JP3428658B2 - 抗菌性微生物製剤、その製造方法及び処理方法 - Google Patents
抗菌性微生物製剤、その製造方法及び処理方法Info
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Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
- C12P1/06—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes by using actinomycetales
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
- A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
- A01N63/28—Streptomyces
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/465—Streptomyces
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
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Description
【発明の詳細な説明】
発明の分野
本発明は、生物学的防除抗菌剤（以下、抗菌性微生物
製剤という）、その製造方法及び処理方法に関するもの
である。特に、本発明は宿主植物の根圏土壌に着生され
た菌類病原菌（fungal pathogens）を制御することによ
って、植物生長を増進させ、植物病を減少させることの
できる２つの抗菌性菌株ストレプトミセス属（Streptom
yces sp.）WYE20及びWYE324、その製造方法及び処理方
法に関するものである。
製剤という）、その製造方法及び処理方法に関するもの
である。特に、本発明は宿主植物の根圏土壌に着生され
た菌類病原菌（fungal pathogens）を制御することによ
って、植物生長を増進させ、植物病を減少させることの
できる２つの抗菌性菌株ストレプトミセス属（Streptom
yces sp.）WYE20及びWYE324、その製造方法及び処理方
法に関するものである。
発明の背景
土壌菌類の病原菌等は、農業と園芸産業に大きい経済
的な損失を起こすものとして知られている。特に、Rhiz
octonia solaniは病原性の非常に強い主な菌類病原菌の
中の一つとして、数多い植物種及び植物体に苗腐病、根
腐病、苗立枯病、葉腐病及び茎腐病のような苗病は勿
論、フォリアー（foliar）病を起こして、経済的な損失
が非常に大きい。例えば、Rhizoctonia solani AG1（I
B）は、キュウリ（Cucumis sativus L.）と、唐辛子（C
apsicum annuum L.）等の一般農作物で植物病を起こす
のみならず、ゴルフ場のグリーン芝であるベントグラス
（bentgrass）にブラウンパッチ（brown patches）を起
こし、Rhizoctonia solani AG2−２は、ゴルフ場全体の
フェアーウェイ（fairway）芝にラージパッチ（large p
atches）を起こして、大きい経済的な損失を招いてい
る。又、Phytophthora capsiciは広範囲で非常に強い土
壌菌類病原菌として、根腐病と冠腐病ならびに唐辛子
（Capsicum annuum L.）の葉、実、及び茎の気中焼枯病
を起こす。Phytophthora capsiciに感染されると、唐辛
子植物で疫病の発生を抑制し難くなる。Phytophthora c
apsiciは特に、高温多湿の時期に唐辛子植物の唐辛子疫
病を起こす原因となる強力な病原菌として、唐辛子作物
を枯死させることにより、大きい経済的な損失を与え
る。前記で言及した通り、Rhizoctonia solaniとPhytop
hthora casiciとは、共に主な菌類病原菌として、病原
性が非常に強くて、胞子を形成し、劣悪な環境条件下で
も長期間に潜伏している。従って、発病条件が最適にな
ると反復的で広範囲に植物病が進行される。
的な損失を起こすものとして知られている。特に、Rhiz
octonia solaniは病原性の非常に強い主な菌類病原菌の
中の一つとして、数多い植物種及び植物体に苗腐病、根
腐病、苗立枯病、葉腐病及び茎腐病のような苗病は勿
論、フォリアー（foliar）病を起こして、経済的な損失
が非常に大きい。例えば、Rhizoctonia solani AG1（I
B）は、キュウリ（Cucumis sativus L.）と、唐辛子（C
apsicum annuum L.）等の一般農作物で植物病を起こす
のみならず、ゴルフ場のグリーン芝であるベントグラス
（bentgrass）にブラウンパッチ（brown patches）を起
こし、Rhizoctonia solani AG2−２は、ゴルフ場全体の
フェアーウェイ（fairway）芝にラージパッチ（large p
atches）を起こして、大きい経済的な損失を招いてい
る。又、Phytophthora capsiciは広範囲で非常に強い土
壌菌類病原菌として、根腐病と冠腐病ならびに唐辛子
（Capsicum annuum L.）の葉、実、及び茎の気中焼枯病
を起こす。Phytophthora capsiciに感染されると、唐辛
子植物で疫病の発生を抑制し難くなる。Phytophthora c
apsiciは特に、高温多湿の時期に唐辛子植物の唐辛子疫
病を起こす原因となる強力な病原菌として、唐辛子作物
を枯死させることにより、大きい経済的な損失を与え
る。前記で言及した通り、Rhizoctonia solaniとPhytop
hthora casiciとは、共に主な菌類病原菌として、病原
性が非常に強くて、胞子を形成し、劣悪な環境条件下で
も長期間に潜伏している。従って、発病条件が最適にな
ると反復的で広範囲に植物病が進行される。
従って、一般的に栽培者は、Rhizoctonia solaniとPh
ytophthora capsiciによる植物病を防除するため、規則
的に複合殺菌剤を使用しているが、殺菌剤に対する耐性
菌株病原菌の出現により唐辛子作物の疫病と、芝ベント
グラスのRhizoctoniaブラウンパッチの防除が段々難し
くなっている。又、ゴルフ場で殺菌剤に対する耐性Rhiz
octonia solaniが広範囲に発生され、唐辛子作物の連作
によるPhytophthora capsiciの拡散のため、これらの病
害を防除するのが段々難しくなる。
ytophthora capsiciによる植物病を防除するため、規則
的に複合殺菌剤を使用しているが、殺菌剤に対する耐性
菌株病原菌の出現により唐辛子作物の疫病と、芝ベント
グラスのRhizoctoniaブラウンパッチの防除が段々難し
くなっている。又、ゴルフ場で殺菌剤に対する耐性Rhiz
octonia solaniが広範囲に発生され、唐辛子作物の連作
によるPhytophthora capsiciの拡散のため、これらの病
害を防除するのが段々難しくなる。
集約的な化学農薬の使用は、却って残留毒性と環境問
題を招くのみならず、化学農薬の遺失と根圏土壌へ効果
的な浸透のための効果的な方法の欠け等で、植物病を効
果的に防除できない。又、化学殺菌剤の適用で長期間の
植物保護を期待し難い。従って、生物学的防除製剤とし
てある根圏に着生する細菌を利用するのはPhytophthora
capsiciによる疫病と、Rhizoctonia solaniによって発
病されるゴルフ場の芝病害等の植物病を防除するのによ
り効果的で、経済的であるのみならず、環境保護も増進
させるようになる。
題を招くのみならず、化学農薬の遺失と根圏土壌へ効果
的な浸透のための効果的な方法の欠け等で、植物病を効
果的に防除できない。又、化学殺菌剤の適用で長期間の
植物保護を期待し難い。従って、生物学的防除製剤とし
てある根圏に着生する細菌を利用するのはPhytophthora
capsiciによる疫病と、Rhizoctonia solaniによって発
病されるゴルフ場の芝病害等の植物病を防除するのによ
り効果的で、経済的であるのみならず、環境保護も増進
させるようになる。
菌類病原菌を防除するための方法として、拮抗性微生
物の利用が関心を引いている（Suh,Ph.D.Dissertation.
University of Idaho,Idaho,USA,1992;Crawford et al,
Appl.Environ.Microbiol.59:3899−3905,1993;U.S.Pat.
No.5,403,584）。あるStreptomyces種菌株を草炭（peat
moss）、沙及びトウモロコシとを含む伝達媒体（deliv
ery medium）と共にポッチング（potting）配合物／土
壌に使用するか、生物学的な防除剤を含むアルギン酸ナ
トリウムと共に植物種子にコーティングし、根を定着さ
せることによって、植物病原菌を防除できると従来技術
で言及されたことがある（米国特許第５、403、584
号）。また、利する生物学的防除製剤を含む泥炭（pea
t）を植物病原菌の防除に使用できると従来技術で言及
されたことがある（米国特許第４、595、589号）。従来
技術で伝達媒体方法は播種／ポッチング配合物の適用に
適合であるが、植物種子や植物根に直接に適用し、菌類
病原菌からの効果的な保護を達成するには適切ではな
い。
物の利用が関心を引いている（Suh,Ph.D.Dissertation.
University of Idaho,Idaho,USA,1992;Crawford et al,
Appl.Environ.Microbiol.59:3899−3905,1993;U.S.Pat.
No.5,403,584）。あるStreptomyces種菌株を草炭（peat
moss）、沙及びトウモロコシとを含む伝達媒体（deliv
ery medium）と共にポッチング（potting）配合物／土
壌に使用するか、生物学的な防除剤を含むアルギン酸ナ
トリウムと共に植物種子にコーティングし、根を定着さ
せることによって、植物病原菌を防除できると従来技術
で言及されたことがある（米国特許第５、403、584
号）。また、利する生物学的防除製剤を含む泥炭（pea
t）を植物病原菌の防除に使用できると従来技術で言及
されたことがある（米国特許第４、595、589号）。従来
技術で伝達媒体方法は播種／ポッチング配合物の適用に
適合であるが、植物種子や植物根に直接に適用し、菌類
病原菌からの効果的な保護を達成するには適切ではな
い。
本発明の目的は、新規に分離したStreptomyces種の菌
株より選択された生物学的に純粋培養体を含む伝達媒体
からなる特別に設計された製剤を植物種子、又は植物根
に直接適用することによって、菌類病原菌の防除ができ
るStreptomyces種の新規な菌株の提供にある。
株より選択された生物学的に純粋培養体を含む伝達媒体
からなる特別に設計された製剤を植物種子、又は植物根
に直接適用することによって、菌類病原菌の防除ができ
るStreptomyces種の新規な菌株の提供にある。
又、本発明の他の目的は抗菌性微生物製剤（antifung
al biocontrol lagents）を提供し、これらを土壌菌類
病原菌による感染より植物を保護するのに使用しようと
する。
al biocontrol lagents）を提供し、これらを土壌菌類
病原菌による感染より植物を保護するのに使用しようと
する。
発明の要約
本発明は、Rhizoctonia solaniとPhytophthora capsi
ciとに対し植物を保護できるStreptomyces sp.WYE20とW
YE324を分離することにより達成した。菌株Streptomyce
s sp.WYE20とWYE324とは、植物の菌類病の発病を防止
し、ビニールハウスと路地実験（agricultural field t
rials）で植物の生長を増進するのに効果的である。従
って、本発明の一側面はStreptomyces sp.WYE20とWYE32
4の微生物純粋培養体を提供するためである。
ciとに対し植物を保護できるStreptomyces sp.WYE20とW
YE324を分離することにより達成した。菌株Streptomyce
s sp.WYE20とWYE324とは、植物の菌類病の発病を防止
し、ビニールハウスと路地実験（agricultural field t
rials）で植物の生長を増進するのに効果的である。従
って、本発明の一側面はStreptomyces sp.WYE20とWYE32
4の微生物純粋培養体を提供するためである。
又本発明は、植物種子、苗ベッド／ポット、又はポッ
チング配合物／土壌をStreptomyces sp.WYE20とWYE324
で処理するために適切である多様の伝達媒体を提供する
ためである。前記伝達媒体は菌類病原菌によって発病さ
れる植物病を抑制するためStreptomyces sp.WYE20とWYE
324とを運搬するに非常に有用である。
チング配合物／土壌をStreptomyces sp.WYE20とWYE324
で処理するために適切である多様の伝達媒体を提供する
ためである。前記伝達媒体は菌類病原菌によって発病さ
れる植物病を抑制するためStreptomyces sp.WYE20とWYE
324とを運搬するに非常に有用である。
本発明の特別な実施態様において、伝達媒体はおが
屑、麸、キチン、キトサン、及びファーマメディア（Ph
armamedia）（商標名：米国TexasのThe Budkeye Oilsee
d Products Companyで製造）の外にStreptomyces sp.WY
E20またはWYE324とで構成されている。他の特別の実施
態様において、前記伝達媒体はペクチン、コロイドキチ
ンと水の外にStreptomyces sp.WYE20またはWYE324とで
構成されている。好ましい具体例として伝達媒体は1g当
り少なくとも105コロニー形式単位のStreptomyces sp.W
YE20またはWYE324を含んでいる。
屑、麸、キチン、キトサン、及びファーマメディア（Ph
armamedia）（商標名：米国TexasのThe Budkeye Oilsee
d Products Companyで製造）の外にStreptomyces sp.WY
E20またはWYE324とで構成されている。他の特別の実施
態様において、前記伝達媒体はペクチン、コロイドキチ
ンと水の外にStreptomyces sp.WYE20またはWYE324とで
構成されている。好ましい具体例として伝達媒体は1g当
り少なくとも105コロニー形式単位のStreptomyces sp.W
YE20またはWYE324を含んでいる。
又、本発明は植物種子、苗ベッド／ポット、ポッチン
グ配合物（potting mixture）／土壌、噴霧又は溝（in
−furrow application）を通して播種及び生長期中、又
はその前に種子、幼苗、及び／又は生長植物での菌類感
染を減少させるための方法を提供するためである。
グ配合物（potting mixture）／土壌、噴霧又は溝（in
−furrow application）を通して播種及び生長期中、又
はその前に種子、幼苗、及び／又は生長植物での菌類感
染を減少させるための方法を提供するためである。
発明の詳細な説明
本発明によると、Streptomyces sp.WYE20とWYE324と
は、植物を限定はしないが、唐辛子、キュウリ、及び芝
等の植物の菌類病を抑制し、生長を促進するのみ効果的
である。
は、植物を限定はしないが、唐辛子、キュウリ、及び芝
等の植物の菌類病を抑制し、生長を促進するのみ効果的
である。
本発明は、菌類病原菌により発病される植物病を抑制
するためにStreptomyces sp.WYE20とWYE324を運ぶのに
有用な色々な伝達媒体を提供するためのものである。
するためにStreptomyces sp.WYE20とWYE324を運ぶのに
有用な色々な伝達媒体を提供するためのものである。
本発明の特定実施態様によると、前記伝達媒体は、伝
達媒体全体重量に対し、麸40乃至65重量％、キトサン１
乃至５重量％、おが屑30乃至55重量％、キチン１乃至３
重量％、パーマメディア１乃至３重量％で構成されてい
る。
達媒体全体重量に対し、麸40乃至65重量％、キトサン１
乃至５重量％、おが屑30乃至55重量％、キチン１乃至３
重量％、パーマメディア１乃至３重量％で構成されてい
る。
好ましい具体例として、前記伝達媒体は全体重量に対し
胞子生成培地0.2乃至3.5重量％を更に含む。胞子生成培
地としては、胞子の生成ができるなら特別に制限されな
いが、ATCC ＃５胞子生成培地、又はYGM（Yeast extrac
t−glucose−mineral salts）培地より選ぶのが好まし
い。
胞子生成培地0.2乃至3.5重量％を更に含む。胞子生成培
地としては、胞子の生成ができるなら特別に制限されな
いが、ATCC ＃５胞子生成培地、又はYGM（Yeast extrac
t−glucose−mineral salts）培地より選ぶのが好まし
い。
他の特定具体例として、伝達媒体は水中での1.0乃至
3.0重量％のペクチン及び0.1乃至0.6重量％のコロイド
キチンで構成されている。
3.0重量％のペクチン及び0.1乃至0.6重量％のコロイド
キチンで構成されている。
好ましい具体例として、伝達媒体は1g当たりにStrept
omyces sp.WYE20またはWYE324のコロニー形成単位とし
て105乃至1010、好ましくには107乃至108個含まれたの
が好ましい。
omyces sp.WYE20またはWYE324のコロニー形成単位とし
て105乃至1010、好ましくには107乃至108個含まれたの
が好ましい。
本発明は、Streptomyces sp.WYE20及びWYE324の菌体
と胞子接種物の製造方法を提供する。Streptomyces sp.
WYE20及びWYE324の生存細胞は適当な条件下でYGM培地又
はベネット（bennett）液体培地の中で栄養細胞（veget
ative cells）を培養し生産する。
と胞子接種物の製造方法を提供する。Streptomyces sp.
WYE20及びWYE324の生存細胞は適当な条件下でYGM培地又
はベネット（bennett）液体培地の中で栄養細胞（veget
ative cells）を培養し生産する。
抗菌性微生物製剤を製造する方法は次の通りである。
25乃至33℃で３乃至７日間130乃至300rpmで培養し、S
treptomyces sp.WYE20又はWYE324を製造する。
treptomyces sp.WYE20又はWYE324を製造する。
Streptomyces sp.WYE20又はWYE324の細胞を回収して
から、細胞を凍結乾燥、又は伝達媒体に直接混合し、乾
燥させる。
から、細胞を凍結乾燥、又は伝達媒体に直接混合し、乾
燥させる。
又、本発明によると、抗菌性微生物製剤を製造する方
法は次の段階で構成する。即ち、伝達媒体全体重量に対
し、麸40乃至65重量％、キトサン１乃至５重量％、おが
屑30乃至55重量％、キチン１乃至３重量％、ファーマメ
ディア１乃至３重量％で構成されている伝達媒体を形成
する段階； 前記伝達媒体を滅菌する段階； 前記伝達媒体にStreptomyces sp.WYE20（KCTC0341B
P）、又はWYE324（KCTC0342BP）を混合する段階； Streptomyces sp.WYE20（KCTC0341BP）、又はStrepto
myces sp.WYE324（KCTC0342BP）の混合細胞を25乃至33
℃で５乃至14日間培養する段階；及び 前記培養段階で得られた結果物を無菌的に乾燥させる
段階で構成される。
法は次の段階で構成する。即ち、伝達媒体全体重量に対
し、麸40乃至65重量％、キトサン１乃至５重量％、おが
屑30乃至55重量％、キチン１乃至３重量％、ファーマメ
ディア１乃至３重量％で構成されている伝達媒体を形成
する段階； 前記伝達媒体を滅菌する段階； 前記伝達媒体にStreptomyces sp.WYE20（KCTC0341B
P）、又はWYE324（KCTC0342BP）を混合する段階； Streptomyces sp.WYE20（KCTC0341BP）、又はStrepto
myces sp.WYE324（KCTC0342BP）の混合細胞を25乃至33
℃で５乃至14日間培養する段階；及び 前記培養段階で得られた結果物を無菌的に乾燥させる
段階で構成される。
好ましくは前記方法は、前記乾燥段階後、得られた結
果物を無菌的に配合することを追加で含む。
果物を無菌的に配合することを追加で含む。
前記方法で、伝達媒体は必要によって、ペレット型に
し、伝達媒体全体重量に対し胞子生成培地0.2乃至3.5重
量％をコーティングする段階を追加で含む。
し、伝達媒体全体重量に対し胞子生成培地0.2乃至3.5重
量％をコーティングする段階を追加で含む。
Streptomyces sp.WYE20又はWYE324は、前記伝達媒体1
g当コロニー形成単位で105乃至1010、好ましくは107乃
至108個混合する。
g当コロニー形成単位で105乃至1010、好ましくは107乃
至108個混合する。
前記媒体の滅菌は121℃で30乃至40分間遂行する。
本発明の他の実施態様として、抗菌性微生物を製造す
る方法は次の段階からなる。
る方法は次の段階からなる。
即ち、水中での1.0乃至3.0重量％のペクチン及び0.1
乃至0.6重量％のコロイドキチンで構成されている伝達
媒体を形成する段階； 前記伝達媒体を滅菌する段階； 前記伝達媒体にStreptomyces sp.WYE20（KCTC 0341B
P）又はWYE324（KCTC 0342BP）を混合する段階でなる。
乃至0.6重量％のコロイドキチンで構成されている伝達
媒体を形成する段階； 前記伝達媒体を滅菌する段階； 前記伝達媒体にStreptomyces sp.WYE20（KCTC 0341B
P）又はWYE324（KCTC 0342BP）を混合する段階でなる。
本発明の前記実施態様で、Streptomyces sp.WYE20又
はWYE324は伝達媒体1g当りコロニー形成単位として105
乃至1010、好ましくは107乃至108個を前記伝達媒体に混
合する。
はWYE324は伝達媒体1g当りコロニー形成単位として105
乃至1010、好ましくは107乃至108個を前記伝達媒体に混
合する。
又、本発明は、植物種子、ポッチング配合物、植物、
又は土壌に対し抗菌性微生物製剤をコーティング、混合
又は噴霧又は溝処理（in−furrow applicating）等の方
法にて使用する。
又は土壌に対し抗菌性微生物製剤をコーティング、混合
又は噴霧又は溝処理（in−furrow applicating）等の方
法にて使用する。
本発明は、又新規に分離した菌株Streptomyces sp.WY
E20及びWYE324の中の一つを含む抗菌性微生物製剤を提
供するためのものである。
E20及びWYE324の中の一つを含む抗菌性微生物製剤を提
供するためのものである。
従って、本発明による菌株に類似している抗菌性を有
する微生物と伝達媒体とを含む抗菌性微生物製剤は、本
発明の純粋な精神と範囲に属するものと理解されるべき
である。
する微生物と伝達媒体とを含む抗菌性微生物製剤は、本
発明の純粋な精神と範囲に属するものと理解されるべき
である。
本発明を次の実施例により、より詳細に説明しようと
する。しかし、本発明が次の実施例に限定されるもので
はない。
する。しかし、本発明が次の実施例に限定されるもので
はない。
材料及び方法
1.微生物の培養培地
全ての細菌培養培地としては、蒸留水を使用し、使用
する前に滅菌方法により殺菌する。全ての細菌試料は、
清潔を維持するため標準無菌実験技術で処理した。
する前に滅菌方法により殺菌する。全ての細菌試料は、
清潔を維持するため標準無菌実験技術で処理した。
１）CYD（casamino acid/yeast extract/dextrose/aga
r）培地は、蒸留水にカザミノ酸（Difco社:0.5g/l）、
イースト抽出物（Difco社:0.8g/l）、Ｄ−グルコース
（0.4g/l）、K2HPO4（2.0g/l;pH7.2乃至7.4）、及び寒
天（18g/l）が含まれている。
r）培地は、蒸留水にカザミノ酸（Difco社:0.5g/l）、
イースト抽出物（Difco社:0.8g/l）、Ｄ−グルコース
（0.4g/l）、K2HPO4（2.0g/l;pH7.2乃至7.4）、及び寒
天（18g/l）が含まれている。
２）WYE（water/agar）培地は、ReddiとRao（1971）で
変形されたものとして、蒸留水にイースト抽出物（0.25
g/l）、K2HPO4（2.0g/l;pHは7.2乃至7.4）、及び寒天
（18g/l）が含まれている。
変形されたものとして、蒸留水にイースト抽出物（0.25
g/l）、K2HPO4（2.0g/l;pHは7.2乃至7.4）、及び寒天
（18g/l）が含まれている。
３）YGM（yeast extract/glucose/mineral salts）培地
は、蒸留水1lに0.6％（w/v）イースト抽出物（Difco La
boratories,Detroit,MI,U.S.A.）、1.0％（w/v）グルコ
ース及び無機燐酸塩溶液（蒸留水1l当5.3gのNa2HPO4、
1.98gのKH2PO4、0.2gのMgSO4・7H2O、0.2gのNaCl、0.05
gのCaCl22H2O、1.0mlの微量成分（Pridham and Gottlei
b,J.Bacteriology 56:107−114,1948）;pHは7.1乃至7.
2）を含む。前記微量成分は、蒸留水100mlに0.64gのCuS
O45H2O、0.11gのFeSO4・7H2O、0.79gのMnCl2・4H2O、0.
15gのZnSO4・7H2Oが含まれている。
は、蒸留水1lに0.6％（w/v）イースト抽出物（Difco La
boratories,Detroit,MI,U.S.A.）、1.0％（w/v）グルコ
ース及び無機燐酸塩溶液（蒸留水1l当5.3gのNa2HPO4、
1.98gのKH2PO4、0.2gのMgSO4・7H2O、0.2gのNaCl、0.05
gのCaCl22H2O、1.0mlの微量成分（Pridham and Gottlei
b,J.Bacteriology 56:107−114,1948）;pHは7.1乃至7.
2）を含む。前記微量成分は、蒸留水100mlに0.64gのCuS
O45H2O、0.11gのFeSO4・7H2O、0.79gのMnCl2・4H2O、0.
15gのZnSO4・7H2Oが含まれている。
４）CM（chitin/mineral salts/agar）培地は、前記無
機燐酸塩溶液1l当たりに従来の方法（Hsu and Lockwoo
d.,Applied Microbiology.p.422−426,1975）にて製造
されたコロイドキチン0.4乃至0.6％（w/v）、（NH4）2S
O40.6％（w/v）及び寒天2.0％（w/v）を含む。pHは7.0
乃至7.2である。
機燐酸塩溶液1l当たりに従来の方法（Hsu and Lockwoo
d.,Applied Microbiology.p.422−426,1975）にて製造
されたコロイドキチン0.4乃至0.6％（w/v）、（NH4）2S
O40.6％（w/v）及び寒天2.0％（w/v）を含む。pHは7.0
乃至7.2である。
５）ラミナリン（laminarin）寒天培地は、前記無機燐
酸塩溶液1l当たりにラミナリン0.25％（w/v）、（NH4）
2SO40.6％（w/v）、及び寒天2.0％（w/v）を含む。pHは
7.2乃至7.4である。
酸塩溶液1l当たりにラミナリン0.25％（w/v）、（NH4）
2SO40.6％（w/v）、及び寒天2.0％（w/v）を含む。pHは
7.2乃至7.4である。
６）変形されたベネット液体培地は、蒸留水にイースト
抽出物（2g/l）、ビーフ抽出物（2g/l）、ペプトン（2g
/l）、グルコース（10g/l）とニスタチン（５μg/ml;pH
6.5乃至7.5）が含まれている。
抽出物（2g/l）、ビーフ抽出物（2g/l）、ペプトン（2g
/l）、グルコース（10g/l）とニスタチン（５μg/ml;pH
6.5乃至7.5）が含まれている。
７）変形されたベネット寒天培地は、蒸留水にイースト
抽出物（2g/l）、ビーフ抽出物（2g/l）、ペプトン（2g
/l）、グルコース（10g/l）とニスタチン（５μg/ml;pH
6.5乃至7.5）と寒天（20g/l）が含まれている。
抽出物（2g/l）、ビーフ抽出物（2g/l）、ペプトン（2g
/l）、グルコース（10g/l）とニスタチン（５μg/ml;pH
6.5乃至7.5）と寒天（20g/l）が含まれている。
８）ISP＃２培地（Difco社）
９）ISP＃３培地（Difco社）
10）ISP＃４培地（Difco社）
11）胞子生成培地（ATCC＃５培地）はイースト抽出物
（1.0g/l）、ビーフ抽出物（1.0g/l）、トリプトース
（2.0g/l）、FeSO4（0.01g/l）、グルコース（10g/l）
寒天（15g/l）（17th Edition ATTC Catalogue of Bact
eria and Bacteriophages）を含む。
（1.0g/l）、ビーフ抽出物（1.0g/l）、トリプトース
（2.0g/l）、FeSO4（0.01g/l）、グルコース（10g/l）
寒天（15g/l）（17th Edition ATTC Catalogue of Bact
eria and Bacteriophages）を含む。
2.Streptomyces sp.WYE20とWYE324の同定
菌株WYE20とWYE324とは、Bergey's Mannual of Syste
matic Bacteriology（1989）と、国際．ストレプトミセ
ス プロジェット（International Streptomyces Proje
ct（ISP）（1974））及びWilliams,et al（1983）等の
方法に根拠し、Streptomyces属の形態学的、生理学的及
び化学的な特性を調査し、Streptomyces属に同定した。
形態学的、生理学的及び化学的な特性に関連し、これら
の菌株の要約された結果を表１乃至５に記録した。
matic Bacteriology（1989）と、国際．ストレプトミセ
ス プロジェット（International Streptomyces Proje
ct（ISP）（1974））及びWilliams,et al（1983）等の
方法に根拠し、Streptomyces属の形態学的、生理学的及
び化学的な特性を調査し、Streptomyces属に同定した。
形態学的、生理学的及び化学的な特性に関連し、これら
の菌株の要約された結果を表１乃至５に記録した。
3.Streptomyces sp.WYE20とWYE324の種培養液の製造と
貯蔵 50mlの変形されたベネット液体培地（pH6.5乃至7.5）
の入っている500mlのフラスコにCYD寒天斜面培地の胞子
を接種棒を用いて接種した。前記の液体培地は、接種す
る前に121℃で15分間滅菌する方法で殺菌した。該接種
フラスコを１乃至４日間25乃至33℃で130乃至300rpmで
攪拌しながら培養した。
貯蔵 50mlの変形されたベネット液体培地（pH6.5乃至7.5）
の入っている500mlのフラスコにCYD寒天斜面培地の胞子
を接種棒を用いて接種した。前記の液体培地は、接種す
る前に121℃で15分間滅菌する方法で殺菌した。該接種
フラスコを１乃至４日間25乃至33℃で130乃至300rpmで
攪拌しながら培養した。
短期保管方法としては、Streptomyces sp.WYE20とWYE
324とを、CYD又はWYE寒天斜面培地で胞子生成されるま
で25℃で培養した後、４℃で保管した。WYE20とWYE324
の両培養体を４週毎に周期的に培養した。長期保管方法
としては、滅菌したグリセロール（15乃至30％）（121
℃、15分）で胞子懸濁液を造って−70℃で保管した。
324とを、CYD又はWYE寒天斜面培地で胞子生成されるま
で25℃で培養した後、４℃で保管した。WYE20とWYE324
の両培養体を４週毎に周期的に培養した。長期保管方法
としては、滅菌したグリセロール（15乃至30％）（121
℃、15分）で胞子懸濁液を造って−70℃で保管した。
4.液体培養液で菌体と胞子の回収及び生産
200mlの変形されたベネット液体培地、又は200mlのYG
M培地（pH6.5乃至7.5）を含む1lフラスコに前記の各種
菌培養液8mlと共に接種し、Streptomyces sp.WYE20とWY
E324の菌体（mycelia）と胞子細胞を生産した。接種フ
ラスコは、３乃至７日間25乃至33℃で130乃至300rpmで
攪拌しながら培養した。前記方法により生産された菌体
及び胞子細胞は4000rpmで10分間遠心分離し無菌状態で
回収した。
M培地（pH6.5乃至7.5）を含む1lフラスコに前記の各種
菌培養液8mlと共に接種し、Streptomyces sp.WYE20とWY
E324の菌体（mycelia）と胞子細胞を生産した。接種フ
ラスコは、３乃至７日間25乃至33℃で130乃至300rpmで
攪拌しながら培養した。前記方法により生産された菌体
及び胞子細胞は4000rpmで10分間遠心分離し無菌状態で
回収した。
5.伝達媒体を用いた菌体及び胞子細胞の生産と抗菌性微
生物製剤の製造 （１）Streptomyces sp.WYE20又はWYE324と伝達媒体か
らなる粉末形抗菌性微生物製剤の製造 本発明の伝達媒体は、伝達媒体全体重量に対し、麸40
乃至65重量％、キトサン１乃至５重量％、おが屑30乃至
55重量％、キチン１乃至３重量％、ファーマメディア
（The Budkeye Oilseed Products Company,TX,U.S.A.）
１乃至３重量％からなり、組成がよく配合されるように
完全に混合した。該伝達媒体をペレット化し、胞子生成
培地（ATCC＃５、又はYGM培地）0.2乃至3.5重量％で噴
霧、コーティングした後、121℃で30乃至40分間滅菌し
た。胞子生成培地を0.2重量％未満に添加した場合に、
胞子生長に影響を与えなかったに対し、胞子生成培地を
3.5重量％を超過して添加する場合には初期細胞成長が
阻害された。
生物製剤の製造 （１）Streptomyces sp.WYE20又はWYE324と伝達媒体か
らなる粉末形抗菌性微生物製剤の製造 本発明の伝達媒体は、伝達媒体全体重量に対し、麸40
乃至65重量％、キトサン１乃至５重量％、おが屑30乃至
55重量％、キチン１乃至３重量％、ファーマメディア
（The Budkeye Oilseed Products Company,TX,U.S.A.）
１乃至３重量％からなり、組成がよく配合されるように
完全に混合した。該伝達媒体をペレット化し、胞子生成
培地（ATCC＃５、又はYGM培地）0.2乃至3.5重量％で噴
霧、コーティングした後、121℃で30乃至40分間滅菌し
た。胞子生成培地を0.2重量％未満に添加した場合に、
胞子生長に影響を与えなかったに対し、胞子生成培地を
3.5重量％を超過して添加する場合には初期細胞成長が
阻害された。
Streptomyces sp.WYE20とWYE324（105乃至107cfu/m
l）100乃至200mlを最終的に滅菌された伝達媒体に接種
した後、30℃で５乃至14日間培養した。伝達媒体中のSt
reptomyces sp.WYE20とWYE324とを無菌的に収穫し、紫
外線で滅菌した滅菌室で乾燥させた。乾燥生成物を無菌
的に配合し、Streptomyces sp.WYE20またはWYE324と伝
達媒体からなる抗菌性微生物製剤を製造した。
l）100乃至200mlを最終的に滅菌された伝達媒体に接種
した後、30℃で５乃至14日間培養した。伝達媒体中のSt
reptomyces sp.WYE20とWYE324とを無菌的に収穫し、紫
外線で滅菌した滅菌室で乾燥させた。乾燥生成物を無菌
的に配合し、Streptomyces sp.WYE20またはWYE324と伝
達媒体からなる抗菌性微生物製剤を製造した。
（２）Streptomyces sp.WYE20またはWYE324と液状伝達
媒体からなる抗菌性微生物製剤の製造 前記で得られたStreptomyces sp.WYE20又はWYE324の
菌体と胞子細胞を水中での1.0乃至3.0重量％のペクチン
と0.1乃至0.6重量％のコロイドキチンからなる滅菌され
た伝達媒体に混合し抗菌性微生物製剤を製造した。
媒体からなる抗菌性微生物製剤の製造 前記で得られたStreptomyces sp.WYE20又はWYE324の
菌体と胞子細胞を水中での1.0乃至3.0重量％のペクチン
と0.1乃至0.6重量％のコロイドキチンからなる滅菌され
た伝達媒体に混合し抗菌性微生物製剤を製造した。
6.菌類病原菌
抗菌性実験のための菌類病原菌としては、Pythium ul
timum、Pythium graminicola、Rhizoctonia solani、Rh
izoctonia solani AG1（IB）、Rhizoctonia solani AG2
−２（IV）、Fusarium oxysporum、Fusarium sambucinc
tum、Fusarium solani、Phytophthora capsici、Phytop
hthora parasitica、Sclerotinia sclerotiorum、Scler
otium cepivorum及びVerticillium dahliae等を使用し
た。全ての菌株はPDA（Difco社）培地、又はCMA（Difco
社）培地で25℃で生長し、４℃で保管した。
timum、Pythium graminicola、Rhizoctonia solani、Rh
izoctonia solani AG1（IB）、Rhizoctonia solani AG2
−２（IV）、Fusarium oxysporum、Fusarium sambucinc
tum、Fusarium solani、Phytophthora capsici、Phytop
hthora parasitica、Sclerotinia sclerotiorum、Scler
otium cepivorum及びVerticillium dahliae等を使用し
た。全ての菌株はPDA（Difco社）培地、又はCMA（Difco
社）培地で25℃で生長し、４℃で保管した。
7.伝達媒体の細胞数の決定
Streptomyces sp.WYE20又はWYE324を含有する伝達媒
体1gを滅菌した蒸留水9mlに添加し、ボテキス（vorte
x）TMで完全に混合した。該懸濁物を連続希釈し及び塗
抹平板法でCMAプレート上で単位ｇ当たりコロニー形成
単位（cfu）で細胞数を決定した。前記プレートを30℃
で培養し、コロニー形成を観察した。液体形態の伝達媒
体のcfu/mlを決定するにも同方法を使用した。
体1gを滅菌した蒸留水9mlに添加し、ボテキス（vorte
x）TMで完全に混合した。該懸濁物を連続希釈し及び塗
抹平板法でCMAプレート上で単位ｇ当たりコロニー形成
単位（cfu）で細胞数を決定した。前記プレートを30℃
で培養し、コロニー形成を観察した。液体形態の伝達媒
体のcfu/mlを決定するにも同方法を使用した。
8.Streptomyces sp.WYE20とWYE324の抗菌活性を決定す
るためのin vivo生物学的な分析 植物生長の増進と菌類病原菌により発病される植物病
の減少に対するStreptomyces sp.WYE20又はWYE324の活
性は、伝達媒体のStreptomyces sp.WYE20又はWYE324で
キュウリ、唐辛子、又はゴルフ場芝を処理し、適当な生
長培地又は農地で処理した種子と処理していなかった種
子を栽培し測定した。
るためのin vivo生物学的な分析 植物生長の増進と菌類病原菌により発病される植物病
の減少に対するStreptomyces sp.WYE20又はWYE324の活
性は、伝達媒体のStreptomyces sp.WYE20又はWYE324で
キュウリ、唐辛子、又はゴルフ場芝を処理し、適当な生
長培地又は農地で処理した種子と処理していなかった種
子を栽培し測定した。
微生物製剤である伝達媒体のStreptomyces sp.WYE20
又はWYE324の活性は発芽率、発芽された植物の生長、植
物の高さ及び病害防除能力等で測定した。
又はWYE324の活性は発芽率、発芽された植物の生長、植
物の高さ及び病害防除能力等で測定した。
実施例1:Streptomyces sp.WYE20とWYE324の分離
土壌試料は、大韓民国忠清北道槐山郡地域の４ヶ所の
根圏から採取した。菌株の分離は、連続希釈及び塗抹平
板法にてWYE寒天培地上で実施した。ここから得られた
菌株をRhizoctonia solaniとPhytophthora capsiciに対
する抗菌性活性、菌類細胞壁分解酵素活性、根定着、低
温（４℃、８℃）生長性、及び大量生産可能性に対し実
験し、２種類の新規の菌株を分離した。２種類の新しい
菌株をStreptomyces sp.WYE20とWYE324と各々称した。S
treptomyces sp.WYE20とWYE324の純粋分離はWYE寒天培
地を用いて25℃で胞子を形成するように４乃至10日間前
記菌株を培養させ、形成されたコロニーを分離し、新し
いWYE寒天培地に画線培養（streak culture）し純粋培
養体を得た。Streptomyces sp.WYE20とWYE324との純粋
培養体をCYD斜面培地に接種後、25℃及び30℃で培養し
胞子を形成させた後、４℃で保管した。該培養液は４週
毎に継代培養した。
根圏から採取した。菌株の分離は、連続希釈及び塗抹平
板法にてWYE寒天培地上で実施した。ここから得られた
菌株をRhizoctonia solaniとPhytophthora capsiciに対
する抗菌性活性、菌類細胞壁分解酵素活性、根定着、低
温（４℃、８℃）生長性、及び大量生産可能性に対し実
験し、２種類の新規の菌株を分離した。２種類の新しい
菌株をStreptomyces sp.WYE20とWYE324と各々称した。S
treptomyces sp.WYE20とWYE324の純粋分離はWYE寒天培
地を用いて25℃で胞子を形成するように４乃至10日間前
記菌株を培養させ、形成されたコロニーを分離し、新し
いWYE寒天培地に画線培養（streak culture）し純粋培
養体を得た。Streptomyces sp.WYE20とWYE324との純粋
培養体をCYD斜面培地に接種後、25℃及び30℃で培養し
胞子を形成させた後、４℃で保管した。該培養液は４週
毎に継代培養した。
実施例2:Streptomyces sp.WYE20とWYE324の同定及び特
性 実施例１で得られた微生物の形態学的、生理学的及び
化学的な特性をBergy's Mannual of Systematic Bacter
iology（1989）の方法により調査した。その結果を表１
乃至表５に表した。
性 実施例１で得られた微生物の形態学的、生理学的及び
化学的な特性をBergy's Mannual of Systematic Bacter
iology（1989）の方法により調査した。その結果を表１
乃至表５に表した。
実施例１から得られた２種類の菌株は、Bergey's Man
nual of Systematic Bacteriology（1989）;Internatio
nal Streptomyces Project（ISP）（1974）；及びWilli
am et al.（1983）等の方法によりStreptomyces属に属
するものと同定された。
nual of Systematic Bacteriology（1989）;Internatio
nal Streptomyces Project（ISP）（1974）；及びWilli
am et al.（1983）等の方法によりStreptomyces属に属
するものと同定された。
２種類の菌株は、各々WYE20とWYE324と名付けられ
た。菌株WYE20は、Streptomyces属の形態学的、生理学
的及び化学的特性を分析した結果、クラスター（Cluste
r）61に属するStreptomyces colombiensisに近いが、St
reptomyces属の新しい菌株であると同定された。菌株WY
E324はStreptomyces属の形態学的、生理学的及び化学的
特性を分析した結果、クラスター（Cluster）61に属す
るStreptomyces goshikiensisに近いが、この菌株はStr
eptomyces属の新しい菌株であると同定された。
た。菌株WYE20は、Streptomyces属の形態学的、生理学
的及び化学的特性を分析した結果、クラスター（Cluste
r）61に属するStreptomyces colombiensisに近いが、St
reptomyces属の新しい菌株であると同定された。菌株WY
E324はStreptomyces属の形態学的、生理学的及び化学的
特性を分析した結果、クラスター（Cluster）61に属す
るStreptomyces goshikiensisに近いが、この菌株はStr
eptomyces属の新しい菌株であると同定された。
これらの菌株WYE20とWYE324とは、1997年６月18日付
で特許出願を目的とする微生物寄託に関する国際協約で
あるブダペスト条約による国際寄託機関である大韓民国
大田広域市所在の生命工学研究所内の遺伝子銀行（Kore
an Collection for Type Cultures,Korea Research Ins
titute of Bioscience and Biotechnology）に寄託番号
KCTC0341BPとKCTC0342BPとして夫々寄託された。
で特許出願を目的とする微生物寄託に関する国際協約で
あるブダペスト条約による国際寄託機関である大韓民国
大田広域市所在の生命工学研究所内の遺伝子銀行（Kore
an Collection for Type Cultures,Korea Research Ins
titute of Bioscience and Biotechnology）に寄託番号
KCTC0341BPとKCTC0342BPとして夫々寄託された。
実施例3:Streptomyces sp.WYE20とWYE324の細胞生長の
ための最適温度 Streptomyces sp.WYE20とWYE324の成長に対する温度
の影響を実験するため、WYE20とWYE324菌株の生殖細胞
を変形されたベネット寒天培地に画線接種した。前記画
線培地を４℃、８℃、27℃、37℃及び45℃で予め定めた
温度で３週間培養した。成長状態を７日、14日、21日目
に記録した。その結果を、成長する速度によって良好に
成長（＋）；徐々に成長（±）；成長しない（−）と評
価し表６に表した。
ための最適温度 Streptomyces sp.WYE20とWYE324の成長に対する温度
の影響を実験するため、WYE20とWYE324菌株の生殖細胞
を変形されたベネット寒天培地に画線接種した。前記画
線培地を４℃、８℃、27℃、37℃及び45℃で予め定めた
温度で３週間培養した。成長状態を７日、14日、21日目
に記録した。その結果を、成長する速度によって良好に
成長（＋）；徐々に成長（±）；成長しない（−）と評
価し表６に表した。
前記表６に表したように菌株WYE20は、４℃で１週間
培養された後、徐々に成長し始めて３週間培養された
後、良好に生長することを現したのに対し、菌株WYE324
は、４℃で３週間培養されてから徐々に成長するものと
わかった。菌株WYE20は８℃と27℃とで全部良好に成長
すると現した。しかし、菌株WYE324の場合、８℃では１
週間培養された後、後徐々に成長し始めて２週間が経過
してから良好な成長を現した。又、菌株WYE324は27℃で
は良好に成長するものとわかった。
培養された後、徐々に成長し始めて３週間培養された
後、良好に生長することを現したのに対し、菌株WYE324
は、４℃で３週間培養されてから徐々に成長するものと
わかった。菌株WYE20は８℃と27℃とで全部良好に成長
すると現した。しかし、菌株WYE324の場合、８℃では１
週間培養された後、後徐々に成長し始めて２週間が経過
してから良好な成長を現した。又、菌株WYE324は27℃で
は良好に成長するものとわかった。
菌株WYE20とWYE324とは、37℃では１週間培養されてか
ら徐々に成長し始め、２週間培養された後、良好に成長
することを現したが、45℃では成長しなかった。
ら徐々に成長し始め、２週間培養された後、良好に成長
することを現したが、45℃では成長しなかった。
実施例4:酵素の活性及び拮抗性の分析
（１）酵素の活性分析
菌株WYE20とWYE324との酵素活性を分析するため、菌
類病原菌を攻撃し殺す酵素として知られているキチナー
ゼとβ−１、３−グルカナーゼを使用した。
類病原菌を攻撃し殺す酵素として知られているキチナー
ゼとβ−１、３−グルカナーゼを使用した。
菌株WYE20とWYE324とのキチナーゼ活性を測定するた
め、唯一の炭素原としてコロイドキチンを含むCM寒天培
地に各菌株を接種し、30℃で14日間培養した。コロニー
形成と成長が観察されたし、これによって菌株WYE20とW
YE324とのキチナーゼ活性があることを確認した。
め、唯一の炭素原としてコロイドキチンを含むCM寒天培
地に各菌株を接種し、30℃で14日間培養した。コロニー
形成と成長が観察されたし、これによって菌株WYE20とW
YE324とのキチナーゼ活性があることを確認した。
菌株WYE20とWYE324とのβ−１、３−グルカナーゼ活
性を測定するため、唯一の炭素原としてラミナリンを含
むラミナリン寒天培地に各菌株を接種し、27℃で７日間
培養した。コロニー形成と成長が観察され、これによっ
て菌株WYE20とWYE324とが共にβ−１、３−グルカナー
ゼ活性があることが確認された。
性を測定するため、唯一の炭素原としてラミナリンを含
むラミナリン寒天培地に各菌株を接種し、27℃で７日間
培養した。コロニー形成と成長が観察され、これによっ
て菌株WYE20とWYE324とが共にβ−１、３−グルカナー
ゼ活性があることが確認された。
（２）拮抗性の分析
菌株WYE20とWYE324との拮抗性を試験するため、試験
管内プレート分析を遂行し、菌類病原菌の成長阻害程度
を測定した。各菌株をCMA培地に画線接種し、30℃で６
乃至10日間培養した。旺盛に成長した菌類菌糸を含むPD
A（Potato Dexrose Agar）ブロックを前記で培養したCM
Aプレートの中央に無菌状態に配置した後、25℃で24乃
至192時間培養した。対照群としては、前記PDAブロック
を菌株WYE20とWYE324とを含まないCMA培地に接種したも
のを使用した。生物活性分析は３つのプレートに反復
し、表７に菌類病原菌の菌糸成長阻害効果として拮抗性
に対する結果を記録した。
管内プレート分析を遂行し、菌類病原菌の成長阻害程度
を測定した。各菌株をCMA培地に画線接種し、30℃で６
乃至10日間培養した。旺盛に成長した菌類菌糸を含むPD
A（Potato Dexrose Agar）ブロックを前記で培養したCM
Aプレートの中央に無菌状態に配置した後、25℃で24乃
至192時間培養した。対照群としては、前記PDAブロック
を菌株WYE20とWYE324とを含まないCMA培地に接種したも
のを使用した。生物活性分析は３つのプレートに反復
し、表７に菌類病原菌の菌糸成長阻害効果として拮抗性
に対する結果を記録した。
前記表７で表したように、菌株WYE20とWYE324とはPythi
um ultimumに対し明らかな成長阻害領域を現した。菌株
WYE20はPythium graminicola、Fusarium oxysporum、Fu
sarium sambucinctum、Fusarium solani、Rhizoctonia
solani、Rhizoctonia solani AG1（IB）、Rhizoctonia
solani AG2−２（IV）、Phytophthora capsici、Phytop
hthora parasitica、Sclerotinia sclerotiorum、Scler
otium cepivorum及びVerticillium dahliaeに対し強い
拮抗性を現した。尚、WYE324はPythium graminicola、F
usarium oxysporum、Fusarium solani、Rhizoctonia so
lani、Rhizoctonia solani AG1（IB）、Rhizoctonia so
lani AG2−２（IV）、Phytophthora capsici、Phytopht
hora parasitica、Sclerotinia sclerotiorum、Sclerot
ium cepivorumに対し強い拮抗性を現した。
um ultimumに対し明らかな成長阻害領域を現した。菌株
WYE20はPythium graminicola、Fusarium oxysporum、Fu
sarium sambucinctum、Fusarium solani、Rhizoctonia
solani、Rhizoctonia solani AG1（IB）、Rhizoctonia
solani AG2−２（IV）、Phytophthora capsici、Phytop
hthora parasitica、Sclerotinia sclerotiorum、Scler
otium cepivorum及びVerticillium dahliaeに対し強い
拮抗性を現した。尚、WYE324はPythium graminicola、F
usarium oxysporum、Fusarium solani、Rhizoctonia so
lani、Rhizoctonia solani AG1（IB）、Rhizoctonia so
lani AG2−２（IV）、Phytophthora capsici、Phytopht
hora parasitica、Sclerotinia sclerotiorum、Sclerot
ium cepivorumに対し強い拮抗性を現した。
実施例5:粉末形抗菌性微生物製剤の製造
麸、キトサン、おが屑、キチン、及びファーマメディ
アを表８に従い配合し、伝達媒体を製造した。該伝達媒
体を圧出機を利用しペレット形に成形した。ペレット形
に成形する過程でペレット成形性を決定するものの、砕
けることや破裂されることなく、ペレットに成形される
場合には“良好”と、その反面ペレットに成形され難い
場合には“低調”と、記録した。その結果を下記表７に
表した。前記伝達媒体の通気性と細胞生長性によって
“低調”、“普通”、及び“良好”と判定した。その結
果を表８に表した。
アを表８に従い配合し、伝達媒体を製造した。該伝達媒
体を圧出機を利用しペレット形に成形した。ペレット形
に成形する過程でペレット成形性を決定するものの、砕
けることや破裂されることなく、ペレットに成形される
場合には“良好”と、その反面ペレットに成形され難い
場合には“低調”と、記録した。その結果を下記表７に
表した。前記伝達媒体の通気性と細胞生長性によって
“低調”、“普通”、及び“良好”と判定した。その結
果を表８に表した。
“材料及び方法”に記載の方式でStreptomyces sp.WY
E20、又はWYE324の培養液150ml（105乃至107cfu/ml）を
前記滅菌された伝達媒体に接種し、30℃で５乃至14日間
培養した。Streptomyces sp.WYE20、又はWYE324の伝達
媒体培養体を無菌状態で回収し紫外線で滅菌したラミナ
ーフローベンチ（laminar flow bench）にて乾燥させ
た。乾燥された生成物を無菌状態に配合しStreptomyces
sp.WYE20、又はWYE324と伝達媒体からなる粉末形抗菌
性微生物製剤を製造した。
E20、又はWYE324の培養液150ml（105乃至107cfu/ml）を
前記滅菌された伝達媒体に接種し、30℃で５乃至14日間
培養した。Streptomyces sp.WYE20、又はWYE324の伝達
媒体培養体を無菌状態で回収し紫外線で滅菌したラミナ
ーフローベンチ（laminar flow bench）にて乾燥させ
た。乾燥された生成物を無菌状態に配合しStreptomyces
sp.WYE20、又はWYE324と伝達媒体からなる粉末形抗菌
性微生物製剤を製造した。
伝達媒体でのWYE20、又はWYE324の細胞数は伝達媒体1
g当105−1010cfuとして調整した。こうして得られたWYE
20、又はWYE324と伝達媒体とからなる抗菌性微生物製剤
を４℃と25℃で３ヶ月間保管した。１ヶ月おきに３ヶ月
にかけてWYE20、又はWYE324との生存性と生長性を測定
し、記録した。
g当105−1010cfuとして調整した。こうして得られたWYE
20、又はWYE324と伝達媒体とからなる抗菌性微生物製剤
を４℃と25℃で３ヶ月間保管した。１ヶ月おきに３ヶ月
にかけてWYE20、又はWYE324との生存性と生長性を測定
し、記録した。
WYE20、又はWYE324を含む伝達媒体1gを滅菌された蒸
留水9mlに添加し、渦流により完全混合した。最終懸濁
液のｇ当りcfuは、連続希釈及び塗抹平板法にて測定
し、その結果を表８と９に表した。
留水9mlに添加し、渦流により完全混合した。最終懸濁
液のｇ当りcfuは、連続希釈及び塗抹平板法にて測定
し、その結果を表８と９に表した。
前記表８及び表９に表したように、D.M.1乃至13は、
ペレット成形性、通気性、細胞生長性等が良好、又は普
通であるに対し、他の範囲の成分を有する対照群１乃至
６等は又はペレット成形性、通気性、又は細胞生長性等
が低調であった。
ペレット成形性、通気性、細胞生長性等が良好、又は普
通であるに対し、他の範囲の成分を有する対照群１乃至
６等は又はペレット成形性、通気性、又は細胞生長性等
が低調であった。
又、D.M.1乃至13のペレットをYGMの胞子生成培地でコ
ーティングし、細胞生長性及び生存性に対する効果を測
定した。その結果を表10に表した。
ーティングし、細胞生長性及び生存性に対する効果を測
定した。その結果を表10に表した。
表９と10に表したように、WYE20及びWYE324の細胞は
D.M.1乃至26で長期間（３ヶ月以上）安定した。D.M.1乃
至26でWYE20、及びWYE324は、３ヶ月後にも微生物製剤
として必要な最少値であるといえる105cfu/gを表した。
特にYGM培地でコーティングしたD.M.1乃至26を使用する
場合、WYE20、及びWYE324細胞の安定性が遥かに増進さ
れた。
D.M.1乃至26で長期間（３ヶ月以上）安定した。D.M.1乃
至26でWYE20、及びWYE324は、３ヶ月後にも微生物製剤
として必要な最少値であるといえる105cfu/gを表した。
特にYGM培地でコーティングしたD.M.1乃至26を使用する
場合、WYE20、及びWYE324細胞の安定性が遥かに増進さ
れた。
実施例6:懸濁液形抗菌性微生物製剤の製造
ペクチン20g、コロイドキチン2g、及び蒸留水1.0lの
全体体積を基準に、その他は水からなる伝達媒体を121
℃で15分間滅菌した。“材料及び方法”に記載の方式で
上記滅菌された伝達媒体にStreptomyces sp.WYE20、又
はWYE324を配合（1.2×107cfu/ml）し、懸濁液状態に抗
菌性微生物製剤を製造した。
全体体積を基準に、その他は水からなる伝達媒体を121
℃で15分間滅菌した。“材料及び方法”に記載の方式で
上記滅菌された伝達媒体にStreptomyces sp.WYE20、又
はWYE324を配合（1.2×107cfu/ml）し、懸濁液状態に抗
菌性微生物製剤を製造した。
こうして得られた生成物を４℃で保管した。微生物製
剤の形態は植物種子と苗の溝処理、又は水に希釈した後
噴霧処理するのに適合した。
剤の形態は植物種子と苗の溝処理、又は水に希釈した後
噴霧処理するのに適合した。
実施例7:抗菌性微生物製剤の分析
実施例５と実施例６にて製造した微生物製剤の効能を
測定するために、in vivo生物学的防除分析を行った。
前記微生物製剤に対し植物、植物種子、植物の根、苗、
ポット、ポッチング配合物、又は土壌を処理し菌類病の
減少と植物生長促進力を調べるため実験した。
測定するために、in vivo生物学的防除分析を行った。
前記微生物製剤に対し植物、植物種子、植物の根、苗、
ポット、ポッチング配合物、又は土壌を処理し菌類病の
減少と植物生長促進力を調べるため実験した。
（１）キュウリ（Cucumis sativus L.）のRhizoctonia
苗立枯病に対する生物学的な防除活性 キュウリのRhizoctonia苗立枯病を抑制する微生物製
剤としてWYE20の効能を実験するため、生物学的な防除
分析を行った。
苗立枯病に対する生物学的な防除活性 キュウリのRhizoctonia苗立枯病を抑制する微生物製
剤としてWYE20の効能を実験するため、生物学的な防除
分析を行った。
実施例６にて製造したてWYE20（1.2×107cfu/ml）20m
lにキュウリ種子を３時間浸濡らしてポットに播種する
方式でキュウリ種子を処理した。対照群として滅菌した
蒸留水と伝達媒体に各々３時間浸し濡らした種子を用い
た。
lにキュウリ種子を３時間浸濡らしてポットに播種する
方式でキュウリ種子を処理した。対照群として滅菌した
蒸留水と伝達媒体に各々３時間浸し濡らした種子を用い
た。
ポッチング配合物としては、ホーツス（Hortus、イギ
リス）を利用した。該ポッチング配合物は121℃で60分
間滅菌し、25℃で12時間放置した後、再び121℃で60分
間滅菌する方法で３回繰替えした。
リス）を利用した。該ポッチング配合物は121℃で60分
間滅菌し、25℃で12時間放置した後、再び121℃で60分
間滅菌する方法で３回繰替えした。
Rhizoctonia solaniをPDB（Potato Dextrose Broth:D
ifco社）を用いて25℃で14日間培養した後、回収し発病
率が約60％となるように滅菌したポッチング配合物と混
合した。キュウリ種子は前記微生物製剤で処理し、各々
の対照群種子はRhizoctonia solaniを人工的に接種した
ポッチング配合物を含むポットに播種した。
ifco社）を用いて25℃で14日間培養した後、回収し発病
率が約60％となるように滅菌したポッチング配合物と混
合した。キュウリ種子は前記微生物製剤で処理し、各々
の対照群種子はRhizoctonia solaniを人工的に接種した
ポッチング配合物を含むポットに播種した。
播種ポットとしては、使い捨て紙コップ（直径9cm）
を使用した。コップ３つの種子を播種し、試験別に６つ
のコップを用意した。該コップをガラス温室にランダム
ブロック（random block）方式で配列し、湿度は40乃至
60％が維持されるように、周期的に水を与えた。又、温
度は自然光で25乃至30℃に維持した。
を使用した。コップ３つの種子を播種し、試験別に６つ
のコップを用意した。該コップをガラス温室にランダム
ブロック（random block）方式で配列し、湿度は40乃至
60％が維持されるように、周期的に水を与えた。又、温
度は自然光で25乃至30℃に維持した。
苗立枯病の発病結果を周期的に記録し、その結果を表
11に表した。
11に表した。
表11に表したように、微生物製剤として伝達媒体のWY
E20に処理されたキュウリ種子はキュウリRhizoctonia苗
立枯病を現していなかった。又、対照群種子によるキュ
ウリ植物はRhizoctonia solaniによる生長障害が深刻で
あったが、本発明によって処理した種子による植物はそ
うではなかった。この結果はWYE20がRhizoctonia solan
i防除と植物生長促進に効果的であることを表してくれ
るものである。
E20に処理されたキュウリ種子はキュウリRhizoctonia苗
立枯病を現していなかった。又、対照群種子によるキュ
ウリ植物はRhizoctonia solaniによる生長障害が深刻で
あったが、本発明によって処理した種子による植物はそ
うではなかった。この結果はWYE20がRhizoctonia solan
i防除と植物生長促進に効果的であることを表してくれ
るものである。
（２）キュウリ（Cucumis sativus L.）のうどんこ病に
対する生物学的な防除活性 実施例６にて製造した微生物製剤であるWYE324（1.2
×107cfu/ml）の効能を実験するため、ポットにあるキ
ュウリ作物のうどんこ病の発病抑制に対する生物学的防
除分析を行った。
対する生物学的な防除活性 実施例６にて製造した微生物製剤であるWYE324（1.2
×107cfu/ml）の効能を実験するため、ポットにあるキ
ュウリ作物のうどんこ病の発病抑制に対する生物学的防
除分析を行った。
播種ポットとしては、使い捨て紙コップ（直径9cm）
を使用した。農業用土壌と、ホーツス（Hortus、イギリ
ス）（体積比で4:1）で構成されているポッチング配合
物を含む各々のコップに１つのキュウリ種子を播種し
た。該コップを該コップをガラス温室に配列した。周期
的に水を与え、温度は自然光で25乃至30℃に維持した。
を使用した。農業用土壌と、ホーツス（Hortus、イギリ
ス）（体積比で4:1）で構成されているポッチング配合
物を含む各々のコップに１つのキュウリ種子を播種し
た。該コップを該コップをガラス温室に配列した。周期
的に水を与え、温度は自然光で25乃至30℃に維持した。
WYE324を含む微生物製剤20mlを実験の始めに１つのキ
ュウリ作物（14日生）に噴霧し、１週間後に１回以上噴
霧した。対照群の作物に対しては水を同量で噴霧した。
各処理群と対照群で３つのキュウリ作物（１コップ当た
りに１つのキュウリ作物）を分析用として用意した。
ュウリ作物（14日生）に噴霧し、１週間後に１回以上噴
霧した。対照群の作物に対しては水を同量で噴霧した。
各処理群と対照群で３つのキュウリ作物（１コップ当た
りに１つのキュウリ作物）を分析用として用意した。
Sphaerotheca fuligineaにより発病されるうどんこ病
を自然的に誘発させるためには、各群当たりに３つのコ
ップと、３つの発病されたキュウリ作物（コップ当たり
に１つの作物）を使用し、ガラス温室にランダムブロッ
ク配列方式で設けた。水分は70％と90％の間が維持され
るようし、周期的に水を与えた。ガラス温室内の温度は
25乃至30℃に維持されるようにした。キュウリうどんこ
病の発病率を調べた。該実験を２週間継続し、分析は繰
替えした。その結果を表12に表した。
を自然的に誘発させるためには、各群当たりに３つのコ
ップと、３つの発病されたキュウリ作物（コップ当たり
に１つの作物）を使用し、ガラス温室にランダムブロッ
ク配列方式で設けた。水分は70％と90％の間が維持され
るようし、周期的に水を与えた。ガラス温室内の温度は
25乃至30℃に維持されるようにした。キュウリうどんこ
病の発病率を調べた。該実験を２週間継続し、分析は繰
替えした。その結果を表12に表した。
表12に表したように、WYE324を含む微生物製剤を噴霧
したキュウリ作物ではうどんこ病が発見されなかったに
対し、対照群の作物では該病が観察された。この結果は
WYE324がキュウリ（Cucumis sativus L.）のうどんこ病
を防除するのに効果的であることを見せてくれるもので
ある。
したキュウリ作物ではうどんこ病が発見されなかったに
対し、対照群の作物では該病が観察された。この結果は
WYE324がキュウリ（Cucumis sativus L.）のうどんこ病
を防除するのに効果的であることを見せてくれるもので
ある。
（３）ゴルフ場グリーン芝（creeping bentagrass）のR
hizoctoniaブラウンパッチに対するStreptomyces sp.WY
E20又はWYE324の生物学的な防除活性 “材料及び方法”に記載の方式により液体培養液に製
造したStreptomyces sp.WYE20又はWYE324を分析用とし
て使用した。Streptomyces sp.WYE20又はWYE324の細胞
数を2.0×105cfu/mlに調整した。活性分析はWYE20又はW
YE324で処理したブロック、又は対照群の各々に対し分
析を行った。各々に対し４つの処理群と対照群ブロック
（1.5m×1.5m）をゴルフグリーンに用意した。分析はラ
ンダムブロックで行った。菌株WYE20又はWYE324を1996
年６月25日より1996年８月23日まで７乃至10日毎に実験
ブロックに噴霧した、ブロック当りのWYE20又はWYE324
2.5mlを毎回使用した。それに対し、対照群ブロックに
対しては同量の水を噴霧した。実験期間化学殺菌剤は全
く使用しなかった。Rhizoctoniaブラウンパッチの発病
を周期的に記録し、その結果を表13（サイト１）と表14
（サイト２）に表した。
hizoctoniaブラウンパッチに対するStreptomyces sp.WY
E20又はWYE324の生物学的な防除活性 “材料及び方法”に記載の方式により液体培養液に製
造したStreptomyces sp.WYE20又はWYE324を分析用とし
て使用した。Streptomyces sp.WYE20又はWYE324の細胞
数を2.0×105cfu/mlに調整した。活性分析はWYE20又はW
YE324で処理したブロック、又は対照群の各々に対し分
析を行った。各々に対し４つの処理群と対照群ブロック
（1.5m×1.5m）をゴルフグリーンに用意した。分析はラ
ンダムブロックで行った。菌株WYE20又はWYE324を1996
年６月25日より1996年８月23日まで７乃至10日毎に実験
ブロックに噴霧した、ブロック当りのWYE20又はWYE324
2.5mlを毎回使用した。それに対し、対照群ブロックに
対しては同量の水を噴霧した。実験期間化学殺菌剤は全
く使用しなかった。Rhizoctoniaブラウンパッチの発病
を周期的に記録し、その結果を表13（サイト１）と表14
（サイト２）に表した。
表13（サイト１）と表14（サイト２）に表したよう
に、本発明のWYE20又はWYE324で処理したブラックでRhi
zoctoniaブラウンパッチの発病が大きく減少した。この
結果はWYE20及びWYE324とがゴルフグリーン芝のRhizoct
oniaブラウンパッチを防除するに効果的であることを表
すものである。
に、本発明のWYE20又はWYE324で処理したブラックでRhi
zoctoniaブラウンパッチの発病が大きく減少した。この
結果はWYE20及びWYE324とがゴルフグリーン芝のRhizoct
oniaブラウンパッチを防除するに効果的であることを表
すものである。
（４）ゴルフ場フェアーウェイ（fairway）芝（Zoysia
japonica）のRhizoctoniaラージパッチ（large patch）
に対する生物学的防除活性 実施例６にて製造したStreptomyces sp.WYE20、又はI
BT678を含む微生物製剤の効能を実験するため、ゴルフ
場フェアーウェイ芝（Zoysia japonica）のRhizoctonia
ラージパッチ抑制に対する生物学的防除分析を行った。
微生物製剤でStreptomyces sp.WYE20、又はIBT678の細
胞数は2.0×106cfu/mlに調整した。
japonica）のRhizoctoniaラージパッチ（large patch）
に対する生物学的防除活性 実施例６にて製造したStreptomyces sp.WYE20、又はI
BT678を含む微生物製剤の効能を実験するため、ゴルフ
場フェアーウェイ芝（Zoysia japonica）のRhizoctonia
ラージパッチ抑制に対する生物学的防除分析を行った。
微生物製剤でStreptomyces sp.WYE20、又はIBT678の細
胞数は2.0×106cfu/mlに調整した。
Rhizoctonia solani AG2−２で感染された土壌をフェ
アーウェイ芝（Zoysia japonica）に接種した後、ポッ
ト（直径が25cm）に移植した。本発明の微生物製剤200m
lを1996年度と1997年度に１週間毎に各々２週間と３週
間処理した。同量の水で処理したポットを対照群として
使用した。群当たりに３つのポットを使用し、ランダム
ブロック配列方式で設けた。自然的な発病を誘導するた
め、1996年の９月初めから10月初め、1997年３月初めか
ら６月末までゴルフ場のフェアーウェイの近い所にポッ
トWP置き、Rhizoctoniaラージパッチ発病を観察した。
表15に表したように、WYE20を含む本発明の微生物製剤
で処理したポットではラージパッチが観察されないに対
し、対照群とIBT678で処理したポットでは該病が観察さ
れた。
アーウェイ芝（Zoysia japonica）に接種した後、ポッ
ト（直径が25cm）に移植した。本発明の微生物製剤200m
lを1996年度と1997年度に１週間毎に各々２週間と３週
間処理した。同量の水で処理したポットを対照群として
使用した。群当たりに３つのポットを使用し、ランダム
ブロック配列方式で設けた。自然的な発病を誘導するた
め、1996年の９月初めから10月初め、1997年３月初めか
ら６月末までゴルフ場のフェアーウェイの近い所にポッ
トWP置き、Rhizoctoniaラージパッチ発病を観察した。
表15に表したように、WYE20を含む本発明の微生物製剤
で処理したポットではラージパッチが観察されないに対
し、対照群とIBT678で処理したポットでは該病が観察さ
れた。
表15に表したようにこのような結果は本発明の微生物
製剤WYE20がゴルフ場フェアーウェイ芝のRhizoctoniaラ
ージパッチを防除するに効果があることを見せてくれる
のである。
製剤WYE20がゴルフ場フェアーウェイ芝のRhizoctoniaラ
ージパッチを防除するに効果があることを見せてくれる
のである。
（５）唐辛子作物疫病に対する生物学的防除活性
実施例６にて製造した微生物製剤であるWYE20、又はW
YE324との効能を実験するため、ポット唐辛子苗の疫病
抑制に対する生物学的防除分析を行った。
YE324との効能を実験するため、ポット唐辛子苗の疫病
抑制に対する生物学的防除分析を行った。
滅菌水に２日間浸濡らした唐辛子種子を実施例６にて
製造した微生物製剤WYE20、又はWYE324で18時間浸濡ら
し処理した（処理群）。Streptomyces sp.WYE20とWYE32
4との細胞数を1.2×107cfu/mlと1.7×107cfu/mlに各々
調整した。対照群としては２日間滅菌水に浸濡らしてか
ら再び18時間浸濡らしたものを使用した。一方、滅菌水
に２日間浸濡らした唐辛子種子を実施例６の伝達媒体に
18時間浸濡らしたものと代替した。これらを他の対照群
として使用した。
製造した微生物製剤WYE20、又はWYE324で18時間浸濡ら
し処理した（処理群）。Streptomyces sp.WYE20とWYE32
4との細胞数を1.2×107cfu/mlと1.7×107cfu/mlに各々
調整した。対照群としては２日間滅菌水に浸濡らしてか
ら再び18時間浸濡らしたものを使用した。一方、滅菌水
に２日間浸濡らした唐辛子種子を実施例６の伝達媒体に
18時間浸濡らしたものと代替した。これらを他の対照群
として使用した。
前記キュウリに対する分析実験にても言及した通り、
PDB（Potato Dextrose Broth:Difco社）を用いて25℃で
14乃至21日間培養されたPhytophthora capsiciを回収
し、滅菌されたポッチング配合物に接種し、対照群であ
る唐辛子播種に対する疫病発病率が80％である感染され
たポッチング配合物を得た。Phytophthora capsiciに感
染されたポッチング配合物を唐辛子播種の疫病抑制に対
する伝達媒体のWYE20とWYE324の効能測定に使用した。
PDB（Potato Dextrose Broth:Difco社）を用いて25℃で
14乃至21日間培養されたPhytophthora capsiciを回収
し、滅菌されたポッチング配合物に接種し、対照群であ
る唐辛子播種に対する疫病発病率が80％である感染され
たポッチング配合物を得た。Phytophthora capsiciに感
染されたポッチング配合物を唐辛子播種の疫病抑制に対
する伝達媒体のWYE20とWYE324の効能測定に使用した。
播種ポットとしては、使い捨て紙コップ（直径9cm）
を使用した。コップ当たりに３つの種子を含む14個のコ
ップを用意し、自然光で25乃至32℃の温度を維持するガ
ラス温室で実験を実施した。ポットはガラス温室にラン
ダムブロック配列方式で設けた。湿度を80％に維持し、
ポットに水を周期的に噴霧した。
を使用した。コップ当たりに３つの種子を含む14個のコ
ップを用意し、自然光で25乃至32℃の温度を維持するガ
ラス温室で実験を実施した。ポットはガラス温室にラン
ダムブロック配列方式で設けた。湿度を80％に維持し、
ポットに水を周期的に噴霧した。
周期的に種子の発芽と、唐辛子作物の疫病を記録し、
表16に表した。
表16に表した。
表16に表したように、本発明のWYE20又はWYE324で処
理した種子の場合、対照群と比べ、唐辛子作物の疫病が
相当減少した。この結果は本発明のWYE20又はWYE324
は、唐辛子作物の疫病を防除するに効果があることを表
したものである。
理した種子の場合、対照群と比べ、唐辛子作物の疫病が
相当減少した。この結果は本発明のWYE20又はWYE324
は、唐辛子作物の疫病を防除するに効果があることを表
したものである。
（６）唐辛子幼苗を利用した植物生長促進に対する分析
本発明の微生物製剤であるWYE20又はWYE324の唐辛子
作物の生長促進に関する効能を実験するため、幼苗分析
を行った。
作物の生長促進に関する効能を実験するため、幼苗分析
を行った。
滅菌水に２日間浸し濡らした唐辛子種子を実施例５
（D.M.22）にて製造した微生物製剤であるWYE20又はWYE
324で処理した（微生物製剤4g当１、000個の種子）。種
子を処理する前にStreptomyces sp.WYE20とWYE324との
細胞数を各々1.2×107cfu/mlと1.7×107cfu/mlに調整し
た。同方法で滅菌水に唐辛子種子を浸し濡らしたものを
対照群として使用した（対照群１）。一方、WYE20又はW
YE324を含まない伝達媒体（D.M.22、4g当１、000個の種
子）で処理した唐辛子種子を他の対照群として使用した
（対照群２）。
（D.M.22）にて製造した微生物製剤であるWYE20又はWYE
324で処理した（微生物製剤4g当１、000個の種子）。種
子を処理する前にStreptomyces sp.WYE20とWYE324との
細胞数を各々1.2×107cfu/mlと1.7×107cfu/mlに調整し
た。同方法で滅菌水に唐辛子種子を浸し濡らしたものを
対照群として使用した（対照群１）。一方、WYE20又はW
YE324を含まない伝達媒体（D.M.22、4g当１、000個の種
子）で処理した唐辛子種子を他の対照群として使用した
（対照群２）。
前記のキュウリ播種と同方式で唐辛子種子を栽培し
た。
た。
播種ポットとしては、使い捨て紙コップ（直径9cm）
を使用した。各実験でコップ当たりに１つの種子を有す
る121個のコップを用意し、自然光で25乃至32℃の温度
を維持するガラス温室で実験を実施した。ガラス温室に
ポットをランダムブロック配列方式で設けた。湿度は40
乃至80％に維持し、ポットに水を周期的に噴霧した。
“材料及び方法”の方式で製造したWYE20又はWYE324の
細胞培養液15mlを４週間栽培した後、微生物製剤で処理
した播種ポットに接種した。対照群では同量の水を与え
た。この実験を９週間継続し、その結果を表17に表し
た。
を使用した。各実験でコップ当たりに１つの種子を有す
る121個のコップを用意し、自然光で25乃至32℃の温度
を維持するガラス温室で実験を実施した。ガラス温室に
ポットをランダムブロック配列方式で設けた。湿度は40
乃至80％に維持し、ポットに水を周期的に噴霧した。
“材料及び方法”の方式で製造したWYE20又はWYE324の
細胞培養液15mlを４週間栽培した後、微生物製剤で処理
した播種ポットに接種した。対照群では同量の水を与え
た。この実験を９週間継続し、その結果を表17に表し
た。
表17に表したように、本発明のWYE20又はWYE324で処
理された唐辛子種子による作物は、対照群種子から発芽
した作物と比べて生長が大きく促進された。この結果は
本発明のWYE20又はWYE324は唐辛子作物の生長促進にも
相当効果的であることを表すものである。
理された唐辛子種子による作物は、対照群種子から発芽
した作物と比べて生長が大きく促進された。この結果は
本発明のWYE20又はWYE324は唐辛子作物の生長促進にも
相当効果的であることを表すものである。
（７）農地での唐辛子定植を用いた生物学的な防除分析
本発明の微生物製剤の農地での唐辛子疫病と唐辛子作
物の生長促進に関する効能を実験するため、生物学的な
防除分析を行った。
物の生長促進に関する効能を実験するため、生物学的な
防除分析を行った。
滅菌水に２日間浸し濡らした唐辛子種子を実施例６に
て製造した微生物製剤に３時間浸し濡らした。該種子を
実施例５にて製造した微生物製剤（D.M.22）（4g当１、
000個の種子）で再び処理した。種子を処理する前にStr
eptomyces sp.WYE20とWYE324との細胞数を各々1.2×107
cfu/mlと1.7×107cfu/mlに調整した。
て製造した微生物製剤に３時間浸し濡らした。該種子を
実施例５にて製造した微生物製剤（D.M.22）（4g当１、
000個の種子）で再び処理した。種子を処理する前にStr
eptomyces sp.WYE20とWYE324との細胞数を各々1.2×107
cfu/mlと1.7×107cfu/mlに調整した。
唐辛子を２日間滅菌水に唐辛子種子を浸し濡らし、再
び３時間浸し濡らした後、WYE20又はWYE324を含まない
伝達媒体で処理した唐辛子種子を対照群として使用し
た。各々の種子を苗ベッドで栽培した。水を周期的に与
え、温度を25℃乃至35℃に維持した。唐辛子苗が1.5乃
至2.0cmの高さに成長した際に、唐辛子苗を沙と土とで
配合された土壌と伝達媒体であるWYE20またはWYE324
（苗穴当たりに0.1g）を含む25個の苗穴（5cm×5cm、6c
m深さ）を有する苗板に移植した。対照群唐辛子苗を前
記と同一な沙と土で配合された土壌と前記と同一な伝達
媒体のみを含む苗穴に移植した。前記苗ポットを18乃至
35℃の温度のビニールハウスで栽培し、周期的に水を与
えた。ビニールハウスにポットをランダムブロック配列
方式で設けた。ビニールハウスで11週間成長した後、各
作物を農地に移植した。移植一種間前にWYE20又はWYE32
4の培養液10ml（1.2乃至1.7×105cfu/ml）を処理群苗穴
に添加した。対照群苗ポットには同量の水を与えた。
び３時間浸し濡らした後、WYE20又はWYE324を含まない
伝達媒体で処理した唐辛子種子を対照群として使用し
た。各々の種子を苗ベッドで栽培した。水を周期的に与
え、温度を25℃乃至35℃に維持した。唐辛子苗が1.5乃
至2.0cmの高さに成長した際に、唐辛子苗を沙と土とで
配合された土壌と伝達媒体であるWYE20またはWYE324
（苗穴当たりに0.1g）を含む25個の苗穴（5cm×5cm、6c
m深さ）を有する苗板に移植した。対照群唐辛子苗を前
記と同一な沙と土で配合された土壌と前記と同一な伝達
媒体のみを含む苗穴に移植した。前記苗ポットを18乃至
35℃の温度のビニールハウスで栽培し、周期的に水を与
えた。ビニールハウスにポットをランダムブロック配列
方式で設けた。ビニールハウスで11週間成長した後、各
作物を農地に移植した。移植一種間前にWYE20又はWYE32
4の培養液10ml（1.2乃至1.7×105cfu/ml）を処理群苗穴
に添加した。対照群苗ポットには同量の水を与えた。
移植された唐辛子の発病と生長を周期的に観察し、そ
の平均値を表18（路地１）と19（路地２）に表した。
の平均値を表18（路地１）と19（路地２）に表した。
表18と19に表したように、本発明によるWYE20又はWYE
324で処理した唐辛子種子による作物は対照群種子によ
り発芽された作物に比べ生長が大きく促進され、疫病も
相当減少した。この結果は本発明のWYE20及びWYE324が
農地で唐辛子疫病を防除し、唐辛子作物生長を促進する
に効果的であることを表すものである。
324で処理した唐辛子種子による作物は対照群種子によ
り発芽された作物に比べ生長が大きく促進され、疫病も
相当減少した。この結果は本発明のWYE20及びWYE324が
農地で唐辛子疫病を防除し、唐辛子作物生長を促進する
に効果的であることを表すものである。
本発明の具体例の実施例と好ましい具体例を提供した
が、当業者にとっては本発明から外れずに、他の方に変
形されるか、修正され得ることは自明である。従って、
他の方に変化、変形及び具現は、本発明の範囲から外れ
ない限り、本発明に属されると理解される。
が、当業者にとっては本発明から外れずに、他の方に変
形されるか、修正され得ることは自明である。従って、
他の方に変化、変形及び具現は、本発明の範囲から外れ
ない限り、本発明に属されると理解される。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名)
C12N 1/00 - 7/08
A01N 63/00 - 63/04
ＢＩＯＳＩＳ／ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)
ＰｕｂＭｅｄ
Claims (22)
- 【請求項１】各々KCTC0341BPとKCTC0342BPとの同定特性
を有する生物学的に純粋な微生物培養体であるStreptom
yces sp.WYE20とStreptomyces sp.WYE324の微生物菌株
培養物。 - 【請求項２】生物学的に純粋な微生物培養体であるStre
ptomyces sp.WYE20とStreptomyces sp.WYE324の中の一
つを含有する抗菌性微生物製剤。 - 【請求項３】前記微生物菌株は、菌類に感染されやすい
植物を保護できる、請求の範囲第１項または第２項記載
の微生物。 - 【請求項４】前記保護は、苗立枯病及び根腐病等の幼苗
病害ならびに、キュウリのうどんこ病、唐辛子の疫病、
又は芝のRhizoctoniaブラウン／ラージ パッチ等の葉
腐病を起こす病原菌に対する保護である、請求の範囲第
３項記載の微生物。 - 【請求項５】前記抗菌性微生物製剤は、生物学的に純粋
なStreptomyces sp.WYE20、又はStreptomyces sp.WYE32
4と伝達媒体からなる、請求の範囲第２項記載の抗菌性
微生物製剤。 - 【請求項６】前記伝達媒体は、伝達媒体全体重量に対し
麸40乃至65重量％、キトサン１乃至５重量％、おが屑30
乃至55重量％、キチン１乃至３重量％、及びファーマメ
ディア１乃至３重量％からなる、請求の範囲第５項記載
の抗菌性微生物製剤。 - 【請求項７】前記伝達媒体は胞子生成培地0.2乃至3.5重
量％を追加で含む、請求の範囲第６項記載の抗菌性微生
物製剤。 - 【請求項８】前記Streptomyces sp.WYE20、又はWYE324
は、前記伝達媒体1g当のコロニー形成単位として105乃
至1010である、請求の範囲第６項または第７項記載の抗
菌性微生物製剤。 - 【請求項９】前記伝達媒体は水中に1.0乃至3.0重量％の
ペクチンおよび0.1乃至0.6重量％のコロイドキチンを含
む、請求の範囲第５項記載の抗菌性微生物製剤。 - 【請求項１０】前記Streptomyces sp.WYE20、又はWYE32
4は前記伝達媒体1g当のコロニー形成単位として105乃至
1010である、請求の範囲第９項記載の抗菌性微生物製
剤。 - 【請求項１１】Streptomyces sp.WYE20、又はWYE324の
純粋培養生産のための培養工程及び菌体を得る工程から
なる抗菌性微生物製剤の製造方法。 - 【請求項１２】前記培養は25乃至33℃で３乃至７日間13
0乃至300rpmでなる、請求の範囲第11項記載の抗菌性微
生物製剤の製造方法。 - 【請求項１３】前記菌体を得る工程は、前記Streptomyc
es sp.WYE20、又はWYE324の微生物純粋培養体を凍結乾
燥してなる、請求の範囲第11項記載の抗菌性微生物製剤
の製造方法。 - 【請求項１４】前記菌体を得る工程は、前記微生物純粋
培養体を適切な伝達媒体と混合してなる、請求の範囲第
11項記載の抗菌性微生物製剤の製造方法。 - 【請求項１５】抗菌性微生物製剤の製造方法であって、
伝達媒体全体の重量に対し麸40乃至65重量％、キトサン
１乃至５重量％、おが屑30乃至55重量％、キチン１乃至
３重量％、及びファーマメディア１乃至３重量％からな
る伝達媒体を形成する段階； 前記伝達媒体を滅菌する段階； 前記伝達媒体にStreptomyces sp.WYE20（KCTC0341B
P）、又はWYE323（KCTC0342BP）を混合する段階； Streptomyces sp.WYE20（KCTC0341BP）、又はStreptomy
ces sp.WYE324（KCTC0342BP）の混合物を25乃至33℃で
５乃至14日間培養する段階；及び 前記培養段階から得られた結果物を無菌的に乾燥させて
なる抗菌性微生物製剤の製造方法。 - 【請求項１６】前記乾燥段階後、得られた結果物を無菌
的に配合することを追加にしてなる、請求の範囲第15項
記載の抗菌性微生物製剤の製造方法。 - 【請求項１７】前記伝達媒体をペレット型にする段階；
及び得られたペレットに胞子生成培地0.2乃至3.5重量％
をコーティングすることを追加にしてなる、請求の範囲
第15項記載の抗菌性微生物製剤の製造方法。 - 【請求項１８】Streptomyces sp.WYE20、又はStreptomy
ces sp.WYE324は、前記伝達媒体1g当のコロニー形成単
位として105乃至1010である、請求の範囲第15項記載の
抗菌性微生物製剤の製造方法。 - 【請求項１９】前記滅菌は121℃で30乃至40分間行われ
る、請求の範囲第15項記載の抗菌性微生物製剤の製造方
法。 - 【請求項２０】抗菌性微生物製剤の製造方法であって、
1.0乃至3.0重量％のペクチン、0.1乃至0.6重量％のコロ
イドキチンと残りの水からなる伝達媒体を形成する段
階； 前記伝達媒体を滅菌する段階；及び 前記伝達媒体にStreptomyces sp.WYE20（KCTC0341B
P）、又はStreptomyces sp.WYE324（KCTC0342BP）を混
合する段階からなる抗菌性微生物製剤の製造方法。 - 【請求項２１】Streptomyces sp.WYE20、又はStreptomy
ces sp.WYE324は、前記伝達媒体1g当のコロニー形成単
位として105乃至1010である、請求の範囲第20項記載の
抗菌性微生物製剤の製造方法。 - 【請求項２２】植物種子、ポッチング（potting）配合
物、生長する植物体、又は土壌に前記請求の範囲第２乃
至10項のいずれか１項に記載の抗菌性微生物製剤をコー
ティング、配合、噴霧、又は溝処理等の方法を使用して
なる抗菌性微生物製剤の使用方法。
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1997/3568 | 1997-02-05 | ||
| KR1019970003568A KR100197077B1 (ko) | 1997-02-05 | 1997-02-05 | 항균성 미생물제제, 그 제조방법 및 처리방법 |
| PCT/KR1998/000015 WO1998035017A1 (en) | 1997-02-05 | 1998-01-24 | Antifungal biocontrol agents, a process for preparing and treating the same |
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| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
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|---|---|---|---|
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