JP5829603B2 - 飼料用サプリメント - Google Patents
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Description
i.少なくとも1種類の脂肪分解酵素と、
ii.少なくとも1種類のフィターゼと、
を含む、飼料用サプリメントが得られる。
et al Aust. Poult. Sci. Symp, 17, 305〜307(2005))とは逆に、少なくとも1種類の特定のフィターゼと少なくとも1種類の特定の脂肪分解酵素とを含む飼料用サプリメントを飼料材料に添加して飼料原料を生成すると、少なくとも1種類の栄養塩の利用率の増加および/または見かけの代謝エネルギ(AME)の増加が生じることを発見した。
i)以下の特徴すなわち、
a)本明細書で開示するリパーゼアッセイで測定した場合に、pH約1.5〜pH約3.5の範囲のpHでリパーゼ活性を有する脂肪分解酵素、
b)配列番号7または8に示すようなアミノ酸配列を含むポリペプチドまたはこれに対する同一性が少なくとも70%、80%、90%、95%、98%または99%であるポリペプチドを含む脂肪分解酵素、
c)配列番号9または10の配列;または遺伝暗号の縮重がゆえに配列番号9または10とは異なる配列;または配列番号9または10に対する同一性が少なくとも70%、80%、90%、95%、98%または99%である配列を含むヌクレオチド配列の発現によって産生される脂肪分解酵素、
のうちの少なくとも1つを特徴とする脂肪分解酵素である脂肪分解酵素と、
ii)以下の特徴すなわち
d)細菌のフィターゼ、
e)pH約2.5〜pH約3.5の範囲のpHで、本明細書で後述するフィターゼアッセイで測定した場合に、フィターゼ活性を有するフィターゼ、
f)配列番号1〜6または配列番号13のいずれか1つに示すようなアミノ酸配列を含むポリペプチドまたはこれに対する同一性が少なくとも70%、80%、90%、95%、98%または99%であるポリペプチドを含むフィターゼ、
g)配列番号11あるいは、配列番号14のヌクレオチド253〜1483の配列;または遺伝暗号の縮重がゆえに配列番号11あるいは、配列番号14のヌクレオチド253〜1483とは異なる配列;または配列番号11、あるいは配列番号14のヌクレオチド253〜1483に対する同一性が少なくとも70%、80%、90%、95%、98%または99%である配列を含むヌクレオチド配列の発現によって産生されるフィターゼのうちの少なくとも1つを特徴とするフィターゼと、を含む。
特に定義しないかぎり、本明細書で用いる科学技術用語はいずれも、本開示が属する技術分野の当業者に一般に理解されているものと同じ意味を有する。Singleton,
et al., DICTIONARY OF MICROBIOLOGY AND MOLECULAR BIOLOGY, 20 ED., John Wiley and Sons, New York(1994)およびHale & Marham, THE HARPER COLLINS DICTIONARY OF BIOLOGY, Harper Perennial, NY (1991)が、本開示で用いる用語の多くについての当業者向けの汎用的な辞書となる。
VectorNTI (Vector NTI Advance 9.1 from Invitrogen Corporation, Carlsbad, California, USA)で計算する。設定はデフォルトのパラメータ(ギャップオープニングペナルティ−10、ギャップ伸長ペナルティ0.1)とする。
料が少なくとも有意な程度に精製されていることを意味する。
フィチン酸(myo−イノシトールヘキサキスリン酸塩)は、穀類、マメ科植物、油糧種子作物における重要な構成成分のひとつである。塩形態でのフィチン酸塩は、これらの植物での亜リン酸の主要な貯蔵形態である。
coli)またはブティアウクセラ(Buttiauxella)sp.フィターゼと同じ機能的な特徴または配列を有するべきものである。たとえば、ブティアウクセラ(Buttiauxella)sp.フィターゼは、ブティアウクセラ(Buttiauxella)sp.由来の変異体であってもよいが、これは天然にはブティアウクセラ(Buttiauxella)種に存在するものではない。
フィターゼBP−11(BP 11とも呼ばれることがある)−これは、少なくとも国際公開第2006/043178号パンフレットに記載されたフィターゼであり、Danisco A/Sから入手してもよいものである。このアミノ酸配列を、本明細書では配列番号6として説明する。フィターゼBP−17(BP 17とも呼ばれることがある)−これは、少なくとも国際公開第2008/097619号パンフレットに記載され、Danisco A/Sから入手してもよいフィターゼである。このアミノ酸配列を、本明細書では配列番号3として説明する。
本発明は、酵素あるいは、このような酵素をコードするヌクレオチド配列の任意のアミノ酸配列の変異体、相同体および誘導体の使用を包含する。
本発明による飼料用サプリメントを、他の成分またはキャリアと組み合わせで使用してもよい。
アシルグリセロールの加水分解を触媒するカルボキシエステラーゼとして定義可能な脂肪分解酵素(EC 3.1.1.3)は、アミラーゼおよびプロテアーゼと一緒に、3つの主要な消化酵素のうちの1つとして生理学的に極めて重要な酵素である。この酵素は、脂質をグリセロールと脂肪酸に加水分解するが、エステル化またはトランスエステル化反応においても機能し得る。
(i)
a)配列番号7または配列番号8として示されるアミノ酸配列または配列番号7または8に対する配列同一性が少なくとも70%であるアミノ酸配列を含む、脂肪分解酵素をコードする少なくとも1種類の異種のヌクレオチド配列;および/または
b)ヌクレオチド配列が、配列番号9または配列番号10または配列番号9または配列番号10に対する配列同一性が少なくとも70%であるヌクレオチド配列として示されるヌクレオチド配列を含む、脂肪分解酵素をコードする少なくとも1種類の異種のヌクレオチド配列;および/または
c)ヌクレオチド配列が、ストリンジェントな条件下で、配列番号9または配列番号10または配列番号9または配列番号10に対する配列同一性が少なくとも70%であるヌクレオチド配列またはこれらの相補体とハイブリダイズするヌクレオチド配列を含む、脂肪分解酵素をコードする少なくとも1種類の異種のヌクレオチド配列;および/または
d)ヌクレオチド配列が、遺伝暗号の縮重以外は配列番号9または配列番号10として示されるものとヌクレオチド配列と同一である、脂肪分解酵素をコードする少なくとも1種類の異種のヌクレオチド配列;
を含むトリコデルマ・リーセイ(Trichoderma reesei)細胞を提供するステップと、
(ii)前記脂肪分解酵素をコードする前記異種のヌクレオチド配列の発現を可能にする条件下で細胞を培養するステップと、を含む。
(i)トリコデルマ・リーセイ(Trichoderma reesei)細胞を、
a)配列番号7または配列番号8として示されるアミノ酸配列または配列番号7または8に対する配列同一性が少なくとも70%であるアミノ酸配列を含む、脂肪分解酵素をコードする少なくとも1種類の異種のヌクレオチド配列;および/または
b)ヌクレオチド配列が、配列番号9または配列番号10または配列番号9または配列番号10に対する配列同一性が少なくとも70%であるヌクレオチド配列として示されるヌクレオチド配列を含む、脂肪分解酵素をコードする少なくとも1種類の異種のヌクレオチド配列;および/または
c)ヌクレオチド配列が、ストリンジェントな条件下で、配列番号9または配列番号10または配列番号9または配列番号10に対する配列同一性が少なくとも70%であるヌクレオチド配列またはこれらの相補体とハイブリダイズするヌクレオチド配列を含む、脂肪分解酵素をコードする少なくとも1種類の異種のヌクレオチド配列;および/または
d)ヌクレオチド配列が、遺伝暗号の縮重以外は配列番号9または配列番号10として示されるものとヌクレオチド配列と同一である、脂肪分解酵素をコードする少なくとも1種類の異種のヌクレオチド配列;
とトランスフェクトまたはトランスフォームするステップと、
(ii)前記脂肪分解酵素をコードする前記異種のヌクレオチド配列の発現を可能にする条件下で細胞を培養するステップと、を含む、脂肪分解酵素を産生する方法が得られる。
(i)トリコデルマ・リーセイ(Trichoderma reesei)細胞を、
a)配列番号7または配列番号8として示されるアミノ酸配列または配列番号7または8に対する配列同一性が少なくとも70%であるアミノ酸配列を含む、脂肪分解酵素をコードする少なくとも1種類の異種のヌクレオチド配列;および/または
b)ヌクレオチド配列が、配列番号9または配列番号10または配列番号9または配列番号10に対する配列同一性が少なくとも70%であるヌクレオチド配列として示されるヌクレオチド配列を含む、脂肪分解酵素をコードする少なくとも1種類の異種のヌクレオチド配列;および/または
c)ヌクレオチド配列が、ストリンジェントな条件下で、配列番号9または配列番号10または配列番号9または配列番号10に対する配列同一性が少なくとも70%であるヌクレオチド配列またはこれらの相補体とハイブリダイズするヌクレオチド配列を含む、脂肪分解酵素をコードする少なくとも1種類の異種のヌクレオチド配列;および/または
d)ヌクレオチド配列が、遺伝暗号の縮重以外は配列番号9または配列番号10として示されるものとヌクレオチド配列と同一である、脂肪分解酵素をコードする少なくとも1種類の異種のヌクレオチド配列;
とトランスフェクトまたはトランスフォームするステップと、
(ii)細胞でステップ(i)を繰り返し、この細胞を、(i)(a)、(i)(b)または(i)(c)に定義されたような少なくとも1種類の別の異種のヌクレオチド配列(配列番号7または配列番号8として示されるアミノ酸配列あるいは、配列番号7または8に対する配列同一性が少なくとも40%であるアミノ酸配列を含む脂肪分解酵素をコードする異種のヌクレオチド配列など)と逐次的にトランスフェクトまたはトランスフォームするステップと、
(iii)前記脂肪分解酵素をコードする前記異種のヌクレオチド配列の発現を可能にする条件下で細胞を培養するステップと、を含む、脂肪分解酵素を産生する方法が得られる。
(i)脂肪分解酵素をコードする少なくとも1種類の異種のヌクレオチド配列を含む、トランスフォームまたはトランスフェクトされたトリコデルマ・リーセイ(Trichoderma reesei)細胞を提供するステップと、
(ii)前記脂肪分解酵素をコードする前記異種のヌクレオチド配列の発現を可能にする条件下で、pH4〜pH5.5で細胞を培養するステップと、
(iii)pH5.5〜pH6.5の培地にて、酵素を単離、精製または濃縮するステップと、を含む、脂肪分解酵素を産生する方法。
a)配列番号7または配列番号8として示されるアミノ酸配列を含むまたは配列番号7または8に対する配列同一性が少なくとも70%であるアミノ酸配列を含む;および/または
b)配列番号9または配列番号10として示される配列を含むか、配列番号9または配列番号10に対する配列同一性が少なくとも70%であるヌクレオチド配列を含むヌクレオチドによってコードされる;および/または
c)ストリンジェントな条件下で、配列番号9または配列番号10とハイブリダイズするヌクレオチド配列を含むか、配列番号9または配列番号10に対する配列同一性が少なくとも70%であるヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列またはこれらの相補体によってコードされる;および/または
d)ヌクレオチド配列が、遺伝暗号の縮重以外は配列番号9または配列番号10として示されるものとヌクレオチド配列と同一である、脂肪分解酵素をコードする少なくとも1種類の異種のヌクレオチド配列である。
a)配列番号7または8に対する配列同一性が少なくとも70%である、脂肪分解酵素タンパク質をコードする少なくとも1種類の異種のヌクレオチド配列;および/または
b)ヌクレオチド配列が、配列番号9または配列番号10または配列番号9または配列番号10に対する配列同一性が少なくとも70%であるヌクレオチド配列として示されるヌクレオチド配列を含む、脂肪分解酵素をコードする少なくとも1種類の異種のヌクレオチド配列;および/または
c)ヌクレオチド配列が、ストリンジェントな条件下で、配列番号9または配列番号10とハイブリダイズされるヌクレオチド配列あるいは、配列番号9または配列番号10に対する配列同一性が少なくとも70%であるヌクレオチド配列あるいは、これらの相補体を含む脂肪分解酵素をコードする少なくとも1種類の異種のヌクレオチド配列;および/または
d)ヌクレオチド配列が、遺伝暗号の縮重以外は配列番号9または配列番号10として示されるものとヌクレオチド配列と同一である、脂肪分解酵素をコードする少なくとも1種類の異種のヌクレオチド配列を含む、トランスフォームまたはトランスフェクトされたトリコデルマ・リーセイ(Trichoderma reesei)細胞であって、
前記トリコデルマ・リーセイ(Trichoderma reesei)細胞が、抑制される非脂肪分解酵素をコードする少なくとも2つの遺伝子を有する。
reesei)以外の宿主生物)における脂肪分解酵素の生成と比較して、脂肪分解酵素の発現の増大/増加および/または収率の改善が得られる。特に、アスペルギルス・ツビンゲンシス(Aspergillus tubingensis)細胞(たとえば、本明細書に援用する国際公開第98/45453号パンフレットに教示されているようなもの)における脂肪分解酵素の発現と比較して、同じ脂肪分解酵素(すなわちトリコデルマ・リーセイ(Trichoderma reesei)細胞で産生)の発現の増加および/または収率の改善が得られる。
「脂肪分解酵素」という用語は、本明細書で使用する場合、トリアシルグリセロール加水分解活性(E.C. 3.1.1.3として分類)を有する酵素を意味する。
一態様では、好ましくは、本発明で使用する脂肪分解酵素が、単離された形態である。「単離された」という表現は、脂肪分解酵素が天然で自然に関連し、天然に見られるものとしての少なくとも1種類の他の成分を、脂肪分解酵素が少なくとも実質的に含まないことを意味する。「単離された」という表現は、脂肪分解酵素が産生される培養液中の少なくとも1種類の他の成分を、脂肪分解酵素が少なくとも実質的に含まないことを意味することもある。本発明の脂肪分解酵素は、そうでなければこの物質が関連しているまたは、それを用いて酵素が産生される1種類以上の汚染物質を実質的に含まない形態で提供できるものである。
一態様では、好ましくは、本発明で使用する脂肪分解酵素が、精製された形態である。「精製された」という表現は、特定の成分が高いレベルで存在することを意味する。この成分は、望ましくは組成物中に存在する主な成分である。好ましくは、これは少なくとも約60%または少なくとも約65%または少なくとも約70%または少なくとも約75%または少なくとも約80%のレベルで存在し、前記レベルは、考慮対象となる全組成物に対して乾燥重量/乾燥重量ベースで判断される。いくつかの実施形態では、量が少なくとも約85%であり、前記レベルは、考慮対象となる全組成物に対して乾燥重量/乾燥重量ベースで判断される。
一態様では、好ましくは、本発明で使用する脂肪分解酵素を濃縮物として用いる。濃縮物は、酵素が排泄される培地の濃縮された形態であってもよい。好ましくは、濃縮物は、酵素が分泌される培地の濃縮された形態で、細胞が除去されているものであってもよい。
1. pH5.5でのリパーゼアッセイ
本明細書で使用する場合、1LIPU(リパーゼ単位)とは、本明細書で後述する条件下で、1分間に1μmolのH+を放出する酵素の量として定義される。
1LPLU(低pHリパーゼ単位)は、本明細書で後述する条件下で、1分間で1マイクロ当量の遊離脂肪酸を産生する酵素の量として定義される。
ton X−100、0.3%のNaCl、120mMのグリシン−HCl、pH3.5。すべての成分を混合した後、1時間攪拌して、基質を調製した。
本明細書で使用する場合、1FTU(フィターゼ単位)とは、本明細書で定義した反応条件下で、1分間に1μmolの無機オルトリン酸塩を基質から放出するのに必要な酵素の量として定義される
フィターゼをフィチン酸ナトリウムと一緒にインキュベートすると、無機リン酸塩が放出される。無機リン酸塩は、モリブデン酸塩−バナジン酸塩試薬との間で色のついた錯体を形成し、これによって黄色に変わる。錯体の黄色の色を分光光度計にて415nmで測定する。
1.1 酢酸緩衝液(pH5.5) 0.25M 1000mL
溶解:
30.02gのナトリウム酢酸塩−三水和物(18,10gナトリウム酢酸塩−無水物)、
0.147gの塩化カルシウム−二水和物、
約900mLの水中、1.76gの100%酢酸(=1.677mL、密度=1.0498g/mL)
4Mの酢酸(100.0mLの脱イオン水中、22.9mLの濃酢酸)を用いてpHを5.5に調整し、溶液を1000mL容のメスフラスコに移す。
標準曲線で用いる溶液をストックする
加熱用の戸棚中、60℃で一晩、KH2PO4を乾燥させる。
溶解:
200mLの酢酸緩衝液中、2.10g(±0.05g)のフィチン酸ナトリウム、十水和物(フィチン酸)。
(バナジウム酸アンモニウム溶液の場合)
75mLの硝酸65%を連続攪拌下で100mLの水に加える。
(ヘプタモリブデン酸アンモニウム溶液の場合)
40mLの32%アンモニウム溶液を水で50mLに調整する。
(着色/停止試薬の場合)
溶解:
225mLの水中、25gのヘプタモリブデン酸アンモニウム−五水和物。この溶液では、アンモニウム溶液を加える前に、ヘプタモリブデン酸アンモニウムを溶解させるのに加熱が必要である。
(着色/停止試薬の場合)
0.5875gのバナジウム酸アンモニウムを、60℃まで事前に加熱した100mLの水に溶解させる)。5mLの24.5%硝酸溶液を連続攪拌下でゆっくりと加える。
使用する直前に調製すべきである。
KH2PO4緩衝液(1.2)を用いる標準曲線を作製する。標準を酢酸緩衝液で希釈する。
以下の式を使用する:Cストック溶液*Vストック溶液=C希釈*V希釈
Vストック溶液=(C希釈*V希釈)/Cストック溶液
式中、C=濃度、V=容量である。
1A:液体生成物(約5500FTU/g):1gの試料を100mL容のメスフラスコで秤量し、重量を書き取り、メスフラスコを酢酸緩衝液で一杯にする。
すべての試料を同時に分析する−対照、ブランク、試料。アッセイの試行は連続流にしておかなければならない。
1. 1.00mLの希釈試料または対照をプラスチック管で2倍または3倍に描く。ブランクについては、1.00mLの酢酸緩衝液を描く。
2. 37℃に平衡化するまでフィチン酸塩溶液(基質)を37.0℃で最低5分間水浴中におく
3. 37.0℃で厳密に5分間、水浴中で試料をインキュベートする。
4. 厳密に5秒間の時間間隔で2.00mLの平衡化フィチン酸塩溶液を試料に加える。
5. 水浴中にて37.0℃で厳密に60分間インキュベートする。
6. 再び時間間隔5秒間で2.00mLの着色/停止試薬を加え、蓋をして、上下を5回逆さまにする。
7. 3500rpmで10分間遠心処理する。
8. 415nmで測定する。脱塩水を用いて分光光度計をゼロに調節する。
ブランクのODは≦0.13でなければならない。そうでない場合、分析を繰り返す必要がある。
データをExcelシートに記入する
標準曲線および傾向線をExcelで作成する。
a)y軸=OD415
b)x軸=mMリン酸塩
c)勾配(α)は0.36〜0.38で書かなければならない
d)切片(β)は|0.02|を超えてはならない
e)相関係数(R2)は≧0.99とする
フィターゼ活性を以下のようにして計算する。
ODブランク=酵素ブランクの平均吸光度
DF=試料の希釈係数
インキュベーション時間=60分間
W試料=試料または対照の重量
α=標準曲線の勾配
β=標準曲線の切片
これは、以下の点を変更した以外、pH5.5でのフィターゼアッセイと同じである。1.1アッセイ緩衝液、グリシン−HCL緩衝液pH3.5(1.1酢酸緩衝液pH5.5の代わりに使用):
0.2Mのグリシン250mlを0.2MのHCl130mLおよび約500mLの脱イオン水と混合する。0.5MのHClまたは0.5MのNaOHを用いてpHを3.5に調整する。この溶液を1000mL容のメスフラスコに移し、溶液を脱イオン水を加えて1000mLまで調整する。
2.10g(±0.05g)のフィチン酸ナトリウム、十水和物(フィチン酸)を200mLのアッセイ緩衝液(グリシンHCl緩衝液pH3.5)に溶解させる。
フィチン酸のもうひとつのロットに変更するときに、基質補正因子が必要な場合もある。
食品または動物用飼料用の酵素添加剤として効率的にするために、フィターゼは多数の異なる特性を兼ね備えたものでなければならない。フィチン酸を動物の胃の酸性環境で分解できるようにするには、低いpH、好ましくは広い範囲のpH値で活性でなければならない。また、高い比活性を持つものでなければならず、好ましくは、飼料ペレットなどの飼料原料の調製で一般に用いられる高温にタンパク質が耐えられるだけの高い熱安定性を持つものでなければならない。
Natuphos(BASF)およびRonozyme P(Novozymes/DSM)と比較した、ブティアウクセラ(Buttiauxella)由来のフィターゼ、変異体BP−17、BP−110、BP−111、BP−112、Phyzyme XPのpH2でのペプシン耐性。
緩衝液:
ペプシンインキュベーション緩衝液:0.1Mのグリシン−HCl、pH2.0、3mg/mlのBSA、2.9mgの塩化ナトリウム無水/mL、0.73mgの塩化カルシウム/mL。ペプシンを含む溶液では、500、1000、3000、6000または10000U/mlのペプシン(Sigma P−7000、10000U/mgが27mg/mlに相当)をそれぞれ含有するように、インキュベーション緩衝液を調製する。1ペプシン単位は、基質としてヘモグロビン(Food Chemical Codex)を用いてTCA−可溶性産物で測定した場合に、pH2.0、37℃で1分間のΔOD280が0.001になる酵素の量として定義される。
BSAを含むフィターゼアッセイ緩衝液:酢酸緩衝液250mM、pH5.5に3mg/mlのBSAを含む。
すべての酵素のセットアップを同一にした:酵素を含む6つの試料を調製した(二重):緩衝液(pH2)中のペプシンの量を増やした4つの試料、ペプシンを含まないがインキュベーション緩衝液(pH2)中の1つの試料、BSAを含むアッセイ緩衝液(pH5.5)中に酵素も含む1つの陽性対照試料。
ペプシン耐性
ブティアウクセラ(Buttiauxella)変異体はいずれも、ペプシンに対してpH2で優れた安定性を示した。対照的に、Natuphosの活性は、ペプシン濃度500U/mlですでに劇的に低下し、さらに活性が低下すると、ペプシン濃度3000U/mlで約45%回復するプラトーが見られた。Ronozyme Pの回復はさらに悪く、ペプシン濃度わずか500U/mgで回復の低下が20%未満であった(図9A)。
本発明によるブティアウクセラ(Buttiauxella)フィターゼ変異体は、同じ条件下で、ペプシンは存在させずにインキュベートした試料の活性と比較して、pH2、37℃、10000U/mlのペプシンで2時間のインキュベーション後に75%を超える回復を示す。
酵素活性の回復の評価
材料および方法
ここで、本発明者らは、コムギ配合酵素のペレット化後の酵素活性の回復を評価する。酵素を顆粒状のコムギに噴霧し、乾燥させた上で飼料と混合し、ペレット化のプロセスを実施する。
結果を図11〜13に示す。
コムギに配合した本発明のブティアウクセラ(Buttiauxella)フィターゼ変異体は、90℃でのペレット化後に70%を超える回復を示す。
フィターゼによるフィチン酸分解についての試験の結果
溶液
インキュベーションには3種類の緩衝液を用いた。これらの緩衝液は以下のとおりとした。
250mMの酢酸塩 pH5.5;
250mMの酢酸塩M pH3.5;
250mMのHClグリシン pH2.5。
インキュベーション容量:1.5または3.0mlのフィチン酸塩+0.25mlの酵素+3.25または1.75mlの緩衝液、37℃で、全容量5.0ml。
フィチン酸塩およびイノシトール異性体の高速イオンクロマトグラフィ(HPIC)による分析。この方法は、SkoglundおよびCarlssonら(J. Agric.
Food Chem., 45(1997), 451〜436 5. J. Agric. Food Chem., 46 (1998), 1877〜1882;およびJ. Agric. Food Chem., 49(2001), 11695〜1701に記載されている。使用したカラムは、4×50mmのプレカラムを有する、Dionexから入手した強アニオン交換体(4×250mm)であった。溶媒AはMilliQ水、溶媒Bは1NのHClを水に入れて調製したものである。勾配は、30分間でBを2.5%から49%に続いて、流量0.8ml/分で50%でのアイソクラティック3分間、2.5%でのアイソクラティック2分間である。それぞれの試行を35分間にする。フィターゼは理論的に可能なIP異性体をそれほど多くは生成しないため、試行を合計25分間に短縮することもできる。溶離液を、流量0.4ml/分で、0.1%のFe(NO3)3・9HO2と2%の過塩素酸(HClO4)とを含有する水溶液を用いて、インラインで誘導体化した。フィチン酸塩およびIP異性体を、290nmでポジティブピークとして検出した。これは、フィチン酸塩−Fe3+−ClO4 -錯体が形成されることによるものである。60%過塩素酸溶液は、Sigmaから購入した。
結果を図14〜17に示す。
本発明のすべての酵素が好ましい特徴を示した。
フィチン酸の判定:
フィチン酸含有量:5%スラリー(乾燥試料の場合)のpHをpH10に調整することで、試料からフィチン酸を抽出した後、イオン交換カラムを用いるHPLC法で測定した。NaOH勾配系を用いて、フィチン酸をカラムから溶出させた。液体中のフィチン酸含有量を、フィチン酸の標準と比較して計算した。
異なる熱安定性BP変異体フィターゼ、すなわちBP110、BP111、BP112によって、従来の乾燥粉末液化プロセス(ソース:Illinois River Energy、Monroe、Illinois)から得た全粒トウモロコシ(corn)液化物のフィチン酸の加水分解に対して温度がおよぼす影響を調べた。32% ds(「乾燥固体」)全粒トウモロコシ(corn)ds.トウモロコシ(corn)液化物のpHをpH5.0に調整し、85℃から89℃に保たれた水浴に入れた。温度の平衡後、BP−フィターゼを4.0FTU/gds.トウモロコシ(corn)となるように添加した。次に、20分の時点で試料を採取し、10mMの水酸化ナトリウム(1〜10倍に希釈)を添加して酵素反応を停止させた。続いて希釈試料を濾過し、HPLCを用いてそのフィチン酸塩誘導体特性(IP1〜IP6)を分析した。図18および図19のHPLCクロマトグラムに、3種類の変異体から得たフィターゼはいずれも、85℃より高い温度でフィチン酸の加水分解を触媒することが明らかに示された。全粒トウモロコシ(corn)液化物のフィチン酸含有量(フィチン酸(IP6)および中間体のIP1〜IP5)は1.7%ds.トウモロコシ(corn)であり、図18のデータは、95%を超えるフィチン酸が、現状の液化条件下で熱安定性フィターゼによって加水分解されたことを示した。有意に、89℃でインキュベートした試料のHPLC特性から、BP−111フィターゼ変異体が他の2種類の変異体由来のフィターゼよりも高い熱安定性を呈することが示された(図19のBP−110およびBP−112を参照のこと)。
トリコデルマ・リーセイ(Trichoderma reesei)におけるアスペルギルス・ツビンゲンシス(Aspergillus tubingensis)リパーゼ3の発現
1.トランスフォーメーションに使用する発現コンストラクト&株
Invitrogenから入手したpDONR(商標)221プラスミドDNA(カタログ番号12536−017)をドナーベクターとして使用した。アスペルギルス・ツビンゲンシス(Aspergillus tubingensis)リパーゼ3ゲノムDNA含有pDONR221::lip 3(図20)をトリコデルマ・リーセイ(T. reesei)ゲートウェイ目的ベクターpTrex3G(国際公開第05/001036号パンフレットに詳細に記載されている)に組み変え、最終的な発現コンストラクトATlipase3Trex(図21)を得た。
以下、本発明による遺伝子の発現に使用できるベクターpTrex3gの構築につて説明する。
1.トリコデルマ・リーセイ(T reesei)cbh1遺伝子のプロモーター領域由来のDNAの2.2bpのセグメント
2.クロラムフェニコール耐性遺伝子(CmR)およびccdB遺伝子をフランキングするいずれかの末端にattRlおよびattR2組換え部位を含むInvitrogenから取得した1.7kbのGatewayリーディングフレームAカセット
3.トリコデルマ・リーセイ(T. reesei)cbh1遺伝子のターミネーター領域由来のDNAの336bpのセグメント
4.天然のプロモーターおよびターミネーター領域とともにアスペルギルス・ニデュランス(Aspergillus nidulans)amdS遺伝子を含有するDNAの2.7kbのフラグメント。
アスペルギルス・ツビンゲンシス(A. tubingensis)リパーゼ3遺伝子を含有する発現コンストラクトATlipase3Trexを、PDS−1000ヘリウムシステム(BioRadカタログ番号165−02257)を用いる粒子ボンバードメントによる遺伝子銃でのトランスフォーメーションまたは電気穿孔を使用して、トリコデルマ・リーセイ(T. reesei)株にトランスフォームした。真菌DNAのみまたは全発現プラスミドを含むPCR産物を、遺伝子銃でのトランスフォーメーションおよび電気穿孔による形質転換体の生成に使用した。
トランスフォーム対象となるトリコデルマ・リーセイ(T. reesei)宿主株を、PDAプレート上で5日間、完全に胞子形成されるまで成長させた。2つのプレートからの胞子を1.2Mのソルビトールで収集し、ミラクロスで濾過して寒天を除去した。胞子を50mlのファルコンチューブに移し、50mlの水を用いて5〜6回繰り返し遠心処理して洗浄した。1.2Mのソルビトール溶液を用いて、胞子を少量(2×ペレット容量未満)に再懸濁させた。次に、この胞子懸濁液を氷上に保持した。90ulの胞子懸濁液のアリコートを電気穿孔キュベット(E−shot、Invitrogenの0.1cmの標準電気穿孔キュベット)に取った。10〜20ulのDNAコンストラクト(プラスミド図4またはPCR産物)を胞子懸濁液に加え、電気穿孔を16kV/cm、25μF、50Ωに設定した。電気穿孔後、胞子懸濁液を氷上に残し、1.0Mのソルビトール5部およびYEPD1部に再懸濁させ、250rpmで振盪しながら28Cで一晩インキュベーションして発芽させた。翌日、胞子発芽体をアセトアミド含有寒天板に蒔いた。形質転換体を採取し、個々にアセトアミド寒天板に移した。
トリコデルマ・リーセイ(T. reesei)の4遺伝子が欠失した株の胞子の懸濁液を調製した。200ulの胞子の懸濁液を最少培地(MM)アセトアミドプレートの中心に広げた。(MMアセトアミドプレートは、以下の組成であった。0.6g/lアセトアミド;1.68g/l CsCl;20g/lグルコース;20g/l KH2PO4、0.6g/l CaCl2 2H20;1ml/l 1000×微量元素溶液;20g/l Noble寒天、pH5.5。1000×微量元素溶液は、5.0g/l FeSO4 7H2O;1.6g/l MnSO4;1.4g/l ZnSO4 7H2Oおよび1.0g/l CoCl2 6H2Oを含有していた。胞子懸濁液を滅菌フードにてMMアセトアミド培地の表面で1時間乾燥させた。トランスフォーメーションについては、製造業者の指示に従った。60mgのタングステン粒子を微量遠心管に入れた。1mlのエタノールを加え、15秒間静置した。エタノールを除去し、粒子を滅菌dH2Oで3度洗浄した上で、250ulの50%(v/v)滅菌グリセロールを加えた。25ulのタングステン粒子懸濁液を微量遠心管に入れた。連続的に攪拌しながら、プラスミドDNAを5ul(100〜200ng/ul)と、2.5MのCaCl2を25ulと、0.1Mのスペルミジンを10ulとを加えた。この粒子を3秒間遠心処理した。上清を除去し、粒子を200ulの100%エタノールで洗浄し、3秒間遠心処理した。上清を除去した。24ulの100%エタノールを加えてピペットで混合し、粒子のアリコート8ulを取り出して、デシケーターに保持したマイクロキャリアディスクの中心に乗せた。このタングステン/DNA溶液が乾燥したら、マイクロキャリアディスクを、胞子を含むMMアセトアミドのプレートと一緒にボンバードメントチャンバに設置した。ボンバードメントのプロセスについては、製造業者の指示どおり実施した。タングステンDNA粒子でプレート上の胞子にDNAを導入した後、プレートを28℃でインキュベートした。トランスフォームされたコロニーをMMアセトアミド培地の新鮮なプレートに移し、28℃でインキュベートした。
MMアセトアミドプレートでの5日間の成長後、電気穿孔または遺伝子銃によるトランスフォーメーションで得られ、安定した形態を示している形質転換体を、96ウェルのマイクロタイタープレートでグルコース/ソホロースを含む200ulの限定培地に接種した。グルコース/ソホロース(1リットルあたり)を含む限定培地は、NH42SO4を5gと、PIPPS緩衝液を33gと、Casアミノ酸を9gと、KH2PO4を4.5gと、CaCl2(無水)を1gと、MgSO4・7H2Oを1gとで構成され、milli−Q H2Oを用いて50%NaOHでpHを5.50に調整して966.5mLにしたものであった。滅菌後、Mazu 5mL、グルコース/ソホロース60%を26mLと400×トリコデルマ・リーセイ(T. reesei)微量金属を2.5mLとを加えた。マイクロタイタープレートを酸素成長チャンバにて28℃で5日間インキュベートした。
本発明に用いるのに適した発現宿主細胞は、セロビオヒドロラーゼI(CBHI、Cel7a)、セロビオヒドロラーゼII(CBHII、Cel6a)、エンドグルカナーゼI(EGI、Cel7b)、エンドグルカナーゼII(EGII、Cel5a)をコードする遺伝子が、分子遺伝子技術での欠失または破壊によって失活したトリコデルマ・リーセイ(T. reesei)の株であってもよい。この株(4遺伝子欠失株)は、他のトリコデルマ・リーセイ(T.reesei)分泌タンパク質をコードする遺伝子の過発現の宿主として有用である。
プラスミドDNAでのトランスフォーメーション用の株RL−P37を調製するために、pyr4遺伝子にnull変異を有する誘導体を単離する必要があった。
CBHIタンパク質をコードするcbhl遺伝子を、株RL−P37のゲノムDNAから、この遺伝子用に公開配列に基づいて設計されたオリゴヌクレオチドプローブとのハイブリダイゼーションによってクローニングした(Shoemaker, S., Schweickart, V., Ladner, M., Gelfand, D., Kwok, S., Myambo, K. and Innis, M.(1983) Biotechnology 1:691〜696)。cbhl遺伝子は、6.5kbPstlフラグメントにあり、このベクターのカナマイシン耐性遺伝子を置き換えてpUC4KのPstl部位に挿入された(Pharmacia Inc., Piscataway, NJ, USA)。得られたプラスミドであるpUC4K::cbh1をHindlllで切断し、大きいほうのフラグメントを単離して再ライゲートし、pUC4K::cbh1ΔH/Hを得た。この手法では、cbhlコード配列全体と約1.2kbの5’フランキング配列および1.5kbの3’フランキング配列を除去した。元のPstlフラグメントの両端から約1kbのフランキングDNAが残った。トリコデルマ・リーセイ(T. reesei)pyr4遺伝子を、pUCl8におけるゲノムDNAの6.5kbのHindlllフラグメントとしてクローニングし、pTpyr2を形成した(Smith, J.L., Bayliss, F.T.およびWard, M.(1991) Curr. Genet. 19:27〜33)。プラスミドpUC4K::cbh1ΔH/HをHindlllで切断し、末端を仔ウシ腸管粘膜由来アルカリホスファターゼで脱リン酸化した。このDNAを、pyr4遺伝子を含有する6.5kbのHindlllフラグメントでライゲートして、pΔCBHlpyr4を得た。
Smithら、(1991)が概説した方法で、株GC69の菌糸から単離されたプロトプラストをEcoRl消化プラスミドpΔCBHlpyr4でトランスフォームした。安定した形質転換体を得て、cbh1遺伝子が欠失したものを後述するようにして同定した。
上記の3で概説した方法で、株P37PΔCBHIPyr-26のプロトプラストを生成し、EcoRl消化pPΔCBHIIでトランスフォームした。安定した形質転換体を振盪フラスコで培養し、培養上清中のタンパク質を等電点電気泳動によって調べた。どのCBHll(CBHIも)タンパク質をも産生しなかったひとつの形質転換体(P37PΔΔCBH67で表記)を同定した。
EGll(以前はEGlllとも呼ばれていた)をコードするegl2遺伝子が、トリコデルマ・リーセイ(T. reesei)からクローニングされ、そのDNA配列が公開されている(Saloheimo et al., 1988, Gene 63:ll〜21)。本発明者らは、pUC219のPstl部位とXhol部位との間に挿入されたゲノムDNAの約4kbのPstl−Xholフラグメントとして、株RL−P37から遺伝子を得た。pTpyr2から得たゲノムDNAの2.7kbのSalIフラグメントに存在するトリコデルマ・リーセイ(T. reesei) pyr4遺伝子を、EGllコード配列内のSall部位に挿入し、プラスミドpEGII::P−1を作製した。これによって、EGllコード配列が破壊されたが、配列の欠失は生じなかった。プラスミドpEGII::P−1をHindlllおよびBamHlで消化して、一方の末端の5bpと他方の末端の16bp(いずれもpUC219のマルチプルクローニング部位由来である)以外はトリコデルマ・リーセイ(T. reesei)だけから誘導されるDNAの線形フラグメントを得ることが可能である。
株P37PΔΔCBH67Pyr-1を、事前にHindlllおよびBamHlで消化しておいたpEGII::P−1でトランスフォームし、安定した形質転換体を選択した。この形質転換体から全DNAを単離し、サザン解析を用いて株を同定した。この株では、pyr4およびegl2遺伝子を含むプラスミドDNAのフラグメントが、egl2ローカスで統合され、結果としてEGllコード配列を破壊していた。プローブとして、egl2遺伝子を含むトリコデルマ・リーセイ(T. reesei)DNAの約4kbのPstlフラグメントを用いて、サザン解析を実施した。株P37PΔΔ67P-1から単離したDNAをサザン解析用にPstlで消化したら、オートラジオグラフ上に単一の4kbのバンドとしてegl2ローカスが可視化された。しかしながら、egl2遺伝子が破壊された形質転換体の場合、このバンドが失われ、予想どおり2つの新たなバンドに置き換わった。DNAをBglllまたはEcoRVで消化すると、egl2遺伝子に対応するバンドのサイズが、トランスフォームされていないP37PΔΔ67P-1株と、egl2が破壊された形質転換体との間で約2.7kb(挿入されたpyr4フラグメントのサイズ)だけ大きくなった。この後者の形質転換体は、この時点でcbhl、cbh2、egl2遺伝子が欠失しており、これを株B31と表記した。さらにサザン解析を実施したところ、pEGII::P−1のpUC DNAフラグメントがこの株に取り入れられていないことが確認された。
cbhl、cbh2、egl2遺伝子が欠失した形質転換体(B31)の胞子を、FOA含有培地に広げた。次に、上記のセクション1で説明した方法を用いて、この形質転換体のpyr4欠損誘導体を得た。このpyr4欠損株をB31 P6と表記した。サザン解析を実施したところ、株B31P6を選択したときに自然発生的な欠失が生じたことが明らかになった。この欠失は、株B31のegl2ローカスで統合されていた大部分のpyr4遺伝子を除去したが、egl2ローカスのフランキングDNAに伸長しなかった。
トリコデルマ・リーセイ(T. reesei)のegl1遺伝子がクローニングされ、その遺伝子のDNA配列が公開されている(Penttila et al., 1986, Gene 45;253〜263; van Arsdell et al., 1987, Biotechnology 5:60〜64)。本発明者らは、pUC100(オリゴヌクレオチドがマルチプルクローニング部位に挿入されて、Bglll、Clal、Xholの制限部位を付加しているpUC18の誘導体)のHindlll部位で挿入されたゲノムDNAの4.2kbのHindlllフラグメントとして、トリコデルマ・リーセイ(T. reesei)株RL−P37からこの遺伝子を得て、pUCEGIを得た。EGIコード配列の中央に近い位置からコード配列の3’末端を越える位置まで伸長している約1kbのEcoRVフラグメントを除去し、pTpyr2から得たpyr4遺伝子を含むトリコデルマ・リーセイ(T. reesei)DNAの3.5kbのScalフラグメントで置き換えた。得られるプラスミドをpPΔEGIと呼んだ。
egl1フランキング領域に対してpyr4遺伝子の向きだけが異なる2つの形態のpPΔEGlを構築した。株B31P6を、両形態のプラスミドをHindlllで消化した後にその混合物でトランスフォームした。安定した形質転換体から全DNAを抽出し、Hindlllで消化し、サザン解析を実施した。使用したプローブは放射線標識したpUCEGIであった。欠失されていないegl1遺伝子を表す株B31P6からDNAの4.2kbのフラグメントへのハイブリダイゼーションを観察した。形質転換体(株1A52)を同定したところ、そこにはこの4.2kbが存在せず、約6.8kbのフラグメントに置き換わっていた。これは、EGIコード配列の一部の欠失と、この位置でのpyr4の挿入につながるegl1ローカスで予測されたように、pPΔEGIからの大きめのHindlllフラグメントを正確に統合した場合に想定されるパターンである。pUCプラスミドをサザン解析のプローブとして使用して、pPΔEGIのpUC DNAフラグメントが株1A52に取り込まれていないことを確認した。
外科的にカニューレ処置した仔ブタにおける、組み合わせでフィターゼ、アミラーゼ、キシラナーゼの上にリパーゼを補ったトウモロコシ(corn)/大豆粕ベースの食餌の回腸エネルギおよびタンパク質消化率、全消化管エネルギ消化率、全消化管CaおよびP貯留を評価した。処置の構成は以下のとおりとした。
・陽性対照。栄養塩が適切な食餌。
・陰性対照。陽性対照と比べて、飼料のDE/kgを150kcal、カルシウム0.15%、利用可能なPを0.12%に抑えた。
・フィターゼ(500FTU/kg)。
・フィターゼ(500FTU/kg)、アミラーゼ(1800u/kg)およびキシラナーゼ(2000u/kg)。
・フィターゼ(500FTU/kg)、アミラーゼ(1800u/kg)、キシラナーゼ(2000u/kg)およびリパーゼ(3000LIPU/kg)。
求量(すなわち106kcal ME/kg BW0.75)を維持できると想定して、1日3回毎日与えた。ブタのBWを記録する際、各期間の最初に飼料の許容量を調整した。
フィターゼを添加しても、陰性対照と比較して回腸エネルギ消化率(図23A)は増えなかったが、フィターゼ+キシラナーゼ+アミラーゼおよびフィターゼ+キシラナーゼ+アミラーゼ+リパーゼを添加すると、それぞれ2.95%および9.28%増えた。これらの変化は、フィターゼ+キシラナーゼ+アミラーゼバックグラウンドに対する純粋にリパーゼの添加だけによる6.3%の効果を示している。同様に、粗タンパク質の回腸消化率は、フィターゼを補充しても陰性対照の食餌と比較して増えなかった(図23B)が、フィターゼ+キシラナーゼ+アミラーゼを補充すると、陰性対照(+5.6%)およびフィターゼを補充した場合(+4.0%)と比較して粗タンパク質消化率が有意に増加した。フィターゼ+キシラナーゼ+アミラーゼの上にリパーゼを追加で補充すると、陰性対照(+10.7%)、フィターゼ補充(+9.1%)、フィターゼ+キシラナーゼ+アミラーゼ(+4.9%)の場合と比較して粗タンパク質消化率がさらに高まった。
リパーゼによるトウモロコシ(corn)−ダイズ食餌における遊離脂肪酸生成の研究で得られた結果
pH約2.8で、異なる組み合わせのリパーゼおよびフィターゼを用いて、飼料試料を40℃でインキュベートする。
適切な試薬およびその濃度は以下のとおりとした。フィターゼアッセイ緩衝液:0.25Mの酢酸ナトリウム、1mMのCaCl2、0.01%のTween 20、pH5.5。ペプシン溶液:2000U/mlのペプシン(Sigma P7000)を含有する0.75MのHCl。飼料試料には、60.01%のトウモロコシ(corn)、31.52%の大豆粕、48、4%のダイズ油、0.4%の塩、0.2%のDLメチオニン、1.16%の石灰石、1.46%のリン酸二カルシウム、1.25%のVIT/MIN混合物を含む基本的なトウモロコシ(corn)−ダイズ食餌を使用した。
本明細書に記載したようなリパーゼ3。本明細書に記載したようなPhyzyme。TfuIIIリパーゼは、Bacillus subtilisで発現されるThermobifida fusca (Tfu_0883;NCBI受託番号YP_288944.1)由来の細菌クチナーゼである。材料および方法で説明したようにして、リパーゼアッセイを用いてTfuIIIを分析した。さらに、同じアッセイを用いて酵素を分析したが、pH条件をpH5.5ではなくpH7.0に変更した。pH7.0で測定したリパーゼ活性を、材料および方法のリパーゼアッセイで説明したものと同じ定義を用いて、LIP7Uと表記する。pH5.5で測定したリパーゼ活性(LIPU)とpH7.0で測定したリパーゼ活性(LIP7U)との比は、1:1.4であった。
以下の酵素の組み合わせをin vitroインキュベーションで評価した。リパーゼ3、リパーゼ3+Ronozyme P、リパーゼ3+Natuphos、リパーゼ3+Phyzyme、TfuIII、TfuIII+Ronozyme P、TfuIII+Natuphos、TfuIII+Phyzyme、リパーゼまたはフィターゼなし。
インキュベーション時に生成された遊離脂肪酸の量を、NEFA−HR(2)キット(WAKO Chemicals GmbH)を用いて測定した。試料を室温に置き、96%エタノール20mlを加えた。試料を手作業で再懸濁させた上で、ロータリーホイールで室温にて1時間混合した。混合後、試料を3500rpmで10分間遠心処理した。上清を96%エタノールで5倍に希釈した上で、試料中の遊離脂肪酸を測定した。110μlのNEFA試薬R1を37℃で5分間平衡化した上で、15μlの希釈試料を加え、反応混合物を37℃で10分間インキュベートした。55μlのNEFA試薬R2を加え、37℃でさらに10分間インキュベーションを継続した。その後、OD520nmを測定した。NEFA標準(WAKO Chemicals GmbH)から作製した標準曲線を用いて、遊離脂肪酸の含有量を計算した。
遊離脂肪酸測定の結果を図29に示す。この図は、トウモロコシ(corn)−ダイズ食餌における遊離脂肪酸生成を示している。産生された遊離脂肪酸(FFA)の量を、リパーゼまたはフィターゼを加えていないブランク値に合わせて補正する。リパーゼなし、かつフィターゼなしのインキュベーションのpHを測定したところpH2.8であったため、本例でのすべてのインキュベーションの代表的なものであると仮定した。これは、インキュベーションが極めて酸性度の高い条件で実施されたことを示している。リパーゼ3単独またはPhyzyme、NatuphosまたはRonozyme Pとの組み合わせで、TfuIIIを単独またはPhyzyme、NatuphosまたはRonozyme Pとの組み合わせで含むすべての試料と比較して、FFAの有意な放出が示される。これは、リパーゼ3がブタの胃またはニワトリの砂嚢の酸性環境での脂肪の加水分解において極めて効果的であろうことを明らかに示すものである。
カルシウムの濃度を上げてのフィチン酸−カルシウム錯体形成の研究で得られた結果ならびに、遊離脂肪酸を加えることによるフィターゼ活性の反転。
フィチン酸は、カルシウムなどの二価のミネラルとの間で、容易にキレート形成可能である。このフィチン酸塩−ミネラル錯体は、不溶性沈殿物として存在することもあれば、可溶性錯体として存在することもあり、フィターゼによる加水分解に対して潜在的に耐性である。遊離脂肪酸は、フィチン酸のフィターゼ耐性形態の形成量の減少ならびに、これに伴う放出されるフィチン酸塩−Pの増加につながるCa−石鹸を形成することで、競合的キレート剤として潜在的に機能することがある。
適切な試薬およびその濃度は以下のとおりとした。アッセイ緩衝液:0.25Mの酢酸ナトリウム、3%Triton X−100(w/v)、pH5.5。フィチン酸塩溶液:アッセイ緩衝液中の9.1mMのフィチン酸ナトリウム塩水和物(Sigma P0109)。CaCl2溶液:アッセイ緩衝液中の0.3MのCaCl2。FFA溶液:96%エタノールに溶解させた40.8mg/mlパルミチン酸−ステアリン酸混合物(Sigma 09586)。エタノール:96%エタノール。
本明細書に記載したようなPhyzyme。Ronozyme P−CTおよびNatuphosは、市販の真菌フィターゼである。本明細書に記載したようなBP17。試料を乾燥生成物として得た。試料1gを最初に0.25Mの酢酸ナトリウム、1mMのCaCl2、0.01%のTween 20、pH5.5に再懸濁させ、マグネチックスターラーを用いて20分間抽出した。抽出混合物を最終的に100mlになるまで0.25Mの酢酸ナトリウム、1mMのCaCl2、0.01%のTween 20、pH5.5で満たし、ガラス繊維フィルタで濾過した。材料および方法で説明したフィターゼアッセイに従って、最終抽出物のフィターゼ活性を測定した。
0.5mlのエタノールを、12ml容の試験管で、1.4mlのアッセイ緩衝液および1mlのフィチン酸塩溶液と混合した。混合物を37℃で5分間水浴中で平衡化した上で、0.1mlのフィターゼ溶液を添加して反応を開始した。ブランク測定のために、フィターゼ溶液の代わりに0.1mlのアッセイ緩衝液を加えた。37℃で1時間のインキュベーション後、2.5MのHClを0.75ml添加して、反応を停止させた。すべてのインキュベーションを二重に実施した。
適切な容量のCaCl2溶液を、12ml容の試験管で、最終アッセイ容量が3mlになるまで0.5mlのエタノール、1mlのフィチン酸塩溶液およびアッセイ緩衝液と混合した。混合物を37℃で5分間水浴中で平衡化した上で、0.1mlのフィターゼ溶液を添加して反応を開始した。ブランク測定のために、フィターゼ溶液の代わりに0.1mlのアッセイ緩衝液を加えた。37℃で1時間のインキュベーション後、2.5MのHClを0.75ml添加して、反応を停止させた。すべてのインキュベーションを二重に実施した。
適切な容量のFFA溶液を、12ml容の試験管で、容量が0.5mlmになるまでエタノールと混合した。最終アッセイ容量が3mlになるまで、0.15mlのカルシウム溶液、1mlのフィチン酸塩溶液およびアッセイ緩衝液を加えた。混合物を37℃で5分間水浴中で平衡化した上で、0.1mlのフィターゼ溶液を添加して反応を開始した。ブランク測定のために、フィターゼ溶液の代わりに0.1mlのアッセイ緩衝液を加えた。37℃で1時間のインキュベーション後、2.5MのHClを0.75ml添加して、反応を停止させた。すべてのインキュベーションを二重に実施した。
Konelab分析装置にて、リン試薬(Thermo Scientific)を用いて、加水分解試料中の無機リン酸塩濃度を測定した。180μlのリン試薬を5μlの試料と混合し、37℃で4分間インキュベートした上で、OD340nmを測定した。sCal Konelab CalibratorおよびNortrol Konelab Control(Thermo Scientific)を用いて、リン酸塩の含有量を計算した。ブランク測定を結果から減算することで、放出された無機リン酸塩としてフィターゼ活性を計算した。すべての活性をCaCl2が存在しない試料に対する相対値として計算した。
図30は、フィチン酸とカルシウムとのフィターゼ耐性錯体の生成ならびに、遊離脂肪酸を加えることによる反転を示す。図30Aは、CaCl2濃度を高めることによるフィターゼ活性に対する影響を示す。図30Bは、遊離脂肪酸を、15mMを含有する反応混合物に加えることによるフィターゼ活性に対する影響を示す。
カルシウムの濃度を上げてのフィチン酸−カルシウム錯体形成の研究で得られた結果ならびに、リパーゼ3によって産生される遊離脂肪酸を加えることによるフィターゼ活性の反転。
実施例11では、15mMのCaCl2を含有するフィターゼ反応混合物に遊離脂肪酸を加えることによるフィターゼ活性に対する影響について説明した。この例では、同様の実験を実施するが、遊離脂肪酸はリパーゼ3によって産生される。トリグリセリドエマルションをリパーゼ3とともにインキュベートし、この混合物の画分を後に30mMのCaCl2を含有するフィターゼ反応混合物に加え、フィターゼ活性に対する影響を観察する。
適切な試薬およびその濃度は以下のとおりとした。リパーゼ試料緩衝液:50mMの酢酸ナトリウム、pH5.0、0.1%のBSA(w/v)、1.2%のNaCl(w/v)。トリグリセリド基質:2%のトリオクタン酸グリセリル(v/v)、0.3%のNaCl(w/v)、13%のTriton X−100(w/v)、120mMの酢酸ナトリウム、pH5.0。フィターゼアッセイ緩衝液: 0.25Mの酢酸ナトリウム、pH5.5。フィチン酸塩溶液:アッセイ緩衝液中9.1mMのフィチン酸ナトリウム塩水和物(Sigma P0109)。CaCl2溶液:アッセイ緩衝液中0.3MのCaCl2。エタノール:96%エタノール。
本明細書に記載したようなリパーゼ3およびPhyzyme。リパーゼ3試料をリパーゼ試料緩衝液に入れ、酵素活性10LIPU/mlまで希釈した。フィターゼ試料を、0.25Mの酢酸ナトリウム、1mMのCaCl2、0.01%のTween 20、pH5.5に入れ、酵素活性0.3FTU/mlまで希釈した。
5mlのトリグリセリド基質を、12ml容の試験管で、1.0mlのリパーゼ溶液と混合した。ブランク混合物用に、リパーゼ溶液の代わりに1.0mlのリパーゼ試料緩衝液を加えた。混合物を連続的に攪拌しながら30℃で120分間水浴中でインキュベートした。以後のフィターゼアッセイで、混合物をそれぞれリパーゼ反応混合物またはブランク反応混合物として直接使用した。
適切な容量のCaCl2溶液を、12ml容の試験管で、最終アッセイ容量が3mlになるまで1.3mlのブランク反応混合物、1mlのフィチン酸塩溶液およびアッセイ緩衝液と混合した。混合物を37℃で5分間水浴中で平衡化した上で、0.1mlのフィターゼ溶液を添加して反応を開始した。ブランク測定のために、フィターゼ溶液の代わりに0.1mLのアッセイ緩衝液を加えた。37℃で1時間のインキュベーション後、2.5MのHClを0.75ml添加して、反応を停止させた。
1.3mlのブランク反応混合物またはリパーゼ反応混合物を、12ml容の試験管で、最終アッセイ容量が3mlになるまで0.3mlのカルシウム溶液、1mlのフィチン酸塩溶液およびアッセイ緩衝液と混合した。混合物を37℃で5分間水浴中で平衡化した上で、0.1mlのフィターゼ溶液を添加して反応を開始した。37℃で1時間のインキュベーション後、2.5MのHClを0.75ml添加して、反応を停止させた。
Konelab分析装置にて、リン試薬(Thermo Scientific)を用いて、加水分解試料中の無機リン酸塩濃度を測定した。180μlのリン試薬を5μlの試料と混合し、37℃で4分間インキュベートした上で、OD340nmを測定した。sCal Konelab CalibratorおよびNortrol Konelab Control(Thermo Scientific)を用いて、リン酸塩の含有量を計算した。ブランク測定を結果から減算することで、放出された無機リン酸塩としてフィターゼ活性を計算した。すべての活性をCaCl2が存在しない試料に対する相対値として計算した。
図31は、フィチン酸とカルシウムとのフィターゼ耐性錯体の生成ならびに、リパーゼを含むリパーゼ反応混合物を加えることによる反転を示す。図31Aは、CaCl2濃度を高めることによるフィターゼ活性に対する影響を示す。図31Bは、リパーゼ反応混合物を、30mMのCaCl2を含有するフィターゼ反応混合物に加えることによるフィターゼ活性に対する影響を示す。
飼料におけるリパーゼ3および膵リパーゼのpH特性についての研究で得られた結果
リパーゼ3および膵リパーゼのpH特性を遅くするために、pHの異なる緩衝液を使用して、飼料試料をリパーゼ3および膵リパーゼとともに40℃でインキュベートする。
本明細書に記載したようなリパーゼ3。ブタ膵臓からのパンクレアチンのような膵リパーゼ(Sigma P7545)。リパーゼ3試料をH2Oに入れ、酵素活性300LIPU/mlまで希釈した。パンクレアチン試料をH2Oに入れ、濃度2mg/mlまで希釈した。
適切な緩衝液およびその濃度は以下のとおりとした。0.25MのHCl;0.5Mのグリシン−HCl、pH2.5;0.5Mのグリシン−HCl、pH3.5;0.5Mのリン酸ナトリウム、pH6.5;0.5Mのリン酸ナトリウム、pH7.5;0.5MのTris、pH8.5;1MのNaHCO3、pH10。他の試薬は以下のとおりとした。TDC溶液:タウロデオキシコール酸ナトリウム(Sigma T0875)をH2Oに入れて80mMまで希釈した。飼料試料には、60.01%のトウモロコシ(corn)、31.52%の大豆粕、48、4%のダイズ油、0.4%の塩、0.2%のDLメチオニン、1.16%の石灰石、1.46%のリン酸二カルシウム、1.25%のVIT/MIN混合物を含む基本的なトウモロコシ(corn)−ダイズ食餌を使用した。
各インキュベーションについて、トウモロコシ(corn)−ダイズ飼料試料1gを50ml容のネジ蓋式の管に秤量した。0.1mlの酵素溶液に続いて、0.1mlのTDC溶液およびそれぞれの緩衝液1.8mlを、それぞれの管に加えた。5つのガラスのビー玉を加えた上で、振盪した水浴中で試料を40℃で120分間インキュベートした。インキュベーション後、管を3500rpmで10分間遠心処理し、上清のpHを測定した。その後、試料を液体窒素中で冷凍し、凍結乾燥機に一晩入れておいた。すべてのインキュベーションを二重に実施した。
インキュベーション時に生成された遊離脂肪酸の量を、NEFA−HR(2)キット(WAKO Chemicals GmbH)を用いて測定した。試料を室温に置き、96%エタノール20mlを加えた。試料を手作業で再懸濁させた上で、ロータリーホイールで室温にて1時間混合した。混合後、試料を3500rpmで10分間遠心処理した。上清を96%エタノールで5倍に希釈した上で、試料中の遊離脂肪酸を測定した。110μlのNEFA試薬R1を37℃で5分間平衡化した上で、15μlの希釈試料を加え、反応混合物を37℃で10分間インキュベートした。55μlのNEFA試薬R2を加え、37℃でさらに10分間インキュベーションを継続した。その後、OD520nmを測定した。NEFA標準(WAKO Chemicals GmbH)から作製した標準曲線を用いて、遊離脂肪酸の含有量を計算した。
図32は、トウモロコシ(corn)−ダイズ食餌で測定したリパーゼ3および膵リパーゼのpH特性を示す。リパーゼ3の濃度は飼料30LIPU/gであり、膵リパーゼの濃度は飼料0.2mg/mlであった。活性を、産生された遊離脂肪酸の測定最大量に対する相対値として示す。
リパーゼまたはフィターゼ自体、リパーゼおよびフィターゼの組み合わせを補った食餌vs.陰性対照の食餌を与えたブロイラー鶏におけるPおよびCaの回腸消化率ならびに、全消化管貯留を評価するための実験を実施した。食餌(表4)は、トウモロコシ(corn)および大豆粕を主成分にしたもので、トウモロコシ(corn)DDGS、コーングルテンミール、ダイズ油を含有していた。
1.陰性対照(NC)
2.NC+リパーゼ(1,000LIPU/kg)
3.NC+リパーゼ(3,000LIPU/kg)
4.NC+フィターゼ(500FTU/kg)
5.NC+フィターゼ(500FTU/kg)+リパーゼ(1,000LIPU/kg)6.NC+フィターゼ(500FTU/kg)+リパーゼ(3,000LIPU/kg)
図33は、フィターゼが陰性対照と比較してリン回腸消化率を有意に高めなかったが、予想どおり6.0%の数字の増分を生じたことを示す。リパーゼは、1,000および3,000LIPU/kgの両方で、陰性対照と比較して回腸リン消化率に何ら効果を生まなかった。対照的に、リパーゼ+フィターゼの組み合わせでは、陰性対照に比して回腸リン消化率を、リパーゼ包含量1,000LIPU/kgで14.3%、3,000U/kgで10.6%と有意に高めることが可能であった。リパーゼ+フィターゼの組み合わせは、リパーゼを1,000u/kgで含ませた場合にのみ、フィターゼ処置と比較して、回腸リン消化率を7.8%の差で有意に高めるものである。
Claims (24)
- フィターゼと脂肪分解酵素とを含む飼料用サプリメントであって、前記脂肪分解酵素が、pH1.5〜pH3.5の範囲のpHでリパーゼ活性を有する、飼料用サプリメント。
- 前記脂肪分解酵素が、配列番号7または配列番号8の配列を有するポリペプチドまたはこれに対する同一性が少なくとも70%であるポリペプチドを含むか;または配列番号9または10の配列;または遺伝暗号の縮重がゆえに配列番号9または10とは異なる配列;または配列番号9または10に対する同一性が少なくとも70%である配列を含むヌクレオチド配列の発現によって産生されるポリペプチドを含み、そしてここで前記フィターゼが、配列番号13の配列を有する大腸菌(E.coli)フィターゼおよび/または配列番号1〜6のいずれか1つの配列を有するブティアウクセラ(Buttiauxella)フィターゼまたはこれに対する同一性が少なくとも70%であるポリペプチドを含むか、または配列番号11あるいは、配列番号14のヌクレオチド253〜1483の配列、または遺伝暗号の縮重がゆえに配列番号11あるいは、配列番号14のヌクレオチド253〜1483とは異なる配列;または配列番号11あるいは、配列番号14のヌクレオチド253〜1483に対する同一性が少なくとも70%である配列を含むヌクレオチド配列の発現によって産生されるポリペプチドを含む、請求項1に記載の飼料用サプリメント。
- 前記脂肪分解酵素が、トリコデルマ・リーセイ(Trichoderma reesei)細胞で産生される、請求項1または2に記載の飼料用サプリメント。
- 前記フィターゼが、pH2.5〜pH5.5の範囲のpHでフィターゼ活性を有する、請求項1〜3のいずれか一項に記載の飼料用サプリメント。
- 前記フィターゼの比活性レベルが少なくとも100FTU/mgである、請求項1〜4のいずれか一項に記載の飼料用サプリメント。
- 前記脂肪分解酵素の比活性レベルが少なくとも100LIPU/mgである、請求項1
〜5のいずれか一項に記載の飼料用サプリメント。 - 脂肪分解酵素対フィターゼの比が1:3〜12:1の範囲にある、請求項1〜6のいずれか一項に記載の飼料用サプリメント。
- 少なくとも1種類の生理学的に許容されるキャリアをさらに含む、請求項1〜7のいずれか一項に記載の飼料用サプリメント。
- 前記生理学的に許容されるキャリアが、マルトデキストリン、石灰石(炭酸カルシウム)、シクロデキストリン、コムギまたはコムギ成分、スクロース、デンプン、アンチフォーム、Na2SO4、タルク、PVAおよびこれらの混合物のうちの少なくとも1つから選択される、請求項8に記載の飼料用サプリメント。
- 前記飼料用サプリメントが少なくとも1種類の別の酵素を含む、請求項1〜9のいずれか一項に記載の飼料用サプリメント。
- 前記少なくとも1種類の別の飼料酵素が、デンプン代謝、繊維の分解、脂質代謝に関与するもの、グリコーゲン代謝に関与する酵素、アセチルエステラーゼ、アミノペプチダーゼ、アミラーゼ、アラビナーゼ、アラビノフラノシダーゼ、カルボキシペプチダーゼ、カタラーゼ、セルラーゼ、キチナーゼ、キモシン、クチナーゼ、デオキシリボヌクレアーゼ、エピメラーゼ、エステラーゼ、ガラクトシダーゼ、グルカナーゼ、グルカンリアーゼ、エンド−グルカナーゼ、グルコアミラーゼ、グルコースオキシダーゼ、グルコシダーゼ(βグルコシダーゼを含む)、グルクロニダーゼ、ヘミセルラーゼ、ヘキソースオキシダーゼ、ヒドロラーゼ、インベルターゼ、イソメラーゼ、ラッカーゼ、リアーゼ、マンノシダーゼ、オキシダーゼ、オキシドレダクターゼ、ペクチン酸リアーゼ、ペクチンアセチルエステラーゼ、ペクチンデポリメラーゼ、ペクチンメチルエステラーゼ、ペクチン分解酵素、ペルオキシダーゼ、フェノールオキシダーゼ、ポリガラクツロナーゼ、プロテアーゼ、ラムノ−ガラクツロナーゼ、リボヌクレアーゼ、トランスフェラーゼ、トランスグルタミナーゼ、キシラナーゼ、ヘキソースオキシダーゼ(D−ヘキソース:O2−オキシドレダクターゼ、EC 1.1.3.5)β−グルカナーゼ、α−アミラーゼ
、ペクチナーゼ、セロビオヒドロラーゼおよび/または酸性ホスファターゼまたはこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項10に記載の飼料用サプリメント。 - 少なくとも1種類のキシラナーゼおよび/または少なくとも1種類のアミラーゼを含む、請求項10または11に記載の飼料用サプリメント。
- 請求項1〜12のいずれか一項に記載の飼料用サプリメントを含む、飼料原料。
- 以下の(a)〜(e)
〔(a)小粒穀物(コムギ、オオムギ、ライムギ、カラスムギおよびこれらの組み合わせなど)および/またはトウモロコシまたはソルガムなどの大粒型穀物などの穀類;
(b)コーングルテンミール、トウモロコシ蒸留粕(Distillers Dried Grain Solubles)(DDGS)、コムギフスマ、コムギミドリング、コムギシヨーツ、米糠、籾殻、カラスムギ外皮、パーム核、シトラスパルプなどの穀類からの副産物;
(c)ダイズ、ヒマワリ、ラッカセイ、ルピナス、エンドウマメ、ソラマメ、ワタ、セイヨウアブラナ、魚粉、乾燥血漿タンパク質、肉および骨粉、ジャガイモタンパク質、ホエー、コプラ、ゴマなどの起源から得られるタンパク質;
(d)野菜および動物起源から得られる油および脂肪;
(e)ミネラルおよびビタミン〕
の飼料材料を含む群から選択される1種又はそれ以上の飼料材料を含む、請求項13に記載の飼料原料。 - 低繊維食品を提供するために、トウモロコシ、コムギ、動物副産物粉またはダイズおよび/または少なくとも1種類の低繊維飼料材料の少なくとも1種類の副産物からなる群から選択される少なくとも1種類の低繊維飼料材料を含む、請求項13に記載の飼料原料。
- 200FTU/kg〜15,000FTU/kgのレベルでフィターゼを含む、請求項
13〜15のいずれか1項に記載の飼料原料。 - 125LIPU/kg〜45,000LIPU/kgのレベルで脂肪分解酵素を含む、
請求項13〜16のいずれか1項に記載の飼料原料。 - 請求項1〜12のいずれか1項に記載の飼料用サプリメントを飼料材料に添加することを含む、請求項13〜17のいずれか1項に記載の飼料原料を生成する方法。
- 少なくとも1種類の脂肪分解酵素と少なくとも1種類のフィターゼとを混合することを含む、請求項1〜12のいずれか1項に記載の飼料用サプリメントを生成する方法。
- 請求項1〜12のいずれか1項に記載の飼料用サプリメントを飼料材料に添加することを含む、飼料材料からの少なくとも1種類の食餌用栄養塩の利用率を増加および/または見かけの代謝エネルギー(AME)を増加させるための方法。
- 請求項13〜17のいずれか1項に記載の飼料原料の有効量を動物に給餌することを含む、動物の成長率を高める方法。
- 飼料原料を製造するにあたって、飼料材料からの少なくとも1種類の栄養塩の利用率を高めるおよび/または利用可能な代謝エネルギを増やすために少なくとも1種類のフィターゼおよび少なくとも1種類のリパーゼを含む飼料用サプリメントを用いる使用法であって、
ここで前記脂肪分解酵素が、pH1.5〜pH3.5の範囲のpHでリパーゼ活性を有し、そして
前記使用法が、前記飼料用サプリメントを飼料材料に添加する工程を含む、
前記使用法。 - 前記少なくとも1種類の栄養塩が、亜リン酸、カルシウム、アミノ酸、脂肪および/またはデンプンから選択される、請求項22に記載の使用法。
- 少なくとも1種類の脂肪分解酵素および少なくとも1種類のフィターゼを含む飼料原料であって、前記脂肪分解酵素が、pH1.5〜pH3.5の範囲のpHでリパーゼ活性を有する、飼料原料。
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WO2015048339A2 (en) * | 2013-09-25 | 2015-04-02 | Pronutria, Inc. | Compositions and formulations for non-human nutrition and methods of production and use thereof |
KR101600670B1 (ko) * | 2013-12-30 | 2016-03-08 | 단국대학교 천안캠퍼스 산학협력단 | 성장율 및 육질 개선을 위한 비육돈 사육용 사료 조성물, 이를 이용한 사육 방법 및 이로부터 얻은 돈육 |
CN103859234B (zh) * | 2014-03-31 | 2015-10-07 | 福建漳州绿野农业开发股份有限公司 | 改善哺乳期母仔猪健康的药膳营养调理剂及其制备方法和应用 |
CN104012759B (zh) * | 2014-05-12 | 2019-07-12 | 何卫星 | 一种鳗鲡早期仔鱼的开口饵料及其培育方法 |
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CN104719616B (zh) * | 2015-03-27 | 2017-10-17 | 国家粮食局科学研究院 | 一种利用小麦淀粉加工副产物戊聚糖浆生产富含功能性低聚糖饲料添加剂的方法 |
CN104757270B (zh) * | 2015-03-27 | 2017-10-17 | 国家粮食局科学研究院 | 一种利用小麦淀粉加工副产物戊聚糖浆生产富含功能性低聚糖饲料的方法 |
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EP1059041A1 (en) * | 1999-06-07 | 2000-12-13 | Universiteit Gent | The combined use of triglycerides containing medium chain fatty acids and exogenous lipolytic enzymes as feed supplements |
ATE490309T1 (de) | 2002-08-12 | 2010-12-15 | Danisco Us Inc | Mutante e. coli-appa-phytaseenzyme und natürliche varianten davon, solche phytaseenzyme codierende nukleinsäuren, diese enthaltende vektoren und wirtszellen und verfahren zur herstellung und verwendung davon |
GB0405637D0 (en) * | 2004-03-12 | 2004-04-21 | Danisco | Protein |
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GB0600913D0 (en) * | 2006-01-17 | 2006-02-22 | Syngenta Ltd | Improvements in or relating to organic compounds |
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CN101063113B (zh) * | 2006-04-30 | 2011-07-20 | 中国农业科学院饲料研究所 | 一种新的植酸酶的克隆和表达 |
CA2652558A1 (en) * | 2006-05-18 | 2007-11-29 | Biobalance Llc | Bacterial strains, compositions including same and probiotic use thereof |
US20080220498A1 (en) * | 2007-03-06 | 2008-09-11 | Cervin Marguerite A | Variant Buttiauxella sp. phytases having altered properties |
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