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JPH04637B2 - - Google Patents

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Publication number
JPH04637B2
JPH04637B2 JP57157442A JP15744282A JPH04637B2 JP H04637 B2 JPH04637 B2 JP H04637B2 JP 57157442 A JP57157442 A JP 57157442A JP 15744282 A JP15744282 A JP 15744282A JP H04637 B2 JPH04637 B2 JP H04637B2
Authority
JP
Japan
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oxidase
layer
acid
multilayer
peroxidase
Prior art date
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Expired
Application number
JP57157442A
Other languages
English (en)
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JPS5946854A (ja
Inventor
Yoshikazu Amano
Fumitada Arai
Masao Kitajima
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Fujifilm Holdings Corp
Original Assignee
Fuji Photo Film Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=15649738&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=JPH04637(B2) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Fuji Photo Film Co Ltd filed Critical Fuji Photo Film Co Ltd
Priority to JP57157442A priority Critical patent/JPS5946854A/ja
Priority to US06/530,207 priority patent/US4587100A/en
Priority to DE8383108933T priority patent/DE3364963D1/de
Priority to EP83108933A priority patent/EP0103288B2/en
Publication of JPS5946854A publication Critical patent/JPS5946854A/ja
Publication of JPH04637B2 publication Critical patent/JPH04637B2/ja
Granted legal-status Critical Current

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    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
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    • G01—MEASURING; TESTING
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    • G01N33/52—Use of compounds or compositions for colorimetric, spectrophotometric or fluorometric investigation, e.g. use of reagent paper and including single- and multilayer analytical elements
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Description

【発明の詳細な説明】 本発明は多層分析材料に関し、特に液体試料中
の過酸化水素の定量を実施する場合、または特定
の成分をオキシダーゼ酵素反応系に導入して生成
した過酸化水素の定量により液体試料中の特定の
成分の定量を実施する場合に有効なペルオキシダ
ーゼを含む過酸化水素検出呈色指示薬系を含む多
層分析材料（多層分析要素、多層分析フイルム、
多層分析素子などとも称される）の改良に関する
ものである。 オキシダーゼ酵素を用い、被検物質又はその反
応生成物を酸化すると同時に生成されるH2O2を
適当な手段により定量する定量法は、近年ますま
す重要になつてきている。その理由はペルオキシ
ダーゼを用いて色素の生成反応に導き、比色的に
H2O2を定量する方法をはじめとして、電極反応
などの手段によりH2O2を定量する方法などH2O2
の定量は確実に実施できるからである。 このような原理に基づく比色定量法としては、
トラインダー（P.Trinder）が導入した試薬系を
用いる方法（「Ann.Clin.Biochem.」６、24−27
（1969））がよく知られている。この方法は、オキ
シダーゼ酵素によつて生成するH2O2にペルオキ
シダーゼを作用させ、４−アミノアンチピリン
（またはその類縁体）とフエノール類（またはナ
フトール類）との酸化カツプリング反応を起さ
せ、生成した色素を定量するものである。この反
応系の利点は、オキシダーゼ酵素の種類を変えて
も同じ検出系を利用することができる点にあり、
広く、各種の分析項目への応用が検討されてい
る。これらのうち、臨床化学検査上特に重要なも
のは、グルコースオキシダーゼ、コレステロール
オシダーゼ、ウリカーゼ、グリセロールオキシダ
ーゼ、フオスフオグルコースオキシダーゼなどで
ある。 これらのオキシダーゼ酵素と生成するH2O2の
検出系とを一体型の多層分析フイルムや、紙片
等への含浸ストリツプスの形体とした臨床検査用
分析材料も広く実用化されている。 これらの分析材料は、被検物質の検出に直接関
与する試薬類を含有する組成物が、支持体となる
紙状物や、フイルム上の支持体に、含浸あるい
は塗布された型体をしている。 一体型の多層分析フイルムは種々の構成をして
おり、必要に応じて、各種の機能層が、積層され
た形で組み込まれている。これらの機能層として
公知のものとしては、液体試料の均一展開を目的
とした展開層（特公昭53−21677、特開昭55−
164356）、反射測定の白色散乱面及び、上層にあ
る有色成分と生成された検出用色素とを光学的に
隔離する為の光遮蔽層（特光昭53−21677、特開
昭51−40191、特開昭55−26428、特開昭55−
26428、特開昭55−164356等）、物質の選択的な拡
散を目的としたバリヤー層（特開昭52−3488）ま
たは液体遮断層（特開昭58−77660、特開昭58−
77661）、生成色素の媒染による効率的な検出を目
的とした検出層（特開昭51−40191、特開昭53−
131089）、生成色素の他層への移動の防止を目的
としたマイグレーシヨン防止層（特開昭54−
29700）、層間の接着性改良を目的とした接着層
（特開昭55−164356等）などがある。 グルコースオキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、
１，７−ジヒドロキシナフタレンおよび４−アミ
ノアンチピリンを含む試薬層を有する前述の特開
昭55−164356等に開示の構成のグルコース定量用
多層分析フイルムにおいて、液体試料として溶血
全血または溶血血漿を用いた場合に、非溶血全血
または非溶血血漿を用いた場合に比べて試薬層の
発色光学濃度が小さくなり、従つてグルコース濃
度値が小さな値になることが見出され、この発色
光学濃度が小さくなる現象は血中カタラーゼの干
渉によるものと推定された。本発明者らはカタラ
ーゼによる干渉の除去のため鋭意研究を続けたと
ころ、グルコース定量用多層分析フイルムにおい
てグルコースオキシダーゼを含む層またはペルオ
キシダーゼを含む試薬層に酢酸ナトリウムまたは
酢酸を添加することにより発色効率が著しく向上
し、血中カタラーゼによる干渉作用が有効に解消
されること、さらに使用条件下における多層分析
材料中の一連の反応速度が速まることを見出し本
発明に到達した。 本発明の目的はペルオキシダーゼを含むH2O2
検出呈色試薬組成物を含む試薬層を有する多層分
析材料において、血中カタラーゼによる呈色光学
濃度の低下、すなわち測定値の低下として現われ
る干渉作用が除去された改良された多層分析材料
を提供することである。 本発明の他の目的はオキシダーゼおよびペルオ
キシダーゼを含むH2O2検出呈色試薬組成物を含
む試薬層を有する多層分析材料において、発色ま
たは呈色効率が向上し、血中カタラーゼによる呈
色光学濃度の減少、すなわち測定値の低下として
現われる干渉作用が除去された改良された多層分
析材料を提供することである。 本発明の他の目的はオキシダーゼおよびペルオ
キシダーゼを含むH2O2検出呈色試薬組成物を含
む試薬層を有する多層分析材料において、使用条
件下において反応速度が早く、定量分析操作に要
する時間が短縮可能な改良された多層分析材料を
提供することである。 本発明の他の目的はオキシダーゼおよびペルオ
キシダーゼを含むH2O2検出呈色試薬組成物を含
む試薬層を有する多層分析材料において、測定領
域が拡大された、すなわちダイナミツクレンジが
広い改良された多層分析材料を提供することであ
る。 本発明の他の目的はグルコースオキシダーゼお
よびペルオキシダーゼを含むH2O2検出呈色試薬
組成物を含む試薬層を有するグルコース定量用多
層分析材料において、発色効率が向上し、血中カ
タラーゼによる呈色光学濃度の減少、すなわち測
定値の低下として現れる干渉作用が除去され、使
用条件下において反応速度が早くて定量分析操作
に要する時間が短縮可能であり、かつ測定領域が
拡大された、すなわちダイナミツクレンジが広
い、改良された多層分析材料を提供することであ
る。 本発明は、水不浸透性光透過性支持体の上に、
少なくともペルオキシダーゼおよび過酸化水素の
存在下で検出可能な変化を起こすインジケータを
含む呈色指示薬組成物を含む試薬層、および多孔
性展開層の二つの層を少なくとも有しこの順に積
層されてなる多層分析材料において、前記試薬層
または試薬層より上側の層に、炭素原子数１ない
し５の直鎖状又は分岐状脂肪族モノカルボン酸、
又はそのナトリウム塩、カリウム塩又はアンモニ
ウム塩が含有されていることを特徴とする多層分
析材料である。 本発明の多層分析材料における光透過性水不浸
透性支持体は波長約200nｍから約900nｍの範囲
の少なくともある範囲の波長領域の電磁波（紫外
線、近紫外線、可視光、または近赤外線）を約40
％以上、好ましくは約65％以上透過させることが
でき、実質的に水をその内部に浸透させることが
なく、かつその表面に設けられる後述の試薬層ま
たは下塗層に含有されるバインダーポリマーまた
は他の成分と実質的に化学反応を生じさせない素
材からなる。前述の規準にあうかぎり支持体とし
て用いることができる素材は何でもよい。支持体
としては、ポリエチレンテレフタレート、ビスフ
エノールＡのポリカーボネート、ポリメチルメタ
クリレート、ポリスチレン、セルロースエステル
（例、セルロースジアセテート、セルローストリ
アセテート、セルロースアセテートプロピオネー
ト）などのポリマーからなる透明シートまたはフ
イルムや透明ガラス板などで厚さ約50μｍから約
２mm、好ましくは約70μｍから約0.5mmの範囲のも
のを用いることができる。 支持体の表面には試薬層（または他の機能層）
を支持体に一体に接着することを容易にする目的
で公知の下塗層を設けるか、あるいは支持体の表
面を公知の化学的処理（例、酸処理、アルカリ処
理）または物理化学的処理（例、コロナ放電処
理、グロー放電処理、紫外線照射処理、火焔処
理）を施すことができる。 本発明の多層分析材料に用いられる少なくとも
ペルオキシダーゼを含む試薬層とは少なくともペ
ルオキシダーゼを含む過酸化水素検出用呈色指示
薬組成物（以下、H2O2呈色試薬という。）を含む
試薬組成物が親水性バインダーポリマーのマトリ
クスの中に分散または溶解されてなる試薬層であ
る。 H2O2呈色試薬はペルオキシダーゼ、およびペ
ルオキシダーゼと過酸化水素の存在下で検出可能
な変化（一般に色濃度の変化、発色または色相の
変化）を起す２種以上の化合物の組合せからなる
インジケータとからなる。インジケータとして (1) 「Ann.Clin.Biochem.」、６、24−27（1969）、
米国特許3992158、特公昭56−45599、特開昭55
−164356、特開昭56−125373、特願昭57−6606
等に開示の、色原体として４−アミノアンチピ
リンまたはその誘導体とカプラーとしてのフエ
ノール、ナフトール、またはそれらの誘導体の
組合せ。 ４−アミノアンチピリン（４−アミノ−２，
３−ジメチル−１−フエニル−３−ピラゾリン
−５−オン）の誘導体の例として、４−アミノ
−２，３−ジメチル−１−（３−クロロフエニ
ル）−３−ピラゾリン−５−オン；４−アミノ
−２，３−ジメチル−１−（２，４，６−トリ
クロロフエニル）−３−ピラゾリン−５−オ
ン；４−アミノ−２−メチル−３−フエニル−
１−（２，４，６−トリクロロフエニル）−３−
ピラゾリン−５−オン、４−アミノ−１−（４
−アミノフエニル）−２，３−ジメチル−３−
ピラゾリン−５−オン、４−アミノ−１−〔４
−（ジエチルアミノ）フエニル〕−２，３−ジメ
チル−３−ピラゾリン−５−オン、４−アミノ
−１−（４−アセトアミドフエニル）−２，３−
ジメチル−３−ピラゾリン−５−オン、４−ア
ミノ−１−（アミノ−２−エチルフエニル）−
２，３−ジメチル−３−ピラゾリン−５−オ
ン、４−アミノ−１−（アミノ−４−メチルフ
エニル）−２，３−ジメチル−３−ピラゾリン
−５−オンをあげることができる。４−アミノ
アンチピリンおよびその誘導体はいずれもその
酸付加塩（例、塩化水素塩）としても用いるこ
とができる。 ナフトールとして、１−ナフトール、２−ナ
フトールをあげることができる。 フエノール誘導体としてカテコール、レゾル
シン、ピロガロール、フロログルシン、ｏ−、
ｍ−、またはｐ−クレゾール、ｏ−、ｍ−、ま
たはｐ−メトキシフエノール、ｏ−、ｍ−、ま
たはｐ−スルホフエノール、ｏ−またはｐ−ク
ロロフエノールをあげることができる。 ナフトール誘導体として、１，７−ジヒドロ
キシナフタレン、４−メトキシ−１−ナフトー
ルをあげることができる。 フエノール誘導体およびナフトール誘導体と
してこれらの他にC.E.K.Mees、T.H.James編
「The Theory of the Photographic Process」
Third Edition（Macmillan Co.、New York、
1966年発行）第387−396ページに記載の化合物
も用いることができる。 これらの組合せのうちで好ましい組合せは４
−アミノアンチピリンと１，７−ジヒドロキシ
ナフタレンの組合せ、４−アミノ−２，３−ジ
メチル−１−（２，４，６−トリクロロフエニ
ル）−３−ピラゾリン−５−オンと１，７−ジ
ヒドロキシナフタレンの組合せである。 (2) 特公昭55−25840に開示の色原体として５−
ピラゾロン誘導体または４−オキサゾロン誘導
体と、カプラーとしてフエノール類、ナフトー
ル類またはその誘導体との組合せ。 (3) 特開昭49−114987に開示の色原体としての４
−アミノピラゾロン誘導体（例、１−（４−ス
ルホフエニル）−２−メチル−３−フエニル−
４−アミノ−３−ピラゾリン−５−オン）とカ
プラーとしてのフエノール、フエノール誘導
体、または多価フエノール（例、カテコール、
レゾルシン、ヒドロキノン、クレゾール、グア
ヤコール、ピロガロール、オルシノール、没食
子酸）との組合せ。 (4) 特公昭57−5519に開示の染料形成物質として
ｐ−トルエンスルホニルヒドラジノ−ベンゾチ
アゾリウム、キノリニウム、またはピリジニウ
ム誘導体と、カプラーとしてフエノール類、ナ
フトール類、それらの誘導体、芳香族アミン類
または反応性メチレン化合物との組合せ、また
は染料前駆体としてトリアリールイミダゾール
誘導体（単独でも用いられる）。 (5) 特開昭57−142562に開示の水素供与体（色原
体）として４−アミノアンチピリン類、４−置
換アンチピリン類、Ｎ，Ｎ−ジ置換−ｏ−また
はｐ−フエニレンジアミン類、２−ヒドラゾノ
ベンゾチアゾリン類またはｐ−ハロゲノフエノ
ールと、カプラーとしてＮ，Ｎ−ジ置換アニリ
ン類との組合せ。 (6) 特開昭57−94653、特開昭57−94654、特開昭
57−94655、特開昭57−94656に開示のｏ−また
はｐ−アミノフエノール化合物またはｏ−また
はｐ−フエニレンジアミン化合物と耐拡散性フ
エノール化合物、耐拡散性ナフトール化合物、
耐拡散性アシルアセトアミド化合物または耐拡
散性ピラゾロン化合物との組合せ。 などがあげられる。これらのインジケータのうち
では、４−アミノアンチピリンまたはその誘導体
とナフトールまたはその誘導体の組合せが好まし
く、そのうちで４−アミノアンチピリンと１，７
−ジヒドロキシナフタレンの組合せ、４−アミノ
−２，３−ジメチル−１−（２，４，６−トリク
ロロフエニル）−３−ピラゾリン−５−オンと１，
７−ジヒドロキシナフタレンの組合せが最も好ま
しい。 ペルオキシダーゼとして特公昭56−45599、特
公昭57−5520等に開示の植物起源および動物起源
のペルオキシダーゼ（EC1.11.1.7）、および特開
昭57−99192等に開示の微生物起源のペルオキシ
ダーゼ（EC1.11.1.7）のうちから適宜に１種また
は２種以上を組合せて用いることができる。 植物起源のペルオキシダーゼの例として、西洋
わさび、じやがいも、いちじく樹液、かぶ、だい
こんから抽出されたペルオキシダーゼを、動物起
源のペルオキシダーゼの例として、牛乳から抽出
されたラクトペルオキシダーゼ、白血球から抽出
されたベルドペルオキシダーゼを、微生物起源の
ペルオキシダーゼとしてAlternaria属、
Cochliobolus属、Curvularia属、Pellicularia属
に属し非特異的ペルオキシダーゼ生産能を有する
微生物起源のペルオキシダーゼを、それぞれにあ
げることができる。 その他に特公昭56−45599、特公昭57−5520等
に開示のチオシアン酸鉄、タンニン酸鉄、フエロ
シアン化鉄（いずれも鉄（＋２）化合物）、クロ
ム硫酸カリウム、沃化ナトリウム、沃化カリウ
ム、モリブデン酸アンモニウム、モリブデン酸カ
リウム等のペルオキシダーゼ活性を有する無機化
合物を用いることもできる。 これらのうちで植物起源または微生物起源の非
特異的ペルオキシダーゼが好ましい。 本発明の多層分析材料においては、少なくとも
ペルオキシダーゼを含む試薬層はペルオキシダー
ゼおよびインジケータが親水性ポリマーバインダ
ーの中に溶解または分散されてなるものである。
バインダーとして用いることができる親水性ポリ
マーはペルオキシダーゼおよびインジケータと実
質的に相互作用を生ずることがなく、被膜形成能
を有するものであれば何でもよい。親水性ポリマ
ーの例としてゼラチン、酸処理ゼラチン、脱イオ
ン化ゼラチン、ゼラチン誘導体（例、アシル化ゼ
ラチン）、ポリビニルアルコール、ポリビニルピ
ロリドン、ポリビニルベンゼンスルホン酸ナトリ
ウム、カルボキシメチルセルロース、ナトリウム
カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチル
セルロース、メチルセルロース、プルラン、プル
ラン誘導体、ポリアクリルアミド、アクリルアミ
ドコポリマー（例、アクリルアミド−Ｎ−ビニル
ピロリドンコポリマー、アクリルアミド−２−ヒ
ドロキシエチルアクリルアミドコポリマー）、を
あげることができる。試薬層の厚さ（乾燥厚さ）
は約5μｍから約100μｍ、好ましくは約10μｍから
約50μｍの範囲である。 試薬層におけるペルオキシダーゼの含有量は約
５千Ｕ／m2から約10万Ｕ／m2、好ましくは約１万
Ｕ／m2から約６万Ｕ／m2（以下Ｕは国際単位を意
味する）の範囲である。インジケータの含有量は
液体試料に含有されると予想される被検成分の最
大含有量に対応する化学量論による量またはそれ
より多い量が必要であり、この量は当業者が実験
により決めることができる。 ペルオキシダーゼを含むH2O2呈色試薬ととも
に用いられる、25℃における水100ｇに対する溶
解度が１ｇ以上の水溶性モノカルボン酸またはそ
の塩（以下、水溶性モノカルボン酸またはその
塩、または単にモノカルボン酸等という。）につ
いて説明する。 水溶性モノカルボン酸またはその塩は本発明は
多層分析材料の支持体以外の少なくとも一つの層
に含有されていればよく、親水性バインダーポリ
マーを含む層の中に含有されていて場合には親水
性バインダーに溶解または分散して含まれている
ことが好ましい。 水溶性モノカルボン酸またはその塩としては脂
肪族モノカルボン酸およびその塩、芳香族モノカ
ルボン酸およびその塩、芳香族置換脂肪族モノカ
ルボン酸およびその塩のいずれか１種または２種
以上を組合せて用いることができる。脂肪族モノ
カルボン酸としては炭素原子数１乃至５の直鎖ま
たは分岐状の飽和脂肪族モノカルボンがあげら
れ、その具体例として、蟻酸、酢酸、プロピオン
酸、酪酸、吉草酸、イソ吉草酸があげられる。脂
肪族モノカルボン酸の塩としては炭素原子数１乃
至５の直鎖または分岐状の飽和脂肪族モノカルボ
ン酸のアルカリ金属塩（例、リチウム塩、ナトリ
ウム塩、カリウム塩）およびアンモニウム塩があ
げられ、その具体例として、蟻酸、酢酸、プロピ
オン酸、酪酸、吉草酸、イソ酪酸、イソ吉草酸の
それぞれリチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩
およびアンモニウム塩があげられる。 芳香族モノカルボン酸塩の具体例として安息香
酸リチウム、安息香酸ナトリウム、安息香酸カリ
ウム、安息香酸アンモニウム、ｏ−トルイル酸ナ
トリウム、ｏ−トルイル酸カリウム、ｍ−トルイ
ル酸ナトリウム、ｐ−トルイル酸ナトリウム、ｐ
−トルイル酸カリウム、ｐ−トルイル酸アンモニ
ウムがあげられる。 芳香族置換脂肪族モノカルボン酸およびその塩
の具体例としてフエニル酢酸、フエニル酢酸ナト
リウム、フエニル酢酸カリウム、フエニル酢酸ア
ンモニウムがあげられる。 これらの水溶性モノカルボン酸またはその塩で
好ましい化合物は酢酸、プロピオン酸、蟻酸ナト
リウム、蟻酸カリウム、酢酸ナトリウム、酢酸カ
リウム、酢酸アンモニウム、プロピオン酸ナトリ
ウム、プロピオン酸カリウム、プロピオン酸アン
モニウムである。 水溶性モノカルボン酸またはその塩は通常は１
種類を多層分析材料の少なくとも一つの層に含有
させればよいが、必要に応じて２種類以上を少な
くとも一つの層に混合して含有させるか、または
複数の層に１種類ずつ別個に含有させることがで
きる。水溶性モノカルボン酸またはその塩は液状
の化合物でも固体状の化合物でもいずれでも用い
ることができ、固体状の化合物の場合結晶水含有
物や結晶アルコール含有物であつてもさしつかえ
なく用いることができる。 水溶性モノカルボン酸またはその塩は使用条件
下において液体試料に含まれる被検成分である
H2O2、または後述するように、オキシダーゼの
触媒作用により液体試料に含まれる被検成分が酸
素により酸化されて生成したH2O2が生体起源の
液体試料に含まれるカタラーゼにより分解される
のを防ぐ作用を有するものと推定される。その結
果、多層分析材料の中に導入されたH2O2はペル
オキシダーゼの存在下にインジケータの検出可能
な変化（一般に色濃度の変化、発色、または色相
の変化）を起す反応にその実質的に全量が組込ま
れると推定され、結果として検出可能な変化の量
が増大し、ことに色濃度の変化、発色、色相の変
化において生じた色の光学濃度が増大する。この
他に水溶性モノカルボン酸またはその塩の存在に
よりオキシダーゼの関与する反応およびペルオキ
シダーゼが関与する検出可能な変化を生ずる反応
の全行程またはそのいずれかの行程の反応速度が
早まる作用をも有すると推定され、結果として液
体試料の多層分析材料への点着から検出可能な変
化の検出．測定に要する時間が短縮される効果が
達せられる。 水溶性モノカルボン酸またはその塩は少なくと
もペルオキシダーゼを含む試薬層に含有されても
よく、あるいは少なくともペルオキシダーゼを含
む試薬層よりも上側の（すなわち、少なくともペ
ルオキシダーゼを含む試薬層に関して支持体と逆
の側）いずれかの層または多孔性展開層のいずれ
かに含有されてもよく、あるいはさらに少なくと
もペルオキシダーゼを含む試薬層とそれより上側
の層または展開層とに含有されてもよい。水溶性
モノカルボン酸またはその塩がペルオキシダーゼ
またはオキシダーゼの活性を阻害する場合には、
水溶性モノカルボン酸またはその塩をペルオキシ
ダーゼまたはオキシダーゼを含む層と別の層に含
有させ、間に中間層を介在させて用いることがで
きる場合がある。被検成分またはそのオキシダー
ゼによる酸化生成物が水溶性モノカルボン酸また
はその塩と同じ化合物（またはイオン）であつた
り、水溶性モノカルボン酸またはその塩が被検成
分の多層分析材料の中においてうける一連の反応
に特異的に干渉したり一連の反応を特異的に阻害
する場合には適宜に他の水溶性モノカルボン酸ま
たはその塩を選択して用いなければならないこと
はいうまでもない。 水溶性モノカルボン酸またはその塩の多層分析
材料中における含有量は液体試量中に含有される
カタラーゼ活性を有する物質の量またはカタラー
ゼ活性値、および定量分析操作の際に多層分析材
料の展開層に点着される液体試料の量に依存し、
多層分析材料に点着される液体試料中に含有され
ると予想されるカタラーゼ活性を有する物質の総
量またはカタラーゼ活性値の総量の最大値に対応
する化学量論による量またはそれより多い量が、
液体試料が展開され浸透する領域に存在する必要
があり、さらに前述の反応速度を早める効果を発
現させるには場合によつてはさらに多くの量が必
要であるかもしれないことは容易に理解されよ
う。本発明において水溶性モノカルボン酸または
その塩の多層分析材料中における含有量は多層分
析材料／m2につき0.1meqから1eq、好ましくは
0.2meqから0.5eqの範囲である。 被検物質が過酸化水素でなく、化学反応により
過酸化水素を生成する反応系に組みこむことがで
きる場合には、被検物質が酸素と相互作用して過
酸化水素を生成するための触媒としてオキシダー
ゼを試薬層または他の層に含有させておくことが
できる。オキシダーゼは被検物質に応じて選択さ
れる必要がある。オキシダーゼとしては１種のオ
キシダーゼを用いられることはもちろん、一連の
連続反応を進行させる複数種の酵素の組合せ（そ
の中の１種はオキシダーゼである。）を用いるこ
ともできる。さらに必要な場合にはオキシダーゼ
とともにそのオキシダーゼの補因子および／また
は補酵素を組合せて用いることはいうまでもな
い。 オキシダーゼ（必要な場合には補酵素もとも
に）はペルオキシダーゼおよびインジケータを含
む試薬層に含有させるか、あるいは試薬層よりも
上側の層に含有させるか、さらにはペルオキシダ
ーゼおよびインジケータを含む試薬とそれよりも
上側の層（１層または複数の層）の両方（または
合計３層以上）に含有させることができる。ここ
で試薬層より上側の層という表現には多孔性展開
層を含めることができる。オキシダーゼが触媒す
る基質の反応には酵素の存在が必須であり、多層
分析材料においては酸素は空気中から展開層を経
て他の層内へ拡散するので、オキシダーゼが触媒
する酸化反応の効率的な進行にとつては酸素の層
中への拡散の効率的な達成を目的とした特願昭56
−93631に開示した、オキシダーゼをペルオキシ
ダーゼおよびインジケータを含む試薬層より上側
の層、ことに多孔性展開層または多孔性展開層に
隣接する層に含有させた構成の多層分析材料とす
ることが好ましい。またコレステロールエステル
のように親油性物質が被検物質である場合には、
親水性バインダーポリマーを有する層へは被検物
質が浸透しにくいので、ことに多孔性展開層の内
部にオキシダーゼを含有させることが好ましい。 本発明の多層分析材料に含有させることができ
るオキシダーゼとして酸素（O2）をアクセプタ
とするオキシダーゼがあげられ、その例として次
の酵素をあげることができる。（ ）内はEC
Numberを表わす。 グリコレートオキシダーゼ（1.1.3.1）、 マレートオキシダーゼ（1.1.3.3）、 グルコースオキシダーゼ（1.1.3.4）、 ヘキソースオキシダーゼ（1.1.3.5）、 コレステロールオキシダーゼ（1.1.3.6）、 アリールアルコールオキシダーゼ（1.1.3.7）、 Ｌ−グルコノラクトンオキシダーゼ（1.1.3.8）、 ガラクトースオキシダーゼ（1.1.3.9）、 アルコールオキシダーゼ（1.1.3.13）、 Ｌ−２−ヒドロキシ酸オキシダーゼ
（1.1.3.15）、 アルデヒドオキシダーゼ（1.2.3.1）、 キサンチンオキシダーゼ（1.2.3.2）、 ピルベートオキシダーゼ（1.2.3.3）、 ピルベートオキシダーゼ（COA−アセチル化）
（1.2.3.6）、 ラトステロールオキシダーゼ（1.3.3.2）、 Ｄ−アスパルテートオキシダーゼ（1.4.3.1）、 Ｌ−アミノ酸オキシダーゼ（1.4.3.2）、 Ｄ−アミノ酸オキシダーゼ（1.4.3.3）、 アミンオキシダーゼ（フラビン含有）
（1.4.3.4）、 ピリドキサミンホスフエートオキシダーゼ
（1.4.3.5）、 アミンオキシダーゼ（銅含有）（1.4.3.6）、 Ｄ−グルタメートオキシダーゼ（1.4.3.7）、 サルコシンオキシダーゼ（1.5.3.1）、 Ｎ−メチルアミノ酸オキシダーゼ（1.5.3.2）、 N6−メチル−Ｌ−リシンオキシダーゼ
（1.5.3.4）、 ウリカーゼ（ウレートオキシダーゼ）
（1.7.3.3）、 スルフイトオキシダーゼ（1.8.3.1）、 アスコルベートオキシダーゼ（1.10.3.3）、 ３−ヒドロキシアントラニレートオキシダーゼ
（1.10.3.5）、 アルギニン ２−モノオレキゲナーゼ
（1.13.12.1）、 リシン ２−モノオキシゲナーゼ（1.13.12.2）、 トリプトフアン ２−モノオキシゲナーゼ
（1.13.12.3）、 ラクテートオキシダーゼ（ラクテート ２−モ
ノオシゲナーゼ）（1.13.12.4）、 ジメチルアニリンモノオキシゲナーゼ
（1.14.13.8）、 コレステロール7α−モノオキシゲナーゼ
（1.14.13.17）、 Flavoprotein−linked monooxygenase
（1.14.14.1）、 フエニルアラニンモノオキシゲナーゼ
（1.14.16.1）、 グリセロールオキシダーゼ（東洋醸造から販
売）、 グリシンオキシダーゼ（化学大辞典第３巻
（1960年９月発行）に記載） オキシダーゼを含む複数種の酵素の組合せの例
として以下のものがある。 グリセロールキナーゼ（2.7.1.30）およびＬ−
α−グリセロ燐酸オキシダーゼ（1.1.99.5；また
は特開昭53−72892、特開昭53−24893に開示）の
組合せ（特開昭53−24893に開示） トリグリセリド加水分解性をもつリパーゼ、グ
リセロールキナーゼ（2.7.1.30）およびＬ−α−
グリセロ燐酸オキシダーゼ（1.1.9.9.5；または特
開昭53−72892、特開昭53−24893に開示）の組合
せ（特開昭53−24893に開示） エステラーゼ作用をもつリパーゼ、プロテアー
ゼおよびコレステロールオキシダーゼ（1.1.3.6）
の組合せ（特開昭50−137192に開示） グルタミルピルベートトランスアミナーゼ（ア
ラニンアミノトランスフエラーゼと同じ。
2.6.1.2）およびピルベートオキシダーゼ
（1.2.3.3）の組合せ（特開昭57−208998に開示） グルタミルオキサロアセテートトランスアミナ
ーゼ（グルタミン−オキソ酸アミノトランスフエ
ラーゼと同じ。2.6.1.15）、オキサロアセテートデ
カルボキシラーゼ（4.1.1.3）およびピルベートオ
キシダーゼ（1.2.3.3）の組合せ（特開昭57−
208998に開示） これらのオキシダーゼのうちで、本発明の多層
分析材料において好ましいものはグルコレートオ
キシダーゼ、マレートオキシダーゼ、グリコース
オキシダーゼ、ヘキソースオキシダーゼ、コレス
テロールオキシダーゼ、Ｌ−グルコノラクタトン
オキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、キサ
ンチンオキシターゼ、ピルベートオキシダーゼ、
ウリカーゼ、アスコルベートオキシダーゼ、ラク
テートオキシダーゼ、グリシンオキシダーゼ、グ
リセロールオキシダーゼなど、およびオキシダー
ゼを含む複数種の酵素の組合せとして例示した組
合せがあげられる。 オキシダーゼの多層分析材料中における含有量
は、主として液体試料に含有される過酸化水素を
生成する被検物質の予想される最大量とオキシダ
ーゼおよびペルオキシダーゼの活性値の比により
決めることができ、これは当業者が実験により決
めることができるが、おおよその含有量として約
１千Ｕ／m2から約10万Ｕ／m2、好ましくは約３千
Ｕ／m2から約５万Ｕ／m2の範囲である。オキシダ
ーゼがグルコースオキシダーゼの場合には、その
含有量は約２千Ｕ／m2から約４万Ｕ／m2、好まし
くは約４千Ｕ／m2から約２万Ｕ／m2の範囲であ
る。 ペルオキシダーゼ、およびオキシダーゼはそれ
ぞれの活性が最大になる最適PH値があり、さらに
はそれぞれの活性はイオン強度や近傍に共存する
陽イオンや陰イオンの種類による影響をもうけ
る。従つて多層分析材料においては、第一にペル
オキシダーゼを含む試薬層、オキシダーゼを含む
層、またはペルオキシダーゼとオキシダーゼをと
もに含む試層それぞれのPH値を、ついで必要に応
じてイオン強度や共存するイオン種などの因子を
最適に設定することが、よい分析結果（定量精
度、くりかえし再現性などについて）を得るため
にはきわめて重要である。かかる目的の為に多孔
性展開層試薬層、光遮蔽層その他の機能層中に
酸、アルカリ、塩、緩衝剤、解離剤、界面活性剤
などを含有させておくことは本発明の実施に当つ
て特に重要なことである。これら反応条件設定の
為の試薬類の種類、量などは、分析の目的その他
によつて大きく変化するので、目的に従つて適
宜、選択する必要がある。 ペルオキシダーゼおよびインジケーターを含む
試薬層に酸、アルカリまたは緩衝剤を含有させて
過酸化水素の存在下で検出可能な変化を起させる
には、ペルオキシダーゼの最適PH値であるPH7.0
を中心にしてPH約5.0から約9.0、好ましくは約6.0
から8.0の範囲のPH値範囲の下で変化を生じさせ
ることが好ましい。 オキシダーゼはその最適PH値は酵素の種類によ
り異なるが、例示すれば、グルコースオキシダー
ゼ：PH約5.6；ヘキソースオキシダーゼ：PH約
6.3；コレステロールオキシダーゼ：PH約5.8；ガ
ラクトースオキシダーゼ：PH約7.0；アルコール
オキシダーゼ：PH約7.5；ウリカーゼ：PH7.5〜
8.5；アスコルベートオキシダーゼ：PH約5.6；Ｌ
−α−グリセロ燐酸オキシダーゼ：PH7.5〜7.7で
ある。 オキシダーゼを含む層はオキシダーゼの種類に
よりそれぞれの最適PH値またはその近傍のPH値範
囲に調整することが好ましい。ペルオキシダーゼ
の最適PH値と異なる最適PH値をもつオキシダーゼ
はそれ故に別々の層に含有させることが好まし
い。例えばグルコースオキシダーゼを多孔性展開
層または後述する接着層に含有させる場合には、
多孔性展開層または接着層に使用条件下において
グルコースオキシダーゼの最適PH値であるPH5.6
を中心としてPH3.6からPH7.6、好ましくはPH4.0か
らPH7.0の範囲に維持することができる酸または
緩衝剤を加えることができる。 試薬層、他の層、または多孔性展開層に含有さ
せることができる酸、アルカリまたは緩衝剤とし
て脂肪族ヒドロキシカルボン酸（例、グリコール
酸、乳酸、α−ヒドロキシ酪酸、グリセリン酸、
タルトロン酸、りんご酸、酒石酸、くえん酸）、
脂肪族ジカルボン酸（例、マロン酸、こはく酸、
グルタル酸、α−メチルグルタル酸、β−メチル
グルタル酸、３，３−ジメチルグルタル酸、α，
α′−ジメチルグルタル酸）、水酸化リチウム、水
酸化ナトリウム、水酸化カリウム、日本化学会編
「化学便覧 基礎編」（東京、丸善(株)、1966年発
行）1312−1320ページに記載の緩衝剤（例、くえ
ん酸水素カリウム−くえん酸、燐酸二水素カリウ
ム−燐酸水素二ナトリウム）、「Biochemistry」、
５(2)、467−477（1966）のNorman E.Goodら著
「Hydrogen Ion Buffers for Biological
Research」R.M.C.Dawson et al編「Date for
Biochemical Research」第２版（Oxford at
the Clarendon Press、1969年発行）476−508ペ
ージ、「Analytical Biochemistry」、104、300−
310（1980）等に記載の緩衝剤（例、２−（Ｎ−モ
ルホリノ）エタンスルホン酸、Ｎ−２−ヒドロキ
シエチルピペラジン−N′−２−ヒドロキシプロ
パン−３−スルホン酸（Heppso）ナトリウム塩
またはカリウム塩、Ｎ−２−ヒドロキシエチルピ
ペラジン−N′−３−プロパンスルホン酸（Epps）
ナトリウム塩またはカリウム塩）、その他の緩衝
剤（例、マレイン酸モノナナトリウムまたはモノ
カリウム塩、３，３−ジメチルグルタル酸モノナ
トリウムまたはモノカリウム塩）、無機酸（硫酸、
燐酸）がある。これらのうちではくえん酸、酒石
酸、りんご酸、グルタル酸、α−メチルグルタル
酸、β−メチルグルタル酸、α，α′−ジメチルグ
ルタル酸、３，３−ジメチルグルタル酸、水酸化
リチウム、Heppso Na塩またはＫ塩、Epps Na
塩またはＫ塩が好ましい。 本発明の多層分析材料における多孔性展開層
（以下、展開層ということがある。）は分析材料の
最外面に位置し（すなわち、分析材料において試
薬層に関して支持体と反対側の最外面に位置す
る。）て、被検体液が点着される面であり、その
作用は点着された被検体液が被検体を含んだまま
液体の容量には無関係に単位面積当りほぼ一定容
量の被検体液を試薬層に供給する機能を果すこと
である。この作用（展開作用）により少なくとも
ペルオキシダーゼを含む試薬層（以下、試薬層と
いうことがある。）に供給される被検体液の容量、
さらには被検体液に含まれる被検体の容量は単位
面積当りほぼ等しいことになり、またこの作用が
存在するゆえに、定量分析に際して被検体液を正
確に秤取しなくても定量分析が実施できることを
意味する。当然のことであるが被検体液を正確に
秤取して定量分析を実施することを排除するもの
でもないし、被検体液を正確に秤取することによ
り定量の精度が高まる場合がある。 本発明の分析材料における多孔性展開層とし
て、特開昭49−53888（特公昭53−21677）、米国特
許第3992158号に開示されている非繊維等方的多
孔性層（例、メンブランフイルターまたはブラツ
シユポリマー層、微小球体または粒子を接着剤で
結合することにより製造された球体または粒子間
の相互結合空間により等方的多孔性が形成されて
いる層）、特開昭55−90859に開示されている微小
球状ビーズが水により膨潤しない接着剤により点
接触状に接着されて形成された三次元格子構造物
からなる連続空隙含有等方的多孔性構造物層、特
開昭55−164356に開示されている水洗された織物
または親水化処理織物からなる繊維質異方性多孔
性展開層、特開昭57−66359に開示されている物
理的活性化処理された表面を有する織物からなる
繊維質異方性多孔性展開層、特開昭57−148250に
開示されている合成ポリマー繊維パルプを含む抄
造紙、抄造紙または不織布からなる繊維質異方
性多孔性展開層を用いることができ、かつこれら
の展開層はここにあげた特許明細書に開示の方法
により設けることができる。また特開昭49−
53888に開示されているごとく、二酸化チタン、
酸化亜鉛、または硫酸バリウムの微粉末を含有す
るメンブランフイルターまたはブラツシユポリマ
ー層は後述する光遮蔽層（輻射線ブロツキング
層、白色背景層または光反射層）をかねる展開層
として本発明において用いることができる。さら
にカーボンブラツクを含有するメンブランフイル
ターまたはブラツシユポリマー層を後述する光遮
蔽層をかねる展開層として用いることができる。
被検体液が全血の場合、好ましい展開層として前
述の三次元格子構造物からなる連続空隙含有等方
的多孔性構造物層および前述の繊維質異方性多孔
性展開層があげられる。 本発明の多層分析材料においては試薬層と展開
層の間に水および被検体透過性の光遮蔽層（色遮
蔽層、輻射線ブロツキング層、背景層または光反
射層ともいう。）を設けることができる。光遮蔽
層は、たとえば、赤血球を含む全血の如く、被検
体液が着色粒子を含む場合に有用な層である。即
ち光遮蔽層の片側にある着色粒子の色はこの層に
よつてさえぎられて反対側、すなわち透明支持体
側からは着色粒子の色は全く見えず、従つて比色
定量または螢光測光定量に当つて着色粒子が定量
の妨害をしない。光遮蔽層は、二酸化チタン微粉
末、硫酸バリウム微粉末、酸化亜鉛微粉末、アル
ミニウム微粉末またはカーボンブラツクの如き微
粉体を水および被検体透過性の親水性ポリマーバ
インダー中に分散した層で、5μｍから100μｍ、
好ましくは5μｍから30μｍの範囲の厚さがあり、
被検体液および被検体は通過しうるものである。
光遮蔽層のポリマーバインダーとしては試薬層に
用いたのと同じ種類の親水性ポリマーの中から適
宜に選択して用いることができる。 光遮蔽層としては二酸化チタン微粉末酸化亜鉛
微粉、硫酸バリウム微粉末またはカーボンブラツ
クなどの光遮蔽能を有する微粒子を含んだメンブ
ランフイルター（ブラツシユポリマー層）を多孔
質光遮蔽層として用いることができる。多孔質光
遮蔽層は特開昭49−53888（特公昭53−21677）ま
たは特開昭54−29700に開示の方法により設ける
ことができる。 本発明の多層分析材料においては展開層を試薬
層、光遮蔽層、または必要により設けられる他の
層の上に接着し積層して一体化するための接着を
強化する目的で接着層を設けることができる。こ
とに展開層として多孔性のシート状、フイルム状
または膜状の素材を用いる場合には接着層を設け
ることが好ましい。 接着層としては試薬層のバインダーとして用い
られている水および被検体透過性親水性ポリマー
を用いることができ、この場合には接着層の親水
性ポリマーが半乾きの状態のとき、または親水性
ポリマーを水または界面活性剤を含む水で湿潤さ
せておいて、展開層として用いる多孔性のシート
状、フイルム状または膜状の素材を適当な圧力を
かけて接着層に接着することができる。接着層の
厚さは0.5μｍから15μｍ、好ましくは0.5μｍから
5μｍの範囲である。 本発明の多層分析材料には前記の諸層のほかに
必要に応じて、特開昭52−3488、特開昭58−
77660、特開昭58−77661に開示のバリヤー層また
は液体遮断層、特開昭51−40191、特開昭53−
131089等に開示の検出層または媒染層、特開昭54
−29700に開示のマイグレーシヨン阻止層、特開
昭54−26793（特公昭57−28277）、特開昭51−
40191等に開示の中間層、特開昭53−131089、特
開昭57−40649、特開昭57−50660、特開昭58−
179359等に開示の蛋白質を通過させることができ
る親水性バインダーポリマーを用いた層、特開昭
56−8549に開示の試薬含有微粒子分散層、実開昭
57−42951に開示の一定面積の液体試料点着供給
用ポーラス体（パツチ）、特開昭57−208998に開
示の酵素等の試薬を含む定面積多孔性層を設ける
ことができる。 本発明の多層分析材料はここまでの説明から明
らかなとおり、透明支持体の上に順にペルオキシ
ダーゼを含む試薬層および展開層が設けられた構
成を有するが、好ましい実施態様として、透明支
持体の上に順にペルオキシダーゼを含む試薬層、
光遮蔽層および展開層が設けられた構処を有する
もの、透明支持体の上に順にペルオキシダーゼを
含む試薬層、光遮蔽層、接着層および展開層が設
けられた構成を有するもの、透明支持体の上に順
にペルオキシダーゼを含む試薬層、オキシダーゼ
を含む光遮蔽層および展開層が設けられた構成を
有するもの、透明支持体の上に順にペルオキシダ
ーゼを含む試薬層、光遮蔽層、オキシダーゼを含
む接着層、および展開層が設けられた構成を有す
るもの、透明支持体の上に順にペルオキシダーゼ
を含む試薬層、光遮蔽層、オキシダーゼを含む接
着層、およびオキシダーゼを含む展開層が設けら
れた構成を有するもの、透明支持体の上に順にペ
ルオキシダーゼを含む試薬層、オキシダーゼを含
む光遮蔽層、オキシダーゼを含む接着層、および
展開層が設けられた構成を有するもの、透明支持
体の上に順にペルオキシダーゼおよびオキシダー
ゼを含む試薬層、光遮蔽層、および展開層が設け
られた構成を有するもの、透明支持体の上に順に
ペルオキシダーゼおよびオキシダーゼを含む試薬
層、オキシダーゼを含む光遮蔽層、接着層、およ
び展開層が設けられた構成を有するもの、透明支
持体の上に順にペルオキシダーゼおよびオキシダ
ーゼを含む試薬層、光遮蔽層、オキシダーゼを含
む試薬層、および展開層が設けられた構成を有す
るもの、さらにこれらの層構成のバリエーシヨ
ン、などがある。 本発明の多層分析材料は前述の特許明細書に開
示の方法に従つて製造することができ、その具体
例は後記する実施例に詳細に説明されている。ま
た本発明の多層分析材料は前述の特許明細書に開
示の操作手順と同様にして被検体液中の被検物質
を定着することができる。本発明の多層分析材料
は実開昭54−162294、特開昭54−156079、実開昭
56−142454、特開昭57−63452に開示のスライド
枠に収めて化学分析スライドまたは特開昭57−
182648に開示の液体試料展開補助材を多孔性展開
層の上に設けた構造の化学分析スライドとして用
いるのが製造、輸送、保管、測定操作などの全て
の面で好ましい。 実施例 １ ゼラチン下塗りが施されている厚さ185μｍの
透明ポリエチレンテレフタレート（PET）フイ
ルム上に、下記組成から成る血中グルコール濃度
定量用の試薬層を乾燥後の膜厚がおよそ15μｍに
なるように塗布、乾燥した。 ペルオキシダーゼ 25000IU １，７−ジヒドロキシナフタレン ５ｇ ４−アミノアンチピリン ５ｇ ゼラチン 200ｇ ノニオンHS210（日本油脂(株)製界面活性剤；ポリ
オキシエチレンノニルフエニルエーテル） ２ｇ この上に、0.2ｇのノニオンHS210及びグルコ
ースオキシダーゼ50000IUを含む二酸化チタン粉
末８重量部をゼラチン１重量部に混合分散したも
のより成る光遮蔽層を乾燥膜厚がおよそ15μｍに
なるように塗布、乾燥した。 次に、水100ml中にゼラチン４ｇと酢酸ナトリ
ウム２ｇの割合で溶解し、さらにこれにノニオン
HS210を0.2ｇ加えて接着層塗布液とした。この
液を光遮蔽層の上に乾燥膜厚が4μｍ（酢酸ナト
リウム含有量32meq／m2）となるように塗布、乾
燥し接着層を形成させた。次に、接着層に30ｇ／
m2の割合で水を湿し水として供給、湿潤させたの
ち、綿100％のブロード（東洋紡製100双糸ブロー
ド）を圧着ラミネートし、乾燥させて多孔性展開
層を設け、グルコース定量用の多層分析フイルム
を完成させた。 このフイルムを1.5cm×1.5cmの正方形のチツプ
に裁断したのち、特開昭57−63452に開示のプラ
スチツクマウント（スライド枠）と同様のマウン
トに収めてグルコース定量用化学分析スライドと
した。このスライドを用いて、血中カタラーゼの
干渉作用に対する緩和効果を調べた。ヘパリン採
血したのち遠心分離によつて調製したヒド血漿に
異なる量のグルコースを添加し、検査用検体とし
た。その10μを上記の分析スライドの展開層の
上に点着し、37℃で６分間インクベーシヨンした
のち、500nｍの測定光で反射測光により発色光
学濃度を測定した。 測定結果を第１表に示す。 比較例 １ 酢酸ナトリウムを添加しないほかは実施例１と
同様にしてグルコース定量用化学分析スライドを
作製し、実施例１と同様の方法によつて発色光学
濃度を測定した。測定結果を第１表に示す。 【表】 本発明の多層分析フイルムを用いた化学分析ス
ライドでは比較例に比べて発色光学濃度の増大が
見られる。 実施例 ２ ヒト全血をヘパリンNaF採血後遠心分離して
血漿を得た。そのグルコース含有量は108mg／dl
とグルコースオキシダーゼ酵素電極法により実測
された。 またその一部を溶血した部分溶血血漿を得た。
部分溶血血漿についてヘモグロビン含有量を測定
したところ137mg／dlであつた。実施例１および
比較例１と同様にして作製したグルコース定量用
化学分析スライドを用い、前記２種の血漿を検体
として発色試験を行なつた。37℃で６分のインク
ベーシヨンの後の発色光学濃度は第２表のとおり
であつた。 【表】 本発明の多層分析フイルムを用いた化学分析ス
ライドでは、溶血ヘモグロビンによる干渉作用が
よく緩和されているとともに発色光学濃度が増大
していることが確かめられた。 実施例３ および４ 酢酸ナトリウムにかえてそれぞれ酢酸（実施例
３）または酢酸アンモニウム（実施例４）1.5ｇ
を加えたほかは実施例１と同様にしてグルコース
分析スライドを作製した。ヒト全血をヘパリン
NaF採血後遠心分離して得た非溶血血漿（グル
コースオキシダーゼ酵素電極法によりそのグルコ
ース含有量は200mg／dlと測定された。）を検体と
して、それぞれ10μずつこれらのスライドの多
孔性展開層に点着し、37℃で６分のインクベーシ
ヨンの後に発色光学濃度を反射測光により測定し
た。結果を第３表に示す。 実施例 ５ 酢酸ナトリウムにかえて、蟻酸ナトリウム1.0
ｇを加えたほかは実施例１と同様にしてグルコー
ス分析スライドを作製した。このものについて実
施例３と同様にして色テストを行つた。結果を第
３表に示す。 実施例 ６ 酢酸ナトリウムにかえてプロピオン酸カリウム
1.5ｇを加えたほかは実施例１と同様にしてグル
コース分析スライドを作製した。このものについ
て実施例３と同様の発色テストを行つた。結果を
第３表に示す。 比較例 ２〜６ 酢酸ナトリウムにかえて３，３−ジメチルグル
タール酸（３，３−DMG）、酒石酸くえん酸ナ
トリウム、燐酸１水素２ナトリウム
（Na2HPO4）、燐酸２水素１カリウム（KH2PO4）
のそれぞれ１ｇを加えたほかは実施例１と同様に
してグルコース分析スライドを作製し、実施例３
と同様の方法により発色テストを行つた。ほかに
比較例１と同様にして作製したグルコース分析ス
ライドについても実施例３と同様の方法により発
色テストを行つた。結果を第３表に示す。 【表】 第３表から、本発明の多層分析フイルムを用い
た化学分析スライドにおいては発色光学濃度の増
大がみられることが明らかである。 実施例 ７ 酢酸ナトリウムを接着層に添加するかわりに、
展開層にあらかじめ、10％水溶液として含浸乾燥
させたもの（酢酸ナトリウム含浸量２ｇ／m2
（24meq／m2）を用いたほかは実施例１と同様に
してグルコース分析スライドを作製した。ヘパリ
ンNaF採血したウサギの新鮮全血10μを検体と
して発色光学濃度を反射測定したところ0.51であ
つた。比較例１と同様にして作製したグルコース
分析スライドでは0.46であつた。 実施例 ８ 酢酸ナトリウムを接着層中に添加するかわりに
試薬層中に加えた（酢酸ナトリウム有量２ｇ／m2
（24meq／m2）ほかは実施例１と同様にしてグル
コース分析スライドを作製した。非溶血ヒト血清
及び部分溶血血清を用いて実施例２と同様の測定
を行つたところ、溶血の影響を緩和する作用があ
ることが確かめられた。 実施例 ９ 酢酸ナトリウムを接着層中のかわりに光遮蔽層
中に添加したほかは実施例１と同様にしてグルコ
ース分析スライドを作製した（酢酸ナトリウム含
有量２ｇ／m2（24meq／m2）。同時に比較例１と
同様にして酢酸ナトリウムを含まないグルコース
分析材スライドを作製した。それぞれのスライド
について、ヘパリン採血後直ちに遠心分離して調
製した溶血のないウサギ血漿を用いて発色テスト
を行つた。 酢酸ナトリウムを添加したスライドでは発色光
学濃度が0.57であつたのに対し酢酸ナトリウム無
添加のスライドでは0.54であつた。 実施例 10 グルコースオキシダーゼにかえて、コレステロ
ールオキシダーゼ50000IUを光遮蔽層用組成に加
え、さらにコレステロールエステラーゼ25000IU
を接着層用組成に加えたほかは実施例１と同様に
してコレステロール分析スライドを作製した（酢
酸ナトリウム含有量32meq／m2）。 このスライドについて、遊離コレステロールお
よびエステル型コレステロールを遊離コレステロ
ール換算375mg／dl含有する非溶血ヒト血清およ
び部分溶血ヒト血清を用いて実施例２と同様にし
て発色テストを行つた。37℃６分のインクベーシ
ヨン後の波長500nｍでの反射測光による発色光
学濃度はそれぞれ0.47及び0.45であつた。 比較例 ７ 酢酸ナトリウムを含まない他は実施例10と同様
にしてコレステロール分析用スライドを作製し
た。このスライドについて、実施例10と同じ試料
を用いて実施例10と同様にして発色テストを行な
つた。37℃６分のインクベーシヨン後の波長
500nｍでの反射測光による発色光学濃度は非溶
血血清で0.44、溶血血清で0.41であつた。 実施例 11 実施例１（酢酸ナトリウム含有量32meq／m2）
及び比較例１と同様にして作製したグルコース分
析用スライドについて、以下の実験を行い反応中
のPHを測定した。PH測定には東亜電波社製PHメー
ターHM15に、表面PH測定用電極GS−165Fを接
続した測定器を用いた。グルコース分析スライド
の多孔性展開層にイオン交換して脱イオンした蒸
溜水（PH7.0）、管理血清（PH8.4）、新鮮ヒト血漿
（PH7.4）の３種の検液をそれぞれ10μ点着し、
検液が展開された後に多層分析材料の多孔性展開
層を剥離除去し、接着層側からPH電極を表面にあ
てて展開層除去後６分後にPHを測定した。また、
この３種の検液３種をPETフイルムの表面に滴
下し、電極をPETフイルムの検液に、密着させ
てそのPH値を測定した。なお、電極の校正には、
PH4.01及び6.86の燐酸標準液（25℃）を、PETフ
イルム上に10μを採取し、電極を直接フイルム
に密着させる方法により測定した。反応中のPH値
測定結果を第４表に示す。 いずれの場合もPHは２〜３分で平衡値に到達す
ることが明らかである。 なお、始めから展開層を除去し、かつ支持体か
ら塗布層のみを剥離した試料について上記と同じ
検液を接着層に点着し、接着層側からおよび試薬
層側からそれぞれ電極（GS−165F）を接触させ
てPHを測定したところ、平衡値は±0.15以内の精
度で上記の測定値に一致していた。 実施例 12 実施例１と同様にして作製したグルコース分析
スライド（酢酸ナトリウム含有量32meq／m2）に
ついて、PH指示薬を用いる方法により使用条件下
で反応が進行中の層のPH値を測定した。指示薬と
してはブロモチモールブルー（BTB）およびブ
ロモチモールパープル（BTP）を混合したマス
キング指示薬を用いた。この指示薬の呈色とPH値
の関係についてはあらかじめ、燐酸緩衝液をPHメ
ーターで較正したPH値既知の緩衝液を用いて較正
し、かつ日立340分光光度計を用いて吸収スペク
トルを測定しキヤリブレーシヨンカーブを求めて
おいた。 次に、イオン交換して脱イオンした蒸溜水（PH
7.0）、管理血清（PH8.4）、新鮮ヒト血漿（PH7.4）
を検液とし、これにそれぞれ上記マスキング指示
薬を少量を添加した液を調製して、前記グルコー
ススライドの多孔性展開層に点着し５分後のマス
キング指示薬の呈色をPETフイルム（支持体）
側から測定した。管理血清、血漿では含有される
グルコースによる発色と重なるので２波長法によ
る反射スペクトル（日立340分光光度計を用い
た。）の測定を行い、グルコースに基づく呈色を
消去した。結果を第４表に示す。 【表】 第４表のPH測定値と実施例１ないし９、および
比較例１ないし６の結果を比較すると、本発明の
水溶性モノカルボン酸またはその塩を含有する多
層分析フイルムを使用条件下において反応中のPH
値にかかわらず、発色光学濃度の増大がみられ、
カタラーゼ活性阻害効果が有効に作用しているこ
とがわかる。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １ 水不浸透性光透過性支持体の上に、少なくと
    もペルオキシダーゼおよび過酸化水素の存在下で
    検出可能な変化を起こすインジケータを含む呈色
    指示薬組成物を含む試薬層、および多孔性展開層
    の二つの層を少なくとも有しこの順に積層されて
    なる多層分析材料において、前記試薬層または試
    薬層より上側の層に、炭素原子数１ないし５の直
    鎖状又は分岐状脂肪族モノカルボン酸、又はその
    ナトリウム塩、カリウム塩又はアンモニウム塩が
    含有されていることを特徴とする多層分析材料。 ２ 前記モノカルボン酸が、蟻酸、酢酸、プロピ
    オン酸、酪酸、吉草酸からなる群から選ばれた少
    なくとも１種の化合物である特許請求の範囲１に
    記載の多層分析材料。 ３ 前記インジケータが色原体としての４−アミ
    ノアンチピリンまたはその誘導体とカプラーとし
    てのフエノール、ナフトールまたはそれらの誘導
    体との組合せである特許請求の範囲１又は２に記
    載の多層分析材料。 ４ 前記試薬層又は試薬層より上側の層にオキシ
    ダーゼが含有されている特許請求の範囲１ないし
    ３に記載の多層分析材料。 ５ 前記オキシダーゼがグルコースオキシダーゼ
    である特許請求の範囲４に記載の多層分析材料。 ６ 前記オキシダーゼがコレステロールオキシダ
    ーゼである特許請求の範囲４に記載の多層分析材
    料。
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