JP3918953B2 - ２個の糖とスペーサーとを含んでなる二結合体 - Google Patents
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、２個の糖とスペーサーとを含んでなる調整可能な（ｔｕｎｅａｂｌｅ）二結合体、二結合体の製造方法、二結合体を含んでなる医薬組成物、及び医薬品製造での二結合体の使用に関する。
【０００２】
【従来の技術】
２個の糖とスペーサーとを含んでなる抗血栓症二結合体はヨーロッパ特許出願第３１２，０８６号で知られている。これらの化合物の糖部分は、硫酸化ガラクトピラノシル、マンノピラノシル又はグルコピラノシル単位を含んでいる。これらの糖は、ヨーロッパ特許出願第５２９，７１５号に開示されている、ウロン酸含有のグリコサミノグリカンのクラスにもグリコサミノグリカノイドのクラスにも属さない。これらの糖がそれ自体で抗血栓症活性を示すかどうかは開示されていない。更には、非常に特異的な構造を有し、８原子と短い鎖長を有し得るスペーサーだけが開示されているが、本発明の二結合体の場合、スペーサーの鎖長が２０原子未満と短いと活性がないことが判明している。その上、ヨーロッパ特許出願第３１２，０８６号に開示されている二結合体の場合、糖は両方ともその還元末端でスペーサーに結合されている。
【０００３】
【発明が解決しようする課題及び課題を解決するための手段】
本発明は、２個の糖とスペーサーとを含んでなり、各糖が、同一であるか又は異なり且つ少なくとも１個の単位をウロン酸とする単糖単位を２〜６個含んでなる調整可能な二結合体に関し、この二結合体は、少なくとも一方の糖がそれ自体で抗血栓症活性を有し、スペーサーが少なくとも一方の糖を他方の糖に非還元末端で結合し、スペーサーの鎖長が２０〜１２０原子であることを特徴とする。
【０００４】
グリコサミノグリカン型の小さい炭水化物分子が強力な抗Ｘａ阻害剤であることは知られている。例えば、ヨーロッパ特許第８４９９９号を参照されたい。以後出願された特許では、これらの塩基性分子の多くの変形が同様の活性を有することが判明した。今日では、これらの比較的小さい分子（ペンタ糖が典型例である）が１種のセリンプロテアーゼ阻害剤のみと、通常は抗トロンビンＩＩＩ（ＡＴ−ＩＩＩ）と相互作用することが明白である。活性化糖ＡＴ−ＩＩＩ複合体は因子Ｘａを選択的に阻害する。天然ヘパリン及びその断片を用いた調査から、ＡＴ−ＩＩＩを媒介とする因子ＩＩａ（トロンビン）の不活性化にはもっと長いグリコサミノグリカンが必要であることが知られている。
【０００５】
実際には、ヘパリン又は他の天然グリコサミノグリカンを断片化すると、通常他の型の化合物（例えばタンパク質、ＤＮＡ、ウイルス等）で汚染された化合物の混合物が得られるため、１６個以上の糖単位を有するグリコサミノグリカンの合成は注目されていない。医学的見地からは、このような混合物は、例えば度々発生する出血の危険性のため、純粋で、十分に限定された合成化合物ほど魅力的ではない。
【０００６】
さて、少なくとも一方の糖がプロテアーゼ阻害剤（例えばＡＴ−ＩＩＩ又はＨＣ−ＩＩ）と相互反応し得、またスペーサーによって互いに結合された（２〜６個の単糖単位を含んでなる）２個の小さな糖分子によって、前述のより大きいグリコサミノグリカンの特性を模倣できることが判明した。２個の糖間の距離を必要最小にするには、最小２０原子のスペーサー長さが必要である。スペーサーが１２０原子より長くなると、合成上の理由から適さなくなる。更には、スペーサーの化学構造が殆ど又は全く重要でないことが判明した。本発明の二結合体の抗血栓症活性及びαＸａ／αＩＩａ活性比は、糖の種類、糖とスペーサーとの結合部位及びスペーサー長さに依存する。例えば、両方とも還元末端でスペーサーに結合した糖は活性がない。
【０００７】
少なくとも一方の糖、好ましくは両方の糖がそれ自体で、ＡＴ−ＩＩＩ及び／若しくはＨＣ−ＩＩに対して親和性を有し、並びに／又は抗因子ＩＩａ及び／若しくは抗因子Ｘａ活性を有する。
【０００８】
適切な二結合体は、少なくとも一方の糖が、式：
【０００９】
【化５】
（式中ではそれぞれ、Ｒは独立して、Ｈ，ＯＨ，ＯＳＯ３ −及びアルコキシの中から選択され、Ｒ１は独立して、ＯＳＯ３ −及びＮＨＳＯ３ −の中から選択され、波線は上方結合又は下方結合を示し、負電荷は水素イオン又はアルカリ金属カチオンによって相殺される）で表される二結合体である。
【００１０】
前記式で使用するアルキルという用語は、１〜８個、好ましくは１〜４個の炭素原子を有するアルキルである。最も好ましいアルキル基はメチル基である。
【００１１】
アルコキシという用語は、１〜８個、好ましくは１〜４個の炭素原子を有するアルコキシ基を意味する。最も好ましいのはメトキシ基である。
【００１２】
ナトリウムは好ましいアルカリ金属である。
【００１３】
最も好ましい二結合体では、少なくとも一方の糖は、式：
【００１４】
【化６】
（式中、Ｒ２は独立して、ＯＳＯ３ −又はＯＣＨ３である）で表される。
【００１５】
前述した如く、スペーサーの化学構造の重要性は二次的なものである。しかしながら、合成上の都合から、他よりも適したスペーサーが幾つかある。容易に導入できる単純なスペーサーは、例えば式：
＝｛Ｑ−ＮＴ−ＣＯ−［（ＣＨ2 ）n −ＮＴ−ＣＯ−（ＣＨ2 ）m ］p −Ｓ−｝
2 、又は
＝｛Ｑ−Ｏ−［（ＣＨ2 ）n −Ｏ］p −（ＣＨ2 ）m −Ｓ−｝2
［式中、２個の基Ｑの一方は一方の糖の非還元末端に付着し、他方の基Ｑは他方の糖の還元又は非還元末端に付着し、各基Ｑはフェニレン（Ｃ6 Ｈ4 ）基又は−［（ＣＨ2 Ｏ）q −（ＣＨ2 ）r −Ｏ］s −［（ＣＨ2 ）t −ＮＴ−ＣＯ］u −（ＣＨ2 ）v であり、Ｔは独立して水素又は先に定義したアルキルであり、ｑは０又は１であり、ｒ及びｔは独立して２〜４であり、ｓは独立して１〜１２、好ましくは１〜６であり、ｕ及びｖは独立して１〜６であり、ｎは１〜８であり、ｍは１〜８であり、ｐは１〜１２であり、原子総数は２０〜１２０個である］で表されるスペーサーである。
【００１６】
他の適切なスペーサーは、式：
【００１７】
【化７】
（式中、２個の基Φの一方は一方の糖の非還元末端に付着し、他方の基Φは他方の糖の還元又は非還元末端に付着し、Φはフェニレン（Ｃ6 Ｈ4 ）基を示し、ｎ、ｍ及びｏは独立して１〜８であり、原子総数は２０〜１２０個である）で表される。
【００１８】
他の同様に適切なスペーサーは、式：
【００１９】
【化８】
（式中、スペーサーの２個の遊離原子価の一方は一方の糖の非還元末端に付着し、スペーサーの他方の遊離原子価は他方の糖の還元又は非還元末端に付着し、Ｔは独立してＨ又は先に定義したアルキルであり、ｍは独立して１〜８であり、ｒは独立して２〜４であり、ｓは独立して１〜１２、好ましくは１〜６であり、ｗは０〜１０、好ましくは０〜７であり、ｘは０又は１であり、ｙは０又は１であり、ｚは０又は１であり、原子総数は２０〜１２０個である）で表される。
【００２０】
これらの実施態様は実現が容易なために好ましい。しかしながら、スペーサーは決して前述したものに限定はされない。
【００２１】
両方の糖が同一の場合、本発明の二結合体は対称的であると称する。両方の糖が互いに異なる場合、二結合体は非対称であると称する。非対称二結合体が、ウロン酸単位を持たない、従ってグリコサミノグリカンやグリコサミノグリカノイドとは異なる１個の糖を、例えばグルコース単位（例えばセロビオース、マルトトリオース、マルトペンタオース又はこれらの誘導体）からなる糖を含むことが好ましい。
【００２２】
本発明の二結合体は、類似化合物の製造で知られている方法で製造することができる。通常、炭水化物部分は、文献で知られている方法を用いて（例えばヨーロッパ特許第８４９９９号、ヨーロッパ特許第３０１６１８号、ヨーロッパ特許第４５４２２０号、ヨーロッパ特許第５２９７１５号及びヨーロッパ特許出願９３０４７６９号の方法を用いて）製造する。一時的な保護基を適用して所望のヒドロキシ基を遊離して、スペーサーに結合することができる。しかしながら、適切な結合基（例えばニトロフェニル基）を所望のヒドロキシ基に付着させることが更に好ましい。ニトロフェニル基は通常の還元段階（ベンジル保護基の開裂）中に対応するアニリン基に変換し、そのアミノ基を用いて（例えば末端にハロゲン若しくはカルボキシル基の活性エステルを有する）残りのスペーサーと結合するか、又は場合によってはこれを一時的に保護し、後の段階で残りのスペーサーに結合することができる。それによって、アニリン基はスペーサーの一部分となる。
【００２３】
炭水化物部分が同一のときに特に有用な他の方法は、スペーサーの半分に相当し、糖と結合しない末端が保護基で保護されており、保護基がなければ二量化する傾向にある部分に炭水化物部分を結合することである。脱保護すると、分子は適切な反応条件下で二量化して、本発明の二結合体となる。
【００２４】
前記方法の変形方法はスペーサーの一部分を炭水化物部分に結合し、その後化学的縮合でスペーサー部分を更に増成（ｂｕｉｌｔ−ｕｐ）することである。この方法は、同一の炭水化物部分を出発材料とする様々なスペーサー長さの二結合体の製造で特に有用である。
【００２５】
他の方法は、スペーサー又はスペーサーの半分を炭水化物部分の一部分に結合し、これを標準的な炭水化物結合技術で残りの炭水化物部分と結合して、必要な二結合体又は二結合体の半分を得、その後必要とあれば、前述したようにスペーサーを脱保護して二量化し得ることである。
【００２６】
本発明の二結合体を使用して、血栓症又は平滑筋細胞増殖を治療又は予防することができる。本発明の二結合体は、ヒトの場合好ましくは体重１ｋｇ当たり０．００１〜１０ｍｇ／日の用量を小腸内投与してもよいし、非経口投与してもよい。経口、頬又は舌下に投与する場合、例えば標準的な参考文献［Ｇｅｎｎａｒｏ等、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， （１８版，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９０，特に第８部：Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｍｕｎｕｆａｃｔｕｒｅを参照）］に記載されているように二結合体を医薬的に適切な助剤と混合し、これを圧縮して固形剤（例えば丸剤及び錠剤）にしてもよいし、加工してカプセル又は坐剤にしてもよい。非経口投与する場合は、二結合体を溶液、懸濁液、乳濁液形態の医薬的に適した液体による注射若しくは注入調製物として、又はスプレー（例えば点鼻スプレー）として適用することもできる。
【００２７】
薬剤（例えば錠剤）の製造では、慣用の添加剤（例えば充填剤、着色剤、ポリマー結合剤等）の使用が考えられる。一般に、活性化合物の機能を妨げない医薬的に許容できる添加剤を使用することができる。
【００２８】
組成物と一緒に投与できる適切な担体には、適量で使用するラクトース、デンプン、セルロース誘導体等又はこれらの混合物が含まれる。
【００２９】
本発明の化合物の調整性（ｔｕｎｅａｂｉｌｉｔｙ）を表Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩに示す。糖、スペーサー長さ及びこれらの組み合わせでαＸａ／αＩＩａ活性比を調整できることは明白である。
【００３０】
スペーサー長さは、スペーサーと結合した糖の酸素原子は数に入れずに、２個の糖間の最短鎖に沿って算出したスペーサーの原子数である。
【００３１】
【表１】
ｂｉｓｃｏｎｊ．＝二結合体
ｓｐａｃｅｒｌ．＝スペーサー長さ
ａ 抗Ｘａ活性（単位／ｍｇ）は、Ａ．Ｎ．Ｔｅｉｅｎ及びＭ． Ｌｅｅの方法（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ Ｒｅｓｅｒａｃｈ， １０， ３９９−４１０（１９７７））で決定した。
【００３２】
ｂ 抗ＩＩａ活性（単位／ｍｇ）は、Ｍ．Ｌ． Ｌａｒｓｏｎ等の方法（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ Ｒｅｓｅｒａｃｈ， １３， ２８５−２８８（１９７８））で決定した。
【００３３】
結論：表Ｉでは、糖を変えることによって二結合体のαＸａ／αＩＩａ活性比を調整できることが分かる。
【００３４】
【表２】
結論：表ＩＩは、スペーサー長さを変えることによって二結合体のαＸａ／αＩＩａ活性比を調整できることを示している。
【００３５】
【表３】
結論：表ＩＩＩは、糖及びスペーサー長さを変えることによって二結合体のαＸａ／αＩＩａ活性比を調整できることを示している。
【００３６】
実施例１
モノサッカリド５
化合物１（３．５ｇ）（Carb. Res. 1989, 186(2), 189-205参照）をジメチルホルムアミド（３０ｍｌ）に溶解し、水素化ナトリウム（５６０ｍｇ）を窒素雰囲気下で添加した。混合物を０℃に冷却し、１−フルオロ−４−ニトロベンゼン（１．６３ｍｌ）を２分間添加した。３０分攪拌した後、混合物を濃縮し、ジクロロメタンおよび水で希釈して抽出した。通常の処理を行った後、残渣をカラムクロマトグラフィーで精製して４ｇの化合物２を得た。化合物２をアセトリシスにより化合物３に変換し、次いでけん化により化合物４にし、トリクロロアセトニトリルとの反応により化合物５を得た。化合物３、４および５の合成に対しては、各々、化合物９（下記参照）、４１および４２（実施例４参照）の製造に関して記載した方法を使用した。
【００３７】
【化９】
テトラサッカリド１４
化合物７を、化合物３９（実施例４参照）に関して記載した方法に従って、化合物６（Bioorganic and Medicinal Letters 1992, 2(9), 905）から合成した。
【００３８】
化合物７（１４．６ｇ）をアセトン（２６０ｍｌ）に溶解し、０℃に冷却した。この温度で、水（５３ｍｌ）および濃硫酸（１０．５ｍｌ）の混合物における酸化クロム（VI）（１０．８ｇ）の溶液を滴下した。混合物を２℃で１６時間攪拌した。過剰の酸化クロム（VI）をメタノールで分解し、混合物を炭酸水素ナトリウムで中和した後、水を添加した。ジクロロメタンで抽出した後、有機層を脱水濃縮乾固した。残留油状物を脱水ジメチルホルムアミド（１７４ｍｌ）に溶解した。炭酸水素カリウム（７ｇ）およびヨードメタン（７ｍｌ）を添加し、混合物を室温で３時間攪拌した。濃縮後、残渣をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製すると、９．１ｇの化合物８が得られた。
【００３９】
化合物８（２．８ｇ）を無水酢酸（５０ｍｌ）、酢酸（０．３ｍｌ）およびトリフルオロ酢酸（３．０ｍｌ）の混合物に溶解した。３時間攪拌した後、混合物を濃縮し、トルエンとともに共沸させると３．１ｇの化合物９が得られた。
【００４０】
化合物１０は化合物９のけん化により合成し、次いで、イミデート１１に変換した。化合物４１および４２の合成に関して記載した方法を使用した（実施例４参照）。
【００４１】
【化１０】
化合物１１を化合物１２（Jaurand G., et al., Bioorganic and Medicinal Chem. Lett., 2(9), 897-900 (1992)、化合物１２参照）と結合して化合物１３を生成し、そのＬｅｖ基を脱離してテトラサッカリド１４を得た。化合物４３および４４の合成に関して記載した方法に従った（実施例４参照）。
【００４２】
７９ｍｇのテトラサッカリド１４および７０ｍｇのモノサッカリド５のジクロロメタン（２．５ｍｌ）溶液に分子ふるい４オングストローム（７０ｍｇ）を添加した。混合物を−２０℃に冷却し、６．８μｍｏｌのトリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリルを添加した。混合物を３０分攪拌し、炭酸水素ナトリウムを添加した。混合物を濾過し、溶媒を蒸発させ、残渣をシリカクロマトグラフィーで精製すると８８ｍｇのペンタサッカリド１５が得られ、これを７．３ｍｌのテトラヒドロフランに溶解し、−５℃に冷却した。この温度で２．６ｍｌの３０％過酸化水素水溶液を添加し、１０分後、１．２ｍｌの１．２５Ｍ水酸化リチウム水溶液を添加した。混合物を０℃で一夜攪拌し、４．８ｍｌのメタノールおよび１．３ｍｌの４Ｍ水酸化ナトリウム水溶液を添加し、１時間攪拌した後、温度を２０℃に上げて混合物をさらに２０分間攪拌した。反応混合物を６Ｎ塩酸でｐＨ３にし（０℃）、けん化生成物を酢酸エチルで抽出した。過剰の過酸化水素を、５％亜硫酸ナトリウム水溶液による抽出により分解し、有機混合物を硫酸マグネシウムにより脱水して蒸発乾固すると８９ｍｇの粗ペンタサッカリド１６が得られた。
【００４３】
ペンタサッカリド１６を１０．２ｍｌのジメチルホルムアミドに溶解し、５５ｍｇの１０％Ｐｄ／木炭を添加した。水素添加分解を一夜行った後、６４ｍｇの粗ペンタサッカリド１７が得られた。
【００４４】
【化１１】
【００４５】
【化１２】
ペンタサッカリド１７（４９ｍｇ）をエタノール−水（１：１）の混合物２ｍｌに溶解し、この混合物に１６ｍｇの炭酸水素ナトリウムおよび１０．４μｌの塩化ベンジルオキシカルボニル（Ｚ−Ｃｌ）を添加した。室温で４時間攪拌した後、溶媒を蒸発させ、メタノールを残渣に添加した。塩を濾別し、濾液を蒸発させると６７ｍｇの粗ペンタサッカリド１８が得られ、これを２．５ｍｌの脱水ジメチルホルムアミドに溶解した。窒素雰囲気下で４４２ｍｇのトリエチルアミン三酸化イオウを添加してその混合物を５０℃で一夜攪拌した後、炭酸水素ナトリウム水溶液を氷冷しながら添加した。混合物を室温で１時間攪拌した後、濃縮して体積を小さくし、セファデックス（商標）Ｇ−２５カラムにより脱塩した。単離した物質をＤｏｗｅｘ（商標） ５０ＷＸ８ Ｎａ＋カラム上で水により溶離すると、１０４ｍｇのペンタサッカリド１９が得られた。１００ｍｇのペンタサッカリド１９を８ｍｌの水に溶解し、１０％Ｐｄ／木炭を添加し、混合物を一夜水素添加分解すると、８３ｍｇのペンタサッカリド２０が得られた。〔α〕Ｄ ２０＝＋５８．１°（ｃ＝１；水）。
【００４６】
９．６ｍｇのペンタサッカリド２０および４．８ｍｇのスルホ−ＬＣ−ＳＰＤＰを０．１ｍｌのエタノールおよび０．３５ｍｌの０．０５Ｍリン酸水素二ナトリウム水溶液（ｐＨ７．８）の混合物に溶解した。混合物を３時間攪拌し、セファデックスＧ−２５カラムにより脱塩すると、９．０ｍｇのモノ複合体２１が得られた。
【００４７】
モノ複合体２１（８．９ｍｇ）をｐＨ８．０の０．０５Ｍリン酸二水素ナトリウム水溶液１．５ｍｌに溶解した。トリブチルホスフィンの０．０５Ｍイソプロパノール溶液１５７μｌを室温で添加し、その混合物を１時間攪拌して、反応混合物に空気を通した。セファデックス（商標）Ｇ−２５カラム上で混合物を脱塩した後、粗ビス複合体をモノＱアニオン交換カラムを使用してＨＰＬＣで精製すると４．０ｍｇのビス複合体Ｉが得られた。〔α〕Ｄ ２０＝＋４５．７° （ｃ＝０．３５；水）。
【００４８】
【化１３】
【００４９】
【化１４】
実施例２
モノ複合体２１（１４．７ｍｇ）をメタノール１ｍｌ及びｐＨ８の０．１Ｍリン酸二水素ナトリウム水溶液２ｍｌの混合物に溶解した。トリブチルホスフィンの０．０５Ｍイソプロパノール溶液２４７μｌを室温で窒素下に添加した。混合物を１時間攪拌して、ジメチルホルムアミド０．５ｍｌ中の２３（１．６８ｍｇ）溶液を加えた後、混合物を更に３時間攪拌した。セファデックス（商標）Ｇ−２５カラム上で混合物を脱塩した後、粗生成物をセファデックス（商標）Ｇ−５０カラム上で１０％アセトニトリル含有０．０５Ｍ塩化ナトリウム水溶液により溶出することにより更に精製した。集めた画分をセファデックス（商標）Ｇ−２５上で脱塩するとビス複合体 II ５．５ｍｇが得られた。〔α〕Ｄ ２０＝＋７．０°（ｃ＝０．３４；水）
【００５０】
【化１５】
実施例３
メチル２，３，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−グルコピラノシド（２．１ｇ）２４を７５ｍｌのジメチルホルムアミドに溶解し、室温で５．５ｍｌのテトラエチレングリコール ジ−ｐ−トシレートを添加した。水素化ナトリウム（１６２ｍｇ）を添加し、混合物を５０℃で２時間加熱した。アジ化リチウム（４．５ｇ）を添加し、反応混合物を７０℃でさらに５時間攪拌した。次いで、混合物を濃縮し、カラムクロマトグラフィーで精製すると、１．５２ｇの化合物２５が得られた。
【００５１】
化合物２５（７６８ｍｇ）の無水酢酸溶液４０ｍｌ（−２０℃）に、硫酸の５％（ｖ／ｖ）無水酢酸溶液１０ｍｌ（−２０℃に冷却）を添加した。混合物をこの温度で１０分攪拌した後、酢酸ナトリウム（３．５ｇ）を添加して反応を停止した。１０分後、混合物を酢酸エチルで抽出し、抽出物を一緒にして１０％の炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、脱水濃縮乾固した。粗生成物をカラムクロマトグラフィーにかけると５７３ｍｇの化合物２６が得られた。
【００５２】
化合物２６（２６９ｍｇ）を５．５ｍｌのジメチルホルムアミド、３１μｌの酢酸および２８μｌのヒドラジン一水和物の混合物に溶解した。混合物を室温で３時間攪拌し、ジクロロメタンおよび水で希釈して抽出した。生成物を通常の処理およびカラムクロマトグラフィーにかけると、１５８ｍｇの化合物２７が得られた。
【００５３】
化合物２７（１５８ｍｇ）を２ｍｌのジクロロメタンに溶解した。トリクロロアセトニトリル（０．１３ｍｌ）および炭酸セシウム（１７．８ｍｇ）を窒素雰囲気下で添加した。混合物を室温で１時間攪拌し、濾過して蒸発させた。生成物をカラムクロマトグラフィーにかけると１８２ｍｇの化合物２８が得られた。
【００５４】
【化１６】
化合物３１は、化合物１１を化合物２９（H. Lucas et al., Angew. Chem. 1993, 105, 462-464参照）とカップリングして化合物３０を生成し、それからＬｅｖ基を脱離することにより合成した。化合物４３および４４の合成に関して記載した方法に従った（実施例４参照）。
【００５５】
【化１７】
化合物３２、３３、および３４を各々、化合物１５、１６および１７に関して記載した方法と同様に合成した（実施例１参照）。
【００５６】
化合物３４（３５ｍｇ）をストック溶液であるトリエチルアミン（２８０μｌ）のジメチルホルムアミド（２０ｍｌ）溶液の０．３５ｍｌに溶解した。Ｎ−（ベンジルオキシカルボニルオキシ）スクシンイミド（１０．６ｍｇ）をｐＨ７．５で添加し、３０分攪拌した後、溶媒を一部蒸発除去した。残渣は、最初にセファデックス（商標）ＬＨ−２０カラムで精製し、次いでＲｐ−１８カラム（アセトニトリル：水：アンモニア＝９５：５：２ ｖ／ｖ）でさらに精製して２９．４ｍｇの化合物３５を得た。
【００５７】
化合物３６は、化合物１９（実施例１参照）に関して記載した方法と同様に合成した。〔α〕D 20＝２２．８°（ｃ＝０．３；水）。
【００５８】
化合物３６（５１．４ｍｇ）を４ｍｌの水に溶解し、触媒（１０％Ｐｄ／Ｃ）を添加した。混合物を水素ガス雰囲気下、室温で５時間攪拌した。濾過後、溶媒を蒸発させると４７ｍｇの化合物３７が得られた。
【００５９】
化合物３７（１５．１ｍｇ）をＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンのジメチルホルムアミド：水＝７：３溶液（ｐＨ９．０）４５０μｌに溶解し、過剰量のスルホスクシンイミジル ６−〔３’（２−ピリジルジチオ）プロピオアミド〕ヘキサノエートを９．０の一定ｐＨで添加した。２０分攪拌した後、混合物を、水：アセトニトリル＝８：２（ｖ／ｖ）によりセファデックス（商標）Ｇ−２５カラムで脱塩すると、１６ｍｇの粗化合物３８が得られた。
【００６０】
ビス複合体 IIIは、化合物２１のビス複合体Ｉへの変換に関して実施例１に記載した方法と同様に化合物３８から合成した。〔α〕D 20＝＋２９．６°（ｃ＝０．１２５；水）。
【００６１】
【化１８】
【００６２】
【化１９】
【００６３】
【化２０】
実施例４
ビス複合体ＩＶ（〔α〕Ｄ ２０＝＋５０．８°（ｃ＝０．３２；水））は、実施例３の方法に従って合成したが、３１の代わりにテトラサッカリド４４を使用し、Ｎ−（ベンジルオキシカルボニルオキシ）スクシンイミドの代わりにスクシンイミド Ｎ−（ベンジルオキシカルボニルオキシ）グリシンを使用した点が異なる。
【００６４】
【化２１】
テトラサッカリド４４の合成
ジサッカリド２９（０．８ｇ）をジオキサン（５．３ｍｌ）に溶解した後、レブリン酸（２７８ｍｇ）、１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（４９４ｍｇ）および４−ジメチルアミノピリジン（２５ｍｇ）を添加した。２時間攪拌した後、ジエチルエーテルを添加し、混合物を０℃に冷却した。結晶を濾別し、濾液を濃縮した。残留油状物をカラムクロマトグラフィーにより精製すると、９００ｍｇの化合物３９が得られた。
【００６５】
化合物３９（１ｇ）の無水酢酸（５０ｍｌ）溶液を−２０℃に冷却した。この温度で、１ｍｌの９８％硫酸を２０ｍｌの無水酢酸に添加する（−２０℃）ことにより合成した溶液Ａ１０ｍｌを窒素雰囲気下で添加した。２．５時間攪拌した後、酢酸ナトリウムを添加することにより反応を停止した。酢酸エチルおよび炭酸水素ナトリウム飽和溶液を冷たい反応混合物に添加し、抽出した後、有機層を水で洗浄し、脱水濃縮乾固した。粗生成物をカラムクロマトグラフィーにより精製すると、８００ｍｇの化合物４０が得られた。
【００６６】
化合物４０（８００ｍｇ）を脱水テトラヒドロフラン（１０ｍｌ）に溶解し、ピペリジン（１．３ｍｌ）を窒素雰囲気下で添加した。混合物を２０℃で２０時間攪拌し、次いで酢酸エチルで希釈した。有機層を０．３Ｎの塩酸および水で洗浄し、脱水した。有機層を濃縮した後、残渣をカラムクロマトグラフィーで精製すると、４３０ｍｇの化合物４１が得られた。
【００６７】
化合物４１（４９０ｍｇ）のジクロロメタン（５．４ｍｌ）溶液に炭酸セシウム（４３ｍｇ）およびトリクロロアセトニトリル（０．５２ｍｌ）を添加した。混合物を２０℃で１時間放置した。濾過後、濾液を濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィーで精製すると、４１７ｍｇの化合物４２が得られた。
【００６８】
化合物４２（３１７ｍｇ）および化合物２９（２４３ｍｇ）をトルエンとともに２回共沸させた。ジクロロメタン（７．１ｍｌ）および粉末分子ふるい４オングストローム（２３５ｍｇ）を添加し、混合物を−２０℃に冷却した。この温度でトリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル（８．７５μｌ）のジクロロメタン（２．８ｍｌ）溶液を滴下した。１時間攪拌した後、炭酸水素ナトリウム固体を添加することにより反応を停止した。混合物をさらに１５分間攪拌し、濾過・濃縮した。カラムクロマトグラフィーにより精製すると、３７２ｍｇの化合物４３が得られた。
【００６９】
化合物４３（３７０ｍｇ）をピリジン（１．２ｍｌ）に溶解した。ピリジン（１．２ｍｌ）、酢酸（１．５６ｍｌ）およびヒドラジン水和物（０．１８ｍｌ）の混合物を２０℃で添加し、混合物を７分間攪拌した。水で希釈し、酢酸エチルで抽出した後、有機層を炭酸水素ナトリウム水溶液および水で洗浄し、脱水してカラムクロマトグラフィーにより精製すると、３２４ｍｇの化合物４４が得られた。
【００７０】
【化２２】
実施例５
活性エステル５２の合成
テトラエチレングリコール４５（１０ｇ）を脱水テトラヒドロフラン（１５０ｍｌ）に溶解し、水素化ナトリウム（鉱物油に６０％分散、１．６４ｇ）を０℃で少しずつ添加した。１時間攪拌した後、塩化ｔ−ブチルジメチルシリル（６．１８ｇ）のテトラヒドロフラン（２０ｍｌ）溶液を添加し、混合物を１５分攪拌した。１０分攪拌した後、混合物を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機抽出物を脱水濃縮乾固した。粗生成物をカラムクロマトグラフィーにかけると、６ｇの化合物４６が得られた。
【００７１】
化合物４６（５．０ｇ）をテトラヒドロフラン（８０ｍｌ）に溶解し、ブロモ酢酸ｔ−ブチル（２６．２ｍｌ）を添加した。混合物を５０℃で攪拌し、水素化ナトリウム（１．１６ｇ）を窒素雰囲気下で少しずつ添加した。１時間攪拌した後、化合物４６に関して記載した方法と同様に混合物を処理した。残渣をカラムクロマトグラフィーにかけると化合物４７（５ｇ）が得られた。
【００７２】
化合物４７（３．１ｇ）の酢酸（２５ｍｌ）、水（８．３ｍｌ）およびテトラヒドロフラン（８．３ｍｌ）の混合物における溶液を２０℃で２４時間攪拌した。混合物を水酸化ナトリウム水溶液で中和し、水で希釈して、酢酸エチルで抽出した。抽出物を合わせて脱水濃縮乾固した。粗生成物をシリカゲルカラムにより濾過すると、１．５２ｇの化合物４８が得られた。
【００７３】
化合物４８（１．４ｇ）をジクロロメタン（１２．７ｍｌ）に溶解し、ピリジン（７．７ｍｌ）および塩化ｐ−トルエンスルホニル（１．３ｇ）を添加し、混合物を２０℃で２０時間攪拌した。水で希釈した後、混合物をジクロロメタンで抽出した。
【００７４】
【化２３】
粗生成物を通常の処理およびカラムクロマトグラフィーにかけると、１．５ｇの化合物４９が得られた。
【００７５】
化合物４９（５７０ｍｇ）のアセトン（２０ｍｌ）溶液にチオ酢酸カリウム（３５０ｍｇ）を添加した。その溶液を２０℃で１時間放置した。混合物を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機層を蒸発させ、シリカゲルカラムにより濾過した後、４４０ｍｇの化合物５０を単離した。
【００７６】
化合物５０（１２０ｍｇ）をジクロロメタン（１．５ｍｌ）に溶解し、トリフルオロ酢酸（０．２０ｍｌ）を室温で添加した。４時間攪拌した後、混合物をトルエンで希釈し、蒸発させた。残渣をトルエンとともに３回共沸させた。粗生成物をカラムクロマトグラフィーにかけると、９１ｍｇの化合物５１が得られた。
【００７７】
化合物５１（２９．１ｍｇ）を脱水ジメチルホルムアミド（１．５ｍｌ）に溶解し、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１２．８μｌ）を添加した。テトラフルオロホウ酸Ｏ−（Ｎ−スクシンイミジル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム（２２．３ｍｇ）を窒素雰囲気下で添加し、混合物を１．５時間攪拌した。この活性エステル５２のストック溶液を化合物５４のスペーサ延長に使用した。
【００７８】
化合物５４の合成は、化合物３４の合成に関する実施例３の方法に従ったが、化合物３１の代わりにテトラサッカリド５３を使用した点のみが異なる。
【００７９】
【化２４】
化合物５３は、H. Lucas et al., Angew. Chem. 1993, 32(3), 434-436に記載の方法と同様に合成した。この文献では、テトラサッカリド（１２）が図２に示されている。化合物５３の合成では、図２の工程ｄ）を採用したが、ＢｎＢｒの代わりにＣＨ3 Ｉを使用することにより、ベンジル基の代わりにメチル基を導入した。化合物５３の合成のその後の反応工程は、該文献のテトラサッカリド１２の合成と同様であった。
【００８０】
化合物５４（５２ｍｇ）をジメチルホルムアミド（１５０μｌ）および水（１５０μｌ）の混合物に溶解した。４−メチルモルホリン（５０μｌ）を添加し、５分攪拌した後、活性エステル５２のストック溶液を添加した。１時間攪拌した後、混合物を蒸発させ、残渣をＲｐ−１８カラム（水：メタノール＝７：３ｖ／ｖ）で精製して、４８ｍｇの化合物５５を得た。
【００８１】
化合物５５（４８ｍｇ）をジメチルホルムアミドとともに２回共沸させ、脱水して、脱水ジメチルホルムアミド（２．１ｍｌ）に溶解した。トリエチルアミン三酸化イオウ（３１２ｍｇ）を窒素雰囲気下で添加し、混合物を５０℃で一夜攪拌した後、炭酸水素ナトリウム水溶液を添加した。混合物を室温で１時間攪拌し、濃縮して少量にし、セファデックス（商標）Ｇ−２５カラムで脱塩した。単離した物質をＤｏｗｅｘ（商標） ＷＸ８ Ｎａ＋カラム上で水により溶離すると、７３ｍｇの硫酸化ペンタサッカリド誘導体が得られた。この化合物を０．２Ｎの塩酸水溶液（２．０ｍｌ）で処理した。中和した後、混合物をセファデックス（商標）Ｇ−２５カラムで脱塩すると５７ｍｇの化合物５６が得られた。
【００８２】
化合物５６（５０ｍｇ）を緩衝液におけるヒドロキシルアミン溶液１０．７ｍｌに溶解した。（この溶液を得るために、ヒドロキシルアミン塩酸塩（１７４ｍｇ）を０．１Ｍのリン酸二水素ナトリウム水溶液１００ｍｌに溶解し、４Ｎの水酸化ナトリウム水溶液でｐＨを７．５に調整した。）反応混合物を２０℃で９０分間攪拌した後、ｐＨを８．５にし、混合物をさらに２４時間攪拌した。セファデックス（商標）Ｇ−５０カラムにより混合物を脱塩して精製すると、４０ｍｇの純粋なビス複合体Ｖが単離された。〔α〕Ｄ ２０＝＋４２．９°（ｃ＝１；水）
【００８３】
【化２５】
【００８４】
【化２６】
実施例６
ビス複合体ＶＩをビス複合体Ｖに関して記載した方法と同様に合成したが、化合物５３の代わりにテトラサッカリド５７（H. Lucas et al., Angew. Chem. 1993, 32(3), 434-436のテトラサッカリド１２）を使用した点のみが異なる。〔α〕Ｄ ２０＝＋３１．６°（ｃ＝０．８２；水）
【００８５】
【化２７】
実施例７
ビス複合体ＶIIの合成は実施例５の方法に従ったが、モノ複合体５４の代わりに化合物８９を使用した点が異なる。化合物８９は、化合物３４の合成法（実施例３に記載）に従い、モノサッカリド２４の代わりに化合物６０を使用して合成した。〔α〕Ｄ ２０＝＋６６．６°（ｃ＝０．５；水）
【００８６】
【化２８】
化合物６０の合成
化合物５８（２９ｇ）およびヨードメタン（１５．５ｍｌ）をジメチルホルムアミド（５０ｍｌ）に溶解した。その溶液を水素化ナトリウム（１０．５ｇ）のジメチルホルムアミド懸濁物に２０℃で滴下した。混合物を１６時間攪拌し、過剰の水素化ナトリウムをメタノールにより分解した。水を添加し、混合物を酢酸エチルで抽出した。濃縮した後、化合物５９（２５ｇ）を単離した。化合物５９（４４ｇ）をジクロロメタン（９０ｍｌ）に溶解し、トリエチルシラン（９２ｍｌ）を添加した。トリフルオロ酢酸（４４ｍｌ）および無水トリフルオロ酢酸（０．９ｍｌ）を滴下し、混合物を２０℃で１時間攪拌した。炭酸水素ナトリウムの冷水溶液で反応を停止し、酢酸エチルで抽出し、脱水濃縮乾固した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーにかけると、３１ｇの化合物６０が得られた。
【００８７】
【化２９】
実施例８
モノサッカリド６９を次のように合成した。１，６−無水マンノース６１（１９．１ｇ）のアセトン（７５ｍｌ）および２，２−ジメトキシプロパン（７５ｍｌ）における溶液に、カンファースルホン酸（２００ｍｇ）を添加した。反応混合物を一夜攪拌した。トリエチルアミンを添加し、溶媒を蒸発させた。ジクロロメタンを残渣に添加し、塩を濾別し、濾液を蒸発乾固した。粗生成物をカラムクロマトグラフィーにかけると、１５ｇの化合物６２が得られた。
【００８８】
化合物６２（３．０ｇ）およびテトラエチレングリコール ジ−ｐ−トシレートを脱水テトラヒドロフラン（２５０ｍｌ）に溶解した。混合物を６０℃に加熱し、水素化ナトリウム（９００ｍｇ）を窒素雰囲気下で添加した。３０分攪拌した後、混合物を濃縮し、カラムクロマトグラフィーで精製すると、３．９ｇの粗化合物６３が得られた。
【００８９】
化合物６３（３．９ｇ）をテトラヒドロフラン（２５ｍｌ）に溶解し、Ｎ−メチルベンジルアミン（１．９５ｍｌ）を添加した。混合物を還流温度に３０分間加熱し、濃縮すると、５．０ｇの粗化合物６４が得られた。
【００９０】
粗化合物６４（５．１ｇ）を３０ｍｌのメタノール：１Ｎ塩酸＝９：１（ｖ／ｖ）に溶解し、その混合物を８５℃で５時間攪拌した。冷却後、ピリジン（５０ｍｌ）を添加し、その溶液を濃縮して粗化合物６５を得た。
【００９１】
粗化合物６５を７５ｍｌのピリジン：無水酢酸＝２：１（ｖ／ｖ）に溶解した。４−ジメチルアミノピリジン（２５ｍｇ）を添加し、その混合物を室温で４時間攪拌した。混合物をトルエンで希釈し、蒸発させた。残渣を酢酸エチルに溶解し、希塩酸を添加した。抽出後、酸性の水層を水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ１０にし、酢酸エチルで再び抽出した。有機層を脱水濃縮乾固した。粗生成物をカラムクロマトグラフィーで精製すると１．８６ｇの化合物６６が得られた。
【００９２】
化合物６６（１．８６ｇ）を無水酢酸（４５ｍｌ）およびトリフルオロ酢酸８３．８ｍｌ）の混合物に溶解した。その溶液を２０℃で６０時間攪拌した後、トルエンで希釈した。濃縮後、残渣を酢酸エチルに溶解し、炭酸水素ナトリウムで洗浄した。有機層を脱水濃縮乾固した。粗生成物をカラムクロマトグラフィーにかけると、０．５ｇの化合物６７が得られた。
【００９３】
化合物６８および６９は、各々、化合物２７および２８に関して実施例３で記載した方法に従って合成した。
【００９４】
【化３０】
【００９５】
【化３１】
化合物６９をテトラサッカリド５７と結合した後、けん化および水素添加分解（各々、化合物３２、３３および３４に関して実施例３で記載したように）して化合物７０を得た。
【００９６】
化合物７０を活性エステル５２で処理した後、硫酸化（実施例５の化合物５５および５６の合成に従って）すると化合物７１が得られた。
【００９７】
化合物７１をヒドロキシルアミンで処理（実施例５の化合物５６からのビス複合体Ｖの合成に従って）するとビス複合体VIIIが生成した。〔α〕D 20＝＋２７．３°（ｃ＝１；水）
実施例９
ビス複合体ＩＸを実施例４の方法に従って合成したが、グルコピラノシルイミデート２８の代わりにマンノピラノシルイミデート６９の類似体を使用する点が異なる。その類似体は、テトラエチレングリコール側鎖の端に−Ｎ（ＣＨ3 ）Ｂｎの代わりに−Ｎ3 を有する。−Ｎ3 を含有する化合物は、化合物６３をＮ−メチルベンジルアミンの代わりにアジ化リチウムと反応させることにより合成した。アジド含有マンノピラノシルイミデートを得るための他の全反応工程は、６９の合成と同様であった。〔α〕D 20＝＋３３．２°（ｃ＝０．２５；水）
【００９８】
【化３２】
実施例１０
ビス複合体Ｘの合成は実施例９の方法に従ったが、ペンタサッカリド部分の合成では、テトラサッカリド５７の代わりにテトラサッカリド５３を使用した点が異なる。〔α〕Ｄ ２０＝＋２６．５°（ｃ＝１；水）
【００９９】
【化３３】
実施例１１
ビス複合体ＸＩは、化合物３２のビス複合体 IIIへの変換（実施例３）に従って化合物７５から合成したが、Ｎ−（ベンジルオキシカルボニルオキシ）スクシンイミドの代わりにスクシンイミドＮ−（ベンジルオキシカルボニルオキシ）グリシンを使用した点が異なる。〔α〕Ｄ ２０＝＋２５．７°（ｃ＝０．４９；水）
【０１００】
【化３４】
化合物７５の合成
２１４ミリモルの化合物２８および１７８ミリモルの化合物７２（ＥＰ５２９７１５、合成Ｖ参照）を室温で４ｍｌのジクロロメタンに溶解し、１６０ｍｇの分子ふるい４オングストロームを添加した。この混合物を１時間攪拌した。次いで、混合物を−２０℃に冷却し、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリルの４０ｍＭジクロロメタン溶液を２１．４ミリモル添加した。反応混合物を１５分間攪拌した後、セライトで濾過し、炭酸水素ナトリウム水溶液および水で洗浄して、蒸発乾固した。残渣をトリフルオロ酢酸および無水酢酸の混合物に溶解することによりアセトリシスにかけた。反応生成物をベンジルアミン／ジエチルエーテルで処理し、次いで、炭酸カリウムの存在下、トリクロロアセトニトリル／ジクロロメタンで処理して化合物７３（収率：５０％）を得た。
【０１０１】
０．１２１ミリモルの化合物７３および０．０９３ミリモルの化合物７４（ＥＰ５２９７１５、合成ＩＸを参照）を３．２ｍｌのジクロロメタンに溶解した。分子ふるいの存在下、アルゴン雰囲気下で、混合物を−２０℃に冷却し、次いで、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリルのジクロロメタン溶液を０．４７０ｍｌ添加した。反応混合物を−２０℃で１時間攪拌した後、濾過・水洗し、蒸発させて、セファデックス（商標）ＬＨ−２０カラム、次いでシリカカラムで精製すると化合物７５（６２％）が得られた。
【０１０２】
【化３５】
実施例１２
マルトペントース７６（５００ｍｇ）を１５ｍｌのピリジン：無水酢酸＝２：１（ｖ／ｖ）に溶解し、一夜攪拌して濃縮した。トルエンとともに共沸させると、９３０ｍｇの化合物７７が得られた。
【０１０３】
反応７７→７８→７９は、２６→２７→２８の変換に関して記載した方法に従って行い、次いで、化合物８０を得るためのカップリング反応を、化合物２８および３１のカップリング反応（実施例３参照）に関して記載した方法に従って行った。
【０１０４】
化合物８０（３００ｍｇ）を脱水メタノールに溶解し、少量のカリウムｔ−ブトキシドを添加した。混合物を一夜攪拌した。Ｄｏｗｅｘ（商標） Ｈ＋を添加して混合物を中和し、濾過後、濾液を濃縮して１８０ｍｇの化合物８１を得た。
【０１０５】
化合物８１を化合物３５（実施例３）に関して記載した方法に従って硫酸化し、化合物８２を生成した。化合物１６の１７への変換（実施例１参照）に関して記載した方法に従って化合物８２を水素添加分解すると、化合物８３が得られた。
【０１０６】
非対称ビス複合体ＸIIの合成
溶液Ａ
化合物８３（４２ｍｇ）を０．１Ｍのリン酸二水素ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．５）（１．３ｍｌ）およびジメチルホルムアミド（０．５ｍｌ）の混合物に溶解し、スルホスクシンイミジル４−（ｐ−マレイミドフェニル）ブチラート（７ｍｇ）を添加した。混合物を１５分攪拌した。
【０１０７】
反応混合物Ｂ
モノ複合体７１（１７．５ｍｇ）を、アルゴン雰囲気下で、５０ミリモルのヒドロキシルアミンの０．１Ｍリン酸二水素ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．５）における溶液１．７ｍｌに溶解した。混合物を１時間攪拌すると化合物８４の溶液が得られた。この溶液に、アルゴン雰囲気下で、１当量の溶液Ａを添加した。混合物をさらに２時間攪拌した。この工程中に対称ビス複合体も生成し、これをジチオトレイトール処理により除去した。３０分攪拌した後、混合物をセファデックス（商標）Ｇ−５０カラムにかけて精製すると、４．７ｍｇの非対称ビス複合体ＸIIが得られた。〔α〕Ｄ ２０＝＋４０．３°（ｃ＝０．３８；水）
【０１０８】
【化３６】
【０１０９】
【化３７】
【０１１０】
【化３８】
【０１１１】
【化３９】
実施例１３
非対称ビス複合体 XIII をビス複合体ＸIIの合成に関して記載した方法に従って合成した。ペタンサッカリド７１の代わりに、類似化合物８５を使用した。化合物８５は、化合物５４の化合物５６への変換（実施例５参照）に関して記載したように、化合物８９を活性エステル５２によりスペーサー延長し、硫酸化することにより変換して得た。化合物８９は実施例７に記載した。〔α〕Ｄ ２０＝＋６５．４°（ｃ＝０．０９；水）
【０１１２】
【化４０】
【０１１３】
【化４１】
実施例１４
硫酸化マルトトリオシド８７を、化合物７６からのマルトペンタオシド８３の合成（実施例１２参照）に関して記載した方法に従って、化合物８６から合成した。
【０１１４】
反応Ａ：化合物８７（２５ｍｇ）を０．１Ｍのリン酸二水素ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．５）（１．０ｍｌ）に溶解し、スルホスクシンイミジル−（４−ヨードアセチル）アミノベンゾエート（２１ｍｇ）を添加した。混合物を２０℃で３０分攪拌し、セファデックス（商標）Ｇ−１５カラムにかけて精製すると、生成物が３０ｍｇ得られた。
【０１１５】
反応Ｂ：化合物８５（１５ｍｇ）をアルゴン雰囲気下で、５０ミリモルのヒドロキシルアミンの０．１Ｍリン酸二水素ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．５）における溶液１．７ｍｌに溶解した。混合物を２０℃で１時間攪拌し、セファデックス（商標）Ｇ−２５カラムにかけて精製すると１４ｍｇの化合物８８が得られた。
【０１１６】
反応Ａで得られた物質および化合物８８を０．１Ｍのリン酸水素ナトリウム緩衝液（１ｍｌ）に溶解し、アルゴン雰囲気下、４℃で、６０時間攪拌した。ジチオトレイトール処理により対称ビス複合体を除去した。３０分攪拌した後、混合物をセファデックス（商標）Ｇ−５０カラムにかけて精製すると、１３ｍｇのビス複合体ＸIVが得られた。〔α〕Ｄ ２０＝＋５５．７°（ｃ＝０．４６；水）
【０１１７】
【化４２】
【０１１８】
【化４３】
【０１１９】
【化４４】
実施例１５
非対称ビス複合体ＸＶを、非対称ビス複合体ＸIVの合成に関して記載した方法に従って合成した。マルトトリオシド８７の代わりに化合物９１を使用した。
【０１２０】
硫酸化セロビオース誘導体９１を、化合物７７からの化合物８３の合成（実施例１２）に関して記載した方法に従って、セロビオースオクタアセテート９０から合成した。〔α〕D 20＝＋５１．２°（ｃ＝０．８３；水）
【０１２１】
【化４５】
【０１２２】
【化４６】
【産業上の利用分野】
本発明は、２個の糖とスペーサーとを含んでなる調整可能な（ｔｕｎｅａｂｌｅ）二結合体、二結合体の製造方法、二結合体を含んでなる医薬組成物、及び医薬品製造での二結合体の使用に関する。
【０００２】
【従来の技術】
２個の糖とスペーサーとを含んでなる抗血栓症二結合体はヨーロッパ特許出願第３１２，０８６号で知られている。これらの化合物の糖部分は、硫酸化ガラクトピラノシル、マンノピラノシル又はグルコピラノシル単位を含んでいる。これらの糖は、ヨーロッパ特許出願第５２９，７１５号に開示されている、ウロン酸含有のグリコサミノグリカンのクラスにもグリコサミノグリカノイドのクラスにも属さない。これらの糖がそれ自体で抗血栓症活性を示すかどうかは開示されていない。更には、非常に特異的な構造を有し、８原子と短い鎖長を有し得るスペーサーだけが開示されているが、本発明の二結合体の場合、スペーサーの鎖長が２０原子未満と短いと活性がないことが判明している。その上、ヨーロッパ特許出願第３１２，０８６号に開示されている二結合体の場合、糖は両方ともその還元末端でスペーサーに結合されている。
【０００３】
【発明が解決しようする課題及び課題を解決するための手段】
本発明は、２個の糖とスペーサーとを含んでなり、各糖が、同一であるか又は異なり且つ少なくとも１個の単位をウロン酸とする単糖単位を２〜６個含んでなる調整可能な二結合体に関し、この二結合体は、少なくとも一方の糖がそれ自体で抗血栓症活性を有し、スペーサーが少なくとも一方の糖を他方の糖に非還元末端で結合し、スペーサーの鎖長が２０〜１２０原子であることを特徴とする。
【０００４】
グリコサミノグリカン型の小さい炭水化物分子が強力な抗Ｘａ阻害剤であることは知られている。例えば、ヨーロッパ特許第８４９９９号を参照されたい。以後出願された特許では、これらの塩基性分子の多くの変形が同様の活性を有することが判明した。今日では、これらの比較的小さい分子（ペンタ糖が典型例である）が１種のセリンプロテアーゼ阻害剤のみと、通常は抗トロンビンＩＩＩ（ＡＴ−ＩＩＩ）と相互作用することが明白である。活性化糖ＡＴ−ＩＩＩ複合体は因子Ｘａを選択的に阻害する。天然ヘパリン及びその断片を用いた調査から、ＡＴ−ＩＩＩを媒介とする因子ＩＩａ（トロンビン）の不活性化にはもっと長いグリコサミノグリカンが必要であることが知られている。
【０００５】
実際には、ヘパリン又は他の天然グリコサミノグリカンを断片化すると、通常他の型の化合物（例えばタンパク質、ＤＮＡ、ウイルス等）で汚染された化合物の混合物が得られるため、１６個以上の糖単位を有するグリコサミノグリカンの合成は注目されていない。医学的見地からは、このような混合物は、例えば度々発生する出血の危険性のため、純粋で、十分に限定された合成化合物ほど魅力的ではない。
【０００６】
さて、少なくとも一方の糖がプロテアーゼ阻害剤（例えばＡＴ−ＩＩＩ又はＨＣ−ＩＩ）と相互反応し得、またスペーサーによって互いに結合された（２〜６個の単糖単位を含んでなる）２個の小さな糖分子によって、前述のより大きいグリコサミノグリカンの特性を模倣できることが判明した。２個の糖間の距離を必要最小にするには、最小２０原子のスペーサー長さが必要である。スペーサーが１２０原子より長くなると、合成上の理由から適さなくなる。更には、スペーサーの化学構造が殆ど又は全く重要でないことが判明した。本発明の二結合体の抗血栓症活性及びαＸａ／αＩＩａ活性比は、糖の種類、糖とスペーサーとの結合部位及びスペーサー長さに依存する。例えば、両方とも還元末端でスペーサーに結合した糖は活性がない。
【０００７】
少なくとも一方の糖、好ましくは両方の糖がそれ自体で、ＡＴ−ＩＩＩ及び／若しくはＨＣ−ＩＩに対して親和性を有し、並びに／又は抗因子ＩＩａ及び／若しくは抗因子Ｘａ活性を有する。
【０００８】
適切な二結合体は、少なくとも一方の糖が、式：
【０００９】
【化５】
（式中ではそれぞれ、Ｒは独立して、Ｈ，ＯＨ，ＯＳＯ３ −及びアルコキシの中から選択され、Ｒ１は独立して、ＯＳＯ３ −及びＮＨＳＯ３ −の中から選択され、波線は上方結合又は下方結合を示し、負電荷は水素イオン又はアルカリ金属カチオンによって相殺される）で表される二結合体である。
【００１０】
前記式で使用するアルキルという用語は、１〜８個、好ましくは１〜４個の炭素原子を有するアルキルである。最も好ましいアルキル基はメチル基である。
【００１１】
アルコキシという用語は、１〜８個、好ましくは１〜４個の炭素原子を有するアルコキシ基を意味する。最も好ましいのはメトキシ基である。
【００１２】
ナトリウムは好ましいアルカリ金属である。
【００１３】
最も好ましい二結合体では、少なくとも一方の糖は、式：
【００１４】
【化６】
（式中、Ｒ２は独立して、ＯＳＯ３ −又はＯＣＨ３である）で表される。
【００１５】
前述した如く、スペーサーの化学構造の重要性は二次的なものである。しかしながら、合成上の都合から、他よりも適したスペーサーが幾つかある。容易に導入できる単純なスペーサーは、例えば式：
＝｛Ｑ−ＮＴ−ＣＯ−［（ＣＨ2 ）n −ＮＴ−ＣＯ−（ＣＨ2 ）m ］p −Ｓ−｝
2 、又は
＝｛Ｑ−Ｏ−［（ＣＨ2 ）n −Ｏ］p −（ＣＨ2 ）m −Ｓ−｝2
［式中、２個の基Ｑの一方は一方の糖の非還元末端に付着し、他方の基Ｑは他方の糖の還元又は非還元末端に付着し、各基Ｑはフェニレン（Ｃ6 Ｈ4 ）基又は−［（ＣＨ2 Ｏ）q −（ＣＨ2 ）r −Ｏ］s −［（ＣＨ2 ）t −ＮＴ−ＣＯ］u −（ＣＨ2 ）v であり、Ｔは独立して水素又は先に定義したアルキルであり、ｑは０又は１であり、ｒ及びｔは独立して２〜４であり、ｓは独立して１〜１２、好ましくは１〜６であり、ｕ及びｖは独立して１〜６であり、ｎは１〜８であり、ｍは１〜８であり、ｐは１〜１２であり、原子総数は２０〜１２０個である］で表されるスペーサーである。
【００１６】
他の適切なスペーサーは、式：
【００１７】
【化７】
（式中、２個の基Φの一方は一方の糖の非還元末端に付着し、他方の基Φは他方の糖の還元又は非還元末端に付着し、Φはフェニレン（Ｃ6 Ｈ4 ）基を示し、ｎ、ｍ及びｏは独立して１〜８であり、原子総数は２０〜１２０個である）で表される。
【００１８】
他の同様に適切なスペーサーは、式：
【００１９】
【化８】
（式中、スペーサーの２個の遊離原子価の一方は一方の糖の非還元末端に付着し、スペーサーの他方の遊離原子価は他方の糖の還元又は非還元末端に付着し、Ｔは独立してＨ又は先に定義したアルキルであり、ｍは独立して１〜８であり、ｒは独立して２〜４であり、ｓは独立して１〜１２、好ましくは１〜６であり、ｗは０〜１０、好ましくは０〜７であり、ｘは０又は１であり、ｙは０又は１であり、ｚは０又は１であり、原子総数は２０〜１２０個である）で表される。
【００２０】
これらの実施態様は実現が容易なために好ましい。しかしながら、スペーサーは決して前述したものに限定はされない。
【００２１】
両方の糖が同一の場合、本発明の二結合体は対称的であると称する。両方の糖が互いに異なる場合、二結合体は非対称であると称する。非対称二結合体が、ウロン酸単位を持たない、従ってグリコサミノグリカンやグリコサミノグリカノイドとは異なる１個の糖を、例えばグルコース単位（例えばセロビオース、マルトトリオース、マルトペンタオース又はこれらの誘導体）からなる糖を含むことが好ましい。
【００２２】
本発明の二結合体は、類似化合物の製造で知られている方法で製造することができる。通常、炭水化物部分は、文献で知られている方法を用いて（例えばヨーロッパ特許第８４９９９号、ヨーロッパ特許第３０１６１８号、ヨーロッパ特許第４５４２２０号、ヨーロッパ特許第５２９７１５号及びヨーロッパ特許出願９３０４７６９号の方法を用いて）製造する。一時的な保護基を適用して所望のヒドロキシ基を遊離して、スペーサーに結合することができる。しかしながら、適切な結合基（例えばニトロフェニル基）を所望のヒドロキシ基に付着させることが更に好ましい。ニトロフェニル基は通常の還元段階（ベンジル保護基の開裂）中に対応するアニリン基に変換し、そのアミノ基を用いて（例えば末端にハロゲン若しくはカルボキシル基の活性エステルを有する）残りのスペーサーと結合するか、又は場合によってはこれを一時的に保護し、後の段階で残りのスペーサーに結合することができる。それによって、アニリン基はスペーサーの一部分となる。
【００２３】
炭水化物部分が同一のときに特に有用な他の方法は、スペーサーの半分に相当し、糖と結合しない末端が保護基で保護されており、保護基がなければ二量化する傾向にある部分に炭水化物部分を結合することである。脱保護すると、分子は適切な反応条件下で二量化して、本発明の二結合体となる。
【００２４】
前記方法の変形方法はスペーサーの一部分を炭水化物部分に結合し、その後化学的縮合でスペーサー部分を更に増成（ｂｕｉｌｔ−ｕｐ）することである。この方法は、同一の炭水化物部分を出発材料とする様々なスペーサー長さの二結合体の製造で特に有用である。
【００２５】
他の方法は、スペーサー又はスペーサーの半分を炭水化物部分の一部分に結合し、これを標準的な炭水化物結合技術で残りの炭水化物部分と結合して、必要な二結合体又は二結合体の半分を得、その後必要とあれば、前述したようにスペーサーを脱保護して二量化し得ることである。
【００２６】
本発明の二結合体を使用して、血栓症又は平滑筋細胞増殖を治療又は予防することができる。本発明の二結合体は、ヒトの場合好ましくは体重１ｋｇ当たり０．００１〜１０ｍｇ／日の用量を小腸内投与してもよいし、非経口投与してもよい。経口、頬又は舌下に投与する場合、例えば標準的な参考文献［Ｇｅｎｎａｒｏ等、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， （１８版，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９０，特に第８部：Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｍｕｎｕｆａｃｔｕｒｅを参照）］に記載されているように二結合体を医薬的に適切な助剤と混合し、これを圧縮して固形剤（例えば丸剤及び錠剤）にしてもよいし、加工してカプセル又は坐剤にしてもよい。非経口投与する場合は、二結合体を溶液、懸濁液、乳濁液形態の医薬的に適した液体による注射若しくは注入調製物として、又はスプレー（例えば点鼻スプレー）として適用することもできる。
【００２７】
薬剤（例えば錠剤）の製造では、慣用の添加剤（例えば充填剤、着色剤、ポリマー結合剤等）の使用が考えられる。一般に、活性化合物の機能を妨げない医薬的に許容できる添加剤を使用することができる。
【００２８】
組成物と一緒に投与できる適切な担体には、適量で使用するラクトース、デンプン、セルロース誘導体等又はこれらの混合物が含まれる。
【００２９】
本発明の化合物の調整性（ｔｕｎｅａｂｉｌｉｔｙ）を表Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩに示す。糖、スペーサー長さ及びこれらの組み合わせでαＸａ／αＩＩａ活性比を調整できることは明白である。
【００３０】
スペーサー長さは、スペーサーと結合した糖の酸素原子は数に入れずに、２個の糖間の最短鎖に沿って算出したスペーサーの原子数である。
【００３１】
【表１】
ｂｉｓｃｏｎｊ．＝二結合体
ｓｐａｃｅｒｌ．＝スペーサー長さ
ａ 抗Ｘａ活性（単位／ｍｇ）は、Ａ．Ｎ．Ｔｅｉｅｎ及びＭ． Ｌｅｅの方法（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ Ｒｅｓｅｒａｃｈ， １０， ３９９−４１０（１９７７））で決定した。
【００３２】
ｂ 抗ＩＩａ活性（単位／ｍｇ）は、Ｍ．Ｌ． Ｌａｒｓｏｎ等の方法（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ Ｒｅｓｅｒａｃｈ， １３， ２８５−２８８（１９７８））で決定した。
【００３３】
結論：表Ｉでは、糖を変えることによって二結合体のαＸａ／αＩＩａ活性比を調整できることが分かる。
【００３４】
【表２】
結論：表ＩＩは、スペーサー長さを変えることによって二結合体のαＸａ／αＩＩａ活性比を調整できることを示している。
【００３５】
【表３】
結論：表ＩＩＩは、糖及びスペーサー長さを変えることによって二結合体のαＸａ／αＩＩａ活性比を調整できることを示している。
【００３６】
実施例１
モノサッカリド５
化合物１（３．５ｇ）（Carb. Res. 1989, 186(2), 189-205参照）をジメチルホルムアミド（３０ｍｌ）に溶解し、水素化ナトリウム（５６０ｍｇ）を窒素雰囲気下で添加した。混合物を０℃に冷却し、１−フルオロ−４−ニトロベンゼン（１．６３ｍｌ）を２分間添加した。３０分攪拌した後、混合物を濃縮し、ジクロロメタンおよび水で希釈して抽出した。通常の処理を行った後、残渣をカラムクロマトグラフィーで精製して４ｇの化合物２を得た。化合物２をアセトリシスにより化合物３に変換し、次いでけん化により化合物４にし、トリクロロアセトニトリルとの反応により化合物５を得た。化合物３、４および５の合成に対しては、各々、化合物９（下記参照）、４１および４２（実施例４参照）の製造に関して記載した方法を使用した。
【００３７】
【化９】
テトラサッカリド１４
化合物７を、化合物３９（実施例４参照）に関して記載した方法に従って、化合物６（Bioorganic and Medicinal Letters 1992, 2(9), 905）から合成した。
【００３８】
化合物７（１４．６ｇ）をアセトン（２６０ｍｌ）に溶解し、０℃に冷却した。この温度で、水（５３ｍｌ）および濃硫酸（１０．５ｍｌ）の混合物における酸化クロム（VI）（１０．８ｇ）の溶液を滴下した。混合物を２℃で１６時間攪拌した。過剰の酸化クロム（VI）をメタノールで分解し、混合物を炭酸水素ナトリウムで中和した後、水を添加した。ジクロロメタンで抽出した後、有機層を脱水濃縮乾固した。残留油状物を脱水ジメチルホルムアミド（１７４ｍｌ）に溶解した。炭酸水素カリウム（７ｇ）およびヨードメタン（７ｍｌ）を添加し、混合物を室温で３時間攪拌した。濃縮後、残渣をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製すると、９．１ｇの化合物８が得られた。
【００３９】
化合物８（２．８ｇ）を無水酢酸（５０ｍｌ）、酢酸（０．３ｍｌ）およびトリフルオロ酢酸（３．０ｍｌ）の混合物に溶解した。３時間攪拌した後、混合物を濃縮し、トルエンとともに共沸させると３．１ｇの化合物９が得られた。
【００４０】
化合物１０は化合物９のけん化により合成し、次いで、イミデート１１に変換した。化合物４１および４２の合成に関して記載した方法を使用した（実施例４参照）。
【００４１】
【化１０】
化合物１１を化合物１２（Jaurand G., et al., Bioorganic and Medicinal Chem. Lett., 2(9), 897-900 (1992)、化合物１２参照）と結合して化合物１３を生成し、そのＬｅｖ基を脱離してテトラサッカリド１４を得た。化合物４３および４４の合成に関して記載した方法に従った（実施例４参照）。
【００４２】
７９ｍｇのテトラサッカリド１４および７０ｍｇのモノサッカリド５のジクロロメタン（２．５ｍｌ）溶液に分子ふるい４オングストローム（７０ｍｇ）を添加した。混合物を−２０℃に冷却し、６．８μｍｏｌのトリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリルを添加した。混合物を３０分攪拌し、炭酸水素ナトリウムを添加した。混合物を濾過し、溶媒を蒸発させ、残渣をシリカクロマトグラフィーで精製すると８８ｍｇのペンタサッカリド１５が得られ、これを７．３ｍｌのテトラヒドロフランに溶解し、−５℃に冷却した。この温度で２．６ｍｌの３０％過酸化水素水溶液を添加し、１０分後、１．２ｍｌの１．２５Ｍ水酸化リチウム水溶液を添加した。混合物を０℃で一夜攪拌し、４．８ｍｌのメタノールおよび１．３ｍｌの４Ｍ水酸化ナトリウム水溶液を添加し、１時間攪拌した後、温度を２０℃に上げて混合物をさらに２０分間攪拌した。反応混合物を６Ｎ塩酸でｐＨ３にし（０℃）、けん化生成物を酢酸エチルで抽出した。過剰の過酸化水素を、５％亜硫酸ナトリウム水溶液による抽出により分解し、有機混合物を硫酸マグネシウムにより脱水して蒸発乾固すると８９ｍｇの粗ペンタサッカリド１６が得られた。
【００４３】
ペンタサッカリド１６を１０．２ｍｌのジメチルホルムアミドに溶解し、５５ｍｇの１０％Ｐｄ／木炭を添加した。水素添加分解を一夜行った後、６４ｍｇの粗ペンタサッカリド１７が得られた。
【００４４】
【化１１】
【００４５】
【化１２】
ペンタサッカリド１７（４９ｍｇ）をエタノール−水（１：１）の混合物２ｍｌに溶解し、この混合物に１６ｍｇの炭酸水素ナトリウムおよび１０．４μｌの塩化ベンジルオキシカルボニル（Ｚ−Ｃｌ）を添加した。室温で４時間攪拌した後、溶媒を蒸発させ、メタノールを残渣に添加した。塩を濾別し、濾液を蒸発させると６７ｍｇの粗ペンタサッカリド１８が得られ、これを２．５ｍｌの脱水ジメチルホルムアミドに溶解した。窒素雰囲気下で４４２ｍｇのトリエチルアミン三酸化イオウを添加してその混合物を５０℃で一夜攪拌した後、炭酸水素ナトリウム水溶液を氷冷しながら添加した。混合物を室温で１時間攪拌した後、濃縮して体積を小さくし、セファデックス（商標）Ｇ−２５カラムにより脱塩した。単離した物質をＤｏｗｅｘ（商標） ５０ＷＸ８ Ｎａ＋カラム上で水により溶離すると、１０４ｍｇのペンタサッカリド１９が得られた。１００ｍｇのペンタサッカリド１９を８ｍｌの水に溶解し、１０％Ｐｄ／木炭を添加し、混合物を一夜水素添加分解すると、８３ｍｇのペンタサッカリド２０が得られた。〔α〕Ｄ ２０＝＋５８．１°（ｃ＝１；水）。
【００４６】
９．６ｍｇのペンタサッカリド２０および４．８ｍｇのスルホ−ＬＣ−ＳＰＤＰを０．１ｍｌのエタノールおよび０．３５ｍｌの０．０５Ｍリン酸水素二ナトリウム水溶液（ｐＨ７．８）の混合物に溶解した。混合物を３時間攪拌し、セファデックスＧ−２５カラムにより脱塩すると、９．０ｍｇのモノ複合体２１が得られた。
【００４７】
モノ複合体２１（８．９ｍｇ）をｐＨ８．０の０．０５Ｍリン酸二水素ナトリウム水溶液１．５ｍｌに溶解した。トリブチルホスフィンの０．０５Ｍイソプロパノール溶液１５７μｌを室温で添加し、その混合物を１時間攪拌して、反応混合物に空気を通した。セファデックス（商標）Ｇ−２５カラム上で混合物を脱塩した後、粗ビス複合体をモノＱアニオン交換カラムを使用してＨＰＬＣで精製すると４．０ｍｇのビス複合体Ｉが得られた。〔α〕Ｄ ２０＝＋４５．７° （ｃ＝０．３５；水）。
【００４８】
【化１３】
【００４９】
【化１４】
実施例２
モノ複合体２１（１４．７ｍｇ）をメタノール１ｍｌ及びｐＨ８の０．１Ｍリン酸二水素ナトリウム水溶液２ｍｌの混合物に溶解した。トリブチルホスフィンの０．０５Ｍイソプロパノール溶液２４７μｌを室温で窒素下に添加した。混合物を１時間攪拌して、ジメチルホルムアミド０．５ｍｌ中の２３（１．６８ｍｇ）溶液を加えた後、混合物を更に３時間攪拌した。セファデックス（商標）Ｇ−２５カラム上で混合物を脱塩した後、粗生成物をセファデックス（商標）Ｇ−５０カラム上で１０％アセトニトリル含有０．０５Ｍ塩化ナトリウム水溶液により溶出することにより更に精製した。集めた画分をセファデックス（商標）Ｇ−２５上で脱塩するとビス複合体 II ５．５ｍｇが得られた。〔α〕Ｄ ２０＝＋７．０°（ｃ＝０．３４；水）
【００５０】
【化１５】
実施例３
メチル２，３，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−グルコピラノシド（２．１ｇ）２４を７５ｍｌのジメチルホルムアミドに溶解し、室温で５．５ｍｌのテトラエチレングリコール ジ−ｐ−トシレートを添加した。水素化ナトリウム（１６２ｍｇ）を添加し、混合物を５０℃で２時間加熱した。アジ化リチウム（４．５ｇ）を添加し、反応混合物を７０℃でさらに５時間攪拌した。次いで、混合物を濃縮し、カラムクロマトグラフィーで精製すると、１．５２ｇの化合物２５が得られた。
【００５１】
化合物２５（７６８ｍｇ）の無水酢酸溶液４０ｍｌ（−２０℃）に、硫酸の５％（ｖ／ｖ）無水酢酸溶液１０ｍｌ（−２０℃に冷却）を添加した。混合物をこの温度で１０分攪拌した後、酢酸ナトリウム（３．５ｇ）を添加して反応を停止した。１０分後、混合物を酢酸エチルで抽出し、抽出物を一緒にして１０％の炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、脱水濃縮乾固した。粗生成物をカラムクロマトグラフィーにかけると５７３ｍｇの化合物２６が得られた。
【００５２】
化合物２６（２６９ｍｇ）を５．５ｍｌのジメチルホルムアミド、３１μｌの酢酸および２８μｌのヒドラジン一水和物の混合物に溶解した。混合物を室温で３時間攪拌し、ジクロロメタンおよび水で希釈して抽出した。生成物を通常の処理およびカラムクロマトグラフィーにかけると、１５８ｍｇの化合物２７が得られた。
【００５３】
化合物２７（１５８ｍｇ）を２ｍｌのジクロロメタンに溶解した。トリクロロアセトニトリル（０．１３ｍｌ）および炭酸セシウム（１７．８ｍｇ）を窒素雰囲気下で添加した。混合物を室温で１時間攪拌し、濾過して蒸発させた。生成物をカラムクロマトグラフィーにかけると１８２ｍｇの化合物２８が得られた。
【００５４】
【化１６】
化合物３１は、化合物１１を化合物２９（H. Lucas et al., Angew. Chem. 1993, 105, 462-464参照）とカップリングして化合物３０を生成し、それからＬｅｖ基を脱離することにより合成した。化合物４３および４４の合成に関して記載した方法に従った（実施例４参照）。
【００５５】
【化１７】
化合物３２、３３、および３４を各々、化合物１５、１６および１７に関して記載した方法と同様に合成した（実施例１参照）。
【００５６】
化合物３４（３５ｍｇ）をストック溶液であるトリエチルアミン（２８０μｌ）のジメチルホルムアミド（２０ｍｌ）溶液の０．３５ｍｌに溶解した。Ｎ−（ベンジルオキシカルボニルオキシ）スクシンイミド（１０．６ｍｇ）をｐＨ７．５で添加し、３０分攪拌した後、溶媒を一部蒸発除去した。残渣は、最初にセファデックス（商標）ＬＨ−２０カラムで精製し、次いでＲｐ−１８カラム（アセトニトリル：水：アンモニア＝９５：５：２ ｖ／ｖ）でさらに精製して２９．４ｍｇの化合物３５を得た。
【００５７】
化合物３６は、化合物１９（実施例１参照）に関して記載した方法と同様に合成した。〔α〕D 20＝２２．８°（ｃ＝０．３；水）。
【００５８】
化合物３６（５１．４ｍｇ）を４ｍｌの水に溶解し、触媒（１０％Ｐｄ／Ｃ）を添加した。混合物を水素ガス雰囲気下、室温で５時間攪拌した。濾過後、溶媒を蒸発させると４７ｍｇの化合物３７が得られた。
【００５９】
化合物３７（１５．１ｍｇ）をＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンのジメチルホルムアミド：水＝７：３溶液（ｐＨ９．０）４５０μｌに溶解し、過剰量のスルホスクシンイミジル ６−〔３’（２−ピリジルジチオ）プロピオアミド〕ヘキサノエートを９．０の一定ｐＨで添加した。２０分攪拌した後、混合物を、水：アセトニトリル＝８：２（ｖ／ｖ）によりセファデックス（商標）Ｇ−２５カラムで脱塩すると、１６ｍｇの粗化合物３８が得られた。
【００６０】
ビス複合体 IIIは、化合物２１のビス複合体Ｉへの変換に関して実施例１に記載した方法と同様に化合物３８から合成した。〔α〕D 20＝＋２９．６°（ｃ＝０．１２５；水）。
【００６１】
【化１８】
【００６２】
【化１９】
【００６３】
【化２０】
実施例４
ビス複合体ＩＶ（〔α〕Ｄ ２０＝＋５０．８°（ｃ＝０．３２；水））は、実施例３の方法に従って合成したが、３１の代わりにテトラサッカリド４４を使用し、Ｎ−（ベンジルオキシカルボニルオキシ）スクシンイミドの代わりにスクシンイミド Ｎ−（ベンジルオキシカルボニルオキシ）グリシンを使用した点が異なる。
【００６４】
【化２１】
テトラサッカリド４４の合成
ジサッカリド２９（０．８ｇ）をジオキサン（５．３ｍｌ）に溶解した後、レブリン酸（２７８ｍｇ）、１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（４９４ｍｇ）および４−ジメチルアミノピリジン（２５ｍｇ）を添加した。２時間攪拌した後、ジエチルエーテルを添加し、混合物を０℃に冷却した。結晶を濾別し、濾液を濃縮した。残留油状物をカラムクロマトグラフィーにより精製すると、９００ｍｇの化合物３９が得られた。
【００６５】
化合物３９（１ｇ）の無水酢酸（５０ｍｌ）溶液を−２０℃に冷却した。この温度で、１ｍｌの９８％硫酸を２０ｍｌの無水酢酸に添加する（−２０℃）ことにより合成した溶液Ａ１０ｍｌを窒素雰囲気下で添加した。２．５時間攪拌した後、酢酸ナトリウムを添加することにより反応を停止した。酢酸エチルおよび炭酸水素ナトリウム飽和溶液を冷たい反応混合物に添加し、抽出した後、有機層を水で洗浄し、脱水濃縮乾固した。粗生成物をカラムクロマトグラフィーにより精製すると、８００ｍｇの化合物４０が得られた。
【００６６】
化合物４０（８００ｍｇ）を脱水テトラヒドロフラン（１０ｍｌ）に溶解し、ピペリジン（１．３ｍｌ）を窒素雰囲気下で添加した。混合物を２０℃で２０時間攪拌し、次いで酢酸エチルで希釈した。有機層を０．３Ｎの塩酸および水で洗浄し、脱水した。有機層を濃縮した後、残渣をカラムクロマトグラフィーで精製すると、４３０ｍｇの化合物４１が得られた。
【００６７】
化合物４１（４９０ｍｇ）のジクロロメタン（５．４ｍｌ）溶液に炭酸セシウム（４３ｍｇ）およびトリクロロアセトニトリル（０．５２ｍｌ）を添加した。混合物を２０℃で１時間放置した。濾過後、濾液を濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィーで精製すると、４１７ｍｇの化合物４２が得られた。
【００６８】
化合物４２（３１７ｍｇ）および化合物２９（２４３ｍｇ）をトルエンとともに２回共沸させた。ジクロロメタン（７．１ｍｌ）および粉末分子ふるい４オングストローム（２３５ｍｇ）を添加し、混合物を−２０℃に冷却した。この温度でトリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル（８．７５μｌ）のジクロロメタン（２．８ｍｌ）溶液を滴下した。１時間攪拌した後、炭酸水素ナトリウム固体を添加することにより反応を停止した。混合物をさらに１５分間攪拌し、濾過・濃縮した。カラムクロマトグラフィーにより精製すると、３７２ｍｇの化合物４３が得られた。
【００６９】
化合物４３（３７０ｍｇ）をピリジン（１．２ｍｌ）に溶解した。ピリジン（１．２ｍｌ）、酢酸（１．５６ｍｌ）およびヒドラジン水和物（０．１８ｍｌ）の混合物を２０℃で添加し、混合物を７分間攪拌した。水で希釈し、酢酸エチルで抽出した後、有機層を炭酸水素ナトリウム水溶液および水で洗浄し、脱水してカラムクロマトグラフィーにより精製すると、３２４ｍｇの化合物４４が得られた。
【００７０】
【化２２】
実施例５
活性エステル５２の合成
テトラエチレングリコール４５（１０ｇ）を脱水テトラヒドロフラン（１５０ｍｌ）に溶解し、水素化ナトリウム（鉱物油に６０％分散、１．６４ｇ）を０℃で少しずつ添加した。１時間攪拌した後、塩化ｔ−ブチルジメチルシリル（６．１８ｇ）のテトラヒドロフラン（２０ｍｌ）溶液を添加し、混合物を１５分攪拌した。１０分攪拌した後、混合物を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機抽出物を脱水濃縮乾固した。粗生成物をカラムクロマトグラフィーにかけると、６ｇの化合物４６が得られた。
【００７１】
化合物４６（５．０ｇ）をテトラヒドロフラン（８０ｍｌ）に溶解し、ブロモ酢酸ｔ−ブチル（２６．２ｍｌ）を添加した。混合物を５０℃で攪拌し、水素化ナトリウム（１．１６ｇ）を窒素雰囲気下で少しずつ添加した。１時間攪拌した後、化合物４６に関して記載した方法と同様に混合物を処理した。残渣をカラムクロマトグラフィーにかけると化合物４７（５ｇ）が得られた。
【００７２】
化合物４７（３．１ｇ）の酢酸（２５ｍｌ）、水（８．３ｍｌ）およびテトラヒドロフラン（８．３ｍｌ）の混合物における溶液を２０℃で２４時間攪拌した。混合物を水酸化ナトリウム水溶液で中和し、水で希釈して、酢酸エチルで抽出した。抽出物を合わせて脱水濃縮乾固した。粗生成物をシリカゲルカラムにより濾過すると、１．５２ｇの化合物４８が得られた。
【００７３】
化合物４８（１．４ｇ）をジクロロメタン（１２．７ｍｌ）に溶解し、ピリジン（７．７ｍｌ）および塩化ｐ−トルエンスルホニル（１．３ｇ）を添加し、混合物を２０℃で２０時間攪拌した。水で希釈した後、混合物をジクロロメタンで抽出した。
【００７４】
【化２３】
粗生成物を通常の処理およびカラムクロマトグラフィーにかけると、１．５ｇの化合物４９が得られた。
【００７５】
化合物４９（５７０ｍｇ）のアセトン（２０ｍｌ）溶液にチオ酢酸カリウム（３５０ｍｇ）を添加した。その溶液を２０℃で１時間放置した。混合物を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機層を蒸発させ、シリカゲルカラムにより濾過した後、４４０ｍｇの化合物５０を単離した。
【００７６】
化合物５０（１２０ｍｇ）をジクロロメタン（１．５ｍｌ）に溶解し、トリフルオロ酢酸（０．２０ｍｌ）を室温で添加した。４時間攪拌した後、混合物をトルエンで希釈し、蒸発させた。残渣をトルエンとともに３回共沸させた。粗生成物をカラムクロマトグラフィーにかけると、９１ｍｇの化合物５１が得られた。
【００７７】
化合物５１（２９．１ｍｇ）を脱水ジメチルホルムアミド（１．５ｍｌ）に溶解し、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１２．８μｌ）を添加した。テトラフルオロホウ酸Ｏ−（Ｎ−スクシンイミジル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム（２２．３ｍｇ）を窒素雰囲気下で添加し、混合物を１．５時間攪拌した。この活性エステル５２のストック溶液を化合物５４のスペーサ延長に使用した。
【００７８】
化合物５４の合成は、化合物３４の合成に関する実施例３の方法に従ったが、化合物３１の代わりにテトラサッカリド５３を使用した点のみが異なる。
【００７９】
【化２４】
化合物５３は、H. Lucas et al., Angew. Chem. 1993, 32(3), 434-436に記載の方法と同様に合成した。この文献では、テトラサッカリド（１２）が図２に示されている。化合物５３の合成では、図２の工程ｄ）を採用したが、ＢｎＢｒの代わりにＣＨ3 Ｉを使用することにより、ベンジル基の代わりにメチル基を導入した。化合物５３の合成のその後の反応工程は、該文献のテトラサッカリド１２の合成と同様であった。
【００８０】
化合物５４（５２ｍｇ）をジメチルホルムアミド（１５０μｌ）および水（１５０μｌ）の混合物に溶解した。４−メチルモルホリン（５０μｌ）を添加し、５分攪拌した後、活性エステル５２のストック溶液を添加した。１時間攪拌した後、混合物を蒸発させ、残渣をＲｐ−１８カラム（水：メタノール＝７：３ｖ／ｖ）で精製して、４８ｍｇの化合物５５を得た。
【００８１】
化合物５５（４８ｍｇ）をジメチルホルムアミドとともに２回共沸させ、脱水して、脱水ジメチルホルムアミド（２．１ｍｌ）に溶解した。トリエチルアミン三酸化イオウ（３１２ｍｇ）を窒素雰囲気下で添加し、混合物を５０℃で一夜攪拌した後、炭酸水素ナトリウム水溶液を添加した。混合物を室温で１時間攪拌し、濃縮して少量にし、セファデックス（商標）Ｇ−２５カラムで脱塩した。単離した物質をＤｏｗｅｘ（商標） ＷＸ８ Ｎａ＋カラム上で水により溶離すると、７３ｍｇの硫酸化ペンタサッカリド誘導体が得られた。この化合物を０．２Ｎの塩酸水溶液（２．０ｍｌ）で処理した。中和した後、混合物をセファデックス（商標）Ｇ−２５カラムで脱塩すると５７ｍｇの化合物５６が得られた。
【００８２】
化合物５６（５０ｍｇ）を緩衝液におけるヒドロキシルアミン溶液１０．７ｍｌに溶解した。（この溶液を得るために、ヒドロキシルアミン塩酸塩（１７４ｍｇ）を０．１Ｍのリン酸二水素ナトリウム水溶液１００ｍｌに溶解し、４Ｎの水酸化ナトリウム水溶液でｐＨを７．５に調整した。）反応混合物を２０℃で９０分間攪拌した後、ｐＨを８．５にし、混合物をさらに２４時間攪拌した。セファデックス（商標）Ｇ−５０カラムにより混合物を脱塩して精製すると、４０ｍｇの純粋なビス複合体Ｖが単離された。〔α〕Ｄ ２０＝＋４２．９°（ｃ＝１；水）
【００８３】
【化２５】
【００８４】
【化２６】
実施例６
ビス複合体ＶＩをビス複合体Ｖに関して記載した方法と同様に合成したが、化合物５３の代わりにテトラサッカリド５７（H. Lucas et al., Angew. Chem. 1993, 32(3), 434-436のテトラサッカリド１２）を使用した点のみが異なる。〔α〕Ｄ ２０＝＋３１．６°（ｃ＝０．８２；水）
【００８５】
【化２７】
実施例７
ビス複合体ＶIIの合成は実施例５の方法に従ったが、モノ複合体５４の代わりに化合物８９を使用した点が異なる。化合物８９は、化合物３４の合成法（実施例３に記載）に従い、モノサッカリド２４の代わりに化合物６０を使用して合成した。〔α〕Ｄ ２０＝＋６６．６°（ｃ＝０．５；水）
【００８６】
【化２８】
化合物６０の合成
化合物５８（２９ｇ）およびヨードメタン（１５．５ｍｌ）をジメチルホルムアミド（５０ｍｌ）に溶解した。その溶液を水素化ナトリウム（１０．５ｇ）のジメチルホルムアミド懸濁物に２０℃で滴下した。混合物を１６時間攪拌し、過剰の水素化ナトリウムをメタノールにより分解した。水を添加し、混合物を酢酸エチルで抽出した。濃縮した後、化合物５９（２５ｇ）を単離した。化合物５９（４４ｇ）をジクロロメタン（９０ｍｌ）に溶解し、トリエチルシラン（９２ｍｌ）を添加した。トリフルオロ酢酸（４４ｍｌ）および無水トリフルオロ酢酸（０．９ｍｌ）を滴下し、混合物を２０℃で１時間攪拌した。炭酸水素ナトリウムの冷水溶液で反応を停止し、酢酸エチルで抽出し、脱水濃縮乾固した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーにかけると、３１ｇの化合物６０が得られた。
【００８７】
【化２９】
実施例８
モノサッカリド６９を次のように合成した。１，６−無水マンノース６１（１９．１ｇ）のアセトン（７５ｍｌ）および２，２−ジメトキシプロパン（７５ｍｌ）における溶液に、カンファースルホン酸（２００ｍｇ）を添加した。反応混合物を一夜攪拌した。トリエチルアミンを添加し、溶媒を蒸発させた。ジクロロメタンを残渣に添加し、塩を濾別し、濾液を蒸発乾固した。粗生成物をカラムクロマトグラフィーにかけると、１５ｇの化合物６２が得られた。
【００８８】
化合物６２（３．０ｇ）およびテトラエチレングリコール ジ−ｐ−トシレートを脱水テトラヒドロフラン（２５０ｍｌ）に溶解した。混合物を６０℃に加熱し、水素化ナトリウム（９００ｍｇ）を窒素雰囲気下で添加した。３０分攪拌した後、混合物を濃縮し、カラムクロマトグラフィーで精製すると、３．９ｇの粗化合物６３が得られた。
【００８９】
化合物６３（３．９ｇ）をテトラヒドロフラン（２５ｍｌ）に溶解し、Ｎ−メチルベンジルアミン（１．９５ｍｌ）を添加した。混合物を還流温度に３０分間加熱し、濃縮すると、５．０ｇの粗化合物６４が得られた。
【００９０】
粗化合物６４（５．１ｇ）を３０ｍｌのメタノール：１Ｎ塩酸＝９：１（ｖ／ｖ）に溶解し、その混合物を８５℃で５時間攪拌した。冷却後、ピリジン（５０ｍｌ）を添加し、その溶液を濃縮して粗化合物６５を得た。
【００９１】
粗化合物６５を７５ｍｌのピリジン：無水酢酸＝２：１（ｖ／ｖ）に溶解した。４−ジメチルアミノピリジン（２５ｍｇ）を添加し、その混合物を室温で４時間攪拌した。混合物をトルエンで希釈し、蒸発させた。残渣を酢酸エチルに溶解し、希塩酸を添加した。抽出後、酸性の水層を水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ１０にし、酢酸エチルで再び抽出した。有機層を脱水濃縮乾固した。粗生成物をカラムクロマトグラフィーで精製すると１．８６ｇの化合物６６が得られた。
【００９２】
化合物６６（１．８６ｇ）を無水酢酸（４５ｍｌ）およびトリフルオロ酢酸８３．８ｍｌ）の混合物に溶解した。その溶液を２０℃で６０時間攪拌した後、トルエンで希釈した。濃縮後、残渣を酢酸エチルに溶解し、炭酸水素ナトリウムで洗浄した。有機層を脱水濃縮乾固した。粗生成物をカラムクロマトグラフィーにかけると、０．５ｇの化合物６７が得られた。
【００９３】
化合物６８および６９は、各々、化合物２７および２８に関して実施例３で記載した方法に従って合成した。
【００９４】
【化３０】
【００９５】
【化３１】
化合物６９をテトラサッカリド５７と結合した後、けん化および水素添加分解（各々、化合物３２、３３および３４に関して実施例３で記載したように）して化合物７０を得た。
【００９６】
化合物７０を活性エステル５２で処理した後、硫酸化（実施例５の化合物５５および５６の合成に従って）すると化合物７１が得られた。
【００９７】
化合物７１をヒドロキシルアミンで処理（実施例５の化合物５６からのビス複合体Ｖの合成に従って）するとビス複合体VIIIが生成した。〔α〕D 20＝＋２７．３°（ｃ＝１；水）
実施例９
ビス複合体ＩＸを実施例４の方法に従って合成したが、グルコピラノシルイミデート２８の代わりにマンノピラノシルイミデート６９の類似体を使用する点が異なる。その類似体は、テトラエチレングリコール側鎖の端に−Ｎ（ＣＨ3 ）Ｂｎの代わりに−Ｎ3 を有する。−Ｎ3 を含有する化合物は、化合物６３をＮ−メチルベンジルアミンの代わりにアジ化リチウムと反応させることにより合成した。アジド含有マンノピラノシルイミデートを得るための他の全反応工程は、６９の合成と同様であった。〔α〕D 20＝＋３３．２°（ｃ＝０．２５；水）
【００９８】
【化３２】
実施例１０
ビス複合体Ｘの合成は実施例９の方法に従ったが、ペンタサッカリド部分の合成では、テトラサッカリド５７の代わりにテトラサッカリド５３を使用した点が異なる。〔α〕Ｄ ２０＝＋２６．５°（ｃ＝１；水）
【００９９】
【化３３】
実施例１１
ビス複合体ＸＩは、化合物３２のビス複合体 IIIへの変換（実施例３）に従って化合物７５から合成したが、Ｎ−（ベンジルオキシカルボニルオキシ）スクシンイミドの代わりにスクシンイミドＮ−（ベンジルオキシカルボニルオキシ）グリシンを使用した点が異なる。〔α〕Ｄ ２０＝＋２５．７°（ｃ＝０．４９；水）
【０１００】
【化３４】
化合物７５の合成
２１４ミリモルの化合物２８および１７８ミリモルの化合物７２（ＥＰ５２９７１５、合成Ｖ参照）を室温で４ｍｌのジクロロメタンに溶解し、１６０ｍｇの分子ふるい４オングストロームを添加した。この混合物を１時間攪拌した。次いで、混合物を−２０℃に冷却し、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリルの４０ｍＭジクロロメタン溶液を２１．４ミリモル添加した。反応混合物を１５分間攪拌した後、セライトで濾過し、炭酸水素ナトリウム水溶液および水で洗浄して、蒸発乾固した。残渣をトリフルオロ酢酸および無水酢酸の混合物に溶解することによりアセトリシスにかけた。反応生成物をベンジルアミン／ジエチルエーテルで処理し、次いで、炭酸カリウムの存在下、トリクロロアセトニトリル／ジクロロメタンで処理して化合物７３（収率：５０％）を得た。
【０１０１】
０．１２１ミリモルの化合物７３および０．０９３ミリモルの化合物７４（ＥＰ５２９７１５、合成ＩＸを参照）を３．２ｍｌのジクロロメタンに溶解した。分子ふるいの存在下、アルゴン雰囲気下で、混合物を−２０℃に冷却し、次いで、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリルのジクロロメタン溶液を０．４７０ｍｌ添加した。反応混合物を−２０℃で１時間攪拌した後、濾過・水洗し、蒸発させて、セファデックス（商標）ＬＨ−２０カラム、次いでシリカカラムで精製すると化合物７５（６２％）が得られた。
【０１０２】
【化３５】
実施例１２
マルトペントース７６（５００ｍｇ）を１５ｍｌのピリジン：無水酢酸＝２：１（ｖ／ｖ）に溶解し、一夜攪拌して濃縮した。トルエンとともに共沸させると、９３０ｍｇの化合物７７が得られた。
【０１０３】
反応７７→７８→７９は、２６→２７→２８の変換に関して記載した方法に従って行い、次いで、化合物８０を得るためのカップリング反応を、化合物２８および３１のカップリング反応（実施例３参照）に関して記載した方法に従って行った。
【０１０４】
化合物８０（３００ｍｇ）を脱水メタノールに溶解し、少量のカリウムｔ−ブトキシドを添加した。混合物を一夜攪拌した。Ｄｏｗｅｘ（商標） Ｈ＋を添加して混合物を中和し、濾過後、濾液を濃縮して１８０ｍｇの化合物８１を得た。
【０１０５】
化合物８１を化合物３５（実施例３）に関して記載した方法に従って硫酸化し、化合物８２を生成した。化合物１６の１７への変換（実施例１参照）に関して記載した方法に従って化合物８２を水素添加分解すると、化合物８３が得られた。
【０１０６】
非対称ビス複合体ＸIIの合成
溶液Ａ
化合物８３（４２ｍｇ）を０．１Ｍのリン酸二水素ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．５）（１．３ｍｌ）およびジメチルホルムアミド（０．５ｍｌ）の混合物に溶解し、スルホスクシンイミジル４−（ｐ−マレイミドフェニル）ブチラート（７ｍｇ）を添加した。混合物を１５分攪拌した。
【０１０７】
反応混合物Ｂ
モノ複合体７１（１７．５ｍｇ）を、アルゴン雰囲気下で、５０ミリモルのヒドロキシルアミンの０．１Ｍリン酸二水素ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．５）における溶液１．７ｍｌに溶解した。混合物を１時間攪拌すると化合物８４の溶液が得られた。この溶液に、アルゴン雰囲気下で、１当量の溶液Ａを添加した。混合物をさらに２時間攪拌した。この工程中に対称ビス複合体も生成し、これをジチオトレイトール処理により除去した。３０分攪拌した後、混合物をセファデックス（商標）Ｇ−５０カラムにかけて精製すると、４．７ｍｇの非対称ビス複合体ＸIIが得られた。〔α〕Ｄ ２０＝＋４０．３°（ｃ＝０．３８；水）
【０１０８】
【化３６】
【０１０９】
【化３７】
【０１１０】
【化３８】
【０１１１】
【化３９】
実施例１３
非対称ビス複合体 XIII をビス複合体ＸIIの合成に関して記載した方法に従って合成した。ペタンサッカリド７１の代わりに、類似化合物８５を使用した。化合物８５は、化合物５４の化合物５６への変換（実施例５参照）に関して記載したように、化合物８９を活性エステル５２によりスペーサー延長し、硫酸化することにより変換して得た。化合物８９は実施例７に記載した。〔α〕Ｄ ２０＝＋６５．４°（ｃ＝０．０９；水）
【０１１２】
【化４０】
【０１１３】
【化４１】
実施例１４
硫酸化マルトトリオシド８７を、化合物７６からのマルトペンタオシド８３の合成（実施例１２参照）に関して記載した方法に従って、化合物８６から合成した。
【０１１４】
反応Ａ：化合物８７（２５ｍｇ）を０．１Ｍのリン酸二水素ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．５）（１．０ｍｌ）に溶解し、スルホスクシンイミジル−（４−ヨードアセチル）アミノベンゾエート（２１ｍｇ）を添加した。混合物を２０℃で３０分攪拌し、セファデックス（商標）Ｇ−１５カラムにかけて精製すると、生成物が３０ｍｇ得られた。
【０１１５】
反応Ｂ：化合物８５（１５ｍｇ）をアルゴン雰囲気下で、５０ミリモルのヒドロキシルアミンの０．１Ｍリン酸二水素ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．５）における溶液１．７ｍｌに溶解した。混合物を２０℃で１時間攪拌し、セファデックス（商標）Ｇ−２５カラムにかけて精製すると１４ｍｇの化合物８８が得られた。
【０１１６】
反応Ａで得られた物質および化合物８８を０．１Ｍのリン酸水素ナトリウム緩衝液（１ｍｌ）に溶解し、アルゴン雰囲気下、４℃で、６０時間攪拌した。ジチオトレイトール処理により対称ビス複合体を除去した。３０分攪拌した後、混合物をセファデックス（商標）Ｇ−５０カラムにかけて精製すると、１３ｍｇのビス複合体ＸIVが得られた。〔α〕Ｄ ２０＝＋５５．７°（ｃ＝０．４６；水）
【０１１７】
【化４２】
【０１１８】
【化４３】
【０１１９】
【化４４】
実施例１５
非対称ビス複合体ＸＶを、非対称ビス複合体ＸIVの合成に関して記載した方法に従って合成した。マルトトリオシド８７の代わりに化合物９１を使用した。
【０１２０】
硫酸化セロビオース誘導体９１を、化合物７７からの化合物８３の合成（実施例１２）に関して記載した方法に従って、セロビオースオクタアセテート９０から合成した。〔α〕D 20＝＋５１．２°（ｃ＝０．８３；水）
【０１２１】
【化４５】
【０１２２】
【化４６】
Claims (10)
- ２個の糖とスペーサーとを含んでなり、各糖が、同一であるか又は異なり且つ２〜６個の単糖単位を含んでなり、単糖単位の少なくとも１個はウロン酸である二結合体であって、少なくとも一方の糖がそれ自体で抗血栓症活性を有し、スペーサーが少なくとも一方の糖を他方の糖に非還元末端で結合し、スペーサーの鎖長が２０〜１２０原子であり、スペーサーの鎖長は、スペーサーと結合した糖の酸素原子は算入せずに、２個の糖間の最短鎖に沿って算出したスペーサーの原子数であり、スペーサーが、式：
＝｛Ｑ−ＮＴ−ＣＯ−［（ＣＨ２）ｎ−ＮＴ−ＣＯ−（ＣＨ２）ｍ］ｐ−Ｓ−｝２、又は
＝｛Ｑ−Ｏ−［（ＣＨ２）ｎ−Ｏ］ｐ−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−｝２
［式中、２個の基Ｑの一方は一方の糖の非還元末端に付着し、他方の基Ｑは他方の糖の還元又は非還元末端に付着し、各基Ｑはフェニレン（Ｃ６Ｈ４）基又は−［（ＣＨ２Ｏ）ｑ−（ＣＨ２）ｒ−Ｏ］ｓ−［（ＣＨ２）ｔ−ＮＴ−ＣＯ］ｕ−（ＣＨ２）ｖであり、Ｔは独立して水素又は（１−８Ｃ）アルキルであり、ｑは０又は１であり、ｒ及びｔは独立して２〜４であり、ｓは独立して１〜１２であり、ｕ及びｖは独立して１〜６であり、ｎは１〜８であり、ｍは１〜８であり、ｐは１〜１２であり、原子総数は２０〜１２０個である］で表されることを特徴とする二結合体。 - ２個の糖とスペーサーとを含んでなり、各糖が、同一であるか又は異なり且つ２〜６個の単糖単位を含んでなり、単糖単位の少なくとも１個はウロン酸である二結合体であって、少なくとも一方の糖がそれ自体で抗血栓症活性を有し、スペーサーが少なくとも一方の糖を他方の糖に非還元末端で結合し、スペーサーの鎖長が２０〜１２０原子であり、スペーサーの鎖長は、スペーサーと結合した糖の酸素原子は算入せずに、２個の糖間の最短鎖に沿って算出したスペーサーの原子数であり、スペーサーが、式：
- ２個の糖とスペーサーとを含んでなり、各糖が、同一であるか又は異なり且つ２〜６個の単糖単位を含んでなり、単糖単位の少なくとも１個はウロン酸である二結合体であって、少なくとも一方の糖がそれ自体で抗血栓症活性を有し、スペーサーが少なくとも一方の糖を他方の糖に非還元末端で結合し、スペーサーの鎖長が２０〜１２０原子であり、スペーサーの鎖長は、スペーサーと結合した糖の酸素原子は算入せずに、２個の糖間の最短鎖に沿って算出したスペーサーの原子数であり、スペーサーが、式：
- 少なくとも一方の糖がそれ自体で、ＡＴ−ＩＩＩ及び／若しくはＨＣ−ＩＩに対して親和性を有し、並びに／又は抗因子ＩＩａ及び／若しくは抗因子Ｘａ活性を有する請求項１ないし３のいずれか１項に記載の二結合体。
- 両方の糖がそれ自体で、ＡＴ−ＩＩＩ及び／若しくはＨＣ−ＩＩに対して親和性を有し、並びに／又は抗因子ＩＩａ及び／若しくは抗因子Ｘａ活性を有する請求項４に記載の二結合体。
- 少なくとも一方の糖が、式：
- 少なくとも一方の糖が、式：
- 下記式で表される二結合体であって、負電荷は水素イオン又はアルカリ金属カチオンによって相殺される二結合体。
- 請求項１から８のいずれか一項に記載の二結合体と医薬的に許容できる助剤とを含んでなる血栓症の治療又は予防のための医薬組成物。
- 血栓症の治療薬又は予防薬の製造における請求項１から８のいずれか一項に記載の二結合体の使用。
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