WO2022075376A1 - トランスサイレチン四量体安定化剤、及び、トランスサイレチンアミロイドーシス予防剤又は進行抑制剤 - Google Patents

Abstract

トランスサイレチン四量体安定化剤、及び、トランスサイレチンアミロイドーシスの予防剤又は進行抑制剤を提供する。　本発明は、グラブリジン、グラブレン及びグラブロールを含有する、トランスサイレチン四量体安定化剤、及び、グラブリジン、グラブレン及びグラブロールを含有する、トランスサイレチンアミロイドーシス予防剤又は進行抑制剤に関する。

Description

トランスサイレチン四量体安定化剤、及び、トランスサイレチンアミロイドーシス予防剤又は進行抑制剤

　本発明は第一に、トランスサイレチンの四量体を安定化するための、トランスサイレチン四量体安定化剤に関する。

　本発明は第二に、トランスサイレチンが異常凝集して生じるアミロイド線維が沈着するトランスサイレチンアミロイドーシスの予防又は進行抑制するための、トランスサイレチンアミロイドーシス予防剤又は進行抑制剤に関する。

　トランスサイレチンは、βシートリッチなホモ四量体タンパク質であり、１つのサブユニットは１２７残基アミノ酸により構成される。トランスサイレチンは血液及び脳脊髄液中でサイロキシン（Ｔ４）と結合し輸送する機能を有することが知られている。トランスサイレチンの四量体は、二量体と二量体との連結部に、２つのサイロキシン結合部位（Ｔ４結合部位）を有する（非特許文献１）。

　トランスサイレチン四量体は生理的条件において通常は安定であるが、遺伝子異常や老化等の要因が加わり不安定化し単量体に分離すると、ミスフォールディングを生じ、アミロイド生成性中間体の凝集物となり、その結果アミロイド化してアミロイド線維の沈着が生じ、アミロイドーシスの臨床症状を引き起こす。トランスサイレチンアミロイドーシスとしては、遺伝的に変異したトランスサイレチン（例えばＶ３０Ｍ変異トランスサイレチン）がアミロイド化し全身の諸臓器に沈着し臓器障害を引き起こす家族性アミロイドポリニューロパチー（ＦＡＰ）、高齢により野生型トランスサイレチンがアミロイド化し、心臓、腱等に沈着し病気を引き起こす老人性全身性アミロイドーシス（ＳＡＡ）等が知られている。

　トランスサイレチン四量体の安定化及びアミロイド形成の阻害については、トランスサイレチンのＴ４結合部位に結合する低分子化合物により達成することができ、種々の医薬品も開発されてはいるものの、副作用が生じることに加えて、１回の投薬に係る費用が高いため患者さんの負担も大きい。また、トランスサイレチンアミロイドーシスは一度発症すると完治が困難な疾患であるだけでなく、加齢に伴い高確率で発症することから、予防策の構築にも注目が集まりつつある。

　非特許文献１及び非特許文献２には、甘草グラブラポリフェノールの１つであるグラブリジンの２分子がトランスサイレチン四量体に結合して安定化し、アミロイド線維の形成を阻害する作用を有することが記載されている。

　甘草は、中国、ヨーロッパ、ロシア、アフガニスタン、イラン、パキスタン等に広く分布するマメ科カンゾウ属（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ属）の植物であり、その根などを食品および生薬として利用してきた長い摂取経験がある植物である。

Yokoyama, T. et al., Biol. Pharm. Bull. 41, 979-984 (2018) Yokoyama, T. et al., J. Med. Chem. 57, 1090-1096 (2014)

　トランスサイレチンアミロイドーシスの予防又は進行抑制には、トランスサイレチン四量体を安定化することが有効であることから、トランスサイレチン四量体の安定化製剤を開発し、発症前から摂取することができれば、トランスサイレチンアミロイドーシスを予防することが可能となる。そこで、本発明は、トランスサイレチン四量体安定化剤、及び、トランスサイレチンアミロイドーシスの予防剤又は進行抑制剤を提供することを目的とする。

　上述したように、非特許文献１及び非特許文献２には、グラブリジン単体が、トランスサイレチン四量体の安定化に寄与することについては記載されているが、グラブリジンに加えて他のポリフェノール化合物を含む混合物のトランスサイレチン四量体の安定化効果に対しては従来検討されていなかった。
　本発明者らは、鋭意検討した結果、グラブリジン、グラブレン及びグラブロールを含むポリフェノール混合物が、トランスサイレチン四量体安定化剤、及び、トランスサイレチンアミロイドーシス予防剤又は進行抑制剤の活性成分として特に有効であることを見出し、以下の発明を完成するに至った。

（１）グラブリジン、グラブレン及びグラブロールを含有する、トランスサイレチン四量体安定化剤。
（２）４’－Ｏ－メチルグラブリジンを更に含有する、（１）に記載の剤。
（３）以下に示すａ）の条件でのＨＰＬＣ分析において、ｂ）、ｃ）及びｄ）の特性：
ａ）移動相：アセトニトリル：メタノール＝１：１（移動相Ａ）と２０ｍＭリン酸（移動相Ｂ）のグラジエント、カラム：ＯＤＳカラム、流速：１．０ｍＬ／分、温度：４０℃、検出器：ＵＶ検出器、検出波長：２８２ｎｍ、
ｂ）グラブリジンピーク強度に対するグラブレンピーク強度の割合が３８％以上４１％以下、
ｃ）グラブリジンピーク強度に対するグラブロールピーク強度の割合が４４％以上４７％以下、
ｄ）グラブリジンピーク強度に対する４’－Ｏ－メチルグラブリジン強度の割合が１５％以上２０％以下、
のうちいずれか１つ以上を示す、（２）に記載の剤。
（４）グリチルリチン酸の含有量が０．００５重量％以下である、（１）～（３）のいずれかに記載の剤。
（５）グラブリジン、グラブレン及びグラブロールを含有する、トランスサイレチンアミロイドーシス予防剤又は進行抑制剤。
（６）トランスサイレチンアミロイドーシスが、老人性全身性アミロイドーシス又は家族性アミロイドポリニューロパチーである、（５）に記載の剤。
（７）４’－Ｏ－メチルグラブリジンを更に含有する、（５）又は（６）に記載の剤。
（８）以下に示すａ）の条件でのＨＰＬＣ分析において、ｂ）、ｃ）及びｄ）の特性：
ａ）移動相：アセトニトリル：メタノール＝１：１（移動相Ａ）と２０ｍＭリン酸（移動相Ｂ）のグラジエント、カラム：ＯＤＳカラム、流速：１．０ｍＬ／分、温度：４０℃、検出器：ＵＶ検出器、検出波長：２８２ｎｍ、
ｂ）グラブリジンピーク強度に対するグラブレンピーク強度の割合が３８％以上４１％以下、
ｃ）グラブリジンピーク強度に対するグラブロールピーク強度の割合が４４％以上４７％以下、
ｄ）グラブリジンピーク強度に対する４’－Ｏ－メチルグラブリジン強度の割合が１５％以上２０％以下、
のうちいずれか１つ以上を示す、（７）に記載の剤。
（９）錠剤、カプセル剤、顆粒剤又は散剤の形態である、（１）～（８）のいずれかに記載の剤。
（１０）グラブリジンの含有量が１回の摂取又は投与単位あたり４ｍｇ～１２００ｍｇである（１）～（９）のいずれかに記載の剤。

（１２）グラブリジン、グラブレン及びグラブロールを含むポリフェノール混合物の、トランスサイレチン四量体を安定化するための組成物の製造のための使用。
　ここで前記組成物は、好ましくは、錠剤、カプセル剤、顆粒剤又は散剤の形態である。また前記組成物は、好ましくは、グラブリジンの含有量が１回の摂取又は投与単位あたり４ｍｇ～１２００ｍｇである。
（１３）グラブリジン、グラブレン及びグラブロールを含むポリフェノール混合物の、トランスサイレチン四量体を安定化するための医薬の製造のための使用。
　ここで前記医薬は、好ましくは、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤等の経口投与用製剤の形態である。また前記医薬は、好ましくは、グラブリジンの含有量が１回の摂取又は投与単位あたり４ｍｇ～１２００ｍｇである。
（１４）グラブリジン、グラブレン及びグラブロールを含むポリフェノール混合物を、生体外に存在するトランスサイレチン四量体に接触させること、及び、
　前記トランスサイレチン四量体の単量体化及び／又は前記トランスサイレチン四量体からのアミロイド線維形成を抑制すること、
を含む、生体外でトランスサイレチン四量体を安定化する方法。
（１５）グラブリジン、グラブレン及びグラブロールを含むポリフェノール混合物を、トランスサイレチン四量体の安定化を必要とする対象に投与すること、及び、
　前記対象において、前記トランスサイレチン四量体の単量体化及び／又は前記トランスサイレチン四量体からのアミロイド線維形成を抑制すること、
を含む、前記対象においてトランスサイレチン四量体を安定化する方法。
　ここで前記投与では、前記ポリフェノール混合物を含有する錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤等の経口投与用製剤の形態の組成物を、前記対象に経口投与することが好ましい。また前記投与では、前記ポリフェノール混合物を、ポリフェノールの総量として１日あたり０．０１～１００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは０．１～３０ｍｇ／ｋｇ体重となるように投与することが好ましい。
（１６）生体外又は生体内でトランスサイレチン四量体を安定化するための、グラブリジン、グラブレン及びグラブロールを含むポリフェノール混合物。
（１７）前記ポリフェノール混合物が、４’－Ｏ－メチルグラブリジンを更に含有する、（１２）に記載の使用、（１３）に記載の使用、（１４）に記載の方法、（１５）に記載の方法、又は、（１６）に記載のポリフェノール混合物。
　ここで、４’－Ｏ－メチルグラブリジンを更に含有する前記ポリフェノール混合物は、以下に示すａ）の条件でのＨＰＬＣ分析において、ｂ）、ｃ）及びｄ）の特性：
ａ）移動相：アセトニトリル：メタノール＝１：１（移動相Ａ）と２０ｍＭリン酸（移動相Ｂ）のグラジエント、カラム：ＯＤＳカラム、流速：１．０ｍＬ／分、温度：４０℃、検出器：ＵＶ検出器、検出波長：２８２ｎｍ、
ｂ）グラブリジンピーク強度に対するグラブレンピーク強度の割合が３８％以上４１％以下、
ｃ）グラブリジンピーク強度に対するグラブロールピーク強度の割合が４４％以上４７％以下、
ｄ）グラブリジンピーク強度に対する４’－Ｏ－メチルグラブリジン強度の割合が１５％以上２０％以下、
のうちいずれか１つ以上を示すことが更に好ましい。
（１８）前記ポリフェノール混合物におけるグリチルリチン酸の含有量が０．００５重量％以下である、（１２）に記載の使用、（１３）に記載の使用、（１４）に記載の方法、（１５）に記載の方法、又は、（１６）に記載のポリフェノール混合物。

（１９）グラブリジン、グラブレン及びグラブロールを含有するポリフェノール混合物の、トランスサイレチンアミロイドーシスの予防又は進行抑制のための組成物の製造のための使用。
　ここで前記組成物は、好ましくは、錠剤、カプセル剤、顆粒剤又は散剤の形態である。また前記組成物は、好ましくは、グラブリジンの含有量が１回の摂取又は投与単位あたり４ｍｇ～１２００ｍｇである。
（２０）グラブリジン、グラブレン及びグラブロールを含有するポリフェノール混合物の、トランスサイレチンアミロイドーシスの予防又は進行抑制のための医薬の製造のための使用。
　ここで前記医薬は、好ましくは、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤等の経口投与用製剤の形態である。また前記医薬は、好ましくは、グラブリジンの含有量が１回の摂取又は投与単位あたり４ｍｇ～１２００ｍｇである。
（２１）グラブリジン、グラブレン及びグラブロールを含有するポリフェノール混合物を、トランスサイレチンアミロイドーシスの予防又は進行の抑制を必要とする対象に投与すること、及び、
　前記対象において、トランスサイレチン四量体の単量体化及び／又はトランスサイレチン四量体からのアミロイド線維形成を抑制すること、
を含む、前記対象においてトランスサイレチンアミロイドーシスを予防又は進行抑制する方法。
　ここで前記投与では、前記ポリフェノール混合物を含有する錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤等の経口投与用製剤の形態の組成物を、前記対象に経口投与することが好ましい。また前記投与では、前記ポリフェノール混合物を、ポリフェノールの総量として１日あたり０．０１～１００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは０．１～３０ｍｇ／ｋｇ体重となるように投与することが好ましい。
（２２）トランスサイレチンアミロイドーシスを予防又は進行抑制するための、グラブリジン、グラブレン及びグラブロールを含有するポリフェノール混合物。
（２３）トランスサイレチンアミロイドーシスが、老人性全身性アミロイドーシス又は家族性アミロイドポリニューロパチーである、（１９）に記載の使用、（２０）に記載の使用、（２１）に記載の方法、又は、（２２）に記載のポリフェノール混合物。
（２４）前記ポリフェノール混合物が、４’－Ｏ－メチルグラブリジンを更に含有する、（１９）に記載の使用、（２０）に記載の使用、（２１）に記載の方法、又は、（２２）に記載のポリフェノール混合物。
　ここで、４’－Ｏ－メチルグラブリジンを更に含有する前記ポリフェノール混合物は、以下に示すａ）の条件でのＨＰＬＣ分析において、ｂ）、ｃ）及びｄ）の特性：
ａ）移動相：アセトニトリル：メタノール＝１：１（移動相Ａ）と２０ｍＭリン酸（移動相Ｂ）のグラジエント、カラム：ＯＤＳカラム、流速：１．０ｍＬ／分、温度：４０℃、検出器：ＵＶ検出器、検出波長：２８２ｎｍ、
ｂ）グラブリジンピーク強度に対するグラブレンピーク強度の割合が３８％以上４１％以下、
ｃ）グラブリジンピーク強度に対するグラブロールピーク強度の割合が４４％以上４７％以下、
ｄ）グラブリジンピーク強度に対する４’－Ｏ－メチルグラブリジン強度の割合が１５％以上２０％以下、
のうちいずれか１つ以上を示すことが更に好ましい。
（２５）前記ポリフェノール混合物におけるグリチルリチン酸の含有量が０．００５重量％以下である、（１９）に記載の使用、（２０）に記載の使用、（２１）に記載の方法、又は、（２２）に記載のポリフェノール混合物。

　本明細書は本願の優先権の基礎となる日本国特許出願番号２０２０－１６９８４２号の開示内容を包含する。

　本発明に係るトランスサイレチン四量体安定化剤は、トランスサイレチンの四量体を安定に維持することができ、単量体化及びアミロイド線維形成を抑制することができる。

　本発明に係るトランスサイレチンアミロイドーシス予防剤又は進行抑制剤は、家族性アミロイドポリニューロパチー（ＦＡＰ）、老人性全身性アミロイドーシス（ＳＡＡ）等のトランスサイレチンアミロイドーシスを予防又は抑制することができる。

図１左側は、実施例３においてポリフェノール混合物含有中鎖脂肪酸トリグリセリド溶液及びグラブリジンを、各々グラブリジンとして０、１０、５０μＭとなるように添加しインキュベートした血清中での、トランスサイレチンの単量体の、トランスサイレチン総量に対する比（ｍｏｎｏｍｅｒ／ｔｏｔａｌ）を示す。図１右側は、実施例３においてポリフェノール混合物含有中鎖脂肪酸トリグリセリド溶液及びグラブリジンを、各々グラブリジンとして０、１０、５０μＭとなるように添加しインキュベートした血清中での、トランスサイレチンの四量体の、トランスサイレチン総量に対する比（ｔｅｔｒａｍｅｒ／ｔｏｔａｌ）を示す。白丸はグラブリジンを添加した血清での前記比を示す。黒丸はポリフェノール混合物含有中鎖脂肪酸トリグリセリド溶液を添加した血清での前記比を示す。 図２は、実施例４においてポリフェノール混合物含有中鎖脂肪酸トリグリセリド溶液をヒトに４週間摂取（摂取量：６００ｍｇ／ｄａｙ）させ経時的に得た血漿中での、トランスサイレチンの単量体の、四量体に対する比（ｍｏｎｏｍｅｒ／ｔｅｔｒａｍｅｒ）を示す。前記比が低いことは、トランスサイレチン四量体の安定性が高いことを示す。

＜ポリフェノール＞
　本発明に係るトランスサイレチン四量体安定化剤及びトランスサイレチンアミロイドーシス予防剤又は進行抑制剤は、有効成分として、グラブリジン（ｇｌａｂｒｉｄｉｎ）、グラブレン（ｇｌａｂｒｅｎｅ）及びグラブロール（ｇｌａｂｒｏｌ）を含有し、より好ましくは、４’－Ｏ－メチルグラブリジン（４’－Ｏ－ｍｅｔｈｙｌｇｌａｂｒｉｄｉｎ）を更に含有する。本明細書では、有効成分として用いられる前記ポリフェノールの組み合わせを「ポリフェノール混合物」と表現する場合がある。本発明者らは、前記ポリフェノール混合物が、従来からトランスサイレチン四量体を安定化する作用を奏することが知られていたグラブリジンを単独で用いた場合と比較して、顕著にトランスサイレチン四量体安定化作用が高いことを見出した。

　前記ポリフェノール混合物に含まれる各ポリフェノールは、プレニルフラボノイドに分類される化合物群であり、ジフェニルプロパンに１つ以上のＣ５イソプレン単位が結合した構造を有する。

　前記ポリフェノール混合物は更に、グリシクマリン（ｇｌｙｃｙｃｏｕｍａｒｉｎ）、グリシロール（ｇｌｙｃｙｒｏｌ）、グリシリン（ｇｌｙｃｙｒｉｎ）、リクイリチゲニン（ｌｉｑｕｉｒｉｔｉｇｅｎｉｎ）、グリコリコン（ｇｌｉｃｏｒｉｃｏｎｅ）、３’－ヒドロキシ－４’－Ｏ－メチルグラブリジン（３’－ｈｙｄｒｏｘｙ－４’－Ｏ－ｍｅｔｈｙｌｇｌａｂｒｉｄｉｎ）、グリウラリンＢ（ｇｌｙｕｒａｌｌｉｎ　Ｂ）、リコクマロン（ｌｉｃｏｃｏｕｍａｒｏｎｅ）、ガンカオニンＩ（ｇａｎｃａｏｎｉｎ  Ｉ）、デヒドログリアスペリンＤ（ｄｅｈｙｄｒｏｇｌｙａｓｐｅｒｉｎ  Ｄ）、エチナチン（ｅｃｈｉｎａｔｉｎ）、イソリコフラボノール（ｉｓｏｌｉｃｏｆｌａｖｏｎｏｌ）、デヒドログリアスペリンＣ（ｄｅｈｙｄｒｏｇｌｙａｓｐｅｒｉｎ  Ｃ）、グリアスペリンＢ（ｇｌｙａｓｐｅｒｉｎ　Ｂ）、グリチルイソフラバノン（ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｓｏｆｌａｖａｎｏｎｅ）、ルピワイテオン（ｌｕｐｉｗｉｇｈｔｅｏｎｅ）、グリアスペリンＤ（ｇｌｙａｓｐｅｒｉｎ　Ｄ）、セミリコイソフラボンＢ（ｓｅｍｉｌｉｃｏｉｓｏｆｌａｖｏｎｅ　Ｂ）等の、他のポリフェノールを含有するものであってよい。

　前記他のポリフェノールとしては更に、ゲニステイン、ダイゼイン、ケルセチン、ルチン、カテキン、エピガロカテキンガレート、ヘスペリジン、ノビレチン、チロソール、ヒドロキシチロソール、オレウロペイン、ナリンゲニン、コーヒー酸、リンゴポリフェノール、茶ポリフェノール、没食子酸等が挙げられる。前記他のポリフェノールは、好ましくは、ゲニステイン、ダイゼイン、ケルセチン、ルチン、カテキン、エピガロカテキンガレート、ヘスペリジン、ノビレチン、ナリンゲニン、コーヒー酸、リンゴポリフェノール、茶ポリフェノールである。これらの他のポリフェノールは単独で用いても２種以上を混合して用いてもよい。

　前記ポリフェノール混合物中の各ポリフェノールは、塩、エステル、配糖体等の形態で存在していてもよい。ポリフェノールの塩としては、医薬品、飲食品、飼料等の最終的な用途において許容される酸、例えば塩酸、硫酸、メタンスルホン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酢酸、安息香酸、シュウ酸、クエン酸、酒石酸、炭酸、又はリン酸との塩、或いは、最終的な用途において許容される塩基との塩、例えばアルカリ金属塩、例えばナトリウム、カリウム塩；アルカリ土類金属塩、例えばカルシウムまたはマグネシウム塩；および好適な有機配位子、例えば第四級アンモニウムとの塩が例示できる。ポリフェノールのエステルとしては脂肪酸エステルが例示でき、具体的には、オレイン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、リノール酸、リノレン酸などの長鎖脂肪酸、および酢酸、酪酸などの短または中鎖脂肪酸とのエステルが例示できる。ポリフェノールの配糖体としては、糖成分として単糖、二糖、三糖、オリゴ糖、多糖等が結合した配糖体が例示できる。

　前記ポリフェノール混合物は、甘草疎水性抽出物又はその精製物として、本発明に係るトランスサイレチン四量体安定化剤及びトランスサイレチンアミロイドーシス予防剤又は進行抑制剤に含まれていても良い。

　前記ポリフェノール混合物の各ポリフェノールは、化学的に合成されたものであってもよい。前記ポリフェノール混合物の各ポリフェノールはまた、植物、微生物、動物等の生物試料から抽出され、必要に応じて精製されたものであってもよい。前記ポリフェノール混合物の各ポリフェノールはまた、前記ポリフェノールを生産する能力を有する微生物を用いた発酵により生産されたものであってもよい。前記ポリフェノールを生産する能力を有する微生物は、遺伝子組み換えされた微生物であってもよいし、野生型の微生物であってもよい。

　前記ポリフェノール混合物は、好ましい実施形態において、以下に示すａ）の条件でのＨＰＬＣ分析において、ｂ）、ｃ）及びｄ）の特性：
ａ）移動相：アセトニトリル：メタノール＝１：１（移動相Ａ）と２０ｍＭリン酸（移動相Ｂ）のグラジエント、カラム：ＯＤＳカラム、流速：１．０ｍＬ／分、温度：４０℃、検出器：ＵＶ検出器、検出波長：２８２ｎｍ、
ｂ）グラブリジンピーク強度（ピーク面積）に対するグラブレンピーク強度（ピーク面積）の割合が３８％以上４１％以下、
ｃ）グラブリジンピーク強度（ピーク面積）に対するグラブロールピーク強度（ピーク面積）の割合が４４％以上４７％以下、
ｄ）グラブリジンピーク強度（ピーク面積）に対する４’－Ｏ－メチルグラブリジン強度（ピーク面積）の割合が１５％以上２０％以下、
のうちいずれか１つ以上、より好ましくは２つ以上、特に好ましくは全て、を示すように混合されていることが好ましい。

　前記グラブリジンピーク強度（ピーク面積）に対するグラブレンピーク強度（ピーク面積）の割合は、上述した範囲であれば特に制限されないが、前記ピーク強度の下限としては例えば、３８％、３９％が好ましく、上限としては４１％、４０％が好ましい。

　グラブリジンピーク強度（ピーク面積）に対するグラブロールピーク強度（ピーク面積）の割合は、上述した範囲であれば特に制限されないが、前記ピーク強度の下限としては例えば、４４％、４５％が好ましく、上限としては４７％、４６％が好ましい。

　グラブリジンピーク強度（ピーク面積）に対する４’－Ｏ－メチルグラブリジン強度（ピーク面積）の割合、上述した範囲であれば特に制限されないが、前記ピーク強度の下限としては例えば、１５％、１６％、１７％が好ましく、上限としては２０％、１９％、１８％が好ましい。

　前記ａ）において、移動相Ａと移動相Ｂとのグラジエントは、好ましくは、移動相Ａと移動相Ｂとの全量あたりの移動相Ａの比率を、分析開始２０分まで５０％（ｖ／ｖ）で一定とし、２０分以降７５分後に８０％（ｖ／ｖ）となるように一定比率で上昇させ、７５分以降８０分まで１００％（ｖ／ｖ）で一定とし、８０分以降１００分まで５０％（ｖ／ｖ）で一定とする条件である。
　前記ａ）において、ＯＤＳカラムとしては例えばＹＭＣ　Ｊ’ｓｐｈｅｒｅ　ＯＤＳ－Ｈ８０（株式会社ワイエムシィ）を用いることができる。ＯＤＳカラムのサイズは内径４．６ｍｍ×長さ２５０ｍｍが例示できる。

　ポリフェノール量の測定法としては、例えば、酒石酸鉄法、プルシアンブルー法、フォリン－チオカルト法、フォリン－デニス法などの比色法やＨＰＬＣ法による成分ごとの測定があり、どの測定法を用いてもよいが、ポリフェノール全体量の測定にはフォリン－デニス法またはフォリン－チオカルト法が使われることが多い。フォリン－デニス法またはフォリン－チオカルト法の場合、標準物質を用いることで標準物質による検量線を作成し、標準物質換算で求めることができる。例えばグラブリジンを標準物質とすることができる。具体的には、例えば後述する実施例記載の方法により、本発明に係るトランスサイレチン四量体安定化剤及びトランスサイレチンアミロイドーシス予防剤又は進行抑制剤に含まれるポリフェノール成分の含有量を、グラブリジン換算値として求めることができる。

＜甘草疎水性抽出物＞
　前記ポリフェノール混合物は、上記の通り、甘草抽出物の形態で使用することができる。この実施形態において、抽出物の原料となる甘草は、グリキルリーザ（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ）属に属する植物であれば特に限定されない。甘草の具体例としては、グリキルリーザ・ウラレンシス（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ　ｕｒａｌｅｎｓｉｓ（Ｇ．ｕｒａｌｅｎｓｉｓ））、グリキルリーザ・インフラータ（Ｇ．ｉｎｆｌａｔａ）、グリキルリーザ・グラブラ（Ｇ．ｇｌａｂｒａ）、グリキルリーザ・エウリカーパ（Ｇ．ｅｕｒｙｃａｒｐａ）、グリキルリーザ・アスペラ（Ｇ．ａｓｐｅｒａ）等が挙げられる。好ましくは、Ｇ．ｕｒａｌｅｎｓｉｓ、Ｇ．ｉｎｆｌａｔａ、Ｇ．ｇｌａｂｒａ等であり、さらに好ましくは、Ｇ．ｇｌａｂｒａである。

　甘草抽出物を得るために用いる植物部位は、特に限定されず、甘草の全草、葉、茎、根(根茎)、花、種子等のいずれを用いてもよい。

　グラブリジン、グラブレン及びグラブロールは疎水性であるため、甘草抽出物としては甘草疎水性抽出物を使用することができる。

　前記ポリフェノール混合物を含む甘草疎水性抽出物は、甘草の疎水性成分を抽出して得た抽出物であればよく、甘草の抽出溶媒を含む抽出液や、前記抽出液から前記抽出溶媒を一部又は全部除去した前記抽出液の濃縮物又は乾燥物、或いは、前記抽出液、前記濃縮物又は前記乾燥物の処理物が例示できる。前記処理物としては、前記抽出液、前記濃縮物又は前記乾燥物の希釈物や、前記抽出液、前記濃縮物又は前記乾燥物から、前記ポリフェノールを濃縮又は精製（粗精製を含む）して、前記ポリフェノールの濃度を高めた処理物が例示できる。甘草疎水性抽出物を甘草から得る場合、その方法は特に限定されない。例えば甘草またはその粉末、あるいは甘草培養細胞などからその疎水性成分を、有機溶媒を用いた抽出等により得ることができる。あるいは、あらかじめ甘草の親水性成分を水又はアルカリ水溶液を用いて抽出・除去した後、その甘草残渣または残渣を乾燥させたものから、甘草中の疎水性成分を、有機溶媒を用いた抽出により得ることができる。あるいは、上記方法で一度抽出された疎水性抽出物を、さらに別種の有機溶媒で抽出することにより得ることができる。

　抽出溶媒として用いる有機溶媒は、医薬品や食品、食品添加物などの製造、加工に使用が許可されたものが好ましい。アルコール類（例えばエタノール）、エステル類（例えば酢酸エチル）、ケトン類（例えばアセトン）、炭化水素類（例えばヘキサン）等の有機溶媒や油脂類（例えば中鎖脂肪酸トリグリセリド）等が挙げられる。有機溶媒は好ましくはアルコール類、ケトン類又は油脂類であり、具体的にはエタノール、アセトン、中鎖脂肪酸トリグリセリド等が好ましい。前記有機溶媒は単独で用いても２種以上を混合して用いてもよい。またこれら有機溶媒の含水溶媒を用いても良い。但し、後述するグリチルリチン酸（グリチルリチン）の含有量を低く抑えるためには、抽出溶媒の含水割合は低い方が好ましい。

　甘草疎水性抽出物は、有機溶媒を用いて抽出された抽出物をそのまま使用してもよいが、さらに精製工程、たとえばカラム処理、脱臭処理、脱色処理などにより粗精製または精製して使用してもよい。

　甘草疎水性抽出物中のポリフェノールの含有量は特に限定されないが、好ましくは５０重量％以上、より好ましくは６０重量％以上、より好ましくは７０重量％以上である。

＜トランスサイレチン四量体安定化剤＞
　本発明に係るトランスサイレチン四量体安定化剤は、トランスサイレチン四量体を安定化し、トランスサイレチンの単量体化を抑制する作用を有する。トランスサイレチン四量体を安定化することで、トランスサイレチンのアミロイド化を抑制することができる。本発明者らは、前記ポリフェノール混合物が、従来からトランスサイレチン四量体を安定化する作用を奏することが知られていたグラブリジン単独と比較して、顕著にトランスサイレチン四量体安定化作用が高いことを見出した。

　安定化の対象となるトランスサイレチンの起源は特に限定されないが、通常は哺乳動物であり、好ましくはヒトである。トランスサイレチンのアミノ酸配列は野生型であってもよいし、変異を有していてもよい。

　一実施形態において、本発明に係るトランスサイレチン四量体安定化剤は、医薬品、飲食品等として対象に投与されて又は対象が摂取して、対象の生体内、例えば血液又は脳脊髄液中、でトランスサイレチン四量体を安定化する用途で用いることができる。

　また、本発明の別の一実施形態は、
　グラブリジン、グラブレン及びグラブロールを含むポリフェノール混合物を、トランスサイレチン四量体の安定化を必要とする対象に投与すること、及び、
　前記対象において、前記トランスサイレチン四量体の単量体化及び／又は前記トランスサイレチン四量体からのアミロイド線維形成を抑制すること、
を含む、前記対象においてトランスサイレチン四量体を安定化する方法
に関する。

　本発明に係るトランスサイレチン四量体安定化剤並びに本発明に係るトランスサイレチン四量体を安定化する方法の対象は、トランスサイレチン四量体の安定化を必要とするヒト又は非ヒト動物であり、好ましくはヒトである。非ヒト動物としては、例えば、養殖動物、愛玩動物、競技動物などが挙げられる。養殖動物としては特に限定されないが、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ラクダ、ラマなどの家畜；マウス、ラット、モルモット、ウサギなどの実験動物；ニワトリ、アヒル、七面鳥、駝鳥などの家禽が挙げられる。愛玩動物としては特に限定されないが、イヌ、ネコなどが挙げられる。競技動物としては特に限定されないが、競走馬などが挙げられる。非ヒト動物は哺乳動物であることが特に好ましい。

　前記実施形態に係るトランスサイレチン四量体安定化剤の対象への投与頻度や投与量は、対象の年齢、性別、状態などに応じて適宜調整すればよい。一日あたりのトランスサイレチン四量体安定化剤の投与量は適宜調整すればよいが、例えば、ポリフェノールの総量として１日あたり０．０１～１００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは０．１～３０ｍｇ／ｋｇ体重、であることができる。一日あたりの投与回数も適宜調整すればよいが、例えば、１回以上、２回以上、５回以下とすることができる。上記の投与量及び投与頻度の例は対象が成人である場合に特に好ましい。投与経路は経口投与であってもよいし、非経口投与であってもよいが、好ましくは経口投与である。

　別の一実施形態において、本発明に係るトランスサイレチン四量体安定化剤は生体外のトランスサイレチン四量体を含む試料中に存在することで、前記試料中でトランスサイレチン四量体を安定化する用途で用いることもできる。前記試料としては、トランスサイレチン四量体を含む血液、脳脊髄液等の体液に由来する試料や、トランスサイレチン四量体を含む溶液が挙げられる。

　本発明の更に別の実施形態は、
グラブリジン、グラブレン及びグラブロールを含むポリフェノール混合物を、生体外に存在するトランスサイレチン四量体に接触させること、及び、
　前記トランスサイレチン四量体の単量体化及び／又は前記トランスサイレチン四量体からのアミロイド線維形成を抑制すること、
を含む、生体外でトランスサイレチン四量体を安定化する方法
に関する。

　トランスサイレチン四量体安定化剤は、前記ポリフェノール混合物を含有するものであればよく、更に１以上の他の成分を含む組成物（例えば、トランスサイレチン四量体を安定化するための組成物又は医薬）であってもよい。トランスサイレチン四量体安定化剤の好ましい形態については後述する。

＜トランスサイレチンアミロイドーシス予防剤又は進行抑制剤＞
　本発明に係るトランスサイレチンアミロイドーシス予防剤又は進行抑制剤は、トランスサイレチンアミロイドーシスの予防又は進行の抑制を必要とする対象に投与されると、トランスサイレチン四量体を安定化し、トランスサイレチンの単量体化を抑制する作用を通じて、トランスサイレチンのアミロイド化を予防又は進行抑制することができる。本発明者らは、前記ポリフェノール混合物が、従来からトランスサイレチン四量体を安定化する作用を奏することが知られていたグラブリジン単独と比較して、トランスサイレチン四量体安定化作用が顕著に高く、それに応じて、トランスサイレチンアミロイドーシスを予防又は進行抑制する活性が顕著に高いことを見出した。

　また、本発明の別の一実施形態は、
　グラブリジン、グラブレン及びグラブロールを含有するポリフェノール混合物を、トランスサイレチンアミロイドーシスの予防又は進行の抑制を必要とする対象に投与すること、及び、
　前記対象において、トランスサイレチン四量体の単量体化及び／又はトランスサイレチン四量体からのアミロイド線維形成を抑制すること、
を含む、前記対象においてトランスサイレチンアミロイドーシスを予防又は進行抑制する方法
に関する。

　一実施形態において、本発明に係るトランスサイレチンアミロイドーシス予防剤又は進行抑制剤並びに本発明に係るトランスサイレチンアミロイドーシスを予防又は進行抑制する方法の対象は、トランスサイレチンアミロイドーシスの予防又は進行の抑制を必要とするヒト又は非ヒト動物であり、好ましくはヒトである。対象の具体例は、トランスサイレチン四量体安定化剤に関して上記した通りである。

　前記実施形態に係るトランスサイレチンアミロイドーシス予防剤又は進行抑制剤の対象への投与頻度や投与量は、対象の年齢、性別、状態などに応じて適宜調整すればよい。一日あたりのトランスサイレチンアミロイドーシス予防剤又は進行抑制剤の投与量は適宜調整すればよいが、例えば、ポリフェノールの総量として１日あたり０．０１～１００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは０．１～３０ｍｇ／ｋｇ体重、であることができる。一日あたりの投与回数も適宜調整すればよいが、例えば、１回以上、５回以下とすることができる。上記の投与量及び投与頻度の例は対象が成人である場合に特に好ましい。投与経路は経口投与であってもよいし、非経口投与であってもよいが、好ましくは経口投与である。

　トランスサイレチンアミロイドーシス予防剤又は進行抑制剤は、前記ポリフェノール混合物を含有するものであればよく、更に１以上の他の成分を含む組成物（例えば、トランスサイレチンアミロイドーシスの予防又は進行抑制のための組成物又は医薬）であってもよい。トランスサイレチンアミロイドーシス予防剤又は進行抑制剤の好ましい形態については後述する。

　予防又は進行抑制の対象とするトランスサイレチンアミロイドーシスとしては、老人性全身性アミロイドーシス、及び、家族性アミロイドポリニューロパチーが例示できる。

＜トランスサイレチン四量体安定化剤及びトランスサイレチンアミロイドーシス予防剤又は進行抑制剤の好ましい実施形態＞
　以下の説明では、トランスサイレチン四量体安定化剤及びトランスサイレチンアミロイドーシス予防剤又は進行抑制剤を総称して「本発明に係る剤」とする。

　本発明に係る剤は、前記ポリフェノール混合物を含有するものであればよく、前記ポリフェノール混合物のみからなるものであってもよいし、前記ポリフェノール混合物と１以上の他の成分とを含む組成物であってもよい。１以上の他の成分は、例えば、食品（通常の食品、特定保健用食品、機能性表示食品、ダイエタリーサプリメント等）、医薬品（ヒト用医薬品又は非ヒト動物用医薬品）、医薬部外品、化粧品、又は、飼料（家畜飼料又はペットフード）として許容される１以上の成分であることができる。食品、医薬品、医薬部外品、化粧品、又は、飼料として許容される１以上の他の成分としては、以下に説明する、本発明に係る剤が含み得る、前記ポリフェノール混合物以外の成分が例示できる。

　本発明に係る剤におけるグラブリジン、グラブレン及びグラブロール、或いは、グラブリジン、グラブレン、グラブロール及び４’－Ｏ－メチルグラブリジンの合計含有量は特に限定されないが、下限としては０．１重量％以上、１重量％以上が好ましく、４重量％以上、５重量％以上、９重量％以上、１０重量％以上がより好ましい。本発明に係る剤における前記合計含有量の上限は特に限定されず、多く含む方が好ましいが、他の有効成分を必要量含有する観点からは、９９重量％以下が好ましく、９０重量％以下がより好ましい。

　本発明に係る剤におけるグラブリジンの含有量は特に限定されないが、下限としては０．１重量％以上、１重量％以上、４重量％以上が好ましい。また上限についても特に限定されないが、他のポリフェノールや成分を混合する観点から９０重量％以下、８５重量％以下、８０重量％以下、７０重量％以下、６０重量％以下が好ましい。

　本発明に係る剤が、対象が摂取する又は対象に投与される場合、本発明に係る剤は、好ましくは、グラブリジンを１回の摂取又は投与単位あたり好ましくは０．４０～４０００ｍｇ、より好ましくは４ｍｇ～１２００ｍｇ含有する。本発明に係る剤が食品の場合、１回の摂取又は投与単位とは、１回に摂取される量である。例えば１回の摂取量が飲み切りの形態でビンや缶に包装されている場合や、個別に包装されている場合は、１回の摂取又は投与単位とは１包装単位を指す。本発明に係る剤が医薬品の場合、１回の摂取又は投与単位とは、推奨されている１回の投与量を指す。

　本発明に係る剤の好ましい実施形態では、グリチルリチン酸（グリチルリチンとも呼ばれる）の含有量が、重量基準で、組成物中のポリフェノールの含有量以下であるのが好ましく、さらにはグラブリジンの含有量以下であるのが好ましい。甘草疎水性抽出物中には、その抽出条件によっては、ポリフェノール以外の成分、例えば親水性成分であるグリチルリチン酸が含まれることがある。ポリフェノール混合物として甘草疎水性抽出物を含む本発明に係る剤では、長期間にわたり摂取又は投与するときの安全性の観点から、グリチルリチン酸の含有量は少ない方が好ましい。本発明に係る剤は、グリチルリチン酸を実質的に含まない、またはその含有量が低いことが好ましく、例えば０．００５重量％以下、好ましくは０．００１重量％以下である。

　本発明に係る剤は、さらに中鎖脂肪酸トリグリセリドを含有してもよい。前記ポリフェノール混合物或いはそれを含む甘草疎水性抽出物は、取り扱いの観点から中鎖脂肪酸トリグセリドに溶解した形で使用するのが好ましい。その場合使用される中鎖脂肪酸トリグリセリドは、炭素数が６～１２の脂肪酸から構成されるものであれば特に限定されないが、炭素数が８または１０の飽和脂肪酸から構成されるトリグリセリドが好ましく、炭素数８の飽和脂肪酸から構成されるトリグリセリドを主成分とするものがより好ましい。中鎖脂肪酸トリグリセリドの構成脂肪酸の比率としては、特に限定されないが、炭素原子数８～１０の脂肪酸の構成比率は５０重量％以上が好ましく、７０重量％以上がより好ましい。また、２０℃での比重が０．９４～０．９６、２０℃での粘度が２３～２８ｃＰの中鎖脂肪酸トリグリセリドが特に好ましい。これら中鎖脂肪酸トリグリセリドは、天然由来のものであってもよいし、エステル交換等により調製されたものであってもよい。

　また、中鎖脂肪酸トリグリセリドは、中鎖脂肪酸トリグリセリドを含むグリセリン脂肪酸エステルであってもよい。好ましくは中鎖脂肪酸トリグリセリドを５０重量％以上含むグリセリン脂肪酸エステル、より好ましくは中鎖脂肪酸トリグリセリドを７０重量％以上含むグリセリン脂肪酸エステルである。

　また本発明に係る剤においては、前記中鎖脂肪酸トリグリセリドとともに、部分グリセリドを更に含んでいてもよいし、中鎖脂肪酸トリグリセリドの代わりに、中鎖脂肪酸の部分グリセリドを用いることもできる。前記部分グリセリドは、部分グリセリドを含むグリセリン脂肪酸エステルであって、好ましくは部分グリセリドを５０重量％以上含むグリセリン脂肪酸エステル、より好ましくは部分グリセリドを７０重量％以上含むグリセリン脂肪酸エステルである。ここでの部分グリセリドとは、ジグリセリド（１，２－ジアシルグリセロール、１，３－ジアシルグリセロール）又はモノグリセリド（１－モノアシルグリセロール、２－モノアシルグリセロール）であり、いずれを用いてもよいし、２種以上が混合されたものを用いてもよい。加工性の観点からジグリセリドが好ましい。また、部分グリセリドは、天然由来のものであってもよいし、エステル交換等により調製されたものであってもよい。前記部分グリセリドを構成する脂肪酸残基は、炭素数４～２４のものが例示され、特に炭素原子数８～１０の中鎖脂肪酸残基が好ましく、用途に応じてそれらの飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸等を選択することが可能である。例えば、流動性が必要とされる場合は不飽和脂肪酸であることが好ましく、可塑性が必要とされる場合は飽和脂肪酸であることが好ましい。また、イソステアリン酸等の分岐脂肪酸を用いることも可能である。

　本発明に係る剤は、前記ポリフェノール混合物以外に、製剤化に用いられる他の成分を含むことができる。製剤化に用いられる他の成分としては、例えば、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、結合剤、酸化防止剤、着色剤、凝集防止剤、吸収促進剤、有効成分の溶解補助剤、安定化剤、油脂、粘度調整剤等が挙げられる。

　前記賦形剤としては特に制限されないが、例えば、白糖、乳糖、ブドウ糖、コーンスターチ、マンニトール、結晶セルロース、リン酸カルシウム、硫酸カルシウム、硫酸マグネシウム等を挙げることができる。

　前記崩壊剤としては特に制限されないが、例えば、でんぷん、寒天、クエン酸カルシウム、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、デキストリン、結晶セルロース、カルボキシメチルセルロース、トラガント等を挙げることができる。

　前記滑沢剤としては特に制限されないが、例えば、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレングリコール、シリカ、硬化植物油等を挙げることができる。

　前記結合剤としては特に制限されないが、例えば、エチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、トラガント、シェラック、ゼラチン、アラビアゴム、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、ソルビトール等を挙げることができる。

　前記酸化防止剤としては、特に制限されないが、例えば、アスコルビン酸、トコフェロール、亜硫酸水素ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、ピロ亜硫酸ナトリウム、クエン酸等を挙げることができる。

　前記着色剤としては特に制限されないが、例えば、医薬品、食品に添加することが許可されているもの等を挙げることができる。

　前記凝集防止剤としては特に制限されないが、例えば、ステアリン酸、タルク、軽質無水ケイ酸、含水二酸化ケイ酸等を挙げることができる。

　前記吸収促進剤としては特に制限されないが、例えば、高級アルコール類、高級脂肪酸類、ショ糖脂肪酸エステルやソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル等の界面活性剤等を挙げることができる。

　前記有効成分の溶解補助剤としては特に限定されないが、フマル酸、コハク酸、リンゴ酸等の有機酸等が挙げられる。

　前記安定化剤としては特に制限されないが、例えば、安息香酸、安息香酸ナトリウム、パラオキシ安息香酸エチル、プロピレングルコール等が挙げられる。

　前記油脂成分としては特に限定されず、例えば、コーン油、ナタネ油、ハイエルシンナタネ油、大豆油、オリーブ油、紅花油、綿実油、ヒマワリ油、米糠油、シソ油、エゴマ油、アマニ油、月見草油、カカオ脂、落花生油、パーム油、パーム核油などの植物油、魚油、牛脂、豚脂、乳脂、卵黄油などの動物油、またはこれらを原料として分別、水添、エステル交換などを行った油脂、或いはこれらの混合油を使用することができる。

　前記粘度調整剤としては特に制限されないが、例えば、ミツロウ、モクロウ、ラノリン、微結晶性ワックス、流動パラフィン等が挙げられる。

　本発明に係る剤は、食品（通常の食品、特定保健用食品、機能性表示食品、ダイエタリーサプリメント等）、医薬品（ヒト用医薬品又は非ヒト動物用医薬品）、医薬部外品、化粧品、又は、飼料（家畜飼料又はペットフード）の形態であってもよく、好ましくは、食品又は医薬品の形態である。

　本発明に係る剤が、食品、医薬品、医薬部外品、飼料又は餌料の形態である場合、経口摂取用製剤の形態であってもよい。経口摂取用製剤としては、錠剤、カプセル剤（ハードカプセル、マイクロカプセル、ソフトカプセル）、顆粒剤、散剤、チュアブル製剤、シロップ、液剤などの、経口的に摂取出来る形態が挙げられる。カプセル剤とする場合のカプセル基材としては特に制限されず、牛骨、牛皮、豚皮、魚皮等を由来とするゼラチンをはじめとして、他の基材、例えば、食品添加物として使用しうるカラギーナン、アルギン酸等の海藻由来品やローカストビーンガムやグアーガム等の植物種子由来品、プルラン、カードラン等の微生物由来品やセルロース類を含む製造用剤も使用しうる。

　また、本発明に係る剤は、一般的な食品の形態であってもよい。一般的な食品としては、例えば、乳飲料、清涼飲料、栄養ドリンク、美容ドリンク等の飲料、チューインガム、チョコレート、キャンディー、ゼリー、ケーキ、ビスケット、クラッカー等の菓子類、アイスクリーム、氷菓等の冷菓類、うどん、中華麺、スパゲティー、即席麺等の麺類、蒲鉾、竹輪、半片等の練り製品、ドレッシング、マヨネーズ、ソース等の調味料、パン、ハム、雑炊、米飯、スープ、各種レトルト食品、各種冷凍食品等が挙げられるがこれらには限定されない。

　本発明に係る剤が特定保健用食品、機能性表示食品、ダイエタリーサプリメント等の、医薬品以外で健康維持のために摂取できる食品の形態である場合には、本発明に係る剤をパッケージに包み、当該パッケージに、トランスサイレチン四量体を安定化することや、トランスサイレチンアミロイドーシスを予防又は進行抑制することに関連する機能を表示してもよい。パッケージとしては、特に制限されないが、例えば、箱、容器、包装フィルム、包装紙等を挙げることができる。また、パッケージに表示する機能としては、これらに類する機能であれば、表現は異なっていても差し支えない。

　更に本発明に係る剤は、非経口剤の形態であってもよい。例えば皮膚に直接塗布する形態とすることもできる。この場合、剤型は、特に限定されるものではなく、例えば、適当な基剤中に前記各成分を溶解または混合分散させて、クリーム状、ペースト状、ゼリー状、ゲル状、乳液状、液状の形状になされたもの（軟膏剤、リニメント剤、ローション剤、スプレー剤など）、基剤中に上記組成物を溶解または混合分散させたものを支持体上に展延したもの（パップ剤など）、粘着剤中に上記組成物を溶解または混合分散させたものを支持体上に展延したもの（プラスター剤、テープ剤など）が挙げられる。

　本発明に係る剤が医薬部外品の形態である場合の医薬部外品とは、「医薬品、医療機器等の品質、有効性及び安全性の確保等に関する法律」に定められた医薬部外品を指し、経口剤（エキス剤、エリキシル剤、シロップ剤、チンキ剤、リモナーデ剤等の液剤とカプセル剤、顆粒剤、丸剤、散剤、錠剤等の固形剤）などが挙げられる。

実施例１
＜サンプルの調製＞
　グラブレン１３５ｍｇ、グラブリジン９２１ｍｇ、グラブロール１８４ｍｇ及び４’－Ｏ－メチルグラブリジン１６０ｍｇを含むエタノール溶液６３．９ｇと中鎖脂肪酸トリグリセライド（アクターＭ２；理研ビタミン（株）、脂肪酸組成はＣ８：Ｃ１０＝９９：１）１８．８ｇを混合し、減圧濃縮によりエタノールを除去した。減圧濃縮により得られた２８．７ｇを吸引濾過により不溶分を濾別した後、不溶分をヘキサンで洗浄し、得られた回収オイルは先の濾液に加えた。回収した濾液２６．２ｇに中鎖脂肪酸トリグリセリド４．５ｇを添加して、ポリフェノール混合物含有中鎖脂肪酸トリグリセリド溶液３０．７ｇ（うち、ポリフェノール混合物１．４ｇを含有）を得た。

　なお、中鎖脂肪酸トリグリセリド溶液に含まれるポリフェノール含量は、グラブリジン（市販試薬）を標準物質に用いたフォリン－デニス法によるポリフェノール分析にて測定した。また、下記分析方法により、グリチルリチン酸の含有量が０．００５重量％以下であることを確認した。

（グリチルリチン酸分析のＨＰＬＣ条件）
カラム：ＹＭＣ　Ｊ’ｓｐｈｅｒｅ  ＯＤＳ－Ｈ８０、内径４．６ｍｍ×長さ２５０ｍｍ（株式会社ワイエムシィ）
カラム温度：４０℃
移動相Ａ：アセトニトリル
移動相Ｂ：２０ｍＭリン酸水溶液
グラジエント：移動相Ａと移動相Ｂとの全量あたりの移動相Ａの比率を、分析開始１０分まで３６％で一定とし、１０分以降５０分後に４５％となるように一定比率で上昇させ、５０分以降５５分まで１００％で一定とし、５５分以降７５分まで３６％で一定とする条件
流速：１ｍＬ／ｍｉｎ
波長：ＵＶ２５４ｎｍ
サンプル注入量：２０μＬ

＜各ポリフェノールのピーク強度の分析＞
　前記ポリフェノール混合物含有中鎖脂肪酸トリグリセリド溶液１ｇをＨＰＬＣ用メタノールに溶解し、全量を１００ｍＬに調整した。
（ポリフェノール分析のＨＰＬＣ条件）
カラム：ＹＭＣ　Ｊ’ｓｐｈｅｒｅ　ＯＤＳ－Ｈ８０、内径４．６ｍｍ×長さ２５０ｍｍ（株式会社ワイエムシィ）
カラム温度：４０℃
移動相Ａ：アセトニトリル：メタノール（１：１＝ｖ/ｖ）
移動相Ｂ：２０ｍＭリン酸水溶液
グラジエント：移動相Ａと移動相Ｂとの全量あたりの移動相Ａの比率を、分析開始２０分まで５０％（ｖ／ｖ）で一定とし、２０分以降７５分後に８０％（ｖ／ｖ）となるように一定比率で上昇させ、７５分以降８０分まで１００％（ｖ／ｖ）で一定とし、８０分以降１００分まで５０％（ｖ／ｖ）で一定とする条件
流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
波長：ＵＶ２８２ｎｍ
サンプル注入量：２０μＬ

＜分析結果＞
　前記ポリフェノール混合物含有中鎖脂肪酸トリグリセリド溶液を試料とした上記条件でのＨＰＬＣ分析において、グラブリジンのピーク強度（ピーク面積）を１００％とした場合、グラブレンのピーク強度は３８％、グラブロールのピーク強度は４４％、４’－Ｏ－メチルグラブリジンのピーク強度は１９％であった。
　前記ポリフェノール混合物含有中鎖脂肪酸トリグリセリド溶液中の１ｇに含まれる各々の成分の含有量は、グラブレン（４．４ｍｇ）、グラブリジン（３０．０ｍｇ）、グラブロール（６．０ｍｇ）、４’－Ｏ－メチルグラブリジン（５．２ｍｇ）であった。各成分の含有量は、既知濃度の各成分の市販の標準物質のＨＰＬＣ分析結果から作製した検量線を用いて測定した。

＜ポリフェノール含量分析＞
　グラブリジン（市販の試薬）を標準物質に用いたフォリン－デニス法によるポリフェノール含量の測定を行った結果、前記ポリフェノール混合物含有中鎖脂肪酸トリグリセリド溶液１ｇ中のポリフェノールの総含有量は、２３９．１ｍｇであった。

実施例２
＜サンプルの調製＞
　上記条件でのＨＰＬＣ分析におけるグラブレン、グラブロール及び４’－Ｏ－メチルグラブリジンのグラブリジンに対するそれぞれのピーク強度（ピーク面積）が下記表の値となるように調製したポリフェノール混合物含有エタノール溶液１～４を６４．０ｇと中鎖脂肪酸トリグリセライド１９．０ｇを混合し、減圧濃縮によりエタノールを除去した。その後、中鎖脂肪酸トリグリセリド４．５ｇを減圧濃縮液へ添加して、ポリフェノール混合物含有中鎖脂肪酸トリグリセリド溶液を得た。

実施例３
＜トランスサイレチン四量体の安定化試験１＞
　中高年齢者３名から血液を採取し血清を得た。実施例１で得たポリフェノール混合物含有中鎖脂肪酸トリグリセリド溶液およびグラブリジンを各血清に添加（各々グラブリジンとして、０、１０、５０μＭとなるように添加）して２５℃、３０分間インキュベートした後に尿素で変性させた。このサンプルを用いて、電気泳動およびウエスタンブロット法により血液中のトランスサイレチン（四量体、二量体、単量体）を定量し、トランスサイレチン総量（ｔｏｔａｌ）に対する単量体（ｍｏｎｏｍｅｒ）の比（ｍｏｎｏｍｅｒ／ｔｏｔａｌ）、並びに、トランスサイレチン総量（ｔｏｔａｌ）に対する四量体（ｔｅｔｒａｍｅｒ）の比（ｔｅｔｒａｍｅｒ／ｔｏｔａｌ）で安定化効果を検討した。図１左側にｍｏｎｏｍｅｒ／ｔｏｔａｌの分析結果を示す。図１右側にｔｅｔｒａｍｅｒ／ｔｏｔａｌの分析結果を示す。

　図１のように、グラブリジン単独では添加濃度５０μＭまでトランスサイレチン総量に対する単量体の割合は変化がなく、トランスサイレチン総量に対する四量体の割合も増加することはなく、トランスサイレチン安定化効果は認められなかった。一方、ポリフェノール混合物含有中鎖脂肪酸トリグリセリド溶液を添加した場合、最大濃度でトランスサイレチン総量に対する単量体の割合を減少させ、トランスサイレチン総量に対する四量体の割合を増加させる（トランスサイレチン安定化）効果が認められた。

実施例４
＜トランスサイレチン四量体の安定化試験２＞
　健常者３名に、実施例１で得たポリフェノール混合物含有中鎖脂肪酸トリグリセリド溶液を４週間摂取（摂取量：６００ｍｇ／ｄａｙ）させて経時的に採血し血漿を得た。各血漿を２５℃、３０分間インキュベートした後に尿素で変性させた。このサンプルを用いて、電気泳動およびウエスタンブロット法により血液中のトランスサイレチン（四量体、単量体）を定量し、単量体と四量体の比（ｍｏｎｏｍｅｒ／ｔｅｔｒａｍｅｒ）で安定化効果を検討した。結果を図２に示す。
　図２のように、ポリフェノール混合物含有中鎖脂肪酸トリグリセリド溶液は２週目には単量体と四量体の比が減少しており、具体的には単量体の割合を減少させ四量体を増加させる（トランスサイレチン安定化）効果が認められた。
　以上のことからポリフェノール混合物は、トランスサイレチン四量体を安定化させ、生体内に含まれる単量体の割合を減少させ四量体を増加させることができる。
　本明細書で引用した全ての刊行物、特許及び特許出願はそのまま引用により本明細書に組み入れられるものとする。

Claims (10)

1. 　グラブリジン、グラブレン及びグラブロールを含有する、トランスサイレチン四量体安定化剤。
2. 　４’－Ｏ－メチルグラブリジンを更に含有する、請求項１に記載の剤。
3. 　以下に示すａ）の条件でのＨＰＬＣ分析において、ｂ）、ｃ）及びｄ）の特性：
   ａ）移動相：アセトニトリル：メタノール＝１：１（移動相Ａ）と２０ｍＭリン酸（移動相Ｂ）のグラジエント、カラム：ＯＤＳカラム、流速：１．０ｍＬ／分、温度：４０℃、検出器：ＵＶ検出器、検出波長：２８２ｎｍ、
   ｂ）グラブリジンピーク強度に対するグラブレンピーク強度の割合が３８％以上４１％以下、
   ｃ）グラブリジンピーク強度に対するグラブロールピーク強度の割合が４４％以上４７％以下、
   ｄ）グラブリジンピーク強度に対する４’－Ｏ－メチルグラブリジン強度の割合が１５％以上２０％以下、
   のうちいずれか１つ以上を示す、請求項２に記載の剤。
4. 　グリチルリチン酸の含有量が０．００５重量％以下である、請求項１～３のいずれか一項に記載の剤。
5. 　グラブリジン、グラブレン及びグラブロールを含有する、トランスサイレチンアミロイドーシス予防剤又は進行抑制剤。
6. 　トランスサイレチンアミロイドーシスが、老人性全身性アミロイドーシス又は家族性アミロイドポリニューロパチーである、請求項５に記載の剤。
7. 　４’－Ｏ－メチルグラブリジンを更に含有する、請求項５又は６に記載の剤。
8. 　以下に示すａ）の条件でのＨＰＬＣ分析において、ｂ）、ｃ）及びｄ）の特性：
   ａ）移動相：アセトニトリル：メタノール＝１：１（移動相Ａ）と２０ｍＭリン酸（移動相Ｂ）のグラジエント、カラム：ＯＤＳカラム、流速：１．０ｍＬ／分、温度：４０℃、検出器：ＵＶ検出器、検出波長：２８２ｎｍ、
   ｂ）グラブリジンピーク強度に対するグラブレンピーク強度の割合が３８％以上４１％以下、
   ｃ）グラブリジンピーク強度に対するグラブロールピーク強度の割合が４４％以上４７％以下、
   ｄ）グラブリジンピーク強度に対する４’－Ｏ－メチルグラブリジン強度の割合が１５％以上２０％以下、
   のうちいずれか１つ以上を示す、請求項７に記載の剤。
9. 　錠剤、カプセル剤、顆粒剤又は散剤の形態である、請求項１～８のいずれか一項に記載の剤。
10. 　グラブリジンの含有量が１回の摂取又は投与単位あたり４ｍｇ～１２００ｍｇである請求項１～９のいずれか一項に記載の剤。

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