JP6993721B2

JP6993721B2 - 抗がん作用を有する化合物およびその製造方法ならびにその応用

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Publication number: JP6993721B2
Application number: JP2019527326A
Authority: JP
Inventors: 兆龍 ▲ゴン▼; 毅暉林; 風慶李; 方強唐
Original assignee: 思路迪（北京）医薬科技有限公司
Priority date: 2016-11-17
Filing date: 2017-11-17
Publication date: 2022-01-14
Anticipated expiration: 2037-11-17
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Description

本発明は化合物およびその製造方法ならびにその使用に関し、具体的には生体内においてより強い抗がん活性に選択的に形質転換させることができる化合物およびその製造方法並びに使用に関する。

抗腫瘍薬を使って腫瘍細胞を選択的に殺すが正常細胞に対する毒性が比較的低いことは、ずっと腫瘍治療における難題である。近年よく使用されるようになった標的治療は主に腫瘍細胞上の特定の変異を標的とし、腫瘍患者に福音を伝えた。しかしながら、標的療法はまた受益患者数が少なくおよび投与後薬剤耐性が早く現れるなどいろいろな制限がある。これにより、生物医学研究開発には別の方法を見つけなければならなず、それによって多くの患者に新しい治療法を提供する。

Ｌｉｎｉｆａｎｉｂは多標的抗がん化合物であり、その標的は血管新生に関連するキナーゼであり、ＶＥＧＦＲｓ、ＰＤＧＦＲｓ、ＣＳＦー１ＲおよびＦｌｔ－１／３に対していずれも比較的高い抑制作用を示す。肝がん治療に関する大規模なランダム化第ＩＩＩ相臨床試験において、Ｌｉｎｉｆａｎｉｂは肝がん患者のＴＴＰ（ｔｉｍｅｔｏｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ、無増悪期間）およびＯＲＲ（ｏｖｅｒａｌｌｒｅｓｐｏｎｓｅｒａｔｅ、全奏効率）に対していずれも肝がんの唯一の認可された標的薬物Ｓｏｒａｆｅｎｉｂ（ＴＴＰ５．４ヶ月ｖｓ４．０ヶ月、ＯＲＲ１３．０％ｖｓ６．９％）より優れるが、その毒性がＳｏｒａｆｅｎｉｂより高く、そのため、その全体的な有効性はＳｏｒａｆｅｎｉｂより高くなく、ＦＤＡの認可を取得していない（非特許文献１）。

ＪＣｌｉｎＯｎｃｏｌ、２０１４、３３、１７２－１７９

上記の問題を解決するため、本発明はＬｉｎｉｆａｎｉｂまたはその誘導体を炭素鎖によってポリペプチドに結合させ、化合物Ｌｉｎｉｆａｎｉｂ－Ｃｘ－ＡＡｙ（即ち本発明式Ｉに示す化合物）を形成させ、ＰＳＭＡ（Ｐｒｏｓｔａｔｅ－ＳｐｅｃｉｆｉｃＭｅｍｂｒａｎｅＡｎｔｉｇｅｎ、前立腺特異的膜抗原）の固形腫瘍の腫瘍内皮細胞および一部の腫瘍細胞における高い発現を利用し、腫瘍部位においてＬｉｎｉｆａｎｉｂ－Ｃｘ－Ａａｙを特異的に分解して活性のある抗がん化合物Ｌｉｎｉｆａｎｉｂまたはその誘導体を形成させ、それによって腫瘍部位において抗がん化合物を特異的に濃縮するとともにその全身毒性を低下させる。

本発明の一態様によれば、本発明は式Ｉで表される構造を有する化合物、その薬学的に許容される塩、立体異性体、溶媒和物または結晶多形体を提出する。

式Ｉ
（ただし、
Ａは（ＣＨ_２）_ｅＮ（Ｒ_７）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ_８）（ＣＨ_２）_ｆおよびＣＨ_２Ｃ（Ｏ）ＮＲ_７から選択され、ｅおよびｆは独立して０または１であり、これらそれぞれの基の左端がＲ_３およびＲ_４に置換される環に結合しており、
Ｌは－［Ｃ_ｍ（Ｏ）（Ｚ）_ｎ（ＮＨ）_ｑ］－であり、ｍ、ｑはそれぞれ０または１であり、ｎは０～１１、ｐは０～８であり、Ｚは－ＣＲ_１０－、－ＣＲ_１０－Ｏ－ＣＲ_１０－、－Ｓ－Ｓ－、－ＣＲ_１０＝ＣＲ_１０－、－ＣＲ_１０≡ＣＲ_１０－、－Ａｒ、－ＣＯ－ＮＨ－および－Ｎ＝ＣＲ_１０－から任意に選択される１個の基または複数の基が従来の方法で結合したものであり、
Ｒ_１およびＲ_２は水素基、アルコキシ基、アルコキシアルコキシ基、アルコキシアルキル基、アルキル基、アリールオキシ基、アリールオキシアルキル基、ハロゲン基、ハロアルコキシ基、ハロアルキル基、ヘテロシクリル基、ヘテロサイクリックアルケニル基、ヘテロサイクリックアルコキシ基、ヘテロサイクリックアルキル基、ヘテロサイクリックオキシアルキル基、ヒドロキシ基、ヒドロキシアルコキシ基、ヒドロキシアルキル基、（ＮＲ_ａＲ_ｂ）アルコキシ基、（ＮＲ_ａＲ_ｂ）アルケニル基、（ＮＲ_ａＲ_ｂ）アルキル基、（ＮＲ_ａＲ_ｂ）カルボニルメチル基および（ＮＲ_ａＲ_ｂ）カルボニルアルキル基から独立して選択され、
Ｒ_３およびＲ_４は水素基、アルコキシ基、アルキル基、ハロゲン基、ハロアルコキシ基、ハロアルキル基およびヒドロキシ基から独立して選択され、
Ｒ_５およびＲ_６は水素基、アルコキシ基、アルコキシアルキル基、アルコキシカルボニル、アルキル基、アリールオキシ基、アリールアルキル基、カルボキシル、シアノ基、ハロゲン基、ハロアルコキシ基、ハロアルキル基、ヒドロキシ基、ヒドロキシアルキル基、ニトロ基およびＮＲ_ｃＲ_ｄから独立して選択され、
Ｒ_７およびＲ_８は水素基およびアルキル基から独立して選択され、
Ｒ_９は水素基、ヒドロキシ基、アミノ基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基、アルキルアミノ基、アルコキシアルキル基、アルキル基、アルコキシカルボニル基、アリール基、ヘテロシクロアルキル基から独立して選択され、
Ｒ_１０は水素基、アルキル基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アルケノキシ基、ニトロ基、ハロゲン基、第一級アミノ基、第二級アミノ基および第三級アミノ基から独立して選択され、
Ｒ_ａおよびＲ_ｂは水素基、アルキル基、アルキルカルボニル基、アルキルスルホニル基、アリールスルホニル基、ハロアルキルスルホニル基およびヘテロサイクリックスルホニル基から独立して選択され、
Ｒ_ｃおよびＲ_ｄは水素基、アルキル基、アルキルカルボニル基、アリール基、アリールアルキル基、シクロアルキル基、シクロアルキルアルキル基、ヘテロシクリル基およびヘテロサイクリックアルキル基から独立して選択される。）

具体的には、各化合物の構造は以下の通りである。

（反応経路）
先ずポリペプチド（反応物１）とベンジル基からなる保護基を有するＬ（反応物２）を触媒および縮合剤の存在下で反応させ、保護基を有する中間体化合物１を得て、当該中間体化合物１をさらに極性溶媒中で接触水素化して保護基をはずして中間体化合物２を得る。

中間体化合物２とＬｉｎｉｆａｎｉｂまたはその誘導体を触媒および縮合剤の存在下で反応させ、保護基を有する中間体化合物３を得て、当該中間体化合物３をさらに酸性条件下で保護基をはずして式Ｉで表される化合物を得る。

（反応経路図）

さらに、上記中間体化合物１を製造する方法において、反応温度は－２０℃から１２５℃までであり、有機溶媒は１－２０個の炭素原子を有するエーテル、アルコール、アルカン、芳香族炭化水素、ケトン、ハロアルカン、アミド、ニトリル、エステル又はその混合物から選択され、触媒は１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ）であり、縮合剤は１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣＩ）、１、３－ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）または４－ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）の中の１種または複数種である。当該工程において、反応における反応物１、２の反応モル比は１：１～１：１０であり、反応物１と縮合剤のモル比は１：０．１～１：１０である。

さらに、中間体化合物２を製造する方法において、反応温度は－２０℃から２５０℃までであり、有機溶媒は１－２０個の炭素原子を有するエーテル、アルコール、ハロアルカン、アミド、ニトリルまたはその混合物、または水と色々な割合で混合した混合物であり、触媒はパラジウム炭素、乾性または湿性水酸化パラジウムである。上記製造方法において、中間体化合物２と触媒の反応モル比は１：０．１～１：１０である。

さらに、上記中間体化合物３を製造する方法において、反応温度は－２０℃から１２５℃までであり、有機溶媒は１－２０個の炭素原子を有するエーテル、アルコール、アルカン、芳香族炭化水素、ケトン、ハロアルカン、アミド、ニトリル、エステル又はその混合物から選択され、触媒は１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ）であり、縮合剤は１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣＩ）、１、３－ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）または４－ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）の中の１種または複数種である。当該工程において、Ｌｉｎｉｆａｎｉｂまたはその誘導体と中間体化合物２のモル比は１：１～１：１０であり、Ｌｉｎｉｆａｎｉｂまたはその誘導体と縮合剤のモル比は１：０．１～１：１０である。

さらに、上記式Ｉで表される化合物を製造する方法において、反応温度は－２０℃から１２５℃までであり、有機溶媒は１－２０個の炭素原子を有するエーテル、アルコール、アルカン、芳香族炭化水素、ケトン、ハロアルカン、アミド、ニトリル、エステル又はそれらの色々な割合で混合した混合物から選択され、酸性試薬はギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸から選択される。上記製造方法において、中間体化合物３と酸性試薬の反応モル比は１：１～１：１０である。

本発明のもう一つの態様によれば、本発明は、本発明の上記式Ｉで表される構造を有する化合物またはその薬学的に許容される塩、立体異性体、溶媒和物または結晶多形体と、薬学的に許容される担体とを含む薬物組成物を提供する。前記薬物組成物は経口投与剤形、非経口投与剤形、外用剤形および直腸内投与剤形を含むがこれらに限られない。ある実施形態において、前記薬物組成物は経口投与される錠剤、カプセル剤、丸剤、散剤、徐放性製剤、液剤および懸濁剤、非経口投与される滅菌液剤、懸濁剤または乳剤、外用軟膏剤またはクリーム剤であってもよい。ある実施形態において、前記薬物組成物および少なくとも１種の治療薬はそれぞれ独立した剤形で組み合わせられる組み合わせ薬物であり、例えばキット製品である。

本発明のもう一つの態様によれば、本発明は、活性成分および薬学的に許容される担体から調製される薬物であって、活性成分が、式Ｉで表される化合物またはその薬学的に許容される塩、立体異性体、溶媒和物または結晶多形体、および薬学的に許容される担体である薬物を提供する。前記薬物は経口投与剤形、非経口投与剤形、外用剤形および直腸内投与剤形を含むがこれらに限られない。ある実施形態において、前記薬物は経口投与される錠剤、カプセル剤、丸剤、散剤、徐放性製剤、液剤および懸濁剤、非経口投与される滅菌液剤、懸濁剤または乳剤、外用軟膏剤またはクリーム剤であってもよい。ある実施形態において、前記薬物および少なくとも１種の治療薬はそれぞれ独立した剤形で組み合わせられる組み合わせ薬物であり、例えばキット製品である。

本発明のもう一つの態様によれば、本発明は式Ｉで表される化合物、その薬学的に許容される塩、立体異性体、溶媒和物、結晶多形体が抗がん作用を有する薬物の調製における使用を提供する。前記がんは食道がん、子宮内膜がん、悪性リンパ腫、多発性骨髄腫、消化管間質腫瘍、結腸がん、直腸がん、乳がん、肝臓がん、胃がん、卵巣がん、子宮がん、子宮頸がん、膣がん、肺がん、腎臓がん、前立腺がん、膀胱がん、膵臓がん、脳がん、黒色腫などを含む。好ましくは肝がんに対し、効果が最も優れる。

本発明のもう一つの態様によれば、本発明は、治療的有効量を有する前記式Ｉで表される化合物、その薬学的に許容される塩、立体異性体、溶媒和物、結晶多形体を、それを必要とする個体に使用することを含む、がんを治療する方法を提供する。ある実施形態において、前記がんは食道がん、子宮内膜がん、悪性リンパ腫、多発性骨髄腫、消化管間質腫瘍、結腸がん、直腸がん、乳がん、肝臓がん、胃がん、卵巣がん、子宮がん、子宮頸がん、膣がん、肺がん、腎臓がん、前立腺がん、膀胱がん、膵臓がん、脳がん、黒色腫などを含む。好ましくは肝がんに対し、効果が最も優れる。

本発明における「薬学的に許容される塩」とは特定の化合物の遊離酸および遊離塩基の生物学的効果を残し、且つ生物学上またはその他の方面において有害作用を有さない塩をいう。本発明における塩とは有機酸／無機酸から形成される酸性塩、および有機塩基／無機塩基から形成される塩基性塩をいう。

本発明における「溶媒和物」とは溶媒和作用により形成される本発明の化合物と溶媒分子との組み合わせをいう。例えば水和物、エタノール溶媒和物、メタノール溶媒和物などである。

本発明における「結晶多形体」または「多結晶体」とは異なる結晶化の形で存在する本発明の化合物をいう。

本発明における「立体異性体」とは分子の中の原子の空間的配置が異なることによって生じる異性体をいう。

本発明における「薬物組成物」とは少なくとも１種の薬学的に許容される任意の化学成分が含まれる生物学的活性化合物をいい、前記薬学的に許容される化学成分は担体、安定剤、希釈剤、分散剤、懸濁剤、増粘剤、および／または賦形剤を含むがこれらに限られない。前記「担体」とは比較的無毒性の化学試薬をいい、それは化合物を細胞または組織の中に導入することに寄与する。本発明における「アルキル基」とは１～１０個の炭素原子を有する直鎖状または分枝状の飽和炭化水素鎖をいい、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、第二級ブチル基、イソブチル基、第三級ブチル基、Ｎ－ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、ｎ－ヘキシル基、３－メチルヘキシル基、２、２－ジメチルペンチル基、２、３－ジメチルペンチル基、ｎ－ヘプチル基、ｎ－オクチル基、ｎ－デシル基およびｎ－デシル基を含むがこれらに限られない。

前記「アリール基」とは６～１４個個の炭素原子を有する芳香族炭素環式基をいう。アリール基は単環式または多環式であり得る。多環芳香族炭素環式基の場合、前記多環系のうち少なくとも１つの環が不飽和であり、他の一つまたは複数の環は飽和であってもよく、部分飽和または不飽和であってもよい。アリール基の例をあげれば、フェニル基、ナフチル基、アントラセニル基、インダニル基およびテトラヒドロナフチル基がある。

前記「ヘテロアリール基」とは少なくとも１個の炭素原子および１個または複数個の独立して選択される窒素原子、酸素原子または硫黄原子を有する５員または６員の芳香環をいう。具体的には、前記「ヘテロアリール基」とは５～１４個の環原子を有する芳香族複素環基をいう。ヘテロアリール基は単環または２個もしくは３個の縮合環であってもよい。ヘテロアリール置換基の例をあげれば、６員環置換基（例えばピリジル基、ピラジニル基、ピリミジニル基、ピリダジニル基および１、３、５－、１、２、４－もしくは１、２、３－トリアジニル基など）、５員環置換基（例えばイミダゾリル基、フリル基、チエニル基、ピラゾリル基、オキサゾリル基、イソキサゾリル基、チアゾリル基、１、２、３－、１、２、４－、１、２、５－、もしくは１、３、４－オキサジアゾリル基およびイソチアゾリル基など）、６／５員縮合環置換基（例えばベンゾチオフェニル基、ベンゾイソオキサゾリル基、ベンゾオキサゾリル基、イミダゾリル基、インドリル基、ベンズイミダゾリル基、ピロロ［２、３－ｂ］ピリジニル基、プリニル基など）、および６／６員縮合環置換基（例えばベンゾピラニル基、キノリル基、イソキノリル基、シンノリニル基、キナゾリニル基、およびベンゾオキサジニル基など）などがある。

前記「シクロアルケニル」とは単環式または架橋炭化水素環系をいう。単環シクロアルケニルは４、５、６、７または８個の炭素原子および０個のヘテロ原子を有する。４員環系は１個の二重結合を有し、５員または６員環系は１個または２個の二重結合を有し、７員または８員環系は１個、２個または３個の二重結合を有する。単環シクロアルケニルの代表的な例としては、シクロブテニル基、シクロペンテニル基、シクロヘキセニル基、シクロヘプテニル基およびシクロオクテニル基を含むがこれらに限られない。

前記「ヘテロシクロアルキル基」とは計３～１４個の環原子を有する飽和環構造をいう。環原子のうち少なくとも１個がヘテロ原子（即ち酸素、窒素または硫黄）であり、その他の環原子が炭素、酸素、窒素および硫黄から独立して選択される。例えばテトラヒドロフラニル基、テトラヒドロピラニル基、テトラヒドロチオフェニル基、ピロリル基、ピロリニル基、ピロリジニル基、イミダゾリル基、イミダゾリニル基、イミダゾリジニル基、ピラゾリル基、ピラゾリニル基、ピラゾリジニル基、トリアゾリル基、テトラゾリル基などが挙げられる。

前記「有効量」とは無毒性であるが、十分な量で必要な作用を提供できる薬物または薬剤をいう。本発明の薬物組成物またはキットにおいて、ある成分または製剤ユニットの「有効量」とは当該成分がその他の成分と併用する場合効果的に必要な作用を提供できる量をいう。「有効量」は被験者の選択、年齢と個体の背景、特定の活性薬物などによって異なる可能性がある。そのため、いつも正確な「有効量」を指すことはなく、しかしながら、如何なる個体病例に適する「有効量」は本分野の一般技術者が従来の実験法によって測定することができる。

前記「被験者」とは患者またはその他の本発明の化合物または薬物組成物の投与を受けることによって本発明に記載の疾病を治療、予防、軽減および／または緩和する動物をいい、特に哺乳類であり、例えば人、犬、猿、牛、馬などが挙げられる。

インビトロ実験を実施するために、本発明はさらに式Ｉで表される化合物の代謝産物式ＩＩで表される化合物を合成し、その反応経路は以下の通りである。

先ずＬｉｎｉｆａｎｉｂまたはその誘導物とＢｏｃ保護基を有するＬ（反応物３）を縮合剤および触媒の存在下で反応させて中間体化合物Ｍａを生成し、当該中間体化合物Ｍａをトリフルオロ酢酸の存在下でＢｏｃ保護基を脱保護して中間体化合物Ｍｂを生成し、当該中間体化合物Ｍｂをさらに保護基を有するアスパラギン酸と縮合して中間体化合物Ｍｃを得て、中間体化合物Ｍｃをトリフルオロ酢酸の存在下でＢｏｃ保護基を脱保護して中間体化合物Ｍｄを生成し、Ｍｄを貴金属担持触媒の存在下で接触水素化してベンジル基を除去して代謝産物式２で表される化合物を得る。

（反応経路図）

ただし、上図で、
Ａは（ＣＨ_２）_ｅＮ（Ｒ_７）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ_８）（ＣＨ_２）_ｆおよびＣＨ_２Ｃ（Ｏ）ＮＲ_７から選択され、ｅおよびｆは独立して０または１であり、これらそれぞれの基の左端がＲ_３およびＲ_４に置換される環に結合しており、
Ｌは－［Ｃ_ｍ（Ｏ）（Ｚ）_ｎ（ＮＨ）_ｑ］－であり、ｍ、ｑはそれぞれ０または１であり、ｎは０～１１、ｐは０～８であり、Ｚは－ＣＲ_１０－、－ＣＲ_１０－Ｏ－ＣＲ_１０－、－Ｓ－Ｓ－、－ＣＲ_１０＝ＣＲ_１０－、－ＣＲ_１０≡ＣＲ_１０－、－Ａｒ、－ＣＯ－ＮＨ－および－Ｎ＝ＣＲ_１０－から任意に選択される１個の基または複数の基が従来の方法で結合したものであり、
Ｒ_１およびＲ_２は水素基、アルコキシ基、アルコキシアルコキシ基、アルコキシアルキル基、アルキル基、アリールオキシ基、アリールオキシアルキル基、ハロゲン基、ハロアルコキシ基、ハロアルキル基、ヘテロシクリル基、ヘテロサイクリックアルケニル基、ヘテロサイクリックアルコキシ基、ヘテロサイクリックアルキル基、ヘテロサイクリックオキシアルキル基、ヒドロキシ基、ヒドロキシアルコキシ基、ヒドロキシアルキル基、（ＮＲ_ａＲ_ｂ）アルコキシ基、（ＮＲ_ａＲ_ｂ）アルケニル基、（ＮＲ_ａＲ_ｂ）アルキル基、（ＮＲ_ａＲ_ｂ）カルボニルメチル基および（ＮＲ_ａＲ_ｂ）カルボニルアルキル基から独立して選択され、
Ｒ_３およびＲ_４は水素基、アルコキシ基、アルキル基、ハロゲン基、ハロアルコキシ基、ハロアルキル基およびヒドロキシ基から独立して選択され、
Ｒ_５およびＲ_６は水素基、アルコキシ基、アルコキシアルキル基、アルコキシカルボニル、アルキル基、アリールオキシ基、アリールアルキル基、カルボキシル、シアノ基、ハロゲン基、ハロアルコキシ基、ハロアルキル基、ヒドロキシ基、ヒドロキシアルキル基、ニトロ基およびＮＲ_ｃＲ_ｄから独立して選択され、
Ｒ_７およびＲ_８は水素基およびアルキル基から独立して選択され、
Ｒ_１０は水素基、アルキル基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アルケノキシ基、ニトロ基、ハロゲン基、第一級アミノ基、第二級アミノ基および第三級アミノ基から独立して選択され、
Ｒ_ａおよびＲ_ｂは水素基、アルキル基、アルキルカルボニル基、アルキルスルホニル基、アリールスルホニル基、ハロアルキルスルホニル基およびヘテロサイクリックスルホニル基から独立して選択され、
Ｒ_ｃおよびＲ_ｄは水素基、アルキル基、アルキルカルボニル基、アリール基、アリールアルキル基、シクロアルキル基、シクロアルキルアルキル基、ヘテロシクリル基およびヘテロサイクリックアルキル基から独立して選択される。

具体的には、各代謝産物の構造は以下の通りである。

本発明は合成段階においてＬｉｎｉｆａｎｉｂの複数の部位において構造改変を行って炭素鎖とアミノ酸の結合を試みるが、結果は満足のいくものではなく、大部分の化合物を合成できず、収率が非常に低く、一部の化合物の合成に成功したが、Ｌｉｎｉｆａｎｉｂの活性を遮断できず、あるいは血漿中において安定して存在できない。結局、１つの部位が結合される産物は収率が高いだけでなく、さらにＬｉｎｉｆａｎｉｂの活性を遮断でき、且つインビトロ（肝ホモジネートおよび脾ホモジネート）において生物学的変換によって活性薬物Ｌｉｎｉｆａｎｉｂを得て、低用量で腫瘍細胞特に肝がん細胞の増殖を抑制する。

前駆体および中間体の肝ホモジネート中での安定性に関する第１回実験を示す。前駆体および中間体の肝ホモジネート中での安定性に関する第２回実験を示す。前駆体および中間体の脾ホモジネート中での安定性に関する第１回実験を示す。前駆体および中間体の脾ホモジネート中での安定性に関する第２回実験を示す。肝ホモジネートと脾ホモジネートの比較を示す。

（実施例１～２：目的化合物１の製造）
（実施例１：中間体化合物３の製造）
Ｌｉｎｉｆａｎｉｂ６００ｍｇ（１．６ｍｍｏｌ）、ＨＯＢＴ３２４ｍｇ（２．４ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ４６０ｍｇ（２．４ｍｍｏｌ）を秤量して５０ｍｌのジクロロメタンに溶かし、撹拌して０．５ｈ反応させ、反応温度を２０～４０℃に制御して徐々に市販中間体化合物２Ａｓｐ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－（ＯｔＢｕ）９１２ｍｇ（１．９２ｍｍｏｌ）を加え、最後にＤＩＰＥＡ５１６ｍｇ（４．０ｍｍｏｌ）を加えた後、当該反応温度を維持して撹拌して１２ｈ反応させ、ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝４０：１）によって反応が完了したかどうかを確認する。反応液に１００ｍｌのジクロロメタンを加えて希釈し、さらに２５０ｍｌの脱イオン水で２回洗浄し、有機相を分離する。有機相をさらに１５０ｍｌの飽和食塩水で洗浄し、分液し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥する。乾燥剤をろ過除去し、ろ液を低温で濃縮させて褐色油状物を得る。当該油状物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝０：１～１００：１）に付し、近似白色の固体粉末７１６ｍｇを得て、収率は５３．８％である。

（実施例２：目的化合物１の製造）
実施例１で調製した中間体化合物３５００ｍｇ（０．３８ｍｍｏｌ）を秤量して２０ｍｌのジクロロメタンに溶かし、反応温度を－５～５℃に制御して徐々にトリフルオロ酢酸３ｍｌ（０．０４ｍｍｏｌ）を加え、当該反応温度を維持して撹拌して２０～２４ｈ反応させ、ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝４０：１）によって反応が完了したかどうかを確認する。反応液に４０ｍｌのジクロロメタンを加えて希釈し、さらに１２０ｍｌの脱イオン水で２回洗浄し、６０ｍｌの５％炭酸水素ナトリウム水溶液で２回洗浄し、１２０ｍｌの脱イオン水で２回洗浄する。有機相を分離し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥する。乾燥剤をろ過除去し、ろ液を低温で濃縮させて赤褐色油状物を得る。当該油状物を分取クロマトグラフィーに付し、近似白色の固体粉末１０６ｍｇを得て、収率は４４．９％である。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ：９．３７（ｓ，１Ｈ），８．６７（ｓ，１Ｈ），８．３２－８．２７（ｍ，２Ｈ），７．９９－７．９６（ｍ，１Ｈ），７．６５－７．５９（ｍ，３Ｈ），７．４２－７．３９（ｍ，２Ｈ），７．２７－７．１８（ｍ，２Ｈ），７．１３－７．０８（ｍ，１Ｈ），６．８１－６．７８（ｍ，２Ｈ），５．２５（ｓ，２Ｈ），４．３４－４．１１（ｍ，２Ｈ），３．７１－３．６０（ｍ，１Ｈ），２．９１－２．８１（ｍ，１Ｈ），２．３７－２．３１（ｍ，２Ｈ），２．２８（ｓ，３Ｈ），２．２４－２．２０（ｍ，１Ｈ），１．８９－１．８６（ｍ，１Ｈ）。ＨＰＬＣ純度：９６．１％（２１４ｎｍ），９５．５％（２５４ｎｍ）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ６２０．０［Ｍ＋１］^＋

構造式は以下の通りである。

（実施例３～４：目的化合物２の製造）
（実施例３：中間体化合物３の製造）
Ｌｉｎｉｆａｎｉｂ６００ｍｇ（１．６ｍｍｏｌ）、ＨＯＢＴ３２４ｍｇ（２．４ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ４６０ｍｇ（２．４ｍｍｏｌ）を秤量して５０ｍｌのジクロロメタンに溶かし、撹拌して０．５ｈ反応させ、反応温度を２０～４０℃に制御して徐々に市販中間体化合物２Ａｓｐ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－（ＯｔＢｕ）１９７８ｍｇ（１．９２ｍｍｏｌ）を加え、最後にＤＩＰＥＡ５１６ｍｇ（４．０ｍｍｏｌ）を加えた後、当該反応温度を維持して撹拌して１２ｈ反応させ、ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝４０：１）によって反応が完了したかどうかを確認する。反応液に１００ｍｌのジクロロメタンを加えて希釈し、さらに２５０ｍｌの脱イオン水で２回洗浄し、有機相を分離する。有機相をさらに１５０ｍｌの飽和食塩水で洗浄し、分液し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥する。乾燥剤をろ過除去し、ろ液を低温で濃縮させて褐色油状物を得る。当該油状物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝０：１～１００：１）に付し、近似白色の固体粉末１０３８ｍｇを得て、収率は４６．８％ある。

（実施例４：目的化合物２の製造）
実施例３で調製した中間体化合物３５２７ｍｇ（０．３８ｍｍｏｌ）を秤量して２０ｍｌのジクロロメタンに溶かし、反応温度を－５～５℃に制御して徐々にトリフルオロ酢酸３ｍｌ（０．０４ｍｍｏｌ）を加え、当該反応温度を維持して撹拌して２０～２４ｈ反応させ、ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝４０：１）によって反応が完了したかどうかを確認する。反応液に４０ｍｌのジクロロメタンを加えて希釈し、さらに１２０ｍｌの脱イオン水で２回洗浄し、６０ｍｌの５％炭酸水素ナトリウム水溶液で２回洗浄し、１２０ｍｌの脱イオン水で２回洗浄する。有機相を分離し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥する。乾燥剤をろ過除去し、ろ液を低温で濃縮させて赤褐色油状物を得る。当該油状物を分取クロマトグラフィーに付し、近似白色の固体粉末１６６ｍｇを得て、収率は４３．５％である。ＨＰＬＣ純度：９５．９％（２１４ｎｍ），９６．５％（２５４ｎｍ）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ１００７．０［Ｍ＋１］^＋

構造式は以下の通りである。

（実施例５～６：目的化合物３の製造）
（実施例５：中間体化合物３の製造）
Ｌｉｎｉｆａｎｉｂ６００ｍｇ（１．６ｍｍｏｌ）、ＨＯＢＴ３２４ｍｇ（２．４ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ４６０ｍｇ（２．４ｍｍｏｌ）を秤量して５０ｍｌのジクロロメタンに溶かし、撹拌して０．５ｈ反応させ、反応温度を２０～４０℃に制御して徐々に市販中間体化合物２Ａｓｐ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－（ＯｔＢｕ）３７５６ｍｇ（１．９２ｍｍｏｌ）を加え、最後にＤＩＰＥＡ５１６ｍｇ（４．０ｍｍｏｌ）を加えた後、当該反応温度を維持して撹拌して１２ｈ反応させ、ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝４０：１）によって反応が完了したかどうかを確認する。反応液に１００ｍｌのジクロロメタンを加えて希釈し、さらに２５０ｍｌの脱イオン水で２回洗浄し、有機相を分離する。有機相をさらに１５０ｍｌの飽和食塩水で洗浄し、分液し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥する。乾燥剤をろ過除去し、ろ液を低温で濃縮させて褐色油状物を得る。当該油状物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝０：１～１００：１）に付し、近似白色の固体粉末１０５１ｍｇを得て、収率は２８．４％である。

（実施例６：目的化合物３の製造）
実施例５で調製した中間体化合物３８７９ｍｇ（０．３８ｍｍｏｌ）を秤量して２０ｍｌのジクロロメタンに溶かし、反応温度を－５～５℃に制御して徐々にトリフルオロ酢酸３ｍｌ（０．０４ｍｍｏｌ）を加え、当該反応温度を維持して撹拌して２０～２４ｈ反応させ、ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝４０：１）によって反応が完了したかどうかを確認する。反応液に４０ｍｌのジクロロメタンを加えて希釈し、さらに１２０ｍｌの脱イオン水で２回洗浄し、６０ｍｌの５％炭酸水素ナトリウム水溶液で２回洗浄し、１２０ｍｌの脱イオン水で２回洗浄する。有機相を分離し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥する。乾燥剤をろ過除去し、ろ液を低温で濃縮させて赤褐色油状物を得る。当該油状物を分取クロマトグラフィーに付し、近似白色の固体粉末１７４ｍｇを得て、収率は２７．７％である。ＨＰＬＣ純度：９２．５％（２１４ｎｍ），９４．１％（２５４ｎｍ）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ１６５２．０［Ｍ＋１］^＋

構造式は以下の通りである。

（実施例７～１０：目的化合物４の製造）
（実施例７：中間体化合物１の製造）
ベンジル－（６－アミノ）ヘキサンエステル塩酸塩３０４ｍｇ（１．１８ｍｍｏｌ）、ＨＯＢＴ２３８ｍｇ（１．７６ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ１９２ｍｇ（１．７６ｍｍｏｌ）を秤量して５０ｍｌのジクロロメタンに溶かし、室温で溶かすまで撹拌する。反応温度を２０～４０℃に制御して徐々にＡｓｐ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－（ＯｔＢｕ）５８４ｍｇ（１．２３ｍｍｏｌ）を加え、加えた後、当該反応温度を維持して撹拌して４ｈ反応させ、ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝４０：１）によって反応が完了したかどうかを確認する。反応液に１００ｍｌのジクロロメタンを加えて希釈し、さらに２５０ｍｌの脱イオン水で２回洗浄し、有機相を分離する。有機相をさらに１５０ｍｌの飽和食塩水で洗浄し、分液し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥する。乾燥剤をろ過除去し、ろ液を低温で濃縮させて褐色油状物を得る。当該油状物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／アセトン＝１０：１～２：１）に付し、黄色の固体粉末３３８ｍｇを得て、収率は４２．３％ある。

（実施例８：中間体化合物２の製造）
実施例７で調製した中間体化合物１２８５ｍｇ（０．４２ｍｍｏｌ）を秤量し、６０ｍｌの無水メタノールに溶かし、窒素保護下で１０％Ｐｄ／Ｃ２５ｍｇを加え、水素ガスを通して３回の置換を行い、水素雰囲気下で２ＭＰａ、２０～６５℃に制御して６～１２ｈ反応させ、ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝４０：１）によって反応が完了したかどうかを確認する。窒素保護下で、反応液をろ過し、パラジウム炭素を回収する。ろ液を低温で濃縮させて黄褐色油状物を得る。当該油状物を分取クロマトグラフィーに付し、淡黄色の固体粉末１１５ｍｇを得て、収率は４６．６％である。

（実施例９：中間体化合物３の製造）
Ｌｉｎｉｆａｎｉｂ６００ｍｇ（１．６ｍｍｏｌ）、ＨＯＢＴ３２４ｍｇ（２．４ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ４６０ｍｇ（２．４ｍｍｏｌ）を秤量して５０ｍｌのジクロロメタンに溶かし、撹拌して０．５ｈ反応させ、反応温度を２０～４０℃に制御して徐々に実施例８で調製した中間体化合物２１１２９ｍｇ（１．９２ｍｍｏｌ）を加え、最後にＤＩＰＥＡ５１６ｍｇ（４．０ｍｍｏｌ）を加えた後、当該反応温度を維持して撹拌して１２ｈ反応させ、ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝４０：１）によって反応が完了したかどうかを確認する。反応液に１００ｍｌのジクロロメタンを加えて希釈し、さらに２５０ｍｌの脱イオン水で２回洗浄し、有機相を分離する。有機相をさらに１５０ｍｌの飽和食塩水で洗浄し、分液し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥する。乾燥剤をろ過除去し、ろ液を低温で濃縮させて褐色油状物を得る。当該油状物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝０：１～１００：１）に付し、近似白色の固体粉末７７６ｍｇを得て、収率は５１．３％である。

（実施例１０：目的化合物４の製造）
実施例９で調製した中間体化合物３５９５ｍｇ（０．６３ｍｍｏｌ）を秤量して２０ｍｌのジクロロメタンに溶かし、反応温度を－５～５℃に制御して徐々にトリフルオロ酢酸３ｍｌ（０．０４ｍｍｏｌ）を加え、当該反応温度を維持して撹拌して２０～２４ｈ反応させ、ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝４０：１）によって反応が完了したかどうかを確認する。反応液に４０ｍｌのジクロロメタンを加えて希釈し、さらに１２０ｍｌの脱イオン水で２回洗浄し、６０ｍｌの５％炭酸水素ナトリウム水溶液で２回洗浄し、１２０ｍｌの脱イオン水で２回洗浄する。有機相を分離し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥する。乾燥剤をろ過除去し、ろ液を低温で濃縮させて赤褐色油状物を得る。当該油状物を分取クロマトグラフィーに付し、近似白色の固体粉末１９３ｍｇを得て、収率は４１．９％である。
^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ：９．３０（ｓ，１Ｈ），８．６７（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），８．５８（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ）８．３１（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ）８．２５－８．２２（ｍ，１Ｈ），８．０９（ｓ，３Ｈ），７．９９（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ），７．６４－７．５８（ｍ，３Ｈ），７．４１（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．１９－７．０９（ｍ，２Ｈ），６．８３（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），５．１７（ｓ，２Ｈ），４．２６－４．１４（ｍ，２Ｈ），３．１５－２．９７（ｍ，４Ｈ），２．７０－２．５４（ｍ，２Ｈ），２．３３－２．３２（ｍ，２Ｈ），２．２８（ｓ，３Ｈ），２．００－１．６９（ｍ，４Ｈ），１．５０－１．３６（ｍ，４Ｈ）。ＨＰＬＣ純度：９８．２％（２１４ｎｍ），９８．５％（２５４ｎｍ）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ７３３．０［Ｍ＋１］^＋

構造式は以下の通りである。

（実施例１１～１４：目的化合物５の製造）
（実施例１１：中間体化合物１の製造）
ベンジル－（６－アミノ）ヘキサンエステル塩酸塩３０４ｍｇ（１．１８ｍｍｏｌ）、ＨＯＢＴ２３８ｍｇ（１．７６ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ１９２ｍｇ（１．７６ｍｍｏｌ）を秤量して５０ｍｌのジクロロメタンに溶かし、室温で溶かすまで撹拌する。反応温度を２０～４０℃に制御して徐々にＡｓｐ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－（ＯｔＢｕ）１２６７ｍｇ（１．２３ｍｍｏｌ）を加え、加えた後、当該反応温度を維持して撹拌して４ｈ反応させ、ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝４０：１）によって反応が完了したかどうかを確認する。反応液に１００ｍｌのジクロロメタンを加えて希釈し、さらに２５０ｍｌの脱イオン水で２回洗浄し、有機相を分離する。有機相をさらに１５０ｍｌの飽和食塩水で洗浄し、分液し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥する。乾燥剤をろ過除去し、ろ液を低温で濃縮させて褐色油状物を得る。当該油状物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／アセトン＝１０：１～２：１）に付し、黄色の固体粉末５４４ｍｇを得て、収率は３７．４％ある。

（実施例１２：中間体化合物２の製造）
実施例１１で調製した中間体化合物１５１８ｍｇ（０．４２ｍｍｏｌ）を秤量し、６０ｍｌの無水メタノールに溶かし、窒素保護下で１０％Ｐｄ／Ｃ２５ｍｇを加え、水素ガスを通して３回の置換を行い、水素雰囲気下で２ＭＰａ、２０～６５℃に制御して６～１２ｈ反応させ、ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝４０：１）によって反応が完了したかどうかを確認する。窒素保護下で、反応液をろ過し、パラジウム炭素を回収する。ろ液を低温で濃縮させて黄褐色油状物を得る。当該油状物を分取クロマトグラフィーに付し、淡黄色の固体粉末２４４ｍｇを得て、収率は５０．８％である。

（実施例１３：中間体化合物３の製造）
Ｌｉｎｉｆａｎｉｂ６００ｍｇ（１．６ｍｍｏｌ）、ＨＯＢＴ３２４ｍｇ（２．４ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ４６０ｍｇ（２．４ｍｍｏｌ）を秤量して５０ｍｌのジクロロメタンに溶かし、撹拌して０．５ｈ反応させ、反応温度を２０～４０℃に制御して徐々に実施例１２で調製した中間体化合物２２１９５ｍｇ（１．９２ｍｍｏｌ）を加え、最後にＤＩＰＥＡ５１６ｍｇ（４．０ｍｍｏｌ）を加えた後、当該反応温度を維持して撹拌して１２ｈ反応させ、ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝４０：１）によって反応が完了したかどうかを確認する。反応液に１００ｍｌのジクロロメタンを加えて希釈し、さらに２５０ｍｌの脱イオン水で２回洗浄し、有機相を分離する。有機相をさらに１５０ｍｌの飽和食塩水で洗浄し、分液し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥する。乾燥剤をろ過除去し、ろ液を低温で濃縮させて褐色油状物を得る。当該油状物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝０：１～１００：１）に付し、近似白色の固体粉末１０５４ｍｇを得て、収率は４３．９％である。

（実施例１４：目的化合物５の製造）
実施例１３で調製した中間体化合物３９４５ｍｇ（０．６３ｍｍｏｌ）を秤量して２０ｍｌのジクロロメタンに溶かし、反応温度を－５～５℃に制御して徐々にトリフルオロ酢酸３ｍｌ（０．０４ｍｍｏｌ）を加え、当該反応温度を維持して撹拌して２０～２４ｈ反応させ、ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝４０：１）によって反応が完了したかどうかを確認する。反応液に４０ｍｌのジクロロメタンを加えて希釈し、さらに１２０ｍｌの脱イオン水で２回洗浄し、６０ｍｌの５％炭酸水素ナトリウム水溶液で２回洗浄し、１２０ｍｌの脱イオン水で２回洗浄する。有機相を分離し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥する。乾燥剤をろ過除去し、ろ液を低温で濃縮させて赤褐色油状物を得る。当該油状物を分取クロマトグラフィーに付し、近似白色の固体粉末２７３ｍｇを得て、収率は３８．７％である。ＨＰＬＣ純度：９７．２％（２１４ｎｍ），９８．４％（２５４ｎｍ）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ１１２０．０［Ｍ＋１］^＋

構造式は以下の通りである。

（実施例１５～１８：目的化合物６の製造）
（実施例１５：中間体化合物１の製造）
ベンジル－（６－アミノ）ヘキサンエステル塩酸塩３０４ｍｇ（１．１８ｍｍｏｌ）、ＨＯＢＴ２３８ｍｇ（１．７６ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ１９２ｍｇ（１．７６ｍｍｏｌ）を秤量して５０ｍｌのジクロロメタンに溶かし、室温で溶かすまで撹拌する。反応温度を２０～４０℃に制御して徐々にＡｓｐ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－（ＯｔＢｕ）２４０６ｍｇ（１．２３ｍｍｏｌ）を加え、加えた後、当該反応温度を維持して撹拌して４ｈ反応させ、ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝４０：１）によって反応が完了したかどうかを確認する。反応液に１００ｍｌのジクロロメタンを加えて希釈し、さらに２５０ｍｌの脱イオン水で２回洗浄し、有機相を分離する。有機相をさらに１５０ｍｌの飽和食塩水で洗浄し、分液し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥する。乾燥剤をろ過除去し、ろ液を低温で濃縮させて褐色油状物を得る。当該油状物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／アセトン＝１０：１～２：１）に付し、黄色の固体粉末７２４ｍｇを得て、収率は２８．４％ある。

（実施例１６：中間体化合物２の製造）
実施例１５で調製した中間体化合物１９０７ｍｇ（０．４２ｍｍｏｌ）を秤量し、６０ｍｌの無水メタノールに溶かし、窒素保護下で１０％Ｐｄ／Ｃ２５ｍｇを加え、水素ガスを通して３回の置換を行い、水素雰囲気下で２ＭＰａ、２０～６５℃に制御して６～１２ｈ反応させ、ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝４０：１）によって反応が完了したかどうかを確認する。窒素保護下で、反応液をろ過し、パラジウム炭素を回収する。ろ液を低温で濃縮させて黄褐色油状物を得る。当該油状物を分取クロマトグラフィーに付し、淡黄色の固体粉末３５７ｍｇを得て、収率は４１．１％である。

（実施例１７：中間体化合物３の製造）
Ｌｉｎｉｆａｎｉｂ６００ｍｇ（１．６ｍｍｏｌ）、ＨＯＢＴ３２４ｍｇ（２．４ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ４６０ｍｇ（２．４ｍｍｏｌ）を秤量して２５０ｍｌのジクロロメタンに溶かし、撹拌して０．５ｈ反応させ、反応温度を２０～４０℃に制御して徐々に実施例１６で調製した中間体化合物２３９７２ｍｇ（１．９２ｍｍｏｌ）を加え、最後にＤＩＰＥＡ５１６ｍｇ（４．０ｍｍｏｌ）を加えた後、当該反応温度を維持して撹拌して１２ｈ反応させ、ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝４０：１）によって反応が完了したかどうかを確認する。反応液に１００ｍｌのジクロロメタンを加えて希釈し、さらに２５０ｍｌの脱イオン水で２回洗浄し、有機相を分離する。有機相をさらに１５０ｍｌの飽和食塩水で洗浄し、分液し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥する。乾燥剤をろ過除去し、ろ液を低温で濃縮させて褐色油状物を得る。当該油状物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝０：１～１００：１）に付し、近似白色の固体粉末１２６５ｍｇを得て、収率は３２．６％である。

（実施例１８：目的化合物６の製造）
実施例１７で調製した中間体化合物３１５２８ｍｇ（０．６３ｍｍｏｌ）を秤量して６０ｍｌのジクロロメタンに溶かし、反応温度を－５～５℃に制御して徐々にトリフルオロ酢酸３ｍｌ（０．０４ｍｍｏｌ）を加え、当該反応温度を維持して撹拌して２０～２４ｈ反応させ、ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝４０：１）によって反応が完了したかどうかを確認する。反応液に４０ｍｌのジクロロメタンを加えて希釈し、さらに１２０ｍｌの脱イオン水で２回洗浄し、６０ｍｌの５％炭酸水素ナトリウム水溶液で２回洗浄し、１２０ｍｌの脱イオン水で２回洗浄する。有機相を分離し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥する。乾燥剤をろ過除去し、ろ液を低温で濃縮させて赤褐色油状物を得る。当該油状物を分取クロマトグラフィーに付し、近似白色の固体粉末３０７ｍｇを得て、収率は２７．６％である。ＨＰＬＣ純度：９６．５％（２１４ｎｍ），９７．７％（２５４ｎｍ）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ１７６５．０［Ｍ＋１］^＋

構造式は以下の通りである。

（実施例１９～２２：目的化合物７の製造）
（実施例１９：中間体化合物１の製造）
ベンジル－（１２－アミノ）ドデカン酸エステル塩酸塩４０４ｍｇ（１．１８ｍｍｏｌ）、ＨＯＢＴ２３８ｍｇ（１．７６ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ１９２ｍｇ（１．７６ｍｍｏｌ）を秤量して５０ｍｌのジクロロメタンに溶かし、室温で溶かすまで撹拌する。反応温度を２０～４０℃に制御して徐々にＡｓｐ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－（ＯｔＢｕ）５８４ｍｇ（１．２３ｍｍｏｌ）を加え、加えた後、当該反応温度を維持して撹拌して４ｈ反応させ、ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝４０：１）によって反応が完了したかどうかを確認する。反応液に１００ｍｌのジクロロメタンを加えて希釈し、さらに２５０ｍｌの脱イオン水で２回洗浄し、有機相を分離する。有機相をさらに１５０ｍｌの飽和食塩水で洗浄し、分液し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥する。乾燥剤をろ過除去し、ろ液を低温で濃縮させて褐色油状物を得る。当該油状物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／アセトン＝１０：１～２：１）に付し、黄色の固体粉末２７８ｍｇを得て、収率は３５．６％ある。

（実施例２０：中間体化合物２の製造）
実施例１９で調製した中間体化合物１２２７０ｍｇ（３．４３ｍｍｏｌ）を秤量し、１００ｍｌの無水メタノールに溶かし、窒素保護下で１０％Ｐｄ／Ｃ５０ｍｇを加え、水素ガスを通して３回の置換を行い、水素雰囲気下で２ＭＰａ、２０～６５℃に制御して６～１２ｈ反応させ、ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝４０：１）によって反応が完了したかどうかを確認する。窒素保護下で、反応液をろ過し、パラジウム炭素を回収する。ろ液を低温で濃縮させて黄褐色油状物を得る。当該油状物を分取クロマトグラフィーに付し、淡黄色の固体粉末１１０１ｍｇを得て、収率は５６．１％である。

（実施例２１：中間体化合物３の製造）
Ｌｉｎｉｆａｎｉｂ６００ｍｇ（１．６ｍｍｏｌ）、ＨＯＢＴ３２４ｍｇ（２．４ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ４６０ｍｇ（２．４ｍｍｏｌ）を秤量して５０ｍｌのジクロロメタンに溶かし、撹拌して０．５ｈ反応させ、反応温度を２０～４０℃に制御して徐々に実施例２０で調製した中間体化合物２１０９８ｍｇ（１．９２ｍｍｏｌ）を加え、最後にＤＩＰＥＡ５１６ｍｇ（４．０ｍｍｏｌ）を加えた後、当該反応温度を維持して撹拌して１２ｈ反応させ、ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝４０：１）によって反応が完了したかどうかを確認する。反応液に１００ｍｌのジクロロメタンを加えて希釈し、さらに２５０ｍｌの脱イオン水で２回洗浄し、有機相を分離する。有機相をさらに１５０ｍｌの飽和食塩水で洗浄し、分液し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥する。乾燥剤をろ過除去し、ろ液を低温で濃縮させて褐色油状物を得る。当該油状物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝０：１～１００：１）に付し、近似白色の固体粉末５８９ｍｇを得て、収率は３９．６％である。

（実施例２２：目的化合物７の製造）
実施例２１で調製した中間体化合物３５８５ｍｇ（０．６３ｍｍｏｌ）を秤量して２０ｍｌのジクロロメタンに溶かし、反応温度を－５～５℃に制御して徐々にトリフルオロ酢酸３ｍｌ（０．０４ｍｍｏｌ）を加え、当該反応温度を維持して撹拌して２０～２４ｈ反応させ、ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝４０：１）によって反応が完了したかどうかを確認する。反応液に４０ｍｌのジクロロメタンを加えて希釈し、さらに１２０ｍｌの脱イオン水で２回洗浄し、６０ｍｌの５％炭酸水素ナトリウム水溶液で２回洗浄し、１２０ｍｌの脱イオン水で２回洗浄する。有機相を分離し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥する。乾燥剤をろ過除去し、ろ液を低温で濃縮させて赤褐色油状物を得る。当該油状物を分取クロマトグラフィーに付し、近似白色の固体粉末２２３ｍｇを得て、収率は４３．３％である。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ：９．３１（ｓ，１Ｈ），８．６７（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ）８．５９（ｓ，１Ｈ），８．３１（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），８．２１（ｓ，１Ｈ），８．１９－７．９８（ｍ，４Ｈ），７．６４－７．５７（ｍ，３Ｈ），７．４２（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），７．１９－７．０９（ｍ，２Ｈ），６．８３－６．８２（ｍ，１Ｈ），５．１８（ｓ，２Ｈ），４．２９－４．１３（ｍ，２Ｈ），３．１２－２．９６（ｍ，４Ｈ），２．７３－２．６８（ｍ，２Ｈ），２．６７－２．６３（ｍ，２Ｈ），２．２８（ｓ，３Ｈ），２．１２－１．６７（ｍ，４Ｈ），１．３７－１．２３（ｍ，１８Ｈ）。ＨＰＬＣ純度：９９．０％（２１４ｎｍ），９９．０％（２５４ｎｍ）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ８１７．１［Ｍ＋１］^＋

構造式は以下の通りである。

（実施例２３～２６：目的化合物８（Ｌｉｎｉｆａｎｉｂ－Ｃ_１２－ＡＡ_５）の製造）
（実施例２３：中間体化合物１の製造）
ベンジル－（１２－アミノ）ドデカン酸エステル塩酸塩４０４ｍｇ（１．１８ｍｍｏｌ）、ＨＯＢＴ２３８ｍｇ（１．７６ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ１９２ｍｇ（１．７６ｍｍｏｌ）を秤量して２５０ｍｌのジクロロメタンに溶かし、室温で溶かすまで撹拌する。反応温度を２０～４０℃に制御して徐々にＡｓｐ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－（ＯｔＢｕ）１２６７ｍｇ（１．２３ｍｍｏｌ）を加え、加えた後、当該反応温度を維持して撹拌して４ｈ反応させ、ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝４０：１）によって反応が完了したかどうかを確認する。反応液に１００ｍｌのジクロロメタンを加えて希釈し、さらに２５０ｍｌの脱イオン水で２回洗浄し、有機相を分離する。有機相をさらに１５０ｍｌの飽和食塩水で洗浄し、分液し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥する。乾燥剤をろ過除去し、ろ液を低温で濃縮させて褐色油状物を得る。当該油状物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／アセトン＝１０：１～２：１）に付し、黄色の固体粉末５３３ｍｇを得て、収率は３５．６％ある。

（実施例２４：中間体化合物２の製造）
実施例２３で調製した中間体化合物１４０００ｍｇ（３．０ｍｍｏｌ）を秤量し、１００ｍｌの無水メタノールに溶かし、窒素保護下で１０％Ｐｄ／Ｃ５０ｍｇを加え、水素ガスを通して３回の置換を行い、水素雰囲気下で２ＭＰａ、２０～６５℃に制御して６～１２ｈ反応させ、ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝４０：１）によって反応が完了したかどうかを確認する。窒素保護下で、反応液をろ過し、パラジウム炭素を回収する。ろ液を低温で濃縮させて黄褐色油状物を得る。当該油状物を分取クロマトグラフィーに付し、淡黄色の固体粉末１５９５ｍｇを得て、収率は４２．８％である。^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ１．２７（ｂｒｓ，１４Ｈ），１．４６～１．４７（ｍ，５４Ｈ），１．６５～１．８５（ｍ，８Ｈ），２．３４～２．３５（ｂｒｓ，１６Ｈ），，３．０６～３．３６（ｂｒｓ，２Ｈ），４．４６－４．５２（ｍ，５Ｈ），６．３１（ｂｒｓ，１Ｈ，－ＮＨ－Ｃ＝Ｏ），６．６８（ｂｒｓ，１Ｈ，－ＮＨ－Ｃ＝Ｏ），６．９１（ｂｒｓ，２Ｈ，－ＮＨ－Ｃ＝Ｏ），７．１９（ｂｒｓ，１Ｈ，－ＮＨ－Ｃ＝Ｏ），７．５４（ｂｒｓ，１Ｈ，－ＮＨ－Ｃ＝Ｏ）。^１３ＣＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ１９２．９７，１９０．３４，１７３．０２，１７２．２２，１７２．００，１７１．８１，１７１．２２，１７１．０８，１７０．７６，８２．４２，８２．２７，８２．０８，８２．０２，８０．６４，８０．５３，５２．３５，５１．８３，５１．４４，３９．８４，３３．７９，３２．５２，３２．１５，３１．６１，３１．１１，２９．２６，２９．１１，２８．９７，２８．９２，２８．８６，２８．７８，２８．７１，２８．４８，２８．３３，２８．１０，２８．０１，２７．９８，２７．７６，２７．６５，２６．６８，２４．６１，１２．１０。

構造式は以下の通りである。

（実施例２５：中間体化合物３の製造）
Ｌｉｎｉｆａｎｉｂ６００ｍｇ（１．６ｍｍｏｌ）、ＨＯＢＴ３２４ｍｇ（２．４ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ４６０ｍｇ（２．４ｍｍｏｌ）を秤量して２５０ｍｌのジクロロメタンに溶かし、撹拌して０．５ｈ反応させ、反応温度を２０～４０℃に制御して徐々に実施例２４で調製した中間体化合物２２３４０ｍｇ（１．９ｍｍｏｌ）を加え、最後にＤＩＰＥＡ５１６ｍｇ（４．０ｍｍｏｌ）を加えた後、当該反応温度を維持して撹拌して１２ｈ反応させ、ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝４０：１）によって反応が完了したかどうかを確認する。反応液に１００ｍｌのジクロロメタンを加えて希釈し、さらに２５０ｍｌの脱イオン水で２回洗浄し、有機相を分離する。有機相をさらに１５０ｍｌの飽和食塩水で洗浄し、分液し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥する。乾燥剤をろ過除去し、ろ液を低温で濃縮させて褐色油状物を得る。当該油状物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝０：１～１００：１）に付し、近似白色の固体粉末１１３２ｍｇを得て、収率は４４．７％である。

（実施例２６：目的化合物８（Ｌｉｎｉｆａｎｉｂ－Ｃ_１２－ＡＡ_５）の製造）
実施例２５で調製した中間体化合物３１０００ｍｇ（０．６３ｍｍｏｌ）を秤量して６０ｍｌのジクロロメタンに溶かし、反応温度を－５～５℃に制御して徐々にトリフルオロ酢酸３ｍｌ（０．０４ｍｍｏｌ）を加え、当該反応温度を維持して撹拌して２０～２４ｈ反応させ、ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝４０：１）によって反応が完了したかどうかを確認する。反応液に４０ｍｌのジクロロメタンを加えて希釈し、さらに１２０ｍｌの脱イオン水で２回洗浄し、６０ｍｌの５％炭酸水素ナトリウム水溶液で２回洗浄し、１２０ｍｌの脱イオン水で２回洗浄する。有機相を分離し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥する。乾燥剤をろ過除去し、ろ液を低温で濃縮させて赤褐色油状物を得る。当該油状物を分取クロマトグラフィーに付し、近似白色の固体粉末２９３ｍｇを得て、収率は３８．６％である。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ：９．５１（ｓ，１Ｈ），８．９７（ｓ，１Ｈ），８．５６（ｓ，１Ｈ），８．３２（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），８．１８（ｓ，１Ｈ），８．０２－７．９６（ｍ，４Ｈ），７．６６－７．５７（ｍ，３Ｈ），７．４２（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．１９－７．０８（ｍ，２Ｈ），６．８２－６．８１（ｍ，１Ｈ），５．１８（ｓ，２Ｈ），４．１６－３．９８（ｍ，６Ｈ），３．０７－２．９６（ｍ，４Ｈ），２．６７－２．６３（ｍ，２Ｈ），２．２８（ｓ，３Ｈ），２．２４－２．１４（ｍ，８Ｈ），２．０３－１．８７（ｍ，５Ｈ），１．７７－１．６７（ｍ，４Ｈ），１．３７－１．２３（ｍ，１８Ｈ）。ＨＰＬＣ純度：９９．３％（２１４ｎｍ），９９．１％（２５４ｎｍ）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ１２０４．５［Ｍ＋１］^＋

構造式は以下の通りである。

（実施例２７～３０：目的化合物９の製造）
（実施例２７：中間体化合物１の製造）
ベンジル－（１２－アミノ）ドデカン酸エステル塩酸塩４０４ｍｇ（１．１８ｍｍｏｌ）、ＨＯＢＴ２３８ｍｇ（１．７６ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ１９２ｍｇ（１．７６ｍｍｏｌ）を秤量して２５０ｍｌのジクロロメタンに溶かし、室温で溶かすまで撹拌する。反応温度を２０～４０℃に制御して徐々にＡｓｐ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－（ＯｔＢｕ）２４０６ｍｇ（１．２３ｍｍｏｌ）を加え、加えた後、当該反応温度を維持して撹拌して４ｈ反応させ、ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝４０：１）によって反応が完了したかどうかを確認する。反応液に１００ｍｌのジクロロメタンを加えて希釈し、さらに２５０ｍｌの脱イオン水で２回洗浄し、有機相を分離する。有機相をさらに１５０ｍｌの飽和食塩水で洗浄し、分液し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥する。乾燥剤をろ過除去し、ろ液を低温で濃縮させて褐色油状物を得る。当該油状物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／アセトン＝１０：１～２：１）に付し、黄色の固体粉末６２７ｍｇを得て、収率は２３．７％ある。

（実施例２８：中間体化合物２の製造）
実施例２７で調製した中間体化合物１６７３２ｍｇ（３．０ｍｍｏｌ）を秤量し、２００ｍｌの無水メタノールに溶かし、窒素保護下で１０％Ｐｄ／Ｃ５０ｍｇを加え、水素ガスを通して３回の置換を行い、水素雰囲気下で２ＭＰａ、２０～６５℃に制御して６～１２ｈ反応させ、ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝４０：１）によって反応が完了したかどうかを確認する。窒素保護下で、反応液をろ過し、パラジウム炭素を回収する。ろ液を低温で濃縮させて黄褐色油状物を得る。当該油状物を分取クロマトグラフィーに付し、淡黄色の固体粉末２４８０ｍｇを得て、収率は３８．４％である。

（実施例２９：中間体化合物３の製造）
Ｌｉｎｉｆａｎｉｂ６００ｍｇ（１．６ｍｍｏｌ）、ＨＯＢＴ３２４ｍｇ（２．４ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ４６０ｍｇ（２．４ｍｍｏｌ）を秤量して２５０ｍｌのジクロロメタンに溶かし、撹拌して０．５ｈ反応させ、反応温度を２０～４０℃に制御して徐々に実施例２８で調製した中間体化合物２４１３４ｍｇ（１．９２ｍｍｏｌ）を加え、最後にＤＩＰＥＡ５１６ｍｇ（４．０ｍｍｏｌ）を加えた後、当該反応温度を維持して撹拌して１２ｈ反応させ、ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝４０：１）によって反応が完了したかどうかを確認する。反応液に１００ｍｌのジクロロメタンを加えて希釈し、さらに２５０ｍｌの脱イオン水で２回洗浄し、有機相を分離する。有機相をさらに１５０ｍｌの飽和食塩水で洗浄し、分液し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥する。乾燥剤をろ過除去し、ろ液を低温で濃縮させて褐色油状物を得る。当該油状物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝０：１～１００：１）に付し、近似白色の固体粉末１１５２ｍｇを得て、収率は２８．７％である。

（実施例３０：目的化合物９の製造）
実施例２９で調製した中間体化合物３１５８１ｍｇ（０．６３ｍｍｏｌ）を秤量して６０ｍｌのジクロロメタンに溶かし、反応温度を－５～５℃に制御して徐々にトリフルオロ酢酸３ｍｌ（０．０４ｍｍｏｌ）を加え、当該反応温度を維持して撹拌して２０～２４ｈ反応させ、ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝４０：１）によって反応が完了したかどうかを確認する。反応液に４０ｍｌのジクロロメタンを加えて希釈し、さらに１２０ｍｌの脱イオン水で２回洗浄し、６０ｍｌの５％炭酸水素ナトリウム水溶液で２回洗浄し、１２０ｍｌの脱イオン水で２回洗浄する。有機相を分離し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥する。乾燥剤をろ過除去し、ろ液を低温で濃縮させて赤褐色油状物を得る。当該油状物を分取クロマトグラフィーに付し、近似白色の固体粉末２７４ｍｇを得て、収率は２３．５％である。ＨＰＬＣ純度：９３．２％（２１４ｎｍ），９４．５％（２５４ｎｍ）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ１８４９．７［Ｍ＋１］^＋

構造式は以下の通りである。

（実施例３１～３３：目的化合物１０の製造）
（実施例３１：代謝産物中間体Ｍｃの製造）
Ｂｏｃ－Ｌ－アスパラギン酸１－ベンジルエステル１３７ｍｇ（０．４２ｍｍｏｌ）、ＨＯＢＴ７７．８ｍｇ（０．５８ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ１１０ｍｇ（０．５８ｍｍｏｌ）を秤量して１０ｍｌのジクロロメタンに溶かし、撹拌して０．５ｈ反応させ、反応温度を２０～４０℃に制御して徐々にＬｉｎｉｆａｎｉｂ１４３ｍｇ（０．３８ｍｍｏｌ）を加え、最後にＤＩＰＥＡ１２４ｍｇ（０．９６ｍｍｏｌ）を加え、加えた後、当該反応温度を維持して撹拌して４ｈ反応させ、ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝４０：１）によって反応が完了したかどうかを確認する。反応液に５０ｍｌのジクロロメタンを加えて希釈し、さらに１００ｍｌの脱イオン水で２回洗浄し、有機相を分離して無水硫酸ナトリウムで乾燥する。乾燥剤をろ過除去し、ろ液を低温で濃縮させて褐色油状物を得る。当該油状物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝０：１～３０：１）に付し、黄色油状物２２１ｍｇを得て、収率は７７．３％である。

（実施例３２：代謝産物中間体Ｍｄの製造）
実施例３１で調製した中間体化合物Ｍｃ１９８ｍｇ（０．２９ｍｍｏｌ）を秤量して２０ｍｌのジクロロメタンに溶かし、反応温度を－５～５℃に制御して徐々にトリフルオロ酢酸を加え、当該反応温度を維持して撹拌して１．５～２ｈ反応させ、ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝４０：１）によって反応が完了したかどうかを確認する反応液に５０ｍｌのジクロロメタンを加えて希釈し、さらに１２０ｍｌの脱イオン水で２回洗浄し、６０ｍｌの５％炭酸水素ナトリウム水溶液で２回洗浄し、１２０ｍｌの脱イオン水で２回洗浄する。有機相を分離し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥する。乾燥剤をろ過除去し、ろ液を低温で濃縮させて黄色油状物を得る。当該油状物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝０：１～１００：１）に付し、黄色油状物１３１ｍｇを得て、収率は７７．８％である。

（実施例３３：目的化合物１０の製造）
実施例３２で調製した中間体化合物Ｍｄ３３６ｍｇ（０．５８ｍｍｏｌ）を秤量し、３０ｍｌの無水メタノールに溶かし、窒素保護下で１０％Ｐｄ／Ｃ２５ｍｇを加え、水素ガスを通して３回の置換を行い、水素雰囲気下で２ＭＰａ、２０～６５℃に制御して６～１２ｈ反応させ、ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝４０：１）によって反応が完了したかどうかを確認する。窒素保護下で、反応液をろ過し、パラジウム炭素を回収する。ろ液を低温で濃縮させて淡黄色油状物を得る当該油状物を分取クロマトグラフィーに付し、白色の固体粉末１７８ｍｇを得て、収率は６２．６％である。ＨＰＬＣ純度：９７．２％（２１４ｎｍ），９８．６％（２５４ｎｍ）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ４９１．０［Ｍ＋１］＋

構造式は以下の通りである。

（実施例３４～３８：目的化合物１１の製造）
（実施例３４：代謝産物中間体Ｍａの製造）
６－（ＢＯＣ－アミノ）ヘキサン酸１３６ｍｇ（０．５９ｍｍｏｌ）、ＨＯＢＴ１０７ｍｇ（０．８ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ１５２ｍｇ（０．８ｍｍｏｌ）を秤量して１０ｍｌのジクロロメタンに溶かし、撹拌して０．５ｈ反応させ、反応温度を２０～４０℃に制御して徐々にＬｉｎｉｆａｎｉｂ２００ｍｇ（０．５３ｍｍｏｌ）を加え、最後にＤＩＰＥＡ１７１ｍｇ（１．３ｍｍｏｌ）を加え、加えた後、当該反応温度を維持して撹拌して４ｈ反応させ、ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝４０：１）によって反応が完了したかどうかを確認する。反応液に５０ｍｌのジクロロメタンを加えて希釈し、さらに１００ｍｌの脱イオン水で２回洗浄し、有機相を分離して無水硫酸ナトリウムで乾燥する。乾燥剤をろ過除去し、ろ液を低温で濃縮させて褐色油状物を得る。当該油状物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１：０～３０：１）に付し、黄色油状物２０７ｍｇを得て、収率は５９．８％である。

（実施例３５：代謝産物中間体Ｍｂの製造）
実施例３４で調製した中間体化合物Ｍａ１９４ｍｇ（０．３３ｍｍｏｌ）を秤量して２０ｍｌのジクロロメタンに溶かし、反応温度を－５～５℃に制御して徐々にトリフルオロ酢酸３ｍｌ（０．０４ｍｍｏｌ）を加え、当該反応温度を維持して撹拌して１．５～２ｈ反応させ、ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝４０：１）によって反応が完了したかどうかを確認する。反応液に５０ｍｌのジクロロメタンを加えて希釈し、さらに１２０ｍｌの脱イオン水で２回洗浄し、６０ｍｌの５％炭酸水素ナトリウム水溶液で２回洗浄し、１２０ｍｌの脱イオン水で２回洗浄する。有機相を分離し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥する。乾燥剤をろ過除去し、ろ液を低温で濃縮させて赤褐色油状物を得る。当該油状物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝０：１～１００：１）に付し、黄色油状物１４７ｍｇを得て、収率は９１．１％である。

（実施例３６：代謝産物中間体Ｍｃの製造）
Ｂｏｃ－Ｌ－アスパラギン酸１－ベンジルエステル１３７ｍｇ（０．４２ｍｍｏｌ）、ＨＯＢＴ７７．８ｍｇ（０．５８ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ１１０ｍｇ（０．５８ｍｍｏｌ）を秤量して１０ｍｌのジクロロメタンに溶かし、撹拌して０．５ｈ反応させ、反応温度を２０～４０℃に制御して徐々に実施例３５で調製した中間体Ｍｂ１８５ｍｇ（０．３８ｍｍｏｌ）を加え、最後にＤＩＰＥＡ１２４ｍｇ（０．９６ｍｍｏｌ）を加え、加えた後、当該反応温度を維持して撹拌して４ｈ反応させ、ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝４０：１）によって反応が完了したかどうかを確認する。反応液に５０ｍｌのジクロロメタンを加えて希釈し、さらに１００ｍｌの脱イオン水で２回洗浄し、有機相を分離して無水硫酸ナトリウムで乾燥する。乾燥剤をろ過除去し、ろ液を低温で濃縮させて褐色油状物を得る。当該油状物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝０：１～３０：１）に付し、黄色油状物２００ｍｇを得て、収率は６６．３％である。

（実施例３７：代謝産物中間体Ｍｄの製造）
実施例３６で調製した中間体化合物Ｍｃ２３０ｍｇ（０．２９ｍｍｏｌ）を秤量して２０ｍｌのジクロロメタンに溶かし、反応温度を－５～５℃に制御して徐々にトリフルオロ酢酸を加え、当該反応温度を維持して撹拌して１．５～２ｈ反応させ、ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝４０：１）によって反応が完了したかどうかを確認する反応液に５０ｍｌのジクロロメタンを加えて希釈し、さらに１２０ｍｌの脱イオン水で２回洗浄し、６０ｍｌの５％炭酸水素ナトリウム水溶液で２回洗浄し、１２０ｍｌの脱イオン水で２回洗浄する。有機相を分離し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥する。乾燥剤をろ過除去し、ろ液を低温で濃縮させて黄色油状物を得る。当該油状物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝０：１～１００：１）に付し、黄色油状物１５８ｍｇを得て、収率は７８．４％である。

（実施例３８：目的化合物１１の製造）
実施例３７で調製した中間体化合物Ｍｄ４２５ｍｇ（０．６１ｍｍｏｌ）を秤量し、３０ｍｌの無水メタノールに溶かし、窒素保護下で１０％Ｐｄ／Ｃ２５ｍｇを加え、水素ガスを通して３回の置換を行い、水素雰囲気下で２ＭＰａ、２０～６５℃に制御して６～１２ｈ反応させ、ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝４０：１）によって反応が完了したかどうかを確認する。窒素保護下で、反応液をろ過し、パラジウム炭素を回収する。ろ液を低温で濃縮させて淡黄色油状物を得る当該油状物を分取クロマトグラフィーに付し、白色の固体粉末２３４ｍｇを得て、収率は６３．４％である。ＨＰＬＣ純度：９６．２％（２１４ｎｍ），９８．１％（２５４ｎｍ）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ６０４．３［Ｍ＋１］^＋

構造式は以下の通りである。

（実施例３９～４３：目的化合物１２（Ｌｉｎｉｆａｎｉｂ－Ｃ_１２－Ａｓｐ）の製造）
（実施例３９：代謝産物中間体Ｍａの製造）
１２－（ＢＯＣ－アミノ）ドデカン酸１８６ｍｇ（０．５９ｍｍｏｌ）、ＨＯＢＴ１０７ｍｇ（０．８ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ１５２ｍｇ（０．８ｍｍｏｌ）を秤量して１０ｍｌのジクロロメタンに溶かし、撹拌して０．５ｈ反応させ、反応温度を２０～４０℃に制御して徐々にＬｉｎｉｆａｎｉｂ２００ｍｇ（０．５３ｍｍｏｌ）を加え、最後にＤＩＰＥＡ１７１ｍｇ（１．３ｍｍｏｌ）を加え、加えた後、当該反応温度を維持して撹拌して４ｈ反応させ、ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝４０：１）によって反応が完了したかどうかを確認する。反応液に５０ｍｌのジクロロメタンを加えて希釈し、さらに１００ｍｌの脱イオン水で２回洗浄し、有機相を分離して無水硫酸ナトリウムで乾燥する。乾燥剤をろ過除去し、ろ液を低温で濃縮させて褐色油状物を得る。当該油状物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１：０～３０：１）に付し、黄色油状物２２５ｍｇを得て、収率は６３．２％である。

（実施例４０：代謝産物中間体Ｍｂの製造）
実施例３９で調製した中間体化合物Ｍａ２２５ｍｇ（０．３３ｍｍｏｌ）を秤量して２０ｍｌのジクロロメタンに溶かし、反応温度を－５～５℃に制御して徐々にトリフルオロ酢酸３ｍｌ（０．０４ｍｍｏｌ）を加え、当該反応温度を維持して撹拌して１．５～２ｈ反応させ、ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝４０：１）によって反応が完了したかどうかを確認する。反応液に５０ｍｌのジクロロメタンを加えて希釈し、さらに１２０ｍｌの脱イオン水で２回洗浄し、６０ｍｌの５％炭酸水素ナトリウム水溶液で２回洗浄し、１２０ｍｌの脱イオン水で２回洗浄する。有機相を分離し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥する。乾燥剤をろ過除去し、ろ液を低温で濃縮させて赤褐色油状物を得る。当該油状物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、黄色油状物２２０ｍｇを得て、収率は９５％である。

（実施例４１：代謝産物中間体Ｍｃの製造）
Ｂｏｃ－Ｌ－アスパラギン酸１－ベンジルエステル１３７ｍｇ（０．４２ｍｍｏｌ）、ＨＯＢＴ７７．８ｍｇ（０．５８ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ１１０ｍｇ（０．５８ｍｍｏｌ）を秤量して１０ｍｌのジクロロメタンに溶かし、撹拌して０．５ｈ反応させ、反応温度を２０～４０℃に制御して徐々に実施例４０で調製した中間体Ｍｂ２２０ｍｇ（０．３８ｍｍｏｌ）を加え、最後にＤＩＰＥＡ１２４ｍｇ（０．９６ｍｍｏｌ）を加え、加えた後、当該反応温度を維持して撹拌して４ｈ反応させ、ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝４０：１）によって反応が完了したかどうかを確認する。反応液に５０ｍｌのジクロロメタンを加えて希釈し、さらに１００ｍｌの脱イオン水で２回洗浄し、有機相を分離して無水硫酸ナトリウムで乾燥する。乾燥剤をろ過除去し、ろ液を低温で濃縮させて褐色油状物を得る。当該油状物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝０：１～３０：１）に付し、黄色油状物２５０ｍｇを得て、収率は７４．２％である。

（実施例４２：代謝産物中間体Ｍｄの製造）
実施例４１で調製した中間体化合物Ｍｃ２５０ｍｇ（０．２９ｍｍｏｌ）を秤量して２０ｍｌのジクロロメタンに溶かし、反応温度を－５～５℃に制御して徐々にトリフルオロ酢酸３ｍｌ（０．０４ｍｍｏｌ）を加え、当該反応温度を維持して撹拌して１．５～２ｈ反応させ、ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝４０：１）によって反応が完了したかどうかを確認する反応液に５０ｍｌのジクロロメタンを加えて希釈し、さらに１２０ｍｌの脱イオン水で２回洗浄し、６０ｍｌの５％炭酸水素ナトリウム水溶液で２回洗浄し、１２０ｍｌの脱イオン水で２回洗浄する。有機相を分離し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥する。乾燥剤をろ過除去し、ろ液を低温で濃縮させて黄色油状物を得る。当該油状物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、黄色油状物１５８ｍｇを得て、収率は７１．３％である。

（実施例４３：目的化合物１２（Ｌｉｎｉｆａｎｉｂ－Ｃ_１２－Ａｓｐ）の製造）
実施例４２で調製した中間体Ｍｄ２１０ｍｇを秤量し、３０ｍｌの無水メタノールに溶かし、窒素保護下で１０％Ｐｄ／Ｃ２５ｍｇを加え、水素ガスを通して３回の置換を行い、水素雰囲気下で２ＭＰａ、２０～６５℃に制御して６～１２ｈ反応させ、ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝４０：１）によって反応が完了したかどうかを確認する。窒素保護下で、反応液をろ過し、パラジウム炭素を回収する。ろ液を低温で濃縮させて淡黄色油状物を得る当該油状物を分取クロマトグラフィーに付し、白色の固体粉末１０２ｍｇを得て、収率は５４．８％である。^１Ｈ－ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）δ：１．２２（ｍ，１２Ｈ），１．３５（ｍ，４Ｈ），１．７１（ｓ，２Ｈ），２．４１（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），２．６４（ｍ，１Ｈ），２．７２（ｍ，１Ｈ），３．３４（ｍ，６Ｈ），３．５０（ｍ，２Ｈ），５．２０（ｓ，２Ｈ），６．８３（ｂｒｓ，１Ｈ），７．１０（ｍ，１Ｈ），７．１８（ｍ，１Ｈ），７．４０（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），７．５８（ｍ，１Ｈ），７．６７（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），７．９１（ｍ，１Ｈ），８．２３（ｍ，１Ｈ），８．３２（ｍ，１Ｈ），９．０１（ｍ，１Ｈ），９．８３（ｍ，１Ｈ）。ＨＰＬＣ純度：９８．５％（２１４ｎｍ），９９．３％（２５４ｎｍ）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ６８８．４［Ｍ＋１］^＋

構造式は以下の通りである。

（実施例４４：腫瘍細胞株の増殖に対するＬｉｎｉｆａｎｉｂ関連化合物の効果）
本発明は細胞増殖実験（ＡｌａｍａｒＢｌｕｅ検出プラットフォーム）を通じて１３個の化合物（化合物１－１２およびＬｉｎｉｆａｎｉｂ）について５４株の市販腫瘍細胞株（２６株の肝がん細胞株を含む）における半数阻害濃度（ＩＣ_５０値）を測定し、１２個の化合物と活性薬物Ｌｉｎｉｆａｎｉｂの活性の相違点について考察する。

１．計器および材料
Ｔｈｅｒｍｏ３１１のＣＯ_２インキュベーター、Ｈａｉｅｒバイオセーフティキャビネット、ＭｏｌｅｃｕｌａｒＤｅｖｉｃｅｓマイクロプレートリーダー、ＸｉａｎｇｙｉＬ５３０の卓上低速遠心分離機、ＯｌｙｍｐｕｓＩＸ５１の倒立型蛍光顕微鏡、ＤＭＥＭ、ＲＰＭＩ１６４０、ＭＥＭ、ＤＭＥＭ／Ｆ１２１：１培地、ウシ胎児血清、０．２５％トリプシン溶液、リン酸塩緩衝液（サーモフィッシャー上海有限公司）、ｓｉｇｍａシグマジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、レサズリンと、
５４株の市販腫瘍細胞株（２６株の肝がん細胞株を含む）。

被験薬物：化合物１－１２および活性薬物Ｌｉｎｉｆａｎｉｂ、化学療法用薬物ドキソルビシン（Ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）（ＨＹ－１５１４２、上海皓元生物医薬科技有限公司）。

２．実験方法
２．１異なる細胞株の培養
５４株の細胞株をウシ胎児血清含有の培地で培養し、３７℃、５％のＣＯ_２インキュベーターでインキュベートする。細胞は培養容器に接着した状態で増殖し、倒立型蛍光顕微鏡で成長の様子を観察し、細胞密集度が８０％－９０％に達したら継代培養を行う。継代の割合と数は実験ニーズに従い、今回の細胞株継代の培養割合は一般的に１：２～１：３である。

２．２異なる腫瘍細胞株に対する増殖抑制作用
細胞測定：対数増殖期にある５４株の細胞株を使用し、５００～１Ｘ１０^４／ウェル（予備実験において決定される各細胞株の最適な播種密度）の数に従って９６ウェルの培養プレートに接種し、５％ＣＯ_２を含有した加湿インキュベーターで３７℃の条件で４ｈ培養した後、各ウェルに１０μＬの化合物１－１２または活性薬物Ｌｉｎｉｆａｎｉｂを加え、各化合物について９つの薬物濃度勾配を測定し（最高測定濃度を３．１６倍勾配に希釈する）、各化合物の溶解度に基づく出発濃度はそれぞれ３０または１００μＭである。且つ各細胞株を測定すると同時にＱＣ参照化合物Ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎを加え、その最終的な薬物濃度は順にそれぞれ１０、３．１６、１、０．３１、０．１、０．０３、０．０１、０．００３および０．００１μＭである。それと同時に陽性対照群（１００％抑制）および陰性対照群（０％抑制）を設置し、薬物群は各濃度２ウェル繰り返し、陽性対照群および陰性対照群は６ウェル繰り返し、継続してインキュベーターで６日間培養した後、後続のＡｌａｍａｒＢｌｕｅ測定操作に入る。

ＡｌａｍａｒＢｌｕｅ測定操作：各ウェルに１０μＬのＡｌａｍａｒＢｌｕｅ試薬を加えて１－４ｈインキュベートし、１－２ｍｉｎ振盪し、ＭＤマイクロプレートリーダーＥＸ：５６０ｎｍ、ＥＭ：５９０ｎｍ波長で蛍光値を測定し、結果を記録し、本発明の化合物が細胞に対する抑制率（％）＝（Ａ_０％抑制－Ａ_投与）／（Ａ_０％抑制－Ａ_{１００％抑制}）×１００％を計算し、さらにＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ５．０またはＭＡＴＩＬＡＢソフトウェアにおいて非線形回帰を使用する方法（一般的に４パラメータフィッティングカーブ方程式）により、ドローイングをして薬物用量反応曲線を得て、それによって本発明の化合物ががん細胞株に作用するＩＣ_５０値を得る。

３．結果と分析
３．１１３個の被験試薬（化合物１－１２およびＬｉｎｉｆａｎｉｂ）が５４株の市販腫瘍細胞株におけるＩＣ_５０をまとめた結果を表１に示す。

表１および表２の結果から、ほとんどすべての腫瘍細胞株が化合物１、２、３および１０に対するＩＣ_５０はＬｉｎｉｆａｎｉｂに対するＩＣ_５０値に非常に近く、この４つの化合物の構造修飾がほとんどＬｉｎｉｆａｎｉｂの活性を遮断する作用を果たさず、その他の８個の化合物（化合物４、５、６、７、８、９、１１および１２）の構造修飾がいずれもＬｉｎｉｆａｎｉｂの腫瘍細胞増殖の抑制活性を遮断することに成功し、大部分の腫瘍細胞がこの８個の化合物およびＬｉｎｉｆａｎｉｂに対するＩＣ_５０は５倍以上の差があることがわかる。Ｌｉｎｉｆａｎｉｂに感受性のある細胞は３株あり、それぞれＫＡＳＵＭＩ－１（白血病細胞）、ＮＣＩ－Ｈ１７０３（肺がん細胞）およびＡＮ３－ＣＡ（子宮内膜腫細胞）であり、そのＩＣ_５０はそれぞれ０．０１、０．０２および０．１９μＭであり、その前駆体Ｌｉｎｉｆａｎｉｂ－Ｃ_１２－ＡＡ_５に対するＩＣ_５０はそれぞれ０．１０、０．０８および３．１４μＭであり、それぞれ１０、４および１６．７倍の差がある。

５４株の市販腫瘍細胞株のうち２６株が肝がん細胞株であり、ほぼ半数の肝がん細胞株（１２／２６、４６％）がＬｉｎｉｆａｎｉｂに対して中等度の感受性を有し、ＩＣ_５０＜５μＭ、且つ大部分の肝がん細胞株（１５／２６、５８％）が前駆体Ｌｉｎｉｆａｎｉｂ－Ｃ_１２－ＡＡ_５およびＬｉｎｉｆａｎｉｂに対するＩＣ_５０は８倍以上の差があり、ほとんどすべての肝がん細胞が中間体に対して応答を示さない（表１を参照）。

（実施例４５：インビトロ（血漿／肝ホモジネート／脾ホモジネート）での安定性に関する研究）
本実施例は前駆体Ｌｉｎｉｆａｎｉｂ－Ｃ_１２－ＡＡ_５（化合物８）、中間体Ｌｉｎｉｆａｎｉｂ－Ｃ_１２－Ａｓｐ（化合物１２）が血漿、肝ホモジネート、脾ホモジネートでのインキュベーション安定性（前駆体Ｌｉｎｉｆａｎｉｂ－Ｃ_１２－ＡＡ_５の代謝により中間体Ｌｉｎｉｆａｎｉｂ－Ｃ_１２－ＡｓｐおよびＬｉｎｉｆａｎｉｂを生成し、中間体Ｌｉｎｉｆａｎｉｂ－Ｃ_１２－Ａｓｐはさらに代謝されてＬｉｎｉｆａｎｉｂを生成する）について考察し、且つ代謝産物の定量解析を行い、それと同時に陽性薬物でインキュベーションシステムの安定性を検証し、化合物の薬物形成特性の評価のために参照を提供することを目的とする。

１計器および材料
計器：液体クロマトグラフ質量分析計、ＡＢＩ
材料：ＳＤ系雄ラット（２００－２５０ｇ）、北京維通利華
試料：陽性薬物とその代謝産物Ｍ１およびＭ２、Ｌｉｎｉｆａｎｉｂ－Ｃ_１２－ＡＡ_５とその代謝産物Ｌｉｎｉｆａｎｉｂ－Ｃ_１２－ＡｓｐおよびＬｉｎｉｆａｎｉｂ。

２Ｌｉｎｉｆａｎｉｂ－Ｃ_１２－ＡＡ_５およびＬｉｎｉｆａｎｉｂ－Ｃ_１２－Ａｓｐの安定性に関する研究
２．１Ｌｉｎｉｆａｎｉｂ－Ｃ_１２－ＡＡ_５和Ｌｉｎｉｆａｎｉｂ－Ｃ_１２－Ａｓｐ血漿中でのインキュベーション安定性に関する研究プログラム
実験動物
種類：ＳＤ系ラット；数量：２
性別：雄；体重：２００－２５０ｇ

実験手順
１．動物の血を採取し、血液サンプルをＥＤＴＡ抗凝固剤入りの採血管に入れ、４℃の条件下で、３０００ｇで１５ｍｉｎ遠心し、血漿を分離し、２つの血液サンプルを等容量で混合する。
２．一定量のＬｉｎｉｆａｎｉｂ－Ｃ_１２－ＡＡ_５／Ｌｉｎｉｆａｎｉｂ－Ｃ_１２－Ａｓｐを秤量してＤＭＳＯ：ＭｅＯＨ（２：８）に溶かし、純度換算により２００μＭの母液を調製し、血漿内に化合物を入れてその最終濃度が２μｇ／ｍＬになるようにし、体系中の有機相の割合は０．５％以下である。
３．３７℃の水浴でインキュベートし、採取時期を０、０．５、１、２、４、６、８ｈに設定する。各採取時期において１００μＬのサンプルを採取し、３００μＬのアセトニトリル（内標準物質を含む）を加えて沈殿処理を行い、１２０００ｒｐｍで５ｍｉｎ遠心し、上澄液２００μＬを取ってＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析に供する。
４．標準曲線を作成し、Ｌｉｎｉｆａｎｉｂ、Ｌｉｎｉｆａｎｉｂ－Ｃ_１２－Ａｓｐおよび残存Ｌｉｎｉｆａｎｉｂ－Ｃ_１２－ＡＡ_５を定量的に測定する。

２．２Ｌｉｎｉｆａｎｉｂ－Ｃ_１２－ＡＡ_５およびＬｉｎｉｆａｎｉｂ－Ｃ_１２－Ａｓｐ肝／脾ホモジネート中でのインキュベーション安定性に関する研究プログラム
実験動物
種類：ＳＤ系ラット；数量：２
生物：雄；体重：２００－２５０ｇ

実験手順
１．生物学的分析法：化合物Ｌｉｎｉｆａｎｉｂ－Ｃ_１２－ＡｓｐおよびＬｉｎｉｆａｎｉｂの生物学的分析法を構築する。
２．実験当日にラットの肝臓／脾臓を採取し、２枚を切り刻んで混合し、４倍体積比（１ｇ：４ｍＬ）のリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）でホモジナイズし、ホモジナイズ過程において温度を１０℃以下に制御する。蛋白質の定量的な測定を行い、肝臓、脾臓中の蛋白質濃度を制御する。
３．肝／脾ホモジネートにそれぞれ薬物Ｌｉｎｉｆａｎｉｂ－Ｃ_１２－ＡＡ_５、Ｌｉｎｉｆａｎｉｂ－Ｃ_１２－Ａｓｐを加え、その濃度をそれぞれ１０００ｎｇ／ｍＬになるようにし、インキュベーション体積は１ｍＬであり、且つインキュベーションシステム中の有機溶媒の濃度を０．５％以下に制御する。
４．３７℃の水浴でインキュベートし、それぞれ採取時期０、０．５、１、２、４、６、８ｈにおいて１００μＬのサンプルを採取し、決定される方法でサンプルの前処理を行った後ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析を行う。
５．ブランク肝／脾ホモジネートに基づいて標準曲線を作成し、Ｌｉｎｉｆａｎｉｂ－Ｃ_１２－Ａｓｐ、Ｌｉｎｉｆａｎｉｂを定量的に測定する。

３．安定性に関する研究の結果
３．１血漿中での安定性試験結果
陽性薬物は予想通り時間の経過とともに血漿において代謝産物に代謝され、血漿体系が安定であり、後続の測定結果が信頼性あることを明らかにする。

結果を表３に示す。

表３から、Ｌｉｎｉｆａｎｉｂ－Ｃ_１２－ＡＡ_５は血漿中でのインキュベーターが安定し、中間体Ｌｉｎｉｆａｎｉｂ－Ｃ_１２－ＡｓｐおよびＬｉｎｉｆａｎｉｂを生成せず、中間体Ｌｉｎｉｆａｎｉｂ－Ｃ_１２－Ａｓｐが血漿でのインキュベーターが安定し、Ｌｉｎｉｆａｎｉｂの生成量が０に近いことがわかる。

３．２肝ホモジネートにおける安定性の結果
陽性薬物は予想通り時間の経過とともに肝ホモジネートにおいて代謝産物に代謝され、肝ホモジネート体系が安定であり、後続の測定結果が信頼性あることを明らかにする。

前駆体および中間体の肝ホモジネートにおける安定性の結果を表４－５および図１－２に示す。

表３－４および図１－２から、前駆体Ｌｉｎｉｆａｎｉｂ－Ｃ_１２－ＡＡ_５から生成される中間体Ｌｉｎｉｆａｎｉｂ－Ｃ_１２－Ａｓｐが肝ホモジネートにおいて迅速にＬｉｎｉｆａｎｉｂ変換され、そのため肝ホモジネートにおいて中間体の蓄積する濃度が比較的低いことがわかる。

また、同じモル濃度の前駆体および中間体を加える場合、肝ホモジネートにおいて各時期で生成されるＬｉｎｉｆａｎｉｂの量が基本的に同じであり、Ｌｉｎｉｆａｎｉｂの生成が基本的に中間体から生成され、前駆体から直接生成されるＬｉｎｉｆａｎｉｂの量が非常に少ないことを明らかにする。

３．３脾ホモジネートにおける安定性の結果
陽性薬物は予想通り時間の経過とともに脾ホモジネートにおいて代謝産物に代謝され、血漿体系が安定であり、後続の測定結果が信頼性あることを明らかにする。

前駆体および中間体の脾ホモジネートにおける安定性の結果を表６－７および図３－４に示す。

表６－７および図３－４から、脾ホモジネートにおける前駆体の代謝が肝ホモジネートにおけるものと同じであり、いずれもまず中間体を生成し、そして中間体がＬｉｎｉｆａｎｉｂに代謝されることがわかる。

また、脾ホモジネートにおける中間体の蓄積する濃度が比較的高く、生成されるＬｉｎｉｆａｎｉｂの量が肝ホモジネートにおけるものより少ない。

上記インビトロ安定性に関する研究の結果から、次の結論を引き出すことができる。
（１）前駆体Ｌｉｎｉｆａｎｉｂ－Ｃ_１２－ＡＡ_５および中間体Ｌｉｎｉｆａｎｉｂ－Ｃ_１２－Ａｓｐが血漿において安定する。
（２）前駆体Ｌｉｎｉｆａｎｉｂ－Ｃ_１２－ＡＡ_５がインビトロにおける代謝経路が大体明らかにされ、即ちＰＳＭＡによって中間体Ｌｉｎｉｆａｎｉｂ－Ｃ_１２－Ａｓｐに代謝され、そして中間体Ｌｉｎｉｆａｎｉｂ－Ｃ_１２－Ａｓｐはあるアミドエステラーゼによって活性薬物Ｌｉｎｉｆａｎｉｂに代謝される。
（３）肝ホモジネートにおいて生成される活性薬物Ｌｉｎｉｆａｎｉｂがより多く、図５を参照し、薬物の前駆体Ｌｉｎｉｆａｎｉｂ－Ｃ_１２－ＡＡ_５が肝臓において活性薬物により特異的に変換される。

［付記］
［付記１］
式Ｉで表される構造を有する化合物、その薬学的に許容される塩、立体異性体、溶媒和物または結晶多形体と、薬学的に許容される担体とを含む薬物組成物。

式Ｉ
（ただし、
Ａは（ＣＨ_２）_ｅＮ（Ｒ_７）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ_８）（ＣＨ_２）_ｆおよびＣＨ_２Ｃ（Ｏ）ＮＲ_７から選択され、ｅおよびｆは独立して０または１であり、これらそれぞれの基の左端がＲ_３およびＲ_４で置換される環に結合しており、
Ｌは－［Ｃ_ｍ（Ｏ）（Ｚ）_ｎ（ＮＨ）_ｑ］－であり、ｍ、ｑはそれぞれ０または１であり、ｎは０～１１、ｐは０～８であり、Ｚは－ＣＲ_１０－、－ＣＲ_１０－Ｏ－ＣＲ_１０－、－Ｓ－Ｓ－、－ＣＲ_１０＝ＣＲ_１０－、－ＣＲ_１０≡ＣＲ_１０－、－Ａｒ、－ＣＯ－ＮＨ－および－Ｎ＝ＣＲ_１０－から任意に選択される１個の基または複数の基が従来の方法で結合したものであり、
Ｒ_１およびＲ_２は水素基、アルコキシ基、アルコキシアルコキシ基、アルコキシアルキル基、アルキル基、アリールオキシ基、アリールオキシアルキル基、ハロゲン基、ハロアルコキシ基、ハロアルキル基、ヘテロシクリル基、ヘテロサイクリックアルケニル基、ヘテロサイクリックアルコキシ基、ヘテロサイクリックアルキル基、ヘテロサイクリックオキシアルキル基、ヒドロキシ基、ヒドロキシアルコキシ基、ヒドロキシアルキル基、（ＮＲ_ａＲ_ｂ）アルコキシ基、（ＮＲ_ａＲ_ｂ）アルケニル基、（ＮＲ_ａＲ_ｂ）アルキル基、（ＮＲ_ａＲ_ｂ）カルボニルメチル基および（ＮＲ_ａＲ_ｂ）カルボニルアルキル基から独立して選択され、
Ｒ_３およびＲ_４は水素基、アルコキシ基、アルキル基、ハロゲン基、ハロアルコキシ基、ハロアルキル基およびヒドロキシ基から独立して選択され、
Ｒ_５およびＲ_６は水素基、アルコキシ基、アルコキシアルキル基、アルコキシカルボニル、アルキル基、アリールオキシ基、アリールアルキル基、カルボキシル、シアノ基、ハロゲン基、ハロアルコキシ基、ハロアルキル基、ヒドロキシ基、ヒドロキシアルキル基、ニトロ基およびＮＲ_ｃＲ_ｄから独立して選択され、
Ｒ_７およびＲ_８は水素基およびアルキル基から独立して選択され、
Ｒ_９は水素基、ヒドロキシ基、アミノ基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基、アルキルアミノ基、アルコキシアルキル基、アルキル基、アルコキシカルボニル基、アリール基、ヘテロシクロアルキル基から独立して選択され、
Ｒ_１０は水素基、アルキル基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アルケノキシ基、ニトロ基、ハロゲン基、第一級アミノ基、第二級アミノ基および第三級アミノ基から独立して選択され、
Ｒ_ａおよびＲ_ｂは水素基、アルキル基、アルキルカルボニル基、アルキルスルホニル基、アリールスルホニル基、ハロアルキルスルホニル基およびヘテロサイクリックスルホニル基から独立して選択され、
Ｒ_ｃおよびＲ_ｄは水素基、アルキル基、アルキルカルボニル基、アリール基、アリールアルキル基、シクロアルキル基、シクロアルキルアルキル基、ヘテロシクリル基およびヘテロサイクリックアルキル基から独立して選択される。）

［付記２］
前記式Ｉで表される化合物の構造式は

または、

または、

または、

または、

または、

または、

または、

または、

である、付記１に記載の薬物組成物。

［付記３］
前記式Ｉで表される化合物の製造方法が、
ポリペプチドとベンジル基からなる保護基を有するＬを触媒および縮合剤の存在下で反応させ、保護基を有する中間体化合物１を得るステップａ、
前記中間体化合物１を極性溶媒中で接触水素化して保護基をはずして中間体化合物２を得るステップｂ、
中間体化合物２とＬｉｎｉｆａｎｉｂまたはその誘導体を触媒および縮合剤の存在下で反応させ、保護基を有する中間体化合物３を得るステップｃ、および
前記中間体化合物３を酸性条件下で保護基をはずして式Ｉで表される化合物を得るステップｄ
を含む、
付記１または２に記載の薬物組成物。

［付記４］
ステップａにおける反応温度は－２０℃から１２５℃であり、前記触媒は１－ヒドロキシベンゾトリアゾールであり、前記縮合剤は１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩、１、３－ジシクロヘキシルカルボジイミドまたは４－ジメチルアミノピリジンの中の１種または複数種である、
付記３に記載の薬物組成物。

［付記５］
ステップｂにおける反応温度は－２０℃から１２５℃であり、前記触媒はパラジウム炭素、乾性または湿性水酸化パラジウムである、
付記３に記載の薬物組成物。

［付記６］
ステップｃにおける反応温度は－２０℃から１２５℃であり、前記触媒は１－ヒドロキシベンゾトリアゾールであり、前記縮合剤は１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩、１、３－ジシクロヘキシルカルボジイミドまたは４－ジメチルアミノピリジンの中の１種または複数種である、
付記３に記載の薬物組成物。

［付記７］
ステップｄにおける反応温度は－２０℃から１２５℃であり、前記酸性試薬はギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸である、
付記３に記載の薬物組成物。

［付記８］
付記１または２に記載の薬物組成物の抗がん作用を有する薬物の調製における使用であって、
がんは食道がん、子宮内膜がん、悪性リンパ腫、多発性骨髄腫、消化管間質腫瘍、結腸がん、直腸がん、乳がん、肝臓がん、胃がん、卵巣がん、子宮がん、子宮頸がん、膣がん、肺がん、腎臓がん、前立腺がん、膀胱がん、膵臓がん、脳がん、黒色腫を含む、
使用。

［付記９］
前記がんは肝がんである、付記８に記載の使用。

［付記１０］
被験者に治療的有効量の付記１または２に記載の薬物組成物を投与することを含む、
がんを治療する方法。

［付記１１］
活性成分および薬学的に許容される担体から調製される薬物であって、
前記活性成分は、式Ｉで表される化合物、その薬学的に許容される塩、立体異性体、溶媒和物または結晶多形体、および薬学的に許容される担体である薬物。

［付記１２］
前記式Ｉで表される化合物の構造式は、

または、

または、

または、

または、

または、

または、

または、

または、

である、付記１１に記載の薬物。

［付記１３］
付記１１または１２に記載の薬物の抗がん作用を有する薬物の調製における使用であって、
がんは食道がん、子宮内膜がん、悪性リンパ腫、多発性骨髄腫、消化管間質腫瘍、結腸がん、直腸がん、乳がん、肝臓がん、胃がん、卵巣がん、子宮がん、子宮頸がん、膣がん、肺がん、腎臓がん、前立腺がん、膀胱がん、膵臓がん、脳がん、黒色腫を含む、
使用。

［付記１４］
前記がんは肝がんである、付記１３に記載の使用。

［付記１５］
被験者に治療的有効量の付記１１または１２に記載の薬物を投与することを含む、
がんを治療する方法。

Claims

式Ｉで表される構造を有する化合物、その薬学的に許容される塩、立体異性体、溶媒和物または結晶多形体と、薬学的に許容される担体とを含む薬物組成物。

式Ｉ
（ただし、
Ａは（ＣＨ_２）_ｅＮ（Ｒ_７）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ_８）（ＣＨ_２）_ｆおよびＣＨ_２Ｃ（Ｏ）ＮＲ_７から選択され、ｅおよびｆは独立して０または１であり、これらそれぞれの基の左端がＲ_３およびＲ_４で置換される環に結合しており、
Ｌは－［Ｃ_ｍ（Ｏ）（Ｚ）_ｎ（ＮＨ）_ｑ］－であり、ｍ、ｑはそれぞれ１であり、ｎは５～１１、ｐは０～８であり、Ｚは－ＣＨ _２－であり、
Ｒ_１およびＲ_２は水素基、アルコキシ基、アルコキシアルコキシ基、アルコキシアルキル基、アルキル基、アリールオキシ基、アリールオキシアルキル基、ハロゲン基、ハロアルコキシ基、ハロアルキル基、ヘテロシクリル基、ヘテロサイクリックアルケニル基、ヘテロサイクリックアルコキシ基、ヘテロサイクリックアルキル基、ヘテロサイクリックオキシアルキル基、ヒドロキシ基、ヒドロキシアルコキシ基、ヒドロキシアルキル基、（ＮＲ_ａＲ_ｂ）アルコキシ基、（ＮＲ_ａＲ_ｂ）アルケニル基、（ＮＲ_ａＲ_ｂ）アルキル基、（ＮＲ_ａＲ_ｂ）カルボニルメチル基および（ＮＲ_ａＲ_ｂ）カルボニルアルキル基から独立して選択され、
Ｒ_３およびＲ_４は水素基、アルコキシ基、アルキル基、ハロゲン基、ハロアルコキシ基、ハロアルキル基およびヒドロキシ基から独立して選択され、
Ｒ_５およびＲ_６は水素基、アルコキシ基、アルコキシアルキル基、アルコキシカルボニル、アルキル基、アリールオキシ基、アリールアルキル基、カルボキシル、シアノ基、ハロゲン基、ハロアルコキシ基、ハロアルキル基、ヒドロキシ基、ヒドロキシアルキル基、ニトロ基およびＮＲ_ｃＲ_ｄから独立して選択され、
Ｒ_７およびＲ_８は水素基およびアルキル基から独立して選択され、
Ｒ_９はヒドロキシ基であり、
Ｒ_ａおよびＲ_ｂは水素基、アルキル基、アルキルカルボニル基、アルキルスルホニル基、アリールスルホニル基、ハロアルキルスルホニル基およびヘテロサイクリックスルホニル基から独立して選択され、
Ｒ_ｃおよびＲ_ｄは水素基、アルキル基、アルキルカルボニル基、アリール基、アリールアルキル基、シクロアルキル基、シクロアルキルアルキル基、ヘテロシクリル基およびヘテロサイクリックアルキル基から独立して選択される。）
前記式Ｉで表される化合物の構造式は

または、

または、

または、

または、

または、

である、請求項１に記載の薬物組成物。
前記式Ｉで表される化合物の製造方法が、
ポリペプチドとベンジル基からなる保護基を有するＬを触媒および縮合剤の存在下で反応させ、保護基を有する中間体化合物１を得るステップａ、
前記中間体化合物１を極性溶媒中で接触水素化して保護基をはずして中間体化合物２を得るステップｂ、
中間体化合物２とＬｉｎｉｆａｎｉｂまたはその誘導体を触媒および縮合剤の存在下で反応させ、保護基を有する中間体化合物３を得るステップｃ、および
前記中間体化合物３を酸性条件下で保護基をはずして式Ｉで表される化合物を得るステップｄ
を含む、
請求項１または２に記載の薬物組成物。
ステップａにおける反応温度は－２０℃から１２５℃であり、前記触媒は１－ヒドロキシベンゾトリアゾールであり、前記縮合剤は１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩、１、３－ジシクロヘキシルカルボジイミドまたは４－ジメチルアミノピリジンの中の１種または複数種である、
請求項３に記載の薬物組成物。
ステップｂにおける反応温度は－２０℃から１２５℃であり、前記触媒はパラジウム炭素、乾性または湿性水酸化パラジウムである、
請求項３に記載の薬物組成物。
ステップｃにおける反応温度は－２０℃から１２５℃であり、前記触媒は１－ヒドロキシベンゾトリアゾールであり、前記縮合剤は１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩、１、３－ジシクロヘキシルカルボジイミドまたは４－ジメチルアミノピリジンの中の１種または複数種である、
請求項３に記載の薬物組成物。
ステップｄにおける反応温度は－２０℃から１２５℃であり、前記酸性試薬はギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸である、
請求項３に記載の薬物組成物。
請求項１または２に記載の薬物組成物の抗がん作用を有する薬物の調製における使用であって、
がんは食道がん、子宮内膜がん、悪性リンパ腫、多発性骨髄腫、消化管間質腫瘍、結腸がん、直腸がん、乳がん、肝臓がん、胃がん、卵巣がん、子宮がん、子宮頸がん、膣がん、肺がん、腎臓がん、前立腺がん、膀胱がん、膵臓がん、脳がん、黒色腫を含む、
使用。
前記がんは肝がんである、請求項８に記載の使用。
被験者に治療的有効量で投与される、請求項１または２に記載の薬物組成物。
活性成分および薬学的に許容される担体から調製される薬物であって、
前記活性成分は、式Ｉで表される化合物、その薬学的に許容される塩、立体異性体、溶媒和物または結晶多形体、および薬学的に許容される担体である薬物。

式Ｉ
（ただし、
Ａは（ＣＨ_２）_ｅＮ（Ｒ_７）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ_８）（ＣＨ_２）_ｆおよびＣＨ_２Ｃ（Ｏ）ＮＲ_７から選択され、ｅおよびｆは独立して０または１であり、これらそれぞれの基の左端がＲ_３およびＲ_４で置換される環に結合しており、
Ｌは－［Ｃ_ｍ（Ｏ）（Ｚ）_ｎ（ＮＨ）_ｑ］－であり、ｍ、ｑはそれぞれ１であり、ｎは５～１１、ｐは０～８であり、Ｚは－ＣＨ _２－であり、
Ｒ_１およびＲ_２は水素基、アルコキシ基、アルコキシアルコキシ基、アルコキシアルキル基、アルキル基、アリールオキシ基、アリールオキシアルキル基、ハロゲン基、ハロアルコキシ基、ハロアルキル基、ヘテロシクリル基、ヘテロサイクリックアルケニル基、ヘテロサイクリックアルコキシ基、ヘテロサイクリックアルキル基、ヘテロサイクリックオキシアルキル基、ヒドロキシ基、ヒドロキシアルコキシ基、ヒドロキシアルキル基、（ＮＲ_ａＲ_ｂ）アルコキシ基、（ＮＲ_ａＲ_ｂ）アルケニル基、（ＮＲ_ａＲ_ｂ）アルキル基、（ＮＲ_ａＲ_ｂ）カルボニルメチル基および（ＮＲ_ａＲ_ｂ）カルボニルアルキル基から独立して選択され、
Ｒ_３およびＲ_４は水素基、アルコキシ基、アルキル基、ハロゲン基、ハロアルコキシ基、ハロアルキル基およびヒドロキシ基から独立して選択され、
Ｒ_５およびＲ_６は水素基、アルコキシ基、アルコキシアルキル基、アルコキシカルボニル、アルキル基、アリールオキシ基、アリールアルキル基、カルボキシル、シアノ基、ハロゲン基、ハロアルコキシ基、ハロアルキル基、ヒドロキシ基、ヒドロキシアルキル基、ニトロ基およびＮＲ_ｃＲ_ｄから独立して選択され、
Ｒ_７およびＲ_８は水素基およびアルキル基から独立して選択され、
Ｒ_９はヒドロキシ基であり、
Ｒ_ａおよびＲ_ｂは水素基、アルキル基、アルキルカルボニル基、アルキルスルホニル基、アリールスルホニル基、ハロアルキルスルホニル基およびヘテロサイクリックスルホニル基から独立して選択され、
Ｒ_ｃおよびＲ_ｄは水素基、アルキル基、アルキルカルボニル基、アリール基、アリールアルキル基、シクロアルキル基、シクロアルキルアルキル基、ヘテロシクリル基およびヘテロサイクリックアルキル基から独立して選択される。）
前記式Ｉで表される化合物の構造式は、

または、

または、

または、

または、

または、

である、請求項１１に記載の薬物。
請求項１１または１２に記載の薬物の抗がん作用を有する薬物の調製における使用であって、
がんは食道がん、子宮内膜がん、悪性リンパ腫、多発性骨髄腫、消化管間質腫瘍、結腸がん、直腸がん、乳がん、肝臓がん、胃がん、卵巣がん、子宮がん、子宮頸がん、膣がん、肺がん、腎臓がん、前立腺がん、膀胱がん、膵臓がん、脳がん、黒色腫を含む、
使用。
前記がんは肝がんである、請求項１３に記載の使用。
被験者に治療的有効量で投与される、請求項１１または１２に記載の薬物。