JP7313345B2 - デング熱に対するブースターワクチン接種のための組成物 - Google Patents

Description

本出願は、本出願の一部として添付の配列表中に含まれるヌクレオチドおよび／またはアミノ酸の配列を参照によって組み入れる。

本発明は、ヒト対象においてデング熱ウイルスに対して応答する中和抗体を産生させる方法におけるブースターワクチンとしてのワクチン組成物およびそのような組成物の使用に関する。

デング熱は、流行性の伝染のリスクがある地域に住む世界の人口の約半分でマラリアに次ぐ第２の最も重要な感染性の熱帯性疾患である。毎年デング熱の３億９千万症例があると推定され、およそ９千６百万人の人々が臨床的に明確な疾患を有した。各年、小児を含む５００，０００と推定される人々が、入院を必要とする重症形態のデング熱にかかり、大流行中にヘルスケアシステムに巨大な歪みをもたらす。重症形態のデング熱に罹患する人々の約２．５％が死亡するであろう（（非特許文献１）。ＵＲＬ：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｗｈｏ．ｉｎｔ／ｍｅｄｉａｃｅｎｔｒｅ／ｆａｃｔｓｈｅｅｔｓ／ｆｓ１１７／ｅｎ／．から入手可能）したがって、ＷＨＯによれば、地方病性の国における人々を保護するために、４種の血清型のデング熱ウイルスに対する安全なおよび効果的なワクチンを開発する、差し迫った必要がある。

デング熱疾患は、フラビウイルス属の、抗原性は異なるが密接に関係する４種の血清型のデング熱ウイルスによって惹起される（（非特許文献２）；（非特許文献３）；（非特許文献４）；（非特許文献５））。デング熱ウイルスはプラスのセンス一本鎖ＲＮＡウイルスである。

デング熱疾患は、ウイルスに感染したネッタイシマカ（Ａｅｄｅｓａｅｇｙｐｔｉ ｍｏｓｑｕｉｔｏ）が血を吸う間にデング熱ウイルスの注入により移される。４～１０日のインキュベーション期間の後、該疾病は突然始まって、３相：発熱（２から７日）、危機的（２４～４８時間この間に重症合併症が起こり得る）および回復（４８～７２時間）が続く。危機相中に、生命を脅かす合併症、例えば出血、ショックおよび急性の器官機能障害が起こり得る。これらの予測できないアウトカムの適切な管理により、致死率を低下させることができる。デング熱の治癒は７から１０日の後に完結するが、通常、無力症が長引く。減少した白血球および血小板数がしばしば観察される。

デング出血熱（ＤＨＦ）を含むデング熱疾患の重症形態は、デング熱ウイルス感染の可能性として致命的な合併症である。ＤＨＦは、高熱およびデング熱疾患の症状により特徴づけられるが、極度の嗜眠および無力症を伴う。増大した静脈の透過性および異常ホメオスタシスにより、血液体積の減少、低血圧、および重症の場合には、血液量減少ショックおよび内出血に至り得る。２つの要因が、ＤＨＦの発生において主要な役割を演じているように思われる―高レベルのウイルス血症を伴う急速なウイルスの複製（疾患の重症度はウイルス血症のレベルと関連する；（非特許文献６））および高レベルの炎症性メディエーターの放出による主要な炎症性応答（（非特許文献７）；（非特許文献８））である。ＤＨＦの死亡率は、処置しないと１０％に達し得るが、処置にアクセスを有する大部分のセンターでは１％未満である。デング熱疾患感染は、１００を超える熱帯性の国の地方病性の病気であり、ＤＨＦは６０のこれらの国で詳細に報道されている（非特許文献９）。

デング熱ショック症候群（ＤＳＳ）はＤＨＦに共通の進行状態であり、しばしば致死的である。ＤＳＳは、静脈外の区域への血漿漏洩に至る全身性の血管炎から生ずる。ＤＳＳは、急速なおよび貧弱な音量の脈拍、低血圧、冷たい四肢、および不眠により特徴づけられる。

アジアでは、ＤＨＦおよびＤＳＳは、主として小児で観察され、ＤＨＦを有するものの約９０％は１５歳未満である（（非特許文献１０）；（非特許文献１１））。対照的に、カリブ海地域および中央アメリカにおける大発生は、主に成人を冒した（（非特許文献１２）。デング熱疾患の発生率は、デング熱が地方病性である多くの国における比較的高年齢の群で増大してきた（（非特許文献１３）；（非特許文献１４））。

デング熱ウイルスの４種の血清型は、約６０～８０％の配列相同性を有する。１種のデング熱血清型による感染は、持続的な相同性免疫を提供するが、しかし、限定された異種の免疫である（非特許文献１５）。したがって、１種の血清型のデング熱に感染した個体は、その後異なる血清型に感染する可能性もある。異なるデング熱ウイルスの血清型から生ずる第２の感染は、理論的にＤＨＦの発生にとってリスク要因であると考えられ、その理由は、ＤＨＦを表す患者は、他の４種の血清型のデング熱ウイルスのうち少なくとも１種に以前に曝露されているからである。

今日まで、デング熱疾患のための特異的処置はない。デング熱疾患のための処置は、症状に基づいてベッドにおける休息、解熱剤および鎮痛剤による発熱および疼痛の制御、および適切な飲み方による。ＤＨＦの処置には、体液損失の埋め合わせ、凝固因子の置き換えおよびヘパリンの点滴が必要である。

蚊の制御および刺されることからヒトの保護などのデング熱の予防手段は、有効性が限定され、実施が困難であり、費用がかかるので、安全なおよび効果的なデング熱ワクチンがあれば、予防の最良の様式であろう。

本出願人は、以前、デング熱ワクチンを開発して、市販名Ｄｅｎｇｖａｘｉａ（登録商標）で上市した。このデング熱ワクチンのワクチン有効性は、とりわけ２から１６歳の対象で立証された（（非特許文献１６）および（非特許文献１７）。

しかしながら、このデング熱ワクチンで得られた結果の徹底的な分析は、それがワクチン接種時にすでに血清が陽性であった対象、すなわち、血清型にかかわらずデング熱ウイルスにより以前感染していた対象のデング熱疾患に対する保護に、特に効果的であることを示す。

しかしながら、最初はデング熱にナイーブな、すなわち以前にデング熱ウイルスに感染したことがない対象の、最初のワクチン接種後の中和抗体レベルは、デング熱免疫対象で生じた中和抗体の応答よりも低い。

異なる第ＩＩＩ相の有効性研究からの結果の分析、すなわち、より高いレベルの中和抗体（ＰＲＮＴ_５０により測定した）がデング熱疾患を発生する確率を減少させることに基づいて、デング熱ワクチンについて、保護の絶対的相関は未だ確立されていないが、より高い中和抗体レベルは、より高いワクチン有効性、すなわちデング熱疾患のより低いリスクと関連すると考えられる。換言すれば、ワクチン接種の２８日後のＰＲＮＴ_５０力価は、リスクと逆相関すると考えられる（非特許文献１８）。

Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ、Ｄｅｎｇｕｅ ａｎｄ ｄｅｎｇｕｅ ｈａｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ ｆｅｖｅｒ、２０１５年５月に更新されたファクトシートＮ°１１７ Ｇｕｂｌｅｒら、１９８８年：「Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ａｒｔｈｒｏｐｏｄ－ｂｏｒｎｅ ｖｉｒａｌ ｄｉｓｅａｓｅ」」。ＭｏｎａｔｈＴＰＭ編、ＢｏｃａＲａｔｏｎ（フロリダ州）編：ＣＲＣＰｒｅｓｓ：２２３～６０頁 Ｋａｕｔｎｅｒら、１９９７年、Ｊ．ｏｆ Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ、１３１巻：５１６～５２４頁 Ｒｉｇａｕ－Ｐｅｒｅｚら、１９９８年、Ｌａｎｃｅｔ、３５２巻：９７１～９７７頁 Ｖａｕｇｈｎら、１９９７年、Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．、１７６巻：３２２～３０頁 Ｖａｕｇｈｎら、２０００年、Ｊ．Ｉｎｆ．Ｄｉｓ．、１８１巻：２～９頁 ＲｏｔｈｍａｎおよびＥｎｎｉｓ、１９９９年、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、２５７巻：１～６頁 ＡｌａｎＬ．Ｒｏｔｈｍａｎ ２０１１年、Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１１巻：５３２～５４３頁 Ｇｕｂｌｅｒ、２００２年、ＴＲＥＮＤＳ ｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、１０巻：１００～１０３頁 Ｍａｌａｖｉｇｅら、２００４年、Ｐｏｓｔｇｒａｄ Ｍｅｄ．Ｊ．、８０巻：５８８～６０１頁 Ｍｅｕｌｅｎら、２０００年、Ｔｒｏｐ．Ｍｅｄ．Ｉｎｔ．Ｈｅａｌｔｈ、５巻：３２５～９頁 Ｍａｌａｖｉｇｅら、２００４年、Ｐｏｓｔｇｒａｄ Ｍｅｄ．Ｊ．、８０巻：５８８～６０１頁 Ｓａｂｃｈａｒｅｏｎら、２０１２年、Ｌａｎｃｅｔ、３８０巻、１５５９～１５６７頁 Ｍｅｓｓｉｎａら、２０１４年、Ｔｒｅｎｄｓ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．、２２巻、１３８～１４６頁 Ｓａｂｉｎ、１９５２年、Ａｍ．Ｊ．Ｔｒｏｐ．Ｍｅｄ．Ｈｙｇ．、１巻：３０～５０頁 Ｃａｐｅｄｉｎｇ ＭＲら、２０１４年、Ｌａｎｃｅｔ；３８４巻（９９５１号）：１３５８～６５頁 ＶｉｌｌａｒＬら、２０１５年、Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ．、３７２巻（２号）：１１３～２３頁） Ｍｏｏｄｉｅ、Ｚ．ら、「Ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ Ａｎａｌｙｓｉs ｏｆ Ｔｅｔｒａｖａｌｅｎｔ Ｄｅｎｇｕｅ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｅｆｆｉｃａｃｙ Ｔｒｉａｌｓ ｉｎ Ａｓｉａ ａｎｄ Ｌａｔｉｎ Ａｍｅｒｉｃａ）、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓ（２０１８年）、２１７巻、７４２～７５３頁）

したがって、前にデング熱ウイルスに自然に感染したことがないヒト対象の中和抗体の応答を、彼らをデング熱に対して、血清型に関わらず効率的に保護するために増強することを目標とするワクチン接種コースで有用なワクチン組成物または方法を開発する必要性がある。

本発明は、ヒト対象においてデング熱ウイルスに対する中和抗体の応答を誘発するためのブースターワクチン接種の方法における使用のためのワクチン組成物であって、前記組成物が、血清型１から４の少なくとも１種のデング熱抗原または前記抗原を対象において発現することができる核酸構築物を含み、
前記対象が、血清型１から４のデング熱ウイルスの各々に対する初回ワクチン接種コースを前に受けており、前記対象が前記初回ワクチン接種コースの前には、デング熱にナイーブであり、
前記ブースターワクチン接種が、血清型１から４の各々に対する中和抗体力価の少なくとも２倍の増大を生ずる、ワクチン組成物に関する。

本発明は、ヒト対象においてデング熱ウイルスに対する中和抗体の応答を誘発する方法における使用のためのワクチン組成物であって、前記組成物が、血清型１から４の各々のデング熱抗原、または前記対象において血清型１から４の各々のデング熱抗原を発現することができる核酸構築物を含み；
前記組成物が：
（ａ）初回ワクチン接種と、それに続く
（ｂ）ブースターワクチン接種
として投与され、
ヒト対象が、最初はデング熱にナイーブである、
ワクチン組成物にさらに関する。

定義
本明細書において使用される用語「デング熱疾患」は、デング熱ウイルスによる感染後に個体によって示される全てのグレードの重症度の臨床的症状を指す。本明細書において使用される用語デング熱疾患は、デング熱の発熱のようなデング熱疾患の軽症の発現および本明細書で定義される重症デング熱または本明細書で定義されるデング出血熱（ＤＨＦ）のようなデング熱のより重症発現の両方を包含する。１９７５以来、臨床的デング熱は、世界保健機関指針（１９９７年更新）により、（ｉ）デング熱の発熱または（ｉｉ）デング出血熱として分類された（Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ．Ｄｅｎｇｕｅ ｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ ｆｅｖｅｒ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ、ｔｒｅａｔｍｅｎｔ、ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌ 第２版．Ｇｅｎｅｖａ：ＷＨＯ、１９９７年；ＩＳＢＮ９２４ １５４５００ ３）。２００９年に、ＷＨＯは、臨床的デング熱を、（ｉ）前兆の徴候を示すかもしくは示さないデング熱または（ｉｉ）重症のデング熱として分類する新しい指針を発した。両方の分類が、Ｓｒｉｋｉａｔｋａｃｈｏｒｎら、Ｃｌｉｎ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．（２０１１年）５３巻（６号）：５６３頁の図１および２に示されている。初期の１９９７年のＷＨＯ分類によれば、デング熱は：（ｉ）頭痛、関節痛、眼窩後の疼痛、皮疹、筋肉痛、出血性発現、および白血球減少から選択される少なくとも２つの症状を有する発熱の存在と一緒に：（ｉｉ）支持する血清反応または他の確立されたデング熱の症例と同じ場所および時期における発生により診断される。デング出血熱への進行は、発熱、出血の発現、血小板減少症および証明された血漿漏洩が全て観察されたときに確認される。２００９年のＷＨＯ分類によれば、デング熱の診断には：（ｉ）発熱および吐き気、嘔吐、皮疹、痛みおよび疼痛、陽性の止血帯試験、または腹痛および敏感な痛み、持続性嘔吐、臨床的体液貯留、粘膜の出血、嗜眠または不眠、肝肥大＞２ｃｍまたは血小板数における急速な減少と同時に起こるヘマトクリットの増大から選択されるいずれかの前兆となる徴候から選択される少なくとも２つの臨床的症状；と一緒に（ｉｉ）支持する血清反応または他の確認されたデング熱の症例と同じ場所および時期における発生の存在が必要である。２００９年のＷＨＯの分類によれば、重症のデング熱は、以下の追加の事象：（ｉ）ショックまたは呼吸困難（体液貯留）に至る重症の血漿漏洩；（ｉｉ）臨床医により評価された重症の出血；または（ｉｉｉ）重症の器官の困難な状況（すなわち肝：ＡＳＴ、ＡＬＴ≧１０００；ＣＮＳ：弱った意識または心臓または他の器官）のいずれかの観察によるデング熱の診断と定義される。

本明細書において使用される用語「デング出血熱」または「ＤＨＦ」は、１９９７年のＷＨＯ定義と一致しており、以下の症状を指す
－ １）臨床的発現：
（ａ）発熱：高い（３８℃以上）および連続して２から７日持続する急性発症；
（ｂ）以下の出血性発現：陽性の止血帯試験、点状出血、紫斑病、斑状出血、鼻血、歯肉出血、および吐血および／または下血のいずれか；
－ ２）試験室的所見：
（ａ）血小板減少症（血小板数≦１００×１０^９／Ｌ）；
（ｂ）血液濃縮（２０％以上増大したヘマトクリット）により示される血漿漏洩または胸水貯留（胸部Ｘ線で見られる）および／または腹水および／または低アルブミン血症。最初の２つの臨床的基準（すなわち発熱および出血性発現）に加わる血小板減少症および血漿漏洩の徴候は、ＤＨＦの臨床的診断を確定するために十分である。胸水貯留（胸部Ｘ線で見られる）および／または低アルブミン血症は、血漿漏洩を支持する証拠を提供する。本明細書において使用されるＤＨＦは、その重症度の根拠に基づいてさらに定義することができる。したがってＤＨＦは、グレードＩ、グレードＩＩ、グレードＩＩＩまたはグレードＩＶであると定義することができる（Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ．Ｄｅｎｇｕｅ ｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ ｆｅｖｅｒ： Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ、ｔｒｅａｔｍｅｎｔ、ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌ 第２版。Ｇｅｎｅｖａ： ＷＨＯ、１９９７年； ＩＳＢＮ ９２ ４ １５４５００ ３）。グレードＩは、非特異的な体質上の症状により伴われる発熱と定義される；出血性のみの発現は陽性の止血帯試験である。グレードＩＩは、グレードＩ患者の発現に加えて、通常皮膚または他の出血の形態における自発的出血と定義される。グレードＩＩＩは、冷たいじっとりした皮膚および不眠の存在とともに、急速な弱い脈拍および狭窄の脈拍圧（２０ｍｍＨｇ以下）または低血圧により発現された循環不全と定義される。グレードＩＶは、検出不能の血液圧および脈拍による深刻なショックと定義される。当業者により理解されるように、本発明の実行、例えば、ＤＨＦに対する保護の方法は、前記ＤＨＦでは、ウイルス学的に確認する必要はない。

本明細書において使用される用語「ウイルス学的に確認されたデング熱」は、デング熱ウイルスにより誘発されたことが、例えば逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ＰＣＲ）によりおよび／またはデング熱非構造１（ＮＳ１）タンパク質の酵素イムノアッセイ（ＥＬＩＳＡ）により確認される、急性発熱エピソード（すなわち少なくとも２日連続して温度≧３８℃）を指す。ＲＴ－ＰＣＲ方法では、市販のキットを使用して、ＲＮＡが血清から抽出されて、可能性のあるＴａｑポリメラーゼ阻害剤または干渉因子は廃棄される。次に、デング熱スクリーンＲＴ－ＰＣＲ反応が、デング熱ウイルスの中に保存された遺伝子配列からプライマーを用いて実施される。結果は、既知の濃度のウイルスのゲノム核酸配列を含有する標準との比較によりｌｏｇ_１０プラーク形成単位（ＰＦＵ）／ｍＬの濃度で表現される。感染性デング熱ウイルス血症後の血清型同定は、Ｓｉｍｐｌｅｘａ（商標）デング熱ＲＴ－ＰＣＲアッセイ（Ｆｏｃｕｓ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、Ｉｎｃ．カリフォルニア州、米国）を用いて血清試料を試験することにより決定される。簡単に説明すると、市販のキットを使用して、ＲＮＡを血清から抽出して、可能性のあるポリメラーゼ阻害剤または干渉因子は廃棄する。次にデング熱配列から血清型特異的プライマーを組み込んでいるＳｉｍｐｌｅｘａ（商標）アッセイを実行する。結果は、各デング熱の血清型について、検出されたかまたは検出されなかったと定性的に表現されて報告される。Ｓｉｍｐｌｅｘａ（商標）アッセイは、血清型同定のために、全てのデング熱スクリーンＲＴ－ＰＣＲ陽性またはデング熱ＮＳ１ Ａｇ ＥＬＩＳＡ陽性試料で使用される。ＮＳ１ ＥＬＩＳＡは、市販のキット（Ｐｌａｔｅｌｉａ（商標）デング熱ＮＳ１ Ａｇ、Ｂｉｏ－Ｒａｄ、Ｍａｒｎｅｓ－ｌａ－Ｃｏｑｕｅｔｔｅ、フランス）を使用して実行される。メーカーの使用説明書の通りに行う。デング熱ＮＳ１ Ａｇ試験は、血清中のＮＳ１ Ａｇの検出を可能にするワンステップサンドイッチ－ＥＬＩＳＡに基づくアッセイである。該試験は、マウスのモノクローナルＡｂ（ＭＡｂ）を、捕捉および検出のために使用する。試料および対照は、Ｍａｂでコートされたマイクロプレートのウェル内でコンジュゲートと直接および同時にインキュベートされる。ＮＳ１ Ａｇが試料中に存在すれば、免疫複合体ＭＡｂ－ＮＳ１－ＭＡｂ／ペルオキシダーゼが形成されるであろう。免疫複合体の存在は、発色反応を開始する発色溶液の添加により立証される。室温におけるインキュベーションの３０分後に、酵素反応を酸溶液の添加により停止させる。４５０／６２０ｎｍに設定された分光光度計を用いて得られた光学密度（ＯＤ）読み取り値は、試料中におけるＮＳ１ Ａｇの存在量と比例する。個々の試料中におけるＮＳ１ Ａｇの存在は、試料のＯＤ読み取りをカットオフの対照血清のＯＤと比較することにより決定される。０．５未満、０．５以上～１．０未満、および１以上の試料比が、陰性、不確か、および陽性の結果を、それぞれ示す。

本明細書において使用される用語「重症のデング熱」または「重症のデング熱疾患」は、本明細書で報告される第ＩＩＩ相の臨床実験を統括するために設立された独立のデータ監視委員会（ＩＤＭＣ）により定義された重症のデング熱を指す。デング熱の発熱の場合におけるＩＤＭＣの定義に従って、以下の基準のいずれか１つの様相が重症デング熱の診断結果となる：（ｉ）ショック（小児または青年における脈拍圧≦２０ｍｍＨｇ、または頻脈、弱い脈拍および衰えた灌流と低血圧［≦９０ｍｍＨｇ］）；（ｉｉ）輸血を必要とする出血；（ｉｉｉ）脳障害すなわち、意識不明または意識低下状態または単なる熱性の痙攣もしくは限局性の神経学的徴候に帰することができない痙攣。意識低下の状態または意識不明は、グラスゴー昏睡スケール（ＧＣＳ）スコアにより支持されなければならない；（ｉｖ）肝機能障害（ＡＳＴ＞１０００Ｕ／Ｌまたはプロトロンビン時間［ＰＴ］国際標準化比［ＩＮＲ］＞１．５）；（ｖ）弱った腎臓機能（血清クレアチニン≧１．５ｍｇ／ｄＬ）または（ｖｉ）胸部Ｘ線（ＣＸＲ）、心エコー検査、心電図（ＥＣＧ）または心臓の酵素により、これらが入手可能な場合に支持される心筋炎、心膜炎または心臓不全（臨床的心臓不全）。当業者により理解されるように、本発明の実行において、例えば、重症のデング熱に対して保護する方法は、前記重症のデング熱がウイルス学的に確認される必要はなく、デング熱疾患の他のウイルス学的に確認された症例と単に同じ場所で起こるだけでよい。

用語「デング熱発熱ウイルス」、「デング熱ウイルス」および「ＤＥＮ」は互換的に使用される。それらは、フラビウイルス科のフラビウイルス属に属するプラスの一本鎖ＲＮＡウイルスを指す。デング熱ウイルスの４種の異なる血清型（血清型１、２、３および４）があり、約６０～８０％の配列相同性を有する。以下の要素を含むゲノムの構成：５’非コード地域（ＮＣＲ）、構造タンパク質（カプシド（Ｃ）、プレメンブレン（pre-membrane）（ｐｒＭ）およびエンベロープ（Ｅ））をコードする地域および非構造タンパク質（ＮＳ１－ＮＳ２Ａ－ＮＳ２Ｂ－ＮＳ３－ＮＳ４Ａ－ＮＳ４Ｂ－ＮＳ５）をコードする地域および３’ＮＣＲ。デング熱ウイルスのゲノムは、翻訳後プロセシングを受ける単一のポリタンパク質に翻訳される中断されないコード地域をコードしている。

本明細書において使用される用語「生の減弱されたデング熱ウイルス」とは、毒性の野生型デング熱ウイルスから誘導された、弱毒化されて対応する野生デング熱ウイルスと関連する症状の同じ組み合わせにより特徴づけられる疾患状態を誘発することができなくなる遺伝子改変による、生のデング熱ウイルスを指す。生の減弱されたデング熱ウイルスは、野生ウイルスから、例えば、組換え核酸技術、部位が指定された突然変異生成、複製コンピテント細胞に基づく連続継代、化学的突然変異生成、電磁放射線またはウイルスの核酸の小さい切片の欠失のような遺伝子操作により製造される。本発明の実行において有用な生の減弱されたデング熱ウイルスの例は、ＶＤＶ１（ＷＯ２００６／１３４４３３）、ＶＤＶ２（ＷＯ２００６／１３４４４３）、および例えば出願ＷＯ０２／０６６６２１、ＷＯ００／５７９０４、ＷＯ００／５７９０８、ＷＯ００／５７９０９、ＷＯ００／５７９１０、ＷＯ０２／０９５００７５およびＷＯ０２／１０２８２８に記載された株を含む。本発明の組成物中における血清型１のデング熱抗原として使用される血清型１の生の減弱されたデング熱ウイルスは、ＬＡＶ１およびＶＤＶ１を含む。本発明の組成物中における血清型２のデング熱抗原として使用される血清型２の生の減弱されたデング熱ウイルスは、ＬＡＶ２およびＶＤＶ２を含む。用語「ＶＤＶ」は、Ｖｅｒｏ細胞中で複製することができて、ヒトにおける中和抗体の導入を含む特異的液性応答を誘発することができる生の減弱されたデング熱ウイルスを表す。

「ＬＡＶ１」ともいわれる１６００７／ＰＤＫ１３として知られている血清型１の生の減弱されたデング熱ウイルスは、野生型ＤＥＮ－１（デング熱ウイルスの血清型１）１６００７株から、野生株から第１代のイヌ腎臓（ＰＤＫ）細胞を通して１３継代を受けることにより誘導された。ＬＡＶ１は、ＥＰ１１５９９６８に記載されて、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＣＮＣＭ、Ｉｎｓｔｉｔｕｔ Ｐａｓｔｅｕｒ、Ｐａｒｉｓ、フランス）にＩ－２４８０の番号で登録された。「ＶＤＶ１」はＬＡＶ１からＶｅｒｏ細胞へのその後の適応により誘導されたウイルスであり；これに関して、ＬＡＶ１からのＲＮＡは、抽出および精製された後、Ｖｅｒｏ細胞にトランスフェクトされる。ＶＤＶ１株は、その後Ｖｅｒｏ細胞中でプレート培養精製および増幅により得られた。ＶＤＶ１株は、ＤＥＮ－１１６００７／ＰＤＫ１３株と比較して３つの追加の突然変異を有する。ＶＤＶ１株の完全なヌクレオチド配列、ならびにＶＤＶ１株を製造してキャラクタライズする方法が、国際特許出願ＷＯ２００６／１３４４３３に記載されている。ＶＤＶ１株の完全な核酸配列は、配列番号６で表される。

「ＬＡＶ２」とも呼ばれる１６６８１／ＰＤＫ５３として知られている血清型２の生の減弱されたデング熱ウイルスは、野生型ＤＥＮ－２（デング熱ウイルスの血清型２）１６６８１株から、野生株を、ＰＤＫ細胞を通して５３継代を受けさせることにより得られた。ＬＡＶ２は、ＥＰ１１５９９６８に記載されており、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＣＮＣＭ、Ｉｎｓｔｉｔｕｔ Ｐａｓｔｅｕｒ、Ｐａｒｉｓ、フランス）に１－２４８１の番号で登録された。「ＶＤＶ２」は、ＬＡＶ２からＶｅｒｏ細胞にその後適応することにより誘導された株であり；これに関して、ＬＡＶ２からのＲＮＡは、抽出および精製された後、Ｖｅｒｏ細胞にトランスフェクトされた。ＶＤＶ２株は、その後Ｖｅｒｏ細胞中におけるプレート培養精製および増幅により得られた。ＶＤＶ２株は、１６６８１／ＰＤＫ５３株と比較して、３通りのサイレント突然変異および非コード地域における１つの突然変異を含む１０通りの追加の突然変異を有する。ＶＤＶ２株の完全なヌクレオチド配列、ならびにＶＤＶ２株を製造およびキャラクタライズする方法は、国際特許出願ＷＯ２００６／１３４４４３に記載されている。ＶＤＶ２株の完全な核酸配列は、配列番号７で表される。

本発明との関連で、「デング熱キメラ」または「キメラデング熱ウイルス」は、遺伝子骨格が、少なくとも受容体フラビウイルスのＥタンパク質の配列をデング熱ウイルスの対応する配列により交換することにより改変された受容体フラビウイルスを意味する。あるいは、およびより好ましくは、受容体フラビウイルスの遺伝子骨格は、受容体フラビウイルスのｐｒＭおよびＥタンパク質の両方をコードする核酸配列を、デング熱ウイルスの対応する配列により交換することにより改変される。典型的には、受容体フラビウイルスは、減弱されている。受容体フラビウイルスは、黄熱病（ＹＦ）ウイルスであることもあり、その場合に、該キメラは、本明細書では「キメラＹＦ／デング熱ウイルス」と称される。好ましくは、本発明によるキメラＹＦ／デング熱ウイルスのＹＦ骨格は、減弱されたＹＦウイルスからのものである。受容体フラビウイルスは、デング熱ウイルスであることもあり、その場合に、キメラデング熱ウイルスは、本明細書では「キメラデング熱／デング熱ウイルス」と称されて、ＥまたはｐｒＭおよびＥタンパク質のデング熱ウイルスの血清型特性は、受容体デング熱ウイルスの遺伝子骨格の血清型特性と同一であるかまたは異なる。受容体フラビウイルスがデング熱ウイルスである場合、前記デング熱ウイルスは好ましくは減弱されている。受容体および供与体デング熱ウイルスの血清型が同一である場合、ｐｒＭおよびＥタンパク質をコードする配列が起源とする受容体デング熱ウイルスおよび供与体デング熱ウイルスは、同じ血清型の２種の異なるウイルス株である。本発明において使用するために、キメラデング熱ウイルスは、典型的にはキメラＹＦ／デング熱ウイルスである。

一実施形態において、キメラＹＦ／デング熱ウイルスは、減弱された黄熱病ウイルス株ＹＦ１７Ｄのゲノム骨格を含む（Ｔｈｅｉｌｅｒ Ｍ．およびＳｍｉｔｈ Ｈ．Ｈ．、１９３７年、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、６５巻７６７～７８６頁）。使用することができる他の減弱されたＹＦ株の例は、ＹＦ１７Ｄ２０４（ＹＦ－ＶＡＸ（Ｒ）、Ｓａｎｏｆｉ－Ｐａｓｔｅｕｒ、Ｓｗｉｆｔｗａｔｅｒ、ペンシルベニア州、米国；Ｓｔａｍａｒｉｌ（Ｒ）、Ｓａｎｏｆｉ－Ｐａｓｔｅｕｒ、ＭａｒｃｙＩ’Ｅｔｏｉｌｅ、フランス；ＡＲＩＬＶＡＸ（ＴＭ）、Ｃｈｉｒｏｎ、Ｓｐｅｋｅ、Ｌｉｖｅｒｐｏｏｌ、英国；ＦＬＡＶＩＭＵＮ（Ｒ）、Ｂｅｒｎａ Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｂｅｒｎ、スイス；ＹＦ１７Ｄ－２０４フランス（Ｘ１５０６７、Ｘ１５０６２）；ＹＦ１７Ｄ－２０４，２３４ＵＳ（Ｒｉｃｅら、１９８５年、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２２９巻：７２６～７３３頁）、または関係する株ＹＦ１７ＤＤ（Ｇｅｎｂａｎｋ照会番号Ｕ１７０６６）、ＹＦ１７Ｄ－２１３（Ｇｅｎｂａｎｋ照会番号Ｕ１７０６７）およびＧａｌｌｅｒら（１９９８年、Ｖａｃｃｉｎｅｓ、１６巻（９／１０号：１０２４～１０２８頁）により記載された株ＹＦ１７ＤＤを含む。有利には、本発明の生の減弱されたキメラＹＦ／デング熱ウイルスの受容体フラビウイルスは、ＹＦ１７ＤまたはＹＦ１７Ｄ２０４である。

本発明の実行で有用なキメラデング熱ウイルスの例には、特許出願ＷＯ９８／３７９１１に記載されているキメラＹＦ／デング熱ウイルスおよび特許出願ＷＯ９６／４０９３３およびＷＯ０１／６０８４７に記載されているもののようなキメラデング熱／デング熱ウイルスが含まれる。

本発明の実行において使用するために特に適当なキメラＹＦ／デング熱ウイルスの一例は、Ｃｈｉｍｅｒｉｖａｘ（登録商標）ＹＦ／デング熱ウイルスであり、それは、本明細書では、「ＣＹＤ」ウイルスとも称される。本明細書において使用されるＣｈｉｍｅｒｉｖａｘ（登録商標）ＹＦ／デング熱（またはＣＹＤ）ウイルスは、生の減弱されたキメラＹＦ／デング熱ウイルスであり、それは、プレメンブレン（ｐｒＭ）およびエンベロープ（Ｅ）のタンパク質をコードする核酸配列が、デング熱ウイルスの対応する構造タンパク質をコードする核酸配列により置き換えられた、適当に減弱されたＹＦウイルス（例えばＹＦ１７ＤまたはＹＦ１７Ｄ２０４（ＹＦ－ＶＡＸ（登録商標）））のゲノム骨格を含む。そのようなＣｈｉｍｅｒｉｖａｘ（登録商標）ウイルスの構築は、Ｃｈａｍｂｅｒｓら（１９９９年、Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ７３巻（４号）：３０９５～３１０１頁）の教示に従ってまたは実質的に従って完成される。ＷＯ２０１６／０３４６２９に記載されている特定のＣｈｉｍｅｒｉｖａｘ（登録商標）（ＣＹＤ）ウイルスは、株ＤＥＮ １ ＰＵＯ ３５９（ＴＶＰ１１４０）、ＤＥＮ ２ ＰＵＯ ２１８、ＤＥＮ ３ ＰａＨ８８１／８８およびＤＥＮ４ １２２８（ＴＶＰ９８０）からのｐｒＭおよびＥ配列を使用することにより発生された。便宜上、ＷＯ２０１６／０３４６２９の実施例に記載されている特定のＣｈｉｍｅｒｉｖａｘ（登録商標）（ＣＹＤ）ウイルスを、本明細書では、「ＣＹＤ１」、「ＣＹＤ２」、「ＣＹＤ３」および「ＣＹＤ４」と称する。これらの特定の株の製造は、国際特許出願ＷＯ９８／３７９１１、ＷＯ０３／１０１３９７、ＷＯ０７／０２１６７２、ＷＯ０８／００７０２１、ＷＯ０８／０４７０２３およびＷＯ０８／０６５３１５に詳細に記載されており、それらの製造方法の詳細な記載についてはそれらの特許出願を引用することができる。ＣＹＤ１、ＣＹＤ２、ＣＹＤ３およびＣＹＤ４のｐｒＭ－Ｅ地域のヌクレオチド配列は、ＷＯ２０１６／０３４６２９および同封された配列表に示されている。あるいは、他のデング熱ウイルス株も、本明細書の他の場所で記載される本発明の実行に有用なキメラウイルスの構築を容易にする核酸の供給源として、例えば他のＣｈｉｍｅｒｉｖａｘ（登録商標）ＹＦ／デング熱ウイルスの構築で、使用することができる。本発明の保護の方法において使用されるキメラデング熱ウイルスの代替的実施形態は、遺伝子骨格が、（ｉ）Ｅ受容体フラビウイルスのタンパク質をコードする配列コードを、デング熱ウイルスの対応する配列により交換することにより、および（ｉｉ）受容体フラビウイルスのｐｒＭタンパク質をコードする配列コードを、非デング熱フラビウイルス、例えばＪＥＶウイルスの対応する配列により交換することにより、改変された受容体フラビウイルスである。そのようなキメラデング熱ウイルスの例は、ＷＯ２０１１／１３８５８６に記載されている。

本明細書において使用される用語「デング熱ウイルス様粒子」または「デング熱ＶＬＰ」は、複製遺伝子材料を含有しないが、その表面でネイティブなビリオン構造と同様な繰り返しの多い順序づけられた整列でデング熱Ｅタンパク質を表すウイルス粒子を指す。典型的には、デング熱ＶＬＰは、デング熱ｐｒＭおよび／またはＭタンパク質も含有する。ＶＬＰは、インビトロで産生することもできる（Ｚｈａｎｇら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．（２０１１年）３０巻（８号）：３３３頁）。ＶＬＰはインビボでも産生することができる。その目的で、ｐｒＭ／ＭおよびＥデング熱タンパク質をコードする1種又は複数の核酸構築物（例えばＤＮＡまたはＲＮＡ）を、対象、例えばヒト対象の細胞中に、当技術分野において公知の方法により、例えば少なくとも１種のウイルスのベクターの使用により、導入することができる。次に、ＶＬＰ粒子がインビボで形成される。本発明の方法において使用することができるウイルスのベクターの例は、ポックスウイルス（例えば減弱されたポックスアンカラウイルス）および麻疹ウイルスを含むが、これらに限定されない。本発明における使用のための、ＶＬＰをインビボで発現するウイルスのベクターの特定のカテゴリーは、例えばＲｅｐｌｉｖａｘ（商標）技術による複製欠陥擬感染性（ＰＩＶ）ウイルスを含む（Ｒｕｍｙａｎｔｓｅｖ ＡＡら、Ｖａｃｃｉｎｅ ２０１１年、７月１８日 ２９巻（３２号）：５１８４～９４頁）。

本発明のワクチン組成物の、対象において免疫応答を惹起する（すなわち中和抗体の産生を誘発する）能力は、例えば、組成物内に含まれる１種または複数のデング熱ウイルス血清型に対して高められた中和抗体の力価を測定することにより、査定することができる。中和抗体の力価は、プラーク減少中和試験（ＰＲＮＴ_５０）の試験により測定することができる（Ｔｉｍｉｒｙａｓｏｖａ、Ｔ．Ｍ．ら、Ａｍ．Ｊ．Ｔｒｏｐ．Ｍｅｄ．Ｈｙｇ． （２０１３年）、８８巻（５号）、９６２～９７０頁）。簡単に説明すると、中和抗体の力価は、デング熱の中和抗体のレベルについて試験する対象か採取された血清で測定される。対象がワクチン接種の対象であれば、試料は、本発明のワクチン組成物の投与後少なくとも２８日の前記対象から採取される。血清（予め加熱で不活性化）の連続２倍希釈物が、血清型１、２、３または４の各デング熱ウイルスの適当な一定のチャレンジ用量（ＰＦＵ／ｍＬとして表現される）と必要に応じて混合される。ＣＹＤデング熱ワクチン構築物の親デング熱ウイルス株が、チャレンジ株として使用される。次に、混合物を、コンフルエントなＶｅｒｏ細胞の単層を有するマイクロプレートのウェルに接種する。吸着後、細胞の単層を２～３日間インキュベートする。デング熱ウイルスに感染した細胞の存在は、感染病巣（すなわちプラーク）の形成により示されて、したがって血清試料中における中和抗体の存在（すなわち、プラークの数の減少）に基づくウイルスの感染力低下が検出される。報告される値（終点の中和力価）は、陰性対照のウェルにおけるウイルスの平均プラーク数（それが１００％ウイルス負荷を表す）と比較して、デング熱チャレンジウイルスの５０％以上（プラーク数で）が中和される、血清の最高の希釈を表す。終点の中和力価は連続した値として表される。アッセイの定量の下限（ＬＬＯＱ）は１０（１／希釈）である。力価が１０（１／希釈）以上である場合に、血清変換が起こると一般的に考えられてきた。ＰＲＮＴ検定は、試験室毎に僅かに変わり得るのでＬＬＯＱも僅かに変わり得る。したがって、一般的様式で、血清変換は、力価が試験のＬＬＯＱ以上である場合に起こると考えられる。しかしながら、代替として、血清変換（すなわち陽性結果）を決定するために、より高いカットオフを、ＰＲＮＴ_５０との関連で、例えば、２５（１／希釈）、５０（１／希釈）、７５（１／希釈）または１００（１／希釈）で使用することができる。ＰＲＮＴ_５０に対するさらなる代替として、デング熱に対する中和抗体の存在を推定するために、より厳格なＰＲＮＴ_９０試験を使用することが好ましいこともある。ＰＲＮＴ_９０の使用が、デング熱の流行地（endemic area）に居住する対象から得られた試料における中和抗体のレベルを推定するために特に好ましいこともあり、その理由は、ＰＲＮＴ_９０試験が、ＰＲＮＴ_５０試験よりも特異的であるからである。

本発明により、デング熱ワクチンの「ブースターワクチン接種後の血清変換率」は、４種のデング熱ウイルスの血清型の各々について、ブースター注射の直前および２８日後に、ＰＲＮＴ_５０（プラーク減少中和試験）により決定された、１０（１／希釈）未満のブースター前の中和抗体力価、および４０（１／希釈）を超えるブースター後の力価、または１０（１／希釈）を超えるブースター前の力価およびブースター後の力価の少なくとも４倍の増大のいずれかを有する対象のパーセンテージを指す。

用語「ＣＣＩＤ_５０」は、細胞培養の５０％を感染させるウイルスの量（例えばワクチンのウイルス）を指す。ＣＣＩＤ_５０アッセイは、統計的な力価計算を用いる限界希釈アッセイである（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ Ｄら、Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ．２０１０年；２０１巻（３号）：３７０～７頁）。

本明細書において使用される「デング熱にナイーブ」、「デング熱非免疫」または「デング熱血清陰性」の対象は、デング熱ウイルスに感染したことがなく、デング熱ワクチンで前に免疫されたこともない対象を指し、すなわち前記対象から採取された血清試料は、デング熱ＥＬＩＳＡまたはＰＲＮＴ_５０アッセイで、陰性の結果を生ずるであろう。デング熱ＥＬＩＳＡの例は、Ａｌｅｒｅ／Ａｂｂｏｔｔから入手できるＰａｎｂｉｏ（登録商標）デング熱ＩｇＧ間接ＥＬＩＳＡであろう。対象のデング熱の血清状態のアセスメントは、好ましくは、ＰＲＮＴ_５０アッセイを使用して査定される。ＰＲＮＴ_５０アッセイに関して、「デング熱にナイーブ」、「デング熱非免疫」または「デング熱血清陰性」の対象からの血清試料は、アッセイのＬＬＯＱ未満の結果を生ずるであろう。

本明細書において使用される「デング熱免疫」または「デング熱血清陽性」の対象は、本発明のワクチン組成物の投与前に、デング熱ウイルスに感染したかまたはデング熱ワクチンにより免疫された対象を指す、すなわち、前記対象から採取されて血清試料は、デング熱ＥＬＩＳＡまたはＰＲＮＴ_５０アッセイにおいて陽性の結果を生ずるであろう。デング熱ＥＬＩＳＡの例は、Ａｌｅｒｅ／Ａｂｂｏｔｔから入手できるＰａｎｂｉｏ（登録商標）デング熱ＩｇＧ間接ＥＬＩＳＡであろう。対象のデング熱血清状態のアセスメントは、好ましくは、ＰＲＮＴ_５０アッセイを使用して査定される。ＰＲＮＴ_５０アッセイに関して、「デング熱免疫」または「デング熱血清陽性」の対象からの血清試料は、アッセイのＬＬＯＱを超える結果を生ずるであろう。

本発明により、本願において使用される「保護方法」は、デング熱ウイルスに曝露されたヒト対象における重症度またはデング熱疾患を発する尤度の低下をもたらす。前記低下が統計的に有意であることが有利である。本発明による保護方法は、以下のいずれか１つまたはそれ以上の結果をもたらすことができる：
（ｉ） 血清型１のデング熱ウイルスにより引き起こされたデング熱疾患、血清型２のデング熱ウイルスにより引き起こされたデング熱疾患、血清型３のデング熱ウイルスにより引き起こされたデング熱疾患および／または血清型４のデング熱ウイルスにより引き起こされたデング熱疾患の発生率または尤度の統計的に有意な低下、例えば予防；
（ｉｉ） 重症度に関わらず、血清型１、２、３および４により引き起こされたデング熱疾患の予防；
（ｉｉｉ） 血清型１のデング熱ウイルスにより引き起こされた重症のデング熱疾患、血清型２のデング熱ウイルスにより引き起こされた重症のデング熱疾患、血清型３のデング熱ウイルスにより引き起こされた重症のデング熱疾患および／または血清型４のデング熱ウイルスにより引き起こされた重症のデング熱疾患の発生率または尤度の統計的に有意な低下、例えば予防；
（ｉｖ） 血清型１のデング熱ウイルスにより引き起こされたＤＨＦ、血清型２のデング熱ウイルスにより引き起こされたＤＨＦ、血清型３のデング熱ウイルスにより引き起こされたＤＨＦおよび／または血清型４のデング熱ウイルスにより引き起こされたＤＨＦの発生率または尤度の低下、例えば予防；好ましくは、前記低下は統計的に有意である；
（ｖ） 血清型１のデング熱ウイルスにより引き起こされたデング熱疾患；血清型２のデング熱ウイルスにより引き起こされたデング熱疾患；血清型３のデング熱ウイルスにより引き起こされたデング熱疾患および／または血清型４のデング熱ウイルスにより引き起こされたデング熱疾患に基づく入院の発生率または尤度の統計的に有意な低下、例えば予防；
（ｖｉ） １４日を超える間隔で起こる異なる血清型に基づくデング熱の２以上のエピソードと定義される、繰り返される症状のウイルス学的に確認された任意の血清型に基づくデング熱の症例の発生率または尤度の統計的に有意な低下、例えば予防。
（ｖｉｉ） 少なくとも５歳であるヒト対象における（ｉ）から（ｖｉ）の任意の１つ；
（ｖｉｉｉ） 少なくとも７歳であるヒト対象における（ｉ）から（ｖｉ）の任意の１つ；
（ｉｘ） 少なくとも９歳であるヒト対象における（ｉ）から（ｖｉ）の任意の１つ；
（ｘ） 少なくとも１１歳であるヒト対象における（ｉ）から（ｖｉ）の任意の１つ；
（ｘｉ） 少なくとも１２歳であるヒト対象における（ｉ）から（ｖｉ）の任意の１つ；
（ｘｉｉ） ９歳と１６歳の間であるヒト対象における（ｉ）から（ｖｉ）の任意の１つ；
（ｘｉｉｉ） １２歳と１６歳の間であるヒト対象における（ｉ）から（ｖｉ）の任意の１つ；
（ｘｉｖ） 流行地域で生活する９歳から６０歳までの個人におけるデング熱ウイルスの血清型１、２、３および４により引き起こされたデング熱疾患の予防；
（ｘｖ） 流行地域で生活する１２歳から６０歳までの個人におけるデング熱ウイルスの血清型１、２、３および４により引き起こされたデング熱疾患の予防。
（ｘｖｉ） 流行地域で生活する９歳から４５歳までの個人におけるデング熱ウイルスの血清型１、２、３および４により引き起こされたデング熱疾患の予防；
（ｘｖｉｉ） 流行地域で生活する１２歳から４５歳までの個人におけるデング熱ウイルスの血清型１、２、３および４により引き起こされたデング熱疾患の予防；

本明細書において使用される、デング熱ウイルスに対する同型の中和抗体とは、デング熱ウイルスの単一の血清型に固有のエピトープに結合して、３種の他の血清型のエピトープと交差反応しない抗体を指す。異型の中和抗体とは、デング熱ウイルスの少なくとも２種の血清型の間で保存されたエピトープと結合する抗体を指し、したがって、そのような抗体は、血清型の交差中和抗体である。

本発明者らは、ブースターデング熱ワクチンの投与は、初回ワクチン接種前にデング熱にナイーブであった対象において中和抗体力価の予想外の増大を誘発し、それが、前記初回ワクチン接種前にデング熱免疫であった対象における増大より比例的に大きいことを示した。デング熱ウイルスに対する初回ワクチン接種に対する免疫応答は、初回ワクチン接種前にデング熱免疫であるヒト対象において、より効果的であるが、本発明者らは、感染したことがない（すなわち、初回ワクチン接種前にデング熱にナイーブであった）ヒト対象に対して、変調の程度が予想外に高いブースターワクチン接種に対する免疫応答の変調の程度が、この集団において最大であることを、今回示した。

したがって、第１の態様により、本発明は、ブースターワクチン接種の方法、およびヒト対象に免疫応答を誘発するためのそのような方法における使用のためのワクチン組成物であって、前記対象が、デング熱ウイルスの血清型１から４の各々に対する初回ワクチン接種を前に受けており、前記初回ワクチン接種前にはデング熱にナイーブであり、好ましくは、前記初回ワクチン接種前にはフラビウイルスにナイーブであり、ワクチン組成物に関する。そのような対象は、好ましくは、デング熱ウイルスに、前に自然に感染したことがなく、好ましくは、フラビウイルスに前に自然に感染したこともない。

本発明によるブースターワクチン接種の方法は、ワクチン組成物をヒト対象に投与する工程を含む。

本発明のワクチン組成物によりまたは本発明の方法により誘発される免疫応答は、好ましくは、液性応答、特にデング熱ウイルスに対する中和抗体の産生を含む応答、すなわち中和抗体の応答である。好ましい実施形態により、中和抗体は、デング熱ウイルスの血清型１から４の各々に対して向けられる。

好ましい実施形態では、本発明のこの態様によるブースターワクチン接種の方法およびブースターとして使用のためのワクチン組成物は、ブースターを受ける対象において、中和抗体の力価を、デング熱血清型の少なくとも１種について、好ましくは少なくとも２種について、最も好ましくは少なくとも３種について、およびさらにより好ましくは血清型１から４の各々について、ブースター投与前における中和抗体の力価との比較により、少なくとも２倍の増大を誘発する。好ましくは、比較は、ブースター投与の２ないし３日前と、その投与のおよそ２８日または１カ月後に測定されたレベルの間でなされる。あるいは、ブースター投与後のレベルは、前記投与のおよそ１または２カ月後に、前記ブースターワクチン接種後、好ましくはおよそ２０日と６０日の間に、特に前記ブースターワクチン接種のおよそ２８日後に測定される。中和抗体の力価は、ＰＲＮＴ_５０試験により有利に測定される。したがって、中和抗体力価は、続くＰＲＮＴ_５０力価に有利に同化される。

別の好ましい実施形態では、ブースターとして使用のためのワクチン組成物および本発明のこの態様による対応する方法は、ブースターを受けるヒト対象において、中和抗体の力価を、デング熱血清型の少なくとも１種について、好ましくは少なくとも２種のデング熱血清型について、より好ましくは少なくとも血清型４について、または血清型３および４について、少なくとも４倍の増大を誘発する。

本発明者らは、そのようなブースターワクチン接種が、ブースター後に、デング熱ウイルスの各血清型について、初回ワクチン接種前にはデング熱に非免疫であった対象において大きく増大した血清変換率を予想外に誘発し、初回ワクチン接種前にデング熱免疫であった対象における血清変換率に関しては、少なくとも２から５の倍率により誘発したことも立証した（実験の部の表８を参照されたい）。好ましい実施形態によれば、デング熱ウイルスの血清型１から４の各々に対して初回ワクチン接種を前に受けたが、前記初回ワクチン接種前にはデング熱にナイーブであったヒト対象における、本発明によるブースターワクチン接種後の血清変換率は、各血清型について少なくとも約３０％、血清型１について好ましくは少なくとも３５％、または血清型２について少なくとも３５％、血清型３について少なくとも４５％である。ブースターワクチン接種後の血清変換率は、ブースターワクチン接種を受ける少なくとも１０名の異なるヒト対象の集団で、好ましくは少なくとも５０名の対象の集団で、さらにより好ましくは少なくとも１００名の対象の集団で好ましくは推定される。

本発明者らは、初回ワクチン接種前にデング熱免疫であった対象における血清変換率に対して、ブースターワクチン接種の血清変換率は、初回ワクチン接種前にはデング熱非免疫であった対象において増大したことだけでなく、中和抗体の力価の相対的低下速度は、初回ワクチン接種前にデング熱免疫であった対象における相対的低下速度に対して、初回ワクチン接種前にはデング熱非免疫であった対象でより低いことも示した。実際、表１５に例示したように、ブースターワクチン接種の１年後に、中和抗体の力価におけるブースター用量の追加効果は、ベースラインでナイーブの対象において未だ存在しており、ベースラインで免疫の対象では消失している。ブースター用量の追加効果は、したがって、ベースラインで免疫の対象におけるよりもベースラインでナイーブの対象において、より持続性である。より特定して、ブースターワクチン接種後１年またはそれ以上の、ブースターを受けた対象における中和抗体の力価は、初回ワクチン接種前にデング熱にナイーブの対象では、ブースターワクチン接種前のレベルに対して、好ましくは少なくとも１．２、または少なくとも１．３以上の倍率により、好ましくはさらに増大した。ブースターワクチン接種後少なくとも１年を通して増大したそのような力価は、少なくとも１種の血清型、好ましくは少なくとも２種または３種の血清型、好ましくは４種の血清型についての力価である。

本発明によるブースターワクチン接種における使用のためのワクチン組成物は、デング熱疾患に対して前にワクチンを接種されたことがあり、前記初回ワクチン接種以前にはフラビウイルスにナイーブであったヒト対象において使用するためのものである。好ましくは、該対象は、フラビウイルスに自然に感染したことはなく、すなわちブースターワクチン接種前にフラビウイルスに感染したことはない。好ましくは、対象は、以前、黄熱病ウイルス、血清型に関わらずデング熱ウイルス、またはＺｉｋａウイルスに自然に感染したことがない。さらにより好ましくは、ブースターワクチン接種を受ける対象は、デング熱ウイルスまたはＺｉｋａウイルスに自然に感染したことがない。最も好ましくは、ヒト対象は、血清型に関わらずデング熱ウイルスに前に自然に感染したことがない。したがって、初回ワクチン接種前に、ヒト対象は、デング熱にナイーブ、好ましくはデング熱にナイーブでＺｉｋａにナイーブ、およびさらにより好ましくは黄熱病にナイーブ、デング熱にナイーブおよびＺｉｋａにナイーブであった。

したがって、好ましいヒト対象は、ブースターの投与前に、血清型１から４の各々に対する少なくとも１０のＰＲＮＴ_５０力価を有する（すなわち、対象は初回ワクチン接種に基づいてデング熱に免疫である）が、１５０未満、好ましくは１２０未満、または好ましくは１００未満、好ましくは８０未満、好ましくは６０未満、好ましくは４０未満またはさらに３０未満のＰＲＮＴ_５０力価を有し、デング熱ウイルスに自然に感染したことがなく、初回ワクチン接種前にはデング熱にナイーブであったことを示す対象である。

デング熱ウイルスによる先立つ自然の感染の非存在は、デング熱ワクチン中に存在することがないデング熱ウイルス抗原に対する抗体、例えば少なくともＤｅｎｇｖａｘｉａ（登録商標）に存在しない、デング熱の非構造タンパク質１（ＮＳ１）抗原に対する抗体の検出の非存在によっても確認することができる。デング熱ＮＳ１タンパク質に対する種々の抗体を検出するための試験は当技術分野において周知である。

本発明の方法により処置されると思われる対象、すなわち初回ワクチン接種を受けたが、自然に感染したことはない対象、または初回ワクチン接種前にはデング熱にナイーブであった対象は、該対象中に存在する中和抗体のタイプまたは品質によっても特徴づけられる。そのような対象は、例えば、４種の血清型のうち１種だけに対して、本質的に同型の中和抗体の応答、および３種の他の血清型に対して混合した同型のおよび異型の中和抗体の応答を示すとして特徴づけられる。好ましくは、この第１の態様によって治療することができる対象は、デング熱ウイルスの血清型４に対する本質的に同型の中和抗体の応答、およびデング熱ウイルスの血清型１～３に対する混合した同型のおよび異型の中和抗体の応答を示す。

本発明による先行するデング熱感染は、ウイルス学的に確認されたデング熱疾患であることもある。

本発明によるワクチン組成物は、対象中における血清型１から４の少なくとも１種のデング熱抗原または前記抗原を発現することができる核酸構築物を含む。好ましい実施形態によれば、ワクチン組成物は：
（ｉ） （ａ） 生の減弱されたデング熱ウイルス；および
（ｂ） 生の減弱されたキメラデング熱ウイルス；
からなる群から（各々独立に）選択される血清型１から４の少なくとも１種のデング熱抗原、
または
（ｉｉ） 前記ヒト対象において、血清型１から４の少なくとも１種のデング熱抗原を発現することができる１種もしくは複数の核酸構築物であり、前記デング熱抗体がデング熱ＶＬＰである、前記核酸構築物
を含む。

好ましい実施形態によれば、ワクチン組成物は：
（ｉ） （ａ）生の減弱されたデング熱ウイルス；および
（ｂ）生の減弱されたキメラデング熱ウイルス；
からなる群から各々独立に選択される血清型１から４の各々のデング熱抗原
または
（ｉｉ） 前記ヒト対象中において、血清型１から４の各々のデング熱抗原を発現することができる１種もしくは複数の核酸構築物であり、前記デング熱抗原がデング熱ＶＬＰである、前記核酸構築物
を含む。

別の実施形態により、ワクチン組成物は、デング熱抗原、または最低２種の血清型、好ましくは少なくとも３種血清型、例えば血清型１、２および４のデング熱抗原を発現することができる核酸を含む。

好ましくは、本発明によるワクチン組成物は：（ａ）生の減弱されたデング熱ウイルスおよび（ｂ）生の減弱されたキメラウイルスからなる群から各々独立に選択される血清型１から４の各々のデング熱抗原を含む。

好ましくは、本発明によるワクチン組成物は、血清型１から４の少なくとも１種、２種、３種または各々のデング熱抗原を含み、前記デング熱抗原の少なくとも１種は、生の減弱されたキメラウイルス、好ましくは生の減弱されたキメラデング熱ウイルス、さらにより好ましくは生の減弱されたキメラデング熱／デング熱ウイルスまたは生の減弱されたキメラＹＦ／デング熱ウイルスである。例えば、血清型２のデング熱抗原は、生の減弱されたキメラデング熱／デング熱ウイルスである。例えば、本発明によるワクチン組成物は、血清型１から４の各々のデング熱抗原（ＴＶ００１、ＴＶ００２、ＴＶ００３およびＴＶ００４と称される）の任意の４価の混合物であってもよく、そのことは、Ｄｕｒｂｉｎら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓ（２０１３年）、２０７巻、９５７～９６５頁に開示されている。好ましくは、本発明のこの実施形態によるワクチン組成物はＴＶ００３である。

好ましくは、本発明によるワクチン組成物は、血清型１から４の少なくとも１種、２種、３種または各々のデング熱抗原を含み、前記デング熱抗原は、各々、生の減弱されたキメラデング熱ウイルスである。例えば、本発明のワクチン組成物は、血清型１から４の各々のデング熱抗原を含み、血清型１、３および４の前記デング熱抗原は、各々、生の減弱されたキメラデング熱／デング熱ウイルスであり、および血清型２の前記デング熱抗原は、生の減弱されたデング熱ウイルスである。例えば、本発明によるワクチン組成物は、血清型１から４の各々のデング熱抗原の４価の混合物であってもよく（ＤＥＮＶａｘと称される）、それは、Ｈｕａｎｇら、ＰＬｏＳ Ｎｅｇｌ Ｔｒｏｐ Ｄｉｓ ７巻（５号）：ｅ２２４３頁（２０１３年）に開示されている。あるいは、本発明のワクチン組成物は、血清型１から４の各々のデング熱抗原を含むことができて、血清型１、３および４の前記デング熱抗原は、各々、生の減弱されたキメラＹＦ／デング熱ウイルスであり、および血清型２の前記デング熱抗原は生の減弱されたデング熱ウイルスである。

好ましくは、本発明によるワクチン組成物は、血清型１から４の各々のデング熱抗原を含み、前記デング熱抗原の各々は、生の減弱されたキメラデング熱ウイルス、好ましくはキメラＹＦ／デング熱ウイルス、より好ましくはキメラＹＦ／デング熱ウイルスであり、それは、ｐｒＭ－Ｅ配列がデング熱ウイルスのｐｒＭ－Ｅ配列で置換された減弱されたＹＦゲノム骨格を含む。

好ましくは、本発明の生の減弱されたキメラデング熱ウイルスは、デング熱ウイルスからの１種またはそれ以上のタンパク質および異なるフラビウイルスからの１種またはそれ以上のタンパク質を含む。好ましくは、異なるフラビウイルスは、黄熱病ウイルス（すなわち、キメラＹＦ／デング熱ウイルス）である。好ましくは、本発明による生の減弱されたキメラデング熱ウイルスは、ｐｒＭ－Ｅ配列がデング熱ウイルスのｐｒＭ－Ｅ配列で置換された減弱された黄熱病ウイルスゲノムを含む。あるいは、本発明の生の減弱されたキメラデング熱ウイルスは、第１のデング熱ウイルスからの１種またはそれ以上のタンパク質および第２のデング熱ウイルス（すなわち、キメラデング熱／デング熱ウイルス）からの１種またはそれ以上のタンパク質を含む。好ましくは、前記第１のデング熱ウイルスおよび前記第２のデング熱ウイルスは、異なる血清型のものである。前記第１のデング熱ウイルスおよび前記第２のデング熱ウイルスが同じ血清型のものである場合、前記第１と第２のデング熱ウイルスは異なる株である。

本発明における使用のための血清型１のデング熱抗原の好ましい例は、配列番号１と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む、生の減弱されたキメラＹＦ／デング熱ウイルスである。本発明における使用のための血清型１のデング熱抗原の別の好ましい例は、配列番号６と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む生の減弱されたデング熱ウイルスである。好ましくは、配列番号６と１００未満％の同一性を有するヌクレオチド配列は、配列番号６の位置１３２３、１５４１、１５４３、１５４５、１５６７、１６０８、２３６３、２６９５、２７８２、５０６３、５９６２、６０４８、６８０６、７３３０、７９４７および９４４５に対応する前記核酸配列内の位置における突然変異を含まない。

本発明における使用のための血清型２のデング熱抗原の好ましい例は、配列番号２と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む、生の減弱されたキメラＹＦ／デング熱ウイルスである。本発明における使用のための血清型２のデング熱抗原の別の好ましい例は、配列番号５と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む生の減弱されたキメラＹＦ／デング熱ウイルスである。本発明における使用のための血清型２のデング熱抗原の別の好ましい例は、配列番号７と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む生の減弱されたデング熱ウイルスである。好ましくは、配列番号７と１００未満％の同一性を有するヌクレオチド配列は、配列番号７の位置７３６、１６１９、４７２３、５０６２、９１９１、１００６３、１０５０７、５７、５２４、２０５５、２５７９、４０１８、５５４７、６５９９および８５７１に対応する前記核酸配列内の位置における突然変異を含まない。

有利には、本発明における使用のための血清型２のデング熱抗原（前記デング熱抗原は、例えば、生の減弱されたデング熱ウイルス、キメラデング熱ウイルスまたはＶＬＰのいずれかである）は、位置Ｅ－２２６にＴｈｒ残基および／または位置Ｅ－２５１にＶａｌ残基を含む。より有利には、血清型２の前記デング熱抗原は、位置Ｅ－２２６にＴｈｒ残基、位置Ｅ－２２８にＧｌｙ残基および位置Ｅ－２５１にＶａｌ残基を含む。この文脈で、Ｅ－２２６は、エンベロープ（Ｅ）タンパク質の位置２２６を表すなどである。特定の位置におけるアミノ酸残基の同一性は、タンパク質アラインメントにより、例えば、配列番号２から容易に誘導されるＥタンパク質のＣＹＤ２からのタンパク質配列を用いるアラインメントにより容易に決定することができる。

本発明における使用のための血清型３のデング熱抗原の好ましい例は、生の減弱されたキメラＹＦ／デング熱ウイルスであり、それは、配列番号３と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または１００％配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。

本発明における使用のための血清型４のデング熱抗原の好ましい例は、生の減弱されたキメラＹＦ／デング熱ウイルスであり、それは、配列番号４と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または１００％配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。

本発明における使用のためのブースター組成物の４価の投薬形態（dosage form）（すなわち、血清型１から４の各々のデング熱抗原を含有するもの）を形成するために、先行する４つの段落で開示された血清型１、２、３および４のデング熱抗原の好ましい例を、可能な任意の組み合わせで組み合わせることができる。あるいは、本発明に従って使用するためのブースター組成物は、二価の投薬形態、または４価の投薬形態として対象に投与することもできて、先行する４つの段落で開示された血清型１、２、３および４のデング熱抗原の好ましい例は、任意の二価の対または可能な４価の組合せで組み合わせることができる。したがって、血清型１、２、３および４のデング熱抗原の特に好ましい組合せで、血清型３および４のデング熱抗原は、それぞれ、生の減弱されたキメラＹＦ／デング熱ウイルスであり、それは、配列番号３と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列および配列番号４と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む生の減弱されたキメラＹＦ／デング熱ウイルスである。そのような特に好ましい組合せにおいて、血清型１および２のデング熱抗原は、それぞれ：
（ｉ）配列番号１と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む生の減弱されたキメラＹＦ／デング熱ウイルス、および配列番号２と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む生の減弱されたキメラＹＦ／デング熱ウイルス；または
（ｉｉ）配列番号１と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む生の減弱されたキメラＹＦ／デング熱ウイルス、および配列番号５と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む生の減弱されたキメラＹＦ／デング熱ウイルス；または
（ｉｉｉ）配列番号１と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む生の減弱されたキメラＹＦ／デング熱ウイルス、および配列番号７と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または１００％配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む生の減弱されたデング熱ウイルス（好ましくは、配列番号７と１００未満％の同一性を有するヌクレオチド配列は、配列番号７の位置７３６、１６１９、４７２３、５０６２、９１９１、１００６３、１０５０７、５７、５２４、２０５５、２５７９、４０１８、５５４７、６５９９および８５７１と対応する前記核酸配列内の位置に突然変異を含まない）；または
（ｉｖ）配列番号６と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む生の減弱されたデング熱ウイルス（好ましくは、配列番号６と１００未満％同一性を有するヌクレオチド配列は、配列番号６の位置１３２３、１５４１、１５４３、１５４５、１５６７、１６０８、２３６３、２６９５、２７８２、５０６３、５９６２、６０４８、６８０６、７３３０、７９４７および９４４５に対応する前記核酸配列内の位置に突然変異を含まない）、および配列番号７と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む生の減弱されたデング熱ウイルス（好ましくは、配列番号７と１００未満％の同一性を有するヌクレオチド配列は、配列番号７の位置７３６、１６１９、４７２３、５０６２、９１９１、１００６３、１０５０７、５７、５２４、２０５５、２５７９、４０１８、５５４７、６５９９および８５７１に対応する前記核酸配列内の位置に突然変異を含まない）
であることができる。

本発明のこの第１の態様によるブースターワクチン接種として使用するためのワクチン組成物は、初回ワクチン接種コース中に以前投与されたワクチン組成物と同一であることが有利であり得る。あるいは、異なる実施形態により、ブースターワクチン接種として使用するためのワクチン組成物は、初回ワクチン接種コース中に以前投与されたワクチン組成物と異なることもある。それは、とりわけ、初回ワクチン接種が、血清型１～４の各々の抗原を含むのに対して、唯一の血清型の抗原のみを含むこともあり；それは、異なる賦形剤、異なる投薬量も含むことがある。それは、完全に異なるワクチン組成物であってもよく；例えば初回ワクチン接種は生の減弱されたキメラデング熱／デング熱ウイルスに基づき、およびブースターワクチン接種は、生の減弱されたキメラＹＦ／デング熱ウイルスに基づく。

第２の態様により、本発明は、ヒト対象においてデング熱ウイルスに対する中和抗体の応答を誘発する方法、およびそのような方法における使用のためのワクチン組成物であって、前記組成物が、血清型１から４の各々のデング熱抗原、または前記対象中において、血清型１から４の各々のデング熱抗原を発現することができる核酸構築物を含み；
前記組成物が：
（ａ）初回ワクチン接種と、それに続く
（ｂ）ブースターワクチン接種
として投与され、
ヒト対象が、最初はデング熱にナイーブである、
ワクチン組成物を対象とする。

この第２の態様により、デング熱ウイルスに対する中和抗体の応答を、ヒト対象において誘発する方法は、（ａ）ワクチン組成物を初回ワクチン接種として投与する工程、および（ｂ）その後ワクチン組成物（それは、初回ワクチン接種組成物と同じであることもまたは異なっていることもある）を、ブースターワクチン接種として投与する工程を含む。

好ましくは、血清型１から４のデング熱抗原は、生の減弱されたデング熱ウイルスおよび生の減弱されたキメラデング熱ウイルスからなる群から各々独立に選択される。

あるいは、本発明のこの第２の態様による使用のためのワクチン組成物は、血清型１から４の各々のデング熱ＶＬＰを発現することができる１種またはそれ以上の核酸構築物を含む。

本発明の第１の態様に関して詳述された血清型１から４の抗原の全ての好ましいタイプおよび組み合せは、本発明のこの第２の態様に適用可能であり；とりわけ、好ましい実施形態によれば、血清型１から４のデング熱抗原は、各々独立に生の減弱されたキメラデング熱ウイルスであり、特にそれらは生の減弱されたキメラデング熱／デング熱およびＹＦ／デング熱ウイルスからなる群から各々独立に選択される。好ましい実施形態により、血清型１から４のデング熱抗原は、全ての生の減弱されたキメラデング熱／デング熱ウイルスであるか、またはそれらは全ての生の減弱されたキメラＹＦ／デング熱ウイルスである。

好ましくは、前記免疫応答は、デング熱ウイルスに対応する中和抗体の産生を含むか、または前記中和抗体の応答は、本発明の第１のおよび第２の態様により、ある一定のレベルのワクチン有効性を生じて、好ましくは、それは、血清型１、２、３および４の少なくとも１種のデング熱ウイルスにより引き起こされたデング熱疾患に対して、最も好ましくは４種の血清型に対して、ヒト対象を保護する。例えば、本発明によるブースターワクチン接種における使用のためのワクチン組成物は、任意の血清型（ヒト対象において本明細書で定義された）により引き起こされたデング熱疾患に関して、少なくとも３０％、より好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、より好ましくは６０％およびさらにより好ましくは７０％のワクチン有効性（ブースター後の）を生ずる。例えば、本発明によるブースターワクチン接種における使用のためのワクチン組成物は、血清型１、血清型２、血清型３または血清型４（ヒト対象において本明細書で定義された）により引き起こされたデング熱疾患に関して、少なくとも３０％、より好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、より好ましくは６０％およびさらにより好ましくは７０％のワクチン有効性（ブースター後の）を生ずる。

好ましくは、デング熱ウイルスにより引き起こされた前記デング熱疾患は、重症のデング熱疾患である。好ましくは、本発明の方法は、デング熱ウイルスの血清型に関わらずデング熱ウイルスにより引き起こされたデング熱疾患が理由の入院の発生率または尤度における低下をもたらす。好ましくは、前記デング熱ウイルスにより引き起こされたデング熱疾患はＤＨＦである。

本発明の第１の態様によるワクチン組成物は、デング熱ウイルスに対する初回ワクチン接種レジメンをすでに受けているヒト対象にブースターとして投与され；したがって、ワクチン組成物は、好ましくは少なくとも２歳のヒト対象に投与される。好ましくは、前記ヒト対象は、少なくとも５歳である。好ましくは、前記ヒト対象は少なくとも７歳であり、さらにより好ましくは、前記ヒト対象は少なくとも９歳である。

最も好ましくは、特に、初回ワクチン接種が３用量の投与計画からなる場合、互いからおよそ６カ月離して投与され、本発明の第１の態様によりブースター用量を投与するヒト対象は、少なくとも１０歳、またはさらにより好ましくは１１歳である。好ましくは、前記ヒト対象は、少なくとも１１または１２歳である。

第１の態様によるワクチン組成物は、好ましくは６２歳未満、好ましくは５５未満、およびさらにより好ましくは４７歳未満の対象に投与される。本発明のこの態様により好ましい対象は、したがって２歳と６２歳の間、好ましくは５歳と５５歳の間、およびより好ましくは１１歳と４７歳の間である。

初回ワクチン接種とそれに続くブースターワクチン接種として投与されるべき本発明の第２の態様によるワクチン組成物は、好ましくは少なくとも生後９カ月のヒト対象に投与されるべきである。好ましくは、前記ヒト対象は、少なくとも２歳、または４または５歳である。好ましくは、前記ヒト対象は、少なくとも７歳であり、さらにより好ましくは、前記ヒト対象は少なくとも９歳である。

第２の態様によるワクチン組成物は、好ましくは６０歳未満、好ましくは５５未満、およびさらにより好ましくは４５歳未満の対象に投与される。本発明のこの態様による好ましい対象は、したがって生後９カ月と６０歳の間、好ましくは４歳と５５歳の間、およびより好ましくは９歳と４５歳の間である。

あるいは、本発明の両方の態様により、前記ヒト対象は、２歳と６０歳の間である。好ましくは、前記ヒト対象は、１０歳と６０歳の間、例えば１０歳と５０歳の間である。好ましい実施形態により、前記ヒト対象は１１歳と５０歳の間である。さらにより好ましい実施形態により、対象は１２歳と４５歳の間、例えば１２歳と３０歳の間である。

本発明によるヒト対象は、好ましくは、妊娠しておらず、授乳中でなくまたは妊娠の可能性がなく、先天性または後天性免疫不全の自己報告がなくまたは疑いがなく、ワクチン接種前６カ月以内に免疫抑制療法、またはワクチン接種前２週間から３カ月以内の間の全身性コルチコステロイド療法を受けておらず、ＨＩＶ血清陽性でなく、本明細書で規定された如何なるワクチン成分に対して全身性過敏症を有しない。

本発明のワクチン組成物は、ブースターワクチン接種として、または初回ワクチン接種とそれに続くブースターワクチン接種として、黄熱病に免疫または黄熱病にナイーブであり、好ましくは黄熱病にナイーブであるヒト対象に投与される。本明細書において使用される黄熱病に免疫の対象とは、本発明の初回ワクチン接種またはブースター組成物の投与以前にＹＦウイルスに感染したことがあるかまたはＹＦワクチンにより免疫されている、すなわち前記対象から採取された血清試料が、ＹＦ ＥＬＩＳＡまたはＹＦ ＰＲＮＴ_５０アッセイで陽性結果を生ずると思われる対象を指す。逆に、黄熱病にナイーブの対象とは、本発明のワクチンまたはブースター組成物の投与より前にＹＦウイルスに感染したことがないかまたはＹＦワクチンにより免疫されている対象、すなわち前記対象から採取された血清試料がＹＦ ＥＬＩＳＡまたはＹＦ ＰＲＮＴ_５０アッセイにおいて陰性の結果を生ずると思われる対象を指す。簡単に説明すると、ＹＦ ＰＲＮＴ_５０アッセイは、以下のように実施される。試験する血清（予め加熱不活性化）の連続２倍希釈で一定濃度（ＰＦＵ／ｍＬと表現される）のＹＦワクチン株１７Ｄと混合される。混合物をコンフルエントのＶｅｒｏ細胞のプレートのウェルに２連で接種される。吸着後、細胞単層を上積みして２ないし３日の間インキュベートする。報告される値（終点中和力価）は、１００％ウイルス装荷を表す陰性対照ウェルとの比較で、ＹＦチャレンジウイルスの５０％以上（プラーク数で）が中和される血清の最高の希釈を表す。ＹＦ ＰＲＮＴ_５０アッセイのためのＬＬＯＱは１０（１／希釈）である。

好ましくは、本発明のワクチン組成物は、ブースターワクチン接種として、黄熱病にナイーブおよびデング熱免疫のヒト対象に、より特定してＹＦまたはデング熱ウイルスに感染したことがなく、ＹＦワクチンにより免疫されていないが、本発明のブースター組成物の投与前にデング熱ワクチンにより免疫された対象に投与される。

本発明の両方の態様による初回ワクチン接種コースは、１用量でまたは複数の用量で、例えば１、２または３用量で投与することもできる。初回ワクチン接種が３用量からなる場合、初回用量および第３の用量は、好ましくは約１２カ月離して投与される。例えば、初回ワクチン接種は、初回用量、第２の用量および第３の用量でなることができて、その場合、前記第２の用量は前記初回用量の約６カ月後に投与されるべきであり、前記第３の用量は前記初回用量の約１２カ月後に投与されるべきである。あるいは、３用量を、ゼロカ月に、約３から４カ月に（例えば約３カ月半に）および約１２カ月に投与することもできる（すなわち、初回ワクチン接種の第２の用量が初回用量の約３カ月半後に投与され、初回ワクチン接種の第３の用量が初回用量の約１２カ月後に投与される投与計画）。

本発明の両方の態様による初回ワクチン接種は、２用量でなることもできる。好ましくは、初回用量および第２の用量は、約３、６、８または９カ月離して投与される。好ましくは、第２の用量は、初回用量の約６カ月後に投与される。あるいは、２用量を、対象に同時または殆ど同時に（例えば互いに２４時間以内に）投与することもできる。

本発明の両方の態様による初回ワクチン接種は、単一用量からなることもできる。

本発明によるブースターワクチン接種は、１または数用量で、好ましくは１、２または３用量で投与することもできる。初回ワクチン接種に関して、上で開示された全ての異なる変法は、必要な変更を加えてブースターワクチン接種に適用される。好ましい実施形態により、本発明のワクチン組成物は、単回のブースター用量として投与される。

好ましくは、本発明により、ブースターワクチン接種として投与されるワクチン組成物は、初回ワクチン接種コースの終了の少なくとも１年後に投与されるべきであり、すなわちブースターの初回用量は、最初の免疫投与計画で予定された最終用量の投与の少なくとも１年後、より好ましくは初回ワクチン接種コースの少なくとも２年後、およびさらにより好ましくは初回ワクチン接種のおよそ４から６年後に投与される。

好ましい実施形態により、ブースターワクチン接種は、初回ワクチン接種の終了後２０年未満に投与される、すなわちブースターの初回用量が初回の免疫投与計画で予定された最終用量の投与後２０年未満に投与される。例えば、ブースター投与は、初回ワクチン接種コースの終了後１年と２０年の間に、好ましくは初回ワクチン接種コースの終了後１．５年と１５年の間、より好ましくは２年と１０年の間に投与される。より好ましくは、ブースターワクチン接種は、初回ワクチン接種の終了後およそ４年と約８年の間、より好ましくは初回ワクチン接種の終了およそ４から５年後に投与される。

本発明との関連で、ブースターワクチン接種も、有利に、繰り返すことができて、すなわち２回以上、例えば２回、または３回投与することができる。好ましくは、ブースターワクチン接種は、第１のブースターワクチン接種後およそ４または５年毎に、または７年毎に、または１０年毎に繰り返される。

本発明によるヒト対象（ワクチン組成物がブースターとして投与される）は、好ましくは、デング熱流行地域に居住するかまたは旅行する人である。より好ましくは、前記ヒト対象は、デング熱流行地域に居住している。本発明によるヒト対象は、デング熱流行を経験している地域に居住していることもある。居住しているという用語は、本明細書ではその従来の意味を与えられ、問題の地域に常態で住所を定めている人を指す。デング熱流行地域は、当業者に周知であり、本発明により、最も熱帯および亜熱帯の大部分の地域、例えばＷＨＯにより流行国と認定された任意の国を含む。例えば、本発明によるデング熱流行地域は、熱帯および亜熱帯内に入るこれらの米州の国またはそれらの一部を含み得る。したがって、本発明によるデング熱の流行地域は、以下の国またはそれらの一部の任意の１つまたはそれ以上を含むこともある：ブラジル、ベネズエラ、コロンビア、エクアドル、ペルー、ボリビア、パラグアイ、パナマ、コスタリカ、ニカラグア、ホンジュラス、エルサルバドル、グアテマラ、ベリーズ、メキシコ、米国およびカリブ海地域の諸島。特定の実施形態において、本発明のデング熱流行地域は、以下の国々からなり得る：ブラジル、コロンビア、ホンジュラス、メキシコおよびではプエルトリコ。別の特定の実施形態、本発明のデング熱流行地域は、以下の国々からなり得る：ブラジル、コロンビアおよびホンジュラス。本発明によるデング熱流行地域は、熱帯および亜熱帯内の南アジアおよびオセアニアの国を含むこともある。したがって、本発明によるデング熱流行地域は、以下の任意の１つまたはそれ以上からなることもある：インド、ミャンマー（ビルマ）、タイ、ラオス、ベトナム、カンボジア、インドネシア、マレーシア、シンガポール、フィリピン、台湾、パプアニューギニアおよびオーストラリア。本発明によるデング熱流行地域（国家のまたは地方の地域であることもある）は、疫学のデータが疾患の高い負担を示す地域である。例えば、デング熱流行地域は、ワクチン接種のための目標とされる集団におけるデング熱の血清学的有病率が、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％または少なくとも９０％である地域として規定される。好ましい実施形態では、本発明による対象は、９歳の局所集団におけるデング熱血清学的有病率が、少なくとも５０％、より好ましくは少なくとも７０％である地域における居住者である。この関連で、年齢が上がるにつれて、デング熱ウイルスに感染している尤度は増大するので、それより年長の亜集団は、より大きな血清学的有病率を示すと考えられる。

本発明による方法において使用するワクチン組成物が、配列番号：１、２、３および４のそれぞれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または１００％の同一性を有する核酸配列（例えばデング熱抗原ＣＹＤ１、ＣＹＤ２、ＣＹＤ３およびＣＹＤ４）を含む血清型１から４のデング熱抗原を含む場合、有利には、本発明によるヒト対象（本発明のワクチン組成物が投与される）は、デング熱の支配的な広まる株が血清型１、３および４であるデング熱流行地域に居住している。例えば、前記デング熱流行地域におけるデング熱疾患の症例の、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％または少なくとも９０％は、血清型１、３または４のデング熱ウイルスによって引き起こされる。本発明によるヒト対象（本発明のワクチン組成物が投与される）は、有利には、デング熱の支配的な広まる株が血清型３および４であるデング熱流行地域に居住している。例えば、前記デング熱流行地域におけるデング熱疾患の症例の少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％または少なくとも９０％は、血清型３のデング熱ウイルスまたは４による感染である。

本発明による方法において使用するワクチン組成物が、配列番号１、２、３および４とそれぞれ、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または１００％の同一性を有する核酸配列（例えば、デング熱抗原ＣＹＤ１、ＣＹＤ２、ＣＹＤ３およびＣＹＤ４）を含む血清型１から４のデング熱抗原を含む場合に、有利には、本発明によるヒト対象（本発明のワクチン組成物が投与される）は、広まる血清型２のデング熱株が位置Ｅ－２２６およびＥ－２２８におけるＴｈｒおよびＧｌｙの存在により特徴づけられる遺伝子型を有するデング熱の流行地域に居住している。有利には、広まる血清型２のデング熱株は、位置ｐｒＭ－１６、Ｅ－８３、Ｅ－２０３、Ｅ－２２６、Ｅ－２２８およびＥ－３４６における以下の残基Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｔｈｒ、ＧｌｙおよびＨｉｓの少なくとも５基または全ての６基の存在によりそれぞれ特徴づけられる遺伝子型を有し、ここで、位置Ｅ－２２６およびＥ－２２８における残基は、それぞれＴｈｒおよびＧｌｙでなければならない。この関係で、ｐｒＭ－１６は、ｐｒＭタンパク質の位置１６を表し、Ｅ－８３はＥタンパク質の位置８３を表す、その他も同様。本発明によるヒト対象（本発明のワクチン組成物が投与される）は、広まる血清型２デング熱ウイルスが、この段落で規定された遺伝子型を有するデング熱流行地域に好ましく居住している、すなわち前記デング熱流行地域における血清型２のデング熱疾患の症例の少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％が、前記遺伝子型を有する血清型２のデング熱ウイルスにより引き起こされている。本明細書でいう血清型２のデング熱ウイルスにより引き起こされたデング熱疾患は、好ましくは、この段落で規定された遺伝子型を有する、血清型２のデング熱ウイルスにより引き起こされたデング熱疾患である。

本発明による方法において使用するワクチン組成物が、配列番号：１、２、３および４のそれぞれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または１００％の同一性を有する核酸配列（例えばデング熱抗原ＣＹＤ１、ＣＹＤ２、ＣＹＤ３およびＣＹＤ４）を含む血清型１から４のデング熱抗原を含む場合、有利には、本発明によるヒト対象（本発明のワクチン組成物が投与される）は、血清型２の広まるデング熱株がアジア－１の遺伝子型を有しないデング熱流行地域に、居住している。血清型２のデング熱ウイルスは、数種の遺伝子型に細分されて、それらは：米州型、アジア／米州型、アジア－１型、アジア－２型、普遍種および野生鳥獣に伝染する型と称される（Ｔｗｉｄｄｙ ＳＳら、（２００２年）Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｐｒｅｓｓｕｒｅｓ ａｍｏｎｇ ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ ｏｆ ｄｅｎｇｕｅ－２ ｖｉｒｕｓ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ；２９８巻（１号）：６３～７２頁）。したがって、本発明によるヒト対象（本発明のワクチン組成物が投与される）は、有利には、血清型２の広まるデング熱株が、米州、アジア／米州、アジア－２、普遍種のまたは野生鳥獣に伝染する遺伝子型を有するデング熱流行地域に居住している。より好ましくは、本発明によるヒト対象（本発明のワクチン組成物が投与される）は、有利には、血清型２の広まるデング熱株が米州、アジア／米州、または普遍種の遺伝子型を有するデング熱流行地域に居住している。本発明によるヒト対象（本発明のワクチン組成物が投与される）は、広まる血清型２デング熱ウイルスが、この段落で規定された遺伝子型を有する、すなわち、前記デング熱流行地域における血清型２のデング熱疾患の症例の少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％が、米州、アジア／米州、アジア－２、普遍種または野生鳥獣に伝染する遺伝子型、好ましくは米州、アジア／米州または普遍種遺伝子型を有する血清型２のデング熱ウイルスにより引き起こされるデング熱流行地域に好ましく居住している。本明細書で参照される血清型２のデング熱ウイルスにより引き起こされるデング熱疾患は、米州、アジア／米州、アジア－２、普遍種または野生鳥獣に伝染する遺伝子型を有する、好ましくは血清型２のデング熱ウイルスにより引き起こされたデング熱疾患である。より好ましくは、本明細書で参照される血清型２のデング熱ウイルスにより引き起こされるデング熱疾患は、米州、アジア／米州、または普遍種遺伝子型を有する、好ましくは血清型２のデング熱ウイルスにより引き起こされたデング熱疾患である。特定のデング熱－２のウイルス株の遺伝子型は、配列アラインメントおよび系統発生論のトリー分析により決定される。簡単に説明すると、参照配列（Ｔｗｉｄｄｙらに記載された各遺伝子型の代表株のＥタンパク質をコードする選択されたヌクレオチド配列である）が遺伝子型を決定すべき血清型－２株のＥタンパク質をコードするヌクレオチド配列とアラインメントされる。次に系統発生論系統樹を計算して、遺伝子型を、参照遺伝子型の配列とそれらのそれぞれのクラスタリングに従って、各未知の血清型－２株に帰属させる。系統発生論の系統樹は、ＦａｓｔＴｒｅｅ２ソフトウェア（Ｐｒｉｃｅ ＭＮら、ＦａｓｔＴｒｅｅ ２－ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ ｍａｘｉｍｕｍ－ｌｉｋｅｌｉｈｏｏｄ ｔｒｅｅｓ ｆｏｒ ｌａｒｇｅ ａｌｉｇｎｍｅｎｔｓ、ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ２０１０年；５巻（３号）：ｅ９４９０頁）およびＷｈｅｌａｎおよびＧｏｌｄｍａｎのアミノ酸発生モデル（Ｗｈｅｌａｎ Ｓ、Ｇｏｌｄｍａｎ Ｎ．Ａ ｇｅｎｅｒａｌ ｅｍｐｉｒｉｃａｌ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｆａｍｉｌｉｅｓ ｕｓｉｎｇ ａ ｍａｘｉｍｕｍ－ｌｉｋｅｌｉｈｏｏｄ ａｐｐｒｏａｃｈ． Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｅｖｏｌ．２００１年；１８巻（５号）：６９１～６９９頁）を使用して、最大尤度方法によって計算する。

本発明による方法において使用するワクチン組成物が、配列番号：１、２、３および４と、それぞれ、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または１００％の同一性を有する核酸配列（例えばデング熱抗原ＣＹＤ１、ＣＹＤ２、ＣＹＤ３およびＣＹＤ４）を含む、血清型１から４のデング熱抗原を含む場合、有利には、本発明によるヒト対象（本発明のワクチン組成物が投与される）は、血清型４の広まるデング熱株がＤＥＮ４－ＩＩ遺伝子型である、デング熱流行地域に居住している。特に、血清型４の広まるデング熱株は、好ましくは、配列番号４から容易に誘導されるＣＹＤ４のｐｒＭ、ＭおよびＥタンパク質配列における等価の残基と一致する「署名」位置ｐｒ７３、Ｍ６５、Ｅ４６、Ｅ１２０、Ｅ１６０、Ｅ２０３、Ｅ３２９、Ｅ４２９、Ｅ４５５、Ｅ４６１およびＥ４７８に残基を有する。好ましくは、「署名」残基の少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９または全ての１０個が合致しなければならない。Ｍ６５とは、Ｍタンパク質の位置６５を指し、ｐｒ７３とはｐｒＭタンパク質の位置７３を指す、その他も同様。本発明によるヒト対象（本発明のワクチン組成物が投与される）は、広まる血清型４のデング熱ウイルスがこの段落で規定された遺伝子型ＤＥＮ４－ＩＩを有する、すなわち、前記デング熱流行地域における血清型４のデング熱疾患の症例の、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％が、前記遺伝子型を有する血清型４のデング熱ウイルスにより引き起こされるデング熱流行地域に、好ましく居住している。本明細書で参照される血清型４のデング熱ウイルスにより引き起こされるデング熱疾患は、好ましくはこの段落で規定された遺伝子型を有する血清型４のデング熱ウイルスにより引き起こされたデング熱疾患である。

本発明による方法において使用するワクチン組成物が、配列番号：１、２、３および４と、それぞれ、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または１００％の同一性を有する核酸配列を含む血清型１から４のデング熱抗原（例えばデング熱抗原ＣＹＤ１、ＣＹＤ２、ＣＹＤ３およびＣＹＤ４）を含む場合、有利には、本発明によるヒト対象（本発明のワクチン組成物が投与される）は、血清型１、２、３および４の広まるデング熱株が、配列番号：１、２、３および４とそれぞれ少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または１００％の同一性を有するｐｒＭ－Ｅのヌクレオチド配列を含む、デング熱流行地域に居住している。

好ましくは、本発明によるブースターワクチン接種、すなわち本発明の第１のまたは第２の態様による方法における使用のための組成物は、デング熱疾患の発生率または尤度を低下させる。

好ましくは、本発明によるブースターワクチン接種、すなわち、本発明の第１のまたは第２の態様による方法における使用のための組成物は、流行地域で生活している９歳から６０歳、または９歳から４５歳の個体で、デング熱ウイルスの血清型１、２、３および４により引き起こされるデング熱疾患の予防をもたらす（すなわち、デング熱疾患の予防において使用するためである）。この関係で、個体はヒト対象であると理解される。

好ましくは、本発明によるブースターワクチン接種、すなわち、本発明の第１のまたは第２の態様による方法における使用のための組成物は、流行地域で生活する１２歳から６０歳、または１２歳から４５歳の個体において、デング熱ウイルスの血清型１、２、３および４により引き起こされるデング熱疾患の予防をもたらす（すなわち、予防で使用するためである）。この関係で、個体はヒト対象であると理解される。

初回ワクチン接種でまたはブースターワクチン接種で投与されるべき本発明の生の減弱されたデング熱ウイルスまたは生の減弱されたキメラデング熱ウイルスの厳密な量は、ワクチン接種される対象の年齢および体重、投与の頻度ならびに組成物中の他の成分によって変化し得る。一般的に、初回またはブースターワクチン接種のための本発明のワクチン組成物の用量に含まれる生の減弱されたデング熱ウイルス（例えばＶＤＶ１またはＶＤＶ２）の量は、約１０^３から約１０^６ＣＣＩＤ_５０の範囲内、例えば約５×１０^３から約５×１０^５の範囲内、例えば約１０^４ＣＣＩＤ_５０である。初回またはブースターワクチン接種のための本発明のワクチン組成物中に含まれるキメラデング熱ウイルス（キメラＹＦ／デング熱ウイルスまたはＣｈｉｍｅｒｉｖａｘ（登録商標）（ＣＹＤ）ウイルスのような）の量は、約１０^５ＣＣＩＤ_５０から約１０^６ＣＣＩＤ_５０。の範囲内にある。本発明による４価の投薬形態または二価の投薬形態に含まれる血清型１から４の各々の生の減弱されたデング熱ウイルスまたは生の減弱されたキメラデング熱ウイルスの量は、好ましくは等しい。有利には、初回またはブースターワクチン接種における使用のための本発明によるワクチン組成物は、本明細書で規定された有効量のデング熱抗原を含む。

本発明の第１の態様によるブースターワクチン接種における使用のためのワクチン組成物、または第２の態様による、初回ワクチン接種とそれに続くブースターワクチン接種として使用するためのワクチン組成物は、薬学的に許容される担体または賦形剤をさらに含むこともできる。本発明による薬学的に許容される担体または賦形剤とは医薬およびワクチンの製剤化において、活性剤の安定性、滅菌および送達性を強化するために一般的に使用される、ヒトでいかなる副反応、例えばアレルギー反応も生じない任意の溶媒または分散媒その他を意味する。賦形剤は、薬学的形態、投与の方法および経路の根拠に基づいて選択される。医薬製剤に関する適当な賦形剤および要件は、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」（第１９版、Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ編、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、ペンシルベニア州（１９９５年））に記載されている。薬学的に許容される賦形剤の特定の例には、水、リン酸塩緩衝食塩水（ＰＢＳ）溶液および０．３％グリシン溶液が含まれる。本発明によるワクチン組成物は、有利には０．４％食塩水を含むことができる。

本発明の方法においてブースターとして使用するためのワクチン組成物は、ｐＨ調節および緩衝剤、等張化剤、湿潤剤等のような、生理学的条件に近づけるために必要とされる薬学的に許容される補助物質、例えば、酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、ソルビタンモノラウレート、トリエタノールアミンオレエート、ヒト血清アルブミン、必須アミノ酸、非必須アミノ酸、Ｌ－アルギニン塩酸塩、ショ糖、Ｄ－トレハロース無水物、ソルビトール、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンおよび／または尿素を場合により含有することができる。それに加えて、ワクチン組成物は、例えば、希釈剤、結合剤、安定剤、および防腐剤を含む薬学的に許容される添加剤を場合により含むことができる。好ましい安定剤は、ＷＯ２０１０／００３６７０に記載されている。

当業者により認識されているように、本発明の第１のまたは第２の態様によるブースターとして使用するためのワクチン組成物は、意図される投与経路と適合性であるように適当に剤形化される。適当な投与経路の例は、例えば、筋肉、経皮的、皮下、鼻腔内、経口または皮内を含む。有利には、投与経路は皮下である。

本発明の第１のまたは第２の態様による使用のためのワクチン組成物は、従来の皮下用注射器またはＢｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ、ニュージャージー州、米国）から市販されているような安全注射器またはジェット注射器を使用して投与することができる。皮内投与のためには、従来の皮下用の注射器がＭａｎｔｏｕｘ技法を使用して利用されるかまたはＢＤ Ｓｏｌｕｖｉａ（商標）微量注射システム（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ、ニュージャージー州、米国）のような特殊な皮内送達デバイスを使用することができる。

投与されるワクチン組成物の体積は、投与方法に依存するであろう。皮下注射の場合には、体積は、一般的に０．１と１．０ｍｌの間、好ましくは約０．５ｍｌである。

一実施形態により、本発明は、デング熱疾患に対してヒト対象を保護する方法で、本発明のワクチン組成物、および前記ワクチン組成物を本発明の第１の態様によるブースターワクチン接種として、または第２の態様による初回ワクチン接種およびブースターワクチン接種として使用するための使用説明書を含むキットも提供する。キットは、前記ワクチン組成物を単独の４価の投薬形態の形態で含むことができるか、または前記キットは、前記ワクチン組成物を２つの二価の投薬形態の形態で含むことができる。キットは、本発明で考えられる少なくとも１用量の任意のワクチン組成物を含むことができる（典型的には、注射器で）。一実施形態により、キットは、本明細書に記載された任意のワクチン組成物の複数回用量製剤を含むことができる。キットは、ブースターワクチン接種としてまたは初回ワクチン接種およびブースターワクチン接種としての、デング熱疾患を予防するための前記ワクチン組成物の使用またはデング熱疾患を防御するための前記ワクチンの使用法を簡単に述べるパンフレットをさらに含む。折りたたみ印刷物は、ワクチン接種の投与計画およびワクチン接種されるべきヒト対象集団、すなわち、血清型に関わらず、前にデング熱ウイルスに自然に感染したことがない対象をさらに簡単に述べることもある。

デング熱疾患の尤度または重症度を低下させることにおける本発明のブースター組成物の有効性は、多くの方法で測定することができる。例えば、デング熱疾患の尤度または重症度を低下させることにおける本発明のブースター組成物の有効性は、少なくとも１用量の前記ブースター組成物の投与後に（例えば、１、２または３用量の前記ブースター組成物の投与後に）：
前記ブースター組成物を受けた対象の群における
（ｉ） 任意の血清型のデング熱ウイルスにより引き起こされたデング熱疾患の症例数；
（ｉｉ） 任意の血清型のデング熱ウイルスにより引き起こされた重症デング熱症例の数；
（ｉｉｉ） 任意の血清型のデング熱ウイルスにより引き起こされたＤＨＦ症例の数；および／または
（ｉｖ） 任意の血清型のデング熱ウイルスにより引き起こされたデング熱疾患の入院した症例の数；
を測定して、これらの測定と前記ブースター組成物を受けていない対象の対照群からの等価測定とを比較することにより計算することができ、ここで、前記の両方の群における対象は、デング熱流行地域に居住して、初回ワクチン接種を受けており、デング熱ウイルスに自然に感染したことはない。ブースターを受けていない対象の対照群と比較されたときの、ブースターを受けた対象の群における（ｉ）から（ｉｖ）の任意の１つまたはそれ以上における統計的に確定的な低下が、本発明によるブースター組成物の有効性を示す。

デング熱疾患の重症度または尤度を低下させることにおける本発明によるブースター組成物の有効性は、少なくとも１用量の前記ブースター組成物の投与後に（例えば、１、２または３用量の前記ブースター組成物の投与後に）：前記ブースター組成物を受けてブースターの投与後にウイルス学的に確認されたデング熱疾患を発生した対象の群における
（ｉ） 発熱の平均持続時間および／または強度；
（ｉｉ） ヘマトクリットにおける変化により規定される血漿漏洩の平均値；
（ｉｉｉ） 血小板減少症（血小板数）の平均値；および／または
（ｉｖ） アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）およびアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）を含む肝酵素のレベルの平均値；
を測定して、これらの測定と前記ブースター組成物を受けていなくてウイルス学的に確認されたデング熱疾患を発生した対象の対照群からの等価測定とを比較することによっても計算することができ、ここで、前記両方の群における対象は、初回ワクチン接種を受けており、ブースター前にデング熱ウイルスに自然に感染したことはない。ブースターを受けたことがなくてウイルス学的に確認されたデング熱疾患を発生した対象の対照群と比較されたときの、ブースター用量を受けていて、ウイルス学的に確認されたデング熱疾患を発生した対象の群における（ｉ）から（ｉｖ）の任意の１つまたはそれ以上における統計的に有意な低下は、デング熱疾患の重症度または尤度を低下させることにおける本発明によるブースター組成物の有効性を示す。

デング熱疾患の重症度または尤度を低下させることにおける本発明によるブースター組成物の有効性は、少なくとも１用量の前記ブースター組成物の投与後に（例えば、１、２または３用量の前記ブースター組成物の投与後に）前記ブースター組成物を受けた対象の群において前記ブースター組成物により誘発された中和抗体力価を測定して、リスクの相関または保護（使用可能であれば）の相関を使用して、中和抗体力価を有効性の評価基準に変換することによっても計算することができる。

本明細書で開示された核酸配列の他の核酸配列とのアラインメントは、当業者に周知の任意の適当な配列アラインメント方法により達成することができる。例えば、配列のアラインメントは、手によって実施することもできる。それより便利には、アラインメントは、専門のコンピュータープログラムを使用して実施することができる。例えば、最適の配列アラインメントは、Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ（ＭＳＡ） ａｌｇｏｒｉｔｈｍｓ Ｃｌｕｓｔａｌ Ｗ ａｎｄ Ｃｌｕｓｔａｌ Ｏｍｅｇａ ａｌｇｏｒｉｔｈｍｓ、ｏｒ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｂｙ Ｌｏｇ－Ｅｘｐｅｃｔａｔｉｏｎ（ＭＵＳＣＬＥ） ａｌｇｏｒｉｔｈｍ（Ｅｄｇａｒ ＲＣ、 Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．（２００４年）：３２巻（５号）：１７９２頁）のような全体的配列アラインメントアルゴリズムによって達成され、同一性のパーセントが決定される。これらのアルゴリズムは、Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＥＢＩ）のｗｅｂ ｓｉｔｅ ａｔ ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／ｓｅｒｖｉｃｅｓで使用可能である。そのようなアルゴリズムが、使用者に限定されたパラメーターを有する場合、デフォルトのパラメーターが使用されるべきである。

本明細書で開示された本発明の種々の特徴および好ましい実施形態を、組み合わせて一緒にすることもできることが理解される。

本出願全体を通して、種々の引用文献が引用されている。これらの引用文献の開示は、これにより参照によって本開示中に組み入れる。

本発明は、以下の実施例によりさらに例示されるであろう。しかしながら、本発明は、特許請求の範囲によって限定されること、およびこれらの例は、本発明の例示のためにのみ与えられ、本発明の限定となることは決してないことが理解されるべきである。

実験の部
ＣＹＤ６４の臨床実験：ラテンアメリカで実施された研究で、３用量のスケジュールを以前完了した青年および成人に、ブースター注射として与えられた４価のデング熱ワクチンの免疫原性および安全性。

１）要約
研究の目的は、３用量のワクチン接種スケジュールの完了の４から５年後に投与されたＣＹＤデング熱ワクチン用量のブースター効果を推定および説明することである。

主要目的
－ ＣＹＤデング熱ワクチンブースターの力価比の幾何平均（ＧＭＴＲ）に関して、以前のＣＹＤデング熱ワクチン試験の対象における第３のＣＹＤデング熱ワクチン注射と比較して非劣性を立証すること。

副次的目的：
－ 非劣性の主要目的が達成されるならば：ＧＭＴＲに関して、以前のＣＹＤデング熱ワクチン試験の対象における第３のＣＹＤデング熱ワクチン注射と比較して、ＣＹＤデング熱ワクチンブースターの優越性を立証すること。
－ 以前のＣＹＤデング熱ワクチン試験で３用量のＣＹＤデング熱ワクチンを受けた対象におけるＣＹＤデング熱ワクチンブースターおよびプラセボ注射により惹起された免疫応答を記載すること。
－ 用量３後（以前のＣＹＤデング熱ワクチン試験の対象）の後、全ての対象におけるブースターまたはプラセボ注射の直前の各デング熱血清型の中和抗体（Ａｂ）レベルを記載すること。
－ 全ての対象におけるブースターまたはプラセボ注射後６カ月および１年の中和Ａｂの持続を記載すること。
－ 全ての対象におけるＣＹＤデング熱ワクチンを用いるブースターワクチン接種の安全性を評価すること。

主要アウトカム評価基準：
－ 研究群で、第３のＣＹＤデング熱ワクチン注射後２８日およびブースター注射後２８日に測定されたデング熱ウイルスの各血清型に対する中和抗体レベル［時間枠：ブースターワクチン接種後２８日目］。

副次的アウトカム評価基準：
－ ブースターまたはプラセボ注射の直前および２８日後におけるＣＹＤデング熱ワクチンの４種の親デング熱ウイルス株の各々に対する中和抗体レベル［時間枠：ブースターワクチン接種の前および２８日後］
－ ブースターまたはプラセボ注射後６カ月および１年におけるＣＹＤデング熱ワクチンの４種の親デング熱ウイルス株の各々に対する中和抗体レベル［時間枠：ブースターワクチン接種後６カ月および１２カ月］
－ ＣＹＤデング熱ワクチンの４種の親デング熱ウイルス株の各々について、ブースター注射後２８日における血清変換を有する対象のパーセンテージ：ブースターまたはプラセボ注射の直前および２８日後に、ＰＲＮＴにより決定されたブースター前の力価＜１０（１／希釈）およびブースター後の力価≧４０（１／希釈）、またはブースター前の力価≧１０（１／希釈）およびブースター後の力価の４倍以上の増大のいずれかを有する対象のパーセンテージ［時間枠：ブースターワクチン接種の前および２８日後］
－ 注射部位の応答型の反応、応答型の全身反応、不応答型の有害事象、および試験中に起こった重大な有害事象を報告する参加者の数［時間枠：ワクチン接種後０日から２年まで］
応答型の注射部位の反応：疼痛、紅斑、および膨潤。応答型の全身反応：発熱（温度）、頭痛、不定愁訴、筋肉痛、および無力症
各デング熱ウイルスの血清型に対する中和抗体レベルは、デング熱プラーク減少中和試験（ＰＲＮＴ）を使用して測定した。

２）統計的方法
主要目的のための仮説および統計的方法（群１のみ）
仮説：
各血清型のための個々の仮説：
ＧＭＴＲに関して、非劣性を試験する手法を、注射後２８日に各血清型について実施し、対象におけるＣＹＤ１３（Ｖｉｌｌａｒ ＬＡら、２０１３年、Ｐｅｄｉａｔｒ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ Ｊ；３２巻（１０号）：１１０２～１１０９頁）およびＣＹＤ３０（Ｄａｙａｎ ＧＨら、２０１３年、Ａｍ Ｊ Ｔｒｏｐ Ｍｅｄ Ｈｙｇ ２０１３年；８９巻（６号）：１０５８～１０６５頁）の試験から第３のＣＹＤデング熱ワクチン用量と比較して、ＣＹＤデング熱ワクチンブースター用量の非劣性を立証した。

各血清型について個々の仮説は以下の通りであった：

式中ｉ＝１、２、３および４；

は、ＣＹＤデング熱ワクチンブースター用量後２８日における免疫原性力価であり、

は、ＣＹＤ１３およびＣＹＤ３０の対象に第３のＣＹＤデング熱ワクチン用量後２８日における免疫原性の力価である。

全体的仮説：
全体的帰無仮説は、少なくとも１種の血清型について、ブースター用量後の応答（ＣＹＤデング熱ワクチンブースター注射後２８日）は、ＰＤ３の応答（ＣＹＤ１３およびＣＹＤ３０の対象において第３のＣＹＤデング熱ワクチン用量後２８日）に劣ると定めることができる：

は、少なくとも１つの

で棄却されない。

全ての

が棄却される。

統計的方法
非劣性検定を、各血清型についてＧＭ（Ｖ_{ブースター}／Ｖ_ＰＤ３）の両側９５％ＣＩを使用して実施した；９５％ＣＩは、対応のあるｔ－検定を使用して計算した。

消失しないＰＤ３およびブースター用量後の力価を有する対象をこの分析に含めた。各血清型について、両側９５％ＣＩの下限が１／２を超えていれば、非劣性が立証された。帰無仮説が棄却されれば、その場合、非劣性の対立仮説が支持される。

４通りの個々の虚無仮説が、同時に棄却された場合に、全体の帰無仮説が棄却された。

第１の副次的目的のための仮説および統計的方法
主要評価項目について、非劣性が立証されたので、次に優越性仮説を実施することにする。

仮説：
各血清型についての個々の仮説：
優越性仮説を検定する手法を、各血清型について実施して、注射後２８日におけるＧＭＴＲに関して、ＣＹＤ１３およびＣＹＤ３０試験の対象における第３のＣＹＤデング熱ワクチン用量と比較して、ＣＹＤデング熱ワクチンブースター用量の優越性を立証した。各血清型について個々の仮説は以下の通りであろう：

式中
ｉ＝１、２、３および４；

は、ＣＹＤデング熱ワクチンブースター用量後２８日における免疫原性力価であり、

は、ＣＹＤ１３およびＣＹＤ３０の対象における第３のＣＹＤデング熱ワクチン用量後２８日における免疫原性力価である。

全体的仮説：
全体的帰無仮説は、少なくとも１種の血清型についてブースター用量後の応答（ＣＹＤデング熱ワクチンブースターの注射後２８日）は、ＰＤ３応答（ＣＹＤ１３およびＣＹＤ３０の対象における第３のＣＹＤデング熱ワクチン用量後２８日）に優越しないとして宣言することができる。

は、少なくとも１つの

で棄却されない。

全ての

が棄却される。

統計的方法
各血清型について、ＧＭ（Ｖ_{ブースター}／Ｖ_ＰＤ３）の両側９５％ＣＩを使用して優越性検定を実施した；９５％ＣＩは対応のあるｔ－検定を使用して計算した。

消失しないＰＤ３およびブースター用量後の力価を有する対象を、この分析に含めた。各血清型について、両側９５％のＣＩの下限が１を超えれば、優越性が立証されたことになる。帰無仮説が棄却されたならば、その場合に、優越性の対立仮説が支持された。

４通りの個々の帰無仮説が同時に棄却されたならば、全体の帰無仮説が棄却されたことになる。

他の副次的なおよび追加の目的のための統計的方法
全ての他の分析は記述的であり；仮説は検定されない。

免疫原性について２つの試料のｔ－検定を、ｌｏｇ_１０に変換された力価に基づいて、幾何平均力価（ＧＭＴ）の比（対数尺度に基づくＧＭＴ間の差）について、９５％ＣＩで使用した。

パーセンテージについて９５％Ｃｌを、厳密な二項分布（Ｃｌｏｐｐｅｒ－Ｐｅａｒｓｏｎの方法）を使用して計算した。力価／力価比のｌｏｇ_１０変換は正規分布に従うと仮定して、最初に、平均および９５％Ｃｌを、ｌｏｇ_１０（力価／力価比）で正規分布のための通常の計算を使用して計算し、次に計算結果に逆対数変換を適用して、ＧＭＴ／ＧＭＴＲおよびそれらの９５％Ｃｌを計算した。

安全のために、９５％Ｃｌの計算で、比率について厳密な二項分布（Ｃｌｏｐｐｅｒ－Ｐｅａｒｓｏｎ方法）を使用した。

標本サイズの計算：
群１に２７９名の対象および群２に９３名の対象がいた。各群について注射後２８日に約２％の脱落を仮定して、２７３および９１の合計の評価可能対象を群１および２について、それぞれ予想した。２７３名の評価対象で、少なくとも１ＡＥを１．１％の真の発生率で観察する確率は約９５％であった。主要評価項目の標本サイズ（群１についてのみ）を推定し、ＧＭＴＲに関して、ＣＹＤ１３およびＣＹＤ３０の試験の対象における第３のＣＹＤデング熱ワクチン用量と比較して、ＣＹＤデング熱ワクチンブースターの注射後２８日で非劣性を立証した。群１における２７３名の評価可能対象で、対応のあるｔ－検定を使用して４通りの個々の帰無仮説を同時に棄却する全体的検定力（表１を参照されたい）は８８．３％であると期待され；非劣性マージン（デルタ）＝２、片側Ｉ型の誤差＝０．０２５および同じ対象におけるＰＤ３と同じ血清型のブースター用量後の応答の間における相関＝０．５を仮定して計算した。

ＰＤ３についての標準偏差（ｓｄ１）の計算は、第ＩＩ相試験のＣＹＤ１３およびＣＹＤ３０から２８日のＰＤ３の力価の標準偏差の加重平均に基づき、およびブースター用量後についての標準偏差（ｓｄ２）は、ＰＤ３についての標準偏差に基づいて推定した。

全体的帰無仮説を棄却するためには、４通りの個々の帰無仮説が同時棄却されるべきであるから、アルファについて多重度の調節は必要でない。

群１と群２の間の３：１の無作為化比が選択されて、その結果２７９および９３名の対象が、群１および群２に、それぞれ登録されると期待された。

力価（ＧＭＴ）の幾何平均および力価比（ＧＭＴＲ）の幾何平均の計算：
中和抗体力価の幾何平均は、力価のｌｏｇ_１０変換が正規分布に従うと仮定して計算して、その結果、ｌｏｇ_１０（力価）に基づく平均および９５％ＣＩを、正規分布についての通常の計算（スチューデントのｔ分布をｎ－１の自由度で使用して）を使用して計算した。次に、力価（ＧＭＴ）の幾何平均を提供するために、計算結果に逆対数変換を適用した。

ＧＭＴを計算するために、ＬＬＯＱ未満として報告される力価を０．５ＬＬＯＱの値に変換する。

ＧＭは以下のように定義される：

幾何平均比に関して、それらは、最初に２つの比較可能な群間の対数変換されたデータの差を計算して、次に比をその差の逆対数変換することにより得られる。

幾何平均力価比（ＧＭＴＲ）を計算するために、ＬＬＯＱ未満の値を０．５ＬＬＯＱに変換して分子に、ＬＬＯＱ未満の値をＬＬＯＱに変換して分母にする。

この方法は、ＧＭＴＲについて最も控えめな結果を提供する。

３）デング熱中和抗体のレベルおよび血清変換を査定する方法：
デング熱の中和Ａｂレベルは、Ｓａｎｏｆｉ Ｐａｓｔｅｕｒ ＧＣＩ、Ｓｗｉｆｔｗａｔｅｒ、米国により（またはＧＣＩが選択した外部の試験室に外注して）、ＰＲＮＴ（ＣＹＤデング熱ワクチン構築物の親デング熱ウイルス株を使用する）によって測定される。

試験する血清（予め加熱不活性化）の連続２倍希釈物を、各デング熱ウイルスの血清型１、２、３または４の一定のチャレンジ用量（プラーク－形成単位［ＰＦＵ］／ｍｌとして表示される）と混合する。混合物をＶｅｒｏ細胞の単層でコンフルエントなマイクロプレートのウェルに接種する。吸着後、細胞の単層を２ないし３日の間インキュベートする。デング熱ウイルスに感染した細胞の存在はプラークの形成により示される。血清試料中におけるＡｂの存在による中和に基づくウイルスの感染力の低下が検出される。報告される値（終点中和力価）は、１００％ウイルス装荷を表す陰性対照のウェルにおける平均ウイルスのプラーク数と比較して、デング熱チャレンジウイルスの５０％以上（プラーク数で）が中和される血清の最高の希釈を表す。終点の中和力価は、不連続の値として与えられる。アッセイの定量の下限（ＬＬＯＱ）は１０（１／希釈）である。

ＣＹＤ－ＴＤＶデング熱ワクチンの４種の親デング熱ウイルス株の各々について、ブースター注射後２８日における血清変換率は、ブースターまたはプラセボの注射の直前および２８日後にＰＲＮＴ_５０（プラーク減少中和試験）により決定される、ブースター前の力価＜１０（１／希釈）およびブースター後の力価≧４０（１／希釈）、またはブースター前の力価≧１０（１／希釈）およびブースター後の力価の４倍以上の増大のいずれかを有する対象のパーセンテージと定義した。ブースター用量の安全性プロファイルも分析されて特別の知見はなかった。

４）導入：
ＣＹＤ６４は、多中心の、観察者ブラインドの、無作為化された、プラセボを対照とする第ＩＩの相非劣性試験であり、２０１６年４月１４日と２０１６年１０月１９日の間にＣＹＤ－ＴＤＶデング熱ワクチン（Ｄｅｎｇｖａｘｉａ（登録商標））ブースターの１用量を受けた２５１名の健常青年および成人で、ブラジル、コロンビア、ホンジュラス、メキシコおよびプエルトリコで実施された。それは、ヘルシンキ宣言および Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ ｏｎ Ｈａｒｍｏｎｉｓａｔｉｏｎ ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｆｏｒ ｇｏｏｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｐｒａｃｔｉｃｅならびに全ての地方および／または国家の規制に従って実施された。それに加えて、各研究所の施設内審査委員会および独立倫理委員会が研究プロトコルを承認した。プロトコルの補正は現在まで行われていない。研究参入前に、書面によるインフォームドコンセントが全ての参加者および／または参加者の両親／保護者から得られた。

適格の参加者は、４～５年前に２つの以前の特異的試験（ＣＹＤ３０およびＣＹＤ１３、それぞれＮＣＴ０１１８７４３３およびＮＣＴ００９９３４４７）で３用量のＣＹＤ－ＴＤＶデング熱ワクチンを受けたことがある１５．３～２３．８歳の健常な青年および成人であった。排除基準には、前に言及した試験の部分でないデング熱に対する以前のワクチン接種；妊娠、授乳または妊娠の可能性のある女性；いずれかの時に別の試験に研究登録への参加；試験のワクチン接種に４週間先行して何らかのワクチンを受けたかまたは試験のワクチン接種の後４週間以内に何らかのワクチンを受ける予定があること；過去３カ月中に、免疫グロブリン、血液または血液から誘導された生成物の受容；知られているかまたは疑われている先天性または後天性免疫不全；何らかの免疫抑制療法の受容；何らかのワクチン成分に対する知られている全身性過敏症、または試験で使用されたワクチンまたは任意の同じ物質を含有するワクチンに対する生命に危険な反応歴；調査員の意見で、試験の実行または完了を妨げる可能性がある慢性疾病；行政または裁判所の命令によるか、または緊急の情況、または意思によらない入院における自由のはく奪；現在のアルコール乱用または薬物依存性；ワクチン接種日における中程度または重症の急性疾病／感染または発熱性の疾病（体温≧３８．０℃）；提案された研究に直接関与する調査員または研究センターの調査員または被用者と同定されたかまたは誰であっても直接関係する家族のメンバーと同定された人が含まれる。

試験に登録された２５１名の参加者の各々は、対話式音声応答システムまたは対話式ウェブ応答システムを媒介として、３：１の比（ＣＹＤ－ＴＤＶデング熱ワクチン群中における３名の対象に対してプラセボ群に含まれる１名の対象）に従って、２つの研究群（群１または群２）の１つに無作為に帰属された。無作為化は、順序を変えるブロック方法で、場所により層別化されて実施された。二重無作為化システムが使用されて、これは、対象処置割り付けが用量分配から分離されることを必然的に含む。固有の用量番号がランダムリストに従って規定されて、処置群間を識別するために用量番号を使用することができないことが確実にされた。対象番号はいかなる理由でも再指定されない。

登録時（０日）に、群１中の全ての参加者は、ＣＹＤ－ＴＤＶのデング熱ワクチンを受け、群２中の全ての参加者はプラセボ注射を受けた；さらに、全ての参加者は、最初のワクチン接種前のベースラインのデング熱免疫状態を推定するために、登録時に、注射前の血液試料を１回、およびデング熱免疫原性のために、注射後２８日に血液試料を１回提供した。４種の親デング熱ウイルス株の各々に対する中和抗体を、第３のＣＹＤ－ＴＤＶデング熱ワクチン注射後２８日におよびブースター注射後２８日に（群１のみ）測定した。

両群について、４種の親デング熱ウイルス株の各々に対する中和抗体（Ｎａｂ）を、ブースターまたはプラセボ注射の直前に測定した。さらに、ＣＹＤ－ＴＤＶデング熱ワクチンの４種の親デング熱ウイルス株の各々についての個々のブースター後／ブースター前の幾何平均力価比（ＧＭＴＲ）を、ブースターまたはプラセボ注射の直前および２８日後に測定した。

両群について、４種の親デング熱ウイルス株の各々に対するＮａｂを、ブースターまたはプラセボ注射後６カ月および１年に測定した。

５）ＣＹＤ６４試験、ブースター用量後２８日の結果
３７２名の計画された対象のうち合計２５１名が無作為化された。無作為化の後、１８７名の対象がＣＹＤ－ＴＤＶデング熱ワクチン群に、６４名の対象がプラセボ群に割り当てられた。国および処置群により無作為化された対象の全体的分布が表２にまとめられている。

全体として、ブースター注射後２８日に、２５０名（９９．６％）の対象が存在して（すなわちＣＹＤ－ＴＤＶデング熱ワクチン群の１名の対象が不在）および２４９名（９９．２％）の対象が血液試料を提供した（すなわち、ＣＹＤ－ＴＤＶデング熱ワクチン群の２名の対象は試料を提供しなかった）。ブースター注射後２８日に、研究を中断した対象は１名（０．５％）だけであった。中止の理由は、プロトコルを遵守しないことであった。

以前の試験における第３のＣＹＤ－ＴＤＶデング熱ワクチン用量と比較したＣＹＤ－ＴＤＶデング熱ワクチンブースターの非劣性
デング熱のＰＲＮＴの関係で、第３のＣＹＤ－ＴＤＶデング熱ワクチンの用量（ＰＤ３）と比較したＣＹＤ－ＴＤＶデング熱ワクチンブースターの用量後のデング熱Ｎａｂの非劣性が、４種の血清型について立証された（１／２を超える両側９５％のＣＩ下限）。ブースター後／ＰＤ３比を、９５％ＣＩで、各血清型について計算した（表３）。４種の血清型の各々に対するブースター後力価の共分散分析が、ベースラインＮａｂレベルを制御するために行われた（ブースター前の効果を除く）；デング熱／プラセボのＧＭＴ比を、９５％ＣＩで各血清型について計算した：血清型１、比２．０４（１．５０；２．７８）、ｐ値０．０００４種；の血清型２、比１．７４（１．２８；２．３８）、ｐ値０．００２１；血清型３、比１．８５（１．３７；２．５０）、ｐ値０．０００２；および血清型４、比２．１９（１．５３；３．１３）、ｐ値＜０．０００１。これは、免疫学的応答が、プラセボと比較してワクチン接種群で優れていることを示す（表４）。

以前の試験における第３のＣＹＤ－ＴＤＶデング熱ワクチン用量と比較したＣＹＤ－ＴＤＶデング熱ワクチンブースターの優越性
ＣＹＤ－ＴＤＶデング熱ワクチンブースターの全体的非劣性を立証することができたので、選択された以前の試験の第３の用量と比較されたブースター用量の優越性分析を、各血清型についてＧＭＴＲを使用して実施した。ブースター用量の優越性が血清型１、血清型２、および血清型４について立証された。血清型３について、ブースター用量の優越性は、この血清型について、ＧＭＴＲの両側９５％ＣＩの下限が１未満であったので、立証することができなかった（表５）。

ブースター注射後２８日における免疫応答
ブースター注射前に、ＧＭＴは処置群間でほぼ同じであった。それらは血清型１、血清型２および血清型３についても同様な範囲にある傾向があった。血清型４のＧＭＴは両群でそれらより低かった。ＣＹＤ－ＴＤＶデング熱ワクチンブースターの注射後に、ＧＭＴはブースター注射前のレベルと比較して増大した。プラセボ注射後に、血清型によるブースター注射前の血清陽性率は、プラセボ注射後に安定にとどまる傾向があった（表６）。

４種の血清型のうち３種について血清変換率が、ブースター注射後２８日に処置群間で異なったことは意味深い。血清型１についての血清変換率はＣＹＤ－ＴＤＶデング熱ワクチン群において１６．９％（９５％ＣＩ：１１．７；２３．３）およびプラセボ群において３．１％（９５％ＣＩ：０．４；１０．８）であった；血清型２については、それは、１９．２％（９５％ＣＩ：１３．７；２５．８）および１７．２％（９５％ＣＩ：８．９；２８．７）であった；血清型３について、血清変換率は、２０．３％（９５％ＣＩ：１４．７；２７．０）および４．７％（９５％ＣＩ：１．０；１３．１）であった；および血清型４については、それは、それぞれ、１９．８％（９５％ＣＩ：１４．２；２６．４）および６．３％（９５％ＣＩ：１．７；１５．２）であった。ＣＹＤ－ＴＤＶデング熱ワクチン群と比較してプラセボ群における血清型２に対する高い血清変換率の妥当と思われる１つの説明は、ＧＭＴに対する自然感染のブースター効果の強い影響である。

ベースラインにおけるデング熱の血清の状態
ＣＹＤ－ＴＤＶデング熱ワクチンのブースター注射に対する免疫応答を、ベースラインにおける対象の血清状態に従って分析した（すなわち、以前の試験ＣＹＤ１３およびＣＹＤ３０におけるＤ０において）。ＣＹＤ－ＴＤＶデング熱ワクチン群に登録した１７７名の対象の中で、１３６名（７７％）の対象は、ベースラインでデング熱に免疫であり、４１名（２３％）はデング熱非免疫であった。プラセボ群では、ベースラインでデング熱に免疫の４６名の対象および１８名の非免疫対象がいた。全体として、ブースター注射前、ならびにブースター注射後２８日におけるＰＤ３の各血清型に対するＮＡｂ力価は、ベースラインでデング熱に免疫の対象における方がより高かった（表７Ａおよび７Ｂ）。

ブースター注射前におけるデング熱の血清状態
ブースター注射前に、ＧＭＴ（１／希釈）は、デング熱に免疫の対象で２２４（血清型４）から６６８（血清型１）の範囲であり、デング熱に非免疫の対象で２９．６（血清型１）から５４．９（血清型４）であった。ブースター注射後２８日に、ＧＭＴ（１／希釈）は、デング熱に免疫の対象で３４３（血清型４）から９４０（血清型１）の範囲、デング熱に非免疫の対象で１００（血清型１）から３４７（血清型４）の範囲であった。ベースラインにおけるデング熱の血清状態は、各血清型に対する血清変換率において意味深い差を有した。血清変換率は、デング熱に非免疫群の対象の方が高かった（表８）。

安全性の評価
ＣＹＤ－ＴＤＶデング熱ワクチンまたはプラセボ注射の後、全ての対象を、即時型反応、応答型反応および不応答型事象または反応について査定した。ＳＡＥを研究中にわたって集め、重大なおよび重大でないＡＥＳＩを、規定された時間枠でＡＥＳＩのタイプによって集めた。ブースター注射後２８日までの安全性および反応原性の概要を表９に示す。

全体的に、ＣＹＤ－ＴＤＶデング熱ワクチン群中における対象の６１．０％およびプラセボ群中における４８．４％が、ブースター注射後に少なくとも１種の応答型反応を経験した。これらの対象の中で、ＣＹＤ－ＴＤＶデング熱ワクチン群中における対象の８．０％およびプラセボ群中における６．３％が、少なくとも１回のグレード３の応答型反応を報告した。各群で報告されたグレード３の応答型反応は大部分全身反応であった。ブースター注射後に、２つの処置群は、応答型反応の数、強度、発症の時、および持続時間に関してほぼ同等であった。両群で最もしばしば報告された応答型の注射部位の反応は、注射部位の疼痛であった（ＣＹＤ－ＴＤＶデング熱ワクチン群において２４．６％およびプラセボ群において１８．８％）。１名の（０．５％）対象が、注射部位の紅斑を経験し（ＣＹＤ－ＴＤＶデング熱ワクチン群において）、どちらの群でも注射部位の膨潤は報告されなかった。報告された大部分の応答型の注射部位反応は、グレード１の強度であり、３日以内に起こり、３日以内に自然に解消した。ＣＹＤ－ＴＤＶデング熱ワクチン群中の１名の（０．５％）対象が、グレード３の反応（注射部位の疼痛）を報告した。両方の群で最もしばしば報告された応答型全身反応は頭痛であった。注射後に、少なくとも１回の頭痛のエピソードが、ＣＹＤ－ＴＤＶデング熱ワクチン群中の対象の４６．５％で、およびプラセボ群中の対象の３４．４％で報告された。筋肉痛、不定愁訴、および無力症の少なくとも１回のエピソードを報告した対象の比率は、処置群を通して同じ範囲内で同様であった（２１％および３２％の間）。ＣＹＤ－ＴＤＶデング熱ワクチン群中の対象の約７．９％およびプラセボ群中の対象の９．５％が少なくとも１回の発熱エピソードを経験した。ＣＹＤ－ＴＤＶデング熱ワクチン群中の合計１５名（８．０％）の対象およびプラセボ群中の４名（６．３％）の対象が、少なくとも１回のグレード３の応答型の全身反応を経験した。頭痛が最も頻繁なグレード３の全身反応であり、それは、ＣＹＤ－ＴＤＶデング熱ワクチン群から１１名（５．９％）の対象により、およびプラセボ群中の２名（３．１％）の対象により報告された。ＣＹＤ－ＴＤＶデング熱ワクチン群中で、１名（０．５％）の対象が、少なくとも１回の即時型の不応答型非重症ＡＲを経験した。該対象は、右腋窩にグレード２のしこりを経験した。この全身事象は、５日後に自然に解消して、調査員により、ブースター注射と関係すると査定された。注射後２８日以内に報告された少しの不応答型非重症ＡＥは、調査員によれば、ワクチン接種と関係した。ＣＹＤ－ＴＤＶデング熱ワクチン群中の１名の対象が、即時型不応答型全身ＡＲ（右腋窩におけるグレード２のしこり）を経験した。同じ群中の第２の対象は、１回の不応答型非重症ＡＲ（グレード１の筋力低下）を経験した。両方の対象について、ＡＲはブースター注射後３日以内に起こって、４～７日以内に自然に解消した。５件のＳＡＥが報告されており、それは、ワクチン接種と関係しないと考えられた。有意と考えられるＡＥ（すなわち、中止、ＡＥＳＩ、および入院したＶＣＤ症例に至るＡＥおよびＳＡＥ）および死は、ブースター注射後２８日以内に報告されなかった。

長期追跡調査
ブースター／プラセボ用量後６カ月および１年における中和抗体の持続を、使用可能な対象でＰＲＮＴによって測定して（デング熱にナイーブおよびデング熱免疫の両方共ベースラインで）、結果を血清型別に表１０から１４に示す。ＣＹＤデング熱ワクチンの受容者の他の長期の追跡調査分析でわかったように、Ｄｅｎｇｖａｘｉａ（登録商標）の投与（ブースター用量）後６カ月の期間に、中和抗体力価の低下はあったが、その点で、中和抗体力価は、少なくともブースター後１年まで安定した。驚くべきことに、ベースラインでデング熱にナイーブであった対象で、低下の相対速度は、ベースラインでデング熱免疫であった対象より低かった。例えば、免疫の対象で、ブースター用量後１２カ月におけるＧＭＴレベルは、全ての４種の血清型について、すでにブースター用量の投与の直前で測定されたＧＭＴレベル未満に降下していた（すなわちＶ０１／Ｄ０で）。しかしながら、ナイーブ対象では、ブースター用量後１２カ月におけるＧＭＴレベルは、全ての４種の血清型について、ブースター用量の投与の直前に（すなわちＶ０１／Ｄ０における）測定されたＧＭＴレベルより高かった。この結果は、表１５で最も容易に見られ、それはベースラインでナイーブおよびベースラインで免疫の対象の両方における各血清型について、Ｍ１２：Ｄ０ＧＭＴ比を示す。したがって、ベースラインでナイーブな対象におけるブースター用量の追加の効果は、驚くべきことに、ベースラインにナイーブな対象において、ベースラインで免疫の患者におけるよりも持続可能であることを見ることができる。

結論
－ ＣＹＤ６４の研究の主要目的が満たされた。４～５年前に、ＣＹＤデング熱ワクチンの３用量の主要なシリーズを受けた対象では、ブースター用量は、ＧＭＴＲに関して第３の用量に対して非劣性である。
－ ＣＹＤデング熱ワクチン３用量の主要なシリーズを４～５年前に受けた対象では、ブースター用量は、ＧＭＴＲに関して、主要なシリーズの第３の用量に対して優越でない。個々の血清型の優越性が血清型３について立証されないので、全体的優越性は達成されない。
－ ＣＹＤデング熱ワクチンブースターは、注射後２８日に、各血清型のＧＭＴを増大させる。
－ ＣＹＤデング熱ワクチンブースターは、各および任意の血清型に対して血清陽性率を増大させる。
－ ベースラインにおけるデング熱の血清状態は、ブースター注射前におけるＧＭＴの持続性およびＧＭＴブースター注射後のレベルの両方に影響する；すなわち、ベースラインでデング熱に免疫だった対象は、ブースター注射の前および後の両方で、より高いＧＭＴを有する傾向があった。
－ 注射後２８日に、ベースラインでデング熱に非免疫の対象は、各血清型について、ベースラインでデング熱に免疫の対象よりも高い血清変換率を有する；すなわち、ブースター注射前とブースター注射後の間におけるＧＭＴの増大は、ベースラインでデング熱に免疫の対象と比較して、ベースラインでデング熱に非免疫（すなわちデング熱にナイーブ）であった対象の方が大きい。ベースラインにおけるデング熱に免疫とデング熱に非免疫の対象間におけるこの差は、初回ワクチン接種コースのＰＤ３とブースター後２８日のＧＭＴを比較したＧＭＴ比でも立証される。
－ ベースラインでナイーブな対象におけるブースター用量の追加の効果は、ベースラインで免疫の患者におけるよりもベースラインにナイーブな対象における方が持続可能である。
－ ３用量の主要なスケジュール後４～５年で投与されたブースターの注射は、反応原性に関して、ＣＹＤ１３およびＣＹＤ３０で投与された第１のＣＹＤデング熱ワクチン注射とほとんど同様である。

本出願において言及する配列

上のリストに挙げたヌクレオチド配列は、リストに挙げられたデング熱ウイルスのプラスのストランドＲＮＡ（すなわち対応するウイルスの粒子で見出されるヌクレオチド配列）を構成する。等価のＤＮＡ配列（それは、操作して対応するウイルスを発現されるために使用することができて、本出願の開示の一部も形成する）は、ヌクレオチドのＵを、ヌクレオチドのＴで置き換えることにより生成することができる。そのようなＤＮＡ配列が対応するデング熱ウイルスのｃＤＮＡ配列を構成する。

Claims (25)

1. ヒト対象においてデング熱ウイルスに対する中和抗体の応答を誘発するためのブースターワクチン接種の方法における使用のためのワクチン組成物であって、前記組成物が、血清型１から４の各々のデング熱抗原を含み、前記デング熱抗原の各々が、（ａ）生の減弱されたデング熱ウイルスおよび（ｂ）生の減弱されたキメラデング熱ウイルスからなるリストから独立に選択され、
   前記対象が、デング熱ウイルスの血清型１から４の各々に対する初回ワクチン接種コースを以前に受けており、前記対象が前記初回ワクチン接種コースの前にはデング熱にナイーブであり、当該初回ワクチン接種コースは複数回の用量で投与され、
   前記ブースターワクチン接種が、前記初回ワクチン接種コースの最終用量の投与の少なくとも１年後以降に投与され、
   前記ブースターワクチン接種により、血清型１から４の各々に対する中和抗体力価が、初回ワクチン後の前記中和抗体力価と比較して、少なくとも２倍の増大を生じ、
   血清型１から４の各々に対する中和抗体力価における前記２倍の増大は、前記ブースターワクチン接種後２０日と６０日の間に測定され、
   前記初回ワクチン後の前記中和抗体力価は前記ブースターワクチン接種の前に測定される、
   前記ワクチン組成物。
2. 前記ブースターワクチン投与は、前記初回ワクチン接種コースの終了後少なくとも２年後以降に投与される、請求項１に記載のワクチン組成物。
3. 前記初回ワクチン接種コースは、１回、２回または３回の用量で投与される、請求項１または２に記載のワクチン組成物。
4. 前記対象は、少なくとも１１歳または１２歳である、請求項１～３のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
5. 前記対象は、ブースター投与前に、血清型１から４の各々に対して、少なくとも１０以上、および１５０未満、好ましくは１２０未満の中和抗体力価を有する、請求項１～４の
   いずれか一項に記載のワクチン組成物。
6. 血清型１から４の各々に対する中和抗体の力価の前記２倍の増大が、前記ブースターワクチン接種後２０と６０日の間に、好ましくは、前記ブースターワクチン接種後２８日に測定される、請求項１～５のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
7. 前記中和抗体力価が、デング熱プラーク減少中和試験（ＰＲＮＴ５０）の試験を使用して測定される、請求項１～６のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
8. ブースターワクチン接種のために投与される前記ワクチン組成物は、初回ワクチン接種コース中において以前に投与されたワクチン組成物と同一である、請求項１～７のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
9. ブースターワクチン接種のために投与される前記ワクチン組成物は、初回ワクチン接種コース中において以前に投与されたワクチン組成物と異なる、請求項１～７のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
10. 前記対象は、初回ワクチン接種の前にデング熱ウイルスに自然に感染したことがない、請求項１～９のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
11. ヒト対象においてデング熱ウイルスに対する中和抗体の応答を誘発する方法における使用のためのワクチン組成物であって、前記組成物が、血清型１から４の各々のデング熱抗原を含み、前記血清型１から４のデング熱抗原は、生の減弱されたデング熱ウイルスおよび生の減弱されたキメラデング熱ウイルスからなる群から各々独立に選択され；
    前記組成物が、
    （ａ）初回ワクチン接種コースであって、当該初回ワクチン接種コースは複数回の用量で投与される、初回ワクチン接種コースと、それに続く前記初回ワクチン接種コースの最終用量の投与の少なくとも１年後以降に、
    （ｂ）ブースターワクチン接種により
    投与され、
    前記ヒト対象が前記初回ワクチン接種コースの前にはデング熱にナイーブである、
    前記ワクチン組成物。
12. 前記ブースターワクチン投与は、前記初回ワクチン接種コースの終了後少なくとも２年後以降に投与される、請求項１１に記載のワクチン組成物。
13. 前記初回ワクチン接種コースは、１回、２回または３回の用量で投与される、請求項１１または１２に記載のワクチン組成物。
14. 前記対象は少なくとも９歳である、請求項１１～１３のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
15. 前記ブースターワクチン接種は、血清型１から４の各々に対する中和抗体力価において、初回ワクチン接種後に誘発された中和抗体力価と比較して、少なくとも２倍の増大を生ずる、請求項１１～１４のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
16. 血清型１から４の各々に対する中和抗体の力価の前記２倍の増大は、前記ブースターワクチン接種後２０日と６０日の間に、好ましくは、前記ブースターワクチン接種後２８日に測定される、請求項１５に記載のワクチン組成物。
17. 前記中和抗体の力価は、デング熱プラーク減少中和試験（ＰＲＮＴ５０）の試験を使用して測定される、請求項１５または１６に記載のワクチン組成物。
18. 前記ヒト対象が、デング熱疾患に対して、好ましくは重症のデング熱疾患に対して保護される、請求項１～１７のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
19. 前記対象は、９カ月と６０歳の間の年齢である、請求項１～３、または１１～１３のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
20. 前記初回ワクチン接種コースは、３回のワクチン用量の投与にあり、第２の用量は、初回用量の６カ月後に投与され、第３の用量は、第２の用量の６カ月後に投与される、請求項１１に記載のワクチン組成物。
21. 前記ブースター免疫は、初回ワクチン接種コースの終了後２０年未満、好ましくは１０年未満に投与される、請求項１～２０のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
22. 前記ヒト対象は、デング熱流行地域に居住している、請求項１～２１のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
23. 血清型１から４の各々のデング熱抗原を含み、前記デング熱抗原のそれぞれが、生の減弱されたキメラデング熱ウイルスである、請求項１～２２のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
24. 前記生の減弱されたキメラデング熱ウイルスは、ｐｒＭ－Ｅ配列がデング熱ウイルスのｐｒＭ－Ｅ配列で置き換えられている、第１のフラビウイルス由来のゲノムを含む、請求項１～２３のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
25. 前記第１のフラビウイルスは、黄熱病ウイルスまたはデング熱ウイルス、好ましくは黄熱病ウイルスである、請求項２４に記載のワクチン組成物。