が入れられる。
そのセル３ａは積分球状のセルホルダ１０ａに嵌め込ま
れている。セルホルダ１０ａはその内面が反射面となっ
ているとともに、励起光１２ｓを入射させ、その入射方
向と１８０°の方向に散乱光を取り出すための窓が開け
られている。励起光１２ｓはミラー１４で折り曲げられ
てセルホルダ１０ａの窓からセル３ａに入射する。１６
はセルホルダ１０ａの窓から出射した散乱光を励起光と
ともに集光させる集光レンズである。セル３ａ内の試料
溶液に照射された励起光は、セルホルダ１０ａの内面で
反射を繰り返し、光散乱を伴ってセルホルダ１０ａの窓
から取り出され、分光器方向へ導かれる。

【００２９】（Ｂ）は励起光の入射方向に対し９０°方
向に散乱光を取り出すようにセルホルダ１０ｂに窓を開
けた例である。セル３ａは内面が反射面となった積分球
状のセルホルダ１０ｂに嵌め込まれ、セルホルダ１０ｂ
にはｙ方向から励起光１２ｓを入射させる窓と、その入
射方向と９０°をなすｘ方向に散乱光１８を取り出す窓
が開けられている。

【００３０】

【発明の効果】本発明ではアマドリ化合物を含む試料に
単一波長の励起光を照射してその試料からの散乱光を受
光し分光して光散乱スペクトルを得、その光散乱スペク
トルのうち、励起波長に対するシフト波数にして８２０
〜８４０ｃｍ^-1、１６５５〜１６６０ｃｍ^-1、２０００
〜２０２０ｃｍ^-1、２０８０〜２１００ｃｍ^-1、２４６
０〜２４７０ｃｍ^-1又は２５３０〜２６００ｃｍ^-1に存
在する光散乱ピークを用いることによって、簡便な光学
的測定方法によりアマドリ化合物を定量測定することが
できる。アマドリ化合物の糖化率の測定には光散乱ピー
クのピーク強度やピーク積分値を用いることができる
が、螢光スペクトルの適当な波数領域の積分値を基準と
してアマドリ化合物とタンパク質等との和による補正を
行なうことによって、糖化率をより正確に求めることが
できる。

【図面の簡単な説明】

【図１】ヒト血清アルブミンの光散乱スペクトルを示す
図であり、（Ａ）は糖化率２４.１％、（Ｂ）は糖化率
５８.２％のものである。

【図２】高濃度のグルコース水溶液の光散乱スペクトル
を示す図である。

【図３】図１（Ａ），（Ｂ）のスペクトルから螢光スペ
クトルを除去する演算操作を行なった後のそれぞれの光
散乱スペクトルを示す図である。

【図４】光散乱スペクトルの１つのピークのピーク強度
と糖化率の関係を示す検量線である。

【図５】光散乱スペクトルの１つのピークのピーク積分
値と糖化率の関係を示す検量線である。

【図６】アルブミン濃度と螢光スペクトルの積分値との
関係を示す図である。

【図７】アマドリ化合物分解酵素によるアマドリ化合物
の光散乱ピークの変化を示す光散乱スペクトルの図であ
り、（Ａ）は分解酵素添加前、（Ｂ）は分解酵素添加後
の状態を示したものである。

【図８】N^α-Z-lysineの光散乱スペクトルを示す図であ
る。

【図９】図７の測定における光散乱ピークの時間による
変化を示す図である。

【図１０】本発明を実施する測定装置の一例を示すブロ
ック図である。

【図１１】同測定装置における他のセル部分の例を示す
断面図であり、（Ａ）は１８０°増強散乱を取り出す
例、（Ｂ）は９０°増強散乱を取り出す例である。

【図１２】（Ａ）は蛍光スペクトルを除いた後のヒト血
中ヘモグロビンの光散乱スペクトルを示す図、（Ｂ）は
ヘモグロビン濃度と蛍光スペクトルの積分値との関係を
示す図である。

【図１３】（Ａ），（Ｂ）はそれぞれバリン、糖化バリ
ンの光散乱スペクトルを示す図である。

【符号の説明】

１励起光源３石英製散乱光セル１２ｓ励起光１８励起光及び光散乱光２２分光器２３検出器

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者上野山晴三京都府京都市南区東九条西明田町57番地株式会社京都第一科学内

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】アマドリ化合物を含む試料に単一波長の
励起光を照射してその試料からの散乱光を受光し分光し
て光散乱スペクトルを得、その光散乱スペクトルのう
ち、励起波長に対するシフト波数にして８２０〜８４０
ｃｍ^-1、１６５５〜１６６０ｃｍ^-1、２０００〜２０２
０ｃｍ^-1、２０８０〜２１００ｃｍ^-1、２４６０〜２４
７０ｃｍ^-1又は２５３０〜２６００ｃｍ^-1に存在する光
散乱ピークを用いてアマドリ化合物の定量測定を行なう
ことを特徴とするアマドリ化合物の測定方法。
【請求項２】前記光散乱スペクトルから蛍光スペクト
ル部分を除去する演算操作を施した後、前記光散乱ピー
クのいずれかのピークのピーク強度又は積分値に基づい
てアマドリ化合物の定量測定を行なう請求項１に記載の
アマドリ化合物の測定方法。
【請求項３】前記光散乱ピークのいずれかのピークの
ピーク強度又は積分値Ｉと、前記光散乱スペクトルのう
ち、励起波長に対するシフト波数にして８２０〜８４０
ｃｍ^-1、１６５５〜１６６０ｃｍ^-1、２０００〜２０２
０ｃｍ^-1、２０８０〜２１００ｃｍ^-1、２４６０〜２４
７０ｃｍ^-1及び２５３０〜２６００ｃｍ^-1を除いて任意
に定めた波数領域の積分値Ｓとの比Ｉ／Ｓに基づいてア
マドリ化合物の定量測定を行なう請求項１に記載のアマ
ドリ化合物の測定方法。
【請求項４】励起光源としてＨｅ−Ｎｅレーザを使用
する請求項１，２又は３に記載のアマドリ化合物の測定
方法。