JPH0648955A - 消化管細胞賦活化剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 消化管に損傷を受けた人または潰瘍等のため
に消化管の手術を受けた人の消化管の修復を促進し、高
齢者においては加齢に伴ない機能が低下した消化管細胞
を賦活化し、さらに新生児の消化管細胞の成長あるいは
増殖を促進して消化管そのものの機能の発達を促進する
消化管細胞賦活化剤を提供する。 【構成】 上皮細胞成長因子と、ラクトフェリン類、ラ
クトフェリン類の加水分解物、またはこれらの混合物と
を含有することを特徴とする消化管細胞賦活化剤。 【効果】 消化管損傷を予防または改善する消化管細胞
賦活化剤を得ることができ、加齢に伴ない機能が低下し
た消化管を改善し、新生児の消化管細胞の成長または増
殖を促進する消化管細胞賦活化剤、および消化管細胞賦
活化食品を得ることができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】この発明は、消化管細胞賦活化剤
に関するものである。さらに詳しくは、この発明は、上
皮細胞成長因子と、ラクトフェリン類および／またはラ
クトフェリン類の加水分解物とを含有し、消化管疾病の
予防や治療、あるいは消化管機能の促進、賦活化等、広
く医療分野に有効な消化管細胞賦活化剤に関するもので
ある。

【０００２】

【従来の技術】上皮細胞成長因子（epidermal growth f
actor 。以下ＥＧＦと記載することがある）は、多種多
様な細胞に対して増殖刺激作用を有する、分子量約6,00
0 のペプチドであり、哺乳類のすべての体液中に含まれ
ている。ＥＧＦは母乳中に比較的高濃度に含まれること
から、ＥＧＦと新生児（動物にあっては新生仔）の成長
・発達との関係が注目され、特にラットおよびマウスの
新生仔の消化管の発達に及ぼすＥＧＦの効果が研究され
てきた。例えば、ラット新生仔にＥＧＦを添加した人工
乳を与えた場合、小腸でのＤＮＡの合成が促進されるこ
と［シー・エル・ベルセス：アメリカン・ジャーナル・
オブ・フィジオロジー（C. L. Berseth: American Jour
nal of Physiology ）、第２５３巻、第Ｇ６６２ペー
ジ、１９８７年］および胃の湿重量が増加すること［ジ
ェー・ファルコナー：バイオロジー・オブ・ザ・ネオネ
ート（J. Falconer: Biology of the Neonate ）、第５
２巻、第３４７ページ、１９８７年、およびイー・ブイ
・オローリンら：アメリカン・ジャーナル・オブ・フィ
ジオロジー（E. V. O'Loughlin, et al: American Jour
nal of Physiology ）、第２４９巻、第Ｇ６７４ペー
ジ、１９８５年）］が明かにされている。また、ラット
新生仔へのＥＧＦの投与は、小腸粘膜および小腸機能の
発達を促進することも示されている［シー・マローら：
ガストロエンテロロジー（C. Malo. et al: Gastroente
rology）、第８３巻、第２３ページ、１９８２年、およ
びワイ・オカら：エンドクリノロジー（Y. Oka, et al:
Enducriology ）、第１１２巻、第９４０ページ、１９
８３年］。

【０００３】以上のような知見に基づき、ＥＧＦを人の
消化管疾病の治療に応用した例も知られている。最近で
は、壊死性小腸炎に陥った８か月の乳児に対してＥＧＦ
を投与して致命的な消化管障害が回復したという報告が
なされ［ピー・イー・サリバンら：ランセット（P. E.
Sullivan, et al: Lancet ）、第３３８巻、第５３ペー
ジ、１９９１年］、ＥＧＦが臨床的にも有効であること
が示された。

【０００４】培養細胞に対するＥＧＦの効果および作用
機構は、１９６２年のＥＧＦ発見から現在に至るまで幅
広く検討されている。消化管系細胞に関しては、小腸上
皮細胞はＥＧＦによりＤＮＡの合成が促進され、その作
用は細胞膜に存在するＥＧＦ受容体を介して惹起される
ことが明らかにされている［エム・イー・フォーギュラ
フィテら、フェブスレター（M. E. Forgue-Lafitte, et
all： FEBS Letter）、第１１４巻、第２４３ページ、
１９８０年、およびエヌ・ガローペイヤットら、エンド
クリノロジー（N. Gallo-Payet, et al: Endocriology
）、第１１６巻、第１９４ページ、１９８５年］。

【０００５】以上のように、ＥＧＦが消化管のいわゆる
賦活化に有効であることが示されたことから、ＥＧＦを
育児用粉乳に配合することが提案された（特開昭６２−
２２８２２５号公報、および特開平１−１４８１４６号
公報）。すなわち、新生児は、消化管細胞が未成熟であ
ることから、消化管からの細菌および各種抗原の侵入を
受けやすく、さらに免疫機能が完成されていないことか
ら、感染症に罹患しやすい。そこで、消化管細胞の成長
または増殖を促進し、消化管機能の発達を促進し、細菌
等の侵入を阻害するために、ＥＧＦを育児用粉乳に配合
することが提案された。

【０００６】母乳中には、ＥＧＦ以外にも消化管細胞に
対して増殖刺激作用を示す物質が含まれている。ラクト
フェリン（lactoferrin 、以下Ｌｆと記載することがあ
る）は、母乳中に極めて多量に含まれている分子量約8
0,000の鉄結合性蛋白質であり、大腸菌、カンジダ菌、
クロストリジウム菌、ブドウ球菌等の有害微生物に対し
て抗菌作用を示すことが知られていた［ジャーナル・オ
ブ・ぺディアトリクス（Journal of Pediatrics ）、第
９４巻、第１ページ、１９７９年、およびジャーナル・
オブ・デイリー・サイエンス（Journal of Dairy Scien
ce）、第６７巻、第６０ページ、１９８４年］。また、
最近になって、ラット小腸上皮クリプト細胞のＤＮＡ合
成がＬｆにより促進されることが明らかにされ［ビー・
エル・ニコルスら：ペディアトリック・リサーチ（B.
L. Nichols, et al: Pediatric Research）、第２１
巻、第５６３ページ、１９８７年］、母乳中の新たな細
胞増殖刺激因子としてＬｆが注目されはじめている。そ
して、ＥＧＦと同様の観点から、Ｌｆについても育児用
食用組成物に配合することが提案されている（特開平１
−９３５３４号公報）。

【０００７】なお、Ｌｆおよびその分解物については、
抗菌性およびチロシナーゼ活性阻害（ヨーロッパ特許公
開第４３８７５０号）、細胞への病原菌付着防止（特開
平３−２２０１３０号公報）、抗ウイルス作用（特開平
１−２３３２２６号公報）等が知られている。

【０００８】

【発明が解決しようとする課題】近年、ストレス等のた
め胃潰瘍等の消化管疾病に陥る人が増加し、また高齢者
では消化管の機能が低下していることは言うまでもない
ことである。上記育児用粉乳の研究成果を消化管疾病の
予防、治療、または加齢に伴なって機能が低下した消化
管細胞の賦活化に役立てることは意義深いものと考えら
れる。

【０００９】この発明の発明者等は、ラクトフェリン類
およびその加水分解物の生物学的活性について研究を行
い、従来知られていなかった次の新規な事実を発見し
た。 ラクトフェリン類を含む蛋白質は、加水分解された
場合には通常その生物学的活性を失うが、ラクトフェリ
ン類の加水分解物はラクトフェリンが有している細胞増
殖作用は保持され、ＥＧＦと相乗的に作用してより強力
な消化管細胞の成長または増殖促進作用を有すること。

【００１０】 ラクトフェリン類もＥＧＦと相乗的に
作用してラクトフェリン単独およびＥＧＦ単独の場合よ
り強力な消化管細胞の成長または増殖促進作用を有する
こと。 この発明は、上記の発見に基づくものであり、消化管に
損傷を受けた人あるいは潰瘍等のため消化管の手術を受
けた人の消化管の修復を促進し、高齢者においては、加
齢に伴ない機能が低下した消化管細胞を賦活化し、さら
には、新生児の消化管細胞の成長あるいは増殖を促進し
て消化管そのものの機能の発達を促進する消化管細胞賦
活化剤を提供することを目的としている。

【００１１】

【課題を解決するための手段】この発明は、上記の課題
を解決するものとして、上皮細胞成長因子と、ラクトフ
ェリン類、ラクトフェリン類の加水分解物、またはこれ
らの混合物とを含有することを特徴とする消化管細胞賦
活化剤を提供する。また、この発明の消化管細胞賦活化
剤は、上記ラクトフェリン類、ラクトフェリン類の加水
分解物、またはこれらの混合物の有効投与量が成人１日
当り１〜５００mg／kg体重であり、上皮細胞成長因子の
有効投与量が同じく0.01〜５０μg ／kg体重であること
を望ましい態様ともしている。

【００１２】以下、この発明について詳しく説明する。
この発明において使用するラクトフェリン類は、市販の
Ｌｆ、獣乳、人乳から常法により分離されるＬｆ、これ
らのＬｆから常法により鉄を除去したアポラクトフェリ
ン、アポラクトフェリンに常法により鉄、銅、亜鉛、マ
ンガン等の金属を完全にまたは一部キレートさせた金属
飽和、または金属部分飽和ラクトフェリン、またはこれ
らの混合物のいずれであってもよい。

【００１３】この発明において使用するラクトフェリン
類の加水分解物は、上記ラクトフェリン類を常法により
酸または酵素で加水分解して得られた分解物、この加水
分解物を常法により精製したもの、またはこれらの混合
物のいずれであってもよい。また上記ラクトフェリン類
とその加水分解物とを混合して使用することもできる
が、後記する試験例から明らかなようにラクトフェリン
類の加水分解物でもＥＧＦとの相乗効果が認められてい
る。

【００１４】この発明において使用するＥＧＦは、常法
により人尿、獣乳または人乳から単離されたもの、組換
えＤＮＡ技術により製造されたもの、化学的に合成され
たもの、市販品またはこれらの混合物、のいずれのもの
であってもよい。この発明の消化管細胞賦活化剤は、そ
のまま医薬品として、または食品等に添加、混合して使
用することもできる。医薬品として用いる場合には、常
法により賦形剤、増量剤、希釈剤、溶解補助剤等と適宜
混合し、錠剤、丸剤、散剤、カプセル剤、坐剤等の形態
で使用することができる。

【００１５】この発明の消化管細胞賦活化剤の有効成分
であるＥＧＦと、ラクトフェリン類および／またはその
加水分解物の投与量は、対象者の年齢、体重、症状等に
より変り得るが、成人１日当りラクトフェリン類および
／またはラクトフェリン類の加水分解物は、１〜５００
mg／kg、ＥＧＦは0.01〜５０μg ／kgが望ましい範囲で
ある。

【００１６】この発明の消化管細胞賦活化剤を食品等に
使用する場合には、所要量を流動食、経腸栄養食、調製
粉乳等に適宜添加することができる。もちろん、ラクト
フェリン類、ラクトフェリン類の加水分解物およびＥＧ
Ｆを本来含有しない食品にそれらを添加することは極め
て有効である。ラクトフェリン類、その加水分解物およ
びＥＧＦは、乳中に存在する天然物であるから、それら
の安全性については問題がないことは明らかである。

【００１７】次に試験例を示してこの発明の作用効果を
具体的に説明する。試験例１ この試験は、小腸上皮細胞に対するＥＧＦのＤＮＡ合成
促進活性の最適作用濃度を決定するために行なった。 （１）試料の調製 市販のマウス顎下腺由来ＥＧＦ（宝酒造社製）を使用し
た。

【００１８】（２）試験方法 ラット小腸上皮クリプト細胞であるＩＥＣ１８細胞（Am
erican Type CultureCollectionから購入）を２４穴カ
ルチャープレートに１穴当り１万個のずつ蒔き、１０％
牛胎児血清を含むダルベッコ変法イーグル培養液（以下
ＦＢＳ−ＤＭＥＭと略記する）で細胞がコンフルエント
になるまで培養した（培養液は、１穴当り１ml使用し
た）。培養液を１％ＦＢＳ−ＤＭＥＭと交換し、さらに
３日培養し、細胞を静止期に導入した。培養液を種々の
濃度のＥＧＦを含む１％ＦＢＳ−ＤＭＥＭ（0.5ml ）と
交換し、１８時間培養した。培養液を ³Ｈ−チミジン
（１μＣ／ml）を含むＤＭＥＭ（0.35ml）と交換し、さ
らに２時間培養した。細胞をリン酸緩衝液［ＰＢＳ
（−）、２ml］で２度洗浄し、のち氷冷５％トリフルオ
ロ酢酸（５％ＴＦＡ、２ml）を加え、冷蔵庫に１時間放
置した。細胞を５％ＴＦＡ（２ml）で２度洗浄し、１規
定のＮａＯＨ（0.4ml ）を加え、３７℃で１時間放置
し、細胞を溶解した。６規定のＨＣｌ（0.08ml）を加
え、中和し、のちＤＮＡに取り込まれた ³Ｈ−チミジン
量を液体シンチレイションカウンタ−で測定した。

【００１９】（３）試験結果 この試験の結果は表１に示すとおりである。表１から明
らかなように、この細胞のＤＮＡ合成に対するＥＧＦの
最適作用濃度は１０ｎｇ／mlであることが判明したの
で、以後の試験例において、ＥＧＦは１０ｎｇ／mlの濃
度で使用した。

【００２０】

【表１】

【００２１】試験例２ この試験は、ＩＥＣ１８細胞のＤＮＡ合成に対するＬｆ
とＥＧＦの併用、またはＬｆの加水分解物（Ｌｆ−Ｈ
ｙ）とＥＧＦの併用の効果を調べるために行った。 （１）試料の調製 市販のマウス顎下腺由来ＥＧＦ（宝酒造社製）および牛
ラクトフェリン（（ｂＬｆ）（雪印乳業社製）を使用し
た。

【００２２】Ｌｆ−Ｈｙは、ｂＬｆから次のようにして
調製した。市販のｂＬｆ（オレオフィナ社製）を精製水
に５００ｇ／9.5lの割合で溶解し、得られた溶液に１モ
ル塩酸を添加してpHを3.0 に調整し、のち市販の豚ペプ
シン（シグマ社製）をｂＬｆ５００ｇに対して１０ｇの
割合で添加し、３７℃で６時間加水分解した。次に６規
定の水酸化ナトリウムでpHを7.0 に調整し、８０℃で１
０分間加熱して酵素を失活させ、室温に冷却し、セライ
ト濾過し、濾液を凍結乾燥し、Ｌｆ−Ｈｙを得た。

【００２３】（２）試験方法 試験例１と同一の方法で試験した。なお、試験試料は、
種々の濃度のｂＬｆまたはｂＬｆ−Ｈｙを添加した試
料、およびＥＧＦを１０ｎｇ／mlと、種々の濃度のｂＬ
ｆまたはｂＬｆ−Ｈｙを共に添加した試料である。 （３）試験結果 この試験の結果は、図１および図２に示すとおりであ
る。図１は、ｂＬｆの添加濃度と ³Ｈ−チミジン取り込
み量の関係を示し、縦軸は ³Ｈ−チミジン取り込み量、
横軸はｂＬｆの添加濃度をそれぞれ示す。図中○および
●は、それぞれｂＬｆ単独（ｎ＝４）、およびＥＧＦ共
存（ｎ＝４）を示す。図２は、ｂＬｆ−Ｈｙの添加濃度
と ³Ｈ−チミジン取り込み量の関係を示し、縦軸は ³Ｈ
−チミジン取り込み量、横軸はｂＬｆ−Ｈｙの添加濃度
をそれぞれ示す。図中○および●は、それぞれｂＬｆ−
Ｈｙ単独（ｎ＝４）、およびＥＧＦ共存（ｎ＝４）を示
す。

【００２４】図１から明らかなようにｂＬｆ単独では、
効果は認められなかったが、ＥＧＦ共存下では、ｂＬｆ
濃度１７〜１５０μg ／mlにおいてＩＥＣ１８細胞ＤＮ
Ａへの ³Ｈ−チミジン取り込み量の顕著な増加が認めら
れ、ＥＧＦとｂＬｆがＤＮＡ合成に相乗的に作用するこ
とが判明した。さらに、図２から明らかなようにｂＬｆ
−Ｈｙ単独では、ｂＬｆ−Ｈｙ濃度５０および１５０μ
g ／mlで効果が認められ、ＥＧＦ共存下では、ｂＬｆ−
Ｈｙ濃度５０および１５０μg ／mlでｂＬｆ−Ｈｙ単独
により ³Ｈ−チミジン取り込み量が顕著に増大し、ｂＬ
ｆ−ＨｙとＥＧＦとのＤＮＡ合成に対する相乗効果が認
められた。なお、ｂＬｆおよびＬｆ−Ｈｙの種類を変更
して試験したが、ほぼ同様の結果が得られた。

【００２５】試験例３ 試験例２において、ＩＥＣ１８細胞ＤＮＡへの ³Ｈ−チ
ミジン取り込み量がＥＧＦとｂＬｆ、またはＥＧＦとｂ
Ｌｆ−Ｈｙの併用で特に促進される事実が明らかになっ
たので、この試験はこの事実が実際に最終的な細胞の賦
活化に反映されるか否か、すなわち細胞数の増加に影響
を与えるか否かを調べるために行った。

【００２６】（１）試料の調製 ＥＧＦ、ｂＬｆ、およびｂＬｆ−Ｈｙは試験例２と同一
のものを使用した。 （２）試験方法 ＩＣＥ１８細胞（試験例１と同一のもの）を２４穴カル
チャープレートに１穴当り５０００個のずつ蒔き、次の
試験検体を含む１％ＦＢＳ−ＤＭＥＭ（0.5ml）で１０
日間培養した。この間、培養３日目および６日目に培養
液を交換し、３日目、６日目および１０日目に細胞数を
測定した。細胞数は、細胞を0.25％トリプシン溶液で処
理し、細胞を浮遊させ、血球計数板を用いて測定した。

【００２７】試験検体は、何も添加しない試料、ＥＧＦ
を１０ng／ml添加した試料、ｂＬｆまたはｂＬｆ−Ｈｙ
を５０μｇ／ml添加した試料、およびＥＧＦを１０ng／
mlと、ｂＬｆまたはｂＬｆ−Ｈｙを５０μg ／mlとを共
に添加した試料である。 （３）試験結果 この試験の結果は、図３および図４に示すとおりであ
る。図３は、マウスＥＧＦ存在下、牛ラクトフェリンの
ラット小腸上皮細胞に対する増殖効果を示し、図４は、
マウスＥＧＦ存在下、牛ラクトフェリンのペプシン加水
分解物のラット小腸上皮細胞に対する増殖効果を示す。
図３において△、▲、○および●は、それぞれ対照群
（無添加群。ｎ＝６）、ＥＧＦ添加群（ｎ＝６）、ｂＬ
ｆ添加群（ｎ＝６）およびＥＧＦとｂＬｆとを添加した
群（ｎ＝６）を示す。図４において△、▲、〇および●
は、それぞれ対照群（無添加群。ｎ＝６）、ＥＧＦ添加
群（ｎ＝６）、ｂＬｆ−Ｈｙ添加群（ｎ＝６）およびＥ
ＧＦとｂＬｆ−Ｈｙとを添加した群（ｎ＝６）を示す。

【００２８】これら、図３および図４から明らかなよう
に、ＥＧＦを単独で添加した群（▲）の細胞数は、何も
添加しない対照群（△）とほぼ同じ割合で増加し、明ら
かにＥＧＦ単独では効果がなかった。一方、図３のＥＧ
ＦとｂＬｆとを添加した群（●）では、培養６日目およ
び１０日目に細胞数が著しく増加することが認められ
た。同様に、図４のＥＧＦとｂＬｆ−Ｈｙとを添加した
群（●）でも、細胞数が培養６日目および１０日目に有
意に増大した。また、図３のｂＬｆ単独添加群（○）お
よび図４のｂＬｆ−Ｈｙ単独添加群（○）は、ＥＧＦと
共に添加した群よりも効果は劣るが、対照群（△）およ
びＥＧＦ単独添加群（▲）と比べると、培養６日目およ
び１０日目に細胞数が有意に増加することが認められ
た。なお、ｂＬｆおよびｂＬｆ−Ｈｙの種類を変更して
試験したが、ほぼ同様の結果が得られた。

【００２９】

【実施例】次に実施例を示してこの発明をさらに具体的
に説明するが、この発明は以下の実施例に限定されるも
のではない。なお、各実施例で使用する各種ラクトフェ
リンおよびＥＧＦは以下の参考例のとおりに調製した。

【００３０】参考例１（アポラクトフェリンの調製） アポラクトフェリンは、市販の牛ラクトフェリン（オレ
オフィナ社製）より、鈴木ら（栄養と食糧、第３１巻、
第３９５ページ、１９７８年）の方法により次のように
して調製した。１％ラクトフェリン水溶液１ｌを２０倍
量の0.05％ＥＤＴＡを含む0.1 モルのクエン酸溶液（pH
2.2 ）に対して４℃下で３０時間透析し、さらに、脱イ
オン水に対して２４時間透析し、凍結乾燥し、約１０ｇ
のアポラクトフェリンを得た。

【００３１】参考例２（ＥＧＦの調製） ＥＧＦは、コーエンおよびカーペンターの方法［エス・
コーエンおよびジー・カーペンター：プロスィーディン
グズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイ
エンシス・ユー・エス・エイ（S. Cohen and G. Carpen
ter: Proceedings of the National Academy of Scienc
es U.S.A. ）、第７２巻、第１３１７ページ、１９７５
年］、サベージおよびハーパーの方法［シー・アール・
ジュニア・サベージおよびアール・ハーパー：アナリテ
ィカル・バイオケミストリー（C.R. Jr. Savage and R.
Happer: Analytical Biochemistry）、第１１１巻、第
１９５ページ、１９８１年］および西室らの方法［西室
ら：ケミカル・アンド・ファーマセウティカル・ブレテ
ィン（S. Nishimuro，et al: Chemical and Pharmaceut
ical Bulletin ）、第３３巻、第４０３７ページ、１９
８５年］によりヒト尿から次のようにして調製した。

【００３２】約２０ｌのヒト尿に水酢酸１ｌを加えて酸
性となし、濃塩酸を加えてpHを3.0〜3.3 に調整した。
イオン交換樹脂Ｂｉｏ−Ｒｅｘ７０（バイオラッド社
製）を水酢酸でpHを3.1 に調整し、５％酢酸で洗浄し、
上記の尿に加え、４℃で１８時間攪拌した。２〜４時間
放置後上澄を廃棄し、樹脂を0.01規定塩酸で洗浄し、１
モル酢酸アンモニウム（pH8.0 ）でＥＧＦを溶出させ
た。溶出液を凍結乾燥し、乾燥物を５０mlの蒸留水に溶
解し、ペプスタイン0.5mg 、２ミリモルのアルギニン、
およびウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）２００mgを添加し
た。

【００３３】この溶液に1,500 mlのエタノールを加えて
攪拌し、３０分間放置し、1,000 ×g で２０分間遠心
し、沈査に２ミリモルのアルギニン１５mlを添加し、塩
酸でpHを3.0 に調整し、さらに、30.000×g ２０分間遠
心し、上澄を得た。0.05％ギ酸で平衡化したＤＥＡＥセ
ルロース（ワットマン社製）を充填したカラム（４×１
４cm）に上記の上澄を通液し、カラムに吸着せずに溶出
するＥＧＦを集め、溶出液を凍結乾燥し、乾燥物を２０
mlの0.05規定塩酸で溶解し、pHを1.5 に調整し、3,000
×g で３０分間遠心し、上澄を得た。

【００３４】Ｂｉｏ−ＧｅｌＰ−１０（バイオラッド社
製）を充填したカラム（４×９０cm）を0.05規定塩酸で
平衡化し、毎時４２mlの流速で溶出させた。大部分のＵ
Ｖ吸収物質は1.5 カラム容積に溶出するが、ＥＧＦは1.
7 カラム容積以後に溶出した。活性分量を集め、アンモ
ニア水でpHを6.0 に調整し、凍結乾燥した。乾燥物を0.
04モル酢酸アンモニウム（pH3.9)５０mlに溶解し、阻外
濾過して５mlに濃縮した。

【００３５】ＣＭセルロース（ワットマン社製）を充填
したカラム（0.9 ×１０cm）を0.04モル酢酸アンモニウ
ムで平衡化し、上記濃縮液を添加し、0.04モル酢酸アン
モニウムで洗浄し、のち１４mlの１モル酢酸アンモニウ
ムで溶出し、溶出液を凍結乾燥し、0.02モル酢酸アンモ
ニウム（pH5.3)５mlに溶解した。ＤＥ−５２セルロース
（ワットマン社製）を充填したカラム（0.9 ×１０cm）
を0.02モル酢酸アンモニウム（pH5.3 ）で平衡化し、毎
時８mlの流速で溶出し、上記溶液の添加後0.02モル酢酸
アンモニウムで洗浄し、0.02〜0.3 モル酢酸アンモニウ
ムの濃度勾配で溶出して、３つのピーク（１〜３）を得
た。ＥＧＦ活性の主要なピークは１および３であり、約
１５０〜２５０μg のＥＧＦを得た。

【００３６】参考例３（鉄飽和ラクトフェリンの調製） 鉄飽和ラクトフェリンは、市販の牛ラクトフェリン（オ
レオフィナ社製）より、鈴木ら（栄養と食糧、第３１
巻、第３９５ページ、１９７８年）の方法により次のよ
うにして調製した。ラクトフェリンの１％水溶液１ｌに
３ミリモルの塩化第二鉄を含む0.1 モルのクエン酸ナト
リウム溶液0.2 ｌを加え、１時間おだやかに攪拌し、の
ち脱イオン水に対して２４時間透析し、凍結乾燥し、約
１０ｇの鉄飽和ラクトフェリンを得た。

【００３７】実施例１（錠剤製造例） ラクトフェリン（オレオフィナ社製） 50.0（mg) 参考例２と同一の方法によるＥＧＦ 0.01 結晶セルロース 170.0 コーンスターチ 66.0 タルク 11.0 ステアリン酸マグネシウム 3.0 １錠当り上記の割合の各原料を常法により均一に混合
し、造粒し、乾燥し、打錠し、錠剤を得た。なお、ＥＧ
Ｆ以外の原料はいずれも市販品を用いた。

【００３８】実施例２（散剤製造例） 参考例１と同一の方法によるアポラクトフェリン 50.0（ｇ） 参考例２と同一の方法によるＥＧＦ 0.1 結晶セルロース 375.0 コーンスターチ 575.0 上記各材料を均一に混合し、常法により散剤１０００袋
を調製した。なお、アポラクトフェリンおよびＥＧＦ以
外の原料はいずれも市販品を用いた。

【００３９】実施例３（カプセル剤製造例） 参考例３と同一の方法による鉄飽和ラクトフェリン 10.0（mg） 参考例２と同一の方法によるＥＧＦ 0.01 乳糖 120.0 結晶セルロース 42.5 カルボキシルメチルセルロース 10.0 タルク 15.0 ステアリン酸マグネシウム 2.5 １錠当り上記の割合の各原料を常法により均一に混合
し、カプセル充填機を用いてカプセル剤を調製した。な
お、鉄飽和ラクトフェリンおよびＥＧＦ以外の原料はい
ずれも市販品を用いた。

【００４０】実施例４（カプセル剤製造例） 参考例２と同一の方法によるＥＧＦ 2.0mg 試験例２と同一の方法によるラクトフェリン加水分解物 20.0（ｇ） 結晶セルロース 78.0 コーンスターチ 20.0 乳糖 17.0 ポリビニルピロリドン 3.0 上記各材料を均一に混合し、常法により顆粒化し、ゼラ
チン硬カプセル１０００カプセルに充填し、カプセル剤
を調製した。なお、ラクトフェリン加水分解物およびＥ
ＧＦ以外の原料はいずれも市販品を用いた。

【００４１】実施例５（散剤製造例） ラクトフェリン（オレオフィナ社製） 25.0（ｇ） 試験例２と同一の方法によるラクトフェリン加水分解物 25.0 参考例２と同一の方法によるＥＧＦ 0.1 結晶セルロース 375.0 コーンスターチ 575.0 上記各材料を均一に混合し、常法により散剤１０００袋
を調製した。なお、ラクトフェリン加水分解物およびＥ
ＧＦ以外の原料はいずれも市販品を用いた。

【００４２】実施例６（調製粉乳製造例） カゼイン粉末（ニューシーランド・デイリーボード製）
1.3kg を温水１５ｌに溶解し、乳糖5.6kg 、植物性油脂
（日本油脂社製）2.8kg 、ビタミン、ミネラルを添加
し、混合し、均質化し、１２０℃で３秒間殺菌した。こ
の溶液に、市販のラクトフェリン（オレオフィナ社製）
５０ｇ、および参考例２と同一の方法により調製したＥ
ＧＦ５０mgを５００mlの殺菌水に溶かした溶液を添加
し、均一に混合し、常法により噴霧乾燥し、調製粉乳約
１０kgを得た。

【００４３】実施例７（経腸栄養剤製造例） カゼイン粉末（ニュージーランド・デイリーボード製）
２kg、大豆蛋白質（不二製油社製）1.5kg 、および試験
例２と同一の方法により調製したラクトフェリン分解物
１kgを温水６０ｌに溶解した。この溶液に難消化性デキ
ストリン（松谷化学工業社製）12.5kg、植物性油脂（日
本油脂社製）３kg、ビタミン、ミネラルを添加し、混合
し、均質化し、全量を１００ｌに調製し、１５０℃で２
秒間殺菌した。この混合液に、参考例２と同一の方法に
より調整したＥＧＦ５００mgを水１００mlに溶解し、無
菌フィルターを通したＥＧＦ水溶液を無菌的に添加し、
混合し、均質化し、液状経腸栄養剤約１００kg得た。

【００４４】

【発明の効果】この発明によって奏せられる効果は次の
とおりである。 （１）消化管損傷を予防または改善する消化管細胞賦活
化剤を得ることができる。 （２）加齢に伴ない機能が低下した消化管を改善し、新
生児の消化管細胞の成長または増殖を促進する消化管細
胞賦活化剤、および消化管細胞賦活化食品を得ることが
できる。

【図面の簡単な説明】

【図１】牛ラクトフェリンの添加濃度と ³Ｈ−チミジン
取り込み量の関係を示す。

【図２】牛ラクトフェリンのペプシン加水分解物の添加
濃度と ³Ｈ−チミジン取り込み量の関係を示す。

【図３】マウスＥＧＦおよび／または牛ラクトフェリン
のラット小腸上皮細胞に対する増殖効果を示す。

【図４】マウスＥＧＦおよび／または牛ラクトフェリン
のペプシン加水分解物のラット小腸上皮細胞に対する増
殖効果を示す。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 上皮細胞成長因子と、ラクトフェリン
   類、ラクトフェリン類の加水分解物、またはこれらの混
   合物とを含有することを特徴とする消化管細胞賦活化
   剤。
2. 【請求項２】 ラクトフェリン類、ラクトフェリン類の
   加水分解物、またはこれらの混合物の有効投与量が、成
   人１日当り１〜５００mg／kg体重である請求項１の消化
   管細胞賦活化剤。
3. 【請求項３】 上皮細胞成長因子の有効投与量が、成人
   １日当り0.01〜５０μｇ／kg体重である請求項１の消化
   管細胞賦活化剤。