JP7445908B2 - クルクミノイド含有口腔用組成物及び抗菌方法 - Google Patents

Description

本発明は、クルクミノイド含有口腔用組成物及び抗菌方法に関する。より詳細には、本発明はクルクミノイド及び特定のポリグリセリン脂肪酸エステルを含有する口腔用組成物、歯周病の治療及び／又は予防剤、及び抗菌方法に関する。

クルクミン（（１Ｅ，６Ｅ）－１，７－ｂｉｓ（４－ｈｙｄｒｏｘｙ－３－ｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）－１，６－ｈｅｐｔａｄｉｅｎｅ－３，５－ｄｉｏｎｅ、Ｃ２１Ｈ２０Ｏ６：分子量約３６８．３８ｇ／ｍｏｌ）を含むクルクミノイドは、植物ウコンの根茎に含まれる黄色のポリフェノール化合物群であり、カレー等のスパイスや染料だけでなく、抗炎症作用や抗腫瘍作用及び抗酸化作用を期待する健康食品素材としても広く利用されている。さらに近年、口腔衛生剤への利用が期待されている（非特許文献１）。

一般的に口腔内には、いわゆる善玉菌と悪玉菌が存在しており、細菌のバランスは、虫歯や歯周病の発生に関係していると言われている。一般的な殺菌剤は、悪玉菌や善玉菌を区別することなく殺菌してしまい、このような細菌バランス保持に効果はない。

Ｉｚｕｉ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ｃｕｒｃｕｍｉｎ Ａｇａｉｎｓｔ Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｏｐａｔｈｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉａ.Ｊ Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｏｌ,８７（１）：８３－９０，２０１６

クルクミノイドは、歯周病菌の増殖を抑制する一方で、常在菌の増殖は抑制せず、口腔衛生剤として有用な物質と言える。しかし、クルクミノイドは難水溶性であるため、口腔衛生剤に配合した場合の溶解量は極めて少なく、抗菌力を十分に発揮させることは困難であった。難水溶性成分は界面活性剤などの可溶化剤を用いて溶解されることが多いが、抗菌成分がミセルに取り込まれ、抗菌性が損なわれる場合がある。さらに、色素であるクルクミノイドを配合した口腔衛生剤を使用すると、歯ブラシや洗面台などが着色する場合がある。これらの課題により、クルクミノイドの配合量を増やさずとも抗菌作用が増強された口腔衛生剤が望まれる。

本発明は、クルクミノイドを含有し、特に歯周病の治療及び／又は予防効果がより強く発揮できるような口腔用組成物、歯周病の治療及び／又は予防剤、及び抗菌方法を提供することを目的とする。

本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討を重ねた結果、クルクミノイドと共に、ＨＬＢが１４以上のポリグリセリン脂肪酸エステルを含有させることによって、その抗菌作用が増強され、歯周病の治療及び／又は予防剤に有効であることを見出し、本発明を達成するに至った。

すなわち、本発明は下記に揚げる口腔用組成物、歯周病の治療及び／又は予防剤、及び抗菌性を向上させる方法に関するものである。
項１．
（Ａ）クルクミノイド；及び
（Ｂ）ＨＬＢが１４以上のポリグリセリン脂肪酸エステルを含有する、歯周病の治療及び／又は予防の為の口腔用組成物。
項２．
前記（Ａ）成分の含有量が、０．００００１～０．０１質量％であり、前記（Ｂ）成分の含有量が、０．００１～５質量％である、項１に記載の口腔用組成物。
項３．
実質的にポリオキシエチレン硬化ヒマシ油を含有しない、項１又は２に記載の口腔用組成物。
項４．
（Ａ）クルクミノイド；及び
（Ｂ）ＨＬＢが１４以上のポリグリセリン脂肪酸エステルを含有する、Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓによる歯周病の治療及び／又は予防剤。
項５．
実質的にポリオキシエチレン硬化ヒマシ油を含有しない、項４に記載の歯周病の治療及び／又は予防剤。
項６．
（Ａ）クルクミノイドを含む組成物に、（Ｂ）ＨＬＢが１４以上のポリグリセリン脂肪酸エステルを配合することで、該組成物のＰｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓへの抗菌性を向上させる方法。

本発明により、口内の特定の菌に対する抗菌作用が増強され、特に歯周病の治療及び／又は予防剤に有効な組成物が提供される。

本発明は、
（Ａ）クルクミノイド；及び
（Ｂ）ＨＬＢが１４以上のポリグリセリン脂肪酸エステルを含有する、歯周病の治療及び／又は予防の為の口腔用組成物、に関する。

［歯周病の治療及び／又は予防の為の口腔用組成物］
本発明の口腔用組成物は、（Ａ）クルクミノイド；及び（Ｂ）ＨＬＢが１４以上のポリグリセリン脂肪酸エステルを含有する、歯周病の治療及び／又は予防の為の口腔用組成物である。

（（Ａ）クルクミノイド）
本発明に用いられる（Ａ）成分のクルクミノイドは、典型的には、クルクミン、デメトキシクルクミン、及びビスデメトキシクルクミンを含む。
このうち、クルクミンは、（１Ｅ，６Ｅ）－１，７－ｂｉｓ（４－ｈｙｄｒｏｘｙ－３－ｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）－１，６－ｈｅｐｔａｄｉｅｎｅ－３，５－ｄｉｏｎｅ（Ｃ２１Ｈ２０Ｏ６：分子量３６８．３８ｇ／ｍｏｌ）を指す。この化合物は、ケト―エノール互変異性化を受けるもので、いずれの形であっても良い。
デメトキシクルクミンは、（Ｅ，Ｅ）－１－（４－ヒドロキシ－３－メトキシフェニル）－７－（４－ヒドロキシフェニル）－１，６－ヘプタジエン－３，５－ジオン（Ｃ２０Ｈ１８Ｏ５：分子量３３８．３５ｇ／ｍｏｌ）を指す。
ビスデメトキシクルクミンは、（Ｅ，Ｅ）－１，７－ビス（４－ヒドロキシフェニル）－１，６－ヘプタジエン－３，５－ジオン（Ｃ１９Ｈ１６Ｏ４：分子量：３０８．３３ｇ／ｍｏｌ）を指す。
クルクミノイドとしては、さらに、植物ウコンの根茎等のように、クルクミノイドを含む植物の溶媒抽出物や粉末であっても良い。ここで、植物は特に限定されないが、ウコンの根茎を用いることができ、クルクミノイドの含有量が規定量であれば春ウコンや秋ウコンなどのウコンの種類は特に制限されない。
ウコンの根茎を溶媒で抽出した抽出物や微細に粉砕したウコン粉末等、様々な形態を使用することができる。

クルクミン、デメトキシクルクミン、及びビスデメトキシクルクミンとしては、市販品を使用してもよい。例えば、クルクミン、デメトキシクルクミン、又はビスデメトキシクルクミン単体としては、富士フイルム和光純薬株式会社製のクルクミン試薬、デメトキシクルクミン試薬、ビスデメトキシクルクミン試薬が例示され、ウコン根の溶媒抽出物としては、日油株式会社製のウコンエキスＢＧが例示され、ウコン粉末としては、伊藤漢方製薬株式会社製の秋ウコン粉末１００％が例示される。

本発明の口腔用組成物におけるクルクミノイドの含有量は、クルクミノイドとして純分換算で組成物全体の０．００００１～０．０１質量％が好ましく、０．００００３～０．００３質量％がより好ましい。この範囲であれば、クルクミノイドの口腔内細菌に対する効果を十分に発揮できる。

（（Ｂ）ＨＬＢが１４以上のポリグリセリン脂肪酸エステル）
本発明に用いられる（Ｂ）成分は、ＨＬＢが１４以上のポリグリセリン脂肪酸エステルである。ここで、ＨＬＢ（Ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｅ Ｌｉｐｏｐｈｉｌｅ Ｂａｌａｎｃｅ）は、けん化価と構成脂肪酸の酸価から次式によって算出することができる。
ＨＬＢ＝２０×（１－Ｓ／Ａ）
Ｓ：けん化価、Ａ：構成脂肪酸の酸価

ポリグリセリン脂肪酸エステルは、このようにＨＬＢが１４以上であれば、限定はされないが、平均重合度１０のデカグリセリンと脂肪酸とのエステルであることが好ましい。このうち、より好ましくは、平均重合度１０のデカグリセリンと炭素数１２～１６の脂肪酸とのエステルであり、さらに好ましくは、平均重合度１０のデカグリセリンとラウリン酸又はミリスチン酸とのエステルであり、最も好ましくは、ミリスチン酸ポリグリセリル‐１０である。

本発明の口腔用組成物におけるポリグリセリン脂肪酸エステルの含有量は、本発明の効果である菌増殖抑制効果を発揮する観点から、０．００１～５質量％が好ましく、０．００１～１．５質量％がより好ましい。

（Ａ）成分に対する（Ｂ）成分の含有量の比率は、（Ａ）成分１質量部に対して、（Ｂ）成分を好ましくは、０．１～５０００００質量部、より好ましくは、１～１００００質量部、さらに好ましくは３～５０００質量部、さらにより好ましくは５～５０００質量部の割合である。この比率の範囲内であることで、より高い抗菌作用が発揮され、さらには、対象物への着色を抑制できる。

本発明の口腔用組成物は、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油を実質的に含有しないことが好ましい。ここで、好ましくは、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油を全く含有しない。

（水分）
本発明の口腔用組成物は水を含有することができる。本発明で使用される水は、本発明の効果を損なわないようなものであればよく、好ましくは精製水、蒸留水、イオン交換水、及びＲＯ水を挙げることができる。
本発明の口腔用組成物に含まれる水の含有量は、１０～９９．９９８８質量％が好ましく、２０～９９質量％がより好ましく、３０～９０質量％がさらにより好ましい。水が存在することで、（Ａ）及び（Ｂ）成分が安定的に溶解でき、成分を口腔内に十分に行き渡らせることが可能となる。

（その他の成分）
本発明の口腔用組成物は、（Ａ）クルクミノイド及び（Ｂ）ＨＬＢ１４以上のポリグリセリン脂肪酸エステルの他に、任意に、その他の成分を含有することができる。ここで、その他の成分には、限定はされないが、湿潤剤、防腐剤、清掃剤（研磨剤）、粘結剤、ｐＨ調整剤、香味剤、薬用成分、発泡剤、清涼剤、矯味剤、甘味剤の他、保湿剤、着色剤などが含まれる。

湿潤剤としては、ソルビット液（ソルビトール）、グリセリン、濃グリセリン、プロピレングリコール、ブチレングリコール、ポリエチレングリコール等が挙げられる。湿潤剤は、１種又は２種以上を併用してもよい。限定はされないが、このうち、少なくともプロピレングリコール及びソルビトールを含むことが好ましく、プロピレングリコール及びソルビトールの組み合わせも使用できる。例えば、プロピレングリコール１質量部に対して、ソルビトール０．０５～４０質量部が好ましく、０．１～２０質量部がより好ましく、０．１～１０質量部がさらにより好ましく、０．５～１０質量部が最も好ましい。

このような湿潤剤の含有量は、限定はされないが、含める場合には、湿潤剤の合計量として、１～６０質量％、より好ましくは５～５０質量％、さらに好ましくは１０～４０質量％でもあり得る。湿潤剤を含めることで、（Ａ）及び（Ｂ）成分を安定的に溶解させ、組成物の外観安定性が良好となる。さらに、甘味や苦味のバランスといった風味を良好にし、使用後のべたつきを感じることなく適度な保湿感を付与することができる。

限定はされないが、プロピレングリコールの含有量は、好ましくは０．１～２０質量％であっても良く、１～２０質量％、５～２０質量％などでもあり得る。

限定はされないが、ソルビトールの含有量は、好ましくは０．１～４０質量％であっても良く、１～４０質量％、５～３０質量％などでもあり得る。

防腐剤として、安息香酸ナトリウム、メチルパラベン、エチルパラベン、ブチルパラベン等のパラオキシ安息香酸エステルが挙げられる。防腐剤は、１種又は２種以上を併用してもよい。このような防腐剤の含有量は、限定はされないが、０．０１～５質量％が好ましく、０．０５～３質量％がより好ましく、０．０１～２質量％がさらにより好ましい。

清掃剤（研磨剤）としては、炭酸カルシウム、重質炭酸カルシウム、水酸化アルミニウム、アルミナ、炭酸マグネシウム、第３リン酸マグネシウム、ケイ酸ジルコニウム、第３リン酸カルシウム、ハイドロキシアパタイト、第４リン酸カルシウム、合成樹脂系研磨剤等が挙げられる。清掃剤は、１種又は２種以上を併用してもよい。

粘結剤としては、カルボキシメチルセルロースナトリウム、キサンタンガム、無水ケイ酸、カラギーナン、アルギン酸及びその塩等が挙げられる。粘結剤は、１種又は２種以上を併用してもよい。

ｐＨ調整剤としては、クエン酸Ｎａ、無水クエン酸、酢酸、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸、リンゴ酸、グルコン酸、マレイン酸、コハク酸、グルタミン酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、酢酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム等が挙げられる。ｐＨ調整剤は、１種又は２種以上を併用してもよい。

香味剤としては、精油などの天然香料（ジンジャーオレオレジン、ジンジャーミント）又は合成香料などが挙げられる。

薬用成分としては、モノフルオロリン酸ナトリウム、フッ化ナトリウム、グリチルリチン酸ジカリウム等が挙げられる。薬効成分は、１種又は２種以上を併用してもよい。

発泡剤としては、ラウロイルメチルタウリンナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ポリオキシエチレンラウリルエーテル硫酸ナトリウム等が挙げられる。発泡剤は、１種又は２種以上を併用してもよい。

清涼剤として、ｌ－メントールなどのメントール、Ｎ－エチル－ｐ－メンタン－３－カルボキシアミド、Ｎ－（エトキシカルボニルメチル）－３－ｐ－メンタンカルボキシアミド、Ｎ，２，３－トリメチル－２－イソプロピルブタンアミド、３－（Ｌ－メトキシ）プロパン－１，２－ジオール、乳酸メンチル（メンチルラクテート）、コハク酸モノメンチル、メントングリセリンアセタール、３－ｌ－メントキシプロパン－１，２－ジオール、メントングリセリンエーテル、スピラントール、モノメンチルサクシネート等が挙げられる。清涼剤は、１種又は２種以上を併用してもよい。

矯味剤として、塩化ナトリウムが挙げられる。

甘味剤として、キシリトール、サッカリンナトリウム、ステビオサイド、ネオヘスペリジンヒドロカルコン、グリチルリチン、ソーマチン、パラチノース、マルチトール、アラビトール等が挙げられる。甘味剤は、１種又は２種以上を併用してもよい。

（口腔用組成物の形態）
本発明の口腔用組成物の形態は、液体、半固体、固体のいずれであってもよい。半固体には、ペースト状又はジェル状が含まれる。本発明の口腔用組成物の好ましい形態は、液体、ペースト状、又はジェル状である。

本発明の口腔用組成物が液体である場合の２５℃におけるｐＨは、好ましくは４．５～９、より好ましくは５～８．５、さらに好ましくは６～８である。

（口腔用組成物の用途）
本発明の口腔用組成物は、例えば、練歯磨剤、液体歯磨剤、ジェル歯磨き等の歯磨剤類及び洗口液、含嗽剤、口中清涼剤、口腔用塗布剤、又は食品等に用いることができる。食品には、チューインガム、錠菓、又はトローチ等が含まれる。本発明の口腔用組成物は、特には、Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓによる歯周病の治療及び／又は予防剤として用いられ得る。特には口内のバイオフィルム形成阻害、Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓによる毒素ベシクルの付着阻害の効果を得ることも可能である。

（口腔用組成物の容器）
本発明の口腔用組成物の収容容器の材質は特に制限されず、例えばポリプロピレン、ポリエチレン、ポリエチレンテレフタレート、アルミなど、通常の歯磨剤及び洗口液等に使用される容器を選択できる。収容容器の形状についても特に制限されず、例えば、チューブ、ボトル、パック、ポーション等が挙げられる。

［Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓによる歯周病の治療及び／又は予防剤］
本発明はまた、（Ａ）クルクミノイド；及び（Ｂ）ＨＬＢが１４以上のポリグリセリン脂肪酸エステルを含有する、Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓによる歯周病の治療及び／又は予防剤を包含する。本発明の歯周病の治療及び／又は予防剤において、各成分とそれらの含有量等、その他の成分とそれらの含有量については、前記口腔用組成物で記載した内容に準じる。さらに、歯周病の治療及び／又は予防剤においても、実質的にポリオキシエチレン硬化ヒマシ油を含有しないことが好ましい。

［Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓへの抗菌性を向上させる方法］
本発明はまた、（Ａ）クルクミノイドを含む組成物に、（Ｂ）ＨＬＢが１４以上のポリグリセリン脂肪酸エステルを配合することで、該組成物のＰｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓへの抗菌性を向上させる方法を包含する。本発明の方法において、各成分とそれらの含有量等、その他の成分とそれらの含有量については、前記口腔用組成物で記載した内容に準じる。さらに、本発明の方法においても、組成物には、実質的にポリオキシエチレン硬化ヒマシ油を含有しないことが好ましい。

以下、本発明の内容を以下の実施例を用いて具体的に説明するが、本発明はこれらに何ら限定されるものではない。

実施例で使用する成分は、下記の通りである。
クルクミノイド：クルクミン（富士フイルム和光純薬株式会社）、ウコンエキスＢＧ（日油株式会社）
ヒノキチオール：ヒノキチオール（東京化成工業株式会社）
チモール：チモール（東京化成工業株式会社）
カテキン：エピガロカテキンガレート（株式会社バイオベルデ）
ラウリン酸ポリグリセリル－１０：Ｄｅｃａｇｌｙｎ １－Ｌ（日光ケミカルズ株式会社）、ＨＬＢ １５．５
ミリスチン酸ポリグリセリル－１０：Ｄｅｃａｇｌｙｎ １－Ｍ（日光ケミカルズ株式会社）、ＨＬＢ １４．０
カプリン酸グリセリル：サンソフト Ｎｏ．７６０－Ｃ（太陽化学株式会社）、ＨＬＢ ６．５
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油：ＮＩＫＫＯＬ ＨＣＯ－６０Ｙ（日光ケミカルズ株式会社）、ＨＬＢ １４．０
プロピレングリコール：日本薬局方プロピレングリコール（株式会社ＡＤＥＫＡ）
ソルビトール：ソルビトールＳ（物産フードサイエンス株式会社）
濃グリセリン：濃グリセリン（ＩＯＩ ＡＣＩＤＣＨＥＭ社）
メチルパラベン：メッキンス－Ｍ（上野製薬株式会社）
カルボキシメチルセルロースナトリウム：ＣＭＣダイセル１３８０（ダイセルミライズ株式会社）
キサンタンガム：ケルデントＳＦＴ（ＤＳＰ五協フード＆ケミカル株式会社）

［天然由来成分評価例］
下記の表１に示す天然由来成分について、抗菌性を調べた。
詳細には、まず、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に天然由来成分を１％溶解させた評価用製剤を作製した。この評価用製剤を、製剤中の天然由来成分の最終濃度が０．０５％になるように各液体培地に添加し、さらに液体培地を用いて２倍ずつ段階希釈した。各希釈液を９６穴プレートに０．１ｍＬ添加し、各供試菌液を０．０１ｍＬ添加した。

Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓは３７℃の嫌気条件下で２日間、その他の菌は、３７℃で一晩培養後、培養液の混濁の有無を確認し、最小発育阻止濃度を
判定した。

なお、このプロトコルで使用した各菌の供試菌液は、以下の通り調製した。

Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの菌液調製
平板培地を用いて、３７℃、嫌気条件下で２日間培養した。液体培地１０ｍＬにコロニーを懸濁し３７℃、嫌気条件下で一晩培養した。
平板培地：ＣＤＣ嫌気性菌用羊血液寒天培地（ＢＤ社製）
液体培地：
Ｔｒｙｐｔｉｃａｓｅ Ｓｏｙ Ｂｒｏｔｈ（ＢＤ社） ３ｗ／ｖ％
Ｙｅａｓｔ Ｅｘｔｒａｃｔ（ＢＤ社） ０．１ｗ／ｖ％
ヘミン（富士フイルム和光純薬株式会社） ０．０００５ｗ／ｖ％
メナジオン（富士フイルム和光純薬株式会社）０．０００１ｗ／ｖ％
精製水 残分

Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓの菌液調製
平板培地を用いて、３７℃で２日間培養した。液体培地１０ｍＬにコロニーを懸濁し３７℃で一晩培養した。
平板培地：ブレインハートインヒュージョンブイヨン（日水製薬株式会社製）＋１．５ｗ／ｖ％寒天
液体培地：ブレインハートインヒュージョンブイヨン（日水製薬株式会社製）

Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｇｏｒｄｏｎｉｉ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｏｒａｌｉｓの菌液調製
平板培地を用いて、３７℃で２日間培養した。液体培地１０ｍＬにコロニーを懸濁し３７℃で一晩培養した。
平板培地：ＴＨＢ培地（ＢＤ社製）＋２ｗ／ｖ％アガロース
液体培地：ＴＨＢ培地（ＢＤ社製）

下記の評価基準に基づいて、最小発育阻止濃度から抗菌性の高さを評価し、各天然由来成分の選択的抗菌性の有無を検証した。
〇 １５．６μｇ／ｍＬ以下
△ １５．６μｇ／ｍＬ超６２．５μｇ／ｍＬ以下
× ６２．５μｇ／ｍＬ超

表中、Ｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓは、Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ ＡＴＣＣ３３２７７を表し、Ｓ．ｍｕｔａｎｓは、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓ ＪＣＭ５７０５を表し、Ｓ．ｇｏｒｄｏｎｉｉは、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｇｏｒｄｏｎｉｉ ＤＬ-１を表し、Ｓ．ｏｒａｌｉｓは、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｏｒａｌｉｓ ＡＴＣＣ９８１１を表す。

この結果から、クルクミンでは、Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ
に選択的な増殖抑制効果が確認できた。一方、ヒノキチオールには、このような選択性はなく、チモールやカテキンでは、効果があったクルクミンの濃度と同程度の濃度では、効果は見られなかった。

［実施例１］
表２に示す組成物を調製し、これらの組成物について、Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓに対する増殖抑制効果を評価した。

（調製方法）
（Ａ）成分と（Ｂ）成分又は比較成分の終濃度、すなわち、菌への作用時の濃度が表２の濃度となるように、各成分量は調整した。
表２に示した各界面活性剤成分を融解温度まで加熱し、クルクミノイドを加えて混合した。さらに、撹拌しながら水を少しずつ添加して、口腔用組成物を調製した。

（評価方法）
（Ａ）成分と（Ｂ）成分又は比較成分の終濃度が表２の組成となるように調製した口腔
用組成物について、抗菌性を評価した。抗菌性の評価は、以下のようにして行った。
液体培地（上記[天然由来成分評価例]に記載したものと同じ）にＰｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ ＡＴＣＣ３３２７７を接種して、３７℃で一晩前培養した。この培養液を液体培地で１０倍希釈したものを供試菌液とした。供試菌液９ｍＬに表２の１０倍濃縮の口腔用組成物１ｍＬを加え、調製直後及び４８時間後に濁度として波長６００ｎｍにおける吸光度をＳＨＩＭＡＤＺＵ 紫外・可視分光光度計 ＵＶ－１２００で測定した。
その結果は、下記の評価基準に基づき、増殖抑制効果の増強率として評価した。
実施例１－１、実施例１－２、比較例１－１、比較例１－２については、参考例１－１を基準として評価した。
増殖抑制効果の増強率（％）＝１００－｛（各組成物の48時間後の濁度－各組成物の調製直後の濁度）／（参考例１－１の４８時間後の濁度－参考例１－１の調製直後の濁度）×１００｝
実施例１－３、比較例１－３、比較例１－４については、参考例１－２を基準として評価した。
増殖抑制効果の増強率（％）＝１００－｛（各組成物の４８時間後の濁度－各組成物の調製直後の濁度）／（参考例１－２の４８時間後の濁度－参考例１－２の調製直後の濁度）×１００｝
×：増殖抑制効果の増強率が４９％以下
△：増殖抑制効果の増強率が５０％以上７４％以下
○：増殖抑制効果の増強率が７５％以上

この検証の結果、ラウリン酸ポリグリセリル-１０とミリスチン酸ポリグリセリル-１０は、クルクミノイド０．０００２％を含有する場合、クルクミノイド単独での増殖抑制効果を７５％以上増強した。さらにミリスチン酸ポリグリセリル-１０は、クルクミノイドを０．００１％含有する場合においても、増殖抑制効果の増強率が７５％以上と顕著であった。一方、カプリン酸グリセリルとポリオキシエチレン硬化ヒマシ油は、クルクミノイドの含有量が０．０００２％と０．００１％のどちらにおいても、増殖抑制効果の増強率は４９％以下であった。

［実施例２］
表３に示すように、クルクミノイド及びポリグリセリン脂肪酸エステル、及び各種成分を下記方法に従って調製し、被験者１８名による試験を行った。

（調製方法）
表３に示した各界面活性剤成分を融解温度まで加熱し、クルクミノイド及びプロピレングリコールを加えて混合した。さらに、撹拌しながらその他の成分及び水を少しずつ添加して、口腔用組成物を調製した。

（評価方法）
表３の組成で調製した口腔用組成物を１日２回（朝・晩）、２週間使用した。
試験前後において、特定の歯間から歯垢を回収し、ＰＢＳバッファーに懸濁した。遠心分離によってＰＢＳバッファーを除去したものを試験検体とした。試験検体を酵素液（５ｍｇ／ｍＬリゾチーム（富士フイルム和光純薬株式会社製）０．１２ｍＬ、５０００Ｕ／ｍＬムタノリシン（シグマアルドリッチ社製）０．０２２ｍＬ）に懸濁し、５０℃で１時間処理した。処理後の検体について、は「Ｗｉｚｅｒｄ （登録商標）Ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｋｉｔ（プロメガ株式会社製）」の使用方法に準拠して細菌ゲノムの抽出を行い、Ｎａｎｏｄｒｏｐ ＮＤ－１０００（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）を用いて核酸量を確認した。得られたゲノムを鋳型として、１６ｓｒＲＮＡ遺伝子をターゲットとするユニバーサルプライマーおよびＰｏｒ
ｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓに特異的なプライマー・プローブセットを用いてリアルタイムＰＣＲを行った（試薬：Ｔｈｕｎｄｅｒｂｉｒｄ Ｐｒｏｂｅ ｑＰＣＲ Ｍｉｘ（東洋紡株式会社製）、検出機：Ｒｏｔｅｒｇｅｎｅ Ｑ）。Ｃｔ値と核酸量から検量線を作成し、各検体に含まれる全菌数に占めるＰｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの割合を算出した。ＰＣＲ用プライマーとしては、Ｋｕｂｏｎｉｗａ Ｍ ｅｔ ａｌ．， Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌ ｐａｔｈｏｇｅｎｓ ｕｓｉｎｇ ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ Ｔａｑｍａｎ ｐｒｏｂｅｓ．， Ｏｒａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， ｖｏｌ． １９， ｐ１６８－ｐ１７６， ２００４に記載のプライマーを使用した。

下記に示す基準に基づき、歯垢中のＰｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの割合を減少させる効果を評価した。
×：０～９％の被験者において、Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの割合が減った
△：１０～２９％の被験者において、Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの割合が減った
〇：３０～４９％の被験者において、Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの割合が減った
◎：５０％以上の被験者において、Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの割合が減った

この結果、実施例の組成物では、洗口液の形態でもジェルの形態でも、歯垢中のＰｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの割合が減った被験者が一定以上の割合で見られた。
さらに、実施例の組成物では、組成物の外観安定性が良好であり、対象物への着色は見ら
れず、保湿感等の使い心地も良かった。
各比較例の組成物は、実施例の組成物程の効果が見られなかった。

［組成物例］
下記に示す処方に基づいて、本発明の口腔用組成物を調製した。

＜組成物例１＞ 液体歯磨剤
クルクミノイド ０．０００２質量％
ミリスチン酸ポリグリセリル－１０ ０．５質量％
プロピレングリコール ５質量％
ソルビトール １０質量％
メチルパラベン ０．１質量％
グリチルリチン酸ジカリウム ０．１質量％
ラウロイルメチルタウリンナトリウム ０．１質量％
クエン酸ナトリウム ０．３質量％
香料 ０．５質量％
水 残分

＜組成物例２＞ 練歯磨剤
クルクミノイド ０．００１質量％
ミリスチン酸ポリグリセリル－１０ １．５質量％
プロピレングリコール １０質量％
ソルビトール ２０質量％
メチルパラベン ０．１質量％
グリチルリチン酸ジカリウム ０．１質量％
ラウロイルメチルタウリンナトリウム ０．５質量％
クエン酸 ０．２質量％
カルボキシメチルセルロースナトリウム ３質量％
無水ケイ酸 ５質量％
炭酸カルシウム ２５質量％
香料 ０．５質量％
水 残分

＜組成物例３＞ ジェル歯磨剤
クルクミノイド ０．００１質量％
ミリスチン酸ポリグリセリル－１０ ０．２質量％
プロピレングリコール １０質量％
ソルビトール １０質量％
メチルパラベン ０．１質量％
グリチルリチン酸ジカリウム ０．１質量％
ラウロイルメチルタウリンナトリウム ０．２質量％
クエン酸ナトリウム ０．３質量％
カルボキシメチルセルロースナトリウム ３質量％
香料 ０．５質量％
水 残分

Claims (1)

1. （Ａ）クルクミノイドを含む組成物に、（Ｂ）ＨＬＢが１４以上のポリグリセリン脂肪酸エステルを配合することで、該組成物のＰｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓへの抗菌性を向上させる方法であって、該（Ａ）クルクミノイド濃度が０．００００１～０．０１質量％；及び該（Ｂ）ＨＬＢが１４以上のポリグリセリン脂肪酸エステルの濃度が０．００１～５質量％である、方法。