JPH06506258A - 改良された生物学的活性を有するポリオキシプロピレン／ポリオキシエチレン共重合体類 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 改良された生物学的活性を有するポリオキシプロピレン／ポリオキシエチレン共 重合体類 関連出願の相互参照 本出願は、１９９１年３月１９日に出願された米国特許出願第０７／６７３、２ ８９号の係属中の一部継続出願である。

技術分野 本発明は、改良された毒性および効能特性を有するポリオキシプロピレン／ポリ オキシエチレン共重合体の製造に関するものである。本発明は、約１，０５より 小さい多分散値を有するポリオキシプロピレン／ポリオキシエチレンブロック共 重合体も包含している。

発明の背景 ある種のポリオキシプロピレン／ポリオキシエチレン共重合体が人間または動物 に投与された時に有利な生物学的影響を有することは見いだされている。これら の有利な生物学的影響は以下にまとめられている。

レオロジー剤としてのポリオキシプロピレン／ポリオキシエチレン共重合体類 共重合体類を、単独でまたは限定されるものでないが他の化合物、フィブリン溶 解酵素、抗凝固剤、フリーラジカル捕捉剤、抗炎症剤、抗生物賀、膜安定剤およ び／または潅流媒体と組み合わせて、循環系疾病の処置に使用することができる 。これらの活性は米国特許第４．８０１．４５２号、４．８７３．０８３号、４ ，８７９，１０９号、４．８３７．０１４号、４、８９７．２６３号、５．０６ ４．６４３号、５．０２８．５９９号、５゜０４７．２３６号、５．０８９．２ ６０号、５．０１７．３７０号、５，０７８．９９５号、５．０３２．３９４号 、５，０４１，２８８号、５．０７１゜６４９号、５，０３９，５２０号、５． ０３０．４４８号、４．９９７．６４４号、４，９３７，０７０号、５．０８０ ．８９４号、および４．９３７．０７０号明細書中に記されており、それらの全 ては引用することにより本明細書の内容となる。

ポリオキシプロピレン／ポリオキシエチレン共重合体類は全く異例の治療活性を 有していることが示されている。表面活性共重合体類は人間および動物の血液お よび他の生理学的流体中での病理学的疎水性相互作用の処置用に有用である。こ れには、接着性の疎水性蛋白質または損傷膜の存在による傷により血液流に対す る抵抗が病理学的に増大されているような疾病および状態の処置用の表面活性共 重合体の使用が包含される。この接着性は病理学的疎水性相互作用により生じ、 そして特異的なリガンドとそれらの受容体との相互作用は必要としない。摩擦を 増加させそして血管の有効半径を減少させることにより、そのような蛋白質およ び／または損傷膜が毛細血管中の抵抗を増加させる。これらの蛋白質の最も重要 なものは可溶性フィブリンであると傷じられている。

病理学的疎水性相互作用により引き起こされる状態に罹っている動物または人間 に有効量の表面活性共重合体を投与することにより、病理学的疎水性相互作用を 処置することができる。表面活性共重合体は溶液状でそのまま投与することもで きまたはフィブリン溶解酵素、抗凝固剤、または酸素ラジカル捕捉剤を包含して いるがそれらに限定されるものではない他の試薬と共に投与することもできる。

前記の特許明細書中に記されている方法は、動物または人間に有効量の下記の一 般式： ＨＯ（ＣｚＨ４０）ｂ（ＣｓＨｓｏ）−（ＣｔＨ４０）ｂＨ［式中、ａは（Ｃｓ ＨｓＯ）により表されている疎水基が約９５０−４０００ダルトン、好適には約 １２００−３５００ダルトン、の間の分子量を有するような整数であり、モして ｂは（Ｃ，Ｈ４０）により表されている親水基が化合物の約５０％−９５％を構 成するような整数である］を有する表面活性共重合体を投与することを含んでい る。

好適な表面活性共重合体は、下記の一般式：％式％） ［式中、疎水基（Ｃｓ　Ｈａ　Ｏ）の分子量は約１７５０ダルトンであり、そし て化合物の合計分子量が約８４００ダルトンである］を有する共重合体である。

表面活性共重合体は、細胞および／または分子の間で病理学的疎水性相互作用が あるような状態において有効である。これらの相互作用は、１）正常値より高い フィブリノーゲンの濃度、２）血管内または局所的な可溶性フィブリン、特に高 分子量フィブリン、の発生、３）毛細血管内での摩擦増加、または４）血液成分 類に対する機械的もしくは化学的外傷により引き起こされると信じられている。

これらの状態の全てが例えば細胞および分子の如き血液成分類の病理学的疎水性 相互作用の増加をもたらす。

フィブリン、特に可溶性フィブリン、が細胞同士の接着を増加させ、小血管中の 摩擦を増加させ、そして特に低い剪断速度における血液の粘度を増加させるとい うことが信じられている。表面活性共重合体の作用は本質的には潤滑作用である と信じられており、その理由はそれらが接着により引き起こされる摩擦を減少さ せるからである。

下記の仮説に拘束されることは望まないが、表面活性共重合体が下記の機構に従 い作用すると信じられている：疎水性相互作用が生物学的構造の重大な決定因子 である。それらが燐脂質類を膜および蛋白質分子中にそれらの元来の構造で一緒 に保持している。該化合物の生物学的活性を認識するためには表面活性共重合体 の生物学の理解が必要である。水は強い水素結合性液体であり、それはそれの流 体状態で全方向で周辺分子との結合を生じる。水との不充分な結合を生じる表面 であると定義されている疎水性表面は表面張力または水分子の水素結合における 均衡の欠如を生じる。この力は非常に強力である。純水の表面張力は約８２ダイ ン／ｃｍである。これは、表面分子上での１平方インチ当たり数十万ボンドの力 に相当する。

疎水性表面を有する２個の分子または粒子が接近すると、それらは即座に接着す る。この接着は、水分子が応力を受けた非−水素結合性疎水性表面から応力を受 けていない塊液相へ移る時に生じる自由エネルギーの減少により引き起こされる 。そのような表面を一緒に保持するエネルギー、すなわち接着の仕事量、は粒子 の表面張力の直接的関数であるｌ：ＷＡＢ＝γＡ＋γＢ−γＡＢ ［式中、ＷＡＢ＝接着の仕事量すなわち粒子表面ＡＢの１平方センチメートルを ２個の分離粒子に分離するのに必要なエネルギーであり、γＡおよびγＢは粒子 Ａおよび粒子Ｂの表面張力であり、γＡＢはそれらの間の界面張力である］。

従って、相当な表面張力を出現させる循環中の粒子または分子は瞬間的に互いに 接着するであろう。膜および高分子内のそのような接着はそれらの一体性を保つ ために必要である。我々はそのような力を記載するために「正常な疎水性相互作 用」という語を使用する。正常な環境下では、循環中の全ての細胞および分子は 親水性の非−接着性表面を有している。細胞および分子の相互作用を調整する受 容体およびリガンドは一般的には細胞および分子のほとんど親水性である露呈表 面上に置かれており、そこではそれらは水性媒体中で自由に運動しそして互いに 相互作用している。脂質類および他の疎水性物質を循環中に移送するためには特 定担体分子が必要である。例えば血液の如き体液中では、可動性要素間の非特異 的接着力は非常に望ましくない。これらの力は「病理学的疎水性相互作用」と定 義されており、その理由はそれらは正常な可動性要素の運動を制限しそして細胞 および分子の不適切な接着を促進させるからである。

損傷組織中では、正常には細胞および分子の内部上に置かれている疎水性領域が 露呈され始めそしてそれの相互作用が損傷と組み合われるような病理学的接着表 面を生成する。血管萱に沿って沈着したフィブリンも接着表面を供している。そ のような接着表面は損傷組織の特性であるようである。表面活性共重合体が接着 性の疎水性表面と結合しそしてそれらを正常組織のものと非常に似ている非−接 着性の水和された表面に転換させる畦力が種々の疾病状態におけるそれの可蛯な 治療活性の基礎であると信じられている。

上記の表面張力による接着は生物学で一般的に研究されている接着とは異なって いる。一般的に研究されている接着は特異的な受容体リガンドの相互作用による ものである。特に、それはフィブリノーゲンの受容体−介在性接着とは異なって いる一フォン・ウィリブランズ（ｖｏｎ　Ｗｉｌｌｉｂｒａｎｄｓ）因子族の蛋 白質類− 表面活性共重合体の親水性および疎水性鎖の両者は生物学的活性に寄与する独特 な性質を有している。ポリオキシエチレン（ＰＯＥ）の親水性鎖は多くの表面活 性剤のものより長くそしてそれらは柔軟性である。

それらは水を、エーテル−結合された酸素との水素結合受容体相互作用により、 即座に結合させる。これらの長く強く水和された柔軟性鎖は相対的に圧縮不能で ありそして互いに接近してくる疎水性表面との障壁を形成する。分子の端部にお けるヒドロキシル部分は水素結合供与体として作用することができる唯一の基で ある。電荷を有する基はない。

結合能力のこの非常に限定された応用範囲により、分子が宿主メゾイエイタおよ び炎症機構を活性化できないことが説明される。しかしなが　゛ら、ＰＯＥ鎖は 必ずしも不活性ではない。ポリオキシエチレンは酸素基とのイオン−双極相互作 用によりカチオンを結合させることができる。

クラウンポリエーテル類および逆オクタブロック共重合体イオノホア類がそのよ うなカチオン結合の例である３゜柔軟性ＰＯＥ鎖が損傷膜または他の疎水性構造 近くのカルシウムおよび他のカチオン運動を結合および調節する構造を形成して いる。

表面活性共重合体の疎水性成分は大きく、弱くそして柔軟性である。

それにより膜または蛋白質分子と結合されるエネルギーは、膜燐脂質類を一緒に 保持するかまたは蛋白質の三次元構造を維持するエネルギーより小さい。従って 、膜脂質類および蛋白質類を溶解させる一般的洗剤とは異なり、表面活性共重合 体は膜上の損傷点に接着しそして傷の拡大を予防する。

表面活性共重合体が疎水性表面に対するフィブリノーゲンの接着並びにその後の 血小板および赤血球の接着を遮断するための表面活性共重合体の能力は試験管内 で容易に示される。多くの表面活性剤は疎水性粒子の相互接着を妨害するが、表 面活性共重合体は毒性を最少にしなから非−接着活性を最適にする独特な性質の 均衡を有している。従って、細胞を溶解させるかまたは膜蛋白質を溶解させるた めに非イオン性表面活性剤を使用しているような生化学者は表面活性共重合体を 日常的には使用していない。表面活性共重合体は細胞を溶解から保護している。

疎水基は損傷細胞および分子と効果的に競合して病理学的な疎水性相互作用を妨 害するが、構造的一体性を維持するはるかに強い正常な疎水性相互作用を破壊す ることはできない。

血液の粘度は一般的には一定圧力および幾何学的形状を有する管を介する流れの 主要な決定因子であるとみなされている。徊えば損傷組織の如き最少管の中で゛ は、他の要素が意味のあるものになる。管の直径が細胞のものより小さい時には 、管に入るためには血液細胞は変形されるはずでありそして次に管壁に沿４て滑 動して摩擦を生じるはずである。小さい管に入る血液細胞の変形は広範囲に研究 されているが４、接着または摩擦成分は研究されていない。管壁に対する細胞の 接着は一般的にはフォノ・ウィリブランズ因子および他の特異的接着性分子との 特異的な相互作用によるものであるＳ０我々のデータは、病理学的状態では細胞 および胃壁の間の非特異的な物理化学的接着から生じる摩擦が流の主要決定因子 になることを示唆している。　□数学的には、２個の粒子間の接着強度および他 方に沿う滑動に抵抗する摩擦力の両者がそれらの表面張力の直接的関数であり、 それらはそれらの疎水性相互作用によりほとんど決定される。小管を通って滑動 する細胞の摩擦は接着成分および変形成分６からなっており、それらは実際には 分離することが困難である： Ｆ＝Ｆａ＋Ｆｄ ［式中、Ｆは細胞の摩擦であり、Ｆａは接着成分であり、モしてＦｄは変形成分 である］。

管内の変形成分は管中への加入に必要なものとは異なっている。それは高い剪断 速度で流れている血液を有する比較的大きい管の中で生じるものと同様であるか もしれない７゜血管内の摩擦はほとんど研究されていないが、摩擦力が接着の仕 事量に直接的に相互関連しているような重合体系に適用されるのと同じ原則を含 んでいるかは疑問である８：Ｆａ＝ｋＷＡ＋ｃ ［式中、Ｆａは摩擦力の接着成分であり、ＷＡは接着の仕事量であり、そしてｋ およびＣは研究された特定系に関与する定数である］。多くの潤滑剤は薄膜状で 作用し、それは２個の表面を分離しそ５して接着を縁少させる− 毛細血管血液流上の表面活性共重合体の影響は、臨界的変数をしっかり調節でき る人工的試験管内系から人間疾病を模している生体内系までの範囲にわたる数種 のモデル中で評価された。第一に、表面活性共重合体は小さい管を通る大細胞の 運動を模するように設計されているモデル中で治療濃度で使用される時には有効 な潤滑剤であり得る。それは摩擦の接着成分を顕著に減少させるが、摩擦の変形 成分に対する検出可能な影響は有していなかった。第二に、表面活性共重合体は ガラスおよび空気のトロンボゲン表面により形成される狭い溝の中の流動を非常 に促進させる。１滴の血液をカバースリップ上に置きそして運動顕微鏡の付いた 顕微鏡下で血液が静かな圧力に応じてカバースリップの端部に流れるのに要した 時間にわたり観察した″。表面活性共重合体はガラスに対する血小板の接着を抑 制しそして赤血球が顕微鏡溝を通って流れることができるような赤血球の柔軟性 を維持していた。表面活性共重合体は赤血球による渦の生成を抑制しないが、そ れは渦を比較的柔軟性にしそして比較的容易に破壊した。第三に、表面活性共重 合体は曲がりくねった毛管寸法のフィブリンで張られた溝の中の血液流を２０倍 以上増加させる。

それは血液の粘度をはるかに少ない量（１０％）だけ減少させて増加させた流の 責任をとっている。

比較的大きい生理学的モデルでは、表面活性共重合体は人間赤血球が潅流されて いる単離されたネズミの心臓中で虚血性損傷後の３０％へマドクリットにおいて 冠状血液流を同様な量だけ増加させた。

兎の中央脳動脈の結紮により生じる発作の生体内モデルでは、表面活性共重合体 が虚血脳組織への血液流を増加させる。水素洗浄技術により２倍程度多い増加が 測定された。これらのモデルのそれぞれにおいて、血液希釈に関する調節があり そして測定された剪断速度における粘度に対する測定可能な影響はなかった。

入手可能なデータは表面活性共重合体が潤滑剤として作用して損傷組織中の血液 流を増加させることを示唆していると信じられている。それは疎水性表面の相互 同士の接着を遮蔽し、そしてそれにより摩擦を減少させそして流動を増加させる 。この仮説は、表面活性共重合体が該摩擦力が小さい正常組織中では血液流に対 する影響をほとんど有していないという観察により強化されている。

表面活性共重合体は身体により代謝されず、そして血液から急速に排除される。

血液中の共重合体の半減期は約２時間であると信じられている。改良されたフィ ブリン溶解性組成物中の表面活性共重合体は組成物中のいずれの他の成分とも共 有結合されておらずまたはいずれの蛋白質とも共有結合されていないということ は理解されよう。

血液膚分類の病理学的疎水性相互作用により引き起こされるかまたはそれを引き 起こすようなある種の循環状態の処置のために、表面活性共重合体をフリーラジ カル捕捉剤であるフィブリン溶解性酵素と共に投与することができ、またはそれ を単独で投与することもできる。これらの状態には下記のものが包含されるが、 それらに限定されるものではない。

心筋梗塞、発作、腸または他の組織梗塞、悪性種、成人呼吸困難症候群（ＡＲＤ Ｓ）　、散在性管内凝固（ＤＩＣ）、糖尿病、不安定性狭心症、溶血性尿毒症症 候群、赤血球断片化症候群、熱発作、維持されている胎児、子廃、悪性高血圧、 火傷、挫傷、骨折、外傷性ショック、主要手術、敗血症、凝固系、中枢神経系外 傷の活性化を促進させるバクテリア性、寄生体性、ウィルス性およびリケッチア 性感染症、並びに主要手術中および直後。これらの状態で起きる血液中の病理学 的疎水性相互作用の処置は微細管および一般的に観察される他の合併症を相当減 少させるということが信じられている。

表面活性共重合体は、傷つけられた血液供給のある非損傷組織に対する側副循環 における増加においても有効である。そのような組繊はしばしば管閉塞領域と隣 接している。この機構が小血管中の病理学的疎水性相互作用を減少させるようで ある。表面活性共重合体が有効である循環状態には下記のものが包含されるが、 それらに限定されるものではない。

脳血栓症、脳塞栓症、心筋梗塞、不安定性狭心症、一時的脳虚血発作、足の間欠 的波付、プラスチックおよび再構成手術、バルーン血管形成術、末楕血管手術、 および整形手術、特に止血器を使用するもの。

表面活性共重合体は２．３秒−１（低い）から９０秒−１（高い）の範囲にわた る剪断速度における正常血液の粘度にはほとんど影響を与えない。

しかしながら、それは手術後患者におけるまたはある種の病理学的状態の患者で 見られる異常な高粘度を顕著に減少させる。この観察は２つの疑問ヲ呈する＝１ ）これらの患者における上昇された全血粘度を引き起こすもの、および２）健康 人間の血液粘度に対して少量の影響を有している表面活性共重合体が行ういずれ の機構により粘度における病理学上昇が正常化されているのか？ ヘマトクリットおよび血漿フィブリノーゲン水準が全血粘度の主要な決定因子で あることは一般的に認められている。これは正常人間においておよび炎症状態の 多くの患者において確認されている。しかしながら、これらの因子は観察された 変化を説明できなかった。冠状動脈心臓ノくイパス手術を受けている患者では、 ヘマトクリットは平均して２３±４％はど低下しそしてフィブリノーゲンは手術 後６時間内に４８±９％はど低下することが見いだされた。粘度は予期したほど 減少しないが、２３±２から３８±４センチポイズの中間値に増加した（２．３ 秒−寡の剪断速度）。ある患者では１００を越える粘度が見られた。異常に高い 血液粘度は可溶性フィブリンの循環している高分子量重合体に関連していた１１ ゜可溶性フィブリン水準は手術中に１９±５μｇ／ｍｌから４３±６μｇ／ｍｌ に上昇した。これらの研究は可溶性フィブリンに関する熱量計酵素評価Ｉ！およ び大きい蛋白質重合体の分子量を測定するためのＳＤＳア特異的受容体の不存在 下では、循環中の細胞および分子は接着性がそれらの間の自由エネルギーまたは 表面張力を減少しない限り互いに接着するであろう。血液の種々の成分類の表面 張力の評価は接触角度を測定することにより行うことができる。

赤血球、リンパ球、血小板、好中球は全て１４−１７度の範囲の接触角度を有し ている。例えばアルブミン、α、マクログロブリンおよび２、−ゲマン因子の如 き周囲血液蛋白質類は１２−１５のわずかに低い範囲の接触角度を有している。

これは、これらの蛋白質類が細胞に対する接着エネルギーを有していないことを 意味している。対照的に、フィブリノーゲンは２４度の接触角度を有しておりそ して可溶性フィブリンは３１である。従って、フィブリノーゲンは循環促進渦形 成において赤血球および他の細胞に弱く接着する。フィブリンはフィブリノーゲ ンよりはるかに非常に強力な接着を促進させ、その理由はそれの増大した接触角 度およびそれがフィブリノーゲンとの重合体を形成する傾向のためである。循環 中の可溶性フィブリンが接着性増加をもたらし、それが低い剪断速度における非 常に顕著に増加された粘度を生じる。この接着には血管の内皮萱も含まれる。接 着力が細胞運動を遅くさせるの不充分であるなら、それらは摩擦増加をもたらす 。これはそれの直径が循環細胞のもの以下であるような非常に小さい血管および 毛管中で特に重要である。

これらの小管中を滑動する細胞の摩擦は意義がある。表面活性共重合体は細胞お よび内皮細胞の疎水性表面に対するフィブリノーゲンおよびフィブリンの接着を 遮断する。これはそれらの接着を妨害しそしてそれらを潤滑化させて流動に対す る非常に減じられた抵抗性をもたらす。これは粘度の測定により部分的にのみ測 定することができる。

ある種のフィブリノーゲン水準が循環における問題を生じるのに充分かどうかは 個々の患者の数種の要素に依存している。高いヘマクリットおよび高水準のフィ ブリノーゲンは粘度増加に対する主要原因であると広くみなされている。しかし ながら、増加されたフィブリノーゲン水準は循環中の増加した可溶性フィブリン としばしば関連している。注意深い研究は、フィブリンがほとんどの重要な変化 にしばしば起因していることを示している。フィブリノーゲンの正常水準は２０ ０−４００μｇ／ｍｌである。はとんどの患者で約８００μｇ／ｍｌより大きい フィブリノーゲン水準が上記の低い剪断速度において高い血液粘度を引き起こす ということが測定されている。可溶性フィブリンの正常水準は約９゜２±１．９ であると報告されている＋４゜ライマン（Ｗｉｍａｎ）およびランビー（Ｒａｎ ｂｙ）評価を使用すると、低い剪断速度における粘度は約１５μｇ／ｍ１以上と いう許容できないほどの高さであつた。可溶性フィブリンは約６００，０００− 数百刃の分子量を有する分子種であることを理解すべきである。

可溶性フィブリンを示すためには多くの方法が使用されている。これらには寒冷 沈澱反応、特にクリオフィブリノーゲン、が包される。沈澱生成を増加させるた めにヘパリンが使用されてきている。エタノールおよびプロタミンも血漿からフ ィブリンを沈澱させる。近代的技術は、循環中の可溶性フィブリンは一般的に溶 解剤と錯体生成することを示している。これらはしばしばフィブリノーゲンまた はフィブリン減成生成物である。ペプチドＡ部分のフィブリンだけが分裂されて いるデスＡＡフィブリンは、１個のフィブリン分子と２個のフィブリノーゲンか らなる相対的に小さい塊を形成する傾向がある。ＡおよびＢペプチド類の両者が 分裂してデスＡＡＢＢフィブリンを製造するなら、はるかに大きい塊が循環中で 製造される。フィブリン減成生成物はフィブリンと重合して含まれている特定生 成物により変動する寸法の塊を生成することができる。

循環中の可溶性フィブリンは、特に低い剪断速度における、血液粘度を顕著に増 加させることができる。しかしながら、臨床的状態に関するこれの関連性は明白 でないままである。粘度は、生体内循環を測定する多くの要素の中の１つである 赤血球の塊を主として評価するものである。

可溶性フィブリンにより影響を受ける他の因子は内皮細胞、白血球および血小板 である。可溶性フィブリンは内皮細胞に関して化学走性であり、それらに即座に 接着しそしてそれらの非有機化を引き起こす。それはまた白血球、特に食細胞、 に関しても刺激効果を有している。可溶性フィブリンの効果の一部は種々の型の 細胞上の特異的受容体により介在されているかもしれない。しかしながら、可溶 性フィブリンの接触角度により測定される自由エネルギーが他の血漿蛋白質のも のより小さいため、それは血液中の事実上全ての製造された因子との非特異的な 疎水性相互作用により即座に接着する。

細胞およびフィブリン溶解機構により清浄化されている。しかしながら、可溶性 フィブリンの製造が多すぎる場合、または清浄機構が傷つけられている場合、ま たは合併症因子が存在している場合には、可溶性フィブリンが悪い反応を誘発す ることもあり得る。

可溶性フィブリンは損傷または炎症組織中で製造される。従って、それの影響は これらの組織中で最も顕著であり、そこではそれが内皮細胞および循環している 血液細胞を潅流を顕著に減少させるような方法でコーティングしている。最大影 響は小血管の中であり、そこでは内皮細胞および白血球をコーティングしている 可溶性フィブリンが摩擦を非常に増加させて白血球細胞を小管中に動かす。摩擦 は白血球および赤血球に伴うさらにはるかに重大な問題であるようであり、その 理由はそれらが比較的大きく且つはるかに比較的に堅いからである。

可溶性フィブリンの製造が充分である場合には、影響は他の領域中では見られな い。研究されている最良のものは成人呼吸困難症候群であり、そこでは損傷組織 の領域中で製造される可溶性フィブリンが微小血栓および肺不全を引き起こす可 能性がある肺の中での他の工程を生じる。しかしながら、比較的少ない管傷度が 他の多くの器官中で示されることがあり得る。

単独でまたはフィブリノーゲンおよび他の物質との複合体中での可溶性フィブリ ンは、冠状血栓症から外傷、火傷、移植後の再潅流傷または凝固の活性化が局部 化されているかもしくは全身化されているような他の状態までの範囲にわたる種 々の管疾病範囲の病因論に対する主要原因剤であると現在では認識されている。

最近の研究は、急性心筋梗塞形成または不安定性狭心症のある事実止金ての患者 はそれらの循環中に顕著に高められた水準の可溶性フィブリンを有することを示 していた。

可溶性フィブリンの影響の一例は犬を使用する研究で示された。正常な犬を子宮 摘出する。次に動物を麻酔したままで、外頚静脈を注意深く切除する。一方、７ 分間にわたる指を用いる静かな圧力により静脈を閉塞することもできる。それ゛ を走査電子顕微鏡によりフィブリン、赤血球および他の製造された要素の接着に 関して試験する。

７分間にわたる閉塞により生じる状態があってもまたはそう′でなくても、非常 にわずかな細胞が子宮摘出を受けなかった犬からの静脈の内皮に接着しているこ とが見いだされている。同様に、子宮摘出を受けなかった動物中では頚静脈の内 皮に対する赤血球の接着には小さい増加だけがあった。しかしながら、動物が静 脈の穏やかな７分間にわたる閉塞の他に子宮摘出を受けている場合には、明白な 壁血栓を製造するようなある場合には内皮表面に対する血液の製造された要素の 接着における激しい増加があった。赤血球およびフィブリンの両者は内皮表面に 可視的に接着性であった。さらに、正常な内皮構築の破壊もあった。動物の全て が手術後に高められた水準の可溶性フィブリンを有していた。このモデルは、遠 隔部位における深い静脈血栓症の非常に増加された危険性を生じる相対的に局部 化された手術により製造される可溶性フィブリンの影響を示している。

表面活性共重合体は、フィブリン、フィブリノーゲン、血小板、赤血球および血 液流の他の検出可能要素の接着を抑制することにより血液中にフィブリンおよび フィブリノーゲンの問題を課す。それは表面上の血栓の生成を遮断する。表面活 性共重合体は水または血漿の粘度に影響を有していない。しかしながら、それは 管中で小区分中の水および血漿の流速を顕著に増加させる。カラムの端部におけ る空気界面またはかなりの表面張力を与える空気泡の存在が管壁に沿って摩擦を 生じさせる。表面活性共重合体はこの表面張力および摩擦を減少させ、そして流 動を改良する。これは−例であり、それにより表面活性共重合体は一般的に測定 された時の流体の粘度に影響を有していないにもかかわらず組織を通り管を通る 流体の流動を改良する。

表面活性共重合体は正常人間からの全血粘度には小さい影響だけを有している。

それは高いヘマトクリットで起きる増加ににはほとんど影響を有していなかった 。しかしながら、それは可溶性フィブリンおよびフィブリノーゲン重合体により 引き起こされると考えられる低い剪断速度における粘度の非常に大きい増加に対 しては影響を有している。

最近の研究は、表面活性共重合体は心筋およびも種々の有害傷害から他の細胞を 保護する能力も有していることを示している。長期にわたる虚血中に、心筋細胞 は「非可逆的損傷」を受ける。非可逆的損傷を維持する細胞は形態学的に無傷で あるが、正常環境に戻った時に生存することができない。酸素化された血液の再 潅流の数分以内に、゛そのような潜伏出血病変を含有している細胞が膨潤および 収縮帯を出現させそして壊死する。

非可逆的に損傷された心筋細胞は機械的および浸透性の脆さ並びにリパーゼ類、 プロテアーゼ類および他の酵素類の潜伏性活性化を有している。再潅流はカルシ ウム充填、細胞膨潤、機械的な膜破壊および細胞を急速に破壊させる酸素フリー ラジカルの生成を含む一連の事象を刺激する。単離された潅流されたネズミの心 臓モデルにおいては、表面活性共重合体はそのような損傷を遅延させる。この機 構は多分赤血球に関して知られているのと同様な方式で浸透性安定イヒおよび増 加された機械的抵抗を含んでいるのであろう。

心筋に対する表面活性共重合体の保護影響は心筋細胞に限定されるものではない 。それは形態学的に評価されると微細管の内皮細胞も保護する。そのような細胞 の一体性を維持しモして非−接着性表面を保有および維持するのを助けることに より、表面活性共重合体は微細管中での高分子および細胞の接着を減少させて冠 状管抵抗を減少させそして非再流動現象の出現を遅延させる。

表面活性共重合体を使用できる状態の例は、鎌状細胞疾病の処置および移植用の 器官の保存におけるものである。これらの両者の態様では、血液流は病理学的疎 水性相互作用のために減じられている。

鎌状細胞発症中に、鎌状赤血球は細胞の異常形のために凝集する。多くの場合、 散在性管内凝固による可溶性フィブリンの高濃度が存在している。これは血液細 胞、血管を内張すしている細胞並びに可溶性フィブリンおよびフィブリノーゲン の間の病理学的疎水性相互作用をもたらす。

患者に表面活性共重合体を投与することにより、血液流は増大されそして組織損 傷はそれにより減じられる。表面活性共重合体を鎌状細胞発症の前に与えて発症 の開始を予防することができる。さらに、有効量の表面活性共重合体を有する溶 液が有効量の抗凝固剤を含有することもできる。

移植用に供与者から除去された器官の中では、組織は虚血および血液の欠如によ り損傷されている。好適には、表面活性共重合体を潅流媒体と混合する。表面活 性共重合体と共に使用できる潅流媒体は当技術の専門家には既知である。潅流媒 体は全血または血漿であることもできる。

溶液は器官中に潅流させることができ、それにより組織に対する損傷を減少させ る。器官に表面活性共重合体溶液を潅流させることにより組織損傷が減じられる ため、器官が成育可能な時間、従って器官を移植できる時間が増大する。

表面活性共重合体は正常組織中の血液流に対する最少の影響を有していながら疾 病または損傷組織を通る血液流を改良するため、動物または人間に有効量の薬品 および有効量の表面活性共重合体を含有している溶液を投与する段階を含んでい る表面活性共重合体が薬品を損傷組織に分配させる方法を包括していることも意 図されている。

疾病または損傷組織中での活性を有する薬品は表面活性共重合体と共に使用する ために適している。これらの薬品には、１、抗微生物性薬品類 抗生物賀類 抗菌・カビ性薬品類 抗ウイルス性薬品類 抗炎症性薬品類 ２、抗菌・カビ性薬品類 ３、癌およびある種の感染症を処置するための化学療法薬品類４、フリーラジカ ルの生成を防止する薬品を含むフリーラジカル捕捉剤薬品類 ５、フィブリン溶解性薬品類 ６、潅流媒体 ７、ステロイドおよび非ステロイド系の抗炎症性薬品類の両者を含むがそれらに 限定されるものではない抗−炎症剤８、膜安定剤、例えばシランチン ９、抗凝固剤 １０、イオノトロピー薬品類、例えばカルシウムチャンネル遮蔽剤１１、自律神 経系調節剤 が包含される。

佐薬としてのポリオキシプロピレン／ポリオキシエチレン共重合体類びに抗原お よび改良された佐薬からなるワクチンとしても有用である。

−態様では、抗原が有効量の下記の一般式：％式％） ［式中、疎水基（ＣｓＨｓＯ）の分子量は約４５００−５５００ダルトンの間で ありそして親水基（Ｃ，Ｈ４０）の百分率は約５％−１５重量％の間である］ を有する表面活性共重合体と混合されている。

改良されたワクチンは抗原および佐薬を含んでおり、そこでは佐薬は水の油中乳 化液状に調合されている下記の一般式：％式％） ［式中、疎水基（Ｃ３Ｈ，Ｏ）の分子量は約３０００−５５００ダルトンノ間で ありそして親水基（Ｃ！　Ｈ４０）の百分率は約５％−１５重量％の間である］ を有する表面活性共重合体を含んでいる。共重合体は一般的に使用されている水 の油中ワクチン乳化液を不安定化させるが、一般的乳化剤が省かれているならそ れらの効率を驚異的に増加させそして安定性を増加させる。

改良されたワクチンは抗原および佐薬を含んでおり、そこでは佐薬は下記の一般 式： ％式％） ［式中、疎水基（Ｃ，Ｈ，Ｏ）の分子量は約３０００−５５００ダルトンの間で ありモして親水基（ＣｚＨ４０）の百分率は約５％−１５重量％の間である〕 を有する表面活性共重合体およびリポ多糖ＩＩ（ＬＰＳ）誘導体を含んでいる。

ＬＰＳおよび表面活性共重合体の組み合わせを含んでいる佐薬はピーク滴定量、 ピーク滴定量に達する時間および応答時間の長さに関する相乗効果を生じる。さ らに、該組み合わせは保護ＩｇＧ２同形像を増加させる傾向がある。

佐薬は下記の一般式： （Ｃ１Ｈ，Ｏ）からなるオクタブロック共重合体の疎水性部分の分子量は約５０ ００−７０００ダルトンの間であり、ａは（Ｃ！Ｈ，Ｏ）により表されている親 水性部分が化合物の合計分子量の約１０％−４０％の間を構成するような数であ り、ｂは（ＣｓＨｇＯ）により表されている親水性部分が化合物の合計分子量の 約６０％−９０％の間を構成するような数である］を有するオクタブロック共重 合体（ボロキサミン）も含んでいる。

共重合体の（Ｃｓ　Ｈｓ　Ｏ）部分は化合物の９５％までを構成することができ る。共重合体の（Ｃ，Ｈ，Ｏ）部分は化合物の５％程度の低さを構成することが できる。

脂質がコンジュゲートした多糖類と共重合体および例えばモノホスホリル脂質の 如き免疫調節剤との組み合わせは、■ｇＧの副群の全てが存在しているような強 力なＩｇＧ応答の製造を含んでいる。特に、肺炎球菌感染症に対して保護性であ るＩ　ｇＧ２およびＩｇＧ３副群が優れている。これは予期せぬ発見であり、そ の理由はイムノゲン調合物中には蛋白質またはペプチドがないからである。ペプ チド分子はこれらの同形像の製造用に必要なＴ細胞を刺激するために必須である と信じられている。

他の者は多糖類がＴ細胞を刺激できないことを報告している。それにもかかわら ず、共重合体、脂質共役多糖類および免疫調節剤の組み合わせはそのような応答 を生じることができる。ポロキサマー類およびボロキサミソ類の佐薬活性は現在 出願係属中の米国特許出願第０７１５４４゜８３１号明細書中に詳細に記されて おり、それは引用することにより本明細書の内容となる。

抗感染症剤としてのポリオキシプロピレン／ポリオキシエチレン共重合体類 他の群のポリオキシプロピレン／ポリオキシエチレン共重合体はバクテリアおよ びウィルスの成長を抑制する。例えば、これらの表面活性共重合体はＨＩＶウィ ルスであるミコバクテリア種およびトキソプラズマ・ゴンディイを抑制すること が知られている。

表面活性共重合体はＨＩＶウィルスまたは関連菌株により引き起こされる感染症 を含む人間または動物におけるウィルス感染症の処置において有効である。本発 明は、ＨＩＶウィルスまたは同様なウィルスが感染している患者に投与できる組 成物を提供するものである。表面活性共重合体は細胞中のＨＩＶウィルスおよび 関連ウィルス菌株の複製を抑制または阻止する際に有効である。

表面活性共重合体は、単独でまたは一般的な抗生物質と共に使用された時に、微 生物により引き起こされる感染症の処置用に有用である。表面活性共重合体と共 に使用することができる数種の一般的な抗生物質には下記のものが包含されるが それらに限定されるものではない：リファンビン、イソニアシト、エタンブトー ル、ゲンタマイシン、テトラサイタリノ、およびエリスロマイシン。

表面活性共重合体は下記の一般式： ％式％） ［式中、ａは（Ｃ，Ｈ＠Ｏ）により表されている疎水基が約１２００−５３００ ダルトンの、好適には約１７５０−４５００ダルトンの、分子量を有するような 整数であり、そしてｂは（ＣｔＨ，Ｏ）により表されている親水性部分が化合物 の約１０％−５０％の間を構成するような整数である］を有している。

ポロキサマー類の抗感染症活性は現在出願係属中の米国特許出願第０７／７６０ ．８０８号明細書中に詳細に記されており、それはここでは参考として記してお く。

成長刺激剤および免疫刺激剤としてのポリオキシプロピレン／ポリオキシエチレ ン共重合体類 ある種のポリオキシプロピレン／ポリエチレン共重合体類は数種の異なる方法で 生物学的系に影響を与えることができる。生物学的に活性な共重合体類は有機体 の成長を刺激し、有機体の運動活性を刺激し、動物の胸腺、周囲リンパ組織およ び骨髄細胞中のＴ−細胞の産生を刺激し、そして肺の免疫応答性を刺激すること ができる。

生物学的に活性な共重合体類は個別細胞に対する広範囲の影響も有している。こ れらの化合物類はイオン泳動活性を有しており、すなわちそれらはある種のイオ ンを細胞膜を越えて移動させる。該化合物類はその後のヒスタミン放出を伴いな から非−細胞溶解性乳房細胞の非粒状化をもたらすことができる。さらに、この 種の生物学的に活性な共重合体類の一部はある種の癌細胞系を特異的に死滅させ ることができる。

ある種の生物学的に活性な共重合体を経口的に動物に投与して例えば鶏および白 鳥の如き食用動物の成長を刺激することができる。これらのおよび池の生物学的 活性は現在出願係属中の米国特許出願第０７／１０７．３５８号および同０７／ ６１０，４１７号明細書中に詳細に記されており、それは引用することにより本 明細書の内容となる。

ポリオキシプロピレン／ポリオキシエチレン共重合体構造表面活性共重合体ブロ ックは、高温および高圧における塩基性触媒の存在下での酸化エチレンおよび酸 化プロピレンの縮合により、製造される。しかしながら、重合体鎖を各共重合体 中で形成するために組み合わされる単量体の数において統計学的変動がある。示 されている分子量は各調合物中の共重合体分子の平均重量の概略値である。これ らの化合物類の製造のさらに詳細な議論は米国特許第２．６７４．６１９号明細 書中に見られ、それは引用することにより本明細書の内容となる。ボロキサマー 類およびボロキサミノブロック共重合体類の構造のさらに一般的な論議はシュモ ル力（Ｓｃｈｍｏｌｋａ）、　１　、　Ｒ，、「ブロック重合体表面活性剤の評 論（＾Ｒｅｖｉｅ＋＋　ｏｆ　Ｂｌｏｃｋ　Ｐｏｌｙｍｅｒ　５ｕｒｆａｃｔａ ｎｔｓ）Ｊ　、Ｊ、ＡＭ、　ＯＩＬ　ＣＨＥＭＩＳＴＳ’　ＳＯＣ，，５４：１ １０−１１６　（１９７７）中に見られ、それは引用することにより本明細書の 内容となる。

ポリオキシプロピレン／ポリオキシエチレン共重合体類の商業的に入手可能な調 合物は成分分子の寸法および構造に関しては広く変動することが測定されている 。例えば、ＢＡＳＦ　（パルジッパニー、ニューシャーシー州）から購買される ポロキサマー１８８の調合物は約１７５０ダルトンの疎水基（Ｃｓ　Ｈａ　Ｏ） の分子量および約８４００ダルトンの化合物の合計分子量の公表されている構造 を有している。実際には、該化合物は３，０００ダルトン以下から２０．０００ ダルトン以上までの範囲にわたる分子からなっている。商業的ポロキサマー１８ ８の分子多様性および分子分布はゲル透過クロマトグラフィーを用いて検出され る広い主および副ピークにより説明されている。

最近入手可能なポロキサマー調合物中の重合体寸法の広い変動の他に、さらにこ れらの画分が相当量の不飽和を含有していることも測定されている。重合体分子 中のこの不飽和が少なくとも部分的には入手可能なポロキサマー調合物の毒性お よび可変性の生物学的活性の原因となっている。

従って、商業的に入手可能なポリオキシプロピレン／ポリオキシエチレン共重合 体類中に存在している広範囲の分子が生物学的活性の予測を困難にしている。さ らに、ポロキサマー１８８調合物中で示されている如（、調合物中の他の分子の 存在が望ましくない生物学的活性をもたらすことがある。

表面活性共重合体ポロキサマー１８８はペルフルオロカーボン類を含有している 人工血液調合物用の乳化剤として使用されている。人工血液調合物を受容してい る患者は毒性反応を示すことが報告されている。毒性反応は、補充剤＋５、食細 胞泳動の麻痺＋６、並びに組織培養中の人間および動物細胞に対する細胞毒性１ ７の活性化を含んでいる。共重合体類の毒性を減少させるための超臨界的流体分 別を使用する研究は部分的にだけの成功が証されている工δ。さらに、ビーグル 大中での毒性学的研究では、ポロキサマー１８８の潅流が高められた肝臓酵素（ ＳＧＯＴ）および器官重量の増加（腎臓）をもたらすことが示された。腎臓の病 歴評価は、基部管状内皮細胞の投与量関連性細胞質空胞形成を示していた。

ポロキサマー共重合体中の鎖長さにおいて小変化だけが行われる時に生物学的活 性を生じることができる非常に大きな変化はハンター（Ｈｕｎｔｅｒ）他の中に 示されている＋９゜著者は、ポロキサマー重合体のポリオキシエチレン部分の鎖 長さにおける１０％の差が優秀な佐薬と佐薬活性が全くないものとの間の差を意 味することができると示している。ポロキサマー１２１は約４４００ダルトンの 分子量を有しておりそして約１０重量％のポリオキシエチレンを含有している。

ポロキサマー１２２は約５５００ダルトンの分子量を有しておりそして約２０重 量％のポリオキシエチレンを含有している。各分子中のポリオキシプロピレンの 量は大体同じである。ハンター他の中に示されている如く、ポロキサマー１２１ を佐薬として牛血清アルブミンと共に使用した時には抗体滴定量は６７゜８１４ ±５９１６であった。ポロキサマー１２２を同一条件下で佐薬として牛血清アル ブミンと共に使用した時にはＢＳＡに対する抗体滴定量は１８４±４５であった 。佐薬なしの対照滴定量はく１００であった。

従って、ポロキサマーの鎖長さにおける相対的に小さい変化が生物学的活性にお ける非常に大きい変化をもたらすことができる。

ポリオキシプロピレン／ポリオキシエチレン共重合体類の商業的に入手可能な源 が毒性並びに生物学的活性における変化を示すことが報告されているため、必要 とされることは商業的調合物の治療活性を保有しているが例えば毒性の如き他の 生物学的活性を含んでいないようなポリオキシプロピレン／ポリオキシエチレン 共重合体類の調合物である。さらに、必要とされることは分子量における比較的 小さい多分散性でありそして比較的少ない不飽和を含有しており従って比較的有 効性が大きいポリオキシプロピレン／ポリオキシエチレン共重合体類の調合物で ある。

発明の概要 本発明は、商業的調合物の治療活性を保有しているが先行技術調合物に固有であ る望ましくない影響を有していないポリオキシプロピレン／ポリオキシエチレン 共重合体類の新規な調合物を含んでいる。本発明を構成しているポリオキシプロ ピレン／ポリオキシエチレン共重合体類は先行技術のポリオキシプロピレン／ポ リオキシエチレン共重合体類より少ない分子の多分散集団であるため、共重合体 類の生物学的活性はさらに良好に規定されそしてさらに予期可能である。さらに 、本発明を構成しているポリオキシプロピレン／ポリオキシエチレン共重合体類 は実質的に不飽和を含んでいない。

本発明は、一般式： ％式％） ［式中、疎水基（Ｃ，Ｈ，Ｏ）の分子量は約１７５０ダルトンでありそして化合 物の合計分子量は約８４００ダルトンである］を有するポリオキシプロピレン／ ポリオキシエチレン共重合体も含んでいる。

商業的に入手可能な表面活性共重合体ポロキサマー１８８により示される毒性が 主として製造方法の結果として存在している少量の高および低分子量分子による ものであることが測定されている。高分子量分子（１５，０００ダルトンより大 きい）は多分補体系の活性化の原因であろう。

低分子量分子（５，０００ダルトンより小さい）は培養中で細胞に対して毒性で あり得る洗剤様の物理的性質を有している。さらに、低分子量分子は集団中に存 在している不飽和重合体を有している。

ポロキサマー１８８の最適なレオロジー分子は約８，４００−９４００ダルトン である。１５，０００以上であり且つ５，０００以下であるポロキサマー１８８ 分子はそれより有効性が小さいレオロジー剤でありそして望ましくない副作用を 示す。５．０００−１５，０００ダルトンの間の分子を含有している調合物はさ らに有効なレオロジー剤である。

本発明はまた、１．０５より小さい多分散値を有するポリオキシプロピレン／ポ リオキシエチレンブロック共重合体類を製造する方法も含んでいる。非−毒性の 表面活性共重合体の製造方法は、最初に酸化プロピレンを複数の反応性水素原子 を含有している塩基化合物と縮合させてポリオキシプロピレン重合体を製造し、 そして次に酸化エチレンをポリオキシプロピレン重合体と縮合させて下記の一般 式：％式％） を有するポリオキシプロピレン／ポリオキシエチレンブロック共重合体を製造す ることを含んでおり、改良は酸化エチレンとポリオキシプロピレン重合体との縮 合段階の前のポリオキシプロピレン重合体の精製である。ポリオキシプロピレン 重合体の精製はゲル透過クロマトグラフィーにより行うことができる。

従って、本発明の一目的は毒性影響に寄与する分子を排除しながら比較的高い割 合の治療的に活性な分子を有している表面活性共重合体を提供することである。

本発明の別の目的は分子重量範囲に関して比較的均質なポリオキシプロピレン／ ポリオキシエチレン共重合体を提供することである。

本発明の別の目的は約１．０５より小さい多分散値を有するポリオキシエチレン ／ポリオキシプロピレンブロック共重合体の製造を提供することである。

本発明の別の目的は実質的に不飽和を有していないポリオキシエチレン／ポリオ キシプロピレンブロック共重合体を提供することである。

本発明の別の目的は補体を活性化させないであろうポロキサマー１８８の治療活 性を有する表面活性共重合体を提供することである。

本発明のさらに別の目的は虚血により損傷されている組織の処置において人間お よび動物の両者で安全に使用することができる精製されたポロキサマー１８８を 提供することである。

本発明のさらに別の目的は再潅流傷により損傷されている組織の処置において人 間および動物の両者で安全に使用することができる表面活性共重合体を提供する ことである。

本発明のさらに別の目的はワクチン佐薬として人間および動物の両者で安全に使 用することができる表面活性共重合体を提供することである。

本発明の別の目的は細胞毒性でないポロキサマー１８８の治療活性を有する表面 活性共重合体を提供することである。

本発明のさらに別の目的は発作の処置において人間および動物の両者で安全に使 用することができる表面活性共重合体を提供することである。

本発明のさらに別の目的は比較的小さい腎臓毒性および比較的小さい洗剤様の活 性を有する表面活性共重合体を提供することである。

本発明のさらに別の目的は抗微生物剤として人間および動物の両者で安全に使用 することができる表面活性共重合体を提供することである。

本発明のさらに別の目的は抗バクテリア剤、抗ウィルス剤、抗菌・殺カビ剤、お よび抗原生動物剤として人間および動物の両者で安全に使用することができる表 面活性共重合体を提供することである。

本発明のさらに別の目的は心筋損傷の処置において人間および動物の両者で安全 に使用することができる表面活性共重合体を提供することである。

本発明のさらに別の目的は成人呼吸困難症候群の処置において人間および動物の 両者で安全に使用することができる表面活性共重合体を提供することである。

本発明のこれらのおよび他の目的、特徴および利点は開示されている態様および 添付されている請求の範囲の下記の詳細な記載を検討した後に明白になるであろ う。

図面の簡単な記載 図１はポロキサマー化合物類を命名するためのポロキサマーグリッドである。

図２はゲル透過クロマトグラフィーにかけられた商業的に入手可能なポロキサマ ー１８８のクロマトグラムである。

図３は実施例■に記されているクロマトグラフィー実施から集められたポロキサ マー１８８の画分１のクロマトグラムである。

図４は実施例Ｉに記されているクロマトグラフィー実施から集められたポロキサ マー１８８の画分２のクロマトグラムである。

図５は実施例Ｉに記されているクロマトグラフィー実施から集められたポロキサ マー１８８の画分３のクロマトグラムである。

図６は実施例■に記されているクロマトグラフィー実施から集められたポロキサ マー１８８の画分４のクロマトグラムである。

図７は実施例Ｉに記されているクロマトグラフィー実施から集められたポロキサ マー１８８の画分５のクロマトグラムである。

図８は実施例Ｉに記されているクロマトグラフィー実施から集められたポロキサ マー１８８の画分６のクロマトグラムである。

図９Ａ−９Ｃは分別されていないおよび分別されているボロキサマー７６０．５ のゲル透過クロマトグラムである。

図１０Ａ−１０Ｃは図９Ａ−９Ｃ中に表示されている画分類の核磁気スペクトル である。

図１１Ａ−１１Ｃはポロキサマー１８８の３種の画分類のゲル透過クロマトグラ ムである。

図１２Ａ−１２Ｃは分別されていないおよび分別されているポロキサマー３３１ のゲル透過クロマトグラムである。

詳細な記述 ポリオキシプロピレン／ポリオキシエチレンブロック共重合体類の先行技術調合 物は工業的用途に適しているが、治療剤としての共重合体類に関する新たに発見 された用途は調合物中の分子の比較的小さい多分散集団を必要としている。

本発明は、１０５より小さい多分散値を有するポリオキシプロピレン／ポリオキ シエチレン共重合体類を含んでいる。新規な共重合体類は、先行技術調合物から 不同分子を除去することによりまたは本発明の一部と考えられる方法に従い共重 合体を製造することにより、製造できる。

本発明の共重合体類の製造方法は、ポリオキンエチレンブロックを分子に加える 前のポリオキシプロピレン／ポリオキシエチレン共重合体のポＩＪフロピレンブ ロックの精製である。この方法で、ポリオキシエチレン重合体の分子への添加前 に部分的に重合されたポリオキシプロピレン重合体が除去される。これが、本発 明として考えられる物理的パラメータ内に入るブロック共重合体をもたらす。

本発明はまた、下記の一般式： ％式％） ［式中、共重合体のポリオキシプロピレン部分により表されている分子量は約９ ００−１５００ダルトンの間、より好適には１，２００−６５００ダルトンの間 、でありそして共重合体のポリオキシエチレン部分により表されている分子量は 共重合体の約５％−９０％の間、より好適な範囲は共重合体の約１０％−９０％ 、を構成しておりそして多分散値は約１．０７より小さい］ を有するポリオキシプロピレン／ポリオキシエチレンブロック共重合体も含んで いる。

本発明はまた、下記の一般式： ％式％） ［式中、疎水基（Ｃ３Ｈ，○）の分子量は約１７５０ダルトンでありそして該化 合物の平均合計分子量は約８３００−９４００ダルトンである］を有するポリオ キシプロピレン／ポリオキシエチレンブロック共重合体も含んでいる。該化合物 は約５．０００−１５，０００の範囲の分子量分布を有しており、好適な分子量 範囲は約７，０００−１２．０００ダルトンの間である。さらに、共重合体は核 磁気共鳴により測定された不飽和を実質的に有していない。

ボロキサマー化合物類の命名法はボロキサマーグリッド（図１）を基礎にしてい る。ボロキサマーグリッドは種々の重合体員の命名法および組成の間の関係であ る。疎水性（ポリオキシプロピレン）分子量は範囲の大体中間点として示されて いる。グリッド上のボロキサマー数の最初の２個の数字に１００を掛算すると疎 水基の大体の分子量を与える。最後の数字に１０を掛算すると表面活性剤の親水 性（ポリオキシエチレン）含有量の概略重量％を与える２０゜例えば、グリッド （図１）の右上四半針に示されているポロキサマー４０７は４０００分子量疎水 基から誘導されており、親水基が共重合体の合計分子量の７０％を構成している 。

他の例は、７６００ダルトンの分子量を有する疎水基を有しておりそして共重合 体の合計分子量の５％を構成している親水基を有するポロキサマー７６０．５で ある。

本出願に記されている代表的なボロキサマー類をそれらのプルロニック（商標） 数と共に表１に示す。

表■ ポロキサマー　ブルロニ・り　）　％ＰＯＥ１８８　Ｆ６８　８０％ ３３１　Ｌ　１０１　１０％ ７６０．５　Ｌｉ２Ｏ，５５％ １０刃０．５　Ｌ３３１　５％ 一般的に重合体類を特徴づける時には分子量平均は重要でありそして有用である が、重合体の分子量分布を知ることも重要である。ある種の加工および最終用途 特性（融解流動性、曲げ寿命、引っ張り強度など）は個々の分子量平均における 値および／または変化を観察することによりしばしば予測されるかまたは理解さ れている。これらの値はポリオキシプロピレン／ポリオキシエチレン共重合体類 の生物学的性質に指定されることもできる。加工特性のリストを以下に記す。

平−工 Ｍｚ　曲げ寿命／剛性 Ｍｎ　脆さ、流動性 Ｍｗ　引っ張り強度 例えば、分布の幅は多分散性（Ｄ）として知られておりそして一般的にはＭＷ／ Ｍｎとして定義されている。単分散性試料は全ての分子が同一であるものと定義 されている。そのような場合には、多分散性（Ｍｗ／　Ｍ　ｎ　）は１．０であ る。狭い分子量標準は１近（のＤの値を有しており、そして典型的な重合体は２ −５の範囲を有している。ある種の重合体類は２０より大きい多分散性を有して いる。

多分散性を表示するための式を以下に記す：Σ面積ｉ　／　Ｍ　ｉ Σ（面積ｉ） Σ［（面積ｉ　ＸＭ　ｉ　）］ ［式中、面積ｉ＝ｉ　ｔｈ片の面積であり、Ｍ　ｉ　＝　ｉ　ｔ　ｈ片の分子量 である］このようにして、上記で挙げられている要素を計算することにより、薬 学的調合物用に許容可能なある種の多分散性を特定することができる。

高い多分散値は一定の調合物中の分子集団に関する広い変動を示しているが、低 い多分散値はそれより小さい変動を示している。分子寸法は生物学的活性の重要 な決定因子であるため、さらに均質な生物学的効果を得るためには調合物中の分 子の分散性を制限することが重要である。従って、多分散性測定を使用して調合 物中の分子の分散性を測定しそして生物学的活性における変動に関する化合物の 予測を補正することができる。

ここで記されている多分散値はカラム加熱器モジュール、モデル４１０屈折率検 出器、マキシマ８２０ソフトウエアパツケージ（全てウォーターズ、ミリポルの 部門、ミルフォード、マサチュセッツ州製）、２個の一連のりクロゲルＰＳ−４ ０カラムおよびリクロゲルＰＳ−２０カラム（ＥＭサイエンス、ギップスタウン 、ニューシャーシー州）が備えられているモデル６００Ｅパワーラインクロマト グラフイーシステム並びにポリエチレングリコール分子量標準（ポリマー・ラボ ラトリーズ・インコーホレーテッド、アンヘルスト、マサチュセッツ州）を用い て得られたクロマトグラムから測定されたと理解すべきである。このシステムを 用いて得られる多分散値はクロマトグラフィー条件、分子量標準およびゲル透過 カラムの寸法排除特性に関連している。異なる分離原則を用いる多分散性測定が ここに記されているものとは異なる絶対的多分散値を与えるかもしれない。しか しながら、当技術分野の専門家は単に単独試料を両方のシステムに走行させそし て次に各クロマトグラムからの多分散値を比較することにより異なる分離方法を 用いて得られた多分散値をここに記されている値に容易に転換させることができ る。

本発明に従うと、１，０７より小さい多分散値を有するポリオキシプロピレン／ ポリオキシエチレンブロック共重合体である組成物が提供される。好適には、多 分散値は約１．０５より小さく、最も好適な多分散値は１．０３である。本発明 はボロキサマー化合物類およびボロキサマー化合物類を包含しているがそれらに 限定されるものではないことを理解すべきである。

本発明に従うと、下記の一般式： ％式％） ［式中、共重合体の合計分子量は約５，０００−１５．０００ダルトンの間、好 適には７，０００−１２，０００ダルトンの間、でありそして共重合体のポリオ キシエチレン部分により表されている分子量は共重合体の約８０％を構成してい る］ を有するポリオキシプロピレン／ポリオキシエチレンブロック共重合体を含んで いる表面活性共重合体である組成物が提供される。

本発明の一態様は、下記の一般式： ％式％） ［式中、疎水基（Ｃ３Ｈ６０）の分子量は約１７５０ダルトンでありそして化合 物の平均分子量は約８３００−９４００ダルトンである］ヲ有スるポリオキシプ ロピレン／ポリオキシエチレン共重合体を含んでいる。多分散値は約１．０５よ り小さい。少なくともこれらの物理的要素に対応するブロック共重合体は先行技 術ボロキサマー１８８の有利な生物学的効果を有しているが、先行技術化合物に 関して報告されている望ましくない副作用は示さない。表面活性共重合体の多分 散値を減少させることにより、先行技術ボロキサマー１８８に伴う毒性が相当減 じられるということが見いだされた。しかしながら、改質されたポロキサマー１ ８８の有利な治療活性は保有されている。

本発明の表面活性共重合体類は多くの方法で製造することができる。

先行技術化合物類をゲル透過クロマトグラフィーにかけることにより、多分散値 を減少させることができる。さらに、該化合物類を当技術の専門家に既知である 分子ふるい技術にかけることもできる。

本発明の表面活性共重合体は数種の方法で製造することができる。第一の方法で は、商業的に入手可能なポロキサマー１８８をゲル透過クロマトグラフィーにか ける。この工程から得られるクロマトグラムは図１に示されている。

図１に示されている如く、商業的ポロキサマー１８８は約７９００−９５００ダ ルトンのピーク分子量を有する広い分布の分子からなってし）る。これは一般的 には８４００ダルトンのポロキサマー１８８に関する表示されている分子量に相 当している。ポロキサマー１８８に関して表示されている分子量はヒドロキシル 方法により測定されている。ポリエーテル鎖の末端基はヒドロキシル基である。

ｍｇのＫＯＨ／ｇの試料で表示されている分析的に測定されたｒＯＨ数」から、 数平均分子量を計算することができる。多分散性化合物の分子量は分子量を測定 するために使用される形態学により異なることがあると理解すべきである。

図１は主ピークの左および右に置かれている小さい副ピークまたは肩部も示して いる。ポロキサマー１８８クロマトグラムのこれらの面積はそれぞれ高および低 分子量を表示している。高分子量種は約２４．０００−１５．０００ダルトンの 寸法範囲である。これらの比較的大きい分子量は比較的低い分子量種と比べて補 充剤を活性化する大きい能力を有していると信じられている。右にある肩部すな わちクロマトグラムの比較的低分子量側は約２，３００ダルトン−５，０００ダ ルトンの間の分子からなっている。この種はさらに大きい洗剤様の性質を有する 化合物でありそして細胞に対して細胞毒性である。

ゲル透過クロマトグラフィ一工程を使用すると、約５，０００ダルトン−１５， ０００ダルトンの範囲の、好適には約６，０００ダルトン−１３，０００ダルト ンの間の、分子を有しており、約８，７００ダルトンにピークを有するポロキサ マー１８８の両分が商業的に入手可能なポロキサマー１８８の有利な治療活性を 依然として保有しながら毒性活性が本質的にない表面活性共重合体類の集団を代 表している。この新規な組成物は最近入手可能なものよりはるかに均質な調合物 であり、そして予期せぬことに先行技術調合物より少ない副作用を有している。

共重合体に関する最適範囲として記載されている分子量範囲が外側範囲であると 考えられていること並びにその範囲に入る分子の集団が本発明の態様であると考 えられていることを理解すべきである。

本発明は、ここに記されている仕様を有する表面活性共重合体の新規な製造方法 も含んでいる。新規方法は均一な疎水性ポリオキシプロピレン重合体の製造を方 法を含んでおり、そして次に一般的に行われている如く親水性ポリオキシエチレ ンの添加で進行する。ポロキサマー１８８の標準的な商業的方法の結果である毒 性共重合体類は頭が切られた重合体鎖および重合体中の不飽和によるものである と信じられている。

本発明の実施においては、疎水性ポリオキシプロピレン重合体が精製されて実質 的に均一なポリオキシプロピレン重合体の集団を得る。精製はゲル透過クロマト グラフィーを用いて実施することができる。しかしながら、希望する範囲のポリ オキシプロピレン重合体を与えるような当技術の専門家に既知であるいずれの方 法でも使用することができる。

改良されたレオロジー試薬の製造においては、ポリオキシプロピレン重合体は約 １７５０ダルトンの平均分子量を有していなければならず、１．０００−２，６ ００ダルトンの間の概略分子量範囲を有している。好適な分子量範囲は１，２０ ０−２，４００ダルトンの間である。

希望するポリオキシプロピレン共重合体が得られた後に、共重合体のエチレン部 分を当技術分野の専門家に既知である標準的方法により分子の両端に加える。最 終的な重合体集団は分子の合計分子量の約２０％のポリオキシエチレン組成を有 していなければならない。

本発明はさらに下記の実施例により説明されており、それらは本発明の範囲を何 ら限定しようとするものではない。対照的に、本発明の範囲および／または添付 されている請求の範囲から逸脱しない限り、ここの記載を読んだ後に当技術分野 の専門家に示唆されるであろうそれらの種々の他の態様、改変、および同等物を 再分類できることは明白に理解されるであろう。

実施例Ｉ ポロキサマー１８８　（ＢＡＳＦコーポレーション、パルジッパニー、ニューシ ャーシー州）をテトラヒドロフラン中に２０ｍｇ／ｍＬの濃度で溶解させた。カ ラム加熱器モジュール、モデル４１０屈折率検出器およびマキシマ８２０ソフト ウエアパツケージ（全てウォーターズ、ミリポア部門、ミルフォード、マサチュ セッツ州製）が備えられているモデル６００Ｅパワーラインクロマトグラフイー システムを使用して商業的に製造されたポロキサマー１８８共重合体を分別した 。クロマトグラフィーシステムには２個のりクロゲルＰＳ−４０カラムおよびリ クロゲルＰＳ−２０カラムが順番に備えられていた（ＥＭサイエンス、ギブスタ ウン、ニューシャーシー州）。リクロゲルＰＳ−４０カラムは１０μｍ粒子寸法 でありそしてリクロゲルＰＳ−２０カラムは５μｍ粒子寸法であった。全てのカ ラムの寸法は７ｍｍＸ２５ｃｍであった。

テトラヒドロフラン中の２００μＬ　（４ｍｇ）のポロキサマー１８８をカラム に加え、そして試料をカラムおよび検出器を用いて４０℃において走行させた。

生じたクロマトグラムは図２に示されている。

実施例ＩＩ 実施例■で集められた試料を５種の画分に分別し、そして各面分を実施例Ｉ中に 示されている如くしてカラム上に流した。種々のクロマトグラフィー走行からの クロマトグラムは図３−８に示されている。ポロキサマー１８８の治療活性を保 有しながら最少の毒性を示す画分は図５に示されている。明白にわかるように、 図５にはピークのいずれの側にも肩部は存在していない。

各画分に関する平均分子量は表ＩＩに示されている。各両分に関するクロマトグ ラムは図３−８に示されている。

表ＩＩ 画分　図　カラムからの時間（分）　分子量　多分散値１　３　１１．５−１２ ．０　１７０００　１．０４００２　４　１２．０−１２．５　１０２７０　１ ．０４７４３　５　１２．５−１３．０　８９６４　１．０２８０４　６　１３ ．０−１３．５　８１８８　１．０３３２５　７　１３．５−１４．０　５４１ ８　１．１１０３分別されていないポロキサマー１８８の多分散値は１．０８９ ６であった。はとんどポロキサマー１８８に相当している画分は、約１．０２８ ０の多分散値を有する画分３である。

実施例ＩＩＩ 機械的スタラー、還流コンデンサー、温度計および酸化プロピレン供給入り口が 備えられている１リットル３首丸底フラスコ中に、５７グラム（０，７５モル） のプロピレングリコールおよび７．５グラムの無水水酸化ナトリウムを入れた。

フラスコに窒素を流して空気を除去しそして水酸化ナトリウムが溶解するまで撹 拌しながら１２０℃に加熱した。生成物が約１７５０ダルトンの計算分子量を有 するまで、充分な酸化プロピレンを混合物中にそれが反応するのと同じ速さで加 えた。生成物を窒素下で冷却しそしてＮａＯＨ触媒を硫酸を用いて中和しそして 次に生成物を濾過した。最終的生成物は水−不溶性のポリオキシプロピレングリ コールであった。

実施例ＩＶ 実施例ＩＩＩからのポリオキシプロピレングリコールをテトラヒドロフラン中に ２０ｍｇ／ｍＬの濃度で溶解させた。カラム加熱器モジュール、モデル４１０屈 折率検出器およびマキシマ８２０ソフトウエアパツケージ（全てウォーターズ、 ミリボア部門、ミルフォード、マサチュセッツ州製）が備えられているモデル６ ００Ｅパワーラインクロマトグラフイーシステムを使用して商業的に製造された ポロキサマー１８８共重合体を分別した。クロマトグラフィーシステムには２個 のりクロゲルＰＳ−４０カラムおよびリクロゲルＰＳ−２０カラムが順番に備え られていた（ＥＭサイエンス、ギブスタウン、ニューシャーシー州）。リクロゲ ルＰＳ−４０カラムは１０μｍ粒子寸法でありそしてリクロゲルＰＳ−２０カラ ムは５μｍ粒子寸法であった。全てのカラムの寸法は７ｍｍＸ２５ｃｍであった 。

テトラヒドロフラン中の２００μＬ　（４ｍｇ）のポリオキシプロピレングリコ ールをカラムに加え、そして試料をカラムおよび検出器を用いて４０℃において 走行させた。１，０００−２，６００ダルトンの間の分子量分布を有する１７５ ０ダルトンの平均分子量に相当する両分を集めた。他の両分は廃棄された。

実施例Ｖ 実施例ＩＶからの精製されたポリオキシプロピレングリコールを適当量の無水水 酸化ナトリウムと共に実施例ＩＩＩ中に記されているのと同じ装置の中に入れた 。適当量の酸化エチレンを１２０℃の平均温度において実施例ＩＩＩ中に記され ているのと同じ技術を用いて加えた。加えられた酸化エチレンの量はポリオキシ プロピレングリコール基質および加えられた酸化エチレンの重量の合計重量の２ ０％に相当していた。

この工程は、商業的調合物に比較して分子寸法および構造に関してはるかに均質 である分子からなるポリオキシプロピレン／ポリオキシエチレンブロック共重合 体を生じた。

実施例ＶＩ ポロキサマー７６０．５の画分をゲル透過クロマトグラフィーにより製造しそし てオキシエチレンの重量％に関しておよびＮＭＲ分析による不飽和に関して下記 の如く分析した。ポロキサマー７６０．５　（ＢＡＳＦコーポレーション、パル ジッパニー、ニューシャーシー州）をテトラヒドロフラン中に２０ｍｇ／ｍＬの 濃度で溶解させた。カラム加熱器モジュール、モデル４１０屈折率検出器および マキシマ８２０ソフトウエアパツケージ（全てウォーターズ、ミリポア部門、ミ ルフォード、マサチュセッツ州製）が備えられているモデル６００Ｅパワーライ ンクロマトグラフイーシステムを使用して商業的に製造されたボロキサマー７６ ０．５共重合体を分別した。クロマトグラフィーシステムにはウルトラスチラゲ ル１０３および５００Ａが順番に備えられていた（ウォーターズ、ミリポア部門 、ミルフォード、マサチュセッツ州）。カラムの寸法は７．７ｍｍ内径Ｘ３０ｃ ｍであった。除去可能な２μｍ適合部が付いているプレカラムフィルター＃Ａ− ３１５をカラムの保護用に使用した。

テトラヒドロフラン中の２００μＬ　（４ｍｇ）のポロキサマー７６０゜５をカ ラムに加え、そして試料をカラムと共に４０℃においてそして検出器と共に４５ ℃において走行させた。

試料１はＢＡＳＦコーポレーション（パルジッパニー、ニューシャーシー州）か ら得られたポロキサマー７６０．５の分別されていない試料でありそして図９Ａ に示されている。画分１はクロマトグラフィーシステムからの初期画分でありそ して図９Ｂに示されている。画分２は後期画分でありオキシ図９０に示されてい る。全てのプロトンＮＭＲ分析はＮＦ工工程重量％オキシエチレン」に従いブル ーカー３００ＭＨｚ装置上で行われた。

図９Ｂおよび９Ｃからのプロトン核磁気共鳴スペクトルは分別されていない試料 と比べてスペクトル中に広がっているわずかなパン（ｂａ口）を示した。後期溶 離画分（画分２）は、約４．０ｐｐｍにおける二重線記号により示されているよ うな最大量の不飽和を含有していた。早期溶離ピーク（画分１）に関するプロト ンスペクトルは水以外の不純物を示さなかった。

重量％オキシエチレンを試料に関して計算した。表ＩＩＩかられかる如（、最も 純粋な両分である早期溶離画分は最低％のオキシエチレンを有していた。この両 分も核磁気共鳴により測定された不飽和を示さなかった。上記のボロキサマー命 名システムを使用すると、種々の画分は下記の特徴およびボロキサマー数を有し ていた。

表ＩＩＩ 画分　％ＰＯＥ″　ＭＷ’　ポロキサマー　不飽和０分別されていない　５．５ 　８１３５　７６０．５　あり早期画分　３．９　１０８５６　１０４．４　な し後期画分　７．５　３０８５　２９１　ありａ、ＮＭＲにより測定された す、ゲル透過クロマトグラフィーにより測定されたポリオキシプロビレｃ、ＮＭ Ｒにより測定された 実施例ＶＩＩ ポロキサマー１８８（プルロニック１ｌＦ６８）を実施例■に従うゲル透過クロ マトグラフィーシステム上で分別した。３種の画分を集めた。

図１１Ａは画分１である早期高分子量画分を示している。図１１Ｂは主ピークで ある画分ＩＩを示している。図１１Ｃは分子の後期溶雌性の比較的低い分子量数 を示している。各両分の％オキシエチレンをプロトンＮＭＲにより２００ＭＨ２ ＮＭＲ分光計を用いて測定した。約１０ｍｇの各試料を試験した。各類に約０． ７ｍＬのＣＤＣｌ、を加えることにより試料を製造した。溶液を濾過しそして５ ｍｍＮＭＲ管に移した。１滴のり、Ｏを加え、そして管を測定の前に振った。

表ＩＶ 早期　８５　１６．５００　２５８ 中期画分　８２　８６５２　１７８ ａ、ＮＭＲにより測定された ｂゲル透過クロマトグラフィーにより測定された表ＩＶに示されている如く、早 期溶雌性の大分子量画分は高い％のオキシエチレンを有しており、そしてポロキ サマー２５８に相当していた。

中期画分は最少％のオキシエチレンを有しているが、後期溶雌性の小分子量画分 は最高％のオキシエチレンを有していた。中期画分は１８８の希望値と非常に対 応している１７８の計算されたボロキサマー数を有していた。後期画分は０３９ の計算されたポロキサマー数を有していた。

従って、商業的に入手可能なボロキサマー調合物は生物学的システム中で有害と なるかもしれない重合体の相当な数を有していた。

実施例ＶＩＩＩ ポロキサマー３３１（プルロニック（商標）ＬＩＯＩ）を実施例ＶＩ中の処方に 従い分別した。分別されていないポロキサマー３３１、早期溶離性画分および後 期溶離性画分に関するクロマトグラムはそれぞれ図１２Ａ−１２Ｃに示されてい る。各試料に関するＮＭＲスペクトルを次に実施例ＶＩ中の如くして測定した。

これらのスペクトルの結果およびタロマドグラムは表Ｖにまとめられている。

表Ｖ 分別されていない　１７　４０４５　３４２　あり早期画分　１５　４４５２　 ３８１　なし後期画分 ３１　１４６６　１０３　あり ａ、ＮＭＲにより測定された す、ゲル透過クロマトグラフィーにより測定されたポリオキシプロピレン ｃ、ＮＭＲにより測定された 各両分に関するボロキサマー数を集められた数値データを基にして計算する時に は、後期画分重合体は分別されていない調合物とは非常に異なっているポロキサ マーである。さらに、重合体の不飽和集団は分別工程により除去されていた。

以上は本発明の好適態様にのみ関連しているということ並びに添付されている請 求の範囲に示されているような本発明の精神および範囲から逸脱しない限り多数 の改変または変更をそこで行えるということは理解すべきである。

１　アダムソン（＾ｄａｍｕｓｏｎ）、　ＡＷ、フィジカル・ケミストリー・オ ブ・サーフエセズ（ＰＨＹＳＩＣＡＬ　Ｃ１（ＥＭＩＳＴＲＹ　ＯＦ　５ＵＲＦ ＡＣＥＳ）、４版、ジョーン・ウィリー・アンド・サンズ、ニューヨーク（１９ ８２）。

２　一般的には、血流遮断および血栓症、基本的原則および臨床的実施（ＨＥＭ ＯＳＴＡＳＩＳ　ＡＮＤ　ＴＨＲＯＭＢＯＳＩＳ、　ＢＡＳＩＣＰＲＩＮＣＩＰ ＬＥＳ　ＡＮＤ　ＣＬＩＮＩＣＡＬ　ＰＲＡＣＴＩＣＥ）、コルマン（Ｃｏｌ− ａｎ）他編集、Ｊ、Ｂ、リッピンコット・カンパニー（１９８７）を参照のこと 。

１　アトキンラン（＾ｔｋｉｎｓｏｎ）、　Ｔ　Ｐ他、“、ＡＭ、　Ｊ、　ＰＨ ＹＳＩＯＬ、、２５４：Ｃ２０（１９８８）。

４　ブルックス（Ｂｒｏｏｋｓ）、　Ｄ　Ｅ、および工ヴアンス（Ｅｖａｎｓ） 、　Ｅ　Ａ、臨床的血液レオロジーにおける血球のレオロジー、心血管および血 液学的疾病、糖尿病、外科および婦人科（Ｒｈｅｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ｂｌｏｏｄ 　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ＣＬＩＮＩＣＡＬｔｌＥｉｌＯＲＨＥＯＬＯＧＹ、＾ｐｐ ｌｉｃａｔｉｏｎｓ　ｉｎ　Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ　ａｎｄ　Ｈｅｍａ ｔｏｌｏｇｉｃａｌＤｉｓｅａｓｅ、　Ｄｉａｂｅｔｅｓ、　Ｓｕｒｇｅｒｙ　 ａｎｄ　Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｙ）ｏ　Ｓ、チェノ（Ｃｈｉｅｎ）、Ｊ。

ドルマンディ（Ｄｏｒｍａｎｄｙ）、　Ｅ、エルンスト（Ｅｒｎｓｔ）およびＡ 、ｖトライ（Ｍａｔｒａｉ）、編集、マルチヌス・ニイホッフ・パブリッシャー ズ、ドルドルヒト（１９８７）。

Ｓ　トンプソン（Ｔｈｏｍｐｓｏｎ）、　Ａ　Ｒ，およびバーカー（Ｈａｒｋｅ ｒ）、　Ｌ　Ａ　、血流遮断および血栓症の手引（ＭＡＮｔｌＡＬ　ＯＦ　ＨＥ ＭＯＳＴＡＳＩＳ　ＡＮＤ　ＴＨＲＯＭＢＯＳＩＳ）、３版、Ｆ、Ａ、デヴイス ・カンパニー、フィラデルフィア（１９８３）。

番　リー（Ｌｅｅ）、　Ｌ　Ｈ１「重合体摩擦および摩耗に対する表面エネルギ ーの影響（Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　５ｕｒｆａｃｅ　ｅｎｅｒｇｅｔｉｃｓ　ｏｎ 　ｐｏｌｙｓｅｒ　ｆｒｉｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｗｅａｒ）Ｊ、重合体摩擦およ び摩耗における進歩（＾ＤＶＡＮＣＥＳ　ＩＮ　ＰＯＬＹＭＥＲＦＲｒＣＴＩＯ Ｎ　ＡＮＤ　ＷＥＡＲ，Ｐｏｌｙｍｅｒ　５ｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎ ｏｌｏｇｙ）中、ポリマー・サイエンス−アンド−テクノロジー（Ｐｏｌｙａ＋ ｅｒ　５ｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、５Ａ巻、Ｌ、Ｈリ− （Ｌｅｅ）編集者、ブレヌム・プレス、ニューヨーク（１９７４）。

フ　ルックス（Ｂｒｏｏｋｓ）および工ヴアンス（Ｅｖａｎｓ）　（１９８７） 　、上記畠　リー（Ｌｅｅ）、　（１９７４）、上記９　アダムソン（Ａｄａｍ ｕｓｏｎ）、（１９８２）、上記＋６　グローヴ７−（Ｇｒｏｖｅｒ）、　Ｆ　 、　Ｌ、　、他、「非イオン系表面活性剤および血液粘度（Ａ　ｎｏｎｉｏｎｉ ｃ　５ｕｒｆａｃｔａｎｔ　ａｎｄ　ｂｌｏｏｄ　ｖｉｓｃｏｓｉｔｙ）Ｊ　、 ＾ＲＣｔｌ　５ＵＲＧ）、１０６　：　３０７　（１９７３）。

■　ババデア（Ｐａｐａｄｅａ）、　Ｃ、およびハンター（Ｈｕｎｔｅｒ）、ア ルキル１、「フィブリン（フィブリノーゲン）濃度に関連する血液粘度に対する レオスＲｘ１ｌの影響（Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ＲｈｅｏｔｈＲｘ”　ｃｏｐｏｌ ｙａ＋ｅｒ　ｏｎ　ｂｌｏｏｄ　ｖｉｓｃｏｓｉｔｙ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｔｏ　 ｆｉｂｒｉｎ（ｏｇｅｎ）　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎＪ　、　ＦＡＳＥＢ　 Ｊ　２　：　Ａ３　８４　（１９８８）。

Ｉｓ　ライマン（Ｗｉｍａｎ）、　Ｂ、およびランビー（Ｒａｎｂｙ）、　Ｍ、 、「急速および定量的分光写真計評価による血漿中の可溶性フィブリンの測定（ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　５ｏｌｕｂｌｅ　ｆｉｂｒｉｎ　ｉｎ　ｐ ｌａｓｍａ　ｂｙ　ａ　ｒａｐｉｄ　ａｎｄ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　T ｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏａｅｔｒｉｃ　ａｓｓａｙ）Ｊ　、ＴＢＲＯＭＢ、　Ｈ ＾ＥＭＯ５Ｔ５５　：１８９　（１９８６）。

■　コナガーン（Ｃｏｎｎａｇｈａｎ）、　Ｄ　Ｇ、フランシス（Ｆｒａｎｃｉ ｓ）、　ＣＷ、レーン（Ｌａｎｅ）、　Ｄ　Ａ　、およびマーダー（Ｍａｒｄｅ ｒ）、　Ｖ　Ｊ　、ｒ新しい高感度技術を用いてのフィブリン重合体、フィブリ ノーゲン減成生成物、および架橋結合されたフィブリン減成生成物の特異的同定 （Ｓｐｅｃｉｆｉｃ　１ｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｉｂｒｉｎ　ｐ ｏｌｙｍｅｒｓ、　ｆｉｂｒｉｎｏｇｅｎ　ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ　ｐｒｏｄ ｕｃｔｓ、　ａｎｄ　ｃｒｏ■ ｓｌｉｎｋｅｄ　ｆｉｂｒｉｎ　ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ　ｐｒｏｄｕｃｔｓ　 ｉｎ　ｐｌａｓｍａ　ａｎｄ　ｓｅｒｕｍ　ｗｉｔｈ　ａ　■ ｅｗ　５ｅｎｓｉｔｉｖｅ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ）、　ＢＬＯＯＤ、６５　：５ ８９　（１９８５）　。

１４　ライマン（ｌｉｍａｎ）、　Ｂ、およびランビー（Ｒａｎｂｙ）、　Ｍ、 、「急速および定量的分光写真計評価による血漿中の可溶性フィブリンの測定（ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　５ｏｌｕｂｌｅ　ｆｉｂｒｉｎ　ｉｎ　ｐ ｌａｓｍａ　ｂｙ　ａ　ｒａｐｉｄ　ａｎｄ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　■ ｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃ　ａｓｓａｙ）Ｊ　、　ＴＨＲＯＭＢ、Ｂ ＡＥ）ＩＯＳＴ５　５　：　１　８　９　（１９８６）。

Ｉｓ　ヴエルセロッテ（Ｙｅｒｃｅｌｌｏｔｔｅ）、　Ｇ、　Ｍ、他、「ペルフ ルオロカーボン人工血液による血漿補充剤の活性化：処置される患者における悪 性肺反応の推測的機構およびコルチコステロイド予防用の理論（＾ｃｔｉｖａｔ ｉｏｎｏｆ　Ｐｌａｓｍａ　Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ　ｂｙ　Ｐｅｒｆｌｕｏｒｏ ｃａｒｂｏｎ　Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ　Ｂｌｏｏｄ：　Ｐｒｏｂａ■ ｌｅ　Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｆ　Ａｄｖｅｒｓｅ　Ｐｕ１ｓｏｎａｒｙ　Ｒｅ ａｃｔｉｏｎｓ　ｉｎ　Ｔｒｅａｔｅｄ　Ｐａｔｉｅｎｔｓａｎｄ　Ｒａｔｉｏ ｎａｌｅ　ｆｏｒ　Ｃｏｒｔｉｃｏｓｔｅｒｏｉｄ　Ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ） Ｊ　、ＢＬＯＯＤ、　５９巻、１２９９−１３０４頁（１９８２）。

１・　レーン（Ｌｉｎｅ）、　Ｔ、　Ａ、、池、「人工血液代用品による食細胞 泳動の麻痺（Ｐａｒａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｐｈａｇｏｃｙｔｅ　ｍｉｇｒａｔｉ ｏｎ　ｄｕｅ　ｔｏ　ａｎ　ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ　ｂｌｏｏｄｓｕｂｓｔｉｔ ｕｔｅ）Ｊ　、ＢＬｏｏＤ、６４巻、４００−４０５　（１９８４）。

１７　レーン（Ｌａｎｅ）、　Ｔ、　Ａ、、他、「超臨界的流体分別による人工 血液代用品の成分の毒性減少（Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｔｏｘｉｃ ｉｔｙ　ｏｆ　ａ　ｃｏｓ＋ｐｏｎｅｎｔ　ｏｆａｎ　ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ　 ｂｌｏｏｄ　５ｕｂｓｔｉｔｕｔｅ　ｂｙ　５ｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ　ｆｌ ｕｉｄ　ｆｒａｃｔＬｏｎａｔｉｏｎ）Ｊ　、丁ＲＡＮＳＦＵＳＩＯＮ、２８巻 、　３７５−３７８　（１９８７）　。

１ｓ　レーン（Ｌａｎｅ）、　Ｔ、　Ａ、、他、「超臨界的流体分別による人工 血液代用品の成分の毒性減少（Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｔｏｘｉｃ ｉｔｙ　ｏｆ　ａ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ　ｏｆａｎ　ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ　ｂ ｌｏｏｄ　５ｕｂｓｔｉｔｕｔｅ　ｂｙ　５ｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ　ｆｌｕ ｉｄ　ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｉｏｎ）Ｊ　、ＴＲＡＮＳＦＵＳｒＱＮ、２８巻、 ３７５−３７８　（１９８７）。

＋９　ハンター（Ｈｕｎｔｅｒ）、「非イオン性ブロック重合体表面活性財の佐 薬活性、ＩＩＩ、選択された生物学的活性表面の特徴（Ｔｈｅ　Ａｄｕｖａｎｔ 　Ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　Ｎｏｎ１ｏｎｉｃ　Ｂｌｏｃｋ　Ｐｏｌｙｍｅｒ　 ５ｕｒｆａｃｔａｎｔｓ、　ＩＩｌ、　Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆ 　５ｅｌｅｃｔｅｄ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ　Ａｃｔｉｖｅ　５ｕｒｆａｃ ｅｓ）Ｊ　、５ＣＡＮＤ、　Ｊ、　ＩＭＭＵＮＯＬ、。

２３巻、２８−３００頁（１９８６）。

１０　ヘンリー（Ｈｅｎｒｙ）、　Ｒ，Ｌ、、他、「火傷被覆およびボロキサマ ー調合物の使用（Ｂｕｒｎ　Ｗｏｕｎｄ　Ｃｏｖｅｒｉｎｇｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ 　Ｕｓｅ　ｏｆ　Ｐｏ１ｏｘａａｅｒ　Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ）Ｊ　、ＣＲ ＩＴＩＣＡＬ　ＲＥＶＩＥＩＩＳ　ＩＮ　ＢＩＯＣＯＭＰＡＴＩＢＩＬＩＴＹ、 　５巻、Ｎ０１３．２０７−２２０頁（１９８９）。

％酸化エチレン −１’Ｖ声 特表千６−５０６２５８　（１ア） −１１ｆ平 １１ｒ平 ＠　’＋（’Ｊ　１−Ｏｆ　Ｘ ｑ１ｒ平、−Ｏｆ　Ｘ 特表千６−５０６２５８　（１９） ｉ１／平　１−Ｏｆ　Ｘ ｉ’ｌ／平 国際調査報告 −情−−＾−−−帽−ＰＣＴ１０５９２１０２２５４

Claims (35)

【特許請求の範囲】
1. １．下記の一般式： ＨＯ（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ｂ（Ｃ３Ｈ６Ｏ）ａ（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ｂＨ［式中、共重合体の ポリオキシプロピレン部分により表されている分子量は約９００−１５００ダル トンの間でありそして共重合体のポリオキシエチレン部分により表されている分 子量は共重合体の約５％−９０％の間を構成しておりそして多分散値は約１．０ ７より小さい］を有するポリオキシプロピレン／ポリオキシエチレンブロック共 重合体。
2. ２．多分散値が約１．０５より小さい、請求の範囲第１項に記載のブロック共重 合体。
3. ３．多分散値が約１．０３より小さい、請求の範囲第１項に記載のブロック共重 合体。
4. ４．共重合体が実質的に飽和されていない、請求の範囲第１項に記載のブロック 共重合体。
5. ５．共重合体が約１，２００−６５００ダルトンの間の分子量範囲を有する、請 求の範囲第１項に記載のブロック共重合体。
6. ６．共重合体のポリオキシエチレン部分が共重合体の約１０％−９０％の間を構 成している、請求の範囲第５項に記載のブロック共重合体。
7. ７．下記の一般式： ＨＯ（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ｂ（Ｃ３Ｈ６Ｏ）ａ（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ｂＨ［式中、疎水基（Ｃ ３Ｈ６Ｏ）の分子量は約１７５０ダルトンでありそして該化合物の平均合計分子 量が約８４００ダルトンでありそして多分散値は約１．０７より小さい］ を有するポリオキシプロピレン／ポリオキシエチレンブロック共重合体を含んで なる、表面活性共重合体。
8. ８．多分散値が約１．０５より小さい、請求の範囲第７項に記載の表面活性共重 合体。
9. ９．多分敬値が約１．０３より小さい、請求の範囲第７項に記載の表面活性共重 合体。
10. １０．共重合体が実質的に飽和されていない、請求の範囲第７項に記載の表面活 性共重合体。
11. １１．下記の一般式： ＨＯ（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ｂ（Ｃ３Ｈ６Ｏ）ａ（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ｂＨ［式中、共重合体の 合計分子量は約５，０００−１５，０００ダルトンの間でありそして共重合体の ポリオキシエチレン部分により表されている分子量は共重合体の約７５％一８５ ％の間を構成している］を有するポリオキシプロピレン／ポリオキシエチレンブ ロック共重合体を含んでなる、表面活性共重合体。
12. １２．共重合体の合計分子量が約７，０００−１２，０００ダルトンの間である 、請求の範囲第１１項に記載の表面活性共重合体。
13. １３．共重合体が実質的に飽和されていない、請求の範囲第１１項に記載の表面 活性共重合体。
14. １４．下記の一般式： ＨＯ（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ｂ（Ｃ３Ｈ６Ｏ）ａ（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ｂＨ［式中、疎水基（Ｃ ３Ｈ６Ｏ）の分子量は約９，７００ダルトンでありそして該化合物の平均合計分 子量は約１０，０００ダルトンでありそして多分散値は約１．０７より小さい］ を有するポリオキシプロピレン／ポリオキシエチレンブロック共重合体を含んで なる、表面活性共重合体。
15. １５．多分散値が約１．０５より小さい、請求の範囲第１４項に記載の表面活性 共重合体。
16. １６．多分散値が約１．０３より小さい、請求の範囲第１４項に記載の表面活性 共重合体。
17. １７．共重合体が実質的に飽和されていない、請求の範囲第１４項に記載の表面 活性共重合体。
18. １８．下記の一般式： ＨＯ（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ｂ（Ｃ３Ｈ６Ｏ）ａ（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ｂＨ［式中、疎水基（Ｃ ３Ｈ６Ｏ）の分子量は約３４００ダルトンでありそして該化合物の平均合計分子 量は約４０００ダルトンでありそして多分散値は約１．０７より小さい］ を有するポリオキシプロピレン／ポリオキシエチレンブロック共重合体を含んで なる、表面活性共重合体。
19. １９．多分散値が約１．０５より小さい、請求の範囲第１８項に記載の表面活性 共重合体。
20. ２０．多分散値が約１．０３より小さい、請求の範囲第１８項に記載の表面活性 共重合体。
21. ２１．共重合体が実質的に飽和されていない、請求の範囲第１８項に記載の表面 活性共重合体。
22. ２２．最初に酸化プロピレンを複数の反応性水素原子を含有している塩基化合物 と縮合させてポリオキシプロピレン重合体を製造し、そして次に酸化エチレンを ポリオキシプロピレン重合体と縮合させて下記の一般式： ＨＯ（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ｂ（Ｃ３Ｈ６Ｏ）ａ（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ｂＨを有するポリオキシ プロピレン／ポリオキシエチレンブロック共重合体を製造することを含んでなる 非−毒性の表面活性共重合体を製造する方法において、改良が酸化エチレンとポ リオキシプロピレン重合体との縮合段階の前のポリオキシプロピレン重合体の精 製であり、それによりポリオキシプロピレン／ポリオキシエチレンブロック共重 合体の多分散値を約１．０７より小さくするような方法。
23. ２３．ポリオキシプロピレン／ポリオキシエチレン共重合体の多分散値が約１． ０５より小さい、請求の範囲第２２項に記載の方法。
24. ２４．ポリオキシプロピレン／ポリオキシエチレン共重合体の多分散値が約１． ０３より小さい、請求の範囲第２２項に記載の方法。
25. ２５．ポリオキシプロピレン重合体がゲル透過クロマトグラフィーにより精製さ れる、請求の範囲第２２項に記載の方法。
26. ２６．共重合体が実質的に飽和されていない、請求の範囲第２２項に記載の表面 活性共重合体。
27. ２７．最初に酸化プロピレンを複数の反応性水素原子を含有している塩基化合物 と縮合させてポリオキシプロピレン重合体を製造し、そして次に酸化エチレンを ポリオキシプロピレン重合体と縮合させて下記の式：ＨＯ（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ｂ（Ｃ ３Ｈ６Ｏ）ａ（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ｂＨ［式中、疎水基（Ｃ３Ｈ６Ｏ）の分子量は約１ ７５０ダルトンでありそして該化合物の平均合計分子量は約８４００ダルトンで ある］を有するポリオキシプロピレン／ポリオキシエチレンブロック共重合体を 製造することを含んでなる非−毒性の表面活性共重合体を製造する方法において 、改良が酸化エチレンとポリオキシプロピレン重合体との縮合段階の前のポリオ キシプロピレン重合体の精製であり、それにより約１．０７より小さい多分散値 を有するポリオキシプロピレン／ポリオキシエチレンブロック共重合体を製造す るような方法。
28. ２８．ポリオキシプロピレン／ポリオキシエチレン共重合体の多分散値が約１． ０５より小さい、請求の範囲第２７項に記載の方法。
29. ２９．ポリオキシプロピレン／ポリオキシエチレン共重合体の多分散値が約１． ０３より小さい、請求の範囲第２７項に記載の方法。
30. ３０．ポリオキシプロピレン重合体がゲル透過クロマトグラフィーにより精製さ れる、請求の範囲第２７項に記載の方法。
31. ３１．共重合体が実質的に飽和されていない、請求の範囲第２７項に記載の表面 活性共重合体。
32. ３２．最初に酸化プロピレンを複数の反応性水素原子を含有している塩基化合物 と縮合させてポリオキシプロピレン重合体を製造し、そして次に酸化エチレンを ポリオキシプロピレン重合体と縮合させて下記の式：ＨＯ（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ｂ（Ｃ ３Ｈ６Ｏ）ａ（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ｂＨ［式中、疎水基（Ｃ３Ｈ６Ｏ）の分子量は約１ ７５０ダルトンでありそして該化合物の平均合計分子量は約８４００ダルトンで ある］を有するポリオキシプロピレン／ポリオキシエチレンブロック共重合体を 製造することを含んでなる非−毒性の表面活性共重合体を製造する方法において 、改良が酸化エチレンとポリオキシプロピレン重合体との縮合段階の前のポリオ キシプロピレン重合体の精製であり、それにより共重合体のポリオキシプロピレ ン部分により表されている分子量が約９００−１５００ダルトンの間でありそし て共重合体のポリオキシエチレン部分により表されている分子量が共重合体の約 ５％−９０％の間を構成しているポリオキシプロピレン／ポリオキシエチレンブ ロック共重合体を製造するような方法。
33. ３３．共重合体が約１．２００−６５００ダルトンの間の分子量範囲を有する、 請求の範囲第３２項に記載の方法。
34. ３４．共重合体のポリオキシエチレン部分が共重合体の約１０％−９０％の間を 構成している、請求の範囲第３２項に記載の方法。
35. ３５．共重合体が実質的に飽和されていない、請求の範囲第３２項に記載の表面 活性共重合体。