JPH04507409A

JPH04507409A - 風疹ｅ１ペプチド

Info

Publication number: JPH04507409A
Application number: JP2511164A
Authority: JP
Inventors: ラクロワ，マーシャル; ズレイン，マーン; ディオンヌ，ジャーバイス
Original assignee: バイオケム・イムノシステムズ・インコーポレイテッド
Priority date: 1989-08-23
Filing date: 1990-08-17
Publication date: 1992-12-24
Anticipated expiration: 2017-08-26
Also published as: DK0491713T3; ES2057579T3; CA2065022A1; WO1991002748A1; US5298596A; EP0491713A1; DE69011122D1; US5164481A; HU9200583D0; AU646641B2; ATE109158T1; JP3317967B2; EP0491713B1; CA2065022C; HUT60508A; OA09653A; DE69011122T2; AU6151790A

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】凰呈上」二［△Ｌヱ聚悲μ」ｕｌを肚本発明は、風疹の感染を検出および定量し、そして風疹ウィルスに特異的な抗体を誘起するのに有用な、新規の直鎖状および環状ペプチド、およびその混合物およびその混合体に関する。このようなペプチドはまた、風疹ウィルスの感染に対するワクチンにも有用である。

良災旦互盈風疹は最初、ドイツで１８世紀に記録され、しばしばＩＩ　ｃｅｒｍａｎ　ｍｅａｓｌｅｓ″と呼ばれる。風疹は、非常に感染しやすい疾患で、全身の発疹および微熱により特徴付けられる。長い間、臨床上、麻疹を含めた他の感染症と混同されていた。風疹の感染に関する重大な危険は、妊娠の期間中に起こる。この時、胎児への重大なダメージが、聴覚障害、白内障、心臓異常、および小脳症という結果を引き起こし得る。

風疹の病原物質である風疹ウィルスは、独月刀工匡旦ファミリーに属する。これはほぼ球形で、エンベロープに包まれた、直径約６０ｎｍのウィルスである。このウィルスのゲノムは、正の一本鎖ＲＮＡ　（１０Ｋｂ）からなる。エンベロープは、感染した宿主細胞由来のリボプロティンである、グリコジル化していないヌクレオキャプシドプロテイン（Ｃ（３３Ｋ））、および２つのグリコプロティン（Ｅｌ　（５８Ｋ）およびＥ２　（４２−４７Ｋ））を含む。後者は、風疹ウィルスの赤血球凝集活性の原因であり、ア／ル化しており、そしてジスルフィド結合により連結している。

風疹ウィルスの３つの株（Ｔｈｅｒｉｅｎ、　Ｊｕｄｉｔｈ、　Ｍ３３）が記載されており、そしてそのゲノムの部分的な塩基配列が決定されている（Ｆｒｅｙら、１９８６、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ　１５４．２２８−２３２、Ｔｅｒｒｙら、１９８８、Ａｒｃｈ、Ｖｉｒｏｌ、９８．１８’９−１９７：　Ｃ１ａｒｋｅら、１９８７、Ｎｕｃｌ。

Ａｃ１ｃ！ｓ　Ｒｅｓ、１５、　３０４１−３０５７ン　。

風疹は、感染した物質（通常鼻咽腔の分泌物）を感受性の細胞培養物に接種することによって診断し得るが、最も広く用いられている診断試験は、ウィルスのグリコプロティンの赤血球凝集性に基づいたものである。このようなアッセイ（” ＨＡＩ”）では、血清試料中に存在する赤血球＃集票に対する抗体によって、ウィルスが赤血球細胞ぐ通常ニワトリの血液古来）に結合するのが妨げられ、従って赤血球凝集が阻害される（　ＰｅｅｔｅｒＩＩｌａｎｓおよびＨｕｙｇｅｌｅｎ、１９６７、Ｐｒｅｓｓｅ　Ｍｅｄ、　７５．２１７７−２１７８およびＬｅｎｎｅｔｔｅおよびＳｃｈｍｉｄｔ、Ｌ９７９．　”肚組担扛Ｒｒｏｃｅｄｕｒｅｓ　ｆｏｒ　ｖｉｒａｌ　ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａｌ　ａｎｄ　ｃｈｌａｍ　ｄｉａｌ　１ｎｆｅｃｔｉｏｎｓ−第５版、Ａｔ５ｅｒｉｃａｎ　Ｐｕｂｌｉｃ　Ｈｅａｌｔｈ　Ａｓ５ｏｃｉａｔｉｏｎ　１ｎｃ、、　Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ）。このような７ノセイでは、）ＩＡＩ抗体価が増大することは、最近に感染したことを反映する。

酵素標識抗体（ＡｖｒａＩａｅａｓ％１９５９、Ｉｍｏｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　Ｌ、　４３−５２）の導入によって、酵素結合イムノンルベント（ＥＬＩＳＡ）が、風疹感染を含めた広範囲のライスル性および細菌性感染の診断に用いられている。ＥＬＩＳＡ２を用いた風疹感染の［ｌ１ｎ（青診断は、例えば屋切にＶＯｌｌｅｒおよびＢｉｄｗｅｌｌによって記載された（１９７５、Ｂｒ、　Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｐａｔｈｏｌ、　５６．３３８−３３９）。

ＥＬＩＳＡでは、ウィルス抽出物を典型的にはプラスチックウェルの表面にコートし、そして血清試料中のくもしあれば）抗体あるいは分析物を、吸着させているウィルス抽出物からのタンパク質に結合させる。適当に洗浄した後、ウェル中のタンパク質に結合した抗体の存在が、西洋ワサビパーオキシダーゼのようなシグナルに結合した、ヒトイムノグロブリンに対する抗体を用いて、検出される。

結合していないシグナルを洗い落と１−た後、それぞれのウェルでの酵素活性のレベルを測定する。ＥＬ　Ｉ　ＳＡの他の型および改変型もまたよく知られており、そしてしばしば用いられる。

風疹のＩｇＭおよびＩｇＧの特異的な測定のためのＥ、Ｌ　Ｉ　Ｓ　Ａの導入によって、風疹ウィルスの感染のための）ＩＡＩ診断用アッセイの使用は、急激に減少してきたくすなわち、１９７８−１９８０年の４５％から１９８２年の１９％）　（Ｓｔｅｅｃｅら、１９８５．　Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｍｉｃｒｏｂｆｏｌ、　２Ｌ　（１）、１４０−１４２；［’）。）ＩＡＩ試験に比ヘテ、ＥＬＩＳＡは、血清の前処理を必要とせず、１つの血清試料につき、１つあるいは２つの希釈物しか必要としない。さらにＥＬＩＳＡに使用する抗原性の物質の量は、前者の）ＩＡＩアッセイで必要な量より少ない。

残念ながら現在用いられている風疹感染のεＬＩＳＡ診断用試験にはいくつかの問題点がある。具体的には、ウェル間のバラツキおよびウェルをコートするのに用いられる風疹抗原の異なるバッチ間でのバラツキかしばしば見られる。このようなバラツキは、宿主細胞培養から風疹ウィルスを再現して単離しようとして直面する様々な問題点の結果であろう。

組織培養で風疹ウィルスを産生させるのは、技術的に困難である。ウィルスは低い力価になり、細胞膜破砕物から分離することは困難であり、そして非常に不安定である（Ｈｏ−Ｔｅｒｒｙら、１９８６．　Ａｒｃｈ　Ｖｉｒｏｌ、　８７．２１９−２２８：　ＣｈａｇｎｏｎおよびＬａＦＩａｍｍｅ、１９６４．　Ｃａｎ、　Ｊ、　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、１０．　５０１−０３）。このことにより、宿主細胞からり（られる細胞の破砕物から、ウィルスを単離するのは、困難になっている。この問題を克服するための試みで、風疹の感染を検知するためのほとんどのＥＬＩＳＡ法では、感染していない細胞から調製した抽出物でコートしたウェルのシリーズ、および風疹に感染した細胞から調製した抽出物でコートした別のウェルのシリーズを用いる。次にそれぞれの血清試料を両方のシリーズのウェル上で試験し、そして正味の反応は、風疹に感染した細胞から調製した抽出物でコートしたウェル上で測定したシグナルから、非感染細胞から調製した抽出物でコートしたウェル上で測定したシグナルを差し引いて計算する。

Ｔｅｒｒｙら（１９８８、Ａｒｃｈ、　Ｖｉｒｏｌ、　９８．　１８９−１９７）、およびＨｏ−Ｔｅｒｒｙら（Ｌ９８５、Ａｒｃｈ、　ｌ’１ｒｏ１．９０．　１４５−１５２および欧州特許出Ｍ第８８３０６１９１．３号）は、風疹Ｅｌグリコプロティンに対する３つの競合しないモノクローナル抗体の反応性について述べている。これらのモノクローナル抗体のそれぞれが結合するエピトープが同定されており、ＥＰＩ、ＥＰ２、およびＥＰ３と命名されている。ＥＰＩおよびＥＰ２に対するモノクローナル抗体は、赤血球凝集阻害および中和活性の両方を示す。ＥＰ３に対するモノクローナル抗体は、中和活性のみを示す。この３つのエピトープのウィルスゲノム中の正確な配座は、図１に示されている。これらの記録のうち、ＥＰＩ、ＥＰ２、あるいはＥＰ３エピトープに相当する合成ペプチドについて記載しているものはない。

従って、このようなエピトープに相当する合成ペプチドが、風疹抗体検出のだめの診断用試験の発達にどれほど有用であるかは知られていない。

１９６３−１９６５年の風疹の流行によって、風疹に対するワクチンの発達が促された（Ｐａｒｋｍａｎら、１９６６、Ｎ、　Ｅｎｇｌ、　Ｊ、　Ｍｅｄ、　２７ｉ、　５６９−５７４）。ワクチンは、弱毒化した生きたウィルスを含み、受容者の少なくとも９５％中で、免疫原性がある。中和性抗体の方は、自然感染後に出てくる場合より遅く出て、そして１０倍低いレベルであるが、それにもかかわらず、ワクチンによって刺激された抗体は、受容者が風疹にかかるのを効果的に予防する。しかし、現在の風疹ワクチンには、いくつかの欠点がある。例えば、ワクチン接種を受けた人のうち有意な人数が、時折起こる関節炎（主に成人女性にみられる）、軽い発疹、熱、およびリンパ節症にかかる。ワクチンにより予防されるのは５年から１０年のみであり、自然感染後の免疫性の方が長続きする。最も重要なことは、少量の感染性ウィルスが典型的には免疫の２−３２！１間後に鼻咽腔に現れることである。従って、妊婦にとって、最近ワクチンを受けた人と接触すること、あるいはさらに悪いのは、自分自身が妊娠していることを知らずに、ワクチンの接種を受けることで、ワクチン接種が非常に危険なものになっている。

合成あるいは組換えペプチドに基つくワクチンには、このような危険はない。なぜならば、抗原性の物質が、完全に無毒であるからである。しかしながら、このようなワクチンは、現在まだ入手できず、ペプチドに基づくワクチンの免疫原性および中和性質は、知られていない。さらに、すべてのペプチドがワクチンに有用であるとは考えられない。例えば、）ＩＡＩ試験での高い抗体価が必ずしも風疹の感染に対する予防と相関はしない（Ｐａｒｔｒｉｄｇｅら、１９８１．　Ｂｒ、　Ｍｅｄ、　Ｊ、　２８２．１８７−１８８）。これは、赤血球凝集および中和に関与するエピトープは異なっているという事実に基づき得る（Ｔｒｕｄｅｌら、１９８２、Ｊ。

Ｖｉｒｏｌ、　Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｓ−、１９１−１９７）。一方、中和性抗体の検出に基づく診断は、免疫の状態および風疹の感染の予防に、高い予想価値がある。

この違いは、風疹に対するペプチドに基づくワクチンの評価のみならず、風疹の感染性に関して患者の免疫の状態をアッセイするのにも重要である。例えば、現在利用されている「精製した」風疹の抗原は、感染力が強く、赤血球凝集エピトープおよび中和エピトープの両方を有する。従って、これらの抗原を用いた免疫の状態のための特異的な試験は、問題であり、そしてこのようなワクチンに用いられる抗原は、感染性で有り得る。

このような問題を考慮して、我々は、風疹ウィルスのＥ１ブロテイノおよびＣプロティン上の特定のペプチド配列を選択し、そしてそれらによって決まるペプチドを調製した。ＥしＩｓＡで測定して、抗体に高いレベルで結合する能力によって選択された我々のペプチドは、風疹の感染に対する診断用試験に有用である。

中和抗体によって認識される本発明のペプチドはまた、完全に無毒の風疹ワクチンの活性成分として有用である。

光層ｆｌ巨風疹ウィルスに曝された血液あるいは体液のスクリーニングおよび風疹感染に対する安全かつ効果的なワクチンの調製物に用いるための、新規なペプチドが開示されている。環状構造（好ましくはペプチド中にある２つのシスティン残基が結合することによって形成されたもの）が導入されているペプチドは、驚くべきことに、対応する直鎖状ペプチドに比べて、診断上も予防用抗体を刺激することにおいても、より活性があり、従って、本発明の好ましい抗原である。

本発明のペプチドは、風疹ウィルスの抗体の検出のための、広範囲の特異的結合アッセイにおいて、風疹の抗原の検出に役立つ抗体を誘起するための免疫原として有用である。あるいは、風疹ウィルスの感染に対するワクチンの調製に有用である。

図面の簡単な説明図１は、風疹ウィルス（Ｊｕｄｉｔｈ株）のＥｌグリコプロティンのアミノ酸配列を示す。配列中のアミノ酸は、以下の１文字コードを用いて示す。すなわち、Ａ＝ａｌａ、　Ｃ＝ＣｙｓＳＤ＝ａｓｐ、　Ｅ＝ｇｌｕＳＦ＝ｐｈａＳＧ＝ｇｌｙＳＨ＝ｈｉｓ、１＝ｉｌｅＳＫｌｙｓ、、Ｌ；１ｅｕＳＭ−ｍｅｔ。

Ｎ＝ａｓｎ、　Ｐ＝ｐｒｏ、　Ｑ＝ｇｌｎ、　Ｒ＝ａｒｇ、、５＝ｓｅｒ、Ｔ＝ｔｈｒＳＶ＝ｖａｌ、Ｗ＝ｔｒｐ１Ｙ−ｔｙｒである。

グリコリル化部位は、推定（？）あるいは確定（■）のどちらかで示しである。

表示ＥＰＩ、ＥＰ２、およびＥＰ３は、Ｔｅｒｒｙら、およびＨｏ−Ｔｅｒｒｙら（前出）で確認された３つのエピトープを示す。表示ＢＣＨ−１３９、環状ＢＣＨ−１３９、ＢＣｌ（−１，４０、環状ＢＣＨ−１４０、ＢＣＨ−１７４、ＢＣＨ−１７６、ＢＣ）！−１７７、ＢＣＨ−１７８、および環状ＢＣＨ−１７８は、本発明の様々なペプチドを示す。二本線は、列挙しているいくつかのポリペプチドの環状構造を示す。

図２は、風疹ウィルス（Ｔｈｅｒｆｅｎ株）のＣプロティンのアミノ酸配列を示す。表示ＢＣＨ−２２’ｌは、本発明の特定のペプチドを示す。

ｌ豆ユ反咀本発明は、風疹ウィルスのＥ１グリコプロティンおよびＣプロティンの領域に相当する新規なペプチドを提供する。本発明はまた、このようなペプチドのアナログ、およびこれらのペプチドおよびアナログの混合物および混合体を提供する。

以下の記述により明らかなように、これらのペプチド、アナログ、混合物、および混合体は、風疹ウィルスおよびそれにおよび組成物に有用である。

本発明のペプチドは、以下の（ｉ）および（ｉ　ｉ）からなる群から選択される：（ｉ）次式を有するペプチド：ａ　−Ｘ−ｂここで、Ｘは、少なくとも６個のアミノ酸の配列であって、風疹ウィルスのＪｕｄｉｔｈ株のＥｌグリコプロティンのＡＡ２１３〜ＡＡ２９１に相当する、風疹ウィルス株のＥｌグリコプロティンのアミノ酸配列由来のプロ、り、そのアナログおよびこれらのブロックの逆配列およびそのアナログ；ａはアミノ末端であって、該ペプチドのカップリングを促進するかまたは免疫原性あるいは抗原性を改善するのに有効な、１〜８個のアミノ酸あるいは置換基：およびｂはカルボ牛ンル末端であって、該ペプチドのカップリングを促進するかまたは免疫原性あるいは抗原性を改善するのに有効な１〜８個のアミノ酸あるいは置換基；および（工１）次式を有するペプチド：Ｚは、少なくとも６個のアミノ酸の配列であって、風疹ウィルスのＴｈｅｒｉｅｎ株のＣプロティンのＡＡ、〜ＡＡ２．に相当する、風疹ウィルス株のＣプロティンのアミノ酸配列由来のブロック、そのアナログおよびこれらのブロックの逆配列およこのアミノ酸は、例えば、風疹ウィルスの几ｄｉｔｈ株のＥｌグびその挿入体であり、ａおよびｂは、上記に定義した通りである。

本明細書では、Ｊｕｄｉｔｈ株のＥｌグリコプロティンについての、Ｔａｒｒｙら（Ａｒｃｈ、Ｖｉｒｏｌ、９８．　１８９−１９７．　１９８８）に記載の、そしてＴｈｅｒｉｅｎ株のＣプロティンについての、Ｔａｋｋｉｎｅｎら（ＪＧｅｎ、　Ｖｉｒｏｌ、　６９，６０３−６１２．１９８８）に記載の、アミノ酸配列および番号付けを用い（参考としやすいために）、本発明のペプチドの特定のアミノ酸配列を命名および表示する。しかし、これらのペプチド、そのアナログ、およびその逆配列は、例えば、Ｔｈｅｒｉｅｎ、　Ｊｕｄｉｔｈ、およびＭ３３株を含む、すべての風疹ウィルスの株の診断および予防に有用である。さらに、これらの株のＥ１グリコプロティンおよびＣプロティンの領域に相当するアミノ酸配列に特徴的なペプチド、そのアナログもまた、本発明および本出願の請求の範囲の範囲内に含まれる。そして、用語「相当する」および「相当している」は、風疹ウィルスの任意の株の決められた領域の、天然のアミノ酸のことを言及するものとする。

本発明はまた、上記のペプチドのアナログをも含む。本明細書の用語「アナログ」は、天然の風疹アミノ酸配列のブロックからなる部分のペプチド鎖中の１個以上の部位でのアミノ酸の挿入体、欠損体、置換体、および改変体を示す。しかし、上記のように、このような挿入体、欠損体、置換体、および改変体であっても、本発明のペプチドは、少なくとも以下の６個のアミノ酸配列を含まなければならない。すなわちノルロイシン、およびβ−バリンのような、アミノ酸を含む。

リフプロティンのＡ　Ａ　２＋３〜ＡＡ２９１由来のプロ／りとして、あるいはそのブロックの逆配列として取られたものである。

あるいは、このアミノ酸は、例えば風疹ウィルスのＴｈｅｒｉｅｎ株のＣプロティンのＡＡ＋〜ＡＡ２１由来のブロック、あるいはそのブロックの逆配列である。

ペプチド鎖中の天然のアミノ配列プロ／りの好ましい改変体および置換体は、（呆存的なものである（すなわち、ペプチドの二次構造および親水性に最小限の影響しかないもの）。

このようなものには、Ａｔ１ａｓ　ｏｆ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　５ｅｑｕｅｎｃｅ　ａｎｄ　５ｔｒｕｃｔｕｒｅ　５．　１９７１１で、Ｄａｙｈｏｆｆが、そしてＥＭＢＯＪ、Ｌ　１７９−１８５．１９８９で、Ａｒｇｏｓが記載しているような、置換体が含まれる。例えば、以下の群に属するアミノ酸同士は、保存的な変換を示す０すなわち、ａｌａ、　ｐｒｏＳｇｌｙ、　ｇｌｕ、　ａｓｐＳｇｉｎ、　ａｓｎＳｓｅｒ。

ｔｈｒ；　ａｙｓ、　ｓｅｒ、ｔｙｒ、　ｔｈｒ；　ｖａｌ、Ｂｅ、、ｌｅｕ％ｍｅｔ、　ａｌａｌｐｈｅ；ｌｙｓ、　ａｒｇ、　ｈｊｓ；およびｐｈｅ％ｔｙｒ、ｔｒｐ、　ｈｉｓである。同様に、酸化される傾向にあるメチオニンは、ノルロイシンに置換され得る。置換体の中には、相当するしアミノ酸のＤ異性体もまた含まれる。

本明細書の用語「アミノ酸」　（例えば、定義ａおよびｂ中）は、風疹ウィルスのＥｌｌグツコプロティンあるいはＣプロティンからのブロックとしてのアミノ酸を言及するとき以外は、全ての天然のアミノ酸、Ｄ形アミノ酸、および天然でない、合成のおよび改変した、例えばホモシスティン、オルニチン、本明細書の用語「逆の配列」あるいは「逆配列」は、表示されたアミノ酸配列の逆順序のアミノ酸配列を意味する。例えば、ＡＲＱ丁ｅは、アミノ酸配列ＰＴＱＲＡの逆の配列である。

本発明のペプチドの例は、上記の式の範囲内のペプチドであり、このなかでＸは、Ｊｕｄｉｔｈ株のＥ１グリコプロティンのＡＡ２＋３′ＡＡ２３９．　ＡＡ２１９′ＡＡ２３９、Ａ　Ａ　２３ＪＡ＋Ａ　Ａ　２６２％Ａ　Ａ　２４９′Ａ　Ａ　２ａｅ、Ａ　Ａ　２Ｈ′Ａ　Ａ　２？？およびＡＡ２７３＋＋ＡＡ２９１でなる群から選択される配列に相当する、風疹ウィルス株のＥｌグリコプロティンのアミノ酸配列、それらのアナログおよびこれらの配列の逆配列およびそのアナログである。そしてＺは、Ｔｈｅｒｉｅｎ株のＣプロティンの配列ＡＡ、　〜ＡＡ２．に相当する、風疹ウィルスの株のＣプロティンのアミノ酸配列、そのアナログ、およびその配列の逆配列、およびそれらのアナログである。例えば、図１および図２を参照のこと。

これらの式で定義される、本発明のペプチドは、直鎖状あるいは環状であり得る。しかし、診断での使用においても、本発明のワクチンの活性成分としても、環状ペプチドの方が好ましい。

本発明の直鎖状ペプチドの例は、以下のＥｌグリコプロティン由来ペプチド（参考として、Ｊｕｃｌｉｔｈ株のアミノ酸配列を用いる）；Ｂ（Ｊ−ｉ３９：　ａ−ＶＣＱＲＨ５ＰＤＣ５Ｐ、ＬＶＧＡＴＰＥＲ−ｂＢＣＨ −１４０：　ａ−ＧＬＧＳ：）ＮＣＨＧＰＤＷＡＳＰＶＣＱＲＪ（Ｓ−ｂＢＣＦ、−１７４：　ａ　−ＴＰＥＲＰＲＬＲＬＶＤλＤＤＰＬＬＲＴＡ−ｂＢＣＨ− ４７６：　ａ−ＶＤＡＪ）ＤＰＬＬＲＴ入ＰＧＰＧＥＷＶＴ−ｂＢＣＨ−１７７：　ａ−′ＥＶＷＴＰＶＩＧＳＱＡＲＸＣＧＬＨニーｂＢＣＨ−１７８：　ａ− ＮＱＱＳＲＷＧＬＧＳＰＮＣＨＧＰＤＷＡＳＰＶＣＱＲＥＳ−ｂさらに、以下のＣプロティン由来ペプチド（参考を容易にするため、Ｔｈｅｒｉｅｎ株を用いる）：ＢＣ！’、−２２９：　ａ−ＭＪ、５ＴＴＰＴＴＭＥＤＬＱＫＡＬＥＡＱ５Ｒ＝ｂ（ここでａおよびｂは、上記で定義した通りである）およびこれらのアナログである。ＢＣ）１−１４０およびＢＣＨ−１７８が好ましく、そしてＢＣＨ −１７８が最も好ましい。

本発明の好ましい環状ペプチドは、以下の（ｉ）、（ｉｉ）、あるいは（ｉｉｉ）の式を有する（参考を容易にするためにＪ　ｕｄ　ｉ　ｔｈ株のＥ１グリコプロティンのアミノ酸配列および番号付けを用いＢは、存在するなら、風疹ウィルスのＪ　ｕｄ　ｉ　ｔｈ株のＥ１グリコプロティンのアミノ酸ＡＡ２ｚａからＡＡ２１３〜ＡＡ２２Ｊまでに相当する、１〜１２個のアミノ酸およびそのアナログ；Ｊは、存在するなら、風疹ウィルスのＪｕｄｉｔｈ株のＥ１グリコプロティンのＡＡ２３６からＡＡ２３６〜ＡＡ２５２まてに相当する、１〜＋７１Ｂｉｌのアミノ酸およびそのアナログ；およびａおよびｂは、上記に定義した通りである；およびここで：Ｏは、存在するなら、風疹ウィルスのＪｕｄｉｔｈ株のＥ１グリコプロティンのＡＡ２３ＡからＡＡ２１３〜ＡＡ２３ａまでに相当する、１〜２２個のアミノ酸およびそのアナログ；Ｕは、存在するなら、風疹ウィルスのＪｕｄｉｔｈ株のＥｌグリフプロティンのＡ　Ａ　２４３からＡＡ２ａ３〜ＡＡ２５２に相当する、１〜ＩＯ個のアミノ酸およびそのアナログ：およびａおよびｂは上記で定義される通りである；および（ｉｉｉ）　これらのアミノ酸配列の逆配列。

本発明のより好ましい環状ペプチドはぐ参考を容易にするために、Ｊｕｄｉｔｈ株のＥ１グリコプロティンを用いる）：「−一一一一一コｆｚ　ａｃ　Ｅ３ＣＩ−１−＋３？　：　ａ−ｖｃｑＲＨｓｐＤｃｓＲＬｖｃａ −τＰＥＲ−’）ｇ　７１３ｃ）４−７４０：　ａ−にＬＧＳＰＮＣＨＣ；ＰＤＷＡＳＰＶＣＱＲ）ＥＳ−ｂ（ごこでａおよびｂは上記に定義した通りである）およびこれらのアナログである。本発明の最も好ましい環状ペプチド（参考を容易；；するために、」μｄｉｔｈ株のＥｌグリフプロティンを用いる）は：（ここでａおよびｂは、上記に定義した通りである）およびそのアナログである。

さらに、本発明の範囲には、本発明の環状および直鎖状合成ペプチドの混合体あるいは混合物が含まれる。例えば、風疹ウィルスに特異的な抗体の検出に好ましいペプチド混合物は、環状ＢＣＩ（−１７８の合成ペプチドあるいはそのアナログ、および本発明の他の任意の環状あるいは直鎖状ペプチドを含有する。風疹ウィルスに特異的な抗体の検出のためにより好ましいペプチド混合物は、環状ＢＣＨ−１７８の合成ペプチド、およびＢＣＨ−２２９合成ペプチドあるいはそのアナログを含有する。

本発明の２つ以上のペプチド配列を共有結合させたり、あるいはさらに本発明の２つ以上のペプチドからなるポリマーを形成させることもまた、所望され得る。

このような変化によって、ペプチドが、その抗原性を失うことなく、化合しにくい固体表面に吸着するのを促進し得る。本発明の１つ以上）合成ペプチドを、Ｔ細胞エピトープを持つことが知られている合成ペプチドと共有結合させることもまた所望し得る。

得られる結合体は、免疫原として、より有用である。

本発明の好ましいおよび最も好ましいペプチドの驚くべき特徴は、これまでに同定されているＥＰＩ、ＥＰ２、およびＥＰ３のエピトープ以外の領域のペプチドが、１つ以上のこれらのエピトープを含むペプチドより、風疹に特異的な抗体を検出するのにより高感度であるということである。例えば、これまでに同定されているエピトープのどれも含まないＢＣＨ−１４０およびＢＣＩＩ−１７８は、これまでに同定されている１種以上のエピトープを含むＢＣＨ−１３９、ＢＣＨ −１７４、ＢＣＨ−１７６、およびＢＣ）ｌ−１７７と比較して、診断上の性質がより改善されている。

本発明の好ましいおよび最も好ましいペプチドの別の顕著な特徴は、環化によって、抗原性が高まることである。例えば、環状ＢＣＨ−１３９、環状ＢＣ１１− １４０、および環状Ｂｅ）Ｉ−１７８でコートしたプレートを用いるＥＬＩＳＡア、セイでは、対応する直鎖型で感作させたプレートより、風疹に特異的な抗体の検出に対してより感度が高いことが示された（表１）。さらに、しばしば、陰性血清の試料によるシグナルもまた環状ペプチドによって減少した。表１にはまた、環状ペプチドＢｅｔ（−１４（ｌおよび環状ペプチドＢＣＨ−１３９に対する環状ペプチド混合物１７！１の優位性も示されている。

本発明の新規なペプチドの別の予期しなかった利点は、公知のＨＡＩ力価を有する、１０９個の試料のパネルから、風疹に特異的な抗体の完全な検出を提供し得ることである。環状ペプチドＢＣＨ−１７８は、この利点を有するペプチドの最も好ましい例である。本発明のペプチドの別の利点は、それが示す高いレベルの特異性である。このことによって、擬陽性の数が最小限となる。

上記に記載のａおよびｂにあるように、本発明のペプチドの天然風疹アミノ酸配列からなるペプチドブロックを改変して、免疫診断試薬としであるいはワクチンの活性成分としてより有用な選択されたペプチドを作ることは、しばしば有用であり、そして確実に本発明の範囲内にある。このような改変には、例えば、以下のようなものか含まれる。ニーへテロニ官能性の架橋剤による、ペプチドの適切な担体へのカップリングを促進するために、片方の末端あるいは両末端に７ステイン残基を付加すること。このような架橋剤は、例えばこのような結合を促進するのに好ましい試薬である、スルホスクシンイミジル−４−（ｐ−マレイミドフェニル）ブチレート、スルホスクシンイミジル−４（Ｎ−マレイミドメチル）フクロヘキサン−１−カルボキシレート、およびＮ−スクシンイミジル−３−（２ −ピリジルジチオ）フ”ロビオ不一トである。；−ペプチド同士の結合を促進し、支持体あるいはより大きなペプチドあるいはタンパク質にカップリングさせるため、またはペプチドの物理的あるいは化学的性質を改変するために、ペプチドの一方の末端あるいは両末端に、１個から８個のアミノ酸をさらに付加すること。このような変化の例は、エステル化反応を介してリンカ−として使用され得る、チロシン、グルタミン酸、あるいはアスパラギン酸、およりンノフ塩基あるいはアミド形成を介して結合し得るリジンの付加によってなされ得る。上記のように、このような付加的なアミノ酸には、全ての天然アミノ酸、Ｄ形アミノ酸、および公知の非天然の、合成、および改変アミノ酸が含まれる。；そして−例えば、アシル化あるいはアミド化による、ペプチドの一方の末端あるいは両末端の誘導体化。このような改変によって、ペプチドの最？、電荷に変化が起こり、そしてまた、固体支持体、担体、あるいは他のペプチドへの共有結合が促進され得る。ペプチドの力、ブリングを促進する、または免疫原性あるいは抗原活性を改善するために有効な置換基の例は、Ｃ２〜Ｃ＋ｓアンル基、ポリエチレングリコール、およびリン脂質である。

本発明の新規なペプチドを調製するために、任意の従来のペプチド製造法が用いられ得る。この中には、合成、組換えＤＮＡ法およびそれらの混合体が含まれる。ここでは固相合成が好ましい。この合成法では、樹脂支持体は、ペプチドの固相調製法の分野で従来用いられている、任意の適当な樹脂であり得る。好ましくは、ｐ−ベンジルオキシアルコールポリスチレンあるいはｐ−メチルへンジドリルアミン樹脂である。第一の保護されたアミノ酸を樹脂支持体にカップリングさせた後、当分野で従来から用いられている標準法によって、アミノ保護基を除去する。アミノ保護基の除去の後、残りのα−アミ／が保護されている、および必要に応じて、側鎖が保護されているアミノ酸が、所望の順番で次々と結合され、選択されたペプチドが得られる。あるいは、樹脂に支持されているアミノ酸配列と力、ブリングさせる前に、溶液法を用いて、複数のアミノ酸の基を結合させ得る。

適切な力、ブリング剤の選択は、確立された技術に従う。

例えば、適切なカップリング剤は、Ｎ、　Ｎ’−ジイソプロピルカルホノイミドあるいはＮ、Ｎ−／ノクロヘキシルカルホンイミド（ＤＣＣ）あるいはベンゾトリアゾール−１−イロキンート１ノス（ツメチルアミン）ホスホニウムヘキサフルオロ−ホスフェート単独あるいは好ましくは１−ヒドロキシベン゛／ト］ノアゾールと組み合わせたもの、である。他の有用なカップ１ノング法には、保護されたアミノ酸の予め形成された対称性の無水物を用いる。

伸長するポリペプチド鎖に導入される、それぞれのアミノ酸に用いられる、必要なα−アミノ保護基は、好ましく１よ、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（ＦＭ６Ｃ）である。

しかし、カップリング条件下で分解せず、かつ伸長して（Ｘるペプチド鎖中に既に存在している他の任意の保護基の存在下で、容易に選択的に除去され得る限り、他の任意の適当な保護基も用いられ得る。

側鎖のアミノ酸のための保護基を選択する基準は；　（ａ）合成のそれぞれの工程における、α−アミノ保護基の除去のために選択された反応条件下での、種々の試薬↓こ対する保護基の安定性；　（ｂ）保護基の有利な特性の保持性（すなわち、カップリング条件下で、分裂しなＬＸこと）；および（Ｃ）ペプチド合成の完了時および他のペプチド構造に影響しな１，１条件下での保護基の除去しやすさ、である。

完全に保護されている樹脂支持体上のペプチド（ま、好ましくは、メチレンクロライド中の５０％〜６０％ト「ノフルオロ酢酸溶液で、１時間から６時間室温で処理して、ｐ−ベンジルオキ／アルコール樹脂から切り離される。この時、アニソール、チオアニソール、硫化エチルメチル、１．２−エタンジチオールおよび関連の試薬のような、適当な捕捉剤を存在させる。同時に、はとんどの酸に不安定な側鎖の保護基は除去される。より酸に耐性の保護基は、典型的にはＨＦ処理によって、除去される。

本発明の好ましい環状ペプチドは、周知の任意の合成環化法によって本発明の直鎖状ペプチドから調製され得る。好ましくは、ンステインの様なチオールを含む存在している２つの残基が用いられる。しかし、その代わりにチオール残基は、環化を進めるために非チオール残基に置き換えられ得る。例えば、本発明の環状合成ペプチドは、ペプチド合成の分野で一般的に知られている技術を用いて、保護されたあるいは保護されていないＳＨ基のジスルフィド結合への直接酸化的変換によって、調製され得る。好ましい方法には、フェリシアン化カリウムでの遊離のＳＨ基の直接酸化が含まれる。あるいは、置換基ａおよびｂを用いて、環化を進め得る。

本発明のペプチドは、当分野で公知の方法にしたがって、風疹ウィルス関連抗体を検出および定量するための診断薬と、　して有用である。これらの方法には、ＥＬＩＳＡ、赤血球凝集法、シングルドツトおよびマルチドツト法およびアッセイが含まれる。

本発明のペプチドまたはペプチド混合物あるいは混合体を用いた、風疹ウィルスに対する抗体を測定するための、好ましい都合のよい古典的な方法は、酵素結合イム／ソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）である。このアッセイでは、例えば、本発明のペプチドまたはペプチド１ｆｆｌ　６物あるいは混合体は、マイクロタイタープレートのウェル上に吸着させるかあるいは共有結合させる。次にウェルを試験される血清あるいは分析物で処理する。洗浄の後、パーオキシダーゼで標識した抗ヒトＩｇＧあるいは抗ヒトＩｇＭをウェルに加える。パーオキシダーゼの測定は、例えば３．３°、　５．５’−テトラメチルベンジジンのような対応する基質で°行われる。この例のアッセイの有用性を損なうことなく、パーオキシダーゼは、例えば、放射活性、蛍光、化学ルミネッセンス、あるいは赤外線発光標識のような他の標識と交換し得る。

本発明のペプチドによる、風疹ウィルスに対する抗体の測定の別の方法は、いわゆる「二抗原サンドイッチアッセイ」（Ｄｏｕｂｌｅ−Ａｎｔ　ｉｇｅｎ−３ａｎｄｙ　１ｃｈ−Ａｓｓａｙ）の酵素免疫学的試験である。この方法は、１ｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｍｅｔｈｏｄｓ、　２０．　２５−３４．　１９７８に記載の、Ｍａ　ｉｏｌ　ｉ旧の研究に基づいている。この方法によれば、試験される血清あるいは他の分析物は、本発明のペプチドでコートしている固相−（捕捉層）、およびパーオキシダーゼあるいは池の標識により標識されている、本発明のペプチド（プローブ層）と接触させる。免疫反応は、１つあるいは２つの工程で行われ得る。免疫反応が、２つの工程で行われる場合、洗浄の工程は、典型的には２回のインキュベーシゴンの合間に行われる。単数口あるいは複数回の免疫反応の後、洗浄の工程が行われる。その後、例えばパーオキシダーゼには、Ｏ −フ二二レンジアミンを用いて、パーオキシダーゼあるいは池の／グナルか測定される。既に記載したものを含めた、他の酵素および色原体がこのアッセイに用いられ得る。

上記のアッセイおよびアッセイ法に用いるための適当な固相には、例えばアミラーゼ類、デキストラン類、天然あるいは改変型セルロース類、ポリエチレン、ポリスチレン、ポリアクリルアミド類、アガロース類、磁鉄鉱、多孔性ガラス粉末、フッ化ポリビニルジエンフルオリド（ｋｙｎａｒ）およびラテックスのような有機および無機のポリマー、試験容器の内部壁（すなわち、ガラスあるいは人工材料の、試験管、タイタープレート、あるいはキュベ／ト）および固体の表面（すなわち、ガラスおよび人工材料のロッド、末端が太くなっているロッド、末端が円い突出部あるいはラメラ（ｌａｍａｌｌａｅ）のロッド）が含まれる。ガラスおよび人工材料の球は、特に固相担体として適切である。

本発明のペプチドおよびそれらの混合物および混合体は、風疹ウィルスに対する抗体の測定および定量に有用であるばかりではない。これらのペプチドは、風疹ウィルス抗原それ自体の測定および定量にもまた有用である。なぜならば、遊離の、重合している、あるいは適当な担体に結合しているこれらのペプチドは、特にそして好ましくはモノクローナル抗体である、抗体を誘起するのに有用であるからである。この抗体は、免疫学的に風疹ウィルスの抗原と交叉反応し得る。

このような抗体は、例えば、哺乳動物あるいは鳥類に、十分な量のペプチドを注射し、所望の免疫反応を誘起し、そしてこの動物の血清由来の該抗体を回収することにより、作成され得る。抗体を誘起するための適当な宿主動物には、例えばウサギ、ウマ、ヤギ、モルモット、ラット、マウス、ウシ、ヒツジ、およびニワトリ（雌）が含まれる。好ましくは、所望のモノクローナル抗体を産生ずるハイブリドーマは、本発明のペプチドおよび従来の方法を用いて調製される。例えば、よく知られている、モノクローナル抗体を産生ずるための、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎの方法が用いられ得る。同じ抗原の異なるエピトープに対するモノクローナル抗体を区別するために、　Ｓｔ”、：ｈｌｉら（Ｊ、　ｏｆ　ＩＩＩｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｍｅｔｈｏｄｓ、３２．２９７−３０４．１９８０）の方法が用いられ得る。

上記の抗体を用いて、風疹ウィルスあるいはその一部を測定あるいは定量するのに、一般的に知られている様々な方法が用いられ得る。このような方法の１つでは、アッセイされる既知の量の血清試料あるいは他の分析物、放射標識した本発明の直鎖状あるいは環状ペプチドまたはこのペプチドの混合物あるいは混合体、および未標識の本発明のペプチドまたはその混合物あるいは混合体を共に混合し、所定量の抗ペプチド、好ましくはモノクローナル抗体を加え、そしてその混合物を静置する。次に、得られた抗体／抗原複合体を、当該分野で知られている方法によって、未結合の試薬から分離する。これらの方法は、すなわち、硫酸アンモニウム、ポリエチレングリコール、過剰のあるいは不溶性の支持体に結合させた第二抗体、あるいはテキストランてコートした木炭による処理である。次に、結合あるいは未結合の相の標識したペプチドのｌｌｉを測定し、そして試料中の風疹ウィルス抗原の含有量か、よく知られている方法で、スタンダードのカーブと、標識されている成分のレベルを比較して決定される。

これらの抗体をアッセイに用いる他の適当な方法は、「二抗体サンドイッチアッセイ」である。このアッセイでは、試験する試料は、例えば、異なる動物（例えばヒツジとウサギ）を、本発明のペプチドまたはその混合物あるいは混合体で免疫することによってできる、２つの異なる抗体で処理される。

この抗体のうち一方は標識され、そしてもう一方は、固相上にコートされる。好ましい固相は、プラスチックビーズであり、そして好ましい標識は、西洋ワサビパーオキシダーゼである。

「二抗体サンドイツチ法」では典型的には、試料を固相抗体および標識抗体とともにインキュベートする。しかし、まず、試料を固相抗体に接触させ、次に随意洗浄した後、その試料を標識抗体に接触させることも可能である。しかし好ましくは、試料は、固相および標識抗体と共に処理される。１回あるいは複数回の免疫反応の後、混合物を洗浄し、標識を当分野で知られている方法にしたがって測定する。パーオキシダーゼを標識として用いるような場合、測定は、例えば、０ −フ二二レンジアミンあるいはテトラメチルベンジジンのような基質を用いて行われ得る。標識した成分の量は、分析物あるいは血清試料中に存在する抗原の量に比例する。

上記のように、風疹ウィルス抗原、あるいはそのウィルスに対する抗体の測定および定量のための方法およびアッセイは、適当なテストキ、ｌ−中で行われ得る。このテストキットには、容器の中に、本発明のペプチド、その混合物あるいは混合体、またはこれらのペプチドあるいはその混合物および混合体によって誘起された風疹ウィルスに対する抗体が含まれている。

本発明のペプチドおよびその混合物および混合体はまた、風疹ウィルスに対する予防的な免疫を、そのウィルスの感染に感受性のある宿主内で誘導し得る、ワクチンの活性成分として有用である。投与のルート、抗原の用量、注入の回数および頻度は、それぞれの個体により様々であり、そして、他のウィルスの感染に対する免疫を与えるのに現在用いられているものに匹敵し得る。例えば、本発明のワクチンは、少なくとも１つの本発明のペプチド、そのアナログまたはその混合物あるいは混合体を含む、薬学的に許容可能な組成物である。この本発明のベプチード、そのアナログまたはその混合物あるいは混合体は、その組成物で処置された、ヒトを含む哺乳動物中で、ある期間、風疹ウィルスの感染を予防するのに十分な抗体を誘起するのに効果的な量が含まれている。

ワクチンは、公知の方法により調製される。本発明のワクチン組成物は、都合良くそして従来通り、生理学的に許容され得る担体物質と結合される。このような担体物質には、医薬品グレードの生理食塩水、破傷風毒素、およびキーホールリンベノトヘモンアニン（ｋｅｙｈｏｌｅ　Ｉｉｍｐｅｔ　ｈｅｍｏｃｙａｎｉｎ）が包含される。本発明のワクチン組成物はまた、アジュバントあるいはミョウバン（ａｌｕｍ）　調製物、リポソーム、あるいはイムノモジュレータ−のような、他の免疫反応促進剤を含み得る。さらに、これらのワクチン組成物は、池の抗原を含み、風疹に加え、池のウィルス（例えば、おたふくかぜおよび麻疹）、あるいは病原体に対する免疫を提供し得る。これらの他の抗原の量もまた、処置される哺乳類動物および疾患の経過に依存する。しかし、抗原は、その病原体あるいはウィルスから処置した哺乳類動物を、ある期間保護するのに十分な量の抗体を誘起゛するのに有効な量で含まれるべきである。

（以下／ｊ：ｌ５ｒ）本発明のペプチドの合成および利用の一般的な方法を以下に提供する。

メチレンクロライド（ＣＨ２ＣＩ２）とジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）との混合物（４：Ｉ）中の、所望のＮα−ＦＭＯＣ保護アミノ酸残基を、ＣＨ２Ｃ１２：　ＤＭＦ　（４：　１）中のｐ−ベンジルオキシアルコール樹脂懸濁物に、０ °Ｃにて添加した。

この混合物を手動で数秒かき混ぜ、次にＮ、Ｎ’−ジシクロへキシル−カルボジイミド（ＤＣＣ）で処理し、次いで触媒量の４−（ジメチルアミノ）ピリジンで処理した。この混合物を０℃にてさらに３０分攪拌し、次に室温で一晩攪拌した。濾過した樹脂を、ＣＨ２Ｃｌ２、ＤＭＦおよびイソプロパツール（各々３回）で連続して洗浄し、最後にＣＨ２Ｃ１２で洗浄した。

この樹脂をＣＨ２Ｃｌ２に懸濁して、水浴中で冷却した。再蒸留ピリジンを攪拌しながらこの懸濁物に加え、次にベンゾイルクロライドを添加した。Ｏ”Ｃにて３０分攪拌を続け、さらに室温で６０分攪拌し続けた。濾過後、この樹脂を、ＣＨ２Ｃ１２、ＤＭＦおよびイソプロパツール（各々３回）で連続して洗浄し、最後に石油エーテル（２回）で洗浄してから、一定の重量になるまで高圧下で乾燥させた。Ｍｅｉｅｎｈａｆｅｒら（Ｉｎｔ。

Ｊ、　Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｒｅｓ、、　Ｈ５３５，１９７９）の、分光光度計による置換の測定により、この樹脂の置換程度が示される。

Ｎα−ＦＭＯＣで保護された最初のアミノ酸残基をもつ樹脂をＢｉｏｓｅａｒｃｈ　９６００ペプチド合成機の反応容器に入れ、そして以下のような工程で処理した：１）ＤＭＦで洗浄した（各々２０秒ずつ４回）２）３０％ピペリジンのＤＭＦ溶液で予め洗浄した（３分）−３）３０％ピペリジンのＤＭＦ溶液で脱保護した（７分）４）ＤＭＦで洗浄した（各々２０秒ずつ８回）５）カイサーチスト−遊離アミノ基を検査した（ポジティブでなければならない）６）次に、このペプチド樹脂を、８当量の所望のＦＭＯＣ保護アミノ酸および１ −ヒドロキシベンゾトリアゾールおよびベンゾトリアゾール−１−イロキシ−トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（全てが１６当量の４−メチルモルホリン含有の乾燥再蒸留ＤＭＦ中に溶解している）と、１あるいは２時間、緩やかに振盪した７）ＤＭＦで洗浄したく各々２０秒ずつ６回）。

工程７の後に、一部の溶液を取って、ニンヒドリン試験を行った。試験結果がネガティブならば、工程１に戻り、次のアミノ酸をカップリングする。試験結果がポジティブあるいはわずかにポジティブならば、工程６および７を繰り返すべきである。

上記概要は、本発明に記載されるペプチドの個々のアミノ酸のカップリングに泪いられ得る。ＦＭＯＣによるＮα−保護もまた、合成を通じて個々の残りのアミノ酸に用いられ得る。

放射性標識ペプチドは、上記カップリングのプロトコールを用いてトリチウム標識アミノ酸を取り込ませることにより調製され得る。

最後のアミノ酸の添加後、上記概要の工程１〜７に戻って、Ｎ−末端残基のＮａ −ＦｌｉｌＯＣを除去する。ペプチド樹脂をＣＨ２Ｃ１２で洗浄し、真空乾燥して、粗製保護ペプチドを得る。

Ｌま立：　ヒからのペプチドの　「および保護されたペプチド−樹脂を、２５％エタンジチオールおよび２．５％アニソールを含有する、５５％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）のＣＨ２Ｃｌ２溶液中に懸濁した。この混合物をＮ２でフチ・ノ／ユして、室温で１．５時間攪拌した。この混合物を濾過して、樹脂をＣＨ２Ｃｌ２で洗浄した。この樹脂を再び、ＣＨ２Ｃｌ、２中の２０％ＴＦＡで５分間室温にて処理した。この混合物を濾過して、樹脂をＣＨ２Ｃｌ２中の２０％ＴＦＡで洗浄し、次いでＣＨ２Ｃｌ２で洗浄した。回収した濾液を３５°Ｃより低い温度で真空蒸発させて、その残留物を乾燥ジメチルエーテルで数回すり砕いた。この個体を１０％酢酸水溶液に溶解して、凍結乾燥し、〜粗生成物を得た。

さらに、ａｒｇおよびｃｙｓ残基を含有するペプチドを、アニソールおよびジメチルサルフィドの存在下で、０℃にて１時間ＨＦ処理して脱保護した。このペプチドを１０％酢酸水溶液で抽出し、ジメチルエーテルで洗浄して、凍結乾燥して粗製ペプチドを得た。

Ｌ火工：二工立工立■１粗製ペプチドを、移動相グラジェントにより、Ｃｌｌ１あるいはＣ４の逆相Ｖｙｄａｃカラム（２，５Ｘ　２５　ｍｍ）での分離、ｉ’ＩＪＨＰＬ　Ｃにより精製した。分離物を２２０ｎｍでモニターして、続いて分析用ＨＰＬＣを行った。

関係のある画分をプールし、蒸発して凍結乾燥した。合成ペプチドの同定は分析用逆相クロマトグラフィーおよびアミノ酸分析により確認された。

立夫旦：ベブチドの環化フェリシアン化カリウム溶液（０，ＯＩＭ、ｐＨ７，０）を、ピ　直鎖状ペプチドの希釈水溶液（０，５ｍＭ）　ｐＨ７，０にゆっくりと添加した。室温で２４時間反応後、ｐＨ−ｆ−５，０まで下げ、この溶液をイオン交換樹脂（Ｂｉｏ− Ｒａｄ　Ａｇ−３−Ｘ４ａ、　ＣＩ−型）で３０分間処理した。懸濁物を濾過し、その濾液を凍結乾燥して、粗製環状ペプチドを得た。このペプチドを分離用逆相ＨＰＬＣで精製し、アミノ酸分析により解析した。環化の証明は、環状ペプチド溶液の一部を還元して直鎖状ペプチドに戻すことによって、環状ペプチドと出発の１１！鎖状ペプチドのＨＰＬＣでの移動度の比較を行って得られた。そしてまた環化した後に遊離のスルフヒドリル基の消失を観察する（Ｅｌ１ｍａｎ試験）ことによっても得られた。

１ｊＬＬ：ペプチドとウシ　゛アルブミンあるいはキーホールリンペットヘモシアニンとの　４スルホスクシンイミジル４−（ｐ−マレイミドフェニル）フチレート（Ｓｕｌｆｏ−３ＭＰＢ）あるいはスルホスクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）ンクａへ牛サンー１−カルボ牛ンレート（Ｓｕｌｆｏ−３ＭＣＣ）のいずれかで予め誘導体化した、ＢＳＡあるいはＫＬＨにペプチドを結合した。

Ｓｕｌｆａ−３ＭＰＢあるいはＳｕｌｆａ−３ＭＣＣ（Ｐｉｅｒｃｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）の水溶液を、ＢＳＡあるいはＫＬＨの０．０２Ｍのリン酸ナトリウムバッファー（ｐＨ７，０）に添加した。この混合物を室温にて４５分間振盪し、そして４℃にて０．１Ｍのリン酸ナトリウムバッファー（ｐＨ６，０）で平衡化したセファデックスＧ−２５カラムに、活性化した担体を直ちにのせた。

活性化した担体に相当する最初の吸収ピーク（２８０１ｍ）の画分を丸底フラスコに集め、そこにペプチドの０．０５Ｍリン酸ナトリウムバッファー（ｐＨ６，２）を添加した。この混合物をＮ２で完全にフラッシュし、室温で一晩イン手ユベートした。カップリング効率は、３Ｈ−標識ペプチドを用いて、そして結合体のアミノ酸分析によりモニターした。

工まニー　Δイムノソルベントアッセイ　ＥＬＩＳＡ　によろうウィルスに・　る　のマイクロタイタープレートの各ウェルを、ペプチドあるいはペプチド混合物を含有する溶液（５ａｇ／ｍ　Ｉ　）　１００μｔ′Ｔ：満たし、て、−晩装置した。ウェルを空にして、そして洗浄バッファー（ト’／ス、０．０４３Ｍ　；　ＮａＣ１，０５Ｍ：　チメロサール、０．０１％ｗ／ｖ　；　Ｔｗｅｅｎ２０．００５％ｖ／ｖ；　ｐ）１７．４）で２回洗浄した。次に、０．３５ｍ１の洗浄バッファーで３７℃にて１時間ウェルを満たし、そして同じバッファーで１回洗浄した。分析する予定の血清試料を標本バッファー（洗浄バフファー十カセイン、０．０５％Ｗ　／　Ｖ　）で希釈した。ウェルを洗浄バｙ７アーですすいでから、希釈した血清試料（０，１ｒｎｌ）を加えた。

これを室温で１時間静置してインキュベートした。次に、ウェルを空にして、洗浄バッファーで２回すばやく洗浄し、さらに１回２分間洗浄した。１％Ｗ／Ｖウシ血清アルブミン含有の洗浄バッファーで希釈した結合体溶液（５ｍ１の５０％グリセロール中０．５ｍｇのパーオキシダーゼ標識アフィニティー精製のヒトｒｇＧあるいはヒトＴｇＭに対するヤギ抗体）を各ウェルに加え（０，１ｍ１）、モして室温で１時間インキュベートした。次に、ウェルを空にして、洗浄バッファーで５回洗浄した。基質溶液（３，３’、５．５−テトラメチルベンジジン、８ｍｇ／ｌ　ｍ　ｌ　（７１ＤＭＳＯ）を、１００容量（Ｄｏ、１Ｍクエン酸− 酢酸バッフｙ−（ｐＨ５，６，０，１％ｖ　／　ｖの３０％Ｈ２Ｏ２含宵）で希釈し、これを各ウェルに加えた（０．１　ｍ１／ウエル）。１ｏ分後、各ウェルの内容物を０．１ｍｌの２Ｎの１（２Ｓ　Ｏｔで処理して、光学密度（ＯＤ値）を４５０ｎｍで読み取った。全ての測定を２回行った。

実質的に上記の一般方法を用いて、下記の特定のペプチドを調製した：　ＢＣ）１−１３９、環状ＢＣＨ−１３９、ＢＣＣｌ４０．環状ＢＣＩ＋−１４０゜ＢＣＨ−１７４、ＢＣｌ（−１７５、ＢＣ）Ｉ−１７７、ＢＣ）］−１７８、環状ＢＣＩ（−１７８およびＢＣＨ−２２９゜次に、これらのペプチドにおける風疹−特異的抗体の検出能力を評価した。

実ｇｉ実験ｌでは、カナダ、アメリカおよびヨーロッパから得られた、種々の陽性血清および陰性血清の血清および血漿試料のパネルを用いた、ＥＬＩＳＡアッセイにおいて、ペプチドＢ（：）ｌ−１３９、環状ＢＣＩ（−１３９、ＢＣ）ｌ−１４０、環状ＢＣ）１−１４０、ＢＣＨ−１７８および環状ＢＣ）！−１７８を比較した。

その結果を表１に示す。

（以下　余白） −１−よ＜７ｔｆｆ４１りニーｈａ−ｔｂｌ　Ｏ，０１４０，０１６０，Ｑ２５　０．０１０　０．０２５　０．ＯＢｌ　２５Ｇ　０．１４コ　Ｃ）、：ＬＳＯＬ、４８２　１．６１！９　１．６６９　工、９１１２　０　０．１２５　０．１’５　０．ｕＯＯ，０５００，２４６０，１！５３　０　０．０７１　０．０６４　０＋ｕ７　０．２００　０ｊｊ５　０．ユ０２４　１２Ｂ　０．１４０　０．１コＯＯ，２４６０，２５０ユ、＜２０　１６７４５　０　０．４２０　０．４４１　０．２０５　０．１４０　０．２０２　０．２０）６　１０２４　０．２５２　０．５６７　１．１７０　１．７５０　１．４９０　１．８４！７　０　０．１５３　０＋２０２　０．１９８　０．２５０　０．１６６　０．４４３Ｂ　２％　０．０Ｂ６　０．１０６　０．９４９　０．１！５０　１４８８　１−５７６９　０　０．１４２　０ｊ、４２　０．１６４　０＋２４０　０．ｌＥ３　０．１４９１０　０　０．１４６　Ｃ，１３９０，１Ｂ９　０．’２００　０．２０２　Ｃ＋！５０’ｉ　０　０．：、２２　０．１６０　０．’５６　０．Ｌ！０　０．２’ｌ　Ｏ，１９８ｔ〒１−才’７”：　０．２１４　０．２１６　０．２２５　０．２！ＯＯ，２２５０，２ｍ５＊　この実験では、その値を越えろ場合にその試料カイ層、疹抗体の存在に対してポ／テイブであると考えられる、力、トオフ（直か、ネガティブ：／←ローＩし試１１（試Ｉｔ　ＦＦＦ釈・・、ファー）つ）ら得られるＯＤ（直−０，２００のｌ直：こ等し′−１イ直であると定義され１こ。

コレラの結果は、環状ペプチドがそれに対応する直鎖状ペプチドより、より高い感度および特異性を有することを実証する。平均すると、環状ペプチドは、血清が陽性血清の場合ではより高い結果、および血清が陰性血清の場合で１よより低い結果を与える。これらの結果もまた、環状ＢＣＨ−１７８が他の環状ペプチドと比較して、驚くべき優れた性質を有することを実証する。

寒腹主実験２では、合成ペプチド環状Ｂｅ）Ｉ−１７８を風疹−特異的抗体のアッセイに用いる。その結果を表２に示す。

（以下　余白） −」−ユ入−１−１２５６２，６２２＋　２．３４６　＋Ａ−２−１　１０２４　２．８５０　＋１．９４５　＋Ａ−１−２　ＣＬ　０．５９１　＋　０．０４７　−人 −２−２１２８２，８５０＋　０．５コア　１Ａ−１−３００，３０４＋　０．７４０　＋入−２−３　５３．２　２．８５０　＋　２．６２６　−Ａ−１−４００，１５７−〇、２：ＬＳ　＝Ａ−２−４　２０４８　２．６３４　＋　１．０６７　＋Ａ−ｉ−５　０　０．２５２　＋　０．５７６−１−Ａ−２−５１０２４２，８５０＋　１．９９５　＝本　全ての血清および血漿試料はＡ−ｒ−ｊで表示されて（する。表示「ｊ」は所定のドナー１こ相当し；表示「ｉ」（ま１または２であり、それはこのドナー力１らの１回目（１）およびいくつかの場合では２回目（２）の献血を示して（入る。

＊＊　この欄には、測定したＯＤ値および定性的なｇ８号「＋」あるいは「−」が含まれている。これらの言己号（ま、その相当するＯＤ値がその試料の風疹ウィルス（こ対するＩｇＧの存在かポジテイフ′であるかまたは不力′テイフ′である力）を示す。

＊ネ水　上記と同様であるが、こｔｚ＋ま風疹ウィルス（こ文寸するＩｇＭ抗体の存在である。

λ−１−６０−０，０２０−−０，０２５−Ａ−２−６２５６２，３６８＋　１，４４８　雫入−１−７５１２２，５１５０’−１，７７２＋Ａ−１−８　１０２４　２．４６Ｂ　＋　２．０００　＋Ａ（−９５１２２，６３７＋　０．２１８　＋Ａ−１−１０　２５６　２．８５０　＋　０．４４８　十Ａ−１−ユｌ　２５６　１゜９２５　＋　Ｏ，８０９＋Ａ−１−’２　０　０．０１８−　０．１９０−Ａ−２−１２１０２４２，８５０＋　０．７０５　＋Ａ−１−１３　’ ＯＯ，０４９＋　０．６２６　〒Ａ−２−）ｊ　５ｍ２　２．８５０　＋　１２６４＋、ｑ−ｚ−λ４　０　０．０２Ｂ−０，１０９−人−２−１４２５６２，３９２＋　１．８６６　ΦＡ−１−１５　０　０．３４９　＋　１．２０６　− Ａ−２−ユ５　２５６　２．コ４３　＋　０．１９２−Ａ−１−１６００，０２０−０，３１６？Ａ−２−１６　１０２４　２．５ＬＢ　＋　０．２）Ｏ−Ａ− Ｌ−Ｂ７　０　０．０９６　−　０．１）７　＊Ａ−２−１７　５１２　２．５ユ６　中　１．５７５　＋Ａ−１−１８　２５６　１．７５１　＋　２．８００　＋入−１−’９　５１２　２．２８５　今　１２９６　＋入−２−２０　２５６　２．０３４　今　０．７２２　＋声ｔ−１−２：　６４　１．２５４　−　０．７２２　＋＋入−２−２ｉ　５ｍ２　２．８５０　＋　０．６１６　−ＰＡ −：＝−２２０−０，０５９−０，１６３−人−２−２２２５６２，７０７−０，４０４−入−１−２３：、２８　０ｊ６６　−　１．５２：ｌ　−Ａ−ｉ−２４０−０，０２５−０，１２４−Ａ−２−２４２５６２，３２４＋　：Ｌ、４６コ　→Ａ−１−２５　０　−０．０１３−　０．０９：ｌ　−Ａ−２−２５５１２２，６２フ　→　１．５４６　→Ａ−１−２６　１６　０．０６８　−　０．６７５　＋Ａ−２−２６　１０２４　２．５１５　＋　１．１５コ　＋Ａ−ｉ− ２７　５１２　１．コ２７　峰　０．９５６　＋Ａ−２−２７　５１２　２．７４５　＋　０．５２６　４八−ニー２８　５１２　２．８５０　＋　１．５２１　＋入−ニー２９　１６　０．３５５　＋　０．９９２　＋Ａ−１−：１０　０　−０．０１９−　−０．０９１−λ−２−３０　１０２４　２．０９０　＋　０．４７０　＋λニーー３１　０　０．０７’Ｏ−−０，０４３−λ−２−３：　ユ０２４　ユ、７６２　＋　Ｏ，３５７−人−１−：！２　０　０．０２５− 　０．４５５ｗＡ−２−３２２５６１，８７０４ｉ、４ε５　→Ａ−２−ココ　２５６　Ｌ、Ｂ５９　◆　０．６０３　＋λ−ユニー４　ユ２Ｂ　２．６０９　＋　２．４７１　〒入−ニー３５　０　０−０９５−　０．１１１−み−２−３５５ユ２　１９４３　４　０．６８３　〒Ａ−４−３６　２５６　１．０９５　＋　２．８００　＋３ベーコ２−３７４０９６２．７２コ、−）０．０εコ、− Ａ−１−：１６　コ２　０．０３６　−　：Ｌ、０４８　−Ｐ）−、−２−３８５’２　２．０５８　＋　０．１２８　−人−ニーフ９　６４　０．４２０　− ”　、コ１３−λ−２−３９　２０４８　２．６５６　＋　１．５０６−ＰＡ− ２−４０１６コ８４　２．５２０　＋　：、、：１４：ｌ　−λ−１−４１　５１２　２．１１５０　◆　１．８６’３　−Ａ−２−４１５１２２，８５０＋　０．４６７　＋Ａ−１−４２　０　０．１０２　−　０．ユ２０　−３−２−４２　４０９６　２．６５９　＋　１．４０３　＋Ａ−１−４コ　１０２４　２．３６２　＋　１．２９５　中入−１−４４１２８１，３７２４２，２１６＋Ａ− １−４５　０　０．０７２−　０．２３４　−ＰＡ−２−４５５１２２，６６８＋　１．５７９　＝λ−２−４６　５１２　２．４８４　今　１．５９７　◆Ａ −２−４’７　１２８　２．０６９　＋　０．９４８　４Ａ−２−４８２５６２，７４３＋　０．４０１　峠λ−１−４９０−ｏ、ｏｘｏ　−０，２９１−Ａ− ２−４９５１２２，０４５＋　０．５２５　−＝み−１−５０２５６２，６４０ ’ｓ　０．７７フ　−Ａ−２−５０２５６２，：３２２　’ｈ　Ｏ，：ｌコ０− ＾−１−５ユ　６４　１．６９４　→　：１．４Ｃ１ｌ　＝入−２−５１　２５６　２．４４２　−　０．１６５−Ａ−１−５２００，１，３４−０，２２０→ 入−２−５２　２５６　２．２Ｓコ　今　０．６９７　◆Ａ−４−５：ｌ　Ｏ０，０２０−０，１１０−人−２−５３２５６２，１２Ｂ　？　０．０ユコ　−人 −’−５４０−０，００９−−０，００１−Ａ−２−５４２５６２，８ＳＯ＋　Ｏ，コ１コ　ｉ＾−ニー５５　５ユ２　ユ、＜ｓ７　＝　０．４４］！入−２− ５５５二２　２．ユニｇ　−Ｐ　Ｃ，０４０−Ａｍニー５６　１２８　０．８Ｂ３　＋　１．１５５　＋λ−２−５６　５１２　２．４６１中　０．４２９→λ −１−５７５１２２，５コア　ｑ　０．８０１　＋Ａ−２−５７　５１２　２．４２６　＊　Ｏ，ユ０ユ　−人−ニー５８　０　−０．０２９　−　０．４６２　＋入−２−５８　Ｌ２Ｂ　２．００１　＋　０．４５４　◆入−１−５９　２５６　２．４３９　＋　２．８００　◆入−２−５９　６４　２．３０７　＋　２．２３２４−Ａ−ニー６０　１６　０．０：１３　−　０．２９３　４λ−２ −６０２５６２，１９ｇ　＋　０．２４０　４λ−１−６１００，６７４→　０．０２４　＋Ａ−２−６１　２０４８　２．５８９　−Ｐ　０．４６０　〒λ− １−６２　二２８　１．６４３　−　１．３００　−’入−２−６２　２０４８　２．５８３　〒　ｏ、４６ｏ　−ＰＡ−１−６コ　ユ６　０．３６：ｌ　＋　ユ、コ２２−’Ａ−２−６コ　ユロ２４　２．ＢＳＯ＋　０．５９１　！入−ニー６４　０　０．３０７　＊　ｏ、ｏｉｌ　−人−２−６’４　５：２　１．５８６　＋　０．２２０　門Ａ−二一６５　０　’　（Ｃｏユ５−　０．２コア　＋λ−２−６５　Ｌ２Ｂ　２．：１６５　４　０．Ｏ１５−これらの結果はこの抗体の！外なミ度および特異性を実証している。８１個のＩ（Ａｌｌｌ性の試料が全て検出された。１６個の他のｔｉ料（ＨＡＩにより陰性である）は、環状ＢＣＨ−１７８を用いる場合、陽性であると示された。これらの後者の結果は、２回目の採血（２〜４週間後）でさらに確認され、その結果、！（ＡＩおよびＥＬＩＳＡアッセイの両方が陽性であった。

Ｌ艷ｌ実験３では、合成環状ＢＣＨ−１７８を、風疹−詩興的抗体について、ペプチドＢＣＨ−１３９、ＢＣ）！−１７６およびＢＣＨ−１７７と比較した。これらの結果を表３に示す。

ネヴテ、プＤ＞）　Ｏｒし０．０１４　０．口１６　０．０１９　０．０ｊＡ− １−４００，１４６０，’３５　０．１８８　０．ｊ’ＯＡ−ニー５　０　Ｃ！、ｍ２２　０．１２８　０．１９４　’０．１９８人−ｎ−８　１０２４　０．２５２　０．１４３　０．２５８　：！、、８４コＡ−ｉ−：＝３　０　０．０７１　０．０６）　Ｏ，１Ｂ４　０．：ＬＯ２Ａ−’：＝−ユ６　０　０．ｍ２５　０．１０４　０．ユ４ユ　０．１コ５Ａ−４−ユ’７　０　０．１４２　０．１５２　１．３９８　０．１＜９２−、−：−二２　０　０．ユ５’！　０．４７０　０．ｎＺ２　０−１４３人−２−Ｂ　２５６　Ｃ，ユ４）　０．１４８　０．１！’９　’１．９：−二λ−２−２３　２５６　０．０８６　０．’２０　０．ｍ９０　１．３６Ｂ＊　このテストて：＝、８７トオフ値か（−ｉ′、ガテイブ：ノトロール−０，２００）と設定され７：。

これらの結果は、環状ＢＣＨ−１７８が他のペプチドより、より特異的およびより高感度であることを実証する。ＢＣＨ−１３９およびＢＣＨ−１７７それぞれは、３個の陽性血清試料のうちの１個だけ検出した。ＢＣＨ−１７６はどれも検出しなかった。これに対して、環状ＢＣＨ−１７８は、偽陽性なく、全ての陽性血清を検出した。

我々は、この明細書に本発明のいくつかの実施態様を記載したが、本発明の方法および組成物を利用して、我々の基礎的な構想概念が変更され、他の実施態様を得ることができるのは明かである。従って、本発明の範囲は、この明細書に実施例として上記提供された特定の実施態様によって定義されるよりも、この明細書に添付されている請求の範囲によってＬ匹ＭλＬユ ΣジＵτＹＬＣＴＡＰＧ　ＧＡ　ＴＱＴＰＶＰ’／ＲＬＡＧＶＲＦＥＳ　Ｋ　！　ＶＤＧＧ　ＣＦＡＰ！ＬＥＡＴＧＡ　ＣＩ　ＣＥ工ＰτＤuＳＣＥＧＬＧＡＷＶＰＴＡＰＣ入ＲＸＷＮＧＴＱＲＡＣＴＦ’ＷＡＶ）ＪＡＹＪＬＳＧＧＹＡＱＬＡＳＹＦ’ＮＰＧＧＳＹＹＸＱＹＨＰＴＡＣＥＶd ＶＥＭＰＥＷ工ＨＡＨＴＴＳＤＰＷＩ（ＰＰＧＰＬＬＸＦＸＴＶＲＰＶＡＡＬＰＲＡＬＡＪ’ＰＲ）へｍＶＴＧｃＹＱｃＧＴＰＡＬＶＥＧＬＡＰＧＧＧＮＣＨＬＴＶＮＧＥＤＶＧＡＬＰＰＧ：ＫＦ’ＶＴＡＡＬＬＮＴＰＰＰＹＱＶＳＣＧＧＥＳＤＲＡＴＡＲＶＩＤＰＡＡＱＳＦＴＧＷＹＧＴＨＴＴＡＶＳＥＴＲＱＴＷ７ｔＥＷＡＡＡＨＷＷＱＬＴＬＧＡＶＣＡＬＬＬＪｔＧＬＬＡＣＣＡＸＣＬＹＹＬＲＧＡＩＡ、ＰＲＬ国旦田Ｌ２０プロティンＱアミノ〜ｆＬ睨列（丁ｈｅｒｉａｎ　Ｊ’！ｊ　）ＤＧＤＳＡＰＬＰＰＨＴＴＥＲＩＥＴＲ５Ａ　ＦｔＨＰＷＲ工Ｒ補正書の写しく翻訳文）提出書（特許法第１８４条の８）平成４年２月２１ａ

Claims

【特許請求の範囲】

１．以下の式を有するペプチド：ａ−Ｘ−ｂここで：Ｘは、少なくとも６個のアミノ酸の配列であって、風疹ウイルスのＪｕｄｉｔｈ株のＥ１グリコプロテインのＡＡ２１３〜ＡＡ２９１に相当する、風疹ウイルスのある株のＥ１グリコプロテインのアミノ酸配列由来のブロックである配列、そのアナログおよび該ブロックの逆配列あるいはそのアナログ；ａはアミノ末端であって、該ペプチドのカップリングを促進するか、または免疫原性あるいは抗原活性を改良するのに有効な、１〜８個のアミノ酸あるいは置換基；およびｂはカルボキシル末端であって、該ペプチドのカップリングを促進するか、または免疫原性あるいは抗原活性を改良するのに有効な、１〜８個のアミノ酸あるいは置換基。
２．請求項１に記載のペプチドであって、Ｘが風疹ウイルスのＪｕｄｉｔｈ株のＥ１グリコプロテインのＡＡ２１３〜ＡＡ２３９、ＡＡ２１９〜ＡＡ２３９、ＡＡ２３４〜ＡＡ２５２、ＡＡ２４９〜ＡＡ２６８、ＡＡ２５８〜ＡＡ２７７およびＡＡ２７３〜ＡＡ２９１でなる群から選択される配列に相当する、風疹ウイルスのある株のＥ１グリコプロテインのアミノ酸配列、それらのアナログおよび該配列の逆配列およびそのアナログである、ペプチド。
３．前記ペプチドが直鎖状または環状である、請求項１あるいは２に記載のペプチド。
４．ＢＣＨ−１３９、ＢＣＨ−１４０、ＢＣＨ−１７４、ＢＣＨ−１７６、ＢＣＨ−１７７およびＢＣＨ−１７８でなる群の直鎖状ペプチドおよびそれらのアナログから選択される、請求項３に記載のペプチド。
５．以下の式を有する環状ペプチドから選択される、請求項３に記載のペプチド：（ｉ）ａ−Ｂ−ＣＨＧＰＤＷＡＳＰＶＣ−Ｊ−ｂここで：Ｂは、存在するなら、風疹ウイルスのＪｕｄｉｔｈ株のＥ１グリコプロテインのアミノ酸ＡＡ２２４からＡＡ２１３〜ＡＡ２２４までに相当する、１〜１２個のアミノ酸およびそのアナログ；Ｊは、存在するなら、風疹ウイルスのＪｕｄｉｔｈ株のＥ１グリコプロテインのＡＡ２３８からＡＡ２３６〜ＡＡ２５２までに相当する、１〜１７個のアミノ酸およびそのアナログ；およびａはアミノ末端であって、該ペプチドのカップリングを促進するか、または免疫原性あるいは抗原活性を改良するのに有効な、１〜８個のアミノ酸あるいは置換基；およびｂはカルボキシル末端であって、該ペプチドのカップリングを促進するか、または免疫原性あるいは抗原活性を改良するのに有効な、１〜８個のアミ／酸あるいは置換基；（ｉｉ）ａ−Ｏ−ＣＱＲＨＳＰＤＣ−Ｕ−ｂここで：Ｏは、存在するなら、風疹ウイルスのＪｕｄｉｔｈ株のＥ１グリコプロテインのＡＡ２３４からＡＡ２１３〜ＡＡ２３４までに相当する、１〜２２個のアミノ酸およびそのアナログ；Ｕは、存在するなら、風疹ウイルスのＪｕｄｉｔｈ株のＥ１グリコプロテインのＡＡ２４３からＡＡ２４３〜ＡＡ２５２に相当する、１〜１０個のアミノ酸およびそのアナログ；およびａおよびｂは上記で定義される通りである；および（ｉｉｉ）これらのアミノ酸配列の逆配列。
６．環状ＢＣＨ−１３９、環状ＢＣＨ−１４０および環状ＢＣＨ−１７８でなる群の環状ペプチドおよびそれらのアナログから選択される、請求項５に記載のペプチド。
７．環状ペプチドＢＣＨ−１７８およびそのアナログ。
８．以下の式を有するペプチド：ａ−Ｚ−ｂここで：Ｚは、少なくとも６個のアミノ酸の配列であって、風疹ウイルスのＴｈｅｒｉｅｎ株のＣプロテインのＡＡ１〜ＡＡ２１に相当する、風疹ウイルスのある株のＣプロテインのアミノ酸配列由来のブロックである配列、そのアナログおよび該ブロックの逆配列あるいはそのアナログ；ａはアミノ末端であって、該ペプチドのカップリングを促進するか、または免疫原性あるいは抗原活性を改良するのに有効な、１〜８個のアミノ酸あるいは置換基；およびｂはカルボキシル末端であって、該ペプチドのカップリングを促進するか、または免疫原性あるいは抗原活性を改良するのに有効な、１〜８個のアミノ酸あるいは置換基。
９．請求項８に記載のペプチドであって、Ｚが風疹ウイルスのＴｈｅｒｉｅｎ株のＣプロテインのＡＡ１〜ＡＡ２１に相当する、風疹ウイルスのある株のＣプロテインのアミノ酸配列、そのアナログおよびこのアミノ酸ブロックの逆配列あるいはそのアナログである、ペプチド。
１０．前記ペプチドが直鎖状あるいは環状である、請求項９に記載のペプチド。
１１．ペプチドＢＣＨ−２２９およびそのアナログ。
１２．請求項１〜１１のいずれかに記載のペプチドを一種より多く含む、混合物あるいは混合体。
１３．少なくとも環状ペプチドＢＣＨ−１７８あるいはそのアナログを含む、請求項１２に記載の混合物あるいは混合体。
１４．少なくとも環状ペプチドＢＣＨ−１７８およびＢＣＨ−２２９あるいはそれらのアナログを含む、請求項１３に記載の混合物あるいは混合体。
１５．分析物内の風疹抗原に対する抗体の存在を検出する方法であって、請求項１〜１１のいずれかに記載のペプチドまたは請求項１２〜１４のいずれかに記載の混合体あるいは混合物によって特徴付けられる、方法。
１６．分析物内の風疹抗原に対する抗体の存在を検出する方法であって、該分析物の部分標品に請求項１〜１１のいずれかに記載のペプチドまたは請求項１２〜１４のいずれかに記載の混合体あるいは混合物を接触させる工程を包含する、方法。
１７．ＥＬＩＳＡ、赤血球凝集法、シングルドットあるいはマルチドットストリップのアッセイ法でなる群から選択される、請求項１６に記載の方法。
１８．請求項１〜１１のいずれかに記載のペプチドに対して免疫学的な交叉反応を示す抗体あるいは該抗体の混合物。
１９．前記抗体がモ／クローナル抗体あるいは該モノクローナル抗体の混合物である、請求項１８に記載の抗体。
２０．分析物内の風疹抗原の存在を検出する方法であって、請求項１８あるいは１９に記載の抗体によって特徴付けられる、方法。
２１．分析物内の風疹抗原の存在を検出する方法であって、該分析物の部分標品に請求項１８あるいは１９に記載の抗体を接触させる工程を包含する、方法。
２２．請求項１〜１１のいずれかに記載のペプチドあるいは請求項１２〜１４のいずれかに記載の混合体または混合物を含有する薬学的に許容され得る組成物であって、その組成物で処置したヒトを含む哺乳動物において、処置した哺乳動物が、ある期間中風疹ウイルス感染から保護されるのに充分な抗体を誘起するために有効な量の、該ペプチド、混合体または混合物が存在する、組成物。
２３．生理学的に許容され得る担体を含有する、請求項２２に記載の組成物。
２４．アジュバントあるいは免疫応答の増強剤を含有する、請求項２２に記載の組成物。
２５．風疹ウイルス以外の病原体に対する第２の抗原を含有する請求項２２に記載の組成物であって、処置した哺乳動物がその病原体による感染からある期間中保護されるのに充分な抗体を誘起するのに有効な量の該第２の抗原が存在する、組成物。
２６．ヒトを含む哺乳動物を保護する方法であって、該哺乳動物を請求項２２〜２５のいずれかに記載の組成物で処置する工程を包含する、方法。