JP6595981B2 - 抗微生物性組成物および関連する使用方法 - Google Patents
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Description
1.チーズのブロックの表面の目障りなカビ汚染および結果として起こる腐敗を制御するための、貯蔵中のまたは調製中のチーズの処理を目的とする。
2.食品の調製、植栽および再植生、または農業を目的として最終的に使用することができる根、塊茎、茎、種子およびその他の器官等の、貯蔵中の様々な植物の一部の処理を目的とする。
3.表面にカビが生えている、またはカビの問題が生じる可能性がある程度まで外寄生されている可能性がある建物の除染での使用を目的とする。
4.エネルギー関連製品へと最終的に発酵させるための、ある港から別の港への長期の海上輸送中の船積みされているゴミの保存での使用を目的とする。
5.植物病原体となる可能性がある微生物の温床となり得る土壌の除染を目的とする。
6.結核およびその他のマイコバクテリウム感染を有する患者の治療を目的とする。
7.鼻の感染症を制御するためのおよび鼻腔をすっきりさせるための治療を目的とする。
8.食品、線維およびその他の物品等の材料を包装し、そのため、この材料を長期にわたり安全に保存するために使用され得るように特別に設計されたポリマーと組み合わせることを目的とする。
真菌の単離。2007年3月に、ボリビアのアマゾンに生息する植物からアナナス・アナナソイデス(Ananas ananassoides)の数本の小さな茎を採取した。これらの茎を、南緯12°40’07’’および西経68°41’58’’の熱帯雨林に隣接するサバンナ地域で採取し、分析のために直ちに輸送した。これらの茎からいくつかの小片(2〜5インチ)を切断し、層流フード下で30秒にわたり70%エタノール中に置いた。1本の滅菌ピンセットを使用し、これらの茎を別々に炎に当てて余分なアルコールを除去した。次いで、(樹皮の下の)内部組織の小片を切り取り、中央のウェルが取り除かれているプレートの片側において、活発に増殖しているM.アルブス(M.albus)の単離株620と共にポテトデキストロース寒天培地(PDA)上に置いた。この技法を使用して、ムスコドル(Muscodor)のその他の単離株を効果的に選別することができる(Worapong et al.,2001a&b)。2週にわたるインキュベーション期間中に、任意の真菌の増殖に関してペトリ皿を定期的に調べた。菌糸を観察した時点で、寒天培地から菌糸の先端を無菌的に切り取って新鮮なPDA上に置いた。このようにして単離株を発見した。いくつかのペトリ皿(PDA)を使用して、真菌が揮発性の抗生物質を産生したかどうかを確認した。この手順は、プレートの中心から1インチ断片の寒天培地を取り除くこと、片側に単離株の塊(plug)を置いて数日にわたり増殖させること、次いで試験生物を隙間の反対側に蒔くことを含んだ。
真菌の分類。自然界での真菌(Fungus)はA.アナナソイデス(A.ananassoides)に関連付けられており、無胞子不完全菌目に属する不完全菌類である。直射日光を避けて放置した場合には、全ての培地上の白っぽい真菌(Fungus)のコロニーを試験した。直射日光に当てた場合には、全ての培地上のピンクがかった真菌(Fungus)のコロニーを試験した。どのような条件下でも胞子またはその他の子実体を観察しなかった。菌糸(Hyphae)(0.6〜2.7μm)は一般的に枝分かれにより成長し、完全なコイル(約40μm)を形成する場合があり、これらに関連するカリフラワー状体(3.5〜14μm)を有する。新たに発生する菌糸(Hyphae)は、試験した全ての培地での全ての条件下で観察する場合に波状のパターンで増殖する。PDA上の菌糸体(Mycelium)は3〜4週間でプレートを覆い、果実のような香りを生じる。
走査電子顕微鏡観察。Castillo et al.(2005)によって説明されている手順後に、実施例1の単離株の走査電子顕微鏡観察を実施した。真菌の増殖を支持する寒天培地片および宿主植物片をろ紙パケットに入れ、次いで、湿潤剤であるTriton X100を含む0.1Mのコカジル酸ナトリウム緩衝液(pH7.2〜7.4)中の2%グルテルアルデヒド中に入れ、5分にわたり吸引して一晩放置した。翌日、切片を水緩衝液1:1で15分ずつ6回洗浄し、続いて10%エタノールで15分洗浄し、30%エタノールで15分洗浄し、50%エタノールで15分洗浄し、70%エタノールで15分ずつ5回洗浄し、次いで70%エタノール中で一晩以上放置した。次いで、切片を95%エタノールで15分ずつ6回すすぎ、次いで100%エタノールで15分ずつ3回すすぎ、続いてアセトンで15分ずつ3回すすいだ。微生物資材を臨界点乾燥させ、金スパッタコーティングし、Everhart−Thornley検出器を使用して、高真空モードのXL30 ESEM FEGで画像を記録した。オンラインで利用可能なImage Jソフトウェアを使用して菌糸を測定した。
真菌の生態。真菌は水性培地上で白色の菌糸体を産生した。あらゆる実験室条件下で、いかなる種類の子実構造または胞子も見られなかった。菌糸は、絡み合ってコイルを形成する傾向がある。ムスコドル(Muscodor)のその他の種もこの傾向を有する(Worapong et al.,2001a)。新たに発生する菌糸は、典型的な直線パターンではなく波状に成長し、通常は絡み合ってロープ状構造を形成する傾向がある。この成長パターンは、インビボ接種研究においてこの生物の同定での診断ツールとして有用であるということを証明する可能性がある。真菌は、小さい鎖によって菌糸に接続されるように見えるカリフラワー状構造も作る。このカリフラワー状構造の本体はどのような条件下でも発芽せず、そのため胞子ではないと思われる。この観察はムスコドル(Muscodor)種に独特であるように思われ、一般にはいかなるその他の真菌種でも存在が認められていない。
真菌の増殖および保管。数片のカーネーションの葉を、活発に増殖する単離株上に置いて胞子の産生を促進した場合には、単離株は胞子またはいかなるその他の子実体も産生しないことを確認し、23℃での1週間のインキュベーション後にもそのような構造を観察しなかった。真菌を、セルロース寒天培地(CA)、麦芽寒天培地(MA)およびコーンミール寒天培地(CMA)等のいくつかの異なる培地上にも蒔いて、胞子産生が示されるかどうかを確認した。培地の内のいくつかでは増殖速度が遅いことを除いて真菌のその他の特性は相違しないと思われ、子実体または胞子を観察しなかった。
単離したM.クリスパンス(M.crispans)のその他のより古典的な特徴も調べてM.アルブス(M.albus)と比較した。直射日光に当てた場合を除き、ムスコドル・クリスパンス(Muscodor crispans)は、増殖が遅くて密な白色の菌糸体を、試験した全ての培地上で産生し、直射日光により、菌糸体は明るいピンク色を発色した。このことは、試験した全ての比較可能な培地および条件で白っぽい菌糸体を産生するM.アルブス(M.albus)とは対照的である(Worapong et al.,2001a)。若い菌糸はまた、M.アルブス(M.albus)で一般に観察される特徴的な直線のケーブル状ではなく波状に成長した(Strobel et al.,2001)。宿主植物材料またはカーネーションの葉を含有する培地等のいかなる培地上でも胞子は形成されなかった。菌糸は直径が変動しており(0.8〜3.6μm)、絡み合ってより複雑な構造を形成することが多く、更には菌糸コイルを形成することが多かった(図1〜3)。これらの菌糸は全体として、M.アルブス(M.albus)の菌糸よりも大きかった(Worapong et al.,2001a)。
揮発性物質の定性分析。ペトリ皿中で成長する菌糸体の10日齢培養物上の空間中におけるガスを分析するために使用した方法は、M.アルブス(M.albus)株cz−620のオリジナルの単離株で使用した方法と同等であった(Strobel et al.,2001)。最初に、安定したフレックスファイバー上のポリジメチルシロキサン上の50/30のジビニルベンゼン/カルブレン(carburen)からなる、焼いた「Solid Phase Micro Extraction」注射器(Supelco)を、真菌の増殖を支持するペトリ皿の側面に開けた小さな孔を通して置いた。このファイバーを、45分にわたり真菌の蒸気相に曝露した。次いで、注射器を、膜厚が0.50mmである30m×0.25mm内径のZB Waxキャピラリーカラムを含むHewlett Packard 6890ガスクロマトグラフのスプリットレス注入口に挿入した。カラムの温度を下記のようにプログラムした:30℃で2分、続いて5℃/分で220℃まで。キャリアガスは超高純度ヘリウム(地元の販売業者)であり、初期のカラムヘッド圧は50kPaであった。揮発性物質を捕捉する前に、ファイバーをヘリウムガス流下で20分にわたり240℃で条件付けた。30秒の注入時間を使用して、GCに試料ファイバーを導入した。ガスクロマトグラフを、単位解像度で作動するHewlett Packard 5973質量選択検出器(質量分析装置)にインターフェイスで接続した。データ収集およびデータ処理を、Hewlett Packard ChemStationソフトウェアシステムで実施した。真菌によって産生された揮発性物質の混合物中の化合物の初期同定を、NISTデータベースを使用するライブラリ比較により行った。
真菌のDNAの単離およびITS−5.8S rDNA配列情報の取得。PDA上で増殖している本真菌の10日齢培養物を、Rapid Homogenization:Plant leaf DNA Amplification Kit(Cartagen;米国、ワシントン州)を使用して、25℃でのインキュベーション後にDNAの供給源として使用した。使用した技法の内のいくつかは、オーストラリア由来のその他のM.アルブス(M.albus)の単離株を遺伝学的に特徴付けるために使用した技法と同等であった(Ezra et al.,2004)。1週齢培養物から、培養した菌糸体を正方形(0.5cm2)に切り取った。この切片の底から寒天培地を擦り取り、できるだけ多くの寒天培地を除去した。この切片を1.5mlのエッペンドルフバイアルに入れ、−80℃で約10分にわたりインキュベートした。次いで、キットの製造業者の使用説明書に従ってDNAを抽出した。抽出したDNAを、二重蒸留した滅菌水で希釈し(1:9)、1μlの試料をPCR増幅に使用した。プライマーITS1(TCCGTAGGTGAACCTGCGGG)およびITS4(TCCTCCGCTTATTGATATGC)を使用するポリメラーゼ連鎖反応により、ITS1,5.8S ITS2 rDNA配列を増幅させた。真菌培養物から抽出した1μlのDNA(1:9希釈)、0.5μlのプライマーITS1および0.5μlのプライマーITS4、1.5mMのMgCl2を含む7μlのRedMixTMプラスPCRミックス(GeneChoice,Inc.、米国、メリーランド州)、ならびに5μlのddH2O PCRグレード(Fisher Scientific、オーストラリア、西オーストラリア州、ウェンブリー)を含有する14μlの反応ミックス中でPCR手順を行った。Biometraパーソナルサイクラー(ドイツ、ゲッティンゲン)中において、下記のPCR増幅を実施した:5分にわたり96℃、続いて45秒にわたり95℃、45秒にわたり50℃および45秒にわたり72℃を35サイクル、続いて5分にわたり72℃。TAE緩衝液を用いた100Vで30分にわたる1.3%アガロースゲルでのゲル電気泳動(Labnet International,Inc.(米国、ニュージャージー州、ウッドブリッジ)のGelXLUltra V2または(Wealtec Inc.米国、ジョージア州)のWealtec GES細胞システム)を使用して、PCR産物を調べた。ゲルを、0.5μgml−1の臭化エチジウム溶液に5分にわたり浸し、次いで蒸留水で5分にわたり洗浄した。Bio−Imaging System(モデル202D;DNR−Imaging Systems、イスラエル、キルヤットアナビム)において、UV光下でゲル撮像を実施した。UltraClean PCR Clean Up DNA Purification Kit(MO BIO Laboratories,Inc.、米国、カリフォルニア州)を使用して、約500bpのPCR産物を精製した。精製物をダイレクトPCRシークエンシングに送った。ITS1プライマーおよびITS4プライマーを使用するPCR産物の両方の鎖に対してシークエンシングを実施した。MegaBACETM1000解析システム(Danyel Biotech Ltd.、イスラエル、レホヴォト)においてDYEnamic ETターミネーターを使用して、シークエンシングを実施した。配列を、NCBIウェブサイト上のGenBankに提出した。この研究で得た配列を、NCBIウェブサイト上のBLASTソフトウェアを使用してGenBankデータベースと比較した。
ムスコドル・クリスパンス(Muscodor crispans)の分子生物学。18S rDNA、ITS1、5.8SおよびITS2の部分配列はDNAの高度の保存された領域であり、従って生物の分類で非常に有用であることが実証されている(Mitchell et al.,1995)。M.クリスパンス(M.crispans)のこれら分子的に特徴的な部分配列を得て、GenBankのデータと比較した。18S rDNA配列の検索後に、525bpのM.クリスパンス(M.crispans)を高度なBLAST検索にかけた。結果として、525bpのM.アルブス(M.albus)(AF324337)との100%同一性が示された。M.クリスパンス(M.crispans)の部分的なITS1配列およびITS2配列ならびに5.8S rDNA配列の比較分析では、M.アルブス(M.albus)(AF324336)のITS1および2、M.ロセウス(M.roseus)(AY034664)のITS1および2、X.エンテロレウカ(X.enteroleuca)CBS 651.89(AF163033)のITS1および2、X.アルブスクラ(X.arbuscula)CBS 452.63(AF163029)のITS1および2、ならびにハイポキシロン・フラギフォルム(Hypoxylon fragiform)(HFR246218)のITS1および2と、それぞれ95%相同性、95%相同性、90%相同性、90%相同性および91%相同性でヒットした。
本発明をある程度、単離した新規の真菌と共に説明しているが、(当該技術分野で理解されるであろう)そのような真菌の多様体(variant)および変異体(muatnt)も本発明との関連において予期されることが理解されるだろう。用語「多様体」および「変異体」を米国特許第6,911,338号明細書に記載されているように定義することができ、この明細書の全体が参照により本明細書に援用される。従って、本発明は、M.クリスパンス(M.crispans)の多様体株または変異体株およびこれらの対応する組成物を対象とすることができる。
植物病原体に対するM.クリスパンス(M.crispans)のバイオアッセイ試験。文献(Strobel,et al.,2001)に既に記載されているように、比較的簡易な試験を使用して、微生物抑制活性に関してM.クリスパンス(M.crispans)の揮発性副生成物の蒸気を試験した。標準PDAペトリ皿中において寒天培地の細片(2cm幅)を除去し、M.クリスパンス(M.crispans)を接種し、約1週間にわたりプレートの片側で増殖させた。次いで、真菌用の寒天培地の小さな塊を使用して、試験する真菌または細菌をペトリ皿の反対側に接種した。細菌および酵母を寒天培地上に画線した(1.5cm長)。次いで、1枚のパラフィルムでプレートを覆い、48時間にわたり23℃でインキュベートした。試験生物の増殖へのM.クリスパンス(M.crispans)の効果を、最初に、接種を行った箇所での増殖の有無を検証することにより確認した。増殖を観察した場合、真菌の菌糸の2箇所で直径の測定を行った。細菌および酵母の増殖が影響を受けた程度をコントロールプレートでの増殖に対する比で推定することにより、細菌および酵母に対する蒸気の生物学的活性を評価した(Strobel et al.,2001)。増殖を観察しなかった場合、試験生物を試験プレートから無菌的に取り出し、蒸気への曝露後のある時点で新鮮なPDAプレート上に接種して試験生物の生存性を確認した。
表8を参照すると、ボトリティス(Botrytis)に属するM.クリスパンス(M.crispans)への揮発性副生成物の蒸気の効果は極めて顕著であり、特に様々な植物の灰色カビ病の原因であるB.シネレア(B.cinerea)に対して極めて顕著である。抑制効果および死滅効果は、タマネギの灰色カビ病いもち病を引き起こすボトリティス・アリイ(Botrytis allii)にも適用可能である。限定されないが、そのような結果は、本発明を効果的に使用し、農産物の表面または収穫後の貯蔵雰囲気を変更してカビおよび関連する問題を防ぐことができることを示唆する。同様に、そのような結果は、真菌の増殖を予防するまたは制御するためにタマネギ(例えばビダリアオリオン)、シャロットおよびニンニク農産物を処理するための本発明のFFC組成物の使用を裏付ける。
M.クリスパンス(M.crispans)の揮発性物質からの蒸気は、穀物(例えばトウモロコシ、小麦、オオムギ、コメ等)で腐敗および真菌増殖を引き起こす多くの真菌に対しても効果的であり、本発明を、様々な果物および野菜、例えばジャガイモ、ビート、ニンジン、サツマイモと共に使用することができ、そのような穀物、果物または野菜は、収穫前、収穫後、貯蔵中または輸送中のいずれかである。従って、本発明の組成物および方法を、農業および食品加工分野において真菌に関連する主要な問題の内のいくつかに適用することができ、アルテルナリア(Alternaria)、クラドスポリウム(Cladosporium)、アスペルギルス(Aspergillus)、ペニシリウム(Penicillium)、ジプロディア(Diplodia)、フサリウム(Fusarium)およびギベレラ(Gibberell)が挙げられるがこれらに限定されない標的生物に対して使用することができる。(例えば表8を参照)。
M.クリスパンス(M.crispans)の副生成物からの蒸気は、マイコスフェレラ・フィジエンシス(Mycosphaerella fijiensis)真菌に対して有効であった。(表8を参照)。従って、本発明を、バナナおよびプランタンの、真菌が関連する黒シガトカ病の治療として使用することができる。
柑橘類の潰瘍病は、米国の柑橘産業の存在そのものを脅かす。表8に示すように、M.クリスパンス(M.crispans)の副生成物からの蒸気は、潰瘍病を引き起こす病原体であるキサントモナス・アキソニポディスp.v.シトリ(Xanthomonas axonipodis p.v.citri)を効果的に死滅させる。そのような結果は、本発明のFFC組成物および関連する方法を使用して、種子、実生苗、果樹園、装備もしくは装置(例えば、作業者の装備および衣服等)ならびに/または収穫した果実を効果的に処理して潰瘍病を予防する、抑制するまたは制御することができることを示唆する。
実施例6の試験および結果の補足として、M.クリスパンス(M.crispans)の揮発性副生成物の蒸気による生物検定試験を、様々なその他の植物およびヒトの病原体である真菌および細菌に対して実行した。(下記の表9を参照)。Xプレートの1個の四分円中のPDA上で真菌を増殖させ、室温で3〜5日わたりインキュベートした後に1種または複数種の試験生物を接種した。接種と同時にコントロールプレートを作製し、個々の試験生物に最適である同じ培地上で増殖させた。試験生物であるスタフィロコッカス・アウレウス(Staphylococcus aureus)6538、サルモネラ・コレラスイス(Salmonella cholerasuis)10708、大腸菌(Escherichia coli)11229、S.アウレウス(S.aureus)ATCC43300(MRSA)およびビブリオ・コレラ(Vibrio cholerae)ATCC14035を、Xプレートの残り3個の四分円中のトリプチカーゼ大豆寒天培地(TSA)上で増殖させた。各生物に関する3枚のプレートを、適切なコントロールと共に室温で約2日、約4日および約6日にわたり真菌の副生成物の蒸気に曝露した。試験微生物の生存性を確認するために、その後、真菌を物理的に除去し、コントロールプレートおよび試験プレートを最短で3〜4日にわたり35±1℃のインキュベーターに入れたが、但し、マイコバクテリウム(Mycobacterium)種を更に約1月にわたりインキュベートした。このことを、副生成物の蒸気が試験生物を抑制したかまたは死滅させたかどうかを確認するために行い、生物の生存性を評価した。この同じプロトコルを、エルシニア・ペスティス(Yersinia pestis)およびバシルス・アンスラシス(Bacillus anthracis)に関して行ったが、但し、曝露時間を3日および5日に変更し、Y.ペスティス(Y.pestis)を、真菌への曝露後に28±1℃でおよび5%CO2中においてインキュベートした。先に述べたプロトコルを使用して、マイコバクテリウム・マリナム(Mycobacterium marinum)ATCC927を残り3個の四分円中の7H11寒天培地(Difco Co)上で増殖させ、33±1℃でインキュベートした。各生物による試験での3回の反復実験全てが同一の挙動であった。
実施例8a
FFCの試験生物を抑制するおよび死滅させる相対的能力を測定した。バイアルに化合物を入れることにより、試験溶液を調製した。PDAが入ったペトリ皿の中心に位置する、予め滅菌したマイクロカップ(4×6mm)に、試験混合物(20マイクロリットル)を入れた。使用しない場合には、混合物を0℃で保管した。3mm3の寒天培地ブロック(試験真菌当たり少なくとも3個の寒天培地ブロック)上で新たに増殖しており、切除した試験生物(表9で述べている)を、マイクロカップから2〜3cmに置いて、ペトリ皿を2層のパラフィルムで覆った。所定の期間後に、寒天培地ブロックの縁からの菌糸の成長の測定を行った。しかし、ゲオトリクム・キャンディダム(Geotrichum candidum)の場合は、接種した寒天培地プレートの元々の領域から再び画線することにより、ゲオトリクム・キャンディダム(Geotrichum candidum)を画線して、新たに目に見える成長および生存性を確認した。試験溶液をマイクロカップ中に入れていない適切なコントロールも作製した。20μlのFFC混合物で試験を少なくとも2回行い、同等の結果であった。
小さい寒天培地ブロックを無菌的に取り出してPDAプレート上に置き、1〜3日後に増殖を観察することにより、または新鮮なPDAプレート上にゲオトリクム・キャンディダム(Geotrichum candidum)を再画線することにより、試験微生物の生存性を得た。このようにして、微生物の生存性を評価することができた。表11aに示す結果は、下記に列挙する生物が特定のFFC組成物により完全に抑制されており、ほとんどの場合は特定のFFC組成物への曝露により死滅していることを示す。そのような生物として、アスペルギルス・ニガー(Aspergillus niger)、チーズに生えるペニシリウム(Penicillium)種、セラコスポラ・ベチコラ(Cercospora beticola)、バーティシリウム・ダーリエ(Verticillum dahaliae)、フィチウム・ウルチナム(Pythium ultimum)、フィトフトラ・パルミボラ(Phytophthora palmivora)、マイコフェレラ・フィジエンシス(Mycophaeraella fijiensis)、リゾクトニア・ソラニ(Rhizoctonia solani)、アスペルギルス・フミガーツス(Aspergillus fumigatus)、ゲオトリクム・キャンディダム(Geotrichum candidum)、トリコデルマ・ビリデ(Trichoderma viridi)、ガノダーマ(Ganoderma)種、クルブラリア(Curvularia)種およびボトリティス・アリイ(Botrytis alli)が挙げられる。そのため、適切に適用する場合、FFC組成物は、これら病原体微生物を制御する能力を有する。そのような結果は、この混合物により、多くのその他の病原体微生物を抑制するまたは死滅させることができることを示す。
表11aのデータを参照すると、用いたFFC組成物の活性プロファイルは、いくつかの例では、M.クリスパンス(M.crispans)およびこの揮発性副生成物の蒸気と比較して異なる抗微生物効果および/または抗微生物効果の増強を示す。
先の実施例を参照して、ならびに同等の技法および手順を使用して、同じ病原体をプロパン酸の蒸気で処理した。比較結果を、列Aおよび列Bに再掲した表11aのデータと共に下記の表11bに示し、観察したプロパン酸のみの効果(抑制%)を列Cに記載する。20μlでは、プロパン酸の量は、本発明のいくつかの実施形態におけるプロパン酸のレベルと同等である。プロパン酸は、ある程度の抗微生物効果を有することが知られている先行技術の様々な単独の化合物の代表的なものである。しかし、表11bの比較データにより実証されているように、本組成物は、本発明と無関係の先行技術の単独の成分から独立して予想される結果を超える、新たなおよび相乗的な結果を示す。表11bに示すように、先行技術ではせいぜい抑制されるにすぎないが、本発明の組成物では、試験した多くの病原体が取り除かれる(即ち死滅する)。その他のそのような単独の先行技術の化合物/組成物との比較でも同様の結果が得られる。
実施例9a
M.ツベルクロシス(M.tuberculosis)の単離株の内の4種の臨床薬剤耐性株(5901867、50001106、59501228および3081)をFFC組成物に曝露した。各単離株に関して、10μLの培養物を7H11寒天培地プレートの中央に置き、次いで滅菌プラスチック耳によりプレートの表面全体にわたり均一に広げた。0.65mlの微小遠心管(マイクロキャップ)から蓋を切り取り、スクリューキャップ蓋を有するオートクレーブ可能な管内で15分にわたり121℃でオートクレーブした。滅菌鉗子を使用して、接種したプレートの中心に置かれているマイクロキャップを取り出した。コントロールプレート(各単離株に関して1枚)にはマイクロキャップを置かなかった。各単離株に関して3枚のプレートを作成し、各プレートの3個のマイクロキャップそれぞれに、5μLの、10μLのまたは20μLのFFCを入れた。次いで、プレートを、ジップロックで密閉した、湿らせた紙タオルが入ったプラスチック袋に入れ、約28日にわたり36℃±1℃でインキュベートした。約48時間の曝露後に、マイクロキャップを取り除いて処分し、プレートをインキュベーターに戻した。紙タオルを頻繁に確認し、再度湿らせて培地の脱水を防止した。全てのコントロールプレートで増殖した。5μLの揮発性物質に曝露したプレートおよび10μLの揮発性物質に曝露したプレートの全てで増殖した。20μLの揮発性物質に曝露した1種の単離株(50001106)のみが増殖した。M.ツベルクロシス(M.tuberculosis)の各単離株は、この生物の臨床薬剤耐性株であることに留意されたい。全ての実験を、米国政府承認のバイオセーフティ実験室条件で行った。
先の実施例のデータに矛盾することなく、本発明のより広い態様を実証することができる。当業者に公知の材料および技法を使用して、生存可能な培養物および適切な培地を調製する。例えば、(例えば、液体組成物の直接接触による、またはこの液体組成物からの蒸気による)本発明のFFC組成物への曝露により、下記の大腸菌群(グラム染色および形態学)の増殖抑制または死滅をもたらすことができる:大腸菌(Escherichia coli)(グラム陰性、桿状)、サルモネラ・エンテリティデス(Salmonella enteritidis)(グラム陰性、桿状)、プセウドモナス・アエルジノサ(Pseudomonas aeruginosa)(グラム陰性、桿状)、スタフィロコッカス・アウレウス(Staphylococcus aureus)(グラム陽性、球状)およびリステリア・モノサイトゲネス(Listeria monocytogenes)(グラム陽性、桿状)。
M.クリスパンス(M.crispans)の揮発性副生成物を模倣する人工組成物に対して試験した試験生物の内のいくつかに関してIC50を算出した。(表1を参照)。表12を参照すると、15μLの人口混合物の利用により全ての試験生物が100%抑制され、これらの試験生物の内のいくつかは、わずか10μLで死滅した。バーティシリウム・ダーリエ(Verticillium dahliae)、ボトリティス・シネレア(Botrytis cinerea)およびアスペルギルス・フミガーツス(Aspergillus fumigatus)は最高体積の混合物(30μL)でさえも死滅しなかったが、3種全てが10μLの試験混合物または15μLの試験混合物により100%抑制された。感受性が最も高い生物はフィチウム・ウルチマム(Pythium ultimum)であり、このフィチウム・ウルチマム(Pythium ultimum)は10μLで死滅しており、2.5μLで100%抑制された。そのため、IC50値は、揮発性物質の死滅能力を必ずしも反映していないことは事実である。なぜならば、P.ウルチマム(P.ultimum)およびボトリティス・シネレア(Botrytis cinerea)の両方が同じIC50を実質的には持つが、一方は死滅して他方は死滅しなかったからである(表13)。
実施例11
通常はゴミとみなされるであろう物品の人工混合物を、2個の弾薬箱(ammo cartridge box)中にまとめた。この物品は、廃棄される穀物品、花の一部、肉廃棄物、新聞紙の繊維および雑多なその他の廃棄物からなった。一方の箱の中に、0.2mlの上述したFFC組成物が入っている小さなビーカーを置いた。他方の箱の中には、FFCが入っていないビーカーを置いた。両方の箱を、80゜Fで10日にわたりインキュベートした。この期間の最後に、箱を開けて調べた。FFCが入った箱では腐敗が起こらないことが明らかであった。一方、コントロールの箱では大量の腐敗物に完全に変化していた。ゴミ処理のためのFFC組成物の使用は、ゴミを発酵させてメタン等のエネルギー関連製品にする世界中の施設への輸送の間での、損傷を受けていないゴミを腐敗から守る好機である。図4は、この実験の条件下においてFFC組成物がゴミを微生物による腐敗から保護したことを示す。
実施例12
10mlの上述したFFC組成物が入ったバイアルを、10×10インチの透明なプラスチックのSaran(登録商標)ラップ1枚に組み込んだ、もしくは組み合わせた、および/またはこのバイアルを使用して、10×10インチの透明なプラスチックのSaran(登録商標)ラップ1枚を浸した。このプラスチックラップを6日にわたりFFC組成物中に浸し、絞らずに乾燥させ、次いで、ペニシリウム(Penicillum)種のチーズ株を十分に接種したチーズ片を覆う包装材として使用した。別の実験では、チーズ片に真菌を接種し、次いで通常のSaran(登録商標)ラップで覆い、次いで10マイクロリットルのFFCを注入した。ペニシリウム(Penicillum)種のみ、処理した包装材のみ、FFCのみ、およびコントロール(処理なし)により、上記の説明に対する適切なコントロールを示す。実験のチーズ片を室温で1週間にわたりインキュベートし、次いで各チーズ品の一部を研究室の職員が食べて試験した。冷蔵庫に貯蔵しておいた、新たに切り取った新鮮なチーズ片と比較した場合、チーズの味の堕落による、この方法での貯蔵による悪影響はなかったことに留意されたい。完全に真菌が湧いたチーズ片は食べなかった。図2から、包装材の下でまたは処理した包装材と共にFFC組成物を使用することにより、チーズ片が、ペニシリウム(Penicillum)種による腐敗およびチーズのコロニー形成から実質的に完全に保護されたことは明らかである。このことは、処理された包装材および未処理のSaranで覆ったチーズでの10マイクロリットルのFFCの注入のみにも当てはまった。
実施例13a
この実験のために、数個のヤムイモを入手した。最終的に腐敗を引き起こす、表面を汚染する微生物が接種源として十分多いであろうと考えられた。そのため、2個のヤムイモ片を、0.2mlのFFCが入っている小さなビーカーの存在下で密閉されている蓋付きのプラスチック箱に入れた。コントロールの箱には、FFCが入っていないビーカーを入れた。次いで、密閉した箱を10日にわたり室温で保持し、その後調べた。処理したヤムイモ片に表面汚染およびより深い汚染は現われないが、コントロールのヤムイモでは、図3に示す表面の傷みおよび初期の腐敗が複数箇所で現われることが明らかであった。図3では、左側は未処理のヤムイモであり、右側はFFCで処理しているヤムイモである。左側のヤムイモの上端において真菌による腐敗の領域が大きいことに留意されたい。
関連する最終用途として、収穫した果物または野菜の農産物にFFC組成物および/またはこの成分を塗布して、あらゆる天然の、ろう状のまたは保護用のコーティングの除去を補うことができる。例えば、茎を切断した、収穫したカボチャおよび類似の農産物を(例えばスプレー塗布により)FFC組成物で処理して、微生物の増殖を制御する/抑制する、市場性を改善する、および品質保持期限を延ばすことができる。
表2〜7および表10に記載した種類の組成物に従う本発明の合成FFC組成物は、フィチウム・ウルチマム(Pythium ultimum)、リゾクトニア・ソラニ(Rhizoctonia solani)AG2−2およびアファノミセス・コクリオイデス(Aphanomyces cochlioides)によって引き起こされるサトウダイコン((ベータ・ブルガリス(Beta vulgaris)L.))の実生苗の病気、ならびにトマト(リコペルシコン・エスカレンタム(Lycopersicon esculentum))ではネコブセンチュウ、メロイドジネ・インコグニタ(Meloidogyne incognita)の制御に関して、生きたM.アルブス(M.albus)の使用と比べて遜色がなかった。この合成組成物は、3種全てのサトウダイコン病原体に対して生きた真菌のデンプンベースの製剤と同程度に苗木立ち枯れ病を制御し、トマトの根での根こぶ(root−knot gall)の数を著しく減少させた。用いたFFC組成物の比率研究では、2μl/cm3および0.75μl/cm3の土壌担体/培地成分の濃度それぞれで、サトウダイコンのリゾクトニア(Rhizoctonia)およびフィチウム(Pythium)による苗木立ち枯れ病が良好に制御されることが分かった。5μl/cm3の濃度の砂によってM.インコグニタ(M.incognita)に関して24時間で100%の死滅率が得られた。比較すると、インビトロ研究において同じ割合の生物学的合理性を使用すると、5g/lの砂を適用した、M.アルブス(M.albus)が感染している細かいオオムギ配合物と比べて、根こぶが少なかった。
コリネバクテリウム・ミシガネセ(Corynebacterium michiganese)は、組織壊疽病(tissue wilt)および腐敗によりトマトの深刻な損失をもたらす。この細菌の真性基準培養物をニュートリエントブロス寒天培地上に画線し、小さいキャップをプレートの中心に置いた。このキャップに、実験室で調製した本発明の人工FFC組成物20マイクロリットルを入れた。コントロールプレートにはFFC組成物を入れなかった。プレートを24時間にわたりインキュベートし、その後調べた。FFC処理プレート上では細菌の増殖がなかった。(図5を参照)。そのため、本発明のFFC組成物を、トマトの種子、苗木または産物の処理に使用することができるがこれらに限定されない。あるいは、FFC組成物を、前床土潅水(pre−bed soil drench)としての水と混合することができる。
先の実施例を参照しておよび上述の実施例の内のいくつかと矛盾することなく、本発明の様々なFFC組成物を、予防的にまたは活発な病気の状態の治療で使用することができ、そのような病気として、特にサトウダイコン、トマト、タマネギ、穀物、バナナおよびプランタンならびに柑橘類の作物に影響を及ぼす病気が挙げられるがこれに限定されない。
単独のまたは様々なその他の組成物に包含され得るFFC組成物および/またはこの成分を、家禽、農産物および関連する食品加工産業における様々な最終用途で用いることができる。いくつかのそのような非限定的用途を下記の実施例に記載する。
表2〜7および表10に記載した種類の組成物に従う本発明のFFC組成物を使用して様々な卵製品を処理することができ、この卵製品として、全卵および液状全卵、強化全卵および液状強化全卵、塩全卵および液状塩全卵、砂糖全卵および液状砂糖全卵、ならびに、液状かどうかにかかわらず、そのような製品と、砂糖、固形シロップ、シロップ、ブドウ糖およびデキストリン、および/またはガムおよび増粘剤との混和物、ならびにスクランブルエッグミックスおよび液状のスクランブルエッグミックス、コレステロール低減卵製品およびこの液状の製品および混和物、ならびに約10%未満の卵の固形分、卵の殻および卵成分(脱コレステロールされた卵黄が挙げられるがこれに限定されない)を含有する関連製品が挙げられるがこれらに限定されない。そのような用語は当業者に理解され得、容認された産業的なおよび規制された使用に従って標準的な意味を有する。
同様に、本発明の様々なFFC組成物(少なくとも一部をイソ酪酸の代わりにプロパン酸を用いるFFC組成物が挙げられるがこれに限定されない)を、品質保持期限延長(ESL)液状卵製品の調製および/または包装で使用することができ、この品質保持期限延長(ESL)液状卵製品として、全卵、スクランブルミックス、卵黄および卵白の液状製品が挙げられるがこれらに限定されない。
同様に、本発明の様々なFFC組成物を、割れた空の卵の殻の加工で使用することができる。当該技術分野で理解されるように、利用可能な技法および加工装置を使用して、FFC組成物および/またはこの成分を単独でまたは別の組成物の一部として包含させ、更なる加工の前に、例えば栄養補助食品への更なる加工の前に空の殻に適用する(例えば噴霧する)ことができる。同様に、当該技術分野で既知の装置および技法を使用して、本発明の1種または複数種の組成物を、家禽の枝肉、肉または関連する肉製品の処理に適用することができる、組み入れることができる、または使用することができる。延長線上で考えると、下記の実施例の内の1つまた複数でも説明するように、本発明を、その他の種類の動物の枝肉、肉、加工肉製品ならびに全てのその他の形態の動物の肉(例えば、哺乳類、鳥類、魚類、巻き貝、二枚貝類、甲殻類、海産食品およびその他の食用種)と共に用いることもできることを当業者は理解するだろう。
先の実施例の延長として、そのようなFFC組成物をそのような加工栄養補助食品(例えば、ハーブおよびスパイスのカプセルまたは錠剤)に包含させて細菌/真菌の増殖を抑制することができる。
先の実施例は様々な下流の加工用途を説明するが、本発明を、卵および家禽の生産との関連で、より広く用いることができる。限定されないが、本発明のFFC組成物または関連する成分を、あらゆる家禽のもしくは卵の生産施設に導入することができる、および/またはこの生産施設に関連するあらゆる装置もしくは機械に適用することができる。例えば、鶏小屋または飼育/産卵施設の空気処理または表面処理により、空中に浮遊する汚染物質および表面に付着した汚染物質ならびにその後の汚染物質上での微生物の増殖を制御することができる、低減することできる、および/または抑制することができる。
FFC組成物またはこの1種もしくは複数種の成分を様々なその他の加工食品に包含させることができ、この加工食品として、水活性を有するまたは微生物の増殖を支持する食品が挙げられる。例えば、そのような組成物または成分を、フムス、ピーナッツバターおよびその他のそのようなスプレッド、ディップおよび混合物に包含させることができる。ピーナッツの栽培産業および加工産業に関しては、本発明の組成物および関連する成分を、殻が割れる前後のピーナツに、最初のピーナッツの洗浄後に、関連する加工製品(例えばピーナツバター)に、ならびに/または包装装置および包装材料に適用することができる。
同様に、本発明のFFC組成物/成分(例えば、上記の表2〜7および表10の組成物の内の1種または複数種、またはこれらの表に記載した種類の変形)を、製剤形態(例えばローション、軟膏、クリーム等)にかかわらず、様々なスキンケア製品またはトリートメント製品として使用することできる、またはこれらの製品に包含させることができる。
例えば、ざ瘡は通常、皮膚小胞に浸入する1種または複数種の細菌種により引き起こされる。本発明の更なる使用を示すと、本発明のプロパン酸置換FFC組成物の水性製剤を調製し、年齢に関連したざ瘡を呈する青年期の男性被験者の治療に使用した。3週間にわたり3日毎に1回塗布することにより、目視の観察でざ瘡の病斑の数および強度が著しく低減した。
消費者向け製品および/またはヘルスケア製品との関連における本発明の別の使用を示すと、本発明のFFC組成物を、代表的な市販のスキンクリーム製剤に(約2重量%で)包含させた。図6に関して、PDAプレートを調製し、コントロールのクリーム(FFC成分またはFFC組成物を含まない)、左上;細菌細胞で汚染されているコントロールのクリーム、右上;FFC組成物を含む「処理済」クリーム、左下;および細菌汚染されている処理済クリーム、右下と共に1日にわたりインキュベートした。示すように、わずかな濃度の本発明のFFC組成物を包含させることにより、そのようなスキンクリーム製品における細菌の増殖が防止された。
同様に、本発明を、様々な口腔衛生製品、口腔ケア製品および口腔治療製品と併せて用いることができる。限定されないが、下記の実施例は、上記に記載した種類のプロパン酸置換FFC組成物のそのような使用を実証する。あるいは、様々なその他のFFC組成物を、上記の表2〜7および表10の組成物または本明細書の他の箇所に記載するこれらの組成物の変形に従って使用することができる。
例えば、そのような一口腔ケア/衛生製品を説明すると、約1%のそのようなFFC組成物を用いて口内洗浄/リンス製品を製剤化した。そのようなFFC組成物の市販されている既製の口内洗浄/リンス製品への包含により、そのような製品を調製した。本発明のFFC組成物を、濃度または用量レベルにかかわらず、歯磨き粉/ゲルまたは関連するチューインガム、口内ケア製品、口腔ケア製品またはデンタルケア製品に包含させることもできる。
扁平苔癬(LP)は、口内でまたはその他の粘膜上で生じる可能性がある皮膚の自己免疫疾患である。膜が不安定になるにつれて細菌または真菌がこの領域に定着し、組織の疼痛、発赤、感染、出血および腫れを引き起こす可能性がある。この疾患における細菌の外来性の関与の原因を低減するために、そのようなFFC組成物の1%水溶液を含有する口内洗浄製品を調製した。患者の口を少なくとも3〜4分にわたり毎日2回〜3回すすぎ、その後に吐き出した。治療の適用前および治療の3週後に写真を撮影した。3週後に、歯茎の発赤がほとんど完全になくなり、併せて口および歯茎の疼痛がほぼ完全になくなり、更に歯茎およびその他の粘膜の色がほぼ正常な色に回復するという結果が示された。患者は、疼痛/出血がほぼ完全に止まったこと、および過去の経験と比較してLPが最も軽減したことを報告した。
上述したFFC組成物の1%の既製の口内リンス溶液を使用して、歯垢を低減させ、口腔の問題と関連する細菌から起こるその他の問題も治療した。2ヶ月にわたる3〜4回の口内リンス/日の毎日の使用により、歯垢の蓄積はわずかであった、またはなかった。(実際には歯科医が取ったメモから)赤色であり、腫れ上がっており、および出血し易いと最初に記録されていた歯茎が、今では色が正常であるように見え、「探針」器具による探査時に出血しなかった。
そのようなFFC組成物の有効性を確認するために、先の実施例から生じる口内の唾液をニュートリエント寒天培地プレートの一側上に置き、非FFCの市販の口内リンス液からの唾液を同じプレートの反対側上に置き、すすいでいない唾液を別のプレート上に置いた。次いで、唾液を2日にわたりインキュベートした。比較すると、すすがなかった唾液では細菌量が多く、非FFCリンス液の唾液では予想通り細菌量が減少していたが、FFCリンス液の唾液では検出可能な細菌がなかった。
別の実施例では、口腔外科医が、口腔手術の前に(例えば1%の市販のリンス/洗浄製品として)FFC組成物を試験した。患者は非処理の唾液を寒天培地プレート(ニュートリエント寒天培地)上に置き、FFCリンス溶液ですすぎ、この唾液を別の寒天培地プレート上に置いた。2〜3日のインキュベーション後に、FFCリンス処理したプレート上では細菌のコロニーは存在せず、このことは、口腔手術の前後の使用により、歯およびその他の口腔の感染が治療されるまたは抑制されることを示す。
乳牛における乳腺炎は、乳房に関連する細菌の複合体により引き起こされる。本発明の様々な非限定的実施形態に従って、下記に記載する種類のFFC組成物またはラムノリピド変性FFC組成物を搾乳時に乳房に適用して、乳製品の細菌の感染および汚染の可能性を低下させることができる。
本発明の様々なFFC組成物を使用して、産業的に/医学的に重要なバイオフィルム上の微生物量を減少させることができる。後者に関しては、義歯から人工関節に及ぶ物品を、外科的移植の前に本発明のFFC組成物で処理することができる。
本発明のFFC組成物を使用して、衣料品の真菌および細菌による腐朽、特に湿潤環境に曝露されている衣料品(即ち、革製品、靴、ブーツ、革ひも、ネクタイ、ベルト)の真菌および細菌による腐朽を制御することができる。例えば、上記に記載した種類の1%のFFC組成物0.2mlをブーツ中に塗布して完全に濡らした。ブーツを閉じて数時間にわたり生じる蒸気を維持し、その後、乾燥した空気に曝露した。腐朽はなく、乾燥したブーツにカビの臭いは残っていないという結果が示された。
本発明の組成物は様々なFFC成分を含むことができ、本発明を知る当業者により理解されるように製剤化することができる。限定されないが、最終用途または処理にかかわらず、本FFC成分および/または関連する組成物の内の1種または複数種を、様々な抗菌性組成物または抗真菌性組成物に包含させることができる。限定されないが、そのような組成物は、ラムノリピド界面活性剤成分を単独でまたは当該技術分野で既知の種類の抗菌性成分および/または抗真菌性成分と併せて含むことができる。後者に関しては、そのような組成物は、シリンゴマイシンおよび/またはプソイドマイシン成分を含むことができる。
例えば、そのようなラムノリピドに関連する変形を説明すると、広範囲の果物および野菜の収穫後の洗浄もしくは処理として使用するために、またはこの処理と併せて使用するために、様々な組成物を、1種または複数種のラムノリピド成分ならびに1種または複数種の本発明のFFC組成物(および/またはこの1種もしくは複数種のFFC成分)で調製することができる。限定されないが、そのような組成物では、(例えば、上述した'572号の出願に記載された)ラムノリピド成分が約0.1重量%〜約99.9重量%の範囲の量で存在することができ、FFC組成物/成分(例えば、上記の表2〜7および表10の組成物)が約99.9重量%〜約0.1重量%の範囲の量で存在することができる。適用されるEPA規則を参照すると、上述したZonixラムノリピド界面活性剤に関する許容限度はない。同様に、本発明のFFC組成物/成分に関する許容限度もない。従って、そのようなラムノリピド/FFC組成物で処理した食品を、更に洗浄することなく消費することができる。
上述に従って、ラムノリピド/FFC組成物を使用して柑橘類の果実を洗浄することができる。8.5%ラムノリピド溶液(水溶液)および5%FFC溶液(例えば表10の組成物の水溶液)を使用して、そのような一洗浄/浴組成物を調製した。1ガロンの95:5(体積/体積)混合物を425ガロンまで希釈した。当産業で既知のまたは適用される州もしくは連邦政府の規定で求められる手順プロトコルを使用して、この組成物を効果的に使用して柑橘類の皮を洗浄して浸透させ、表面のおよび内部の両方の細菌および真菌を死滅させた。柑橘類の果実では効果的な結果が実証されたが、このラムノリピド/FFC組成物および関連するラムノリピド/FFC組成物を、あらゆる果実または野菜(例えば、限定されないが、ブルーベリー、トマト、ブドウ、タマネギ、サトウダイコン、サツマイモ、リンゴ、西洋ナシ、パイナップル、ならびに例えばノニおよびアサイフルーツ等が挙げられるがこれらに限定されない様々なその他の熱帯地方の農産物)の収穫後の洗浄または処理と併せて同等に使用することができる。本実施例のFFC組成物で洗浄したまたは処理した果実/野菜は、ヒトが消費しても安全であるおよび衛生的であると認められるだろう。
ラムノリピド成分が包含されているかまたは包含されていないかにかかわらず、本発明の様々なFFC組成物を使用して、様々な果実および野菜(例えば、限定されないが、西洋ナシ、モモ、リンゴ、トマト、アンズ、マンゴー等)を包装するもしくは缶詰にする前にまたは包装するもしくは缶詰にするときに処理して、細菌量/真菌量を減少させることができる。
FFC成分化合物の供給。本発明の組成物で使用する成分化合物を、商業的に得ることできる、または公知の種類のもしくは文献に記載されている合成技法を使用して調製することができる。(例えば、全体が参照により本明細書に援用される米国特許第6,911,338号明細書を参照)。
その他の実施形態を説明すると、本発明の様々な組成物を、例えば援用される米国特許第6,566,349号明細書に記載されている、果実飲料用の添加剤として使用するために配合することができる。例えば、本発明の組成物を、フラボノイド化合物および/もしくは抗酸化剤と組み合わせてまたはこれらの代わりとしてジュースに添加することができる、または加工前に果実および野菜に予め適用して製品の品質保持期限を延ばすことができる。当業者が理解することができるように、'349号特許のそのような組成物を、過度に実験することなく直接的な方法で、本発明の1種または複数種の組成物を任意の最終用途を決定することができる量で含むように変更することができる。
本発明の組成物を、例えば援用される米国特許第5,866,182号明細書の記載されている、茶および茶/果物混合飲料の保存で使用するために配合することもできる。例えば、本発明の組成物を、ソルビン酸Kおよび/安息香酸Na、アスコルビン酸ならびに二炭酸ジメチルと組み合わせてまたはこれらの代わりとして使用することができる。当業者が理解することができるように、'182号特許(例えばこの実施例1)のそのような飲料を、本発明の1種または複数種の組成物を含むように変更することができ、任意の特定の用途のためのこの組成物の量を、過度に実験することなく直接的な方法で決定することができる。
本発明の組成物を、例えば援用される米国特許第5,176,903号明細書に記載されている、制汗剤および脱臭剤の抗微生物効果の保持および/または増強で使用するために配合することもできる。例えば、本発明の組成物を、パラベン、イミダゾリジニル尿素、クオタニウム−15、ベンジルアルコール、フェノキシエタノールおよび(例えば米国特許第5,176,903号明細書の実施例1〜3に記載されている)様々なその他の好適な防腐剤と組み合わせてまたはこれらの代わりとして使用することができ、分解から保護するために、品質保持期限を延ばすためにおよび/または有効性を高めるために、そのような制汗剤/脱臭剤に添加することでき、1種または複数種のそのような組成物は、当業者が過度に実験することなく直接的な方法で決定することができる量である。
本発明の組成物を、例えば援用される米国特許第4,548,808号明細書に記載されている、制汗剤で使用するために配合することもできる。例えば、品質保持期限を延ばすためにおよび抗微生物効果を高めるために、当業者により過度に実験することなく容易に決定される有効量で、本発明の1種または複数種の組成物を、’808号特許(例えばこの実施例1〜6)に記載されている実質的に無水の非アルコール性制汗剤製品に添加することができる。
本発明の組成物を、例えば援用される米国特許第3,119,691号明細書に記載されている、動物/ペットの飼料、例えばドッグフードで使用するために配合することもできる。当業者は、’691号特許に開示されている製品の品質保持期限を延ばすために、本組成物の内の1種または複数種を、低水和(low hydration)ドッグフード、高水分ドッグフードおよび再水和可能なドッグフード(例えば’691号に記載されている製品組成物)に添加することができ、そのような組成物は、過度に実験することなく容易に決定される量であることを認識するだろう。
本発明の組成物を、例えば援用される米国特許第5,060,598号明細書および米国特許第4,721,059号明細書に記載されている、猫砂で使用するために配合することもできる。例えば粘土、アルファルァ、木材チップおよびおがくずが挙げられる様々な吸収材料、ならびに粘土状の充填材('059号特許)および泥炭('598号特許)が挙げられる高吸収材料を使用して、尿を吸収して臭気を制御する。本発明の1種または複数種の組成物を、これらの材料と併せて使用して(例えば噴霧して、または包含させて)、微生物の活性の低下させるまたは取り除くおよび砂の使用後の臭気を制御することができ、そのような組成物は、過度に実験することなく容易に決定される量である。
本発明の組成物を、例えば援用される米国特許第6,250,511号明細書に記載されている、スプレー殺菌剤用途で使用するために配合することもできる。’511号特許には、スプレーボトル中に、約25%〜75%の少なくとも1種のグリコール化合物、0.2〜60%の抗微生物性成分、約5%〜45%の界面活性剤ならびに任意選択的に有効量の香料、染料およびその添加剤(’511号特許の第3欄)を含む処理溶液を入れることが記載されている。例えば、本発明の1種または複数種の組成物を、抗微生物性成分の代わりとしてまたは添加剤として’511号特許の殺菌剤と併せて使用することができ、そのような組成物は、過度に実験することなく当業者により容易に決定される量である。
本発明の組成物を、例えば援用される米国再発行特許第40,050号明細書に記載されている、食品および飲料品の加工設備の洗浄および/または殺菌のために配合することもできる。'050号再発行特許は二酸化ハロゲン組成物を教示するが、当業者は、そのような配合物を変更して本発明の1種または複数種の組成物を代わりに用いることができ、そのような組成物は、過度に実験することなく容易に決定される量であり、'050号再発行特許に記載されている(例えばこの第3〜4欄に記載されている)種類の装置および技法を使用して、そのような加工設備に接触するまたは適用される。
本発明の組成物を、例えば援用される米国特許第4,988,576号明細書に記載されている、木材の保存で使用するために(および援用される米国特許第7,449,130号明細書に記載されているリグノセルロース系複合体用に)配合することもできる。'576号特許は、リグニンスルホン酸塩のグラフトコポリマー、ヒドロキシベンジルアルコール、および金属塩もしくは金属塩の混合物またはリグノスルホン酸塩のグラフトコポリマーの少なくとも1種の金属塩を含む防腐剤組成物の溶液を木材に含浸させることを教示しており、コポリマーは、リグノスルホン酸塩とアクリル単量体との反応生成物である。例えば、本発明の1種または複数種の組成物を、単独でまたは'576号特許(または'130号特許)の実施例1〜4および実施例1〜2にそれぞれ記載されているように'576号特許(または'130号特許)により教示されるそのような防腐剤と組み合わせて使用して木材に含浸させるまたは木材を保存することができ、そのような組成物は、過度に実験することなく当業者により容易に決定される量である。
本発明の組成物を、例えば援用される米国特許第4,575,891号明細書に記載されている、拭き取り布の消毒および/または殺菌と共に使用するために配合することもでき、米国特許第4,575,891号明細書は、殺菌剤が部分的に染み込んだパッドを教示する(例えば米国特許第4,575,891号明細書の第2欄)。’891号特許には、アルコール性溶液およびその他の消毒液として好適な殺菌剤が記載されている。例えば、本発明の1種または複数種の組成物を単独でまたはそのような殺菌剤と組み合わせて使用することができ、そのような拭き取り布材に包含させることができ、そのような組成物は、過度に実験することなく当業者により容易に決定されるおよび包含される量である。
本発明の組成物を、例えば援用される米国特許第6,187,327号明細書に記載されている、手の消毒用ローションと共に使用するために配合することもできる。例えば、本発明の1種または複数種の組成物を、’327号特許のローションに添加してこのローションと共に作用するように、またはこのローションの活性成分の内のいずれかを置き換えて抗微生物性効果を改善するために配合することができる。’327号特許には、様々なその他の既知の手の消毒剤(例えば両性のカチオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、湿潤剤および非イオン性の退行剤(regressing agent))も開示されている。いずれにしても、本発明の組成物を、あらゆるそのような手の消毒剤における活性成分の内のいずれかの代わりとしてまたはこの活性成分と共に使用するために包含させることができ、そのような組成物は、過度に実験することなく容易に決定される量である。
本発明の組成物を、例えば援用される米国特許第4,581,238号明細書に記載されている、食用種子または作物種子の処理で使用するために配合することもでき、米国特許第4,581,238号明細書は、種子とソルビン酸塩が分散されている蒸気とを接触させることを教示する(例えば米国特許第4,581,238号明細書の第2〜5欄)。例えば、米国特許第4,581,238号明細書に開示されている教示および装置を使用して、本発明の1種または複数種の組成物を揮発させてまたはその他の方法でそのような種子に適用することができ、そのような組成物は、過度に実験することなく当業者により容易に決定される量である。
本発明の組成物を、例えば援用される米国特許第4,356,204号明細書に記載されている、腐敗性生物の増殖の予防および抑制で使用するために配合することもでき、米国特許第4,356,204号明細書は、食品と効果的に増殖を抑制する量のケトヘキサン酸とを接触させることを教示する(例えば米国特許第4,356,204号明細書の第2〜3欄)。本発明の1種または複数種の組成物を単独でまたはそのようなケトヘキサン酸と共に使用して、腐敗性生物を更に抑制するおよび/または死滅させることができる。同様に、援用される米国特許第2,711,976号明細書は、カスタード食品の腐敗性生物およびスタフィロコッカス(Staphylococcus)種に対する耐性を高めるためのアミノ酸の使用を示唆する。この場合も、本発明の1種または複数種の組成物を、単独でまたはそのようなアミノ酸と組み合わせてまたはそのようなアミノ酸の代わりとして使用することができる。同様に、援用される米国特許第2,866,819号明細書は、食品における防腐剤としてのソルビン酸の使用を示唆する。この場合も、本発明の1種または複数種の組成物を、単独でまたはソルビン酸と組み合わせてまたはソルビン酸の代わりとして使用することができる。同様に、援用される米国特許第2,910,368号明細書には、野菜の品質保持期限を延ばすためのEDTAとソルビン酸との使用が開示されている。この場合も、本発明の1種または複数種の組成物を、単独でまたはEDTAおよび/もしくはソルビン酸と組み合わせて使用することができる。各例では、本発明のそのような組成物を、過度に実験することなく当業者により容易に決定される量で使用することができる。
本発明の組成物を、例えば援用される米国特許第5,273,769号明細書に記載されている、果実、種子、穀物およびマメ科植物の処理で使用するために配合することもでき、米国特許第5,273,769号明細書は、処理しようとする物品の内のいずれかを容器に入れ、その後二酸化炭素およびアンモニアを導入することを教示する。例えば、米国特許第5,273,769号明細書(例えば実施例1〜4)に記載されている装置および技法を使用して、本発明の1種または複数種の組成物を、過度に実験することなく当該技術分野で理解され得るように効果的に用いることができる。
本発明の組成物を、歯科用のおよび医療用の物品/装置および移植片の処理で使用するために配合することもでき、後者は、援用される米国特許第6,812,217号明細書により具体的に記載されており、米国特許第6,812,217号明細書は、移植可能な医療用装置の外表面に適用される抗微生物性ポリマーフィルムを教示する。例えば、米国特許第6,812,217号明細書に記載されている種類の技法を使用して、本発明の1種または複数種の組成物を、そのような装置もしくは物品(医療用もしくは歯科用のどちらか)またはそれら上のポリマーフィルム(例えば第5〜6欄に記載されている)に付着させてまたはその他の方法で組み入れて抗微生物効果を付与することもでき、そのような組成物は、過度に実験することなく当業者により容易に決定される量である。
本発明の組成物を、例えば援用される米国特許第5,968,207号明細書に記載されている、織物の処理で使用するために配合することもでき、米国特許第5,968,207号明細書は、拡散または含浸による織物の繊維または布地へのトリクロサンエステルの適用を教示する。例えば、本発明の1種または複数種の組成物を、単独でまたはそのような化合物と組み合わせて使用するために配合し、人工、天然またはブレンド(例えば'207号特許の第2〜3欄に記載されている)のいずれかにかかわらず、織物またはこの繊維の抗微生物性を改善することができ、そのような組成物は、過度に実験することなく当業者により容易に決定される量である。
本発明の組成物を、例えば援用される米国特許第7,575,744号明細書に記載されている、食品加工施設、関連する設備および食材の表面の処理のために配合することができる。例えば、米国特許第7,575,744号明細書に記載されている種類の教示および装置を使用して、本発明の1種または複数種の組成物を配合し、広範囲の食品加工施設での設備および食材の表面に付着させて微生物の活性を低減させるまたは取り除くことができ、そのような施設/設備として、軽食の、家禽の、柑橘類の、ピーナッツのおよび関連する食品の加工施設/設備が挙げられるがこれらに限定されない(例えば第20欄を参照)。そのような組成物を、過度に実験することなく当業者により容易に決定される量で用いることができる。
本発明の組成物を、家畜(farm animal)および家畜(livestock)における微生物関連の疾患(即ち、乳腺炎、蹄、口等)の治療で使用するために配合することもでき、例えば援用される米国特許第7,192,575号明細書に記載されている、作物、植物、穀物およびその他の食料品での微生物の増殖を抑制するために配合することもでき、米国特許第7,192,575号明細書は、クローブバッド油、ユーカリ油、ラベンダー油、ティーツリー油およびオレンジ油の適用およびこられを含む組成物を教示する。例えば、本発明の1種または複数種の組成物を、単独でまたは'575号特許(例えば'575号特許の実施例1〜2)の組成物と組み合わせて使用するために配合することができ、そのような組成物は、過度に実験することなく当業者により容易に決定される量である。
本発明の組成物を、例えば援用される米国特許第6,156,362号明細書に記載されている、例えばドレッシング、ソース、マリネード、調味料、スプレッド、バター、マーガリン、乳製品ベースの食品等の食料品の微生物による腐敗からの保護で使用するために配合することもでき、米国特許第6,156,362号明細書は抗微生物性成分の組み合わせを教示する。本発明の1種または複数種の組成物を、単独でまたは'362号特許(例えば'362号特許の実施例1〜4)の成分の内の1種もしくは複数種と組み合わせて使用するために配合することができ、そのような組成物は、過度に実験することなく当業者により容易に決定される量である。
本発明の組成物を、例えば援用される米国特許第7,659,326号明細書および本明細書で引用されている典拠(例えばArthur A.LemanによるKirk−Othmer−Paint;pp.1046〜1049,Vol.17;1996、この開示もその全体が参照により本明細書に援用される)に記載されている、広範囲の水性塗料および有機系塗料、染料および関連する表面コーティングとの混和ために配合することができる。例えば、本発明の1種または複数種の組成物を、単独でまたは’326特許の詳細な説明ならびに実施例1および実施例3に記載されている別の抗微生物性成分と組み合わせて使用するために配合することができ、そのような組成物は、過度に実験することなく当業者により容易に決定される量である。
本発明の組成物を、例えば援用される米国特許第6,231,845号明細書に記載されている、アフターシェーブ製品に使用するためにまたはこのアフターシェーブ製品に包含させるために配合することもできる。例えば、本発明の1種または複数種の組成物を、’845号特許の実施例1〜6に記載されている種類の成分と共に使用して、先行技術のそのようなアフターシェーブ製品に抗微生物効果を付与することができる。そのような組成物は、過度に実験することなく当業者により容易に決定される量で存在することができる。
本発明の組成物を、例えば援用される米国特許第7,507,429号明細書に記載されている、(例えば哺乳類の、鳥類の、魚類の、巻き貝の、甲殻類のおよび/もしくはその他の形態の海産食品のならびに/またはその他の食用種の)枝肉、肉または肉製品の処理用の製品への使用また包含のために配合することもできる。例えば、本発明の1種または複数種の組成物を、'429号特許に記載されている種類の製品への包含のために、単独でまたは別の抗微生物性成分と組み合わせて使用すべく配合することができる。そのような組成物は、過度に実験することなく当業者により容易に決定される量で存在することができ、対応する製品を、'429号特許に記載されているまたは本発明を知る当業者により別の方法で理解される教示および装置と共に、適用するまたはその他の方法で利用することができる。(例えば、'429号特許の詳細な説明の肉加工、噴霧、浸漬および処理、ならびに組成物および成分の項目を参照)。
本発明の組成物を、食品用の材料(例えば、コーティングまたはその他の包含用の材料)への使用または包含のために配合することもでき、そのような製品として、スナック食品、シリアル食品およびその他の食品成分、援用される米国特許第7,163,708号明細書に記載されている種類のそのようなスナック食品およびシリアル食品ならびに材料が挙げられるがこれらに限定されない。そのような材料がどのようにして適用され得るかは限定されないが、本発明の1種または複数種の組成物を、単独でまたは’708号特許の食品およびコーティング材料に関する詳細な説明に記載されているそのような材料の抗微生物性成分または防腐剤成分の内の1種もしくは複数種と共に使用することができる。従って、当業者に理解されるように、そのような組成物は、過度に実験することなく容易に決定される量で存在することができる。
本発明の組成物を様々な食用のスプレッド組成物との混和のために配合することもでき、このスプレッド組成物として、ピーナッツバター組成物、例えば援用される米国特許第7,498,050号明細書に記載されているピーナッツバター組成物が挙げられるがこれに限定されない。例えば、当業者に理解されるように、’050号特許の実施例1〜2に記載されているように本発明の1種または複数種の組成物をそのような食用のスプレッド製品と共に使用して抗微生物効果を付与するまたは高めることができ、そのような組成物は、過度に実験することなく容易に決定される量で存在することができる。
本発明の組成物を、広範囲の害虫駆除用組成物、例えば援用される米国特許第6,720,450号明細書(例えば米国特許第6,720,450号明細書の詳細な説明の第2〜3節)に記載されている害虫駆除用組成物との混和のために配合することもできる。例えば、本発明の1種または複数種の組組成物を、単独でまたは例えば'450号特許に記載されている別の抗殺虫剤成分と組み合わせて使用するために配合するこができる。同様に、本発明の1種または複数種の組成物を、様々な吸血昆虫に対して使用するために好適な担体成分と共に米国特許第6,720,450号明細書に記載されているように配合することができ、この吸血昆虫として、様々な種類の蚊および農作物の害虫が挙げられるがこれらに限定されない。本組成物を、蚊の直接接触、阻止および/または除去のために米国特許第6,720,450号明細書に記載されているように使用することができ、この蚊として、この幼虫、蛹および/たまは成体の形態が挙げられる。あるいは、本発明を忌避作用のために使用するおよび/または配合することができる。いずれにしても、そのような組成物は、過度に実験することなく当業者により容易に決定される量で存在することができ、任意選択的に界面活性剤成分を含むことができる。そのような界面活性剤は生物界面活性剤とすることができる。限定されないが、そのような生物界面活性剤を、モノラムノリピド、ジラムノリピドおよびこれらの組み合わせから選択することができる。
代表的な抗微生物性組成物を様々な試験生物に対して使用して、いくつかのアッセイを行った。接種材料の塊(3×3mm)を最低レベルで画線し、次いでマイクロカップの中心のウェルに入れた組成物B〜Lからの蒸気にそれぞれ曝露した。室温での38時間後に、各塊からの放射状の増殖を測定した(mm)。
本発明の様々な物品の使用に従って、およびこの使用を説明すると、(例えば、ワイオミング州、ラヴェルのAlハーヴェイからの)ベントナイト粘土の顆粒に、上記の表10の代表的な組成物(約0.80ml/ベンントナイトg)を含浸させ、上部が開いている収容器に入れた。この物品と一束のラズベリー(即ち収穫後の腐敗しやすい食品)の一部との顆粒を、密閉した容器に入れた。7日後では、わずかなカビまたはその他の微生物の増殖が明らかであった。(図11Aを参照)。これに対して、抗微生物性組成物が混和されていないベントナイト顆粒のコントロール系を使用して、同じ束からのラズベリーを、密閉した容器中で同じ期間にわたり保管し、過度の腐敗を観察した。(図11Bを参照)。
実施例52の組成物B〜Lが挙げられるがこれらに限定されない本発明の様々なその他の組成物を、固体担体成分と混和させることができる。例えば、蒸気浸透性の収容器、例えば密閉されたまたは再密閉可能である柔軟な袋または小袋と併せて使用するために、市販されているベントナイト粘土の顆粒にそのような組成物を含浸させることができる。好適な寸法のメッシュもしくは多孔質の不織布Tyvek(登録商標)かまたは機能的に類似の材質かにかかわらず、そのような袋/小袋は、食品加工および食品接触に関するFDA仕様を満たす全ての成分(即ち抗微生物性成分、担体および収容器)を有する物品を提供することができる。
上記の段落[0055]および段落[0119]ならびに実施例11を参照して、ベントナイト粘土の顆粒に表10の組成物を含浸させ、次いで蒸気浸透性の小袋または類似のそのような収容器で包装し、ヒトの排泄物またはゴミの堆積物または回収物に近接して置いた。限定されないが、任意選択的に最終の処理および/または処分までの途中での予備的措置として、そのような物品をヒトの排泄物の容器中にまたはこの容器に隣接して置くことができる。
段落[0057]〜[0062]および段落[0119]を参照して、実施例55の最終用途との組み合わせで有用な抗微生物性組成物を下記に表す。
再び、段落[0057]〜[0062]および段落[0119]を参照して、実施例55の最終用途との組み合わせで有用な別の抗微生物性組成物を下記に表す。
さらに、段落[0057]〜[0062]および段落[0119]を参照して、実施例55の最終用途との組み合わせで有用な別の抗微生物性組成物を下記に表す。
段落[0077]および段落[0087]〜[0091]、表2〜7および表10ならびに実施例32〜33を更に参照して、本発明の様々なFFC組成物を使用して猫砂および関連する動物ケア製品を調製することができる。例えば、ベントナイト粘土の顆粒またはその他の固体担体成分に、下記に表す種類の抗微生物性組成物(例えば0.20重量%〜約10.0重量%、またはいくつかの実施形態では約1.0重量%〜約3.0重量%)を接触させる、または含浸させる。
あるいは、実施例52に記載した種類の組成物(組成物B〜L)および実施例55a〜55cに記載した種類の組成物を、そのようなトイレ砂品の調製で使用することもできる。いずれにしても、任意のそのような成分の相対量を、任意の特定の配合のために、所望の抗微生物効果のために、および/または本明細書に記載した種類の内の任意の1種もしくは複数種の添加剤の存在に適合するために調整することができ、添加剤として賦香/芳香剤が挙げられるがこれに限定されない。
上記の段落[0026]および段落[0087]ならびに実施例52を参照して、1種または複数種の酸性塩と共にプロパン酸を使用して本発明の組成物を調製することができ、酸性塩として、任意の1種または複数種のC2〜約C6の酸の塩が挙げられるがこれに限定されない。食品グレードの品質の酸性塩等のそのような酸性塩を、下記に記載するように調製することができ、Sigma−Aldrich(ミズーリ州、セントルイス)が挙げられるがこれに限定されない当業者に公知の供給源から入手可能である。
本発明のいくつかの実施形態に従って、および段落[0061]を参照して、下記の組成物を成分の量または濃度に関する制限がないとみなすことができ、そのような組成物として、
A.プロパン酸:C4の酸性塩、
B.プロパン酸:C5の酸性塩、
C.プロパン酸:C6の酸性塩、
D.プロパン酸:C4の酸性塩の組み合わせ、
E.プロパン酸:C5の酸性塩の組み合わせ、
F.プロパン酸:C6の酸性塩の組み合わせ、および
G.プロパン酸:C4〜C6の酸性塩の組み合わせ
が挙げられる。そのようなC4〜C6の酸性塩およびこれらの組み合わせを、限定されないが、n−C4〜n−C6のモノカルボン酸およびこの構造異性体ならびに好適な対応するC4〜C6のポリカルボン酸およびヒドロキシポリカルボン酸の塩から選択することができ、この塩として、本発明を知る当業者に理解されるように、2−メチルプロパン酸、2−メチルブタン酸、3−メチルブタン酸、2,3−ジメチルプロパン酸、2,2−ジメチルプロパン酸、酒石酸、クエン酸ならびにその他のC4〜C6のモノカルボン酸および(ヒドロキシ)ポリカルボン酸の塩が挙げられるがこれらに限定されず、そのような塩を、限定されないが、そのような酸のアルカリ(例えばナトリウム、カリウム等)塩、アルカリ土類(例えばカルシウム、マグネシウム等)塩および第4級アミン(例えばアンモニウム等)塩から選択することができる。成分を、そのまま混合することにより、または水および/もしくは含水アルコールが挙げられるがこれらに限定されない好適な溶媒もしくは希釈剤と共に混合することにより、ならびに任意選択的にラムノリピド等の界面活性成分の存在下で混合することにより、そのような組成物を調製することができる。
実施例57aの任意の組成物を参照して、本発明の様々なその他の組成物は、任意のそのような酸性塩成分に加えてまたはこの酸性塩成分の代わりとして、1種または複数種のC2〜約C5の酸およびこの構造異性体の1種または複数種のエステルを含むことができる。
実施例57a〜bの任意の組成物を参照して、本発明の様々なその他の組成物は、任意のそのような酸性塩成分および/または酸エステル成分に加えてまたはこれらの代わりとして、1種または複数種のC2〜約C8のアルデヒド成分を含むことができる。
実施例57a〜cの組成物を参照して、本発明の様々なその他の組成物は、別のC2〜約C6の酸成分を含むことができる。限定されないが、プロパン酸に加えてまたはプロパン酸の部分的な代わりとして、そのような追加の酸成分を、酢酸、イソ酪酸、クエン酸およびこれらの組み合わせから選択することができる。
酸エステルが存在しない実施例57および実施例57a〜dの組成物、即ちプロパン酸と少なくとも1種のC4〜約C6の酸性塩との組成物、プロパン酸と少なくとも1種の追加のC2〜約C6の酸成分との組成物、およびプロパン酸と少なくとも1種のC4〜約C6の酸性塩との組成物にもかかわらず、アルデヒドおよび/またはケトンを用いることができる。いずれにしても、上記で論じたように、本発明のあらゆる組成物には、ナフタレン誘導体化合物およびアズレン誘導体化合物ならびにその他の縮合芳香族化合物およびこの水素化誘導体が欠如していることができる。
実施例57および実施例57a〜eの任意の1種または複数種の上記組成物に関して、そのような組成物を、本明細書で論じた種類の製品または上記に記載したように使用される製品が挙げられるがこれらに限定されない製品に包含させることができる。全体として、限定されないが上記に記載したように、1種または複数種のそのような組成物を、食品成分または栄養補助食品(例えば実施例17d)、様々な食品(例えば段落[0032]、段落[0052]および段落[0066])、例えばピーナッツバター、フムスならびに様々なディップおよびスプレッド(例えば実施例18)、チーズ(例えば段落[0067])ならびにその他の乳製品および関連する製品等の加工食品等、固体担体成分(例えば実施例53〜56)、ならびに蒸気浸透性の収容器と組み合わせたそのような担体成分(例えば実施例53〜55)に包含させることができ、ならびにソルビン酸、安息香酸ならびにソルビン酸塩および安息香酸塩(例えば実施例28および実施例39)の代わりとして包含させることができる。
実施例57および実施例57a〜eを参照して、プロパン酸とイソ酪酸の塩(例えばカリウム)との代表的な組成物の比較試験により、本発明が、食品に包含された場合に抗微生物効果を発揮することが実証された。より具体的には、0.1グラムのイソ酪酸カリウムを20マクロリットルのプロパン酸に添加した。(同様に、下記の表15に示すように、いくつかの参照組成物も調製した)。試験組成物および参照組成物を10グラムの新鮮な冷凍フムス(Costco)と手で混入して、密封した容器に入れた。処理した容器およびコントロールの容器を25℃で保持し、その後10日目および18日目に検査した、およびサンプリングした。各容器のサンプリングを無菌の目移針により行い、約1mgをポテトデキストロース寒天培地(ODA)ペトリ皿上に画線させ、30時間にわたりインキュベートし、次いで検査した。結果を下記の表15にまとめる。
目的:本発明の組成物が、高pHおよび低滴定酸度(TA)に起因してカビの増殖の影響を受けやすい酵素修飾チーズ(enzyme modified cheese)(EMC)チェダー製品(EMC CH)中においてカビを抑制することができるかどうかを確認する。手段:組成物を調製し、EMCチェダー製品を入手し、1〜10CFU/試料100グラムを供給するためのカビ胞子の供給源としてブルーチーズスラリーを調製する。組成物の有効性を試験する。
抗微生物性組成物の調製:
1.394.92gのイソ酪酸と498.76gの45% KOH(水酸化カリウム)とを1Lの容量フラスコに入れて、イソ酪酸カリウム(K−IB)の4M(モル濃度)溶液を調製する。
2.脱イオン水を加えて体積を1Lにする。
3.室温に調節し、体積を再調整する。
4.pH=8.11である。
5.4Mのイソ酪酸カリウム、プロピオン酸、酢酸およびクエン酸を含む全ての成分を下記の表中の割合で秤量し、最終組成物を調製する。
本実施例の組成物(FF#2と表す)は、イソ酪酸カリウム、プロピオン酸、酢酸およびクエン酸で構成されている。本実施例の組成物のpHは5.39である。
ブルーチーズスラリー(BM)(青カビ)の調製
1.予め蒔くことにより、ブルーチーズ中において34億CFU/gのペニシリウム・ロックフォルティ(Penicillium roqueforti)を得た。
2.1gのブルーチーズを9mlのクエン酸ナトリウム(2.0%)緩衝液に加える(1/10希釈)。
3.0.1mlの1つの希釈液(1/10)および3段階希釈液を9.9mlのクエン酸ナトリウム緩衝液にする。
4.各試料ならびにコントロール「C」および「D」上に0.2mlを蒔く。
5.6.8CFU/試料に合わせるためのBMを算出する。
実験:
1.ネガティブコントロール「Aa」として100gのEMC CHを白色カップに入れ、ネガティブコントロール「Ab」として100gのEMC CHを無菌カップに入れる。
2.ネガティブコントロール「B」として99gのEMC CHを1mlのFF#2(1.0%)と共に白色カップに入れる。
3.ポジティブコントロール「C」として、上部の表面上に0.2mlのBMがある100gのEMC CHを白色カップに入れる。
4.ポジティブコントロール「D」として、0.2mlのBMが混入されている100gのEMC CHを白色カップに入れる。
5.試験白色カップ「E」は、上部の表面に0.2mlのBMを接種している99gのEMC CH中に1mlのFF#2(1.0%)を有することができる。
6.試験白色カップ「F」は、製品内に0.2mlのBMを接種している99gのEMC CH中に1mlのFF#2(1.0%)を有することができる。
7.白色試験カップに番号を付けてラベルを貼る。
8.12週(84日)にわたり25℃でインキュベートする。
9.最初のpH、TAおよびカビの総数に関して1個の試験カップをサンプリングする。
10.2週目、4週目、8週目および12週目に、PDA(ポテトデキストロース寒天培地 重量/1%酒石酸)を使用してカビの総数を調べる。
11.12週目に最後のpHおよびTAをサンプリングする。
12.結果を記録する。
13.試料Aおよび試料BのGC/MSアッセイを得て、製品におけるFF#2の化学的効果を比較する。
目的:FF#2が、高pHおよび低TAに起因してカビの増殖の影響を受けやすい脂肪分解(Lipolyzed)クリーム製品(LC)中においてカビを抑制することができるかどうかを確認する。手段:FF#2を調製し、ソルビン酸カリウムが入っていない脂肪分解クリーム製品を入手し、1〜10CFU/試料100グラムを供給するためのカビ胞子の供給源としてブルーチーズスラリーを調製する。FF#2の有効性を試験する。
FF#2の調製:
1.394.92gのイソ酪酸と498.76gの45% KOH(水酸化カリウム)とを1Lの容量フラスコに入れて、イソ酪酸カリウム(K−IB)の4M(モル濃度)溶液を調製する。
2.脱イオン水を加えて体積を1Lにする。
3.室温に調節し、体積を再調整する。
4.pH=8.11である。
5.4Mのイソ酪酸カリウム、プロピオン酸、酢酸およびクエン酸を含む全ての成分を下記の表中の割合で秤量し、最終FF#2を調製する。
FF#2は、イソ酪酸カリウム、プロピオン酸、酢酸およびクエン酸で構成されている。FF#2のpHは5.39である。
ブルーチーズスラリー(BM)(青カビ)の調製
1.予め蒔くことにより、ブルーチーズ中において34億CFU/gのペニシリウム・ロックフォルティ(Penicillium roqueforti)を得た。
2.1gのブルーチーズを9mlのクエン酸ナトリウム(2.0%)緩衝液に加える(1/10希釈)。
3.0.1mlの1つの希釈液(1/10)および3段階希釈液を9.9mlのクエン酸ナトリウム緩衝液にする。
4.各試料ならびにコントロール「C」および「D」上に0.2mlを蒔く。
5.6.8CFU/試料に合わせるためのBMを算出する。
実験:
1.ネガティブコントロール「Aa」として100gのLCを白色カップに入れ、ネガティブコントロール「Ab」として100gのLCを無菌カップに入れる。
2.ネガティブコントロール「B」として99gのLCを1mlのFF#2(1.0%)と共に白色カップに入れる。
3.ポジティブコントロール「C」として、上部の表面上に0.2mlのBMがある100gのLCを白色カップに入れる。
4.ポジティブコントロール「D」として、0.2mlのBMが混入されている100gのLCを白色カップに入れる。
5.試験白色カップ「E」は、上部の表面に0.2mlのBMを接種している99gのLC中に1mlのFF#2(1.0%)を有することができる。
6.試験白色カップ「F」は、製品内に0.2mlのBMを接種している99gのLC中に1mlのFF#2(1.0%)を有することができる。
7.白色試験カップに番号を付けてラベルを貼る。
8.12週(84日)にわたり25℃でインキュベートする。
9.最初のpH、TAおよびカビの総数に関して1個の試験カップをサンプリングする。
10.2週目、4週目、8週目および12週目に、PDA(ポテトデキストロース寒天培地 重量/1%酒石酸)を使用してカビの総数を調べる。
11.12週目に最後のpHおよびTAをサンプリングする。
12.結果を記録する。
13.試料Aおよび試料BのGC/MSアッセイを得て、製品におけるFF#2の化学的効果を比較する。
真菌および細菌の代表的な株に対して実施例60a〜bの組成物(FF#2)を試験した。組成物をポテトデキストロース寒天培地プレートの中心でマイクロカップに入れ、接種材料の小さな塊を、中心のウェルのマイクロカップの周囲に2cmの間隔を置いて配置した。表16に示す量の組成物をカップに入れた。プレートを周囲温度で24時間にわたりインキュベートして測定した。コントロールプレートに関して測定を行い、組成物に関して表される抑制の量を、コントロールプレートでの増殖(組成物を含まない)に対する増殖の量として示す。各試験生物に関して最低でも2回の測定を完了した後に、百分率の抑制結果を算出した。
Claims (42)
- 固体担体成分と、前記固体担体成分と組み合わせられている揮発性組成物とを含む物品であって、
前記組成物が、プロパン酸と、イソ酪酸塩、酢酸イソアミル、イソ酪酸イソブチル、イソ酪酸イソペンチル、酢酸アリル、イソ酪酸メチル、酢酸ブチル、酢酸フェニルエチル、ベンズアルデヒド及びこれらの組み合わせから選択される他の成分とを含む物品。 - 前記他の成分がイソ酪酸イソブチルである請求項1に記載の物品。
- 前記他の成分がベンズアルデヒドである請求項1に記載の物品。
- 前記固体担体成分が粘土を含む請求項1に記載の物品。
- 前記粘土がベントナイト粘土を含む請求項4に記載の物品。
- 前記組成物がラムノリピド成分を含む請求項5に記載の物品。
- 前記他の成分が、酢酸イソアミル、イソ酪酸イソブチルおよびこれらの組み合わせから選択される請求項1に記載の物品。
- 前記他の成分がイソ酪酸イソブチルである請求項7に記載の物品。
- 前記組成物がプロパン酸およびイソ酪酸イソブチルを含む請求項8に記載の物品。
- 前記他の成分が酢酸イソアミルである請求項7に記載の物品。
- 前記組成物が、プロパン酸、酢酸イソアミルおよびベンズアルデヒドを含む請求項7に記載の物品。
- 前記組成物がラムノリピド成分を含む請求項1に記載の物品。
- 前記固体担体成分が粘土を含む請求項1に記載の物品。
- 前記粘土がベントナイト粘土である請求項13に記載の物品。
- 前記組成物が、請求項9に記載の組成物および請求項11に記載の組成物ならびに前記組成物の組み合わせから選択される請求項1に記載の物品。
- プロパン酸と、イソ酪酸塩、酢酸イソアミル、イソ酪酸イソブチル、イソ酪酸イソペンチル、酢酸アリル、イソ酪酸メチル、酢酸ブチル、酢酸フェニルエチル、ベンズアルデヒド及びこれらの組み合わせから選択される他の成分とを含む組成物。
- 前記他の成分が酢酸イソアミルおよびイソ酪酸イソブチルから選択される請求項16に記載の組成物。
- 酢酸イソアミルおよびベンズアルデヒドを含む請求項17に記載の組成物。
- 前記塩がイソ酪酸のカリウム塩およびアンモニウム塩から選択される請求項16に記載の組成物。
- 前記他の成分がベンズアルデヒドである請求項16に記載の組成物。
- 前記プロパン酸成分に加えてC2〜C6の酸成分を含む請求項16に記載の組成物。
- 前記酸成分が、酢酸、イソ酪酸、クエン酸およびこれらの組み合わせから選択される請求項21に記載の組成物。
- プロパン酸および少なくとも1種のイソ酪酸塩を含む請求項16に記載の組成物。
- 前記塩がイソ酪酸のカリウム塩およびアンモニウム塩から選択される請求項23に記載の組成物。
- 前記プロパン酸に加えて酸成分を含み、前記追加の酸成分が、酢酸、イソ酪酸、クエン酸およびこれらの組み合わせから選択される請求項24に記載の組成物。
- プロパン酸および少なくとも1種のイソ酪酸塩を含む組成物。
- 前記イソ酪酸塩が、イソ酪酸のカリウム塩およびアンモニウム塩から選択される請求項26に記載の組成物。
- 前記プロパン酸に加えて酸成分を含み、前記追加の酸成分がC2〜C6の酸およびこれらの組み合わせから選択される請求項26に記載の組成物。
- 前記追加の酸成分が、酢酸、イソ酪酸、クエン酸およびこれらの組み合わせから選択される請求項28に記載の組成物。
- プロパン酸とイソ酪酸の塩とからなる組成物、ならびにプロパン酸とイソ酪酸の塩と酢酸およびクエン酸の内の少なくとも一方とからなる組成物から選択される請求項29に記載の組成物。
- 請求項16に記載の組成物、請求項26に記載の組成物および前記組成物の組み合わせから選択される組成物を含む製品。
- ヒト用の食品、動物用の食品、包装品および固体担体成分から選択される請求項31に記載の製品。
- 前記固体担体が粘土を含む請求項32に記載の製品。
- 前記ヒト用の食品が加工食品から選択される請求項33に記載の製品。
- 乳製品から選択される請求項34に記載の製品。
- 微生物の活性に影響を与える方法であって、
請求項16に記載の組成物を準備し、
前記組成物と、微生物および微生物の活性を支持する能力がある食品の内の少なくとも一方とを接触させることを含み、前記組成物が、微生物の活性に影響を与えるに十分な量である方法。 - 前記食品が収穫後の農産物を含み、前記農産物が容器内にある請求項36に記載の方法。
- 前記農産物の供給連鎖のある段階で前記農産物を前記容器に導入する請求項37に記載の方法。
- 前記導入が、収穫の段階、加工の段階、卸売販売の段階、小売販売の段階およびこれらの組み合わせから選択される請求項38に記載の方法。
- 前記組成物が、イソ酪酸イソブチル、酢酸イソアミルおよびこれらの組み合わせから選択される他の成分を含む請求項36に記載の方法。
- 前記他の成分がベンズアルデヒドである請求項40に記載の方法。
- 前記食品が収穫後の農産物を含み、前記農産物が容器内にある請求項40に記載の方法。
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