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JP7329087B2 - ナイセリア・メニンギティディスのワクチン - Google Patents

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Description

ナイセリア・メニンギティディス（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）（Ｎ．メニンギティディス）は、世界中の細菌性髄膜炎および敗血症の主な原因である。ナイセリア・メニンギティディスの血清型Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ－１３５（それぞれＭｅｎＡ、ＭｅｎＣ、ＭｅｎＹ、およびＭｅｎＷであり、集合的にＭｅｎＡＣＹＷと呼ばれる）は、世界中の大部分の髄膜炎菌性疾患に関与している。現在、Ｎ．メニンギティディスから保護するために６種類のワクチンがあり、Ｍｅｎａｃｔｒａ（登録商標）、Ｎｉｍｅｎｒｉｘ（登録商標）、およびＭｅｎｖｅｏ（登録商標）のような四価髄膜炎菌結合型ワクチン、Ｍｅｎｏｍｕｎｅ（登録商標）のような髄膜炎菌多糖ワクチン、Ｎｅｉｓｖａｃ－Ｃ（登録商標）、Ｍｅｎｊｕｇａｔｅ（登録商標）、およびＭｅｎｉｔｏｒｉｘ（登録商標）のような血清型Ｃ髄膜炎菌ワクチン、ＭｅｎＡｆｒｉＶａｃ（登録商標）のような血清型Ａ髄膜炎菌ワクチン、ＭｅｎＨｉｂｒｉｘ（登録商標）のような血清型ＣおよびＹ髄膜炎菌ワクチン、ならびにＢｅｘｓｅｒｏ（登録商標）およびＴｒｕｍｅｎｂａ（登録商標）のような血清型Ｂ髄膜炎菌ワクチンである。
Ｎ．メニンギティディスについての疫学は、複雑であり、予測不能であり、地域的に差があり、経時的に変化するものである、と記載することができる。このように、改善されたＮ．メニンギティディスワクチンを開発する必要性が存在している。特に、現存する多糖結合体ワクチンは、１人またはそれ以上の乳幼児、幼児、青年、および／もしくは高齢者への投与に適していないことがある、または一部のレシピエントには弱い、もしくは検出不能な血清応答をもたらすことがある。
一部の実施形態において、本明細書に開示されている組成物、方法、および／または使用は、１つもしくはそれ以上の利益を提供する、または少なくとも社会に有用な選択肢を提供する。そのような利益は、ＭｅｎＡ、ＭｅｎＣ、ＭｅｎＹ、およびＭｅｎＷの１つ、２つ、３つ、または４つ全てに対する改善された免疫原性；２人、３人、または４人の乳幼児、幼児、青年、および高齢者における免疫原性；ならびに液体製剤として、例えば、冷蔵下で複数年（例えば、２．５、３、３．５、４、または４．５年間）、または室温で複数月（例えば、２、３、４、５、または６カ月間）にわたる長期保管を可能にする十分な安定性のうちの１つまたはそれ以上を含むことができる。
したがって、以下の実施形態が提供される。実施形態１は、ナイセリア・メニンギティディスワクチン組成物であって、ａ）ＭｅｎＡ莢膜多糖と担体タンパク質の第１の結合体；ｂ）ＭｅｎＣ莢膜多糖と担体タンパク質の第２の結合体；ｃ）ＭｅｎＷ－１３５莢膜多糖と担体タンパク質の第３の結合体；およびｄ）ＭｅｎＹ莢膜多糖と担体タンパク質の第４の結合体を含み、第２の結合体が、両方とも第二級アミンを介して担体タンパク質に結合している二重末端連結結合型多糖および単一末端連結結合型多糖を含む個体群であり、第２の結合体の多糖が、多糖ｍｇ当たり０．３μｍｏｌから多糖ｍｇ当たり１．６μｍｏｌのＯ－アセチル化レベルを有する、ナイセリア・メニンギティディスワクチン組成物である。Ｏ－アセチル化のレベルは、多糖ｍｇ当たり０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、または１．２μｍｏｌ以上である。Ｏ－アセチル化のレベルは、多糖ｍｇ当たり０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、または１．５μｍｏｌ以下である。例えば、レベルは、多糖ｍｇ当たり０．６～１．５μｍｏｌ、または多糖ｍｇ当たり０．８～１．４μｍｏｌの範囲である。Ｏ－アセチ
ル含有量を、Ｈｅｓｔｒｉｎ法（Ｈｅｓｔｒｉｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９４９年、１８０巻、２４９頁）により測定することができる。
実施形態２は、ナイセリア・メニンギティディスワクチン組成物であって、ａ）ＭｅｎＡ莢膜多糖と担体タンパク質の第１の結合体；ｂ）ＭｅｎＣ莢膜多糖と担体タンパク質の第２の結合体；ｃ）ＭｅｎＷ－１３５莢膜多糖と担体タンパク質の第３の結合体；およびｄ）ＭｅｎＹ莢膜多糖と担体タンパク質の第４の結合体を含み、第２の結合体が、第二級アミンを介して担体タンパク質に結合している単一末端連結結合型多糖を含む個体群であり、単一末端連結結合型多糖が、末端非連結糖を有し、末端糖が、７位に第一級ヒドロキシルもしくは第二級アミン連結を有する、または還元末端が、（２－ヒドロキシ）エトキシもしくは第二級アミン連結により修飾されている、ナイセリア・メニンギティディスワクチン組成物である。第２の結合体個体群は、多糖の両方の末端に、例えば、第二級アミンを介して連結している担体タンパク質を有する二重末端連結結合体を、更に含むことができる。
実施形態３は、ナイセリア・メニンギティディスワクチン組成物であって、ａ）ＭｅｎＡ莢膜多糖と担体タンパク質の第１の結合体；ｂ）ＭｅｎＣ莢膜多糖と担体タンパク質の第２の結合体；ｃ）ＭｅｎＷ－１３５莢膜多糖と担体タンパク質の第３の結合体；およびｄ）ＭｅｎＹ莢膜多糖と担体タンパク質の第４の結合体を含み、ＭｅｎＡ莢膜多糖が、カルバメート、スペーサー、およびアミドを含むリンカーを介して担体タンパク質に結合しており、スペーサーが、カルバメートとアミドの間にあり、２～１０個の直鎖炭素を含み、第１の結合体が、０．３～１．５の多糖対担体タンパク質質量比を有する、ナイセリア・メニンギティディスワクチン組成物である。第１の結合体は、例えば、０．３～０．４、０．４～０．５、０．５～０．６、０．６～０．７、０．７～０．８、０．８～０．９、０．９～１．０、１．０～１．１、１．１～１．２、１．２～１．３、１．３～１．４、または１．４～１．５の多糖対担体タンパク質質量比を有することができる。
実施形態４は、ナイセリア・メニンギティディスワクチン組成物であって、ａ）ＭｅｎＡ莢膜多糖と担体タンパク質の第１の結合体；ｂ）ＭｅｎＣ莢膜多糖と担体タンパク質の第２の結合体；ｃ）ＭｅｎＷ－１３５莢膜多糖と担体タンパク質の第３の結合体；およびｄ）ＭｅｎＹ莢膜多糖と担体タンパク質の第４の結合体を含み、ＭｅｎＡ莢膜多糖が、カルバメート、スペーサー、およびアミドを含むリンカーを介して担体タンパク質に結合しており、スペーサーが、カルバメートとアミドの間にあり、２～１０個の直鎖炭素を含み、ＭｅｎＣ、ＭｅｎＷ－１３５、およびＭｅｎＹ莢膜多糖が、第二級アミンを介して担体タンパク質に結合し、結合体のうちの少なくとも１つが、３００ｋＤａ～１５００ｋＤａの範囲の重量平均分子量を有する、ナイセリア・メニンギティディスワクチン組成物である。
実施形態５は、ナイセリア・メニンギティディスワクチン組成物であって、ａ）ＭｅｎＡ莢膜多糖と担体タンパク質の第１の結合体；ｂ）ＭｅｎＣ莢膜多糖と担体タンパク質の第２の結合体；ｃ）ＭｅｎＷ－１３５莢膜多糖と担体タンパク質の第３の結合体；およびｄ）ＭｅｎＹ莢膜多糖と担体タンパク質の第４の結合体を含み、担体タンパク質が、破傷風トキソイドであり、第１、第２、第３、および第４の結合体の１つまたはそれ以上が、３００ｋＤａ～１５００ｋＤａの範囲の重量平均分子量を有し、組成物が、総多糖に対して２０重量％未満の遊離多糖を含む、ナイセリア・メニンギティディスワクチン組成物である。組成物中の少なくとも１つ、２つ、３つ、または４つの結合体は、３００ｋＤａ～１５００ｋＤａの範囲の重量平均分子量を有することができる。組成物中の少なくとも１つ、２つ、３つ、または４つの結合体の重量平均分子量は、４００ｋＤａ、５００ｋＤａ、６００ｋＤａ、７００ｋＤａ、８００ｋＤａ、９００ｋＤａ、１０００ｋＤａ、または１１００ｋＤａ以上である。組成物中の少なくとも１つ、２つ、３つ、または４つの結合
体の重量平均分子量は、６００ｋＤａ、７００ｋＤａ、８００ｋＤａ、９００ｋＤａ、１０００ｋＤａ、１１００ｋＤａ、１２００ｋＤａ、１３００ｋＤａ、または１４００ｋＤａ以下である。少なくとも１つの結合体は、７００～８００、８００～９００、９００～１０００、１０００～１１００、１１００～１２００、１２００～１３００、１３００～１４００、または１４００～１５００ｋＤａの範囲の分子量を有することができる。ＭｅｎＡ結合体は、７００～８００、８００～９００、９００～１０００、１０００～１１００、１１００～１２００、１２００～１３００、１３００～１４００、または１４００～１５００ｋＤａの範囲の分子量を有することができる。ＭｅｎＣ結合体は、７００～８００、８００～９００、９００～１０００、１０００～１１００、１１００～１２００、１２００～１３００、１３００～１４００、または１４００～１５００ｋＤａの範囲の分子量を有することができる。ＭｅｎＹ結合体は、７００～８００、８００～９００、９００～１０００、１０００～１１００、１１００～１２００、１２００～１３００、１３００～１４００、または１４００～１５００ｋＤａの範囲の分子量を有することができる。ＭｅｎＷ－１３５結合体は、７００～８００、８００～９００、９００～１０００、１０００～１１００、１１００～１２００、１２００～１３００、１３００～１４００、または１４００～１５００ｋＤａの範囲の分子量を有することができる。
実施形態６は、ナイセリア・メニンギティディスワクチン組成物であって、ａ）ＭｅｎＡ莢膜多糖と担体タンパク質の第１の結合体；ｂ）ＭｅｎＣ莢膜多糖と担体タンパク質の第２の結合体；ｃ）ＭｅｎＷ－１３５莢膜多糖と担体タンパク質の第３の結合体；およびｄ）ＭｅｎＹ莢膜多糖と担体タンパク質の第４の結合体を含み、担体タンパク質が、破傷風トキソイドであり、第１、第２、第３、および第４の結合体の１つまたはそれ以上が、０．３～１．５の多糖対担体タンパク質質量比を有し、組成物が、総多糖に対して２０重量％未満の遊離多糖を含む、ナイセリア・メニンギティディスワクチン組成物である。第１の結合体は、例えば、０．３～０．４、０．４～０．５、０．５～０．６、０．６～０．７、０．７～０．８、０．８～０．９、０．９～１．０、１．０～１．１、１．１～１．２、１．２～１．３、１．３～１．４、または１．４～１．５の多糖対担体タンパク質質量比を有することができる。第２の結合体は、例えば、０．３～０．４、０．４～０．５、０．５～０．６、０．６～０．７、０．７～０．８、０．８～０．９、０．９～１．０、１．０～１．１、１．１～１．２、１．２～１．３、１．３～１．４、または１．４～１．５の多糖対担体タンパク質質量比を有することができる。第３の結合体は、例えば、０．３～０．４、０．４～０．５、０．５～０．６、０．６～０．７、０．７～０．８、０．８～０．９、０．９～１．０、１．０～１．１、１．１～１．２、１．２～１．３、１．３～１．４、または１．４～１．５の多糖対担体タンパク質質量比を有することができる。第４の結合体は、例えば、０．３～０．４、０．４～０．５、０．５～０．６、０．６～０．７、０．７～０．８、０．８～０．９、０．９～１．０、１．０～１．１、１．１～１．２、１．２～１．３、１．３～１．４、または１．４～１．５の多糖対担体タンパク質質量比を有することができる。
実施形態７は、第１、第２、第３、および／または第４の結合体が、７００ｋＤａ～１４００ｋＤａまたは８００ｋＤａ～１３００ｋＤａの範囲の分子量を有する分子を含む個体群である、先行実施形態のいずれか１つに記載のワクチン組成物である。第１および第２の結合体は、７００ｋＤａ～１４００ｋＤａまたは８００ｋＤａ～１３００ｋＤａの範囲の分子量を有する分子を含む個体群である。第１および第３の結合体は、７００ｋＤａ～１４００ｋＤａまたは８００ｋＤａ～１３００ｋＤａの範囲の分子量を有する分子を含む個体群である。第１および第４の結合体は、７００ｋＤａ～１４００ｋＤａまたは８００ｋＤａ～１３００ｋＤａの範囲の分子量を有する分子を含む個体群である。第２および第３の結合体は、７００ｋＤａ～１４００ｋＤａまたは８００ｋＤａ～１３００ｋＤａの範囲の分子量を有する分子を含む個体群である。第２および第４の結合体は、７００ｋＤａ～１４００ｋＤａまたは８００ｋＤａ～１３００ｋＤａの範囲の分子量を有する分子を
含む個体群である。第３および第４の結合体は、７００ｋＤａ～１４００ｋＤａまたは８００ｋＤａ～１３００ｋＤａの範囲の分子量を有する分子を含む個体群である。
実施形態８は、ナイセリア・メニンギティディスワクチン組成物であって、ＭｅｎＣ莢膜多糖と担体タンパク質の結合体を含み、結合体が、両方とも第二級アミンを介して担体タンパク質に結合している二重末端連結結合型多糖および単一末端連結結合型多糖を含む個体群であり、ＭｅｎＣ莢膜多糖と担体タンパク質の結合体における多糖が、多糖ｍｇ当たり０．３μｍｏｌから多糖ｍｇ当たり１．６μｍｏｌの範囲のＯ－アセチル化レベルを有する、ナイセリア・メニンギティディスワクチン組成物である。Ｏ－アセチル化のレベルは、多糖ｍｇ当たり０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、または１．２μｍｏｌ以上である。Ｏ－アセチル化のレベルは、多糖ｍｇ当たり０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、または１．５μｍｏｌ以下である。例えば、レベルは、多糖ｍｇ当たり０．６～１．５μｍｏｌ、または多糖ｍｇ当たり０．８～１．４μｍｏｌの範囲である。Ｏ－アセチル含有量を、Ｈｅｓｔｒｉｎ法（Ｈｅｓｔｒｉｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９４９年、１８０巻、２４９頁）により測定することができる。
実施形態９は、結合体が、（ａ）３００ｋＤａ～１５００ｋＤａの範囲の重量平均分子量を有する、または（ｂ）７００ｋＤａ～１４００ｋＤａまたは８００ｋＤａ～１３００ｋＤａの範囲の分子量を有する分子を含む個体群である、実施形態８に記載のワクチン組成物である。
実施形態１０は、分子量が多角度光散乱（ＭＡＬＳ）により決定される、実施形態４、５、７、または９のいずれか１つに記載のワクチン組成物である。
実施形態１１は、ＭｅｎＣ多糖が、多糖ｍｇ当たり０．６～１．５μｍｏｌまたは多糖ｍｇ当たり０．８～１．４μｍｏｌの範囲のＯ－アセチル化度を有する、先行実施形態のいずれか１つに記載のワクチン組成物である。
実施形態１２は、Ｏ－アセチル化度が、多糖ｍｇ当たり０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、または１．２μｍｏｌ以上である、実施形態１１に記載のワクチン組成物である。
実施形態１３は、Ｏ－アセチル化度が、多糖ｍｇ当たり０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、または１．４μｍｏｌ以下である、実施形態１１に記載のワクチン組成物である。
実施形態１４は、ＭｅｎＣ多糖を含む結合体が、二重末端連結結合型多糖および単一末端連結結合型多糖を含む個体群である、先行実施形態のいずれか１つに記載のワクチン組成物である。
実施形態１５は、第２の結合体の単一末端連結多糖が、末端非連結糖を含み、単一末端連結結合型多糖が、末端非連結糖を有し、末端糖が、７位に第一級ヒドロキシルを有する、または還元末端が、（２－ヒドロキシ）エトキシにより修飾されている、実施形態１４に記載のワクチン組成物である。
実施形態１６は、ＭｅｎＣ多糖を含む結合体が、（ｉ）７位の第一級ヒドロキシル、（ｉｉ）還元末端の（２－ヒドロキシ）エトキシ、および（ｉｉｉ）担体タンパク質への結合から選択される１つまたはそれ以上の修飾を含み、修飾が多糖ｍｇ当たり２５ｎｍｏｌ以上で存在する、先行実施形態のいずれか１つに記載のワクチン組成物である。
実施形態１７は、（ｉ）未変性のＭｅｎＷ－１３５またはＭｅｎＹ多糖の近接ジオールの位置にある第一級ヒドロキシル、および（ｉｉ）担体タンパク質への結合から選択される１つまたはそれ以上の修飾を含むＭｅｎＷ－１３５および／またはＭｅｎＹ多糖の結合体を含み、修飾が多糖ｍｇ当たり６０ｎｍｏｌ以上で存在する、先行実施形態のいずれか１つに記載のワクチン組成物である。
実施形態１８は、修飾が、多糖ｍｇ当たり２００ｎｍｏｌ未満、多糖ｍｇ当たり１５０ｎｍｏｌ未満、多糖ｍｇ当たり１００ｎｍｏｌ未満、または多糖ｍｇ当たり８０ｎｍｏｌ未満の量で存在する、実施形態１６または１７に記載のワクチン組成物である。
実施形態１９は、ＭｅｎＣ多糖が、未変性ＭｅｎＣ多糖に対してサイズが３倍～８倍低減されている、先行実施形態のいずれか１つに記載のワクチン組成物である。
実施形態２０は、０．５～１．５の多糖対担体タンパク質質量比を有する、ＭｅｎＡ莢膜多糖と担体タンパク質の結合体を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載のワクチン組成物である。実施形態２０Ａは、０．７～１．４の多糖対担体タンパク質質量比を有する、ＭｅｎＡ莢膜多糖と担体タンパク質の結合体を含む、実施形態２０に記載のワクチン組成物である。
実施形態２１は、ＭｅｎＡ結合体が、０．８～１．３の多糖対担体タンパク質質量比を有する、実施形態２０に記載のワクチン組成物である。
実施形態２２は、０．３～１．１の多糖対担体タンパク質質量比を有する、ＭｅｎＣおよび／またはＭｅｎＹ莢膜多糖と担体タンパク質の結合体を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載のワクチン組成物である。
実施形態２３は、ＭｅｎＣ結合体が、０．４～０．８の多糖対担体タンパク質質量比を有する、実施形態２２に記載のワクチン組成物である。
実施形態２４は、０．３～１．３の多糖対担体タンパク質質量比を有する、ＭｅｎＷ－１３５莢膜多糖と担体タンパク質の結合体を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載のワクチン組成物である。
実施形態２５は、ＭｅｎＷ－１３５結合体が、０．６～１．３の多糖対担体タンパク質質量比を有する、実施形態２４に記載のワクチン組成物である。
実施形態２６は、０．５～１．３の多糖対担体タンパク質質量比を有する、ＭｅｎＹ莢膜多糖と担体タンパク質の結合体を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載のワクチン組成物である。
実施形態２７は、ＭｅｎＹ結合体が、０．５～０．９の多糖対担体タンパク質質量比を有する、実施形態２６に記載のワクチン組成物である。
実施形態２８は、組成物が２０重量％未満の遊離多糖を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載のワクチン組成物である。
実施形態２９は、組成物が、１０重量％未満の遊離多糖を含む、５重量％未満の遊離多糖を含む、または実質的に遊離多糖を欠いている、実施形態２８に記載のワクチン組成物である。
実施形態３０は、ＭｅｎＡ、ＭｅｎＣ、ＭｅｎＷ－１３５、またはＭｅｎＹ結合体が、リンカーを介して担体タンパク質に結合している、先行実施形態のいずれか１つに記載のワクチン組成物である。
実施形態３１は、リンカーが２～１０個の直鎖炭素を含む、実施形態３０に記載のワクチン組成物である。
実施形態３２は、リンカーが、ＭｅｎＡ、ＭｅｎＣ、ＭｅｎＷ－１３５、またはＭｅｎＹ結合体に、１０～１００個の糖反復単位当たり１つのリンカーの比で存在する、実施形態３０および３１に記載のワクチン組成物である。
実施形態３３は、リンカーが、ＭｅｎＡ、ＭｅｎＣ、ＭｅｎＷ－１３５、またはＭｅｎＹ結合体に、２０～６０個の糖反復単位当たり１つのリンカーの比で存在する、実施形態３０および３１に記載のワクチン組成物である。
実施形態３４は、リンカーが、第１のカルボニルと第２のカルボニルの間にスペーサーを含み、スペーサーが４～８個の炭素を含む、実施形態３０および３１に記載のワクチン組成物である。
実施形態３５は、ＭｅｎＡ結合体のリンカーがジヒドラジドの残基を含む、実施形態３０～３４のいずれか１つに記載のワクチン組成物である。
実施形態３６は、ＭｅｎＡ結合体のリンカーがアジピン酸ジヒドラジドの残基を含む、実施形態３５に記載のワクチン組成物である。
実施形態３７は、ＭｅｎＡ、ＭｅｎＣ、ＭｅｎＷ－１３５、および／またはＭｅｎＹ結合体の多糖が、式Ｉ：
Figure 0007329087000001
 ［式中、ＰＳは多糖への結合を示し、ＰＲは担体タンパク質への結合を示す］
のリンカーを介して担体タンパク質に結合している、先行実施形態のいずれか１つに記載のワクチン組成物である。
実施形態３８は、リンカーがＭｅｎＡ結合体の中にある、実施形態３０～３７のいずれか１つに記載のワクチン組成物である。
実施形態３９は、リンカーがＭｅｎＣ結合体の中にある、実施形態３０～３７のいずれか１つに記載のワクチン組成物である。
実施形態４０は、リンカーがＭｅｎＷ－１３５結合体の中にある、実施形態３０～３７のいずれか１つに記載のワクチン組成物である。
実施形態４１は、リンカーがＭｅｎＹ結合体の中にある、実施形態３０～３７のいずれか１つに記載のワクチン組成物である。
実施形態４２は、ＭｅｎＡ、ＭｅｎＣ、ＭｅｎＷ－１３５、および／またはＭｅｎＹ結合体の多糖が、式ＩＩ：ＰＲ－ＮＨ－ＣＨ２－ＰＳ（ＩＩ）［式中、ＰＳは多糖への結合を示し、ＰＲは担体タンパク質への結合を示す］に示されているように担体タンパク質に結合している、先行実施形態のいずれか１つに記載のワクチン組成物である。
実施形態４３は、ＭｅｎＡ結合体の多糖が、式ＩＩに示されているように担体タンパク質に結合している、実施形態４２に記載のワクチン組成物である。
実施形態４４は、ＭｅｎＣ結合体の多糖が、式ＩＩに示されているように担体タンパク質に結合している、実施形態４２に記載のワクチン組成物である。
実施形態４５は、ＭｅｎＷ－１３５結合体の多糖が、式ＩＩに示されているように担体タンパク質に結合している、実施形態４２に記載のワクチン組成物である。
実施形態４６は、ＭｅｎＹ結合体の多糖が、式ＩＩに示されているように担体タンパク質に結合している、実施形態４２に記載のワクチン組成物である。
実施形態４７は、担体タンパク質が、組み換えエキソプロテインＡ（ｅｘｏｐｒｏｔｅｉｎ Ａ）（ｒＥＰＡ）、ジフテリアトキソイド、またはジフテリア毒素のＢフラグメント、ＣＲＭ１９７、破傷風トキソイド、または破傷風毒素のＣフラグメントを含む、またはそれからなる、先行実施形態のいずれか１つに記載のワクチン組成物である。
実施形態４８は、担体タンパク質が破傷風トキソイドである、先行実施形態のいずれか１つに記載のワクチン組成物である。
実施形態４９は、ナイセリア・メニンギティディス莢膜多糖と担体タンパク質との結合体を生成する方法であって、ａ）多糖を、カルバメート連結を形成することができる活性化剤で活性化する工程であり、活性化剤が、多糖の２０倍から５０倍のモル過剰量で存在する工程；ｂ）活性化された多糖を部分的にクエンチし、活性化された多糖を、多糖反復単位に対して０．３～１．０のモル比で添加されたジヒドラジドリンカーで誘導体化する工程であり、多糖が、１０～１００個の糖反復単位当たり１つのジヒドラジドリンカーの比で誘導体化される工程；ｃ）誘導体化された多糖をカルボジイミド化学物質により担体タンパク質に結合させる工程であり、多糖が、結合反応の開始時に、担体タンパク質に対して３：１～５：１の重量対重量比（ｗｅｉｇｈｔ－ｔｏ－ｗｅｉｇｈｔ ｒａｔｉｏ）で存在し、それによって結合体を形成する工程を含む方法である。
実施形態５０は、ジヒドラジドリンカーが多糖反復単位に対して０．４～０．６のモル比で添加される、実施形態４９に記載の方法である。
実施形態５１は、グリセロールにより反応をクエンチする工程を更に含む、実施形態４９に記載の方法である。
実施形態５２は、ジヒドラジドリンカーがアジピン酸ジヒドラジドである、実施形態４９～５１のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態５３は、誘導体化された多糖が、結合反応において１０ｇ／Ｌ～２０ｇ／Ｌの出発濃度である、実施形態４９～５１のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態５４は、活性化剤が、ＣＤＩ（１，１’－カルボニルジイミダゾール）および
ＣＤＴ（１，１’－カルボニル－ジ－（１，２，４－トリアゾール）、または他の適切な脱離基のような、２つのＮ連結ヘテロアリールに結合しているカルボニルを含む、実施形態４９～５１のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態５５は、活性化剤がカルボニルジイミダゾールである、実施形態５４に記載の方法である。
実施形態５６は、活性化剤が、多糖の３５倍から４５倍のモル過剰量で活性化工程に存在する、実施形態４９～５１のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態５７は、結合工程が、担体タンパク質をＮ－エチル－Ｎ’－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドと反応させることを含む、実施形態４９～５１のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態５８は、多糖がＭｅｎＡ莢膜多糖である、実施形態４９～５１のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態５９は、多糖がＭｅｎＣ莢膜多糖である、実施形態４９～５１のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態６０は、多糖がＭｅｎＷ－１３５またはＭｅｎＹ莢膜多糖である、実施形態４９～５１のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態６１は、ナイセリア・メニンギティディス莢膜多糖と担体タンパク質との結合体を生成する方法であって、ａ）多糖をアルカリ加水分解により部分的に脱Ｏ－アセチル化する工程；ｂ）多糖を過ヨウ素酸塩処理により活性化し、それによって、ジオールを、多糖１ｍｇ当たりアルデヒド少なくとも２０ｎｍｏｌの程度までアルデヒドに変換する工程；ｃ）活性化された多糖を、還元的アミノ化により担体タンパク質に結合させる工程であり、多糖が、担体タンパク質に対して１：１～５：１の重量対重量比で結合反応に存在し、それによって結合体を形成する工程を含む方法である。
実施形態６２は、多糖が、担体タンパク質に対して１．５～３：１の重量対重量比で結合反応に存在する、実施形態６１に記載の方法である。
実施形態６３は、脱Ｏ－アセチル化が、多糖におけるＯ－アセチル化の初期量を４０％～７０％、または５０％～６０％低減する、実施形態６１に記載の方法である。
実施形態６４は、脱Ｏ－アセチル化の後に、多糖が、多糖ｍｇ当たり０．６μｍｏｌから多糖ｍｇ当たり１．５μｍｏｌ、または多糖ｍｇ当たり０．８～１．４μｍｏｌのＯ－アセチル化度を有する、実施形態６１～６３のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態６５は、Ｏ－アセチル化度が、多糖ｍｇ当たり０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、または１．２μｍｏｌ以上である、実施形態６４に記載の方法である。
実施形態６６は、Ｏ－アセチル化度が、多糖ｍｇ当たり０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、または１．４μｍｏｌ以下である、実施形態６４に記載の方法である。
実施形態６７は、活性化された多糖が、結合反応において２０ｇ／Ｌ～５０ｇ／Ｌの出発濃度である、実施形態６１～６６のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態６８は、多糖がＭｅｎＣ莢膜多糖である、実施形態６１～６６のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態６９は、多糖がＭｅｎＡ莢膜多糖である、実施形態６１～６６のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態７０は、多糖がＭｅｎＷ－１３５またはＭｅｎＹ莢膜多糖である、実施形態６１～６６のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態７１は、多糖が、結合反応の前に３０～１５０ｋＤａ、または５０～１００ｋＤａのサイズに低減される、実施形態６１～６６のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態７２は、ナイセリア・メニンギティディス莢膜多糖と担体タンパク質との結合体を生成する方法であって、ａ）多糖を過ヨウ素酸塩処理により活性化し、それによって、ジオールを、多糖１ｍｇ当たりアルデヒド少なくとも５０ｎｍｏｌの程度までアルデヒドに変換する工程；ｂ）活性化された多糖を、還元的アミノ化により担体タンパク質に結合させる工程であり、多糖が、担体タンパク質に対して１：１～５：１の重量対重量比で結合反応に存在し、それによって結合体を形成する工程を含む方法である。
実施形態７３は、多糖が、担体タンパク質に対して１．５～３：１の重量対重量比で結合反応に存在する、実施形態７２に記載の方法である。
実施形態７４は、多糖がＭｅｎＷ－１３５またはＭｅｎＹ莢膜多糖である、実施形態７２および７３のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態７５は、多糖がＭｅｎＣ莢膜多糖である、実施形態７２および７３のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態７６は、多糖がＭｅｎＡ莢膜多糖である、実施形態７２および７３のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態７７は、多糖が、結合反応の前に１００～２００ｋＤａ、または１２５～１７５ｋＤａのサイズに低減される、実施形態７２～７６のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態７８は、多糖が酸加水分解および／または熱によりサイズが低減される、実施形態４９、６１、および７２のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態７９は、多糖が酸化的開裂によりサイズが低減される、実施形態４９、６１、および７２のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態８０は、還元的アミノ化が、シアノ水素化ホウ素、またはピリジンボラン（Ｃ５Ｈ８ＢＮ）およびピコリンボラン錯体（Ｃ６Ｈ７Ｎ・ＢＨ３）のような他の還元試薬を使用して、イミンをアミンに還元することを含む、実施形態７２～７９のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態８１は、結合体における未反応アルデヒドを還元試薬によりアルコールに変換することを更に含む、実施形態７２～７９のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態８２は、還元試薬が水素化ホウ素である、実施形態８１に記載の方法である。
実施形態８３は、過ヨウ素酸塩を１ｍＭ～４ｍＭまたは１．５ｍＭ～３ｍＭの濃度で添加して、多糖を活性化する、実施形態７２～７９のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態８４は、結合体を疎水性相互作用クロマトグラフィーにより精製することを更に含む、実施形態４９～８３のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態８５は、結合体を混合モード樹脂クロマトグラフィーにより精製することを更に含む、実施形態４９～８３のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態８６は、ナイセリア・メニンギティディス莢膜多糖と担体タンパク質の結合体を、結合体、塩、および遊離多糖を含有する混合物から精製する方法であって、ａ）疎水性相互作用クロマトグラフィー樹脂を混合物と接触させる工程であり、結合体が樹脂に結合する工程；ｂ）遊離多糖を樹脂から溶出する工程；およびｃ）結合体を水性液体により樹脂から溶出する工程であり、水性液体が塩を含まない、または混合物より少ない塩を含有し、それによって、精製された結合体を含む組成物を得る工程を含む方法である。
実施形態８７は、塩が硫酸アンモニウムを含む、実施形態８６に記載の方法である。
実施形態８８は、混合物が、０．５～１．５Ｍまたは０．８～１．２Ｍの範囲の量で塩を含む、実施形態８６または実施形態８７に記載の方法である。
実施形態８９は、水性液体が０．２、０．１、または０．０５Ｍ未満の塩を含む、実施形態８６～８８のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態９０は、水性液体が水である、実施形態８６～８９のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態９１は、組成物が、２０重量％未満の遊離多糖を含む、１０重量％未満の遊離多糖を含む、５重量％未満の遊離多糖を含む、または遊離多糖を実質的に欠いている、実施形態８６～９０のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態９２は、疎水性相互作用クロマトグラフィー樹脂が、フェニル、プロピル、またはブチル樹脂である、実施形態８６～９１のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態９３は、担体タンパク質が破傷風トキソイドである、実施形態４９～９２のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態９４は、実施形態４９～８５のいずれか１つに記載の方法によって生成された結合体である。
実施形態９５は、ワクチン組成物であって、ａ）ＭｅｎＡ莢膜多糖と担体タンパク質の第１の結合体；ｂ）ＭｅｎＣ莢膜多糖と担体タンパク質の第２の結合体；ｃ）ＭｅｎＷ－１３５莢膜多糖と担体タンパク質の第３の結合体；およびｄ）ＭｅｎＹ莢膜多糖と担体タンパク質の第４の結合体を含み、第１、第２、第３、および第４の結合体の１つ、２つ、３つ、または全てが、実施形態４９～８５のいずれか１つに記載の方法によって生成されたワクチン組成物である。
実施形態９６は、アジュバントを含まない、実施形態１～４８または９５のいずれか１
つに記載のワクチン組成物である。
実施形態９７は、薬学的に許容される緩衝液を更に含む、実施形態１～４８または９５および９６のいずれか１つに記載のワクチン組成物である。
実施形態９８は、ｐＨが５．５～６．５の酢酸緩衝液を含む、実施形態９７に記載のワクチン組成物である。
実施形態９９は、薬学的に許容される塩を更に含む、実施形態１～４８または９５～９８のいずれか１つに記載のワクチン組成物である。
実施形態１００は、薬学的に許容される塩が塩化ナトリウムである、実施形態９９に記載のワクチン組成物である。
実施形態１０１は、薬学的に許容される塩が、０．４５％～０．９％ｗ／ｖ、または０．５％ｗ／ｖ～０．８５％ｗ／ｖで存在する、実施形態９９または１００に記載のワクチン組成物である。
実施形態１０２は、第１、第２、第３、および第４の結合体の少なくとも１つ、２つ、３つ、または４つ全てが、多糖と担体タンパク質との複数の結合点を含む、実施形態１～４８または９５～１０１のいずれか１つに記載のワクチン組成物である。
実施形態１０３は、筋肉内投与用に製剤化される、実施形態１～４８または９５～１０２のいずれか１つに記載のワクチン組成物である。
実施形態１０４は、それぞれ６μｇ～１５μｇのＭｅｎＡ、ＭｅｎＣ、ＭｅｎＷ－１３５、およびＭｅｎＹ多糖を含む、実施形態１～４８または９５～１０３いずれか１つに記載のワクチン組成物の単一単位用量である。
実施形態１０５は、担体タンパク質が５０μｇ～８０μｇの量で存在する、実施形態１０４に記載の単一単位用量である。
実施形態１０６は、シリンジに含有されている、実施形態１０４または１０５に記載の単一単位用量である。
実施形態１０７は、シリンジがシリコーンを含まない、実施形態１０６に記載の単一単位用量である。
実施形態１０８は、シリンジが市販または流通用に包装されている、実施形態１０６または１０７に記載の単一単位用量である。
実施形態１０９は、対象にナイセリア・メニンギティディスのワクチン接種をする方法であって、実施形態１～４８または９５～１０３のいずれか１つに記載のワクチン組成物の用量を対象に投与することを含む方法である。実施形態１０９Ａは、対象にナイセリア・メニンギティディスのワクチン接種をする方法であって、ワクチン組成物の用量を対象に投与することを含む方法に使用される、実施形態１～４８または９５～１０３のいずれか１つに記載のワクチン組成物である。
実施形態１１０は、対象をナイセリア・メニンギティディスに対して免疫化するための、実施形態１～４８もしくは９５～１０３のいずれか１つに記載のワクチン組成物、また
は実施形態１０４～１０８のいずれか１つに記載の単一単位用量の使用である。実施形態１１０Ａは、対象をナイセリア・メニンギティディスに対して免疫化するために使用される、実施形態１～４８もしくは９５～１０３のいずれか１つに記載のワクチン組成物、または実施形態１０４～１０８のいずれか１つに記載の単一単位用量である。
実施形態１１１は、対象をナイセリア・メニンギティディスに対して免疫化する医薬の製造における、実施形態１～４８もしくは９５～１０３のいずれか１つに記載のワクチン組成物、または実施形態１０４～１０８のいずれか１つに記載の単一単位用量の使用である。実施形態１１１Ａは、対象をナイセリア・メニンギティディスに対して免疫化する医薬として使用される、実施形態１～４８もしくは９５～１０３のいずれか１つに記載のワクチン組成物、または実施形態１０４～１０８のいずれか１つに記載の単一単位用量である。
実施形態１１２は、ワクチンが筋肉内に投与される、実施形態１０９～１１１Ａのいずれか１つに記載の方法、使用、または組成物である。
実施形態１１３は、対象が６週齢から３歳である、実施形態１０９～１１２のいずれか１つに記載の方法、使用、または組成物である。
実施形態１１４は、対象が、２カ月齢、６カ月齢、１２カ月齢、または１５カ月齢である、実施形態１１３に記載の方法、使用、または組成物である。
実施形態１１５は、対象が、５０歳もしくはそれ以上、５５歳もしくはそれ以上、６０歳もしくはそれ以上、または６５歳もしくはそれ以上である、実施形態１０９～１１２のいずれか１つに記載の方法、使用、または組成物である。
実施形態１１６は、ワクチンが０．５ｍＬの用量で投与される、実施形態１０９～１１５のいずれか１つに記載の方法、使用、または組成物である。
実施形態１１７は、ワクチンが、それぞれ４～１０μｇの血清型Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ－１３５を含む、実施形態１１６に記載の方法、使用、または組成物である。
実施形態１１８は、ワクチンが５０～８０μｇの破傷風トキソイドタンパク質を含む、実施形態１１６に記載の方法、使用、または組成物である。
実施形態１１９は、ワクチンが、それぞれ４～１０μｇの血清型Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ－１３５、ならびに５０～８０μｇの破傷風トキソイドタンパク質を含む、実施形態１１６に記載の方法、使用、または組成物である。
実施形態１２０は、ナイセリア・メニンギティディスを対象としないワクチンを、ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴワクチンと同時に投与することを更に含み、ただし、ナイセリア・メニンギティディスを対象としないワクチンがＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴワクチンと同じ注射剤の中にない、実施形態１０９～１１９のいずれか１つに記載の方法、使用、または組成物である。
実施形態１２１は、非ナイセリア・メニンギティディスワクチンが、水痘、ジフテリア、Ｈｉｂ、Ｂ型肝炎、はしか、ムンプス、百日咳、ポリオ、肺炎球菌、ロタウイルス、風疹、または破傷風感染の予防を対象とする、実施形態１２０に記載の方法、使用、または組成物である。
実施形態１２２は、非ナイセリア・メニンギティディスワクチンが、ＤＴａＰ５、Ｈｉｂ、ＨｅｐＢ、ＤＴａｐ５－ＩＰＶ／Ｈｉｂ、ＤＴａｐ５－ＩＰＶ／Ｈｉｂ、ＨｅｐＢ、ＭＭＲ、ＩＰＶ、ＰＣＶ７、ＰＣＶ１３、ＲＶ１、またはＲＶ５である、実施形態１２０に記載の方法、使用、または組成物である。
実施形態１２３は、対象が、以前にナイセリア・メニンギティディス莢膜糖結合体ワクチンを受けていた、実施形態１０９～１２２のいずれか１つに記載の方法、使用、または組成物である。
実施形態１２４は、対象が、ナイセリア・メニンギティディス莢膜糖結合体ワクチンを４カ月～１０年前に受けていた、実施形態１２３に記載の方法、使用、または組成物である。実施形態１２４Ａは、対象が、ナイセリア・メニンギティディス莢膜糖結合体ワクチンを２カ月～１０年前に受けていた、実施形態１２３に記載の方法、使用、または組成物である。
実施形態１２５は、対象が、以前にナイセリア・メニンギティディス莢膜糖結合体ワクチンを受けていなかった、実施形態１０９～１２２のいずれか１つに記載の方法、使用、または組成物である。
血清型Ａ多糖－ＡＤＨ連結タンパク質結合体の概略を示す図である。カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）による活性化、場合により、多糖のヒドロキシル基でのアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）による誘導体化、およびタンパク質（例えば、破傷風トキソイド（ＴＴ））との反応によって形成された、反応性部位残基１１を有する血清型Ａ多糖１０である。活性化された／誘導体化された多糖は、基１４において直接的または間接的に連結１２を介してタンパク質１３に架橋される。例えば、直接的な連結は、例えば、カルバメート連結（例えば、ＣＤＩから誘導された）を形成することによって、タンパク質の第一級アミンを使用することができる。間接的な連結は、ＡＤＨおよびＮ－エチル－Ｎ’－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＡＣ）から誘導され、タンパク質のカルボキシルを活性化する。 タンパク質のカルボキシル基（例えば、アスパラギン酸もしくはグルタミン側鎖、またはＣ末端における）と反応するＮ－エチル－Ｎ’－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＡＣ）を使用する、担体タンパク質（例えば、ＴＴ）の活性Ｏ－アシルイソ尿素中間体の調製を例示する図である。この中間体は、活性化された誘導体化多糖（示されず）のアミン基へのカップリングに適している。 担体タンパク質（例えば、ＴＴ）に連結した血清型Ａ多糖－ＡＤＨ結合体の生成に使用することができる、活性化された誘導体化血清型Ａ多糖を生成する一般スキームを例示する図である。この実施形態では、多糖をＣＤＩによりヒドロキシル基で活性化して、イミダゾールカルバメート中間体を形成し、これをＡＤＨにより更に誘導体化する。ＡＤＨ誘導体化血清型Ａ多糖は、ＡＤＨリンカーの第一級アミン基と、担体タンパク質（示されず）の活性Ｏ－アシルイソ尿素中間体とのアミンカップリングを介して、担体タンパク質に共有結合することに適している。 カルバメートを介して破傷風トキソイド結合体に連結している血清型Ａ多糖を生成する一般スキームを示す図である。多糖（ＰＳ）をＣＤＩによりヒドロキシル基で活性化して、イミダゾールカルバメート活性中間体を形成する。次に活性中間体をタンパク質担体（ＰＲ）と反応させる。カルバメート連結を、求核置換反応を介して形成し、ここでタンパク質の第一級アミンは、カルバメート炭素に作用して、イミダゾールの欠失および多糖とタンパク質との間のカルバメート連結の形成をもたらす。 （Ｅ）ＣＤＩ活性化の後、ならびに（Ｆ）ＣＤＩ活性化およびＡＤＨによる誘導体化の後の血清型Ａ多糖の構造を示す図である。 （Ｅ）ＣＤＩ活性化の後、ならびに（Ｆ）ＣＤＩ活性化およびＡＤＨによる誘導体化の後の血清型Ａ多糖の構造を示す図である。 破傷風トキソイド担体タンパク質およびＮ－エチル－Ｎ’－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＡＣ）から形成された、活性化された誘導体化多糖および活性Ｏ－アシルイソ尿素中間体からの担体タンパク質（例えば、ＴＴ）に連結した血清型Ａ多糖－ＡＤＨ結合体の生成を例示する図である。活性化された誘導体化多糖の第一級アミンは、脱離基として機能するイソ尿素を置換して、タンパク質が、アミド結合、ＡＤＨの残基、およびカルバメート連結を介して多糖に連結している生成物をもたらし、ここでカルボニルはＣＤＩから誘導される。排除された尿素副産物は示されていない。 連結多糖反復単位（ＡＤＨ残基を含む）の構造が描かれている、図１Ｆにおける反応の生成物を示す図である。 血清型Ｃ多糖－タンパク質結合体の概略を示す図である。血清型Ｃ多糖２０は、それらの末端でタンパク質（例えば、破傷風トキソイド）２１に結合している。 メタ過ヨウ素酸ナトリウムを使用する血清型Ｃ多糖（多糖反復単位に従来の炭素番号付けを示している）の活性化を例示する図である。メタ過ヨウ素酸ナトリウム処理は、７番と８番の炭素の間に開裂をもたらし、多糖を酸化的に脱重合して、対応する末端アルデヒドにする。 還元的アミノ化を介した血清型Ｃ多糖－タンパク質（例えば、ＴＴ）結合体の形成を例示する図である。タンパク質（ＰＲ）の第一級アミン（例えば、リシン側鎖またはＮ末端）は、脱重合された活性化血清型Ｃ多糖（ＰＳ）の末端アルデヒドと反応して、シッフ塩基中間体（示されず）を形成し、これを還元して（例えば、ピリジンボラン、ピコリンボラン、またはシアノ水素化ホウ素を使用して）、第二級アミン連結をもたらす。多糖部分は、タンパク質に末端連結している。個別のタンパク質分子は、１つを超える多糖と反応することができ、一部の多糖末端は未反応であってもよい（示されず；図２Ａの例示を参照すること）。未反応アルデヒドをキャップすることができる、すなわち、シッフ塩基（示されず）を還元した後、水素化ホウ素ナトリウムのような適切な還元剤を使用して、アルコールに還元することができる。 連結多糖反復単位の構造が描かれている、図２Ｃにおける反応の生成物を示す図である。追加の多糖へのタンパク質の連結が可能である（示されず）。 血清型Ｗ－１３５または血清型Ｙ多糖－タンパク質結合体の概略を示す図である。血清型Ｗ－１３５または血清型Ｙ多糖３１は、１つまたはそれ以上の位置で、１つまたはそれ以上のタンパク質（例えば、破傷風トキソイド）３０に結合している。 血清型Ｗ－１３５多糖の脱重合および活性化を例示する図である。多糖を、例えば、高温の使用によって脱重合し、次にメタ過ヨウ素酸ナトリウムで処理して活性化し、このことは、例えばシアル酸部分の７番と８番の炭素の間のような近接ジオールを開裂し、酸化してアルデヒドにする。 還元的アミノ化を介した血清型Ｗ－１３５多糖－タンパク質（例えば、ＴＴ）結合体の形成を例示する図である。タンパク質（ＰＲ）の第一級アミン（例えば、リシン側鎖またはＮ末端）は、脱重合された活性化血清型Ｗ－１３５多糖（ＰＳ）のアルデヒドと反応して、シッフ塩基中間体（示されず）を形成する。中間体をシアノ水素化ホウ素ナトリウムで還元して、第二級アミン連結をもたらす。個別のタンパク質分子は、１つを超える多糖と反応することができ、その逆も同じである（示されず；図３の例示を参照すること）。未反応アルデヒドをキャップすることができる、すなわち、シッフ塩基（示されず）を還元した後、水素化ホウ素ナトリウムのような適切な還元剤を使用して、アルコールに還元することができる。 連結多糖反復単位の１つの可能な構造が描かれている、図４Ｂにおける反応の生成物を示す図である。追加の多糖へのタンパク質が可能であり、その逆も同じである（示されず；図３の例示を参照すること）。 血清型Ｙ多糖の脱重合および活性化を例示する図である。多糖を、例えば、高温の使用によって脱重合し、次にメタ過ヨウ素酸ナトリウムで処理して活性化し、このことは、例えばシアル酸部分の７番と８番の炭素の間のような近接ジオールを開裂し、酸化してアルデヒドにする。 還元的アミノ化を介した血清型Ｙ多糖－タンパク質（例えば、ＴＴ）結合体の形成を例示する図である。タンパク質（ＰＲ）の第一級アミン（例えば、リシン側鎖またはＮ末端）は、脱重合された活性化血清型Ｙ多糖（ＰＳ）のアルデヒドと反応して、シッフ塩基中間体（示されず）を形成する。中間体を還元して（例えば、ピリジンボラン、ピコリンボラン、またはシアノ水素化ホウ素を使用して）、第二級アミン連結をもたらす。個別のタンパク質分子は、１つを超える多糖と反応することができ、その逆も同じである（示されず；図３の例示を参照すること）。未反応アルデヒドをキャップすることができる、すなわち、シッフ塩基（示されず）を還元した後、水素化ホウ素ナトリウムのような適切な還元剤を使用して、アルコールに還元することができる。 連結多糖反復単位の１つの可能な構造が描かれている、図５Ｂにおける反応の生成物を示す図である。追加の多糖へのタンパク質が可能であり、その逆も同じである（示されず；図３の例示を参照すること）。 最後のワクチン投与の３０日（Ｄ３０）後に、血清型Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷで１：８以上のｈＳＢＡ力価を達成した群１～４における対象の百分率を示すグラフである。 最後のワクチン投与のＤ３０後に、血清型Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷで１：８以上のｒＳＢＡ力価を達成した群１～４における対象の百分率を示すグラフである。 ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴワクチン投与後の７日間以内に、１つまたはそれ以上の応答型（ｓｏｌｉｃｉｔｅｄ）注射部位反応を報告した参加者の累積百分率を示すグラフである。 ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴワクチン＋ルーチンワクチン、またはルーチンワクチンの単独のいずれかを投与した７日間以内に、応答型全身反応を有した対象の百分率を示すグラフである。 ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴワクチンまたはＭｅｎｏｍｕｎｅ（登録商標）－Ａ／Ｃ／Ｙ／Ｗ－１３５（ＭＰＳＶ４）ワクチンのいずれかの投与のＤ３０後に、異なる血清型においてｈＳＢＡ力価の≧１：８を達成した対象の百分率を示すグラフである。 ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴワクチンまたはＭＰＳＶ４ワクチンのいずれかの投与のＤ３０後の、ｈＳＢＡ幾何学平均力価（ＧＭＴ）の要約を示すグラフである。 ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴワクチンまたはＭＰＳＶ４ワクチンのいずれかの投与のＤ３０後に、異なる血清型においてｒＳＢＡ力価の≧１：８を達成した対象の百分率を示すグラフである。 ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴワクチンまたはＭＰＳＶ４ワクチンのいずれかの投与後に、応答型注射部位反応を有する対象の百分率をタイプおよびグレード別に示すグラフである。 ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴワクチンまたはＭＰＳＶ４ワクチンのいずれかの投与後に、応答型全身反応を有する対象の百分率をタイプおよびグレード別に示すグラフである。 ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴワクチンＭＣＶ４－ＴＴワクチンのいずれかの投与のＤ３０後に、ｈＳＢＡワクチン血清応答を達成した対象の百分率を示すグラフである。 ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴワクチンまたはＭＣＶ４－ＴＴワクチンのいずれかの投与後の、ワクチン接種後ｈＳＢＡ幾何学平均を示すグラフである。 ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴワクチンまたはＭＣＶ４－ＴＴワクチンのいずれかの投与後Ｄ０～Ｄ７での応答型注射部位反応を示すグラフである。 ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴワクチンまたはＭＣＶ４－ＴＴワクチンのいずれかの投与後Ｄ０～Ｄ７での応答型全身反応を示すグラフである。
ここで、本発明の特定の実施形態を詳細に参照し、その例は添付の図面に例示されている。本発明は、例示の実施形態と共に記載されるが、本発明をこれらの実施形態に限定することを意図していないことが理解されるべきである。対照的に、本発明は、全ての代替案、改変、および等価物を網羅することが意図され、これらは、特許請求の範囲によって定義されている本発明の範囲内に含まれる。
本教示を詳細に記載する前に、本開示は、特定の組成物または方法工程に限定されず、それらは変わることが理解されるべきである。本明細書および添付の特許請求の範囲に使用されるとき、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈から明白に示される場合を除いて、複数対象を含むことに留意するべきである。このように、例えば、「結合体」への参照は複数の結合体を含み、「細胞」への参照は、複数の細胞を含む、などである。
数値範囲は、範囲を確定する数値も含める。測定値および測定可能値は、測定に関連する有効桁および誤差を考慮して近似値であることが理解されるべきである。また、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｓ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、および「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」の使用は、制限することを意図していない。前述の一般的な記載および詳細な記載は、両方とも単に例示的および説明的なものであり、本教示を限定しないことが理解されるべきである。
上記の本明細書に特定的に示されていない限り、様々な構成成分を「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」ことを列挙する本明細書の実施形態は、列挙された構成成分「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」または「実質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」ことも考慮され、様々な構成成分「からなる」ことを列挙する本明細書の実施形態は、列挙された構成成分「を含む」または「から実質的になる」ことも考慮され、様々な構成成分「から実質的になる」ことを列挙する本明細書の実施形態は、列挙された構成成分「からなる」または「を含む」ことも考慮される（この交換可能性は、特許請求の範囲における用語の使用には当てはまらない）。
本明細書に使用されるセクションの見出しは、単に構成の目的のためであり、どのような方法でも、望ましい主題に限定していると解釈されるべきではない。参照によって組み入れられる任意の文献が本明細書において定義される任意の用語と矛盾する場合には、本明細書が優先される。本教示が様々な実施形態と共に記載されているが、本教示がそのような実施形態に限定されることを意図していない。対照的に、本教示は、様々な代替案、改変、および等価物を包含し、当業者には理解される。
Ａ．定義
特に記述のない限り、以下の用語および語句は、本明細書において使用されるとき、以下の意味を有する。
用語「またはその組み合わせ」は、本明細書において使用されるとき、この用語に先行して列挙された用語の全ての並べ換えおよび組み合わせを指す。例えば、「Ａ、Ｂ、Ｃ、またはその組み合わせ」は、Ａ、Ｂ、Ｃ、ＡＢ、ＡＣ、ＢＣ、またはＡＢＣのうちの少なくとも１つを含むことが意図され、特定の文脈において順序が重要である場合には、ＢＡ、ＣＡ、ＣＢ、ＡＣＢ、ＣＢＡ、ＢＣＡ、ＢＡＣ、またはＣＡＢのうちの少なくとも１つを含むことも意図される。この例を続けると、ＢＢ、ＡＡＡ、ＡＡＢ、ＢＢＣ、ＡＡＡＢＣＣＣＣ、ＣＢＢＡＡＡ、ＣＡＢＡＢＢなどのような、１つまたはそれ以上の項目または用語の繰り返しを含有する組み合わせが明確に含まれる。当業者は、典型的には、文脈か
ら明白ではない限り、任意の組み合わせにおける項目または用語の数に制限はないことを理解する。
本明細書において使用されるとき、用語「キット」は、１つまたはそれ以上の構成成分または組成物のような関連する構成成分と、溶媒、溶液、緩衝液、使用説明書、または乾燥剤のような、１つまたはそれ以上の関連する材料とのパッケージセットを指す。
「または（ｏｒ）」は、包括的な意味で使用され、すなわち、文脈から必要とされない限り、「および／または（ａｎｄ／ｏｒ）」と同等である。
用語「リンカー」および「連結」は、交換可能に使用され、担体タンパク質または多糖のような項目に共有結合している、または結合している原子の鎖を含む化学部分を意味する。
「連結部分」は、別の分子と反応して、共有結合による連結を形成することができる、化学反応基、置換基、または部分、例えば、求核剤または求電子剤を意味する。
「アルキル」は、親アルカン、アルケン、またはアルキンの単一炭素原子から１個の水素原子を除去することによって誘導された飽和または不飽和、分枝鎖、直鎖、分枝、または環状の炭化水素ラジカルを意味する。典型的なアルキル基は、１～１２個の飽和および／または不飽和炭素からなり、メチル、エチル、プロピル、ブチルなどが含まれるが、これらに限定されない。
「反復単位」は、多糖において重合される単糖またはオリゴ糖残基である。ＭｅｎＡおよびＭｅｎＣの反復単位は、単糖（それぞれ、Ｎ－アセチルマンノサミンおよびシアル酸）であり、ＭｅｎＷ－１３５およびＭｅｎＹの反復単位は、二糖である（ＭｅｎＹではシアル酸とグルコースであり、ＭｅｎＷ－１３５ではシアル酸とガラクトースである）。反復単位は、側鎖によって（例えば、Ｏ－アセチル化）、および／または本明細書に開示されているような修飾によって、１つずつ隣が異なっていてもよい。
ＭｅｎＡ、ＭｅｎＣ、ＭｅｎＷ－１３５、およびＭｅｎＹは、ナイセリア・メニンギティディスの血清型Ａ、Ｃ、Ｗ－１３５、もしくはＹのそれぞれ、またはその莢膜多糖の短縮形として使用される（例えば、「ＭｅｎＣ結合体」の場合では、ナイセリア・メニンギティディスの血清型Ｃの莢膜多糖と担体タンパク質との結合体を意味する）。
Ｂ．例示的なワクチン組成物
一部の実施形態において、ワクチン組成物が提供される。一部の実施形態において、ワクチン組成物は、ＭｅｎＣ莢膜多糖と担体タンパク質の結合体を含む。一部の実施形態において、ワクチン組成物は、ＭｅｎＡ莢膜多糖と担体タンパク質の結合体を含む。一部の実施形態において、ワクチン組成物は、ＭｅｎＷ－１３５莢膜多糖と担体タンパク質の結合体を含む。一部の実施形態において、ワクチン組成物は、ＭｅｎＹ莢膜多糖と担体タンパク質の結合体を含む。一部の実施形態において、ワクチン組成物は、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つの、莢膜多糖と担体タンパク質の結合体を含む。少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つの、莢膜多糖と担体タンパク質の結合体は、ナイセリア・メニンギティディスの異なる血清型からの莢膜多糖の結合体、例えば、ＭｅｎＡ、ＭｅｎＣ、ＭｅｎＹ、およびＭｅｎＷ莢膜多糖と担体タンパク質、例えば、破傷風トキソイドとの結合体である。
莢膜多糖を、米国特許出願第２００３／００６８３３６号、実施例１に記載された方法に従って調製することができる。莢膜多糖を、例えば米国特許第６，９３３，１３７号に
記載の培地および方法を使用して調製することもできる。
担体タンパク質を含む結合体が本明細書に開示されている。タンパク質担体の例は、例えば、Ｐｉｃｈｉｃｈｅｒｏ ＭＥ．Ｐｒｏｔｅｉｎ ｃａｒｒｉｅｒｓ ｏｆ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ ｖａｃｃｉｎｅｓ：Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ，ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｒｉａｌｓ．Ｈｕｍａｎ Ｖａｃｃｉｎｅｓ＆Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ．２０１３年、９巻（１２号）：２５０５～２５２３頁．ｄｏｉ：１０．４１６１／ｈｖ．２６１０９において考察されており、参照によって本明細書に組み入れる。一部の実施形態において、担体タンパク質は、組み換えエキソプロテインアルファ（ＲＥＰＡ）、ジフテリアトキソイド、ＣＲＭ１９７、破傷風トキソイド、または破傷風毒素のＣフラグメントを含む、またはそれからなる。一部の実施形態において、タンパク質担体は破傷風トキソイドである。
一部の実施形態において、破傷風トキソイド（ＴＴ）は、ＭｕｅｌｌｅｒおよびＭｉｌｌｅｒ培地、または修飾ＭｕｅｌｌｅｒおよびＭｉｌｌｅｒ培地に増殖させたクロストリジウム・テタニ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ）（Ｈａｒｖａｒｄ Ｓｔｒａｉｎ）の培養物からの抽出、硫酸アンモニウム精製、および毒素のホルマリン不活性化によって調製される。一部の実施形態において、ＴＴは、残留ホルムアルデヒドを低減するために加工され、塩化ナトリウムで濃縮され、滅菌濾過される。一部の実施形態において、ＴＴは、硫酸アンモニウム精製ではなくクロマトグラフィーにより精製される。一部の実施形態において、修飾ＭｕｅｌｌｅｒおよびＭｉｌｌｅｒ培地は、ビーフハートインフュージョン（ｂｅｅｆ ｈｅａｒｔ ｉｎｆｕｓｉｏｎ）を含有しない。一部の実施形態において、クロストリジウム・テタニは、国際公開第２００６／０４２５４２号、１６頁、表３に記載されている培地に増殖される。
下記に考察される特定の実施形態は、化学部分（例えば、ヒドロキシルまたはＯ－アセチル化）、または担体タンパク質との結合体のような特徴に関連し、これは多糖の質量単位当たり所定の量で存在する。例えば、ある特定の特徴、または特徴の組み合わせは、２５ｎｍｏｌ／ｇ未満の多糖のようなレベルで存在する。これは、多糖１ｍｇ当たり、特徴または特徴の組み合わせが少なくとも１５×１０１５倍で生じることを意味する（２５ｎｍｏｌ＝２５×１０－９モル×（６．０２×１０２３項目／モル）＝１５×１０１５項目）。
一部の実施形態において、ＭｅｎＣ莢膜多糖と担体タンパク質との結合体における多糖は、多糖ｍｇ当たり０．３μｍｏｌから多糖ｍｇ当たり１．６μｍｏｌの範囲のＯ－アセチル化レベルを有する。一部の実施形態において、Ｏ－アセチル化のレベルは、多糖ｍｇ当たり０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、または１．２μｍｏｌ以上である。一部の実施形態において、Ｏ－アセチル化のレベルは、多糖ｍｇ当たり０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、または１．５μｍｏｌ以下である。例えば、レベルは、多糖ｍｇ当たり０．６～１．５μｍｏｌ、または多糖ｍｇ当たり０．８～１．４μｍｏｌの範囲である。Ｏ－アセチル含有量を、Ｈｅｓｔｒｉｎ法（Ｈｅｓｔｒｉｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９４９年、１８０巻、２４９頁）により測定することができる。
一部の実施形態において、組成物中の少なくとも１つの結合体は、３００ｋＤａ～１５００ｋＤａの範囲の重量平均分子量を有する。一部のそのような実施形態において、重量平均分子量は、４００ｋＤａ、５００ｋＤａ、６００ｋＤａ、７００ｋＤａ、８００ｋＤａ、９００ｋＤａ、１０００ｋＤａ、または１１００ｋＤａ以上である。一部のそのような実施形態において、重量平均分子量は、６００ｋＤａ、７００ｋＤａ、８００ｋＤａ、９００ｋＤａ、１０００ｋＤａ、１１００ｋＤａ、１２００ｋＤａ、１３００ｋＤａ、ま
たは１４００ｋＤａ以下である。重量平均分子量は、当該技術に既知の方法、例えば、多角度光散乱（ＭＡＬＳ）により決定される。一部の実施形態において、組成物中の少なくとも１つの結合体は、７００ｋＤａ～１４００ｋＤａの分子量を有する分子を含む（すなわち、分子の個体群である）。個体群の一部の分子は、重量平均または数平均分子量が範囲内であっても、なくても、この範囲の重量を有することに留意するべきである。例えば、６００ｋＤａ～１５００ｋＤａの重量平均分子量を有する分子の個体群は、７００ｋＤａ～１４００ｋＤａの範囲の分子量を有する分子を含有する可能性がある。一部の実施形態において、組成物中の少なくとも１つの結合体は、８００ｋＤａ～１３００ｋＤａの分子量を有する分子を含む。一部の実施形態において、組成物中の少なくとも１つの結合体は、７００～８００、８００～９００、９００～１０００、１０００～１１００、１１００～１２００、１２００～１３００、１３００～１４００、または１４００～１５００ｋＤａの範囲の分子量を有する分子を含む。一部の実施形態において、ＭｅｎＡ結合体は、上記に記載された分子量を有する。一部の実施形態において、ＭｅｎＣ結合体は、上記に記載された分子量を有する。一部の実施形態において、ＭｅｎＷ－１３５結合体は、上記に記載された分子量を有する。一部の実施形態において、ＭｅｎＹ結合体は、上記に記載された分子量を有する。一部の実施形態において、分子量は、多角度光散乱（ＭＡＬＳ）を使用して決定される。一部の実施形態において、分子量は、高速サイズ排除クロマトグラフィー（ＨＰＳＥＣ）を使用して決定される。
一部の実施形態において、ＭｅｎＣの結合体のような結合体は、単一末端連結結合型多糖、二重末端連結結合型多糖、またはこれらの組み合わせを含む個体群である。単一末端連結結合型多糖は、一方の末端で担体タンパク質に結合している。二重末端連結結合型多糖は、両方の末端で担体タンパク質に結合している。末端連結結合型多糖は、例えば、多糖主鎖における近接ジオールを、例えば過ヨウ素酸塩処理により開裂および活性化して、活性化末端を露出することによって、形成することができる。例えば、ＭｅｎＣ多糖は、シアル酸反復単位に、その反復単位で７および８位がＯ－アセチル化されない程度に７，８近接ジオールを有する。この近接ジオールは、それを開裂すると１つの多糖を隣から分離するので、多糖の主鎖の中にある、すなわち、近接ジオールは側鎖の一部ではない。活性化した後、活性化末端を、担体タンパク質と反応させて（または、次に担体タンパク質に結合させる、もしくは既に結合しているリンカーと反応させて）、末端連結多糖結合体を形成することができる。結合体は、多糖の末端（末端糖残基）の一方のみが担体タンパク質に連結する場合（適用可能であれば、リンカーを介することを含む）、単一末端連結している。二重末端連結結合体は、多糖の両方の末端に連結した担体タンパク質を有する。一般に、担体タンパク質に対して高い化学量論の多糖、または反応体の低い全体濃度は、結合反応を単一末端連結生成物の方へ偏向させる。対照的に、担体タンパク質に対して低い化学量論の多糖、または反応体の高い全体濃度は、結合反応を二重末端連結生成物の方へ偏向させる。
一部の実施形態において、単一末端連結結合型多糖（例えば、ＭｅｎＣ結合体）は、末端非連結糖を有し、そこには７位に第一級ヒドロキシルがある、または還元末端が（２－ヒドロキシ）エトキシで修飾されている。このことは、７，８近接ジオールを含む多糖を過ヨウ素酸塩により活性化すること（末端アルデヒドをもたらす）、例えば、水素化ホウ素試薬により、一方の末端で結合すること、および他方の末端で未反応アルデヒドを還元することによって、もたらされる。７位の第一級ヒドロキシルは、切断シアル酸残基の末端であると考慮される。（２－ヒドロキシ）エトキシにより修飾された還元末端は、還元末端において、別の残基の９番および８番炭素、ならびにこれらに関連する酸素のフラグメントに結合したシアル酸と考慮される。
一部の実施形態において、結合体は、（ｉ）未変性のＭｅｎＷ－１３５またはＭｅｎＹ多糖の近接ジオールの位置にある第一級ヒドロキシル、および（ｉｉ）担体タンパク質へ
の結合から選択される１つまたはそれ以上の修飾を含むＭｅｎＷ－１３５および／またはＭｅｎＹ多糖であり、修飾は、多糖ｍｇ当たり６０ｎｍｏｌ以上で存在する。修飾は、過ヨウ素酸塩による酸化、続く担体タンパク質への結合、および未反応アルデヒドの還元によって形成される。多糖残基の過ヨウ素酸塩誘導開裂は、シアル酸の７，８または８，９位のような近接ジオール位置において、潜在的には反復単位のヘキソース環においても、特にジオールがシス配列の場合に生じる。一部の実施形態において、修飾は、多糖ｍｇ当たり２００ｎｍｏｌ未満、多糖ｍｇ当たり１５０ｎｍｏｌ未満、多糖ｍｇ当たり１００ｎｍｏｌ未満、または多糖ｍｇ当たり８０ｎｍｏｌ未満の量で存在する。
一部の実施形態において、多糖は、第二級アミンを介して担体タンパク質に連結している。一部の実施形態において、多糖は、式ＩＩ：
ＰＲ－ＮＨ－ＣＨ２－ＰＳ（ＩＩ）
［式中、ＰＳは多糖への結合を示し、ＰＲは担体タンパク質への結合を示す］
に示されているように担体タンパク質に連結している。そのような第二級アミン連結は、例えば還元的アミノ化を介して形成することができ、ここでは、タンパク質の第一級アミン（例えば、リシン側鎖のＮ末端またはアミノ基）が多糖の活性化された基（例えば、アルデヒド）に作用して、シッフ塩基を形成し、次にこれを還元して、第二級アミンを形成する。還元は、シアノ水素化ホウ素（例えば、シアノ水素化ホウ素ナトリウム）、またはボラン（例えば、ピリジンボランまたはピコリンボラン）のような適切な還元試薬を使用して実施することができる。
一部の実施形態において、ＭｅｎＣ多糖の結合体は、未変性ＭｅｎＣ多糖に対してサイズが３倍～８倍、例えば、３倍～４倍、４倍～５倍、５倍～６倍、６倍～７倍、または７倍～８倍低減される。過ヨウ素酸塩開裂は、隣接反復単位を分離し、それによって多糖サイズの低減をもたらす。サイズは、熱および／または酸のような処理によって、例えば、過ヨウ素酸処理の前に更に低減される。超音波処理またはマイクロフルイダイゼーション（ｍｉｃｒｏｆｌｕｄｉｚａｔｉｏｎ）のような、サイズを低減する他の既知の処理を使用することもできる。
一部の実施形態において、ＭｅｎＡ多糖の結合体は、０．３～１．５、例えば、０．３～０．４、０．４～０．５、０．５～０．６、０．６～０．７、０．７～０．８、０．８～０．９、０．９～１．０、１．０～１．１、１．１～１．２、１．２～１．３、１．３～１．４、または１．４～１．５の多糖対担体タンパク質質量比を有する。一部の実施形態において、ＭｅｎＡ多糖の結合体は、０．５～１．５の多糖対担体タンパク質質量比を有する。
一部の実施形態において、ＭｅｎＣ多糖の結合体は、０．３～１．１、例えば、０．３～０．４、０．４～０．５、０．５～０．６、０．６～０．７、０．７～０．８、０．８～０．９、０．９～１．０、または１．０～１．１の多糖対担体タンパク質質量比を有する。
一部の実施形態において、ＭｅｎＷ－１３５多糖の結合体は、０．３～１．３、例えば、０．３～０．４、０．４～０．５、０．５～０．６、０．６～０．７、０．７～０．８、０．８～０．９、０．９～１．０、１．０～１．１、１．１～１．２、または１．２～１．３の多糖対担体タンパク質質量比を有する。
一部の実施形態において、ＭｅｎＹ多糖の結合体は、０．５～１．３、例えば、０．３～０．４、０．４～０．５、０．５～０．６、０．６～０．７、０．７～０．８、０．８～０．９、０．９～１．０、１．０～１．１、１．１～１．２、または１．２～１．３の多糖対担体タンパク質質量比を有する。
いくつかの実施形態において、本明細書に提供されるワクチン組成物は、２０重量％未満の遊離多糖を含む、例えば、１０重量％未満の遊離多糖を含む、５重量％未満の遊離多糖を含む、または遊離多糖を実質的に欠いている。「遊離多糖を実質的に欠いている」とは、遊離多糖のレベルが、デオキシオコール酸塩沈殿アッセイの検出限界を下回っていることを意味し、これは、タンパク質結合型多糖がデオキシオコール酸塩によって沈殿し、溶液中に残った多糖がアッセイされるものであり、例えば、Ｌｅｉら、「Ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｆｒｅｅ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｉｎ ｍｅｎｉｎｇｏｃｏｃｃａｌ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ－ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ ｔｏｘｏｉｄ
ｃｏｎｊｕｇａｔｅ ｖａｃｃｉｎｅｓ」、Ｄｅｖ Ｂｉｏｌ（Ｂａｓｅｌ）．２０００年、１０３巻：２５９～６４頁（ＰＭＩＤ：１１２１４２４６）に記載されている。
一部の実施形態において、多糖は、２～１０個の直鎖炭素、例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個の炭素を含むリンカーを介して、担体タンパク質に結合している。「直鎖炭素」は、多糖から担体タンパク質に導く鎖に沿った炭素であり、この鎖の分枝の炭素を含まない。一部の実施形態において、リンカーは、第１のカルボニルと第２のカルボニルの間にスペーサーを含み、スペーサーは、４～８個の炭素（例えば、４、５、６、７、または８個の炭素）を含み、これらは直鎖炭素である。第１のカルボニルは、カルバメートの一部である。第２のカルボニルは、アミドの一部である。第１のカルボニルは、多糖の近位および担体タンパク質から遠位にある。第２のカルボニルは、担体タンパク質の近位および多糖から遠位にある。リンカーは、アジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）のようなジヒドラジドの残基を含むことができる。一部の実施形態において、多糖は、式Ｉ：
Figure 0007329087000002
 ［式中、ＰＳは多糖への結合を示し、ＰＲは担体タンパク質への結合を示す］
のリンカーを介して担体タンパク質に結合している。個別の多糖を、１つ、または１つを超える担体タンパク質に（異なる位置で）結合することができ、その逆も同じである。
一部の実施形態において、リンカーは、１０～１００個、例えば２０～６０個の糖反復単位当たり１つのリンカーの比で結合体に存在する。これには、担体タンパク質および多糖の両方が結合しているリンカー、ならびに多糖のみに結合している、すなわち、担体タンパク質と結合を形成しなかったリンカーも含まれる。
一部の実施形態において、リンカーを介したナイセリア・メニンギティディス莢膜多糖と担体タンパク質との結合体が提供され、ここでリンカーは、多糖の１０～１００個の反復単位当たり１つのリンカー、例えば、１０～２０個の反復単位当たり１つのリンカー、２０～３０個の反復単位当たり１つのリンカー、３０～４０個の反復単位当たり１つのリンカー、４０～５０個の反復単位当たり１つのリンカー、５０～６０個の反復単位当たり１つのリンカー、または６０～７０個の反復単位当たり１つのリンカーの量で存在する。一部の実施形態において、ＭｅｎＡ多糖は、上記に記載されたリンカーを介して担体タンパク質に結合している。一部の実施形態において、ＭｅｎＣ多糖は、上記に記載されたリンカーを介して担体タンパク質に結合している。
一部の実施形態において、本開示による多糖結合体組成物は、現存の製剤と比べて改善
された安定性を有する。一部の実施形態において、安定性は、それぞれの結合型多糖に対応する遊離多糖レベルが、２℃～８℃で、例えば、２．５、３、３．５、４、または４．５年間保管された後に４０％を下回ったままであるかを試験する。一部の実施形態において、安定性は、それぞれの結合型多糖に対応する遊離多糖レベルが、２３℃～２７℃で、例えば、２、３、４、５、または６カ月間保管された後に４０％を下回ったままであるかを試験する。特定の四価ＭｅｎＡＣＹＷ多糖結合体ワクチンは、少なくとも部分的には、１つまたはそれ以上の構成結合体が液体製剤として低い安定性をもたらすので、凍結乾燥または他の保存手段を必要とする。凍結乾燥は、単一液体製剤と比べて製造および投与の両方において複雑にする。一部の実施形態において、多糖は、複数の点で担体タンパク質に結合している。複数の結合点は、一般に、結合化学の結果であり、例えば、過ヨウ素酸塩活性化、続く還元的アミノ化またはカルボニルジイミダゾールに基づいたカップリング（場合によりリンカーを用いる）であり、適切な多糖サイズおよび装填比を伴って、担体タンパク質と多糖の格子を形成することができる。そのような例示的な化学の詳細な考察については、下記の実施例を参照すること。複数の結合点を伴うタンパク質－多糖格子の形成に適合する例示的な多糖サイズおよび装填比は、少なくとも３０ｋＤａ（および上記に考察された例示的なサイズ範囲）、ならびに多糖／タンパク質比の０．３～１．５（および上記に考察された例示的な装填比範囲）である。特定の理論に束縛されるものではないが、多糖と担体タンパク質の間に複数の結合点を有する結合体を提供することは、複数の開裂（例えば、加水分解）事象が担体タンパク質から多糖フラグメントを遊離するために必要であるので、接合体の長期安定性に貢献する。この長期安定性への貢献は、液体による保管がグリコシド結合より不安定であるホスホジエステル連結を有するＭｅｎＡ多糖にとって、とりわけ関連性がある。一部の実施形態において、組成物は、担体タンパク質への複数の結合点を有するＭｅｎＡ多糖を含む。一部の実施形態において、組成物は、担体タンパク質への複数の結合点を有するＭｅｎＣ多糖を含む。一部の実施形態において、組成物は、担体タンパク質への複数の結合点を有するＭｅｎＹ多糖を含む。一部の実施形態において、組成物は、担体タンパク質への複数の結合点を有するＭｅｎＷ－１３５多糖を含む。一部の実施形態において、組成物は、ＭｅｎＡ、ＭｅｎＣ、ＭｅｎＹ、およびＭｅｎＷ－１３５多糖を含み、それぞれ担体タンパク質への複数の結合点を有する。
一部の実施形態において、本明細書に記載されているワクチン組成物は、シリンジによる液体製剤として、例えば、充填済のおよび／またはシリコーンを含まないシリンジとして提供される。一部の実施形態において、そのようなシリンジは、販売および／または流通用に商業的に包装されている。
Ｃ．結合体およびワクチンの例示的な生成方法
莢膜多糖と担体タンパク質との結合体を生成および／または精製する方法が、本明細書において提供される。
試薬（例えば、活性化剤）は、関連する工程または反応の際の任意の時点で（例えば、反応が開始されるときに）所定の量で存在する場合、工程（例えば、活性化工程）においてそのような量で存在すると考慮される。
一部の実施形態において、多糖と担体タンパク質との結合体を生成する方法が提供される。一部の実施形態において、多糖は、例えばアルカリ加水分解により脱Ｏ－アセチル化される。例えば、ＮａＯＨまたはＫＯＨのような水酸化物を、例えば、５０～１５０、６０～１４０、７０～１３０、８０～１２０、９０～１１０、または９５～１００ｍＭの濃度で使用することができる。一部の実施形態において、水酸化物は、５０、６０、７０、８０、９０、または１００ｍＭの濃度である。一部の実施形態において、水酸化物は１００ｍＭの濃度である。脱Ｏーアセチル化は、多糖を出発量と比較して４０％～７０％または５０％～６０％脱Ｏ－アセチル化するのに十分な時間および温度で実施される。一部の
実施形態において、脱Ｏ－アセチル化は、多糖を出発量と比較して３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００％脱Ｏ－アセチル化するのに十分な時間および温度で実施される。特定の実施形態において、脱Ｏ－アセチル化の後に、多糖は、多糖ｍｇ当たり０．６μｍｏｌから多糖ｍｇ当たり１．５μｍｏｌ、または多糖ｍｇ当たり０．８～１．４μｍｏｌのＯ－アセチル化度を有する。一部の実施形態において、Ｏ－アセチル化度は、多糖ｍｇ当たり０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、または２，０μｍｏｌ以上である。
一部の実施形態において、Ｏ－アセチル化度は、多糖ｍｇ当たり０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、または１．４μｍｏｌ以下である。
一部の実施形態において、多糖は、例えば、熱、酸処理、超音波処理、マイクロフルイダイゼーション、または熱と酸のようなこれらの組み合わせによって脱重合される。例えば、多糖は、４０℃～８０℃（例えば、４５℃、５０℃、５５℃、６０℃、６５℃、７０℃、または７５℃）に加熱される、および／または５、５５、６、もしくは６．５以上のような弱酸性ｐＨに曝露される。多糖は、例えば、５０、７５、１００、１２５、１５０、１７５、または２００ｋＤａのように、５０ｋＤａ～２００ｋＤａの重量平均分子量まで脱重合される。
一部の方法は、カルバメート連結を形成することができる活性化剤を使用し、その例は当該技術において知られている。カルバメート連結を形成することができる活性化剤は、２つの良好な脱離基、例えば、イミダゾール、ピリジン、ピリミジン、プリン、トリアジン、ピラジン、チアジン、チアゾールなどのようなＮ連結へテロアリールに結合しているカルボニルを有する化合物である。一部の実施形態において、活性化剤は、カルボニルジイミダゾールである。活性化剤は、多糖に対して、２０倍から５４０倍、例えば、２０倍から２５倍、２５倍から３０倍、３０倍から３５倍、３５倍から４０倍、４０倍から４５倍、または４５倍から５０倍のモル過剰量で存在することができる。
一部の実施形態において、ジヒドラジドリンカーのようなリンカーは、活性化された多糖と、例えば、多糖反復単位に対して、０．３～０．４、０．４～０．５、０．５～０．６、０．６～０．７、０．７～０．８、０．８～０．９、または０．９～１．０のように、０．３～１．０のモル比で反応する。一部の実施形態において、ジヒドラジドリンカーは、アジピン酸ジヒドラジドである。いくつかの実施形態において、多糖は、１０～１００個の反復単位当たり１つのリンカー、例えば、１０～２０個、２０～３０個、３０～４０個、４０～５０個、５０～６０個、６０～７０個、７０～８０個、８０～９０個、または９０～１００個の反復単位当たり１つのリンカーを含有するように、リンカーによって誘導体化される。一部の実施形態において、多糖は、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９ ６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００個の反復単位当たり１つのリンカーを含有するように、リンカーによって誘導体化される。
一部の実施形態において、多糖は、過ヨウ素酸塩、例えば、メタ過ヨウ素酸ナトリウム（過ヨウ素酸ナトリウムとしても知られている）のような酸化剤による処理によって活性化される。一部の実施形態において、酸化剤は多糖と反応して、アルデヒドを形成する。
一部の実施形態において、アルデヒドは、多糖の、例えば、ＭｅｎＷ－１３５およびＭｅｎＹ多糖の側鎖に形成される。一部の実施形態において、アルデヒドは、多糖主鎖を開裂することによって形成され、例えば、ＭｅｎＣ多糖では末端に形成される。酸化処理は、酸化剤をほぼ２ｍＭ、例えば、１．５～３ｍＭで使用して実施することができる。酸化処理は、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、または３．０ｍＭで実施することができる。酸化処理は、多糖ｍｇ当たり少なくとも２０ｎｍｏｌ、例えば、２０～３０、２０～４０、２０～５０、２０～６０、２０～７０、２０～８０、２０～９０、２０～１００、２０～１５０、２０～１６０、２０～１７０、２０～１８０、２０～１９０、または２０～２００ｎｍｏｌを生成するのに十分な温度および時間で実施することができる。酸化処理は、多糖ｍｇ当たり少なくとも２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、または２００ｎｍｏｌを生成するのに十分な温度および時間で実施することができる。一部の実施形態において、酸化処理は、６．５～９．５の範囲のｐＨである、または６．０、６．５、７．０、７．５、８．０、８．５、９．０、もしくは９．５のｐＨを有する。一部の実施形態において、酸化処理は、室温を下回って、例えば、２０℃、１５℃、１０℃、または５℃未満で液体溶液において実施される。
結合が還元的アミノ化を介する場合、シッフ塩基は、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（例えば、ＮａＣＮＢＨ３）、またはピリジンボランもしくはピコリンボランのようなボランのように、適切な還元剤によって還元される。
結合した後に未反応アルデヒドが存在する場合、結合体は、アルデヒドを還元またはアミン化することによって安定化される。ＮＡＢＨ４のような水素化ホウ素が、適切な還元試薬である。アンモニア、メチルアミン、グリシン、アラニンなどが、未反応アルデヒドのアミノ化に適している。
一部の実施態様において、結合体は精製される。１つの精製方法は、硫酸アンモニウムの存在下での限外濾過を伴い、米国特許第６，１４６，９０２号に記載されている。あるいは、結合体は、とりわけ、サイズ排除クロマトグラフィー、密度勾配遠心分離、疎水性相互作用クロマトグラフィー、混合モード樹脂クロマトグラフィー、または硫酸アンモニウム分画を含むいくつもの標準的な技術によって、未反応タンパク質および多糖から精製することができる。例えば、Ｐ．Ｗ．Ａｎｄｅｒｓｏｎら、（１９８６年）．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７巻：１１８１～１１８６頁を参照すること。また、Ｈ．Ｊ．Ｊｅｎｎｉｎｇｓ ａｎｄ Ｃ．Ｌｕｇｏｗｓｋｉ（１９８１年）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２７巻：１０１１～１０１８頁も参照すること。
一部の実施形態において、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）が実施される。フェニル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、またはデシル樹脂のような樹脂を使用することができる。混合物を樹脂に装填して、結合体を遊離多糖から精製することができる。一部の実施形態において、混合物は、硫酸アンモニウムのような塩を含む。一部の実施形態において、装填された混合物のｐＨは、ｐＨが中性に近づくように調整される。一部の実施形態において、装填された混合物のｐＨは、５．５～８．５、６～８、６．５～７．５、もしくは７である、またはこれらに調整される。塩は、例えば、０．５Ｍ～０．７Ｍ、０．７Ｍ～０．９Ｍ、０．９Ｍ～１．１Ｍ、１．１Ｍ～１．３Ｍ、または１．３Ｍ～１．５Ｍのように、０．５Ｍ～１．５Ｍの濃度で存在する。装填した後、樹脂を、例えば硫酸アンモニウムを含む塩溶液で洗浄することができ、ここで塩濃度は、例えば前の行で示されているようなものである。一部の実施形態において、樹脂はカラムの中にあり、洗浄液は、少なくとも２、３、４、５、または６カラム体積、例えば、７、８、９、または１０カラム体積までのものである。一部の実施形態において、樹脂は、塩溶液のバ
ッチにより、例えば、装填前の混合物の体積の少なくとも２、３、４、５、６、または７倍の体積を有する累積バッチ体積を有する、２つまたはそれ以上のバッチにより洗浄される。結合体は、より強く、例えば、高いイオン強度で樹脂と相互作用することができ、遊離多糖を洗い流すことができる。結合体を、水、例えば、ＷＦＩのような低イオン強度溶出液を使用して洗浄した後に、樹脂から溶出させることができる。あるいは、低塩溶液を使用することができ、例えば、０．２、０．１、０．０５、０．０２、０．０１、または０．００５Ｍ以下の塩濃度を有するもの（例えば、酢酸ナトリウムのような酢酸塩）である。一部の実施形態において、溶出液は、２０重量％未満の遊離多糖を含む、例えば、１０重量％未満の遊離多糖を含む、５重量％未満の遊離多糖を含む、または遊離多糖を実質的に欠いている。
一部の実施形態において、ナイセリア・メニンギティディス莢膜多糖と担体タンパク質との結合体を生成する方法は、
ａ）多糖を、カルバメート連結（例えば、カルボニルジイミダゾール）を形成することができる活性化剤で活性化し、活性化剤が、多糖の２０倍から５０倍のモル過剰量で存在すること；
ｂ）活性化剤をクエンチし（例えば、水を使用して）、活性化された多糖を、多糖反復単位に対して０．３～１．０のモル比で添加されたジヒドラジドリンカーで誘導体化し、多糖が、１０～１００個の糖反復単位当たり１つのジヒドラジドリンカーの比で誘導体化されること；
ｃ）誘導体化された多糖をカルボジイミド化学物質により担体タンパク質に結合し、多糖が、結合反応の開始時に、担体タンパク質に対して３：１～５：１の重量対重量比で存在し、それによって結合体を形成すること
を含む。
一部の実施形態において、ナイセリア・メニンギティディス莢膜多糖と担体タンパク質との結合体を生成する方法は、
ａ）多糖をアルカリ加水分解により部分的に脱Ｏ－アセチル化すること；
ｂ）多糖を過ヨウ素酸塩処理により活性化し、それによって、ジオールを、多糖１ｍｇ当たりアルデヒド少なくとも１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、または５０ｎｍｏｌの程度まで変換すること；
ｃ）活性化された多糖を還元的アミノ化により担体タンパク質に結合し、多糖が、担体タンパク質に対して０．５：１～５：１の重量対重量比で結合反応に存在し、それによって結合体を形成すること
を含む。
一部の実施形態において、ナイセリア・メニンギティディス莢膜多糖と担体タンパク質との結合体を生成する方法は、
ａ）多糖を過ヨウ素酸塩処理により活性化し、それによって、ジオールを、多糖１ｍｇ当たりアルデヒド少なくとも２５、３０、３５、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、または７５ｎｍｏｌの程度までアルデヒドに変換すること；
ｂ）活性化された多糖を還元的アミノ化により担体タンパク質に結合し、多糖が、担体タンパク質に対して１：１～５：１の重量対重量比で結合反応に存在し、それによって結合体を形成すること
を含む。
一部の実施形態において、精製方法は、結合体を疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）により精製することを更に含む。
Ａ．例示的なワクチン製剤
本発明のワクチン組成物の製剤は、当該技術において認識されている方法によって達成される。本発明のワクチン組成物／製剤は、１つまたはそれ以上のアジュバントを含有することもできる。アジュバントには、アルミニウムアジュバント、フロイトアジュバント、ＢＡＹ、ＤＣ－ｃｈｏｌ、ｐｃｐｐ、モノホスホリルリピドＡ、ＣｐＧ、ＱＳ－２１、コレラ毒素、およびホルミルメチオニルペプチドが例として限定されることなく含まれる。例えば、Ｖａｃｃｉｎｅ Ｄｅｓｉｇｎ ｔｈｅ Ｓｕｂｕｎｉｔ ａｎｄ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ａｐｐｒｏａｃｈ、１９９５年（Ｍ．Ｆ．Ｐｏｗｅｌｌ ａｎｄ Ｍ．Ｊ．Ｎｅｗｍａｎ編、Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．）を参照すること。存在する場合、アジュバントは、水酸化アルミニウムまたはリン酸アルミニウムのようなアルミニウムアジュバントである。一部の実施形態において、ワクチン組成物および製剤、例えば、ＭｅｎＡＣＷＹ－ＴＴワクチンは、アジュバントを含まない。一部の実施形態において、ワクチン組成物および製剤、例えば、ＭｅｎＡＣＷＹ－ＴＴワクチンは、アジュバントを含む。
本発明のワクチン組成物および製剤（例えば、結合体ワクチン／ＭｅｎＡＣＷＹ－ＴＴワクチン）を単回用量により、または連続して（すなわち、「１つのブースター」または「複数のブースター」と共に）、またはナイセリア・メニンギティディス莢膜糖結合体ワクチンのような異なるナイセリア・メニンギティディスワクチンの早期投与後にブースターとして、投与することができる。例えば、小児は、単回用量を人生の初期に受けることができ、１０年後までにブースター用量が投与され、これは、小児期疾患を予防するために他のワクチンにおいて現在推奨されているものである。一部の実施形態において、本明細書に記載されているワクチンの用量は、ナイセリア・メニンギティディス莢膜糖結合体ワクチンが予め投与された２～４カ月、４～６カ月、６～１２カ月、１年～２年、２年～３年、３年～４年、４年～５年、５年～６年、６年～７年、７年～８年、８年～９年、または９年～１０年後のように、ナイセリア・メニンギティディス莢膜糖結合体ワクチンが予め投与された２カ月～１０年後に投与される。
ブースター用量は、感作されたＢ細胞から、すなわち既往応答によって抗体を生じる。換言すると、ワクチン組成物および製剤、例えば、ＭｅｎＡＣＷＹ－ＴＴワクチンは、若年および高齢者集団において高い一次機能性抗体応答を（すなわち、ワクチンの単回投与後に）誘発し、既往応答を（すなわち、ブースター投与後に）誘発することができ、ワクチン組成物および製剤、例えば、本発明のＭｅｎＡＣＷＹ－ＴＴワクチンによるり誘発された防御免疫応答が長続きすることを実証している。
一部の実施形態において、投与は筋肉内注射である。一部の実施形態において、投与は、皮下、皮内、腹腔内、非経口、または静脈内である。組成物および製剤を、酢酸ナトリウム緩衝食塩水、滅菌水、生理学的食塩水などのような、適切な担体、希釈剤、または賦形剤と混合してもよい。組成物／製剤を凍結乾燥することもできる。組成物／製剤は、湿潤または乳化剤、ｐＨ緩衝剤、ゲル化または粘性増強添加剤、防腐剤などのような補助物質を、投与経路および望ましい調合剤に応じて含有することができる。「ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥ」、１７版、１９８５年のような標準的な教科書を、過度な実験を行うことなく適切な調合剤を調製するために参考にすることができ、参照により本明細書に組み入れる。
一部の実施形態において、ワクチン組成物／製剤は、液体調合剤である。一部の実施形態において、ワクチン組成物／製剤、例えば、ＭｅｎＡＣＷＹ－ＴＴワクチンは、動物、小児、特に幼児、高齢者、例えば、５５、６０、６５、７０、７５、８０、または９０歳を超える高齢者に注射により投与される液体組成物である。
適切な担体および他の添加剤の選択肢は、正確な投与経路および特定の剤形の性質に応
じて決まる。
一実施形態において、ワクチン組成物および製剤、例えば、ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴワクチンは、薬学的に許容される防腐剤、担体、緩衝賦形剤などを含む。一実施形態において、薬学的に許容される防腐剤、担体、または賦形剤は、組成物の貯蔵寿命を増加または延長する。一部の実施形態おいて、ワクチンは緩衝液を含む。一部の実施形態において、緩衝液は酢酸ナトリウムである。一部の実施形態において、緩衝液はリン酸ナトリウムである。一部の実施形態において、緩衝液は、１０ｍＭ～１００ｍＭ、例えば、１０ｍＭ～７０ｍＭ、１５ｍＭ～４５ｍＭ、２０ｍＭ～４０ｍＭ、４０ｍＭ～６０ｍＭ、または６０ｍＭ～１００ｍＭの範囲の濃度で存在する。一部の実施形態において、緩衝液は、４．５～７．５、４．５～７．０、４．５～６．５、４．５～６．０、４．５～５．５、または４．５～５．０のｐＨを有する。一部の実施態様において、緩衝液は、５．５～７．０、例えば、５．７５～６．２５または６．２５～６．７５の範囲のｐＨを有する。一部の実施形態において、緩衝液は、５．５～６．５のｐＨを有する。一部の実施形態において、緩衝液は、５または６のｐＨを有する。一部の実施態様において、ワクチン組成物は、薬学的に許容される塩を含む。一部の実施形態において、ワクチン組成物／製剤は、食塩水を含む。一部の実施形態において、食塩水は、ＮａＣｌを含む、またはＮａＣｌである。ＮａＣｌは、０．５％～０．８５％ｗ／ｖ、または０．６％～０．８％ｗ／ｖ、または０．６ｗ／ｖ％、０．６７ｗ／ｖ％、０．７５ｗ／ｖ％、０．８ｗ／ｖ％、０．８５ｗ／ｖ％、もしくは０．９％ｗ／ｖのように、０．４５％～０．９ｗ／ｖの濃度で存在することができる。
一実施形態において、組成物におけるそれぞれの構成成分は、Ｎ．メニンギティディス多糖－タンパク質担体結合体に対して化学的に不活性である
一部の実施形態において、ワクチン組成物および製剤、例えば、ＭｅｎＡＣＷＹ－ＴＴワクチンは、単一単位用量として製剤化される。一部の実施形態において、単一単位用量は、それぞれ６μｇ～１５μｇのＭｅｎＡ、ＭｅｎＣ、ＭｅｎＷ－１３５、およびＭｅｎＹ多糖を含む。一部の実施形態において、単一単位用量は、それぞれ４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５μｇのＭｅｎＡ、ＭｅｎＣ、ＭｅｎＷ－１３５、およびＭｅｎＹ多糖を含む。一部の実施形態において、担体タンパク質は、単一単位用量において５０μｇ～８０μｇの量で存在する。一部の実施形態において、担体タンパク質は、単一単位用量において４５、５０、６６、６０、６５、７０、７５、または８０μｇの量で存在する。
一部の実施形態において、ワクチン組成物および製剤、例えば、ＭｅｎＡＣＷＹ－ＴＴワクチンは、酢酸ナトリウム、酢酸ナトリウム緩衝生理食塩水、または類似した緩衝液により０．５ｍＬの用量で製剤化される。一部の実施形態において、０．５ｍＬ用量は、５０、５５、６０、６５、７０、８０、８５、または９０μｇの破傷風トキソイドタンパク質に結合した、それぞれ２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５μｇの血清型Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ－１３５を含む。一部の実施形態において、この０．５ｍＬ用量は、筋肉内に投与される。
Ｂ．例示的な方法および使用
一部の実施形態において、対象にナイセリア・メニンギティディスのワクチン接種をする方法には、ワクチン組成物または製剤、例えば、本明細書に記載されているＭｅｎＡＣＷＹ－ＴＴワクチンの投与を含むことが包含される。一部の実施形態において、本発明は、対象をナイセリア・メニンギティディスに対して免疫化するための、本明細書に記載されているワクチン組成物または製剤の使用を含む。一部の実施形態では、対象をナイセリア・メニンギティディスに対して免疫化する医薬の製造における、本明細書に記載されて
いるワクチン組成物または製剤の使用が包含される。
一部の実施形態において、対象は、ワクチンが接種されたとき１２カ月齢以上である。一部の実施形態において、対象は、ワクチンが接種されたとき高齢者である。一部の実施形態において、高齢者は、ワクチンが接種されたとき、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、または１００歳である。
一部の実施形態において、対象は、ワクチンが接種されたとき、６週齢から３歳である。一部の実施形態において、対象は、ワクチンが接種されたとき、４、５、６、７、８、９、または１０週齢である。一部の実施形態において、対象は、ワクチンが接種されたとき、２カ月齢、４可決齢、６カ月齢、１２カ月齢、および／または１５カ月齢である。一部の実施態様において、対象には、年齢に基づいてワクチンが接種される。一部の実施形態において、対象には、３用量のワクチン組成物または製剤、例えば、本明細書に記載されているＭｅｎＡＣＷＹ－ＴＴワクチンが、６～８、１０～１２、および１４～１６週間にわたって与えられる。
一部の実施形態において、対象には、人生の全体を通して１回を超えてワクチンが接種される。一部の実施形態において、対象は、１回目の用量の３年以上後にブースター用量を受ける。一部の実施形態において、対象は、１回目の用量の４年以上後にブースター用量を受ける。一部の実施形態において、対象は、最初の誕生日の前に３回まで、最初の誕生日の頃または後に１回ワクチン接種を受ける。一部の実施形態において、１回目のワクチン接種は、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０週齢の時である。一部の実施形態において、１回目または２回目のワクチン接種は、３、４、または５カ月齢の時である。一部の実施形態において、１回目、２回目、または３回目のワクチン接種は、５、６、または７カ月齢の時である。一部の実施形態において、１回目、２回目、３回目、または４回目のワクチン接種は、１１、１２、１３、１４、または１５カ月齢の時である。一部の実施形態において、１回目、２回目、３回目、または４回目のワクチン接種は、１４、１５、１６、１７、または１８カ月齢の時である。一部の実施形態において、１回目のワクチン接種は、６、７、８、または９カ月齢の時であり、２回目のワクチン接種は、２４カ月齢までに与えられる。一部の実施形態において、対象には、以前にナイセリア・メニンギティディスのＭｅｎＡＣＷＹ－ＴＴまたは他のワクチンを受けていたかにかかわりなく、高齢者としてワクチンが接種される。一部の実施形態において、対象は、ワクチン組成物または製剤、例えば、本明細書に記載されているＭｅｎＡＣＷＹ－ＴＴワクチンでワクチン接種されたとき、５０歳以上、５５歳以上、６０歳以上、または６５歳以上である。
一部の実施形態において、ワクチン組成物または製剤、例えば、本明細書に記載されているＭｅｎＡＣＷＹ－ＴＴワクチンは、他のルーチンワクチンと同時に投与される。一部の実施形態において、ルーチンワクチンには、例えば、Ｐｅｎｔａｃｅｌ（登録商標）（ＤＴａＰ５－ＩＰＶ／Ｈｉｂ）、Ｐｒｅｖｎａｒ（登録商標）（ＰＣＶ７）、Ｐｒｅｖｎａｒ １３（登録商標）（ＰＣＶ１３）、ＲｏｔａＴｅｑ（登録商標）（ＲＶ５）、ＲＯＴＡＲＩＸ（登録商標）（ＲＶ１）、ＥＮＧＥＲＩＸ－Ｂ（登録商標）（ＨｅｐＢ）、ＲＥＣＯＭＢＩＶＡＸ ＨＢ（登録商標）（ＨｅｐＢ）、Ｍ－Ｍ－Ｒ（登録商標）（ＭＭＲ）、Ｍ－Ｍ－Ｒ（登録商標）ＩＩ（ＭＭＲ）、およびＶＡＲＩＶＡＸ（登録商標）（Ｖ）ワクチンが含まれる。一部の実施形態において、ルーチンワクチンには、例えば、Ａｄａｃｅｌ（登録商標）（Ｔｄａｐ５）およびＧａｒｄａｓｉｌ（登録商標）（ＨＰＶ４）が含まれる。一部の実施形態において、ルーチンワクチンには、ＤＴａＰ５－ＩＰＶ／ＨｉｂＨｅｐＢが含まれる。他のルーチンワクチンが当該技術において知られており、ワクチン組成物または製剤、例えば、本明細書に記載されているＭｅｎＡＣＷＹ－ＴＴワクチンと同時に、その前、または後に対象に提供される。
以下は、本明細書に開示されている方法、使用、および組成物の実施例である。上記に提供された一般的および詳細な記載を考慮して、様々な他の実施例を実施できることが理解される。以下の実施例は、本教示を例示する目的で提示されており、本開示または特許請求の範囲の範囲を制限するものとして解釈されるべきではない。
１．群Ａ結合体の調製
実施例１Ａ
群Ａ精製済莢膜多糖を、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中の１０重量％の塩化テトラブチルアンモニウム（ＴＢＡＣ）に溶解して、標的濃度の８ｍｇ／ｍＬにした。溶液を、多糖が完全に溶解するまで１９～２５℃で混合した。溶解した多糖を、Ｎ－アセチルマンノサミンホスフェート反復単位（ＰＳ ＲＵ）１つ当たり標的濃度の３５～４５モル過剰量のカルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）の添加によって活性化し、１９～２５℃で５０～７０分間混合した（図１Ｃ、第１の反応；生成物は図１Ｅに示されている）。多糖溶液をＷＦＩ（５０％ｖ／ｖ）で１：２に希釈して、活性化された多糖の濃度を、５０％のＤＭＳＯ中４ｍｇ／ｍｌに調整した。溶液をアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）の添加（ＰＲ ＲＵの１～３ｍｏｌ当たり１．０ｍｏｌのＡＤＨ）により誘導体化し（図１Ｃ、第２の反応；生成物は図１Ｆに示されている）、室温で一晩混合した。反応から、１０～１００個の多糖反復単位当たり１つの結合ＡＤＨ、例えば、２０、３０、４０、５０、または６０個の多糖反復単位当たり１つの結合ＡＤＨとなるような誘導体化の量を得た。活性化された多糖を、１０ｋＤａのＭＷＣＯ ＰＥＳ膜の限外濾過により濃縮し、次に生理学的食塩水の１２～１８体積交換によりダイアフィルトレーション（ｄｉａｆｉｌｔｅｒ）した。標的濃度は、およそ３０ｍｇ／ｍＬであった。活性化された多糖を濾過し、１～５℃で保管した。
精製された破傷風トキソイドタンパク質（ＴＴ）を０．２ミクロン膜で濾過し、１～５℃で保管した。誘導体化された多糖および濃縮した破傷風タンパク質を、０．５：１、１：１、２：１、３：１、４：１、または５：１の比で一緒に混合した。１．０ＭのＭＥＳ緩衝液、ｐＨ５．７中の交差架橋剤１－エチル－３－（ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＡＣ）の１００ｍｇ／ｍＬのアリコートを、最終濃度のＥＤＡＣが１０ｍｇ／ｍＬおよびＭＥＳが１００ｍＭとなるように、多糖－タンパク質混合物に加えた。食塩水を加えて、標的濃度の１６ｍｇ／ｍＬの多糖および４ｍｇ／ｍＬのＴＴを得た。最終ｐＨを５．５～５．９に調整し、反応を１５．６～２３．９℃で１６～２４時間混合した。この時間の間に、ＥＤＡＣおよびＴＴは反応して、Ｏ－アシルイソ尿素中間体（図１Ｂ）を形成した。次にＯ－アシルイソ尿素中間体および誘導体化された多糖は、結合体を形成した（図１Ｇ；生成物は図１Ｈおよび図１Ａに示されている）。
硫酸アンモニウムを結合体反応に加えて、１Ｍの硫酸アンモニウム濃度を生じた。ｐＨを７に調整し、溶解するまで室温で混合した。結合体反応混合物を、フェニル樹脂を充填したＨＩＣカラムに適用した。非結合多糖を、２～７カラム体積の１Ｍ硫酸アンモニウム溶液で溶出した。結合体をＷＦＩで溶出した。本および続く実施例において、結合体のＨＩＣ精製は、２０質量％未満の多糖が遊離（非結合）多糖である生成物をもたらすことができた。結合体溶出液を、１００ｋＤａのＭＷＣＯ ＰＥＳ膜を使用して、５０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ６．０の１０体積交換によってダイアフィルトレーションした。精製された結合体の最終濾過を０．２ミクロン膜の使用によって実施し、結合体を１～５℃で保管した。
実施例１Ｂ
群Ａ精製済莢膜多糖を、塩化テトラブチルアンモニウム（ＴＢＡＣ）／ジメチルスルホ
キシド（ＤＭＳＯ）に重量に基づいて溶解して、標的濃度の６ｍｇ／ｍＬにした。溶液を１９～２５℃で１６～２４時間混合した。溶解した多糖を、Ｎ－アセチルマンノサミンホスフェート反復単位（ＰＳ ＲＵ）１つ当たり標的濃度の３５～４５モル過剰量のカルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）の添加によって活性化し、１９～２５℃で５０～７０分間混合した（図１Ｃ、第１の反応；生成物は図１Ｅに示されている）。多糖溶液を、活性化された多糖が、５０％のＤＭＳＯ中３ｍｇ／ｍｌの標的濃度になるように、ＷＦＩ（４５～５５％ｖ／ｖ）で１：２に希釈した。
精製した破傷風トキソイドタンパク質（ＴＴ）を０．２ミクロン膜で濾過し、１～５℃で保管した。破傷風タンパク質を最終濃度の１ｍｇ／ｍＬで加えた。この時間の間に、活性化された多糖およびＴＴが反応して、カルバメート連結を有する結合体を形成した（図１Ｄ）。反応を室温で一晩進行させた。
硫酸アンモニウムを結合体反応に加えて、１Ｍの硫酸アンモニウム濃度を生じた。ｐＨを７に調整し、溶解するまで室温で混合した。 結合体反応混合物を、フェニル樹脂を充填したＨＩＣカラムに適用した。非結合多糖を、２～７カラム体積の１Ｍ硫酸アンモニウム溶液で溶出した。結合体をＷＦＩで溶出した。本および続く実施例において、結合体のＨＩＣ精製は、２０質量％未満の多糖が遊離（非結合）多糖である生成物をもたらすことができた。結合体溶出液を、１００ｋＤａのＭＷＣＯ ＰＥＳ膜を使用して、５０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ６．０の１０体積交換によってダイアフィルトレーションした。精製された結合体の最終濾過を０．２ミクロン膜の使用によって実施し、結合体を１～５℃で保管した。
２．群Ｃ結合体の調製
実施例２Ａ
群Ｃ精製済莢膜多糖を生理学的食塩水に溶解して、標的濃度の１０ｍｇ／ｍＬにした。溶液を、溶解するまで混合した。多糖溶液の温度を３７℃に調整し、水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）を加えて、標的最終濃度の１００ｍＭのＮａＯＨにした。溶液を混合し、２０分間インキュベートして、最終結合体中の多糖が多糖ｍｇ当たりＯＡｃ０．８～１．４μｍｏｌのＯ－アセチル化レベルおよび／または出発材料のＯ－アセチル化レベルに対して５０％～６０％の低減を有するような、部分的な脱Ｏ－アセチル化をもたらした。未変性ＭｅｎＣ多糖は、単糖反復単位当たり２つの潜在的なＯ－アセチル化位置を有し、一般に、全体的なＯ－アセチル化レベルの４０～４５％を全ての可能なＯ－アセチル化部位において有する。出発材料に対するＯ－アセチル基の５０％低減は、２５％未満の全体的な（全ての可能なＯ－アセチル化部位の）Ｏ－アセチル化レベルをもたらす。
ｐＨを６に調整し、温度を１５℃に下げた。溶解した多糖を、標的濃度が２ｍＭになるように、メタ過ヨウ素酸ナトリウムの添加により活性化した（図２Ｂ）。ｐＨを６に調整し、溶液を１５℃で混合した。過ヨウ素酸塩が酸化して、隣接ジオール位置を切断し、アルデヒド末端鎖をもたらした。反応を、ＨＰＳＥＣで決定して平均分子サイズが５０，０００～１００，０００ダルトンに低減されるまで混合した。還元活性（アルデヒドの量を反映する）は、多糖ｍｇ当たり４０～１００ｎｍｏｌであった。反応を、多糖１グラム当たり０．５ｍＬのグリセロールの量のグリセロールを添加してクエンチし、最低５分間混合した。多糖を、最初に５ｋＤａのＭＷＣＯ再生セルロースフィルターを使用する限外濾過により濃縮し、次に５０ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ６．０の８～１２体積交換によりダイアフィルトレーションした。材料を更に濃縮して、標的濃度の５０ｍｇ／ｍＬにした。脱重合／活性化された多糖を濾過し、保管した。
精製された破傷風トキソイドタンパク質を、１０ｋＤａのＭＷＣＯ ＰＥＳ膜で濃縮して標的最終濃度の１００ｍｇ／ｍＬまでにして、次に０．２ミクロンフィルターに通した
。濾過されたタンパク質溶液を１～５℃で保管した。脱重合／活性化された多糖および濃縮した破傷風タンパク質を、０．５：１、１：１、２：１、３：１、４：１、または５：１（多糖：タンパク質）の質量比で一緒に混合した。２．０Ｍのリン酸塩緩衝液中のシアノ水素化ホウ素ナトリウムの１００ｍｇ／ｍＬのアリコートを、シアノ水素化ホウ素ナトリウムが１０ｍｇ／ｍＬになり、リン酸塩緩衝液が２００ｍＭ、ｐＨ８．０になるように、多糖－タンパク質混合物に加えた。食塩水を加えて、濃度を調整して、例えば、多糖の標的である１５～５０ｍｇ／ｍＬにした。反応（図２Ｃ）を３７℃で１６～３０時間混合した。反応を、６ｍＭのリン酸塩緩衝食塩水（ＰＢＳ）で１：２に希釈した。６ｍＭのＰＢＳ中の水素化ホウ素ナトリウムの１００ｍｇ／ｍＬのアリコートを反応混合物に加えて、標的である反応体積１ｍＬ当たり０．５ｍｇの水素化ホウ素ナトリウムを得た。反応を室温で最低１５分間混合した。水素化ホウ素ナトリウムは、未反応アルデヒドをアルコールに還元することによってキャップして、第一級ヒドロキシルを７位に有する末端非連結糖をもたらした、または還元末端は（２－ヒドロキシ）エトキシで修飾された。生成物（末端糖は示されていない）を、図２Ｄおよび図２Ａに例示する。結合体溶液を、５０ｋＤａのＭＷＣＯ ＰＥＳ膜による６ｍＭのＰＢＳの１０体積交換によってダイアフィルトレーションした。溶液を１～５℃で保管した。
硫酸アンモニウムを結合体反応に加えて、１Ｍの硫酸アンモニウム濃度を生じた。ｐＨを７に調整し、溶解するまで室温で混合した。結合体反応混合物を、フェニル樹脂を充填したＨＩＣカラムに適用した。非結合多糖を、２～７カラム体積の１Ｍ硫酸アンモニウム溶液で溶出した。結合体をＷＦＩで溶出した。本および続く実施例において、結合体のＨＩＣ精製は、２０質量％未満の多糖が遊離（非結合）多糖である生成物をもたらすことができた。結合体溶出液を、１００ｋＤａのＭＷＣＯ ＰＥＳ膜を使用して、５０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ６．０の１０体積交換によってダイアフィルトレーションした。精製された結合体の最終濾過を０．２ミクロン膜の使用によって実施し、結合体を１～５℃で保管した。
実施例２Ｂ
群Ｃ精製済莢膜多糖を生理学的食塩水に溶解して、標的濃度の１０ｍｇ／ｍＬにした。溶液を、溶解するまで混合した。ｐＨを６．０に調整し、温度を１５℃に変えた。溶解した多糖を、標的濃度が２ｍＭになるように、メタ過ヨウ素酸ナトリウムの添加により活性化した（図２Ｂ）。反応を、ＨＰＳＥＣで決定して平均分子サイズが５０，０００～１００，０００ダルトンになるまで混合した。反応を、多糖１グラム当たり０．５ｍＬのグリセロールの量のグリセロールを添加してクエンチし、最低５分間混合した。多糖を、最初に５ｋＤａのＭＷＣＯ再生セルロースフィルターを使用する限外濾過により濃縮し、次に５０ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ６．０の８～１２体積交換によりダイアフィルトレーションした。材料を更に濃縮して、標的濃度の５０ｍｇ／ｍＬにした。脱重合／活性化された多糖を濾過し、１～５℃で保管した。
精製された破傷風トキソイドタンパク質を、１０ｋＤａのＭＷＣＯ ＰＥＳ膜で濃縮して標的最終濃度の１００ｍｇ／ｍＬまでにして、次に０．２ミクロンフィルターに通した。濾過されたタンパク質溶液を１～５℃で保管した。脱重合／活性化された多糖および濃縮した破傷風タンパク質を、０．５：１、１：１、２：１、３：１、４：１、または５：１（多糖：タンパク質）のモル比で一緒に混合した。２．０Ｍのリン酸塩緩衝液中のシアノ水素化ホウ素ナトリウムの１００ｍｇ／ｍＬのアリコートを、シアノ水素化ホウ素ナトリウムが１０ｍｇ／ｍＬになり、リン酸塩緩衝液が２００ｍＭ、ｐＨ８．０になるように、多糖－タンパク質混合物に加えた。食塩水を加えて、濃度を調整して、例えば、多糖の標的である１５～５０ｍｇ／ｍＬにした。反応（図２Ｃ）を３７℃で１６～３０時間混合した。反応を、６ｍＭのリン酸塩緩衝食塩水（ＰＢＳ）で１：２に希釈した。６ｍＭのＰＢＳ中の水素化ホウ素ナトリウムの１００ｍｇ／ｍＬのアリコートを反応混合物に加えて、標的である反応体積１ｍＬ当たり０．５ｍｇの水素化ホウ素ナトリウムを得た。反応を室温で最低１５分間混合した。水素化ホウ素ナトリウムは、未反応アルデヒドをアルコールに還元することによってキャップして、第一級ヒドロキシルを７位に有する末端非連結糖をもたらした、または還元末端は（２－ヒドロキシ）エトキシで修飾された。生成物（末端糖は示されていない）を、図２Ｄおよび図２Ａに例示する。結合体溶液を、５０ｋＤａのＭＷＣＯ ＰＥＳ膜による６ｍＭＰＢＳの１０体積交換によってダイアフィルトレーションした。溶液を１～５℃で保管した。
硫酸アンモニウムを結合体反応に加えて、１Ｍの硫酸アンモニウム濃度を生じた。ｐＨを７に調整し、溶解するまで室温で混合した。結合体反応混合物を、フェニル樹脂を充填したＨＩＣカラムに適用した。非結合多糖を、２～７カラム体積の１Ｍ硫酸アンモニウム溶液で溶出した。結合体をＷＦＩで溶出した。本および続く実施例において、結合体のＨＩＣ精製は、２０質量％未満の多糖が遊離（非結合）多糖である生成物をもたらすことができた。結合体溶出液を、１００ｋＤａのＭＷＣＯ ＰＥＳ膜を使用して、５０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ６．０の１０体積交換によってダイアフィルトレーションした。精製された結合体の最終濾過を０．２ミクロン膜の使用によって実施し、結合体を１～５℃で保管した。
３．群Ｗ－１３５およびＹ結合体の調製
群Ｗ－１３５精製済莢膜多糖を酢酸ナトリウム緩衝液に溶解して、標的濃度の１０ｍｇ／ｍＬにした。溶液を、溶解するまで混合した。多糖溶液を、ジャケット付き熱交換器の使用により５０～７０℃に加熱した。ｐＨを４．５に調整した。反応（図４Ａ、工程１）を、ＨＰＳＥＣで測定して平均分子サイズが１５０，０００ダルトンになるまで混合した。反応混合物を１～５℃に冷却した。メタ過ヨウ素酸ナトリウムを、標的メタ過ヨウ素酸ナトリウム濃度が２ｍＭになるように多糖溶液に加えた（図４Ａ、工程２）。ｐＨを６．０に調整し、溶液を０～５℃で６０分間混合した。過ヨウ素酸塩が酸化し、隣接ジオール位置で開裂して、アルデヒドを、例えば、図４Ａに示されているようにシアル酸残基の７位にもたらした。還元活性（アルデヒドの量を反映する）は、多糖ｍｇ当たり６０～１５０ｎｍｏｌであった。反応を、多糖１グラム当たり０．５ｍのグリセロールを添加してクエンチし、最低５分間混合した。多糖を、１０ｋＤａのＭＷＣＯ再生セルロースフィルターを使用する限外濾過により濃縮し、次に５０ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ６．０の１０体積交換によりダイアフィルトレーションした。材料を更に濃縮して、標的濃度の５０ｍｇ／ｍＬにした。脱重合／活性化された多糖を濾過し、１～５℃で保管した。
精製された破傷風トキソイドタンパク質を、１０ｋＤａのＭＷＣＯ ＰＥＳ膜で濃縮して標的最終濃度の１００ｍｇ／ｍＬまでにして、次に０．２ミクロンフィルターに通し、１～５℃で保管した。脱重合／活性化された多糖および濃縮した破傷風タンパク質を、０．５：１、１：１、２：１、３：１、４：１、または５：１（多糖：タンパク質）の質量比で一緒に混合した。２．０Ｍのリン酸塩緩衝液中のシアノ水素化ホウ素ナトリウムの１００ｍｇ／ｍＬのアリコートを、シアノ水素化ホウ素ナトリウムが１０ｍｇ／ｍＬになり、リン酸塩緩衝液が２００ｍＭ、ｐＨ９．０になるように、多糖－タンパク質混合物に加えた。食塩水を加えて、標的濃度を調整して、例えば、多糖の標的である１５～５０ｍｇ／ｍＬにした。反応（図４Ｂ）を室温で一晩混合した。
反応を、６ｍＭのリン酸塩緩衝食塩水（ＰＢＳ）で１：２に希釈した。６ｍＭのＰＢＳ中の水素化ホウ素ナトリウムの１００ｍｇ／ｍＬのアリコートを反応混合物に加えて、標的である反応体積１ｍＬ当たり０．５ｍｇの水素化ホウ素ナトリウムを得た。反応を室温で最低１５分間混合した。水素化ホウ素ナトリウムは、未反応アルデヒドをアルコールに還元することによってキャップした。生成物は、図４Ｃおよび図３に示されている。
硫酸アンモニウムを結合体反応に加えて、１Ｍの硫酸アンモニウム濃度を生じた。ｐＨを７に調整し、溶解するまで室温で混合した。結合体反応混合物を、フェニル樹脂を充填したＨＩＣカラムに適用した。非結合多糖を、２～７カラム体積の１Ｍ硫酸アンモニウム溶液で溶出した。結合体をＷＦＩで溶出した。結合体溶出液を、１００ｋＤａのＭＷＣＯ
ＰＥＳ膜を使用して、５０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ６．０の１０体積交換によってダイアフィルトレーションした。精製された結合体の最終濾過を０．２ミクロン膜の使用によって実施し、結合体を１～５℃で保管した。同じ方法を、群Ｙ精製済莢膜多糖に使用することができる。
４．四価ワクチンの製剤化
実施例４Ａ
四価ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴ結合体ワクチンを、実施例１Ａ、２Ａ、および３～４に記載されたように調製した４つの一価ＰＳ－タンパク質結合体から製剤化し、酢酸ナトリウム緩衝食塩水で希釈して、最終濃度の１０μｇのＰＳ／血清型／０．５ｍＬにした。換言すると、０．５ｍＬ用量のＭｅｎＡＣＹＷ結合体ワクチンは、合計４５～８０μｇの破傷風トキソイドタンパク質に結合した、それぞれ１０μｇの髄膜炎菌ＰＳ血清型Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ－１３５を含有した（破傷風トキソイドタンパク質の実際の量は、この製剤化に使用された一価バルク濃縮物ロットにおける特定のＰＳとタンパク質との比によって決まる）。
ＭｅｎＡＣＹＷ結合体ワクチンの各０．５ｍＬ用量を、３０ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝ｐＨ６．０食塩水で製剤化した。
実施例４Ｂ
四価ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴ結合体ワクチンを、実施例１Ａ、２Ｂ、および３～４に記載されたように調製した４つの一価ＰＳ－タンパク質結合体から製剤化し、酢酸ナトリウム緩衝食塩水で希釈して、最終濃度の１０μｇのＰＳ／血清型／０．５ｍＬにした。換言すると、０．５ｍＬ用量のＭｅｎＡＣＹＷ結合体ワクチンは、合計４５～８０μｇの破傷風トキソイドタンパク質に結合した、それぞれ１０μｇの髄膜炎菌ＰＳ血清型Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ－１３５を含有した（破傷風トキソイドタンパク質の実際の量は、この製剤化に使用された一価バルク濃縮物ロットにおける特定のＰＳとタンパク質との比によって決まる）。
ＭｅｎＡＣＹＷ結合体ワクチンの各０．５ｍＬ用量を、３０ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝ｐＨ６．０食塩水で製剤化した。
実施例４Ｃ
四価ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴ結合体ワクチンを、実施例１Ｂ、２Ｂ、および３～４に記載されたように調製した４つの一価ＰＳ－タンパク質結合体から製剤化し、酢酸ナトリウム緩衝食塩水で希釈して、最終濃度の１０μｇのＰＳ／血清型／０．５ｍＬにした。換言すると、０．５ｍＬ用量のＭｅｎＡＣＹＷ結合体ワクチンは、合計４５～８０μｇの破傷風トキソイドタンパク質に結合した、それぞれ１０μｇの髄膜炎菌ＰＳ血清型Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ－１３５を含有した（破傷風トキソイドタンパク質の実際の量は、この製剤化に使用された一価バルク濃縮物ロットにおける特定のＰＳとタンパク質との比によって決まる）。
ＭｅｎＡＣＹＷ結合体ワクチンの各０．５ｍＬ用量を、３０ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝ｐＨ６．０食塩水で製剤化した。
５．例示の結合体の特性および免疫原性
ＭｅｎＡ結合体を、破傷風トキソイドとの結合反応に使用された多糖濃度が１２ｍｇ／ｍｌであった以外は、ＡＤＨリンカーを用いることなく上記に記載されたように一般的に調製した。結合体は、０．３の多糖／タンパク質（ＰＳ／ＰＲ）質量比を有した。Ｏ－アセチル化レベルを決定すると、多糖ｍｇ当たり３．０μｍｏｌであった。
ＭｅｎＡ結合体を、破傷風トキソイドとの結合反応に使用された多糖濃度が１２ｍｇ／ｍｌであった以外は、ＡＤＨリンカーを用いて上記に記載されたように一般的に調製した。結合体は、１．０のＰＳ／ＰＲ質量比を有した。Ｏ－アセチル化レベルを決定すると、多糖ｍｇ当たり２．８μｍｏｌであった。ＡＤＨリンカーを有するＭｅｎＡ結合体のいくつかの追加のバッチを調製し、ここで破傷風トキソイドとの結合反応に使用される多糖濃度は、１２ｍｇ／ｍｌまたは１６ｍｇ／ｍｌのいずれかであった。これらのバッチのＰＳ／ＰＲ質量比の測定値は、１．０、１．１、１．２、および１．３であり、多糖ｍｇ当たりのμｍｏｌでのＯ－アセチル化レベルの測定値は、２．５、２．８、２．９、および３．０であった。同じ値が２回以上観察された。
ＭｅｎＡ結合体のそれぞれのバッチは、ＭｅｎＡワクチン未感作（ｖａｃｃｉｎｅ－ｎａｉｖｅ）のヒト、マウス、および／またはモルモット対象に四価製剤を投与したとき、免疫原性であること（すなわち、処理前試料および／または未免疫化対照と比べて、少なくとも実質的および統計的に有意なレシピエントの割合において、血清殺細菌アッセイおよび／またはＥＬＩＳＡにより測定すると、抗ＭｅｎＡ抗体を誘発したこと）が確認された。
ＭｅｎＣ結合体を上記に記載されたように一般的に調製した。結合体は、０．６の多糖／タンパク質（ＰＳ／ＰＲ）質量比を有した。Ｏ－アセチル化レベルを決定すると、多糖ｍｇ当たり２．４μｍｏｌであった。ＭｅｎＣ結合体のいくつかの追加のバッチを調製した。これらのバッチのＰＳ／ＰＲ質量比の測定値は、０．４、０．６、および０．７であり、多糖ｍｇ当たりのμｍｏｌでのＯ－アセチル化レベルの測定値は、０．８、１．２、１．３、１，４、１．５、２．２、および２．３であった。同じ値が２回以上観察された。
ＭｅｎＣ結合体のそれぞれのバッチは、ＭｅｎＣワクチン未感作のヒト、マウス、および／またはモルモット対象に四価製剤を投与したとき、免疫原性であること（すなわち、処理前試料および／または未免疫化対照と比べて、少なくとも実質的および統計的に有意なレシピエントの割合において、血清殺細菌アッセイおよび／またはＥＬＩＳＡにより測定すると、抗ＭｅｎＣ抗体を誘発したこと）が確認された。
ＭｅｎＷ－１３５結合体を上記に記載されたように一般的に調製した。結合体は、０．９の多糖／タンパク質（ＰＳ／ＰＲ）質量比を有した。Ｏ－アセチル化レベルを決定すると、多糖ｍｇ当たり１．６μｍｏｌであった。ＭｅｎＷ－１３５結合体のいくつかの追加のバッチを調製した。これらのバッチのＰＳ／ＰＲ質量比の測定値は、０．６、０．７、０．８、０．９、および１．２であり、多糖ｍｇ当たりのμｍｏｌでのＯ－アセチル化レベルの測定値は、０．７、０．８、および１．３であった。同じ値が２回以上観察された。
ＭｅｎＷ－１３５結合体のそれぞれのバッチは、ＭｅｎＷ－１３５ワクチン未感作のヒト、マウス、および／またはモルモット対象に四価製剤を投与したとき、免疫原性であること（すなわち、処理前試料および／または未免疫化対照と比べて、少なくとも実質的および統計的に有意なレシピエントの割合において、血清殺細菌アッセイおよび／またはＥＬＩＳＡにより測定すると、抗ＭｅｎＷ－１３５抗体を誘発したこと）が確認された。
ＭｅｎＹ結合体を上記に記載されたように一般的に調製した。結合体は、１．０の多糖／タンパク質（ＰＳ／ＰＲ）質量比を有した。Ｏ－アセチル化レベルを決定すると、多糖ｍｇ当たり１．３μｍｏｌであった。ＭｅｎＹ結合体のいくつかの追加のバッチを調製した。これらのバッチのＰＳ／ＰＲ質量比の測定値は、０．６、０．７、０．８、および０．９であり、多糖ｍｇ当たりのμｍｏｌでのＯ－アセチル化レベルの測定値は、０．８、０．９、１．０、１．１、および１．３であった。同じ値が２回以上観察された。
ＭｅｎＹ結合体のそれぞれのバッチは、ＭｅｎＹワクチン未感作のヒト、マウス、および／またはモルモット対象に四価製剤を投与したとき、免疫原性であること（すなわち、処理前試料および／または未免疫化対照と比べて、少なくとも実質的および統計的に有意なレシピエントの割合において、血清殺細菌アッセイおよび／またはＥＬＩＳＡにより測定すると、抗ＭｅｎＹ抗体を誘発したこと）が確認された。
上記に記載された全ての結合体バッチは、３００～１５００ｋＤａの範囲の重量平均分子量を有する結合体分子の個体群であった。
６．臨床試験
本明細書に記載されている四価ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴ結合体を臨床研究に使用して、乳幼児および幼児（６週齢以上）、ならびに５６歳以上の成人における異なるワクチン接種スケジュールの安全性および免疫原性を評価した。
ａ）第Ｉ／ＩＩ相臨床試験１－健康な髄膜炎菌ワクチン未感作幼児（１２カ月齢＋／－２１日）に投与した様々なＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴ様製剤の安全性および免疫原性
この第Ｉ／ＩＩ相臨床試験は、１２カ月齢＋／－２１日の幼児（群１～５）に筋肉内投与されたＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴに関連して、様々な四価髄膜炎菌多糖－破傷風トキソイド結合体製剤の単回用量の安全性および免疫原性を評価した。認可された一価髄膜炎菌結合体ワクチンである、ＮｅｉｓＶａｃ－Ｃ（登録商標）（完全に脱Ｏ－アセチル化された髄膜炎菌群Ｃ多糖－破傷風トキソイド結合体を、本明細書において「ＭｅｎＣ－ＴＴ」と喚び、対照群（図６）に投与した。
製剤１Ａは、０．５ｍＬの用量当たり、４つの多糖（すなわち、ＭｅｎＡＣＹＷ）からそれぞれ４μｇの多糖および２２．１μｇのＴＴを含有した。全て未変性のＯ－アセチル化レベルを有し、本質的に上記に記載されたように、過ヨウ素酸塩活性化および還元的アミノ化（ＭｅｎＣＹＷ）、またはカルボニルジイミダゾールおよびアジピン酸ジヒドラジド（ＭｅｎＡ）の使用によって結合させた。
製剤１Ｂは、０．５ｍＬの用量当たり、それぞれ１０μｇのＭｅｎＡおよびＭｅｎＷ多糖、それぞれ４μｇのＭｅｎＣおよびＭｅｎＹ多糖、ならびに３６．６μｇのＴＴを含有した。それ以外は製剤１Ａと同一であった。
製剤１Ｃは、０．５ｍＬの用量当たり、４つの多糖からそれぞれ１０μｇおよび５．４８μｇのＴＴを含有した。それ以外は製剤１Ａと同一であった。
製剤２Ａは、０．５ｍＬの用量当たり、４つの多糖からそれぞれ４μｇの多糖および３３．９μｇのＴＴを含有した。ＭｅｎＣ、Ｙ、およびＷ多糖を、アルカリ処理によって部分的に脱Ｏ－アセチル化し、本質的に上記に記載されたように、過ヨウ素酸活性化および還元的アミノ化を介して結合させた。ＭｅｎＡ多糖は、未変性Ｏ－アセチル化レベルを有し、米国特許出願第２００５／０００２９７５号、実施例５に本質的に記載されているような結合化学を使用してネオグリココンジュゲート（ｎｅｏｇｌｙｃｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ）として作製した。
製剤２Ｂは、０．５ｍＬの用量当たり、４つの多糖からそれぞれ１０μｇおよび８４．８μｇのＴＴを含有した。それ以外は製剤２Ａと同一であった。
上記の製剤は、全て、０．６７％のＮａＣｌを含有し、リン酸ナトリウムによりｐＨ６で緩衝された。
６つの研究群を表１にまとめ、特徴づけた。
Figure 0007329087000003
治療群の間で男女比は変動しており、極端な例は、群２では３９．２％対６０．７％であり、群５では６２．３％対３７．７％であった。全ての群における年齢範囲は、１１．０～１２．０カ月齢であり、全群にわたる平均は１１．５～１１．７カ月齢の範囲であった。
非応答型有害事象（ＡＥ）の安全性データを、ワクチン投与の３０～３７日後まで収集した。応答型ＡＥの間隔はＤ０～Ｄ７（すなわち、投与の０～７日後）であった。集められた応答型反応源性（ｒｅａｃｔｏｇｅｎｉｃｉｔｙ）には、注射部位圧痛、発赤、および腫脹、ならびに発熱、嘔吐、食欲喪失、異常な号泣、傾眠、および被刺激性が含まれた。
ワクチン接種を受けた全ての対象は研究を完了したが、ワクチン接種を受けた５６人の対象（群全体）をプロトコールからの逸脱のため分析から除外し、最も一般的な原因は、許容される時間内に３０～３７日目の血液試料を提供できなかったことである。
２人の対象が即時型非応答型ＡＥを経験し、そのうちの１人は、ワクチン接種に関連すると考慮された（群１の対象に発疹が発生した）。
０日目から７日目の間の応答型注射部位反応：全ての群において、大多数の対象は応答型反応を経験した。全体的に、応答型反応の率は群間で同等であった。注射部位反応を報告した群１～５のレシピエントの百分率は、対照ワクチンを受けた対象（群６）において見られるものと類似していた。
注射部位反応の率と、それぞれのワクチン製剤に含有されている破傷風トキソイドの量との明確な相関関係は、存在しなかった。
最も一般的な注射部位反応は圧痛であり、この率は、群１の２５．４％から群５の３９．３％の範囲であり、次は紅斑であり、群２の２９．５％から群５の３９．３％の範囲であり、極めて希な反応は腫脹であり、群４の１３．６％から群３の２３．０％の範囲であった。大多数の応答型注射部位反応は、グレード１の強さであり、ワクチン接種の時に始まり３日以内に消散し、治療介入する必要は何もなかった。強さ、発症時、持続期間、または行った処置に関して、群としての傾向は見られなかった。
０日目から７日目の間の応答型全身反応：注射部位反応と同じように、発熱、嘔吐、異常な号泣、傾眠、食欲喪失、および被刺激性のような全身反応の全体的な率は、群１～５において同等であり、対照ワクチンにおいて見られたものに類似していた。全群において最も一般的な全身反応は被刺激性であり、群４の５４．２％から群２および群５の両方の７０．５％の範囲であった。次に最も一般的な（群２以外の全ての群における）は、異常な号泣であり、群２の３４．４％から群６の４８．４％の範囲であり、その後に食欲喪失が続き（群２において２番目に一般的な反応であった）、群６の２７．９％から群６の４６．８％の範囲であった。嘔吐の率は、群４の１８．６％から群６の３２．３％の範囲であり、発熱は最も少なく報告された反応であり、群１の１１．１％から群６の２５．８％の範囲であった。大多数の応答型全身反応は、グレード１の強度であり、ワクチン接種の時に始まり３日以内に消散し、治療介入する必要は何もなかった。強度、発症時、持続期間、または行った処置に関して、群としての傾向は見られなかった。
０日目から３０日目の間の非応答型有害事象：合計で９３１件の非応答型ＡＥが３２７人の対象から報告された。合計で１０７件の非応答型ＡＥが、ワクチン接種に関連すると考慮され、有害反応（ＡＲ）と確認された。最も一般的なＡＲは、ＳＯＣの１）一般的な障害および投与部位の状態（２５件）；２）感染および侵襲、ならびに皮膚および皮下組織の障害（それぞれ２０件）；３）胃腸障害、ならびに呼吸器、胸郭、および縦隔障害（それぞれ１６件）であった。ＡＲの件数と受けたワクチンとの間に明確な関連性は存在しなかった。合計で４件の全身性ＡＲがグレード３の強さであると報告された：群１および４では、それぞれ１件であり、群５では２件であった。
重篤なＡＥ：死亡例は発生しなかった。合計で７件のＳＡＥが研究の期間中に７人の対象において発生した：群１の対象では２件、群２の対象では１件、群３の対象では２件、群４の対象では２件であった。群５および６ではＳＡＥの報告はなかった。これらのＳＡＥのうちの１つである、群３の１人の対象により経験された反応性関節炎は、ワクチン接種に関連すると認められた。対象は、２３日後に完全に回復した。
安全性に関する結論は、単回用量が全群において良好に耐容されたこと、および安全性プロファイルには有意な差がなかったことであった。
髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ－１３５に対する機能性抗体を、ヒト補体（ＳＢＡ－ＨＣ）および仔ウサギ補体（ＳＢＡ－ＢＲ）を使用する血清殺細菌アッセイにより測定して、１）ＳＢＡ－ＨＣ力価≧１：８および≧１：４、またはＳＢＡ－ＢＲ力価≧１：８を有する対象の割合；２）幾何学平均力価（ＧＭＴ）；３）逆累積分布曲線（ＲＣＤＣ）；ならびに４）力価分布を決定した。ワクチンに存在する破傷風トキソイドに対する抗体力価を、ＥＬＩＳＡにより評価した。アッセイを、ワクチン接種前（表２および３の「前」）およびワクチン接種の３０～３７日後（表２および３の「後」）に採取した血液試料によって実施した。
表２および３はＳＢＡ－ＨＣの結果を示す。表２および３では、９５％信頼区間の百分率である。
Figure 0007329087000004
Figure 0007329087000005
表から分かるように、ワクチン接種前の力価は、全ての血清型において低かった。血清型Ａでは、全ての群における大多数の対象は、８以下の力価を有し、他の３つの血清型で
は、実質的に全ての対象が＜４の値を有した。ワクチン接種後の群１～５において、血清型Ａでは大多数の力価値が８～１２８であり、血清型Ｃでは１６～１０２４であり、血清型Ｙでは＜４～１２８であり、血清型Ｗ１－３５では＜４～６４であった。対照群において、血清型Ａ、Ｙ、およびＷ－１３５の値は、大部分が＜４～４であったが、血清型Ｃでは、大部分の値は２５６～１０２４であった。低用量群と比べて、高用量群により高く抗体が応答する傾向があった。
ＳＢＡ－ＢＲアッセイでは、投与前ＧＭＴは全ての治療群にわたって同等であり、血清型Ａでは４．２２～５．２６、血清型Ｃでは４．００～６．２６、血清型Ｗ－１３５では６．０１～８．４５であった。血清型Ｙではより大きな変動が見られ、その値は１７．３５（群５）から３５．９２（群１）の範囲であった。
群１～５において、ワクチン接種後の値は、血清型Ａでは３３６．９１（群１）～７５９．３５（群５）の範囲であり、対照群の値は５．６６であった。血清型Ｃの値は、１４５．５３（群１）～６３６．３７（群５）の範囲であった。対照群の値は、１２９０．１６であった。血清型Ｙの値は、５８６．５４（群３）～７１３．７０（群４）の範囲であった。対照群の値は、２３．４１であった。血清型Ｗ－１３５の値は、９１２．２８（群４）～１５１８．７１（群５）の範囲であった。対照群の値は、８．５７であった。
ｂ）第ＩＩ相臨床試験１－乳幼児および幼児におけるＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴの安全性および免疫原性
第ＩＩ相無作為化非盲検多施設臨床試験を、米国において５８０人の小児に実施した。試験は、異なるスケジュールおよびルーチン小児用ワクチン接種と同時に投与されたＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴワクチンの安全性および免疫原性プロファイルを研究するために設計された。この研究は、ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴワクチン、およびＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴワクチンと同時に投与されるときに選択された認可小児用ワクチン（Ｐｅｎｔａｃｅｌ（登録商標）（ＤＴａＰ－ＩＰＶ／Ｈｉｂ）、Ｐｒｅｖｎａｒ（登録商標）（ＰＣＶ７）またはＰｒｅｖｎａｒ（登録商標）１３（ＰＣＶ１３）、Ｍ－Ｍ－Ｒ（登録商標）ＩＩ（ＭＭＲ）、Ｖａｒｉｖａｘ（登録商標）（Ｖ）、ＥＮＧＥＲＩＸ－Ｂ（登録商標）またはＲＥＣＯＭＢＩＶＡＸ ＨＢ（登録商標）（ＨｅｐＢ）、Ｒｏｔａｒｉｘ（登録商標）（ＲＶ１）、およびＲｏｔａｔｅｑ（登録商標）（ＲＶ５））の免疫原性プロファイルを記載することも目的であった。
参加者は、ルーチンワクチンと同時に投与されたＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴワクチン（治療群；表１の群１～５）、またはルーチン小児用ワクチンのみ（対照群；群６～７）のいずれかを受けた。
２カ月齢の乳幼児を、表１に示されたように、３つの治療群（群１～３）、ならびに２つの対照群（群６および７）に無作為に割り当てた。治療群１～３の乳幼児は、３または４用量のＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴワクチンを（ルーチンワクチンと同時に）表４に記載されているように受けた。
表４は、臨床試験設計の要約を提示している。
Figure 0007329087000006
６カ月齢および１２カ月齢の時に２用量のＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴワクチンを（ルーチンワクチンと同時に）受けた１２カ月齢の乳幼児（群４）、ならびに１２カ月齢の時に１用量のＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴワクチンを（ルーチンワクチンと同時に）受けた１２カ月齢の乳幼児（群５）も登録した。
ヒト（ｈＳＢＡ）および仔ウサギ（ｒＳＢＨ）補体による血清殺細菌アッセイを使用して、ベースライン、ならびに最後の乳幼児および乳児用量の３０日後での髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ－１３５に対する抗体を測定した。両方のアッセイの定量化下限（ＬＬＯＱ）は、１：４であった。例えば、Ｍａｓｌａｎｋａら、Ｓｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ａ Ｍｕｌｔｉｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ
Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ Ｓｅｒｏｇｒｏｕｐ Ａ ａｎｄ Ｃ Ｓｅｒｕｍ Ｂａｃｔｅｒｉｃｉｄａｌ Ａｓｓａｙｓ，Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ
Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１９９７年、３月、１５６～１６７頁、およびＧｏｌｄｓｃｈｎｅｉｄｅｒ Ｇｏｔｓｃｈｌｉｃｈ，ａｎｄ Ａｒｔｅｎｓｔｅｉｎ、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ｔｏ Ｍｅｎｉｎｇｏｃｏｃｃｕｓ，Ｔｈｅ Ｒｏｌｅ ｏｆ Ｈｕｍｏｒａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、１９６９年を参照すること。
安全性データをワクチンの最後の用量の６カ月後まで収集した。応答型有害事象（ＡＥ）の間隔はＤ０～Ｄ７（すなわち、投与の０～７日後）であった。集められた応答型反応源性には、体温、および注射部位の発赤と腫脹の毎日の測定、ならびに注射部位疼痛、頭痛、筋肉痛、および倦怠感の強さの記録も含まれた。非応答型ＡＥおよび重篤な有害事象（ＳＡＥ）も、研究の全体を通して集めた。全ての統計分析は、記述的であった。
人口統計学を安全性分析のセットのために分析し、少なくとも１用量の研究または対照ワクチンを受け、安全性データが入手可能であった対象と定義した。群１、２、３、６、および７が含まれる研究での平均年齢は、それぞれ、２．１９、２．２０、２．２４、２．１８、および２．２０カ月齢であった。年齢の範囲は、群１では１．５７～２．９７カ月齢、群２では１．５７～２．９０カ月齢、群３では１．５３～３．００カ月齢、群６では１．５３～２．８７カ月齢、群７では１．７０～２．９７カ月齢であった（２カ月齢に含まれる基準［４２～８９日］）。群４では、平均年齢は６．２３カ月齢であり、年齢の範囲は、５．６３カ月から６．５０カ月齢であった。（６カ月齢に含まれる基準［１８０日±１４日］）。群５では、平均年齢は１２．４カ月齢であり、年齢の範囲は、１２．２～１２．７カ月齢であった。（１２カ月齢に含まれる基準［３６５日＋１４日］）。
乳幼児のシリーズが完了し、追加のＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴワクチン用量を２歳の時に受けた後（群１～４）、大部分の研究参加者は、１歳の時に受けた用量の数にかかわらず、ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴワクチンに含まれた４つ全ての血清型（ＡＣＹＷ）において、保護的な力価の１：８（ヒト補体［ｈＳＢＡ］では９１％～１００％および仔ウサギ補体［ｒＳＢＡ］では８０％～１００％）を達成した。単回用量を１２カ月齢の時に受けた参加者（群５）では、ＡＣＹＷの保護的力価の１：８は、４７．５％～９０％（ｈＳＡＢ）および６２％～１００％（ｒＳＢＡ）であった。したがって、ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴ結合体ワクチンは、１歳の時に受けた第一スケジュールにかかわらず、２歳の時の追加用量の後にしっかりとした免疫原性応答を実証している。
図６は、群１～４において血清型Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷのそれぞれで１：８以上のｈＳＢＡレベルを有する対象の百分率を提示している。図７は、同じ群においてｒＳＢＡに類似した結果を提示している。
１２カ月齢の時に単回用量のＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴワクチンが投与された後のｈＳＢＡに対する免疫応答（群５）は、３用量シリーズ（群３）の血清型Ｃ（９０％）に見られた応答に類似していたが、血清型Ｙ（４７．５％）、Ａ（７５％）、およびＷ－１３５（５４％）では低かった。１２カ月齢の時に単回ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴワクチン用量を受けた対象（群５）におけるｈＳＡＢおよびｒＳＢＡ力価を示す表５を参照すること。
Figure 0007329087000007
ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴワクチンと同時に投与されたルーチン小児用ワクチンによる干渉の証拠はなかった（データ示されず）。
応答型注射部位反応の頻度は、反復ワクチン用量によって増加しなかった。ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴワクチン投与後の７日間以内に、１つまたはそれ以上の応答型注射部位反応を報告した参加者の累積百分率を表す図８を参照すること。ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴワクチン投与後の７日間以内に≧１の応答型注射部位反応を報告した参加者の累積百分率は、４用量を受けた群（群１および２、８０．０％～８０．８％）において最高であり、その後に、２用量（群４、７５．３％）または３用量（群２、７４．０％）の用量を受けた群が続き、１用量を受けた群（群５、５７．４％）が最低であった。
図９は、ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴワクチン＋ルーチンワクチン、またはルーチンワクチンの単独のいずれかを投与した７日間以内の応答型全身反応を示す。
大部分の非重篤有害事象（ＮＳＡＥ）が、ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴワクチンまたはルーチンワクチンによるいずれかのワクチン接種後に報告され、報告されたグレード３のＮＳＡＥは、それぞれ、研究ワクチンと無関係であった。ワクチン関連の重篤な有害事象はなかった。
ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴワクチンおよびルーチンワクチンは、両方とも、対照群においてＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴワクチンを伴わないでルーチンワクチンが与えられたときと比較して、同時に（すなわち、同じ日に別々のワクチンとして）与えられたときに免疫原性であり、ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴワクチンとルーチンワクチンとの間に否定的な相互作用がなかったとを示している。
まとめると、ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴワクチンは、免疫スケジュールおよび投与された用量の数にかかわりなく、乳幼児および幼児に安全であり、十分に耐容された。ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴワクチンの安全性プロファイルは、免疫スケジュールおよび投与された用量の数にかかわりなく、対照群と全体的に類似していた。
したがって、治療用ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴワクチンは、十分に耐容され、免疫原性であった。１歳および２歳の時の両方における用量を含む全てのワクチン接種スケジュールは、４つのワクチンＮ．メニンギティディス血清型Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷにおいて、しっかりとした免疫応答を誘導し、許容される安全性プロファイルを伴っていた。
ｃ）第ＩＩ相臨床試験２－５６歳以上の成人に投与されたＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴの安全性
および免疫原性
年齢および基礎慢性疾病が、髄膜炎菌疾患にとって重要な危険因子であり、そのため、高齢者にとっては危険性が増加する。臨床研究を実施して、５６歳以上の成人において、認可された四価髄膜炎菌単純多糖ワクチンである（ＭＰＳＶ４）、Ｍｅｎｏｍｕｎｅ（登録商標）－Ａ／Ｃ／Ｙ／Ｗ－１３５と比較して、ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴワクチンの安全性および免疫原性を評価した。
第ＩＩ相無作為化非盲検多施設研究を、米国において５６歳以上の３０１人に健康な成人に実施した。１２箇所の研究施設の参加者を、ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴまたはＭＰＳＶ４（Ｍｅｎｏｍｕｎｅ（登録商標）－Ａ／Ｃ／Ｙ／Ｗ－１３５）のいずれかの１用量を受けるように無作為に割り当てた。患者を、年齢に応じて２つのサブセット：１）５６～６４歳、および２）６５歳以上に層別化した。
４つの研究群を以下のように形成した。群１ａ（ｎ＝１０１、年齢５６～６４歳）および群１ｂ（ｎ＝１００、≧６５歳）は、ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴを受けた。群２ａ（ｎ＝５０、年齢５６～６４歳）および群２ｂ（ｎ＝５０、≧６５歳）は、ＭＰＳＶ４ワクチンを受けた。「群１」は、群１ａ＋群１ｂを指す。「群２」は、群２ａ＋群２ｂを指す。人口統計学の結果を表６にまとめた。
Figure 0007329087000008
上記に記載されたヒト（ｈＳＢＡ）および仔ウサギ（ｒＳＢＨ）補体による血清殺細菌アッセイを使用して、ベースライン、ならびに最後のワクチン投与の３０日後での髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ－１３５に対する抗体を測定した。両方のアッセイの定量化下限（ＬＬＯＱ）は、１：４であった。
安全性データを最後の用量の３０日後まで収集した。応答型ＡＥの間隔はＤ０～Ｄ７（すなわち、投与の０～７日後）であった。集められた応答型反応源性には、体温、および注射部位の発赤と腫脹の毎日の測定、ならびに注射部位疼痛、頭痛、筋肉痛、および倦怠感の強さの記録も含まれた。非応答型ＡＥおよび重篤な有害事象（ＳＡＥ）も、研究の全体を通して集めた。全ての統計分析は、記述的であった。
人口統計学を安全性分析のセットのために分析し、少なくとも１用量の研究または対照ワクチンを受け、安全性データが入手可能であった対象と定義した。登録時には、対象の平均年齢は、群１および群２の両方において類似していた（それぞれ、６６．１±７．１３歳、および６５．８±６．５８歳）。加えて、年齢は、５６～６４歳の対象を有する群、および＞６５歳の対象を有する群において類似していた（群１ａでは６０．３±２．５
２歳、群２ａでは６０．８±２．５９歳＜群１ｂでは７１．９±５．２８歳、群２ｂでは７０．８±５．４５歳）。
群１および群２の両方とも、男性対象（それぞれ、３９．２％［７８／１９９］および４５．０％［４５／１００］）よりも女性対象（それぞれ、６０．８％［１２１／１９９］および５５．０％［５５／１００］）の方が、わずかに多かった。同じ傾向がサブセットにおいても観察されたが、群２は例外であり、女性と男性の対象の数が等しかった（５０．０％［２５／５０］。
血清型Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ－１３５に対してｈＳＢＡ力価≧１：８を有する研究参加者の百分率は、全ての群においてベースラインと比較して３０日目には著しく増加した。２つの年齢基層（５６～６４歳および≧６５歳）において、結果は、表７に示されているように、それぞれのワクチン接種群内で全体的に類似していた。
Figure 0007329087000009
図１０は、全ての患者（すなわち、組み合わせた年齢群）からのデータを使用して、血清型Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ－１３５によりＤ３０でｈＳＢＡレベル≧１：８を達成した対象の百分率を提示する。ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴを投与した後にｈＳＢＡ力価≧１：８を有する個人の百分率は、血清型ＡおよびＣにおけるＭＰＳＶ４投与後の力価と同等であった。ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴを投与した後にｈＳＢＡ力価≧１：８を有する個人の百分率は、血清型ＹおよびＷにおけるＭＰＳＶ４投与後の力価より高かった。
図１１は、両方のワクチンによるＤ３０での異なる血清型の幾何学平均力価（ＧＭＴ）を提示する。ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴによるＧＭＴは、全ての血清型においてＭＰＳＶ４のＧＭＴに等しかった。
１：８以上のｒＳＢＡ力価を有する参加者の百分率は、４つ全てのワクチン群において、ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴのレシピエントとＭＰＳＶ４のレシピエントで同等であった。図１２を参照すること。
ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴ投与の７日以内の応答型注射部位反応（図１３）および応答型全身反応（図１４）は、ＭＰＳＶ４ワクチンと類似していた。
全体的に、ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴおよびＭＰＳＶ４ワクチンの両方の反応源性プロファイルは、類似していた。大部分の非応答型有外事象は、グレード１またはグレード２の強さであった。即時過敏性反応はなく、ＡＥまたはＳＡＥが原因の中止はなかった。高齢のワクチンレシピエントに反応源性の増加は観察されなかった。重篤な有害事象は報告されなかった。
ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴは、５６歳以上の成人に投与されたときに十分に耐容され、免疫原性であった。したがって、ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴは、高齢者の免疫化のために現在入手可能な、ＭＰＳＶ４のような単純多糖ワクチンしか入手することができない地域を含む世界中の地域において、侵襲性髄膜炎菌疾患を予防する代替的ワクチンを表している。
ｄ）第ＩＩ相臨床試験３－健康な髄膜炎菌ワクチン未感作幼児（１２～２３カ月齢）に投与したＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴの安全性および免疫原性
ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴ結合体ワクチンは、６週齢以上の個人に使用することが意図されている。この研究は、対照として、認可された四価髄膜炎菌結合体ワクチン（ＭＣＶ４－ＴＴ）である、Ｎｉｍｅｎｒｉｘ（登録商標）を使用して、乳児における単回用量の安全性および免疫原性を評価した。
１８８人の髄膜炎菌ワクチン未感作幼児（１２～２３カ月齢）における１第ＩＩ相無作為化非盲検研究を、フィンランドで実施した。参加者を、ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴワクチンまたはＭＣＶ４－ＴＴのいずれかの１用量を受けるように無作為に割り当てた。ヒト（ｈＳＢＡ）および仔ウサギ（ｒＳＢＨ）補体による血清殺細菌アッセイを使用して、ベースラインおよび用量の３０日後での髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ－１３５に対する抗体を測定した。両方の血清殺細菌アッセイのＬＬＯＱは、１：４であった。破傷風に対する抗体応答も測定した。
安全性データを最後の用量の３０日後まで収集した。応答型有害事象（ＡＥ）の間隔はＤ０～Ｄ７であった。集められた応答型反応源性には、体温、および注射部位の発赤と腫脹の毎日の測定、ならびに注射部位疼痛、頭痛、筋肉痛、および倦怠感の強さの記録も含まれた。非応答型ＡＥおよび重篤な有害事象（ＳＡＥ）を、研究の全体を通して集めた。全ての分析は、記述的であった。
表８は、試験の研究デザインおよび対象の性質についてのデータを提示している。
Figure 0007329087000010
人口統計学分析を安全性分析セットで行った。安全性分析セットは、少なくとも１用量の研究または対照ワクチンを受け、安全性データが入手可能であった対象と定義した。合計で９８人（５２．１％）の男性対象および９０人（４７．９％）の女性対象が安全性分析セットに存在し、全体的な男性／女性対象の比は１．０９であった。ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴ群では男性の方が女性よりも多かった（男女比は１．５４であった）。ＭＣＶ４－ＴＴ群では女性の方が男性よりも多かった（男女比は０．７７であった）。対象の年齢は、２群では同等であった。登録した対象の平均年齢は、ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴ群では１．４４±０．３０２歳であり、ＭＣＶ４－ＴＴ群では１．４７±０．３１４歳であった。
ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴワクチンによるｋｈＳＢＡワクチン血清応答を有する対象の百分率は、血清型Ａ、Ｗ、およびＹではＭＣＶ４－ＴＴと同等であった［９６．７％～９８．９％（ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴ）および９１．９％～９８．８％（ＭＣＶ４－ＴＴ）の範囲］（図１５）。ｈＳＢＡワクチン血清応答を次のように定義した：力価がベースラインで＜１：８である場合、ワクチン接種後の力価は≧１：８であること、または力価がベースラインで≧１：８である場合、ワクチン接種後に≧４倍増加すること。
血清型Ｃの血清応答を有する対象の百分率は、ＭＣＶ４－ＴＴ（８６．０％）よりＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴ（１００．０％）の方が高かった。血清型Ｃの傾向は、ｒＳＢＡを使用したときも同様であった。
ワクチンのＤ３０後にｈＳＢＡ力価≧８（≧１：８）を達成した対象の百分率のデータを表９に提示する。
Figure 0007329087000011
ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴは、ｈＳＢＡ幾何学平均力価およびワクチン接種後ｈＳＢＡ力価≧８（≧１：８）を有する対象の百分率を評価すると、血清型Ａ、Ｗ、およびＹに対して同等の免疫応答、ならびに血清型Ｃに対して高い免疫応答を誘発した（図１６および表１０）。図１６および表１０は、表１０が図１６に示されているようにｌｏｇ２スケールに変換されている以外は、同じデータを示している。
Figure 0007329087000012
安全性も、この研究において評価した。反応源性プロファイルは、両方のワクチンにおいて同等であった。少なくとも１件の応答型注射部位反応を報告した対象の百分率は、両方のワクチンにおいて同等であった（４８．９％および５３．２％）。注射部位の紅斑、圧痛、および腫脹のデータを図１７に示す。大多数の注射部位反応は、グレード１または２の強さであり、全て、Ｄ０～Ｄ３で始まり大部分が１～３日間続いた。
グレード３の応答型注射部位反応を報告した対象は、わずかであった：ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴ群では３．２％の対象であり、ＭＣＶ４－ＴＴ群では４．３％の対象であった。
応答型全身反応も２つの群において類似していた（図１８）。
少なくとも１件の非応答型非重篤ＡＥを報告した対象の百分率は、研究群において同等であった。大部分の非応答型有外事象は、グレード１またはグレード２の強さであった。この群のいずれにおいても、即時型非応答型ＡＥの報告はなかった。任意のアナフィラキシーまたは生命を脅かす事象を含む即時型ＳＡＥはなかった。報告された２件の重篤な有害事象は、無関係であると考えられた。
治療用ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴワクチンは、十分に耐容され、免疫原性であった。ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴワクチンの単回用量は、最初に髄膜炎菌ワクチン接種を受けた幼児にとって代替的なワクチン選択肢である優れた潜在力を実証した。
ｅ）第ＩＩ相臨床試験４－健康な髄膜炎菌ワクチン未感作青年（１０～１８歳）に投与したＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴの安全性および免疫原性
この第ＩＩ相研究は、年齢１０～１８歳の青年に筋肉内投与された単回用量（３０ｍＭの酢酸ナトリウムによりｐＨ６．０で緩衝された０．６７％のＮａＣｌ中の、合計６５μｇのＴＴに結合された多糖を血清型当たり１０μｇ）のＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴの安全性および免疫原性を評価した。認可された四価髄膜炎菌結合体ワクチンである、本明細書において「ＭｅｎＡＣＹＷ－ＣＲＭ１９７」と喚ばれる、Ｍｅｎｖｅｏ（登録商標）（髄膜炎菌（群Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ－１３５）多糖ジフテリアＣＲＭ１９７結合体ワクチンを、対照群（群２）に投与した。ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴとＴｄａｐ／Ａｄａｃｅｌ（登録商標）およびＨＰＶ／Ｇａｒｄａｓｉｌ（登録商標）との同時投与（群３）の効果も、Ｔｄａｐ／Ａｄａｃｅｌ（登録商標）およびＨＰＶ／Ｇａｒｄａｓｉｌ（登録商標）単独の投与（群４）と比較した。対照ワクチン、ならびにＴｄａｐ／Ａｄａｃｅｌ（登録商標）およびＨＰＶ／Ｇａｒｄａｓｉｌ（登録商標）ワクチンを、ラベルの使用説明書に従って投与した。４つの研究群を表１１にまとめ、特徴づけた。
Figure 0007329087000013
合計７４人の対象（４．３％）が試験を完了しなかった：群１では１０人（２．０％）、群２では７人（１．４％）、群３では２７人（６．７％）、群４では３０人（１０．０％）であった。最も頻繁に報告された中止理由は、有害事象が原因ではない自主的な離脱、追跡不能、およびプロトコール不履行であった。ＳＡＥまたは他のＡＥが原因の早期中止はなかった。
ヒト補体（ｈＳＢＡ）による血清殺細菌アッセイを使用して、ベースラインおよび用量の３０日後での髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ－１３５に対する抗体を測定した。
血清殺細菌アッセイのＬＬＯＱは、１：４であった。ｈＳＢＡデータを、群１の４６３人のメンバーから、群２の４６４人のメンバーから、群３の３６０人のメンバーから集めた。ｈＳＢＡの結果は表１２にあり、ここで対象％は、陽性血清応答を有する対象の百分率を示し、すなわち、ワクチン接種前ｈＳＢＡ力価＜１：８を有する対象では、ワクチン接種後ｈＳＢＡが≧１：８であること、またはワクチン接種前ｈＳＢＡ力価≧１：８を有する対象では、ワクチン接種前から後でｈＳＢＡ力価に少なくとも４倍の増加があることを示している。高い百分率の対象が、４つ全ての血清型においてＭｅｎＡＣＹＷ－ＣＲＭ１９７よりＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴの方に陽性血清応答を示した。
Figure 0007329087000014
群１と２の血清応答頻度の差を、９５％信頼区間と共に表１３に示す。
Figure 0007329087000015
群１と３の血清応答頻度の差は、９５％信頼では有意ではなく、ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴの効力がＴｄａｐ／Ａｄａｃｅｌ（登録商標）およびＨＰＶ／Ｇａｒｄａｓｉｌ（登録商標）との同時投与によって影響を受けないという結論と一致している。
表１４は、０日目（Ｄ０）および３０日目（Ｄ３０）での幾何学平均力価（ＧＭＴ）として表されるｈＳＢＡの結果を、９５％信頼区間と共に示す。
Figure 0007329087000016
ジフテリアおよび破傷風に対する免疫応答を全ての群で比較した。結果を表１５に示し、幾何学平均濃度（ＧＭＣ）、≧０．１ＩＵ／ｍＬを有する対象％、ならびに抗破傷風および抗ジフテリア抗体濃度の≧１．０ＩＵ／ｍＬを有する対象％として表されている。
Figure 0007329087000017
結果は、群３のようなＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴとＴｄａｐ／Ａｄａｃｅｌ（登録商標）の同時投与が後者の免疫原性に干渉しなかった（群４の結果を参照すること）という結論と一致した。
またワクチン応答を以下の抗原：百日咳毒素（ＰＴ）、百日咳繊維状赤血球凝集素（ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ ｆｉｌａｍｅｎｔｏｕｓ ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ）（ＦＨＡ）
、百日咳パータクチン（ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ ｐｅｒｔａｃｔｉｎ ）（ＰＲＮ）、および百日咳線毛抗原（ＦＩＭ）に関して特徴づけた。表１６を参照すること。
Figure 0007329087000018
以下のことを安全性に関して観察した：ワクチン接種の３０分後に報告された任意の非応答型全身有害事象（ＡＥ）の発生、性質、持続時間、強さ、およびワクチン接種との関連性；ワクチン接種Ｄ０後から７日間までに発生した応答型注射部位反応の発生、発症時点、発生の日数、強さ、行った処置、および反応が研究の早期中止をもたらしたか；ワクチン接種Ｄ０後から７日間までに発生した応答型全身反応の発生、発症時点、発生の日数、強さ、行った処置、および反応が研究の早期中止をもたらしたか；ワクチン接種Ｄ０後から２３～２７日間までに発生した非応答型ＡＥの発生、発症時点、発生の日数、強さ、行った処置、ワクチン接種との関連性（全身ＡＥのみ）、および反応が研究の早期中止をもたらしたか；ならびにワクチン接種Ｄ０後から１８０日間まで（群１および群２）または２１０日間まで（群３および群４）の試験全体にわたる重篤有害事象（ＳＡＥ）の発生、発症時点、発生の日数、強さ、行った処置、ワクチン接種との関連性、帰結、およびＳＡＥ反応が研究の早期中止をもたらしたか。応答型全身反応には、発熱、筋肉痛、および頭痛が含まれた。応答型注射部位反応には、疼痛、紅斑、および腫脹が含まれた。
Ｄ０～Ｄ０７で少なくとも１件の応答型反応を報告した対象の百分率は、ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴ結合体ワクチンおよびＭＥＮＶＥＯ（登録商標）で同等であった：それぞれ、群１では対象の６３．５％（３１５／４９６）であり、群２では対象の６４．２％（３１６／４９２）であった。少なくとも１件の応答型反応を報告した対象の百分率は、ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴ結合体ワクチンをＴｄａｐおよびＨＰＶと同時に受けた対象と、ＴｄａｐおよびＨＰＶ単独を受けた対象では同等であった：それぞれ、群３では８８．９％（３４５／３８８）であり、群４では８９．０％（２５８／２９０）であった。少なくとも１件の応答型注射部位反応を報告した対象の百分率は、群１、群２、およびＧｎｎ ３において同等であった：それぞれ、４６．６％（２３１／４９６）、４５．７％（２２５／４９２９）、および４９．０％（１９０／３８８）であった。ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴ結合体ワクチンが単独で与えられた（群１）に対して、ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴ結合体ワクチンがＴｄａｐおよびＨＰＶと同時に与えられた（群３）時には、ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴ結合体ワクチンに局所反応源性の増加が見られなかった。
最も頻繁に報告された注射部位反応は、疼痛であり、群１では４５．２％（２２４／４９６）の対象、群２では４２．５％（２０９／４９２）の対象、群３では４７．２％（１８３／３８８）の対象によって報告され、その後に続くのは注射部位紅斑であり、これは
、群１では５．０％（２５／４９６）の対象、群３では７．５％（３７／４９１）の対象、群３では３．９％（１５／３８８）の対象によって報告され、そして注射部位腫脹であり、これは群１では５．４％（２７／４９６）の対象、群２では６．５％（３２／４９１）の対象、群３では４．４＆（１７／３８８）の対象によって報告された。ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴ結合体ワクチンまたはＭＥＮＶＥＯ（登録商標）注射部位における大多数の反応は、グレード１または２の強さであり、Ｄ０～Ｄ３で始まり、１～３日間続いた。ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴ結合体ワクチンまたはＭＥＮＶＥＯ（登録商標）注射部位においてグレード３の任意の注射部位反応を有する対象の百分率は、群１では１．８％（９／４９６）、群２では２．２％（１１／４９２）、および群３では２．８％（１１／３８８）であった。ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴ結合体ワクチンまたはＭＥＮＶＥＯ（登録商標）注射部位においてグレード３の疼痛を有する対象の百分率は、群１では１．４％（７／４９６）、群２では１．０％（５／４９２）、および群３では２．３％（９／３８８）であった。グレード３の紅斑を有する対象の百分率は、群１では０．４％（２／４９６）、群２では１．２％（６／４９１）、および群３では０．５％（２／３８８）であった。グレード３の腫脹を有する対象の百分率は、群１では０．２％（１／４９６）、群２では０．４％（２／４９１）、および群３では０．３％（１／３８８）であった。強さのグレードは一般に以下の意味を有する。グレード１：活動に干渉しないグレード２：活動ｎいくらか干渉するグレード３：有意；毎日の活動を妨げる。
ワクチン接種後に少なくとも１件の応答型全身反応を報告した対象の百分率は、群１（５２．０％［２５８／４９６］）と群２（５１．０％［２５１／４９２］）で同等であった。筋肉痛が最も一般的に報告された応答型全身反応であり、その後に頭痛および倦怠感が続き、発熱の報告は極めて少なかった。筋肉痛は、群１の対象の３５．３％（１７５／４９６）、群２の対象の３５．２％（１７３／４９２）から報告された。頭痛は、群１の対象の３０．２％（１５０／４９６）、群２の対象の３０．９％（１５２／４９２）から報告された。倦怠感は、群１の対象の２６．０％（１２９／４９６）、群２の対象の２６．４％（１３０／４９２）から報告された。発熱は、群１の対象の１．４％（７／４９４）、群２の対象の１．２％（６／４８８）から報告された。
ワクチン接種後に少なくとも１件の応答型全身反応を有した対象の百分率は、群３（７０．６％［２７４／３８８］）と群４（６５．９％［１９１／２９０］）で同等であった。筋肉痛は、最も一般的に報告された応答型全身反応であった：群３の対象の６１．３％（２３８／３８８）、群４の対象の５５．４％（１６０／２８９）であった。頭痛は、群３の対象の３３．８％（１３１／３８８）、群４の対象の２９．０％（８４／２９０）から報告された。倦怠感は、群３の対象の２９．１％（１１３／３８８）、群４の対象の２７．９％（８１／２９０）から報告された。発熱は、群３の対象の１．６％（６／３８７）、群４の対象の０．７％（２／２８６）から報告された。全体的に、大多数の応答型全身反応は、グレード１またはグレード２の強さであり、Ｄ０～Ｄ３で始まり、１～３日間続いた。
全体的に、グレード３の応答型全身反応を報告した対象の百分率は、群１（３．８％［１９／４９６］）と群２（４．３％［２１／４９２］）で同等であった。グレード３の応答型全身反応を報告した対象の百分率は、群３（７．５％［２９／３８８］）と群４（５．５％［１６／２９０］）で同等であった。最も頻繁に報告されたグレード３応答型全身反応は、筋肉痛であり、その後に倦怠感および頭痛が続いた。グレード３の筋肉痛を報告した対象の百分率は、群１（１．６％［８／４９６］）と群２（１．８％［９／４９２］）、および群３（４．６％［１．８／３８８］）と群４（３．８％［１１／２８９］）で同等であった。グレード３の倦怠感を報告した対象の百分率は、群１（２．２％［１１／４９６］）と群２（２．８％［１４／４９２］）で同等であった。倦怠感は、群４（１．７％［５／２９０］）よりも群３（２．６％［１０／３８８］）から頻繁に報告された。
グレード３の頭痛を報告した対象の百分率は、群１（１．８％［９／４９６］）と群２（１．８％［９／４９２］）の両方で同一であった。頭痛は、群４（１．７％［５／２９０］）よりも群３（２．８％［１１／３８８］）から頻繁に報告された。
全体的に、Ｄ０～Ｄ３０で少なくとも１件の非応答型ＡＥを報告した対象の百分率は、４研究群において同等であった：群１では対象の２２．９％（１１５／５０３）、群２では対象の２５．７％（１２９／５０１）、群３では対象の２６．０％（１０２／３９２）、群４では対象２２．６％（６７／２９６）であった。わずかな対象しか即時型非応答型ＡＥを報告しなかった：群１では対象の０．６％（３／５０３）、群２では対象の０．２％（１／５０１）、群３では対象の０．８％（３／３９２）、群４では対象の０．７％（２／２９６）であった。任意のアナフィラキシーまたは生命を脅かす事象を含む即時型ＳＡＥはなかった。１２件の即時型非応答型ＡＥが、２３～３７日間に９人対象から報告された。１人の対象は、ワクチン接種のＤ０後の６カ月間に１件の即時型非応答型ＡＥを報告した。
ワクチン接種のＤ０後に少なくとも１件の非応答型非重篤注射部位ＡＲを報告した対象の百分率は、群１および群２で同等であり、それぞれ１．４％（７／５０３）および１．６％（８／５０１）であった。群４よりも群３において、少なくとも１件の非応答型非重篤注射部位ＡＲを報告した対象の百分率は数値的に高く、それぞれ４．３％（１７／３９２）および２．０％（６／２９６）であった。最も一般的に報告された比応答型注射部位反応は、そう痒であり、１４人の対象から報告されており、その後に皮下出血が続き、１３人の対象から報告された。これらの非応答型注射部位反応は、一般に任意のワクチン接種の後に起こるものである。
ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴ結合体ワクチンまたはＭＥＮＶＥＯ（登録商標）注射部位で少なくとも１件の非応答型非重篤注射部位ＡＲを報告した対象の百分率は、同等であった：群１では１．４％（７／５０３）、群２では１．６％（８／５０１）、および群３では１．８％（７／３９２）であった。群２における１人の対象は、１件のグレード３非応答型非重篤注射部位ＡＲの注射部位温感を報告し、それはＤ０に始まり、４日間続き、自然に消散した。処置は行わなかった。グレード３の非応答型非重篤注射部位ＡＲは、群１では報告されなかった、または群３のＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴ結合体ワクチン注射部位では、報告されなかった。
３０日以内に少なくとも１件の非応答型非重篤ＡＥを報告した対象の百分率は、４研究群において同等であった：群１では対象の２２．７％（１１４／５０３）、群２では対象の２５．５％（１２８／５０１）、群３では対象の２６．０％（１０２／３９２）、群４では対象の２２．３％（６６／２９６）であった。最も頻繁に報告されたものは、感染および侵襲（群１では対象の７．２％［３６／５０３］、群２では対象の８．０％［４０／５０１］、群３では対象の８．２％［３２／３９２］、群４では対象の６．１％［１８／２９６］）であり、最も一般的なタイプは上気道感染であった。
１６人の対象が試験期間中にＳＡＥを報告し、４人の対象はワクチン接種Ｄ０から３０日以内にＳＡＥを報告した。ワクチンに関連すると考えられたものはなく、研究を中止させたものはなかった。全ての患者が回復した。研究期間中に報告された死亡例は、なかった。
青年においてＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴ結合体ワクチンによるワクチン接種は安全であり、単独で与えられたとき、またはＴｄａｐおよびＨＰＶワクチンと同時に与えられたときに確認された安全性の問題は、なかった。ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴ結合体ワクチンの安全性プロファイルは、認可されたＭＥＮＶＥＯ（登録商標）ワクチンと同等であった。
ｆ）第ＩＩＩ相臨床脂環１－青年および成人におけるＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴのブースター用量の免疫原性および安全性
この研究は、青年（≧１５～＜１８歳）および成人（１８～５９歳）に筋肉内投与された単回用量（３０ｍＭの酢酸ナトリウムによりｐＨ６．０で緩衝された０．６７％のＮａＣｌ中の、合計６５μｇのＴＴに結合された多糖を血清型当たり１０μｇ）のＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴの安全性および免疫原性を評価した。対象には、ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴ投与の４～１０年前に１用量の四価髄膜炎菌結合体ワクチン（「プライミングワクチン（ｐｒｉｍｉｎｇ ｖａｃｃｉｎｅ）」を与えた（群１；ｎ＝４０２）。
認可された四価髄膜炎菌結合体ワクチンである、本明細書において「ＭｅｎＡＣＹＷ－ＤＴ」と喚ばれる、Ｍｅｎａｃｔｒａ（登録商標）（髄膜炎菌（群Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ－１３５）莢膜糖ジフテリアトキソイド結合体ワクチンを、対照群（群２；ｎ＝４０７）に投与した。群２の対象には、４～１０年前に１用量のプライミングワクチンも与えられている。
両方の群において、プライミングワクチンはＭｅｎＡＣＹＷ－ＤＴ（全ての対象の８６．３％）、ＭｅｎＡＣＹＷ－ＣＲＭ１９７（全ての対象の１１．２５％；ＭｅｎＡＣＹＷ－ＣＲＭ１９７は、臨床試験４に関して上記に考察されている）、または不明（全ての対象おｎ２．４５％；群１では９人、群２では１０人）であった。研究群の人口統計学は表１７の通りであった。
Figure 0007329087000019
ｈＳＢＡおよび仔ウサギ血清殺菌力（ｒＳＢＡ）アッセイを、治療後の３０日目に実施した。ｈＳＢＡアッセイも６日目に実施した。陽性血清反応を示した対象の百分率を表１８に提示する。ｈＳＢＡの結果では、陽性反応は、ベースライン力価が＜１：８の時にワクチン接種後力価が≧１：１６であること、またはベースライン力価が≧１：８の時に、ワクチン接種後に４倍の増加があることのいずれかであった。群１の３８４人の対象および群２の３８９人の対象が、３０日目に有効なｈＳＢＡの結果を有した。ｒＳＢＡの結果では、陽性反応は、ベースライン力価が＜１：８の時にワクチン接種後力価が≧１：３２であること、またはベースライン力価が≧１：８の時に、ワクチン接種後に４倍の増加があることのいずれかであった。
Figure 0007329087000020
３０日目にｈＳＢＡ力価≧１：８を示した対象の百分率は、全ての血清型において≧９９％であり、以前に投与されたワクチンの素生によって有意に変動しなかった（データ示されず）。
表１９は、ｈＳＢＡおよびｒＳＢＡにより測定した、０日目（治療前）および３０日目の幾何学平均力価（ＧＭＴ）を示す。３０日目に、ｈＳＢＡの結果を群全体として、およびＭｅｎＡＣＹＷ－ＤＴおよびＭｅｎＡＣＹーＣＲＭ１９７を以前に受けたサブグループにより表した。
Figure 0007329087000021
Figure 0007329087000022
上記に表された結果は、ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴの投与後の血清応答が、ブースターの３０日後で４つ全ての血清型においてＭｅｎＡＣＹＷ－ＤＴより大きかったことを、ｈＳＢＡアッセイの使用によって実証した対象の百分率を示す。ｈＳＢＡによるワクチン接種後ＧＭＴも、４つ全ての血清型において、ＭｅｎＡＣＹＷ－ＤＴに対して数値的に高かった。
更に、単回用量のＭｅｎＡＣＹＷ－ＤＴまたはＭｅｎＡＣＹＷ－ＣＲＭ１９７を４～１０年前に受けた成人および青年への単回用量のＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴの投与は、十分に耐容され、新たな安全性の問題または安全性のシグナルを何も生じなかった。以下のことを安全性に関して観察した：ワクチン接種の３０分後に報告された任意の非応答型全身ＡＥの発生、性質、持続時間、強さ、およびワクチン接種との関連性；ワクチン接種後から７日間までに発生した応答型注射部位反応の発生、発症時点、発生の日数、強さ、行った処置、および反応が研究の早期中止をもたらしたか；ワクチン接種後から７日間までに発生した応答型全身反応の発生、発症時点、発生の日数、強さ、行った処置、および反応が研究の早期中止をもたらしたか；Ｄ３０（＋１４日間）までに発生した非応答型ＡＥの発生、発症時点、発生の日数、強さ、行った処置、ワクチン接種との関連性（全身ＡＥのみ）、および事象が研究の早期中止をもたらしたか；ならびに試験全体にわたるＳＡＥの発生、性質、発症時点、持続期間、重篤度基準、ワクチン接種との関連性、帰結、およびＳＡＥが研究の早期中止をもたらしたか。応答型ＡＥは、本質的に上記の第ＩＩ相臨床試験４に記載された通りであった。
全体的に、少なくとも１件の応答型反応を報告した対象の百分率は、群１と群２：において同等であった：それぞれ、群１では対象の６４．３％（２５６／３９８）であり、群２では対象の６５．４％（２６３／４０２）であった。少なくとも１件のグレード３応答型反応を報告した対象の百分率は、群１と群２において同等であった：それぞれ、群１では対象の５．０％（２０／３９８）であり、群２では対象の５．５％（２２／４０２）であった。少なくとも１件の応答型注射部位反応を報告した対象の百分率は、群１と群２において同等であった：それぞれ、群１では対象の４６．５％（１８５／３９８）であり、群２では対象の４９．３％（１９８／４０２）であった。最も頻繁に報告された応答型注射部位反応は、群１の対象の４４．７％（１７８／３９８）、群２の対象の４８．８％（１９６／４０２）から報告された疼痛であった。紅斑および腫脹は、あまり頻繁に報告されなかった。紅斑および腫脹は、群２（それぞれ、１．５％［６／４０２］および０．７％［３／４０２］）よりも群１（それぞれ、５．０％［２０／３９８］および４．０％［１６／３９８］）において高い頻度で報告された。大部分はグレード１の強さであり、グレード２の紅斑および腫脹を報告した対象の百分率は、群１（それぞれ、０．５％［２／３９８］および０．８％［３／３９８］）と群２（９０．２％［１／４０２］および０．５％［２／４０２］）において同等であった。グレード３の紅斑および腫脹は、いずれの
群にからも報告されなかった。ＭｅｎＡＣＹＷ結合体ワクチンまたはＭｅｎａｃｔｒａ（登録商標）注射部位における大多数の反応は、グレード１または２の強さであり、大部分がＤ０～Ｄ３で始まり、大部分か１～３日間続いた。グレード３の応答型注射部位反応を報告した対象は、わずかであった：群１の対象の１．０％（４／３９８）、および群２の対象の２．０％（８／４０２）がグレード３の疼痛を報告した。いずれの群の対象もグレード３の紅斑または腫脹を報告しなかった。
少なくとも１件の応答型全身反応を報告した対象の百分率は、群１と群２において同等であった：それぞれ、群１では対象の５５．３％（２２０／３９８）であり、群２では対象の５４．２％（２１８／４０２）であった。筋肉痛および頭痛が最も頻繁に報告された応答型全身反応であった：筋肉痛は、群１では対象の３６．７％（１４６／３９８）から、群２では対象の３８．８％（１５６／４０２）から報告され、頭痛は、群１では対象の３７．９％（１５１／３９８）から、群２では対象の３３．３％（１３４／４０２）から報告された。倦怠感は、群１の対象の２７．６％（１１０／３９８）、群２の対象の２６．９％（１０８／４０２）から報告された。発熱は、群１の対象から報告されず（０．０％［０／３９０］）、群２の対象の０．５％（２／３９５）から報告された。全体的に、大多数の応答型全身反応は、グレード１またはグレード２の強さであり、Ｄ０～Ｄ３０で始まり、１～３日間続いた。グレード３の応答型全身反応を報告した対象は、わずかであった：グレード３の応答型全身反応を報告した対象の百分率は、発熱（それぞれ、０．０％［０／３９０］および０．３％［１／３９５］）、頭痛（それぞれ、２．３％［９／３９８］および．５％［１４／４０２］）、倦怠感（それぞれ、２．８％［１１／３９８］および３．５％［１４／４０２］）、ならびに筋肉痛（それぞれ、２．０％［８／３９８］および２．２％［９／４０２］）では、群１と群２で類似していた。
Ｄ０～Ｄ３０で少なくとも１件の非応答型非重篤ＡＥを報告した対象の百分率は、群１（２６．１％［１０５／４０２］）と群２（２５．３％［１０３／４０７］）において同等であった。非応答型非重篤ＡＥの数は、群１（ｎ＝１６４件のＡＥ）と群２（ｎ＝１６４件のＡＥ）において同一であった。非応答型非重篤ＡＥの小さく同等な百分率は、Ｄ０の与えられたワクチンに関連すると考えられた：群１の対象では３．０％（１２／４０２）、群２の対象では２．９％（１２／４０７）であった。これらの事象の大部分は、グレード１またはグレード２の強さであった。
群１では２人の対象（０．５％）が、少なくとも１件の即時型非応答型ＡＥ（両方の対象とも、めまい）を報告し、群２では対象者がいなかった（０．０％）。
合計して、群１では５人の対象（１．２％）および群２では６人の対象（１．５％）が、少なくとも１件の非応答型非重篤注射部位ＡＲを報告した。注射部位皮下出血は、群１において２人の対象（０．５％）、群２において３人の対象（０．７％）から報告された。注射部位そう痒は、群１において２人の対象（０．５％）、群２において１人の対象（０．２％）から報告された。注射部位温感は、群１において１人の対象（０．２％）から報告された。注射部位変色および注射部位じんま疹は、群２において、それぞれ１人の対象（０．２％）から報告された。注射部位変色はグレード３であり、研究の終了時まで続いた。
筋肉痛は、感染および侵襲は、最も頻繁に報告された非応答型非重篤全身ＡＥ（群１では対象の７．５％（３０／４０２）、群２では対象の６．６％［２７／４０７］）であった。最も頻繁に報告されたタイプの感染および侵襲は、群１では対象の１．７％（７／４０２）から、群２では対象１．７％（７／４０７）から報告された上咽頭炎、および群１では対象の１．０％（４／４０２）から、群２では対象の１．７％（７／４０７）から報告された上気道感染であった。また、頻繁に報告されたものは、呼吸器、胸郭、および縦
隔障害のＳＯＣの報告されたものであった：群１では対象の６．０％（２４／４０２）および群２では対象の６．６％（２７／４０７）であり、咳および中咽頭疼痛が含まれた。ワクチン接種の３０日以内の大部分の非応答型非重篤ＡＥは、グレード１およびグレード２の強さであった。少なくとも１件のグレード３非応答型非重篤ＡＥを報告した対象の百分率は、両方の群において同等であった：群１では対象の３．７％（１５／４０２）であり、群２では対象の４．２％（１７／４０７）であった。
非応答型非重篤全身ＡＲは、全身障害および投与部位状態の分類において最も頻繁に報告されており、群１では対象の２．２％（９／４０２）から、群２では対象の１．７％（７／４０７）から報告された。この分類において最も頻繁に報告された非応答型非重篤全身ＡＲは、疲労であった：群１では対象の０．５％（２／４０２）から、群２では対象の０．２％（１／４０７）から報告された。群２の１人の対象だけがグレード３の非応答型重篤全身ＡＲを報告した：胃腸障害のＳＯＣのグレード３嘔気および全身障害および投与部位状態の分類におけるグレード３の疲労であった。両方ともＤ０に始まり、２日間続いた。嘔気には薬剤を摂取し、疲労には処置を行わなかった。
いずれの群においても、研究を中止させるＡＥまたはＡＲはなかった。３人の対象がワクチン接種した最初の３０日以内にＳＡＥを経験した：群１の１人の対象における両側性肺塞栓症、ならびに群２の１人の対象における大うつ病性障害および胸痛であった。これらのＳＡＥのうち、研究者によってワクチンに関連すると考えられたものはなく、研究を中止させたものはなかった。
６人の対象（群１の４人および群２の２人）は、６カ月の追跡調査にわたって、Ｄ３０後に合計で６件のＳＡＥを経験した：群１の４人の対象（１．０％）は、４件のＳＡＥを経験し、群２の２人の対象（０．５％）は２件のＳＡＥを経験した。ＳＡＥのうち、ワクチンに関連すると考えられたものはなく、研究を中止させたものはなかった。死亡例は、研究中に報告されなかった。
四価髄膜炎菌結合体ワクチンで初回刺激された少なくとも１５歳の青年および成人におけるＭｅｎＡＣＹＷ結合体ワクチンのブースター用量によるワクチン接種は、安全であることが見出され、確認された安全性の問題はなかった。全体的に、ＭｅｎＡＣＹＷＴ結合体ワクチンの安全性プロファイルは、認可されたワクチンであるＭｅｎａｃｔｒａ（登録商標）と同等であった。
７．ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴ液体製剤の安定性
ＭｅｎＡＣＷＹ－ＣＲＭ１９７／Ｍｅｎｖｅｏ（登録商標）（ＣＲＭ１９７との四価結合体であり、ＭｅｎＡ結合体が凍結乾燥されている）、およびＭＣＶ４－ＴＴ／Ｎｉｍｅｎｒｉｘ（登録商標）（完全に凍結乾燥されている、ＴＴとの四価結合体）のような現存する髄膜炎菌多糖結合体ワクチンの一部または全ての構成成分は、液体製剤として長期保管されない。Ｍｅｎａｃｔｒａ（登録商標）（ＴＴとの四価結合体）は、液体製剤であるが、貯蔵寿命は２４カ月である。最近の文献において、Ｂｅｒｅｓｆｏｒｄらは、様々な現存するワクチンの安定性を特徴づけ、特定の条件下での脱重合および免疫原性の損失を観察して、「任意の新たに開発中のＭｅｎＡＣＷＹ多糖－タンパク質結合体ワクチンでは、主な推奨は、最終生成物を凍結乾燥して、免疫原性に影響を与える有害な分解を防止することを考慮すべき」との推奨を導き出した。Ｂｅｒｅｓｆｏｒｄら、Ｖａｃｃｉｎｅ ２０１７年６月１６日；３５巻（２８号）：要約、３５９８～３６０６頁。
液体製剤は、これらが製造工程で凍結乾燥を必要としないこと、投与前に再構成工程を必要としないこと、および再構成に関連した過誤の危険性を回避することから、少なくとも有利である。当然のことながら、これらの利点は、生成物それ自他が免疫原性を損なう
分解を被る場合には、関係がなくなる。したがって、ＭｅｎＡＣＹＷ結合体ワクチンは、液体製剤として２４カ月を超えて安定していることが望ましい。本開示によるＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴの安定性を以下のように特徴づけた。
ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴを、３０ｍＭの酢酸ナトリウムによりｐＨ６．０で緩衝された０．６７％のＮａＣｌ中に２℃～８℃で５４カ月間保存し、０、１、３、６、９、１２、１８、２４、３０、３６、４２、４８、および５４カ月から選択された時点で安定性を試験した（表２０を参照すること）。測定したパラメーターには、外観、滅菌性、異常な毒性の不在、それぞれの血清型における総多糖、遊離多糖の％、分子量、多分散度、ｐＨ、および免疫原性が含まれた。
ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴの加速安定性試験も、製剤を２３℃～２７℃で保管することによって実施した。試験は、１週間、３カ月間、および６カ月間に１回またはそれ以上実施した（表２１を参照すること）。
外観では、溶液は、２℃～８℃で５４カ月および２３℃～２７℃で６カ月間の全期間中において透明のままであり、欠陥は認められなかった（上記の列挙された全ての時点で試験した）。
異常な毒性の不在は、１用量のＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴの投与後の齧歯類（マウスまたはモルモット）を観察することによって決定した。全ての試験において、全ての動物が投与後の２８日間の試験期間で生存し、非特異的または未経験の応答はなく、動物は試験期間中に体重を減少しなかった。異常な毒性の試験は、０、１２、２４、３６、４２、４８、および５４カ月の時点で実施した。
ｐＨは、０カ月では６．１であり、全ての測定値は、時間経過の全体を通して６．１～６．３の範囲であった（ｐＨの時点は、２℃～８℃で０、１、６、１２、２４、３６、４２、４８、および５４カ月、ならびに２３℃～２７℃で６カ月であった）。５４カ月を含む試験時点のいずれにも増殖は観察されなかった（滅菌性の時点は、２℃～８℃で０、１２、２４、３６、４２、４８、および５４カ月、ならびに２３℃～２７℃で６カ月であった）。
総多糖は、Ｄｉｏｎｅｘ（商標）クロマトグラフィーにより測定した。遊離多糖の％は、Ｄｉｏｎｅｘ（商標）クロマトグラフィーおよびデオキシオコール酸塩沈殿によって測定した。分子量および多分散度は、サイズ排除クロマトグラフィー／多角度光散乱（ＳＥＣ／ＭＡＬＳ）によって測定した。
２℃～８℃の結果は表２０にあり、２３℃～２７℃の結果は表２１にある。
Figure 0007329087000023
Figure 0007329087000024
結果は、２℃～８℃で５４カ月および２３℃～２７℃の６カ月の期間全体を通して、良好な安定性を示した。特に、２℃～８℃では、４つ全ての血清型にはＴＴへの多糖の結合に最小限の損失（遊離多糖の％に０～３％の増加）しかなく、免疫原性は全ての時点において実質的に維持されたが、２４カ月が例外であり、低い値は外れ値であると思われる、ならびに／または、３６カ月以上の観察に基づく技術的な問題によってもたらされたと思われ、これらは、０および１２カ月の測定に類似している。２３℃～２７℃では、６カ月間でＭｅｎＡ、ＭｅｎＹ、およびＭｅｎＷに遊離多糖が増加しているが、レベルは、許容限界の４０％を下回ったままであった。免疫原性は、６カ月で依然として存在していた。
これらの結果から、ＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴを、例えば、包装、流通、および保管の際に冷蔵下で液体製剤として長期間維持することができ、保存のための凍結乾燥または他の手段が不必要になると結論づけることができる。
前述の発明は、理解の明瞭さを目的として例示および実施例によって一部の詳細が記載されているが、記載および実施例は、本発明の範囲を制限するものとして考慮されるべきではない。

Claims (22)

  1. ナイセリア・メニンギティディスＭｅｎＡ莢膜多糖と担体タンパク質との結合体を生成する方法であって、
    ａ）ＭｅｎＡ莢膜多糖を、カルバメート連結を形成することができる活性化剤で活性化する工程であり、活性化剤が、ＭｅｎＡ莢膜多糖の２０倍から５０倍のモル過剰量で存在する工程；
    ｂ）活性化されたＭｅｎＡ莢膜多糖を部分的にクエンチし、活性化されたＭｅｎＡ莢膜多糖を、ＭｅｎＡ莢膜多糖反復単位に対して０．３～１．０のモル比で添加されたジヒドラジドリンカーで誘導体化する工程であり、ＭｅｎＡ莢膜多糖が、１０～１００個の糖反復単位当たり１つのジヒドラジドリンカーの比で誘導体化される工程；
    ｃ）誘導体化されたＭｅｎＡ莢膜多糖をカルボジイミド化学物質により担体タンパク質に結合させる工程であり、ＭｅｎＡ莢膜多糖が、結合反応の開始時に、担体タンパク質に対して３：１～５：１の重量対重量比（ｗｅｉｇｈｔ－ｔｏ－ｗｅｉｇｈｔ ｒａｔｉｏ）で存在し、それによって結合体を形成する工程を含み、ここで、担体タンパク質は破傷風トキソイドであり、結合体は０．７～１．４の多糖対担体タンパク質質量比を有する、該方法。
  2. ジヒドラジドリンカーがＭｅｎＡ莢膜多糖反復単位に対して０．４～０．６のモル比で添加される、請求項１に記載の方法。
  3. グリセロールにより反応をクエンチする工程を更に含む、請求項１または２に記載の方法。
  4. ジヒドラジドリンカーがアジピン酸ジヒドラジドである、請求項１～３のいずれか１項に記載の方法。
  5. 誘導体化されたＭｅｎＡ莢膜多糖が、結合反応において１０ｇ／Ｌ～２０ｇ／Ｌの出発濃度である、請求項１～４のいずれか１項に記載の方法。
  6. 活性化剤が、ＣＤＩ（１，１’－カルボニルジイミダゾール）である、請求項１～５の
    いずれか１項に記載の方法。
  7. 活性化剤が、ＭｅｎＡ莢膜多糖の３５倍から４５倍のモル過剰量で活性化工程に存在する、請求項１～６のいずれか１項に記載の方法。
  8. 結合工程が、担体タンパク質をＮ－エチル－Ｎ’－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドと反応させることを含む、請求項１～７のいずれか１項に記載の方法。
  9. ナイセリア・メニンギティディス莢膜多糖と担体タンパク質との結合体を生成する方法であって、
    ａ）莢膜多糖を過ヨウ素酸塩処理（periodate treatment）により活性化し、それによって、ジオールを、多糖１ｍｇ当たりアルデヒドを少なくとも５０ｎｍｏｌまでアルデヒドに変換する工程；
    ｂ）活性化された莢膜多糖を、還元的アミノ化により担体タンパク質に結合させる工程であり、活性化された莢膜多糖が、担体タンパク質に対して１：１～５：１の重量対重量比で結合反応に存在し、それによって結合体、結合体では莢膜多糖が第二級アミンを介して担体タンパク質に直接結合している、を形成する工程を含み、
    ここで、担体タンパク質が破傷風トキソイドであり、莢膜多糖が、多糖ｍｇ当たり０．３μｍｏｌから多糖ｍｇ当たり１．６μｍｏｌのＯ－アセチル化レベルを有するＭｅｎＣ莢膜多糖である、該方法。
  10. 莢膜多糖が、担体タンパク質に対して１．５～３：１の重量対重量比で結合反応に存在する、請求項９に記載の方法。
  11. 還元的アミノ化が、シアノ水素化ホウ素、ピリジンボラン（Ｃ５Ｈ８ＢＮ）またはピコリンボラン錯体（Ｃ６Ｈ７Ｎ・ＢＨ３）を使用してイミンをアミンに還元することを含む、請求項９または１０に記載の方法。
  12. 結合体における未反応アルデヒドを還元試薬によりアルコールに変換することを更に含み、ここで、還元試薬が水素化ホウ素である、請求項９～１１のいずれか１項に記載の方法。
  13. 過ヨウ素酸塩（periodate）を１ｍＭ～４ｍＭまたは１．５ｍＭ～３ｍＭの濃度で添加して、莢膜多糖を活性化する、請求項９～１２のいずれか１項に記載の方法。
  14. 莢膜多糖が、結合反応の前に１００～２００ｋＤａ、または１２５～１７５ｋＤａのサイズに低減される、請求項１～１３のいずれか１項に記載の方法。
  15. 結合体を疎水性相互作用クロマトグラフィーにより精製することを更に含む、請求項１～１４のいずれか１項に記載の方法。
  16. 結合体を混合モード樹脂クロマトグラフィーにより精製することを更に含む、請求項１～１４のいずれか１項に記載の方法。
  17. 請求項１～１６のいずれか１項に記載の方法であって、該方法が、
    ａ）ナイセリア・メニンギティディスＭｅｎＡ莢膜多糖と担体タンパク質の第１の結合体；
    ｂ）ナイセリア・メニンギティディスＭｅｎＣ莢膜多糖と担体タンパク質の第２の結合体；
    ｃ）ナイセリア・メニンギティディスＭｅｎＷ－１３５莢膜多糖と担体タンパク質の第
    ３の結合体；および
    ｄ）ナイセリア・メニンギティディスＭｅｎＹ莢膜多糖と担体タンパク質の第４の結合体を含むワクチン組成物を調整する工程をさらに含み、
    ここで、第１の結合体が、請求項１～８，１４～１６のいずれか１項に記載の方法で得られたものであり、そして、
    第２の結合体が、請求項９～１６のいずれか１項に記載の方法で得られたものである、該方法。
  18. ワクチン組成物がアジュバントを含まない、請求項１７に記載の方法。
  19. ワクチン組成物が薬学的に許容される緩衝液を更に含む、請求項１７または１８に記載の方法。
  20. ワクチン組成物がｐＨが５．５～６．５の酢酸緩衝液を含む、請求項１９に記載の方法。
  21. 該ワクチン組成物が薬学的に許容される塩を更に含む、ここで、薬学的に許容される塩が塩化ナトリウムである、請求項１７～２０のいずれか１項に記載の方法。
  22. 第１、第２、第３、および第４の結合体の少なくとも１つ、２つ、３つ、または４つ全てが、多糖と担体タンパク質との複数の結合点を含む、請求項１７～２１のいずれか１項に記載の方法。
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