JP5711616B2

JP5711616B2 - Ｉｌ−１７産生抑制剤

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Publication number: JP5711616B2
Application number: JP2011129424A
Authority: JP
Inventors: 忠臣川島
Original assignee: Kikkoman Corp
Current assignee: Kikkoman Corp
Priority date: 2011-06-09
Filing date: 2011-06-09
Publication date: 2015-05-07
Anticipated expiration: 2031-06-09
Also published as: JP2012254959A

Description

本発明は、フコキサンチン、フコキサンチノール又はそれらの誘導体を有効成分とするＩＬ−１７産生抑制剤、Ｔｈ１７細胞分化抑制剤及びＩＬ−１７又はＴｈ１７細胞に関連する疾患又は状態の予防又は治療用組成物に関する。

インターロイキン（ＩＬ）の一種であるＩＬ−１７は、炎症性サイトカインの産生を誘導することが知られる。近年、ＩＬ−１７を産生するＴｈ１７細胞（ヘルパーＴ細胞タイプ１７）が見出され、ＩＬ−１７及びＴｈ１７細胞が、自己免疫性疾患や非感染性の炎症性疾患と深く関連することが明らかになってきた。

また、昨今、薬物療法と一般療法の中間に位置するともいえる疾患等の治療や予防に食品（健康食品、機能性食品、健康補助食品、特定保健用食品等）が用いられるようになってきており、ＩＬ−１７産生に着目した食品素材の開発も行われている。例えば、特許文献１は、マウス脾臓細胞と共培養した場合にＩＬ‐１７産生を抑制する特定の乳酸菌、該乳酸菌によって発酵した発酵乳製品、該発酵乳製品を、ＩＬ−１７産生抑制の有効成分として含有する医薬又は飲食品等を開示する。

ＩＬ−１７に着目した炎症性疾患の処置として、特許文献２は、ＩＬ−２３のアンタゴニストがＩＬ−１７産生を阻害すること、及び哺乳動物被験体中のＩＬ−１７の上昇した発現によって特徴付けられる炎症性疾患（アレルギー疾患等）の処置のための方法であって、有効量のＩＬ−２３のアンタゴニストを該被験体に投与する工程を包含する方法を開示する。ＩＬ−１７産生を抑制し、炎症性腸疾患等の自己免疫疾患抑制作用等に効果を有する成分としては、レチノイン酸や合成レチノイドも知られている（非特許文献１）。

一方、フコキサンチンは、海藻に特徴的に含まれるカロテノイドの一種であり、近年特に注目され、脂肪燃焼促進作用、白色脂肪細胞減少作用、抗酸化作用、抗ガン作用、抗糖尿病作用、血管新生抑制作用、抗炎症作用等が報告されている食品素材である。例えば、ＵＶ−Ｂ照射による細胞損傷に対し、フコキサンチンが保護作用を有することが報告されている（非特許文献２）。

これまでにフコキサンチンについて報告されている抗炎症作用は、リポ多糖（ＬＰＳ）により誘発させた、外的要因による感染性炎症（エンドトキシン誘発性ブドウ膜炎）に対し、フコキサンチンが炎症抑制作用を示したというものである（非特許文献３）。

特開２０１０−１１５１２６号公報特開２０１１−０４２６５８号公報

J Leukoc Biol. 86(4):959-69 (2009) J Photochem Photobiol B. 95(2):101-7 (2009) Exp Eye Res. 81(4): 422-8 (2005)

自己免疫性疾患や非感染性炎症性疾患に対する治療効果又は予防効果を有する食品及び医薬品へのニーズは高まってきている。効果が高く、しかも安心して長期に渡って服用できる製品や、経済的負担がより少ない製品も、求められている。また、フコキサンチンは、様々な作用を有する食品素材として知られているものの、ＩＬ−１７やＴｈ１７細胞との関係、自己免疫疾患や非感染性炎症性疾患の予防及び治療作用を有することについては、知られていない。

以上のような背景のもと、本発明が解決しようとする課題は、新たなＩＬ−１７産生抑制剤を提供することにある。

本発明者は、上記課題を解決するために、鋭意検討を重ねた結果、フコキサンチン及びその誘導体であるフコキサンチノールが、ＩＬ−１７産生抑制作用及びナイーブＴ細胞からＴｈ１７細胞への分化抑制作用を有し、自己免疫疾患及び非感染性炎症性疾患等のＩＬ−１７及びＴｈ１７細胞に関連する疾患の治療等に有用であることを見出した。また、食用として多量に流通している安価なワカメから簡便にフコキサンチンを抽出する方法を見出し、本発明を完成した。

本発明は、以下のとおりである。
[１]
フコキサンチン、フコキサンチノール又はそれらの誘導体を含有するＩＬ−１７産生抑制剤。
[２]
フコキサンチン、フコキサンチノール又はそれらの誘導体を含有するＴｈ１７細胞分化抑制剤。
[３]
フコキサンチン、フコキサンチノール又はそれらの誘導体を含有する、ＩＬ−１７又はＴｈ１７細胞に関連する疾患又は状態の予防又は治療用組成物。
[４]
前記疾患又は状態が、自己免疫性疾患又は非感染性炎症性疾患、である、[３]に記載の組成物。
[５]
前記疾患又は状態が、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、乾癬、クローン病、潰瘍性大腸炎及び食物アレルギーからなる群から選択される、[４]に記載の組成物。
[６]
フコキサンチン、フコキサンチノール又はそれらの誘導体が海藻由来である、[１]〜[５]のいずれかに記載の剤又は組成物。
[７]
オクタデカテトラエン酸、エイコサペンタエン酸及びα−リノレン酸から選択されるω−３多価不飽和脂肪酸をさらに含有する、[６]に記載の剤又は組成物。
[８]
フコキサンチン、フコキサンチノール又はそれらの誘導体を、１ｇ当り、乾燥物換算で、１ｍｇ〜１００ｍｇ含有する、[１]〜[７]のいずれかに記載の剤又は組成物。
[９]
飲料であって、フコキサンチン、フコキサンチノール又はそれらの誘導体を、５００ｍＬ当り、乾燥物換算で、５ｍｇ〜２５００ｍｇ含有する、[１]〜[７]のいずれかに記載の剤又は組成物。
[１０]
フコキサンチン、フコキサンチノール又はそれらの誘導体が、フコキサンチン、フコキサンチノール又はそれらの塩である、[１]〜[９]のいずれかに記載の剤又は組成物。
[１１]
フコキサンチン、フコキサンチノール又はそれらの誘導体が、褐藻類のエタノール抽出物由来である、[１]〜[９]のいずれかに記載の剤又は組成物。
[１２]
ナイーブＴ細胞からＴｈ１７細胞への分化を抑制することでＩＬ−１７産生を抑制する、[１]に記載のＩＬ−１７産生抑制剤。
[１３]
ナイーブＴ細胞から制御性Ｔ細胞を誘導することでＴｈ１７細胞への分化を抑制する、[２]に記載のＴｈ１７細胞分化抑制剤。
[１４]
フコキサンチン、フコキサンチノール又はそれらの誘導体を含有する免疫調節用組成物。

本発明によれば、新たなＩＬ−１７産生抑制剤及びＴｈ１７細胞分化抑制剤を提供することができる。また、本発明によれば、自己免疫性疾患、非感染性炎症性疾患等、ＩＬ−１７又はＴｈ１７細胞に関連する疾患又は状態の予防又は治療用組成物を提供することができる。さらに、本発明によれば、食用として多量に流通している安価な原料を用いて、安心して長期に渡って服用できる、経済的負担がより少ない上記の剤及び組成物を提供することができる。

実施例１において、培地に各種成分を様々な量添加してＣＤ４陽性脾臓細胞を培養した時のＩＬ−１７産生量を示す。実施例２において、培地に各種成分を様々な量添加してＣＤ４陽性ＣＤ６２Ｌ陽性Ｔ細胞を培養した際の、ＩＬ−１７産生Ｔｈ１７細胞数及びＦｏｘｐ３陽性制御性Ｔ細胞数を示す。

以下、本発明を実施するための形態について詳細に説明する。なお、本発明は以下の実施の形態に限定されるものではなく、その要旨の範囲内で種々変形して実施することができる。

本発明は、ＩＬ−１７産生抑制剤、Ｔｈ１７細胞抑制剤、ＩＬ−１７又はＴｈ１７細胞に関連する疾患又は状態の予防又は治療用組成物及び免疫調節用組成物（以下、単に「本発明の組成物等」ともいう）に関する。本発明の組成物等は、有効成分としてフコキサンチン、フコキサンチノール又はそれらの誘導体（以下、単に「本発明の有効成分」ともいう）を含有する。

フコキサンチン（ｆｕｃｏｘａｎｔｈｉｎ、Ｃ₄₂Ｈ₅₈Ｏ₆）は、褐藻類中の主要カロテノイドであり、以下の構造を有する。

フコキサンチノール（ｆｕｃｏｘａｎｔｈｉｎｏｌ、Ｃ₄₀Ｈ₅₆Ｏ₅）は、フコキサンチンの加水分解によりアセチル基が遊離して得られる化合物であり、以下の構造を有する。

本発明の有効成分は、所望の作用（ＩＬ−１７産生抑制作用、Ｔｈ１７細胞分化抑制作用等）を有する限り、上記の構造の一部が改変又は修飾された誘導体であっても良い。フコキサンチン又はフコキサンチノールの誘導体としては、例えば、生理学的に許容される塩、エステル又はプロドラッグ等が挙げられる。なお、フコキサンチノールはフコキサンチンの誘導体の一種であり、フコキサンチンはフコキサンチノールの誘導体の一種である。

フコキサンチン又はフコキサンチノールの誘導体のうち、生理学的に許容される塩としては、特に限定されないが、例えば、アルカリ金属塩（ナトリウム塩、カリウム塩等）、アルカリ土類金属塩（マグネシウム塩、カルシウム塩等）、これらの水酸化物塩又は炭酸塩、アルカリ金属アルコキサイド（ナトリウムメトキサイド、カリウムｔ−プトキサイド等）との塩が挙げられる。また、無機酸（塩酸、硫酸、リン酸等）や有機酸（マレイン酸、クエン酸、フマル酸等）を付加した酸付加塩、アミンの付加塩、アミノ酸の付加塩等も挙げられる。なお、上記の塩の水和物もここでいう塩に含まれる。

フコキサンチン又はフコキサンチノールの誘導体のうち、エステルは、カルボン酸とのエステル化反応で生じるエステルであれば特に限定されない。カルボン酸としてはギ酸、酢酸、乳酸等が例示される。

フコキサンチン又はフコキサンチノールの誘導体のうち、プロドラッグとは、生体に投与された後に生体内で代謝され、所望の作用（ＩＬ−１７産生抑制作用、Ｔｈ１７細胞分化抑制作用等）を発現する化合物を意味する。生体内におけるフコキサンチンの代謝物として、フコキサンチノールやアマロウシアキサンチンＡ（amarouciaxanthin A）が知られており、例えば、生体に投与された後、これらの化合物を代謝物として生じる化合物も、上記のプロドラッグに含まれる。また、安定性や吸収性の改善、副作用の低減等を目的としてプロドラッグ化されたフコキサンチン又はフコキサンチノールも、上記のプロドラッグに含まれる。

本発明の有効成分であるフコキサンチン、フコキサンチノール又はそれらの誘導体としては、市販品を用いてもよいし、化学的に合成したものを用いてもよいが、より簡便には、海藻から抽出した海藻抽出物（以下、海藻を溶媒で抽出処理して得られる海藻抽出物を単に「海藻抽出物」と略記する場合がある）を用いることができる。海藻抽出物を用いる場合、海藻中には後述のω−３多価不飽和脂肪酸も含まれるため、本発明の有効成分とともにω−３多価不飽和脂肪酸を含む本発明の組成物等を容易に得ることができる。

海藻抽出物の原料となる海藻は、本発明の有効成分を含むものであれば特に限定されないが、本発明の有効成分を多く含むという観点から褐藻類が好ましく、安価で容易に入手可能であるという観点から、ワカメ、コンブ、モズク等を用いることができる。このような海藻の種子を除く地上部部分の葉、茎、花、及び皮等の植物体を原料として用いることができ、硬い茎の部分を除去した葉の部分を原料として用いることが好ましい。

上記の原料について、本発明の有効成分を、直接、生の植物体から抽出してもよく、ピューレ状に粉砕して海藻ピューレを得た後、抽出してもよい。植物体を一度乾燥させた後に抽出してもよく、乾燥後さらに粉末化したものを抽出してもよい。市販の海藻粉末を用いてもよい。

また、上記の原料から海藻溶液を作成し、これを抽出に用いてもよい。海藻溶液は、上記の原料由来の成分を含む溶液であって、本発明の有効成分を含む溶液であれば特に限定されない。海藻溶液としては、例えば、上記の海藻ピューレに水又は温水を加えた溶液、海藻粉末を水又は温水に溶解又は混合させた海藻粉末溶液等が挙げられる。海藻溶液は、植物体（葉等）の固形分を含んでいてもよい。

上記の原料又は海藻溶液を溶媒で抽出処理する方法は、従来公知の方法に従って行うことができ、特に限定されるものではないが、例えば、上記の原料又は海藻溶液に抽出溶媒を添加、懸濁し、攪拌後、遠心分離又は吸引ろ過により固形物を除去し、液体部を回収することで、海藻抽出物を得ることができる。

抽出溶媒としては、本発明の有効成分が抽出できる限り特に限定されないが、好ましくは、食品添加物の抽出溶剤となり得る有機溶媒であり、例えばエタノール、メタノール、酢酸エチル、へキサン等を単独又は組み合わせて用いることができる。安価で安全であるという観点から、好ましくはエタノールを用いることができる。

抽出処理の具体例としては、例えば、３０〜８０％程度のエタノールを乾燥原料の５〜５０倍程度の量となるよう添加し、室温〜６０℃程度で、１５分〜６０分程度、攪拌しながら行う処理を挙げることができる。必要に応じて抽出を繰り返すこともできる。このような条件で抽出処理を行って得られた海藻抽出物は、ω−３多価不飽和脂肪酸も含有することを本発明者らは確認している。

ω−３多価不飽和脂肪酸は、ω−３位に二重結合を複数個有する不飽和脂肪酸であり、動物は体内で生合成することができない脂肪酸である。海藻類に多く含まれるω−３多価不飽和脂肪酸としては、例えば、オクタデカテトラエン酸（ステアリドン酸）、エイコサペンタエン酸（必須脂肪酸）、α−リノレン酸（必須脂肪酸）が知られ、それぞれ様々な効能が報告されている。したがって、一態様において、本発明の組成物等は、さらに、オクタデカテトラエン酸、エイコサペンタエン酸及びα−リノレン酸から選択されるω−３多価不飽和脂肪酸を含有することで、本発明の有効成分の作用に加えて、これらのω−３多価不飽和脂肪酸の有する作用も提供することができる。

海藻抽出物は、溶液の形態であってもよいし、所望により、エバポレーター等により濃縮処理を行って得られた濃縮物、乾燥処理を行って得られた乾燥物、凍結処理を行って得られた凍結物であってもよい。得られた海藻抽出物に本発明の有効成分が含まれているかは、例えば標準品を用いたＨＰＬＣ等、常法により確認することができる。得られた海藻抽出物は、溶液（水溶液及び油溶液）、濃縮物、乾燥物等いずれの形態であっても、そのまま本発明の組成物等としてもよいし、そのまま又はさらに精製して得られる精製物を下記の医薬品や飲食品に添加して本発明の組成物等としてもよい。特に、本発明の組成物等が上記のω−３多価不飽和脂肪酸も含有する場合、さらなる精製を行わずに海藻抽出物を用いることが好ましい場合がある。

フコキサンチン及びフコキサンチノールは、後述の実施例に記載の通り、ＩＬ−１７産生抑制作用及びＴｈ１７細胞分化抑制作用を有する。したがって、フコキサンチン、フコキサンチノール又はそれらの誘導体を含有する組成物は、ＩＬ−１７産生抑制剤、Ｔｈ１７細胞分化抑制剤及びＩＬ−１７又はＴｈ１７細胞に関連する疾患又は状態の予防又は治療用組成物として用いることができる。

ＩＬ−１７産生抑制作用は、例えば後述の実施例１に記載の方法を参照して確認することができる。また、Ｔｈ１７細胞分化抑制作用は、例えば後述の実施例２に記載の方法を参照して確認することができる。本発明者らは、様々な種類が知られるカロテノイドのうち、特にフコキサンチン及びその誘導体であるフコキサンチノールが、上記の作用を有することを確認している。

すでにＴｈ１７細胞分化抑制作用等が報告されているレチノイン酸は、生体内でビタミンＡから誘導され、生体内濃度が、恒常性により一定に保たれていることが知られる。従って、ビタミンＡを多量に摂取しても生体内のレチノイン酸濃度に大きな変動はない。一方、フコキサンチン及びフコキサンチノールは、摂取後、生体内での代謝の影響を受けにくく、生体内で上記の所望の作用を発揮することができると考えられる。

ＩＬ−１７は、炎症性サイトカインや炎症メディエーター（ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８、Ｇ−ＣＳＦ、ＭＣＰ−１、ＴＮＦ−α、ＮＯＳ−２、メタロプロテアーゼ、ケモカイン等）の産生を誘導することが知られる。従って、ＩＬ−１７産生抑制剤は、ＩＬ−１７の産生を抑制することにより、上記の炎症性サイトカインや炎症メディエーターの産生も抑制することができる。従って、ＩＬ−１７産生抑制剤は、上記の炎症性サイトカインや炎症メディエーターの関与する疾患の治療又は予防においても有用であり得る。また、関節リウマチ、多発性硬化症、乾癬、潰瘍性大腸炎、クローン病等、様々な自己免疫性疾患や非感染性炎症性疾患において、ＩＬ−１７の濃度が著しく上昇していることが知られる。従って、ＩＬ−１７産生抑制剤は、これらの疾患の治療又は予防においても有用であり得る。

よって、本明細書中において、ＩＬ−１７に関連する疾患又は状態とは、ＩＬ−１７及び／又はＩＬ−１７により産生が誘導される炎症性サイトカインや炎症メディエーターの量が、健常な状態と異なる疾患又は状態を指す。

Ｔｈ−１７細胞は、ヘルパーＴ細胞のサブセットの１つである。骨髄で産生されたＴ細胞は胸腺で分化・成熟後、ナイーブＴ細胞として血流を循環しているが、各種サイトカインによる刺激を受けて各サブセットへと分化する。例えば、通常、ナイーブＴ細胞は、ＴＧＦ−β及びＩＬ−６の刺激によりＴｈ１７細胞に分化し、ＴＧＦ−βのみの刺激により制御性Ｔ細胞に分化する。

Ｔｈ−１７細胞は、ＩＬ−１７のほか、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、ＩＬ−２２等のサイトカイン産生能を有することが知られる。また、Ｔｈ−１７細胞は自己免疫性疾患に関与していることが知られる。Ｔｈ−１７細胞はまた自己免疫性疾患（例えば関節リウマチ、多発性硬化症、乾癬等）、炎症性腸疾患等とも関連することが明らかになってきている。

よって、本明細書中において、Ｔｈ−１７に関連する疾患又は状態とは、Ｔｈ−１７及び／又はＴｈ−１７により産生が誘導されるサイトカインの量が、健常な状態と異なる疾患又は状態を指す。

より特定すれば、本明細書中において、ＩＬ−１７又はＴｈ−１７に関連する疾患又は状態には、自己免疫性疾患及び非感染性炎症性疾患が含まれる。自己免疫性疾患の例としては、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、乾癬等が挙げられ、非感染性炎症性疾患の例としては、炎症性腸疾患（クローン病及び潰瘍性大腸炎）、食物アレルギー等が挙げられる。

なお、本明細書中において、非感染性炎症性疾患とは、細菌感染等の外的要因によらず、自己に対する過剰な応答等によって引き起こされる炎症性疾患を意味する。

また、本明細書中、軽症から中等症の自己免疫疾患又は炎症性疾患に罹患した際、あるいは薬剤により活動期から寛解期に移行した際に摂取（好ましくは経口摂取）することで、ＩＬ−１７産生抑制作用及び／又はＴｈ１７細胞分化抑制作用を引き起こす組成物を、免疫調節用組成物ということもある。

本発明の組成物等は、飲食品や医薬品とすることができる。摂取容易性の観点から、好ましくは本発明の組成物を飲食品とすることができる。

飲食品としては、サプリメント、特定保健用食品、栄養機能食品、健康食品、機能性食品、健康補助食品、通常の飲食品等が挙げられる。通常の飲食品の好ましい形態は、飴、ゼリー、錠菓、飲料、スープ、麺、煎餅、和菓子、冷菓、焼き菓子等の食品や飲料であり、本発明の有効成分の酸化を防ぐという観点から、好ましくは、果汁飲料、野菜ジュース、果物野菜ジュース、茶飲料、コーヒー飲料、スポーツドリンク、清涼飲料等の容器詰飲料である。これらの飲食品は、いずれも当業者に公知の手法を用いて、フコキサンチン、フコキサンチノール又はそれらの誘導体あるいはそれらを含む海藻抽出物を添加して製造することができる。

フコキサンチン、フコキサンチノール又はそれらの誘導体あるいはそれらを含む上記の海藻抽出物は、味・臭いに特異な厭味が少ないことから液状、半流動状又は固形形態で経口投与により摂取することが可能であり、それ自体または適宜製剤上の都合で賦形剤などと混合して粉末、顆粒、錠剤、カプセル剤などの形態で投与することができる。

本発明の組成物等を飲食品とする場合、上記の海藻抽出物は、溶液、濃縮物、乾燥物、凍結物等のいずれの形態あっても、そのまま上記飲食品とすることができる。また、本発明の組成物等を各種飲食品の配合剤として利用することもできる。例えば、上記の海藻抽出物を溶液（水溶液又は油溶液）として得た場合、そのまま飲料として、又は上記の飲食品に配合して利用することができる。海藻抽出物は、適当な濃度まで減圧濃縮することによって濃厚な液状組成物とすることも可能である。また、上記の海藻抽出物は、乾燥物とすることにより保存安定性に優れる。乾燥物も、そのまま飲食品として、又は上記の飲食品に配合して利用することができる。

本発明の組成物等を飲食品とする場合、フコキサンチン、フコキサンチノール又はそれらの誘導体を、１ｇ当り、乾燥物換算で、０．０１ｍｇ〜１００ｍｇ程度、好ましくは１ｍｇ〜１００ｍｇ程度、配合することができる。例えば本発明の組成物等を飲料とする場合、５００ｍＬ当り、乾燥物換算で、好ましくは５ｍｇ〜２，５００ｍｇ、より好ましくは１０ｍｇ〜１，０００ｍｇ配合することができる。例えば本発明の組成物等をサプリメントとする場合、１ｇ当り、乾燥物換算で、０．１ｍｇ〜１０ｍｇ程度配合することができる。該配合量を達成できるように、適宜他の原料、添加物等と混合することができる。なお、一般に、海藻中のフコキサンチン量は多くても乾燥重量の０．１％程度であることが知られ、海藻中のフコキサンチノール量は、さらに少ないことが知られる。

摂取回数は、特に限定されないが、好ましくは１日１〜３回であり、必要に応じて摂取回数を増減してもよい。

上記の飲食品は、自己免疫性疾患予防作用、非感染性炎症性疾患予防作用、より詳細には、炎症性腸疾患（クローン病又は潰瘍性大腸炎）予防作用（例えば、消化管の炎症抑制作用、腹痛緩和作用、排便の改善作用等）、関節痛緩和作用、関節リウマチ予防作用、全身性エリテマトーデス予防作用、多発性硬化症予防作用、乾癬予防作用、食物アレルギー軽減作用等の作用を有する旨の表示を付した飲食品であってもよい。

本発明の組成物等を医薬品とする場合、フコキサンチン、フコキサンチノール、またはそれらの誘導体あるいはそれらを含有する海藻抽出物に薬学的に許容可能な賦形剤を添加して、医薬品として用いることができる。医薬品の剤形としては、液体、ペースト等の液剤、粉末、顆粒、錠剤等の固体等、公知の剤型が挙げられる。より詳細には、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、液剤、シロップ剤、チュアブル、トローチ等の経口剤、軟膏剤、ゲル剤、クリーム剤、貼付剤等の外用剤、注射剤、舌下剤、吸入剤、点眼剤、坐剤等の剤形が挙げられ、好ましくは、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、注射剤である。

上記の医薬品は、動物、中でも哺乳類に投与することができる。哺乳類としては、ヒト、イヌ、ネコ、ウシ、ウマなどが挙げられ、ヒトであることが好ましい。

上記の医薬品の投与量は、個々の薬剤の活性、患者の症状、年齢、体重等の種々の条件により適宜調整することができるが、例えば、フコキサンチン、フコキサンチノール又はそれらの誘導体を、乾燥物換算で、好ましくは１回５ｍｇ〜２，５００ｍｇ、より好ましくは１回１０ｍｇ〜１，０００ｍｇ、さらに好ましくは１回１０ｍｇ〜１００ｍｇ投与することができる。海藻抽出物を含む医薬品の場合も同様に、乾燥物換算で上記の量の有効成分となるよう、投与することができる。

投与回数は、特に限定されないが、好ましくは１日１〜３回であり、必要に応じて投与回数を増減してもよい。投与方法についても特に制限されないが、フコキサンチンは腸管から吸収されるため、経口摂取が好ましい。

本発明の組成物等がω−３多価不飽和脂肪酸を含有する場合、その含有量は、特に限定されないが、例えば１ｇ当り、０．１ｍｇ〜５００ｍｇ程度含有することができる。

以下、本発明を実施例及び比較例により具体的に説明するが、本発明は、これらの実施例に何ら限定されるものではない。なお、実施例１及び２は、Blood. 111(3):1013-20 (2008)に記載の方法を参照して行った。

［実施例１］
Ｃ５７ＢＬ／６マウス（１０週齢、雄、日本クレア生産）より脾臓を摘出後、４００ユニット／ｍＬのタイプＩコラゲナーゼ（シグマ社製）及び１０％ＦＢＳ（ニチレイ社製）を含有するＲＰＭＩ１６４０培地中で攪拌し、脾臓細胞を得た。その後、脾臓細胞を、ＣＤ４マイクロビーズ（ミルテニー・バイオテク社製）を含むＭＡＣＳバッファー［０．５％ＢＳＡ（シグマ社製）及び２ｍＭＥＤＴＡ含有ＰＢＳ（ｐＨ７．２）］中に懸濁し、１５分間、４℃でインキュベートを行った。脾臓細胞をＭＡＣＳバッファーで洗浄後、ＭＡＣＳカラム（ミルテニー・バイオテク社製）によりＣＤ４陽性細胞を分離・回収し、ＣＤ４陽性Ｔ細胞として試験に用いた。９６ウェルマイクロプレート（ＢＤ社製）に５０μＬの５μｇ／ｍＬ抗マウスＣＤ３抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社製）を分注し、４℃、１５時間インキュベート後、ＰＢＳで２回洗浄し、上記のＣＤ４陽性Ｔ細胞の培養に用いた。ＣＤ４陽性Ｔ細胞からＴｈ１７細胞を誘導するために、５μｇ／ｍＬ抗マウスＣＤ２８抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社製）、２０ｎｇ／ｍＬＩＬ−６（Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓ社製）、２ｎｇ／ｍＬＴＧＦ−β（Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓ社製）及び１０％ＦＢＳを含有するＲＰＭＩ１６４０培地中で５×１０⁵ ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ（培養液量２５０μＬ）で培養した。

培養開始時に、レチノイン酸（ポジティブコントロール）、フコキサンチン又はフコキサンチン以外の各種カロテノイドを培地に添加した。レチノイン酸（シグマ社製）は終濃度１μＭとなるように、フコキサンチン（ＣａｙｍａｎＣｈｅｍｉｃａｌ社）、アスタキサンチン（和光純薬工業社製）、リコペン（和光純薬工業社製）及びルテイン（和光純薬工業社製）は、それぞれ終濃度２μＭ又は４μＭとなるように添加した。培養７２時間後、上清を回収し、ＩＬ−１７の濃度をマウスＩＬ−１７ＥＬＩＳＡＫｉｔ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社製）を用いて測定した。

結果を図１に示す。対照として、レチノイン酸、フコキサンチン及び各種カロテノイドの添加をせずに同様の培地で培養した結果（「Ｍｅｄ」）ならびに５μｇ／ｍＬ抗マウスＣＤ２８抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社製）、及び１０％ＦＢＳを含有するＲＰＭＩ１６４０培地（ＩＬ−６及びＲＧＦ−βを添加しない）中で、レチノイン酸、フコキサンチン及び各種カロテノイドの添加をせずに培養した結果（「Ｕｎｔ」）を示す。レチノイン酸はナイーブＴ細胞からＦｏｘｐ３陽性の制御性Ｔ細胞を誘導することで、Ｔｈ１７細胞の分化を抑制し、ＩＬ−１７の産生を抑えることが知られているが、フコキサンチンにもＩＬ−１７産生抑制作用があることが示された。フコキサンチン以外の各種カロテノイド（アスタキサンチン、リコペン、ルテイン）は、ＩＬ−１７産生抑制作用を示さなかった。

［実施例２］
実施例１と同様の手法を用いてマウスより脾臓細胞を得た。その後、脾臓細胞よりＭｏｕｓｅＣＤ４⁺ ＴＣｅｌｌＩｓｏｌａｔｉｏｎＫｉｔＩＩ（ミルテニー・バイオテク社製）を用いることで、ＣＤ４陽性Ｔ細胞を回収した。ＦＩＴＣ標識抗マウスＣＤ６２Ｌ抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社製）で細胞を標識後、ＦＩＴＣマイクロビーズ（ミルテニー・バイオテク社製）と共に１５分間、４℃でインキュベートし、ＭＡＣＳバッファーにて洗浄後、ＭＡＣＳカラムによりＣＤ６２Ｌ陽性細胞を分離、回収した。これによりＣＤ４陽性、ＣＤ６２Ｌ陽性のナイーブＴ細胞を得た。得られたナイーブＴ細胞からＴｈ１７細胞を誘導するために、５μｇ／ｍＬ抗マウスＣＤ２８抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社製）、２０ｎｇ／ｍＬＩＬ−６（Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓ社製）、２ｎｇ／ｍＬＴＧＦ−β（Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓ社製）及び１０％ＦＢＳを含有するＲＰＭＩ１６４０培地中、５×１０⁵ ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ（培養液量２５０μＬ）で培養した。

培養開始時に、レチノイン酸（ポジティブコントロール）、フコキサンチン又はフコキサンチン以外の各種カロテノイドを培地に添加した。レチノイン酸（シグマ社製）は終濃度１μＭとなるように、フコキサンチン（ＣａｙｍａｎＣｈｅｍｉｃａｌ社製）、フコキサンチノール（和光純薬工業社製）、アスタキサンチン（和光純薬工業社製）、リコペン（和光純薬工業社製）及びルテイン（和光純薬工業社製）は、それぞれ終濃度２μＭ又は４μＭとなるように添加した。培養７２時間後、Ｐｈｏｒｂｏｌ１２−Ｍｙｒｉｓｔａｔｅ１３−ａｃｅｔａｔｅ（ＰＭＡ、シグマ社製）、イオノマイシン（シグマ社製）及びＧｏｌｇｉＳｔｏｐ（ＢＤ社製）を、それぞれ終濃度が０．１μｇ／ｍＬ、０．２５μｇ／ｍＬ及び２μｌ／ｍＬとなるように添加した。４時間後、細胞を回収し、Ｆｏｘｐ３ＳｔａｉｎｉｎｇＫｉｔ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社製）により細胞を固定後、ＦＩＴＣ標識抗マウスＩＬ−１７抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社製）、及びＰＥ標識抗マウスＦｏｘｐ３抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社製）で染色後、フローサイトメーターにより各発現を解析し、Ｆｏｘｐ３陽性制御性Ｔ細胞、ＩＬ−１７産生Ｔｈ１７細胞の割合を調べ、Ｆｏｘｐ３陽性制御性Ｔ細胞とＩＬ−１７産生Ｔｈ１７細胞の比率を算出した。

結果を図２に示す。なお、図２の縦軸及び横軸に記載の数値は蛍光強度を示す。蛍光強度は測定ごとに多少変化するが、同時に測定した細胞群同士の割合を示す数値として用いることができる。対照として、レチノイン酸、フコキサンチン及び各種カロテノイドの添加なしに同様の培地で培養した結果（対照（培地添加））、ならびに５μｇ／ｍＬ抗マウスＣＤ２８抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社製）、及び１０％ＦＢＳを含有するＲＰＭＩ１６４０培地（ＩＬ−６及びＲＧＦ−βを添加しない）中で、レチノイン酸、フコキサンチン及び各種カロテノイドの添加をせずに培養した結果（「未処理」）を示す。レチノイン酸と同様に、フコキサンチン、及びフコキサンチノールの代謝物であるフコキサンチノールにも、ナイーブＴ細胞からＦｏｘｐ３陽性制御性Ｔ細胞を誘導し、ＩＬ−１７を産生するＴｈ１７細胞の分化を抑制する作用があることが示された。レチノイン酸は、生体内ではビタミンＡから誘導されるが、生体内濃度が恒常性により一定の濃度に保たれていることが知られている。すなわち、ビタミンＡを多量に摂取しても生体内のレチノイン酸濃度に大きな変動はないが、フコキサンチン及びその代謝物のフコキサンチノールは、摂取後、生体内での代謝の影響を受けにくく、生体内で効果を発揮することができるという利点を有すると考えられた。

［実施例３］
ワカメ抽出物の作製並びに抽出物中のフコキサンチン含量及び脂肪酸含量の測定を行った。乾燥ワカメ（粉末）３０ｇに８０％エタノールを２００ｍＬ添加し、３０分攪拌した。その後、吸引ろ過により上清を回収し、回収した上清をエバポレーターにより濃縮し、分析に用いるため、１００％エタノール５０ｍＬに溶解した。分析値の結果を表に示す。ω−３多価不飽和脂肪酸である、オクタデカテトラエン酸、エイコサペンタエン酸及びα−リノレン酸ならびにフコキサンチン（３６．６ｍｇ）が回収された。

本発明のＩＬ−１７産生抑制剤、Ｔｈ１７細胞分化抑制剤及びＩＬ−１７又はＴｈ１７細胞に関連する疾患又は状態の予防又は治療用組成物は、医薬品、食品及び試薬等の分野において産業上の利用可能性を有する。本発明によれば、上記の剤及び組成物を安価に簡便に提供することができる。

Claims

フコキサンチン、フコキサンチノール又はそれらの塩若しくはエステルを含有する、ＩＬ−１７又はＴｈ１７細胞に関連する疾患又は状態の予防又は治療用医薬組成物であって、前記疾患又は状態が、全身性エリテマトーデス及び多発性硬化症からなる群から選択される、医薬組成物。
フコキサンチン、フコキサンチノール又はそれらの塩若しくはエステルが海藻由来である、請求項１に記載の医薬組成物。
オクタデカテトラエン酸、エイコサペンタエン酸及びα−リノレン酸から選択されるω−３多価不飽和脂肪酸をさらに含有する、請求項２に記載の医薬組成物。
フコキサンチン、フコキサンチノール又はそれらの塩若しくはエステルが、褐藻又は褐藻から作成した海藻溶液をエタノールで抽出した褐藻抽出物由来である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
フコキサンチン、フコキサンチノール又はそれらの塩若しくはエステルを、１ｇ当り、乾燥物換算で、１ｍｇ〜１００ｍｇ含有する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
フコキサンチン、フコキサンチノール又はそれらの塩若しくはエステルを、５００ｍＬ当り、乾燥物換算で、５ｍｇ〜２５００ｍｇ含有する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の医薬組成物。