JPH082917B2

JPH082917B2 - ポリミキシン複合体

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Publication number: JPH082917B2
Application number: JP2304230A
Authority: JP
Inventors: デイーン・アレン・ハンドレイ; フイリツプ・レイク
Original assignee: Sandoz AG
Current assignee: Sandoz AG
Priority date: 1989-11-15
Filing date: 1990-11-13
Publication date: 1996-01-17
Anticipated expiration: 2011-01-17
Also published as: IE65268B1; EP0428486B1; DK0428486T3; IL96326A0; MY104520A; AU639952B2; KR910009274A; ZA909187B; ES2063326T3; DE69012747D1; IL96326A; AU6655590A; JPH03220198A; HK49696A; IE904105A1; CA2029997A1; NZ236050A; CY2052B1; DE69012747T2; HU210901A9

Description

【発明の詳細な説明】本発明は新規なポリミキシン複合体（conjugates）
に、また、その製造方法および使用方法に関するもので
ある。

エンドトキシンまたはリポ多糖類は、グラム陽性菌の
細胞壁より誘導される構造分子である。これらは、血流
中に導入されると体温調節を阻害して発熱の原因となり
得る。これらはまた毒性効果を有し、心臓障害、肺障害
および腎臓障害に導く。エンドトキシン関連疾病は、集
中治療病棟の患者の死因となる。

抗生物質の中でも独特なものは、エンドトキシン分子
の脂質Ａ領域に結合することにより達成されるポリミキ
シン、特にポリミキシンＢ（PMB）のエンドトキシンを
中和する能力である。バチルス・ポリミキサ（B.アエロ
スポルス）よりのポリミキシンＢは高度に帯電した両親
媒性（amphiphilic）の環状ペプチド脂質（peptidolipi
d）である。ポリミキシンＢはまた、種々の菌類感染
症、特に免疫抑制された（immunocompromised）固体に
生ずるものの防除にも有用である。

しかし、PMBは理想的な抗生物質とは言えない幾つか
の性質を有している。第１に、体内での半減期が短く、
有効であるためには反復投与が必要である。第２に、腎
臓を通過する際に広範囲の損傷の原因となる。第３に、
高い投与量では神経毒性を有し、これが呼吸麻痺の原因
となる。

従来、研究者らはポリミキシンを不動（immobile）分
子、または固定分子に複合させていた。たとえば、PMB
のセファローズへの結合を記述しているイッセクッツ
（Issekutz），免疫学的方法雑誌(J.Immunol.Methods)6
1（1983）275-281を参照されたい。これらの複合体は、
生成技術においては有用であるが、生体内の治療的使用
には適していない。

薬学的活性、持続性の増大、または器官毒性の減少を
達成するための一つのアプローチには、大分子量の高分
子物質、たとえばデキストラン、ポリエチレングリコー
ルまたはポリビニルピロリドンへの薬品の配合が含まれ
ている。しかし、この重合体複合体の領域での試みは限
定された成功しか得られていない。たとえば、プロカイ
ンアミド（抗不整脈薬）の複合体形状は単独の（nativ
e）プロカインアミドよりも活性が少なく、かつ、短い
半減期を示す（シャハト（Schacht）ら，ニューヨーク
科学アカデミー年報(Ann.NY Acad.Sci.)（1985），446
199-211）。同様に、担体に結合したプロスタグランジ
ン類似物B 245は単独の分子より（数桁（by several lo
g orders））有効性が少ない［バムフォード（Bamfor
d）ら，ビオキミカ・ビオフィジカ・アクタ (Bioch.Biop
hys.Acta)886（1986）109-118］。生物学的能力の減少
はまた、カリクレイン、アプロチニン、ブラジキニン
［オージャ（Odya）ら，生化学薬学(Biochem.Pharmaco
l.)27（1978）173-179］および抗腫瘍薬ダウノルビシン
［フルウィッツ（Hurwitz）ら、応用生化学雑誌(J.Ap
pl.Biochem.)2（1980）25-35］およびミトマイシンＣ
［タカクラ（Takakura）ら，癌研究(Cancer Res.)44（1
984）2505-2510］の複合形状に関しても記述されてい
る。複合酵素も、立体障害と基質接近（substrate acce
ssibility）の減少とによる生物学的活性の減少を受け
る［ブロムホフ（Blomhoff）ら，ビオキミカ・ビオフィ
ジカ・アクタ(Bioch.Biophys.Acta)757（1983）202-20
8;マーシャル（Marshall）ら，生物化学雑誌(J.Biol.Ch
em.)251（1976）1081-1087;フォスター（Foster），エ
クスペリエンチア(Experientia)31（1975）772-3;ワイ
ルマン（Wileman）ら，薬物薬学雑誌 (J.Pharm.Pharmaco
l.)35（1983）762-765］。しかし、配合後の循環器内
（circulatory）半減期が改良される若干の例も存在す
る［ワイルマン，上掲論文；カネオ（Kaneo），化学薬
学雑誌(Chem.Pharm.Bull.)37（1989）218-220］。

血流中により永く存在し、かつ／または治療的投与量
において神経毒性もしくは腎臓毒性を持たない形状のポ
リミキシンを開発することが望ましい。

本発明は、水に可溶なポリミキシン−担体複合体、た
とえばポリミキシンＡ−、Ｂ−またはＥ−担体複合体
に、特にPMB−担体複合体に関するものである。これら
はエンドトキシンの中和における使用が示されている。
これらは単独のポリミキシンよりも有効であり、かつ毒
性が少ないので、単独のポリミキシンの投与に対する改
良である。

本件明細書中で使用するには以下の定義を適用する： −LD₀はPMBまたはその配合体の最高無毒性投与量であ
る； −LD₁₀₀は、正常な試験動物に注射した場合に90-100％
の致死率という結果を与えるPMBまたはその複合形状の
投与量である； −PD₁₀₀は、増感された試験動物に注射した場合に少な
くとも95％生存という結果を与えるポリミキシンＢまた
はその複合形状の投与量である； −治療指数（TI）は、LD₁₀₀をPD₁₀₀で割って計算する。

本件明細書における定義では、複合体は25℃において
少なくとも0.5mg/mlの、好ましくは25℃において少なく
とも1mg/mlの水に対する溶解度を有する場合に水溶性で
ある。この種の複合体は水溶性かつ注射可能、無基質
（non-matrix）、コロイド状、非架橋、非高分子量であ
り、かつ／または非粒状である。

ポリミキシンに複合し得る担体は、水溶性複合体を形
成し得る、均一な、無毒性の、非発癌性の、非刺激性
の、かつ非免疫原性の分子から選択する。通常は生体重
合体である。この種の担体には多糖類たとえばデキスト
ランまたはヒドロキシエチル澱粉（HES）、タンパク質
たとえばアルブミン、ならびに重合体、たとえばポリビ
ニルピロリドン、ポリエチレングリコールおよびポリビ
ニルアルコールが含まれる。デキストランが最も好まし
い。

生体重合体部分のサイズ、すなわち複合体の担体部分
は変えることができる。典型的には25,000ないし500,00
0の、好ましくは50,000ないし300,000の、より好ましく
は79,000ないし200,000の分子量範囲である。選択した
生体重合体のサイズは、複合体の血流中循環の有効時間
の長さに有意の影響を与える可能性がある。一般には、
生体重合体が大きければ複合体がより長く循環中に留ま
るであろう。したがって、生体重合体のサイズにより、
複合体の体内持続時間をあらかじめ定めた時間に相当す
る値に調節することができる。

本発明記載の複合体は通常の手法で製造することがで
きる。

ポリミキシンＢを例にとれば、これは細菌性エンドト
キシンに結合する５個のγ−アミノ基を有する。少なく
とも１個のγ−アミノ基をPMBを担体に確実に結合させ
るのに使用することができるが、５個の部位全てをこの
目的に使用することはできず、全てを使用すれば複合体
はエンドトキシン中和活性を失ってしまう。ポリミキシ
ンをこれらの担体に結合させるには、種々の化学反応を
使用することができる。重合体１分子あたりの結合した
PMB分子数は、結合反応中に反応剤の比率を変えること
により影響を与えることができる。本複合体は一般に
は、モル比基準で1PMB:15生体重合体ないし200PMB:1生
体重合体を含有し、より好ましくは本複合体は1-10PMB:
1生体重合体を、さらに好ましくは1-3PMB:1生体重合体
を有する。高いPMB:生体重合体比率を有する複合体は、
低い比率を有する複合体よりも大きな能力を有するよう
に思われる。

ポリミキシン−担体複合体、より特定的にはPMB−デ
キストラン複合体を製造する一つの方法は、カルバミン
酸エステル結合を経由するもの（方法Ａ）である。この
様式で製造したPMB−デキストラン複合体（詳細は下の
実施例１を参照）は単独のPMBの抗エンドトキシン活性
を保持することが見いだされており、加えて、単独のPM
Bが示す激しい神経毒性が欠如していることも見いださ
れている。これらの複合形状はまた、慢性毒性が減少し
ていることにより、単独のPMBより2-5倍改良された治療
指数をも示す。

複合されたポリミキシン−デキストランを製造する第
２の方法は、アミン結合を経由するもの（方法Ｂ）であ
る。この手法で製造したPMB−デキストラン複合体（詳
細は下の実施例２を参照）は単独のPMBと同一の一般的
抗エンドトキシン活性を保持するか、または、単独のPM
Bよりも活性が大きい。これらの複合形状は単独のPMBに
見られる激しい神経毒性のいかなるものも完全に欠如し
ており、慢性毒性が減少していることにより、単独のPM
Bで見られる治療指数より33倍の改良を示す。特に、PMB
−デキストラン複合体の１種は試験した投与量において
測定可能な毒性が全く欠如しており、良好な抗エンドト
キシン活性を保持しており、結果的に治療指数の80倍の
改良が得られている。

さらに、驚くべきことには、この方法により製造し、
“迅速精製した”配合体がTIの60ないし120倍の改良を
示すことが見いだされている。本明細書および特許請求
の範囲を通じて使用する“迅速精製した”は、本物質が
モレキュラーシーブクロマトグラフィー、脱塩ゲル、ま
たはアミコン（Amicon）超遠心を用いて非結合PMBから
精製され、（7-10日の長期透析時間とは対照的に）約12
-24時間、好ましくは約18時間で得られたことを意味す
る。したがって、これらの方法により製造し、迅速精製
した複合体は本発明の他の一つの好ましい態様を構成す
る。

しかし、上に概括した２種の方法のいずれかで得られ
るポリミキシン−担体複合体は精製するのが困難であ
る。単独のPMBを複合体から分離するためにまず、10日
の長期透析が試みられた。透析袋内部のタンパク質レベ
ルは漸近線に達したが、ゲル透過クロマトグラフィーは
単一の大分子量種を示し、物質はなお非結合のPMBを含
有していた。加圧透析（アミコン）濾過を長期透析に置
き換えた場合にも結果は同一であった。この手法で精製
した複合体は、PMBと平衡点（equipoint）にあったが、
なおPMBの毒性の1/3ないし1/5を保持していた。理論に
拘束されることは望まないが、“遊離の"PMBと配合体と
の間のある種の化学的な結合（association）がその分
離を困難にしているように思われる。動物への注射に際
しては、“遊離の"PMBはそれ自体分解して毒性問題の原
因となる。

以下の方法（方法Ｃ）（詳細は下の実施例４を参照）
は上記の困難を取り除くものである。ポリミキシン−デ
キストラン複合体、たとえばPMB−デキストラン複合体
を低級アルコール、好ましくはメタノール中で沈澱さ
せ、続いて遠心的に回収し、超音波で再溶解させる。こ
の方法を通常は少なくとも３回、好ましくは７ないし10
回繰り返し、得られる物質の純度を、たとえばゲル透過
クロマトグラフィーおよび逆相高圧液体クロマトグラフ
ィー（RP-HPLC）により評価する。いずれかの方法によ
りタンパク質が検出されれば、沈澱−再溶解工程を繰り
返す。この手法で精製した複合体を“超純（ultra-pur
e）”ポリミキシン複合体と呼び、一般には、全タンパ
ク質1mgあたり20μｇ未満の非複合ポリミキシンを、好
ましくは全タンパク質1mgあたり10μｇ未満の非配合ポ
リミキシンを有するものとして記述することができる。

かくして、本発明のその他の態様は、ａ）ポリミキシンをデキストランに適当に複合させて水
溶性ポリミキシン−デキストラン複合体を形成し；ｂ）得られる複合体を低級アルコール中で沈澱させ；ｃ）この複合体を再懸濁させ；ｄ）複合体が非結合のポリミキシンを実質的に含有しな
くなるまで段階ｂ）およびｃ）を反復することよりなる水溶性ポリミキシン−デキストラン複合体
の製造方法である。

ここで、“実質的に非結合のポリミキシンを含有しな
い”は、複合体の非結合ポリミキシンに対する比率がモ
ル基準で少なくとも95:1、好ましくは少なくとも99:1で
あることとして定義される。上記の低級アルコールは、
たとえば１ないし10個の炭素原子を有するものであり、
好ましくは１ないし４個の炭素原子を有するもの、たと
えばｎ−ブタノールまたはイソプロパノール、より好ま
しくはメタノールまたはエタノールである。ポリミキシ
ンは好ましくはPMBである。

超純複合体は実質的に毒性を持たず、その結果、これ
にはLD₁₀₀が得られない。100mg/kgの投与量では毒性は
見られない。より高い濃度では溶液があまりに粘稠で注
射できない。このことは、5mg/kgの生体内LD₀と9.5mg/k
gのLD₁₀₀とを有する単独のPMBとは対照的である。した
がって、超純PMB複合体の治療指数は、毒性が減少して
いるために、単独のPMBより100倍高い。

単独のPMBに替えて複合体を使用することの第２の利
点は、複合体がより長い活性持続時間を有し、したがっ
て予防的に使用し得ることである。したがって、本発明
の態様の一つは、この種の予防的処置を必要とする対象
に予防的有効量のポリミキシン、好ましくはPMBおよび
担体、好ましくはデキストラン、ならびに適宜に医薬と
して許容し得るその他の担体または希釈剤、たとえば不
活性溶媒の水溶性複合体を投与することによる、細菌性
エンドトキシンの存在に起因する疾病の予防である。本
複合体は実質的に毒性を持たないので、敗血症のショッ
ク症状を起こし易い患者、たとえば長期栄養補給用の液
体食品に依存している患者に日常的に、予防的に投与す
ることができる。

本発明はまた、水溶性ポリミキシン−担体複合体を適
宜にその他の医薬として許容し得る担体または希釈剤、
たとえば不活性溶媒とともに含有する医薬組成物に関す
るものである。

本発明はまた、水溶性ポリミキシン−担体複合体を適
宜にその他の医薬として許容し得る担体または希釈剤、
たとえば不活性溶媒と混合することよりなる医薬組成物
の製造方法に関するものでもある。

本発明の他の一つの態様は、処置を必要とする対象に
エンドトキシン中和量のポリミキシン、特にPMBおよび
担体、特にデキストラン、ならびに不活性溶液の水溶性
複合体を投与することよりなる、細菌性エンドトキシン
の存在に起因する疾病の処置である。ポリミキシンは細
菌感染症または菌類感染症の防除にも有効であるので、
本発明の他の態様は、処置を必要とする対象に殺細菌的
に、または殺菌的に有効な量のポリミキシンおよび担
体、特にデキストラン、ならびに不活性溶液の水溶性複
合体を投与することよりなる、細菌感染症または菌類感
染症の処置方法である。

本発明記載のポリミキシン−担体複合体は、ポリミキ
シン自体の使用に適合する手法で使用することができ
る。すなわち、本件複合体は細菌感染症または菌類感染
症用の抗生物質として単独で、または他の殺細菌剤およ
び／または抗炎症剤と組み合わせて使用することができ
る。本件複合体は、たとえば筋内に、静脈内に、包膜内
に（intrathecally）、結膜下に（subconjunctivally）
または局所的に投与することができる。筋内注射用の配
合剤は、典型的には滅菌水、生理的食塩水または約１％
のプロカイン・HCl中の有効量のPMB複合体よりなるもの
である。静脈内複合剤は典型的には５％デキストローズ
および滅菌水中の有効量のPMB複合体よりなるものであ
る。包膜内複合剤は典型的には生理的食塩水中の有効量
のPMB複合体よりなるものである。局所的な眼科的使用
には、有効量を水または生理的食塩水および任意にグリ
セリン、ならびに点眼薬用硫酸銅と混合してもよく、ま
た、軟膏または懸濁液にすることもできる。局所適用用
の、特に火傷領域用のクリームは、典型的には不活性成
分、たとえば液体ペテロラタム、プロピレングリコー
ル、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレンおよび
乳化性ロウ中の有効量のPMB複合剤よりなるものであ
る。

ポリミキシン複合体の使用量は、特定の患者に典型的
に処方されるであろう単独のポリミキシンの量（処置す
る条件ならびに患者の年令および体重のような要因を考
慮に入れて）と使用する特定のポリミキシン複合体の活
性とを基準とする。ポリミキシン複合体の有効活性が増
加しているため、その毒性が減少しているため、また、
活性の持続時間が増加しているために、単独のポリミキ
シンと比較して50％までの投与量の減少をしばしば実現
することができる。

本発明は、以下の非限定的な実施例を引用して説明す
ることができる。全ての温度は摂氏温度である。

実施例1:PMBのデキストランへの化学的複合（方法A;カルバミン酸エステル結合）デキストラン（分子量79,000または200,000）2gを20m
lの水に溶解させ、０℃に冷却し、テトラフルオロホウ
酸１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウム（CDA
P）５−300mgを添加し、30秒間混合する。トリエチルア
ミン（0.2M、CDAP5mgに対して0.04ml）を激しく撹拌し
ながら滴々添加し、全反応混合物を1mlの10N HClを含有
する80mlの氷冷絶対エタノールに移す。デキストランが
沈澱するので、この沈澱を０℃で５分間、1000×ｇで遠
心して取り出し、20-50mlの0.25M炭酸水素Na緩衝液にpH
9.0で再溶解させる。この混合物に600-100mgのPMB（粉
末の、または水に予備溶解させた）を添加し、８℃で24
時間撹拌する。ついで、全反応混合物を分子量50,000遮
断（cut-off）の透析用チューブに移し、0.05Mの発熱性
物質を含有しない（pyrogen-free）リン酸緩衝液に対し
て6-10日間透析する。透析した最終的な反応混合物のタ
ンパク質含有量を分光法により、208nmにおける吸収
で、またはブラッドフォード（Bradford）試薬（ビオラ
ッド（Bio Rad,Richmond,CA,USA）を用いて595nmで測定
する。

ニンヒドリン反応を用い、対照体として単独のPMBを
使用して遊離のアミノ用いて測定する。窒素含量および
炭素含量の分析はCHN元素分析計を用いて行う。

以下の表において、“モル比”は、複合に使用したデ
キストランの濃度（23.7マイクロモル）を透析後の最終
的なPMB−タンパク質のマイクロモルで表した濃度（208
nmでの分析値を基準にする）で割って決定する。デキス
トランは“dx"と略記する。“C:N"比はデキストラン2g
あたり450分子の水を想定する。“結合/PMB"は、ニンヒ
ドリン反応を基準にした、PMBがデキストランに付着し
ている結合数の推定値である。“ND"は“測定していな
い”である。

実施例2:PMBのデキストランへの化学的複合（方法B;アミン結合）デキストラン（分子量79,000または200,000）1.25gを
20mlの蒸留水に溶解させ、ついで過ヨウ素酸Na0.071-0.
71gを添加する。22℃で１時間ののち、この反応混合物
をDEAEA25カチオン交換樹脂（ファルマシア社（Pharmac
ia Inc.,Piscataway,NJ.,USA））を含有するカラムに移
し、この混合物を回収し、20-25mlの単一分画に貯蔵す
る。ついで、この酸化したデキストランを80-200mlの炭
酸水素Na緩衝液またはホウ酸Na緩衝液（pH8.5-9.0）に
溶解させた2gのPMBと混合し、60分後、40mlの0.05-25％
ホウ水素化Naを単一処理で、または多重処理で、各処理
を30分ないし24時間継続して添加する。この反応を30分
間進行させ、ついで８℃で7-10日間、0.05M発熱性物質
非含有リン酸Na緩衝液に対して透析する。実施例１に記
載したものと同様にして、透析した最終的な反応混合物
のタンパク含有量と遊離のアミノ基とを分析する。

長期透析による精製に加えて、数個の代表的な試料を
18時間の透析を用いて迅速精製し、G-100セファデック
ス（Sephadex）カラム（ファルマシア社）で精製し、ア
ミコン濾過装置でYM-100アミコン濾過器を用いて濃縮す
る。

以下の表において、モル比は複合に使用したデキスト
ランの量（6.25マイクロモル）を透析後の最終的なPMB
−タンパク質のマイクロモル数（208nmでのデータを基
準にする）で割って決定する。窒素百分率はCHN元素分
析計を用いて測定する。結合/PMBは、ニンヒドリン反応
により推定する。

実施例3:PMB複合体の抗エンドトキシン活性 A.エンドトキシン誘起致死率この研究を通じて雄のCB57BL/cマウス（18-22g、ジャ
クソン研究所（Jackson Labs））を使用する。ガラノス
（Galanos）ら，合衆国国立科学アカデミー報文集(Pro
c.Natl.Acad.Sci.USA)76（1979）5939に記載されたもの
と同様にして、試験動物にエンドトキシン（リストビオ
ロジカル（List Biologicals,Palo Alto,CA,USA）製の0
111B4）とガラクトサミンとを投与して増感する。エン
ドトキシンとガラクトサミン（320mg/kg）とを0.5mlの
発熱性物質非含有等張食塩水に入れて各試験動物に、日
差による変化（diurnal variation）を避けるため13:00
ないし15:00に、腹膜内に注射する。投与量−応答の研
究から、0.01mg/kgのエンドトキシンが85-95％の致死率
を生むことが測定される。試験動物は注射後６日間、毎
日観察する。

B.PMB（単独および複合形状）誘起致死率 PMB（単独の、および複合形状の）を、非増感マウス
におけるその固有の毒性に関して評価する。この研究を
通じて雄のCB57BL/cマウス（18-22g、ジャクソン研究
所）を使用する。試験動物に単独のPMBまたは複合PMBを
腹膜内注射により投与（１動物あたり0.5ml）し、致死
率を７日間監視する。PMB（単独の、および複合形状
の）の投与量を変えて、100％致死率を与えるLD₁₀₀を測
定する。各投与量ごとに10ないし20匹を使用する。

C.PMBの抗エンドトキシン評価 PMB（単独の、および複合形状の）を腹膜内注射の前
にエンドトキシンと60分間予備混合するか、または、単
一の腹膜内注射と同一の基剤を同時投与して、そのエン
ドトキシンを中和する能力に関して評価する。PMB（単
独の、および複合形状の）の濃度は変化させるが、各注
射の体積は１動物あたり0.5mlの一定値に保つ。複合PMB
による保護を単独のPMBと比較する（体重1kgあたりのタ
ンパク質のmg数で表して）。対照例（エンドトキシン、
ガラクトサミンおよびビークル）も各実験に含ませる。
各グループは10ないし17匹を有する。

連続性に関するイェート（Yate）の補正を用いるχ−
二乗分析を使用して、グループ間の生存率の統計的分
析、または対照例との比較による分析を行う。

D.治療指数の決定 LD₁₀₀をPD₁₀₀で割ってPMB（単独の、および複合形状
の）の治療指数（TI）を決定する。下の表において、
“処置”は、上記の実施例１および２に現れる配合体を
言う。

実施例4:超純PMB−デキストラン複合体（方法C;アルコール沈澱） 1.製造上記の実施例２に記載したものと実質的に同様にして
PMB−デキストラン複合体を製造し、“PXN 1/50"と呼ば
れる複合体を得る。

白色の凝集体であるこの複合体を60％メタノール中で
沈澱させ、遠心により回収し、ついで超音波再溶解させ
る。この工程を７回繰り返し、得られる物質の純度をゲ
ル透過クロマトグラフィーおよび逆相高圧液体クロマト
グラフィー（RP-HPLC）により評価する。ゲル透過クロ
マトグラフィーによっては遊離のPMBは検出されない
が、RP-HPLCは全タンパク質1mgあたり48μｇの非配合PM
Bを示す。ついで、この複合体をさらに３回沈澱させて
非複合PMBを除去する。

2.生物学的活性得られる超純PMB−デキストラン複合体を単独のPMB
と、上記の実施例3,c.に記載したエンドトキシン誘起致
死試験において比較する。

1mg/kgの静脈内投与において超純PMB配合体は、少な
くとも６時間のLD₉₀エンドトキシン誘発試験（challeng
e）に対して＞70％の保護を与える。10mg/kgの静脈内投
与においては、この複合体はエンドトキシンの投与後1.
5時間、治療的保護を与える。したがって、このPMB複合
体は予防的使用に適している。

本超純PMB複合体は、単独のPMBと比較して、毒性が驚
くほど減少している。単独のPMBは5mg/kgの静脈内LD₀と
9.5mg/kgの静脈内LD₁₀₀とを有し、毒性の早期開始と狭
い治療範囲とを示唆している。本件超純PMB複合体は＞1
00mg/kgのLD₀を有し、その固有の無毒性のためにLD₁₀₀
を得ることは不可能であった。下の表においては、PMB
（単独の、または複合形状の）の間で最高無毒性投与量
の比較を行った：本発明の主なる特徴および態様は以下のとおりであ
る。

1.ポリミキシンと担体との水溶性複合体。

2.上記の担体が多糖類たとえばデキストランもしくはヒ
ドロキシエチル澱粉、タンパク質たとえばアルブミン、
または重合体たとえばポリビニルピロリドン、ポリエチ
レングリコールもしくはポリビニルアルコールであるこ
とを特徴とする上記の第１項記載の複合体。

3.上記のポリミキシンがPMBであることを特徴とする上
記の第１項記載の複合体。

4.上記の担体がデキストランであることを特徴とする上
記の第２項記載の複合体。

5.上記の担体がデキストランであることを特徴とする上
記の第３項記載の複合体。

6.PMBがカルバミン酸エステル結合を通じて結合してい
ることを特徴とする上記の第５項記載の複合体。

7.PMBがアミン結合を通じて結合していることを特徴と
する上記の第５項記載の複合体。

8.a）ポリミキシンをデキストランに適当に配合させて
水溶性ポリミキシン−デキストラン複合体を形成し；ｂ）得られる複合体を低級アルコール中で沈澱させ；ｃ）この複合体を再懸濁させ；ｄ）複合体が非複合のポリミキシンを実質的に含有しな
くなるまで段階ａ）およびｂ）を反復することよりなる、上記の第４項記載のポリミキシン−デキ
ストラン複合体の製造方法。

9.上記の第１項記載の複合体をその他の医薬として許容
し得る担体または希釈剤とともに含有する医薬組成物。

10.実質的に無毒性の上記の第１項記載の注射可能な複
合体。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】ポリミキシンと担体との水溶性複合体であ
って、ポリミキシンがポリミキシンＥである場合には前
記担体かタンパク質以外である、全身的な循環系で使用
するための複合体。
【請求項２】担体が多糖類または水溶性合成重合体であ
るか、あるいはポリミキシンがポリミキシンＥ以外であ
る場合には担体がタンパク質であってもよい請求項１記
載の複合体。
【請求項３】ポリミキシンがポリミキシンＢ（PMB）で
ある請求項１記載の複合体。
【請求項４】ポリミキシンＢ（PMB）対担体のモル比が
1:15〜200:1である請求項３記載の複合体。
【請求項５】25℃において水1ml当たり少なくとも1mgの
溶解性をもつ請求項１記載の複合体。
【請求項６】注射可能な請求項１記載の複合体。
【請求項７】担体が分子量79,000〜200,000を有する請
求項１記載の複合体。
【請求項８】エンドトキシン中和活性を有する請求項１
記載の複合体。
【請求項９】複合体対未結合ポリミキシンのモル比が少
なくとも99:1を示す請求項１記載の複合体。
【請求項１０】担体がデキストランである請求項２又は
３記載の複合体。
【請求項１１】担体がデキストランであり、そしてポリ
ミキシンＢ（PMB）がカルバメート結合を介して結合さ
れた請求項３記載の複合体。
【請求項１２】担体がデキストランであり、そしてポリ
ミキシンＢ（PMB）がアミン結合を介して結合された請
求項３記載の複合体。
【請求項１３】請求項10記載のポリミキシンとデキスト
ランとの複合体の製造方法であって、ａ）ポリミキシンをデキストランに適当に結合させて全
身的な循環系で使用するための水溶性ポリミキシン−デ
キストラン複合体を形成する段階、ｂ）得られた複合体を低級アルコール中で沈澱させる段
階、ｃ）前記複合体を再懸濁させる段階、ならびにｄ）前記複合体が未結合のポリミキシンを実質的に含有
しなくなるまで段階ｂ）およびｃ）を反復する段階、を含んでなる方法。
【請求項１４】請求項１〜12のいずれか一つに記載の複
合体を、さらなる医薬的に許容される担体または希釈剤
とともに含んでなるエンドトキシンを中和するための医
薬組成物。