JP2022531609A

JP2022531609A - 新規メチルキナゾリノン誘導体

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Publication number: JP2022531609A
Application number: JP2021566023A
Authority: JP
Inventors: コジモドレンテ，; デーヴィッドスティーブンヘウィングス，; ダニエルフンツィカー，; ダニエラクルメナッハ，; ピエルジョルジョフランチェスコトンマゾペッタッツォーニ，; ユルゲンヴィヒマン，
Original assignee: エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト
Priority date: 2019-12-10
Filing date: 2020-12-08
Publication date: 2022-07-07
Anticipated expiration: 2040-12-08
Also published as: CR20220251A; MX2022006783A; PE20221778A1; CN114787156B; US20240174621A1; ZA202206923B; JP7108146B2; AU2020403443B2; BR112022011123A2; CN118791472A; UA128299C2; EP4073065A1; US12116349B2; IL292161A; KR20220110554A; US20220298119A1; JP2022124458A; ZA202204675B; AU2020403443A1; WO2021116055A1

Abstract

本発明は、一般式（Ｉ）TIFF2022531609000032.tif68170を有する新規化合物又はその薬学的に許容され得る塩を提供する。式（Ｉ）の化合物を医薬として使用することができる。【選択図】なし

Description

本発明は、新規化合物、その製造、それを含有する薬学的組成物、及び治療活性物質としてのその使用を提供する。ＢＲＡＦ阻害剤であり、パラドックス遮断特性を有する本発明の化合物。

本発明は、特に、式（Ｉ）

の新規化合物、又はその薬学的に許容され得る塩を提供する。

急速進行性線維肉腫（ＲＡＦ）クラスのセリン－トレオニンキナーゼは、ＭＡＰキナーゼシグナル伝達経路の最初のノードを構成する３つのメンバー（ＡＲＡＦ、ＢＲＡＦ、ＲＡＦ１）を含む。ＭＥＫ１及び２のリン酸化によるシグナル伝播における３つのＲＡＦアイソフォームの明らかな冗長性にもかかわらず、頻繁な発がん性活性化変異は、ＢＲＡＦについてのみ一般に見出される。特に、Ｖ６００をグルタミン酸又はリジンで置換すると、キナーゼが高度に活性化され、その結果、外部刺激とは無関係にＭＡＰＫ経路が過剰刺激される（Ｃｅｌｌ．２０１５Ｊｕｎ１８；１６１（７）：１６８１-１６９６）。

変異型ＢＲＡＦは標的化可能な発がん性ドライバーであり、３つのＢＲＡＦ阻害剤（ベムラフェニブ、ダブラフェニブ及びエンコラフェニブ）が現在まで市場に出回っており、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ陽性黒色腫において有効性を示している。しかしながら、薬物耐性の迅速な獲得はほぼ普遍的に観察されており、標的療法に関する治療上の利益の持続期間は依然として限られている。

さらに、開発されたＢＲＡＦ阻害剤は、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ駆動性腫瘍においてＭＡＰＫシグナル伝達を抑制する予想外の「逆説的」能力を明らかにしたが、同じ阻害剤がＢＲＡＦ野生型（ＷＴ）モデルにおいてＭＡＰＫ刺激活性を示した（ＮＥｎｇｌＪＭｅｄ２０１２；３６６：２７１－２７３；及びＢｒｉｔｉｓｈＪｏｕｒｎａｌｏｆＣａｎｃｅｒｖｏｌｕｍｅ１１１，ｐａｇｅｓ６４０-６４５（２０１４））。

次いで、ＲＡＦパラドックスに関する機構的研究により、発がん性ＢＲＡＦＶ６００Ｅがその単量体サイトゾル形態でＭＥＫ１／２をリン酸化する一方で、ＷＴＢＲＡＦ及びＲＡＦ１の活性化は、細胞膜移行、並びに活性化ＲＡＳによって促進されるホモ及び／又はヘテロ二量体化を含む事象の複雑な段階を必要とすることが明らかになった（ＫＲＡＳ、ＮＲＡＳ、ＨＲＡＳ）（ＮａｔｕｒｅＲｅｖｉｅｗｓＣａｎｃｅｒｖｏｌｕｍｅ１４，ｐａｇｅｓ４５５-４６７（２０１４））。

ベムラフェニブ、ダブラフェニブ又はエンコラフェニブのような阻害剤のＷＴＢＲＡＦ又はＲＡＦ１プロトマーへの結合は、ＲＡＦホモ及び／又はヘテロ二量体化、並びに新たに形成されたＲＡＦ二量体の膜会合を迅速に誘導する。二量体型配座では、１つのＲＡＦプロトマーが第２のＲＡＦプロトマーの配座変化をアロステリックに誘導してキナーゼ活性状態をもたらし、重要なことに、阻害剤の結合にとって好ましくない配座をもたらす。結果として、薬物処置によって誘導された二量体は、経路の過活性化を伴う未結合プロトマーによって操作される触媒作用によりＭＥＫリン酸化を促進する。

ＲＡＦパラドックスは、２つの臨床的に関連する結果をもたらす：１）ＢＲＡＦｉ単剤療法時の二次腫瘍（主に角化細胞腫及び扁平上皮癌腫）の増殖の促進（ＮＥｎｇｌＪＭｅｄ２０１２；３６６：２７１－２７３）、及び２）ＢＲＡＦｉ単剤療法の状況と並んでＢＲＡＦｉ＋ＭＥＫｉの組合せにおける薬物耐性の獲得は、ＲＡＳ変異、ＢＲＡＦ増幅、二量体作用性ＢＲＡＦスプライスバリアントの発現を含む遺伝的に駆動される事象による二量体媒介性ＲＡＦシグナル伝達の活性化を示す（ＮａｔｕｒｅＲｅｖｉｅｗｓＣａｎｃｅｒｖｏｌｕｍｅ１４，ｐａｇｅｓ４５５-４６７（２０１４））。したがって、このパラドックスを遮断することができるＲＡＦ阻害剤が必要とされている。

さらに、現在承認されている古典的なＢＲＡＦ阻害剤であるベムラフェニブ（Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ２０１２，９，１１，３２３６-３２４５）、ダブラフェニブ（ＪＰｈａｒｍａｃｏｌＥｘＴｈｅｒ２０１３，３４４（３）６５５－６６４）及びエンコラフェニブ（ＰｈａｒｍａｃｏｌＲｅｓ．２０１８；１２９：４１４－４２３）は全て、脳透過性が非常に低い。これは、脳がん又は脳転移の処置の場合、これらの古典的なＢＲＡＦ阻害剤の使用にとって大きな制限である。したがって、脳透過性が改善されたＢＲＡＦ阻害剤が必要とされている。

本発明は、式（Ｉ）のＢＲＡＦ阻害剤が、高い効力を保持しつつも、ＭＡＰＫシグナル伝達経路のパラドックス活性化がかなり少ない、より強力で選択的なＢＲＡＦ阻害剤であるという驚くべき知見に関する。したがって、この化合物は、ＲＡＦパラドックスを誘導する化合物（パラドックス誘導剤又はＲＡＦパラドックス誘導剤と呼ぶことができる）とは対照的に、パラドックス遮断剤又はＲＡＦパラドックス遮断剤と呼ぶことができる。パラドックス遮断剤であることに加えて、式（Ｉ）の化合物はまた、非常に強力な脳浸透特性を有し、したがって、脳内のがんの処置のために緊急に必要とされる代替療法を提供する。

図１は、ＢＲＡＦ変異型細胞株Ａ３７５において実施例１によって誘導されたＰ－ＥＲＫ阻害曲線を開示している。図２は、ＢＲＡＦ変異型細胞株Ａ３７５において実施例２によって誘導されたＰ－ＥＲＫ阻害曲線を開示している。図３は、ＢＲＡＦ変異型細胞株Ａ３７５において参照化合物ＡＲ－２５によって誘導されたＰ－ＥＲＫ阻害曲線を開示している。図４は、ＷＴＢＲＡＦ細胞株ＨＣＴ－１１６において実施例１によって誘導されたＰ－ＥＲＫ活性化曲線を開示している。比較のため、対照化合物ダブラフェニブ（パラドックス誘導剤）及びＰＬＸ－８３９４（パラドックス遮断剤）による処置によって生成されたデータも示す。図５は、ＷＴＢＲＡＦ細胞株ＨＣＴ－１１６において実施例２によって誘導されたＰ－ＥＲＫ活性化曲線を開示している。比較のため、対照化合物ダブラフェニブ（パラドックス誘導剤）及びＰＬＸ－８３９４（パラドックス遮断剤）による処置によって生成されたデータも示す。図６は、ＷＴＢＲＡＦ細胞株ＨＣＴ－１１６において参照化合物ＡＲ－２５によって誘導されたＰ－ＥＲＫ活性化曲線を開示している。比較のため、対照化合物ダブラフェニブ（パラドックス誘導剤）及びＰＬＸ－８３９４（パラドックス遮断剤）による処置によって生成されたデータも示す。図７は、第１世代ＢＲＡＦ阻害剤によって誘導されるＭＡＰキナーゼ経路の逆説的活性化を示す。ＢＲＡＦはＭＡＰキナーゼシグナル伝達経路の最初のノードの一部であり、変異型ＢＲＡＦは発がん性ドライバーである（左）。ＢＲＡＦＶ６００Ｅ／Ｋ変異腫瘍では、タンパク質が第１世代ＢＲＡＦ阻害剤によって阻害される状態である単量体としてＢＲＡＦシグナルが伝達される（中央）。第１世代のＢＲＡＦ阻害剤は、ＢＲＡＦＷＴホモ及び／又はヘテロ二量体化を促進する（上、右）。これに関連して、ＢＲＡＦ阻害剤によって占有されていないプロトマーは、阻害剤結合に好ましくない配座を獲得する（中央、右）。第１世代のＢＲＡＦ阻害剤による治療の結果は、これに関連して、逆説的に増加したＭＡＰＫ活性化及び結果として生じるＢＲＡＦＷＴ細胞の腫瘍増殖である（下、右）。図８は、化合物実施例１が１日１ｍｇ／ｋｇから始まる用量依存的な抗腫瘍活性を誘発し、強力な脳透過性媒介有効性を証明することを開示している。

国際公開第２０１２／１１８４９２号は、実施例２５として化合物ＡＲ－２５、実施例３０としてＡＲ－３０、及び実施例３１としてＡＲ－３１を開示している。

「薬学的に許容され得る塩」という用語は、生物学的に又はその他望ましくないものではない、遊離塩基又は遊離酸の生物学的有効性及び特性を保持する式（Ｉ）の化合物の塩を指す。塩は塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸（特に塩酸）等の無機酸と、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、サリチル酸、Ｎ－アセチルシステイン等の有機酸で形成される。また、これらの塩は、遊離酸に無機塩基又は有機塩基を添加して調製してもよい。無機塩基から誘導される塩には、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム及びマグネシウム塩等が含まれるがこれらに限定されない。有機塩基から誘導される塩には、第１級、第２級及び第３級アミン、天然に存在する置換アミンを含む置換アミン、環状アミン及び塩基性イオン交換樹脂、例えばイソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、エタノールアミン、リジン、アルギニン、Ｎ－エチルピペリジン、ピペリジン、ポリイミン樹脂等の塩が含まれるがこれらに限定されない。式（Ｉ）の化合物の特に薬学的に許容され得る塩としては、塩酸塩、メタンスルホン酸塩、クエン酸塩等が挙げられる。

式（Ｉ）の化合物は、１つの不斉中心を含有し、光学的に純粋な鏡像異性体又は鏡像異性体の混合物、例えばラセミ体等の形態で存在することができる。

Ｃａｈｎ－Ｉｎｇｏｌｄ－Ｐｒｅｌｏｇ則によれば、不斉炭素原子は、「Ｒ」又は「Ｓ」立体配置のものであり得る。

また、本発明の一実施形態は、本明細書に記載される式（Ｉ）による化合物又はその薬学的に許容され得る塩、特に本明細書に記載される式（Ｉ）による化合物、より詳しくは本明細書に記載される式（Ｉａ）又は（Ｉｂ）の化合物である。

本発明はまた、式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容され得る塩に関し、薬学的に許容され得る塩は、塩酸塩、メタンスルホン酸塩及びクエン酸塩から選択され得る。

また、本発明の一実施形態は、式（Ｉａ）

による化合物である。

また、本発明の一実施形態は、式（Ｉｂ）

による化合物である。

本明細書に記載される式（Ｉａ）及び（Ｉｂ）の化合物を製造するためのプロセスも本発明の目的である。

本発明の式（Ｉ）の化合物の調製は、逐次的又は収束的な合成経路で行うことができる。本発明の合成は、以下の一般的なスキームで示される。得られた生成物の反応及び精製を行うために必要な技能は、当業者に知られている。

より詳細には、式（Ｉ）の化合物は、以下に示す方法、実施例に示す方法、又は類似の方法によって製造することができる。個々の反応工程のための適切な反応条件は、当業者に知られている。反応順序は、スキーム１に表示されているものに限定されないが、出発原料及びそれぞれの反応性に応じて、反応工程の順序を自由に変更することができる。出発材料は、市販されているか、又は以下に示す方法に類似する方法、本明細書に引用された参考文献若しくは実施例に記載されている方法、又は当技術分野で知られている方法によって調製することができる。
スキーム１

本発明における式（Ｉ）の化合物を官能基で誘導体化して、ｉｎｖｉｖｏで親化合物に変換して戻すことができる誘導体を提供できることが、理解されるであろう。

したがって、本発明はまた、本発明による化合物の調製のためのプロセスであって、式（Ｂ１）

の化合物と、式（Ｂ２）

の化合物との、塩基の存在下での反応を含む、プロセスに関する。

反応を溶媒中で好都合に行うことができる。溶媒は、例えばＤＭＦであり得る。

反応を塩基の存在下で好都合に行うことができる。塩基は、例えば炭酸セシウムであり得る。

反応のための好都合な条件は、約３０℃～約１５０℃、特に約５０℃～約１３０℃、より詳しくは約７０℃～約１２０℃であり得る。好都合な条件は、およそ１００℃で、約１時間～約４８時間、特に約２時間～約２０時間である。

本発明はまた、本発明のプロセスに従って製造される場合の本発明による化合物に関する。

本発明はまた、特に、以下のものに関する：
治療活性物質として使用するための、本明細書に記載される式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容され得る塩；
本明細書に記載される式（Ｉ）の化合物、又はその薬学的に許容され得る塩と、治療的に不活性な担体と、を含む、薬学的組成物；
がんの処置又は予防に使用するための、本明細書に記載される式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容され得る塩；
甲状腺がん、結腸直腸がん、脳がん、黒色腫又は非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）の処置又は予防に使用するための、本明細書に記載される式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容され得る塩；
甲状腺がん、結腸直腸がん、脳がん、黒色腫又はＮＳＣＬＣを処置又は予防するための、本明細書に記載される式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容され得る塩の使用；
甲状腺がん、結腸直腸がん、脳がん、黒色腫又はＮＳＣＬＣを治療又は予防するための医薬を調製するための、本明細書に記載される式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容され得る塩の使用；
がんを処置するための方法であって、それを必要とする患者に、有効量の本明細書中に記載の式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容され得る塩を投与することを含む、方法；及び
甲状腺がん、結腸直腸がん、脳がん、黒色腫又はＮＳＣＬＣを処置又は予防するための方法であって、それを必要とする患者に、有効量の本明細書に記載される式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容され得る塩を投与することを含む、方法。

本発明の特定の実施形態は、がん、特にＢＲＡＦ変異型駆動性がん、より詳しくは甲状腺がん、結腸直腸がん、脳がん、黒色腫又はＮＳＣＬＣの治療的及び／又は予防的処置に使用するための、本明細書に記載される式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容され得る塩に関する。

本発明の特定の実施形態は、がん、特にＢＲＡＦ変異型駆動性がん、より詳しくは甲状腺がん、結腸直腸がん、脳がん、黒色腫又はＮＳＣＬＣの治療的及び／又は予防的処置のための医薬を製造するための、本明細書に記載される式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容され得る塩に関する。

本発明のある特定の実施形態は、本明細書に記載の式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容され得る塩、及び薬学的に許容され得る賦形剤を含む、薬学的組成物に関する。

本発明の特定の実施形態は、がん、特にＢＲＡＦ変異型駆動性がん、より詳しくは甲状腺がん、結腸直腸がん、脳がん、黒色腫又は非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）の治療的及び／又は予防的処置のための方法であって、それを必要とする患者に、有効量の本明細書に記載される式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容され得る塩を投与することによる、方法に関する。

本発明の特定の実施形態は、ＢＲＡＦ変異型駆動性がん、特に甲状腺がん、結腸直腸がん、脳がん、黒色腫又はＮＳＣＬＣを有する患者の治療的及び／又は予防的処置における医薬として使用するための本明細書に記載される式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容され得る塩であって、治療的及び／又は予防的処置が、前記患者におけるＢＲＡＦ変異状態を判定すること、次いで、本明細書に記載の式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容され得る塩を前記患者に投与することを含む、本明細書に記載される式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容され得る塩に関する。

本発明の特定の実施形態は、脳転移の治療的及び／又は予防的処置における医薬として使用するための、本明細書に記載の式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容され得る塩に関する。

さらに、本発明は、式（Ｉ）の化合物の対応する重水素化形態の置換基を、適用可能な場合は全て含む。

さらに、本発明は、式（Ｉ）の化合物の対応するトリチウム形態の置換基を、適用可能な場合は全て含む。

本発明の特定の実施形態は、少なくとも１つの置換基が少なくとも１つの放射性同位体を含む、本明細書に記載の式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容され得る塩に関する。放射性同位体の特定の例は、^２Ｈ、^３Ｈ、^１３Ｃ、^１４Ｃ、及び^１８Ｆである。

さらに、本発明は、適用可能な場合、式（Ｉ）の化合物の全ての光学異性体、すなわち、ジアステレオ異性体、ジアステレオ異性混合物、ラセミ混合物、それらの全ての対応する鏡像異性体、及び／又は互変異性体、並びにそれらの溶媒和物を含む。

所望であれば、本発明の化合物のラセミ混合物を分離して、個々の鏡像異性体を単離することができる。分離は、化合物のラセミ混合物を鏡像異性的に純粋な化合物にカップリングさせてジアステレオ異性混合物を形成し、続いて、分別再結晶化又はクロマトグラフィのような標準的方法によって個々のジアステレオマを分離するような、当該技術分野で公知の方法で行うことができる。

一実施形態では、光学的に純粋な鏡像異性体が提供される場合、光学的に純粋な鏡像異性体とは、化合物が所望の異性体を９０重量％超、特に所望の異性体を９５重量％超、又はより詳しくは所望の異性体を９９重量％超含有することを意味し、該重量パーセントは、化合物の異性体の全重量を基準とする。キラル的に純粋な又はキラル濃縮された化合物は、キラル選択的合成によって、又は鏡像異性体の分離によって調製することができる。鏡像異性体の分離は、最終生成物で、又は代替的に好適な中間体に対して行うことができる。

本発明の別の実施形態は、本発明の化合物と、治療的に不活性な担体、希釈剤又は賦形剤とを含有する薬学的組成物又は医薬、並びにこのような組成物及び医薬を調製するために本発明の化合物を使用する方法を提供する。一例では、式（Ｉ）の化合物は、生理学的に許容され得る担体、すなわち、生薬の投与形態に使用される用量及び濃度でレシピエントに対して毒性でない担体と、適切なｐＨと所望の純度で、周囲温度で混合することによって製剤化されてもよい。製剤のｐＨは、特定の用途及び化合物の濃度に主に依存するが、好ましくは約３～約８の範囲である。一例では、式（Ｉ）の化合物は、ｐＨ５の酢酸緩衝剤中で製剤化される。別の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は無菌である。化合物は、例えば、固体若しくは非晶質組成物として、凍結乾燥製剤として、又は水溶液として保管され得る。

組成物は、良好な医療行為と一致した様式で製剤化、投薬、及び投与される。これに関連して考慮すべき要因としては、治療される特定の障害、治療される特定の哺乳動物、個々の患者の臨床状態、障害の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与スケジュール、及び医療従事者に既知である他の要因が挙げられる。

また、本発明の一実施形態は、記載されるプロセスのいずれか１つに従って製造された場合の、本明細書に記載の式（Ｉ）の化合物である。

アッセイ手順
材料：
Ｌ－グルタミンを添加したＤＭＥＭフェノールレッド不含培地を（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）から購入した。ウシ胎児血清（ＦＢＳ）をＶＷＲから購入した。ＡｄｖａｎｃｅｄＥＲＫｐｈｏｓｐｈｏ－Ｔ２０２／Ｙ２０４キット－１０，０００試験を、Ｃｉｓｂｉｏカタログ番号６４ＡＥＲＰＥＨから購入した。Ａ３７５及びＨＣＴ１１６細胞を、元々ＡＴＣＣから入手し、Ｒｏｃｈｅリポジトリによって保管した。３８４ウェルマイクロプレートは３８４ウェル（蓋付き、ＨｉＢａｓｅ、小容量カタログ７８４－０８０）でありＧｒｅｉｎｅｒＢｉｏ－Ｏｎｅから購入した。

Ａ３７５又はＨＣＴ１１６細胞におけるＰ－ＥＲＫ決定のためのＨＴＲＦアッセイ
Ａ３７５は、Ｖ６００Ｅ変異ＢＲＡＦを発現する細胞がんモデルであり、ＨＣＴ１１６は、ＷＴＢＲＡＦを発現する細胞がんモデルである。第１世代のＢＲＡＦ阻害剤、例えばダブラフェニブは、Ｖ６００Ｅ変異ＢＲＡＦ細胞（例えばＡ３７５等）の増殖を阻害する一方、ＷＴＢＲＡＦ細胞（例えば、ＨＣＴ１１６等）の増殖を活性化するという点で、腫瘍細胞に対する逆説的効果を誘導する。ＥＲＫ１、２リン酸化（ＭＡＰＫ経路のリン酸化カスケードの末端メンバー）は、ＭＡＰＫ経路の活性化状態の主な読み出しとして以後報告されている。アッセイの前に、Ａ３７５及びＨＣＴ１１６細胞株を、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を補充したＤＭＥＭ無フェノールレッド培地中で維持する。化合物処置の後、Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４においてリン酸化されたときのＥＲＫタンパク質上の言及されたキット（Ｃｉｓｂｉｏカタログ番号６４ＡＥＲＰＥＨ）において提供される２つの抗体の選択的結合によって誘導されるＦＲＥＴ蛍光シグナルを測定することによって、Ｐ－ＥＲＫレベルを決定する。簡潔に言えば、１２μｌ培地／ウェル中の８０００細胞／ウェルを３８４ウェルプレートに播種し、インキュベーター内に一晩放置し（５％ＣＯ２加湿雰囲気下、３７℃で）、翌日、プレートを以下の最終薬物濃度で試験化合物、ダブラフェニブ及びＰＬＸ８３９４（後者の２つは対照として）を用いて二連で処置する：１０μＭ－３μＭ－１μＭ－０．３μＭ－０．１μＭ－０．０３μＭ－０．０１μＭ－０．００３μＭ－０．００１μＭ、全てのウェルをＤＭＳＯ正規化に供し、薬物インキュベーションを１時間行う。次いで、キットと共に供給された４×溶解緩衝液４μｌをウェルに添加し、次いで、プレートを３０秒間（３００ｒｃｆ）遠心分離し、プレートシェーカー上で室温で１時間インキュベートする。

インキュベーションの最後に、４μＬ／ウェルの進行したＰ－ＥＲＫ抗体溶液（製造者の指示に従って調製）を添加し、続いて４μＬ／ウェルのｃｒｉｐｔａｔｅＰ－ＥＲＫ抗体溶液（製造者の指示に従って調製）（Ｃｉｓｂｉｏカタログ番号６４ＡＥＲＰＥＨ）を試験ウェルに添加する。

適切なデータを可能にするために、正規化対照ウェルでは、以下の表に報告されている非薬物処置ウェルが、（製造業者の指示に従って）各プレートに常に含まれる。

次いで、プレートを３００ｒｃｆで３０秒間遠心分離し、蒸発を防ぐために密封し、室温の暗所で一晩インキュベートする。

次いで、プレートを分析し、蛍光発光値をＰｈｅｒａｓｔａｓｔＦＳＸ（ＢＭＧＬａｂｔｅｃｈ）装置によって６６５ｎＭ及び６２０ｎＭで収集する。

得られた蛍光値を式比＝シグナル（６２０ｎｍ）／シグナル（６２５ｎｍ）＊１００００に従って処理し、次いでブランク上の比の平均を全ての値に減算する。

Ａ３７５細胞（ＢＲＡＦ阻害）の場合、ＤＭＳＯのみで処置した細胞によって誘導された比（ブランクを差し引いたもの）の平均を１００％とみなし、１０μＭダブラフェニブで処置した細胞によって誘導された比（ブランクを差し引いたもの）の平均を０％とみなして、データを正規化する。正規化された点の平均をシグモイド曲線でフィッティングし、ＩＣ５０を決定する。結果を表１～２及び図１～３に示す。

ＨＣＴ１１６細胞（ＢＲＡＦ活性化）の場合、ＤＭＳＯのみで処置した細胞によって誘導された比（ブランクを差し引いたもの）の平均を０％とみなし、最も高いシグナルを提供する濃度でダブラフェニブ処置した細胞によって誘導された比（ブランクを差し引いたもの）の平均を１００％とみなして、データを正規化する。個々の点にシグモイド曲線又はベル形状曲線を当てはめ、ダブラフェニブ媒介性の最大活性化と比較した活性化のパーセンテージを決定する。ＥＣ５０は、ダブラフェニブによって達成される最大値の５０％に等しい活性化が得られる濃度である。結果を表２及び図４～６に示す。

活性化がダブラフェニブによって達成される最大値の５０％に達しない場合、ＥＣ５０計算は適用できない。

ダブラフェニブからの最大パラドックス誘導効果のパーセンテージは、試験化合物がその最大Ｐ－ＥＲＫシグナルを誘導するパーセンテージを、試験した用量範囲内でダブラフェニブによって生成された最大シグナルのパーセンテージとして評価することによって決定される。

脳浸透電位を評価するためのＣＳＦＫ_ｐ、ｕｕ測定ＣＳＦＫ_ｐ、ｕｕは、脳脊髄液（ＣＳＦ）中の濃度：非結合血漿曝露の比であり、Ｋ_ｐ、ｕｕ値≧１は良好な脳浸透を示す。化合物実施例１について、マウス及びラットにおける単回経口投与試験、連続血漿及びＣＳＦ濃度（投与後２４時間まで）をＬＣ－ＭＳ／ＭＳによって測定してＣＳＦＫ_ｐ、ｕｕを計算した。ラット及びミニブタにおける複数の経口用量研究のため、Ｔｍａｘ（最後の投与の３時間後）に近似する血漿及びＣＳＦ濃度をＬＣ－ＭＳ／ＭＳによって測定し、ＣＳＦＫ_ｐ、ｕｕを計算するために使用した。

頭蓋内移植Ａ３７５－Ｌｕｃ
ルシフェラーゼを構成的に発現するＡ３７５ＢＲＡＦＶ６００Ｅがん細胞を免疫無防備状態のマウスの頭蓋内に注射した。化合物実施例１による処置を頭蓋内注射から７日目に開始し、２週間継続した。異なる群を、それぞれ１ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ及び２０ｍｇ／ｋｇの実施例１の毎日の経口投与に供した。結果を図８に示す。

式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容され得る塩は、医薬として（例えば、医薬製剤の形態で）使用することができる。本発明の医薬製剤は、経口投与（例えば、錠剤、コーティング錠剤、糖衣錠、硬質及び軟質ゼラチンカプセル、溶液、乳剤又は懸濁液の形態）等の内服投与、経鼻投与（例えば、鼻スプレーの形態）、直腸投与（例えば、坐剤の形態）、又は眼局所投与（例えば、溶液、軟膏、ゲル又は水溶性高分子挿入剤の形態）が可能である。しかしながら、投与は、筋肉内、静脈内、眼内等の非経口的に（例えば、滅菌注射液の形態で）行うこともできる。

式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容され得る塩は、錠剤、コーティング錠、糖衣錠、硬質ゼラチンカプセル、注射液又は外用剤の製造のための薬学的に不活性な、無機又は有機アジュバントを用いて加工することができる。ラクトース、コーンスターチ又はその誘導体、タルク、ステアリン酸又はその塩等を、例えば、錠剤、ドラゼ及び硬質ゼラチンカプセル用のそのようなアジュバントとして、使用することができる。

軟質ゼラチンカプセルに適したアジュバントとしては、例として、植物油、ワックス、油脂、半固形物、液体ポリオール等が挙げられる。

溶液及びシロップ剤の製造に適したアジュバントは、例として、水、ポリオール、サッカロース、転化糖、グルコース等である。

注射溶液のための適切なアジュバントは、例えば、水、アルコール、ポリオール、グリセロール、植物油等である。

坐剤のための適切なアジュバントは、例として、天然又は硬化した油、ワックス、油脂、半固体又は液体ポリオール等である。

眼部外用剤形のための適切なアジュバントは、例として、シクロデキストリン、マンニトール、又は当該技術分野で知られている多くの他の担体及び賦形剤である。

さらに、医薬製剤は、防腐剤、可溶化剤、粘度増加物質、安定剤、湿潤剤、乳化剤、甘味剤、着色剤、着香剤、浸透圧を変化させるための塩、緩衝剤、マスキング剤、又は酸化防止剤を含有することができる。本発明の医薬製剤は更に、他の治療上価値のある物質を含むことができる。

投薬量は広範に変化させることができ、当然、各特定の場合における個々の要件に適合させる。一般に、経口投与の場合、体重１ｋｇあたり約０．１ｍｇ～約２０ｍｇ、好ましくは体重１ｋｇあたり約０．５ｍｇ～約４ｍｇ（例えば、１人あたり約３００ｍｇ）を１日量として、好ましくは１～３回に分けて個別に投与し、これは、適切であれば、例えば、同量で構成することができる。局所投与の場合、製剤は、０．００１重量％～１５重量％の医薬を含むことができ、０．１～２５ｍｇの間であり得る必要量は、１日あたりの単回投与でも、１週間あたりの単回投与でも、１日あたりの複数回の投与（２～４回）でも、１週間あたりの複数回の投与でもよい。ただし、これが示されている場合は、ここに記載されている上限又は下限を超える可能性があることは明らかである。

薬学的組成物
式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容され得る塩を、例えば医薬製剤の形態で、治療活性物質として使用することができる。医薬製剤は、経口、例えば、錠剤、コーティング錠、糖衣錠、硬質ゼラチンカプセル及び軟質ゼラチンカプセル、溶液、エマルジョン、又は懸濁液の形態で投与することができる。しかしながら、投与はまた、例えば坐剤の形態で直腸に、又は、例えば注射液の形態で非経口的に行うこともできる。

式（Ｉ）の化合物及びその薬学的に許容され得る塩を、医薬製剤の製造のために、薬学的に不活性な無機又は有機担体と共に加工することができる。ラクトース、コーンスターチ若しくはその誘導体、タルク、及びステアリン酸又はその塩等は、例えば、錠剤、コーティング錠、糖衣錠、及び硬質ゼラチンカプセルの担体として使用することができる。軟質ゼラチンカプセルに好適な担体は、例えば、植物油、ワックス、脂肪、半固体及び液体ポリオール等である。しかしながら、活性物質の性質にもよるが、軟質ゼラチンカプセルの場合には通常、担体は必要とされない。溶液及びシロップ剤の製造に適した担体材料は例えば、水、ポリオール、グリセロール、植物油等である。坐剤に適した担体は、例えば、天然油又は硬化した油、ワックス、油脂、半液体又は液体ポリオール等である。

さらに、医薬製剤は、防腐剤、可溶化剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、甘味剤、着色剤、着香剤、浸透圧を変化させるための塩、緩衝液、マスキング剤、又は酸化防止剤等の、薬学的に許容され得る補助物質を含むことができる。本発明の医薬製剤は更に、他の治療上価値のある物質を含むことができる。

式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容され得る塩、及び治療的に不活性な担体を含有する医薬もまた、本発明により提供され、その製造のためのプロセスは、式（Ｉ）の１つ以上の化合物及び／又はその薬学的に許容され得る塩、並びに所望により、１つ以上の他の治療上有用な物質を、１つ以上の治療的に不活性な担体と共に生薬投与形態とすることを含む。

投与量は、広範囲内で変化させることができ、当然、それぞれの具体的な症例において個々の要件に対して調整されなければならない。経口投与の場合、成人の投与量は、一般式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容され得る塩の対応する量で１日あたり約０．０１ｍｇ～約１０００ｍｇまで変化させることができる。１日投与量は、単回用量又は分割用量で投与することができ、更に、必要であると判明した場合、上限を超えることもできる。

以下の実施例は、本発明を限定することなく説明するが、本発明の代表例に過ぎない。医薬製剤は、簡便に、約１～５００ｍｇ、特に１～１００ｍｇの式（Ｉ）の化合物を含有する。本発明に係る組成物の実施例は、以下の通りである。

実施例Ａ
以下の組成の錠剤は、通常の方法で製造される。

製造手順
１．材料１、２、３、及び４を混ぜ合わせ、精製水で造粒する。
２．顆粒を５０℃で乾燥させる。
３．顆粒を適切な粉砕装置に通す。
４．材料５を加えて３分間混ぜ、適当なプレス機で圧縮する。

実施例Ｂ－１
以下の組成のカプセルを製造する。

製造手順
１．材料１、２、及び３を適当なミキサーで３０分ほど混ぜる。
２．材料４と５を加えて３分ほど混ぜる。
３．適切なカプセルに充填する。

式（Ｉ）の化合物、ラクトース、及びコーンスターチを、先ずミキサー中で混合し、次いで粉砕機中で混合する。混合物をミキサーに戻し、そこにタルクを加えてよく混ぜ合わせる。この混合物は、機械によって適当なカプセル、例えば硬質ゼラチンカプセルに充填される。
実施例Ｂ－２

次の組成の軟質ゼラチンカプセルを製造する。

製造手順
式（Ｉ）の化合物を他の成分の温かい融解物に溶解し、混合物を適当なサイズの軟質ゼラチンカプセルに充填する。充填した軟質ゼラチンカプセルを、通常の手順に従って処理する。

実施例Ｃ
次の組成の坐剤を製造する。

製造手順
坐剤練剤をガラス又はスチール容器中で溶融し、充分に混合し、４５℃に冷却する。次いで、これに式（Ｉ）の微粉末化合物を加え、完全に分散するまで撹拌する。混合物を好適な大きさの坐剤型に注ぎ、冷えるまで放置し、その後、坐剤を型から取り出し、ろう紙又は金属箔で個々に包装する。

実施例Ｄ
以下の組成の注射液を製造する。

製造手順
式（Ｉ）の化合物を、ポリエチレングリコール４００と注射用水（一部）との混合物に溶解する。ｐＨは酢酸により５．０に調整する。残量の水を加えて、体積を１．０ｍＬに調整する。溶液をフィルタにかけ、適切な過量を用いてバイアルに充填し、滅菌する。

実施例Ｅ
次の組成のサシェ剤（ｓａｃｈｅｔ）を製造する。

製造手順
式（Ｉ）の化合物を、ラクトース、微結晶セルロース、及びカルボキシルメチルセルロースナトリウムと混合し、水中のポリビニルピロリドンの混合物で顆粒化する。顆粒にステアリン酸マグネシウム及び調味添加剤を混ぜ、サシェに充填する。

実施例
略号
ＤＣＭ＝ジクロロメタン；ＤＭＦ＝ジメチルホルムアミド；ＤＭＳＯ＝ジメチルスルホキシド；ＤＲＦ＝用量範囲設定；ＥＳＩ＝エレクトロスプレーイオン化；ＥｔＯＡｃ＝酢酸エチル；ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ＝液体クロマトグラフィ－ＭＳ／ＭＳ；ＭｅＯＨ＝メタノール；ＭＳ＝質量分析；ｒｔ＝室温；Ｐ－ｇｐ＝Ｐ－糖タンパク質；ＳＦＣ＝超臨界流体クロマトグラフィ。

参照化合物ＡＲ－２５、ＡＲ－３０及びＡＲ－３１を、それぞれ、国際公開第２０１２／１１８４９２号に開示されている実施例２５、実施例３０及び実施例３１の合成に従って調製した。
６－ヒドロキシ－３－メチル－キナゾリン－４－オン

２－アミノ－５－ヒドロキシ安息香酸（１０ｇ、６５．３ｍｍｏｌ、当量：１．０）及びＮ－メチルホルムアミド（３０ｇ、２９．９ｍＬ、５０３ｍｍｏｌ、当量：７．７）を１４５℃で２１時間４５分間加熱し、次いで、室温に冷却した。反応混合物を５０ｍＬのＨ_２Ｏで希釈し、室温で２０分間撹拌した。得られた沈殿物をフィルタにかけて収集した。淡褐色固体を２０ｍＬの水で３回洗浄した。固体をトルエンに溶解し、蒸発乾固させた（３回）。固体を高真空下、４０℃で一晩真空乾燥させて、標題化合物を淡褐色固体として得た（１０．３ｇ、収率８９％）。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：１７７．１［Ｍ＋Ｈ］^＋
３，６－ジフルオロ－２－（３－メチル－４－オキソ－キナゾリン－６－イル）オキシ－ベンゾニトリル

炭酸セシウム（３．２２ｇ、９．７９ｍｍｏｌ、当量：１．１５）を、６－ヒドロキシ－３－メチルキナゾリン－４－オン（１５００ｍｇ、８．５１ｍｍｏｌ、当量：１．０）を含むＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３５ｍＬ）の溶液に室温で加えた。混合物を室温で３０分間撹拌し、次いで、２，３，６－トリフルオロベンゾニトリル（１．４７ｇ、１．０８ｍＬ、９．３７ｍｍｏｌ、当量：１．１）を添加した。１時間後、反応物を氷上で冷却し、水（１２０ｍＬ）で希釈した。得られた固体をフィルタにかけて回収し、氷水（１００ｍＬ）及びヘプタン（１００ｍＬ）で洗浄し、吸引乾燥した。固体をトルエンに溶解し、蒸発乾固させ（３回）、次いで、真空中で一晩乾燥させて、標題化合物を淡褐色固体（２．５８ｇ、収率９７％）として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：３１４．１［Ｍ＋Ｈ］＋．
（３Ｒ）－３－フルオロピロリジン－１－スルホンアミド

（Ｒ）－３－フルオロピロリジン塩酸塩（１．８ｇ、１４．３ｍｍｏｌ、当量：１．２）を、ジオキサン（１０ｍＬ）中の硫酸ジアミド（１．１４８ｇ、１１．９ｍｍｏｌ、当量：１．０）及びトリエチルアミン（２．４２ｇ、３．３３ｍＬ、２３．９ｍｍｏｌ、当量：２）の溶液に添加した。反応物を１１５℃で１５．５時間撹拌し、室温に冷却し、真空中で濃縮した。残渣をＤＣＭで希釈し、シリカゲルで蒸発乾固させて、カラムに移した。フラッシュクロマトグラフィ（４０ｇシリカ、８０％ＥｔＯＡｃ）による精製により標題化合物を白色結晶性固体として得た（１．８２ｇ、収率９１％）。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：１６９．１［Ｍ＋Ｈ］^＋．
（３Ｓ）－３－フルオロピロリジン－１－スルホンアミド

トリエチルアミン（３０４ｍｇ、４１９μｌ、３．０１ｍｍｏｌ、当量：２．０）を、ジオキサン（１．３ｍＬ）中の硫酸ジアミド（１４６ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ、当量：１．０）及び（Ｓ）－３－フルオロピロリジン塩酸塩（２３４ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ、当量：１．２）の懸濁液に添加した。反応物を密閉管中１１５℃で１６時間３５分間撹拌し、次いで、真空中で濃縮した。残渣をＭｅＯＨで希釈し、シリカゲルで蒸発乾固させて、カラムに移した。フラッシュクロマトグラフィ（４０ｇシリカ、０～８％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）による精製で標題化合物を淡黄色固体として得た（１９３ｍｇ、収率７５％）。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：１６９．１［Ｍ＋Ｈ］^＋．
（３Ｒ）－Ｎ－［２－シアノ－４－フルオロ－３－（３－メチル－４－オキソ－キナゾリン－６－イル）オキシ－フェニル］－３－フルオロ－ピロリジン－１－スルホンアミド（実施例１）

（Ｒ）－３－フルオロピロリジン－１－スルホンアミド（１．２６ｇ、７．５１ｍｍｏｌ、当量：２．１）及び炭酸セシウム（２．５６ｇ、７．８７ｍｍｏｌ、当量：２．２）を、アルゴン雰囲気下、乾燥ＤＭＦ（１０．２ｍＬ）に懸濁した。反応混合物を５０℃で３０分間撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、３，６－ジフルオロ－２－（（３－メチル－４－オキソ－３，４－ジヒドロキナゾリン－６－イル）オキシ）ベンゾニトリル（１．１２ｇ、３．５８ｍｍｏｌ、当量：１．０）のＤＭＦ（２５．５ｍＬ）中の溶液を添加した。反応混合物を１００℃で１５時間撹拌し、次いで、真空中で濃縮した。残渣を飽和ＮＨ_４Ｃｌ（１００ｍＬ）及びＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）の水溶液に取った。相を分離し、水層を１００ｍＬのＥｔＯＡｃで２回更に抽出した。合わせた有機層を水（２００ｍＬ）及びブライン（２００ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、フィルタにかけ、真空中で濃縮した。水層をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬで３回）で逆抽出した。合わせた有機抽出物をブライン（２００ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、フィルタにかけて真空で濃縮した。残渣をＤＣＭ及びＭｅＯＨで希釈し、シリカ上に濃縮した。フラッシュクロマトグラフィ（１２０ｇ、０．５～２％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）による精製によって灰白色の固体が得られ、これを超音波処理しながら１：１ヘプタン／ＤＣＭ（２０ｍＬ）でトリチュエートし、次いで、真空中で乾燥させて、標題化合物を無色固体（１．０８７ｇ、収率６６％）として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：４２６．２［Ｍ＋Ｈ］^＋．キラルＳＦＣ：ＲＴ＝４．５９４分［ＣｈｉｒａｌｐａｋＩＣカラム、４．６×２５０ｍｍ、粒径５μｍ（Ｄａｉｃｅｌ）；８分間にわたり０．２％ＮＨＥｔ_２を含有する２０～４０％ＭｅＯＨの勾配；流量：２．５ｍＬ／分；１４０バールの背圧］。
（３Ｓ）－Ｎ－［２－シアノ－４－フルオロ－３－（３－メチル－４－オキソ－キナゾリン－６－イル）オキシ－フェニル］－３－フルオロ－ピロリジン－１－スルホンアミド（実施例２）

（Ｓ）－３－フルオロピロリジン－１－スルホンアミド（１８１ｍｇ、１．０８ｍｍｏｌ、当量：２．１）をＤＭＦ（１．６ｍｌ）に溶解した。室温で、炭酸セシウム（３６８ｍｇ、１．１３ｍｍｏｌ、当量：２．２）を添加し、反応混合物を５０℃で３０分間撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、３，６－ジフルオロ－２－（（３－メチル－４－オキソ－３，４－ジヒドロキナゾリン－６－イル）オキシ）ベンゾニトリル（１６０．８ｍｇ、５１３μｍｏｌ、当量：１．０）を含むＤＭＦ（４ｍＬ）の溶液を添加した。反応混合物を１０５℃で２時間５０分間撹拌し、次いで、真空中で濃縮した。残渣をＤＣＭに取り、飽和ＮＨ_４Ｃｌ水溶液で洗浄した。水層をＤＣＭで２回逆抽出した。合わせた有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、フィルタにかけて濃縮した。残渣（褐色油）をＤＣＭで希釈し、カラムに移した。フラッシュクロマトグラフィ（８０ｇ、ＤＣＭ中０～１００％ＥｔＯＡｃ）による精製によって固体が得られ、これをＳＦＣによって更に精製すると、標題化合物が淡黄色固体（１１９ｍｇ、収率５０％）として得られた。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：４２６．２［Ｍ＋Ｈ］^＋．キラルＳＦＣ：ＲＴ＝４．４１１分［ＣｈｉｒａｌｐａｋＩＣカラム、４．６×２５０ｍｍ、粒径５μｍ（Ｄａｉｃｅｌ）；８分間にわたり０．２％ＮＨＥｔ_２を含有する２０～４０％ＭｅＯＨの勾配；流量：２．５ｍＬ／分；１４０バールの背圧］。

本発明は、特に、式（Ｉ）

の新規化合物、又はその薬学的に許容される塩を提供する。

さらに、開発されたＢＲＡＦ阻害剤は、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ駆動性腫瘍においてＭＡＰＫシグナル伝達を抑制する予想外の「パラドキシカル」な能力を明らかにしたが、同じ阻害剤がＢＲＡＦ野生型（ＷＴ）モデルにおいてＭＡＰＫ刺激活性を示した（ＮＥｎｇｌＪＭｅｄ２０１２；３６６：２７１－２７３；及びＢｒｉｔｉｓｈＪｏｕｒｎａｌｏｆＣａｎｃｅｒｖｏｌｕｍｅ１１１，ｐａｇｅｓ６４０-６４５（２０１４））。

ベムラフェニブ、ダブラフェニブ又はエンコラフェニブのような阻害剤のＷＴＢＲＡＦ又はＲＡＦ１プロトマーへの結合は、ＲＡＦホモ及び／又はヘテロ二量体化、並びに新たに形成されたＲＡＦ二量体の膜会合を迅速に誘導する。二量体型コンフォメーションでは、１つのＲＡＦプロトマーが第２のＲＡＦプロトマーのコンフォメーション変化をアロステリックに誘導してキナーゼ活性状態をもたらし、重要なことに、阻害剤の結合にとって好ましくないコンフォメーションをもたらす。結果として、薬物処置によって誘導された二量体は、経路の過活性化を伴う未結合プロトマーによって操作される触媒作用によりＭＥＫリン酸化を促進する。

図１は、ＢＲＡＦ変異型細胞株Ａ３７５において実施例１によって誘導されたＰ－ＥＲＫ阻害曲線を開示している。図２は、ＢＲＡＦ変異型細胞株Ａ３７５において実施例２によって誘導されたＰ－ＥＲＫ阻害曲線を開示している。図３は、ＢＲＡＦ変異型細胞株Ａ３７５において参照化合物ＡＲ－２５によって誘導されたＰ－ＥＲＫ阻害曲線を開示している。図４は、ＷＴＢＲＡＦ細胞株ＨＣＴ－１１６において実施例１によって誘導されたＰ－ＥＲＫ活性化曲線を開示している。比較のため、対照化合物ダブラフェニブ（パラドックス誘導剤）及びＰＬＸ－８３９４（パラドックス遮断剤）による処置によって生成されたデータも示す。図５は、ＷＴＢＲＡＦ細胞株ＨＣＴ－１１６において実施例２によって誘導されたＰ－ＥＲＫ活性化曲線を開示している。比較のため、対照化合物ダブラフェニブ（パラドックス誘導剤）及びＰＬＸ－８３９４（パラドックス遮断剤）による処置によって生成されたデータも示す。図６は、ＷＴＢＲＡＦ細胞株ＨＣＴ－１１６において参照化合物ＡＲ－２５によって誘導されたＰ－ＥＲＫ活性化曲線を開示している。比較のため、対照化合物ダブラフェニブ（パラドックス誘導剤）及びＰＬＸ－８３９４（パラドックス遮断剤）による処置によって生成されたデータも示す。図７は、第１世代ＢＲＡＦ阻害剤によって誘導されるＭＡＰキナーゼ経路のパラドキシカル活性化を示す。ＢＲＡＦはＭＡＰキナーゼシグナル伝達経路の最初のノードの一部であり、変異型ＢＲＡＦは発がん性ドライバーである（左）。ＢＲＡＦＶ６００Ｅ／Ｋ変異腫瘍では、タンパク質が第１世代ＢＲＡＦ阻害剤によって阻害される状態である単量体としてＢＲＡＦシグナルが伝達される（中央）。第１世代のＢＲＡＦ阻害剤は、ＢＲＡＦＷＴホモ及び／又はヘテロ二量体化を促進する（上、右）。これに関連して、ＢＲＡＦ阻害剤によって占有されていないプロトマーは、阻害剤結合に好ましくないコンフォメーションを獲得する（中央、右）。第１世代のＢＲＡＦ阻害剤による治療の結果は、これに関連して、パラドキシカル（逆説的）に増加したＭＡＰＫ活性化及び結果として生じるＢＲＡＦＷＴ細胞の腫瘍増殖である（下、右）。図８は、化合物実施例１が１日１ｍｇ／ｋｇから始まる用量依存的な抗腫瘍活性を誘発し、強力な脳透過性媒介有効性を証明することを開示している。

「薬学的に許容される塩」という用語は、生物学的に又はその他望ましくないものではない、遊離塩基又は遊離酸の生物学的有効性及び特性を保持する式（Ｉ）の化合物の塩を指す。塩は塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸（特に塩酸）等の無機酸と、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、サリチル酸、Ｎ－アセチルシステイン等の有機酸で形成される。また、これらの塩は、遊離酸に無機塩基又は有機塩基を添加して調製してもよい。無機塩基から誘導される塩には、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム及びマグネシウム塩等が含まれるがこれらに限定されない。有機塩基から誘導される塩には、第１級、第２級及び第３級アミン、天然に存在する置換アミンを含む置換アミン、環状アミン及び塩基性イオン交換樹脂、例えばイソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、エタノールアミン、リジン、アルギニン、Ｎ－エチルピペリジン、ピペリジン、ポリイミン樹脂等の塩が含まれるがこれらに限定されない。式（Ｉ）の化合物の特に薬学的に許容される塩としては、塩酸塩、メタンスルホン酸塩、クエン酸塩等が挙げられる。

また、本発明の一実施形態は、本明細書に記載される式（Ｉ）による化合物又はその薬学的に許容される塩、特に本明細書に記載される式（Ｉ）による化合物、より具体的には本明細書に記載される式（Ｉａ）又は（Ｉｂ）の化合物である。

本発明はまた、式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容される塩に関し、薬学的に許容される塩は、塩酸塩、メタンスルホン酸塩及びクエン酸塩から選択され得る。

また、本発明の一実施形態は、式（Ｉａ）

による化合物である。

また、本発明の一実施形態は、式（Ｉｂ）

による化合物である。

本明細書に記載される式（Ｉａ）及び（Ｉｂ）の化合物を製造するための方法も本発明の目的である。

より具体的には、式（Ｉ）の化合物は、以下に示す方法、実施例に示す方法、又は類似の方法によって製造することができる。個々の反応工程のための適切な反応条件は、当業者に知られている。反応順序は、スキーム１に表示されているものに限定されないが、出発原料及びそれぞれの反応性に応じて、反応工程の順序を自由に変更することができる。出発材料は、市販されているか、又は以下に示す方法に類似する方法、本明細書に引用された参考文献若しくは実施例に記載されている方法、又は当技術分野で知られている方法によって調製することができる。
スキーム１

したがって、本発明はまた、本発明による化合物の調製のための方法であって、式（Ｂ１）

の化合物と、式（Ｂ２）

の化合物との、塩基の存在下での反応を含む、方法に関する。

反応を溶媒中で簡便に行うことができる。溶媒は、例えばＤＭＦであり得る。

反応を塩基の存在下で簡便に行うことができる。塩基は、例えば炭酸セシウムであり得る。

反応のための簡便な条件は、約３０℃～約１５０℃、特に約５０℃～約１３０℃、より具体的には約７０℃～約１２０℃であり得る。簡便な条件は、およそ１００℃で、約１時間～約４８時間、特に約２時間～約２０時間である。

本発明はまた、本発明の方法に従って製造される場合の本発明による化合物に関する。

本発明はまた、特に、以下のものに関する：
治療活性物質として使用するための、本明細書に記載される式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩；
本明細書に記載される式（Ｉ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩と、治療的に不活性な担体と、を含む、薬学的組成物；
がんの処置又は予防に使用するための、本明細書に記載される式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩；
甲状腺がん、結腸直腸がん、脳がん、黒色腫又は非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）の処置又は予防に使用するための、本明細書に記載される式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩；
甲状腺がん、結腸直腸がん、脳がん、黒色腫又はＮＳＣＬＣを処置又は予防するための、本明細書に記載される式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩の使用；
甲状腺がん、結腸直腸がん、脳がん、黒色腫又はＮＳＣＬＣを治療又は予防するための医薬を調製するための、本明細書に記載される式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩の使用；
がんを処置するための方法であって、それを必要とする患者に、有効量の本明細書中に記載の式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法；及び
甲状腺がん、結腸直腸がん、脳がん、黒色腫又はＮＳＣＬＣを処置又は予防するための方法であって、それを必要とする患者に、有効量の本明細書に記載される式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法。

本発明の特定の実施形態は、がん、特にＢＲＡＦ変異型駆動性がん、より具体的には甲状腺がん、結腸直腸がん、脳がん、黒色腫又はＮＳＣＬＣの治療的及び／又は予防的処置に使用するための、本明細書に記載される式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩に関する。

本発明の特定の実施形態は、がん、特にＢＲＡＦ変異型駆動性がん、より具体的には甲状腺がん、結腸直腸がん、脳がん、黒色腫又はＮＳＣＬＣの治療的及び／又は予防的処置のための医薬を製造するための、本明細書に記載される式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩に関する。

本発明のある特定の実施形態は、本明細書に記載の式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される賦形剤を含む、薬学的組成物に関する。

本発明の特定の実施形態は、がん、特にＢＲＡＦ変異型駆動性がん、より具体的には甲状腺がん、結腸直腸がん、脳がん、黒色腫又は非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）の治療的及び／又は予防的処置のための方法であって、それを必要とする患者に、有効量の本明細書に記載される式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩を投与することによる、方法に関する。

本発明の特定の実施形態は、ＢＲＡＦ変異型駆動性がん、特に甲状腺がん、結腸直腸がん、脳がん、黒色腫又はＮＳＣＬＣを有する患者の治療的及び／又は予防的処置における医薬として使用するための本明細書に記載される式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩であって、治療的及び／又は予防的処置が、前記患者におけるＢＲＡＦ変異状態を判定すること、次いで、本明細書に記載の式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩を前記患者に投与することを含む、本明細書に記載される式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩に関する。

本発明の特定の実施形態は、脳転移の治療的及び／又は予防的処置における医薬として使用するための、本明細書に記載の式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩に関する。

本発明の特定の実施形態は、少なくとも１つの置換基が少なくとも１つの放射性同位体を含む、本明細書に記載の式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩に関する。放射性同位体の特定の例は、^２Ｈ、^３Ｈ、^１３Ｃ、^１４Ｃ、及び^１８Ｆである。

所望であれば、本発明の化合物のラセミ混合物を分離して、個々の鏡像異性体を単離することができる。分離は、化合物のラセミ混合物を鏡像異性的に純粋な化合物にカップリングさせてジアステレオ異性混合物を形成し、続いて、分別再結晶化又はクロマトグラフィーのような標準的方法によって個々のジアステレオマーを分離するような、当該技術分野で公知の方法で行うことができる。

一実施形態では、光学的に純粋な鏡像異性体が提供される場合、光学的に純粋な鏡像異性体とは、化合物が所望の異性体を９０重量％超、特に所望の異性体を９５重量％超、又はより具体的には所望の異性体を９９重量％超含有することを意味し、該重量パーセントは、化合物の異性体の全重量を基準とする。キラル的に純粋な又はキラル濃縮された化合物は、キラル選択的合成によって、又は鏡像異性体の分離によって調製することができる。鏡像異性体の分離は、最終生成物で、又は代替的に適切な中間体に対して行うことができる。

本発明の別の実施形態は、本発明の化合物と、治療的に不活性な担体、希釈剤又は賦形剤とを含有する薬学的組成物又は医薬、並びにこのような組成物及び医薬を調製するために本発明の化合物を使用する方法を提供する。一例では、式（Ｉ）の化合物は、生理学的に許容される担体、すなわち、生薬の投与形態に使用される用量及び濃度でレシピエントに対して毒性でない担体と、適切なｐＨと所望の純度で、周囲温度で混合することによって製剤化されてもよい。製剤のｐＨは、特定の用途及び化合物の濃度に主に依存するが、好ましくは約３～約８の範囲である。一例では、式（Ｉ）の化合物は、ｐＨ５の酢酸緩衝剤中で製剤化される。別の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は無菌である。化合物は、例えば、固体若しくは非晶質組成物として、凍結乾燥製剤として、又は水溶液として保管され得る。

組成物は、良質な医学のための原則と一致した様式で製剤化、投薬、及び投与される。これに関連して考慮すべき要因としては、治療される特定の障害、治療される特定の哺乳動物、個々の患者の臨床状態、障害の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与スケジュール、及び医療従事者に既知である他の要因が挙げられる。

また、本発明の一実施形態は、記載される方法のいずれか１つに従って製造された場合の、本明細書に記載の式（Ｉ）の化合物である。

Ａ３７５又はＨＣＴ１１６細胞におけるＰ－ＥＲＫ決定のためのＨＴＲＦアッセイ
Ａ３７５は、Ｖ６００Ｅ変異ＢＲＡＦを発現する細胞がんモデルであり、ＨＣＴ１１６は、ＷＴＢＲＡＦを発現する細胞がんモデルである。第１世代のＢＲＡＦ阻害剤、例えばダブラフェニブは、Ｖ６００Ｅ変異ＢＲＡＦ細胞（例えばＡ３７５等）の増殖を阻害する一方、ＷＴＢＲＡＦ細胞（例えば、ＨＣＴ１１６等）の増殖を活性化するという点で、腫瘍細胞に対するパラドキシカルな効果を誘導する。ＥＲＫ１、２リン酸化（ＭＡＰＫ経路のリン酸化カスケードの末端メンバー）は、ＭＡＰＫ経路の活性化状態の主な読み出しとして以後報告されている。アッセイの前に、Ａ３７５及びＨＣＴ１１６細胞株を、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を補充したＤＭＥＭ無フェノールレッド培地中で維持する。化合物処置の後、Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４においてリン酸化されたときのＥＲＫタンパク質上の言及されたキット（Ｃｉｓｂｉｏカタログ番号６４ＡＥＲＰＥＨ）において提供される２つの抗体の選択的結合によって誘導されるＦＲＥＴ蛍光シグナルを測定することによって、Ｐ－ＥＲＫレベルを決定する。簡潔に言えば、１２μｌ培地／ウェル中の８０００細胞／ウェルを３８４ウェルプレートに播種し、インキュベーター内に一晩放置し（５％ＣＯ２加湿雰囲気下、３７℃で）、翌日、プレートを以下の最終薬物濃度で試験化合物、ダブラフェニブ及びＰＬＸ８３９４（後者の２つは対照として）を用いて二連で処置する：１０μＭ－３μＭ－１μＭ－０．３μＭ－０．１μＭ－０．０３μＭ－０．０１μＭ－０．００３μＭ－０．００１μＭ、全てのウェルをＤＭＳＯ正規化に供し、薬物インキュベーションを１時間行う。次いで、キットと共に供給された４×溶解緩衝液４μｌをウェルに添加し、次いで、プレートを３０秒間（３００ｒｃｆ）遠心分離し、プレートシェーカー上で室温で１時間インキュベートする。

式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩は、医薬として（例えば、医薬製剤の形態で）使用することができる。本発明の医薬製剤は、経口投与（例えば、錠剤、コーティング錠剤、糖衣錠、硬質及び軟質ゼラチンカプセル、溶液、乳剤又は懸濁液の形態）等の内服投与、経鼻投与（例えば、鼻スプレーの形態）、直腸投与（例えば、坐剤の形態）、又は眼局所投与（例えば、溶液、軟膏、ゲル又は水溶性高分子挿入剤の形態）が可能である。しかしながら、投与は、筋肉内、静脈内、眼内等の非経口的に（例えば、滅菌注射液の形態で）行うこともできる。

式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩は、錠剤、コーティング錠、糖衣錠、硬質ゼラチンカプセル、注射液又は外用剤の製造のための薬学的に不活性な、無機又は有機アジュバントを用いて加工することができる。ラクトース、コーンスターチ又はその誘導体、タルク、ステアリン酸又はその塩等を、例えば、錠剤、ドラゼ及び硬質ゼラチンカプセル用のそのようなアジュバントとして、使用することができる。

薬学的組成物
式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩を、例えば医薬製剤の形態で、治療活性物質として使用することができる。医薬製剤は、経口、例えば、錠剤、コーティング錠、糖衣錠、硬質ゼラチンカプセル及び軟質ゼラチンカプセル、溶液、エマルジョン、又は懸濁液の形態で投与することができる。しかしながら、投与はまた、例えば坐剤の形態で直腸に、又は、例えば注射液の形態で非経口的に行うこともできる。

式（Ｉ）の化合物及びその薬学的に許容される塩を、医薬製剤の製造のために、薬学的に不活性な無機又は有機担体と共に加工することができる。ラクトース、コーンスターチ若しくはその誘導体、タルク、及びステアリン酸又はその塩等は、例えば、錠剤、コーティング錠、糖衣錠、及び硬質ゼラチンカプセルの担体として使用することができる。軟質ゼラチンカプセルに好適な担体は、例えば、植物油、ワックス、脂肪、半固体及び液体ポリオール等である。しかしながら、活性物質の性質にもよるが、軟質ゼラチンカプセルの場合には通常、担体は必要とされない。溶液及びシロップ剤の製造に適した担体材料は例えば、水、ポリオール、グリセロール、植物油等である。坐剤に適した担体は、例えば、天然油又は硬化した油、ワックス、油脂、半液体又は液体ポリオール等である。

さらに、医薬製剤は、防腐剤、可溶化剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、甘味剤、着色剤、着香剤、浸透圧を変化させるための塩、緩衝液、マスキング剤、又は酸化防止剤等の、薬学的に許容される補助物質を含むことができる。本発明の医薬製剤は更に、他の治療上価値のある物質を含むことができる。

式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩、及び治療的に不活性な担体を含有する医薬もまた、本発明により提供され、その製造のための方法は、式（Ｉ）の１つ以上の化合物及び／又はその薬学的に許容される塩、並びに所望により、１つ以上の他の治療上有用な物質を、１つ以上の治療的に不活性な担体と共に生薬投与形態とすることを含む。

投与量は、広範囲内で変化させることができ、当然、それぞれの具体的な症例において個々の要件に対して調整されなければならない。経口投与の場合、成人の投与量は、一般式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩の対応する量で１日あたり約０．０１ｍｇ～約１０００ｍｇまで変化させることができる。１日投与量は、単回用量又は分割用量で投与することができ、更に、必要であると判明した場合、上限を超えることもできる。

実施例Ａ
以下の組成の錠剤は、通常の方法で製造される。

実施例Ｂ－１
以下の組成のカプセルを製造する。

次の組成の軟質ゼラチンカプセルを製造する。

実施例Ｃ
次の組成の坐剤を製造する。

実施例Ｄ
以下の組成の注射液を製造する。

製造手順
式（Ｉ）の化合物を、ポリエチレングリコール４００と注射用水（一部）との混合物に溶解する。ｐＨは酢酸により５．０に調整する。残量の水を加えて、体積を１．０ｍＬに調整する。溶液を濾過し、適切な過量を用いてバイアルに充填し、滅菌する。

実施例
略号
ＤＣＭ＝ジクロロメタン；ＤＭＦ＝ジメチルホルムアミド；ＤＭＳＯ＝ジメチルスルホキシド；ＤＲＦ＝用量範囲設定；ＥＳＩ＝エレクトロスプレーイオン化；ＥｔＯＡｃ＝酢酸エチル；ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ＝液体クロマトグラフィー－ＭＳ／ＭＳ；ＭｅＯＨ＝メタノール；ＭＳ＝質量分析；ｒｔ＝室温；Ｐ－ｇｐ＝Ｐ－糖タンパク質；ＳＦＣ＝超臨界流体クロマトグラフィー。

２－アミノ－５－ヒドロキシ安息香酸（１０ｇ、６５．３ｍｍｏｌ、当量：１．０）及びＮ－メチルホルムアミド（３０ｇ、２９．９ｍＬ、５０３ｍｍｏｌ、当量：７．７）を１４５℃で２１時間４５分間加熱し、次いで、室温に冷却した。反応混合物を５０ｍＬのＨ_２Ｏで希釈し、室温で２０分間撹拌した。得られた沈殿物をろ取した。淡褐色固体を２０ｍＬの水で３回洗浄した。固体をトルエンに溶解し、エバポレートした（３回）。固体を高真空下、４０℃で一晩減圧乾燥させて、標題化合物を淡褐色固体として得た（１０．３ｇ、収率８９％）。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：１７７．１［Ｍ＋Ｈ］^＋
３，６－ジフルオロ－２－（３－メチル－４－オキソ－キナゾリン－６－イル）オキシ－ベンゾニトリル

炭酸セシウム（３．２２ｇ、９．７９ｍｍｏｌ、当量：１．１５）を、６－ヒドロキシ－３－メチルキナゾリン－４－オン（１５００ｍｇ、８．５１ｍｍｏｌ、当量：１．０）を含むＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３５ｍＬ）の溶液に室温で加えた。混合物を室温で３０分間撹拌し、次いで、２，３，６－トリフルオロベンゾニトリル（１．４７ｇ、１．０８ｍＬ、９．３７ｍｍｏｌ、当量：１．１）を添加した。１時間後、反応物を氷上で冷却し、水（１２０ｍＬ）で希釈した。得られた固体をろ取し、氷水（１００ｍＬ）及びヘプタン（１００ｍＬ）で洗浄し、吸引乾燥した。固体をトルエンに溶解し、エバポレートした（３回）、次いで、一晩減圧乾燥させて、標題化合物を淡褐色固体（２．５８ｇ、収率９７％）として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：３１４．１［Ｍ＋Ｈ］^＋。
（３Ｒ）－３－フルオロピロリジン－１－スルホンアミド

（Ｒ）－３－フルオロピロリジン塩酸塩（１．８ｇ、１４．３ｍｍｏｌ、当量：１．２）を、ジオキサン（１０ｍＬ）中の硫酸ジアミド（１．１４８ｇ、１１．９ｍｍｏｌ、当量：１．０）及びトリエチルアミン（２．４２ｇ、３．３３ｍＬ、２３．９ｍｍｏｌ、当量：２）の溶液に添加した。反応物を１１５℃で１５．５時間撹拌し、室温に冷却し、減圧濃縮した。残渣をＤＣＭで希釈し、シリカゲルと共にエバポレートして、カラムに移した。フラッシュクロマトグラフィー（４０ｇシリカ、８０％ＥｔＯＡｃ）による精製により標題化合物を白色結晶性固体として得た（１．８２ｇ、収率９１％）。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：１６９．１［Ｍ＋Ｈ］^＋。
（３Ｓ）－３－フルオロピロリジン－１－スルホンアミド

トリエチルアミン（３０４ｍｇ、４１９μｌ、３．０１ｍｍｏｌ、当量：２．０）を、ジオキサン（１．３ｍＬ）中の硫酸ジアミド（１４６ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ、当量：１．０）及び（Ｓ）－３－フルオロピロリジン塩酸塩（２３４ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ、当量：１．２）の懸濁液に添加した。反応物を密閉管中１１５℃で１６時間３５分間撹拌し、次いで、減圧濃縮した。残渣をＭｅＯＨで希釈し、シリカゲルと共にエバポレートして、カラムに移した。フラッシュクロマトグラフィー（４０ｇシリカ、０～８％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）による精製で標題化合物を淡黄色固体として得た（１９３ｍｇ、収率７５％）。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：１６９．１［Ｍ＋Ｈ］^＋。
（３Ｒ）－Ｎ－［２－シアノ－４－フルオロ－３－（３－メチル－４－オキソ－キナゾリン－６－イル）オキシ－フェニル］－３－フルオロ－ピロリジン－１－スルホンアミド（実施例１）

（Ｒ）－３－フルオロピロリジン－１－スルホンアミド（１．２６ｇ、７．５１ｍｍｏｌ、当量：２．１）及び炭酸セシウム（２．５６ｇ、７．８７ｍｍｏｌ、当量：２．２）を、アルゴン雰囲気下、乾燥ＤＭＦ（１０．２ｍＬ）に懸濁した。反応混合物を５０℃で３０分間撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、３，６－ジフルオロ－２－（（３－メチル－４－オキソ－３，４－ジヒドロキナゾリン－６－イル）オキシ）ベンゾニトリル（１．１２ｇ、３．５８ｍｍｏｌ、当量：１．０）のＤＭＦ（２５．５ｍＬ）中の溶液を添加した。反応混合物を１００℃で１５時間撹拌し、次いで、減圧濃縮した。残渣を飽和ＮＨ_４Ｃｌ（１００ｍＬ）及びＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）の水溶液に取った。相を分離し、水層を１００ｍＬのＥｔＯＡｃで２回更に抽出した。合わせた有機層を水（２００ｍＬ）及びブライン（２００ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、減圧濃縮した。水層をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬで３回）で逆抽出した。合わせた有機抽出物をブライン（２００ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、減圧濃縮した。残渣をＤＣＭ及びＭｅＯＨで希釈し、シリカ上に濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（１２０ｇ、０．５～２％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）による精製によって灰白色の固体が得られ、これを超音波処理しながら１：１ヘプタン／ＤＣＭ（２０ｍＬ）で粉砕し、次いで、減圧乾燥させて、標題化合物を無色固体（１．０８７ｇ、収率６６％）として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：４２６．２［Ｍ＋Ｈ］^＋。キラルＳＦＣ：ＲＴ＝４．５９４分［ＣｈｉｒａｌｐａｋＩＣカラム、４．６×２５０ｍｍ、粒径５μｍ（Ｄａｉｃｅｌ）；８分間にわたり０．２％ＮＨＥｔ_２を含有する２０～４０％ＭｅＯＨの勾配；流量：２．５ｍＬ／分；１４０バールの背圧］。
（３Ｓ）－Ｎ－［２－シアノ－４－フルオロ－３－（３－メチル－４－オキソ－キナゾリン－６－イル）オキシ－フェニル］－３－フルオロ－ピロリジン－１－スルホンアミド（実施例２）

（Ｓ）－３－フルオロピロリジン－１－スルホンアミド（１８１ｍｇ、１．０８ｍｍｏｌ、当量：２．１）をＤＭＦ（１．６ｍｌ）に溶解した。室温で、炭酸セシウム（３６８ｍｇ、１．１３ｍｍｏｌ、当量：２．２）を添加し、反応混合物を５０℃で３０分間撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、３，６－ジフルオロ－２－（（３－メチル－４－オキソ－３，４－ジヒドロキナゾリン－６－イル）オキシ）ベンゾニトリル（１６０．８ｍｇ、５１３μｍｏｌ、当量：１．０）を含むＤＭＦ（４ｍＬ）の溶液を添加した。反応混合物を１０５℃で２時間５０分間撹拌し、次いで、減圧濃縮した。残渣をＤＣＭに取り、飽和ＮＨ_４Ｃｌ水溶液で洗浄した。水層をＤＣＭで２回逆抽出した。合わせた有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣（褐色油）をＤＣＭで希釈し、カラムに移した。フラッシュクロマトグラフィー（８０ｇ、ＤＣＭ中０～１００％ＥｔＯＡｃ）による精製によって固体が得られ、これをＳＦＣによって更に精製すると、標題化合物が淡黄色固体（１１９ｍｇ、収率５０％）として得られた。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：４２６．２［Ｍ＋Ｈ］^＋。キラルＳＦＣ：ＲＴ＝４．４１１分［ＣｈｉｒａｌｐａｋＩＣカラム、４．６×２５０ｍｍ、粒径５μｍ（Ｄａｉｃｅｌ）；８分間にわたり０．２％ＮＨＥｔ_２を含有する２０～４０％ＭｅＯＨの勾配；流量：２．５ｍＬ／分；１４０バールの背圧］。

Claims

式（Ｉ）

の化合物又はその薬学的に許容され得る塩。
前記化合物が、式（Ｉ）の化合物である、請求項１に記載の化合物。
前記化合物が、式（Ｉａ）

の化合物である、請求項１又は２に記載の化合物。
前記化合物が、式（Ｉｂ）

の化合物である、請求項１又は２に記載の化合物。
請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物の調製のためのプロセスであって、式（Ｂ１）

の化合物と、式（Ｂ２）

の化合物との、塩基の存在下での反応を含む、プロセス。
請求項５に記載のプロセスに従って製造された場合の、請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物。
治療活性物質としての使用のための、請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物。
請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物と、治療的に不活性な担体と、を含む、薬学的組成物。
がんの処置又は予防に使用するための、請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物。
甲状腺がん、結腸直腸がん、脳がん、黒色腫又はＮＳＣＬＣの処置又は予防に使用するための、請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物。
甲状腺がん、結腸直腸がん、脳がん、黒色腫又はＮＳＣＬＣの処置又は予防のための、請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物の使用。
甲状腺がん、結腸直腸がん、脳がん、黒色腫又はＮＳＣＬＣの処置又は予防のための医薬の調製のための、請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物の使用。
有効量の、請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物を、それを必要とする患者に投与することを含む、がんの処置方法。
有効量の、請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物を、甲状腺がん、結腸直腸がん、脳がん、それを必要とする患者に投与することを含む、黒色腫又はＮＳＣＬＣの処置方法。
本明細書で上述した発明。