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JP2021512090A - 免疫細胞に薬剤を送達するための組成物及び方法 - Google Patents

免疫細胞に薬剤を送達するための組成物及び方法 Download PDF

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Abstract

本開示は、免疫細胞、具体的にはＴ細胞、ならびにＢ細胞、樹状細胞、及び単球への薬剤（例えば、核酸（治療的及び／または予防的ＲＮＡなど））の送達増進を可能にする免疫細胞送達脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）組成物を特徴とする。ＬＮＰは、有効量の免疫細胞送達増強脂質を含み、その結果、免疫細胞送達増強薬剤を含まないＬＮＰと比較して、免疫細胞送達ＬＮＰによる薬剤の送達が増進する。薬剤の送達（例えば、核酸の送達）、タンパク質発現、免疫細胞活性の調節、及び免疫応答の調節のための免疫細胞送達ＬＮＰの使用方法も開示される。【選択図】図４２

Description

関連出願
本出願は、２０１８年１月３０日出願の米国仮出願第６２／６２３，９２２号、２０１８年９月１９日出願の米国仮出願第６２／７３３，６０９号、及び２０１８年１０月１２日出願の米国仮出願第６２／７４４，８２５号の利益を主張する。これらの参照出願の内容はすべて、この参照によって本明細書に組み込まれる。
小分子薬、タンパク質、及び核酸などの生物活性物質の効果的な標的化送達は、継続的な医学的な課題を表している。特に、細胞への核酸の送達は、そのような種の相対的な不安定性及び低い細胞透過性により困難になる。したがって、細胞への核酸などの治療薬及び／または予防薬の送達を促進するための方法及び組成物を開発する必要性が存在する。
脂質含有ナノ粒子組成物、リポソーム、及びリポプレックスは、小分子薬、タンパク質、及び核酸などの生物活性物質の細胞及び／または細胞内区画への輸送媒体として有効であることが証明されている。そのような組成物は、一般に、「カチオン性」及び／またはアミノ（イオン化可能な）脂質、リン脂質、及び／または多価不飽和脂質（ヘルパー脂質）、構造脂質（例えば、ステロール）、及び／またはポリエチレングリコール含有脂質（ＰＥＧ脂質）を１つ以上含む。最適には、脂質ナノ粒子組成物は、ｉ）アミノ（イオン化可能な）脂質、２）リン脂質、３）構造脂質またはその混合物、４）ＰＥＧ脂質、及び５）薬剤をそれぞれ含む。カチオン性及び／またはイオン化可能な脂質には、例えば、プロトン化が容易に可能なアミン含有脂質が含まれる。そのような脂質含有ナノ粒子組成物は様々なものが示されているものの、安全性及び効力を維持しながら所望の細胞集団に到達させるための有効な送達媒体は未だ足りていない。
患者の免疫系を刺激することが、がんに対する有効な治療となり得ることが臨床試験によって示されている。一方、全身性の免疫刺激は、自己免疫型の病態及び／または毒性と関連することが多い。免疫細胞集団への免疫調節剤の送達を制御することによって免疫応答を効率的に調節する能力があれば、現在の治療によって得られるものを超えて安全性及び効力の両方が改善されることになる。しかしながら、トランスフェクションが困難であることが知られている生物活性物質（小分子薬、タンパク質、及び核酸など）を確実に免疫細胞に送達することが可能な送達系が不足していることによって、免疫系を調節しようとする試みが阻まれている。核酸分子をｉｎ ｖｉｖｏで安全かつ効率的に免疫細胞に送達することもまた、依然として達成困難である。さらに、可溶性タンパク質（例えば、サイトカイン及び抗体）を用いる現在の免疫調節技術は、細胞内タンパク質もしくは膜貫通型タンパク質の発現誘導に有効ではないか、または内在性タンパク質の発現低減に有効ではない。核酸分子をｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏで効率的に免疫細胞に送達する能力があれば、新たな免疫療法が可能となるであろう。
免疫細胞（リンパ球または骨髄系細胞など）への薬剤の送達を増進する脂質ベースの改良型組成物（免疫細胞送達脂質ナノ粒子（ＬＮＰ））、ならびにその使用が本明細書で提供される。一実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞（例えば、ＣＤ４＋及び／またはＣＤ８＋Ｔ細胞、ナイーブ細胞、エフェクター細胞、及び／またはメモリー細胞）、樹状細胞、マクロファージ、単球、ＮＫ細胞（未熟ＮＫ細胞及び活性化ＮＫ細胞を含む）、ＮＫ Ｔ細胞、及び／またはＢ細胞（形質細胞を含む）である。好ましくは、免疫細胞は、ヒトまたは霊長類の免疫細胞である。
いくつかの態様では、免疫細胞送達ＬＮＰを使用することによって、免疫細胞への送達がｉｎ ｖｉｔｒｏで増進する一方で、他の態様では、免疫細胞への送達がｉｎ ｖｉｖｏで増進する。ｉｎ ｖｉｖｏでの投与が行われると、一実施形態では、免疫細胞送達ＬＮＰは、対照ＬＮＰと比較すると脾臓及び骨髄への薬剤の送達増進をもたらす。いくつかの態様では、免疫細胞（例えば、ヒト免疫細胞）とＬＮＰとの接触はｉｎ ｖｉｔｒｏで行われる。いくつかの態様では、免疫細胞とＬＮＰとの接触は、ＬＮＰを対象（例えば、ヒト対象）に投与することによってｉｎ ｖｉｖｏで行われる。一実施形態では、対象は、免疫細胞におけるタンパク質の発現または活性を調節することで恩恵が得られると想定される者である。いくつかの態様では、ＬＮＰは、静脈内投与される。いくつかの態様では、ＬＮＰは、筋肉内投与される。いくつかの態様では、ＬＮＰは、皮下、節内、及び腫瘍内からなる群から選択される経路によって投与される。
免疫細胞送達ＬＮＰによって送達されるべき薬剤は、免疫細胞に送達することが有益であると想定される分子を含み得る。一実施形態では、薬剤は、核酸分子を含むか、または核酸分子からなり得る。いくつかの態様では、核酸分子は、ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ＲＮＡｉ、ｄｓＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９、ｓｓＤＮＡ、及びＤＮＡからなる群から選択される。いくつかの態様では、核酸分子は、ショートマー、アンタゴｍｉｒ、アンチセンス、リボザイム、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、非対称干渉ＲＮＡ（ａｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ダイサー基質ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、及びそれらの混合物からなる群から選択されるＲＮＡである。いくつかの実施形態では、核酸分子は、ｓｉＲＮＡ分子である。いくつかの実施形態では、核酸分子は、ｍｉＲである。いくつかの実施形態では、核酸分子は、アンタゴｍｉｒである。いくつかの態様では、核酸分子は、ＤＮＡである。いくつかの態様では、核酸分子は、ｍＲＮＡである。
したがって、一態様では、本開示は、免疫細胞送達脂質ナノ粒子に関し、この脂質ナノ粒子は、
（ｉ）イオン化可能な脂質、
（ｉｉ）ステロールまたは他の構造脂質、
（ｉｉｉ）非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質、
（ｉｖ）免疫細胞に送達するための薬剤、及び
（ｖ）任意選択のＰＥＧ脂質
を含み、
（ｉ）イオン化可能な脂質または（ｉｉ）ステロールもしくは他の構造脂質、のうちの１つ以上は、免疫細胞への脂質ナノ粒子の送達を増進する上で有効な量で免疫細胞送達増強脂質を含む。
別の実施形態では、本開示は、免疫細胞送達脂質ナノ粒子に関し、この脂質ナノ粒子は、
（ｉ）イオン化可能な脂質、
（ｉｉ）ステロールまたは他の構造脂質、
（ｉｉｉ）非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質、
（ｉｖ）ＰＥＧ脂質、及び
（ｖ）目的タンパク質をコードするｍＲＮＡを含む薬剤
を含み、
（ｉ）イオン化可能な脂質または（ｉｉ）ステロールもしくは他の構造脂質、のうちの１つ以上は、免疫細胞への脂質ナノ粒子の送達を増進する上で有効な量で免疫細胞送達増強脂質を含む。
別の実施形態では、本開示は、免疫細胞送達脂質ナノ粒子に関し、この脂質ナノ粒子は、
（ｉ）イオン化可能な脂質、
（ｉｉ）ステロールまたは他の構造脂質、
（ｉｉｉ）非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質、
（ｉｖ）免疫細胞に送達するための薬剤、及び
（ｖ）任意選択のＰＥＧ脂質
を含み、
（ｉ）イオン化可能な脂質、または（ｉｉ）ステロールもしくは他の構造脂質、または（ｉｉｉ）非カチオン性ヘルパー脂質もしくはリン脂質、または（ｖ）ＰＥＧ脂質、のうちの１つ以上は、Ｃ１ｑに結合し、及び／またはＣ１ｑ結合脂質を含まない対照脂質ナノ粒子と比較してＣ１ｑへのＬＮＰの結合を促進する（例えば、増加させる、刺激する、増進する）Ｃ１ｑ結合脂質である。
別の態様では、本開示は、免疫細胞に薬剤を送達する方法に関し、この方法は、免疫細胞を免疫細胞送達脂質ナノ粒子と接触させることを含み、この脂質ナノ粒子は、
（ｉ）イオン化可能な脂質、
（ｉｉ）ステロールまたは他の構造脂質、
（ｉｉｉ）非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質、
（ｉｖ）免疫細胞に送達するための薬剤、及び
（ｖ）任意選択のＰＥＧ脂質
を含み、
（ｉ）イオン化可能な脂質または（ｉｉ）ステロールもしくは他の構造脂質、のうちの１つ以上は、免疫細胞への脂質ナノ粒子の送達を増進する上で有効な量で免疫細胞送達増強脂質を含み、その結果、薬剤は、免疫細胞に送達される。
別の態様では、本開示は、免疫細胞中または免疫細胞上での目的タンパク質の発現を誘導する方法に関し、この方法は、免疫細胞を免疫細胞送達脂質ナノ粒子と接触させることを含み、この脂質ナノ粒子は、
（ｉ）イオン化可能な脂質、
（ｉｉ）ステロールまたは他の構造脂質、
（ｉｉｉ）非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質、
（ｉｖ）目的タンパク質をコードする核酸を含む薬剤、及び
（ｖ）任意選択のＰＥＧ脂質
を含み、
（ｉ）イオン化可能な脂質または（ｉｉ）ステロールもしくは他の構造脂質、のうちの１つ以上は、免疫細胞への脂質ナノ粒子の送達を増進する上で有効な量で免疫細胞送達増強脂質を含み、その結果、目的タンパク質の発現が免疫細胞中または免疫細胞上で誘導される。
別の態様では、本開示は、Ｔ細胞の活性化または活性を調節する方法に関し、この方法は、Ｔ細胞を免疫細胞送達脂質ナノ粒子と接触させることを含み、この脂質ナノ粒子は、
（ｉ）イオン化可能な脂質、
（ｉｉ）ステロールまたは他の構造脂質、
（ｉｉｉ）非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質、
（ｉｖ）Ｔ細胞の活性化または活性を調節する核酸を含む薬剤、及び
（ｖ）任意選択のＰＥＧ脂質
を含み、
（ｉ）イオン化可能な脂質または（ｉｉ）ステロールもしくは他の構造脂質、のうちの１つ以上は、Ｔ細胞への脂質ナノ粒子の送達を増進する上で有効な量で免疫細胞送達増強脂質を含み、その結果、Ｔ細胞の活性化または活性が調節される。
別の態様では、本開示は、タンパク質に対する免疫応答を亢進させる方法に関し、この方法は、免疫細胞を免疫細胞送達脂質ナノ粒子と接触させることを含み、この脂質ナノ粒子は、
（ｉ）イオン化可能な脂質、
（ｉｉ）ステロールまたは他の構造脂質、
（ｉｉｉ）非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質、
（ｉｖ）核酸分子を含む薬剤、及び
（ｖ）任意選択のＰＥＧ脂質
を含み、
（ｉ）イオン化可能な脂質または（ｉｉ）ステロールもしくは他の構造脂質、のうちの１つ以上は、免疫細胞への脂質ナノ粒子の送達を増進する上で有効な量で免疫細胞送達増強脂質を含み、その結果、タンパク質に対する免疫応答が亢進する。
別の態様では、本開示は、がん抗原に対するＴ細胞応答を亢進させる方法に関し、この方法は、Ｔ細胞を免疫細胞送達脂質ナノ粒子と接触させることを含み、この脂質ナノ粒子は、
（ｉ）イオン化可能な脂質、
（ｉｉ）ステロールまたは他の構造脂質、
（ｉｉｉ）非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質、
（ｉｖ）がん抗原に結合するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードするｍＲＮＡを含む薬剤、及び
（ｖ）任意選択のＰＥＧ脂質
を含み、
（ｉ）イオン化可能な脂質または（ｉｉ）ステロールもしくは他の構造脂質、のうちの１つ以上は、免疫細胞への脂質ナノ粒子の送達を増進する上で有効な量で免疫細胞送達増強脂質を含み、その結果、がん抗原に対するＴ細胞応答が亢進する。
別の態様では、本開示は、対象における目的抗原に対する免疫応答を増進する方法に関し、この方法は、免疫細胞送達脂質ナノ粒子を対象に投与することを含み、この脂質ナノ粒子は、
（ｉ）イオン化可能な脂質、
（ｉｉ）ステロールまたは他の構造脂質、
（ｉｉｉ）非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質、
（ｉｖ）目的抗原をコードするｍＲＮＡを含む薬剤、及び
（ｖ）任意選択のＰＥＧ脂質
を含み、
（ｉ）イオン化可能な脂質または（ｉｉ）ステロールもしくは他の構造脂質、のうちの１つ以上は、免疫細胞への脂質ナノ粒子の送達を増進する上で有効な量で免疫細胞送達増強脂質を含み、その結果、目的抗原をコードするｍＲＮＡがカプセル化されているが、免疫細胞送達増強脂質を含まないＬＮＰによって誘導される目的抗原に対する免疫応答と比較して、目的抗原に対する免疫応答が対象において増進する。
別の態様では、本開示は、Ｂ細胞の活性化または活性を調節する方法に関し、この方法は、Ｂ細胞を免疫細胞送達脂質ナノ粒子と接触させることを含み、この脂質ナノ粒子は、
（ｉ）イオン化可能な脂質、
（ｉｉ）ステロールまたは他の構造脂質、
（ｉｉｉ）非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質、
（ｉｖ）核酸分子を含む薬剤、及び
（ｖ）任意選択のＰＥＧ脂質
を含み、
（ｉ）イオン化可能な脂質または（ｉｉ）ステロールもしくは他の構造脂質、のうちの１つ以上は、免疫細胞への脂質ナノ粒子の送達を増進する上で有効な量で免疫細胞送達増強脂質を含み、その結果、Ｂ細胞の活性化または活性が調節される。
いくつかの態様では、方法は、同じまたは異なる核酸分子がカプセル化された第２のＬＮＰを同時または連続的に投与することをさらに含み、第２のＬＮＰは、免疫細胞送達増強脂質を含まない。他の態様では、方法は、異なる核酸分子がカプセル化された第２のＬＮＰを同時または連続的に投与することをさらに含み、第２のＬＮＰは、免疫細胞送達増強脂質を含む。
本開示のＬＮＰまたは方法の一実施形態では、送達増進は、免疫細胞送達増強脂質を含まない脂質ナノ粒子と比較したときのものである。本開示のＬＮＰまたは方法の別の実施形態では、送達増進は、適切な対照と比較したときのものである。
本開示のＬＮＰまたは方法の一実施形態では、薬剤は、免疫細胞におけるタンパク質発現を刺激する。本開示のＬＮＰまたは方法の別の実施形態では、薬剤は、免疫細胞におけるタンパク質発現を抑制する。本開示のＬＮＰまたは方法の別の実施形態では、薬剤は、免疫細胞活性を調節する可溶性タンパク質をコードする。本開示のＬＮＰまたは方法の別の実施形態では、薬剤は、免疫細胞活性を調節する細胞内タンパク質をコードする。本開示のＬＮＰまたは方法の別の実施形態では、薬剤は、免疫細胞活性を調節する膜貫通型タンパク質をコードする。本開示のＬＮＰまたは方法の別の実施形態では、薬剤は、免疫機能を増進する。本開示のＬＮＰまたは方法の別の実施形態では、薬剤は、免疫機能を抑制する。
本開示のＬＮＰまたは方法の一実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞である。本開示のＬＮＰまたは方法の別の実施形態では、免疫細胞は、Ｂ細胞である。本開示のＬＮＰまたは方法の別の実施形態では、免疫細胞は、樹状細胞または骨髄系細胞である。
本開示のＬＮＰまたは方法の一実施形態では、ＬＮＰは、フィトステロールを含むか、またはフィトステロールとコレステロールとを組み合わせたものを含む。一実施形態では、フィトステロールは、β−シトステロール、スチグマステロール、β−シトスタノール、カンペステロール、ブラシカステロール、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。一実施形態では、フィトステロールは、β−シトステロール、β−シトスタノール、カンペステロール、ブラシカステロール、化合物Ｓ−１４０、化合物Ｓ−１５１、化合物Ｓ−１５６、化合物Ｓ−１５７、化合物Ｓ−１５９、化合物Ｓ−１６０、化合物Ｓ−１６４、化合物Ｓ−１６５、化合物Ｓ−１７０、化合物Ｓ−１７３、化合物Ｓ−１７５、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。一実施形態では、フィトステロールは、化合物Ｓ−１４０、化合物Ｓ−１５１、化合物Ｓ−１５６、化合物Ｓ−１５７、化合物Ｓ−１５９、化合物Ｓ−１６０、化合物Ｓ−１６４、化合物Ｓ−１６５、化合物Ｓ−１７０、化合物Ｓ−１７３、化合物Ｓ−１７５、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。一実施形態では、フィトステロールは、化合物Ｓ−１４１、化合物Ｓ−１４０、化合物Ｓ−１４３、及び化合物Ｓ−１４８を組み合わせたものである。一実施形態では、フィトステロールは、シトステロールまたはその塩もしくはエステルを含む。一実施形態では、フィトステロールは、スチグマステロールまたはその塩もしくはエステルを含む。一実施形態では、フィトステロールは、ベータ−シトステロール
Figure 2021512090
 またはその塩もしくはエステルである。
本開示のＬＮＰまたは方法の一実施形態では、ＬＮＰは、フィトステロールまたはその塩もしくはエステルと、コレステロールまたはその塩と、を含む。
いくつかの実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞であり、フィトステロールまたはその塩もしくはエステルは、β−シトステロール、β−シトスタノール、カンペステロール、及びブラシカステロール、ならびにそれらの組み合わせからなる群から選択される。一実施形態では、フィトステロールは、β−シトステロールである。一実施形態では、フィトステロールは、β−シトスタノールである。一実施形態では、フィトステロールは、カンペステロールである。一実施形態では、フィトステロールは、ブラシカステロールである。
いくつかの実施形態では、免疫細胞は、単球または骨髄系細胞であり、フィトステロールまたはその塩もしくはエステルは、β−シトステロール及びスチグマステロール、ならびにそれらの組み合わせからなる群から選択される。一実施形態では、フィトステロールは、β−シトステロールである。一実施形態では、フィトステロールは、スチグマステロールである。
本開示のＬＮＰまたは方法の実施形態のいくつかでは、ＬＮＰは、ステロールまたはその塩もしくはエステルと、コレステロールまたはその塩と、を含み、免疫細胞は、単球または骨髄系細胞であり、ステロールまたはその塩もしくはエステルは、β−シトステロール−ｄ７、ブラシカステロール、化合物Ｓ−３０、化合物Ｓ−３１、及び化合物Ｓ−３２からなる群から選択される。
一実施形態では、コレステロールのｍｏｌ％は、脂質ナノ粒子に存在するフィトステロールのｍｏｌ％の約１％〜５０％である。一実施形態では、コレステロールのｍｏｌ％は、脂質ナノ粒子に存在するフィトステロールのｍｏｌ％の約１０％〜４０％である。一実施形態では、コレステロールのｍｏｌ％は、脂質ナノ粒子に存在するフィトステロールのｍｏｌ％の約２０％〜３０％である。一実施形態では、コレステロールのｍｏｌ％は、脂質ナノ粒子に存在するフィトステロールのｍｏｌ％の約３０％である。
本開示のＬＮＰまたは方法の一実施形態では、イオン化可能な脂質は、式（Ｉ Ｉ）、式（Ｉ ＩＡ）、式（Ｉ ＩＢ）、式（Ｉ ＩＩ）、式（Ｉ ＩＩａ）、式（Ｉ ＩＩｂ）、式（Ｉ ＩＩｃ）、式（Ｉ ＩＩｄ）、式（Ｉ ＩＩｅ）、式（Ｉ ＩＩｆ）、式（Ｉ ＩＩｇ）、式（Ｉ ＩＩＩ）、式（Ｉ ＶＩ）、式（Ｉ ＶＩ−ａ）、式（Ｉ ＶＩＩ）、式（Ｉ ＶＩＩＩ）、式（Ｉ ＶＩＩａ）、式（Ｉ ＶＩＩＩａ）、式（Ｉ ＶＩＩＩｂ）、式（Ｉ ＶＩＩｂ−１）、式（Ｉ ＶＩＩｂ−２）、式（Ｉ ＶＩＩｂ−３）、式（Ｉ ＶＩＩｃ）、式（Ｉ ＶＩＩｄ）、式（Ｉ ＶＩＩＩｃ）、式（Ｉ ＶＩＩＩｄ）、式（Ｉ ＩＸ）、式（Ｉ ＩＸａ１）、式（Ｉ ＩＸａ２）、式（Ｉ ＩＸａ３）、式（Ｉ ＩＸａ４）、式（Ｉ ＩＸａ５）、式（Ｉ ＩＸａ６）、式（Ｉ ＩＸａ７）、もしくは式（Ｉ ＩＸａ８）のいずれかの化合物を含み、及び／または化合物Ｘ（化合物Ｉ−１８とも称される）、化合物Ｙ（化合物Ｉ−２５とも称される）、化合物Ｉ−４８、化合物Ｉ−５０、化合物Ｉ−１０９、化合物Ｉ−１１１、化合物Ｉ−１１３、化合物Ｉ−１８１、化合物Ｉ−１８２、化合物Ｉ−２４４、化合物Ｉ−２９２、化合物Ｉ−３０１、化合物Ｉ−３２１、化合物Ｉ−３２２、化合物Ｉ−３２６、化合物Ｉ−３２８、化合物Ｉ−３３０、化合物Ｉ−３３１、化合物Ｉ−３３２、もしくは化合物Ｉ−Ｍからなる群から選択される化合物を含む。一実施形態では、イオン化可能な脂質は、化合物Ｘ、化合物Ｙ、化合物Ｉ−４８、化合物Ｉ−５０、化合物Ｉ−１０９、化合物Ｉ−１１１、化合物Ｉ−１１３、化合物Ｉ−１８１、化合物Ｉ−１８２、化合物Ｉ−２４４、化合物Ｉ−２９２、化合物Ｉ−３０１、化合物Ｉ−３０９、化合物Ｉ−３１７、化合物Ｉ−３２１、化合物Ｉ−３２２、化合物Ｉ−３２６、化合物Ｉ−３２８、化合物Ｉ−３３０、化合物Ｉ−３３１、化合物Ｉ−３３２、化合物Ｉ−３４７、化合物Ｉ−３４８、化合物Ｉ−３４９、化合物Ｉ−３５０、化合物Ｉ−３５２、及び化合物Ｉ−Ｍからなる群から選択される化合物を含む。一実施形態では、イオン化可能な脂質は、化合物Ｘ、化合物Ｙ、化合物Ｉ−３２１、化合物Ｉ−２９２、化合物Ｉ−３２６、化合物Ｉ−１８２、化合物Ｉ−３０１、化合物Ｉ−４８、化合物Ｉ−５０、化合物Ｉ−３２８、化合物Ｉ−３３０、化合物Ｉ−１０９、化合物Ｉ−１１１、及び化合物Ｉ−１８１からなる群から選択される化合物を含む。一実施形態では、イオン化可能な脂質は、化合物Ｘ、化合物Ｙ、化合物Ｉ−３０９、化合物Ｉ−３１７、化合物Ｉ−３２１、化合物Ｉ−２９２、化合物Ｉ−３２６、化合物Ｉ−３４７、化合物Ｉ−３４８、化合物Ｉ−３４９、化合物Ｉ−−３５０、化合物Ｉ−３５１、化合物Ｉ−３５２、化合物Ｉ−１８２、化合物Ｉ−３０１、化合物Ｉ−４８、化合物Ｉ−５０、化合物Ｉ−３２８、化合物Ｉ−３３０、化合物Ｉ−１０９、化合物Ｉ−１１１、及び化合物Ｉ−１８１からなる群から選択される化合物を含む。一実施形態では、イオン化可能な脂質は、化合物Ｉ−３０９、化合物Ｉ−３１７、化合物Ｉ−３４７、化合物Ｉ−３４８、化合物Ｉ−３４９、化合物Ｉ−３５０、化合物Ｉ−３５１、及び化合物Ｉ−３５２からなる群から選択される化合物を含む。
いくつかの実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞であり、イオン化可能な脂質は、化合物Ｉ−３０１、化合物Ｉ−３２１、及び化合物Ｉ−３２６からなる群から選択される化合物を含む。他の実施形態では、免疫細胞は、単球または骨髄系細胞であり、イオン化可能な脂質は、化合物Ｘ、化合物Ｉ−１０９、化合物Ｉ−１１１、化合物Ｉ−１８１、化合物Ｉ−１８２、及び化合物Ｉ−２４４からなる群から選択される化合物を含む。
前述の態様または関連する態様のいずれかでは、本開示のＬＮＰのイオン化可能な脂質は、化合物Ｉ １８（化合物Ｘとも称される）、化合物Ｉ−２５（化合物Ｙとも称される）、化合物Ｉ−４８、化合物Ｉ−５０、化合物Ｉ−１０９、化合物Ｉ−１１１、化合物Ｉ−１１３、化合物Ｉ−１８１、化合物Ｉ−１８２、化合物Ｉ−２４４、化合物Ｉ−２９２、化合物Ｉ−３０１、化合物Ｉ−３２１、化合物Ｉ−３２２、化合物Ｉ−３２６、化合物Ｉ−３２８、化合物Ｉ−３３０、化合物Ｉ−３３１、及び化合物Ｉ−３３２からなる群から選択される少なくとも１つの化合物を含む。別の実施形態では、本開示のＬＮＰのイオン化可能な脂質は、化合物Ｉ １８（化合物Ｘとも称される）、化合物Ｉ−２５（化合物Ｙとも称される）、化合物Ｉ−４８、化合物Ｉ−５０、化合物Ｉ−１０９、化合物Ｉ−１１１、化合物Ｉ−１８１、化合物Ｉ−１８２、化合物Ｉ−２９２、化合物Ｉ−３０１、化合物Ｉ−３２１、化合物Ｉ−３２６、化合物Ｉ−３２８、及び化合物Ｉ−３３０からなる群から選択される化合物を含む。別の実施形態では、本開示のＬＮＰのイオン化可能な脂質は、化合物Ｉ−１８２、化合物Ｉ−３０１、化合物Ｉ−３２１、及び化合物Ｉ−３２６からなる群から選択される化合物を含む。
本開示のＬＮＰまたは方法の一実施形態では、非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質は、ＤＳＰＣ、ＤＭＰＥ、ＤＯＰＣ、及び化合物Ｈ−４０９からなる群から選択される化合物を含む。本開示のＬＮＰまたは方法の一実施形態では、非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質は、ＤＳＰＣ、ＤＰＰＣ、ＤＭＰＥ、ＤＭＰＣ、ＤＯＰＣ、化合物Ｈ−４０９、化合物Ｈ−４１８、化合物Ｈ−４２０、化合物Ｈ−４２１、及び化合物Ｈ−４２２からなる群から選択される化合物を含む。一実施形態では、リン脂質は、ＤＳＰＣである。本開示のＬＮＰまたは方法の一実施形態では、非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質は、ＤＰＰＣ、ＤＭＰＣ、化合物Ｈ−４１８、化合物Ｈ−４２０、化合物Ｈ−４２１、及び化合物Ｈ−４２２からなる群から選択される化合物を含む。
本開示のＬＮＰまたは方法の一実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞であり、非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質は、ＤＳＰＣ、ＤＭＰＥ、及び化合物Ｈ−４０９からなる群から選択される化合物を含む。一実施形態では、リン脂質は、ＤＳＰＣである。一実施形態では、リン脂質は、ＤＭＰＥである。一実施形態では、リン脂質は、化合物Ｈ−４０９である。
本開示のＬＮＰまたは方法の一実施形態では、免疫細胞は、単球または骨髄系細胞であり、非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質は、ＤＯＰＣ、ＤＭＰＥ、及び化合物Ｈ−４０９からなる群から選択される化合物を含む。一実施形態では、リン脂質は、ＤＳＰＣである。一実施形態では、リン脂質は、ＤＭＰＥである。一実施形態では、リン脂質は、化合物Ｈ−４０９である。
本開示のＬＮＰまたは方法の一実施形態では、ＬＮＰは、ＰＥＧ脂質を含む。一実施形態では、ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、ＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロール、及びそれらの混合物からなる群から選択される。一実施形態では、ＰＥＧ脂質は、化合物Ｐ４１５、化合物Ｐ−４１６、化合物Ｐ−４１７、化合物Ｐ−４１９、化合物Ｐ−４２０、化合物Ｐ−４２３、化合物Ｐ−４２４、化合物Ｐ−４２８、化合物Ｐ−Ｌ１、化合物Ｐ−Ｌ２、化合物Ｐ−Ｌ１６、化合物Ｐ−Ｌ１７、化合物Ｐ−Ｌ１８、化合物Ｐ−Ｌ１９、化合物Ｐ−Ｌ２２、及び化合物Ｐ−Ｌ２３からなる群から選択される。一実施形態では、ＰＥＧ脂質は、化合物４２８、化合物Ｐ−Ｌ１６、化合物Ｐ−Ｌ１７、化合物Ｐ−Ｌ１８、化合物Ｐ−Ｌ１９、化合物Ｐ−Ｌ１、及び化合物Ｐ−Ｌ２からなる群から選択される。一実施形態では、ＰＥＧ脂質は、化合物Ｐ４１５、化合物Ｐ−４１６、化合物Ｐ−４１７、化合物Ｐ−４１９、化合物Ｐ−４２０、化合物Ｐ−４２３、化合物Ｐ−４２４、化合物Ｐ−４２８、化合物Ｐ−Ｌ１、化合物Ｐ−Ｌ２、化合物Ｐ−Ｌ１６、化合物Ｐ−Ｌ１７、化合物Ｐ−Ｌ１８、化合物Ｐ−Ｌ１９、化合物Ｐ−Ｌ２２、及び化合物Ｐ−Ｌ２３からなる群から選択される。化合物Ｐ−４１５、化合物Ｐ−４１６、化合物Ｐ−４１７、化合物Ｐ−４１９、化合物Ｐ−４２０、化合物Ｐ−４２３、化合物Ｐ−４２４、化合物Ｐ−４２８、化合物Ｐ−Ｌ１、化合物Ｐ−Ｌ２、化合物Ｐ−Ｌ３、化合物Ｐ−Ｌ４、化合物Ｐ−Ｌ６、化合物Ｐ−Ｌ８、化合物Ｐ−Ｌ９、化合物Ｐ−Ｌ１６、化合物Ｐ−Ｌ１７、化合物Ｐ−Ｌ１８、化合物Ｐ−Ｌ１９、化合物Ｐ−Ｌ２２、化合物Ｐ−Ｌ２３、及び化合物Ｐ−Ｌ２５。一実施形態では、ＰＥＧ脂質は、化合物Ｐ−Ｌ３、化合物Ｐ−Ｌ４、化合物Ｐ−Ｌ６、化合物Ｐ−Ｌ８、化合物Ｐ−Ｌ９、及び化合物Ｐ−Ｌ２５からなる群から選択される。
本開示のＬＮＰまたは方法の一実施形態では、ＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約３０ｍｏｌ％〜約６０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質を約０ｍｏｌ％〜約３０ｍｏｌ％含み、ステロールまたは他の構造脂質を約１８．５ｍｏｌ％〜約４８．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％〜約１０ｍｏｌ％含む。本開示のＬＮＰまたは方法の一実施形態では、ＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約３５ｍｏｌ％〜約５５ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質を約５ｍｏｌ％〜約２５ｍｏｌ％含み、ステロールまたは他の構造脂質を約３０ｍｏｌ％〜約４０ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％〜約１０ｍｏｌ％含む。本開示のＬＮＰまたは方法の一実施形態では、ＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約５０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質を約１０ｍｏｌ％含み、ステロールまたは他の構造脂質を約３８．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。一実施形態では、ステロールまたは他の構造脂質のｍｏｌ％は、フィトステロールが１８．５％であり、構造脂質の総ｍｏｌ％は、３８．５％である。一実施形態では、ステロールまたは他の構造脂質のｍｏｌ％は、フィトステロールが２８．５％であり、構造脂質の総ｍｏｌ％は、３８．５％である。
本開示のＬＮＰまたは方法の一実施形態では、ＬＮＰは、
ｉ）化合物Ｉ−３０１、化合物Ｉ−３２１、及び化合物Ｉ−３２６からなる群から選択される化合物であるイオン化可能な脂質を約５０ｍｏｌ％含み、
（ｉｉ）ＤＳＰＣであるリン脂質を約１０ｍｏｌ％含み、
（ｉｉｉ）β−シトステロール及びコレステロールから選択される構造脂質を約３８．５ｍｏｌ％含み、
（ｉｖ）化合物Ｐ−４２８であるＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。
いくつかの態様では、本開示は、免疫療法の方法における使用のための脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を提供し、ＬＮＰは、免疫細胞への送達増進をもたらし、
ＬＮＰは、
（ｉ）ステロールまたは他の構造脂質、
（ｉｉ）イオン化可能な脂質、及び
（ｉｉｉ）免疫細胞に送達するための薬剤、
を含み、
（ｉ）ステロールもしくは他の構造脂質、及び／または（ｉｉ）イオン化可能な脂質、のうちの１つ以上は、免疫細胞へのＬＮＰの送達を増進する上で有効な量で免疫細胞送達増強脂質を含み、
送達増進は、免疫細胞送達増強脂質を含まない対照ＬＮＰと比較したときの当該ＬＮＰの特徴である。
いくつかの態様では、本開示は、免疫療法の方法における使用のための脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を提供し、ＬＮＰは、免疫細胞への送達増進をもたらし、
ＬＮＰは、
（ｉ）ステロールまたは他の構造脂質、
（ｉｉ）イオン化可能な脂質、及び
（ｉｉｉ）免疫細胞に送達するための薬剤、
を含み、
ステロールまたは他の構造脂質は、免疫細胞へのＬＮＰの送達を増進する上で有効な量で免疫細胞送達増強脂質を含み、
送達増進は、免疫細胞送達増強脂質を含まない対照ＬＮＰと比較したときの当該ＬＮＰの特徴である。
いくつかの態様では、本開示は、免疫療法の方法における使用のための脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を提供し、ＬＮＰは、免疫細胞への送達増進をもたらし、
ＬＮＰは、
（ｉ）ステロールまたは他の構造脂質、
（ｉｉ）イオン化可能な脂質、及び
（ｉｉｉ）免疫細胞に送達するための薬剤、
を含み、
イオン化可能な脂質は、免疫細胞へのＬＮＰの送達を増進する上で有効な量で免疫細胞送達増強脂質を含み、
送達増進は、免疫細胞送達増強脂質を含まない対照ＬＮＰと比較したときの当該ＬＮＰの特徴である。
いくつかの態様では、本開示は、免疫療法の方法における使用のための脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を提供し、ＬＮＰは、免疫細胞への送達増進をもたらし、
ＬＮＰは、
（ｉ）ステロールまたは他の構造脂質、
（ｉｉ）イオン化可能な脂質、及び
（ｉｉｉ）免疫細胞に送達するための薬剤、
を含み、
（ｉ）ステロールまたは他の構造脂質、及び（ｉｉ）イオン化可能な脂質は、免疫細胞へのＬＮＰの送達を増進する上で有効な量で免疫細胞送達増強脂質を含み、
送達増進は、免疫細胞送達増強脂質を含まない対照ＬＮＰと比較したときの当該ＬＮＰの特徴である。
前述の態様または関連する態様のいずれかでは、ステロールまたは他の構造脂質は、フィトステロールまたはコレステロールである。
前述の態様または関連する態様のいずれかでは、免疫細胞送達増強脂質は、Ｃ１ｑに結合し、及び／または免疫細胞送達増強脂質を含まない対照ＬＮＰと比較して、当該脂質を含むＬＮＰがＣ１ｑに結合することを促進し、及び／または免疫細胞送達増強脂質を含まない対照ＬＮＰと比較して、Ｃ１ｑと結合したＬＮＰが免疫細胞に取り込まれることを増加させる。
前述の態様または関連する態様のいずれかでは、免疫細胞に送達するための薬剤は、核酸分子である。いくつかの態様では、薬剤は、免疫細胞における目的タンパク質の発現を刺激する。いくつかの態様では、免疫細胞に送達するための薬剤は、目的タンパク質をコードする核酸分子である。いくつかの態様では、免疫細胞に送達するための薬剤は、目的タンパク質をコードするｍＲＮＡである。
前述の態様または関連する態様のいずれかでは、免疫細胞における目的タンパク質の発現が、免疫細胞送達増強脂質を含まない対照ＬＮＰと比較して増進する。いくつかの態様では、薬剤は、免疫細胞活性を調節するタンパク質をコードする。
前述の態様または関連する態様のいずれかでは、免疫細胞は、リンパ球である。いくつかの態様では、免疫細胞は、Ｔ細胞またはＢ細胞である。いくつかの態様では、免疫細胞は、Ｔ細胞である。いくつかの態様では、免疫細胞は、Ｂ細胞である。いくつかの態様では、免疫細胞は、樹状細胞または骨髄系細胞である。いくつかの態様では、免疫細胞は、樹状細胞である。いくつかの態様では、免疫細胞は、骨髄系細胞である。
前述の態様または関連する態様のいずれかでは、脂質ナノ粒子は、
（ｉｖ）非カチオン性ヘルパー脂質もしくはリン脂質、及び／または
（ｖ）ＰＥＧ脂質
をさらに含む。
いくつかの態様では、脂質ナノ粒子は、非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質をさらに含む。いくつかの態様では、ナノ粒子は、ＰＥＧ脂質をさらに含む。いくつかの態様では、脂質ナノ粒子は、非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質と、ＰＥＧ脂質と、をさらに含む。
前述の態様または関連する態様のいずれかでは、本明細書に記載の方法を用いることで、免疫細胞の活性化または活性が調節される。いくつかの態様では、方法を用いることで、Ｔ細胞またはＢ細胞の活性化または活性が調節される。
前述の態様または関連する態様のいずれかでは、本明細書に記載の方法を用いることで、目的抗原に対する免疫応答が亢進し、任意選択でがん抗原に対するＴ細胞応答が亢進する。いくつかの態様では、本明細書に記載の方法を用いることで、目的抗原に対する免疫応答が亢進する。いくつかの態様では、本明細書に記載の方法を用いることで、がん抗原に対するＴ細胞応答が亢進する。
いくつかの態様では、本開示は、免疫細胞に薬剤を送達するｉｎ ｖｉｔｒｏの方法を提供し、この方法は、免疫細胞を、免疫細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子と接触させることを含む。ｉｎ ｖｉｔｒｏの方法の態様のいくつかでは、方法を用いることで、
ａ．免疫細胞（例えば、Ｔ細胞もしくはＢ細胞）の活性化もしくは活性が調節され、及び／または
ｂ．目的抗原に対する免疫応答が亢進し、任意選択でがん抗原に対するＴ細胞応答が亢進する。
ｉｎ ｖｉｔｒｏの方法の態様のいくつかでは、方法を用いることで、免疫細胞の活性化または活性が調節される。ｉｎ ｖｉｔｒｏの方法の態様のいくつかでは、方法を用いることで、目的抗原に対する免疫応答が亢進する。ｉｎ ｖｉｔｒｏの方法の態様のいくつかでは、方法を用いることで、がん抗原に対するＴ細胞応答が亢進する。ｉｎ ｖｉｔｒｏの方法の態様のいくつかでは、方法を用いることで、
ａ．免疫細胞の活性化または活性が調節され、
ｂ．目的抗原に対する免疫応答が亢進する。
ｉｎ ｖｉｔｒｏの方法の態様のいくつかでは、方法を用いることで、
ａ．免疫細胞の活性化または活性が調節され、
ｂ．がん抗原に対するＴ細胞応答が亢進する。
Ａ〜Ｂは、化合物Ｘ／コレステロール／ＤＳＰＣ／ＰＥＧ ＤＭＧを含むＬＮＰ（ＬＮＰ１）、化合物Ｘ／コレステロール／ＤＳＰＣ／化合物４２８を含むＬＮＰ（ＬＮＰ２）、または化合物Ｘ／ベータ−シトステロール／コレステロール／ＰＥＧ ＤＭＧを含むＬＮＰ（ＬＮＰ３）のいずれかにｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡがカプセル化されたものと共にヒトＡＭＬ細胞をｅｘ ｖｉｖｏでインキュベートした結果を示す棒グラフである。ＰＢＳを負の対照として使用した。Ａは、フローサイトメトリーによって決定したｍＯＸ４０Ｌ＋細胞のパーセントを示す。Ｂは、蛍光顕微鏡法によって決定した細胞当たりのＰＥ強度を示す。 ＡＭＬ ＰＢＭＣで再構成されたＰＤＸマウスから得られた脾細胞のフローサイトメトリーグラフを示し、Ｔ細胞へのトランスフェクションが示される。当該ＰＤＸマウスには、ＰＢＳ（Ａ）、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡが化合物Ｘ−コレステロール−ＤＳＰＣ−ＰＥＧ ＤＭＧを含むＬＮＰ（ＬＮＰ１）にカプセル化されたもの（Ｂ）、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡが化合物Ｘ−コレステロール−ＤＳＰＣ−化合物４２８を含むＬＮＰ（ＬＮＰ２）にカプセル化されたもの（Ｃ）、またはｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡが化合物Ｘ−ベータ−シトステロール／コレステロール−ＤＳＰＣ−ＰＥＧ ＤＭＧを含むＬＮＰ（ＬＮＰ３）にカプセル化されたもの（Ｄ）、のいずれかを静脈内投与した。各グラフのＸ軸は、ｈＣＤ３＋細胞を示す。各グラフのＹ軸は、ｍＯＸ４０Ｌ＋細胞を示す。各処理について、４つのグラフ（左から右に示される）は、４匹の異なるマウスから得られた結果を示す。 ＡＭＬ ＰＢＭＣで再構成されたＰＤＸマウスから得られた脾細胞のフローサイトメトリーグラフを示し、Ｔ細胞へのトランスフェクションが示される。当該ＰＤＸマウスには、ＰＢＳ（Ａ）、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡが化合物Ｘ−コレステロール−ＤＳＰＣ−ＰＥＧ ＤＭＧを含むＬＮＰ（ＬＮＰ１）にカプセル化されたもの（Ｂ）、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡが化合物Ｘ−コレステロール−ＤＳＰＣ−化合物４２８を含むＬＮＰ（ＬＮＰ２）にカプセル化されたもの（Ｃ）、またはｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡが化合物Ｘ−ベータ−シトステロール／コレステロール−ＤＳＰＣ−ＰＥＧ ＤＭＧを含むＬＮＰ（ＬＮＰ３）にカプセル化されたもの（Ｄ）、のいずれかを静脈内投与した。各グラフのＸ軸は、ｈＣＤ３＋細胞を示す。各グラフのＹ軸は、ｍＯＸ４０Ｌ＋細胞を示す。各処理について、４つのグラフ（左から右に示される）は、４匹の異なるマウスから得られた結果を示す。 ＡＭＬ ＰＢＭＣで再構成されたＰＤＸマウスから得られた脾細胞のフローサイトメトリーグラフを示し、Ｔ細胞へのトランスフェクションが示される。当該ＰＤＸマウスには、ＰＢＳ（Ａ）、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡが化合物Ｘ−コレステロール−ＤＳＰＣ−ＰＥＧ ＤＭＧを含むＬＮＰ（ＬＮＰ１）にカプセル化されたもの（Ｂ）、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡが化合物Ｘ−コレステロール−ＤＳＰＣ−化合物４２８を含むＬＮＰ（ＬＮＰ２）にカプセル化されたもの（Ｃ）、またはｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡが化合物Ｘ−ベータ−シトステロール／コレステロール−ＤＳＰＣ−ＰＥＧ ＤＭＧを含むＬＮＰ（ＬＮＰ３）にカプセル化されたもの（Ｄ）、のいずれかを静脈内投与した。各グラフのＸ軸は、ｈＣＤ３＋細胞を示す。各グラフのＹ軸は、ｍＯＸ４０Ｌ＋細胞を示す。各処理について、４つのグラフ（左から右に示される）は、４匹の異なるマウスから得られた結果を示す。 ＡＭＬ ＰＢＭＣで再構成されたＰＤＸマウスから得られた脾細胞のフローサイトメトリーグラフを示し、Ｔ細胞へのトランスフェクションが示される。当該ＰＤＸマウスには、ＰＢＳ（Ａ）、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡが化合物Ｘ−コレステロール−ＤＳＰＣ−ＰＥＧ ＤＭＧを含むＬＮＰ（ＬＮＰ１）にカプセル化されたもの（Ｂ）、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡが化合物Ｘ−コレステロール−ＤＳＰＣ−化合物４２８を含むＬＮＰ（ＬＮＰ２）にカプセル化されたもの（Ｃ）、またはｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡが化合物Ｘ−ベータ−シトステロール／コレステロール−ＤＳＰＣ−ＰＥＧ ＤＭＧを含むＬＮＰ（ＬＮＰ３）にカプセル化されたもの（Ｄ）、のいずれかを静脈内投与した。各グラフのＸ軸は、ｈＣＤ３＋細胞を示す。各グラフのＹ軸は、ｍＯＸ４０Ｌ＋細胞を示す。各処理について、４つのグラフ（左から右に示される）は、４匹の異なるマウスから得られた結果を示す。 Ａ〜Ｂは、ヒトＰＢＭＣ（ドナー１）のフローサイトメトリーグラフを示し、Ｔ細胞へのトランスフェクションが示される。当該ヒトＰＢＭＣは、化合物Ｘ−コレステロール−ＤＳＰＣ−ＰＥＧ ＤＭＧを含むＬＮＰ（ＬＮＰ１）、化合物Ｘ−コレステロール−ＤＳＰＣ−化合物４２８を含むＬＮＰ（ＬＮＰ２）、または化合物Ｘ−ベータ−シトステロール／コレステロール−ＤＳＰＣ−ＰＥＧ ＤＭＧを含むＬＮＰ（ＬＮＰ３）（左から右に示される）、のいずれかにｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡがカプセル化されたもの（２０ｎｇ（Ａ）または５０ｎｇ（Ｂ））と共にｅｘ ｖｉｖｏでインキュベートしたものである。ＰＢＳを負の対照として使用した（最も左のパネル）。各グラフのＸ軸は、ｍＯＸ４０Ｌ＋細胞を示す。各グラフのＹ軸は、ｈＣＤ３＋細胞を示す。 Ａ〜Ｂは、ヒトＰＢＭＣ（ドナー２）のフローサイトメトリーグラフを示し、Ｔ細胞へのトランスフェクションが示される。当該ヒトＰＢＭＣは、化合物Ｘ−コレステロール−ＤＳＰＣ−ＰＥＧ ＤＭＧを含むＬＮＰ（ＬＮＰ１）、化合物Ｘ−コレステロール−ＤＳＰＣ−化合物４２８を含むＬＮＰ（ＬＮＰ２）、または化合物Ｘ−ベータ−シトステロール／コレステロール−ＤＳＰＣ−ＰＥＧ ＤＭＧを含むＬＮＰ（ＬＮＰ３）（左から右に示される）、のいずれかにｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡがカプセル化されたもの（２０ｎｇ（Ａ）または５０ｎｇ（Ｂ））と共にｅｘ ｖｉｖｏでインキュベートしたものである。ＰＢＳを負の対照として使用した（最も左のパネル）。各グラフのＸ軸は、ｍＯＸ４０Ｌ＋細胞を示す。各グラフのＹ軸は、ｈＣＤ３＋細胞を示す。 Ａ〜Ｄは、ヒトＰＢＭＣのフローサイトメトリーグラフを示し、Ｔ細胞へのトランスフェクションが示される。当該ヒトＰＢＭＣは、化合物Ｘ−ベータ−シトステロール／コレステロール−ＤＳＰＣ−ＰＥＧ ＤＭＧを含むＬＮＰにｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡがカプセル化されたものの３つの異なるロット（左から右に示されるパネル）のうちの１つまたはＰＢＳと共にｅｘ ｖｉｖｏでインキュベートしたものである。Ａ〜Ｄは、４回の異なる技術的反復測定を示す。各グラフのＸ軸は、ｍＯＸ４０Ｌ＋細胞を示す。各グラフのＹ軸は、ｈＣＤ３＋細胞を示す。 Ａ〜Ｂは、ヒトＰＢＭＣのフローサイトメトリーグラフを示し、Ｔ細胞へのトランスフェクションが示される。当該ヒトＰＢＭＣは、化合物Ｘ−ベータ−シトステロール／コレステロール−ＤＳＰＣ−ＰＥＧ ＤＭＧを含むＬＮＰにＥＧＦＰをコードするｍＲＮＡがカプセル化されたもの（Ｂ）またはＰＢＳ（Ａ）と共にｅｘ ｖｉｖｏでインキュベートしたものである。パネル（左から右に示される）は、４回の異なる反復測定、及びそれらを重ね合わせて合成表示したものを示す。各グラフのＸ軸は、ＥＧＦＰ＋細胞を示す。各グラフのＹ軸は、ｈＣＤ３＋細胞を示す。 マウスＰＢＭＣのフローサイトメトリーグラフを示し、マウスＴ細胞へのトランスフェクションが生じなかったことが示される。当該マウスＰＢＭＣは、化合物Ｘ−コレステロール−ＤＳＰＣ−ＰＥＧ ＤＭＧを含むＬＮＰ（ＬＮＰ１）、化合物Ｘ−コレステロール−ＤＳＰＣ−化合物４２８を含むＬＮＰ（ＬＮＰ２）、または化合物Ｘ−ベータ−シトステロール／コレステロール−ＤＳＰＣ−ＰＥＧ ＤＭＧを含むＬＮＰ（ＬＮＰ３）（左から右に示される）、のいずれかにｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡがカプセル化されたもの（５０ｎｇ）と共にｅｘ ｖｉｖｏでインキュベートしたものである。ＰＢＳを負の対照として使用した（最も左のパネル）。各グラフのＸ軸は、ｍＯＸ４０Ｌ＋細胞を示す。各グラフのＹ軸は、ｈＣＤ３＋細胞を示す。 Ａ〜Ｄは、ヒトＰＢＭＣのフローサイトメトリーグラフを示す。当該ヒトＰＢＭＣは、化合物Ｘ−ベータ−シトステロール／コレステロール−ＤＳＰＣ−ＰＥＧ ＤＭＧを含むＬＮＰにｍＲＮＡがカプセル化されたものと共にｅｘ ｖｉｖｏでインキュベートした後、細胞型（上部に示される）について細胞選別を行ったものである。Ａ〜Ｄは、それぞれドナー１〜４の結果を示す。トランスフェクションされた細胞のパーセントは、調べたそれぞれの細胞型ごとに下部に示される。 Ａ〜Ｄは、ヒトＰＢＭＣのフローサイトメトリーグラフを示す。当該ヒトＰＢＭＣは、化合物Ｘ−ベータ−シトステロール／コレステロール−ＤＳＰＣ−ＰＥＧ ＤＭＧを含むＬＮＰにｍＲＮＡがカプセル化されたものと共にｅｘ ｖｉｖｏでインキュベートした後、細胞型（上部に示される）について細胞選別を行ったものである。Ａ〜Ｄは、それぞれドナー１〜４の結果を示す。トランスフェクションされた細胞のパーセントは、調べたそれぞれの細胞型ごとに下部に示される。 Ａ〜Ｃは、ヒトＰＢＭＣのフローサイトメトリーグラフを示す。当該ヒトＰＢＭＣは、化合物Ｘ−ベータ−シトステロール／コレステロール−ＤＳＰＣ−ＰＥＧ ＤＭＧを含むＬＮＰ（ＬＮＰ３）にｍＲＮＡがカプセル化されたものと共にｅｘ ｖｉｖｏでインキュベートした後、Ｔ細胞サブセットについて細胞選別を行ったものである。Ａは、ＣＤ４＋Ｔ細胞の結果を示す。Ｂは、ＣＤ８＋Ｔ細胞の結果を示す。Ｃは、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｌｏｗＴｒｅｇ細胞の結果を示す。 非ヒト霊長類から得られた脾細胞におけるｍＯＸ４０Ｌ＋細胞のパーセントを示す棒グラフである。当該非ヒト霊長類には、化合物Ｘ／ＰＥＧ ＤＭＧ及びコレステロールを含むＬＮＰ（ＬＮＰ１）、化合物Ｘ／化合物４２８及びコレステロールを含むＬＮＰ（ＬＮＰ２）、化合物Ｘ／ＤＳＰＥ ＰＥＧ及びコレステロールを含むＬＮＰ（ＬＮＰ４）、または化合物Ｘ／ベータ−シトステロール／コレステロール／ＰＥＧ ＤＭＧを含むＬＮＰ（ＬＮＰ３）、のいずれかにｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡがカプセル化されたものを静脈内注射してｉｎ ｖｉｖｏ処理を行った。 Ａ〜Ｃは、非ヒト霊長類から得られた脾細胞のフローサイトメトリーグラフを示し、脾臓Ｔ細胞へのトランスフェクションが示される。当該非ヒト霊長類には、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡがカプセル化されたＬＮＰ組成物（化合物Ｘ／ＰＥＧ ＤＭＧ及びコレステロール（ＬＮＰ１）、化合物Ｘ／化合物４２８及びコレステロール（ＬＮＰ２）、化合物Ｘ／ＤＳＰＥ ＰＥＧ及びコレステロール（ＬＮＰ４）、または化合物Ｘ／ベータ−シトステロール／コレステロール／ＰＥＧ ＤＭＧ（ＬＮＰ３））（パネルの上部に左から右に示される）を静脈内注射することによってｉｎ ｖｉｖｏ処理を行った。Ａ及びＢは、２匹の異なる動物から得られた結果を示す。Ｃは、それら２匹の動物から得られた結果を重ね合わせて合成表示したものを示す。各グラフのＸ軸は、ｍＯＸ４０Ｌ＋細胞を示す。各グラフのＹ軸は、カニクイザルＣＤ３＋細胞を示す。 Ａ〜Ｃは、非ヒト霊長類から得られた脾細胞のフローサイトメトリーグラフを示し、脾臓Ｂ細胞へのトランスフェクションが示される。当該非ヒト霊長類には、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡがカプセル化されたＬＮＰ組成物（化合物Ｘ／ＰＥＧ ＤＭＧ及びコレステロール（ＬＮＰ１）、化合物Ｘ／化合物４２８及びコレステロール（ＬＮＰ２）、化合物Ｘ／ＤＳＰＥ ＰＥＧ及びコレステロール（ＬＮＰ４）、または化合物Ｘ／ベータ−シトステロール／コレステロール／ＰＥＧ ＤＭＧ（ＬＮＰ３））（パネルの上部に左から右に示される）を静脈内注射してｉｎ ｖｉｖｏ処理を行った。Ａ及びＢは、２匹の異なる動物から得られた結果を示す。Ｃは、それら２匹の動物から得られた結果を重ね合わせて合成表示したものを示す。各グラフのＸ軸は、ｍＯＸ４０Ｌ＋細胞を示す。各グラフのＹ軸は、カニクイザルＣＤ２０＋細胞を示す。 Ａ〜Ｃは、非ヒト霊長類から得られた脾細胞のフローサイトメトリーグラフを示し、脾臓樹状細胞へのトランスフェクションが示される。当該非ヒト霊長類には、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡがカプセル化されたＬＮＰ組成物（化合物Ｘ／ＰＥＧ ＤＭＧ及びコレステロール（ＬＮＰ１）、化合物Ｘ／化合物４２８及びコレステロール（ＬＮＰ２）、化合物Ｘ／ＤＳＰＥ ＰＥＧ及びコレステロール（ＬＮＰ４）、または化合物Ｘ／ベータ−シトステロール／コレステロール／ＰＥＧ ＤＭＧ（ＬＮＰ３））（パネルの上部に左から右に示される）を静脈内注射してｉｎ ｖｉｖｏ処理を行った。Ａ及びＢは、２匹の異なる動物から得られた結果を示す。Ｃは、それら２匹の動物から得られた結果を重ね合わせて合成表示したものを示す。各グラフのＸ軸は、ｍＯＸ４０Ｌ＋細胞を示す。各グラフのＹ軸は、カニクイザルＣＤ１１ｃ＋細胞を示す。 Ａ〜Ｂは、非ヒト霊長類から得られた総骨髄細胞についてフローサイトメトリーを行った結果をまとめたグラフであり、骨髄細胞へのトランスフェクションが示される。当該非ヒト霊長類には、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡがカプセル化されたＬＮＰ組成物（化合物Ｘ／ＰＥＧ ＤＭＧ及びコレステロール（ＬＮＰ１）、化合物Ｘ／化合物４２８及びコレステロール（ＬＮＰ２）、化合物Ｘ／ＤＳＰＥ ＰＥＧ及びコレステロール（ＬＮＰ４）、または化合物Ｘ／ベータ−シトステロール／コレステロール／ＰＥＧ ＤＭＧ（ＬＮＰ３））（グラフの下部に示される）を静脈内注射してｉｎ ｖｉｖｏ処理を行った。Ａは、大腿骨から得られた骨髄におけるｍＯＸ４０Ｌ＋細胞のパーセントを示す。Ｂは、上腕骨から得られた骨髄におけるｍＯＸ４０Ｌ＋細胞のパーセントを示す。 Ａ〜Ｃは、非ヒト霊長類から得られた脾細胞のフローサイトメトリーグラフを示し、脾臓ＣＤ２０＋Ｂ細胞（Ａ）、脾臓ＣＤ３＋Ｔ細胞（Ｂ）、及び脾臓ＣＤ１１ｃ＋樹状細胞（Ｃ）へのトランスフェクションが示される。当該非ヒト霊長類には、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡがカプセル化されたＬＮＰ組成物（化合物Ｘ／ＰＥＧ ＤＭＧ及びコレステロール（ＬＮＰ１）または化合物Ｘ／ベータ−シトステロール／コレステロール／ＰＥＧ ＤＭＧ（ＬＮＰ３））（パネルの上部に左から右に示される）を静脈内注射してｉｎ ｖｉｖｏ処理を行った。 Ａ〜Ｂは、非ヒト霊長類から得られた骨髄細胞のフローサイトメトリーグラフを示し、大腿骨の骨髄細胞（Ａ）及び上腕骨の骨髄細胞（Ｂ）へのトランスフェクションが示される。当該非ヒト霊長類には、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡがカプセル化されたＬＮＰ組成物（化合物Ｘ／ＰＥＧ ＤＭＧ及びコレステロール（ＬＮＰ１）または化合物Ｘ／ベータ−シトステロール／コレステロール／ＰＥＧ ＤＭＧ（ＬＮＰ３））（パネルの上部に左から右に示される）を静脈内注射してｉｎ ｖｉｖｏ処理を行った。 非ヒト霊長類ＰＢＭＣのフローサイトメトリーグラフを示し、Ｔ細胞へのトランスフェクションが示される。当該非ヒト霊長類ＰＢＭＣは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡがカプセル化されたＬＮＰ組成物（化合物Ｘ／ＰＥＧ ＤＭＧ及びコレステロール（ＬＮＰ１）、化合物Ｘ／化合物４２８及びコレステロール（ＬＮＰ２）、または化合物Ｘ／ベータ−シトステロール／コレステロール／ＰＥＧ ＤＭＧ（ＬＮＰ３））（パネルの上部に左から右に示される）を用いてｅｘ ｖｉｖｏでのトランスフェクションを行ったものである。各グラフのＸ軸は、ｍＯＸ４０Ｌ＋細胞を示す。各グラフのＹ軸は、カニクイザルＣＤ３＋細胞を示す。 Ａ〜Ｄは、ヒトドナーから得られた骨髄細胞のフローサイトメトリーグラフを示し、ＣＤ４５＋ＣＤ３８＋ＣＤ１３８＋ＣＤ１９＋ＣＤ２０−形質細胞へのトランスフェクションが示される。当該骨髄細胞は、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡがカプセル化されたＬＮＰ３（化合物Ｘ／ベータ−シトステロール／コレステロール／ＰＥＧ ＤＭＧ）を用いてｅｘ ｖｉｖｏでのトランスフェクションを行ったものである。Ａは、ＰＢＳ対照を示す。Ｂは、ドナー１から得られた結果を示す。Ｃは、ドナー２から得られた結果を示す。Ｄは、ドナー３から得られた結果を示す。 Ａ〜Ｃは、ラットから得られた脾細胞のフローサイトメトリーグラフを示す。当該ラットには、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡがカプセル化されたＬＮＰ３（化合物Ｘ／ベータ−シトステロール／コレステロール／ＰＥＧ ＤＭＧ）を用いて０．１５ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、もしくは０．６ｍｇ／ｋｇの用量でｉｎ ｖｉｖｏでのトランスフェクションを行うか、またはＰＢＳ対照を投与した。Ａは、ＣＤ３＋脾臓Ｔ細胞についての結果を示す。Ｂは、ＣＤ１９＋脾臓Ｂ細胞についての結果を示す。Ｃは、ＣＤ１１ｂ＋脾臓マクロファージについての結果を示す。 ラットから得られた脾細胞のフローサイトメトリーグラフを示し、以下に記載の投与処理を当該ラットに行ってから２４時間時点、９６時間時点、または１６８時間時点でのトランスフェクションされた細胞のパーセントが示される。当該ラットには、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡがカプセル化されたＬＮＰ３（化合物Ｘ／ベータ−シトステロール／コレステロール／ＰＥＧ ＤＭＧ）を用いて０．６ｍｇ／ｋｇでｉｎ ｖｉｖｏでのトランスフェクションを行うか、またはＰＢＳ対照を投与した。 ラットから得られた脾細胞のフローサイトメトリーグラフを示し、単回用量を投与する処理レジメン、３日ごとに１回の投与を行い、合計３回用量を投与する処理レジメン（Ｑ３Ｄ×３）、または１日に１回の投与を３日間行う処理レジメン（ＱＤ×３）を用いてトランスフェクションされた細胞のパーセントが示される。当該ラットには、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡがカプセル化されたＬＮＰ３（化合物Ｘ／ベータ−シトステロール／コレステロール／ＰＥＧ ＤＭＧ）を用いて０．６ｍｇ／ｋｇでｉｎ ｖｉｖｏでのトランスフェクションを行うか、またはＰＢＳ対照を投与した。 Ａ〜Ｂは、ヒトＰＢＭＣについてｍＯＸ４０Ｌ＋細胞の％（左軸）及び蛍光強度の中央値（ＭＦＩ）（右軸）を示す棒グラフである。当該ヒトＰＢＭＣは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡがカプセル化されたＬＮＰ３（化合物Ｘ／ベータ−シトステロール／コレステロール／ＰＥＧ ＤＭＧ）を用いて単回（Ａ）または複数回（Ｂ）のトランスフェクションを行ったものである。Ａは、単回のトランスフェクションから２４時間後、４８時間後、及び７２時間後に測定した結果を示す。Ｂは、１回目のトランスフェクションから２４時間後、２回目のトランスフェクションから２４時間後、及び３回目のトランスフェクションから２４時間後に測定した結果を示す。 Ａ〜Ｄは、ヒトＴ細胞のフローサイトメトリーグラフを示し、ＬＮＰと１５分（Ａ）、６０分（Ｂ）、４時間（Ｃ）、または２４時間（Ｄ）相互作用させた後のトランスフェクションされた細胞のパーセントが示される。当該ヒトＴ細胞は、ＰＢＳ、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡがカプセル化されたＬＮＰ１（化合物Ｘ／ＰＥＧ ＤＭＧ／コレステロール）、またはｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡがカプセル化されたＬＮＰ３（化合物Ｘ／ベータ−シトステロール／コレステロール／ＰＥＧ ＤＭＧ）を用いてｅｘ ｖｉｖｏでのトランスフェクションを行ったものである。 化合物Ｙを含むか、または化合物Ｙ及びベータ−シトステロール／コレステロールを含むＬＮＰにサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）糖タンパク質ＢをコードするｍＲＮＡワクチンがカプセル化されたものを筋肉内投与して免疫化したマウスから得られた血清中の糖タンパク質Ｂ（ｇＢ）特異的ＩｇＧの力価を示すドットプロットであり、ＥＬＩＳＡによって測定したものである。 Ａ〜Ｂは、Ｃ５７Ｂｌ６／Ｊマウスから得られた脾臓ＣＤ３＋細胞（主にＴ細胞）をフローサイトメトリーで分析した結果をまとめたグラフであり、Ｔ細胞へのトランスフェクションが示される。当該Ｃ５７Ｂｌ６／Ｊマウスには、ＰＢＳ、化合物Ｘ−ＤＳＰＣ−ＰＥＧ ＤＭＧを含むＬＮＰ（ＬＮＰ１）にｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡがカプセル化されたもの、または化合物Ｘ−ベータ−シトステロール／コレステロール−ＤＳＰＣ−ＰＥＧ ＤＭＧを含むＬＮＰ（ＬＮＰ３）にｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡがカプセル化されたもの、のいずれかを静脈内投与した。Ａは、ｍＯＸ４０Ｌを発現するＣＤ３＋細胞のパーセントを示す。Ｂは、ＣＤ３＋細胞集団におけるｍＯＸ４０Ｌの平均蛍光指数（ＭＦＩ）を示す。 Ａ〜Ｂは、Ｃ５７Ｂｌ６／Ｊマウスから得られた脾臓ＣＤ１９＋細胞（主にＢ細胞）をフローサイトメトリーで分析した結果をまとめたグラフであり、Ｂ細胞へのトランスフェクションが示される。当該Ｃ５７Ｂｌ６／Ｊマウスには、ＰＢＳ、化合物Ｘ−ＤＳＰＣ−ＰＥＧ ＤＭＧを含むＬＮＰ（ＬＮＰ１）にｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡがカプセル化されたもの、または化合物Ｘ−ベータ−シトステロール／コレステロール−ＤＳＰＣ−ＰＥＧ ＤＭＧを含むＬＮＰ（ＬＮＰ３）にｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡがカプセル化されたもの、のいずれかを静脈内投与した。Ａは、ｍＯＸ４０Ｌを発現するＣＤ１９＋細胞のパーセントを示す。Ｂは、ＣＤ１９＋細胞集団におけるｍＯＸ４０Ｌの平均蛍光指数（ＭＦＩ）を示す。 Ａ〜Ｂは、Ｃ５７Ｂｌ６／Ｊマウスから得られた脾臓ＣＤ１１ｃ＋細胞（主に樹状細胞）をフローサイトメトリーで分析した結果をまとめたグラフであり、樹状細胞へのトランスフェクションが示される。当該Ｃ５７Ｂｌ６／Ｊマウスには、ＰＢＳ、化合物Ｘ−ＤＳＰＣ−ＰＥＧ ＤＭＧを含むＬＮＰ（ＬＮＰ１）にｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡがカプセル化されたもの、または化合物Ｘ−ベータ−シトステロール／コレステロール−ＤＳＰＣ−ＰＥＧ ＤＭＧを含むＬＮＰ（ＬＮＰ３）にｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡがカプセル化されたもの、のいずれかを静脈内投与した。Ａは、ｍＯＸ４０Ｌを発現するＣＤ１１ｃ＋細胞のパーセントを示す。Ｂは、ＣＤ１１ｃ＋細胞集団におけるｍＯＸ４０Ｌの平均蛍光指数（ＭＦＩ）を示す。 Ａ〜Ｂは、Ｃ５７Ｂｌ６／Ｊマウスから得られた総骨髄細胞をフローサイトメトリーで分析した結果をまとめたグラフであり、骨髄細胞へのトランスフェクションが示される。当該Ｃ５７Ｂｌ６／Ｊマウスには、ＰＢＳ、化合物Ｘ−ＤＳＰＣ−ＰＥＧ ＤＭＧを含むＬＮＰ（ＬＮＰ１）にｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡがカプセル化されたもの、または化合物Ｘ−ベータ−シトステロール／コレステロール−ＤＳＰＣ−ＰＥＧ ＤＭＧを含むＬＮＰ（ＬＮＰ３）にｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡがカプセル化されたもの、のいずれかを静脈内投与した。Ａは、ｍＯＸ４０Ｌを発現する骨髄細胞のパーセントを示す。Ｂは、骨髄細胞集団におけるｍＯＸ４０Ｌの平均蛍光指数（ＭＦＩ）を示す。 抗ＣＤ３３ ＣＡＲ Ｔ ｍＲＮＡコンストラクトがＬＮＰ３にカプセル化されたものを用いてトランスフェクションを行ったＴ細胞と共にインキュベートしたＣＤ３３＋ＡＭＬ細胞が受ける細胞傷害性を示すグラフである。Ｔ細胞：ＡＭＬ細胞の比を１：１及び１：５として試験した。ＣＤ３４ ｍＲＮＡコンストラクトを対照として使用した。 様々な異なるイオン化可能な脂質（アミノ脂質）（記載のもの）を含むＬＮＰを用いてＴ細胞へのトランスフェクションをｉｎ ｖｉｔｒｏで行った結果を示し、ＬＮＰが結合した細胞の％と、ＬＮＰによってカプセル化されているｍＲＮＡによってコードされるタンパク質を発現する細胞の％と、が示される。 様々な異なるイオン化可能な脂質（アミノ脂質）（記載のもの）を含むＬＮＰを用いてＴ細胞へのトランスフェクションをｉｎ ｖｉｔｒｏで行った結果を示し、ＬＮＰが結合した細胞の％と、ＬＮＰによってカプセル化されているｍＲＮＡによってコードされるタンパク質を発現する細胞の％と、が示される。 様々な異なるイオン化可能な脂質（アミノ脂質）（記載のもの）を含むＬＮＰを用いてＴ細胞へのトランスフェクションをｉｎ ｖｉｔｒｏで行った結果を示し、ＬＮＰが結合した細胞の％と、ＬＮＰによってカプセル化されているｍＲＮＡによってコードされるタンパク質を発現する細胞の％と、が示される。 様々な異なるステロール（記載のもの）を含むＬＮＰを用いてＴ細胞へのトランスフェクションをｉｎ ｖｉｔｒｏで行った結果を示し、ＬＮＰが結合した細胞の％と、ＬＮＰによってカプセル化されているｍＲＮＡによってコードされるタンパク質を発現する細胞の％と、が示される。 様々な異なるステロール（記載のもの）を含むＬＮＰを用いてＴ細胞へのトランスフェクションをｉｎ ｖｉｔｒｏで行った結果を示し、ＬＮＰが結合した細胞の％と、ＬＮＰによってカプセル化されているｍＲＮＡによってコードされるタンパク質を発現する細胞の％と、が示される。 様々な異なるリン脂質（記載のもの）を含むＬＮＰを用いてＴ細胞へのトランスフェクションをｉｎ ｖｉｔｒｏで行った結果を示し、ＬＮＰが結合した細胞の％と、ＬＮＰによってカプセル化されているｍＲＮＡによってコードされるタンパク質を発現する細胞の％と、が示される。 様々な異なるＰＥＧ脂質（記載のもの）を含むＬＮＰを用いてＴ細胞へのトランスフェクションをｉｎ ｖｉｔｒｏで行った結果を示し、ＬＮＰが結合した細胞の％と、ＬＮＰによってカプセル化されているｍＲＮＡによってコードされるタンパク質を発現する細胞の％と、が示される。 様々な異なるＰＥＧ脂質（記載のもの）を含むＬＮＰを用いてＴ細胞へのトランスフェクションをｉｎ ｖｉｔｒｏで行った結果を示し、ＬＮＰが結合した細胞の％と、ＬＮＰによってカプセル化されているｍＲＮＡによってコードされるタンパク質を発現する細胞の％と、が示される。 様々な異なるＰＥＧ脂質（記載のもの）を含むＬＮＰを用いてＴ細胞へのトランスフェクションをｉｎ ｖｉｔｒｏで行った結果を示し、ＬＮＰが結合した細胞の％と、ＬＮＰによってカプセル化されているｍＲＮＡによってコードされるタンパク質を発現する細胞の％と、が示される。 様々な異なるＬＮＰ組成（記載のもの）を有するＬＮＰを用いてＴ細胞へのトランスフェクションをｉｎ ｖｉｔｒｏで行った結果を示し、ＬＮＰが結合した細胞の％と、ＬＮＰによってカプセル化されているｍＲＮＡによってコードされるタンパク質を発現する細胞の％と、が示される。 様々な異なるＬＮＰ組成（記載のもの）を有するＬＮＰを用いてＴ細胞へのトランスフェクションをｉｎ ｖｉｔｒｏで行った結果を示し、ＬＮＰが結合した細胞の％と、ＬＮＰによってカプセル化されているｍＲＮＡによってコードされるタンパク質を発現する細胞の％と、が示される。 様々な異なるＬＮＰ組成（記載のもの）を有するＬＮＰを用いてＴ細胞へのトランスフェクションをｉｎ ｖｉｔｒｏで行った結果を示し、ＬＮＰが結合した細胞の％と、ＬＮＰによってカプセル化されているｍＲＮＡによってコードされるタンパク質を発現する細胞の％と、が示される。 様々な異なるＬＮＰ組成（記載のもの）を有するＬＮＰを用いてＴ細胞へのトランスフェクションをｉｎ ｖｉｔｒｏで行った結果を示し、ＬＮＰが結合した細胞の％と、ＬＮＰによってカプセル化されているｍＲＮＡによってコードされるタンパク質を発現する細胞の％と、が示される。 様々な異なるステロール（記載のもの）を含むＬＮＰを用いてＴ細胞へのトランスフェクションをｉｎ ｖｉｔｒｏで行った結果を示し、ＬＮＰが結合した細胞の％と、ＬＮＰによってカプセル化されているｍＲＮＡによってコードされるタンパク質を発現する細胞の％と、が示される。 ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡがカプセル化された異なるＬＮＰ組成物を静脈内注射してｉｎ ｖｉｖｏ処理したマウスから得られたＣＤ３＋脾臓Ｔ細胞をフローサイトメトリーによって分析した結果を示す棒グラフである。 様々な異なるイオン化可能な脂質（アミノ脂質）（記載のもの）を含むＬＮＰを用いて単球へのトランスフェクションをｉｎ ｖｉｔｒｏで行った結果を示し、ＬＮＰが結合した細胞の％と、ＬＮＰによってカプセル化されているｍＲＮＡによってコードされるタンパク質を発現する細胞の％と、が示される。 様々な異なるステロール（記載のもの）を含むＬＮＰを用いて単球へのトランスフェクションをｉｎ ｖｉｔｒｏで行った結果を示し、ＬＮＰが結合した細胞の％と、ＬＮＰによってカプセル化されているｍＲＮＡによってコードされるタンパク質を発現する細胞の％と、が示される。 様々な異なるリン脂質（記載のもの）を含むＬＮＰを用いて単球へのトランスフェクションをｉｎ ｖｉｔｒｏで行った結果を示し、ＬＮＰが結合した細胞の％と、ＬＮＰによってカプセル化されているｍＲＮＡによってコードされるタンパク質を発現する細胞の％と、が示される。 ｉｎ ｖｉｔｒｏでのインキュベート時に、異なるＬＮＰ組成物によってカプセル化されたｍＲＮＡを発現する単球の平均パーセントを示す棒グラフである。 Ａ〜Ｂは、ヒトＥＰＯ（ｈｕＥＰＯ）をコードするｍＲＮＡがＬＮＰ１（化合物Ｘ／ＰＥＧ ＤＭＧ／コレステロール）またはＬＮＰ３（化合物Ｘ／ベータ−シトステロール／コレステロール／ＰＥＧ ＤＭＧ）のいずれかにカプセル化されたものを用いてＴ細胞へのトランスフェクションを行った後にＥＬＩＳＡによって測定したｈｕＥＰＯ濃度（ｍＩＵ／ｍＬで示される）を示す棒グラフである。Ａは、１：５０希釈した上清をＥＬＩＳＡによって測定した結果を示す。Ｂは、１：２５０希釈した上清をＥＬＩＳＡによって測定した結果を示す。 Ｆｏｘｐ３をコードするｍＲＮＡがＬＮＰ１またはＬＮＰ３のいずれかにカプセル化されたものを用いてＴ細胞へのトランスフェクションを行った後にＦｏｘｐ３タンパク質を発現するＣＤ３＋Ｔ細胞のパーセントを示す棒グラフである。ＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡがＬＮＰ３にカプセル化されたものを用いて行ったＴ細胞へのトランスフェクションも正の対照として示される。 様々な異なるイオン化可能な脂質（アミノ脂質）（記載のもの）を含むＬＮＰを用いてＴ細胞へのトランスフェクションをｉｎ ｖｉｔｒｏで行った結果を示し、ＬＮＰが結合した細胞の％と、ＬＮＰによってカプセル化されているｍＲＮＡによってコードされるタンパク質を発現する細胞の％と、が示される。 様々な異なるイオン化可能な脂質（アミノ脂質）（記載のもの）を含むＬＮＰを用いてＴ細胞へのトランスフェクションをｉｎ ｖｉｔｒｏで行った結果を示し、ＬＮＰが結合した細胞の％と、ＬＮＰによってカプセル化されているｍＲＮＡによってコードされるタンパク質を発現する細胞の％と、が示される。 様々な異なるイオン化可能な脂質（アミノ脂質）（記載のもの）を含むＬＮＰを用いてＴ細胞へのトランスフェクションをｉｎ ｖｉｔｒｏで行った結果を示し、ＬＮＰが結合した細胞の％と、ＬＮＰによってカプセル化されているｍＲＮＡによってコードされるタンパク質を発現する細胞の％と、が示される。 様々な異なるイオン化可能な脂質（アミノ脂質）（記載のもの）を含むＬＮＰを用いてＴ細胞へのトランスフェクションをｉｎ ｖｉｔｒｏで行った結果を示し、ＬＮＰが結合した細胞の％と、ＬＮＰによってカプセル化されているｍＲＮＡによってコードされるタンパク質を発現する細胞の％と、が示される。 様々な異なるイオン化可能な脂質（アミノ脂質）（記載のもの）を含むＬＮＰを用いてＴ細胞へのトランスフェクションをｉｎ ｖｉｔｒｏで行った結果を示し、ＬＮＰが結合した細胞の％と、ＬＮＰによってカプセル化されているｍＲＮＡによってコードされるタンパク質を発現する細胞の％と、が示される。 様々な異なるステロール（記載のもの）を含むＬＮＰを用いてＴ細胞へのトランスフェクションをｉｎ ｖｉｔｒｏで行った結果を示し、ＬＮＰが結合した細胞の％と、ＬＮＰによってカプセル化されているｍＲＮＡによってコードされるタンパク質を発現する細胞の％と、が示される。 様々な異なるステロール（記載のもの）を含むＬＮＰを用いてＴ細胞へのトランスフェクションをｉｎ ｖｉｔｒｏで行った結果を示し、ＬＮＰが結合した細胞の％と、ＬＮＰによってカプセル化されているｍＲＮＡによってコードされるタンパク質を発現する細胞の％と、が示される。 様々な異なるステロール（記載のもの）を含むＬＮＰを用いてＴ細胞へのトランスフェクションをｉｎ ｖｉｔｒｏで行った結果を示し、ＬＮＰが結合した細胞の％と、ＬＮＰによってカプセル化されているｍＲＮＡによってコードされるタンパク質を発現する細胞の％と、が示される。 様々な異なるステロール（記載のもの）を含むＬＮＰを用いてＴ細胞へのトランスフェクションをｉｎ ｖｉｔｒｏで行った結果を示し、ＬＮＰが結合した細胞の％と、ＬＮＰによってカプセル化されているｍＲＮＡによってコードされるタンパク質を発現する細胞の％と、が示される。 様々な異なるステロール（記載のもの）を含むＬＮＰを用いてＴ細胞へのトランスフェクションをｉｎ ｖｉｔｒｏで行った結果を示し、ＬＮＰが結合した細胞の％と、ＬＮＰによってカプセル化されているｍＲＮＡによってコードされるタンパク質を発現する細胞の％と、が示される。 様々な異なるステロール（記載のもの）を含むＬＮＰを用いてＴ細胞へのトランスフェクションをｉｎ ｖｉｔｒｏで行った結果を示し、ＬＮＰが結合した細胞の％と、ＬＮＰによってカプセル化されているｍＲＮＡによってコードされるタンパク質を発現する細胞の％と、が示される。 様々な異なるステロール（記載のもの）を含むＬＮＰを用いてＴ細胞へのトランスフェクションをｉｎ ｖｉｔｒｏで行った結果を示し、ＬＮＰが結合した細胞の％と、ＬＮＰによってカプセル化されているｍＲＮＡによってコードされるタンパク質を発現する細胞の％と、が示される。 様々な異なるリン脂質（記載のもの）を含むＬＮＰを用いてＴ細胞へのトランスフェクションをｉｎ ｖｉｔｒｏで行った結果を示し、ＬＮＰが結合した細胞の％と、ＬＮＰによってカプセル化されているｍＲＮＡによってコードされるタンパク質を発現する細胞の％と、が示される。 様々な異なるＰＥＧ脂質（記載のもの）を含むＬＮＰを用いてＴ細胞へのトランスフェクションをｉｎ ｖｉｔｒｏで行った結果を示し、ＬＮＰが結合した細胞の％と、ＬＮＰによってカプセル化されているｍＲＮＡによってコードされるタンパク質を発現する細胞の％と、が示される。 様々な異なる脂質製剤（記載のもの）を含むＬＮＰを用いてＴ細胞へのトランスフェクションをｉｎ ｖｉｔｒｏで行った結果を示し、ＬＮＰが結合した細胞の％と、ＬＮＰによってカプセル化されているｍＲＮＡによってコードされるタンパク質を発現する細胞の％と、が示される。 様々な異なる脂質製剤（記載のもの）を含むＬＮＰを用いてＴ細胞へのトランスフェクションをｉｎ ｖｉｔｒｏで行った結果を示し、ＬＮＰが結合した細胞の％と、ＬＮＰによってカプセル化されているｍＲＮＡによってコードされるタンパク質を発現する細胞の％と、が示される。 様々な異なる脂質製剤（記載のもの）を含むＬＮＰを用いてＴ細胞へのトランスフェクションをｉｎ ｖｉｔｒｏで行った結果を示し、ＬＮＰが結合した細胞の％と、ＬＮＰによってカプセル化されているｍＲＮＡによってコードされるタンパク質を発現する細胞の％と、が示される。 様々な異なる脂質製剤（記載のもの）を含むＬＮＰを用いてＴ細胞へのトランスフェクションをｉｎ ｖｉｔｒｏで行った結果を示し、ＬＮＰが結合した細胞の％と、ＬＮＰによってカプセル化されているｍＲＮＡによってコードされるタンパク質を発現する細胞の％と、が示される。
本開示は、免疫細胞送達増強脂質を含み、免疫細胞送達増強脂質を含まない脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）と比較して免疫細胞への薬剤（複数可）の送達を向上させる脂質ベースの改良型組成物、具体的には免疫細胞送達ＬＮＰを提供する。様々な態様において、本開示は、免疫細胞送達増強脂質を含む改良型のＬＮＰ（免疫細胞または免疫細胞集団に送達するための薬剤（複数可）を含むＬＮＰなど）、免疫細胞または免疫細胞集団への薬剤（例えば、核酸分子）の送達を増進するための方法、免疫細胞活性を調節することで恩恵が得られると想定される対象にそのようなＬＮＰを送達する方法、及びそのような対象を治療する方法、を提供する。本開示は、ＬＮＰのある特定の脂質成分が、当該ＬＮＰに存在すると、ＬＮＰと免疫細胞との結合、及び免疫細胞への薬剤の送達を増進するという発見に少なくとも部分的には基づくものであり、こうした増進は、例えば、免疫細胞が核酸分子を発現することによって示される。本開示のＬＮＰによって免疫細胞への送達増進が生じることは、免疫細胞におけるｍＲＮＡの発現増加を測定することによって実証されているが、送達される核酸分子に応じて、既存の発現をノックダウンする（すなわち、低減する）ことでも同じ手法を実証することができる。さらに、このモデル系ではｍＲＮＡを使用することで免疫細胞への送達増進が実証されているが、本開示の免疫細胞送達ＬＮＰを使用すれば今や他の薬剤も免疫細胞に送達できることを当業者なら認識するであろう。そのような薬剤は当該技術分野で知られており、一実施形態では、薬剤は、核酸分子を含むか、または核酸分子からなるものである。具体的には、ある特定の核酸分子は潜在的に治療に有用であることが知られており、症例によっては、そのような核酸分子によってコードされるタンパク質またはそうした核酸分子自体が現在治療に使用されている。本開示の免疫細胞増進ＬＮＰによって進展が得られることを踏まえると、治療を改善することが可能である。したがって、一実施形態では、薬剤が核酸分子であるとき、核酸分子の送達増進が得られることで、免疫細胞の活性化または活性を調節する（例えば、増加させるまたは低減する）ことができる。いくつかの態様では、薬剤は、ｍＲＮＡ、ＲＮＡｉ、ｄｓＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉｒ、アンタゴｍｉｒ、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９、ｓｓＤＮＡ、及びＤＮＡからなる群から選択される核酸分子である。
特定の実施形態では、免疫細胞送達ＬＮＰは、免疫細胞送達増強脂質を含まないＬＮＰと比較して免疫細胞（Ｔ細胞、Ｂ細胞、単球、及び樹状細胞など）への薬剤（例えば、核酸分子）の送達を増進する。一実施形態では、目的タンパク質をコードするｍＲＮＡが免疫細胞送達増強脂質を含む免疫細胞送達ＬＮＰによって送達されると、免疫細胞送達増強脂質を含まないＬＮＰと比較して当該ｍＲＮＡの発現が免疫細胞において増進することが実証されている。免疫細胞送達増進ＬＮＰと結合した薬剤（例えば、当該ＬＮＰにカプセル化された薬剤）は免疫細胞に送達されることが、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏで実証されており、この実証は、例えば、免疫細胞増進ＬＮＰに存在するｍＲＮＡ分子によってコードされるタンパク質が発現することをもってなされている。
本明細書に示されるように、免疫細胞送達増進ＬＮＰを用いることで、免疫細胞におけるタンパク質の発現が少なくとも約２倍に増加することが示されている。免疫細胞への送達は、ｉｎ ｖｉｖｏでも実証されている。予想外なことに、カプセル化されたｍＲＮＡは、本開示のＬＮＰの単回静脈内注射後に、脾臓Ｔ細胞の少なくとも約１５％、脾臓Ｂ細胞の少なくとも約２５％、及び樹状細胞の少なくとも約４０％にｉｎ ｖｉｖｏで送達されることが実証された。カプセル化されたｍＲＮＡが骨髄細胞の５％超に送達されることもｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏで実証されている。免疫細胞送達増強脂質を含むＬＮＰを使用して本明細書に示される送達レベルは、ｉｎ ｖｉｖｏでの免疫療法を可能にするものである。本開示は、がん、感染性疾患、ワクチン接種、及び自己免疫疾患を含む、様々な臨床的状況において、免疫応答の上方制御及び下方制御を含めて、様々な免疫応答を調節するための方法を提供する。
本開示のＬＮＰは、先行技術によるＬＮＰと比較してＴ細胞への送達増進を生じさせ、それによって、養子移入のためのＴ細胞をｅｘ ｖｉｖｏで増殖させることに伴う問題が回避されるため、内在性のＴ細胞を標的とする上で特に有用である。ＬＮＰは、炎症部位（腫瘍など）に免疫細胞を輸送するタンパク質をコードする核酸分子（例えば、ｍＲＮＡ）を含み得る。したがって、本開示は、Ｔ細胞を修飾エフェクター細胞もしくは修飾ヘルパー細胞として利用するか、またはＴ細胞をがん細胞標的として利用し、それによって免疫応答を調節するための方法を提供する。別の実施形態では、本開示の免疫細胞増進ＬＮＰを使用してＴ細胞を改変することで、抑制されており、及び／または免疫抑制を媒介する細胞へと分化させることができる。ＬＮＰが核酸分子を効率的にＴ細胞集団に送達することが示されたことはこれまでになく、Ｔ細胞がＬＮＰを効率的に取り込むことが示されたこともこれまでになかったことから、Ｔ細胞へのＬＮＰの送達増進、具体的にはｉｎ ｖｉｖｏでの送達増進は、予想外のことであった。
いずれかの特定の機序または理論によって拘束されることは意図しないが、本開示のＬＮＰによって免疫細胞への核酸分子の送達増進が生じる理由は、免疫細胞送達増強脂質（例えば、コレステロール類似体もしくはアミノ脂質またはそれらの組み合わせ）が有効量で存在することによるものであると考えられ、当該免疫細胞送達増強脂質は、ＬＮＰに存在すると、当該免疫細胞送達増強脂質を含まないＬＮＰと比較して、細胞との結合及び／または細胞への取り込み、内部移行、細胞内輸送及び／または細胞内プロセシング、及び／またはエンドソーム脱出を増進することによって機能し得、及び／または免疫細胞による認識及び／または免疫細胞への結合を増進し得る。さらに、ＬＮＰが免疫細胞に取り込まれ／免疫細胞と結合するには血清が絶対的に必要であることがｉｎ ｖｉｔｒｏの実験において観測された。様々な血清成分を枯渇させてみたところ、免疫細胞によるＬＮＰの取り込みには補体成分１ｑ（Ｃ１ｑ）が関与するものと決定付けられた。したがって、いずれかの特定の機序または理論によって拘束されることは意図しないが、一実施形態では、本開示の免疫細胞送達増強脂質は、Ｃ１ｑに結合するか、またはそのような脂質を含むＬＮＰがＣ１ｑに結合することを促進する。したがって、免疫細胞に核酸分子を送達するために本開示のＬＮＰをｉｎ ｖｉｔｒｏで使用する場合については、Ｃ１ｑを含む培養条件が使用される（例えば、血清を含む培地が使用されるか、または血清を含まない培地に外来性のＣ１ｑが添加される）。本開示のＬＮＰがｉｎ ｖｉｖｏで使用される場合については、Ｃ１ｑに対する要件は、内在性のＣ１ｑによって満たされる。
標的化部分を利用することで免疫細胞へのＬＮＰの標的化を達成しようとする試みが以前に行われている（例えば、Ｓａｔｓｅｐｉｎ，Ｔ．，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎａｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ２０１６，Ｖｏｌ．１１：３０７７−３０８６を参照のこと）。本明細書に記載のＬＮＰは、そのような標的化部分を利用することなく免疫細胞への送達を増進する。そのような標的化部分を利用すると望ましくない作用（例えば、細胞表面受容体のアゴニズムまたはアンタゴニズム）が生じる可能性があるが、本開示のＬＮＰは、カプセル化された核酸分子の送達を改善し、それによって、そのような標的化部分の必要性及びその望ましくない作用を回避する。したがって、いくつかの実施形態では、脂質ベースの組成物は、免疫細胞への標的化部分、すなわち当該組成物を免疫細胞へと指向化する部分を含まない。いくつかの実施形態では、脂質ベースの組成物は、免疫細胞マーカーに対する特異性を有する抗体を含まない。いくつかの実施形態では、脂質ベースの組成物は、免疫細胞へと当該組成物を標的化するリガンド（例えば、Ｎ−アセチルガラクトサミンまたはヒアルロナン）を含まない。一実施形態では、脂質ベースの組成物は、標的化部分（例えば、ＣＡＲ）をコードするｍＲＮＡを含むが、当該ＬＮＰが単に当該標的化部分に起因して免疫細胞に結合することはない。むしろ、一実施形態では、本開示の免疫細胞送達増進ＬＮＰの場合、免疫細胞送達増強脂質がＬＮＰに存在することによって、ＬＮＰと免疫細胞との結合、及び免疫細胞への薬剤の送達が、免疫細胞送達増強脂質を含まない対照ＬＮＰと比較して増進する。
薬剤（例えば、ｍＲＮＡを含む核酸分子）を効率的に免疫細胞に送達する能力は、免疫細胞による免疫応答の調節に有用であり、こうした調節は、例えば、免疫応答（例えば、がん抗原または感染性疾患抗原に対するもの）を亢進させるか、あるいは免疫細胞における免疫抑制を低減すること（例えば、エフェクター機能を回復もしくは増進するためのもの、または疲弊Ｔ細胞（ＰＤ−１を発現するＴ細胞など）を強化するために免疫チェックポイント阻害を調節することによるもの）によって行われる。別の実施形態では、免疫細胞の活性化を低減するか、または免疫細胞を免疫寛容化する核酸分子を免疫細胞（例えば、骨髄系細胞、樹状細胞、Ｔ細胞、及び／またはＢ細胞）に送達することで、例えば、自己免疫を低減することができる。免疫応答は、局所的または全身的に調節することができる（こうした調節は、例えば、１つ以上の免疫細胞の活性または機能を改変することによって行われる）。さらに、ＬＮＰの送達先の細胞、あるいはそのような細胞と相互作用する細胞及び／またはそのような細胞によって影響を受ける細胞において細胞の活性及び／または機能を改変することができる（こうした改変は、例えば、オートクリン様式またはパラクリン様式で行われる）。
免疫細胞送達ＬＮＰは、例えば、天然起源の分子または操作された分子の発現を調節する核酸分子の送達に有用である。一実施形態では、可溶性／分泌タンパク質（例えば、天然起源の可溶性分子、あるいは機能／半減期／及び／または安定性の改善が促進されるように修飾または操作されている可溶性分子）の発現が調節される。別の実施形態では、細胞内タンパク質（例えば、天然起源の細胞内タンパク質、または機能が改変されている操作もしくは修飾された細胞内タンパク質）の発現が調節される。別の実施形態では、膜貫通型タンパク質（例えば、天然起源の可溶性分子、または機能が改変されている修飾もしくは操作された可溶性分子）の発現が調節される。
一実施形態では、核酸分子は、免疫細胞に天然に発現しないタンパク質（例えば、異種タンパク質または修飾タンパク質）をコードし得る。一実施形態では、核酸分子は、免疫細胞に天然に発現するタンパク質をコードまたはノックダウンし得る。
例えば、いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、可溶性／分泌タンパク質、膜貫通型タンパク質、または細胞内タンパク質をコードするｍＲＮＡの送達増進及び免疫細胞における発現増進に有用である。膜貫通型タンパク質は、例えば、免疫細胞に新たな結合特異性を付与するものであり得る。細胞内分子は、例えば、細胞シグナル伝達または細胞運命を調節するものであり得る。例えば、発現され得るタンパク質の例としては、サイトカイン、ケモカイン、共刺激因子、Ｔ細胞受容体（ＴｃＲ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、動員因子、転写因子、エフェクター分子、ＭＨＣ分子、酵素、またはそれらの組み合わせが挙げられる。
他の態様では、本開示のＬＮＰは、細胞傷害性を腫瘍細胞へと再指向化するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードするｍＲＮＡを発現するように免疫エフェクター細胞を遺伝子操作する上で有用である。ＣＡＲは、修飾された膜貫通型タンパク質であり、特定の標的リガンドまたは標的抗原に結合するリガンド特異的または抗原特異的な認識ドメインを含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、がん抗原に結合するＣＡＲをコードするｍＲＮＡをＴ細胞に送達して当該がん抗原に対する免疫応答を亢進させる上で有用である。例えば、ＣＤ３３＋急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞に対するＴ細胞応答を、抗ＣＤ３３ＣＡＲをコードするｍＲＮＡを含む本開示のＬＮＰを投与することによって誘導または亢進させることができる。
本開示は、同じ薬剤（例えば、異なるＬＮＰに含められる）または異なる薬剤を送達するために複数のＬＮＰを併用するための方法も提供し、こうした薬剤は、例えば、核酸分子を免疫細胞または異なる細胞集団に送達するために、例えば同じＬＮＰまたは異なるＬＮＰ（例えば、免疫細胞送達増進ＬＮＰであるもの、または免疫細胞送達増進ＬＮＰではないもの）に含められる核酸分子である。
免疫細胞送達ＬＮＰ
免疫細胞送達ＬＮＰは、当該ＬＮＰを用いることで、対照ＬＮＰ（例えば、免疫細胞送達増強脂質を含まないＬＮＰ）と比較して免疫細胞への薬剤の送達が増加するという点において特徴付けることができる。具体的には、一実施形態では、免疫細胞送達ＬＮＰを用いることで、対照ＬＮＰと比較してＬＮＰが免疫細胞と結合するパーセントが増加する（例えば、２倍以上に増加する）か、または対照ＬＮＰと比較してＬＮＰによって輸送される薬剤を発現する免疫細胞（例えば、ＬＮＰと結合／によってカプセル化されたｍＲＮＡによってコードされるタンパク質を発現する免疫細胞）のパーセントが増加する（例えば、２倍以上に増加する）。別の実施形態では、免疫細胞送達ＬＮＰを用いることで、対照ＬＮＰ（例えば、免疫細胞送達増強脂質を含まないＬＮＰ）と比較してＣ１ｑへの結合が増加し、及び／またはＣ１ｑと結合したＬＮＰが免疫細胞に取り込まれること（例えば、オプソニン化を介して生じる）が増加する。
別の実施形態では、免疫細胞送達ＬＮＰを用いることで、対照ＬＮＰと比較して免疫細胞への薬剤（例えば、核酸分子）の送達が増加する。一実施形態では、免疫細胞送達ＬＮＰを用いることで、対照ＬＮＰと比較してＴ細胞への核酸分子剤の送達が増加する。一実施形態では、免疫細胞送達ＬＮＰを用いることで、対照ＬＮＰと比較してＢ細胞への核酸分子剤の送達が増加する。一実施形態では、免疫細胞送達ＬＮＰを用いることで、対照ＬＮＰと比較してＢ細胞への核酸分子剤の送達が増加する。一実施形態では、免疫細胞送達ＬＮＰを用いることで、対照ＬＮＰと比較して骨髄系細胞への核酸分子剤の送達が増加する。
一実施形態では、核酸分子がｍＲＮＡであるとき、免疫細胞への核酸剤の送達の増加は、対照ＬＮＰと比較して免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）においてｍＲＮＡによってコードされるタンパク質分子の発現をＬＮＰが少なくとも約２倍超に高める能力によって測定することができる。
免疫細胞送達ＬＮＰは、（ｉ）イオン化可能な脂質、（ｉｉ）ステロールまたは他の構造脂質、（ｉｉｉ）非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質、（ｉｖ）ＰＥＧ脂質、ならびに（ｖ）ＬＮＰにカプセル化され、及び／またはＬＮＰと結合した薬剤（例えば、核酸分子）を含み、免疫細胞送達ＬＮＰにおける（ｉ）イオン化可能な脂質または（ｉｉ）構造脂質もしくはステロール、のうちの１つ以上は、有効量の免疫細胞送達増強脂質を含む。
別の実施形態では、本開示の免疫細胞送達脂質ナノ粒子は、
（ｉ）イオン化可能な脂質、
（ｉｉ）ステロールまたは他の構造脂質、
（ｉｉｉ）非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質、
（ｉｖ）免疫細胞に送達するための薬剤、及び
（ｖ）任意選択のＰＥＧ脂質
を含み、
（ｉ）イオン化可能な脂質または（ｉｉ）ステロールもしくは他の構造脂質、のうちの１つ以上は、免疫細胞への脂質ナノ粒子の送達を増進する上で有効な量で免疫細胞送達増強脂質を含む。一実施形態では、送達増進は、免疫細胞送達増強脂質を含まない脂質ナノ粒子と比較したときのものである。別の実施形態では、送達増進は、適切な対照と比較したときのものである。
別の実施形態では、本開示の免疫細胞送達脂質ナノ粒子は、
（ｉ）イオン化可能な脂質、
（ｉｉ）ステロールまたは他の構造脂質、
（ｉｉｉ）非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質、
（ｉｖ）免疫細胞に送達するための薬剤、及び
（ｖ）任意選択のＰＥＧ脂質
を含み、
（ｉ）イオン化可能な脂質、または（ｉｉ）ステロールもしくは他の構造脂質、または（ｉｉｉ）非カチオン性ヘルパー脂質もしくはリン脂質、または（ｖ）ＰＥＧ脂質、のうちの１つ以上は、Ｃ１ｑに結合するＣ１ｑ結合脂質であるか、またはＣ１ｑ結合脂質を含まない対照ＬＮＰと比較してＣ１ｑへのＬＮＰの結合を促進する（例えば、増加させる、刺激する、増進する）Ｃ１ｑ結合脂質である。
別の実施形態では、本開示の免疫細胞送達脂質ナノ粒子は、
（ｉ）イオン化可能な脂質、
（ｉｉ）ステロールまたは他の構造脂質、
（ｉｉｉ）非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質、
（ｉｖ）免疫細胞に送達するための薬剤、及び
（ｖ）任意選択のＰＥＧ脂質
を含み、
（ｉ）イオン化可能な脂質または（ｉｉ）ステロールもしくは他の構造脂質、のうちの１つ以上は、Ｃ１ｑに結合するか、または対照ＬＮＰ（例えば、（ｉ）イオン化可能な脂質または（ｉｉ）ステロールもしくは他の構造脂質を含まないＬＮＰ）と比較してＣ１ｑへのＬＮＰの結合を促進する（例えば、増加させる、刺激する、増進する）。
別の態様では、本開示は、免疫細胞送達脂質をスクリーニングする方法を提供し、この方法は、被験免疫細胞送達脂質を含む被験ＬＮＰをＣ１ｑと接触させること、及びＣ１ｑへの結合を測定すること、を含み、被験免疫細胞送達脂質は、それがＣ１ｑに結合するか、またはそれを含むＬＮＰがＣ１ｑに結合することを促進する（例えば、増加させる、刺激する、増進する）とき、免疫細胞送達脂質として選択される。
ＬＮＰの脂質含量
前述のように、脂質に関して、免疫細胞送達ＬＮＰは、（ｉ）イオン化可能な脂質、（ｉｉ）ステロールまたは他の構造脂質、（ｉｉｉ）非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質、（ｉｖ）ＰＥＧ脂質を含み、免疫細胞送達ＬＮＰにおける（ｉ）イオン化可能な脂質または（ｉｉ）構造脂質もしくはステロール、のうちの１つ以上は、有効量の免疫細胞送達増強脂質を含む。こうしたカテゴリーの脂質は、以下により詳細に示される。
（ｉ）イオン化可能な脂質
本開示の脂質ナノ粒子は、イオン化可能な脂質を１つ以上含む。ある特定の実施形態では、本開示のイオン化可能な脂質は、中心アミン部分と、少なくとも１つの生分解性基と、を含む。本明細書に記載のイオン化可能な脂質は、哺乳動物の細胞または臓器に核酸分子を送達するための本開示の脂質ナノ粒子において有利に使用することができる。以下に示されるイオン化可能な脂質の構造は、当該イオン化可能な脂質を本発明の他の脂質と区別するために接頭辞Ｉを含む。
本発明の第１の態様では、本明細書に記載の化合物は、式（Ｉ Ｉ）：
Figure 2021512090
 の化合物もしくはそのＮ−オキシド、またはその塩もしくは異性体であり、式中：
Ｒ１は、Ｃ５−３０アルキル、Ｃ５−２０アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及び−Ｒ”Ｍ’Ｒ’からなる群から選択され；
Ｒ２及びＲ３は、Ｈ、Ｃ１−１４アルキル、Ｃ２−１４アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及び−Ｒ＊ＯＲ”からなる群から独立して選択されるか、またはＲ２及びＲ３は、それらが結合している原子と一緒になって複素環もしくは炭素環を形成し；
Ｒ４は、水素、Ｃ３−６炭素環、−（ＣＨ２）ｎＱ、−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、−（ＣＨ２）ｏＣ（Ｒ１０）２（ＣＨ２）ｎ−ｏＱ、−ＣＨＱＲ、−ＣＱ（Ｒ）２、及び非置換のＣ１−６アルキルからなる群から選択され、Ｑは、炭素環、複素環、−ＯＲ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＸ３、−ＣＸ２Ｈ、−ＣＸＨ２、−ＣＮ、−Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｒ８、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＲ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（ＯＲ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（＝ＮＲ９）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＯＲ、及び−Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲから選択され、各々のｏは、１、２、３、及び４から独立して選択され、各々のｎは、１、２、３、４、及び５から独立して選択され；
各々のＲ５は、ＯＨ、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、及びＨからなる群から独立して選択され；
各々のＲ６は、ＯＨ、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、及びＨからなる群から独立して選択され；
Ｍ及びＭ’は、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−Ｍ”−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｓ）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ−Ｓ−、アリール基、及びヘテロアリール基から独立して選択され、Ｍ”は結合、Ｃ１−１３アルキル、またはＣ２−１３アルケニルであり；
Ｒ７は、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、及びＨからなる群から選択され；
Ｒ８は、Ｃ３−６炭素環及び複素環からなる群から選択され；
Ｒ９は、Ｈ、ＣＮ、ＮＯ２、Ｃ１−６アルキル、−ＯＲ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ）２、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ３−６炭素環及び複素環からなる群から選択され；
Ｒ１０は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１−３アルキル、及びＣ２−３アルケニルからなる群から選択され；
各々のＲは、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、（ＣＨ２）ｑＯＲ＊、及びＨからなる群から独立して選択され、
各々のｑは、１、２、及び３から独立して選択され；
各々のＲ’は、Ｃ１−１８アルキル、Ｃ２−１８アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及びＨからなる群から独立して選択され；
各々のＲ”は、Ｃ３−１５アルキル及びＣ３−１５アルケニルからなる群から独立して選択され；
各々のＲ＊は、Ｃ１−１２アルキル及びＣ２−１２アルケニルからなる群から独立して選択され；
各々のＹは、独立してＣ３−６炭素環であり；
各々のＸは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩからなる群から独立して選択され；ならびに、
ｍは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、及び１３から選択され；Ｒ４が−（ＣＨ２）ｎＱ、−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、−ＣＨＱＲ、または−ＣＱ（Ｒ）２であるとき、（ｉ）ｎが１、２、３、４、もしくは５であるときにＱは、−Ｎ（Ｒ）２でないか、または（ｉｉ）ｎが１もしくは２であるときにＱは、５、６、もしくは７員のヘテロシクロアルキルではない。
別の態様では、本開示は、式（ＩＩＩ）：
Figure 2021512090
 の化合物もしくはそのＮ−オキシド、またはその塩もしくは異性体に関し、式中、
Ｒ１は、Ｃ５−３０アルキル、Ｃ５−２０アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及び−Ｒ”Ｍ’Ｒ’からなる群から選択され、
Ｒ２及びＲ３は、Ｈ、Ｃ１−１４アルキル、Ｃ２−１４アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及び−Ｒ＊ＯＲ”からなる群から独立して選択されるか、またはＲ２及びＲ３は、それらが結合している原子と一緒になって複素環もしくは炭素環を形成し、
Ｒ４は、水素、Ｃ３−６炭素環、−（ＣＨ２）ｎＱ、−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、−（ＣＨ２）ｏＣ（Ｒ１０）２（ＣＨ２）ｎ−ｏＱ、−ＣＨＱＲ、−ＣＱ（Ｒ）２、及び非置換のＣ１−６アルキルからなる群から選択され、Ｑは、炭素環、複素環、−ＯＲ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＸ３、−ＣＸ２Ｈ、−ＣＸＨ２、−ＣＮ、−Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、Ｎ（Ｒ）Ｒ８、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＲ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（ＯＲ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（＝ＮＲ９）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＯＲ、及び−Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲから選択され、それぞれのｏは、１、２、３、及び４から独立して選択され、それぞれのｎは、１、２、３、４、及び５から独立して選択され、
Ｒｘは、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、−（ＣＨ２）ｖＯＨ、及び−（ＣＨ２）ｖＮ（Ｒ）２からなる群から選択され、
ｖは、１、２、３、４、５、及び６から選択され、
それぞれのＲ５は、ＯＨ、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、及びＨからなる群から独立して選択され、
それぞれのＲ６は、ＯＨ、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、及びＨからなる群から独立して選択され、
Ｍ及びＭ’は、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−Ｍ”−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｓ）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ−Ｓ−、アリール基、及びヘテロアリール基から独立して選択され、Ｍ”は、結合、Ｃ１−１３アルキル、またはＣ２−１３アルケニルであり、
Ｒ７は、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
Ｒ８は、Ｃ３−６炭素環及び複素環からなる群から選択され、
Ｒ９は、Ｈ、ＣＮ、ＮＯ２、Ｃ１−６アルキル、−ＯＲ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ）２、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ３−６炭素環、及び複素環からなる群から選択され、
Ｒ１０は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１−３アルキル、及びＣ２−３アルケニルからなる群から選択され；
それぞれのＲは、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、（ＣＨ２）ｑＯＲ＊、及びＨからなる群から独立して選択され、
それぞれのｑは、１、２、及び３から独立して選択され、
それぞれのＲ’は、Ｃ１−１８アルキル、Ｃ２−１８アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及びＨからなる群から独立して選択され、
それぞれのＲ”は、Ｃ３−１５アルキル及びＣ３−１５アルケニルからなる群から独立して選択され、
それぞれのＲ＊は、Ｃ１−１２アルキル及びＣ２−１２アルケニルからなる群から独立して選択され、
それぞれのＹは、独立してＣ３−６炭素環であり、
それぞれのＸは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩからなる群から独立して選択され、
ｍは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、及び１３から選択される。
ある特定の実施形態では、式（Ｉ）の化合物のサブセットには、式（ＩＡ）：
Figure 2021512090
 の化合物もしくはそのＮ−オキシド、またはその塩もしくは異性体が含まれ、式中、ｌは、１、２、３、４、及び５から選択され；ｍは、５、６、７、８、及び９から選択され；Ｍ１は結合またはＭ’であり；Ｒ４は、水素、非置換のＣ１−３アルキル、−（ＣＨ２）ｏＣ（Ｒ１０）２（ＣＨ２）ｎ−ｏＱ、または−（ＣＨ２）ｎＱであり、Ｑは、ＯＨ、−ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｒ８、−ＮＨＣ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−ＮＨＣ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキルであり；Ｍ及びＭ’は、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−Ｍ”−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、−Ｓ−Ｓ−、アリール基、及びヘテロアリール基から独立して選択され；ならびにＲ２及びＲ３は、Ｈ、Ｃ１−１４アルキル、及びＣ２−１４アルケニルからなる群から独立して選択される。例えば、ｍは、５、７、または９である。例えば、Ｑは、ＯＨ、−ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、または−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２である。例えば、Ｑは、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、または−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒである。
ある特定の実施形態では、式（Ｉ）の化合物のサブセットには、式（ＩＢ）：
Figure 2021512090
 の化合物もしくはそのＮ−オキシド、またはその塩もしくは異性体が含まれ、全ての変数はここで定義されているものである。例えば、ｍは、５、６、７、８、及び９から選択され；Ｍ及びＭ’は、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−Ｍ”−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、−Ｓ−Ｓ−、アリール基、及びヘテロアリール基から独立して選択され；ならびにＲ２及びＲ３は、Ｈ、Ｃ１−１４アルキル、及びＣ２−１４アルケニルからなる群から独立して選択される。例えば、ｍは、５、７、または９である。ある特定の実施形態では、式（Ｉ）の化合物のサブセットには、式（ＩＩ）：
Figure 2021512090
 の化合物もしくはそのＮ−オキシド、またはその塩もしくは異性体が含まれ、ｌは、１、２、３、４、及び５から選択され、Ｍ１は、結合またはＭ’であり、Ｒ４は、水素、非置換のＣ１−３アルキル、−（ＣＨ２）ｏＣ（Ｒ１０）２（ＣＨ２）ｎ−ｏＱ、または−（ＣＨ２）ｎＱであり、ｎは、２、３、または４であり、Ｑは、ＯＨ、−ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｒ８、−ＮＨＣ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−ＮＨＣ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、ヘテロアリール、またはヘテロシクロアルキルであり、Ｍ及びＭ’は、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−Ｍ”−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、−Ｓ−Ｓ−、アリール基、及びヘテロアリール基から独立して選択され、Ｒ２及びＲ３は、Ｈ、Ｃ１−１４アルキル、及びＣ２−１４アルケニルからなる群から独立して選択される。
本開示の別の態様は、式（Ｉ ＶＩ）：
Figure 2021512090
 の化合物もしくはそのＮ−オキシド、またはその塩もしくは異性体に関し、式中、
Ｒ１は、Ｃ５−３０アルキル、Ｃ５−２０アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及び−Ｒ”Ｍ’Ｒ’からなる群から選択され、
Ｒ２及びＲ３は、Ｈ、Ｃ１−１４アルキル、Ｃ２−１４アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及び−Ｒ＊ＯＲ”からなる群から独立して選択されるか、またはＲ２及びＲ３は、それらが結合している原子と一緒になって複素環もしくは炭素環を形成し、
それぞれのＲ５は、ＯＨ、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、及びＨからなる群から独立して選択され、
それぞれのＲ６は、ＯＨ、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、及びＨからなる群から独立して選択され、
Ｍ及びＭ’は、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−Ｍ”−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｓ）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ−Ｓ−、アリール基、及びヘテロアリール基から独立して選択され、Ｍ”は、結合、Ｃ１−１３アルキル、またはＣ２−１３アルケニルであり、
Ｒ７は、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
それぞれのＲは、Ｈ、Ｃ１−３アルキル、及びＣ２−３アルケニルからなる群から独立して選択され、
ＲＮは、ＨまたはＣ１−３アルキルであり、
それぞれのＲ’は、Ｃ１−１８アルキル、Ｃ２−１８アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及びＨからなる群から独立して選択され、
それぞれのＲ”は、Ｃ３−１５アルキル及びＣ３−１５アルケニルからなる群から独立して選択され、
それぞれのＲ＊は、Ｃ１−１２アルキル及びＣ２−１２アルケニルからなる群から独立して選択され、
それぞれのＹは、独立してＣ３−６炭素環であり、
それぞれのＸは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩからなる群から独立して選択され、
Ｘａ及びＸｂはそれぞれ、独立してＯまたはＳであり、
Ｒ１０は、Ｈ、ハロ、−ＯＨ、Ｒ、−Ｎ（Ｒ）２、−ＣＮ、−Ｎ３、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）ＯＲ、−Ｓ（Ｏ）２ＯＲ、−ＮＯ２、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−ＮＨ（ＣＨ２）ｔ１Ｎ（Ｒ）２、−ＮＨ（ＣＨ２）ｐ１Ｏ（ＣＨ２）ｑ１Ｎ（Ｒ）２、−ＮＨ（ＣＨ２）ｓ１ＯＲ、−Ｎ（（ＣＨ２）ｓ１ＯＲ）２、炭素環、複素環、アリール、及びヘテロアリールからなる群から選択され、
ｍは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、及び１３から選択され、
ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０から選択され、
ｒは、０または１であり、
ｔ１は、１、２、３、４、及び５から選択され、
ｐ１は、１、２、３、４、及び５から選択され、
ｑ１は、１、２、３、４、及び５から選択され、
ｓ１は、１、２、３、４、及び５から選択される。
一実施形態では、式（ＶＩ）の化合物のサブセットには、式（ＶＩ−ａ）：
Figure 2021512090
 の化合物もしくはそのＮ−オキシド、またはその塩もしくは異性体が含まれ、式中、
Ｒ１ａ及びＲ１ｂは、Ｃ１−１４アルキル及びＣ２−１４アルケニルからなる群から独立して選択され、
Ｒ２及びＲ３は、Ｃ１−１４アルキル、Ｃ２−１４アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及び−Ｒ＊ＯＲ”からなる群から独立して選択されるか、またはＲ２及びＲ３は、それらが結合している原子と一緒になって複素環もしくは炭素環を形成する。
別の実施形態では、式（ＶＩ）の化合物のサブセットには、式（ＶＩＩ）：
Figure 2021512090
 の化合物もしくはそのＮ−オキシド、またはその塩もしくは異性体が含まれ、式中、
ｌは、１、２、３、４、及び５から選択され、
Ｍ１は、結合またはＭ’であり、
Ｒ２及びＲ３は、Ｈ、Ｃ１−１４アルキル、及びＣ２−１４アルケニルからなる群から独立して選択される。
別の実施形態では、式（Ｉ ＶＩ）の化合物のサブセットには、式（Ｉ ＶＩＩＩ）：
Figure 2021512090
 の化合物もしくはそのＮ−オキシド、またはその塩もしくは異性体が含まれ、式中、
ｌは、１、２、３、４、及び５から選択され、
Ｍ１は、結合またはＭ’であり、
Ｒａ’及びＲｂ’は、Ｃ１−１４アルキル及びＣ２−１４アルケニルからなる群から独立して選択され、
Ｒ２及びＲ３は、Ｃ１−１４アルキル及びＣ２−１４アルケニルからなる群から独立して選択される。
式（Ｉ Ｉ）、式（Ｉ ＩＡ）、式（Ｉ ＶＩ）、式（Ｉ ＶＩ−ａ）、式（Ｉ ＶＩＩ）、または式（Ｉ ＶＩＩＩ）のいずれか１つの化合物は、適用可能な場合、下記の特徴を１つ以上含む。
いくつかの実施形態では、Ｍ１は、Ｍ’である。
いくつかの実施形態では、Ｍ及びＭ’は、独立して、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−または−ＯＣ（Ｏ）−である。
いくつかの実施形態では、Ｍ及びＭ’のうちの少なくとも１つは、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−または−ＯＣ（Ｏ）−である。
ある特定の実施形態では、Ｍ及びＭ’のうちの少なくとも１つは、−ＯＣ（Ｏ）−である。
ある特定の実施形態では、Ｍは、−ＯＣ（Ｏ）−であり、Ｍ’は、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−である。いくつかの実施形態では、Ｍは、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−であり、Ｍ’は、−ＯＣ（Ｏ）−である。ある特定の実施形態では、Ｍ及びＭ’はそれぞれ、−ＯＣ（Ｏ）−である。いくつかの実施形態では、Ｍ及びＭ’はそれぞれ、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−である。
ある特定の実施形態では、Ｍ及びＭ’のうちの少なくとも１つは、−ＯＣ（Ｏ）−Ｍ”−Ｃ（Ｏ）Ｏ−である。
いくつかの実施形態では、Ｍ及びＭ’は、独立して−Ｓ−Ｓ−である。
いくつかの実施形態では、Ｍ及びＭ’のうちの少なくとも１つは、−Ｓ−Ｓである。
いくつかの実施形態では、Ｍ及びＭ’の一方は、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−または−ＯＣ（Ｏ）−であり、もう一方は、−Ｓ−Ｓ−である。例えば、Ｍは、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−もしくは−ＯＣ（Ｏ）−であり、Ｍ’は、−Ｓ−Ｓ−であるか、またはＭ’は、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−もしくは−ＯＣ（Ｏ）−であり、Ｍは、−Ｓ−Ｓ−である。
いくつかの実施形態では、Ｍ及びＭ’のうちの１つは、−ＯＣ（Ｏ）−Ｍ”−Ｃ（Ｏ）Ｏ−であり、Ｍ”は、結合、Ｃ１−１３アルキル、またはＣ２−１３アルケニルである。他の実施形態では、Ｍ”は、Ｃ１−６アルキルまたはＣ２−６アルケニルである。ある特定の実施形態では、Ｍ”は、Ｃ１−４アルキルまたはＣ２−４アルケニルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｍ”は、Ｃ１アルキルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｍ”は、Ｃ２アルキルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｍ”は、Ｃ３アルキルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｍ”は、Ｃ４アルキルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｍ”は、Ｃ２アルケニルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｍ”は、Ｃ３アルケニルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｍ”は、Ｃ４アルケニルである。
いくつかの実施形態では、ｌは、１、３、または５である。
いくつかの実施形態では、Ｒ４は、水素である。
いくつかの実施形態では、Ｒ４は、水素ではない。
いくつかの実施形態では、Ｒ４は、非置換メチルまたは−（ＣＨ２）ｎＱであり、Ｑは、ＯＨ、−ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、または−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒである。
いくつかの実施形態では、Ｑは、ＯＨである。
いくつかの実施形態では、Ｑは、−ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２である。
いくつかの実施形態では、Ｑは、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２である。
いくつかの実施形態では、Ｑは、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒである。
いくつかの実施形態では、Ｑは、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒである。
いくつかの実施形態では、Ｑは、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２である。
いくつかの実施形態では、Ｑは、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＲである。
いくつかの実施形態では、Ｑは、−Ｎ（Ｒ）Ｒ８である。
いくつかの実施形態では、Ｑは、−ＮＨＣ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２である。
いくつかの実施形態では、Ｑは、−ＮＨＣ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２である。
いくつかの実施形態では、Ｑは、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２である。
いくつかの実施形態では、Ｑは、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲである。
いくつかの実施形態では、ｎは、２である。
いくつかの実施形態では、ｎは、３である。
いくつかの実施形態では、ｎは、４である。
いくつかの実施形態では、Ｍ１は、存在しない。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのＲ５は、ヒドロキシルである。例えば、１つのＲ５は、ヒドロキシルである。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのＲ６は、ヒドロキシルである。例えば、１つのＲ６は、ヒドロキシルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ５及びＲ６のうちの１つは、ヒドロキシルである。例えば、１つのＲ５は、ヒドロキシルであり、それぞれのＲ６は、水素である。例えば、１つのＲ６は、ヒドロキシルであり、それぞれのＲ５は、水素である。
いくつかの実施形態では、Ｒｘは、Ｃ１−６アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒｘは、Ｃ１−３アルキルである。例えば、Ｒｘは、メチルである。例えば、Ｒｘは、エチルである。例えば、Ｒｘは、プロピルである。
いくつかの実施形態では、Ｒｘは、−（ＣＨ２）ｖＯＨであり、ｖは、１、２、または３である。例えば、Ｒｘは、メタノイルである。例えば、Ｒｘは、エタノイルである。例えば、Ｒｘは、プロパノイルである。
いくつかの実施形態では、Ｒｘは、−（ＣＨ２）ｖＮ（Ｒ）２であり、ｖは、１、２、または３であり、それぞれのＲは、Ｈまたはメチルである。例えば、Ｒｘは、メタンアミノ、メチルメタンアミノ、またはジメチルメタンアミノである。例えば、Ｒｘは、アミノメタニル、メチルアミノメタニル、またはジメチルアミノメタニルである。例えば、Ｒｘは、アミノエタニル、メチルアミノエタニル、またはジメチルアミノエタニルである。例えば、Ｒｘは、アミノプロパニル、メチルアミノプロパニル、またはジメチルアミノプロパニルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ’は、Ｃ１−１８アルキル、Ｃ２−１８アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、または−ＹＲ”である。
いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｃ３−１４アルキルまたはＣ３−１４アルケニルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ１ｂは、Ｃ１−１４アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ１ｂは、Ｃ２−１４アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ１ｂは、Ｃ３−１４アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ１ｂは、Ｃ１−８アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ１ｂは、Ｃ１−５アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ１ｂは、Ｃ１−３アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ１ｂは、Ｃ１アルキル、Ｃ２アルキル、Ｃ３アルキル、Ｃ４アルキル、及びＣ５アルキルから選択される。例えば、いくつかの実施形態では、Ｒ１ｂは、Ｃ１アルキルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｒ１ｂは、Ｃ２アルキルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｒ１ｂは、Ｃ３アルキルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｒ１ｂは、Ｃ４アルキルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｒ１ｂは、Ｃ５アルキルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ１は、−（ＣＨＲ５Ｒ６）ｍ−Ｍ−ＣＲ２Ｒ３Ｒ７とは異なる。
いくつかの実施形態では、−ＣＨＲ１ａＲ１ｂ−は、−（ＣＨＲ５Ｒ６）ｍ−Ｍ−ＣＲ２Ｒ３Ｒ７とは異なる。
いくつかの実施形態では、Ｒ７は、Ｈである。いくつかの実施形態では、Ｒ７は、Ｃ１−３アルキルから選択される。例えば、いくつかの実施形態では、Ｒ７は、Ｃ１アルキルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｒ７は、Ｃ２アルキルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｒ７は、Ｃ３アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ７は、Ｃ４アルキル、Ｃ４アルケニル、Ｃ５アルキル、Ｃ５アルケニル、Ｃ６アルキル、Ｃ６アルケニル、Ｃ７アルキル、Ｃ７アルケニル、Ｃ９アルキル、Ｃ９アルケニル、Ｃ１１アルキル、Ｃ１１アルケニル、Ｃ１７アルキル、Ｃ１７アルケニル、Ｃ１８アルキル、及びＣ１８アルケニルから選択される。
いくつかの実施形態では、Ｒｂ’は、Ｃ１−１４アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒｂ’は、Ｃ２−１４アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒｂ’は、Ｃ３−１４アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒｂ’は、Ｃ１−８アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒｂ’は、Ｃ１−５アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒｂ’は、Ｃ１−３アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒｂ’は、Ｃ１アルキル、Ｃ２アルキル、Ｃ３アルキル、Ｃ４アルキル、及びＣ５アルキルから選択される。例えば、いくつかの実施形態では、Ｒｂ’は、Ｃ１アルキルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｒｂ’は、Ｃ２アルキルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｒｂ’は、Ｃ３アルキルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｒｂ’は、Ｃ４アルキルである。
一実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩａ）：
Figure 2021512090
 の化合物もしくはそのＮ−オキシド、またはその塩もしくは異性体であり、式中、Ｒ４は、本明細書に記載のものである。
別の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩｂ）：
Figure 2021512090
 の化合物もしくはそのＮ−オキシド、またはその塩もしくは異性体であり、式中、Ｒ４は、本明細書に記載のものである。
別の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩｃ）もしくは式（ＩＩｅ）：
Figure 2021512090
 （Ｉ ＩＩｃ）、もしくは
Figure 2021512090
 （Ｉ ＩＩｅ）
の化合物またはそのＮ−オキシド、あるいはその塩または異性体であり、式中、Ｒ４は、本明細書に記載のものである。
別の実施形態では、式（Ｉ Ｉ）の化合物は、式（Ｉ ＩＩｆ）：
Figure 2021512090
 の化合物もしくはそのＮ−オキシド、またはその塩もしくは異性体であり、
式中、Ｍは、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−または−ＯＣ（Ｏ）−であり、Ｍ”は、Ｃ１−６アルキルまたはＣ２−６アルケニルであり、Ｒ２及びＲ３は、Ｃ５−１４アルキル及びＣ５−１４アルケニルからなる群から独立して選択され、ｎは、２、３、及び４から選択される。
さらなる実施形態では、式（Ｉ Ｉ）の化合物は、式（ＩＩｄ）：
Figure 2021512090
 の化合物もしくはそのＮ−オキシド、またはその塩もしくは異性体であり、式中、ｎは、２、３、または４であり、ｍ、Ｒ’、Ｒ”、及びＲ２〜Ｒ６は、本明細書に記載のものである。例えば、Ｒ２及びＲ３はそれぞれ、Ｃ５−１４アルキル及びＣ５−１４アルケニルからなる群から独立して選択され得る。
さらなる実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩｇ）：
Figure 2021512090
 の化合物もしくはそのＮ−オキシド、またはその塩もしくは異性体であり、式中、ｌは、１、２、３、４、及び５から選択され、ｍは、５、６、７、８、及び９から選択され、Ｍ１は、結合またはＭ’であり、Ｍ及びＭ’は、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−Ｍ”−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、−Ｓ−Ｓ−、アリール基、及びヘテロアリール基から独立して選択され、Ｒ２及びＲ３は、Ｈ、Ｃ１−１４アルキル、及びＣ２−１４アルケニルからなる群から独立して選択される。例えば、Ｍ”は、Ｃ１−６アルキル（例えば、Ｃ１−４アルキル）またはＣ２−６アルケニル（例えばＣ２−４アルケニル）である。例えば、Ｒ２及びＲ３は、Ｃ５−１４アルキル及びＣ５−１４アルケニルからなる群から独立して選択される。
別の実施形態では、式（Ｉ ＶＩ）の化合物のサブセットには、式（Ｉ ＶＩＩａ）：
Figure 2021512090
 の化合物もしくはそのＮ−オキシド、またはその塩もしくは異性体が含まれる。
別の実施形態では、式（Ｉ ＶＩ）の化合物のサブセットには、式（Ｉ ＶＩＩＩａ）：
Figure 2021512090
 の化合物もしくはそのＮ−オキシド、またはその塩もしくは異性体が含まれる。
別の実施形態では、式（Ｉ ＶＩ）の化合物のサブセットには、式（Ｉ ＶＩＩＩｂ）：
Figure 2021512090
 の化合物もしくはそのＮ−オキシド、またはその塩もしくは異性体が含まれる。
別の実施形態では、式（Ｉ ＶＩ）の化合物のサブセットには、式（Ｉ ＶＩＩｂ−１）：
Figure 2021512090
 の化合物もしくはそのＮ−オキシド、またはその塩もしくは異性体が含まれる。
別の実施形態では、式（Ｉ ＶＩ）の化合物のサブセットには、式（Ｉ ＶＩＩｂ−２）：
Figure 2021512090
 の化合物もしくはそのＮ−オキシド、またはその塩もしくは異性体が含まれる。
別の実施形態では、式（Ｉ ＶＩ）の化合物のサブセットには、式（Ｉ ＶＩＩｂ−３）：
Figure 2021512090
 の化合物もしくはそのＮ−オキシド、またはその塩もしくは異性体が含まれる。別の実施形態では、式（ＶＩ）の化合物のサブセットには、式（ＶＩＩｃ）：
Figure 2021512090
 の化合物が含まれる。
別の実施形態では、式（Ｉ ＶＩ）の化合物のサブセットには、式（ＶＩＩｄ）：
Figure 2021512090
 の化合物もしくはそのＮ−オキシド、またはその塩もしくは異性体が含まれる。
別の実施形態では、式（Ｉ ＶＩ）の化合物のサブセットには、式（Ｉ ＶＩＩＩｃ）：
Figure 2021512090
 の化合物が含まれる。
別の実施形態では、式Ｉ ＶＩ）の化合物のサブセットには、式（Ｉ ＶＩＩＩｄ）：
Figure 2021512090
 の化合物もしくはそのＮ−オキシド、またはその塩もしくは異性体が含まれる。
式（Ｉ Ｉ）、式（Ｉ ＩＡ）、式（Ｉ ＩＢ）、式（Ｉ ＩＩ）、式（Ｉ ＩＩａ）、式（Ｉ ＩＩｂ）、式（Ｉ ＩＩｃ）、式（Ｉ ＩＩｄ）、式（Ｉ ＩＩｅ）、式（Ｉ ＩＩｆ）、式（Ｉ ＩＩｇ）、式Ｉ（ＩＩＩ）、式（Ｉ ＶＩ）、式（Ｉ ＶＩ−ａ）、式（Ｉ ＶＩＩ）、式（Ｉ ＶＩＩＩ）、式（Ｉ ＶＩＩａ）、式（Ｉ ＶＩＩＩａ）、式（Ｉ ＶＩＩＩｂ）、式（Ｉ ＶＩＩｂ−１）、式（Ｉ ＶＩＩｂ−２）、式（Ｉ ＶＩＩｂ−３）、式（Ｉ ＶＩＩｃ）、式（Ｉ ＶＩＩｄ）、式（Ｉ ＶＩＩＩｃ）、または式（Ｉ ＶＩＩＩｄ）のいずれか１つの化合物は、適用可能な場合、下記の特徴を１つ以上含む。
いくつかの実施形態では、Ｒ４は、Ｃ３−６炭素環、−（ＣＨ２）ｎＱ、−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、−（ＣＨ２）ｏＣ（Ｒ１０）２（ＣＨ２）ｎ−ｏＱ、−ＣＨＱＲ、及び−ＣＱ（Ｒ）２からなる群から選択され、Ｑは、Ｃ３−６炭素環、Ｎ、Ｏ、Ｓ、及びＰから選択される１つ以上のヘテロ原子を有する５〜１４員の芳香族複素環または非芳香族複素環、−ＯＲ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＸ３、−ＣＸ２Ｈ、−ＣＸＨ２、−ＣＮ、−Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、ならびに−Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲから選択され、それぞれのｏは、１、２、３、及び４から独立して選択され、それぞれのｎは、１、２、３、４、及び５から独立して選択される。
別の実施形態では、Ｒ４は、Ｃ３−６炭素環、−（ＣＨ２）ｎＱ、−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、−（ＣＨ２）ｏＣ（Ｒ１０）２（ＣＨ２）ｎ−ｏＱ、−ＣＨＱＲ、及び−ＣＱ（Ｒ）２からなる群から選択され、Ｑは、Ｃ３−６炭素環、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つ以上のヘテロ原子を有する５〜１４員のヘテロアリール、−ＯＲ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＸ３、−ＣＸ２Ｈ、−ＣＸＨ２、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲ、ならびにＮ、Ｏ、及びＳから選択される１つ以上のヘテロ原子を有する５〜１４員のヘテロシクロアルキルであって、オキソ（＝Ｏ）、ＯＨ、アミノ、及びＣ１−３アルキルから選択される１つ以上の置換基で置換された当該５〜１４員のヘテロシクロアルキル、から選択され、それぞれのｏは、１、２、３、及び４から独立して選択され、それぞれのｎは、１、２、３、４、及び５から独立して選択される。
別の実施形態では、Ｒ４は、Ｃ３−６炭素環、−（ＣＨ２）ｎＱ、−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、−（ＣＨ２）ｏＣ（Ｒ１０）２（ＣＨ２）ｎ−ｏＱ、−ＣＨＱＲ、及び−ＣＱ（Ｒ）２からなる群から選択され、Ｑは、Ｃ３−６炭素環、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つ以上のヘテロ原子を有する５〜１４員の複素環、−ＯＲ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＸ３、−ＣＸ２Ｈ、−ＣＸＨ２、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲから選択され、それぞれのｏは、１、２、３、及び４から独立して選択され、それぞれのｎは、１、２、３、４、及び５から独立して選択され、Ｑが５〜１４員の複素環であり、かつ（ｉ）Ｒ４が−（ＣＨ２）ｎＱ（ｎは、１もしくは２である）であるか、または（ｉｉ）Ｒ４が−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ（ｎは、１である）であるか、または（ｉｉｉ）Ｒ４が−ＣＨＱＲであるとき、これらの場合に加えて、Ｑが５〜１４員の複素環であり、かつＲ４が−ＣＱ（Ｒ）２であるとき、Ｑは、５〜１４員のヘテロアリールまたは８〜１４員のヘテロシクロアルキルのいずれかである。
別の実施形態では、Ｒ４は、Ｃ３−６炭素環、−（ＣＨ２）ｎＱ、−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、−（ＣＨ２）ｏＣ（Ｒ１０）２（ＣＨ２）ｎ−ｏＱ、−ＣＨＱＲ、及び−ＣＱ（Ｒ）２からなる群から選択され、Ｑは、Ｃ３−６炭素環、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つ以上のヘテロ原子を有する５〜１４員のヘテロアリール、−ＯＲ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＸ３、−ＣＸ２Ｈ、−ＣＸＨ２、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲから選択され、それぞれのｏは、１、２、３、及び４から独立して選択され、それぞれのｎは、１、２、３、４、及び５から独立して選択される。
別の実施形態では、Ｒ４は、−（ＣＨ２）ｎＱであり、Ｑは、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ８であり、ｎは、１、２、３、４、及び５から選択される。さらなる実施形態では、Ｒ４は、−（ＣＨ２）ｎＱであり、Ｑは、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ８であり、Ｒ８は、Ｃ３−６炭素環（Ｃ３−６シクロアルキルなど）であり、ｎは、１、２、３、４、及び５から選択される。例えば、Ｒ４は、−（ＣＨ２）３ＮＨＳ（Ｏ）２Ｒ８であり、Ｒ８は、シクロプロピルである。
別の実施形態では、Ｒ４は、−（ＣＨ２）ｏＣ（Ｒ１０）２（ＣＨ２）ｎ−ｏＱであり、Ｑは、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒであり、ｎは、１、２、３、４、及び５から選択され、ｏは、１、２、３、及び４から選択される。さらなる実施形態では、Ｒ４は、−（ＣＨ２）ｏＣ（Ｒ１０）２（ＣＨ２）ｎ−ｏＱであり、Ｑは、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ（Ｒは、Ｃ１−Ｃ３アルキルである）であり、ｎは、１、２、３、４、及び５から選択され、ｏは、１、２、３、及び４から選択される。別の実施形態では、Ｒ４は、−（ＣＨ２）ｏＣ（Ｒ１０）２（ＣＨ２）ｎ−ｏＱであり、Ｑは、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ（Ｒは、Ｃ１−Ｃ３アルキルである）であり、ｎは、３であり、ｏは、１である。いくつかの実施形態では、Ｒ１０は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１−３アルキル、またはＣ２−３アルケニルである。例えば、Ｒ４は、３−アセトアミド−２，２−ジメチルプロピルである。
いくつかの実施形態では、１つのＲ１０は、Ｈであり、１つのＲ１０は、Ｃ１−３アルキルまたはＣ２−３アルケニルである。別の実施形態では、それぞれのＲ１０は、Ｃ１−３アルキルまたはＣ２−３アルケニルである。別の実施形態では、それぞれのＲ１０は、Ｃ１−３アルキル（例えばメチル、エチル、またはプロピル）である。例えば、１つのＲ１０は、メチルであり、１つのＲ１０は、エチルまたはプロピルである。例えば、１つのＲ１０は、エチルであり、１つのＲ１０は、メチルまたはプロピルである。例えば、１つのＲ１０は、プロピルであり、１つのＲ１０は、メチルまたはエチルである。例えば、それぞれのＲ１０は、メチルである。例えば、それぞれのＲ１０は、エチルである。例えば、それぞれのＲ１０は、プロピルである。
いくつかの実施形態では、１つのＲ１０は、Ｈであり、１つのＲ１０は、ＯＨである。別の実施形態では、それぞれのＲ１０は、ＯＨである。
別の実施形態では、Ｒ４は、非置換のＣ１−４アルキル（例えば、非置換メチル）である。
別の実施形態では、Ｒ４は、水素である。
ある特定の実施形態では、本開示は、式（Ｉ）を有する化合物を提供し、式中、Ｒ４は、−（ＣＨ２）ｎＱまたは−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲであり、Ｑは、−Ｎ（Ｒ）２であり、ｎは、３、４、及び５から選択される。
ある特定の実施形態では、本開示は、式（Ｉ）を有する化合物を提供し、式中、Ｒ４は、−（ＣＨ２）ｎＱ、−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、−ＣＨＱＲ、及び−ＣＱ（Ｒ）２からなる群から選択され、Ｑは、−Ｎ（Ｒ）２であり、ｎは、１、２、３、４、及び５から選択される。
ある特定の実施形態では、本開示は、式（Ｉ）を有する化合物を提供し、式中、Ｒ２及びＲ３は、Ｃ２−１４アルキル、Ｃ２−１４アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及び−Ｒ＊ＯＲ”からなる群から独立して選択されるか、またはＲ２及びＲ３は、それらが結合している原子と一緒になって複素環もしくは炭素環を形成し、Ｒ４は、−（ＣＨ２）ｎＱまたは−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲであり、Ｑは、−Ｎ（Ｒ）２であり、ｎは、３、４、及び５から選択される。
ある特定の実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、Ｃ２−１４アルキル、Ｃ２−１４アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及び−Ｒ＊ＯＲ”からなる群から独立して選択されるか、またはＲ２及びＲ３は、それらが結合している原子と一緒になって複素環もしくは炭素環を形成する。いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、Ｃ２−１４アルキル及びＣ２−１４アルケニルからなる群から独立して選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及び−Ｒ＊ＯＲ”からなる群から独立して選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している原子と一緒になって複素環または炭素環を形成する。
いくつかの実施形態では、Ｒ１は、Ｃ５−２０アルキル及びＣ５−２０アルケニルからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ１は、ヒドロキシルで置換されたＣ５−２０アルキルである。
他の実施形態では、Ｒ１は、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及び−Ｒ”Ｍ’Ｒ’からなる群から選択される。
ある特定の実施形態では、Ｒ１は、−Ｒ＊ＹＲ”及び−ＹＲ”から選択される。いくつかの実施形態では、Ｙは、シクロプロピル基である。いくつかの実施形態では、Ｒ＊は、Ｃ８アルキルまたはＣ８アルケニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ”は、Ｃ３−１２アルキルである。例えば、Ｒ”は、Ｃ３アルキルであり得る。例えば、Ｒ”は、Ｃ４−８アルキル（例えば、Ｃ４アルキル、Ｃ５アルキル、Ｃ６アルキル、Ｃ７アルキル、またはＣ８アルキル）であり得る。
いくつかの実施形態では、Ｒは、（ＣＨ２）ｑＯＲ＊であり、ｑは、１、２、及び３から選択され、Ｒ＊は、アミノ、Ｃ１−Ｃ６アルキルアミノ、及びＣ１−Ｃ６ジアルキルアミノからなる群から選択される１つ以上の置換基で置換されたＣ１−１２アルキルである。例えば、Ｒは、（ＣＨ２）ｑＯＲ＊であり、ｑは、１、２、及び３から選択され、Ｒ＊は、Ｃ１−Ｃ６ジアルキルアミノで置換されたＣ１−１２アルキルである。例えば、Ｒは、（ＣＨ２）ｑＯＲ＊であり、ｑは、１、２、及び３から選択され、Ｒ＊は、Ｃ１−Ｃ６ジアルキルアミノで置換されたＣ１−３アルキルである。例えば、Ｒは、（ＣＨ２）ｑＯＲ＊であり、ｑは、１、２、及び３から選択され、Ｒ＊は、ジメチルアミノで置換されたＣ１−３アルキル（例えば、ジメチルアミノエタニル）である。
いくつかの実施形態では、Ｒ１は、Ｃ５−２０アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ１は、Ｃ６アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ１は、Ｃ８アルキルである。他の実施形態では、Ｒ１は、Ｃ９アルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１は、Ｃ１４アルキルである。他の実施形態では、Ｒ１は、Ｃ１８アルキルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ１は、Ｃ２１−３０アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ１は、Ｃ２６アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ１は、Ｃ２８アルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１は、
Figure 2021512090
 である。
いくつかの実施形態では、Ｒ１は、Ｃ５−２０アルケニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１は、Ｃ１８アルケニルである。いくつかの実施形態では、Ｒ１は、リノレイルである。
ある特定の実施形態では、Ｒ１は、分岐鎖である（例えば、デカン−２−イル、ウンデカン−３−イル、ドデカン−４−イル、トリデカン−５−イル、テトラデカン−６−イル、２−メチルウンデカン−３−イル、２−メチルデカン−２−イル、３−メチルウンデカン−３−イル、４−メチルドデカン−４−イル、またはヘプタデカ−９−イル）。ある特定の実施形態では、Ｒ１は、
Figure 2021512090
 である。
ある特定の実施形態では、Ｒ１は、非置換のＣ５−２０アルキルまたはＣ５−２０アルケニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ’は、置換されたＣ５−２０アルキルまたはＣ５−２０アルケニル（例えば、Ｃ３−６炭素環で置換されたもの（１−シクロプロピルノニルなど）、またはＯＨもしくはアルコキシで置換されたもの）である。例えば、Ｒ１は、
Figure 2021512090
 である。
他の実施形態では、Ｒ１は、−Ｒ”Ｍ’Ｒ’である。ある特定の実施形態では、Ｍ’は、−ＯＣ（Ｏ）−Ｍ”−Ｃ（Ｏ）Ｏ−である。例えば、Ｒ１は、
Figure 2021512090
 であり、式中、ｘ１は、１〜１３の整数（例えば、３、４、５、及び６から選択される整数）であり、ｘ２は、１〜１３の整数（例えば、１、２、及び３から選択される整数）であり、ｘ３は、２〜１４の整数（例えば、４、５、及び６から選択される整数）である。例えば、ｘ１は、３、４、５、及び６から選択され、ｘ２は、１、２、及び３から選択され、ｘ３は、４、５、及び６から選択される。
他の実施形態では、Ｒ１は、−（ＣＨＲ５Ｒ６）ｍ−Ｍ−ＣＲ２Ｒ３Ｒ７とは異なる。
いくつかの実施形態では、Ｒ’は、−Ｒ＊ＹＲ”及び−ＹＲ”から選択される。いくつかの実施形態では、Ｙは、Ｃ３−８シクロアルキルである。いくつかの実施形態では、Ｙは、Ｃ６−１０アリールである。いくつかの実施形態では、Ｙは、シクロプロピル基である。いくつかの実施形態では、Ｙは、シクロヘキシル基である。ある特定の実施形態では、Ｒ＊は、Ｃ１アルキルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ”は、Ｃ３−１２アルキル及びＣ３−１２アルケニルからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ”は、Ｃ８アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｙに隣接するＲ”は、Ｃ１アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｙに隣接するＲ”は、Ｃ４−９アルキル（例えば、Ｃ４アルキル、Ｃ５アルキル、Ｃ６アルキル、Ｃ７アルキル、もしくはＣ８アルキル、またはＣ９アルキル）である。
いくつかの実施形態では、Ｒ”は、置換されたＣ３−１２（例えば、置換されたＣ３−１２アルキル（例えば、ヒドロキシルで置換されたＣ３−１２アルキル））である。例えば、Ｒ”は、
Figure 2021512090
 である。
いくつかの実施形態では、Ｒ’は、Ｃ４アルキル及びＣ４アルケニルから選択される。ある特定の実施形態では、Ｒ’は、Ｃ５アルキル及びＣ５アルケニルから選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ’は、Ｃ６アルキル及びＣ６アルケニルから選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ’は、Ｃ７アルキル及びＣ７アルケニルから選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ’は、Ｃ９アルキル及びＣ９アルケニルから選択される。
いくつかの実施形態では、Ｒ’は、Ｃ４アルキル、Ｃ４アルケニル、Ｃ５アルキル、Ｃ５アルケニル、Ｃ６アルキル、Ｃ６アルケニル、Ｃ７アルキル、Ｃ７アルケニル、Ｃ９アルキル、Ｃ９アルケニル、Ｃ１１アルキル、Ｃ１１アルケニル、Ｃ１７アルキル、Ｃ１７アルケニル、Ｃ１８アルキル、及びＣ１８アルケニルから選択され、これらはそれぞれ、直鎖または分岐鎖のいずれかである。
いくつかの実施形態では、Ｒ’は、直鎖である。いくつかの実施形態では、Ｒ’は、分岐鎖である。
いくつかの実施形態では、Ｒ’は、
Figure 2021512090
 または
Figure 2021512090
 である。いくつかの実施形態では、Ｒ’は、
Figure 2021512090
 または
Figure 2021512090
 であり、Ｍ’は、−ＯＣ（Ｏ）−である。他の実施形態では、Ｒ’は、
Figure 2021512090
 または
Figure 2021512090
 であり、Ｍ’は、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−である。
他の実施形態では、Ｒ’は、Ｃ１１アルキル及びＣ１１アルケニルから選択される。他の実施形態では、Ｒ’は、Ｃ１２アルキル、Ｃ１２アルケニル、Ｃ１３アルキル、Ｃ１３アルケニル、Ｃ１４アルキル、Ｃ１４アルケニル、Ｃ１５アルキル、Ｃ１５アルケニル、Ｃ１６アルキル、Ｃ１６アルケニル、Ｃ１７アルキル、Ｃ１７アルケニル、Ｃ１８アルキル、及びＣ１８アルケニルから選択される。ある特定の実施形態では、Ｒ’は、直鎖のＣ４−１８アルキルまたはＣ４−１８アルケニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ’は、分岐鎖（例えば、デカン−２−イル、ウンデカン−３−イル、ドデカン−４−イル、トリデカン−５−イル、テトラデカン−６−イル、２−メチルウンデカン−３−イル、２−メチルデカン−２−イル、３−メチルウンデカン−３−イル、４−メチルドデカン−４−イル、またはヘプタデカ−９−イル）である。ある特定の実施形態では、Ｒ’は、
Figure 2021512090
 である。
ある特定の実施形態では、Ｒ’は、非置換のＣ１−１８アルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ’は、置換されたＣ１−１８アルキル（例えば、置換されたＣ１−１５アルキル（例えば、アルコキシ（メトキシなど）で置換されたＣ１−１５アルキル、またはＣ３−６炭素環で置換されたＣ１−１５アルキル（１−シクロプロピルノニルなど）、またはＣ（Ｏ）Ｏ−アルキルもしくはＯＣ（Ｏ）−アルキル（Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ３もしくはＯＣ（Ｏ）ＣＨ３など）で置換されたＣ１−１５アルキル）である。例えば、Ｒ’は、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、または
Figure 2021512090
 である。
ある特定の実施形態では、Ｒ’は、分岐したＣ１−１８アルキルである。例えば、Ｒ’は、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、または
Figure 2021512090
 である。
いくつかの実施形態では、Ｒ”は、Ｃ３−１５アルキル及びＣ３−１５アルケニルからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ”は、Ｃ３アルキル、Ｃ４アルキル、Ｃ５アルキル、Ｃ６アルキル、Ｃ７アルキル、またはＣ８アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ”は、Ｃ９アルキル、Ｃ１０アルキル、Ｃ１１アルキル、Ｃ１２アルキル、Ｃ１３アルキル、Ｃ１４アルキル、またはＣ１５アルキルである。
いくつかの実施形態では、Ｍ’は、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−である。いくつかの実施形態では、Ｍ’は、−ＯＣ（Ｏ）−である。いくつかの実施形態では、Ｍ’は、−ＯＣ（Ｏ）−Ｍ”−Ｃ（Ｏ）Ｏ−である。
いくつかの実施形態では、Ｍ’は、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、または−ＯＣ（Ｏ）−Ｍ”−Ｃ（Ｏ）Ｏ−である。いくつかの実施形態では、Ｍ’は、−ＯＣ（Ｏ）−Ｍ”−Ｃ（Ｏ）Ｏ−であり、Ｍ”は、Ｃ１−４アルキルまたはＣ２−４アルケニルである。
他の実施形態では、Ｍ’は、アリール基またはヘテロアリール基である。例えば、Ｍ’は、フェニル、オキサゾール、及びチアゾールからなる群から選択され得る。
いくつかの実施形態では、Ｍは、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−である。いくつかの実施形態では、Ｍは、−ＯＣ（Ｏ）−である。いくつかの実施形態では、Ｍは、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−である。いくつかの実施形態では、Ｍは、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−である。いくつかの実施形態では、Ｍは、−ＯＣ（Ｏ）−Ｍ”−Ｃ（Ｏ）Ｏ−である。
いくつかの実施形態では、Ｍは、−Ｃ（Ｏ）である。いくつかの実施形態では、Ｍは、−ＯＣ（Ｏ）−であり、Ｍ’は、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−である。いくつかの実施形態では、Ｍは、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−であり、Ｍ’は、−ＯＣ（Ｏ）−である。いくつかの実施形態では、Ｍ及びＭ’はそれぞれ、−ＯＣ（Ｏ）−である。いくつかの実施形態では、Ｍ及びＭ’はそれぞれ、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−である。
他の実施形態では、Ｍは、アリール基またはヘテロアリール基である。例えば、Ｍは、フェニル、オキサゾール、及びチアゾールからなる群から選択され得る。
いくつかの実施形態では、Ｍは、Ｍ’と同じである。他の実施形態では、Ｍは、Ｍ’と異なる。
いくつかの実施形態では、Ｍ”は、結合である。いくつかの実施形態では、Ｍ”は、Ｃ１−１３アルキルまたはＣ２−１３アルケニルである。いくつかの実施形態では、Ｍ”は、Ｃ１−６アルキルまたはＣ２−６アルケニルである。ある特定の実施形態では、Ｍ”は、直鎖のアルキルまたはアルケニルである。ある特定の実施形態では、Ｍ”は、分岐鎖であり、例えば、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２−である。
いくつかの実施形態では、それぞれのＲ５は、Ｈである。いくつかの実施形態では、それぞれのＲ６は、Ｈである。ある特定のそのような実施形態では、それぞれのＲ５及びそれぞれのＲ６は、Ｈである。
いくつかの実施形態では、Ｒ７は、Ｈである。他の実施形態では、Ｒ７は、Ｃ１−３アルキル（例えば、メチル、エチル、プロピル、またはｉ−プロピル）である。
いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｃ５−１４アルキルまたはＣ５−１４アルケニルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ２とＲ３とは、同じである。いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、Ｃ８アルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、Ｃ２アルキルである。他の実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、Ｃ３アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、Ｃ４アルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、Ｃ５アルキルである。他の実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、Ｃ６アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、Ｃ７アルキルである。
他の実施形態では、Ｒ２とＲ３とは、異なる。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、Ｃ８アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ３は、Ｃ１−７（例えば、Ｃ１アルキル、Ｃ２アルキル、Ｃ３アルキル、Ｃ４アルキル、Ｃ５アルキル、Ｃ６アルキル、もしくはＣ７アルキル）またはＣ９アルキルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ３は、Ｃ１アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ３は、Ｃ２アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ３は、Ｃ３アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ３は、Ｃ４アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ３は、Ｃ５アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ３は、Ｃ６アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ３は、Ｃ７アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ３は、Ｃ９アルキルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ７及びＲ３は、Ｈである。
ある特定の実施形態では、Ｒ２は、Ｈである。
いくつかの実施形態では、ｍは、５、６、７、８、または９である。いくつかの実施形態では、ｍは、５、７、または９である。例えば、いくつかの実施形態では、ｍは、５である。例えば、いくつかの実施形態では、ｍは、７である。例えば、いくつかの実施形態では、ｍは、９である。
いくつかの実施形態では、Ｒ４は、−（ＣＨ２）ｎＱ及び−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲから選択される。
いくつかの実施形態では、Ｑは、−ＯＲ、−ＯＨ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＸ３、−ＣＮ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｈ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）（Ｒ）、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｈ）（Ｒ）、−Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、炭素環、及び複素環からなる群から選択される。
ある特定の実施形態では、Ｑは、−Ｎ（Ｒ）Ｒ８、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＲ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、または−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲである。
ある特定の実施形態では、Ｑは、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（ＯＲ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、または−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２である。
ある特定の実施形態では、Ｑは、チオ尿素またはそのアイソスター（例えば、
Figure 2021512090
 または−ＮＨＣ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２）である。
ある特定の実施形態では、Ｑは、−Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２である。例えば、Ｑが−Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２であるとき、ｎは、４または５である。例えば、Ｒ９は、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ）２である。
ある特定の実施形態では、Ｑは、−Ｃ（＝ＮＲ９）Ｒまたは−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＯＲであり、例えば、−ＣＨ（＝Ｎ−ＯＣＨ３）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−ＯＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＣＨ３）−ＯＨ、または−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＣＨ３）−ＯＣＨ３である。
ある特定の実施形態では、Ｑは、−ＯＨである。
ある特定の実施形態では、Ｑは、置換された５〜１０員のヘテロアリールであるか、または非置換の５〜１０員のヘテロアリールであり、例えば、Ｑは、トリアゾール、イミダゾール、ピリミジン、プリン、２−アミノ−１，９−ジヒドロ−６Ｈ−プリン−６−オン−９−イル（もしくはグアニン−９−イル）、アデニン−９−イル、シトシン−１−イル、またはウラシル−１−イルであり、これらはそれぞれ、アルキル、ＯＨ、アルコキシ、−アルキル−ＯＨ、−アルキル−Ｏ−アルキルから選択される１つ以上の置換基で必要に応じて置換され、こうした置換基は、さらに置換され得る。ある特定の実施形態では、Ｑは、置換された５〜１４員のヘテロシクロアルキルであり、例えば、オキソ（＝Ｏ）、ＯＨ、アミノ、モノアルキルアミノまたはジアルキルアミノ、及びＣ１−３アルキルから選択される１つ以上の置換基で置換された５〜１４員のヘテロシクロアルキルである。例えば、Ｑは、４−メチルピペラジニル、４−（４−メトキシベンジル）ピペラジニル、イソインドリン−２−イル−１，３−ジオン、ピロリジン−１−イル−２，５−ジオン、またはイミダゾリジン−３−イル−２，４−ジオンである。
ある特定の実施形態では、Ｑは、−ＮＨＲ８であり、Ｒ８は、オキソ（＝Ｏ）、アミノ（ＮＨ２）、モノアルキルアミノまたはジアルキルアミノ、Ｃ１−３アルキル、及びハロから選択される１つ以上の置換基で必要に応じて置換されたＣ３−６シクロアルキルである。例えば、Ｒ８は、シクロブテニルであり、例えば、３−（ジメチルアミノ）−シクロブタ−３−エン−４−イル−１，２−ジオンである。さらなる実施形態では、Ｒ８は、オキソ（＝Ｏ）、チオ（＝Ｓ）、アミノ（ＮＨ２）、モノアルキルアミノまたはジアルキルアミノ、Ｃ１−３アルキル、ヘテロシクロアルキル、及びハロから選択される１つ以上の置換基で必要に応じて置換されたＣ３−６シクロアルキルであり、モノアルキルアミノまたはジアルキルアミノ、Ｃ１−３アルキル、及びヘテロシクロアルキルは、さらに置換される。例えば、Ｒ８は、オキソ、アミノ、及びアルキルアミノのうちの１つ以上で置換されたシクロブテニルであり、アルキルアミノは、例えばＣ１−３アルコキシ、アミノ、モノアルキルアミノまたはジアルキルアミノ、及びハロのうちの１つ以上で、さらに置換される。例えば、Ｒ８は、３−（（（ジメチルアミノ）エチル）アミノ）シクロブタ−３−エニル−１，２−ジオンである。例えば、Ｒ８は、オキソ及びアルキルアミノのうちの１つ以上で置換されたシクロブテニルである。例えば、Ｒ８は、３−（エチルアミノ）シクロブタ−３−エン−１，２−ジオンである。例えば、Ｒ８は、オキソ、チオ、及びアルキルアミノのうちの１つ以上で置換されたシクロブテニルである。例えば、Ｒ８は、３−（エチルアミノ）−４−チオキソシクロブタ−２−エン−１−オンまたは２−（エチルアミノ）−４−チオキソシクロブタ−２−エン−１−オンである。例えば、Ｒ８は、チオ及びアルキルアミノのうちの１つ以上で置換されたシクロブテニルである。例えば、Ｒ８は、３−（エチルアミノ）シクロブタ−３−エン−１，２−ジチオンである。例えば、Ｒ８は、オキソ及びジアルキルアミノのうちの１つ以上で置換されたシクロブテニルである。例えば、Ｒ８は、３−（ジエチルアミノ）シクロブタ−３−エン−１，２−ジオンである。例えば、Ｒ８は、オキソ、チオ、及びジアルキルアミノのうちの１つ以上で置換されたシクロブテニルである。例えば、Ｒ８は、２−（ジエチルアミノ）−４−チオキソシクロブタ−２−エン−１−オンまたは３−（ジエチルアミノ）−４−チオキソシクロブタ−２−エン−１−オンである。例えば、Ｒ８は、チオ及びジアルキルアミノのうちの１つ以上で置換されたシクロブテニルである。例えば、Ｒ８は、３−（ジエチルアミノ）シクロブタ−３−エン−１，２−ジチオンである。例えば、Ｒ８は、オキソ、及びアルキルアミノまたはジアルキルアミノのうちの１つ以上で置換されたシクロブテニルであり、アルキルアミノまたはジアルキルアミノは、例えば１つ以上のアルコキシで、さらに置換される。例えば、Ｒ８は、３−（ビス（２−メトキシエチル）アミノ）シクロブタ−３−エン−１，２−ジオンである。例えば、Ｒ８は、オキソ及びヘテロシクロアルキルのうちの１つ以上で置換されたシクロブテニルである。例えば、Ｒ８は、オキソ、及びピペリジニル、ピペラジニル、またはモルホリニルのうちの１つ以上で置換されたシクロブテニルである。例えば、Ｒ８は、オキソ及びヘテロシクロアルキルのうちの１つ以上で置換されたシクロブテニルであり、ヘテロシクロアルキルは、例えば１つ以上のＣ１−３アルキルで、さらに置換される。例えば、Ｒ８は、オキソ及びヘテロシクロアルキルのうちの１つ以上で置換されたシクロブテニルであり、ヘテロシクロアルキル（例えば、ピペリジニル、ピペラジニル、またはモルホリニル）は、メチルでさらに置換される。
ある特定の実施形態では、Ｑは、−ＮＨＲ８であり、Ｒ８は、アミノ（ＮＨ２）、モノアルキルアミノまたはジアルキルアミノ、Ｃ１−３アルキル、及びハロから選択される１つ以上の置換基で必要に応じて置換されたヘテロアリールである。例えば、Ｒ８は、チアゾールまたはイミダゾールである。
ある特定の実施形態では、Ｑは、−ＮＨＣ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２であり、Ｒ９は、ＣＮ、Ｃ１−６アルキル、ＮＯ２、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ）２、−ＯＲ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、またはＨである。例えば、Ｑは、−ＮＨＣ（＝ＮＲ９）Ｎ（ＣＨ３）２、−ＮＨＣ（＝ＮＲ９）ＮＨＣＨ３、−ＮＨＣ（＝ＮＲ９）ＮＨ２である。いくつかの実施形態では、Ｑは、−ＮＨＣ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２であり、Ｒ９は、ＣＮであり、Ｒは、モノアルキルアミノまたはジアルキルアミノで置換されたＣ１−３アルキルであり、例えば、Ｒは、（（ジメチルアミノ）エチル）アミノである。いくつかの実施形態では、Ｑは、−ＮＨＣ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２であり、Ｒ９は、Ｃ１−６アルキル、ＮＯ２、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ）２、−ＯＲ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、またはＨであり、Ｒは、モノアルキルアミノまたはジアルキルアミノで置換されたＣ１−３アルキルであり、例えば、Ｒは、（（ジメチルアミノ）エチル）アミノである。
ある特定の実施形態では、Ｑは、−ＮＨＣ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２であり、Ｒ９は、ＮＯ２、ＣＮ、Ｃ１−６アルキル、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ）２、−ＯＲ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、またはＨである。例えば、Ｑは、−ＮＨＣ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（ＣＨ３）２、−ＮＨＣ（＝ＣＨＲ９）ＮＨＣＨ３、または−ＮＨＣ（＝ＣＨＲ９）ＮＨ２である。
ある特定の実施形態では、Ｑは、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）ＯＲであり、−ＯＣ（Ｏ）ＮＨＣＨ３、−Ｎ（ＯＨ）Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ３、−Ｎ（ＯＨ）Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、−Ｎ（ＯＣＨ３）Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ３、−Ｎ（ＯＣＨ３）Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、−Ｎ（ＯＨ）Ｓ（Ｏ）２ＣＨ３、または−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＣＨ３などである。
ある特定の実施形態では、Ｑは、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒであり、Ｒは、Ｃ１−３アルコキシルまたはＳ（Ｏ）ｚＣ１−３アルキルで必要に応じて置換されたアルキルであり、ｚは、０、１、または２である。
ある特定の実施形態では、Ｑは、非置換または置換されたＣ６−１０アリール（フェニルなど）またはＣ３−６シクロアルキルである。
いくつかの実施形態では、ｎは、１である。他の実施形態では、ｎは、２である。さらなる実施形態では、ｎは、３である。ある特定の他の実施形態では、ｎは、４である。例えば、Ｒ４は、−（ＣＨ２）２ＯＨであり得る。例えば、Ｒ４は、−（ＣＨ２）３ＯＨであり得る。例えば、Ｒ４は、−（ＣＨ２）４ＯＨであり得る。例えば、Ｒ４は、ベンジルであり得る。例えば、Ｒ４は、４−メトキシベンジルであり得る。
いくつかの実施形態では、Ｒ４は、Ｃ３−６炭素環である。いくつかの実施形態では、Ｒ４は、Ｃ３−６シクロアルキルである。例えば、Ｒ４は、例えばＯＨ、ハロ、Ｃ１−６アルキルなどで、必要に応じて置換されたシクロヘキシルであり得る。例えば、Ｒ４は、２−ヒドロキシシクロヘキシルであり得る。
いくつかの実施形態では、Ｒは、Ｈである。
いくつかの実施形態では、Ｒは、モノアルキルアミノまたはジアルキルアミノで置換されたＣ１−３アルキルであり、例えば、Ｒは、（（ジメチルアミノ）エチル）アミノである。
いくつかの実施形態では、Ｒは、Ｃ１−３アルコキシル、アミノ、及びＣ１−Ｃ３ジアルキルアミノからなる群から選択される１つ以上の置換基で置換されたＣ１−６アルキルである。
いくつかの実施形態では、Ｒは、非置換のＣ１−３アルキルまたは非置換のＣ２−３アルケニルである。例えば、Ｒ４は、−ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＯＨ、または−ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＣＨ３であり得る。
いくつかの実施形態では、Ｒは、置換されたＣ１−３アルキルであり、例えば、ＣＨ２ＯＨである。例えば、Ｒ４は、−ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＯＨ、−（ＣＨ２）３ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＯＨ、−（ＣＨ２）３ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＯＢｎ、−（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２ＯＨ、−（ＣＨ２）３ＮＨＣＨ２ＯＣＨ３、−（ＣＨ２）３ＮＨＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ３、ＣＨ２ＳＣＨ３、ＣＨ２Ｓ（Ｏ）ＣＨ３、ＣＨ２Ｓ（Ｏ）２ＣＨ３、または−ＣＨ（ＣＨ２ＯＨ）２であり得る。
いくつかの実施形態では、Ｒ４は、下記の群のいずれかから選択される。
Figure 2021512090
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いくつかの実施形態では、
Figure 2021512090
 は、下記の群のいずれかから選択される。
Figure 2021512090
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いくつかの実施形態では、Ｒ４は、下記の群のいずれかから選択される。
Figure 2021512090
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いくつかの実施形態では、
Figure 2021512090
 は、下記の群のいずれかから選択される。
Figure 2021512090
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いくつかの実施形態では、式（ＩＩＩ）の化合物は、アニオンをさらに含む。本明細書に記載のように、アニオンは、アミンと反応してアンモニウム塩を形成することが可能な任意のアニオンであり得る。例としては、限定されないが、塩化物イオン、臭化物イオン、ヨウ化物イオン、フッ化物イオン、酢酸イオン、ギ酸イオン、トリフルオロ酢酸イオン、ジフルオロ酢酸イオン、トリクロロ酢酸イオン、及びリン酸イオンが挙げられる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の式のいずれかの化合物は、筋肉内投与のためのナノ粒子組成物の調製に適する。
いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している原子と一緒になって複素環または炭素環を形成する。いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している原子と一緒になることで、Ｎ、Ｏ、Ｓ、及びＰから選択される１つ以上のヘテロ原子を有する５〜１４員の芳香族複素環または非芳香族複素環を形成する。いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している原子と一緒になることで、必要に応じて置換されたＣ３−２０炭素環（例えば、Ｃ３−１８炭素環、Ｃ３−１５炭素環、Ｃ３−１２炭素環、またはＣ３−１０炭素環）を形成し、当該Ｃ３−２０炭素環は、芳香族または非芳香族のいずれかである。いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している原子と一緒になってＣ３−６炭素環を形成する。他の実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している原子と一緒になってＣ６炭素環（シクロヘキシル基またはフェニル基など）を形成する。ある特定の実施形態では、複素環またはＣ３−６炭素環は、１つ以上のアルキル基で置換される（この置換は、例えば、同じ環原子に対してなされるか、または隣接環原子もしくは非隣接環原子に対してなされる）。例えば、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している原子と一緒になることで、１つ以上のＣ５アルキルで置換されたシクロヘキシル基またはフェニル基を形成し得る。ある特定の実施形態では、Ｒ２及びＲ３によって形成される複素環またはＣ３−６炭素環は、炭素環基で置換される。例えば、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している原子と一緒になることで、シクロヘキシルで置換されたシクロヘキシル基またはフェニル基を形成し得る。いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している原子と一緒になってＣ７−１５炭素環（シクロヘプチル基、シクロペンタデカニル基、またはナフチル基など）を形成する。
いくつかの実施形態では、Ｒ４は、−（ＣＨ２）ｎＱ及び−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲから選択される。いくつかの実施形態では、Ｑは、−ＯＲ、−ＯＨ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＸ３、−ＣＮ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｈ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）（Ｒ）、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｈ）（Ｒ）、及び複素環からなる群から選択される。他の実施形態では、Ｑは、イミダゾール、ピリミジン、及びプリンからなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している原子と一緒になって複素環または炭素環を形成する。いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している原子と一緒になってＣ３−６炭素環を形成する。いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している原子と一緒になってＣ６炭素環を形成する。いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している原子と一緒になってフェニル基を形成すする。いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している原子と一緒になってシクロヘキシル基を形成する。いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している原子と一緒になって複素環を形成する。ある特定の実施形態では、複素環またはＣ３−６炭素環は、１つ以上のアルキル基で置換される（この置換は、例えば、同じ環原子に対してなされるか、または隣接環原子もしくは非隣接環原子に対してなされる）。例えば、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している原子と一緒になることで、１つ以上のＣ５アルキルで置換されたフェニル基を形成し得る。
いくつかの実施形態では、Ｒ５及びＲ６のうちの少なくとも１つは、Ｃ１−３アルキル（例えば、メチル）として存在する。いくつかの実施形態では、Ｍに隣接するＲ５及びＲ６の一方は、Ｃ１−３アルキル（例えば、メチル）であり、もう一方は、Ｈである。いくつかの実施形態では、Ｍに隣接するＲ５及びＲ６の一方は、Ｃ１−３アルキル（例えば、メチル）であり、もう一方は、Ｈであり、Ｍは、−ＯＣ（Ｏ）−または−Ｃ（Ｏ）Ｏ−である。
いくつかの実施形態では、Ｒ５及びＲ６のうちの多くとも１つは、Ｃ１−３アルキル（例えば、メチル）として存在する。いくつかの実施形態では、Ｍに隣接するＲ５及びＲ６の一方は、Ｃ１−３アルキル（例えば、メチル）であり、もう一方は、Ｈである。いくつかの実施形態では、Ｍに隣接するＲ５及びＲ６の一方は、Ｃ１−３アルキル（例えば、メチル）であり、もう一方は、Ｈであり、Ｍは、−ＯＣ（Ｏ）−または−Ｃ（Ｏ）Ｏ−である。
いくつかの実施形態では、Ｒ５及びＲ６のうちの少なくとも１つは、メチルとして存在する。
式（ＶＩ）、式（ＶＩ−ａ）、式（ＶＩＩ）、式（ＶＩＩａ）、式（ＶＩＩｂ）、式（ＶＩＩｃ）、式（ＶＩＩｄ）、式（ＶＩＩＩ）、式（ＶＩＩＩａ）、式（ＶＩＩＩｂ）、式（ＶＩＩＩｃ）、または式（ＶＩＩＩｄ）のいずれか１つの化合物は、適用可能な場合、下記の特徴を１つ以上含む。
いくつかの実施形態では、ｒは、０である。いくつかの実施形態では、ｒは、１である。
いくつかの実施形態では、ｎは、２、３、または４である。いくつかの実施形態では、ｎは、２である。いくつかの実施形態では、ｎは、４である。いくつかの実施形態では、ｎは、３ではない。
いくつかの実施形態では、ＲＮは、Ｈである。いくつかの実施形態では、ＲＮは、Ｃ１−３アルキルである。例えば、いくつかの実施形態では、ＲＮは、Ｃ１アルキルである。例えば、いくつかの実施形態では、ＲＮは、Ｃ２アルキルである。例えば、いくつかの実施形態では、ＲＮは、Ｃ２アルキルである。
いくつかの実施形態では、Ｘａは、Ｏである。いくつかの実施形態では、Ｘａは、Ｓである。いくつかの実施形態では、Ｘｂは、Ｏである。いくつかの実施形態では、Ｘｂは、Ｓである。
いくつかの実施形態では、Ｒ１０は、Ｎ（Ｒ）２、−ＮＨ（ＣＨ２）ｔ１Ｎ（Ｒ）２、−ＮＨ（ＣＨ２）ｐ１Ｏ（ＣＨ２）ｑ１Ｎ（Ｒ）２、−ＮＨ（ＣＨ２）ｓ１ＯＲ、−Ｎ（（ＣＨ２）ｓ１ＯＲ）２、及び複素環からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、Ｒ１０は、−ＮＨ（ＣＨ２）ｔ１Ｎ（Ｒ）２、−ＮＨ（ＣＨ２）ｐ１Ｏ（ＣＨ２）ｑ１Ｎ（Ｒ）２、−ＮＨ（ＣＨ２）ｓ１ＯＲ、−Ｎ（（ＣＨ２）ｓ１ＯＲ）２、及び複素環からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、Ｒ１０は、−ＮＨ（ＣＨ２）ｏＮ（Ｒ）２であり、ｏは、２、３、または４である。
いくつかの実施形態では、−ＮＨ（ＣＨ２）ｐ１Ｏ（ＣＨ２）ｑ１Ｎ（Ｒ）２中のｐ１は、２である。いくつかの実施形態では、−ＮＨ（ＣＨ２）ｐ１Ｏ（ＣＨ２）ｑ１Ｎ（Ｒ）２中のｑ１は、２である。
いくつかの実施形態では、Ｒ１０は、−Ｎ（（ＣＨ２）ｓ１ＯＲ）２であり、ｓ１は、２である。
いくつかの実施形態ではＲ１０は、−ＮＨ（ＣＨ２）ｏＮ（Ｒ）２、−ＮＨ（ＣＨ２）ｐＯ（ＣＨ２）ｑＮ（Ｒ）２、−ＮＨ（ＣＨ２）ｓＯＲ、または−Ｎ（（ＣＨ２）ｓＯＲ）２であり、Ｒは、ＨまたはＣ１−Ｃ３アルキルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｒは、Ｃ１アルキルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｒは、Ｃ２アルキルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｒは、Ｈである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｒは、Ｈであり、１つのＲは、Ｃ１−Ｃ３アルキルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｒは、Ｈであり、１つのＲは、Ｃ１アルキルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｒは、Ｈであり、１つのＲは、Ｃ２アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ１０は、−ＮＨ（ＣＨ２）ｔ１Ｎ（Ｒ）２、−ＮＨ（ＣＨ２）ｐ１Ｏ（ＣＨ２）ｑ１Ｎ（Ｒ）２、−ＮＨ（ＣＨ２）ｓ１ＯＲ、または−Ｎ（（ＣＨ２）ｓ１ＯＲ）２であり、それぞれのＲは、Ｃ２−Ｃ４アルキルである。
例えば、いくつかの実施形態では、１つのＲは、Ｈであり、１つのＲは、Ｃ２−Ｃ４アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ１０は、複素環である。例えば、いくつかの実施形態では、Ｒ１０は、モルホリニルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｒ１０は、メチルピペラジニルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ５及びＲ６はそれぞれ、Ｈとして存在する。
いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、下記のものからなる群から選択される。
Figure 2021512090
Figure 2021512090
Figure 2021512090
Figure 2021512090
さらなる実施形態では、式（Ｉ Ｉ）の化合物は、下記のものからなる群から選択される。
Figure 2021512090
いくつかの実施形態では、式（Ｉ Ｉ）または式（Ｉ ＩＶ）の化合物は、下記のものからなる群から選択される。
Figure 2021512090
Figure 2021512090
Figure 2021512090
Figure 2021512090
Figure 2021512090
Figure 2021512090
Figure 2021512090
Figure 2021512090
Figure 2021512090
Figure 2021512090
Figure 2021512090
Figure 2021512090
Figure 2021512090
Figure 2021512090
Figure 2021512090
Figure 2021512090
いくつかの実施形態では、本開示の脂質は、化合物Ｉ−３４０Ａ：
Figure 2021512090
 （化合物Ｉ−３４０Ａ）
を含む。
式（Ｉ Ｉ）、式（Ｉ ＩＡ）、式Ｉ（ＩＢ）、式Ｉ（ＩＩ）、式（Ｉ ＩＩａ）、式（Ｉ ＩＩｂ）、式（Ｉ ＩＩｃ）、式（Ｉ ＩＩｄ）、式（Ｉ ＩＩｅ）、式（Ｉ ＩＩｆ）、式（Ｉ ＩＩｇ）、式（Ｉ ＩＩＩ）、式（Ｉ ＶＩ）、式（Ｉ ＶＩ−ａ）、式（Ｉ ＶＩＩ）、式（Ｉ ＶＩＩＩ）、式（Ｉ ＶＩＩａ）、式（Ｉ ＶＩＩＩａ）、式（Ｉ ＶＩＩＩｂ）、式（Ｉ ＶＩＩｂ−１）、式（Ｉ ＶＩＩｂ−２）、式（Ｉ ＶＩＩｂ−３）、式（Ｉ ＶＩＩｃ）、式（Ｉ ＶＩＩｄ）、式（Ｉ ＶＩＩＩｃ）、または式（Ｉ ＶＩＩＩｄ）を有する脂質の中心アミン部分は、生理学的ｐＨにおいてプロトン化し得る。したがって、脂質は、生理学的ｐＨにおいて正の電荷または部分的に正の電荷を有し得る。そのような脂質は、カチオン性（アミノ）脂質またはイオン化可能な（アミノ）脂質と称され得る。脂質は、両性イオン、すなわち、正電荷も負電荷も有する中性分子でもあり得る。
いくつかの態様では、本開示のイオン化可能な脂質は、式Ｉ（Ｉ ＩＸ）
Figure 2021512090
 の化合物のうちの１つ以上またはその塩もしくは異性体であり得、式中、
Ｗは、
Figure 2021512090
 または
Figure 2021512090
 であり、
環Ａは、
Figure 2021512090
 または
Figure 2021512090
 であり；
ｔは１または２であり；
Ａ１及びＡ２はそれぞれ、ＣＨまたはＮから独立して選択され；
Ｚは、ＣＨ２または存在せず、ＺがＣＨ２であるとき、破線（１）及び（２）はそれぞれ単結合を表し；Ｚが存在しないとき、破線（１）及び（２）は両方とも存在せず；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５は、Ｃ５−２０アルキル、Ｃ５−２０アルケニル、−Ｒ”ＭＲ’、−Ｒ＊ＹＲ”、−ＹＲ”、及び−Ｒ＊ＯＲ”からなる群から独立して選択され；
ＲＸ１及びＲＸ２は各々独立して、ＨまたはＣ１−３アルキルであり；
各々のＭは、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｓ）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｏ）−、アリール基、及びヘテロアリール基からなる群から独立して選択され；
Ｍ＊はＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｗ１及びＷ２は各々、−Ｏ−及び−Ｎ（Ｒ６）−からなる群から独立して選択され；
各々のＲ６が、Ｈ及びＣ１−５アルキルからなる群から独立して選択され；
Ｘ１、Ｘ２、及びＸ３は、結合、−ＣＨ２−、−（ＣＨ２）２−、−ＣＨＲ−、−ＣＨＹ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎ−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｃ（Ｓ）−、及び−ＣＨ（ＳＨ）−からなる群から独立して選択され；
各々のＹは、独立してＣ３−６炭素環であり；
各々のＲ＊は、Ｃ１−１２アルキル及びＣ２−１２アルケニルからなる群から独立して選択され；
各々のＲは、Ｃ１−３アルキル及びＣ３−６炭素環からなる群から独立して選択され；
各々のＲ’は、Ｃ１−１２アルキル、Ｃ２−１２アルケニル、及びＨからなる群から独立して選択され；
各々のＲ”は、Ｃ３−１２アルキル、Ｃ３−１２アルケニル、及び−Ｒ＊ＭＲ’からなる群から独立して選択され；ならびに
ｎは、１〜６の整数であり；
環Ａが
Figure 2021512090
 であるとき、
ｉ）Ｘ１、Ｘ２、及びＸ３のうちの少なくとも１つが、−ＣＨ２−ではなく；及び／または
ｉｉ）Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５のうちの少なくとも１つが−Ｒ”ＭＲ’である。
いくつかの実施形態では、化合物は、式（Ｉ ＩＸａ１）〜（Ｉ ＩＸａ８）：
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、または
Figure 2021512090
 のいずれかである。
いくつかの実施形態では、イオン化可能な脂質は、米国出願第６２／２７１，１４６号、同６２／３３８，４７４号、同６２／４１３，３４５号、及び同６２／５１９，８２６号、ならびにＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０６８３００号に記載されている化合物の１つ以上である。
いくつかの実施形態では、イオン化可能な脂質は、米国出願第６２／５１９，８２６号に記載されている化合物１〜１５６から選択される。
いくつかの実施形態では、イオン化可能な脂質は、米国出願第６２／５１９，８２６号に記載されている化合物１〜１６、４２〜６６、６８〜７６、及び７８〜１５６から選択される。
いくつかの実施形態では、イオン化可能な脂質は、
Figure 2021512090
 （化合物Ｉ−３５６（本明細書では化合物Ｍとも称される）またはその塩である。
いくつかの実施形態では、イオン化可能な脂質は、
Figure 2021512090
 ［化合物Ｉ−Ｎ］またはその塩である。
いくつかの実施形態では、イオン化可能な脂質は、
Figure 2021512090
 ［化合物Ｉ−Ｏ］またはその塩である。
いくつかの実施形態では、イオン化可能な脂質は、
Figure 2021512090
 ［化合物Ｉ−Ｐ］またはその塩である。
いくつかの実施形態では、イオン化可能な脂質は、
Figure 2021512090
 ［化合物Ｉ−Ｑ］またはその塩である。
本明細書に記載の式のいずれかを有する脂質（例えば、式（Ｉ Ｉ）、式（Ｉ ＩＡ）、式（Ｉ ＩＢ）、式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、式（ＩＩｂ）、式（ＩＩｃ）、式（ＩＩｄ）、式（ＩＩｅ）、式（ＩＩｆ）、式（ＩＩｇ）、式（ＩＩＩ）、式（ＶＩ）、式（ＶＩ−ａ）、式（ＶＩＩ）、式（ＶＩＩＩ）、式（ＶＩＩａ）、式（ＶＩＩＩａ）、式（ＶＩＩＩｂ）、式（ＶＩＩｂ−１）、式（ＶＩＩｂ−２）、式（ＶＩＩｂ−３）、式（ＶＩＩｃ）、式（ＶＩＩｄ）、式（ＶＩＩＩｃ）、式（ＶＩＩＩｄ）、式（ＩＸ）、式（ＩＸａ１）、式（ＩＸａ２）、式（ＩＸａ３）、式（ＩＸａ４）、式（ＩＸａ５）、式（ＩＸａ６）、式（ＩＸａ７）、または式（ＩＸａ８）（明確には、これらのそれぞれに文字Ｉが前に付く）のいずれかを有する化合物）の中心アミン部分は、生理学的ｐＨでプロトン化されていてもよい。したがって、脂質は、生理学的ｐＨで正または部分的に正の電荷を有してもよい。そのような脂質は、カチオン性またはイオン化可能な（アミノ）脂質と呼ばれる場合がある。脂質は、両性イオン、すなわち、正電荷と負電荷の両方を有する中性分子であってもよい。
いくつかの実施形態では、本発明のイオン化可能なアミノ脂質（例えば、式（Ｉ）、式（ＩＡ）、式（ＩＢ）、式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、式（ＩＩｂ）、式（ＩＩｃ）、式（ＩＩｄ）、式（ＩＩｅ）、式（ＩＩｆ）、式（ＩＩｇ）、式（ＩＩＩ）、式（ＶＩ）、式（ＶＩ−ａ）、式（ＶＩＩ）、式（ＶＩＩＩ）、式（ＶＩＩａ）、式（ＶＩＩＩａ）、式（ＶＩＩＩｂ）、式（ＶＩＩｂ−１）、式（ＶＩＩｂ−２）、式（ＶＩＩｂ−３）、式（ＶＩＩｃ）、式（ＶＩＩｄ）、式（ＶＩＩＩｃ）、式（ＶＩＩＩｄ）、式（ＩＸ）、式（ＩＸａ１）、式（ＩＸａ２）、式（ＩＸａ３）、式（ＩＸａ４）、式（ＩＸａ５）、式（ＩＸａ６）、式（ＩＸａ７）、または式（ＩＸａ８）（明確には、これらのそれぞれに文字Ｉが前に付く）のいずれかを有する化合物）が脂質組成物に含まれる量の範囲は、約１ｍｏｌ％〜９９ｍｏｌ％である。
一実施形態では、本発明のイオン化可能なアミノ脂質（例えば、式（Ｉ）、式（ＩＡ）、式（ＩＢ）、式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、式（ＩＩｂ）、式（ＩＩｃ）、式（ＩＩｄ）、式（ＩＩｅ）、式（ＩＩｆ）、式（ＩＩｇ）、式（ＩＩＩ）、式（ＶＩ）、式（ＶＩ−ａ）、式（ＶＩＩ）、式（ＶＩＩＩ）、式（ＶＩＩａ）、式（ＶＩＩＩａ）、式（ＶＩＩＩｂ）、式（ＶＩＩｂ−１）、式（ＶＩＩｂ−２）、式（ＶＩＩｂ−３）、式（ＶＩＩｃ）、式（ＶＩＩｄ）、式（ＶＩＩＩｃ）、式（ＶＩＩＩｄ）、式（ＩＸ）、式（ＩＸａ１）、式（ＩＸａ２）、式（ＩＸａ３）、式（ＩＸａ４）、式（ＩＸａ５）、式（ＩＸａ６）、式（ＩＸａ７）、または式（ＩＸａ８）（明確には、これらのそれぞれに文字Ｉが前に付く）のいずれかを有する化合物）が脂質組成物に含まれる量は、少なくとも約１ｍｏｌ％、少なくとも約２ｍｏｌ％、少なくとも約３ｍｏｌ％、少なくとも約４ｍｏｌ％、少なくとも約５ｍｏｌ％、少なくとも約６ｍｏｌ％、少なくとも約７ｍｏｌ％、少なくとも約８ｍｏｌ％、少なくとも約９ｍｏｌ％、少なくとも約１０ｍｏｌ％、少なくとも約１１ｍｏｌ％、少なくとも約１２ｍｏｌ％、少なくとも約１３ｍｏｌ％、少なくとも約１４ｍｏｌ％、少なくとも約１５ｍｏｌ％、少なくとも約１６ｍｏｌ％、少なくとも約１７ｍｏｌ％、少なくとも約１８ｍｏｌ％、少なくとも約１９ｍｏｌ％、少なくとも約２０ｍｏｌ％、少なくとも約２１ｍｏｌ％、少なくとも約２２ｍｏｌ％、少なくとも約２３ｍｏｌ％、少なくとも約２４ｍｏｌ％、少なくとも約２５ｍｏｌ％、少なくとも約２６ｍｏｌ％、少なくとも約２７ｍｏｌ％、少なくとも約２８ｍｏｌ％、少なくとも約２９ｍｏｌ％、少なくとも約３０ｍｏｌ％、少なくとも約３１ｍｏｌ％、少なくとも約３２ｍｏｌ％、少なくとも約３３ｍｏｌ％、少なくとも約３４ｍｏｌ％、少なくとも約３５ｍｏｌ％、少なくとも約３６ｍｏｌ％、少なくとも約３７ｍｏｌ％、少なくとも約３８ｍｏｌ％、少なくとも約３９ｍｏｌ％、少なくとも約４０ｍｏｌ％、少なくとも約４１ｍｏｌ％、少なくとも約４２ｍｏｌ％、少なくとも約４３ｍｏｌ％、少なくとも約４４ｍｏｌ％、少なくとも約４５ｍｏｌ％、少なくとも約４６ｍｏｌ％、少なくとも約４７ｍｏｌ％、少なくとも約４８ｍｏｌ％、少なくとも約４９ｍｏｌ％、少なくとも約５０ｍｏｌ％、少なくとも約５１ｍｏｌ％、少なくとも約５２ｍｏｌ％、少なくとも約５３ｍｏｌ％、少なくとも約５４ｍｏｌ％、少なくとも約５５ｍｏｌ％、少なくとも約５６ｍｏｌ％、少なくとも約５７ｍｏｌ％、少なくとも約５８ｍｏｌ％、少なくとも約５９ｍｏｌ％、少なくとも約６０ｍｏｌ％、少なくとも約６１ｍｏｌ％、少なくとも約６２ｍｏｌ％、少なくとも約６３ｍｏｌ％、少なくとも約６４ｍｏｌ％、少なくとも約６５ｍｏｌ％、少なくとも約６６ｍｏｌ％、少なくとも約６７ｍｏｌ％、少なくとも約６８ｍｏｌ％、少なくとも約６９ｍｏｌ％、少なくとも約７０ｍｏｌ％、少なくとも約７１ｍｏｌ％、少なくとも約７２ｍｏｌ％、少なくとも約７３ｍｏｌ％、少なくとも約７４ｍｏｌ％、少なくとも約７５ｍｏｌ％、少なくとも約７６ｍｏｌ％、少なくとも約７７ｍｏｌ％、少なくとも約７８ｍｏｌ％、少なくとも約７９ｍｏｌ％、少なくとも約８０ｍｏｌ％、少なくとも約８１ｍｏｌ％、少なくとも約８２ｍｏｌ％、少なくとも約８３ｍｏｌ％、少なくとも約８４ｍｏｌ％、少なくとも約８５ｍｏｌ％、少なくとも約８６ｍｏｌ％、少なくとも約８７ｍｏｌ％、少なくとも約８８ｍｏｌ％、少なくとも約８９ｍｏｌ％、少なくとも約９０ｍｏｌ％、少なくとも約９１ｍｏｌ％、少なくとも約９２ｍｏｌ％、少なくとも約９３ｍｏｌ％、少なくとも約９４ｍｏｌ％、少なくとも約９５ｍｏｌ％、少なくとも約９６ｍｏｌ％、少なくとも約９７ｍｏｌ％、少なくとも約９８ｍｏｌ％、または少なくとも約９９ｍｏｌ％である。
一実施形態では、本発明のイオン化可能なアミノ脂質（例えば、式（Ｉ）、式（ＩＡ）、式（ＩＢ）、式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、式（ＩＩｂ）、式（ＩＩｃ）、式（ＩＩｄ）、式（ＩＩｅ）、式（ＩＩｆ）、式（ＩＩｇ）、式（ＩＩＩ）、式（ＶＩ）、式（ＶＩ−ａ）、式（ＶＩＩ）、式（ＶＩＩＩ）、式（ＶＩＩａ）、式（ＶＩＩＩａ）、式（ＶＩＩＩｂ）、式（ＶＩＩｂ−１）、式（ＶＩＩｂ−２）、式（ＶＩＩｂ−３）、式（ＶＩＩｃ）、式（ＶＩＩｄ）、式（ＶＩＩＩｃ）、式（ＶＩＩＩｄ）、式（ＩＸ）、式（ＩＸａ１）、式（ＩＸａ２）、式（ＩＸａ３）、式（ＩＸａ４）、式（ＩＸａ５）、式（ＩＸａ６）、式（ＩＸａ７）、または式（ＩＸａ８）（明確には、これらのそれぞれに文字Ｉが前に付く）のいずれかを有する化合物）が脂質組成物に含まれる量の範囲は、約３０ｍｏｌ％〜約７０ｍｏｌ％、約３５ｍｏｌ％〜約６５ｍｏｌ％、約４０ｍｏｌ％〜約６０ｍｏｌ％、及び約４５ｍｏｌ％〜約５５ｍｏｌ％である。
１つの特定の実施形態では、本発明のイオン化可能なアミノ脂質（例えば、式（Ｉ）、式（ＩＡ）、式（ＩＢ）、式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、式（ＩＩｂ）、式（ＩＩｃ）、式（ＩＩｄ）、式（ＩＩｅ）、式（ＩＩｆ）、式（ＩＩｇ）、式（ＩＩＩ）、式（ＶＩ）、式（ＶＩ−ａ）、式（ＶＩＩ）、式（ＶＩＩＩ）、式（ＶＩＩａ）、式（ＶＩＩＩａ）、式（ＶＩＩＩｂ）、式（ＶＩＩｂ−１）、式（ＶＩＩｂ−２）、式（ＶＩＩｂ−３）、式（ＶＩＩｃ）、式（ＶＩＩｄ）、式（ＶＩＩＩｃ）、式（ＶＩＩＩｄ）、式（ＩＸ）、式（ＩＸａ１）、式（ＩＸａ２）、式（ＩＸａ３）、式（ＩＸａ４）、式（ＩＸａ５）、式（ＩＸａ６）、式（ＩＸａ７）、または式（ＩＸａ８）（明確には、これらのそれぞれに文字Ｉが前に付く）のいずれかを有する化合物）が脂質組成物に含まれる量は、約４５ｍｏｌ％である。
１つの特定の実施形態では、本発明のイオン化可能なアミノ脂質（例えば、式（Ｉ）、式（ＩＡ）、式（ＩＢ）、式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、式（ＩＩｂ）、式（ＩＩｃ）、式（ＩＩｄ）、式（ＩＩｅ）、式（ＩＩｆ）、式（ＩＩｇ）、式（ＩＩＩ）、式（ＶＩ）、式（ＶＩ−ａ）、式（ＶＩＩ）、式（ＶＩＩＩ）、式（ＶＩＩａ）、式（ＶＩＩＩａ）、式（ＶＩＩＩｂ）、式（ＶＩＩｂ−１）、式（ＶＩＩｂ−２）、式（ＶＩＩｂ−３）、式（ＶＩＩｃ）、式（ＶＩＩｄ）、式（ＶＩＩＩｃ）、式（ＶＩＩＩｄ）、式（ＩＸ）、式（ＩＸａ１）、式（ＩＸａ２）、式（ＩＸａ３）、式（ＩＸａ４）、式（ＩＸａ５）、式（ＩＸａ６）、式（ＩＸａ７）、または式（ＩＸａ８）（明確には、これらのそれぞれに文字Ｉが前に付く）のいずれかを有する化合物）が脂質組成物に含まれる量は、約４０ｍｏｌ％である。
１つの特定の実施形態では、本発明のイオン化可能なアミノ脂質（例えば、式（Ｉ）、式（ＩＡ）、式（ＩＢ）、式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、式（ＩＩｂ）、式（ＩＩｃ）、式（ＩＩｄ）、式（ＩＩｅ）、式（ＩＩｆ）、式（ＩＩｇ）、式（ＩＩＩ）、式（ＶＩ）、式（ＶＩ−ａ）、式（ＶＩＩ）、式（ＶＩＩＩ）、式（ＶＩＩａ）、式（ＶＩＩＩａ）、式（ＶＩＩＩｂ）、式（ＶＩＩｂ−１）、式（ＶＩＩｂ−２）、式（ＶＩＩｂ−３）、式（ＶＩＩｃ）、式（ＶＩＩｄ）、式（ＶＩＩＩｃ）、式（ＶＩＩＩｄ）、式（ＩＸ）、式（ＩＸａ１）、式（ＩＸａ２）、式（ＩＸａ３）、式（ＩＸａ４）、式（ＩＸａ５）、式（ＩＸａ６）、式（ＩＸａ７）、または式（ＩＸａ８）（明確には、これらのそれぞれに文字Ｉが前に付く）のいずれかを有する化合物）が脂質組成物に含まれる量は、約５０ｍｏｌ％である。
本明細書に開示のイオン化可能なアミノ脂質（例えば、式（Ｉ）、式（ＩＡ）、式（ＩＢ）、式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、式（ＩＩｂ）、式（ＩＩｃ）、式（ＩＩｄ）、式（ＩＩｅ）、式（ＩＩｆ）、式（ＩＩｇ）、式（ＩＩＩ）、式（ＶＩ）、式（ＶＩ−ａ）、式（ＶＩＩ）、式（ＶＩＩＩ）、式（ＶＩＩａ）、式（ＶＩＩＩａ）、式（ＶＩＩＩｂ）、式（ＶＩＩｂ−１）、式（ＶＩＩｂ−２）、式（ＶＩＩｂ−３）、式（ＶＩＩｃ）、式（ＶＩＩｄ）、式（ＶＩＩＩｃ）、式（ＶＩＩＩｄ）、式（ＩＸ）、式（ＩＸａ１）、式（ＩＸａ２）、式（ＩＸａ３）、式（ＩＸａ４）、式（ＩＸａ５）、式（ＩＸａ６）、式（ＩＸａ７）、または式（ＩＸａ８）（明確には、これらのそれぞれに文字Ｉが前に付く）のいずれかを有する化合物）に加えて、本明細書に開示の脂質ベースの組成物（例えば、脂質ナノ粒子）は、追加成分（コレステロール及び／またはコレステロール類似体、非カチオン性ヘルパー脂質、構造脂質、ＰＥＧ脂質、及びそれらの任意の組み合わせなど）を含み得る。
本発明の追加のイオン化可能な脂質は、３−（ジドデシルアミノ）−Ｎ１，Ｎ１，４−トリドデシル−１−ピペラジンエタンアミン（ＫＬ１０）、Ｎ１−［２−（ジドデシルアミノ）エチル］−Ｎ１，Ｎ４，Ｎ４−トリドデシル−１，４−ピペラジンジエタンアミン（ＫＬ２２）、１４，２５−ジトリデシル−１５，１８，２１，２４−テトラアザ−オクタトリアコンタン（ＫＬ２５）、１，２−ジリノレイルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ−ＤＭＡ）、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノメチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−Ｋ−ＤＭＡ）、ヘプタトリアコンタ−６，９，２８，３１−テトラエン−１９−イル４−（ジメチルアミノ）ブタノエート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）、２，２−ジリノレイル−４−（２−ジメチルアミノエチル）−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、１，２−ジオレイルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン（ＤＯＤＭＡ）、（１３Ｚ，１６５Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−ノニルドコサ−１３−１６−ジエン−１−アミン（Ｌ６０８）、２−（｛８−［（３β）−コレスト−５−エン−３−イルオキシ］オクチル｝オキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−１−アミン（Ｏｃｔｙｌ−ＣＬｉｎＤＭＡ）、（２Ｒ）−２−（｛８−［（３β）−コレスト−５−エン−３−イルオキシ］オクチル｝オキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−１−アミン（Ｏｃｔｙｌ−ＣＬｉｎＤＭＡ（２Ｒ））、及び（２Ｓ）−２−（｛８−［（３β）−コレスト−５−エン−３−イルオキシ］オクチル｝オキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−１−アミン（Ｏｃｔｙｌ−ＣＬｉｎＤＭＡ（２Ｓ））からなる非限定的な群から選択され得る。これらに加えて、イオン化可能なアミノ脂質は、環式アミン基を含む脂質でもあり得る。
本発明のイオン化可能なアミノ脂質は、国際公開公報第ＷＯ２０１７／０７５５３１Ａ１号に開示の化合物でもあり得、当該文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。例えば、イオン化可能なアミノ脂質には、限定されないが、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
及びそれらの任意の組み合わせが含まれる。
本発明のイオン化可能な脂質は、国際公開公報第２０１５／１９９９５２Ａ１号に開示の化合物でもあり得、当該文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。例えば、イオン化可能なアミノ脂質には、限定されないが、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
及びそれらの任意の組み合わせが含まれる。
前述の態様または関連する態様のいずれかでは、本開示のＬＮＰのイオン化可能な脂質は、いずれかに含まれる化合物（例えば、式（Ｉ）、式（ＩＡ）、式（ＩＢ）、式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、式（ＩＩｂ）、式（ＩＩｃ）、式（ＩＩｄ）、式（ＩＩｅ）、式（ＩＩｆ）、式（ＩＩｇ）、式（ＩＩＩ）、式（ＶＩ）、式（ＶＩ−ａ）、式（ＶＩＩ）、式（ＶＩＩＩ）、式（ＶＩＩａ）、式（ＶＩＩＩａ）、式（ＶＩＩＩｂ）、式（ＶＩＩｂ−１）、式（ＶＩＩｂ−２）、式（ＶＩＩｂ−３）、式（ＶＩＩｃ）、式（ＶＩＩｄ）、式（ＶＩＩＩｃ）、式（ＶＩＩＩｄ）、式（ＩＸ）、式（ＩＸａ１）、式（ＩＸａ２）、式（ＩＸａ３）、式（ＩＸａ４）、式（ＩＸａ５）、式（ＩＸａ６）、式（ＩＸａ７）、または式（ＩＸａ８）（明確には、これらのそれぞれに文字Ｉが前に付く）のいずれかを有する化合物）を含む。
前述の態様または関連する態様のいずれかでは、本開示のＬＮＰのイオン化可能な脂質は、化合物番号Ｉ １〜３５６のいずれかを含む化合物を含む。
前述の態様または関連する態様のいずれかでは、本開示のＬＮＰのイオン化可能な脂質は、化合物番号Ｉ １８（化合物Ｘとも称される）、化合物番号Ｉ ２５（化合物Ｙとも称される）、化合物番号Ｉ ４８、化合物番号Ｉ ５０、化合物番号Ｉ １０９、化合物番号Ｉ １１１、化合物番号Ｉ １１３、化合物番号Ｉ １８１、化合物番号Ｉ １８２、化合物番号Ｉ ２４４、化合物番号Ｉ ２９２、化合物番号Ｉ ３０１、化合物番号Ｉ ３２１、化合物番号Ｉ ３２２、化合物番号Ｉ ３２６、化合物番号Ｉ ３２８、化合物番号Ｉ ３３０、化合物番号Ｉ ３３１、及び化合物番号Ｉ ３３２からなる群から選択される少なくとも１つの化合物を含む。別の実施形態では、本開示のＬＮＰのイオン化可能な脂質は、化合物番号Ｉ １８（化合物Ｘとも称される）、化合物番号Ｉ ２５（化合物Ｙとも称される）、化合物番号Ｉ ４８、化合物番号Ｉ ５０、化合物番号Ｉ １０９、化合物番号Ｉ １１１、化合物番号Ｉ １８１、化合物番号Ｉ １８２、化合物番号Ｉ ２９２、化合物番号Ｉ ３０１、化合物番号Ｉ ３２１、化合物番号Ｉ ３２６、化合物番号Ｉ ３２８、及び化合物番号Ｉ ３３０からなる群から選択される化合物を含む。別の実施形態では、本開示のＬＮＰのイオン化可能な脂質は、化合物番号Ｉ １８２、化合物番号Ｉ ３０１、化合物番号Ｉ ３２１、及び化合物番号Ｉ ３２６からなる群から選択される化合物を含む。
前述の態様または関連する態様のいずれかでは、本発明の化合物（例えば、化合物番号１〜３５６のいずれかを含む化合物）の合成は、２０１８年９月１９日出願の米国仮特許出願第６２／７３３，３１５号に記載の合成の説明に従って行われる。
代表的な合成経路：
化合物Ｉ−１８２：ヘプタデカン−９−イル８−（（３−（（２−（メチルアミノ）−３，４−ジオキソシクロブタ−１−エン−１−イル）アミノ）プロピル）（８−（ノニルオキシ）−８−オキソオクチル）アミノ）オクタノエート
３−メトキシ−４−（メチルアミノ）シクロブタ−３−エン−１，２−ジオン
Figure 2021512090
 化学式：Ｃ６Ｈ７ＮＯ３
分子量：１４１．１３
３，４−ジメトキシ−３−シクロブテン−１，２−ジオン（１ｇ、７ｍｍｏｌ）を１００ｍＬのジエチルエーテル中に含む溶液に対して、ＴＨＦ中に２Ｍのメチルアミンを含む溶液（３．８ｍＬ、７．６ｍｍｏｌ）を添加したところ、ほぼ瞬時に沈殿物が形成された。この混合物を室温で２４時間攪拌してからろ過した。フィルター上の固体をジエチルエーテルで洗浄し、風乾した。フィルター上の固体を熱ＥｔＯＡｃに溶解してからろ過し、ろ液を室温に冷却した後、０℃に冷却して沈殿物を得た。この沈殿物をろ過によって単離し、冷ＥｔＯＡｃで洗浄し、風乾してから減圧下で乾燥させることで、３−メトキシ−４−（メチルアミノ）シクロブタ−３−エン−１，２−ジオン（０．７０ｇ、５ｍｍｏｌ、７３％）を白色の固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６） δ： ｐｐｍ ８．５０ （ｂｒ． ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ６９ Ｈｚ）；４．２７ （ｓ， ３Ｈ）；３．０２ （ｓｄｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ４２ Ｈｚ， ４．５ Ｈｚ）。
ヘプタデカン−９−イル８−（（３−（（２−（メチルアミノ）−３，４−ジオキソシクロブタ−１−エン−１−イル）アミノ）プロピル）（８−（ノニルオキシ）−８−オキソオクチル）アミノ）オクタノエート
Figure 2021512090
 化学式：Ｃ５０Ｈ９３Ｎ３Ｏ６
分子量：８３２．３１
ヘプタデカン−９−イル８−（（３−アミノプロピル）（８−（ノニルオキシ）−８−オキソオクチル）アミノ）オクタノエート（２００ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）を１０ｍＬのエタノール中に含む溶液に対して３−メトキシ−４−（メチルアミノ）シクロブタ−３−エン−１，２−ジオン（３９ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）を添加し、得られた無色の溶液を室温で２０時間攪拌した。その後、ＬＣ／ＭＳによって分析したところ、出発アミンはすべて消費されていた。溶液を減圧下で濃縮し、残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（ジクロロメタン中にＮＨ４ＯＨを１％、ＭｅＯＨを２０％含む混合物のジクロロメタン中の含有率を０→１００％として溶出）によって精製することで、ヘプタデカン−９−イル８−（（３−（（２−（メチルアミノ）−３，４−ジオキソシクロブタ−１−エン−１−イル）アミノ）プロピル）（８−（ノニルオキシ）−８−オキソオクチル）アミノ）オクタノエート（１３８ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ、６０％）を白色のガム状固体として得た。ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ： ＲＴ ＝ ３分。ＭＳ （ＥＳ）： Ｃ５１Ｈ９５Ｎ３Ｏ６に対するｍ／ｚ （ＭＨ＋） ８３３．４。１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ｐｐｍ ７．８６ （ｂｒ． ｓ．， １Ｈ）；４．８６ （五重線， １Ｈ， Ｊ ＝ ６ Ｈｚ）；４．０５ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ６ Ｈｚ）；３．９２ （ｄ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ３ Ｈｚ）；３．２０ （ｓ， ６Ｈ）；２．６３ （ｂｒ． ｓ， ２Ｈ）；２．４２ （ｂｒ． ｓ， ３Ｈ）；２．２８ （ｍ， ４Ｈ）；１．７４ （ｂｒ． ｓ， ２Ｈ）；１．６１ （ｍ， ８Ｈ）；１．５０ （ｍ， ５Ｈ）；１．４１ （ｍ， ３Ｈ）；１．２５ （ｂｒ． ｍ， ４７Ｈ）；０．８８ （ｔ， ９Ｈ， Ｊ ＝ ７．５ Ｈｚ）。
化合物Ｉ−３０１：ヘプタデカン−９−イル８−（（３−（（２−（メチルアミノ）−３，４−ジオキソシクロブタ−１−エン−１−イル）アミノ）プロピル）（８−オキソ−８−（ウンデカン−３−イルオキシ）オクチル）アミノ）オクタノエート
Figure 2021512090
 化学式：Ｃ５２Ｈ９７Ｎ３Ｏ６
分子量：８６０．３６
化合物Ｉ−３０１は、化合物１８２と類似的に調製したが、例外として、ヘプタデカン−９−イル８−（（３−アミノプロピル）（８−（ノニルオキシ）−８−オキソオクチル）アミノ）オクタノエートの代わりにヘプタデカン−９−イル８−（（３−アミノプロピル）（８−オキソ−８−（ウンデカン−３−イルオキシ）オクチル）アミノ）オクタノエート（５００ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）を使用した。一連の反応後処理（有機溶媒添加後の水性溶液での洗浄を含む）を実施した後、残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（ジクロロメタン中にＮＨ４ＯＨを１％、ＭｅＯＨを２０％含む混合物のジクロロメタン中の含有率を０→５０％として溶出）によって精製することで、ヘプタデカン−９−イル８−（（３−（（２−（メチルアミノ）−３，４−ジオキソシクロブタ−１−エン−１−イル）アミノ）プロピル）（８−オキソ−８−（ウンデカン−３−イルオキシ）オクチル）アミノ）オクタノエート（１８０ｍｇ、３２％）を白色のワックス状固体として得た。ＨＰＬＣ／ＵＶ （２５４ ｎｍ）： ＲＴ ＝ ６．７７分。Ｃ５２Ｈ９７Ｎ３Ｏ６に対するＭＳ （ＣＩ）： ｍ／ｚ （ＭＨ＋） ８６０．７。１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ｐｐｍ ４．８６−４．７９ （ｍ， ２Ｈ）；３．６６ （ｂｓ， ２Ｈ）；３．２５ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ４．９ Ｈｚ）；２．５６−２．５２ （ｍ， ２Ｈ）；２．４２−２．３７ （ｍ， ４Ｈ）；２．２８ （ｄｄ， ４Ｈ， Ｊ ＝ ２．７ Ｈｚ， ７．４ Ｈｚ）；１．７８−１．６８ （ｍ， ３Ｈ）；１．６４−１．５０ （ｍ， １６Ｈ）；１．４８−１．３８ （ｍ， ６Ｈ）；１．３２−１．１８ （ｍ， ４３Ｈ）；０．８８−０．８４ （ｍ， １２Ｈ）。
（ｉｉ）コレステロール／構造脂質
本明細書に記載の免疫細胞送達ＬＮＰは、１つ以上の構造脂質を含む。
本明細書で使用される「構造脂質」という用語は、ステロールを指すと共に、ステロール部分を含む脂質も指す。脂質ナノ粒子に構造脂質を組み込むことは、粒子中で他の脂質が凝集することを軽減する上で役立ち得る。構造脂質には、限定されないが、コレステロール、フェコステロール、エルゴステロール、ブラシカステロール、トマチジン、トマチン、ウルソール酸、アルファ−トコフェロール、及びそれらの混合物が含まれ得る。ある特定の実施形態では、構造脂質は、コレステロールである。ある特定の実施形態では、構造脂質は、コレステロール及びコルチコステロイド（例えば、プレドニゾロン、デキサメタゾン、プレドニゾン、及びヒドロコルチゾンなど）、またはそれらの組み合わせを含む。
いくつかの実施形態では、構造脂質は、ステロールである。本明細書で定義される「ステロール」は、ステロイドアルコールからなるステロイドの部分群である。ある特定の実施形態では、構造脂質は、ステロイドである。ある特定の実施形態では、構造脂質は、コレステロールである。ある特定の実施形態では、構造脂質は、コレステロールの類似体である。ある特定の実施形態では、構造脂質は、アルファ−トコフェロールである。構造脂質の例としては、限定されないが、下記のものが挙げられる。
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、及び
Figure 2021512090
 。
本明細書に記載の免疫細胞送達ＬＮＰは、１つ以上の構造脂質を含む。
本明細書で使用される「構造脂質」という用語は、ステロールを指すと共に、ステロール部分を含む脂質も指す。脂質ナノ粒子に構造脂質を組み込むことは、粒子中で他の脂質が凝集することを軽減する上で役立ち得る。ある特定の実施形態では、構造脂質は、コレステロール及びコルチコステロイド（例えば、プレドニゾロン、デキサメタゾン、プレドニゾン、及びヒドロコルチゾンなど）、またはそれらの組み合わせを含む。
いくつかの実施形態では、構造脂質は、ステロールである。本明細書で定義される「ステロール」は、ステロイドアルコールからなるステロイドの部分群である。構造脂質には、限定されないが、ステロール（例えば、フィトステロールまたはズーステロール）が含まれ得る。
ある特定の実施形態では、構造脂質は、ステロイドである。例えば、ステロールには、限定されないが、コレステロール、□−シトステロール、フェコステロール、エルゴステロール、シトステロール、カンペステロール、スチグマステロール、ブラシカステロール、エルゴステロール、トマチジン、トマチン、ウルソール酸、アルファ−トコフェロール、または本明細書の表１〜１６中の化合物Ｓ１〜１４８のいずれか１つが含まれ得る。
ある特定の実施形態では、構造脂質は、コレステロールである。ある特定の実施形態では、構造脂質は、コレステロールの類似体である。
ある特定の実施形態では、構造脂質は、アルファ−トコフェロールである。
ある一態様では、本発明の構造脂質は、式ＳＩ：
Figure 2021512090
 式ＳＩ
の構造を有する化合物またはその薬学的に許容される塩を特徴とし、式中、
Ｒ１ａは、Ｈ、必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、必要に応じて置換されたＣ２−Ｃ６アルケニル、または必要に応じて置換されたＣ２−Ｃ６アルキニルであり、
Ｘは、ＯまたはＳであり、
Ｒ１ｂは、Ｈ、必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、または
Figure 2021512090
 であり、
Ｒｂ１、Ｒｂ２、及びＲｂ３はそれぞれ、独立して、必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルまたは必要に応じて置換されたＣ６−Ｃ１０アリールであり、
Ｒ２は、ＨまたはＯＲＡであり、ＲＡは、Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３は、Ｈまたは
Figure 2021512090
 であり、
それぞれの
Figure 2021512090
 は、独立して、単結合または二重結合を表し、
Ｗは、ＣＲ４ａまたはＣＲ４ａＲ４ｂであり、Ｗと隣接炭素との間に二重結合が存在する場合、Ｗは、ＣＲ４ａであり、Ｗと隣接炭素との間に単結合が存在する場合、Ｗは、ＣＲ４ａＲ４ｂであり、
Ｒ４ａ及びＲ４ｂはそれぞれ、独立して、Ｈ、ハロ、または必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ５ａ及びＲ５ｂはそれぞれ、独立して、ＨもしくはＯＲＡであるか、またはＲ５ａ及びＲ５ｂは、それぞれが結合している原子と一緒になって
Figure 2021512090
 を形成し、
Ｌ１ａは、存在しないか、
Figure 2021512090
 であるか、または
Figure 2021512090
 であり、
Ｌ１ｂは、存在しないか、
Figure 2021512090
 であるか、または
Figure 2021512090
 であり、
ｍは、１、２、または３であり、
Ｌ１ｃは、存在しないか、
Figure 2021512090
 であるか、または
Figure 2021512090
 であり、
Ｒ６は、必要に応じて置換されたＣ３−Ｃ１０シクロアルキル、必要に応じて置換されたＣ３−Ｃ１０シクロアルケニル、必要に応じて置換されたＣ６−Ｃ１０アリール、必要に応じて置換されたＣ２−Ｃ９ヘテロシクリル、または必要に応じて置換されたＣ２−Ｃ９ヘテロアリールである。
いくつかの実施形態では、化合物は、式ＳＩａ：
Figure 2021512090
 式ＳＩａ
の構造を有するか、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、化合物は、式ＳＩｂ：
Figure 2021512090
 式ＳＩｂ
の構造を有するか、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、化合物は、式ＳＩｃ：
Figure 2021512090
 式ＳＩｃ
の構造を有するか、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、化合物は、式ＳＩｄ：
Figure 2021512090
 式ＳＩｄ
の構造を有するか、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、Ｌ１ａは、存在しない。いくつかの実施形態では、Ｌ１ａは、
Figure 2021512090
 である。いくつかの実施形態では、Ｌ１ａは、
Figure 2021512090
 である。
いくつかの実施形態では、Ｌ１ｂは、存在しない。いくつかの実施形態では、Ｌ１ｂは、
Figure 2021512090
 である。いくつかの実施形態では、Ｌ１ｂは、
Figure 2021512090
 である。
いくつかの実施形態では、ｍは、１または２である。いくつかの実施形態では、ｍは、１である。いくつかの実施形態では、ｍは、２である。
いくつかの実施形態では、Ｌ１ｃは、存在しない。いくつかの実施形態では、Ｌ１ｃは、
Figure 2021512090
 である。いくつかの実施形態では、Ｌ１ｃは、
Figure 2021512090
 である。
いくつかの実施形態では、Ｒ６は、必要に応じて置換されたＣ６−Ｃ１０アリールである。
いくつかの実施形態では、Ｒ６は、
Figure 2021512090
 であり、式中、
ｎ１は、０、１、２、３、４、または５であり、
それぞれのＲ７は、独立して、ハロまたは必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルである。
いくつかの実施形態では、それぞれのＲ７は、独立して、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、または
Figure 2021512090
 である。
いくつかの実施形態では、ｎ１は、０、１、または２である。いくつかの実施形態では、ｎは、０である。いくつかの実施形態では、ｎ１は、１である。いくつかの実施形態では、ｎ１は、２である。
いくつかの実施形態では、Ｒ６は、必要に応じて置換されたＣ３−Ｃ１０シクロアルキルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ６は、必要に応じて置換されたＣ３−Ｃ１０モノシクロアルキルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ６は、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、または
Figure 2021512090
 であり、式中、
ｎ２は、０、１、２、３、４、または５であり、
ｎ３は、０、１、２、３、４、５、６、または７であり、
ｎ４は、０、１、２、３、４、５、６、７、８、または９であり、
ｎ５は、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１１であり、
ｎ６は、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、または１３であり、
それぞれのＲ８は、独立して、ハロまたは必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルである。
いくつかの実施形態では、それぞれのＲ８は、独立して、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、または
Figure 2021512090
 である。
いくつかの実施形態では、Ｒ６は、必要に応じて置換されたＣ３−Ｃ１０ポリシクロアルキルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ６は、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、または
Figure 2021512090
 である。
いくつかの実施形態では、Ｒ６は、必要に応じて置換されたＣ３−Ｃ１０シクロアルケニルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ６は、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、または
Figure 2021512090
 であり、式中、
ｎ７は、０、１、２、３、４、５、６、または７であり、
ｎ８は、０、１、２、３、４、５、６、７、８、または９であり、
ｎ９は、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１１であり、
それぞれのＲ９は、独立して、ハロまたは必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ６は、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、または
Figure 2021512090
 である。
いくつかの実施形態では、それぞれのＲ９は、独立して、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、または
Figure 2021512090
 である。
いくつかの実施形態では、Ｒ６は、必要に応じて置換されたＣ２−Ｃ９ヘテロシクリルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ６は、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、または
Figure 2021512090
 であり、式中、
ｎ１０は、０、１、２、３、４、または５であり、
ｎ１１は、０、１、２、３、４、または５であり、
ｎ１２は、０、１、２、３、４、５、６、または７であり、
ｎ１３は、０、１、２、３、４、５、６、７、８、または９であり、
それぞれのＲ１０は、独立して、ハロまたは必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｙ１及びＹ２はそれぞれ、独立して、Ｏ、Ｓ、ＮＲＢ、またはＣＲ１１ａＲ１１ｂであり、
ＲＢは、Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ１１ａ及びＲ１１ｂはそれぞれ、独立して、Ｈ、ハロ、または必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｙ２がＣＲ１１ａＲ１１ｂである場合、Ｙ１は、Ｏ、Ｓ、またはＮＲＢである。
いくつかの実施形態では、Ｙ１は、Ｏである。
いくつかの実施形態では、Ｙ２は、Ｏである。いくつかの実施形態では、Ｙ２は、ＣＲ１１ａＲ１１ｂである。
いくつかの実施形態では、それぞれのＲ１０は、独立して、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、または
Figure 2021512090
 である。
いくつかの実施形態では、Ｒ６は、必要に応じて置換されたＣ２−Ｃ９ヘテロアリールである。
いくつかの実施形態では、Ｒ６は、
Figure 2021512090
 であり、式中、
Ｙ３は、ＮＲＣ、Ｏ、またはＳであり、
ｎ１４は、０、１、２、３、または４であり、
ＲＣは、Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
それぞれのＲ１２は、独立して、ハロまたは必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ６は、
Figure 2021512090
 である。いくつかの実施形態では、Ｒ６は、
Figure 2021512090
 である。
ある一態様では、本発明の構造脂質は、式ＳＩＩ：
Figure 2021512090
 式ＳＩＩ
の構造を有する化合物またはその薬学的に許容される塩を特徴とし、式中、
Ｒ１ａは、Ｈ、必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、必要に応じて置換されたＣ２−Ｃ６アルケニル、または必要に応じて置換されたＣ２−Ｃ６アルキニルであり、
Ｘは、ＯまたはＳであり、
Ｒ１ｂは、Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ２は、ＨまたはＯＲＡであり、ＲＡは、Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３は、Ｈまたは
Figure 2021512090
 であり、
Figure 2021512090
 は、単結合または二重結合を表し、
Ｗは、ＣＲ４ａまたはＣＲ４ａＲ４ｂであり、Ｗと隣接炭素との間に二重結合が存在する場合、Ｗは、ＣＲ４ａであり、Ｗと隣接炭素との間に単結合が存在する場合、Ｗは、ＣＲ４ａＲ４ｂであり、
Ｒ４ａ及びＲ４ｂはそれぞれ、独立して、Ｈ、ハロ、または必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ５ａ及びＲ５ｂはそれぞれ、独立して、ＨもしくはＯＲＡであるか、またはＲ５ａ及びＲ５ｂは、それぞれが結合している原子と一緒になって
Figure 2021512090
 を形成し、
Ｌ１は、必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキレンであり、
Ｒ１３ａ、Ｒ１３ｂ、及びＲ１３ｃはそれぞれ、独立して、必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルまたは必要に応じて置換されたＣ６−Ｃ１０アリールである。
いくつかの実施形態では、化合物は、式ＳＩＩａ：
Figure 2021512090
 式ＳＩＩａ
の構造を有するか、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、化合物は、式ＳＩＩｂ：
Figure 2021512090
 式ＳＩＩｂ
の構造を有するか、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、または
Figure 2021512090
 である。
いくつかの実施形態では、Ｒ１３ａ、Ｒ１３ｂ、及びＲ１３ｃはそれぞれ、独立して、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、または
Figure 2021512090
 である。
ある一態様では、本発明の構造脂質は、式ＳＩＩＩ：
Figure 2021512090
 式ＳＩＩＩ
の構造を有する化合物またはその薬学的に許容される塩を特徴とし、式中、
Ｒ１ａは、Ｈ、必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、必要に応じて置換されたＣ２−Ｃ６アルケニル、または必要に応じて置換されたＣ２−Ｃ６アルキニルであり、
Ｘは、ＯまたはＳであり、
Ｒ１ｂは、Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ２は、ＨまたはＯＲＡであり、ＲＡは、Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３は、Ｈまたは
Figure 2021512090
 であり、
それぞれの
Figure 2021512090
 は、独立して、単結合または二重結合を表し、
Ｗは、ＣＲ４ａまたはＣＲ４ａＲ４ｂであり、Ｗと隣接炭素との間に二重結合が存在する場合、Ｗは、ＣＲ４ａであり、Ｗと隣接炭素との間に単結合が存在する場合、Ｗは、ＣＲ４ａＲ４ｂであり、
Ｒ４ａ及びＲ４ｂはそれぞれ、独立して、Ｈ、ハロ、ヒドロキシル、必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、−ＯＳ（Ｏ）２Ｒ４ｃであり、Ｒ４ｃは、必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルまたは必要に応じて置換されたＣ６−Ｃ１０アリールであり、
Ｒ５ａ及びＲ５ｂはそれぞれ、独立して、ＨもしくはＯＲＡであるか、またはＲ５ａ及びＲ５ｂは、それぞれが結合している原子と一緒になって
Figure 2021512090
 を形成し、
Ｒ１４は、ＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ１５は、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 または
Figure 2021512090
 であり、
Ｒ１６は、Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ１７ｂは、Ｈ、ＯＲ１７ｃ、必要に応じて置換されたＣ６−Ｃ１０アリール、または必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ１７ｃは、Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
ｏ１は、０、１、２、３、４、５、６、７、または８であり、
ｐ１は、０、１、または２であり、
ｐ２は、０、１、または２であり、
Ｚは、ＣＨ２Ｏ、Ｓ、またはＮＲＤであり、ＲＤは、Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
それぞれのＲ１８は，独立して，ハロまたは必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルである。
いくつかの実施形態では、化合物は、式ＳＩＩＩａ：
Figure 2021512090
 式ＳＩＩＩａ
の構造を有するか、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、化合物は、式ＳＩＩＩｂ：
Figure 2021512090
 式ＳＩＩＩｂ
の構造を有するか、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、Ｒ１４は、Ｈ、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、または
Figure 2021512090
 である。
いくつかの実施形態では、Ｒ１４は、
Figure 2021512090
 である。
いくつかの実施形態では、Ｒ１５は、
Figure 2021512090
 である。いくつかの実施形態では、Ｒ１５は、
Figure 2021512090
 である。
いくつかの実施形態では、Ｒ１６は、Ｈである。いくつかの実施形態では、Ｒ１６は、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、または
Figure 2021512090
 である。
いくつかの実施形態では、Ｒ１７ａは、Ｈである。いくつかの実施形態では、Ｒ１７ａは、必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ１７ｂは、Ｈである。いくつかの実施形態では、Ｒ１７ｂは、必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ１７ｂは、ＯＲ１７ｃである。
いくつかの実施形態では、Ｒ１７ｃは、Ｈ、
Figure 2021512090
 、または
Figure 2021512090
 である。いくつかの実施形態では、Ｒ１７ｃは、Ｈである。いくつかの実施形態では、Ｒ１７ｃは、
Figure 2021512090
 である。
いくつかの実施形態では、Ｒ１５は、
Figure 2021512090
 である。
いくつかの実施形態では、それぞれのＲ１８は、独立して、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、または
Figure 2021512090
 である。
いくつかの実施形態では、Ｚは、ＣＨ２である。いくつかの実施形態では、Ｚは、Ｏである。いくつかの実施形態では、Ｚは、ＮＲＤである。
いくつかの実施形態では、ｏ１は、０、１、２、３、４、５、または６である。
いくつかの実施形態では、ｏ１は、０である。いくつかの実施形態では、ｏ１は、１である。いくつかの実施形態では、ｏ１は、２である。いくつかの実施形態では、ｏ１は、３である。いくつかの実施形態では、ｏ１は、４である。いくつかの実施形態では、ｏ１は、５である。いくつかの実施形態では、ｏ１は、６である。
いくつかの実施形態では、ｐ１は、０または１である。いくつかの実施形態では、ｐ１は、０である。いくつかの実施形態では、ｐ１は、１である。
いくつかの実施形態では、ｐ２は、０または１である。いくつかの実施形態では、ｐ２は、０である。いくつかの実施形態では、ｐ２は、１である。
ある一態様では、本発明の構造脂質は、式ＳＩＶ：
Figure 2021512090
 式ＳＩＶ
の構造を有する化合物またはその薬学的に許容される塩を特徴とし、式中、
Ｒ１ａは、Ｈ、必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、必要に応じて置換されたＣ２−Ｃ６アルケニル、または必要に応じて置換されたＣ２−Ｃ６アルキニルであり、
Ｘは、ＯまたはＳであり、
Ｒ１ｂは、Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ２は、ＨまたはＯＲＡであり、ＲＡは、Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３は、Ｈまたは
Figure 2021512090
 であり、
Figure 2021512090
 は、単結合または二重結合を表し、
Ｗは、ＣＲ４ａまたはＣＲ４ａＲ４ｂであり、Ｗと隣接炭素との間に二重結合が存在する場合、Ｗは、ＣＲ４ａであり、Ｗと隣接炭素との間に単結合が存在する場合、Ｗは、ＣＲ４ａＲ４ｂであり、
Ｒ４ａ及びＲ４ｂはそれぞれ、独立して、Ｈ、ハロ、または必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ５ａ及びＲ５ｂはそれぞれ、独立して、ＨもしくはＯＲＡであるか、またはＲ５ａ及びＲ５ｂは、それぞれが結合している原子と一緒になって
Figure 2021512090
 を形成し、
ｓは、０または１であり、
Ｒ１９は、ＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ２０は、Ｃ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ２１は、ＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルである。
いくつかの実施形態では、化合物は、式ＳＩＶａ：
Figure 2021512090
 式ＳＩＶａ
の構造を有するか、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、化合物は、式ＳＩＶｂ：
Figure 2021512090
 式ＳＩＶｂ
の構造を有するか、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、Ｒ１９は、Ｈ、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、または
Figure 2021512090
 である。
いくつかの実施形態では、Ｒ１９は、
Figure 2021512090
 である。
いくつかの実施形態では、Ｒ２０は、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、または
Figure 2021512090
 である。
いくつかの実施形態では、Ｒ２１は、Ｈ、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、または
Figure 2021512090
 である。
ある一態様では、本発明の構造脂質は、式ＳＶ：
Figure 2021512090
 式ＳＶ
の構造を有する化合物またはその薬学的に許容される塩を特徴とし、式中、
Ｒ１ａは、Ｈ、必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、必要に応じて置換されたＣ２−Ｃ６アルケニル、または必要に応じて置換されたＣ２−Ｃ６アルキニルであり、
Ｘは、ＯまたはＳであり、
Ｒ１ｂは、Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ２は、ＨまたはＯＲＡであり、ＲＡは、Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３は、Ｈまたは
Figure 2021512090
 であり、
Figure 2021512090
 は、単結合または二重結合を表し、
Ｗは、ＣＲ４ａまたはＣＲ４ａＲ４ｂであり、Ｗと隣接炭素との間に二重結合が存在する場合、Ｗは、ＣＲ４ａであり、Ｗと隣接炭素との間に単結合が存在する場合、Ｗは、ＣＲ４ａＲ４ｂであり、
Ｒ４ａ及びＲ４ｂはそれぞれ、独立して、Ｈ、ハロ、または必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ５ａ及びＲ５ｂはそれぞれ、独立して、ＨもしくはＯＲＡであるか、またはＲ５ａ及びＲ５ｂは、それぞれが結合している原子と一緒になって
Figure 2021512090
 を形成し、
Ｒ２２は、ＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ２３は、ハロ、ヒドロキシル、必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、または必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６ヘテロアルキルである。
いくつかの実施形態では、化合物は、式ＳＶａ：
Figure 2021512090
 式ＳＶａ
の構造を有するか、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、化合物は、式ＳＶｂ：
Figure 2021512090
 式ＳＶｂ
の構造を有するか、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、Ｒ２２は、Ｈ、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、または
Figure 2021512090
 である。
いくつかの実施形態では、Ｒ２２は、
Figure 2021512090
 である。
いくつかの実施形態では、Ｒ２３は、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、または
Figure 2021512090
 である。
ある一態様では、本発明の構造脂質は、式ＳＶＩ：
Figure 2021512090
 式ＳＶＩ
の構造を有する化合物またはその薬学的に許容される塩を特徴とし、式中、
Ｒ１ａは、Ｈ、必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、必要に応じて置換されたＣ２−Ｃ６アルケニル、または必要に応じて置換されたＣ２−Ｃ６アルキニルであり、
Ｘは、ＯまたはＳであり、
Ｒ１ｂは、Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ２は、ＨまたはＯＲＡであり、ＲＡは、Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３は、Ｈまたは
Figure 2021512090
 であり、
Figure 2021512090
 は、単結合または二重結合を表し、
Ｗは、ＣＲ４ａまたはＣＲ４ａＲ４ｂであり、Ｗと隣接炭素との間に二重結合が存在する場合、Ｗは、ＣＲ４ａであり、Ｗと隣接炭素との間に単結合が存在する場合、Ｗは、ＣＲ４ａＲ４ｂであり、
Ｒ４ａ及びＲ４ｂはそれぞれ、独立して、Ｈ、ハロ、または必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ５ａ及びＲ５ｂはそれぞれ、独立して、ＨもしくはＯＲＡであるか、またはＲ５ａ及びＲ５ｂは、それぞれが結合している原子と一緒になって
Figure 2021512090
 を形成し、
Ｒ２４は、ＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ２５ａ及びＲ２５ｂはそれぞれ、Ｃ１−Ｃ６アルキルである。
いくつかの実施形態では、化合物は、式ＳＶＩａ：
Figure 2021512090
 式ＳＶＩａ
の構造を有するか、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、化合物は、式ＳＶＩｂ：
Figure 2021512090
 式ＳＶＩｂ
の構造を有するか、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、Ｒ２４は、Ｈ、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、または
Figure 2021512090
 である。
いくつかの実施形態では、Ｒ２４は、
Figure 2021512090
 である。
いくつかの実施形態では、Ｒ２５ａ及びＲ２５ｂはそれぞれ、独立して、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、または
Figure 2021512090
 である。
ある一態様では、本発明の構造脂質は、式ＳＶＩＩ：
Figure 2021512090
 式ＳＶＩＩ
の構造を有する化合物またはその薬学的に許容される塩を特徴とし、式中、
Ｒ１ａは、Ｈ、必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、必要に応じて置換されたＣ２−Ｃ６アルケニル、必要に応じて置換されたＣ２−Ｃ６アルキニル、または
Figure 2021512090
 であり、Ｒ１ｃ、Ｒ１ｄ、及びＲ１ｅはそれぞれ、独立して、必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルまたは必要に応じて置換されたＣ６−Ｃ１０アリールであり、
Ｘは、ＯまたはＳであり、
Ｒ１ｂは、Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ２は、ＨまたはＯＲＡであり、ＲＡは、Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３は、Ｈまたは
Figure 2021512090
 であり、
Figure 2021512090
 は、単結合または二重結合を表し、
Ｗは、ＣＲ４ａまたはＣＲ４ａＲ４ｂであり、Ｗと隣接炭素との間に二重結合が存在する場合、Ｗは、ＣＲ４ａであり、Ｗと隣接炭素との間に単結合が存在する場合、Ｗは、ＣＲ４ａＲ４ｂであり、
Ｒ４ａ及びＲ４ｂはそれぞれ、独立して、Ｈ、ハロ、または必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ５ａ及びＲ５ｂはそれぞれ、独立して、ＨもしくはＯＲＡであるか、またはＲ５ａ及びＲ５ｂは、それぞれが結合している原子と一緒になって
Figure 2021512090
 を形成し、
ｑは、０または１であり、
Ｒ２６ａ及びＲ２６ｂはそれぞれ、独立して、Ｈもしくは必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであるか、またはＲ２６ａ及びＲ２６ｂは、それぞれが結合している原子と一緒になって
Figure 2021512090
 もしくは
Figure 2021512090
 を形成し、Ｒ２６ｃ及びＲ２６はそれぞれ、独立して、Ｈもしくは必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ２７ａ及びＲ２７ｂはそれぞれ、Ｈ、ヒドロキシル、または必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルである。
いくつかの実施形態では、化合物は、式ＳＶＩＩａ：
Figure 2021512090
 式ＳＶＩＩａ
の構造を有するか、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、化合物は、式ＳＶＩＩｂ：
Figure 2021512090
 式ＳＶＩＩｂ
の構造を有するか、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、Ｒ２６ａ及びＲ２６ｂは、独立して、Ｈ、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、または
Figure 2021512090
 である。
いくつかの実施形態では、Ｒ２６ａ及びＲ２６ｂは、それぞれが結合している原子と一緒になって
Figure 2021512090
 または
Figure 2021512090
 を形成する。
いくつかの実施形態では、Ｒ２６ａ及びＲ２６ｂは、それぞれが結合している原子と一緒になって
Figure 2021512090
 を形成する。いくつかの実施形態では、Ｒ２６ａ及びＲ２６ｂは、それぞれが結合している原子と一緒になって
Figure 2021512090
 を形成する。
いくつかの実施形態では、Ｒ２６ｃ及びＲ２６はそれぞれ、独立して、Ｈ、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、または
Figure 2021512090
 である。
いくつかの実施形態では、Ｒ２７ａ及びＲ２７ｂはそれぞれ、Ｈ、ヒドロキシル、または必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ３アルキルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ２７ａ及びＲ２７ｂそれぞれ、独立して、Ｈ、ヒドロキシル、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 である。
ある一態様では、本発明の構造脂質は、式ＳＶＩＩＩ：
Figure 2021512090
 式ＳＶＩＩＩ
の構造を有する化合物またはその薬学的に許容される塩を特徴とし、式中、
Ｒ１ａは、Ｈ、必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、必要に応じて置換されたＣ２−Ｃ６アルケニル、または必要に応じて置換されたＣ２−Ｃ６アルキニルであり、
Ｘは、ＯまたはＳであり、
Ｒ１ｂは、Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ２は、ＨまたはＯＲＡであり、ＲＡは、Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３は、Ｈまたは
Figure 2021512090
 であり、
Figure 2021512090
 は、単結合または二重結合を表し、
Ｗは、ＣＲ４ａまたはＣＲ４ａＲ４ｂであり、Ｗと隣接炭素との間に二重結合が存在する場合、Ｗは、ＣＲ４ａであり、Ｗと隣接炭素との間に単結合が存在する場合、Ｗは、ＣＲ４ａＲ４ｂであり、
Ｒ４ａ及びＲ４ｂはそれぞれ、独立して、Ｈ、ハロ、または必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ５ａ及びＲ５ｂはそれぞれ、独立して、ＨもしくはＯＲＡであるか、またはＲ５ａ及びＲ５ｂは、それぞれが結合している原子と一緒になって
Figure 2021512090
 を形成し、
Ｒ２８は、Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
ｒは、１、２、または３であり、
それぞれのＲ２９は、独立して、Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３０ａ、Ｒ３０ｂ、及びＲ３０ｃはそれぞれ、Ｃ１−Ｃ６アルキルである。
いくつかの実施形態では、化合物は、式ＳＶＩＩＩａ：
Figure 2021512090
 式ＳＶＩＩＩａ
の構造を有するか、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、化合物は、式ＳＶＩＩＩｂ：
Figure 2021512090
 式ＳＶＩＩＩｂ
の構造を有するか、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、Ｒ２８は、Ｈ、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、または
Figure 2021512090
 である。
いくつかの実施形態では、Ｒ２８は、
Figure 2021512090
 である。
いくつかの実施形態では、Ｒ３０ａ、Ｒ３０ｂ、及びＲ３０ｃはそれぞれ、独立して、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、または
Figure 2021512090
 である。
いくつかの実施形態では、ｒは、１である。いくつかの実施形態では、ｒは、２である。いくつかの実施形態では、ｒは、３である。
いくつかの実施形態では、それぞれのＲ２９は、独立して、Ｈ、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、または
Figure 2021512090
 である。
いくつかの実施形態では、それぞれのＲ２９は、独立して、Ｈまたは
Figure 2021512090
 である。
ある一態様では、本発明の構造脂質は、式ＳＩＸ：
Figure 2021512090
 式ＳＩＸ
の構造を有する化合物またはその薬学的に許容される塩を特徴とし、式中、
Ｒ１ａは、Ｈ、必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、必要に応じて置換されたＣ２−Ｃ６アルケニル、または必要に応じて置換されたＣ２−Ｃ６アルキニルであり、
Ｘは、ＯまたはＳであり、
Ｒ１ｂは、Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ２は、ＨまたはＯＲＡであり、ＲＡは、Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３は、Ｈまたは
Figure 2021512090
 であり、
Figure 2021512090
 は、単結合または二重結合を表し、
Ｗは、ＣＲ４ａまたはＣＲ４ａＲ４ｂであり、Ｗと隣接炭素との間に二重結合が存在する場合、Ｗは、ＣＲ４ａであり、Ｗと隣接炭素との間に単結合が存在する場合、Ｗは、ＣＲ４ａＲ４ｂであり、
Ｒ４ａ及びＲ４ｂはそれぞれ、独立して、Ｈ、ハロ、または必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ５ａ及びＲ５ｂはそれぞれ、独立して、ＨもしくはＯＲＡであるか、またはＲ５ａ及びＲ５ｂは、それぞれが結合している原子と一緒になって
Figure 2021512090
 を形成し、
Ｒ３１は、ＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３２ａ及びＲ３２ｂはそれぞれ、Ｃ１−Ｃ６アルキルである。
いくつかの実施形態では、化合物は、式ＳＩＸａ：
Figure 2021512090
 式ＳＩＸａ
の構造を有するか、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、化合物は、式ＳＩＸｂ：
Figure 2021512090
 式ＳＩＸｂ
の構造を有するか、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、Ｒ３１は、Ｈ、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、または
Figure 2021512090
 である。
いくつかの実施形態では、Ｒ３１は、
Figure 2021512090
 である。
いくつかの実施形態では、Ｒ３２ａ及びＲ３２ｂはそれぞれ、独立して、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、または
Figure 2021512090
 である。
ある一態様では、本発明の構造脂質は、式ＳＸ：
Figure 2021512090
 式ＳＸ
の構造を有する化合物またはその薬学的に許容される塩を特徴とし、式中、
Ｒ１ａは、Ｈ、必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、必要に応じて置換されたＣ２−Ｃ６アルケニル、または必要に応じて置換されたＣ２−Ｃ６アルキニルであり、
Ｘは、ＯまたはＳであり、
Ｒ２は、ＨまたはＯＲＡであり、ＲＡは、Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３は、Ｈまたは
Figure 2021512090
 であり、
Figure 2021512090
 は、単結合または二重結合を表し、
Ｗは、ＣＲ４ａまたはＣＲ４ａＲ４ｂであり、Ｗと隣接炭素との間に二重結合が存在する場合、Ｗは、ＣＲ４ａであり、Ｗと隣接炭素との間に単結合が存在する場合、Ｗは、ＣＲ４ａＲ４ｂであり、
Ｒ４ａ及びＲ４ｂはそれぞれ、独立して、Ｈ、ハロ、または必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ５ａ及びＲ５ｂはそれぞれ、独立して、ＨもしくはＯＲＡであるか、またはＲ５ａ及びＲ５ｂは、それぞれが結合している原子と一緒になって
Figure 2021512090
 を形成し、
Ｒ３３ａは、必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルまたは
Figure 2021512090
 であり、Ｒ３５は、必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルもしくは必要に応じて置換されたＣ６−Ｃ１０アリールであり、
Ｒ３３ｂは、Ｈもしくは必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、または
Ｒ３５及びＲ３３ｂは、それぞれが結合している原子と一緒になることで、必要に応じて置換されたＣ３−Ｃ９ヘテロシクリルを形成し、
Ｒ３４は、必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルまたは必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６ヘテロアルキルである。
いくつかの実施形態では、化合物は、式ＳＸａ：
Figure 2021512090
 式ＳＸａ
の構造を有するか、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、化合物は、式ＳＸｂ：
Figure 2021512090
 式ＳＸｂ
の構造を有するか、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、Ｒ３３ａは、
Figure 2021512090
 である。
いくつかの実施形態では、Ｒ３５は、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、または
Figure 2021512090
 である。
いくつかの実施形態では、Ｒ３５は、
Figure 2021512090
 であり、式中、
ｔは、０、１、２、３、４、または５であり、
それぞれのＲ３６は、独立して、ハロ、ヒドロキシル、必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、または必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６ヘテロアルキルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ３４は、
Figure 2021512090
 であり、式中、ｕは、０、１、２、３、または４である。
いくつかの実施形態では、ｕは、３または４である。
ある一態様では、本発明の構造脂質は、式ＳＸＩ：
Figure 2021512090
 式ＳＸＩ
の構造を有する化合物またはその薬学的に許容される塩を特徴とし、式中、
Ｒ１ａは、Ｈ、必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、必要に応じて置換されたＣ２−Ｃ６アルケニル、または必要に応じて置換されたＣ２−Ｃ６アルキニルであり、
Ｘは、ＯまたはＳであり、
Ｒ２は、ＨまたはＯＲＡであり、ＲＡは、Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３は、Ｈまたは
Figure 2021512090
 であり、
Figure 2021512090
 は、単結合または二重結合を表し、
Ｗは、ＣＲ４ａまたはＣＲ４ａＲ４ｂであり、Ｗと隣接炭素との間に二重結合が存在する場合、Ｗは、ＣＲ４ａであり、Ｗと隣接炭素との間に単結合が存在する場合、Ｗは、ＣＲ４ａＲ４ｂであり、
Ｒ４ａ及びＲ４ｂはそれぞれ、独立して、Ｈ、ハロ、または必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ５ａ及びＲ５ｂはそれぞれ、独立して、ＨもしくはＯＲＡであるか、またはＲ５ａ及びＲ５ｂは、それぞれが結合している原子と一緒になって
Figure 2021512090
 を形成し、
Ｒ３７ａ及びＲ３７ｂはそれぞれ、独立して、必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６ヘテロアルキル、ハロ、またはヒドロキシルである。
いくつかの実施形態では、化合物は、式ＳＸＩａ：
Figure 2021512090
 式ＳＸＩａ
の構造を有するか、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、化合物は、式ＳＸＩｂ：
Figure 2021512090
 式ＳＸＩｂ
の構造を有するか、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、Ｒ３７ａは、ヒドロキシルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ３７ｂは、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、または
Figure 2021512090
 である。
ある一態様では、本発明の構造脂質は、式ＳＸＩＩ：
Figure 2021512090
 式ＳＸＩＩ
の構造を有する化合物またはその薬学的に許容される塩を特徴とし、式中、
Ｒ１ａは、Ｈ、必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、必要に応じて置換されたＣ２−Ｃ６アルケニル、または必要に応じて置換されたＣ２−Ｃ６アルキニルであり、
Ｘは、ＯまたはＳであり、
Ｒ２は、ＨまたはＯＲＡであり、ＲＡは、Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３は、Ｈまたは
Figure 2021512090
 であり、
Figure 2021512090
 は、単結合または二重結合を表し、
Ｗは、ＣＲ４ａまたはＣＲ４ａＲ４ｂであり、Ｗと隣接炭素との間に二重結合が存在する場合、Ｗは、ＣＲ４ａであり、Ｗと隣接炭素との間に単結合が存在する場合、Ｗは、ＣＲ４ａＲ４ｂであり、
Ｒ４ａ及びＲ４ｂはそれぞれ、独立して、Ｈ、ハロ、または必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ５ａ及びＲ５ｂはそれぞれ、独立して、ＨもしくはＯＲＡであるか、またはＲ５ａ及びＲ５ｂは、それぞれが結合している原子と一緒になって
Figure 2021512090
 を形成し、
Ｑは、Ｏ、Ｓ、またはＮＲＥであり、ＲＥは、Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３８は、必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルである。
いくつかの実施形態では、化合物は、式ＳＸＩＩａ：
Figure 2021512090
 式ＳＸＩＩａ
の構造を有するか、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、化合物は、式ＳＸＩＩｂ：
Figure 2021512090
 式ＳＸＩＩｂ
の構造を有するか、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、Ｑは、ＮＲＥである。
いくつかの実施形態では、ＲＥは、Ｈまたは
Figure 2021512090
 である。
いくつかの実施形態では、ＲＥは、Ｈである。いくつかの実施形態では、ＲＥは、
Figure 2021512090
 である。
いくつかの実施形態では、Ｒ３８は、
Figure 2021512090
 であり、式中、ｕは、０、１、２、３、または４である。
いくつかの実施形態では、Ｘは、Ｏである。
いくつかの実施形態では、Ｒ１ａは、Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ１ａは、Ｈである。
いくつかの実施形態では、Ｒ１ｂは、Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ１ｂは、Ｈである。
いくつかの実施形態では、Ｒ２は、Ｈである。
いくつかの実施形態では、Ｒ４ａは、Ｈである。
いくつかの実施形態では、Ｒ４ｂは、Ｈである。
いくつかの実施形態では、
Figure 2021512090
 は、二重結合を表す。
いくつかの実施形態では、Ｒ３は、Ｈである。いくつかの実施形態では、Ｒ３は、
Figure 2021512090
 である。
いくつかの実施形態では、Ｒ５ａは、Ｈである。
いくつかの実施形態では、Ｒ５ｂは、Ｈである。
ある一態様では、本発明は、表１中の化合物Ｓ−１〜４２、化合物Ｓ−１５０、化合物Ｓ−１５４、化合物Ｓ−１６２〜１６５、化合物Ｓ−１６９〜１７２、及び化合物Ｓ−１８４のいずれか１つの構造を有する化合物またはその任意の薬学的に許容される塩を特徴とする。本明細書で使用される「ＣＭＰＤ」は、「化合物」を指す。
Figure 2021512090
Figure 2021512090
Figure 2021512090
Figure 2021512090
ある一態様では、本発明は、表２中の化合物Ｓ−４３〜５０及び化合物Ｓ−１７５〜１７８のいずれか１つの構造を有する化合物またはその任意の薬学的に許容される塩を特徴とする。
Figure 2021512090
ある一態様では、本発明は、表３中の化合物Ｓ−５１〜６７、化合物Ｓ−１４９、及び化合物Ｓ−１５３のいずれか１つの構造を有する化合物またはその任意の薬学的に許容される塩を特徴とする。
Figure 2021512090
Figure 2021512090
ある一態様では、本発明は、表４中の化合物Ｓ−６８〜７３のいずれか１つの構造を有する化合物またはその任意の薬学的に許容される塩を特徴とする。
Figure 2021512090
ある一態様では、本発明は、表５中の化合物Ｓ−７４〜７８のいずれか１つの構造を有する化合物またはその任意の薬学的に許容される塩を特徴とする。
Figure 2021512090
ある一態様では、本発明は、表６中の化合物Ｓ−７９または化合物Ｓ−８０のいずれか１つの構造を有する化合物またはその任意の薬学的に許容される塩を特徴とする。
Figure 2021512090
ある一態様では、本発明は、表７中の化合物Ｓ−８１〜８７、化合物Ｓ−１５２、及び化合物Ｓ−１５７のいずれか１つの構造を有する化合物またはその任意の薬学的に許容される塩を特徴とする。
Figure 2021512090
ある一態様では、本発明は、表８中の化合物Ｓ−８８〜９７のいずれか１つの構造を有する化合物またはその任意の薬学的に許容される塩を特徴とする。
Figure 2021512090
ある一態様では、本発明は、表９中の化合物Ｓ−９８〜１０５及び化合物Ｓ−１８０〜１８２のいずれか１つの構造を有する化合物またはその任意の薬学的に許容される塩を特徴とする。
Figure 2021512090
ある一態様では、本発明は、表１０中の化合物Ｓ−１０６の構造を有する化合物またはその任意の薬学的に許容される塩を特徴とする。
Figure 2021512090
ある一態様では、本発明は、表１１中の化合物Ｓ−１０７または化合物Ｓ−１０８の構造を有する化合物またはその任意の薬学的に許容される塩を特徴とする。
Figure 2021512090
ある一態様では、本発明は、表１２中の化合物Ｓ−１０９の構造を有する化合物またはその任意の薬学的に許容される塩を特徴とする。
Figure 2021512090
ある一態様では、本発明は、表１３中の化合物Ｓ−１１０〜１３０、化合物Ｓ−１５５、化合物Ｓ−１５６、化合物Ｓ−１５８、化合物Ｓ−１６０、化合物Ｓ−１６１、化合物Ｓ−１６６〜１６８、化合物Ｓ−１７３、化合物Ｓ−１７４、及び化合物Ｓ−１７９のいずれか１つの構造を有する化合物またはその任意の薬学的に許容される塩を特徴とする。
Figure 2021512090
Figure 2021512090
Figure 2021512090
ある一態様では、本発明は、表１４中の化合物Ｓ−１３１〜１３３のいずれか１つの構造を有する化合物またはその任意の薬学的に許容される塩を特徴とする。
Figure 2021512090
ある一態様では、本発明は、表１５中の化合物Ｓ−１３４〜１４８、化合物Ｓ−１５１、及び化合物Ｓ−１５９のいずれか１つの構造を有する化合物またはその任意の薬学的に許容される塩を特徴とする。
Figure 2021512090
Figure 2021512090
本発明の脂質ナノ粒子の構造脂質の１つ以上は、構造脂質の組成物（例えば、２つ以上の構造脂質の混合物、３つ以上の構造脂質の混合物、４つ以上の構造脂質の混合物、または５つ以上の構造脂質の混合物）であり得る。構造脂質の組成物には、限定されないが、ステロール（例えば、コレステロール、β−シトステロール、フェコステロール、エルゴステロール、シトステロール、カンペステロール、スチグマステロール、ブラシカステロール、エルゴステロール、トマチジン、トマチン、ウルソール酸、アルファ−トコフェロール、または表１５中の化合物１３４〜１４８、化合物１５１、及び化合物１５９のいずれか１つ）を任意に組み合わせたものが含まれ得る。例えば、本発明の脂質ナノ粒子の構造脂質の１つ以上は、表１６中の組成物１８３であり得る。
Figure 2021512090
組成物Ｓ−１８３は、化合物Ｓ−１４１、化合物Ｓ−１４０、化合物Ｓ−１４３、及び化合物Ｓ−１４８の混合物である。いくつかの実施形態では、組成物Ｓ−１８３は、化合物Ｓ−１４１を約３５％〜約４５％含み、化合物Ｓ−１４０を約２０％〜約３０％含み、化合物Ｓ−１４３を約２０％〜約３０％含み、化合物Ｓ−１４８を約５％〜約１５％含む。いくつかの実施形態では、組成物１８３は、化合物Ｓ−１４１を約４０％含み、化合物Ｓ−１４０を約２５％含み、化合物Ｓ−１４３を約２５％含み、化合物Ｓ−１４８を約１０％含む。
いくつかの実施形態では、構造脂質は、フィトステロールである。いくつかの実施形態では、フィトステロールは、シトステロール、スチグマステロール、カンペステロール、シトスタノール、カンペスタノール、ブラシカステロール、フコステロール、ベータ−シトステロール、スチグマスタノール、ベータ−シトスタノール、エルゴステロール、ルペオール、シクロアルテノール、Δ５−アベナセロール（ａｖｅｎａｓｅｒｏｌ）、Δ７−アベナセロール（ａｖｅｎａｓｅｒｏｌ）、またはΔ７−スチグマステロール（その類似体、塩、またはエステルを含む）の単独のものまたは組み合わさったものである。いくつかの実施形態では、本開示のＬＮＰのフィトステロール成分は、単一のフィトステロールである。いくつかの実施形態では、本開示のＬＮＰのフィトステロール成分は、異なるフィトステロール（例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つの異なるフィトステロール）の混合物である。いくつかの実施形態では、本開示のＬＮＰのフィトステロール成分は、１つ以上のフィトステロールと１つ以上のズーステロールとの混合物（フィトステロール（例えば、シトステロール（ベータ−シトステロールなど））とコレステロールとの混合物など）である。
化合物の比率
本発明の脂質ナノ粒子は、本明細書に記載の構造成分を含み得る。脂質ナノ粒子の構造成分は、化合物Ｓ−１〜１４８のいずれか１つ、本発明の１つ以上の構造化合物の混合物、及び／または化合物Ｓ−１〜１４８のいずれか１つをコレステロール及び／またはフィトステロールと組み合わせたものであり得る。
例えば、脂質ナノ粒子の構造成分は、本発明の構造化合物の１つ以上（例えば、化合物Ｓ−１〜１４８のいずれか）とコレステロールとの混合物であり得る。脂質ナノ粒子に存在する構造化合物のｍｏｌ％は、コレステロールに対して０〜９９ｍｏｌ％であり得る。脂質ナノ粒子に存在する構造化合物のｍｏｌ％は、コレステロールに対して約１０ｍｏｌ％、約２０ｍｏｌ％、約３０ｍｏｌ％、約４０ｍｏｌ％、約５０ｍｏｌ％、約６０ｍｏｌ％、約７０ｍｏｌ％、約８０ｍｏｌ％、または約９０ｍｏｌ％であり得る。
一態様では、本発明は、２つ以上のステロールを含む組成物を特徴とし、２つ以上のステロールは、β−シトステロール、シトスタノール、カンペステロール、スチグマステロール、及びブラシカステロールのうちの少なくとも２つを含む。組成物は、コレステロールを追加で含み得る。一実施形態では、β−シトステロールは、組成物において、コレステロールではないステロールの約３５〜９９％（例えば、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、またはそれを超える％）を構成する。
別の態様では、本発明は、２つ以上のステロールを含む組成物を特徴とし、２つ以上のステロールは、β−シトステロール及びカンペステロールを含み、β−シトステロールは、組成物におけるステロールの９５〜９９．９％を構成し、カンペステロールは、組成物におけるステロールの０．１〜５％を構成する。
いくつかの実施形態では、組成物は、シトスタノールをさらに含む。いくつかの実施形態では、β−シトステロールは、組成物におけるステロールの９５〜９９．９％を構成し、カンペステロールは、組成物におけるステロールの０．０５〜４．９５％を構成し、シトスタノールは、組成物におけるステロールの０．０５〜４．９５％を構成する。
別の態様では、本発明は、２つ以上のステロールを含む組成物を特徴とし、２つ以上のステロールは、β−シトステロール及びシトスタノールを含み、β−シトステロールは、組成物におけるステロールの９５〜９９．９％を構成し、シトスタノールは、組成物におけるステロールの０．１〜５％を構成する。
いくつかの実施形態では、組成物は、カンペステロールをさらに含む。いくつかの実施形態では、β−シトステロールは、組成物におけるステロールの９５〜９９．９％を構成し、カンペステロールは、組成物におけるステロールの０．０５〜４．９５％を構成し、シトスタノールは、組成物におけるステロールの０．０５〜４．９５％を構成する。
いくつかの実施形態では、組成物は、カンペステロールをさらに含む。いくつかの実施形態では、β−シトステロールは、組成物におけるステロールの７５〜８０％を構成し、カンペステロールは、組成物におけるステロールの５〜１０％を構成し、シトスタノールは、組成物におけるステロールの１０〜１５％を構成する。
いくつかの実施形態では、組成物は、追加のステロールをさらに含む。いくつかの実施形態では、β−シトステロールは、組成物におけるステロールの３５〜４５％を構成し、スチグマステロールは、組成物におけるステロールの２０〜３０％を構成し、カンペステロールは、組成物におけるステロールの２０〜３０％を構成し、ブラシカステロールは、組成物におけるステロールの１〜５％を構成する。
別の態様では、本発明は、複数の脂質ナノ粒子を含む組成物を特徴とし、複数の脂質ナノ粒子は、イオン化可能な脂質と２つ以上のステロールとを含み、２つ以上のステロールは、β−シトステロール及びカンペステロールを含み、β−シトステロールは、組成物におけるステロールの９５〜９９．９％を構成し、カンペステロールは、組成物におけるステロールの０．１〜５％を構成する。
いくつかの実施形態では、２つ以上のステロールは、シトスタノールをさらに含む。いくつかの実施形態では、β−シトステロールは、組成物におけるステロールの９５〜９９．９％を構成し、カンペステロールは、組成物におけるステロールの０．０５〜４．９５％を構成し、シトスタノールは、組成物におけるステロールの０．０５〜４．９５％を構成する。
別の態様では、本発明は、複数の脂質ナノ粒子を含む組成物を特徴とし、複数の脂質ナノ粒子は、イオン化可能な脂質と２つ以上のステロールとを含み、２つ以上のステロールは、β−シトステロール及びシトスタノールを含み、β−シトステロールは、組成物におけるステロールの９５〜９９．９％を構成し、シトスタノールは、組成物におけるステロールの０．１〜５％を構成する。
いくつかの実施形態では、２つ以上のステロールは、カンペステロールをさらに含む。いくつかの実施形態では、β−シトステロールは、組成物におけるステロールの９５〜９９．９％を構成し、カンペステロールは、組成物におけるステロールの０．０５〜４．９５％を構成し、シトスタノールは、組成物におけるステロールの０．０５〜４．９５％を構成する。
（ｉｉｉ）非カチオン性ヘルパー脂質／リン脂質
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の脂質ベースの組成物（例えば、ＬＮＰ）は、１つ以上の非カチオン性ヘルパー脂質を含む。いくつかの実施形態では、非カチオン性ヘルパー脂質は、リン脂質である。いくつかの実施形態では、非カチオン性ヘルパー脂質は、リン脂質代用物またはリン脂質代替物である。
本明細書で使用される「非カチオン性ヘルパー脂質」という用語は、炭素数が少なくとも８の長さの脂肪酸鎖を少なくとも１つ含むと共に、極性頭部基部分を少なくとも１つ含む脂質を指す。一実施形態では、ヘルパー脂質は、ホスファチジルコリン（ＰＣ）ではない。一実施形態では、非カチオン性ヘルパー脂質は、リン脂質またはリン脂質代用物である。いくつかの実施形態では、リン脂質またはリン脂質代用物は、例えば、１つ以上の飽和もしくは（多価）不飽和のリン脂質、またはリン脂質代用物、あるいはそれらの組み合わせであり得る。一般に、リン脂質はリン脂質部分及び１つ以上の脂肪酸部分を含む。
リン脂質部分は、例えば、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸、２−リゾホスファチジルコリン、及びスフィンゴミエリンからなる非限定的な群から選択され得る。
脂肪酸部分は、例えば、ラウリン酸、ミリスチン酸、ミリストレイン酸、パルミチン酸、パルミトレイン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、アルファ−リノレン酸、エルカ酸、フィタン酸、アラキジン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ベヘン酸、ドコサペンタエン酸、及びドコサヘキサエン酸からなる非限定的な群から選択され得る。
リン脂質には、限定されないが、グリセロリン脂質（ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルグリセロール、及びホスファチジン酸など）が含まれる。リン脂質には、スフィンゴリン脂質（スフィンゴミエリンなど）も含まれる。
いくつかの実施形態では、非カチオン性ヘルパー脂質は、ＤＳＰＣ類似体、ＤＳＰＣ代用物、オレイン酸、またはオレイン酸類似体である。
いくつかの実施形態では、非カチオン性ヘルパー脂質は、非ホスファチジルコリン（ＰＣ）両性イオン脂質、ＤＳＰＣ類似体、オレイン酸、オレイン酸類似体、または１，２−ジステアロイル−ｉ７７−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）代用物である。
リン脂質
本明細書に開示の医薬組成物の脂質組成物は、１つ以上の非カチオン性ヘルパー脂質を含み得る。いくつかの実施形態では、非カチオン性ヘルパー脂質は、リン脂質（例えば、１つ以上の飽和もしくは（多価）不飽和のリン脂質、またはそれらの組み合わせ）である。一般に、リン脂質は、リン脂質部分と、１つ以上の脂肪酸部分と、を含む。本明細書で使用されるとき、「リン脂質」は、リン酸部分と、不飽和脂肪酸鎖などの１つ以上の炭素鎖とを含む脂質である。リン脂質は、１つ以上の多重（例えば、二重または三重）結合（例えば、１つ以上の不飽和）を含んでもよい。リン脂質またはその類似体もしくは誘導体はコリンを含んでもよい。リン脂質またはその類似体もしくは誘導体はコリンを含まない場合がある。特定のリン脂質は、膜への融合を促進することができる。例えば、カチオン性リン脂質は、膜（例えば、細胞膜または細胞内膜）の１つ以上の負に荷電したリン脂質と相互作用できる。膜へのリン脂質の融合は、脂質含有組成物の１つ以上の要素が膜を通過することを可能にでき、例えば、１つ以上の要素の細胞への送達を可能にする。
リン脂質部分は、例えば、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸、２−リゾホスファチジルコリン、及びスフィンゴミエリンからなる非限定的な群から選択することができる。
脂肪酸部分は、例えば、ラウリン酸、ミリスチン酸、ミリストレイン酸、パルミチン酸、パルミトレイン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、アルファ−リノレン酸、エルカ酸、フィタン酸、アラキジン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ベヘン酸、ドコサペンタエン酸、及びドコサヘキサエン酸からなる非限定的な群から選択することができる。
特定のリン脂質は、膜への融合を促進することができる。例えば、カチオン性リン脂質は、膜（例えば、細胞膜または細胞内膜）の１つ以上の負に荷電したリン脂質と相互作用できる。膜へのリン脂質の融合は、脂質含有組成物（例えば、ＬＮＰ）の１つ以上の要素（例えば、治療薬）が膜を通過することを可能にし、例えば、１つ以上の要素の標的組織への送達を可能にする。
本開示の脂質ナノ粒子の脂質成分は、１つ以上のリン脂質（１つ以上の（多価）不飽和脂質など）を含み得る。リン脂質は、１つ以上の脂質二重層に集合する場合がある。一般に、リン脂質は、リン脂質部分と、１つ以上の脂肪酸部分と、を含み得る。例えば、リン脂質は、式（Ｈ ＩＩＩ）：
Figure 2021512090
 を有する脂質であり得、
式中、Ｒｐは、リン脂質部分を表し、Ｒ１及びＲ２は、不飽和度が同じもしくは異なり得る脂肪酸部分、または飽和した脂肪酸部分を表す。リン脂質部分は、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸、２−リゾホスファチジルコリン、及びスフィンゴミエリンからなる非限定的な群から選択され得る。脂肪酸部分は、ラウリン酸、ミリスチン酸、ミリストレイン酸、パルミチン酸、パルミトレイン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、アルファ−リノレン酸、エルカ酸、フィタン酸、アラキジン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ベヘン酸、ドコサペンタエン酸、及びドコサヘキサエン酸からなる非限定的な群から選択され得る。分岐、酸化、環化、及びアルキンを含む修飾及び置換を伴う天然種を含む非天然種もまた想定される。例えば、リン脂質は、１つ以上のアルキン（例えば、１つ以上の二重結合が三重結合で置き換えられたアルケニル基）で官能化または架橋することができる。適切な反応条件下で、アルキン基は、アジドへの曝露時に銅触媒による環化付加を起こし得る。そのような反応は、ＬＮＰの脂質二重層を官能化して膜透過もしくは細胞認識を促進する上で有用であるか、またはＬＮＰを有用な構成成分（標的化部分もしくは画像化部分（例えば、色素）など）と複合体化させる上で有用であり得る。それぞれの可能性は、本発明の個別の実施形態となる。
本明細書に記載の組成物及び方法に有用なリン脂質において有用なリン脂質は、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、１，２−ジリノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１，２−ジウンデカノイル−ｓｎ−グリセロ−ホスホコリン（ＤＵＰＣ）、１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、１，２−ジ−Ｏ−オクタデセニル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：０ Ｄｉｅｔｈｅｒ ＰＣ）、１−オレオイル−２−コレステリルヘミスクシノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＯＣｈｅｍｓＰＣ）、１−ヘキサデシル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｃ１６ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、１，２−ジリノレノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：３（ｃｉｓ）ＰＣ）、１，２−ジアラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＡＰＣ）、１，２−ジドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（２２：６（ｃｉｓ）ＰＣ）、１，２−ジフィタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（４ＭＥ １６．０ ＰＥ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、１，２−ジリノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＰＥ（１８：２／１８：２）、１，２−ジリノレノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＰＥ １８：３（９Ｚ，１２Ｚ，１５Ｚ）、１，２−ジアラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＡＰＥ １８：３（９Ｚ，１２Ｚ，１５Ｚ）、１，２−ジドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（２２：６（ｃｉｓ）ＰＥ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｒａｃ−（１−グリセロール）ナトリウム塩（ＤＯＰＧ）、及びスフィンゴミエリンからなる非限定的な群から選択され得る。それぞれの可能性は、本発明の個別の実施形態となる。
いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、ＤＳＰＣを含む。ある特定の実施形態では、ＬＮＰは、ＤＯＰＥを含む。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、ＤＭＰＥを含む。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、ＤＳＰＣもＤＯＰＥも含む。
一実施形態では、免疫細胞送達ＬＮＰにおいて使用するための非カチオン性ヘルパー脂質は、ＤＳＰＣ、ＤＭＰＥ、及びＤＯＰＣ、またはそれらの組み合わせからなる群から選択される。
リン脂質には、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルグリセロール、及びホスファチジン酸などのグリセロリン脂質が含まれるが、これらに限定されない。リン脂質には、スフィンゴミエリンなどのスフィンゴリン脂質も含まれる。
リン脂質の例としては、限定されないが、下記のものが挙げられる。
Figure 2021512090
 、
（ＤＳＰＣ）
Figure 2021512090
 、
（ＤＯＰＣ）
Figure 2021512090
 、
（ＰＣ（１８：２（９２，１２２）／１８：２（９２，１２２）
Figure 2021512090
 、
（ＤＡＰＣ）
Figure 2021512090
 、
（２２：６（ｃｉｓ）ＰＣ）
Figure 2021512090
 、
（ＤＳＰＥ）
Figure 2021512090
 、
（ＤＯＰＥ）
Figure 2021512090
 、
ＰＥ１８：２／１８：２
Figure 2021512090
 、
ＰＥ（１８：３（９Ｚ，１２Ｚ，１５Ｚ／１８：３（９Ｚ，１２Ｚ，１５Ｚ））
Figure 2021512090
 、
ＤＡＰＥ
Figure 2021512090
 、
２２：６ＰＥ
Figure 2021512090
 、
（Ｌｙｓｏ ＰＣ１８：１）
Figure 2021512090
 、
Ｃｍｐｄ Ｈ ４１６
Figure 2021512090
 、
ＭＡＰＣＨＯ−１６
Figure 2021512090
 、及び
エデルトシン（Ｅｄｅｌｔｏｓｉｎｅ）
Figure 2021512090
 。
Ｃｍｐｄ Ｈ ４１７
Figure 2021512090
 ＤＰＰＣ
Figure 2021512090
 ＤＭＰＣ
Figure 2021512090
 Ｃｍｐｄ Ｈ ４１８
Figure 2021512090
 Ｃｍｐｄ Ｈ ４１９
Figure 2021512090
 Ｃｍｐｄ Ｈ ４２０
Figure 2021512090
 Ｃｍｐｄ Ｈ ４２１
Figure 2021512090
 Ｃｍｐｄ Ｈ ４２２
ある特定の実施形態では、本発明において有用または潜在的に有用なリン脂質は、ＤＳＰＣ（１，２−ジオクタデカノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）の類似体またはバリアントである。ある特定の実施形態では、本発明において有用または潜在的に有用なリン脂質は、式（Ｈ ＩＸ）：
Figure 2021512090
 の化合物またはその塩であり、式中：
各々のＲ１は、独立して、必要に応じて置換されたアルキルであるか；または必要に応じて、２つのＲ１は、介在原子と一緒になって、必要に応じて置換された単環式カルボシクリルもしくは必要に応じて置換された単環式ヘテロシクリルを形成するか；または、必要に応じて３つのＲ１が介在原子と一緒になって、必要に応じて置換された二環式カルボシクリルもしくは必要に応じて置換された二環式ヘテロシクリルを形成し；
ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり；
ｍは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり；
Ａは、式：
Figure 2021512090
 または式：
Figure 2021512090
 のものであり；
Ｌ２のそれぞれの例は、独立して、結合または必要に応じて置換されたＣ１−６アルキレンであり、必要に応じて置換されたＣ１−６アルキレンのメチレン単位のうちの１つは、−Ｏ−、−Ｎ（ＲＮ）−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ−、または−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−によって必要に応じて置き換えられ；
Ｒ２のそれぞれの例は、独立して、必要に応じて置換されたＣ１−３０アルキル、必要に応じて置換されたＣ１−３０アルケニル、または必要に応じて置換されたＣ１−３０アルキニルであり、必要に応じて、Ｒ２のメチレン単位のうちの１つ以上は、必要に応じて置換されたカルボシクリレン、必要に応じて置換されたヘテロシクリレン、必要に応じて置換されたアリーレン、必要に応じて置換されたヘテロアリーレン、−Ｎ（ＲＮ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｏ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＯＳ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｏ−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、または−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏ−によって独立して置き換えられ；
ＲＮの各々の例は、独立して、水素、必要に応じて置換されたアルキル、または窒素保護基であり；
環Ｂは、必要に応じて置換されたカルボシクリル、必要に応じて置換されたヘテロシクリル、必要に応じて置換されたアリール、または必要に応じて置換されたヘテロアリールであり；
ｐは１または２であり；
ただし、この化合物は式：
Figure 2021512090
 、
であって、
式中、Ｒ２の各例が、独立して、非置換アルキル、非置換アルケニル、または非置換アルキニルであるものではない。
ｉ）リン脂質頭部の修飾
ある特定の実施形態では、本発明において有用または潜在的に有用なリン脂質は、修飾されたリン脂質頭部（例えば、修飾コリン基）を含む。ある特定の実施形態では、修飾された頭部を有するリン脂質は、修飾された第４級アミンを有するＤＳＰＣまたはその類似体である。例えば、式（ＩＸ）の実施形態では、Ｒ１の少なくとも１つは、メチルではない。ある特定の実施形態では、Ｒ１の少なくとも１つは、水素またはメチルである。ある特定の実施形態では、式（ＩＸ）の化合物は、下記の式：
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 のうちの１つの化合物またはその塩であり、式中：
各々のｔは、独立して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり；
各々のｕは、独立して、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり；
各々のｖは、独立して、１、２、または３である。
ある特定の実施形態では、式（Ｈ ＩＸ）の化合物は、下記の式：
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 のうちの１つの化合物またはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（Ｈ ＩＸ）の化合物は、下記の式：
Figure 2021512090
 （化合物Ｈ−４００）、
Figure 2021512090
 （化合物Ｈ−４０１）、
Figure 2021512090
 （化合物Ｈ−４０２）、
Figure 2021512090
 （化合物Ｈ−４０３）、
Figure 2021512090
 （化合物Ｈ−４０４）、
Figure 2021512090
 （化合物Ｈ−４０５）、
Figure 2021512090
 （化合物Ｈ−４０６）、
Figure 2021512090
 （化合物Ｈ−４０７）、
Figure 2021512090
 （化合物Ｈ−４０８）、
Figure 2021512090
 （化合物Ｈ−４０９）
のうちの１つの化合物またはその塩である。
一実施形態では、免疫細胞送達ＬＮＰは、非カチオン性ヘルパー脂質として化合物Ｈ−４０９を含む。
（ｉｉ）リン脂質尾部の修飾
ある特定の実施形態では、本発明において有用または潜在的に有用なリン脂質は、修飾された尾部を含む。ある特定の実施形態では、本発明において有用または潜在的に有用なリン脂質は、修飾された尾部を有するＤＳＰＣ（１，２−ジオクタデカノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）またはその類似体である。本明細書において記載されるとき、「修飾された尾部」は、より短いまたはより長い脂肪族鎖、分岐が導入された脂肪族鎖、置換基が導入された脂肪族鎖、１つ以上のメチレンが環状またはヘテロ原子基で置換された脂肪族鎖、またはそれらの任意の組み合わせであり得る。例えば、ある特定の実施形態では、（Ｈ ＩＸ）の化合物は、式（Ｈ ＩＸ−ａ）の化合物またはその塩であり、Ｒ２は少なくとも１つ存在し、Ｒ２のそれぞれの例は、必要に応じて置換されたＣ１−３０アルキルであり、Ｒ２のメチレン単位のうちの１つ以上は、必要に応じて置換されたカルボシクリレン、必要に応じて置換されたヘテロシクリレン、必要に応じて置換されたアリーレン、必要に応じて置換されたヘテロアリーレン、−Ｎ（ＲＮ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｏ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＯＳ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｏ−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、または−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏ−によって独立して置き換えられる。
ある特定の実施形態では、式（Ｈ ＩＸ）の化合物は、式（Ｈ ＩＸ−ｃ）：
Figure 2021512090
 の化合物またはその塩であり、式中：
それぞれのｘは、独立して、０〜３０の整数（両端値を含む）であり、
Ｇのそれぞれの例は、必要に応じて置換されたカルボシクリレン、必要に応じて置換されたヘテロシクリレン、必要に応じて置換されたアリーレン、必要に応じて置換されたヘテロアリーレン、−Ｎ（ＲＮ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｏ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＯＳ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｏ−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、または−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏ−からなる群から独立して選択される。それぞれの可能性は、本発明の個別の実施形態となる。
ある特定の実施形態では、式（Ｈ ＩＸ−ｃ）の化合物は、式（Ｈ ＩＸ−ｃ−１）：
Figure 2021512090
 の化合物またはその塩であり、式中：
ｖのそれぞれの例は、独立して、１、２、または３である。
ある特定の実施形態では、式（Ｈ ＩＸ−ｃ）の化合物は、式（Ｈ ＩＸ−ｃ−２）：
Figure 2021512090
 の化合物またはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＩＸ−ｃ）の化合物は、下記の式：
Figure 2021512090
 の化合物またはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（Ｈ ＩＸ−ｃ）の化合物は、下記の式：
Figure 2021512090
 の化合物またはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（Ｈ ＩＸ−ｃ）の化合物は、式（Ｈ ＩＸ−ｃ−３）：
Figure 2021512090
 の化合物またはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（Ｈ ＩＸ−ｃ）の化合物は、下記の式：
Figure 2021512090
 の化合物またはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（Ｈ ＩＸ−ｃ）の化合物は、下記の式：
Figure 2021512090
 の化合物またはその塩である。
ある特定の実施形態では、本発明において有用または潜在的に有用なリン脂質は、修飾ホスホコリン部分を含み、第４級アミンをホスホリル基に連結するアルキル鎖はエチレンではない（例えば、ｎは２ではない）。したがって、ある特定の実施形態では、本発明において有用または潜在的に有用なリン脂質は、式（Ｈ ＩＸ）の化合物であり、ｎは、１、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。例えば、ある特定の実施形態では、式（Ｈ ＩＸ）の化合物は、下記の式：
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 のうちの１つの化合物またはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（Ｈ ＩＸ）の化合物は、下記の式：
Figure 2021512090
Figure 2021512090
Figure 2021512090
Figure 2021512090
Figure 2021512090
Figure 2021512090
Figure 2021512090
 （化合物Ｈ−４１１）
Figure 2021512090
Figure 2021512090
Figure 2021512090
 （化合物Ｈ−４１２）
Figure 2021512090
 （化合物Ｈ−４１３）
Figure 2021512090
 （化合物Ｈ−４１４）
のうちの１つの化合物またはその塩である。
ある特定の実施形態では、本発明のリン脂質の代わりに代替の脂質が使用される。そのような代替の脂質の例としては、限定されないが、下記のものが挙げられる。
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、及び
Figure 2021512090
 。
リン脂質尾部の修飾
ある特定の実施形態では、本発明において有用なリン脂質は、修飾された尾部を含む。ある特定の実施形態では、本発明において有用なリン脂質は、修飾された尾部を有するＤＳＰＣまたはその類似体である。本明細書に記載の「修飾された尾部」は、脂肪族鎖が短鎖化もしくは長鎖化した尾部、脂肪族鎖に分岐が導入された尾部、脂肪族鎖に置換基が導入された尾部、脂肪族鎖のメチレンのうちの１つ以上が環式基もしくはヘテロ原子基によって置き換えられた尾部、またはそれらの任意の組み合わせであり得る。例えば、ある特定の実施形態では、（Ｈ Ｉ）の化合物は、式（Ｈ Ｉ−ａ）の化合物またはその塩であり、Ｒ２は少なくとも１つ存在し、Ｒ２のそれぞれの例は、必要に応じて置換されたＣ１−３０アルキルであり、Ｒ２のメチレン単位のうちの１つ以上は、必要に応じて置換されたカルボシクリレン、必要に応じて置換されたヘテロシクリレン、必要に応じて置換されたアリーレン、必要に応じて置換されたヘテロアリーレン、−Ｎ（ＲＮ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｏ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＯＳ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｏ−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、または−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏ−によって独立して置き換えられる。
ある特定の実施形態では、式（Ｈ Ｉ−ａ）の化合物は、式（Ｈ Ｉ−ｃ）：
Figure 2021512090
 の化合物またはその塩であり、式中：
それぞれのｘは、独立して、０〜３０の整数（両端値を含む）であり、
Ｇのそれぞれの例は、必要に応じて置換されたカルボシクリレン、必要に応じて置換されたヘテロシクリレン、必要に応じて置換されたアリーレン、必要に応じて置換されたヘテロアリーレン、−Ｎ（ＲＮ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｏ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＯＳ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｏ−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、または−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏ−からなる群から独立して選択される。それぞれの可能性は、本発明の個別の実施形態となる。
ある特定の実施形態では、式（Ｈ Ｉ−ｃ）の化合物は、式（Ｈ Ｉ−ｃ−１）：
Figure 2021512090
 の化合物またはその塩であり、式中：
ｖのそれぞれの例は、独立して、１、２、または３である。
ある特定の実施形態では、式（Ｈ Ｉ−ｃ）の化合物は、式（Ｈ Ｉ−ｃ−２）：
Figure 2021512090
 の化合物またはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（Ｉ−ｃ）の化合物は、下記の式：
Figure 2021512090
 の化合物またはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（Ｈ Ｉ−ｃ）の化合物は、下記の式：
Figure 2021512090
 の化合物またはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（Ｈ Ｉ−ｃ）の化合物は、式（Ｈ Ｉ−ｃ−３）：
Figure 2021512090
 の化合物またはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（Ｈ Ｉ−ｃ）の化合物は、下記の式：
Figure 2021512090
 の化合物またはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（Ｈ Ｉ−ｃ）の化合物は、下記の式：
Figure 2021512090
 の化合物またはその塩である。
ホスホコリンリンカーの修飾
ある特定の実施形態では、本発明において有用なリン脂質は、修飾されたホスホコリン部分を含み、第４級アミンをホスホリル基に連結するアルキル鎖はエチレンではない（例えば、ｎは、２ではない）。したがって、ある特定の実施形態では、本発明において有用なリン脂質は、式（Ｈ Ｉ）の化合物であり、式中、ｎは、１、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。例えば、ある特定の実施形態では、式（Ｈ Ｉ）の化合物は、下記の式：
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 のうちの１つの化合物またはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（Ｈ Ｉ）の化合物は、下記の式：
Figure 2021512090
Figure 2021512090
Figure 2021512090
Figure 2021512090
Figure 2021512090
Figure 2021512090
Figure 2021512090
 （Ｃｍｐｄ Ｈ １６２）
Figure 2021512090
Figure 2021512090
Figure 2021512090
 （Ｃｍｐｄ Ｈ １５４）
Figure 2021512090
 （Ｃｍｐｄ Ｈ １５６）
Figure 2021512090
 （Ｃｍｐｄ Ｈ １６３）
のうちの１つの化合物またはその塩である。
ＤＳＰＣ以外のリン脂質を有する多数のＬＮＰ製剤を調製し、その活性を試験した。このことについては、後述の実施例に記載される。
リン脂質代用物またはリン脂質代替物
いくつかの実施形態では、脂質ベースの組成物（例えば、脂質ナノ粒子）は、リン脂質の代わりにオレイン酸またはオレイン酸類似体を含む。いくつかの実施形態では、オレイン酸類似体は、修飾されたオレイン酸尾部、修飾されたカルボン酸部分、またはこれらの両方を含む。いくつかの実施形態では、オレイン酸類似体は、異なる基によってオレイン酸のカルボン酸部分が置き換えられた化合物である。
いくつかの実施形態では、脂質ベースの組成物（例えば、脂質ナノ粒子）は、リン脂質の代わりに異なる両性イオン基を含む。
リン脂質代用物及び／またはリン脂質代替物の例は、公開ＰＣＴ出願ＷＯ２０１７／０９９８２３に提供されており、当該文献は、参照によって本明細書に組み込まれる。
リン脂質代用物及び／またはリン脂質代替物の例は、公開ＰＣＴ出願ＷＯ２０１７／０９９８２３に提供されており、当該文献は、参照によって本明細書に組み込まれる。
（ｉｖ）ＰＥＧ脂質
ＰＥＧ脂質の例としては、限定されないが、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン及びホスファチジン酸、ＰＥＧ−セラミド複合体（例えば、ＰＥＧ−ＣｅｒＣ１４またはＰＥＧ−ＣｅｒＣ２０）、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ならびにＰＥＧ修飾１，２−ジアシルオキシプロパン−３−アミンが挙げられる。このような脂質は、ＰＥＧ化脂質とも呼ばれる。例えば、ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ−ｃ−ＤＯＭＧ、ＰＥＧ−ＤＭＧ、ＰＥＧ−ＤＬＰＥ、ＰＥＧ−ＤＭＰＥ、ＰＥＧ−ＤＰＰＣ、またはＰＥＧ−ＤＳＰＥ脂質であり得る。
いくつかの実施形態では、ＰＥＧ脂質には、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロールメトキシポリエチレングリコール（ＰＥＧ−ＤＭＧ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［アミノ（ポリエチレングリコール）］（ＰＥＧ−ＤＳＰＥ）、ＰＥＧ−ジステリルグリセロール（ＰＥＧ−ＤＳＧ）、ＰＥＧ−ジパルメトレイル、ＰＥＧ−ジオレイル、ＰＥＧ−ジステアリル、ＰＥＧ−ジアシルグリカミド（ＰＥＧ−ＤＡＧ）、ＰＥＧ−ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＤＰＰＥ）、またはＰＥＧ−１，２−ジミリスチルオクスルプロピル−３−アミン（ＰＥＧ−ｃ−ＤＭＡ）が含まれるが、これらに限定されない。
一実施形態では、ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、ＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロール、及びそれらの混合物からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、ＰＥＧ脂質の脂質部分には、約Ｃ１４〜約Ｃ２２、好ましくは約Ｃ１４〜約Ｃ１６の長さを有するものが含まれる。いくつかの実施形態では、ＰＥＧ部分、例えばｍＰＥＧ−ＮＨ２は、約１０００、２０００、５０００、１０，０００、１５，０００、または２０，０００ダルトンのサイズを有する。一実施形態では、ＰＥＧ脂質はＰＥＧ２ｋ−ＤＭＧである。
一実施形態では、本明細書に記載の脂質ナノ粒子は、非拡散性ＰＥＧであるＰＥＧ脂質を含むことができる。非拡散性ＰＥＧの非限定的な例には、ＰＥＧ−ＤＳＧ及びＰＥＧ−ＤＳＰＥが含まれる。
ＰＥＧ脂質は、米国特許第８１５８６０１号及び国際公開ＷＯ２０１５／１３０５８４ Ａ２に記載されているものなど、当技術分野で知られており、これらは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
一般に、本明細書に記載の様々な式の他の脂質成分のいくつか（例えば、ＰＥＧ脂質）は、２０１６年１２月１０日に出願された「Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ ａｎｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ａｇｅｎｔｓ」と題する国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０００１２９に記載のように合成することができ、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
脂質ナノ粒子組成物の脂質成分は、ＰＥＧまたはＰＥＧ修飾脂質などのポリエチレングリコールを含む１つ以上の分子を含んでもよい。そのような種は、代替的にＰＥＧ化脂質と呼ばれる場合がある。ＰＥＧ脂質は、ポリエチレングリコールで修飾された脂質である。ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、ＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロール、及びそれらの混合物を含む非限定的な群から選択され得る。例えば、ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ−ｃ−ＤＯＭＧ、ＰＥＧ−ＤＭＧ、ＰＥＧ−ＤＬＰＥ、ＰＥＧ−ＤＭＰＥ、ＰＥＧ−ＤＰＰＣ、またはＰＥＧ−ＤＳＰＥ脂質であり得る。
いくつかの実施形態では、ＰＥＧ修飾脂質は、ＰＥＧ ＤＭＧの修飾形態である。ＰＥＧ−ＤＭＧは、下記の構造を有する。
Figure 2021512090
一実施形態では、本発明において有用なＰＥＧ脂質は、国際公開ＷＯ２０１２０９９７５５に記載されているＰＥＧ化脂質であり得、その内容はその全体が参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に記載されるこれらの例示的なＰＥＧ脂質のいずれも、ＰＥＧ鎖上にヒドロキシル基を含むように修飾され得る。ある特定の実施形態では、ＰＥＧ脂質はＰＥＧ−ＯＨ脂質である。本明細書で一般的に定義されるように、「ＰＥＧ−ＯＨ脂質」（本明細書では「ヒドロキシ−ＰＥＧ化脂質」とも呼ばれる）は、脂質上に１つ以上のヒドロキシル（−ＯＨ）基を有するＰＥＧ化脂質である。ある特定の実施形態では、ＰＥＧ−ＯＨ脂質には、ＰＥＧ鎖に１つ以上のヒドロキシル基が含まれている。ある特定の実施形態では、ＰＥＧ−ＯＨまたはヒドロキシ−ＰＥＧ化脂質は、ＰＥＧ鎖の末端に−ＯＨ基を含む。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。
いくつかの実施形態では、ＰＥＧ脂質は、式（ＰＩ）：
Figure 2021512090
 の化合物またはその塩もしくは異性体であり、式中：
ｒは、１〜１００の整数であり、
Ｒ５ＰＥＧは、Ｃ１０−４０アルキル、Ｃ１０−４０アルケニル、またはＣ１０−４０アルキニルであり、Ｒ５ＰＥＧのメチレン基のうちの１つ以上は、Ｃ３−１０カルボシクリレン、４〜１０員のヘテロシクリレン、Ｃ６−１０アリーレン、４〜１０員のヘテロアリーレン、−Ｎ（ＲＮ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｏ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＯＳ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｏ−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、または−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏ−によって必要に応じて独立して置き換えられ、
ＲＮのそれぞれの例は、独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、または窒素保護基である。
例えば、Ｒ５ＰＥＧは、Ｃ１７アルキルである。例えば、ＰＥＧ脂質は、式（ＰＩ−ａ）：
Figure 2021512090
 の化合物またはその塩もしくは異性体であり、式中、ｒは、１〜１００の整数である。
例えば、ＰＥＧ脂質は、下記の式：
Figure 2021512090
 （ＰＥＧ１；以降は、化合物４２８とも称される）
の化合物またはその塩もしくは異性体である。
ＰＥＧ脂質は、式（ＰＩＩ）：
Figure 2021512090
 の化合物またはその塩もしくは異性体であり得、式中：
ｓは、１〜１００の整数であり、
Ｒ’’は、水素、Ｃ１−１０アルキル、または酸素保護基であり、
Ｒ７ＰＥＧは、Ｃ１０−４０アルキル、Ｃ１０−４０アルケニル、またはＣ１０−４０アルキニルであり、Ｒ５ＰＥＧのメチレン基のうちの１つ以上は、Ｃ３−１０カルボシクリレン、４〜１０員のヘテロシクリレン、Ｃ６−１０アリーレン、４〜１０員のヘテロアリーレン、−Ｎ（ＲＮ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｏ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＯＳ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｏ−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、または−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏ−によって必要に応じて独立して置き換えられ、
ＲＮのそれぞれの例は、独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、または窒素保護基である。
いくつかの実施形態では、Ｒ７ＰＥＧは、Ｃ１０−６０アルキルであり、Ｒ７ＰＥＧのメチレン基のうちの１つ以上は、−Ｃ（Ｏ）−によって置き換えられる。例えば、Ｒ７ＰＥＧは、Ｃ３１アルキルであり、Ｒ７ＰＥＧのメチレン基のうちの２つは、−Ｃ（Ｏ）−によって置き換えられる。
いくつかの実施形態では、Ｒ’’は、メチルである。
いくつかの実施形態では、ＰＥＧ脂質は、式（ＰＩＩ−ａ）：
Figure 2021512090
 の化合物またはその塩もしくは異性体であり、式中、ｓは、１〜１００の整数である。
例えば、ＰＥＧ脂質は、下記の式：
Figure 2021512090
 の化合物またはその塩もしくは異性体である。
ある特定の実施形態では、本発明において有用なＰＥＧ脂質は、式（ＰＩＩＩ）の化合物である。式（ＰＩＩＩ）：
Figure 2021512090
 の化合物またはその塩が本明細書で提供され、式中：
Ｒ３は、−ＯＲＯであり；
ＲＯは、水素、必要に応じて置換されたアルキル、または酸素保護基であり；
ｒは１〜１００の整数であり、両端を含み；
Ｌ１は、必要に応じて置換されたＣ１−１０アルキレンであり、必要に応じて置換されたＣ１−１０アルキレンの少なくとも１つのメチレンは、必要に応じて置換されたカルボシクリレン、必要に応じて置換されたヘテロシクリレン、必要に応じて置換されたアリーレン、必要に応じて置換されたヘテロアリーレン、Ｏ、Ｎ（ＲＮ）、Ｓ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、ＯＣ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ、またはＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）によって独立して置き換えられ；
Ｄは、クリックケミストリーによって得られる部分または生理学的条件下で切断可能な部分であり；
ｍは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり；
Ａは、式：
Figure 2021512090
 または式：
Figure 2021512090
 のものであり；
Ｌ２の各々の例は、独立して、結合または必要に応じて置換されたＣ１−６アルキレンであり、必要に応じて置換されたＣ１−６アルキレンの１つのメチレン単位は、Ｏ、Ｎ（ＲＮ）、Ｓ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、ＯＣ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ、またはＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）によって必要に応じて置き換えられ；
Ｒ２の各々の例は、独立して、必要に応じて置換されたＣ１−３０アルキル、必要に応じて置換されたＣ１−３０アルケニル、または必要に応じて置換されたＣ１−３０アルキニルであり；必要に応じて、Ｒ２の１つ以上のメチレン単位は、必要に応じて置換されたカルボシクリレン、必要に応じて置換されたヘテロシクリレン、必要に応じて置換されたアリーレン、必要に応じて置換されたヘテロアリーレン、Ｎ（ＲＮ）、Ｏ、Ｓ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ、Ｃ（Ｏ）Ｓ、ＳＣ（Ｏ）、Ｃ（＝ＮＲＮ）、Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）、ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）、Ｃ（Ｓ）、Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｓ）、ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）、Ｓ（Ｏ）、ＯＳ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）Ｏ、−ＯＳ（Ｏ）Ｏ、ＯＳ（Ｏ）２、Ｓ（Ｏ）２Ｏ、ＯＳ（Ｏ）２Ｏ、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ、Ｓ（Ｏ）２、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、または−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏによって独立して置き換えられ；
ＲＮの各々の例は、独立して、水素、必要に応じて置換されたアルキル、または窒素保護基であり；
環Ｂは、必要に応じて置換されたカルボシクリル、必要に応じて置換されたヘテロシクリル、必要に応じて置換されたアリール、または必要に応じて置換されたヘテロアリールであり；
ｐは１または２である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物は、ＰＥＧ−ＯＨ脂質（すなわち、Ｒ３は、−ＯＲＯであり、ＲＯは、水素である）である。ある特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物は、式（ＰＩＩＩ−ＯＨ）：
Figure 2021512090
 の化合物またはその塩である。
ある特定の実施形態では、Ｄは、クリックケミストリーによって得られる部分（例えば、トリアゾール）である。ある特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物は、式（ＰＩＩＩ−ａ−１）もしくは式（ＰＩＩＩ−ａ−２）：
Figure 2021512090
 もしくは
Figure 2021512090
 の化合物またはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物は、下記の式：
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 のうちの１つの化合物またはその塩であり、式中、
ｓは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物は、下記の式：
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 のうちの１つの化合物またはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物は、下記の式：
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 のうちの１つの化合物またはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物は、下記の式：
Figure 2021512090
 （化合物Ｐ−４１５Ａ）、
Figure 2021512090
 （化合物Ｐ−４１５）
Figure 2021512090
 （化合物Ｐ−４１６Ａ）、
Figure 2021512090
 （化合物Ｐ−４１６）
Figure 2021512090
 （化合物Ｐ−４１７）、
Figure 2021512090
 （化合物Ｐ−４１８）
のうちの１つの化合物またはその塩である。
ある特定の実施形態では、Ｄは、生理学的条件下で切断可能な部分（例えば、エステル、アミド、カーボネート、カルバメート、尿素）である。ある特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物は、式（ＰＩＩＩ−ｂ−１）もしくは式（ＰＩＩＩ−ｂ−２）：
Figure 2021512090
 の化合物またはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物は、式（ＰＩＩＩ−ｂ−１−ＯＨ）もしくは式（ＰＩＩＩ−ｂ−２−ＯＨ）：
Figure 2021512090
 の化合物またはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物は、下記の式：
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 のうちの１つの化合物またはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物は、下記の式：
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 のうちの１つの化合物またはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物は、下記の式：
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 のうちの１つの化合物またはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物は、下記の式：
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 のうちの１つの化合物またはその塩である。
ある特定の実施形態では、本発明において有用なＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ化脂肪酸である。ある特定の実施形態では、本発明において有用なＰＥＧ脂質は、式（ＰＩＶ）の化合物である。式（ＰＩＶ）：
Figure 2021512090
 の化合物またはその塩が本明細書で提供され、式中：
Ｒ３は、−ＯＲＯであり；
ＲＯは、水素、必要に応じて置換されたアルキル、または酸素保護基であり；
ｒは１〜１００の整数（両端値を含む）であり；
Ｒ５は、必要に応じて置換されたＣ１０−４０アルキル、必要に応じて置換されたＣ１０−４０アルケニル、または必要に応じて置換されたＣ１０−４０アルキニルであり；必要に応じて、Ｒ５の１つ以上のメチレン基は、必要に応じて置換されたカルボシクリレン、必要に応じて置換されたヘテロシクリレン、必要に応じて置換されたアリーレン、必要に応じて置換されたヘテロアリーレン、Ｎ（ＲＮ）、Ｏ、Ｓ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、−ＮＲＮＣ（Ｏ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、ＯＣ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ、Ｃ（Ｏ）Ｓ、ＳＣ（Ｏ）、Ｃ（＝ＮＲＮ）、Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）、ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）、Ｃ（Ｓ）、Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｓ）、−ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）、Ｓ（Ｏ）、ＯＳ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）Ｏ、ＯＳ（Ｏ）Ｏ、ＯＳ（Ｏ）２、Ｓ（Ｏ）２Ｏ、ＯＳ（Ｏ）２Ｏ、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ、Ｓ（Ｏ）２、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、またはＮ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏによって置き換えられ；
ＲＮの各々の例は、独立して、水素、必要に応じて置換されたアルキル、または窒素保護基である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＩＶの化合物は、式（ＰＩＶ−ＯＨ）：
Figure 2021512090
 の化合物またはその塩である。いくつかの実施形態では、ｒは、４０〜５０である。いくつかの実施形態では、ｒは、４５である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＩＶ）の化合物は、下記の式：
Figure 2021512090
 （化合物Ｐ−４１９）、
Figure 2021512090
 （化合物Ｐ−４２０）、
Figure 2021512090
 （化合物Ｐ−４２１）、
Figure 2021512090
 （化合物Ｐ−４２２）、
Figure 2021512090
 （化合物Ｐ−４２３）、
Figure 2021512090
 （化合物Ｐ−４２４）、
Figure 2021512090
 （化合物Ｐ−４２５）、
Figure 2021512090
 （化合物Ｐ−４２６）
のうちの１つの化合物またはその塩である。いくつかの実施形態では、ｒは、４０〜５０である。いくつかの実施形態では、ｒは、４５である。
さらに他の実施形態では、式（ＰＩＶ）の化合物は、
Figure 2021512090
 （化合物Ｐ−４２７）
またはその塩である。
一実施形態では、式（ＰＩＶ）の化合物は、
Figure 2021512090
 （化合物Ｐ−４２８）
である。
一態様では、式（ＰＶ）：
Figure 2021512090
 のＰＥＧ脂質またはその薬学的に許容される塩を含む脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）が本明細書で提供され、式中：
Ｌ１は、結合、必要に応じて置換されたＣ１−３アルキレン、必要に応じて置換されたＣ１−３ヘテロアルキレン、必要に応じて置換されたＣ２−３アルケニレン、必要に応じて置換されたＣ２−３アルキニレンであり、
Ｒ１は、必要に応じて置換されたＣ５−３０アルキル、必要に応じて置換されたＣ５−３０アルケニル、または必要に応じて置換されたＣ５−３０アルキニルであり、
ＲＯは、水素、必要に応じて置換されたアルキル、必要に応じて置換されたアシル、または酸素保護基であり、
ｒは、２〜１００の整数（両端値を含む）である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＶ）のＰＥＧ脂質は、下記の式：
Figure 2021512090
 のＰＥＧ脂質またはその薬学的に許容される塩であり、式中：
Ｙ１は、結合、−ＣＲ２−、−Ｏ−、−ＮＲＮ−、または−Ｓ−であり、
Ｒのそれぞれの例は、独立して、水素、ハロゲン、または必要に応じて置換されたアルキルであり、
ＲＮは、水素、必要に応じて置換されたアルキル、必要に応じて置換されたアシル、または窒素保護基である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＶ）のＰＥＧ脂質は、下記の式：
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、もしくは
Figure 2021512090
 のうちの１つのＰＥＧ脂質またはその薬学的に許容される塩であり、式中：
Ｒのそれぞれの例は、独立して、水素、ハロゲン、または必要に応じて置換されたアルキルである。
ある特定の実施形態では、式（ＰＶ）のＰＥＧ脂質は、下記の式：
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、もしくは
Figure 2021512090
 のうちの１つのＰＥＧ脂質またはその薬学的に許容される塩であり、式中：
ｓは、５〜２５の整数（両端値を含む）である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＶ）のＰＥＧ脂質は、下記の式：
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、もしくは
Figure 2021512090
 のうちの１つのＰＥＧ脂質またはその薬学的に許容される塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＶ）のＰＥＧ脂質は、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、及び
Figure 2021512090
 、
ならびにその薬学的に許容される塩からなる群から選択される。
別の態様では、式（ＰＶＩ）：
Figure 2021512090
 のＰＥＧ脂質またはその薬学的に許容される塩を含む脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）が本明細書で提供され、式中：
ＲＯは、水素、必要に応じて置換されたアルキル、必要に応じて置換されたアシル、または酸素保護基であり、
ｒは、２〜１００の整数（両端値を含む）であり、
ｍは、５〜１５の整数（両端値を含む）または１９〜３０の整数（両端値を含む）である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＶＩ）のＰＥＧ脂質は、下記の式：
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、もしくは
Figure 2021512090
 のうちの１つのＰＥＧ脂質またはその薬学的に許容される塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＶＩ）のＰＥＧ脂質は、下記の式：
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、もしくは
Figure 2021512090
 、
のうちの１つのＰＥＧ脂質またはその薬学的に許容される塩である。
別の態様では、式（ＰＶＩＩ）：
Figure 2021512090
 のＰＥＧ脂質またはその薬学的に許容される塩を含む脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）が本明細書で提供され、式中：
Ｙ２は、−Ｏ−、−ＮＲＮ−、または−Ｓ−であり、
Ｒ１のそれぞれの例は、独立して、必要に応じて置換されたＣ５−３０アルキル、必要に応じて置換されたＣ５−３０アルケニル、または必要に応じて置換されたＣ５−３０アルキニルであり、
ＲＯは、水素、必要に応じて置換されたアルキル、必要に応じて置換されたアシル、または酸素保護基であり、
ＲＮは、水素、必要に応じて置換されたアルキル、必要に応じて置換されたアシル、または窒素保護基であり、
ｒは、２〜１００の整数（両端値を含む）である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＶＩＩ）のＰＥＧ脂質は、下記の式：
Figure 2021512090
 、もしくは
Figure 2021512090
 のうちの１つのＰＥＧ脂質またはその薬学的に許容される塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＶＩＩ）のＰＥＧ脂質は、下記の式：
Figure 2021512090
 、もしくは
Figure 2021512090
 のうちの１つのＰＥＧ脂質またはその薬学的に許容される塩であり、式中：
ｓのそれぞれの例は、独立して、５〜２５の整数（両端値を含む）である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＶＩＩ）のＰＥＧ脂質は、下記の式：
Figure 2021512090
 、もしくは
Figure 2021512090
 のうちの１つのＰＥＧ脂質またはその薬学的に許容される塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＶＩＩ）のＰＥＧ脂質は、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、及び
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 ならびにその薬学的に許容される塩からなる群から選択される。
別の態様では、式（ＰＶＩＩＩ）：
Figure 2021512090
 のＰＥＧ脂質またはその薬学的に許容される塩を含む脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）が本明細書で提供され、式中：
Ｌ１は、結合、必要に応じて置換されたＣ１−３アルキレン、必要に応じて置換されたＣ１−３ヘテロアルキレン、必要に応じて置換されたＣ２−３アルケニレン、必要に応じて置換されたＣ２−３アルキニレンであり、
Ｒ１のそれぞれの例は、独立して、必要に応じて置換されたＣ５−３０アルキル、必要に応じて置換されたＣ３−３０アルケニル、または必要に応じて置換されたＣ５−３０アルキニルであり、
ＲＯは、水素、必要に応じて置換されたアルキル、必要に応じて置換されたアシル、または酸素保護基であり、
ｒは、２〜１００の整数（両端値を含む）であり、
ただし、Ｌ１が−ＣＨ２ＣＨ２−または−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−であるとき、ＲＯは、メチルではない。
ある特定の実施形態では、Ｌ１が、必要に応じて置換されたＣ２アルキレンまたはＣ３アルキレンであるとき、ＲＯは、必要に応じて置換されたアルキルではない。ある特定の実施形態では、Ｌ１が、必要に応じて置換されたＣ２アルキレンまたはＣ３アルキレンであるとき、ＲＯは、水素である。ある特定の実施形態では、Ｌ１が−ＣＨ２ＣＨ２−または−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−であるとき、ＲＯは、必要に応じて置換されたアルキルではない。ある特定の実施形態では、Ｌ１が−ＣＨ２ＣＨ２−または−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−であるとき、ＲＯは、水素である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＶＩＩＩ）のＰＥＧ脂質は、式：
Figure 2021512090
 のＰＥＧ脂質またはその薬学的に許容される塩であり、式中：
Ｙ１は、結合、−ＣＲ２−、−Ｏ−、−ＮＲＮ−、または−Ｓ−であり、
Ｒのそれぞれの例は、独立して、水素、ハロゲン、または必要に応じて置換されたアルキルであり、
ＲＮは、水素、必要に応じて置換されたアルキル、必要に応じて置換されたアシル、または窒素保護基であり、
ただし、Ｙ１が結合または−ＣＨ２−であるとき、ＲＯは、メチルではない。
ある特定の実施形態では、Ｌ１が−ＣＲ２−であるとき、ＲＯは、必要に応じて置換されたアルキルではない。ある特定の実施形態では、Ｌ１が−ＣＲ２−であるとき、ＲＯは、水素である。ある特定の実施形態では、Ｌ１が−ＣＨ２−であるとき、ＲＯは、必要に応じて置換されたアルキルではない。ある特定の実施形態では、Ｌ１が−ＣＨ２−であるとき、ＲＯは、水素である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＶＩＩＩ）のＰＥＧ脂質は、下記の式：
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 のうちの１つのＰＥＧ脂質またはその薬学的に許容される塩であり、式中：
Ｒのそれぞれの例は、独立して、水素、ハロゲン、または必要に応じて置換されたアルキルである。
ある特定の実施形態では、式（ＰＶＩＩＩ）のＰＥＧ脂質は、下記の式：
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 のうちの１つのＰＥＧ脂質またはその薬学的に許容される塩であり、式中：
Ｒのそれぞれの例は、独立して、水素、ハロゲン、または必要に応じて置換されたアルキルであり、
それぞれのｓは、独立して、５〜２５の整数（両端値を含む）である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＶＩＩＩ）のＰＥＧ脂質は、下記の式：
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 のうちの１つのＰＥＧ脂質またはその薬学的に許容される塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＶＩＩＩ）のＰＥＧ脂質は、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
Figure 2021512090
 、
及びその薬学的に許容される塩からからなる群から選択される。
前述の態様または関連する態様のいずれかでは、本発明のＰＥＧ脂質は、ｒが４０〜５０であることを特徴とする。
本明細書で提供されるＬＮＰは、ある特定の実施形態では、現存するＰＥＧ脂質含有ＬＮＰ製剤と比較してＰＥＧ放出を増加させる。本明細書で使用される「ＰＥＧ放出」は、ＰＥＧ脂質からＰＥＧ基が切断されることを指す。多くの場合、ＰＥＧ脂質からのＰＥＧ基の切断は、エステラーゼによる切断または加水分解が血清によって誘導されることで生じる。本明細書で提供されるＰＥＧ脂質は、ある特定の実施形態では、ＰＥＧ放出率が制御されるように設計されている。ある特定の実施形態では、ヒト血清中で、本明細書で提供されるＬＮＰにおいて約６時間後に生じるＰＥＧ放出の％は、５％超、１０％超、１５％超、２０％超、２５％超、３０％超、３５％超、４０％超、４５％超、５０％超、５５％超、６０％超、６５％超、７０％超、７５％超、８０％超、８５％超、９０％超、９５％超、または９８％超である。ある特定の実施形態では、ヒト血清中で、本明細書で提供されるＬＮＰにおいて約６時間後に生じるＰＥＧ放出の％は、５０％超である。ある特定の実施形態では、ヒト血清中で、本明細書で提供されるＬＮＰにおいて約６時間後に生じるＰＥＧ放出の％は、６０％超である。ある特定の実施形態では、ヒト血清中で、本明細書で提供されるＬＮＰにおいて約６時間後に生じるＰＥＧ放出の％は、７０％超である。ある特定の実施形態では、ヒト血清中でＬＮＰにおいて約６時間後に生じるＰＥＧ放出の％は、８０％超である。ある特定の実施形態では、ヒト血清中でＬＮＰにおいて約６時間後に生じるＰＥＧ放出の％は、９０％超である。ある特定の実施形態では、ヒト血清中で、本明細書で提供されるＬＮＰにおいて約６時間後に生じるＰＥＧ放出の％は、９０％超である。
他の実施形態では、ヒト血清中で、本明細書で提供されるＬＮＰにおいて約６時間後に生じるＰＥＧ放出の％は、５％未満、１０％未満、１５％未満、２０％未満、２５％未満、３０％未満、３５％未満、４０％未満、４５％未満、５０％未満、５５％未満、６０％未満、６５％未満、７０％未満、７５％未満、８０％未満、８５％未満、９０％未満、９５％未満、または９８％未満である。ある特定の実施形態では、ヒト血清中で、本明細書で提供されるＬＮＰにおいて約６時間後に生じるＰＥＧ放出の％は、６０％未満である。ある特定の実施形態では、ヒト血清中で、本明細書で提供されるＬＮＰにおいて約６時間後に生じるＰＥＧ放出の％は、７０％未満である。ある特定の実施形態では、ヒト血清中で、本明細書で提供されるＬＮＰにおいて約６時間後に生じるＰＥＧ放出の％は、８０％未満である。
本明細書で提供されるＰＥＧ脂質に加えて、ＬＮＰは、追加の脂質成分を１つ以上含み得る。ある特定の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、他の脂質に対して０．１５〜１５％のモル比でＬＮＰに存在する。ある特定の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、他の脂質に対して０．１５〜５％のモル比で存在する。ある特定の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、他の脂質に対して１〜５％のモル比で存在する。ある特定の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、他の脂質に対して０．１５〜２％のモル比で存在する。ある特定の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、他の脂質に対して１〜２％のモル比で存在する。ある特定の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、他の脂質に対して約１％、約１．１％、約１．２％、約１．３％、約１．４％、約１．５％、約１．６％、約１．７％、約１．８％、約１．９％、または約２％のモル比で存在する。ある特定の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、他の脂質に対して約１．５％のモル比で存在する。
一実施形態では、本明細書に開示の医薬組成物の脂質組成物におけるＰＥＧ脂質の量の範囲は、約０．１ｍｏｌ％〜約５ｍｏｌ％、約０．５ｍｏｌ％〜約５ｍｏｌ％、約１ｍｏｌ％〜約５ｍｏｌ％、約１．５ｍｏｌ％〜約５ｍｏｌ％、約２ｍｏｌ％〜約５ｍｏｌ％、約０．１ｍｏｌ％〜約４ｍｏｌ％、約０．５ｍｏｌ％〜約４ｍｏｌ％、約１ｍｏｌ％〜約４ｍｏｌ％、約１．５ｍｏｌ％〜約４ｍｏｌ％、約２ｍｏｌ％〜約４ｍｏｌ％、約０．１ｍｏｌ％〜約３ｍｏｌ％、約０．５ｍｏｌ％〜約３ｍｏｌ％、約１ｍｏｌ％〜約３ｍｏｌ％、約１．５ｍｏｌ％〜約３ｍｏｌ％、約２ｍｏｌ％〜約３ｍｏｌ％、約０．１ｍｏｌ％〜約２ｍｏｌ％、約０．５ｍｏｌ％〜約２ｍｏｌ％、約１ｍｏｌ％〜約２ｍｏｌ％、約１．５ｍｏｌ％〜約２ｍｏｌ％、約０．１ｍｏｌ％〜約１．５ｍｏｌ％、約０．５ｍｏｌ％〜約１．５ｍｏｌ％、または約１ｍｏｌ％〜約１．５ｍｏｌ％である。
一実施形態では、本明細書に開示の脂質組成物におけるＰＥＧ脂質の量は、約２ｍｏｌ％である。一実施形態では、本明細書に開示の脂質組成物におけるＰＥＧ脂質の量は、約１．５ｍｏｌ％である。
一実施形態では、本明細書に開示の脂質組成物におけるＰＥＧ脂質の量は、少なくとも約０．１ｍｏｌ％、少なくとも約０．２ｍｏｌ％、少なくとも約０．３ｍｏｌ％、少なくとも約０．４ｍｏｌ％、少なくとも約０．５ｍｏｌ％、少なくとも約０．６ｍｏｌ％、少なくとも約０．７ｍｏｌ％、少なくとも約０．８ｍｏｌ％、少なくとも約０．９ｍｏｌ％、少なくとも約１ｍｏｌ％、少なくとも約１．１ｍｏｌ％、少なくとも約１．２ｍｏｌ％、少なくとも約１．３ｍｏｌ％、少なくとも約１．４ｍｏｌ％、少なくとも約１．５ｍｏｌ％、少なくとも約１．６ｍｏｌ％、少なくとも約１．７ｍｏｌ％、少なくとも約１．８ｍｏｌ％、少なくとも約１．９ｍｏｌ％、少なくとも約２ｍｏｌ％、少なくとも約２．１ｍｏｌ％、少なくとも約２．２ｍｏｌ％、少なくとも約２．３ｍｏｌ％、少なくとも約２．４ｍｏｌ％、少なくとも約２．５ｍｏｌ％、少なくとも約２．６ｍｏｌ％、少なくとも約２．７ｍｏｌ％、少なくとも約２．８ｍｏｌ％、少なくとも約２．９ｍｏｌ％、少なくとも約３ｍｏｌ％、少なくとも約３．１ｍｏｌ％、少なくとも約３．２ｍｏｌ％、少なくとも約３．３ｍｏｌ％、少なくとも約３．４ｍｏｌ％、少なくとも約３．５ｍｏｌ％、少なくとも約３．６ｍｏｌ％、少なくとも約３．７ｍｏｌ％、少なくとも約３．８ｍｏｌ％、少なくとも約３．９ｍｏｌ％、少なくとも約４ｍｏｌ％、少なくとも約４．１ｍｏｌ％、少なくとも約４．２ｍｏｌ％、少なくとも約４．３ｍｏｌ％、少なくとも約４．４ｍｏｌ％、少なくとも約４．５ｍｏｌ％、少なくとも約４．６ｍｏｌ％、少なくとも約４．７ｍｏｌ％、少なくとも約４．８ｍｏｌ％、少なくとも約４．９ｍｏｌ％、または少なくとも約５ｍｏｌ％である。
合成例：
化合物：ＨＯ−ＰＥＧ２０００−エステル−Ｃ１８
Figure 2021512090
 パラジウムを担持させた炭素（１０ｗｔ．％、７４ｍｇ、０．０７０ｍｍｏｌ）を入れた窒素充填済フラスコに対して、ベンジル−ＰＥＧ２０００−エステル−Ｃ１８（８２２ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）及びＭｅＯＨ（２０ｍＬ）を添加した。Ｈ２を用いてフラスコの排気及び再充填を３回実施し、Ｈ２雰囲気（１ａｔｍ）下、室温でフラスコ内容物を１２時間攪拌した。この混合物をｃｅｌｉｔｅに通してろ過し（このろ過の際、ＤＣＭですすぎを行った）、ろ液を減圧下で濃縮することで所望の生成物（６９２ｍｇ、８８％）を得た。この方法論を使用すると、ｎ＝４０〜５０となる。一実施形態では、得られる多分散系混合物のｎは、平均４５とされる。
例えば、ｒの値は、ＰＥＧ脂質中のＰＥＧ部分の分子量に基づいて決定され得る。例えば、分子量２，０００（例えば、ＰＥＧ２０００）のｎの値は、約４５に相当する。所与の組成物については、ポリマーは、長さが異なるポリマー鎖が分布するものとして見られることが多いため、ｎの値は、当該技術分野で許容される範囲内の値の分布をとることを暗示し得る。例えば、そのようなポリマー組成物の多分散性を理解している当業者であれば、ｎの値（例えば、構造式中のもの）が４５なら、実際のＰＥＧ含有組成物（例えば、ＤＭＧ ＰＥＧ２００ ｐｅｇ脂質組成物）における値の分布は４０〜５０となり得ることを理解するであろう。
いくつかの態様では、本明細書に開示の医薬組成物の免疫細胞送達脂質は、ＰＥＧ脂質を含まない。
一実施形態では、本開示の免疫細胞送達ＬＮＰは、ＰＥＧ脂質を含む。一実施形態では、ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ ＤＭＧではない。いくつかの態様では、ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、ＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロール、及びそれらの混合物からなる群から選択される。いくつかの態様では、ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ−ｃ−ＤＯＭＧ脂質、ＰＥＧ−ＤＭＧ脂質、ＰＥＧ−ＤＬＰＥ脂質、ＰＥＧ−ＤＭＰＥ脂質、ＰＥＧ−ＤＰＰＣ脂質、及びＰＥＧ−ＤＳＰＥ脂質からなる群から選択される。他の態様では、ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ−ＤＭＧである。
一実施形態では、本開示の免疫細胞送達ＬＮＰは、ＰＥＧ脂質を含み、当該ＰＥＧ脂質は、分岐を有する場合、約１４超または約１０超の鎖長を有する。
一実施形態では、ＰＥＧ脂質は、化合物番号Ｐ４１５、化合物番号Ｐ４１６、化合物番号Ｐ４１７、化合物番号Ｐ ４１９、化合物番号Ｐ ４２０、化合物番号Ｐ ４２３、化合物番号Ｐ ４２４、化合物番号Ｐ ４２８、化合物番号Ｐ Ｌ１、化合物番号Ｐ Ｌ２、化合物番号Ｐ Ｌ１６、化合物番号Ｐ Ｌ１７、化合物番号Ｐ Ｌ１８、化合物番号Ｐ Ｌ１９、化合物番号Ｐ Ｌ２２、及び化合物番号Ｐ Ｌ２３のいずれかからなる群から選択される化合物である。一実施形態では、ＰＥＧ脂質は、化合物番号Ｐ４１５、化合物番号Ｐ４１７、化合物番号Ｐ ４２０、化合物番号Ｐ ４２３、化合物番号Ｐ ４２４、化合物番号Ｐ ４２８、化合物番号Ｐ Ｌ１、化合物番号Ｐ Ｌ２、化合物番号Ｐ Ｌ１６、化合物番号Ｐ Ｌ１７、化合物番号Ｐ Ｌ１８、化合物番号Ｐ Ｌ１９、化合物番号Ｐ Ｌ２２、及び化合物番号Ｐ Ｌ２３のいずれかからなる群から選択される化合物である。
一実施形態では、ＰＥＧ脂質は、Ｃｍｐｄ ４２８、Ｃｍｐｄ ＰＬ１６、Ｃｍｐｄ ＰＬ１７、Ｃｍｐｄ ＰＬ １８、Ｃｍｐｄ ＰＬ１９、Ｃｍｐｄ ＰＬ １、及びＣｍｐｄ ＰＬ ２からなる群から選択される。
免疫細胞送達増強脂質
免疫細胞送達増強脂質は、ＬＮＰに有効量で存在するとき、免疫細胞送達増強脂質を含まないＬＮＰと比較して免疫細胞（例えば、ヒトまたは霊長類の免疫細胞）への薬剤の送達を増進し、それによって、免疫細胞送達ＬＮＰを創出する。免疫細胞送達増強脂質は、ＬＮＰに存在するとき、免疫細胞送達増強脂質を含まない対照ＬＮＰと比較してＬＮＰに存在する薬剤を免疫細胞に送達することを促進するという点において特徴付けられ得る。
一実施形態では、少なくとも１つの免疫細胞送達増強脂質がＬＮＰに存在すると、少なくとも１つの免疫細胞送達増強脂質を含まない対照ＬＮＰと比較して免疫細胞と結合するＬＮＰのパーセントが増加する。別の実施形態では、少なくとも１つの免疫細胞送達増強脂質がＬＮＰに存在すると、免疫細胞送達増強脂質を含まない対照ＬＮＰと比較して免疫細胞への核酸分子剤の送達が増加する。一実施形態では、少なくとも１つの免疫細胞送達増強脂質がＬＮＰに存在すると、免疫細胞送達増強脂質を含まない対照ＬＮＰと比較してＢ細胞への核酸分子剤の送達が増加する。具体的には、一実施形態では、少なくとも１つの免疫細胞送達増強脂質がＬＮＰに存在すると、免疫細胞送達増強脂質を含まない対照ＬＮＰと比較して骨髄系細胞への核酸分子剤の送達が増加する。一実施形態では、少なくとも１つの免疫細胞送達増強脂質がＬＮＰに存在すると、免疫細胞送達増強脂質を含まない対照ＬＮＰと比較してＴ細胞への核酸分子剤の送達が増加する。
一実施形態では、少なくとも１つの免疫細胞送達増強脂質がＬＮＰに存在すると、少なくとも１つの免疫細胞送達増強脂質を含まない対照ＬＮＰと比較してＣ１ｑに結合するＬＮＰのパーセントが増加する。一実施形態では、少なくとも１つの免疫細胞送達増強脂質がＬＮＰに存在すると、少なくとも１つの免疫細胞送達増強脂質を含まない対照ＬＮＰと比較して、Ｃ１ｑと結合したＬＮＰが免疫細胞によって取り込まれるパーセントが増加する（例えば、免疫細胞によるオプソニン化を介した取り込みのパーセントが増加する）。
一実施形態では、核酸分子がｍＲＮＡであるとき、少なくとも１つの免疫細胞送達増強脂質が存在すると、免疫細胞送達増強脂質を含まない対照ＬＮＰと比較して、ｍＲＮＡによってコードされるタンパク質分子の免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、単球）における発現が少なくとも約２倍超に上昇する。
一実施形態では、免疫細胞送達増強脂質は、イオン化可能な脂質である。前述の態様または関連する態様のいずれかでは、本開示のＬＮＰのイオン化可能な脂質（Ｉによって表される）は、いずれかに含まれる化合物（例えば、式（Ｉ Ｉ）、式（Ｉ ＩＡ）、式（Ｉ ＩＢ）、式（Ｉ ＩＩ）、式（Ｉ ＩＩａ）、式（Ｉ ＩＩｂ）、式（Ｉ ＩＩｃ）、式（Ｉ ＩＩｄ）、式（Ｉ ＩＩｅ）、式（Ｉ ＩＩｆ）、式（Ｉ ＩＩｇ）、式（Ｉ ＩＩＩ）、式（Ｉ ＶＩ）、式（Ｉ ＶＩ−ａ）、式（Ｉ ＶＩＩ）、式（Ｉ ＶＩＩＩ）、式（Ｉ ＶＩＩａ）、式（Ｉ ＶＩＩＩａ）、式（Ｉ ＶＩＩＩｂ）、式（Ｉ ＶＩＩｂ−１）、式（Ｉ ＶＩＩｂ−２）、式（Ｉ ＶＩＩｂ−３）、式（Ｉ ＶＩＩｃ）、式（Ｉ ＶＩＩｄ）、式（Ｉ ＶＩＩＩｃ）、式（Ｉ ＶＩＩＩｄ）、式（Ｉ ＩＸ）、式（Ｉ ＩＸａ１）、式（Ｉ ＩＸａ２）、式（Ｉ ＩＸａ３）、式（Ｉ ＩＸａ４）、式（Ｉ ＩＸａ５）、式（Ｉ ＩＸａ６）、式（Ｉ ＩＸａ７）、もしくは式（Ｉ ＩＸａ８）のいずれかを有する化合物）を含み、及び／または化合物Ｘ、化合物Ｙ、化合物Ｉ ４８、化合物Ｉ ５０、化合物Ｉ １０９、化合物Ｉ １１１、化合物Ｉ １１３、化合物Ｉ １８１、化合物Ｉ １８２、化合物Ｉ ２４４、化合物Ｉ ２９２、化合物Ｉ ３０１、化合物Ｉ ３２１、化合物Ｉ ３２２、化合物Ｉ ３２６、化合物Ｉ ３２８、化合物Ｉ ３３０、化合物Ｉ ３３１、化合物Ｉ ３３２、もしくは化合物Ｉ Ｍのいずれかを含む。
一実施形態では、免疫細胞送達増強脂質は、イオン化可能な脂質である。前述の態様または関連する態様のいずれかでは、本開示のＬＮＰのイオン化可能な脂質は、化合物Ｘ、化合物Ｙ、化合物Ｉ−３２１、化合物Ｉ−２９２、化合物Ｉ−３２６、化合物Ｉ−１８２、化合物Ｉ−３０１、化合物Ｉ−４８、化合物Ｉ−５０、化合物Ｉ−３２８、化合物Ｉ−３３０、化合物Ｉ−１０９、化合物Ｉ−１１１、または化合物Ｉ−１８１として本明細書に記載の化合物を含む。
前述の態様または関連する態様のいずれかでは、本開示のＬＮＰのイオン化可能な脂質は、化合物番号Ｉ １８（化合物Ｘとも称される）、化合物番号Ｉ ２５（化合物Ｙとも称される）、化合物番号Ｉ ４８、化合物番号Ｉ ５０、化合物番号Ｉ １０９、化合物番号Ｉ １１１、化合物番号Ｉ １１３、化合物番号Ｉ １８１、化合物番号Ｉ １８２、化合物番号Ｉ ２４４、化合物番号Ｉ ２９２、化合物番号Ｉ ３０１、化合物番号Ｉ ３０９、化合物番号Ｉ ３１７、化合物番号Ｉ ３２１、化合物番号Ｉ ３２２、化合物番号Ｉ ３２６、化合物番号Ｉ ３２８、化合物番号Ｉ ３３０、化合物番号Ｉ ３３１、化合物番号Ｉ ３３２、化合物番号Ｉ ３４７、化合物番号Ｉ ３４８、化合物番号Ｉ ３４９、化合物番号Ｉ ３５０、化合物番号Ｉ ３５１、及び化合物番号Ｉ ３５２からなる群から選択される少なくとも１つの化合物を含む。別の実施形態では、本開示のＬＮＰのイオン化可能な脂質は、化合物番号Ｉ １８（化合物Ｘとも称される）、化合物番号Ｉ ２５（化合物Ｙとも称される）、化合物番号Ｉ ４８、化合物番号Ｉ ５０、化合物番号Ｉ １０９、化合物番号Ｉ １１１、化合物番号Ｉ １８１、化合物番号Ｉ １８２、化合物番号Ｉ ２９２、化合物番号Ｉ ３０１、化合物番号Ｉ ３２１、化合物番号Ｉ ３２６、化合物番号Ｉ ３２８、及び化合物番号Ｉ ３３０からなる群から選択される化合物を含む。別の実施形態では、本開示のＬＮＰのイオン化可能な脂質は、化合物番号Ｉ １８２、化合物番号Ｉ ３０１、化合物番号Ｉ ３２１、及び化合物番号Ｉ ３２６からなる群から選択される化合物を含む。
免疫細胞送達増強脂質がイオン化可能な脂質を含む実施形態では、免疫細胞送達増強脂質は、ＬＮＰに存在する唯一のイオン化可能な脂質であり得るか、または追加のイオン化可能な脂質を少なくとも１つ含む混合物として存在し得ることが理解されよう。換言すれば、イオン化可能な脂質の混合物（例えば、免疫細胞送達増強効果を有する複数のイオン化可能な脂質の混合物、または免疫細胞送達増強効果を有する１つのイオン化可能な脂質と、免疫細胞送達増強効果を有さない少なくとも１つのイオン化可能な脂質と、の混合物）が用いられる可能性があるということである。
一実施形態では、免疫細胞送達増強脂質は、ステロールを含む。別の実施形態では、免疫細胞送達増強脂質は、天然起源のステロールを含む。別の実施形態では、免疫細胞送達増強脂質は、修飾ステロールを含む。一実施形態では、免疫細胞送達増強脂質は、１つ以上のフィトステロールを含む。一実施形態では、免疫細胞送達増強脂質は、フィトステロール／コレステロール混合物を含む。
一実施形態では、免疫細胞送達増強脂質は、有効量のフィトステロールを含む。
「フィトステロール」という用語は、フィトステロイド（その塩またはエステルを含む）である植物ベースのステロール及びスタノールの群を指す。
「ステロール」という用語は、ステロイドアルコールとしても知られるステロイドの部分群を指す。ステロールは、通常、（１）「フィトステロール」としても知られる植物ステロール、及び（２）「ズーステロール」としても知られる動物ステロール（コレステロールなど）、という２つのクラスに分けられる。「スタノール」という用語は、ステロール環構造に二重結合を有さないクラスの飽和ステロールを指す。
「有効量のフィトステロール」という用語は、所望の活性（例えば、送達増進、免疫細胞による取り込みの増進、核酸活性の増進）を誘発することになる量のフィトステロールが脂質ベースの組成物（ＬＮＰを含む）に１つ以上含まれることを意味することが意図される。いくつかの実施形態では、有効量のフィトステロールは、脂質ナノ粒子におけるステロールのすべてまたは実質的にすべて（すなわち、約９９〜１００％）である。いくつかの実施形態では、有効量のフィトステロールは、脂質ナノ粒子におけるステロールのすべてまたは実質的にすべてに満たない（約９９〜１００％未満）であるが、脂質ナノ粒子におけるフィトステロールではないステロールよりは多い量である。いくつかの実施形態では、有効量のフィトステロールは、脂質ナノ粒子におけるステロールの総量の５０％超、６０％超、７０％超、７５％超、８０％超、８５％超、９０％超、または９５％超である。いくつかの実施形態では、有効量のフィトステロールは、脂質ナノ粒子におけるステロールの総量の９５〜１００％、７５〜１００％、または５０〜１００％である。
いくつかの実施形態では、フィトステロールは、シトステロール、スチグマステロール、カンペステロール、シトスタノール、カンペスタノール、ブラシカステロール、フコステロール、ベータ−シトステロール、スチグマスタノール、ベータ−シトスタノール、エルゴステロール、ルペオール、シクロアルテノール、Δ５−アベナセロール（ａｖｅｎａｓｅｒｏｌ）、Δ７−アベナセロール（ａｖｅｎａｓｅｒｏｌ）、またはΔ７−スチグマステロール（その類似体、塩、またはエステルを含む）の単独のものまたは組み合わさったものである。いくつかの実施形態では、本開示のＬＮＰのフィトステロール成分は、単一のフィトステロールである。いくつかの実施形態では、本開示のＬＮＰのフィトステロール成分は、異なるフィトステロール（例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つの異なるフィトステロール）の混合物である。いくつかの実施形態では、本開示のＬＮＰのフィトステロール成分は、１つ以上のフィトステロールと１つ以上のズーステロールとの混合物（フィトステロール（例えば、シトステロール（ベータ−シトステロールなど））とコレステロールとの混合物など）である。
いくつかの実施形態では、シトステロールは、ベータ−シトステロールである。
いくつかの実施形態では、ベータ−シトステロールは、式：
Figure 2021512090
 を有する（その類似体、塩、またはエステルを含む）。
いくつかの実施形態では、シトステロールは、スチグマステロールである。
いくつかの実施形態では、スチグマステロールは、式：
Figure 2021512090
 を有する（その類似体、塩、またはエステルを含む）。
いくつかの実施形態では、シトステロールは、カンペステロールである。
いくつかの実施形態では、カンペステロールは、式：
Figure 2021512090
 を有する（その類似体、塩、またはエステルを含む）。
いくつかの実施形態では、シトステロールは、シトスタノールである。
いくつかの実施形態では、シトスタノールは、式：
Figure 2021512090
 を有する（その類似体、塩、またはエステルを含む）。
いくつかの実施形態では、シトステロールは、カンペスタノールである。
いくつかの実施形態では、カンペスタノールは、式：
Figure 2021512090
 を有する（その類似体、塩、またはエステルを含む）。
いくつかの実施形態では、シトステロールは、ブラシカステロールである。
いくつかの実施形態では、ブラシカステロールは、式：
Figure 2021512090
 を有する（その類似体、塩、またはエステルを含む）。
いくつかの実施形態では、シトステロールは、フコステロールである。
いくつかの実施形態では、フコステロールは、式：
Figure 2021512090
 を有する（その類似体、塩、またはエステルを含む）。
いくつかの実施形態では、フィトステロール（例えば、ベータ−シトステロール）は、７０％超の純度を有する。いくつかの実施形態では、フィトステロール（例えば、ベータ−シトステロール）は、８０％超の純度を有する。いくつかの実施形態では、フィトステロール（例えば、ベータ−シトステロール）は、９０％超の純度を有する。いくつかの実施形態では、フィトステロール（例えば、ベータ−シトステロール）は、９５％超の純度を有する。いくつかの実施形態では、フィトステロール（例えば、ベータ−シトステロール）は、９７％超、９８％超、または９９％超の純度を有する。
一実施形態では、免疫細胞送達増進ＬＮＰは、複数の型の構造脂質を含む。
例えば、一実施形態では、免疫細胞送達増進ＬＮＰは、フィトステロールである免疫細胞送達増強脂質を少なくとも１つ含む。一実施形態では、フィトステロールは、ＬＮＰにおける唯一の構造脂質である。別の実施形態では、免疫細胞送達ＬＮＰは、構造脂質の混合物を含む。
一実施形態では、本明細書に開示の医薬組成物の脂質組成物におけるフィトステロールと構造脂質とを合わせた量（例えば、ベータ−シトステロールとコレステロールとを合わせた量）の範囲は、約２０ｍｏｌ％〜約６０ｍｏｌ％、約２５ｍｏｌ％〜約５５ｍｏｌ％、約３０ｍｏｌ％〜約５０ｍｏｌ％、または約３５ｍｏｌ％〜約４５ｍｏｌ％である。
一実施形態では、本明細書に開示の脂質組成物におけるフィトステロールと構造脂質とを合わせた量（例えば、ベータ−シトステロールとコレステロールとを合わせた量）の範囲は、約２５ｍｏｌ％〜約３０ｍｏｌ％、約３０ｍｏｌ％〜約３５ｍｏｌ％、または約３５ｍｏｌ％〜約４０ｍｏｌ％である。
一実施形態では、本明細書に開示の脂質組成物におけるフィトステロール及び構造脂質（例えば、ベータ−シトステロール及びコレステロール）の量は、約２４ｍｏｌ％、約２９ｍｏｌ％、約３４ｍｏｌ％、または約３９ｍｏｌ％である。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示の脂質組成物におけるフィトステロールと構造脂質とを合わせた量（例えば、ベータ−シトステロールとコレステロールとを合わせた量）は、少なくとも約２０ｍｏｌ％、少なくとも約２１ｍｏｌ％、少なくとも約２２ｍｏｌ％、少なくとも約２３ｍｏｌ％、少なくとも約２４ｍｏｌ％、少なくとも約２５ｍｏｌ％、少なくとも約２６ｍｏｌ％、少なくとも約２７ｍｏｌ％、少なくとも約２８ｍｏｌ％、少なくとも約２９ｍｏｌ％、少なくとも約３０ｍｏｌ％、少なくとも約３１ｍｏｌ％、少なくとも約３２ｍｏｌ％、少なくとも約３３ｍｏｌ％、少なくとも約３４ｍｏｌ％、少なくとも約３５ｍｏｌ％、少なくとも約３６ｍｏｌ％、少なくとも約３７ｍｏｌ％、少なくとも約３８ｍｏｌ％、少なくとも約３９ｍｏｌ％、少なくとも約４０ｍｏｌ％、少なくとも約４１ｍｏｌ％、少なくとも約４２ｍｏｌ％、少なくとも約４３ｍｏｌ％、少なくとも約４４ｍｏｌ％、少なくとも約４５ｍｏｌ％、少なくとも約４６ｍｏｌ％、少なくとも約４７ｍｏｌ％、少なくとも約４８ｍｏｌ％、少なくとも約４９ｍｏｌ％、少なくとも約５０ｍｏｌ％、少なくとも約５１ｍｏｌ％、少なくとも約５２ｍｏｌ％、少なくとも約５３ｍｏｌ％、少なくとも約５４ｍｏｌ％、少なくとも約５５ｍｏｌ％、少なくとも約５６ｍｏｌ％、少なくとも約５７ｍｏｌ％、少なくとも約５８ｍｏｌ％、少なくとも約５９ｍｏｌ％、または少なくとも約６０ｍｏｌ％である。
いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、１つ以上のフィトステロール（例えば、ベータ−シトステロール）と、１つ以上の構造脂質（例えばコレステロール）と、を含む。いくつかの実施形態では、構造脂質のｍｏｌ％は、脂質ナノ粒子に存在するフィトステロールのｍｏｌ％の約１％〜５０％である。いくつかの実施形態では、構造脂質のｍｏｌ％は、脂質ベースの組成物（例えば、ＬＮＰ）に存在するフィトステロールのｍｏｌ％の約１０％〜４０％である。いくつかの実施形態では、構造脂質のｍｏｌ％は、脂質ベースの組成物（例えば、ＬＮＰ）に存在するフィトステロールのｍｏｌ％の約２０％〜３０％である。いくつかの実施形態では、構造脂質のｍｏｌ％は、脂質ベースの組成物（例えば、脂質ナノ粒子）に存在するフィトステロールのｍｏｌ％の約３０％である。
いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、フィトステロール（例えば、ベータ−シトステロール）を１５〜４０ｍｏｌ％含む。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、フィトステロール（例えば、ベータ−シトステロール）を約１５ｍｏｌ％、約１６ｍｏｌ％、約１７ｍｏｌ％、約１８ｍｏｌ％、約１９ｍｏｌ％、約２０ｍｏｌ％、約２１ｍｏｌ％、約２２ｍｏｌ％、約２３ｍｏｌ％、約２４ｍｏｌ％、約２５ｍｏｌ％、約２６ｍｏｌ％、約２７ｍｏｌ％、約２８ｍｏｌ％、約２９ｍｏｌ％、約３０ｍｏｌ％、約３１ｍｏｌ％、約３２ｍｏｌ％、約３３ｍｏｌ％、約３４ｍｏｌ％、約３５ｍｏｌ％、約３６ｍｏｌ％、約３７ｍｏｌ％、約３８ｍｏｌ％、約３０ｍｏｌ％、または約４０ｍｏｌ％含み、構造脂質（例えば、コレステロール）を０ｍｏｌ％、１ｍｏｌ％、２ｍｏｌ％、３ｍｏｌ％、４ｍｏｌ％、５ｍｏｌ％、６ｍｏｌ％、７ｍｏｌ％、８ｍｏｌ％、９ｍｏｌ％、１０ｍｏｌ％、１１ｍｏｌ％、１２ｍｏｌ％、１３ｍｏｌ％、１４ｍｏｌ％、１５ｍｏｌ％、１６ｍｏｌ％、１７ｍｏｌ％、１８ｍｏｌ％、１９ｍｏｌ％、２０ｍｏｌ％、２１ｍｏｌ％、２２ｍｏｌ％、２３ｍｏｌ％、２４ｍｏｌ％、または２５ｍｏｌ％含む。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、フィトステロール（例えば、ベータ−シトステロール）を２０ｍｏｌ％超含み、構造脂質（例えば、コレステロール）を２０ｍｏｌ％未満含み、その結果、フィトステロール及び構造脂質の総ｍｏｌ％は、３０〜４０ｍｏｌ％である。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、フィトステロール（例えば、ベータ−シトステロール）を約２０ｍｏｌ％、約２１ｍｏｌ％、約２２ｍｏｌ％、約２３ｍｏｌ％、約２４ｍｏｌ％、約２５ｍｏｌ％、約２６ｍｏｌ％、約２７ｍｏｌ％、約２８ｍｏｌ％、約２９ｍｏｌ％、約３０ｍｏｌ％、約３１ｍｏｌ％、約３２ｍｏｌ％、約３３ｍｏｌ％、約３４ｍｏｌ％、約３５ｍｏｌ％、約３７ｍｏｌ％、約３８ｍｏｌ％、約３９ｍｏｌ％、または約４０ｍｏｌ％含み、構造脂質（例えば、コレステロール）を、それぞれ約１９ｍｏｌ％、約１８ｍｏｌ％、約１７ｍｏｌ％、約１６ｍｏｌ％、約１５ｍｏｌ％、約１４ｍｏｌ％、約１３ｍｏｌ％、約１２ｍｏｌ％、約１１ｍｏｌ％、約１０ｍｏｌ％、約９ｍｏｌ％、約８ｍｏｌ％、約７ｍｏｌ％、約６ｍｏｌ％、約５ｍｏｌ％、約４ｍｏｌ％、約３ｍｏｌ％、約２ｍｏｌ％、約１ｍｏｌ％、または約０ｍｏｌ％含む。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、フィトステロール（例えば、ベータ−シトステロール）を約２８ｍｏｌ％含み、構造脂質（例えば、コレステロール）を約１０ｍｏｌ％含む。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、フィトステロール及び構造脂質（例えば、コレステロール）を総ｍｏｌ％で３８．５％含む。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、フィトステロール（例えば、ベータ−シトステロール）を２８．５ｍｏｌ％含み、構造脂質（例えば、コレステロール）を１０ｍｏｌ％含む。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、フィトステロール（例えば、ベータ−シトステロール）を１８．５ｍｏｌ％含み、構造脂質（例えば、コレステロール）を２０ｍｏｌ％含む。
ある特定の実施形態では、ＬＮＰは、イオン化可能な脂質を５０％含み、ヘルパー脂質（例えば、リン脂質）を１０％含み、構造脂質を３８．５％含み、ＰＥＧ脂質を１．５％含む。ある特定の実施形態では、ＬＮＰは、イオン化可能な脂質を５０％含み、ヘルパー脂質（例えば、リン脂質）を１０％含み、構造脂質を３８％含み、ＰＥＧ脂質を２％含む。ある特定の実施形態では、ＬＮＰは、イオン化可能な脂質を５０％含み、ヘルパー脂質（例えば、リン脂質）を２０％含み、構造脂質を２８．５％含み、ＰＥＧ脂質を１．５％含む。ある特定の実施形態では、ＬＮＰは、イオン化可能な脂質を５０％含み、ヘルパー脂質（例えば、リン脂質）を２０％含み、構造脂質を２８％含み、ＰＥＧ脂質を２％含む。ある特定の実施形態では、ＬＮＰは、イオン化可能な脂質を４０％含み、ヘルパー脂質（例えば、リン脂質）を３０％含み、構造脂質を２８．５％含み、ＰＥＧ脂質を１．５％含む。ある特定の実施形態では、ＬＮＰは、イオン化可能な脂質を４０％含み、ヘルパー脂質（例えば、リン脂質）を３０％含み、構造脂質を２８％含み、ＰＥＧ脂質を２％含む。ある特定の実施形態では、ＬＮＰは、イオン化可能な脂質を４５％含み、ヘルパー脂質（例えば、リン脂質）を２０％含み、構造脂質を３３．５％含み、ＰＥＧ脂質を１．５％含む。ある特定の実施形態では、ＬＮＰは、イオン化可能な脂質を４５％含み、ヘルパー脂質（例えば、リン脂質）を２０％含み、構造脂質を３３％含み、ＰＥＧ脂質を２％含む。
一態様では、免疫細胞送達増進ＬＮＰは、フィトステロールを含み、当該ＬＮＰは、追加の構造脂質を含まない。したがって、ＬＮＰの構造脂質（ステロール）成分は、フィトステロールからなる。別の態様では、免疫細胞送達増進ＬＮＰは、フィトステロールと、追加の構造脂質と、を含む。したがって、ＬＮＰのステロール成分は、フィトステロールと、１つ以上の追加のステロールまたは構造脂質と、を含む。
前述の態様または関連する態様のいずれかでは、本開示のＬＮＰの構造脂質（例えば、ステロール（フィトステロールまたはフィトステロール／コレステロール混合物など））は、コレステロール、β−シトステロール（本明細書ではＣｍｐｄ Ｓ １４１とも称される）、カンペステロール（本明細書ではＣｍｐｄ Ｓ １４３とも称される）、β−シトスタノール（本明細書ではＣｍｐｄ Ｓ １４４とも称される）、ブラシカステロール、もしくはスチグマステロールとして本明細書に記載の化合物、またはそれらの組み合わせもしくは混合物を含む。別の実施形態では、本開示のＬＮＰの構造脂質（例えば、ステロール（フィトステロールまたはフィトステロール／コレステロール混合物など））は、コレステロール、β−シトステロール、カンペステロール、β−シトスタノール、ブラシカステロール、スチグマステロール、β−シトステロール−ｄ７、化合物Ｓ−３０、化合物Ｓ−３１、化合物Ｓ−３２から選択される化合物、またはそれらの組み合わせもしくは混合物を含む。別の実施形態では、本開示のＬＮＰの構造脂質（例えば、ステロール（フィトステロールまたはフィトステロール／コレステロール混合物など））は、コレステロール、β−シトステロール（本明細書ではＣｍｐｄ Ｓ １４１とも称される）、カンペステロール（本明細書ではＣｍｐｄ Ｓ １４３とも称される）、β−シトスタノール（本明細書ではＣｍｐｄ Ｓ １４４とも称される）、化合物Ｓ−１４０、化合物Ｓ−１４４、ブラシカステロール（本明細書ではＣｍｐｄ Ｓ １４８とも称される）として本明細書に記載の化合物、または組成物Ｓ−１８３（化合物Ｓ−１４１を約４０％含み、化合物Ｓ−１４０を約２５％含み、化合物Ｓ−１４３を約２５％含み、ブラシカステロールを約１０％含む）を含む。いくつかの実施形態では、本開示のＬＮＰの構造脂質は、化合物Ｓ−１５９、化合物Ｓ−１６０、化合物Ｓ−１６４、化合物Ｓ−１６５、化合物Ｓ−１６７、化合物Ｓ−１７０、化合物Ｓ−１７３、または化合物Ｓ−１７５として本明細書に記載の化合物を含む。
一実施形態では、免疫細胞送達増進ＬＮＰは、非カチオン性ヘルパー脂質（例えば、リン脂質）を含む。前述の態様または関連する態様のいずれかでは、本開示のＬＮＰの非カチオン性ヘルパー脂質（例えば、リン脂質）は、ＤＳＰＣ、ＤＭＰＥ、ＤＯＰＣ、またはＨ−４０９として本明細書に記載の化合物を含む。一実施形態では、非カチオン性ヘルパー脂質（例えば、リン脂質）は、ＤＳＰＣである。他の実施形態では、本開示のＬＮＰの非カチオン性ヘルパー脂質（例えば、リン脂質）は、ＤＳＰＣ、ＤＭＰＥ、ＤＯＰＣ、ＤＰＰＣ、ＰＭＰＣ、Ｈ−４０９、Ｈ−４１８、Ｈ−４２０、Ｈ−４２１またはＨ−４２２として本明細書に記載の化合物を含む。
前述の態様または関連する態様のいずれかでは、本開示のＬＮＰのＰＥＧ脂質は、本明細書に記載の化合物を含み、当該化合物は、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、ＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロール、及びそれらの混合物からなる群から選択され得る。別の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、化合物番号Ｐ４１５、化合物番号Ｐ４１６、化合物番号Ｐ４１７、化合物番号Ｐ ４１９、化合物番号Ｐ ４２０、化合物番号Ｐ ４２３、化合物番号Ｐ ４２４、化合物番号Ｐ ４２８、化合物番号Ｐ Ｌ５、化合物番号Ｐ Ｌ１、化合物番号Ｐ Ｌ２、化合物番号Ｐ Ｌ１６、化合物番号Ｐ Ｌ１７、化合物番号Ｐ Ｌ１８、化合物番号Ｐ Ｌ１９、化合物番号Ｐ Ｌ２２、化合物番号Ｐ Ｌ２３、ＤＭＧ、ＤＰＧ、及びＤＳＧからなる群から選択される。別の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、Ｃｍｐｄ ４２８、Ｃｍｐｄ ＰＬ１６、Ｃｍｐｄ ＰＬ１７、Ｃｍｐｄ ＰＬ １８、Ｃｍｐｄ ＰＬ１９、Ｃｍｐｄ Ｐ Ｌ５、Ｃｍｐｄ ＰＬ １、及びＣｍｐｄ ＰＬ ２からなる群から選択される。
一実施形態では、免疫細胞送達増強脂質は、イオン化可能な脂質とフィトステロールとの組み合わせを有効量で含む。
他の実施形態では、本開示は、１つ以上の免疫細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子を提供し、ＬＮＰは、イオン化可能な脂質として化合物Ｘを含み、リン脂質としてＤＳＰＣを含み、構造脂質としてコレステロールまたはコレステロール／β−シトステロール混合物を含み、ＰＥＧ脂質として化合物４２８を含む。こうした化合物Ｘ含有組成物の様々な実施形態では、イオン化可能な脂質：リン脂質：構造脂質：ＰＥＧ脂質の比は、例えば、下記の比であり得る：（ｉ）５０：１０：３８：２、（ｉｉ）５０：２０：２８：２、（ｉｉｉ）４０：２０：３８：２、（ｉｖ）４０：３０：２８：２。構造脂質成分については、一実施形態では、構造脂質は、すべてコレステロールであり、３８％または２８％を構成する。別の実施形態では、構造脂質は、コレステロール／β−シトステロールであり、その総パーセントとして３８％または２８％を構成し、当該混合物は、例えば、（ｉ）コレステロールを２０％含み、β−シトステロールを１８％含むか、（ｉｉ）コレステロールを１０％含み、β−シトステロールを１８％含むか、または（ｉｉｉ）コレステロールを１０％含み、β−シトステロールを２８％含み得る。別の実施形態では、構造脂質は、コレステロール／β−シトステロールであり、その総パーセントとして３８．５％を構成し、当該混合物は、例えば、（ｉ）コレステロールを２０％含み、β−シトステロールを１８．５％含むか、または（ｉｉ）コレステロールを１０％含み、β−シトステロールを２８．５％含み得る。
他の実施形態では、本開示は、１つ以上の免疫細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子を提供し、ＬＮＰは、イオン化可能な脂質として化合物Ｙを含み、リン脂質としてＤＳＰＣを含み、構造脂質としてコレステロールまたはコレステロール／β−シトステロール混合物を含み、ＰＥＧ脂質として化合物４２８を含む。こうした化合物Ｙ含有組成物の様々な実施形態では、イオン化可能な脂質：リン脂質：構造脂質：ＰＥＧ脂質の比は、例えば、下記の比であり得る：（ｉ）５０：１０：３８：２、（ｉｉ）５０：２０：２８：２、（ｉｉｉ）４０：２０：３８：２、（ｉｖ）４０：３０：２８：２。構造脂質成分については、一実施形態では、構造脂質は、すべてコレステロールであり、３８％または２８％を構成する。別の実施形態では、構造脂質は、コレステロール／β−シトステロールであり、その総パーセントとして３８％または２８％を構成し、当該混合物は、例えば、（ｉ）コレステロールを２０％含み、β−シトステロールを１８％含むか、（ｉｉ）コレステロールを１０％含み、β−シトステロールを１８％含むか、または（ｉｉｉ）コレステロールを１０％含み、β−シトステロールを２８％含み得る。
他の実施形態では、本開示は、１つ以上の免疫細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子を提供し、ＬＮＰは、イオン化可能な脂質として化合物Ｉ−１８２を含み、リン脂質としてＤＳＰＣを含み、構造脂質としてコレステロールまたはコレステロール／β−シトステロール混合物を含み、ＰＥＧ脂質として化合物４２８を含む。こうした化合物Ｉ−１８２含有組成物の様々な実施形態では、イオン化可能な脂質：リン脂質：構造脂質：ＰＥＧ脂質の比は、例えば、下記の比であり得る：（ｉ）５０：１０：３８：２、（ｉｉ）５０：２０：２８：２、（ｉｉｉ）４０：２０：３８：２、（ｉｖ）４０：３０：２８：２。構造脂質成分については、一実施形態では、構造脂質は、すべてコレステロールであり、３８％または２８％を構成する。別の実施形態では、構造脂質は、コレステロール／β−シトステロールであり、その総パーセントとして３８％または２８％を構成し、当該混合物は、例えば、（ｉ）コレステロールを２０％含み、β−シトステロールを１８％含むか、（ｉｉ）コレステロールを１０％含み、β−シトステロールを１８％含むか、または（ｉｉｉ）コレステロールを１０％含み、β−シトステロールを２８％含み得る。
他の実施形態では、本開示は、１つ以上の免疫細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子を提供し、ＬＮＰは、イオン化可能な脂質として化合物Ｉ−３２１を含み、リン脂質としてＤＳＰＣを含み、構造脂質としてコレステロールまたはコレステロール／β−シトステロール混合物を含み、ＰＥＧ脂質として化合物４２８を含む。こうした化合物Ｉ−３２１含有組成物の様々な実施形態では、イオン化可能な脂質：リン脂質：構造脂質：ＰＥＧ脂質の比は、例えば、下記の比であり得る：（ｉ）５０：１０：３８：２、（ｉｉ）５０：２０：２８：２、（ｉｉｉ）４０：２０：３８：２、（ｉｖ）４０：３０：２８：２。構造脂質成分については、一実施形態では、構造脂質は、すべてコレステロールであり、３８％または２８％を構成する。別の実施形態では、構造脂質は、コレステロール／β−シトステロールであり、その総パーセントとして３８％または２８％を構成し、当該混合物は、例えば、（ｉ）コレステロールを２０％含み、β−シトステロールを１８％含むか、（ｉｉ）コレステロールを１０％含み、β−シトステロールを１８％含むか、または（ｉｉｉ）コレステロールを１０％含み、β−シトステロールを２８％含み得る。
他の実施形態では、本開示は、１つ以上の免疫細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子を提供し、ＬＮＰは、イオン化可能な脂質として化合物Ｉ−２９２を含み、リン脂質としてＤＳＰＣを含み、構造脂質としてコレステロールまたはコレステロール／β−シトステロール混合物を含み、ＰＥＧ脂質として化合物４２８を含む。こうした化合物Ｉ−２９２含有組成物の様々な実施形態では、イオン化可能な脂質：リン脂質：構造脂質：ＰＥＧ脂質の比は、例えば、下記の比であり得る：（ｉ）５０：１０：３８：２、（ｉｉ）５０：２０：２８：２、（ｉｉｉ）４０：２０：３８：２、（ｉｖ）４０：３０：２８：２。構造脂質成分については、一実施形態では、構造脂質は、すべてコレステロールであり、３８％または２８％を構成する。別の実施形態では、構造脂質は、コレステロール／β−シトステロールであり、その総パーセントとして３８％または２８％を構成し、当該混合物は、例えば、（ｉ）コレステロールを２０％含み、β−シトステロールを１８％含むか、（ｉｉ）コレステロールを１０％含み、β−シトステロールを１８％含むか、または（ｉｉｉ）コレステロールを１０％含み、β−シトステロールを２８％含み得る。
他の実施形態では、本開示は、１つ以上の免疫細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子を提供し、ＬＮＰは、イオン化可能な脂質として化合物Ｉ−３２６を含み、リン脂質としてＤＳＰＣを含み、構造脂質としてコレステロールまたはコレステロール／β−シトステロール混合物を含み、ＰＥＧ脂質として化合物４２８を含む。こうした化合物Ｉ−３２６含有組成物の様々な実施形態では、イオン化可能な脂質：リン脂質：構造脂質：ＰＥＧ脂質の比は、例えば、下記の比であり得る：（ｉ）５０：１０：３８：２、（ｉｉ）５０：２０：２８：２、（ｉｉｉ）４０：２０：３８：２、（ｉｖ）４０：３０：２８：２。構造脂質成分については、一実施形態では、構造脂質は、すべてコレステロールであり、３８％または２８％を構成する。別の実施形態では、構造脂質は、コレステロール／β−シトステロールであり、その総パーセントとして３８％または２８％を構成し、当該混合物は、例えば、（ｉ）コレステロールを２０％含み、β−シトステロールを１８％含むか、（ｉｉ）コレステロールを１０％含み、β−シトステロールを１８％含むか、または（ｉｉｉ）コレステロールを１０％含み、β−シトステロールを２８％含み得る。
他の実施形態では、本開示は、１つ以上の免疫細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子を提供し、ＬＮＰは、イオン化可能な脂質として化合物Ｉ−３０１を含み、リン脂質としてＤＳＰＣを含み、構造脂質としてコレステロールまたはコレステロール／β−シトステロール混合物を含み、ＰＥＧ脂質として化合物４２８を含む。こうした化合物Ｉ−３０１含有組成物の様々な実施形態では、イオン化可能な脂質：リン脂質：構造脂質：ＰＥＧ脂質の比は、例えば、下記の比であり得る：（ｉ）５０：１０：３８：２、（ｉｉ）５０：２０：２８：２、（ｉｉｉ）４０：２０：３８：２、（ｉｖ）４０：３０：２８：２。構造脂質成分については、一実施形態では、構造脂質は、すべてコレステロールであり、３８％または２８％を構成する。別の実施形態では、構造脂質は、コレステロール／β−シトステロールであり、その総パーセントとして３８％または２８％を構成し、当該混合物は、例えば、（ｉ）コレステロールを２０％含み、β−シトステロールを１８％含むか、（ｉｉ）コレステロールを１０％含み、β−シトステロールを１８％含むか、または（ｉｉｉ）コレステロールを１０％含み、β−シトステロールを２８％含み得る。
他の実施形態では、本開示は、１つ以上の免疫細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子を提供し、ＬＮＰは、イオン化可能な脂質として化合物Ｉ−４８を含み、リン脂質としてＤＳＰＣを含み、構造脂質としてコレステロールまたはコレステロール／β−シトステロール混合物を含み、ＰＥＧ脂質として化合物４２８を含む。こうした化合物Ｉ−４８含有組成物の様々な実施形態では、イオン化可能な脂質：リン脂質：構造脂質：ＰＥＧ脂質の比は、例えば、下記の比であり得る：（ｉ）５０：１０：３８：２、（ｉｉ）５０：２０：２８：２、（ｉｉｉ）４０：２０：３８：２、（ｉｖ）４０：３０：２８：２。構造脂質成分については、一実施形態では、構造脂質は、すべてコレステロールであり、３８％または２８％を構成する。別の実施形態では、構造脂質は、コレステロール／β−シトステロールであり、その総パーセントとして３８％または２８％を構成し、当該混合物は、例えば、（ｉ）コレステロールを２０％含み、β−シトステロールを１８％含むか、（ｉｉ）コレステロールを１０％含み、β−シトステロールを１８％含むか、または（ｉｉｉ）コレステロールを１０％含み、β−シトステロールを２８％含み得る。
他の実施形態では、本開示は、１つ以上の免疫細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子を提供し、ＬＮＰは、イオン化可能な脂質として化合物Ｉ−５０を含み、リン脂質としてＤＳＰＣを含み、構造脂質としてコレステロールまたはコレステロール／β−シトステロール混合物を含み、ＰＥＧ脂質として化合物４２８を含む。こうした化合物Ｉ−５０含有組成物の様々な実施形態では、イオン化可能な脂質：リン脂質：構造脂質：ＰＥＧ脂質の比は、例えば、下記の比であり得る：（ｉ）５０：１０：３８：２、（ｉｉ）５０：２０：２８：２、（ｉｉｉ）４０：２０：３８：２、（ｉｖ）４０：３０：２８：２。構造脂質成分については、一実施形態では、構造脂質は、すべてコレステロールであり、３８％または２８％を構成する。別の実施形態では、構造脂質は、コレステロール／β−シトステロールであり、その総パーセントとして３８％または２８％を構成し、当該混合物は、例えば、（ｉ）コレステロールを２０％含み、β−シトステロールを１８％含むか、（ｉｉ）コレステロールを１０％含み、β−シトステロールを１８％含むか、または（ｉｉｉ）コレステロールを１０％含み、β−シトステロールを２８％含み得る。
他の実施形態では、本開示は、１つ以上の免疫細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子を提供し、ＬＮＰは、イオン化可能な脂質として化合物Ｉ−３２８を含み、リン脂質としてＤＳＰＣを含み、構造脂質としてコレステロールまたはコレステロール／β−シトステロール混合物を含み、ＰＥＧ脂質として化合物４２８を含む。こうした化合物Ｉ−３２８含有組成物の様々な実施形態では、イオン化可能な脂質：リン脂質：構造脂質：ＰＥＧ脂質の比は、例えば、下記の比であり得る：（ｉ）５０：１０：３８：２、（ｉｉ）５０：２０：２８：２、（ｉｉｉ）４０：２０：３８：２、（ｉｖ）４０：３０：２８：２。構造脂質成分については、一実施形態では、構造脂質は、すべてコレステロールであり、３８％または２８％を構成する。別の実施形態では、構造脂質は、コレステロール／β−シトステロールであり、その総パーセントとして３８％または２８％を構成し、当該混合物は、例えば、（ｉ）コレステロールを２０％含み、β−シトステロールを１８％含むか、（ｉｉ）コレステロールを１０％含み、β−シトステロールを１８％含むか、または（ｉｉｉ）コレステロールを１０％含み、β−シトステロールを２８％含み得る。
他の実施形態では、本開示は、１つ以上の免疫細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子を提供し、ＬＮＰは、イオン化可能な脂質として化合物Ｉ−３３０を含み、リン脂質としてＤＳＰＣを含み、構造脂質としてコレステロールまたはコレステロール／β−シトステロール混合物を含み、ＰＥＧ脂質として化合物４２８を含む。こうした化合物Ｉ−３３０含有組成物の様々な実施形態では、イオン化可能な脂質：リン脂質：構造脂質：ＰＥＧ脂質の比は、例えば、下記の比であり得る：（ｉ）５０：１０：３８：２、（ｉｉ）５０：２０：２８：２、（ｉｉｉ）４０：２０：３８：２、（ｉｖ）４０：３０：２８：２。構造脂質成分については、一実施形態では、構造脂質は、すべてコレステロールであり、３８％または２８％を構成する。別の実施形態では、構造脂質は、コレステロール／β−シトステロールであり、その総パーセントとして３８％または２８％を構成し、当該混合物は、例えば、（ｉ）コレステロールを２０％含み、β−シトステロールを１８％含むか、（ｉｉ）コレステロールを１０％含み、β−シトステロールを１８％含むか、または（ｉｉｉ）コレステロールを１０％含み、β−シトステロールを２８％含み得る。
他の実施形態では、本開示は、１つ以上の免疫細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子を提供し、ＬＮＰは、イオン化可能な脂質として化合物Ｉ−１０９を含み、リン脂質としてＤＳＰＣを含み、構造脂質としてコレステロールまたはコレステロール／β−シトステロール混合物を含み、ＰＥＧ脂質として化合物４２８を含む。こうした化合物Ｉ−１０９含有組成物の様々な実施形態では、イオン化可能な脂質：リン脂質：構造脂質：ＰＥＧ脂質の比は、例えば、下記の比であり得る：（ｉ）５０：１０：３８：２、（ｉｉ）５０：２０：２８：２、（ｉｉｉ）４０：２０：３８：２、（ｉｖ）４０：３０：２８：２。構造脂質成分については、一実施形態では、構造脂質は、すべてコレステロールであり、３８％または２８％を構成する。別の実施形態では、構造脂質は、コレステロール／β−シトステロールであり、その総パーセントとして３８％または２８％を構成し、当該混合物は、例えば、（ｉ）コレステロールを２０％含み、β−シトステロールを１８％含むか、（ｉｉ）コレステロールを１０％含み、β−シトステロールを１８％含むか、または（ｉｉｉ）コレステロールを１０％含み、β−シトステロールを２８％含み得る。
他の実施形態では、本開示は、１つ以上の免疫細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子を提供し、ＬＮＰは、イオン化可能な脂質として化合物Ｉ−１１１を含み、リン脂質としてＤＳＰＣを含み、構造脂質としてコレステロールまたはコレステロール／β−シトステロール混合物を含み、ＰＥＧ脂質として化合物４２８を含む。こうした化合物Ｉ−１１１含有組成物の様々な実施形態では、イオン化可能な脂質：リン脂質：構造脂質：ＰＥＧ脂質の比は、例えば、下記の比であり得る：（ｉ）５０：１０：３８：２、（ｉｉ）５０：２０：２８：２、（ｉｉｉ）４０：２０：３８：２、（ｉｖ）４０：３０：２８：２。構造脂質成分については、一実施形態では、構造脂質は、すべてコレステロールであり、３８％または２８％を構成する。別の実施形態では、構造脂質は、コレステロール／β−シトステロールであり、その総パーセントとして３８％または２８％を構成し、当該混合物は、例えば、（ｉ）コレステロールを２０％含み、β−シトステロールを１８％含むか、（ｉｉ）コレステロールを１０％含み、β−シトステロールを１８％含むか、または（ｉｉｉ）コレステロールを１０％含み、β−シトステロールを２８％含み得る。
他の実施形態では、本開示は、１つ以上の免疫細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子を提供し、ＬＮＰは、イオン化可能な脂質として化合物Ｉ−１８１を含み、リン脂質としてＤＳＰＣを含み、構造脂質としてコレステロールまたはコレステロール／β−シトステロール混合物を含み、ＰＥＧ脂質として化合物４２８を含む。こうした化合物Ｉ−１８１含有組成物の様々な実施形態では、イオン化可能な脂質：リン脂質：構造脂質：ＰＥＧ脂質の比は、例えば、下記の比であり得る：（ｉ）５０：１０：３８：２、（ｉｉ）５０：２０：２８：２、（ｉｉｉ）４０：２０：３８：２、（ｉｖ）４０：３０：２８：２。構造脂質成分については、一実施形態では、構造脂質は、すべてコレステロールであり、３８％または２８％を構成する。別の実施形態では、構造脂質は、コレステロール／β−シトステロールであり、その総パーセントとして３８％または２８％を構成し、当該混合物は、例えば、（ｉ）コレステロールを２０％含み、β−シトステロールを１８％含むか、（ｉｉ）コレステロールを１０％含み、β−シトステロールを１８％含むか、または（ｉｉｉ）コレステロールを１０％含み、β−シトステロールを２８％含み得る。
他の実施形態では、本開示は、１つ以上の免疫細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子を提供し、ＬＮＰは、イオン化可能な脂質として化合物Ｘ、化合物Ｙ、化合物Ｉ−３２１、化合物Ｉ−２９２、化合物Ｉ−３２６、化合物Ｉ−１８２、化合物Ｉ−３０１、化合物Ｉ−４８、化合物Ｉ−５０、化合物Ｉ−３２８、化合物Ｉ−３３０、化合物Ｉ−１０９、化合物Ｉ−１１１、または化合物Ｉ−１８１のいずれかを含み、リン脂質としてＤＳＰＣを含み、構造脂質としてコレステロール、コレステロール／β−シトステロール混合物、β−シトステロール／β−シトスタノール混合物、β−シトステロール／カンペステロール混合物、β−シトステロール／β−シトスタノール／カンペステロール混合物、コレステロール／カンペステロール混合物、コレステロール／β−シトスタノール混合物、コレステロール／β−シトスタノール／カンペステロール混合物、またはコレステロール／β−シトステロール／β−シトスタノール／カンペステロール混合物を含み、ＰＥＧ脂質として化合物４２８を含む。こうした組成物の様々な実施形態では、イオン化可能な脂質：リン脂質：構造脂質：ＰＥＧ脂質の比は、例えば、下記の比であり得る：（ｉ）５０：１０：３８：２、（ｉｉ）５０：２０：２８：２、（ｉｉｉ）４０：２０：３８：２、（ｉｖ）４０：３０：２８：２、（ｖ）４０：１８．５：４０：１．５、または（ｖｉ）４５：２０：３３．５：１．５。一実施形態では、構造脂質成分については、ＬＮＰは、例えば、構造脂質を４０％含み得、この４０％の内訳は、（ｉ）１０％がコレステロールであり、３０％がβ−シトステロールであるか、（ｉｉ）１０％がコレステロールであり、３０％がカンペステロールであるか、（ｉｉｉ）１０％がコレステロールであり、３０％がβ−シトスタノールであるか、（ｉｖ）１０％がコレステロールであり、２０％がβ−シトステロールであり、１０％がカンペステロールであるか、（ｖ）１０％がコレステロールであり、２０％がβ−シトステロールであり、１０％がβ−シトスタノールであるか、（ｖｉ）１０％がコレステロールであり、１０％がβ−シトステロールであり、２０％がカンペステロールであるか、（ｖｉｉ）１０％がコレステロールであり、１０％がβ−シトステロールであり、２０％がカンペステロールであるか、（ｖｉｉｉ）１０％がコレステロールであり、２０％がカンペステロールであり、１０％がβ−シトスタノールであるか、（ｉｘ）１０％がコレステロールであり、１０％がカンペステロールであり、２０％がβ−シトスタノールであるか、または（ｘ）１０％がコレステロールであり、１０％がβ−シトステロールであり、１０％がカンペステロールであり、１０％がβ−シトスタノールである。別の実施形態では、構造脂質成分については、ＬＮＰは、例えば、構造脂質を３３．５％含み得、この３３．５％の内訳は、（ｉ）３３．５％がコレステロールであるか、（ｉｉ）１８．５％がコレステロールであり、１５％がβ−シトステロールであるか、（ｉｉｉ）１８．５％がコレステロールであり、１５％がカンペステロールであるか、または（ｉｖ）１８．５％がコレステロールであり、１５％がカンペステロールである。
他の実施形態では、本開示は、１つ以上の免疫細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子を提供し、ＬＮＰは、イオン化可能な脂質として化合物Ｉ−３０１、化合物Ｉ−３２１、または化合物Ｉ−３２６を含み、リン脂質としてＤＳＰＣを含み、構造脂質としてコレステロールまたはコレステロール／β−シトステロール混合物を含み、ＰＥＧ脂質として化合物４２８を含む。一実施形態では、ＬＮＰは、Ｔ細胞（例えば、ＣＤ３＋Ｔ細胞）への送達を増進する。
他の実施形態では、本開示は、１つ以上の免疫細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子を提供し、ＬＮＰは、化合物Ｘ、化合物Ｉ−１０９、化合物Ｉ−１１１、化合物Ｉ−１８１、化合物Ｉ−１８２、または化合物Ｉ−２４４を含み、ＬＮＰは、単球への送達を増進する。ＬＮＰのその他の成分は、本明細書に開示のものから選択することができ、例えば、リン脂質としてＤＳＰＣが選択され、構造脂質としてコレステロールまたはコレステロール／β−シトステロール混合物が選択され、ＰＥＧ脂質として化合物４２８が選択される。
他の実施形態では、本開示は、１つ以上の免疫細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子を提供し、ＬＮＰは、構造脂質としてカンペステロール、β−シトスタノール、またはスチグマステロールを含み、ＬＮＰは、単球への送達を増進する。ＬＮＰのその他の成分は、本明細書に開示のものから選択することができ、例えば、イオン化可能な脂質として化合物Ｘ、化合物Ｉ−１０９、化合物Ｉ−１１１、化合物Ｉ−１８１、化合物Ｉ−１８２、または化合物Ｉ−２４４が選択され、リン脂質としてＤＳＰＣが選択され、ＰＥＧ脂質として化合物４２８が選択される。
他の実施形態では、本開示は、１つ以上の免疫細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子を提供し、ＬＮＰは、ヘルパー脂質（例えば、リン脂質）としてＤＯＰＣ、ＤＭＰＥ、またはＨ−４０９を含み、ＬＮＰは、単球への送達を増進する。ＬＮＰのその他の成分は、本明細書に開示のものから選択することができ、例えば、イオン化可能な脂質として化合物Ｘ、化合物Ｉ−１０９、化合物Ｉ−１１１、化合物Ｉ−１８１、化合物Ｉ−１８２、または化合物Ｉ−２４４が選択され、構造脂質としてコレステロール、コレステロール／β−シトステロール混合物、カンペステロール、β−シトスタノール、またはスチグマステロールが選択され、ＰＥＧ脂質として化合物４２８が選択される。
追加のＬＮＰ成分の例
界面活性剤
ある特定の実施形態では、本開示の脂質ナノ粒子は、１つ以上の界面活性剤を必要に応じて含む。
ある特定の実施形態では、界面活性剤は両親媒性ポリマーである。本明細書で使用されるとき、両親媒性「ポリマー」は、オリゴマーまたはポリマーを含む両親媒性化合物である。例えば、両親媒性ポリマーは、２つ以上のＰＥＧモノマー単位などのオリゴマーフラグメントを含むことができる。例えば、本明細書に記載の両親媒性ポリマーはＰＳ ２０であり得る。
例えば、両親媒性ポリマーはブロックコポリマーである。
例えば、両親媒性ポリマーは凍結保護剤である。
例えば、両親媒性ポリマーは、約３０℃、大気圧の水中で２×１０−４Ｍ未満の臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）を有する。
例えば、両親媒性ポリマーは、約３０℃、大気圧の水中で、約０．１×１０−４Ｍ〜約１．３×１０−４Ｍの範囲の臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）を有する。
例えば、製剤中で、例えば、凍結または凍結乾燥の前で、両親媒性ポリマーの濃度は、そのＣＭＣからＣＭＣの約３０倍の範囲である（例えば、そのＣＭＣの約２５倍、約２０倍、約１５倍、約１０倍、約５倍、または約３倍まで）。
例えば、両親媒性ポリマーは、ポロキサマー（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標））、ポロキサミン（Ｔｅｔｒｏｎｉｃ（登録商標））、ポリオキシエチレングリコールソルビタンアルキルエステル（ポリソルベート）及びポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）から選択される。
例えば、両親媒性ポリマーはポロキサマーである。例えば、両親媒性ポリマーは以下の構造：
Figure 2021512090
 であり、式中、ａは、１０〜１５０の整数であり、ｂは、２０〜６０の整数である。例えば、ａは約１２かつｂは約２０、またはａは約８０かつｂは約２７、またはａは約６４かつｂは約３７、またはａは約１４１かつｂは約４４、またはａは約１０１かつｂは約５６である。
例えば、両親媒性ポリマーはＰ１２４、Ｐ１８８、Ｐ２３７、Ｐ３３８、またはＰ４０７である。
例えば、両親媒性ポリマーはＰ１８８である（例えば、ポロキサマー１８８、ＣＡＳ番号９００３−１１−６、Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ Ｐ１８８としても知られる）。
例えば、両親媒性ポリマーはポロキサミン、例えばテトロニック３０４またはテトロニック９０４である。
例えば、両親媒性ポリマーは、分子量約３ｋＤａ、１０ｋＤａ、または２９ｋＤａのＰＶＰなどのポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）である。
例えば、両親媒性ポリマーはＰＳ２０などのポリソルベートである。
ある特定の実施形態では、界面活性剤は非イオン性界面活性剤である。
いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は界面活性剤を含む。いくつかの実施形態では、界面活性剤は両親媒性ポリマーである。いくつかの実施形態では、界面活性剤は非イオン性界面活性剤である。
例えば、非イオン性界面活性剤は、ポリエチレングリコールエーテル（Ｂｒｉｊ）、ポロキサマー、ポリソルベート、ソルビタン、及びそれらの誘導体からなる群から選択される。
例えば、ポリエチレングリコールエーテルは、式（ＶＩＩＩ）：
Figure 2021512090
 の化合物、またはその塩もしくは異性体であり、式中：
ｔは１〜１００の整数であり；
Ｒ１ＢＲＩＪは、独立して、Ｃ１０−４０アルキル、Ｃ１０−４０アルケニル、またはＣ１０−４０アルキニルであり；必要に応じて、Ｒ５ＰＥＧの１つ以上のメチレン基は、Ｃ３−１０カルボシクリレン、４〜１０員のヘテロシクリレン、Ｃ６−１０アリーレン、４〜１０員のヘテロアリーレン、−Ｎ（ＲＮ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｏ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＯＳ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｏ−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、または−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏ−によって独立して置き換えられ；
ＲＮの各々の例は、独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、または窒素保護基である。
ある実施形態では、Ｒ１ＢＲＩＪは、Ｃ１８アルキルである。例えば、ポリエチレングリコールエーテルは、式（ＶＩＩＩ−ａ）：
Figure 2021512090
 の化合物またはその塩もしくは異性体である。
いくつかの実施形態では、Ｒ１ＢＲＩＪは、Ｃ１８アルケニルである。例えば、ポリエチレングリコールエーテルは、式（ＶＩＩＩ−ｂ）：
Figure 2021512090
 の化合物またはその塩もしくは異性体である。
いくつかの実施形態では、ポロキサマーは、ポロキサマー１０１、ポロキサマー１０５、ポロキサマー１０８、ポロキサマー１２２、ポロキサマー１２３、ポロキサマー１２４、ポロキサマー１８１、ポロキサマー１８２、ポロキサマー１８３、ポロキサマー１８４、ポロキサマー１８５、ポロキサマー１８８、ポロキサマー２１２、ポロキサマー２１５、ポロキサマー２１７、ポロキサマー２３１、ポロキサマー２３４、ポロキサマー２３５、ポロキサマー２３７、ポロキサマー２３８、ポロキサマー２８２、ポロキサマー２８４、ポロキサマー２８８、ポロキサマー３３１、ポロキサマー３３３、ポロキサマー３３４、ポロキサマー３３５、ポロキサマー３３８、ポロキサマー４０１、ポロキサマー４０２、ポロキサマー４０３、及びポロキサマー４０７からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、界面活性剤は、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）４０、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）６０、またはＴｗｅｅｎ（登録商標）８０である。
いくつかの実施形態では、ソルビタンの誘導体は、Ｓｐａｎ（登録商標）２０、Ｓｐａｎ（登録商標）６０、Ｓｐａｎ（登録商標）６５、Ｓｐａｎ（登録商標）８０、またはＳｐａｎ（登録商標）８５である。
いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子中の非イオン性界面活性剤の濃度は、約０．００００１％ｗ／ｖ〜約１％ｗ／ｖ、例えば約０．００００５％ｗ／ｖ〜約０．５％ｗ／ｖ、または約０．０００１％ｗ／ｖ〜約０．１％ｗ／ｖの範囲である。
いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子中の非イオン性界面活性剤の濃度は、約０．０００００１ｗｔ％〜約１ｗｔ％、例えば、約０．０００００２ｗｔ％〜約０．８ｗｔ％、または約０．０００００５ｗｔ％〜約０．５ｗｔ％の範囲である。
いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子中のＰＥＧ脂質の濃度は、約０．０１ｍｏｌ％〜約５０ｍｏｌ％、例えば約０．０５ｍｏｌ％〜約２０ｍｏｌ％、約０．０７ｍｏｌ％〜約１０ｍｏｌ％、約０．１ｍｏｌ％〜約８ｍｏｌ％、約０．２ｍｏｌ％〜約５ｍｏｌ％、または約０．２５ｍｏｌ％〜約３ｍｏｌ％の範囲である。
アジュバント
いくつかの実施形態では、本発明のＬＮＰは、１つ以上のアジュバントを必要に応じて含み、こうしたアジュバントは、例えば、グルコピラノシル脂質アジュバント（ＧＬＡ）、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（例えば、クラスＡまたはクラスＢ）、ポリ（Ｉ：Ｃ）、水酸化アルミニウム、及びＰａｍ３ＣＳＫ４である。
他の成分
本発明のＬＮＰには、先行するセクションで説明した成分に加えて、１つ以上の成分を必要に応じて含めることができる。例えば、脂質ナノ粒子は、ビタミン（例えば、ビタミンＡもしくはビタミンＥ）またはステロールなどの１つ以上の小さな疎水性分子を含んでもよい。
脂質ナノ粒子はまた、１つ以上の透過性エンハンサー分子、糖質、ポリマー、表面改変剤、または他の成分を含んでもよい。透過性エンハンサー分子は、例えば、米国特許出願公開第２００５／０２２２０６４号に記載されている分子であってもよい。糖質には、単糖（例えば、グルコース）及び多糖類（例えば、グリコーゲンならびにその誘導体及び類似体）が含まれ得る。
ポリマーは、脂質ナノ粒子をカプセル化または部分的にカプセル化するために含まれるか、及び／または使用されてもよい。ポリマーは、生分解性及び／または生体適合性であり得る。ポリマーは、ポリアミン、ポリエーテル、ポリアミド、ポリエステル、ポリカルバメート、ポリ尿素、ポリカーボネート、ポリスチレン、ポリイミド、ポリスルホン、ポリウレタン、ポリアセチレン、ポリエチレン、ポリエチレンイミン、ポリイソシアネート、ポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリアクリロニトリル、及びポリアリレートから選択され得るが、これらに限定されない。例えば、ポリマーには、ポリ（カプロラクトン）（ＰＣＬ）、エチレン酢酸ビニルポリマー（ＥＶＡ）、ポリ（乳酸）（ＰＬＡ）、ポリ（Ｌ−乳酸）（ＰＬＬＡ）、ポリ（グリコール酸）（ＰＧＡ）、ポリ（乳酸−コ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）、ポリ（Ｌ−乳酸−コ−グリコール酸）（ＰＬＬＧＡ）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）（ＰＤＬＡ）、ポリ（Ｌ−ラクチド）（ＰＬＬＡ）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−カプロラクトン）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−カプロラクトン−コ−グリコリド）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−ＰＥＯ−コ−Ｄ，Ｌ−ラクチド）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−ＰＰＯ−コ−Ｄ，Ｌ−ラクチド）、ポリアルキルシアノアクリレート、ポリウレタン、ポリ−Ｌ−リジン（ＰＬＬ）、ヒドロキシプロピルメタクリレート（ＨＰＭＡ）、ポリエチレングリコール、ポリ−Ｌ−グルタミン酸、ポリ（ヒドロキシ酸）、ポリ無水物、ポリオルトエステル、ポリ（エステルアミド）、ポリアミド、ポリ（エステルエーテル）、ポリカーボネート、ポリエチレン及びポリプロピレンなどのポリアルキレン、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）などのポリアルキレングリコール、ポリアルキレンオキシド（ＰＥＯ）、ポリ（エチレンテレフタレート）などのポリアルキレンテレフタレート、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリビニルエーテル、ポリ（酢酸ビニル）などのポリビニルエステル、ポリ（塩化ビニル）（ＰＶＣ）などのポリビニルハライド、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ポリシロキサン、ポリスチレン、ポリウレタン、アルキルセルロースなどの誘導体化セルロース、ヒドロキシアルキルセルロース、セルロースエーテル、セルロースエステル、ニトロセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ポリ（メチル（メタ）アクリレート）（ＰＭＭＡ）、ポリ（エチル（メタ）アクリレート）、ポリ（ブチル（メタ）アクリレート）、ポリ（イソブチル（メタ）アクリレート）、ポリ（ヘキシル（メタ）アクリレート）、ポリ（イソデシル（メタ）アクリレート）、ポリ（ラウリル（メタ）アクリレート）、ポリ（フェニル（メタ）アクリレート）、ポリ（メチルアクリレート）、ポリ（イソプロピルアクリレート）、ポリ（イソブチルアクリレート）、ポリ（オクタデシルアクリレート）などのアクリル酸のポリマーならびにそれらの共重合体及び混合物、ポリジオキサノン及びその共重合体、ポリヒドロキシアルカノエート、ポリプロピレンフマレート、ポリオキシメチレン、ポロキサマー、ポロキサミン、ポリ（オルト）エステル、ポリ（酪酸）、ポリ（吉草酸）、ポリ（ラクチド−コ−カプロラクトン）、トリメチレンカーボネート、ポリ（Ｎ−アクリロイルモルホリン）（ＰＡｃＭ）、ポリ（２−メチル−２−オキサゾリン）（ＰＭＯＸ）、ポリ（２−エチル−２−オキサゾリン）（ＰＥＯＺ）、ならびにポリグリセロールが含まれ得る。
表面改変剤には、アニオンタンパク質（例えば、ウシ血清アルブミン）、界面活性剤（例えば、ジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミドなどのカチオン性界面活性剤）、糖または糖誘導体（例えば、シクロデキストリン）、核酸、ポリマー（例えば、ヘパリン、ポリエチレングリコール、及びポロキサマー）、粘液溶解剤（例えば、アセチルシステイン、ヨモギ、ブロメライン、パパイン、クレロデンドラム、ブロムヘキシン、カルボシステイン、エプラジノン、メスナ、アンブロキソール、ソブレロール、ドミオドール、レトステイン、ステプロニン、チオプロニン、ゲルゾリン、サイモシンβ４、ドルナーゼアルファ、ネルテネキシン、及びエルドステイン）、ならびにＤＮａｓｅ（例えば、ｒｈＤＮａｓｅ）が含まれ得るが、これらに限定されない。表面改変剤は、ナノ粒子内及び／またはＬＮＰの表面上に配置され得る（例えば、コーティング、吸着、共有結合、または他のプロセスによる）。
脂質ナノ粒子はまた、１つ以上の官能化脂質を含んでもよい。例えば、脂質はアルキン基で官能化され、適切な反応条件下でアジドに曝露されると、環化付加反応を起こし得る。特に、脂質二重層は、膜透過、細胞認識、または画像化を促進するのに有用な１つ以上の基でこのように官能化されてもよい。ＬＮＰの表面はまた、１つ以上の有用な抗体と複合体化させてもよい。標的細胞送達、画像化、及び膜透過に有用な官能基及び複合体は、当該技術分野で周知である。
これらの成分に加えて、脂質ナノ粒子は、医薬組成物に有用な任意の物質を含んでもよい。例えば、脂質ナノ粒子は、１つ以上の溶媒、分散媒、希釈剤、分散助剤、懸濁助剤、造粒助剤、崩壊剤、充填剤、流動促進剤、液体媒体、結合剤、界面活性剤、等張剤、増粘剤または乳化剤、緩衝剤、潤滑剤、油、保護剤、及びその他の種などであるが、これらに限定されない、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤または副成分を含んでもよい。ワックス、バター、着色剤、コーティング剤、香味料、香料などの賦形剤も含まれてもよい。薬学的に許容される賦形剤は、当該技術分野で周知である（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ， ２１ｓｔ Ｅｄｉｔｉｏｎ， Ａ． Ｒ． Ｇｅｎｎａｒｏ；Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ， Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ， Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ， ＭＤ， ２００６を参照されたい）。
希釈剤の例には、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、リン酸カルシウム、リン酸二カルシウム、硫酸カルシウム、リン酸水素カルシウム、リン酸ナトリウムラクトース、スクロース、セルロース、微結晶セルロース、カオリン、マンニトール、ソルビトール、イノシトール、塩化ナトリウム、乾燥デンプン、コーンスターチ、粉砂糖、及び／またはそれらの組み合わせが含まれ得るが、これらに限定されない。造粒剤及び分散剤は、ジャガイモデンプン、コーンスターチ、タピオカデンプン、デンプングリコール酸ナトリウム、粘土、アルギン酸、グアーガム、柑橘パルプ、寒天、ベントナイト、セルロース及び木材製品、天然スポンジ、カチオン交換樹脂、炭酸カルシウム、ケイ酸塩、炭酸ナトリウム、架橋ポリビニルピロリドン）（クロスポビドン）、カルボキシメチルデンプンナトリウム（グリコール酸デンプンナトリウム）、カルボキシメチルセルロース、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム（クロスカルメロース）、メチルセルロース、アルファ化デンプン（デンプン１５００）、微結晶デンプン、水不溶性デンプン、カルボキシメチルセルロースカルシウム、ケイ酸アルミニウムマグネシウム（ＶＥＥＧＵＭ（登録商標））、ラウリル硫酸ナトリウム、第４級アンモニウム化合物、及び／またはそれらの組み合わせからなる非限定的なリストから選択され得る。
界面活性剤及び／または乳化剤には、天然乳化剤（例えば、アカシアゴム、寒天、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、トラガカント、コンドラックス、コレステロール、キサンタン、ペクチン、ゼラチン、卵黄、カゼイン、羊毛脂肪、コレステロール、ワックス、及びレシチン）、コロイド粘土（例えば、ベントナイト［ケイ酸アルミニウム］及びＶＥＥＧＵＭ（登録商標）［ケイ酸マグネシウムアルミニウム］）、長鎖アミノ酸誘導体、高分子量アルコール（例えば、ステアリルアルコール、セチルアルコール、オレイルアルコール、トリアセチンモノステアレート、エチレングリコールジステアレート、グリセリルモノステアレート、及びプロピレングリコールモノステアレート、ポリビニルアルコール）、カルボマー（例えば、カルボキシポリメチレン、ポリアクリル酸、アクリル酸ポリマー、及びカルボキシビニルポリマー）、カラギーナン、セルロース誘導体（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、粉末セルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース）、ソルビタン脂肪酸エステル（例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート［ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０］、ポリオキシエチレンソルビタン［ＴＷＥＥＮ（登録商標）６０］、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート［ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０］、ソルビタンモノパルミテート［ＳＰＡＮ（登録商標）４０］、ソルビタンモノステアレート［ＳＰＡＮ（登録商標）６０］、トリステアリン酸ソルビタン［ＳＰＡＮ（登録商標）６５］、モノオレイン酸グリセリル、モノオレイン酸ソルビタン［ＳＰＡＮ（登録商標）８０］）、ポリオキシエチレンエステル（例えば、ポリオキシエチレンモノステアレート［ＭＹＲＪ（登録商標）４５］、ポリオキシエチレン水素化ヒマシ油、ポリエトキシ化ヒマシ油、ポリオキシメチレンステアレート、及びＳＯＬＵＴＯＬ（登録商標））、スクロース脂肪酸エステル、ポリエチレングリコール脂肪酸エステル（例えば、ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（登録商標））、ポリオキシエチレンエーテル（例えば、ポリオキシエチレンラウリルエーテル［ＢＲＩＪ（登録商標）３０］）、ポリ（ビニルピロリドン）、ジエチレングリコールモノラウレート、オレイン酸トリエタノールアミン、オレイン酸ナトリウム、オレイン酸カリウム、オレイン酸エチル、オレイン酸、ラウリン酸エチル、ラウリル硫酸ナトリウム、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｆ６８、ＰＯＬＯＸＡＭＥＲ（登録商標）１８８、臭化セトリモニウム、塩化セチルピリジニウム、塩化ベンザルコニウム、ドキュセートナトリウム、及び／またはそれらの組み合わせが含まれ得るが、これらに限定されない。
結合剤はデンプン（例えば、コーンスターチ及びデンプンペースト）；ゼラチン；糖（例えば、スクロース、グルコース、デキストロース、デキストリン、糖蜜、ラクトース、ラクチトール、マンニトール）；天然及び合成ゴム（アカシアゴム、アルギン酸ナトリウム、アイリッシュコケの抽出物、パンワールガム、ガッティガム、イサポール殻の粘液、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、微結晶セルロース、酢酸セルロース、ポリ（ビニルピロリドン）、ケイ酸マグネシウムアルミニウム（ＶＥＥＧＵＭ（登録商標））、カラマツアラボガラクタン）；アルギン酸塩；ポリエチレンオキシド；ポリエチレングリコール；無機カルシウム塩；ケイ酸；ポリメタクリレート；ワックス；水；アルコール；及びそれらの組み合わせ、または他の任意の適切な結合剤であり得る。
保存剤の例には、抗酸化剤、キレート剤、抗菌性保存剤、抗真菌性保存剤、アルコール保存剤、酸性保存剤、及び／または他の保存剤が含まれ得るが、これらに限定されない。抗酸化剤の例には、アルファトコフェロール、アスコルビン酸、パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、モノチオグリセロール、メタ重亜硫酸カリウム、プロピオン酸、没食子酸プロピル、アスコルビン酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、及び／または亜硫酸ナトリウムが含まれるが、これらに限定されない。キレート剤の例には、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、クエン酸一水和物、エデト酸二ナトリウム、エデト酸二カリウム、エデト酸、フマル酸、リンゴ酸、リン酸、エデト酸ナトリウム、酒石酸、及び／またはエデト酸三ナトリウムが含まれる。抗菌性保存剤の例には、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、ベンジルアルコール、ブロノポール、セトリミド、塩化セチルピリジニウム、クロルヘキシジン、クロロブタノール、クロロクレゾール、クロロキシレノール、クレゾール、エチルアルコール、グリセリン、ヘキセチジン、イミド尿素、フェノール、フェノキシエタノール、フェニルエチルアルコール、硝酸フェニル水銀、プロピレングリコール、及び／またはチメロサールが含まれるが、これらに限定されない。抗真菌性保存剤の例には、ブチルパラベン、メチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、安息香酸、ヒドロキシ安息香酸、安息香酸カリウム、ソルビン酸カリウム、安息香酸ナトリウム、プロピオン酸ナトリウム、及び／またはソルビン酸が含まれるが、これらに限定されない。アルコール保存剤の例には、エタノール、ポリエチレングリコール、ベンジルアルコール、フェノール、フェノール化合物、ビスフェノール、クロロブタノール、ヒドロキシ安息香酸、及び／またはフェニルエチルアルコールが含まれるが、これらに限定されない。酸性保存剤の例には、ビタミンＡ、ビタミンＣ、ビタミンＥ、ベータカロチン、クエン酸、酢酸、デヒドロアスコルビン酸、アスコルビン酸、ソルビン酸、及び／またはフィチン酸が含まれるが、これらに限定されない。他の保存剤には、トコフェロール、酢酸トコフェロール、デシルオキシムメシレート、セトリミド、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、エチレンジアミン、ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）、ラウリルエーテル硫酸ナトリウム（ＳＬＥＳ）、重亜硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸カリウム、メタ重亜硫酸カリウム、ＧＬＹＤＡＮＴ ＰＬＵＳ（登録商標）、ＰＨＥＮＯＮＩＰ（登録商標）、メチルパラベン、ＧＥＲＭＡＬＬ（登録商標）１１５、ＧＥＲＭＡＢＥＮ（登録商標）ＩＩ、ＮＥＯＬＯＮＥ（商標）、ＫＡＴＨＯＮ（商標）、及び／またはＥＵＸＹＬ（登録商標）が含まれるが、これらに限定されない。
緩衝剤の例には、クエン酸緩衝液、酢酸緩衝液、リン酸緩衝液、塩化アンモニウム、炭酸カルシウム、塩化カルシウム、クエン酸カルシウム、グルビオン酸カルシウム、グルセプト酸カルシウム、グルコン酸カルシウム、ｄ−グルコン酸、グリセロリン酸カルシウム、乳酸カルシウム、ラクトビオン酸カルシウム、プロパン酸、レブリン酸カルシウム、ペンタン酸、二塩基性リン酸カルシウム、リン酸、三塩基性リン酸カルシウム、水酸化リン酸カルシウム、酢酸カリウム、塩化カリウム、グルコン酸カリウム、カリウム混合物、二塩基性リン酸カリウム、一塩基性リン酸カリウム、リン酸カリウム混合物、酢酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、二塩基性リン酸ナトリウム、一塩基性リン酸ナトリウム、リン酸ナトリウム混合物、トロメタミン、アミノスルホン酸緩衝液（例えば、ＨＥＰＥＳ）、水酸化マグネシウム、水酸化アルミニウム、アルギン酸、パイロジェンフリー水、等張食塩水、リンガー溶液、エチルアルコール、及び／またはそれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。潤滑剤は、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸、シリカ、タルク、麦芽、ベヘン酸グリセリル、硬化植物油、ポリエチレングリコール、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ロイシン、ラウリル硫酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、及びそれらの組み合わせからなる非限定的な群から選択され得る。
油の例には、アーモンド、アプリコットカーネル、アボカド、ババス、ベルガモット、ブラックカレントシード、ルリヂサ、ケイド、カモミール、キャノーラ、キャラウェイ、カルナウバ、ヒマシ、シナモン、ココアバター、ココナッツ、タラ肝、コーヒー、トウモロコシ、綿実、エミュー、ユーカリ、月見草、魚、亜麻仁、ゲラニオール、ヒョウタン、グレープシード、ヘーゼルナッツ、ヒソップ、ミリスチン酸イソプロピル、ホホバ、ククイナッツ、ラバンジン、ラベンダー、レモン、リトアキューブバ、マカデミアナッツ、ゼニアオイ、マンゴー種子、メドウフォーム種子、ミンク、ナツメグ、オリーブ、オレンジ、オレンジラフィー、パーム、パームカーネル、ピーチカーネル、ピーナッツ、ケシの実、パンプキンシード、ナタネ、米ぬか、ローズマリー、ベニバナ、サンダルウッド、サスカナ、サボリー、シーバックソーン、ゴマ、シアバター、シリコーン、大豆、ヒマワリ、ティーツリー、アザミ、ツバキ、ベチバー、クルミ、及び小麦胚芽油、ならびにステアリン酸ブチル、カプリル酸トリグリセリド、カプリン酸トリグリセリド、シクロメチコン、ジエチルセバケート、ジメチコン３６０、シメチコン、ミリスチン酸イソプロピル、鉱油、オクチルドデカノール、オレイルアルコール、シリコーンオイル、及び／またはそれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
ＬＮＰ組成物
本明細書に記載の脂質ナノ粒子は、１つ以上の特定の用途または標的用に設計できる。脂質ナノ粒子の要素及びその相対量は、特定の用途もしくは標的に基づいて、及び／または１つ以上の要素の有効性、毒性、費用、使いやすさ、可用性、もしくはその他の特徴に基づいて選択できる。同様に、脂質ナノ粒子の特定の製剤は、例えば、要素の特定の組み合わせの有効性及び毒性に応じて、特定の用途または標的に合わせて選択することができる。脂質ナノ粒子製剤の有効性及び忍容性は、製剤の安定性によって影響を受ける場合がある。
本発明のＬＮＰは、少なくとも１つの免疫細胞送達増強脂質を含む。本開示のＬＮＰは、ＬＮＰの成分として、有効量の免疫細胞送達増強脂質を含み、ＬＮＰは、（ｉ）イオン化可能な脂質、（ｉｉ）コレステロールまたは他の構造脂質、（ｉｉｉ）非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質、（ｉｖ）ＰＥＧ脂質、ならびに（ｖ）ＬＮＰにカプセル化され、及び／またはＬＮＰと結合した薬剤（例えば、核酸分子）、を含み、有効量の免疫細胞送達増強脂質は、免疫細胞送達増強脂質を含まないＬＮＰと比較して免疫細胞（例えば、ヒトまたは霊長類の免疫細胞）への薬剤の送達を増進する。
様々な成分の要素は、特定の分率（例えば、モル百分率）で提供され得る。
例えば、前述の態様または関連する態様のいずれかでは、本開示のＬＮＰは、構造脂質またはその塩を含む。いくつかの態様では、構造脂質は、コレステロールまたはその塩である。さらなる態様では、コレステロールのｍｏｌ％は、ＬＮＰに存在するフィトステロールのｍｏｌ％の約１％〜５０％である。他の態様では、コレステロールのｍｏｌ％は、ＬＮＰに存在するフィトステロールのｍｏｌ％の約１０％〜４０％である。いくつかの態様では、コレステロールのｍｏｌ％は、ＬＮＰに存在するフィトステロールのｍｏｌ％の約２０％〜３０％である。さらなる態様では、コレステロールのｍｏｌ％は、ＬＮＰに存在するフィトステロールのｍｏｌ％の約３０％である。
前述の態様または関連する態様のいずれかでは、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約３０ｍｏｌ％〜約６０ｍｏｌ％含み、リン脂質を約０ｍｏｌ％〜約３０ｍｏｌ％含み、ステロールを約１８．５ｍｏｌ％〜約４８．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％〜約１０ｍｏｌ％含む。
前述の態様または関連する態様のいずれかでは、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約３５ｍｏｌ％〜約５５ｍｏｌ％含み、リン脂質を約５ｍｏｌ％〜約２５ｍｏｌ％含み、ステロールを約３０ｍｏｌ％〜約４０ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％〜約１０ｍｏｌ％含む。
前述の態様または関連する態様のいずれかでは、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約５０ｍｏｌ％含み、リン脂質を約１０ｍｏｌ％含み、ステロールを約３８．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。
ある特定の実施形態では、脂質ナノ粒子のイオン化可能な脂質成分は、イオン化可能な脂質を約３０ｍｏｌ％〜約６０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約０ｍｏｌ％〜約３０ｍｏｌ％含み、１つ以上の構造脂質を必要に応じて含めてフィトステロールを約１８．５ｍｏｌ％〜約４８．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％〜約１０ｍｏｌ％含むが、総ｍｏｌ％が１００％を超えないことが条件である。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子のイオン化可能な脂質成分は、イオン化可能な脂質を約３５ｍｏｌ％〜約５５ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約５ｍｏｌ％〜約２５ｍｏｌ％含み、１つ以上の構造脂質を必要に応じて含めてフィトステロールを約３０ｍｏｌ％〜約４０ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％〜約１０ｍｏｌ％含む。特定の実施形態では、脂質成分は、イオン化可能な脂質を約５０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１０ｍｏｌ％含み、１つ以上の構造脂質を必要に応じて含めてフィトステロールを約３８．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。別の特定の実施形態では、脂質成分は、イオン化可能な脂質を約４０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約２０ｍｏｌ％含み、１つ以上の構造脂質を必要に応じて含めてフィトステロールを約３８．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。いくつかの実施形態では、フィトステロールは、ベータ−シトステロールであり得、非カチオン性ヘルパー脂質は、リン脂質（ＤＯＰＥ、ＤＳＰＣなど）またはリン脂質代用物（オレイン酸など）であり得る。他の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ−ＤＭＧであり得、及び／または構造脂質は、コレステロールであり得る。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約３０ｍｏｌ％〜約６０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約０ｍｏｌ％〜約３０ｍｏｌ％含み、フィトステロールを約１８．５ｍｏｌ％〜約４８．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％〜約１０ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約３０ｍｏｌ％〜約６０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約０ｍｏｌ％〜約３０ｍｏｌ％含み、フィトステロール及び構造脂質を約１８．５ｍｏｌ％〜約４８．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％〜約１０ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約３０ｍｏｌ％〜約６０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約０ｍｏｌ％〜約３０ｍｏｌ％含み、フィトステロール及びコレステロールを約１８．５ｍｏｌ％〜約４８．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％〜約１０ｍｏｌ％含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約３５ｍｏｌ％〜約５５ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約５ｍｏｌ％〜約２５ｍｏｌ％含み、フィトステロールを約３０ｍｏｌ％〜約４０ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％〜約１０ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約３５ｍｏｌ％〜約５５ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約５ｍｏｌ％〜約２５ｍｏｌ％含み、フィトステロール及び構造脂質を約３０ｍｏｌ％〜約４０ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％〜約１０ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約３５ｍｏｌ％〜約５５ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約５ｍｏｌ％〜約２５ｍｏｌ％含み、フィトステロール及びコレステロールを約３０ｍｏｌ％〜約４０ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％〜約１０ｍｏｌ％含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約５０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１０ｍｏｌ％含み、フィトステロールを約３８．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約５０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１０ｍｏｌ％含み、フィトステロール及び構造脂質を約３８．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約５０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１０ｍｏｌ％含み、フィトステロール及びコレステロールを約３８．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約４０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約２０ｍｏｌ％含み、フィトステロールを約３８．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約４０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約２０ｍｏｌ％含み、フィトステロール及び構造脂質を約３８．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約４０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約２０ｍｏｌ％含み、フィトステロール及びコレステロールを約３８．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約４５ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１０ｍｏｌ％含み、フィトステロールを約３８．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約４５ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１０ｍｏｌ％含み、フィトステロール及び構造脂質を約３８．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約４５ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１０ｍｏｌ％含み、フィトステロール及びコレステロールを約３８．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約５５ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約５ｍｏｌ％含み、フィトステロールを約３８．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約５５ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約５ｍｏｌ％含み、フィトステロール及び構造脂質を約３８．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約５５ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約５ｍｏｌ％含み、フィトステロール及びコレステロールを約３８．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約６０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約５ｍｏｌ％含み、フィトステロールを約３３．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約６０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約５ｍｏｌ％含み、フィトステロール及び構造脂質を約３３．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約６０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約５ｍｏｌ％含み、フィトステロール及びコレステロールを約３３．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約４５ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約２０ｍｏｌ％含み、フィトステロールを約３３．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約４５ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約２０ｍｏｌ％含み、フィトステロール及び構造脂質を約３３．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約４５ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約２０ｍｏｌ％含み、フィトステロール及びコレステロールを約３３．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約５０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約２０ｍｏｌ％含み、フィトステロールを約２８．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約５０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約２０ｍｏｌ％含み、フィトステロール及び構造脂質を約２８．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約５０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約２０ｍｏｌ％含み、フィトステロール及びコレステロールを約２８．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約５５ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約２０ｍｏｌ％含み、フィトステロールを約２３．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約５５ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約２０ｍｏｌ％含み、フィトステロール及び構造脂質を約２３．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約５５ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約２０ｍｏｌ％含み、フィトステロール及びコレステロールを約２３．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約６０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約２０ｍｏｌ％含み、フィトステロールを約１８．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約６０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約２０ｍｏｌ％含み、フィトステロール及び構造脂質を約１８．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約６０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約２０ｍｏｌ％含み、フィトステロール及びコレステロールを約１８．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約４０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１５ｍｏｌ％含み、フィトステロールを約４３．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約４０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１５ｍｏｌ％含み、フィトステロール及び構造脂質を約４３．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約４０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１５ｍｏｌ％含み、フィトステロール及びコレステロールを約４３．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約５０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１５ｍｏｌ％含み、フィトステロールを約３３．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約５０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１５ｍｏｌ％含み、フィトステロール及び構造脂質を約３３．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約５０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１５ｍｏｌ％含み、フィトステロール及びコレステロールを約３３．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約５５ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１５ｍｏｌ％含み、フィトステロールを約２８．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約５５ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１５ｍｏｌ％含み、フィトステロール及び構造脂質を約２８．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約５５ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１５ｍｏｌ％含み、フィトステロール及びコレステロールを約２８．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約６０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１５ｍｏｌ％含み、フィトステロールを約２３．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約６０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１５ｍｏｌ％含み、フィトステロール及び構造脂質を約２３．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約６０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１５ｍｏｌ％含み、フィトステロール及びコレステロールを約２３．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約４０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１０ｍｏｌ％含み、フィトステロールを約４８．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約４０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１０ｍｏｌ％含み、フィトステロール及び構造脂質を約４８．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約４０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１０ｍｏｌ％含み、フィトステロール及びコレステロールを約４８．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約４５ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１０ｍｏｌ％含み、フィトステロールを約４３．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約４５ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１０ｍｏｌ％含み、フィトステロール及び構造脂質を約４３．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約４５ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１０ｍｏｌ％含み、フィトステロール及びコレステロールを約４３．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約５５ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１０ｍｏｌ％含み、フィトステロールを約３３．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約５５ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１０ｍｏｌ％含み、フィトステロール及び構造脂質を約３３．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約５５ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１０ｍｏｌ％含み、フィトステロール及びコレステロールを約３３．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約６０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１０ｍｏｌ％含み、フィトステロールを約２８．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約６０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１０ｍｏｌ％含み、フィトステロール及び構造脂質を約２８．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約６０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１０ｍｏｌ％含み、フィトステロール及びコレステロールを約２８．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約４０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約５ｍｏｌ％含み、フィトステロールを約５３．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約４０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約５ｍｏｌ％含み、フィトステロール及び構造脂質を約５３．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約４０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約５ｍｏｌ％含み、フィトステロール及びコレステロールを約５３．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約４５ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約５ｍｏｌ％含み、フィトステロールを約４８．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約４５ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約５ｍｏｌ％含み、フィトステロール及び構造脂質を約４８．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約４５ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約５ｍｏｌ％含み、フィトステロール及びコレステロールを約４８．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約５０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約５ｍｏｌ％含み、フィトステロールを約４３．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約５０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約５ｍｏｌ％含み、フィトステロール及び構造脂質を約４３．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約５０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約５ｍｏｌ％含み、フィトステロール及びコレステロールを約４３．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約４０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約２０ｍｏｌ％含み、フィトステロールを約４０ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約４０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約２０ｍｏｌ％含み、フィトステロール及び構造脂質を約４０ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約４０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約２０ｍｏｌ％含み、フィトステロール及びコレステロールを約４０ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約４５ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約２０ｍｏｌ％含み、フィトステロールを約３５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約４５ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約２０ｍｏｌ％含み、フィトステロール及び構造脂質を約３５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約４５ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約２０ｍｏｌ％含み、フィトステロール及びコレステロールを約３５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約５０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約２０ｍｏｌ％含み、フィトステロールを約３０ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約５０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約２０ｍｏｌ％含み、フィトステロール及び構造脂質を約３０ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約５０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約２０ｍｏｌ％含み、フィトステロール及びコレステロールを約３０ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約５５ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約２０ｍｏｌ％含み、フィトステロールを約２５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約５５ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約２０ｍｏｌ％含み、フィトステロール及び構造脂質を約２５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約５５ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約２０ｍｏｌ％含み、フィトステロール及びコレステロールを約２５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約６０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約２０ｍｏｌ％含み、フィトステロールを約２０ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約６０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約２０ｍｏｌ％含み、フィトステロール及び構造脂質を約２０ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約６０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約２０ｍｏｌ％含み、フィトステロール及びコレステロールを約２０ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約４０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１５ｍｏｌ％含み、フィトステロールを約４５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約４０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１５ｍｏｌ％含み、フィトステロール及び構造脂質を約４５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約４０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１５ｍｏｌ％含み、フィトステロール及びコレステロールを約４５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約４５ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１５ｍｏｌ％含み、フィトステロールを約４０ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約４５ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１５ｍｏｌ％含み、フィトステロール及び構造脂質を約４０ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約４５ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１５ｍｏｌ％含み、フィトステロール及びコレステロールを約４０ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約５０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１５ｍｏｌ％含み、フィトステロールを約３５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約５０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１５ｍｏｌ％含み、フィトステロール及び構造脂質を約３５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約５０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１５ｍｏｌ％含み、フィトステロール及びコレステロールを約３５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約５５ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１５ｍｏｌ％含み、フィトステロールを約３０ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約５５ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１５ｍｏｌ％含み、フィトステロール及び構造脂質を約３０ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約５５ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１５ｍｏｌ％含み、フィトステロール及びコレステロールを約３０ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約６０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１５ｍｏｌ％含み、フィトステロールを約２５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約６０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１５ｍｏｌ％含み、フィトステロール及び構造脂質を約２５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約６０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１５ｍｏｌ％含み、フィトステロール及びコレステロールを約２５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約４０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１０ｍｏｌ％含み、フィトステロールを約５０ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約４０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１０ｍｏｌ％含み、フィトステロール及び構造脂質を約５０ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約４０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１０ｍｏｌ％含み、フィトステロール及びコレステロールを約５０ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約４５ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１０ｍｏｌ％含み、フィトステロールを約４５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約４５ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１０ｍｏｌ％含み、フィトステロール及び構造脂質を約４５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約４５ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１０ｍｏｌ％含み、フィトステロール及びコレステロールを約４５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約５０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約０ｍｏｌ％含み、フィトステロールを約４８．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約５０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約０ｍｏｌ％含み、フィトステロール及び構造脂質を約４８．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約５０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約０ｍｏｌ％含み、フィトステロール及びコレステロールを約４８．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約５０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１０ｍｏｌ％含み、フィトステロールを約４０ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約５０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１０ｍｏｌ％含み、フィトステロール及び構造脂質を約４０ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約５０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１０ｍｏｌ％含み、フィトステロール及びコレステロールを約４０ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約５５ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１０ｍｏｌ％含み、フィトステロールを約３５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約５５ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１０ｍｏｌ％含み、フィトステロール及び構造脂質を約３５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約５５ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１０ｍｏｌ％含み、フィトステロール及びコレステロールを約３５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約６０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１０ｍｏｌ％含み、フィトステロールを約３０ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約６０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１０ｍｏｌ％含み、フィトステロール及び構造脂質を約３０ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を約６０ｍｏｌ％含み、非カチオン性ヘルパー脂質を約１０ｍｏｌ％含み、フィトステロール及びコレステロールを約３０ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％含む。
本明細書の実施形態に関する態様のいくつかでは、本開示のＬＮＰのフィトステロールと構造脂質成分との含有比は、フィトステロール：構造脂質＝約１０：１〜１：１０（フィトステロール：構造脂質（例えば、ベータ−シトステロール：コレステロール）＝約１０：１、約９：１、約８：１、約７：１、約６：１、約５：１、約４：１、約３：１、約２：１、約１：１、約１：２、約１：３、約１：４、約１：５、約１：６、約１：７、約１：８、約１：９、及び約１：１０など）である。
いくつかの実施形態では、ＬＮＰのフィトステロール成分は、フィトステロールと構造脂質（コレステロールなど）との混合物であり、フィトステロール（例えば、ベータ−シトステロール）及び構造脂質（例えば、コレステロール）はそれぞれ、特定のｍｏｌ％で存在する。例えば、いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、フィトステロール（例えば、ベータ−シトステロール）を１５〜４０ｍｏｌ％含む。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、フィトステロール（例えば、ベータ−シトステロール）を約１５ｍｏｌ％、約１６ｍｏｌ％、約１７ｍｏｌ％、約１８ｍｏｌ％、約１９ｍｏｌ％、約２０ｍｏｌ％、約２１ｍｏｌ％、約２２ｍｏｌ％、約２３ｍｏｌ％、約２４ｍｏｌ％、約２５ｍｏｌ％、約２６ｍｏｌ％、約２７ｍｏｌ％、約２８ｍｏｌ％、約２９ｍｏｌ％、約３０ｍｏｌ％、約３１ｍｏｌ％、約３２ｍｏｌ％、約３３ｍｏｌ％、約３４ｍｏｌ％、約３５ｍｏｌ％、約３６ｍｏｌ％、約３７ｍｏｌ％、約３８ｍｏｌ％、約３０ｍｏｌ％、または約４０ｍｏｌ％含み、構造脂質（例えば、コレステロール）を０ｍｏｌ％、１ｍｏｌ％、２ｍｏｌ％、３ｍｏｌ％、４ｍｏｌ％、５ｍｏｌ％、６ｍｏｌ％、７ｍｏｌ％、８ｍｏｌ％、９ｍｏｌ％、１０ｍｏｌ％、１１ｍｏｌ％、１２ｍｏｌ％、１３ｍｏｌ％、１４ｍｏｌ％、１５ｍｏｌ％、１６ｍｏｌ％、１７ｍｏｌ％、１８ｍｏｌ％、１９ｍｏｌ％、２０ｍｏｌ％、２１ｍｏｌ％、２２ｍｏｌ％、２３ｍｏｌ％、２４ｍｏｌ％、または２５ｍｏｌ％含む。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、フィトステロール（例えば、ベータ−シトステロール）を２０ｍｏｌ％超含み、構造脂質（例えば、コレステロール）を２０ｍｏｌ％未満含み、その結果、フィトステロール及び構造脂質の総ｍｏｌ％は、３０〜４０ｍｏｌ％である。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、フィトステロール（例えば、ベータ−シトステロール）を約２０ｍｏｌ％、約２１ｍｏｌ％、約２２ｍｏｌ％、約２３ｍｏｌ％、約２４ｍｏｌ％、約２５ｍｏｌ％、約２６ｍｏｌ％、約２７ｍｏｌ％、約２８ｍｏｌ％、約２９ｍｏｌ％、約３０ｍｏｌ％、約３１ｍｏｌ％、約３２ｍｏｌ％、約３３ｍｏｌ％、約３４ｍｏｌ％、約３５ｍｏｌ％、約３７ｍｏｌ％、約３８ｍｏｌ％、約３９ｍｏｌ％、または約４０ｍｏｌ％含み、構造脂質（例えば、コレステロール）を、それぞれ約１９ｍｏｌ％、約１８ｍｏｌ％、約１７ｍｏｌ％、約１６ｍｏｌ％、約１５ｍｏｌ％、約１４ｍｏｌ％、約１３ｍｏｌ％、約１２ｍｏｌ％、約１１ｍｏｌ％、約１０ｍｏｌ％、約９ｍｏｌ％、約８ｍｏｌ％、約７ｍｏｌ％、約６ｍｏｌ％、約５ｍｏｌ％、約４ｍｏｌ％、約３ｍｏｌ％、約２ｍｏｌ％、約１ｍｏｌ％、または約０ｍｏｌ％含む。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、フィトステロール（例えば、ベータ−シトステロール）を約２８ｍｏｌ％含み、構造脂質（例えば、コレステロール）を約１０ｍｏｌ％含む。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、フィトステロール及び構造脂質（例えば、コレステロール）を総ｍｏｌ％で３８．５％含む。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、フィトステロール（例えば、ベータ−シトステロール）を２８．５ｍｏｌ％含み、構造脂質（例えば、コレステロール）を１０ｍｏｌ％含む。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、フィトステロール（例えば、ベータ−シトステロール）を１８．５ｍｏｌ％含み、構造脂質（例えば、コレステロール）を２０ｍｏｌ％含む。
本開示の脂質ナノ粒子は、１つ以上の特定の用途または標的向けに設計され得る。例えば、本開示の脂質ナノ粒子は、哺乳動物（例えば、ヒト）の体内の特定の免疫細胞（例えば、リンパ球系細胞もしくは骨髄系細胞）、組織、臓器、またはその系もしくは群への核酸分子（ＲＮＡなど）の送達がさらに増進するように必要に応じて設計され得る。脂質ナノ粒子の物理化学的特性は、特定の身体標的に対する選択性を高めるために変更し得る。例えば、粒径は、免疫細胞への取り込みが促進されるように調整され得る。前述のように、脂質ナノ粒子に含められる核酸分子は、免疫細胞への所望の送達に基づいて選択されることもあり得る。例えば、核酸分子は、特定の適応症、状態、疾患、もしくは障害、及び／または特定の細胞、組織、臓器、またはその系もしくは群への送達（例えば、局所的または特異的送達）のために選択され得る。
ある特定の実施形態では、目的ポリペプチドをコードし、細胞内で翻訳されて目的ポリペプチドを生成させることが可能なｍＲＮＡを脂質ナノ粒子は含み得る。他の実施形態では、脂質ナノ粒子は、本明細書に記載の他の型の薬剤を含み得、こうした他の型の薬剤は、他の核酸剤（ＤＮＡ剤及び／またはＲＮＡ剤を含む）（例えば、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、アンチセンス核酸、及び同様のもの）などであり、こうした薬剤については、さらに詳細に後述される。
脂質ナノ粒子における核酸分子の量は、脂質ナノ粒子のサイズ、組成、所望の標的及び／または用途、あるいは他の特性、ならびに治療薬及び／または予防薬の特性に依存し得る。例えば、脂質ナノ粒子で有用なＲＮＡの量は、ＲＮＡのサイズ、配列、及びその他の特性に依存し得る。脂質ナノ粒子における核酸分子及び他の要素（例えば、脂質）の相対量も異なり得る。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子におけるイオン化可能な脂質成分：核酸分子のｗｔ／ｗｔ比は、約５：１〜約６０：１、例えば５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１１：１、１２：１、１３：１、１４：１、１５：１、１６：１、１７：１、１８：１、１９：１、２０：１、２５：１、３０：１、３５：１、４０：１、４５：１、５０：１、及び６０：１であってよい。例えば、イオン化可能な脂質成分：核酸分子のｗｔ／ｗｔ比は、約１０：１〜約４０：１であってもよい。ある特定の実施形態では、ｗｔ／ｗｔ比は約２０：１である。ＬＮＰにおける核酸分子の量は、例えば、吸収分光法（例えば、紫外可視分光法）を使用して測定され得る。
いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、１つ以上のＲＮＡと、１つ以上のイオン化可能な脂質と、を含み、それらの量は、特定のＮ：Ｐ比を提供するように選択され得る。組成物のＮ：Ｐ比は、１つ以上の脂質中の窒素原子対ＲＮＡ中のリン酸基の数のモル比を指す。一般に、低いＮ：Ｐ比が好ましい。１以上のＲＮＡ、脂質、及びそれらの量は、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１２：１、１４：１、１６：１、１８：１、２０：１、２２：１、２４：１、２６：１、２８：１、または３０：１などの約２：１〜約３０：１のＮ：Ｐ比を提供するように選択され得る。ある特定の実施形態では、Ｎ：Ｐ比は約２：１〜約８：１であり得る。他の実施形態では、Ｎ：Ｐ比は約５：１〜約８：１である。例えば、Ｎ：Ｐ比は、約５．０：１、約５．５：１、約５．６７：１、約５．７：１、約５．８：１、約５．９：１、約６．０：１、約６．５：１、または約７．０：１であり得る。例えば、Ｎ：Ｐ比は約５．６７：１であり得る。別の実施形態では、Ｎ：Ｐ比は、約５．８：１であり得る。
いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子を含む製剤は、塩化物塩などの塩をさらに含み得る。
いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子を含む製剤は、二糖類などの糖をさらに含み得る。いくつかの実施形態では、製剤はさらに糖を含むが、塩化物塩などの塩は含まない。
物理的特性
脂質ナノ粒子の特性は、その成分に依存し得る。例えば、構造脂質としてコレステロールを含む脂質ナノ粒子は、異なる構造脂質を含む脂質ナノ粒子とは異なる特性を有し得る。同様に、脂質ナノ粒子の特性は、その成分の絶対量または相対量に依存し得る。例えば、リン脂質のより高いモル分率を含む脂質ナノ粒子は、リン脂質のより低いモル分率を含む脂質ナノ粒子とは異なる特性を有し得る。特性は、脂質ナノ粒子の調製の方法及び条件によっても異なり得る。
脂質ナノ粒子は、様々な方法で特性評価し得る。例えば、脂質ナノ粒子の形態及びサイズ分布を調べるために、顕微鏡法（例えば、透過型電子顕微鏡法または走査型電子顕微鏡法）を使用できる。ゼータ電位の測定には、動的光散乱または電位差測定（例えば、電位差滴定）を使用できる。動的光散乱を利用して、粒径を決定することもできる。Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ Ｎａｎｏ ＺＳ（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｌｔｄ， Ｍａｌｖｅｒｎ， Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒｓｈｉｒｅ， ＵＫ）などの機器を使用して、粒子径、多分散性指数、及びゼータ電位などの脂質ナノ粒子の複数の特性を測定することもできる。
脂質ナノ粒子の平均サイズは、例えば動的光散乱（ＤＬＳ）によって測定される数十ｎｍ〜数百ｎｍであり得る。例えば、平均サイズは、約４０ｎｍ〜約１５０ｎｍ、例えば約４０ｎｍ、４５ｎｍ、５０ｎｍ、５５ｎｍ、６０ｎｍ、６５ｎｍ、７０ｎｍ、７５ｎｍ、８０ｎｍ、８５ｎｍ、９０ｎｍ、９５ｎｍ、１００ｎｍ、１０５ｎｍ、１１０ｎｍ、１１５ｎｍ、１２０ｎｍ、１２５ｎｍ、１３０ｎｍ、１３５ｎｍ、１４０ｎｍ、１４５ｎｍ、または１５０ｎｍであってよい。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子の平均サイズは、約５０ｎｍ〜約１００ｎｍ、約５０ｎｍ〜約９０ｎｍ、約５０ｎｍ〜約８０ｎｍ、約５０ｎｍ〜約７０ｎｍ、約５０ｎｍ〜約６０ｎｍ、約６０ｎｍ〜約１００ｎｍ、約６０ｎｍ〜約９０ｎｍ、約６０ｎｍ〜約８０ｎｍ、約６０ｎｍ〜約７０ｎｍ、約７０ｎｍ〜約１００ｎｍ、約７０ｎｍ〜約９０ｎｍ、約７０ｎｍ〜約８０ｎｍ、約８０ｎｍ〜約１００ｎｍ、約８０ｎｍ〜約９０ｎｍ、または約９０ｎｍ〜約１００ｎｍであり得る。ある特定の実施形態では、脂質ナノ粒子の平均サイズは、約７０ｎｍ〜約１００ｎｍであってもよい。特定の実施形態では、平均サイズは約８０ｎｍであってもよい。他の実施形態では、平均サイズは約１００ｎｍであってもよい。
脂質ナノ粒子は、比較的均一なものであり得る。多分散性指数を使用して、ＬＮＰの均一性、例えば脂質ナノ粒子の粒径分布を示すことができる。本明細書で使用されるとき、「多分散性指数」は、系の粒径分布の均一性を表す比率である。例えば、０．３未満の小さい値は、狭い粒径分布を示す。小さい（例えば、０．３未満）多分散性指数は、一般に狭い粒径分布を示す。脂質ナノ粒子は、約０〜約０．２５、例えば、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１０、０．１１、０．１２、０．１３、０．１４、０．１５、０．１６、０．１７、０．１８、０．１９、０．２０、０．２１、０．２２、０．２３、０．２４、または０．２５などの多分散性指数を有し得る。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子の多分散性指数は約０．１０〜約０．２０であってよい。
脂質ナノ粒子のゼータ電位を使用して、組成物の動電学的電位を示すことができる。本明細書で使用されるとき、「ゼータ電位」は、例えば粒子組成物中の脂質の動電学的電位である。
例えば、ゼータ電位は、脂質ナノ粒子の表面電荷を表し得る。より高い電荷を帯びた種が細胞、組織、及び体内の他の要素と望ましくない相互作用をする可能性があるため、正または負の比較的低い電荷をもつ脂質ナノ粒子が、一般的に望ましい。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子のゼータ電位は約−１０ｍＶ〜約＋２０ｍＶ、約−１０ｍＶ〜約＋１５ｍＶ、約−１０ｍＶ〜約＋１０ｍＶ、約−１０ｍＶ〜約＋５ｍＶ、約−１０ｍＶ〜約０ｍＶ、約−１０ｍＶ〜約−５ｍＶ、約−５ｍＶ〜約＋２０ｍＶ、約−５ｍＶ〜約＋１５ｍＶ、約−５ｍＶ〜約＋１０ｍＶ、約−５ｍＶ〜約＋５ｍＶ、約−５ｍＶ〜約０ｍＶ、約０ｍＶ〜約＋２０ｍＶ、約０ｍＶ〜約＋１５ｍＶ、約０ｍＶ〜約＋１０ｍＶ、約０ｍＶ〜約＋５ｍＶ、約＋５ｍＶ〜約＋２０ｍＶ、約＋５ｍＶ〜約＋１５ｍＶ、または約＋５ｍＶ〜約＋１０ｍＶであり得る。
核酸分子のカプセル化の効率は、提供される初期量と比較して、調製後に脂質ナノ粒子にカプセル化されるか、さもなければ結合する核酸分子の量を表す。カプセル化効率は、望ましくは高い（例えば、１００％に近い）。カプセル化効率は、例えば、脂質ナノ粒子を１つ以上の有機溶媒または界面活性剤で粉砕する前と後の脂質ナノ粒子を含む溶液中の核酸分子の量を比較することにより測定できる。蛍光を使用して、溶液中の遊離した核酸分子（例えば、ＲＮＡ）の量を測定してもよい。本明細書に記載の脂質ナノ粒子の場合、核酸分子のカプセル化効率は少なくとも５０％、例えば５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％であり得る。いくつかの実施形態では、カプセル化効率は少なくとも８０％であってよい。ある特定の実施形態では、カプセル化効率は少なくとも９０％であってよい。
脂質ナノ粒子は、１つ以上のコーティングを必要に応じて含み得る。例えば、脂質ナノ粒子は、コーティングを有するカプセル、フィルム、または錠剤に製剤化され得る。本明細書に記載の組成物を含むカプセル、フィルム、または錠剤は、任意の有用なサイズ、引張強度、硬度、または密度を有し得る。
薬剤の例
送達対象の薬剤
本開示の免疫細胞送達脂質及び当該脂質を含むＬＮＰを使用することで、薬剤との結合（例えば、薬剤のカプセル化）によって、様々な異なる薬剤を免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、骨髄系細胞、マクロファージ／単球）に送達することができる。典型的には、ＬＮＰによって送達される薬剤は核酸であるが、核酸以外の薬剤（小分子、化学療法薬、ペプチド、タンパク質、及び他の生物学的分子など）も本開示に含まれる。送達され得る核酸には、ＤＮＡベースの分子（すなわち、デオキシリボヌクレオチドを含むもの）及びＲＮＡベースの分子（すなわち、リボヌクレオチドを含むもの）が含まれる。さらに、核酸は、当該分子が天然に生じる形態であるか、または当該分子が化学的に修飾された形態（すなわち、修飾ヌクレオチドを１つ以上含むもの）であり得る。
タンパク質発現を増進するための薬剤
一実施形態では、脂質ベースの組成物（例えば、ＬＮＰ）と結合／によってカプセル化される薬剤は、タンパク質発現を増進する（すなわち、増加させる、刺激する、上方制御する）薬剤である。一実施形態では、薬剤は、脂質ベースの組成物が送達される標的免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、骨髄系細胞）におけるタンパク質発現を増加させる。付加的または代替的に、別の実施形態では、薬剤は、脂質ベースの組成物が送達される標的免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、骨髄系細胞）以外の細胞（例えば、バイスタンダー細胞）におけるタンパク質発現を増加させる。タンパク質発現を増進するために使用され得る薬剤の型の例としては、限定されないが、ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９技術、ｓｓＤＮＡ、及びＤＮＡ（例えば、発現ベクター）が挙げられる。
ＤＮＡ剤
一実施形態では、ＬＮＰと結合／によってカプセル化される薬剤は、ＤＮＡ剤である。ＤＮＡ分子は、二本鎖ＤＮＡであるか、一本鎖ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）であるか、または部分的に二本鎖のＤＮＡである分子（すなわち、一部が二本鎖であり、一部が一本鎖である分子）であり得る。場合によっては、ＤＮＡ分子は、三本鎖であるか、または部分的に三本鎖である（すなわち、一部が三本鎖であり、一部が二本鎖である）。ＤＮＡ分子は、環状ＤＮＡ分子または直鎖ＤＮＡ分子であり得る。
ＬＮＰと結合／によってカプセル化されるＤＮＡ剤は、遺伝子を細胞に導入することが可能なＤＮＡ分子であり得、細胞に導入される遺伝子は、例えば、転写物をコードし、発現し得る遺伝子である。例えば、ＤＮＡ剤は、目的タンパク質をコードすることで、ＬＮＰによって免疫細胞に送達されると免疫細胞における目的タンパク質の発現を増加させ得る。いくつかの実施形態では、ＤＮＡ分子は、天然由来のものであり得、例えば、天然源から単離されたものである。他の実施形態では、ＤＮＡ分子は合成分子であり、例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏで生成される合成ＤＮＡ分子である。いくつかの実施形態では、ＤＮＡ分子は、組換え分子である。ＤＮＡ剤の例としては、限定されないが、プラスミド発現ベクター及びウイルス発現ベクターが挙げられる。
本明細書に記載のＤＮＡ剤（例えば、ＤＮＡベクター）は、様々な異なる特徴を有し得る。本明細書に記載のＤＮＡ剤（例えば、ＤＮＡベクター）は、非コードＤＮＡ配列を含み得る。例えば、ＤＮＡ配列は、遺伝子の制御エレメント（例えば、プロモーター、エンハンサー、終止エレメント、ポリアデニル化シグナルエレメント、スプライシングシグナルエレメント、及び同様のもの）を少なくとも１つ含み得る。いくつかの実施形態では、非コードＤＮＡ配列は、イントロンである。いくつかの実施形態では、非コードＤＮＡ配列は、トランスポゾンである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＤＮＡ配列は、転写的に活性な遺伝子に機能可能なように連結された非コードＤＮＡ配列を有し得る。他の実施形態では、本明細書に記載のＤＮＡ配列は、遺伝子に連結されていない非コードＤＮＡ配列を有し得、すなわち、こうした非コードＤＮＡは、ＤＮＡ配列上の遺伝子を制御しない。
ＲＮＡ剤
一実施形態では、ＬＮＰと結合／によってカプセル化される薬剤は、ＲＮＡ剤である。ＲＮＡ分子は、一本鎖ＲＮＡであるか、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）であるか、または部分的に二本鎖のＲＮＡである分子（すなわち、一部が二本鎖であり、一部が一本鎖である分子）であり得る。ＲＮＡ分子は、環状ＲＮＡ分子または直鎖ＲＮＡ分子であり得る。
ＬＮＰと結合／によってカプセル化されるＲＮＡ剤は、遺伝子を細胞に導入することが可能なＲＮＡ剤であり得、細胞に導入される遺伝子は、例えば、目的タンパク質をコードすることで、ＬＮＰによって免疫細胞に送達されると免疫細胞における目的タンパク質の発現を増加させ得る。いくつかの実施形態では、ＲＮＡ分子は、天然由来のものであり得、例えば、天然源から単離されたものである。他の実施形態では、ＲＮＡ分子は合成分子であり、例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏで生成される合成ＲＮＡ分子である。
ＲＮＡ剤の例としては、限定されないが、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）（例えば、目的タンパク質をコードするもの）、修飾ｍＲＮＡ（ｍｍＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ結合部位（複数可）（ｍｉＲ結合部位（複数可））を含むｍＲＮＡ、機能性ＲＮＡエレメントを含む修飾ＲＮＡ、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、アンタゴｍｉｒ、低分子（短鎖）干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）（ショートマー及びダイサー基質ＲＮＡを含む）、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）分子、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、ロックド核酸（ＬＮＡ）、ならびにＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９技術が挙げられ、これらのＲＮＡ剤はそれぞれ、以下のサブセクションにさらに記載される。
メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）
いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書に記載の方法において使用するための少なくとも１つｍＲＮＡを含む脂質組成物（例えば、脂質ナノ粒子）を提供する。
ｍＲＮＡは、天然起源または非天然起源のｍＲＮＡであり得る。ｍＲＮＡは、以下に記載の修飾された核酸塩基、ヌクレオシド、またはヌクレオチドを１つ以上含み得、この場合、ｍＲＮＡは、「修飾ｍＲＮＡ」または「ｍｍＲＮＡ」と称され得る。本明細書に記載の「ヌクレオシド」は、有機塩基（例えば、プリンもしくはピリミジン）またはその誘導体（本明細書では「核酸塩基」とも称される）と共に糖分子（例えば、ペントースもしくはリボース）またはその誘導体を含む化合物として定義される。本明細書に記載の「ヌクレオチド」は、リン酸基を含むヌクレオシドとして定義される。
ｍＲＮＡは、５’非翻訳領域（５’−ＵＴＲ）、３’非翻訳領域（３’−ＵＴＲ）、及び／またはコード領域（例えば、オープンリーディングフレーム）を含み得る。コンストラクトにおいて使用するための５’ＵＴＲの例は、配列番号６０に示される。コンストラクトにおいて使用するための３’ＵＴＲの例は、配列番号６１に示される。コンストラクトにおいて使用するためのｍｉＲ−１２２結合部位及び／またはｍｉＲ−１４２−３ｐ結合部位を含む３’ＵＴＲの例は、配列番号６２に示される。一実施形態では、ｍｉＲ１２２結合部位を含めることによって肝細胞での発現が低減される。ｍＲＮＡは、数十（例えば、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、もしくは１００）の塩基対、数百（例えば、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、もしくは９００）の塩基対、または数千（例えば、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００、６０００、７０００、８０００、９０００、１０、０００）の塩基対を含めて、任意の適切な数の塩基対を含み得る。核酸塩基、ヌクレオシド、またはヌクレオチドの任意の数（例えば、すべて、いくつか、またはゼロ）が、古典的な種の類似体であり得、こうした類似体は、置換されたもの、修飾されたもの、またはその他の様式で非天然起源のものであり得る。ある特定の実施形態では、特定の核酸塩基型のすべてが修飾され得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｍＲＮＡは、５’キャップ構造、鎖終結ヌクレオチド、任意選択のコザック配列（コザックコンセンサス配列としても知られる）、ステムループ、ポリＡ配列、及び／またはポリアデニル化シグナルを含み得る。
５’キャップ構造または５’キャップ種は、リンカーによって連結された２つのヌクレオシド部分を含む化合物であり、天然起源のキャップ、非天然起源のキャップ、もしくはキャップ類似体、またはアンチリバースキャップアナログ（ＡＲＣＡ）から選択され得る。キャップ種は、修飾されたヌクレオシド部分及び／またはリンカー部分を１つ以上含み得る。例えば、天然のｍＲＮＡキャップには、グアニンヌクレオチドと、７位がメチル化されたグアニン（Ｇ）ヌクレオチドと、がそれらの５位で三リン酸結合によって連結されたもの（例えば、ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇ（一般には、ｍ７ＧｐｐｐＧと記載される））が含まれ得る。キャップ種は、アンチリバースキャップアナログでもあり得る。考えられ得るキャップ種のリストには、限定されないが、ｍ７ＧｐｐｐＧ、ｍ７Ｇｐｐｐｍ７Ｇ、ｍ７３’ｄＧｐｐｐＧ、ｍ２７，Ｏ３’ＧｐｐｐＧ、ｍ２７，Ｏ３’ＧｐｐｐｐＧ、ｍ２７，Ｏ２’ＧｐｐｐｐＧ、ｍ７Ｇｐｐｐｍ７Ｇ、ｍ７３’ｄＧｐｐｐＧ、ｍ２７，Ｏ３’ＧｐｐｐＧ、ｍ２７，Ｏ３’ＧｐｐｐｐＧ、及びｍ２７，Ｏ２’ＧｐｐｐｐＧが含まれる。
ｍＲＮＡは、鎖終結ヌクレオシドを代替的または付加的に含み得る。例えば、鎖終結ヌクレオシドには、自体の糖基の２’位及び／または３’位が脱酸素化されたヌクレオシドが含まれ得る。そのような種には、３’−デオキシアデノシン（コルジセピン）、３’−デオキシウリジン、３’−デオキシシトシン、３’−デオキシグアノシン、３’−デオキシチミン、ならびに２’，３’−ジデオキシヌクレオシド（２’，３’−ジデオキシアデノシン、２’，３’−ジデオキシウリジン、２’，３’−ジデオキシシトシン、２’，３’−ジデオキシグアノシン、及び２’，３’−ジデオキシチミンなど）が含まれ得る。いくつかの実施形態では、鎖終結ヌクレオチドをｍＲＮＡ（例えば、その３’末端）に組み込むことでｍＲＮＡが安定化し得る。このことは、例えば、国際特許公開公報第ＷＯ２０１３／１０３６５９号に記載されている。
ｍＲＮＡは、ステムループ（ヒストンステムループなど）を代替的または付加的に含み得る。ステムループは、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、または９つ以上のヌクレオチド塩基対を含み得る。例えば、ステムループは、４つ、５つ、６つ、７つ、または８つのヌクレオチド塩基対を含み得る。ステムループは、ｍＲＮＡの任意の領域に位置し得る。例えば、ステムループは、非翻訳領域（５’非翻訳領域もしくは３’非翻訳領域）、コード領域、またはポリＡ配列もしくは尾部の中、上流、または下流に位置し得る。いくつかの実施形態では、ステムループは、ｍＲＮＡの１つ以上の機能（複数可）（翻訳開始、翻訳効率、及び／または転写終結など）に影響を与え得る。
ｍＲＮＡは、ポリＡ配列及び／またはポリアデニル化シグナルを代替的または付加的に含み得る。ポリＡ配列は、そのすべてまたは大部分がアデニンヌクレオチドまたはその類似体もしくは誘導体から構成され得る。ポリＡ配列は、ｍＲＮＡの３’非翻訳領域に隣接して位置する尾部であり得る。いくつかの実施形態では、ポリＡ配列は、ｍＲＮＡの核外輸送、翻訳、及び／または安定性に影響を与え得る。
ｍＲＮＡは、マイクロＲＮＡ結合部位を代替的または付加的に含み得る。
いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、第１のコード領域及び第２のコード領域を含むバイシストロン性のｍＲＮＡであり、このバイシストロン性のｍＲＮＡは、第１のコード領域と第２のコード領域との間に配列内からの翻訳の開始を可能にする配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列を含む介在配列を有するか、または自己切断ペプチド（２Ａペプチドなど）をコードする介在配列を有する。ＩＲＥＳ配列及び２Ａペプチドは、典型的には、同じベクターからの複数のタンパク質の発現を増進するために使用される。当該技術分野では様々なＩＲＥＳ配列が公知かつ利用可能であり、例えば脳心筋炎ウイルスのＩＲＥＳを含めて、様々なＩＲＥＳ配列が使用され得る。
一実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、自己切断ペプチドをコードする配列を含み得る。自己切断ペプチドには、限定されないが、２Ａペプチドが含まれ得る。当該技術分野では様々な２Ａペプチドが公知かつ利用可能であり、例えば口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）の２Ａペプチド、ウマ鼻炎Ａウイルスの２Ａペプチド、Ｔｈｏｓｅａ ａｓｉｇｎａウイルスの２Ａペプチド、及び豚テシオウイルス−１の２Ａペプチドを含めて、様々な２Ａペプチドが使用され得る。２Ａペプチドは、リボソームスキッピングによって１つの転写物から２つのタンパク質を生成させるためにいくつかのウイルスによって利用されており、この生成過程ではリボソームスキッピングが生じることで、２Ａペプチド配列ではペプチド結合が正常に形成されず、結果的に、１つの翻訳事象から２つの不連続タンパク質が生成する。非限定的な例として、２Ａペプチドは、ＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号６３）というタンパク質配列、そのフラグメントまたはバリアントを有し得る。一実施形態では、２Ａペプチドでは、最後のグリシンと最後のプロリンとの間で切断が生じる。別の非限定的な例として、本開示のポリヌクレオチドは、ＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号６３）というタンパク質配列、そのフラグメントまたはバリアントを有する２Ａペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み得る。２Ａペプチドをコードするポリヌクレオチド配列の例の１つは、ＧＧＡＡＧＣＧＧＡＧＣＴＡＣＴＡＡＣＴＴＣＡＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＧＣＡＧＧＣＴＧＧＡＧＡＣＧＴＧＧＡＧＧＡＧＡＡＣＣＣＴＧＧＡＣＣＴ（配列番号６４）である。例示の一実施形態では、２Ａペプチドは下記の配列：５’−ＴＣＣＧＧＡＣＴＣＡＧＡＴＣＣＧＧＧＧＡＴＣＴＣＡＡＡＡＴＴＧＴＣＧＣＴＣＣＴＧＴＣＡＡＡＣＡＡＡＣＴＣＴＴＡＡＣＴＴＴＧＡＴＴＴＡＣＴＣＡＡＡＣＴＧＧＣＴＧＧＧＧＡＴＧＴＡＧＡＡＡＧＣＡＡＴＣＣＡＧＧＴＣＣＡＣＴＣ−３’（配列番号６５）によってコードされる。２Ａペプチドのポリヌクレオチド配列は、本明細書に記載の方法によって修飾もしくはコドン最適化がなされ、及び／または当該技術分野で知られているものであり得る。
一実施形態では、この配列は、２つ以上の目的ポリペプチドのコード領域を分離するために使用され得る。非限定的な例として、Ｆ２Ａペプチドをコードする配列は、第１のコード領域Ａと第２のコード領域Ｂとの間に存在し得る（Ａ−Ｆ２Ａｐｅｐ−Ｂ）。Ｆ２Ａペプチドが存在すると、Ｆ２Ａペプチド配列の末端に位置するグリシンとプロリンとの間で１つの長鎖タンパク質が切断され（ＮＰＧＰが切断されてＮＰＧ及びＰが生じる）、その結果、個別のタンパク質Ａ（Ｆ２Ａペプチドのアミノ酸が２１個付加されており、末端にはＮＰＧが存在する）及び個別のタンパク質Ｂ（Ｆ２Ａペプチドのアミノ酸（Ｐ）が１つ付加されている）が創出される。同様に、他の２Ａペプチド（Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、及びＥ２Ａ）についても、こうしたペプチドが長鎖タンパク質に存在すると、２Ａペプチド配列の末端に位置するグリシンとプロリンとの間が切断される（ＮＰＧＰが切断されてＮＰＧ及びＰが生じる）。タンパク質Ａとタンパク質Ｂとは、同じまたは異なる目的ペプチドまたは目的ポリペプチドであり得る。特定の実施形態では、タンパク質Ａは、免疫原性細胞死を誘導するポリペプチドであり、タンパク質Ｂは、炎症性及び／または免疫性の応答を刺激し、及び／または免疫応答性を制御する別のポリペプチドである（このことについては、以下にさらに記載される）。
修飾ｍＲＮＡ
いくつかの実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、修飾された核酸塩基、ヌクレオシド、またはヌクレオチド（「修飾ｍＲＮＡ」または「ｍｍＲＮＡ」と呼ばれる）を１つ以上含む。いくつかの実施形態では、修飾ｍＲＮＡは、有用な特性を有し得、こうした特性には、参照の非修飾ｍＲＮＡと比較して、安定性が増進すること、細胞内に保持されること、翻訳が増進すること、及び／または当該ｍＲＮＡが導入される細胞の自然免疫応答が実質的に誘導されないこと、が含まれる。したがって、修飾ｍＲＮＡを使用することで、タンパク質産生の効率が増進し、核酸の細胞内保持が増進し、免疫原性が低減され得る。
いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、異なる修飾核酸塩基、修飾ヌクレオシド、または修飾ヌクレオチドを１つ以上（例えば、１つ、２つ、３つ、または４つ）含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、異なる修飾核酸塩基、修飾ヌクレオシド、または修飾ヌクレオチドを１つ以上（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０個、２０個、３０個、４０個、５０個、６０個、７０個、８０個、９０個、１００個、またはそれを超える数）含む。いくつかの実施形態では、修飾ｍＲＮＡが導入される細胞では、当該ｍＲＮＡの分解が、対応する非修飾ｍＲＮＡと比較して低減され得る。
いくつかの実施形態では、修飾核酸塩基は、修飾ウラシルである。修飾ウラシルを有する核酸塩基及びヌクレオシドの例としては、シュードウリジン（ψ）、ピリジン−４−オンリボヌクレオシド、５−アザ−ウリジン、６−アザ−ウリジン、２−チオ−５−アザ−ウリジン、２−チオ−ウリジン（ｓ２Ｕ）、４−チオ−ウリジン（ｓ４Ｕ）、４−チオ−シュードウリジン、２−チオ−シュードウリジン、５−ヒドロキシ−ウリジン（ｈｏ５Ｕ）、５−アミノアリル−ウリジン、５−ハロ−ウリジン（例えば、５−ヨード−ウリジンまたは５−ブロモ−ウリジン）、３−メチル−ウリジン（ｍ３Ｕ）、５−メトキシ−ウリジン（ｍｏ５Ｕ）、ウリジン５−オキシ酢酸（ｃｍｏ５Ｕ）、ウリジン５−オキシ酢酸メチルエステル（ｍｃｍｏ５Ｕ）、５−カルボキシメチル−ウリジン（ｃｍ５Ｕ）、１−カルボキシメチル−シュードウリジン、５−カルボキシヒドロキシメチル−ウリジン（ｃｈｍ５Ｕ）、５−カルボキシヒドロキシメチル−ウリジンメチルエステル（ｍｃｈｍ５Ｕ）、５−メトキシカルボニルメチル−ウリジン（ｍｃｍ５Ｕ）、５−メトキシカルボニルメチル−２−チオ−ウリジン（ｍｃｍ５ｓ２Ｕ）、５−アミノメチル−２−チオ−ウリジン（ｎｍ５ｓ２Ｕ）、５−メチルアミノメチル−ウリジン（ｍｎｍ５Ｕ）、５−メチルアミノメチル−２−チオ−ウリジン（ｍｎｍ５ｓ２Ｕ）、５−メチルアミノメチル−２−セレノ−ウリジン（ｍｎｍ５ｓｅ２Ｕ）、５−カルバモイルメチル−ウリジン（ｎｃｍ５Ｕ）、５−カルボキシメチルアミノメチル−ウリジン（ｃｍｎｍ５Ｕ）、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオ−ウリジン（ｃｍｎｍ５ｓ２Ｕ）、５−プロピニル−ウリジン、１−プロピニル−シュードウリジン、５−タウリノメチル−ウリジン（τｍ５Ｕ）、１−タウリノメチル−シュードウリジン、５−タウリノメチル−２−チオ−ウリジン（τｍ５ｓ２Ｕ）、１−タウリノメチル−４−チオ−シュードウリジン、５−メチル−ウリジン（ｍ５Ｕ、すなわち、核酸塩基デオキシチミンを有する）、１−メチル−シュードウリジン（ｍ１ψ）、５−メチル−２−チオ−ウリジン（ｍ５ｓ２Ｕ）、１−メチル−４−チオ−シュードウリジン（ｍ１ｓ４ψ）、４−チオ−１−メチル−シュードウリジン、３−メチル−シュードウリジン（ｍ３ψ）、２−チオ−１−メチル−シュードウリジン、１−メチル−１−デアザ−シュードウリジン、２−チオ−１−メチル−１−デアザ−シュードウリジン、ジヒドロウリジン（Ｄ）、ジヒドロシュードウリジン、５，６−ジヒドロウリジン、５−メチル−ジヒドロウリジン（ｍ５Ｄ）、２−チオ−ジヒドロウリジン、２−チオ−ジヒドロシュードウリジン、２−メトキシ−ウリジン、２−メトキシ−４−チオ−ウリジン、４−メトキシ−シュードウリジン、４−メトキシ−２−チオ−シュードウリジン、Ｎ１−メチル−シュードウリジン、３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）ウリジン（ａｃｐ３Ｕ）、１−メチル−３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）シュードウリジン（ａｃｐ３ψ）、５−（イソペンテニルアミノメチル）ウリジン（ｉｎｍ５Ｕ）、５−（イソペンテニルアミノメチル）−２−チオ−ウリジン（ｉｎｍ５ｓ２Ｕ）、α−チオ−ウリジン、２’−Ｏ−メチル−ウリジン（Ｕｍ）、５，２’−Ｏ−ジメチル−ウリジン（ｍ５Ｕｍ）、２’−Ｏ−メチル−シュードウリジン（ψｍ）、２−チオ−２’−Ｏ−メチル−ウリジン（ｓ２Ｕｍ）、５−メトキシカルボニルメチル−２’−Ｏ−メチル−ウリジン（ｍｃｍ５Ｕｍ）、５−カルバモイルメチル−２’−Ｏ−メチル−ウリジン（ｎｃｍ５Ｕｍ）、５−カルボキシメチルアミノメチル−２’−Ｏ−メチル−ウリジン（ｃｍｎｍ５Ｕｍ）、３，２’−Ｏ−ジメチル−ウリジン（ｍ３Ｕｍ）、及び５−（イソペンテニルアミノメチル）−２’−Ｏ−メチル−ウリジン（ｉｎｍ５Ｕｍ）、１−チオ−ウリジン、デオキシチミジン、２’−Ｆ−アラ−ウリジン、２’−Ｆ−ウリジン、２’−ＯＨ−アラ−ウリジン、５−（２−カルボメトキシビニル）ウリジン、ならびに５−［３−（１−Ｅ−プロペニルアミノ）］ウリジンが挙げられる。
いくつかの実施形態では、修飾核酸塩基は、修飾シトシンである。修飾シトシンを有する核酸塩基及びヌクレオシドの例としては、５−アザ−シチジン、６−アザ−シチジン、シュードイソシチジン、３−メチル−シチジン（ｍ３Ｃ）、Ｎ４−アセチル−シチジン（ａｃ４Ｃ）、５−ホルミル−シチジン（ｆ５Ｃ）、Ｎ４−メチル−シチジン（ｍ４Ｃ）、５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）、５−ハロ−シチジン（例えば、５−ヨード−シチジン）、５−ヒドロキシメチル−シチジン（ｈｍ５Ｃ）、１−メチル−シュードイソシチジン、ピロロ−シチジン、ピロロ−シュードイソシチジン、２−チオ−シチジン（ｓ２Ｃ）、２−チオ−５−メチル−シチジン、４−チオ−シュードイソシチジン、４−チオ−１−メチル−シュードイソシチジン、４−チオ−１−メチル−１−デアザ−シュードイソシチジン、１−メチル−１−デアザ−シュードイソシチジン、ゼブラリン、５−アザ−ゼブラリン、５−メチル−ゼブラリン、５−アザ−２−チオ−ゼブラリン、２−チオ−ゼブラリン、２−メトキシ−シチジン、２−メトキシ−５−メチル−シチジン、４−メトキシ−シュードイソシチジン、４−メトキシ−１−メチル−シュードイソシチジン、リシジン（ｋ２Ｃ）、α−チオ−シチジン、２’−Ｏ−メチル−シチジン（Ｃｍ）、５，２’−Ｏ−ジメチル−シチジン（ｍ５Ｃｍ）、Ｎ４−アセチル−２’−Ｏ−メチル−シチジン（ａｃ４Ｃｍ）、Ｎ４，２’−Ｏ−ジメチル−シチジン（ｍ４Ｃｍ）、５−ホルミル−２’−Ｏ−メチル−シチジン（ｆ５Ｃｍ）、Ｎ４，Ｎ４，２’−Ｏ−トリメチル−シチジン（ｍ４２Ｃｍ）、１−チオ−シチジン、２’−Ｆ−アラ−シチジン、２’−Ｆ−シチジン、及び２’−ＯＨ−アラ−シチジンが挙げられる。
いくつかの実施形態では、修飾核酸塩基は、修飾アデニンである。修飾アデニンを有する核酸塩基及びヌクレオシドの例としては、ａ−チオ−アデノシン、２−アミノ−プリン、２，６−ジアミノプリン、２−アミノ−６−ハロ−プリン（例えば、２−アミノ−６−クロロ−プリン）、６−ハロ−プリン（例えば、６−クロロ−プリン）、２−アミノ−６−メチル−プリン、８−アジド−アデノシン、７−デアザ−アデニン、７−デアザ−８−アザ−アデニン、７−デアザ−２−アミノ−プリン、７−デアザ−８−アザ−２−アミノ−プリン、７−デアザ−２，６−ジアミノプリン、７−デアザ−８−アザ−２，６−ジアミノプリン、１−メチル−アデノシン（ｍ１Ａ）、２−メチル−アデニン（ｍ２Ａ）、Ｎ６−メチル−アデノシン（ｍ６Ａ）、２−メチルチオ−Ｎ６−メチル−アデノシン（ｍｓ２ｍ６Ａ）、Ｎ６−イソペンテニル−アデノシン（ｉ６Ａ）、２−メチルチオ−Ｎ６−イソペンテニル−アデノシン（ｍｓ２ｉ６Ａ）、Ｎ６−（シス−ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン（ｉｏ６Ａ）、２−メチルチオ−Ｎ６−（シス−ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン（ｍｓ２ｉｏ６Ａ）、Ｎ６−グリシニルカルバモイル−アデノシン（ｇ６Ａ）、Ｎ６−スレオニルカルバモイル−アデノシン（ｔ６Ａ）、Ｎ６−メチル−Ｎ６−スレオニルカルバモイル−アデノシン（ｍ６ｔ６Ａ）、２−メチルチオ−Ｎ６−スレオニルカルバモイル−アデノシン（ｍｓ２ｇ６Ａ）、Ｎ６，Ｎ６−ジメチル−アデノシン（ｍ６２Ａ）、Ｎ６−ヒドロキシノルバリルカルバモイル−アデノシン（ｈｎ６Ａ）、２−メチルチオ−Ｎ６−ヒドロキシノルバリルカルバモイル−アデノシン（ｍｓ２ｈｎ６Ａ）、Ｎ６−アセチル−アデノシン（ａｃ６Ａ）、７−メチル−アデニン、２−メチルチオ−アデニン、２−メトキシ−アデニン、α−チオ−アデノシン、２’−Ｏ−メチル−アデノシン（Ａｍ）、Ｎ６，２’−Ｏ−ジメチル−アデノシン（ｍ６Ａｍ）、Ｎ６，Ｎ６，２’−Ｏ−トリメチル−アデノシン（ｍ６２Ａｍ）、１，２’−Ｏ−ジメチル−アデノシン（ｍ１Ａｍ）、２’−Ｏ−リボシルアデノシン（ホスフェート）（Ａｒ（ｐ））、２−アミノ−Ｎ６−メチル−プリン、１−チオ−アデノシン、８−アジド−アデノシン、２’−Ｆ−アラ−アデノシン、２’−Ｆ−アデノシン、２’−ＯＨ−アラ−アデノシン、及びＮ６−（１９−アミノ−ペンタオキサノナデシル）−アデノシンが挙げられる。
いくつかの実施形態では、修飾核酸塩基は、修飾グアニンである。修飾グアニンを有する核酸塩基及びヌクレオシドの例としては、ａ−チオ−グアノシン、イノシン（Ｉ）、１−メチル−イノシン（ｍ１Ｉ）、ワイオシン（ｉｍＧ）、メチルワイオシン（ｍｉｍＧ）、４−デメチル−ワイオシン（ｉｍＧ−１４）、イソワイオシン（ｉｍＧ２）、ワイブトシン（ｙＷ）、ペルオキシワイブトシン（ｏ２ｙＷ）、ヒドロキシワイブトシン（ＯｈｙＷ）、修飾途中のヒドロキシワイブトシン（ＯｈｙＷ＊）、７−デアザ−グアノシン、キューオシン（Ｑ）、エポキシキューオシン（ｏＱ）、ガラクトシル−キューオシン（ｇａｌＱ）、マンノシル−キューオシン（ｍａｎＱ）、７−シアノ−７−デアザ−グアノシン（ｐｒｅＱ０）、７−アミノメチル−７−デアザ−グアノシン（ｐｒｅＱ１）、アルケオシン（Ｇ＋）、７−デアザ−８−アザ−グアノシン、６−チオ−グアノシン、６−チオ−７−デアザ−グアノシン、６−チオ−７−デアザ−８−アザ−グアノシン、７−メチル−グアノシン（ｍ７Ｇ）、６−チオ−７−メチル−グアノシン、７−メチル−イノシン、６−メトキシ−グアノシン、１−メチル−グアノシン（ｍ１Ｇ）、Ｎ２−メチル−グアノシン（ｍ２Ｇ）、Ｎ２，Ｎ２−ジメチル−グアノシン（ｍ２２Ｇ）、Ｎ２，７−ジメチル−グアノシン（ｍ２，７Ｇ）、Ｎ２，Ｎ２，７−ジメチル−グアノシン（ｍ２，２，７Ｇ）、８−オキソ−グアノシン、７−メチル−８−オキソ−グアノシン、１−メチル−６−チオ−グアノシン、Ｎ２−メチル−６−チオ−グアノシン、Ｎ２，Ｎ２−ジメチル−６−チオ−グアノシン、α−チオ−グアノシン、２’−Ｏ−メチル−グアノシン（Ｇｍ）、Ｎ２−メチル−２’−Ｏ−メチル−グアノシン（ｍ２Ｇｍ）、Ｎ２，Ｎ２−ジメチル−２’−Ｏ−メチル−グアノシン（ｍ２２Ｇｍ）、１−メチル−２’−Ｏ−メチル−グアノシン（ｍ１Ｇｍ）、Ｎ２，７−ジメチル−２’−Ｏ−メチル−グアノシン（ｍ２，７Ｇｍ）、２’−Ｏ−メチル−イノシン（Ｉｍ）、１，２’−Ｏ−ジメチル−イノシン（ｍ１Ｉｍ）、２’−Ｏ−リボシルグアノシン（ホスフェート）（Ｇｒ（ｐ））、１−チオ−グアノシン、Ｏ６−メチル−グアノシン、２’−Ｆ−アラ−グアノシン、及び２’−Ｆ−グアノシンが挙げられる。
いくつかの実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、前述の修飾核酸塩基を１つ以上組み合わせて含む（例えば、前述の修飾核酸塩基を２つ、３つ、または４つ、組み合わせて含む）。
いくつかの実施形態では、修飾核酸塩基は、シュードウリジン（ψ）、Ｎ１−メチルシュードウリジン（ｍ１ψ）、２−チオウリジン、４’−チオウリジン、５−メチルシトシン、２−チオ−１−メチル−１−デアザ−シュードウリジン、２−チオ−１−メチル−シュードウリジン、２−チオ−５−アザ−ウリジン、２−チオ−ジヒドロシュードウリジン、２−チオ−ジヒドロウリジン、２−チオ−シュードウリジン、４−メトキシ−２−チオ−シュードウリジン、４−メトキシ−シュードウリジン、４−チオ−１−メチル−シュードウリジン、４−チオ−シュードウリジン、５−アザ−ウリジン、ジヒドロシュードウリジン、５−メトキシウリジン、または２’−Ｏ−メチルウリジンである。いくつかの実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、前述の修飾核酸塩基を１つ以上組み合わせて含む（例えば、前述の修飾核酸塩基を２つ、３つ、または４つ、組み合わせて含む）。一実施形態では、修飾核酸塩基は、Ｎ１−メチルシュードウリジン（ｍ１ψ）であり、本開示のｍＲＮＡは、Ｎ１−メチルシュードウリジン（ｍ１ψ）で完全に修飾される。いくつかの実施形態では、Ｎ１−メチルシュードウリジン（ｍ１ψ）は、ｍＲＮＡにおけるウラシルの７５〜１００％を占める。いくつかの実施形態では、Ｎ１−メチルシュードウリジン（ｍ１ψ）は、ｍＲＮＡにおけるウラシルの１００％を占める。
いくつかの実施形態では、修飾核酸塩基は、修飾シトシンである。修飾シトシンを有する核酸塩基及びヌクレオシドの例としては、Ｎ４−アセチル−シチジン（ａｃ４Ｃ）、５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）、５−ハロ−シチジン（例えば、５−ヨード−シチジン）、５−ヒドロキシメチル−シチジン（ｈｍ５Ｃ）、１−メチル−シュードイソシチジン、２−チオ−シチジン（ｓ２Ｃ）、２−チオ−５−メチル−シチジンが挙げられる。いくつかの実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、前述の修飾核酸塩基を１つ以上組み合わせて含む（例えば、前述の修飾核酸塩基を２つ、３つ、または４つ、組み合わせて含む）。
いくつかの実施形態では、修飾核酸塩基は、修飾アデニンである。修飾アデニンを有する核酸塩基及びヌクレオシドの例としては、７−デアザ−アデニン、１−メチル−アデノシン（ｍ１Ａ）、２−メチル−アデニン（ｍ２Ａ）、Ｎ６−メチル−アデノシン（ｍ６Ａ）が挙げられる。いくつかの実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、前述の修飾核酸塩基を１つ以上組み合わせて含む（例えば、前述の修飾核酸塩基を２つ、３つ、または４つ、組み合わせて含む）。
いくつかの実施形態では、修飾核酸塩基は、修飾グアニンである。修飾グアニンを有する核酸塩基及びヌクレオシドの例としては、イノシン（Ｉ）、１−メチル−イノシン（ｍ１Ｉ）、ワイオシン（ｉｍＧ）、メチルワイオシン（ｍｉｍＧ）、７−デアザ−グアノシン、７−シアノ−７−デアザ−グアノシン（ｐｒｅＱ０）、７−アミノメチル−７−デアザ−グアノシン（ｐｒｅＱ１）、７−メチル−グアノシン（ｍ７Ｇ）、１−メチル−グアノシン（ｍ１Ｇ）、８−オキソ−グアノシン、７−メチル−８−オキソ−グアノシンが挙げられる。いくつかの実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、前述の修飾核酸塩基を１つ以上組み合わせて含む（例えば、前述の修飾核酸塩基を２つ、３つ、または４つ、組み合わせて含む）。
いくつかの実施形態では、修飾核酸塩基は、１−メチル−シュードウリジン（ｍ１ψ）、５−メトキシ−ウリジン（ｍｏ５Ｕ）、５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）、シュードウリジン（ψ）、α−チオ−グアノシン、またはα−チオ−アデノシンである。いくつかの実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、前述の修飾核酸塩基を１つ以上組み合わせて含む（例えば、前述の修飾核酸塩基を２つ、３つ、または４つ、組み合わせて含む）。
いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、シュードウリジン（ψ）を含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、シュードウリジン（ψ）及び５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、１−メチル−シュードウリジン（ｍ１ψ）を含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、１−メチル−シュードウリジン（ｍ１ψ）及び５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、２−チオウリジン（ｓ２Ｕ）を含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、２−チオウリジン及び５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、５−メトキシ−ウリジン（ｍｏ５Ｕ）を含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、５−メトキシ−ウリジン（ｍｏ５Ｕ）及び５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、２’−Ｏ−メチルウリジンを含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、２’−Ｏ−メチルウリジン及び５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、Ｎ６−メチル−アデノシン（ｍ６Ａ）を含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、Ｎ６−メチル−アデノシン（ｍ６Ａ）及び５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。
ある特定の実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、特定の修飾について一様に修飾される（すなわち、完全に修飾され、配列全体を通じて修飾される）。例えば、ｍＲＮＡは、Ｎ１−メチルシュードウリジン（ｍ１ψ）または５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）で一様に修飾される可能性があり、このことは、ｍＲＮＡ配列におけるすべてのウリジンまたはすべてのシトシンヌクレオシドがＮ１−メチルシュードウリジン（ｍ１ψ）または５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）で置き換えられることを意味する。同様に、本開示のｍＲＮＡは、配列に存在する任意の型のヌクレオシド残基が修飾残基（前述のものなど）で置き換えられることによって一様に修飾され得る。
いくつかの実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、コード領域（例えば、ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム）に修飾が存在し得る。他の実施形態では、ｍＲＮＡは、コード領域以外の領域に修飾が存在し得る。例えば、いくつかの実施形態では、５’−ＵＴＲ及び／または３’−ＵＴＲが提供され、そのいずれかまたは両方が、１つ以上の異なるヌクレオシド修飾を独立して含み得る。そのような実施形態では、コード領域にもヌクレオシド修飾が存在し得る。
本開示のｍｍＲＮＡに存在し得るヌクレオシド修飾及びその組み合わせの例としては、限定されないが、ＰＣＴ特許出願公開公報ＷＯ２０１２０４５０７５、同ＷＯ２０１４０８１５０７、同ＷＯ２０１４０９３９２４、同ＷＯ２０１４１６４２５３、及び同ＷＯ２０１４１５９８１３に記載のものが挙げられる。
本開示のｍｍＲＮＡは、糖、核酸塩基、及び／またはヌクレオシド間結合に対する修飾の組み合わせを含み得る。こうした組み合わせは、本明細書に記載の任意の修飾を１つ以上含み得る。
修飾ヌクレオシド及び修飾ヌクレオシドの組み合わせの例は、以下の表１７及び表１８に示される。修飾ヌクレオチドのこうした組み合わせは、本開示のｍｍＲＮＡを形成させるために使用され得る。ある特定の実施形態では、修飾ヌクレオシドによって本開示のｍＲＮＡの天然のヌクレオチドが部分的または完全に置き換えられ得る。非限定的な例として、天然のヌクレオチドウリジンは、本明細書に記載の修飾ヌクレオシドで置き換えられ得る。別の非限定的な例では、天然のヌクレオシドウリジン（例えば、天然のウリジンの約０．１％、約１％、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または約９９．９％）は、本明細書に開示の修飾ヌクレオシドのうちの少なくとも１つで部分的に置き換えられ得る。
Figure 2021512090
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Figure 2021512090
本開示によれば、本開示のポリヌクレオチドは、表１７もしくは表１８に記載の修飾の組み合わせを含むか、または表１７もしくは表１８に記載の修飾のうちの１つを含むように合成され得る。
記載される修飾が１つである場合、記載のヌクレオシドまたはヌクレオチドは、修飾されているそのＡヌクレオチド、Ｕヌクレオチド、Ｇヌクレオチド、もしくはＣヌクレオチド、または修飾されているＡヌクレオシド、Ｕヌクレオシド、Ｇヌクレオシド、もしくはＣヌクレオシドの１００パーセントを占める。パーセントが記載される場合、こうしたパーセントは、存在するＡ三リン酸、Ｕ三リン酸、Ｇ三リン酸、またはＣ三リン酸の総量にその特定のＡ核酸塩基三リン酸、Ｕ核酸塩基三リン酸、Ｇ核酸塩基三リン酸、またはＣ核酸塩基三リン酸が占めるパーセントを表す。例えば、２５％ ５−アミノアリル−ＣＴＰ＋７５％ ＣＴＰ／２５％ ５−メトキシ−ＵＴＰ＋７５％ ＵＴＰという組み合わせは、シトシン三リン酸の２５％が５−アミノアリル−ＣＴＰである一方でシトシンの７５％がＣＴＰであり、ウラシルの２５％が５−メトキシＵＴＰである一方でウラシルの７５％がＵＴＰであるポリヌクレオチドを指す。修飾ＵＴＰが記載されない場合、ポリヌクレオチドに見られるヌクレオチドの部位の１００％に天然起源のＡＴＰ、ＵＴＰ、ＧＴＰ、及び／またはＣＴＰが使用されている。この例では、ＧＴＰヌクレオチド及びＡＴＰヌクレオチドはすべて、非修飾のままで存在する。
本開示のｍＲＮＡまたはその領域は、コドンが最適化され得る。コドンの最適化方法は当該技術分野で知られており、下記の目的を含む様々な目的に有用であり得る：宿主生物におけるコドン頻度に合わせて適切なフォールディングを維持すること、ｍＲＮＡの安定性が向上するか、二次構造が低減されるようにＧＣ含量を偏らせること、コドンもしくは塩基が直列に反復して存在することで遺伝子の構築もしくは発現が害され得ることを最小化すること、転写及び翻訳の制御領域をカスタマイズすること、タンパク質輸送配列を挿入もしくは除去すること、コードされるタンパク質における翻訳後修飾部位（例えば、グリコシル化部位）を除去／追加すること、タンパク質ドメインを追加、除去、もしくはシャッフルすること、制限酵素認識部位の挿入もしくは欠失を行うこと、リボソーム結合部位及びｍＲＮＡ分解部位を修飾すること、タンパク質の様々なドメインの適切なフォールディングが可能になるように翻訳速度を調整すること、またはポリヌクレオチド内の問題の二次構造を低減もしくは除去すること。コドンを最適化するツール、アルゴリズム、及びサービスは当該技術分野で知られている。例としては、限定されないが、ＧｅｎｅＡｒｔ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）が提供するサービス、ＤＮＡ２．０（Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ，ＣＡ）、及び／または独自の方法が挙げられる。一実施形態では、最適化アルゴリズムを使用してｍＲＮＡ配列を最適化することで、例えば、哺乳動物細胞における発現が最適化されるか、またはｍＲＮＡの安定性が増進する。
ある特定の実施形態では、本開示は、本明細書に記載のポリヌクレオチド配列のいずれかに対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するポリヌクレオチドを含む。
本開示のｍＲＮＡは、当該技術分野で利用可能な手段によって生成させることができ、こうした手段には、限定されないが、ｉｎ ｖｉｔｒｏの転写（ＩＶＴ）法及び合成法が含まれる。酵素（ＩＶＴ）法、固相法、液相法、組み合わせ合成法、小領域合成法、及びライゲーション法が利用され得る。一実施形態では、ｍＲＮＡは、ＩＶＴ酵素合成法を使用して調製される。ＩＶＴによってポリヌクレオチドを調製する方法は、当該技術分野で知られており、国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１３／３００６２に記載されている。当該文献の内容は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。したがって、本開示は、本明細書に記載のｍＲＮＡのｉｎ ｖｉｔｒｏでの転写に使用され得るポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ、コンストラクト、及びベクター）も含む。
合成の間または合成の後に、非天然の修飾核酸塩基がポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）に導入され得る。ある特定の実施形態では、修飾は、ヌクレオシド間結合、プリン塩基もしくはピリミジン塩基、または糖に対して行われ得る。特定の実施形態では、修飾は、化学合成またはポリメラーゼ酵素を用いてポリヌクレオチド鎖の末端またはポリヌクレオチド鎖の他の任意の場所に導入され得る。修飾核酸及びその合成の例は、ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０５８５１９号に開示されている。修飾ポリヌクレオチドの合成は、Ｖｅｒｍａ ａｎｄ Ｅｃｋｓｔｅｉｎ，Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｖｏｌ．７６，９９−１３４（１９９８）にも記載されている。
異なる機能性部分（標的化剤または送達剤、蛍光標識、液体、ナノ粒子など）とポリヌクレオチドまたはその領域との複合体化には酵素的ライゲーション法または化学的ライゲーション法のいずれも使用され得る。ポリヌクレオチドと修飾ポリヌクレオチドとの複合体については、Ｇｏｏｄｃｈｉｌｄ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｖｏｌ．１（３），１６５−１８７（１９９０）に概説されている。
マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）結合部位
本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））は、制御エレメント（例えば、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）結合部位、転写因子結合部位、構造化ｍＲＮＡ配列及び／またはモチーフ、内因性核酸結合分子の疑似受容体として作用するように改変された人工結合部位、ならびにそれらの組み合わせ）を含み得る。いくつかの実施形態では、そのような制御エレメントを含む核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））は、「センサー配列」を含むと称される。センサー配列の非限定的な例は、米国公開第２０１４／０２００２６１号に記載されており、その内容は参照により全体が本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））は、目的ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含むと共に、１つ以上のｍｉＲＮＡ結合部位（複数可）をさらに含む。ｍｉＲＮＡ結合部位（複数可）を含めるか、または組み込むことで、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））、引いてはそこにコードされるポリペプチドが、天然起源のｍｉＲＮＡの組織特異的及び／または細胞型特異的な発現に基づいて制御される。
ｍｉＲＮＡ（例えば、天然起源のｍｉＲＮＡ）は、核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））に結合し、ポリヌクレオチドの安定性を低下させるか、ポリヌクレオチドの翻訳を阻害することにより、遺伝子発現を下方制御する１９〜２５ヌクレオチドの長さの非コードＲＮＡである。ｍｉＲＮＡ配列は、「シード」領域、すなわち、成熟ｍｉＲＮＡの位置２〜８の領域内の配列を含む。ｍｉＲＮＡシードは、成熟ｍｉＲＮＡの位置２〜８または２〜７を含むことができる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡシードは７ヌクレオチド（例えば、成熟ｍｉＲＮＡのヌクレオチド２〜８）を含むことができ、対応するｍｉＲＮＡ結合部位のシード相補部位は、ｍｉＲＮＡの位置１とは反対のアデノシン（Ａ）が隣接している。いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡシードは６ヌクレオチド（例えば、成熟ｍｉＲＮＡのヌクレオチド２〜７）を含むことができ、対応するｍｉＲＮＡ結合部位のシード相補部位は、ｍｉＲＮＡの位置１とは反対のアデノシン（Ａ）が隣接している。例えば、Ｇｒｉｍｓｏｎ Ａ， Ｆａｒｈ ＫＫ， Ｊｏｈｎｓｔｏｎ ＷＫ， Ｇａｒｒｅｔｔ−Ｅｎｇｅｌｅ Ｐ， Ｌｉｍ ＬＰ， Ｂａｒｔｅｌ ＤＰ；Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ． ２００７ Ｊｕｌ ６；２７（１）：９１−１０５を参照されたい。標的細胞または組織のｍｉＲＮＡプロファイリングを行って、細胞または組織内のｍｉＲＮＡの有無を判断できる。いくつかの実施形態では、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））は、１つ以上のマイクロＲＮＡ結合部位、マイクロＲＮＡ標的配列、マイクロＲＮＡ相補的配列、またはマイクロＲＮＡシード相補的配列を含む。そのような配列は、米国特許公開第２００５／０２６１２１８号及び米国特許公開第２００５／００５９００５号に教示されているものなどの任意の公知のマイクロＲＮＡに対応し得（例えば、そうしたマイクロＲＮＡに相補性を有し得る）、そのそれぞれの内容は参照により全体が本明細書に組み込まれる。
本明細書で使用する場合、「マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡまたはｍｉＲ）結合部位」という用語は、ｍｉＲＮＡと相互作用、結合、または結合するためのｍｉＲＮＡの全てまたは領域に対する十分な相補性を有する、５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲを含む、核酸分子内、例えばＤＮＡ内またはＲＮＡ転写物内の配列を指す。いくつかの実施形態では、目的ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））は、１つ以上のｍｉＲＮＡ結合部位（複数可）をさらに含む。例示的な実施形態では、核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲは、１つ以上のｍｉＲＮＡ結合部位（複数可）を含む。
ｍｉＲＮＡに対して十分な相補性を有するｍｉＲＮＡ結合部位は、核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））のｍｉＲＮＡ媒介調節、例えば核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））のｍｉＲＮＡ媒介翻訳抑制または分解を促進するのに十分な程度の相補性を指す。本開示の例示的な態様において、ｍｉＲＮＡに対して十分な相補性を有するｍｉＲＮＡ結合部位は、核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））のｍｉＲＮＡ媒介分解、例えば、ｍＲＮＡの、ｍｉＲＮＡ誘導ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）媒介切断を促進するのに十分な程度の相補性を指す。ｍｉＲＮＡ結合部位は、例えば、１９〜２５ヌクレオチドｍｉＲＮＡ配列、１９〜２３ヌクレオチドｍｉＲＮＡ配列、または２２ヌクレオチドｍｉＲＮＡ配列に対して相補性を有し得る。ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲＮＡの一部のみ、例えば、天然に存在するｍｉＲＮＡ配列の全長の１、２、３、または４ヌクレオチド未満の部分のみに相補的であり得る。所望の調節がｍＲＮＡ分解であるとき、全部または完全な相補性（例えば、天然に存在するｍｉＲＮＡの長さの全てまたはかなりの部分にわたる全部の相補性または完全な相補性）が好ましい。
いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位には、ｍｉＲＮＡシード配列との相補性（例えば、部分的または完全な相補性）を有する配列が含まれる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位には、ｍｉＲＮＡシード配列と完全な相補性を有する配列が含まれる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位には、ｍｉＲＮＡ配列と相補性（部分的または完全な相補性など）を有する配列が含まれる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位には、ｍｉＲＮＡ配列と完全な相補性を有する配列が含まれる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位はｍｉＲＮＡ配列と完全な相補性を有するが、１、２、または３ヌクレオチドの置換、末端付加、及び／または短縮化がある。
いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、対応するｍｉＲＮＡと同一の長さである。他の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、５’末端、３’末端、またはその両方で、対応するｍｉＲＮＡよりも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２ヌクレオチド（複数可）短い。さらに他の実施形態では、マイクロＲＮＡ結合部位は、５’末端、３’末端、またはその両方で、対応するマイクロＲＮＡよりも２ヌクレオチド短い。対応するｍｉＲＮＡよりも短いｍｉＲＮＡ結合部位は、１つ以上のｍｉＲＮＡ結合部位を取り込んだｍＲＮＡを分解したり、ｍＲＮＡの翻訳を妨げたりすることがなおも可能である。
いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ダイサーを含む活性ＲＩＳＣの一部である対応する成熟ｍｉＲＮＡに結合する。別の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位のＲＩＳＣ内の対応するｍｉＲＮＡへの結合は、ｍｉＲＮＡ結合部位を含むｍＲＮＡを分解するか、またはｍＲＮＡが翻訳されるのを防ぐ。いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位はｍｉＲＮＡと十分な相補性を持っているため、ｍｉＲＮＡを含むＲＩＳＣ複合体はｍｉＲＮＡ結合部位を含む核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））を切断する。他の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は不完全な相補性を有するため、ｍｉＲＮＡを含むＲＩＳＣ複合体は、ｍｉＲＮＡ結合部位を含む核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の不安定性を誘発する。別の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は不完全な相補性を持っているため、ｍｉＲＮＡを含むＲＩＳＣ複合体はｍｉＲＮＡ結合部位を含む核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の転写を抑制する。
いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、対応するｍｉＲＮＡから１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２のミスマッチ（複数可）を有する。
いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、対応するｍｉＲＮＡの少なくとも約１０、少なくとも約１１、少なくとも約１２、少なくとも約１３、少なくとも約１４、少なくとも約１５、少なくとも約１６、少なくとも約１７、少なくとも約１８、少なくとも約１９、少なくとも約２０、または少なくとも約２１の連続したヌクレオチドのそれぞれに相補的な、少なくとも約１０、少なくとも約１１、少なくとも約１２、少なくとも約１３、少なくとも約１４、少なくとも約１５、少なくとも約１６、少なくとも約１７、少なくとも約１８、少なくとも約１９、少なくとも約２０、または少なくとも約２１の連続したヌクレオチドを有する。
１つ以上のｍｉＲＮＡ結合部位を本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））内に改変することにより、問題のｍｉＲＮＡが利用可能であれば、核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））を分解または翻訳の減少の標的とすることができる。これにより、核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の送達時のオフターゲット効果を減らすことができる。例えば、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））が組織または細胞に送達されることを意図していないが、最終的に当該組織または細胞に到達するのであれば、その組織または細胞に豊富なｍｉＲＮＡは、１つ以上のｍｉＲＮＡの結合部位が核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲに入れるよう改変されている場合、目的の遺伝子の発現を阻害し得る。
例えば、核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））にｍｉＲを１つ以上含めることで、リンパ球系細胞以外の細胞型における発現を最小化できることを当業者なら理解するであろう。一実施形態では、ｍｉＲ１２２が使用され得る。別の実施形態では、ｍｉＲ１２６が使用され得る。さらに別の実施形態では、こうしたｍｉＲまたはその組み合わせのコピーが複数使用され得る。
逆に、ｍｉＲＮＡ結合部位は、特定の組織でのタンパク質発現を増加させるために、天然に存在する核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））配列から削除できる。例えば、特定のｍｉＲＮＡの結合部位を核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））から除去して、ｍｉＲＮＡを含む組織または細胞のタンパク質発現を改善することができる。
一実施形態では、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））は、正常及び／またはがん性細胞などであるが、これらに限定されない特定の細胞に対して細胞傷害性または細胞保護性ｍＲＮＡ治療薬の制御が生じるように、５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲに少なくとも１つのｍｉＲＮＡ結合部位を含むことができる。別の実施形態では、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））は、正常及び／またはがん性細胞などであるが、これらに限定されない特定の細胞に対して細胞傷害性または細胞保護性ｍＲＮＡ治療薬の制御が生じるように、５’−ＵＴＲ及び／または３’−ＵＴＲに２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれ以上のｍｉＲＮＡ結合部位を含むことができる。
複数の組織での発現の調節は、１つ以上のｍｉＲＮＡ結合部位（例えば、１つ以上の異なるｍｉＲＮＡ結合部位）の導入または除去によって実現できる。ｍｉＲＮＡ結合部位を除去または挿入するかどうかの決定は、発生及び／または疾患の状態にある組織及び／または細胞におけるｍｉＲＮＡ発現パターン及び／またはそのプロファイリングに基づいて行うことができる。ｍｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ結合部位、ならびにそれらの発現パターン及び生物学における役割の同定が報告されている（例えば、Ｂｏｎａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｃｕｒｒ Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔｓ ２０１０ １１：９４３−９４９；Ａｎａｎｄ ａｎｄ Ｃｈｅｒｅｓｈ Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｈｅｍａｔｏｌ ２０１１ １８：１７１−１７６；Ｃｏｎｔｒｅｒａｓ ａｎｄ Ｒａｏ Ｌｅｕｋｅｍｉａ ２０１２ ２６：４０４−４１３（２０１１ Ｄｅｃ ２０． ｄｏｉ： １０．１０３８／ｌｅｕ．２０１１．３５６）；Ｂａｒｔｅｌ Ｃｅｌｌ ２００９ １３６：２１５−２３３；Ｌａｎｄｇｒａｆ ｅｔ ａｌ， Ｃｅｌｌ， ２００７ １２９：１４０１−１４１４；Ｇｅｎｔｎｅｒ ａｎｄ Ｎａｌｄｉｎｉ， Ｔｉｓｓｕｅ Ａｎｔｉｇｅｎｓ． ２０１２ ８０：３９３−４０３、及びそれらの中の引用；それぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。
ｍｉＲＮＡ及びｍｉＲＮＡ結合部位は、米国公開第２０１４／０２００２６１号、同第２００５／０２６１２１８号、及び同第２００５／００５９００５号に記載された非限定的な例を含む、任意の公知の配列に対応することができ、これらはそれぞれ参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。ｍｉＲＮＡがｍＲＮＡを制御し、それによりタンパク質発現を行うことが知られている組織の例には、肝臓（ｍｉＲ−１２２）、筋肉（ｍｉＲ−１３３、ｍｉＲ−２０６、ｍｉＲ−２０８）、内皮細胞（ｍｉＲ−１７−９２、ｍｉＲ−１２６）、骨髄系細胞（ｍｉＲ−１４２−３ｐ、ｍｉＲ−１４２−５ｐ、ｍｉＲ−１６、ｍｉＲ−２１、ｍｉＲ−２２３、ｍｉＲ−２４、ｍｉＲ−２７）、脂肪組織（ｌｅｔ−７、ｍｉＲ−３０ｃ）、心臓（ｍｉＲ−１ｄ、ｍｉＲ−１４９）、腎臓（ｍｉＲ−１９２、ｍｉＲ−１９４、ｍｉＲ−２０４）、及び肺上皮細胞（ｌｅｔ−７、ｍｉＲ−１３３、ｍｉＲ−１２６）が含まれるが、これらに限定されない。具体的には、ｍｉＲＮＡは、抗原提示細胞（ＡＰＣ）（例えば、樹状細胞及び単球）、単球、単球、Ｂリンパ球、Ｔリンパ球、顆粒球、ナチュラルキラーなどの免疫細胞（造血細胞とも呼ばれる）で差次的に発現することが知られている。免疫細胞特異的ｍｉＲＮＡは、免疫原性、自己免疫、感染に対する免疫反応、炎症、ならびに遺伝子治療及び組織／臓器移植後の望ましくない免疫応答に関与している。免疫細胞固有のｍｉＲＮＡは、造血細胞（免疫細胞）の発生、増殖、分化、及びアポトーシスの多くの側面も制御する。例えば、ｍｉＲ−１４２及びｍｉＲ−１４６は免疫細胞でのみ発現し、特に骨髄樹状細胞で豊富である。ｍｉＲ−１４２結合部位をポリヌクレオチドの３’−ＵＴＲに付加することにより、核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））に対する免疫応答を遮断できることが実証されており、組織及び細胞内でのより安定した遺伝子導入が可能になる。ｍｉＲ−１４２は、抗原提示細胞の外来性核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））を効率的に分解し、形質導入細胞の細胞傷害性除去を抑制する（例えば、Ａｎｎｏｎｉ Ａ ｅｔ ａｌ．， ｂｌｏｏｄ， ２００９， １１４， ５１５２−５１６１；Ｂｒｏｗｎ ＢＤ， ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔ ｍｅｄ． ２００６， １２（５）， ５８５−５９１；Ｂｒｏｗｎ ＢＤ， ｅｔ ａｌ．， ｂｌｏｏｄ， ２００７， １１０（１３）： ４１４４−４１５２、それらのそれぞれは参照により本明細書に組み込まれる）。
抗原媒介性免疫応答とは、外来抗原によって誘発される免疫応答を指し、外来抗原は、生物に侵入すると、抗原提示細胞によって処理され、抗原提示細胞の表面に表示される。Ｔ細胞は提示された抗原を認識し、抗原を発現する細胞の細胞傷害性排除を誘導できる。
本開示の核酸分子の５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲにｍｉＲ−１４２結合部位を導入すると、ｍｉＲ−１４２を介した分解により抗原提示細胞の遺伝子発現を選択的に抑制し、抗原提示細胞（例えば樹状細胞）の抗原提示を制限でき、それにより核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の送達後の抗原媒介性免疫応答を防ぐ。核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））は、細胞傷害性除去を誘発することなく、標的組織または細胞で安定して発現する。
一実施形態では、免疫細胞、抗原提示細胞で発現することが知られているｍｉＲＮＡの結合部位は、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））に入れるよう改変され、ｍｉＲＮＡ媒介ＲＮＡ分解により抗原提示細胞の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の発現を抑制し、抗原媒介性免疫応答を抑制することができる。核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の発現は、免疫細胞特異的なｍｉＲＮＡが発現しない非免疫細胞で維持される。例えば、いくつかの実施形態では、肝臓特異的タンパク質に対する免疫原性反応を防ぐために、ｍｉＲ−１２２結合部位を除去し、ｍｉＲ−１４２（及び／またはｍｉｒＲ−１４６）結合部位を、本開示の核酸分子の５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲへと入れるよう改変することができる。
ＡＰＣ及びマクロファージの選択的分解及び抑制をさらに促進するために、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））は、単独であるいはｍｉＲ−１４２及び／またはｍｉＲ−１４６結合部位と組み合わせて、５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲにさらなる負の制御エレメントを含むことができる。非限定的な例として、さらなる負の制御エレメントは、構成的減衰エレメント（ＣＤＥ）である。
免疫細胞特異的ｍｉＲＮＡには、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ａ−２−３ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ａ−３ｐ、ｈｓａ−７ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｃ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｅ−３ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｅ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｇ−３ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｇ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ−３ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ−５ｐ、ｍｉＲ−１０ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１０ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１１８４、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｆ−１−−３ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｆ−２−−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｆ−５ｐ、ｍｉＲ−１２５ｂ−１−３ｐ、ｍｉＲ−１２５ｂ−２−３ｐ、ｍｉＲ−１２５ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−１２７９、ｍｉＲ−１３０ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１３０ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１３２−３ｐ、ｍｉＲ−１３２−５ｐ、ｍｉＲ−１４２−３ｐ、ｍｉＲ−１４２−５ｐ、ｍｉＲ−１４３−３ｐ、ｍｉＲ−１４３−５ｐ、ｍｉＲ−１４６ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１４６ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１４６ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−１４６ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−１４７ａ、ｍｉＲ−１４７ｂ、ｍｉＲ−１４８ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１４８ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１５０−３ｐ、ｍｉＲ−１５０−５ｐ、ｍｉＲ−１５１ｂ、ｍｉＲ−１５５−３ｐ、ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｍｉＲ−１５ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１５ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１５ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−１５ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−１６−１−３ｐ、ｍｉＲ−１６−２−３ｐ、ｍｉＲ−１６−５ｐ、ｍｉＲ−１７−５ｐ、ｍｉＲ−１８１ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１８１ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１８１ａ−２−３ｐ、ｍｉＲ−１８２−３ｐ、ｍｉＲ−１８２−５ｐ、ｍｉＲ−１９７−３ｐ、ｍｉＲ−１９７−５ｐ、ｍｉＲ−２１−５ｐ、ｍｉＲ−２１−３ｐ、ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｍｉＲ−２１４−５ｐ、ｍｉＲ−２２３−３ｐ、ｍｉＲ−２２３−５ｐ、ｍｉＲ−２２１−３ｐ、ｍｉＲ−２２１−５ｐ、ｍｉＲ−２３ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−２３ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−２４−１−５ｐ、ｍｉＲ−２４−２−５ｐ、ｍｉＲ−２４−３ｐ、ｍｉＲ−２６ａ−１−３ｐ、ｍｉＲ−２６ａ−２−３ｐ、ｍｉＲ−２６ａ−５ｐ、ｍｉＲ−２６ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−２６ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−２７ａ−３ｐ、ｍｉＲ−２７ａ−５ｐ、ｍｉＲ−２７ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−２７ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−２８−３ｐ、ｍｉＲ−２８−５ｐ、ｍｉＲ−２９０９、ｍｉＲ−２９ａ−３ｐ、ｍｉＲ−２９ａ−５ｐ、ｍｉＲ−２９ｂ−１−５ｐ、ｍｉＲ−２９ｂ−２−５ｐ、ｍｉＲ−２９ｃ−３ｐ、ｍｉＲ−２９ｃ−５ｐ、ｍｉＲ−３０ｅ−３ｐ、ｍｉＲ−３０ｅ−５ｐ、ｍｉＲ−３３１−５ｐ、ｍｉＲ−３３９−３ｐ、ｍｉＲ−３３９−５ｐ、ｍｉＲ−３４５−３ｐ、ｍｉＲ−３４５−５ｐ、ｍｉＲ−３４６、ｍｉＲ−３４ａ−３ｐ、ｍｉＲ−３４ａ−５ｐ、ｍｉＲ−３６３−３ｐ、ｍｉＲ−３６３−５ｐ、ｍｉＲ−３７２、ｍｉＲ−３７７−３ｐ、ｍｉＲ−３７７−５ｐ、ｍｉＲ−４９３−３ｐ、ｍｉＲ−４９３−５ｐ、ｍｉＲ−５４２、ｍｉＲ−５４８ｂ−５ｐ、ｍｉＲ５４８ｃ−５ｐ、ｍｉＲ−５４８ｉ、ｍｉＲ−５４８ｊ、ｍｉＲ−５４８ｎ、ｍｉＲ−５７４−３ｐ、ｍｉＲ−５９８、ｍｉＲ−７１８、ｍｉＲ−９３５、ｍｉＲ−９９ａ−３ｐ、ｍｉＲ−９９ａ−５ｐ、ｍｉＲ−９９ｂ−３ｐ、及びｍｉＲ−９９ｂ−５ｐが含まれるが、これらに限定されない。さらに、マイクロアレイハイブリダイゼーション及びミクロトーム分析により免疫細胞で新規ｍｉＲＮＡを同定することができる（例えば、Ｊｉｍａ ＤＤ ｅｔ ａｌ， Ｂｌｏｏｄ， ２０１０， １１６：ｅ１１８−ｅ１２７；Ｖａｚ Ｃ ｅｔ ａｌ．， ＢＭＣ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ， ２０１０， １１，２８８、それぞれの内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
肝臓で発現することが知られているｍｉＲＮＡには、ｍｉＲ−１０７、ｍｉＲ−１２２−３ｐ、ｍｉＲ−１２２−５ｐ、ｍｉＲ−１２２８−３ｐ、ｍｉＲ−１２２８−５ｐ、ｍｉＲ−１２４９、ｍｉＲ−１２９−５ｐ、ｍｉＲ−１３０３、ｍｉＲ−１５１ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１５１ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１５２、ｍｉＲ−１９４−３ｐ、ｍｉＲ−１９４−５ｐ、ｍｉＲ−１９９ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１９９ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１９９ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−２９６−５ｐ、ｍｉＲ−５５７、ｍｉＲ−５８１、ｍｉＲ−９３９−３ｐ、及びｍｉＲ−９３９−５ｐが含まれるが、これらに限定されない。任意の肝臓特異的ｍｉＲＮＡからのｍｉＲＮＡ結合部位を本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））に導入またはそこから除去して、肝臓における核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の発現を調節することができる。肝臓特異的ｍｉＲＮＡ結合部位は、単独で、または本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））中の免疫細胞（例えば、ＡＰＣ）ｍｉＲＮＡ結合部位とさらに組み合わせて改変することができる。一実施形態では、肝細胞によるｍＲＮＡの分解を促進するｍｉＲＮＡ結合部位がｍＲＮＡ分子剤に存在する。
肺で発現することが知られているｍｉＲＮＡには、ｌｅｔ−７ａ−２−３ｐ、ｌｅｔ−７ａ−３ｐ、ｌｅｔ−７ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１２６−３ｐ、ｍｉＲ−１２６−５ｐ、ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｍｉＲ−１２７−５ｐ、ｍｉＲ−１３０ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１３０ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１３０ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−１３０ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−１３３ａ、ｍｉＲ−１３３ｂ、ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−１８ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１８ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１８ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−１８ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−２４−１−５ｐ、ｍｉＲ−２４−２−５ｐ、ｍｉＲ−２４−３ｐ、ｍｉＲ−２９６−３ｐ、ｍｉＲ−２９６−５ｐ、ｍｉＲ−３２−３ｐ、ｍｉＲ−３３７−３ｐ、ｍｉＲ−３３７−５ｐ、ｍｉＲ−３８１−３ｐ、及びｍｉＲ−３８１−５ｐが含まれるが、これらに限定されない。任意の肺特異的ｍｉＲＮＡからのｍｉＲＮＡ結合部位を本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））に導入またはそこから除去して、肺における核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の発現を調節することができる。肺特異的ｍｉＲＮＡ結合部位は、単独で、または本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））中の免疫細胞（例えば、ＡＰＣ）ｍｉＲＮＡ結合部位とさらに組み合わせて改変することができる。
心臓で発現することが知られているｍｉＲＮＡには、ｍｉＲ−１、ｍｉＲ−１３３ａ、ｍｉＲ−１３３ｂ、ｍｉＲ−１４９−３ｐ、ｍｉＲ−１４９−５ｐ、ｍｉＲ−１８６−３ｐ、ｍｉＲ−１８６−５ｐ、ｍｉＲ−２０８ａ、ｍｉＲ−２０８ｂ、ｍｉＲ−２１０、ｍｉＲ−２９６−３ｐ、ｍｉＲ−３２０、ｍｉＲ−４５１ａ、ｍｉＲ−４５１ｂ、ｍｉＲ−４９９ａ−３ｐ、ｍｉＲ−４９９ａ−５ｐ、ｍｉＲ−４９９ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−４９９ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−７４４−３ｐ、ｍｉＲ−７４４−５ｐ、ｍｉＲ−９２ｂ−３ｐ、及びｍｉＲ−９２ｂ−５ｐが含まれるが、これらに限定されない。任意の心臓特異的マイクロＲＮＡからのｍｉＲＮＡ結合部位を本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））に導入またはそこから除去して、心臓における核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の発現を調節することができる。心臓特異的ｍｉＲＮＡ結合部位は、単独で、または本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））中の免疫細胞（例えば、ＡＰＣ）ｍｉＲＮＡ結合部位とさらに組み合わせて改変することができる。
神経系で発現することが知られているｍｉＲＮＡには、ｍｉＲ−１２４−５ｐ、ｍｉＲ−１２５ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１２５ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１２５ｂ−１−３ｐ、ｍｉＲ−１２５ｂ−２−３ｐ、ｍｉＲ−１２５ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−１２７１−３ｐ、ｍｉＲ−１２７１−５ｐ、ｍｉＲ−１２８、ｍｉＲ−１３２−５ｐ、ｍｉＲ−１３５ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１３５ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１３５ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−１３５ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−１３７、ｍｉＲ−１３９−５ｐ、ｍｉＲ−１３９−３ｐ、ｍｉＲ−１４９−３ｐ、ｍｉＲ−１４９−５ｐ、ｍｉＲ−１５３、ｍｉＲ−１８１ｃ−３ｐ、ｍｉＲ−１８１ｃ−５ｐ、ｍｉＲ−１８３−３ｐ、ｍｉＲ−１８３−５ｐ、ｍｉＲ−１９０ａ、ｍｉＲ−１９０ｂ、ｍｉＲ−２１２−３ｐ、ｍｉＲ−２１２−５ｐ、ｍｉＲ−２１９−１−３ｐ、ｍｉＲ−２１９−２−３ｐ、ｍｉＲ−２３ａ−３ｐ、ｍｉＲ−２３ａ−５ｐ、ｍｉＲ−３０ａ−５ｐ、ｍｉＲ−３０ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−３０ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−３０ｃ−１−３ｐ、ｍｉＲ−３０ｃ−２−３ｐ、ｍｉＲ−３０ｃ−５ｐ、ｍｉＲ−３０ｄ−３ｐ、ｍｉＲ−３０ｄ−５ｐ、ｍｉＲ−３２９、ｍｉＲ−３４２−３ｐ、ｍｉＲ−３６６５、ｍｉＲ−３６６６、ｍｉＲ−３８０−３ｐ、ｍｉＲ−３８０−５ｐ、ｍｉＲ−３８３、ｍｉＲ−４１０、ｍｉＲ−４２５−３ｐ、ｍｉＲ−４２５−５ｐ、ｍｉＲ−４５４−３ｐ、ｍｉＲ−４５４−５ｐ、ｍｉＲ−４８３、ｍｉＲ−５１０、ｍｉＲ−５１６ａ−３ｐ、ｍｉＲ−５４８ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−５４８ｃ−５ｐ、ｍｉＲ−５７１、ｍｉＲ−７−１−３ｐ、ｍｉＲ−７−２−３ｐ、ｍｉＲ−７−５ｐ、ｍｉＲ−８０２、ｍｉＲ−９２２、ｍｉＲ−９−３ｐ、及びｍｉＲ−９−５ｐが含まれるが、これらに限定されない。神経系において豊富なｍｉＲＮＡには、ｍｉＲ−１３２−３ｐ、ｍｉＲ−１３２−３ｐ、ｍｉＲ−１４８ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−１４８ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−１５１ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１５１ａ−５ｐ、ｍｉＲ−２１２−３ｐ、ｍｉＲ−２１２−５ｐ、ｍｉＲ−３２０ｂ、ｍｉＲ−３２０ｅ、ｍｉＲ−３２３ａ−３ｐ、ｍｉＲ−３２３ａ−５ｐ、ｍｉＲ−３２４−５ｐ、ｍｉＲ−３２５、ｍｉＲ−３２６、ｍｉＲ−３２８、ｍｉＲ−９２２を含むがこれらに限定されないニューロンに特異的に発現するもの、ならびにｍｉＲ−１２５０、ｍｉＲ−２１９−１−３ｐ、ｍｉＲ−２１９−２−３ｐ、ｍｉＲ−２１９−５ｐ、ｍｉＲ−２３ａ−３ｐ、ｍｉＲ−２３ａ−５ｐ、ｍｉＲ−３０６５−３ｐ、ｍｉＲ−３０６５−５ｐ、ｍｉＲ−３０ｅ−３ｐ、ｍｉＲ−３０ｅ−５ｐ、ｍｉＲ−３２−５ｐ、ｍｉＲ−３３８−５ｐ、及びｍｉＲ−６５７を含むがこれらに限定されないグリア細胞で特異的に発現するものがさらに含まれる。任意のＣＮＳ特異的ｍｉＲＮＡからのｍｉＲＮＡ結合部位を本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））に導入またはそこから除去して、神経系における核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の発現を調節することができる。神経系特異的ｍｉＲＮＡ結合部位は、単独で、または本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））中の免疫細胞（例えば、ＡＰＣ）ｍｉＲＮＡ結合部位とさらに組み合わせて改変することができる。
膵臓で発現することが知られているｍｉＲＮＡには、ｍｉＲ−１０５−３ｐ、ｍｉＲ−１０５−５ｐ、ｍｉＲ−１８４、ｍｉＲ−１９５−３ｐ、ｍｉＲ−１９５−５ｐ、ｍｉＲ−１９６ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１９６ａ−５ｐ、ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｍｉＲ−２１４−５ｐ、ｍｉＲ−２１６ａ−３ｐ、ｍｉＲ−２１６ａ−５ｐ、ｍｉＲ−３０ａ−３ｐ、ｍｉＲ−３３ａ−３ｐ、ｍｉＲ−３３ａ−５ｐ、ｍｉＲ−３７５、ｍｉＲ−７−１−３ｐ、ｍｉＲ−７−２−３ｐ、ｍｉＲ−４９３−３ｐ、ｍｉＲ−４９３−５ｐ、及びｍｉＲ−９４４が含まれるが、これらに限定されない。任意の膵臓特異的ｍｉＲＮＡからのｍｉＲＮＡ結合部位を本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））に導入またはそこから除去して、膵臓における核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の発現を調節することができる。膵臓特異的ｍｉＲＮＡ結合部位は、単独で、または本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））中の免疫細胞（例えば、ＡＰＣ）ｍｉＲＮＡ結合部位とさらに組み合わせて改変することができる。
腎臓で発現することが知られているｍｉＲＮＡには、ｍｉＲ−１２２−３ｐ、ｍｉＲ−１４５−５ｐ、ｍｉＲ−１７−５ｐ、ｍｉＲ−１９２−３ｐ、ｍｉＲ−１９２−５ｐ、ｍｉＲ−１９４−３ｐ、ｍｉＲ−１９４−５ｐ、ｍｉＲ−２０ａ−３ｐ、ｍｉＲ−２０ａ−５ｐ、ｍｉＲ−２０４−３ｐ、ｍｉＲ−２０４−５ｐ、ｍｉＲ−２１０、ｍｉＲ−２１６ａ−３ｐ、ｍｉＲ−２１６ａ−５ｐ、ｍｉＲ−２９６−３ｐ、ｍｉＲ−３０ａ−３ｐ、ｍｉＲ−３０ａ−５ｐ、ｍｉＲ−３０ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−３０ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−３０ｃ−１−３ｐ、ｍｉＲ−３０ｃ−２−３ｐ、ｍｉＲ３０ｃ−５ｐ、ｍｉＲ−３２４−３ｐ、ｍｉＲ−３３５−３ｐ、ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｍｉＲ−３６３−３ｐ、ｍｉＲ−３６３−５ｐ、及びｍｉＲ−５６２が含まれるが、これらに限定されない。任意の腎臓特異的ｍｉＲＮＡからのｍｉＲＮＡ結合部位を本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））に導入またはそこから除去して、腎臓における核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の発現を調節することができる。腎臓特異的ｍｉＲＮＡ結合部位は、単独で、または本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））中の免疫細胞（例えば、ＡＰＣ）ｍｉＲＮＡ結合部位とさらに組み合わせて改変することができる。
筋肉で発現することが知られているｍｉＲＮＡには、ｌｅｔ−７ｇ−３ｐ、ｌｅｔ−７ｇ−５ｐ、ｍｉＲ−１、ｍｉＲ−１２８６、ｍｉＲ−１３３ａ、ｍｉＲ−１３３ｂ、ｍｉＲ−１４０−３ｐ、ｍｉＲ−１４３−３ｐ、ｍｉＲ−１４３−５ｐ、ｍｉＲ−１４５−３ｐ、ｍｉＲ−１４５−５ｐ、ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｍｉＲ−１８８−５ｐ、ｍｉＲ−２０６、ｍｉＲ−２０８ａ、ｍｉＲ−２０８ｂ、ｍｉＲ−２５−３ｐ、及びｍｉＲ−２５−５ｐが含まれるが、これらに限定されない。任意の筋肉特異的ｍｉＲＮＡからのｍｉＲＮＡ結合部位を本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））に導入またはそこから除去して、筋肉における核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の発現を調節することができる。筋肉特異的ｍｉＲＮＡ結合部位は、単独で、または本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））中の免疫細胞（例えば、ＡＰＣ）ｍｉＲＮＡ結合部位とさらに組み合わせて改変することができる。
ｍｉＲＮＡは、内皮細胞、上皮細胞、脂肪細胞を含むがこれらに限定されない様々なタイプの細胞でも差次的に発現する。
内皮細胞で発現することが知られているｍｉＲＮＡには、ｌｅｔ−７ｂ−３ｐ、ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−１００−３ｐ、ｍｉＲ−１００−５ｐ、ｍｉＲ−１０１−３ｐ、ｍｉＲ−１０１−５ｐ、ｍｉＲ−１２６−３ｐ、ｍｉＲ−１２６−５ｐ、ｍｉＲ−１２３６−３ｐ、ｍｉＲ−１２３６−５ｐ、ｍｉＲ−１３０ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１３０ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１７−５ｐ、ｍｉＲ−１７−３ｐ、ｍｉＲ−１８ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１８ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１９ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１９ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１９ｂ−１−５ｐ、ｍｉＲ−１９ｂ−２−５ｐ、ｍｉＲ−１９ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−２０ａ−３ｐ、ｍｉＲ−２０ａ−５ｐ、ｍｉＲ−２１７、ｍｉＲ−２１０、ｍｉＲ−２１−３ｐ、ｍｉＲ−２１−５ｐ、ｍｉＲ−２２１−３ｐ、ｍｉＲ−２２１−５ｐ、ｍｉＲ−２２２−３ｐ、ｍｉＲ−２２２−５ｐ、ｍｉＲ−２３ａ−３ｐ、ｍｉＲ−２３ａ−５ｐ、ｍｉＲ−２９６−５ｐ、ｍｉＲ−３６１−３ｐ、ｍｉＲ−３６１−５ｐ、ｍｉＲ−４２１、ｍｉＲ−４２４−３ｐ、ｍｉＲ−４２４−５ｐ、ｍｉＲ−５１３ａ−５ｐ、ｍｉＲ−９２ａ−１−５ｐ、ｍｉＲ−９２ａ−２−５ｐ、ｍｉＲ−９２ａ−３ｐ、ｍｉＲ−９２ｂ−３ｐ、及びｍｉＲ−９２ｂ−５ｐが含まれるが、これらに限定されない。多くの新規ｍｉＲＮＡは、ディープシークエンシング解析から内皮細胞において発見されている（例えば、Ｖｏｅｌｌｅｎｋｌｅ Ｃ ｅｔ ａｌ．， ＲＮＡ， ２０１２， １８， ４７２−４８４、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。任意の内皮細胞特異的ｍｉＲＮＡからのｍｉＲＮＡ結合部位を本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））に導入またはそこから除去して、内皮細胞における核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の発現を調節することができる。
上皮細胞で発現することが知られているｍｉＲＮＡには、ｌｅｔ−７ｂ−３ｐ、ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−１２４６、ｍｉＲ−２００ａ−３ｐ、ｍｉＲ−２００ａ−５ｐ、ｍｉＲ−２００ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−２００ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−２００ｃ−３ｐ、ｍｉＲ−２００ｃ−５ｐ、ｍｉＲ−３３８−３ｐ、ｍｉＲ−４２９、ｍｉＲ−４５１ａ、ｍｉＲ−４５１ｂ、ｍｉＲ−４９４、ｍｉＲ−８０２及びｍｉＲ−３４ａ、ｍｉＲ−３４ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−３４ｃ−５ｐ、ｍｉＲ−４４９ａ、ｍｉＲ−４４９ｂ−３ｐ、呼吸器繊毛上皮細胞に特異的なｍｉＲ−４４９ｂ−５ｐ、ｌｅｔ−７ファミリー、ｍｉＲ−１３３ａ、ｍｉＲ−１３３ｂ、肺上皮細胞に特異的なｍｉＲ−１２６、ｍｉＲ−３８２−３ｐ、腎上皮細胞に特異的なｍｉＲ−３８２−５ｐ、角膜上皮細胞に特異的なｍｉＲ−７６２が含まれるが、これらに限定されない。任意の上皮細胞特異的ｍｉＲＮＡからのｍｉＲＮＡ結合部位を本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））に導入またはそこから除去して、上皮細胞における核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の発現を調節することができる。
さらに、ｍｉＲＮＡの大規模な群は胚性幹細胞に富んでおり、幹細胞の自己再生、ならびに神経細胞、心臓、造血細胞、皮膚細胞、骨形成細胞、及び筋肉細胞などの様々な細胞系統の発生及び／または分化を制御する（例えば、Ｋｕｐｐｕｓａｍｙ ＫＴ ｅｔ ａｌ．， Ｃｕｒｒ． Ｍｏｌ Ｍｅｄ， ２０１３， １３（５）， ７５７−７６４；Ｖｉｄｉｇａｌ ＪＡ ａｎｄ Ｖｅｎｔｕｒａ Ａ， Ｓｅｍｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｌ． ２０１２， ２２（５−６）， ４２８−４３６；Ｇｏｆｆ ＬＡ ｅｔ ａｌ．， ＰＬｏＳ Ｏｎｅ，２００９， ４：ｅ７１９２；Ｍｏｒｉｎ ＲＤ ｅｔ ａｌ．， Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ，２００８，１８， ６１０−６２１；Ｙｏｏ ＪＫ ｅｔ ａｌ．， Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ Ｄｅｖ． ２０１２， ２１（１１）， ２０４９−２０５７、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。胚性幹細胞に豊富なｍｉＲＮＡには、ｌｅｔ−７ａ−２−３ｐ、ｌｅｔ−ａ−３ｐ、ｌｅｔ−７ａ−５ｐ、ｌｅｔ７ｄ−３ｐ、ｌｅｔ−７ｄ−５ｐ、ｍｉＲ−１０３ａ−２−３ｐ、ｍｉＲ−１０３ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１０６ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−１０６ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−１２４６、ｍｉＲ−１２７５、ｍｉＲ−１３８−１−３ｐ、ｍｉＲ−１３８−２−３ｐ、ｍｉＲ−１３８−５ｐ、ｍｉＲ−１５４−３ｐ、ｍｉＲ−１５４−５ｐ、ｍｉＲ−２００ｃ−３ｐ、ｍｉＲ−２００ｃ−５ｐ、ｍｉＲ−２９０、ｍｉＲ−３０１ａ−３ｐ、ｍｉＲ−３０１ａ−５ｐ、ｍｉＲ−３０２ａ−３ｐ、ｍｉＲ−３０２ａ−５ｐ、ｍｉＲ−３０２ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−３０２ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−３０２ｃ−３ｐ、ｍｉＲ−３０２ｃ−５ｐ、ｍｉＲ−３０２ｄ−３ｐ、ｍｉＲ−３０２ｄ−５ｐ、ｍｉＲ−３０２ｅ、ｍｉＲ−３６７−３ｐ、ｍｉＲ−３６７−５ｐ、ｍｉＲ−３６９−３ｐ、ｍｉＲ−３６９−５ｐ、ｍｉＲ−３７０、ｍｉＲ−３７１、ｍｉＲ−３７３、ｍｉＲ−３８０−５ｐ、ｍｉＲ−４２３−３ｐ、ｍｉＲ−４２３−５ｐ、ｍｉＲ−４８６−５ｐ、ｍｉＲ−５２０ｃ−３ｐ、ｍｉＲ−５４８ｅ、ｍｉＲ−５４８ｆ、ｍｉＲ−５４８ｇ−３ｐ、ｍｉＲ−５４８ｇ−５ｐ、ｍｉＲ−５４８ｉ、ｍｉＲ−５４８ｋ、ｍｉＲ−５４８ｌ、ｍｉＲ−５４８ｍ、ｍｉＲ−５４８ｎ、ｍｉＲ−５４８ｏ−３ｐ、ｍｉＲ−５４８ｏ−５ｐ、ｍｉＲ−５４８ｐ、ｍｉＲ−６６４ａ−３ｐ、ｍｉＲ−６６４ａ−５ｐ、ｍｉＲ−６６４ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−６６４ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−７６６−３ｐ、ｍｉＲ−７６６−５ｐ、ｍｉＲ−８８５−３ｐ、ｍｉＲ−８８５−５ｐ、ｍｉＲ−９３−３ｐ、ｍｉＲ−９３−５ｐ、ｍｉＲ−９４１、ｍｉＲ−９６−３ｐ、ｍｉＲ−９６−５ｐ、ｍｉＲ−９９ｂ−３ｐ及びｍｉＲ−９９ｂ−５ｐが含まれるが、これらに限定されない。予測される多くの新規ｍｉＲＮＡは、ヒト胚性幹細胞のディープシークエンシングによって発見される（例えば、Ｍｏｒｉｎ ＲＤ ｅｔ ａｌ．， Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ，２００８，１８， ６１０−６２１；Ｇｏｆｆ ＬＡ ｅｔ ａｌ．， ＰＬｏＳ Ｏｎｅ， ２００９， ４：ｅ７１９２；Ｂａｒ Ｍ ｅｔ ａｌ．， Ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ， ２００８， ２６， ２４９６−２５０５、これらのそれぞれの内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
いくつかの実施形態では、胚性幹細胞特異的ｍｉＲＮＡの結合部位は、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の３’ＵＴＲに含まれるか、またはそこから除去されて、胚性幹細胞の発生及び／または分化を調節し、変性状態（例えば、変性疾患）での幹細胞の老化を阻害し、あるいは疾患状態の幹細胞（例えば、がん幹細胞）の老化及びアポトーシスを刺激することができる。
多くのｍｉＲＮＡ発現研究は、様々ながん細胞／組織及びその他の疾患でのｍｉＲＮＡの差次的発現をプロファイルするために実施される。いくつかのｍｉＲＮＡは特定のがん細胞で異常に過剰発現し、他のｍｉＲＮＡは過少発現している。例えば、ｍｉＲＮＡは、がん細胞において（ＷＯ２００８／１５４０９８、ＵＳ２０１３／００５９０１５、ＵＳ２０１３／００４２３３３、ＷＯ２０１１／１５７２９４）；がん幹細胞において（ＵＳ２０１２／００５３２２４）；膵臓癌及び疾患において（ＵＳ２００９／０１３１３４８、ＵＳ２０１１／０１７１６４６、ＵＳ２０１０／０２８６２３２、ＵＳ８３８９２１０）；喘息及び炎症において（ＵＳ８４１５０９６）；前立腺癌において（ＵＳ２０１３／００５３２６４）；肝細胞癌において（ＷＯ２０１２／１５１２１２、ＵＳ２０１２／０３２９６７２、ＷＯ２００８／０５４８２８、ＵＳ８２５２５３８）；胚細胞癌において（ＷＯ２０１１／０７６１４３、ＷＯ２０１３／０３３６４０、ＷＯ２００９／０７０６５３、ＵＳ２０１０／０３２３３５７）；皮膚Ｔ細胞リンパ腫において（ＷＯ２０１３／０１１３７８）；大腸癌細胞において（ＷＯ２０１１／０２８１７５６、ＷＯ２０１１／０７６１４２）；がん陽性リンパ節において（ＷＯ２００９／１００４３０、ＵＳ２００９／０２６３８０３）；上咽頭癌において（ＥＰ２１１２２３５）；慢性閉塞性肺疾患において（ＵＳ２０１２／０２６４６２６、ＵＳ２０１３／００５３２６３）；甲状腺癌において（ＷＯ２０１３／０６６６７８）；卵巣癌細胞において（ＵＳ２０１２／０３０９６４５、ＷＯ２０１１／０９５６２３）；乳癌細胞において（ＷＯ２００８／１５４０９８、ＷＯ２００７／０８１７４０、ＵＳ２０１２／０２１４６９９）、白血病及びリンパ腫において（ＷＯ２００８／０７３９１５、ＵＳ２００９／００９２９７４、ＵＳ２０１２／０３１６０８１、ＵＳ２０１２／０２８３３１０、ＷＯ２０１０／０１８５６３）差次的に発現しており、そのそれぞれの内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
非限定的な例として、特定のがん及び／または腫瘍細胞で過剰発現するｍｉＲＮＡのｍｉＲＮＡ結合部位は、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の３’ＵＴＲから除去され、がん細胞において過剰発現したｍｉＲＮＡにより抑制された発現を回復することができ、したがって、例えば、転写刺激及び／または抑制、細胞周期停止、アポトーシス及び細胞死などの対応する生物学的機能を改善する。ｍｉＲＮＡの発現が上方制御されていない正常な細胞及び組織は、影響を受けない。
ｍｉＲＮＡは、血管新生などの複雑な生物学的プロセスも調節できる（例えば、ｍｉＲ−１３２）（Ａｎａｎｄ ａｎｄ Ｃｈｅｒｅｓｈ Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｈｅｍａｔｏｌ ２０１１ １８：１７１−１７６）。本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））において、核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の発現を生物学的に関連する細胞タイプまたは関連する生物学的プロセスに合わせるために、そのようなプロセスに関与するｍｉＲＮＡ結合部位を除去または導入することができる。これに関連して、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））は栄養要求性ポリヌクレオチドとして定義される。
いくつかの実施形態では、本開示のポリペプチドの治療濃度域及び／または差次的発現（例えば、組織特異的発現）は、ポリペプチドをコードする核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））にｍｉＲＮＡ結合部位を組み込むことによって改変され得る。一例では、核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））は、別の組織型と比較してある組織型において高発現するｍｉＲＮＡが結合するｍｉＲＮＡ結合部位を１つ以上含み得る。別の例では、核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））は、同じ組織を起源とする非がん性細胞と比較してがん細胞において低発現するｍｉＲＮＡが結合するｍｉＲＮＡ結合部位を１つ以上含み得る。こうした核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））によってコードされるポリペプチドは、そのようなｍｉＲＮＡの発現レベルが低いがん細胞に存在すると、典型的には、発現が増加することになる。
肝癌細胞（例えば、肝細胞癌細胞）は、典型的には、正常な肝細胞と比較してｍｉＲ−１２２の発現レベルが低い。したがって、ポリペプチドをコードする核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））がｍｉＲ−１２２結合部位を（例えばｍＲＮＡの３’−ＵＴＲに）１つ以上含むと、典型的には、正常な肝細胞におけるポリペプチドの発現レベルは比較的低くなり、肝癌細胞におけるポリペプチドの発現レベルは比較的高くなる。ポリペプチドが免疫原性細胞死を誘導できるのであれば、これによって、正常な肝細胞と比較して肝癌細胞（例えば、肝細胞癌細胞）の免疫原性細胞死滅が優先的に生じ得る。
いくつかの実施形態では、核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））は、少なくとも１つのｍｉＲ−１２２結合部位、少なくとも２つのｍｉＲ−１２２結合部位、少なくとも３つのｍｉＲ−１２２結合部位、少なくとも４つのｍｉＲ−１２２結合部位、または少なくとも５つのｍｉＲ−１２２結合部位を含む。一態様では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲ−１２２に結合するか、またはｍｉＲ−１２２に相補的である。別の態様では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲ−１２２−３ｐまたはｍｉＲ−１２２−５ｐに結合する。特定の態様では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、配列番号７５に対する同一性が少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％であるヌクレオチド配列を含み、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲ−１２２に結合する。別の特定の態様では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、配列番号７３に対する同一性が少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％であるヌクレオチド配列を含み、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲ−１２２に結合する。こうした配列は、以下の表１９に示される。
いくつかの実施形態では、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））は、ｍｉＲＮＡ結合部位を含み、ｍｉＲＮＡ結合部位は、表１９から選択される１つ以上のヌクレオチド配列（こうしたｍｉＲＮＡ結合部位配列の任意の１つ以上の１つ以上のコピーを含む）を含む。いくつかの実施形態では、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））は、表１９から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つ、少なくとも８つ、少なくとも９つ、少なくとも１０個、またはそれを超える数の同じまたは異なるｍｉＲＮＡ結合部位（その任意の組み合わせを含む）をさらに含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲ−１４２に結合するか、またはｍｉＲ−１４２に相補的である。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ−１４２は、配列番号６６を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲ−１４２−３ｐまたはｍｉＲ−１４２−５ｐに結合する。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ−１４２−３ｐ結合部位は、配列番号６８を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ−１４２−５ｐ結合部位は、配列番号７０を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、配列番号６８または配列番号７０との同一性が少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％であるヌクレオチド配列を含む。
Figure 2021512090
いくつかの実施形態では、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））にｍｉＲＮＡ結合部位が挿入される位置は、核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の任意の位置（例えば、５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲ）である。いくつかの実施形態では、５’ＵＴＲは、ｍｉＲＮＡ結合部位を含む。いくつかの実施形態では、３’ＵＴＲは、ｍｉＲＮＡ結合部位を含む。いくつかの実施形態では、５’ＵＴＲ及び３’ＵＴＲは、ｍｉＲＮＡ結合部位を含む。核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））における挿入部位は、核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））にｍｉＲＮＡ結合部位を挿入することで、対応するｍｉＲＮＡの非存在下での機能性ポリペプチドの翻訳が妨害されない限り、核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））における任意の場所であり得、ｍｉＲＮＡの存在下では、核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））にｍｉＲＮＡ結合部位が挿入されており、対応するｍｉＲＮＡにｍｉＲＮＡ結合部位が結合すれば、ポリヌクレオチドを分解するか、または核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の翻訳を阻止することが可能である。
いくつかの実施形態では、ＯＲＦを含む本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））におけるＯＲＦの終止コドンから少なくとも約３０ヌクレオチド下流にｍｉＲＮＡ結合部位が挿入される。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドにおけるＯＲＦの終止コドンから少なくとも約１０ヌクレオチド下流、少なくとも約１５ヌクレオチド下流、少なくとも約２０ヌクレオチド下流、少なくとも約２５ヌクレオチド下流、少なくとも約３０ヌクレオチド下流、少なくとも約３５ヌクレオチド下流、少なくとも約４０ヌクレオチド下流、少なくとも約４５ヌクレオチド下流、少なくとも約５０ヌクレオチド下流、少なくとも約５５ヌクレオチド下流、少なくとも約６０ヌクレオチド下流、少なくとも約６５ヌクレオチド下流、少なくとも約７０ヌクレオチド下流、少なくとも約７５ヌクレオチド下流、少なくとも約８０ヌクレオチド下流、少なくとも約８５ヌクレオチド下流、少なくとも約９０ヌクレオチド下流、少なくとも約９５ヌクレオチド下流、または少なくとも約１００ヌクレオチド下流にｍｉＲＮＡ結合部位が挿入される。いくつかの実施形態では、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））におけるＯＲＦの終止コドンから約１０ヌクレオチド〜約１００ヌクレオチド下流、約２０ヌクレオチド〜約９０ヌクレオチド下流、約３０ヌクレオチド〜約８０ヌクレオチド下流、約４０ヌクレオチド〜約７０ヌクレオチド下流、約５０ヌクレオチド〜約６０ヌクレオチド下流、約４５ヌクレオチド〜約６５ヌクレオチド下流にｍｉＲＮＡ結合部位が挿入される。
ｍｉＲＮＡによる遺伝子制御は、ｍｉＲＮＡの周辺配列によって影響を受け得るものであり、当該制御に影響を与えるものは、限定されないが、周辺配列の種、配列の型（例えば、異種、同種、外来性、内在性、もしくは人工的なもの）、周辺配列における制御エレメント、及び／または周辺配列における構造エレメントなどである。ｍｉＲＮＡは、５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲによって影響を受け得る。非限定的な例として、非ヒト３’ＵＴＲは、同じ配列型のヒト３’ＵＴＲと比較して、目的ポリペプチドの発現に対するｍｉＲＮＡ配列の制御作用を強め得る。
一実施形態では、５’ＵＴＲの他の制御エレメント及び／または構造エレメントもまた、ｍｉＲＮＡ介在性の遺伝子制御に影響を与え得る。制御エレメント及び／または構造エレメントの一例は、５’ＵＴＲにおける構造化ＩＲＥＳ（配列内リボソーム進入部位）であり、この構造化ＩＲＥＳは、翻訳伸長因子が結合してタンパク質の翻訳を開始する上で必要なものである。５’−ＵＴＲに二次構造を形成するこのエレメントにＥＩＦ４Ａ２が結合することが、ｍｉＲＮＡ介在性の遺伝子発現に必要である（Ｍｅｉｊｅｒ ＨＡ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１３，３４０，８２−８５（当該文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）。本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））は、マイクロＲＮＡ介在性の遺伝子制御を増進するためにこの構造化５’ＵＴＲをさらに含み得る。
本開示のポリヌクレオチドの３’ＵＴＲには、少なくとも１つのｍｉＲＮＡ結合部位が操作導入され得る。この状況では、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つ、少なくとも８つ、少なくとも９、少なくとも１０個、またはそれを超える数のｍｉＲＮＡ結合部位が本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の３’ＵＴＲに操作導入され得る。例えば、１〜１０個、１〜９つ、１〜８つ、１〜７つ、１〜６つ、１〜５つ、１〜４つ、１〜３つ、２つ、または１つのｍｉＲＮＡ結合部位が本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の３’ＵＴＲに操作導入され得る。一実施形態では、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））に組み込まれるｍｉＲＮＡ結合部位は、同じｍｉＲＮＡ部位であり得るか、または異なるｍｉＲＮＡ部位であり得る。異なるｍｉＲＮＡ結合部位の組み合わせが本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））に組み込まれる場合、こうした組み合わせには、異なるｍｉＲＮＡ部位のいずれかのコピーを１つ以上含む組み合わせが含まれ得る。別の実施形態では、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））に組み込まれるｍｉＲＮＡ結合部位は、体内の同じまたは異なる組織を標的とし得る。非限定的な例として、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の３’−ＵＴＲに組織特異的、細胞型特異的、または疾患特異的なｍｉＲＮＡが結合する部位を導入することで、特定の細胞型（例えば、肝細胞、骨髄系細胞、内皮細胞、がん細胞など）における発現の程度が低減され得る。
一実施形態では、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））にｍｉＲＮＡ結合部位が操作導入される位置は、３’ＵＴＲの５’末端付近、３’ＵＴＲの５’末端と３’末端とのほぼ中間、及び／または３’ＵＴＲの３’末端付近であり得る。非限定的な例として、ｍｉＲＮＡ結合部位が操作導入される位置は、３’ＵＴＲの５’末端付近、ならびに３’ＵＴＲの５’末端と３’末端とのほぼ中間であり得る。別の非限定的な例として、ｍｉＲＮＡ結合部位が操作導入される位置は、３’ＵＴＲの３’末端付近、ならびに３’ＵＴＲの５’末端と３’末端とのほぼ中間であり得る。さらに別の非限定的な例として、ｍｉＲＮＡ結合部位が操作導入される位置は、３’ＵＴＲの５’末端付近、及び３’ＵＴＲの３’末端付近であり得る。
別の実施形態では、３’ＵＴＲは、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、または１０個のｍｉＲＮＡ結合部位を含み得る。ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡシード配列、及び／またはシード配列に隣接するｍｉＲＮＡ配列に相補的であり得る。
一実施形態では、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））は、対象の異なる組織または異なる細胞型において発現するｍｉＲＮＡ部位を１つ以上含むように操作され得る。非限定的な例として、ｍｉＲ−１９２及びｍｉＲ−１２２を含むように本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））を操作することで、対象の肝臓及び腎臓における核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の発現が制御され得る。別の実施形態では、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））は、同じ組織に対するｍｉＲＮＡ部位を１つ以上含むように操作され得る。いくつかの実施形態では、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））によってコードされるポリペプチドと関連する治療濃度域及びまたは差次的発現は、ｍｉＲＮＡ結合部位を用いて改変され得る。例えば、死滅シグナルを生成するポリペプチドをコードする核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））は、がん細胞のｍｉＲＮＡ特徴に基づいてそうした細胞における発現が高まるように設計され得る。がん細胞において特定のｍｉＲＮＡの発現レベルが低下している場合、そのｍｉＲＮＡ（または複数のｍｉＲＮＡ）に対する結合部位をコードする核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の発現は高まることになる。したがって、死滅シグナルを生成するポリペプチドは、がん細胞の細胞死を誘発または誘導する。隣接する非がん細胞は、同じｍｉＲＮＡの発現が高まっており、３’ＵＴＲにコードされる結合部位または「センサー」にｍｉＲＮＡが結合してその作用が生じることでポリヌクレオチドの発現レベルが低下すると想定されるため、コードされる死滅シグナルによって受ける影響は少ないことになる。逆に、がん細胞においてｍｉＲＮＡの発現が高まっている場合、がん細胞及び非がん性細胞を含む組織に対して細胞生存シグナルまたは細胞保護シグナルを送達することができ、この場合、がん細胞に対する生存シグナルは弱まり、正常細胞に対する生存シグナルは強まる結果となる。本明細書に記載のようにｍｉＲＮＡ結合部位を使用することで、異なるシグナルを与えるように複数の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））を設計及び投与することができる。
いくつかの実施形態では、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の発現は、少なくとも１つのセンサー配列を当該ポリヌクレオチドに組み込み、投与用に核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））を製剤化することによって制御され得る。非限定的な例として、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））は、ｍｉＲＮＡ結合部位を組み込み、カチオン性脂質（本明細書に記載の脂質のいずれかを含む）を含む脂質ナノ粒子中に核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））を製剤化することによって組織または細胞へと標的化され得る。
異なる組織、細胞型、または生物学的条件におけるｍｉＲＮＡの発現パターンに基づいて特定の組織、細胞型、または生物学的条件における発現標的化が進むように本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））を操作することができる。組織特異的なｍｉＲＮＡが結合する部位を導入することで、組織もしくは細胞におけるタンパク質発現または生物学的条件と関連するタンパク質発現が最適化されるように本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））を設計することができる。
いくつかの実施形態では、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））は、既知のｍｉＲＮＡシード配列に対する同一性が１００％であるか、またはｍｉＲＮＡシード配列に対する同一性が１００％未満であるｍｉＲＮＡ結合部位が組み込まれるように設計され得る。いくつかの実施形態では、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））は、既知のｍｉＲＮＡシード配列に対する同一性が少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％であるｍｉＲＮＡ結合部位が組み込まれるように設計され得る。ｍｉＲＮＡの結合親和性が低下し、結果的に核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の下方調節が弱まるようにｍｉＲＮＡシード配列を部分的に変異させることができる。要するに、ｍｉＲＮＡ結合部位とｍｉＲＮＡのシードとの間のマッチまたはミスマッチの程度は、ｍｉＲＮＡがタンパク質発現を調節する能力をより精密に調整するためのレオスタットとして働き得るということである。さらに、ｍｉＲＮＡ結合部位の非シード領域に変異を導入することでも、ｍｉＲＮＡがタンパク質発現を調節する能力に影響を与えることができる。
一実施形態では、ステムループのループにｍｉＲＮＡ配列が組み込まれ得る。別の実施形態では、ステムループのループにｍｉＲＮＡシード配列が組み込まれ得ると共に、ステムループの５’ステムまたは３’ステムにｍｉＲＮＡ結合部位が組み込まれ得る。
一実施形態では、ステムループのステムの５’末端に翻訳エンハンサーエレメント（ＴＥＥ）が組み込まれ得ると共に、ステムループのステムにｍｉＲＮＡのシードが組み込まれ得る。別の実施形態では、ステムループのステムの５’末端にＴＥＥが組み込まれ得ると共に、ステムループのステムにｍｉＲＮＡのシードが組み込まれ得、さらに、ステムの３’末端またはステムループの下流の配列にｍｉＲＮＡ結合部位が組み込まれ得る。ｍｉＲＮＡのシード及びｍｉＲＮＡ結合部位は、同じ及び／または異なるｍｉＲＮＡ配列に対するものであり得る。
一実施形態では、ｍｉＲＮＡ配列及び／またはＴＥＥ配列を組み込むとステムループ領域の形が変化し、こうしてステムループ領域の形が変化することで翻訳が増加及び／または減少し得る（例えば、Ｋｅｄｄｅ ｅｔ ａｌ．，“Ａ Ｐｕｍｉｌｉｏ−ｉｎｄｕｃｅｄ ＲＮＡ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｓｗｉｔｃｈ ｉｎ ｐ２７−３’ＵＴＲ ｃｏｎｔｒｏｌｓ ｍｉＲ−２２１ ａｎｄ ｍｉＲ−２２ ａｃｃｅｓｓｉｂｉｌｉｔｙ．”Ｎａｔｕｒｅ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ．２０１０（当該文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。
一実施形態では、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の５’−ＵＴＲは、少なくとも１つのｍｉＲＮＡ配列を含み得る。ｍｉＲＮＡ配列は、限定されないが、１９ヌクレオチドもしくは２２ヌクレオチドの配列であり、及び／またはシードを含まないｍｉＲＮＡ配列であり得る。一実施形態では、５’ＵＴＲにｍｉＲＮＡ配列を含めることで、本明細書に記載の本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））が安定化され得る。
別の実施形態では、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の５’ＵＴＲにｍｉＲＮＡ配列を含めることで、翻訳開始部位（開始コドンなどであるが、これに限定されない）への到達性が下がり得る。例えば、Ｍａｔｓｕｄａ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ．２０１０ １１（５）：ｅ１５０５７（当該文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと。この文献では、開始コドン（−４〜＋３７（この表記ではＡＵＧコドンのＡが＋１である））への到達性を下げるために、当該第１の開始コドン（ＡＵＧ）周辺にアンチセンスロックド核酸（ＬＮＡ）オリゴヌクレオチド及びエクソン接合部複合体（ＥＪＣ）が使用された。ＬＮＡまたはＥＪＣを用いて開始コドン周辺の配列を改変することで、ポリヌクレオチドの効率、長さ、及び構造安定性に影響が及ぶことをＭａｔｓｕｄａは示した。本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））は、翻訳開始部位への到達性を下げるために、Ｍａｔｓｕｄａ ｅｔ ａｌによって報告されたＬＮＡ配列またはＥＪＣ配列の代わりにｍｉＲＮＡ配列を翻訳開始部位付近に含み得る。翻訳開始部位は、ｍｉＲＮＡ配列の上流、下流、または内部に位置し得る。非限定的な例として、翻訳開始部位は、ｍｉＲＮＡ配列（シード配列など）内または結合部位内に位置し得る。別の非限定的な例として、翻訳開始部位は、ｍｉＲ−１２２配列（シード配列など）内またはｍｉｒ−１２２結合部位内に位置し得る。いくつかの実施形態では、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））は、抗原提示細胞による抗原提示を抑制するために、少なくとも１つのｍｉＲＮＡを含み得る。ｍｉＲＮＡは、完全なｍｉＲＮＡ配列、ｍｉＲＮＡシード配列、シードを含まないｍｉＲＮＡ配列、またはそれらの組み合わせであり得る。非限定的な例として、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））に組み込まれるｍｉＲＮＡは、造血系に特異的であり得る。別の非限定的な例として、抗原提示を抑制するために本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））に組み込まれるｍｉＲＮＡは、ｍｉＲ−１４２−３ｐである。
いくつかの実施形態では、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））は、目的の組織または細胞におけるコードポリペプチドの発現を抑制するために、少なくとも１つのｍｉＲＮＡを含み得る。非限定的な例として、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））は、肝臓における目的コードポリペプチドの発現を抑制するために、少なくとも１つのｍｉＲ−１２２結合部位を含み得る。別の非限定的な例として、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））は、少なくとも１つのｍｉＲ−１４２−３ｐ結合部位、少なくとも１つのｍｉＲ−１４２−３ｐシード配列、シードを含まない少なくとも１つのｍｉＲ−１４２−３ｐ結合部位、少なくとも１つのｍｉＲ−１４２−５ｐ結合部位、少なくとも１つのｍｉＲ−１４２−５ｐシード配列、シードを含まない少なくとも１つのｍｉＲ−１４２−５ｐ結合部位、少なくとも１つのｍｉＲ−１４６結合部位、少なくとも１つのｍｉＲ−１４６シード配列、及び／またはシード配列を含まない少なくとも１つのｍｉＲ−１４６結合部位を含み得る。
いくつかの実施形態では、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））は、免疫細胞においてｍＲＮＡ治療薬を選択的に分解して治療的送達によって生じる望ましくない免疫原性反応を抑えるために、少なくとも１つのｍｉＲＮＡ結合部位を３’ＵＴＲに含み得る。非限定的な例として、ｍｉＲＮＡ結合部位は、抗原提示細胞における本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の不安定性を高め得る。こうしたｍｉＲＮＡの例としては、限定されないが、ｍｉｒ−１４２−５ｐ、ｍｉｒ−１４２−３ｐ、ｍｉｒ−１４６ａ−５ｐ、及びｍｉｒ−１４６−３ｐが挙げられる。
一実施形態では、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））は、核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））におけるＲＮＡ結合タンパク質と相互作用し得る領域にｍｉＲＮＡ配列を少なくとも１つ含む。
いくつかの実施形態では、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））は、（ｉ）配列が最適化されたヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）、及び（ｉｉ）ｍｉＲＮＡ結合部位（例えば、ｍｉＲ−１４２に結合するｍｉＲＮＡ結合部位）を含む。
いくつかの実施形態では、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））は、本明細書に開示のポリペプチドをコードするウラシル修飾配列と、本明細書に開示のｍｉＲＮＡ結合部位（例えば、ｍｉＲ−１４２に結合するｍｉＲＮＡ結合部位）と、を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドをコードするウラシル修飾配列は、化学的に修飾された核酸塩基（例えば、５−メトキシウラシル）を少なくとも１つ含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリペプチドをコードするウラシル修飾配列におけるある型の核酸塩基（例えば、ウラシル）の少なくとも９５％は修飾核酸塩基である。いくつかの実施形態では、ポリペプチドをコードするウラシル修飾配列におけるウラシルの少なくとも９５％は５−メトキシウリジンである。いくつかの実施形態では、本明細書に開示のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列と、ｍｉＲＮＡ結合部位と、を含む核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））は、送達剤と共に製剤化され、こうした送達剤は、例えば、式（Ｉ）を有する化合物（例えば、化合物１〜１４７のいずれか）である。
機能性ＲＮＡエレメントを含む修飾ＲＮＡ分子
本開示は、修飾（例えば、ＲＮＡエレメント）を含む合成核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））を提供し、修飾は、所望の翻訳制御活性を与える。いくつかの実施形態では、本開示は、５’非翻訳領域（ＵＴＲ）、開始コドン、ポリペプチドをコードする完全なオープンリーディングフレーム、３’ＵＴＲ、及び少なくとも１つの修飾を含む核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））を提供し、少なくとも１つの修飾は、所望の翻訳制御活性を与え、こうした修飾は、例えば、ｍＲＮＡ翻訳の翻訳忠実度を促進及び／または増進する修飾である。いくつかの実施形態では、所望の翻訳制御活性は、シス作用性の制御活性である。いくつかの実施形態では、所望の翻訳制御活性は、４３Ｓ開始前複合体（ＰＩＣ）またはリボソームが開始コドンまたはその近位に滞留する時間を長くするものである。いくつかの実施形態では、所望の翻訳制御活性は、開始コドンにおけるポリペプチド合成の開始または開始コドンからのポリペプチド合成の開始を促進するものである。いくつかの実施形態では、所望の翻訳制御活性は、完全なオープンリーディングフレームから翻訳されるポリペプチドの量を増加させるものである。いくつかの実施形態では、所望の翻訳制御活性は、ＰＩＣまたはリボソームによる開始コドンのデコードの忠実度を向上させるものである。いくつかの実施形態では、所望の翻訳制御活性は、ＰＩＣまたはリボソームによるリーキースキャニングを抑制または低減するものである。いくつかの実施形態では、所望の翻訳制御活性は、ＰＩＣまたはリボソームによって開始コドンがデコードされる速度を低減するものである。いくつかの実施形態では、所望の翻訳制御活性は、開始コドン以外の任意のｍＲＮＡ内コドンにおけるポリペプチド合成の開始を抑制または低減するものである。いくつかの実施形態では、所望の翻訳制御活性は、完全なオープンリーディングフレーム以外の任意のｍＲＮＡ内オープンリーディングフレームから翻訳されるポリペプチドの量を抑制または低減するものである。いくつかの実施形態では、所望の翻訳制御活性は、異常な翻訳産物が生じることを抑制または低減するものである。いくつかの実施形態では、所望の翻訳制御活性は、前述の翻訳制御活性が１つ以上組み合わさったものである。
したがって、本開示は、本明細書に記載の所望の翻訳制御活性を与える配列及び／またはＲＮＡ二次構造（複数可）を含むＲＮＡエレメントを含む核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））を提供する。いくつかの態様では、核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））は、翻訳の翻訳忠実度を促進及び／または増進する配列及び／またはＲＮＡ二次構造（複数可）を含むＲＮＡエレメントを含む。いくつかの態様では、核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））は、所望の翻訳制御活性（リーキースキャニングの抑制及び／または低減など）を提供する配列及び／またはＲＮＡ二次構造（複数可）を含むＲＮＡエレメントを含む。いくつかの態様では、本開示は、リーキースキャニングを抑制及び／または低減し、それによって核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の翻訳忠実度を向上させる配列及び／またはＲＮＡ二次構造（複数可）を含むＲＮＡエレメントを含む核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））を提供する。
いくつかの実施形態では、ＲＮＡエレメントは、天然ヌクレオチド及び／または修飾ヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、ＲＮＡエレメントは、ヌクレオチドまたはその誘導体もしくは類似体が連結された配列を含み、この配列は、本明細書に記載の所望の翻訳制御活性を与える。いくつかの実施形態では、ＲＮＡエレメントは、ヌクレオチドまたはその誘導体もしくは類似体が連結された配列を含み、この配列は、安定なＲＮＡ二次構造を形成するか、またはフォールディングして安定なＲＮＡ二次構造へと変化し、ＲＮＡ二次構造は、本明細書に記載の所望の翻訳制御活性を提供する。ＲＮＡエレメントは、当該エレメント（例えば、ＧＣ高含有エレメント）の一次配列に基づいて、当該エレメント（例えばステムループ）によって形成されるＲＮＡ二次構造によって、ＲＮＡ分子内の当該エレメントの位置（例えば、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内の存在位置）、当該エレメント（例えば、「翻訳エンハンサーエレメント」）の生物学的機能及び／または活性によって、ならびにそれらの任意の組み合わせによって、同定され、及び／または特徴付けられ得る。
いくつかの態様では、本開示は、リーキースキャニングを抑制し、及び／または翻訳の翻訳忠実度を向上させる１つ以上の構造的修飾を有する核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））を提供し、構造的修飾の少なくとも１つは、ＧＣ高含有ＲＮＡエレメントである。いくつかの態様では、本開示は、少なくとも１つの修飾を含む修飾核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））を提供し、少なくとも１つの修飾は、ヌクレオチドまたはその誘導体もしくは類似体が連結された配列を含むＧＣ高含有ＲＮＡエレメントであり、このＧＣ高含有ＲＮＡエレメントは、核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の５’ＵＴＲにおけるコザックコンセンサス配列の上流に位置する。一実施形態では、ＧＣ高含有ＲＮＡエレメントは、核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の５’ＵＴＲにおけるコザックコンセンサス配列の約３０ヌクレオチド上流、約２５ヌクレオチド上流、約２０ヌクレオチド上流、約１５ヌクレオチド上流、約１０ヌクレオチド上流、約５ヌクレオチド上流、約４ヌクレオチド上流、約３ヌクレオチド上流、約２ヌクレオチド上流、または約１ヌクレオチド（複数可）上流に位置する。別の実施形態では、ＧＣ高含有ＲＮＡエレメントは、コザックコンセンサス配列の１５〜３０ヌクレオチド上流、１５〜２０ヌクレオチド上流、１５〜２５ヌクレオチド上流、１０〜１５ヌクレオチド上流、または５〜１０ヌクレオチド上流に位置する。別の実施形態では、ＧＣ高含有ＲＮＡエレメントは、核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の５’ＵＴＲにおけるコザックコンセンサス配列に直接隣接して位置する。
いくつかの実施形態では、ＧＣ高含有ＲＮＡエレメントは、３〜３０個、５〜２５個、１０〜２０個、１５〜２０個、約２０個、約１５個、約１２個、約１０個、約７つ、約６つ、または約３つのヌクレオチド、その誘導体、または類似体が任意の順序で連結された配列を含み、配列組成は、７０〜８０％がシトシン塩基であるか、６０〜７０％がシトシン塩基であるか、５０％〜６０％がシトシン塩基であるか、４０〜５０％がシトシン塩基であるか、または３０〜４０％がシトシン塩基である。いくつかの実施形態では、ＧＣ高含有ＲＮＡエレメントは、３〜３０個、５〜２５個、１０〜２０個、１５〜２０個、約２０個、約１５個、約１２個、約１０個、約７つ、約６つ、または約３つのヌクレオチド、その誘導体、または類似体が任意の順序で連結された配列を含み、配列組成は、約８０％がシトシンであるか、約７０％がシトシンであるか、約６０％がシトシンであるか、約５０％がシトシンであるか、約４０％がシトシンであるか、または約３０％がシトシンである。
いくつかの実施形態では、ＧＣ高含有ＲＮＡエレメントは、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９つ、８つ、７つ、６つ、５つ、４つ、または３つのヌクレオチドまたはその誘導体もしくは類似体が任意の順序で連結された配列を含み、配列組成は、７０〜８０％がシトシンであるか、６０〜７０％がシトシンであるか、５０％〜６０％がシトシンであるか、４０〜５０％がシトシンであるか、または３０〜４０％がシトシンである。いくつかの実施形態では、ＧＣ高含有ＲＮＡエレメントは、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９つ、８つ、７つ、６つ、５つ、４つ、または３つのヌクレオチドまたはその誘導体もしくは類似体が任意の順序で連結された配列を含み、配列組成は、約８０％がシトシンであるか、約７０％がシトシンであるか、約６０％がシトシンであるか、約５０％がシトシンであるか、約４０％がシトシンであるか、または約３０％がシトシンである。
いくつかの実施形態では、本開示は、少なくとも１つの修飾を含む修飾核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））を提供し、少なくとも１つの修飾は、ヌクレオチドまたはその誘導体もしくは類似体が連結された配列を含むＧＣ高含有ＲＮＡエレメントであり、ＧＣ高含有ＲＮＡエレメントは、核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の５’ＵＴＲにおけるコザックコンセンサス配列の上流に位置し、ＧＣ高含有ＲＮＡエレメントは、核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の５’ＵＴＲにおけるコザックコンセンサス配列の約３０ヌクレオチド上流、約２５ヌクレオチド上流、約２０ヌクレオチド上流、約１５ヌクレオチド上流、約１０ヌクレオチド上流、約５ヌクレオチド上流、約４ヌクレオチド上流、約３ヌクレオチド上流、約２ヌクレオチド上流、または約１ヌクレオチド（複数可）上流に位置し、ＧＣ高含有ＲＮＡエレメントは、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、または２０個のヌクレオチドまたはその誘導体もしくは類似体が任意の順序で連結された配列を含み、配列組成は、＞５０％がシトシンである。いくつかの実施形態では、配列組成は、＞５５％がシトシンであり、＞６０％がシトシンであり、＞６５％がシトシンであり、＞７０％がシトシンであり、＞７５％がシトシンであり、＞８０％がシトシンであり、＞８５％がシトシンであり、または＞９０％がシトシンである。
いくつかの実施形態では、本開示は、少なくとも１つの修飾を含む修飾核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））を提供し、少なくとも１つの修飾は、ヌクレオチドまたはその誘導体もしくは類似体が連結された配列を含むＧＣ高含有ＲＮＡエレメントであり、ＧＣ高含有ＲＮＡエレメントは、核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の５’ＵＴＲにおけるコザックコンセンサス配列の上流に位置し、ＧＣ高含有ＲＮＡエレメントは、核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の５’ＵＴＲにおけるコザックコンセンサス配列の約３０ヌクレオチド上流、約２５ヌクレオチド上流、約２０ヌクレオチド上流、約１５ヌクレオチド上流、約１０ヌクレオチド上流、約５ヌクレオチド上流、約４ヌクレオチド上流、約３ヌクレオチド上流、約２ヌクレオチド上流、または約１ヌクレオチド（複数可）上流に位置し、ＧＣ高含有ＲＮＡエレメントは、約３〜３０個、約５〜２５個、約１０〜２０個、約１５〜２０、または約２０個、約１５個、約１２個、約１０個、約６つ、もしくは約３つのヌクレオチドまたはその誘導体もしくは類似体の配列を含み、この配列は、反復ＧＣモチーフを含み、反復ＧＣモチーフは、［ＣＣＧ］ｎであり、式中、ｎ＝１〜１０、ｎ＝２〜８、ｎ＝３〜６、またはｎ＝４〜５である。いくつかの実施形態では、配列は、［ＣＣＧ］ｎという反復ＧＣモチーフを含み、式中、ｎ＝１、２、３、４、または５である。いくつかの実施形態では、配列は、［ＣＣＧ］ｎという反復ＧＣモチーフを含み、式中、ｎ＝１、２、または３である。いくつかの実施形態では、配列は、［ＣＣＧ］ｎという反復ＧＣモチーフを含み、式中、ｎ＝１である。いくつかの実施形態では、配列は、［ＣＣＧ］ｎという反復ＧＣモチーフを含み、式中、ｎ＝２である。いくつかの実施形態では、配列は、［ＣＣＧ］ｎという反復ＧＣモチーフを含み、式中、ｎ＝３である。いくつかの実施形態では、配列は、［ＣＣＧ］ｎという反復ＧＣモチーフを含み、式中、ｎ＝４（配列番号１７７）である。いくつかの実施形態では、配列は、［ＣＣＧ］ｎという反復ＧＣモチーフを含み、式中、ｎ＝５（配列番号１７８）である。
いくつかの実施形態では、本開示は、少なくとも１つの修飾を含む修飾核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））を提供し、少なくとも１つの修飾は、ヌクレオチドまたはその誘導体もしくは類似体が連結された配列を含むＧＣ高含有ＲＮＡエレメントであり、ＧＣ高含有ＲＮＡエレメントは、核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の５’ＵＴＲにおけるコザックコンセンサス配列の上流に位置し、ＧＣ高含有ＲＮＡエレメントは、表２０に示される配列のいずれか１つを含む。一実施形態では、ＧＣ高含有ＲＮＡエレメントは、核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の５’ＵＴＲにおけるコザックコンセンサス配列の約３０ヌクレオチド上流、約２５ヌクレオチド上流、約２０ヌクレオチド上流、約１５ヌクレオチド上流、約１０ヌクレオチド上流、約５ヌクレオチド上流、約４ヌクレオチド上流、約３ヌクレオチド上流、約２ヌクレオチド上流、または約１ヌクレオチド（複数可）上流に位置する。別の実施形態では、ＧＣ高含有ＲＮＡエレメントは、コザックコンセンサス配列の約１５〜３０ヌクレオチド上流、約１５〜２０ヌクレオチド上流、約１５〜２５ヌクレオチド上流、約１０〜１５ヌクレオチド上流、または約５〜１０ヌクレオチド上流に位置する。別の実施形態では、ＧＣ高含有ＲＮＡエレメントは、核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の５’ＵＴＲにおけるコザックコンセンサス配列に直接隣接して位置する。
いくつかの実施形態では、本開示は、少なくとも１つの修飾を含む修飾核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））を提供し、少なくとも１つの修飾は、表２０に示される配列Ｖ１［ＣＣＣＣＧＧＣＧＣＣ］（配列番号８０）またはその誘導体もしくは類似体を含むＧＣ高含有ＲＮＡエレメントであり、ＧＣ高含有ＲＮＡエレメントは、核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の５’ＵＴＲにおけるコザックコンセンサス配列の上流に位置する。いくつかの実施形態では、ＧＣ高含有エレメントは、表２０に示される配列Ｖ１を含み、この配列Ｖ１は、核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の５’ＵＴＲにおけるコザックコンセンサス配列の上流に直接隣接して位置する。いくつかの実施形態では、ＧＣ高含有エレメントは、表５に示される配列Ｖ１を含み、この配列Ｖ１は、核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の５’ＵＴＲにおけるコザックコンセンサス配列の１塩基上流、２塩基上流、３塩基上流、４塩基上流、５塩基上流、６塩基上流、７塩基上流、８塩基上流、９塩基上流、または１０塩基上流に位置する。他の実施形態では、ＧＣ高含有エレメントは、表２０に示される配列Ｖ１を含み、この配列Ｖ１は、核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の５’ＵＴＲにおけるコザックコンセンサス配列の１〜３塩基上流、３〜５塩基上流、５〜７塩基上流、７〜９塩基上流、９〜１２塩基上流、または１２〜１５塩基上流に位置する。
いくつかの実施形態では、本開示は、少なくとも１つの修飾を含む修飾核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））を提供し、少なくとも１つの修飾は、表２０に示される配列Ｖ２［ＣＣＣＣＧＧＣ］またはその誘導体もしくは類似体を含むＧＣ高含有ＲＮＡエレメントであり、ＧＣ高含有ＲＮＡエレメントは、核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の５’ＵＴＲにおけるコザックコンセンサス配列の上流に位置する。いくつかの実施形態では、ＧＣ高含有エレメントは、表２０に示される配列Ｖ２を含み、この配列Ｖ２は、核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の５’ＵＴＲにおけるコザックコンセンサス配列の上流に直接隣接して位置する。いくつかの実施形態では、ＧＣ高含有エレメントは、表２０に示される配列Ｖ２を含み、この配列Ｖ２は、核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の５’ＵＴＲにおけるコザックコンセンサス配列の１塩基上流、２塩基上流、３塩基上流、４塩基上流、５塩基上流、６塩基上流、７塩基上流、８塩基上流、９塩基上流、または１０塩基上流に位置する。他の実施形態では、ＧＣ高含有エレメントは、表２０に示される配列Ｖ２を含み、この配列Ｖ２は、核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の５’ＵＴＲにおけるコザックコンセンサス配列の１〜３塩基上流、３〜５塩基上流、５〜７塩基上流、７〜９塩基上流、９〜１２塩基上流、または１２〜１５塩基上流に位置する。
いくつかの実施形態では、本開示は、少なくとも１つの修飾を含む修飾核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））を提供し、少なくとも１つの修飾は、表２０に示される配列ＥＫ［ＧＣＣＧＣＣ］またはその誘導体もしくは類似体を含むＧＣ高含有ＲＮＡエレメントであり、ＧＣ高含有ＲＮＡエレメントは、核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の５’ＵＴＲにおけるコザックコンセンサス配列の上流に位置する。いくつかの実施形態では、ＧＣ高含有エレメントは、表２０に示される配列ＥＫを含み、この配列ＥＫは、核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の５’ＵＴＲにおけるコザックコンセンサス配列の上流に直接隣接して位置する。いくつかの実施形態では、ＧＣ高含有エレメントは、表２０に示される配列ＥＫを含み、この配列ＥＫは、核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の５’ＵＴＲにおけるコザックコンセンサス配列の１塩基上流、２塩基上流、３塩基上流、４塩基上流、５塩基上流、６塩基上流、７塩基上流、８塩基上流、９塩基上流、または１０塩基上流に位置する。他の実施形態では、ＧＣ高含有エレメントは、表２０に示される配列ＥＫを含み、この配列ＥＫは、核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の５’ＵＴＲにおけるコザックコンセンサス配列の１〜３塩基上流、３〜５塩基上流、５〜７塩基上流、７〜９塩基上流、９〜１２塩基上流、または１２〜１５塩基上流に位置する。
いくつかの実施形態では、本開示は、少なくとも１つの修飾を含む修飾核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））を提供し、少なくとも１つの修飾は、表２０に示される配列Ｖ１［ＣＣＣＣＧＧＣＧＣＣ］（配列番号８０）またはその誘導体もしくは類似体を含むＧＣ高含有ＲＮＡエレメントであり、ＧＣ高含有ＲＮＡエレメントは、核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の５’ＵＴＲにおけるコザックコンセンサス配列の上流に位置し、５’ＵＴＲは、表２０に示される下記の配列を含む：
ＧＧＧＡＡＡＴＡＡＧＡＧＡＧＡＡＡＡＧＡＡＧＡＧＴＡＡＧＡＡＧＡＡＡＴＡＴＡＡＧＡ（配列番号７７）。
いくつかの実施形態では、ＧＣ高含有エレメントは、表２０に示される配列Ｖ１を含み、この配列Ｖ１は、表２０に示される５’ＵＴＲ配列におけるコザックコンセンサス配列の上流に直接隣接して位置する。いくつかの実施形態では、ＧＣ高含有エレメントは、表２０に示される配列Ｖ１を含み、この配列Ｖ１は、核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の５’ＵＴＲにおけるコザックコンセンサス配列の１塩基上流、２塩基上流、３塩基上流、４塩基上流、５塩基上流、６塩基上流、７塩基上流、８塩基上流、９塩基上流、または１０塩基上流に位置し、５’ＵＴＲは、表２０に示される下記の配列を含む：
ＧＧＧＡＡＡＴＡＡＧＡＧＡＧＡＡＡＡＧＡＡＧＡＧＴＡＡＧＡＡＧＡＡＡＴＡＴＡＡＧＡ（配列番号７７）。
他の実施形態では、ＧＣ高含有エレメントは、表２０に示される配列Ｖ１を含み、この配列Ｖ１は、核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の５’ＵＴＲにおけるコザックコンセンサス配列の１〜３塩基上流、３〜５塩基上流、５〜７塩基上流、７〜９塩基上流、９〜１２塩基上流、または１２〜１５塩基上流に位置し、５’ＵＴＲは、表２０に示される下記の配列を含む：
ＧＧＧＡＡＡＴＡＡＧＡＧＡＧＡＡＡＡＧＡＡＧＡＧＴＡＡＧＡＡＧＡＡＡＴＡＴＡＡＧＡ（配列番号７７）。
いくつかの実施形態では、５’ＵＴＲは、表２０に示される下記の配列を含む：
ＧＧＧＡＡＡＴＡＡＧＡＧＡＧＡＡＡＡＧＡＡＧＡＧＴＡＡＧＡＡＧＡＡＡＴＡＴＡＡＧＡＣＣＣＣＧＧＣＧＣＣＧＣＣＡＣＣ（配列番号７８）
いくつかの実施形態では、５’ＵＴＲは、表２０に示される下記の配列を含む：
ＧＧＧＡＡＡＴＡＡＧＡＧＡＧＡＡＡＡＧＡＡＧＡＧＴＡＡＧＡＡＧＡＡＡＴＡＴＡＡＧＡＣＣＣＣＧＧＣＧＣＣＡＣＣ（配列番号７９）
Figure 2021512090
いくつかの実施形態では、本開示は、少なくとも１つの修飾を含む修飾核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））を提供し、少なくとも１つの修飾は、ヘアピンまたはステムループを形成する順序でヌクレオチドまたはその誘導体もしくは類似体が連結された配列を含む安定なＲＮＡ二次構造を含むＧＣ高含有ＲＮＡエレメントである。いくつかの実施形態では、安定なＲＮＡ二次構造は、コザックコンセンサス配列の上流に位置する。いくつかの実施形態では、安定なＲＮＡ二次構造は、コザックコンセンサス配列の約３０ヌクレオチド上流、約２５ヌクレオチド上流、約２０ヌクレオチド上流、約１５ヌクレオチド上流、約１０ヌクレオチド上流、または約５ヌクレオチド上流に位置する。いくつかの実施形態では、安定なＲＮＡ二次構造は、コザックコンセンサス配列の約２０ヌクレオチド上流、約１５ヌクレオチド上流、約１０ヌクレオチド上流、または約５ヌクレオチド上流に位置する。いくつかの実施形態では、安定なＲＮＡ二次構造は、コザックコンセンサス配列の約５ヌクレオチド上流、約４ヌクレオチド上流、約３ヌクレオチド上流、約２ヌクレオチド上流、約１ヌクレオチド上流に位置する。別の実施形態では、安定なＲＮＡ二次構造は、コザックコンセンサス配列の約１５〜３０ヌクレオチド上流、約１５〜２０ヌクレオチド上流、約１５〜２５ヌクレオチド上流、約１０〜１５ヌクレオチド上流、または約５〜１０ヌクレオチド上流に位置する。別の実施形態では、安定なＲＮＡ二次構造は、コザックコンセンサス配列の１２〜１５ヌクレオチド上流に位置する。別の実施形態では、安定なＲＮＡ二次構造は、約−３０ｋｃａｌ／ｍｏｌ、約−２０〜−３０ｋｃａｌ／ｍｏｌ、約−２０ｋｃａｌ／ｍｏｌ、約−１０〜−２０ｋｃａｌ／ｍｏｌ、約−１０ｋｃａｌ／ｍｏｌ、約−５〜−１０ｋｃａｌ／ｍｏｌのデルタＧを有する。
いくつかの実施形態では、修飾は、ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームに機能可能なように連結され、修飾とオープンリーディングフレームとは異種である。
いくつかの実施形態では、ＧＣ高含有ＲＮＡエレメントの配列は、グアニン（Ｇ）核酸塩基及びシトシン（Ｃ）核酸塩基から排他的に構成される。
本明細書に記載の所望の翻訳制御活性を与えるＲＮＡエレメントは、既知の手法（リボソームプロファイリングなど）を使用して同定され、特徴付けられ得る。リボソームプロファイリングは、ＰＩＣ及び／またはリボソームがｍＲＮＡに結合した位置を決定することを可能にする手法である（例えば、Ｉｎｇｏｌｉａ ｅｔ ａｌ．，（２００９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３２４（５９２４）：２１８−２３（当該文献は、参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。この手法は、核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の領域またはセグメントが、ＰＩＣ及び／またはリボソームによってヌクレアーゼ消化から保護されることに基づくものである。保護の結果、「フットプリント」と呼ばれる３０ｂｐのＲＮＡフラグメントが生じる。ＲＮＡフットプリントの配列及び頻度は、当該技術分野で知られる方法（例えば、ＲＮＡ−ｓｅｑ）によって解析され得る。フットプリントは、おおまかには、リボソームのＡ部位に中心がくる。核酸分子（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））に沿って特定の位置または場所にＰＩＣまたはリボソームが留まるのであれば、こうした位置に相対的に高頻度でフットプリントが生じることになる。ＰＩＣ及び／またはリボソームの処理能力が低下する位置ではフットプリントがより多く生じ、ＰＩＣ及び／またはリボソームの処理能力が高まる位置ではフットプリントが少なくなることが研究によって示されている（Ｇａｒｄｉｎ ｅｔ ａｌ．，（２０１４）ｅＬｉｆｅ ３：ｅ０３７３５）。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＲＮＡエレメントをいずれか１つまたは複数含むポリヌクレオチドに沿う個別の位置もしくは場所にＰＩＣもしくはリボソームが滞留する時間、または当該個別の位置もしくは場所をＰＩＣもしくはリボソームが占有する時間は、リボソームプロファイリングによって決定される。
タンパク質発現を低減するための薬剤
一実施形態では、脂質ベースの組成物（例えば、ＬＮＰ）と結合／によってカプセル化される薬剤は、タンパク質発現を低減する（すなわち、減少させる、抑制する、下方制御する）薬剤である。一実施形態では、薬剤は、脂質ベースの組成物が送達される標的免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、骨髄系細胞）におけるタンパク質発現を低減する。付加的または代替的に、別の実施形態では、薬剤を用いることで、脂質ベースの組成物が送達される標的免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、骨髄系細胞）と比較して、他の細胞（例えば、バイスタンダー細胞）におけるタンパク質発現が低減される。タンパク質発現の低減に使用され得る薬剤の型の例としては、限定されないが、マイクロＲＮＡ結合部位（複数可）（ｍｉＲ結合部位）を含むｍＲＮＡ、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、アンタゴｍｉｒ、低分子（短鎖）干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）（ショートマー及びダイサー基質ＲＮＡを含む）、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）分子、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、ロックド核酸（ＬＮＡ）、ならびにＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９技術が挙げられる。
ＲＮＡ干渉分子
ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）は、標的ｍＲＮＡ分子を中和することによってＲＮＡ分子が遺伝子の発現または翻訳を抑制する生物学的プロセスを指す。ＲＮＡｉは、ＲＮＡ誘導型サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）によって制御される遺伝子サイレンシングプロセスであり、細胞の細胞質において短い二本鎖ＲＮＡ分子（ｄｓＲＮＡ）によって開始される。低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）及びマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）という２つの型の低分子リボ核酸分子がＲＮＡ干渉の中心をなしている。ＲＮＡｉは天然の細胞プロセスであるが、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏで目的の標的遺伝子／ｍＲＮＡの発現を抑制するためにＲＮＡｉの構成要素を合成及び利用することも行われている。
天然のプロセスとして、ｄｓＲＮＡは、リボヌクレアーゼタンパク質であるダイサーを活性化することによってＲＮＡｉを開始する。ダイサーは、ｄｓＲＮＡ及び短鎖ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）に結合し、これらを切断して２０〜２５塩基対の二本鎖フラグメントを生成する。こうした短い二本鎖フラグメントは、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）と呼ばれる。次に、こうしたｓｉＲＮＡは、ほどかれて一本鎖になり、ＲＩＳＣローディング複合体（ＲＬＣ）によって活性ＲＩＳＣに組み込まれる。ＲＩＳＣに組み込まれた後、ｓｉＲＮＡは、その標的ｍＲＮＡと塩基対を形成し、当該標的ｍＲＮＡを切断することによって、当該標的ｍＲＮＡが翻訳鋳型として使用されることを阻止する。
ＲＮＡｉの現象には、広義では、ｍｉＲＮＡの遺伝子サイレンシング作用も含まれる。マイクロＲＮＡは、（例えば、発生段階に）遺伝子発現の制御を支援する遺伝子的にコードされた非コードＲＮＡである。天然起源の成熟ｍｉＲＮＡは、外来性のｄｓＲＮＡから生じるｓｉＲＮＡに構造的に類似しているが、ｍｉＲＮＡは、成熟する前に広範な転写後修飾を受ける。この転写後修飾には、ｐｒｅ−ｍｉＲＮＡのｄｓＲＮＡ部分がダイサーによって切断されることで、ＲＩＳＣ複合体に組み込まれ得る成熟ｍｉＲＮＡ分子が生じることが含まれる。
したがって、一実施形態では、脂質ベースの組成物（例えば、ＬＮＰ）と結合／によってカプセル化される薬剤は、ｓｉＲＮＡ及びｍｉＲＮＡを含めて、ＲＮＡｉ分子（すなわち、ＲＮＡ干渉を媒介するか、またはＲＮＡ干渉に関与する分子）であり、ｓｉＲＮＡ及びｍｉＲＮＡはそれぞれ、以下にさらに詳述される。
低分子干渉ＲＮＡ
低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）は、短鎖干渉ＲＮＡまたはサイレンシングＲＮＡとも称され、ＲＮＡｉ経路内で機能することで相補的ヌクレオチド配列によって特定の標的配列の発現を妨害するクラスの二本鎖ＲＮＡ分子であり、このクラスの二本鎖ＲＮＡ分子は、典型的には、２０〜２５塩基対の長さを有する。ｓｉＲＮＡは、転写後のｍＲＮＡを分解することによって遺伝子発現を抑制し、それによって翻訳を阻止する。本明細書で使用される「ｓｉＲＮＡ」という用語は、当該技術分野で知られるすべての形態のｓｉＲＮＡを包含し、こうしたｓｉＲＮＡには、限定されないが、ショートマー、ロングマー、２’５’−異性体、及びダイサー基質ＲＮＡが含まれる。天然起源のｓｉＲＮＡ及び人工的に合成されたｓｉＲＮＡ、ならびに治療におけるその使用（例えば、ナノ粒子による送達を行うもの）については、当該技術分野で報告されている（例えば、Ｈａｍｉｌｔｏｎ ａｎｄ Ｂａｌｃｏｍｂｅ（１９９９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８６：９５０−９５２、Ｅｌｂａｓｈｉｒ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｎａｔｕｒｅ ４１１：４９４−４９８、Ｓｈｅｎ ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐ．１９：３６７−３７３、Ｗｉｔｔｒｕｐ ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｇｅｎｅｔ．１６：５４３−５５２を参照のこと）。
したがって、一実施形態では、脂質ベースの組成物（例えば、ＬＮＰ）と結合／によってカプセル化される薬剤はｓｉＲＮＡである。一実施形態では、ｓｉＲＮＡは、免疫細胞において発現する標的配列の発現を抑制する。一実施形態では、ｓｉＲＮＡは、Ｔ細胞において発現する標的配列の発現を抑制する。一実施形態では、ｓｉＲＮＡは、Ｂ細胞において発現する標的配列の発現を抑制する。一実施形態では、ｓｉＲＮＡは、樹状細胞において発現する標的配列の発現を抑制する。一実施形態では、ｓｉＲＮＡは、骨髄系細胞において発現する標的配列の発現を抑制する。
別の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、骨髄系細胞）における転写因子（例えば、ＦｏｘＰ３、Ｔ−ｂｅｔ、ＲｏＲｇｔ、ＳＴＡＴ３、ＡｈＲ、ＮＦｋＢ）の発現を抑制する。一実施形態では、ｓｉＲＮＡは、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、骨髄系細胞）における細胞質タンパク質（例えば、Ｍｃｌ−１、ＨＤＡＣ１０ヒストンデアセチラーゼ、アスパラギニルエンドペプチダーゼ（ＡＥＰ）、ＳＯＣＳ１、ＳＯＣＳ２、ＰＰＡＲｇ、ＧＩＬＺ、ＡＭＫａ１、ＡＭＫａ２、ＳＨＰ−１、ＳＨＰ−２、ＣＡＭＫＫ２、ＩＤＯ１、ＩＤＯ２、ＴＤＯ）の発現を抑制する。別の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、骨髄系細胞）における膜貫通型タンパク質（例えば、細胞表面受容体（抗体、Ｔ細胞受容体、免疫チェックポイント阻害物質など））の発現を抑制する。別の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、骨髄系細胞）における分泌タンパク質（例えば、サイトカイン、ケモカイン）の発現を抑制する。別の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、骨髄系細胞）における細胞内シグナル伝達タンパク質の発現を抑制する。別の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、骨髄系細胞）における酵素（例えば、ＡＭＰＫａ１、ＡＭＰＫａ２、ＨＤＡＣ１０、ＡＥＰ、ＳＨＰ−１、ＳＨＰ−２、ＣＡＭＫＫ２、ＩＤＯ１、ＩＤＯ２、ＴＤＯ）の発現を抑制する。
マイクロＲＮＡ
マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）は、遺伝子発現のＲＮＡサイレンシング及び転写後制御において機能する非コードＲＮＡ低分子（典型的には、約２２ヌクレオチドを含む）である。ｍｉＲＮＡは、ｍＲＮＡ分子内の相補的配列との塩基対形成、ｍＲＮＡの切断誘導、ｍＲＮＡのポリＡ尾部の短縮化を介するｍＲＮＡの不安定化、及び／またはリボソームがｍＲＮＡをタンパク質に変換する翻訳効率の低減、を介して遺伝子発現を抑制する。ｍＲＮＡの切断に関しては、ｍｉＲＮＡと標的ｍＲＮＡ配列との間に完全な相補性が存在する場合、Ａｇｏ２タンパク質によるｍＲＮＡの切断が可能となることで、ｍＲＮＡの分解誘導に繋がることが実証されている。ｍｉＲＮＡ及びその機能については、当該技術分野で報告されている（例えば、Ａｍｂｒｏｓ（２００４）Ｎａｔｕｒｅ４３１：３５０−３５５、Ｂａｒｔｅｌ（２００４）Ｃｅｌｌ １１６：２８１−２９７、Ｂａｒｔｅｌ（２００９）Ｃｅｌｌ １３６：２１５−２３３、Ｆａｂｉａｎｅｔ ａｌ．（２０１０）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．７９：３５１−３７９を参照のこと）。
したがって、一実施形態では、脂質ベースの組成物（例えば、ＬＮＰ）と結合／によってカプセル化される薬剤は、ｍｉＲＮＡである。一実施形態では、ｍｉＲＮＡは、免疫細胞において発現する標的配列の発現を抑制する。一実施形態では、ｍｉＲＮＡは、Ｔ細胞において発現する標的配列の発現を抑制する。一実施形態では、ｍｉＲＮＡは、Ｂ細胞において発現する標的配列の発現を抑制する。一実施形態では、ｍｉＲＮＡは、樹状細胞において発現する標的配列の発現を抑制する。一実施形態では、ｍｉＲＮＡは、骨髄系細胞において発現する標的配列の発現を抑制する。
別の実施形態では、ｍｉＲＮＡは、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、骨髄系細胞）における転写因子（例えば、ＦｏｘＰ３、Ｔ−ｂｅｔ、ＲｏＲｇｔ、ＳＴＡＴ３、ＡｈＲ、ＮＦｋＢ）の発現を抑制する。一実施形態では、ｍｉＲＮＡは、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、骨髄系細胞）における細胞質タンパク質（例えば、Ｍｃｌ−１、ＨＤＡＣ１０ヒストンデアセチラーゼ、アスパラギニルエンドペプチダーゼ（ＡＥＰ）、ＳＯＣＳ１、ＳＯＣＳ２、ＰＰＡＲｇ、ＧＩＬＺ、ＡＭＫａ１、ＡＭＫａ２、ＳＨＰ−１、ＳＨＰ−２、ＣＡＭＫＫ２、ＩＤＯ１、ＩＤＯ２、ＴＤＯ）の発現を抑制する。別の実施形態では、ｍｉＲＮＡは、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、骨髄系細胞）における膜貫通型タンパク質（例えば、細胞表面受容体（抗体、Ｔ細胞受容体、免疫チェックポイント阻害物質など））の発現を抑制する。別の実施形態では、ｍｉＲＮＡは、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、骨髄系細胞）における分泌タンパク質（例えば、サイトカイン、ケモカイン）の発現を抑制する。別の実施形態では、ｍｉＲＮＡは、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、骨髄系細胞）における細胞内シグナル伝達タンパク質の発現を抑制する。別の実施形態では、ｍｉＲＮＡは、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、骨髄系細胞）における酵素（例えば、ＡＭＰＫａ１、ＡＭＰＫａ２、ＨＤＡＣ１０、ＡＥＰ、ＳＨＰ−１、ＳＨＰ−２、ＣＡＭＫＫ２、ＩＤＯ１、ＩＤＯ２、ＴＤＯ）の発現を抑制する。
免疫細胞活性の調節及び／または免疫応答の調節について、適切なｍｉＲＮＡの例としては、限定されないが、Ｌｅｔ−７ｄ−５ｐ、ｍｉＲ−７、ｍｉＲ−１０ａ、ｍｉＲ−１０ｂ、ｍｉＲ−１５、ｍｉＲ−１８ａ、ｍｉＲ−２０ａ、ｍｉＲ−２０ｂ、ｍｉＲ−２１、ｍｉＲ−２６ａ、ｍｉＲ−３４ａ、ｍｉＲ−９６、ｍｉＲ−９９ａ、ｍｉＲ−１００、ｍｉＲ−１２４、ｍｉＲ−１２５ａ、ｍｉＲ−１２６、ｍｉＲ−１４２−３ｐ、ｍｉＲ−１４６、ｍｉＲ−１５０、ｍｉＲ−１５５、ｍｉＲ−１８１ａ、及びｍｉＲ−２１０が挙げられる。
アンタゴｍｉｒ
アンタゴｍｉｒは、当該技術分野では抗ｍｉＲまたはブロックｍｉｒとしても知られており、ｍＲＮＡ分子上の所望の部位に他の分子が結合することを阻止するクラスの化学的に操作されたオリゴヌクレオチドである。アンタゴｍｉｒは、内在性ｍｉＲＮＡのサイレンシングを行うために使用される。アンタゴｍｉｒは、特定のｍｉＲＮＡ標的に対しては完全な相補性を有し、Ａｇｏ２の切断部位に対しては誤対合を形成するか、またはＡｇｏ２による切断の抑制に繋がる何らかの塩基修飾を有する低分子合成ＲＮＡである。典型的には、アンタゴｍｉｒは、自体の分解抵抗性を向上させる修飾（２’−メトキシ基及び／またはホスホロチオエートなど）を１つ以上有する。アンタゴｍｉｒ及びその機能については、当該技術分野で報告されている（例えば、Ｋｒｕｔｚｆｅｌｄｔ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｎａｔｕｒｅ ４３８：６８５−６８９、Ｃｚｅｃｈ（２００６）Ｎｅｗ Ｅｎｇ．Ｊ．Ｍｅｄ．３５４：１１９４−１１９５を参照のこと）。
したがって、一実施形態では、脂質ベースの組成物（例えば、ＬＮＰ）と結合／によってカプセル化される薬剤は、アンタゴｍｉｒである。アンタゴｍｉｒは遺伝子発現を下方制御する内在性ｍｉＲＮＡの活性を遮断する（抑制する）ものであるため、アンタゴｍｉｒが作用すると、目的遺伝子の発現の増進（すなわち、増加、刺激、上方制御）に繋がることになり得る。したがって、一実施形態では、アンタゴｍｉｒは、免疫細胞において発現する標的配列の発現を増進する。一実施形態では、アンタゴｍｉｒは、Ｔ細胞において発現する標的配列の発現を増進する。一実施形態では、アンタゴｍｉｒは、Ｂ細胞において発現する標的配列の発現を増進する。一実施形態では、アンタゴｍｉｒは、樹状細胞において発現する標的配列の発現を増進する。一実施形態では、アンタゴｍｉｒは、骨髄系細胞において発現する標的配列の発現を増進する。
別の実施形態では、アンタゴｍｉｒは、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、骨髄系細胞）における転写因子（例えば、ＦｏｘＰ３、Ｔ−ｂｅｔ、ＲｏＲｇｔ、ＳＴＡＴ３、ＡｈＲ、ＮＦｋＢ）の発現を増進する。一実施形態では、アンタゴｍｉｒは、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、骨髄系細胞）における細胞質タンパク質（例えば、Ｍｃｌ−１、ＨＤＡＣ１０ヒストンデアセチラーゼ、アスパラギニルエンドペプチダーゼ（ＡＥＰ）、ＳＯＣＳ１、ＳＯＣＳ２、ＰＰＡＲｇ、ＧＩＬＺ、ＡＭＫａ１、ＡＭＫａ２、ＳＨＰ−１、ＳＨＰ−２、ＣＡＭＫＫ２、ＩＤＯ１、ＩＤＯ２、ＴＤＯ）の発現を増進する。別の実施形態では、アンタゴｍｉｒは、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、骨髄系細胞）における膜貫通型タンパク質（例えば、細胞表面受容体（抗体、Ｔ細胞受容体、免疫チェックポイント阻害物質など））の発現を増進する。別の実施形態では、アンタゴｍｉｒは、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、骨髄系細胞）における分泌タンパク質（例えば、サイトカイン、ケモカイン）の発現を増進する。別の実施形態では、アンタゴｍｉｒは、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、骨髄系細胞）における細胞内シグナル伝達タンパク質の発現を増進する。別の実施形態では、アンタゴｍｉｒは、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、骨髄系細胞）における酵素（例えば、ＡＭＰＫａ１、ＡＭＰＫａ２、ＨＤＡＣ１０、ＡＥＰ、ＳＨＰ−１、ＳＨＰ−２、ＣＡＭＫＫ２、ＩＤＯ１、ＩＤＯ２、ＴＤＯ）の発現を増進する。
免疫細胞活性の調節及び／または免疫応答の調節について、適切なアンタゴｍｉｒの例としては、限定されないが、ｍｉＲ−７、ｍｉＲ−１５ａ、ｍｉＲ−１６、ｍｉＲ−１７、ｍｉＲ−２１、ｍｉＲ−２２、ｍｉＲ−２３、ｍｉＲ−２４、ｍｉＲ−２５、ｍｉＲ−２７、ｍｉＲ−３１、ｍｉＲ−９２、ｍｉＲ−１０６ｂ、ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−１４８ａ、ｍｉＲ−１５５、及びｍｉＲ−２１０から選択されるｍｉＲＮＡを特異的に標的とするアンタゴｍｉｒが挙げられる。
アンチセンスＲＮＡ
アンチセンスＲＮＡ（ａｓＲＮＡ）は、当該技術分野ではアンチセンス転写物とも称され、タンパク質をコードするメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）に相補性を有し、それとハイブリダイゼーションすることによってタンパク質への当該ｍＲＮＡの翻訳を遮断する天然起源の一本鎖ＲＮＡ分子または合成的に生成される一本鎖ＲＮＡ分子である。アンチセンス転写物は、短鎖（２００ヌクレオチド未満）の非コードＲＮＡ（ｎｃＲＮＡ）及び長鎖（２００ヌクレオチド超）のｎｃＲＮＡに分類される。ａｓＲＮＡの主要な天然機能は遺伝子発現を制御することにあり、遺伝子ノックダウン及び治療用途向けの研究ツールとして合成バージョンが広く使用されている。アンチセンスＲＮＡ及びその機能については、当該技術分野で報告されている（例えば、Ｗｅｉｓｓ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌｅｃ．Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．５５：３３４−３５８、Ｗａｈｌｓｔｅｄｔ（２０１３）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃ．１２：４３３−４４６、Ｐｅｌｅｃｈａｎｏ ａｎｄ Ｓｔｅｉｎｍｅｔｚ（２０１３）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｇｅｎｅｔ．１４：８８０−８９３を参照のこと）。したがって、一実施形態では、脂質ベースの組成物（例えば、ＬＮＰ）と結合／によってカプセル化される薬剤は、アンチセンスＲＮＡをコードするか、またはアンチセンスＲＮＡである核酸（例えば、ＲＮＡまたはＤＮＡ）である。
リボザイム
リボザイム（リボ核酸酵素）は、タンパク質酵素の作用と同様の生化学反応を触媒することが可能なＲＮＡ分子である。天然のリボザイムまたはｉｎ ｖｉｔｒｏでの進化を経たリボザイムの最も一般的な活性は、ＲＮＡ及びＤＮＡの切断またはライゲーション、ならびにペプチド結合形成である。さらに、当該技術分野では、良好な酵素活性を有する自己切断ＲＮＡについて報告されている。リボザイムの治療的使用、具体的には、ＲＮＡベースのウイルスの切断に向けたリボザイムの治療的使用が検討されているところである。リボザイム及びその機能については、当該技術分野で報告されている（例えば、Ｋｒｕｇｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９８２）Ｃｅｌｌ ３１：１４７−１５７、Ｔａｎｇ ａｎｄ Ｂａｋｅｒ（２０００）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９７：８４−８９、Ｆｅｄｏｒ ａｎｄ Ｗｉｌｌｉａｍｓｏｎ（２００５）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．６：３９９−４１２を参照のこと）。したがって、一実施形態では、脂質ベースの組成物（例えば、ＬＮＰ）と結合／によってカプセル化される薬剤は、リボザイムをコードするか、またはリボザイムである核酸（例えば、ＲＮＡまたはＤＮＡ）である。
低分子ヘアピンＲＮＡ
低分子（または短鎖）ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）は、ＲＮＡ干渉を介する標的遺伝子発現のサイレンシングに使用され得る型の、タイトなヘアピンターンを有する合成ＲＮＡ分子である。ｓｈＲＮＡは、分解及び代謝回転の速度が比較的遅いという点において有利なＲＮＡ干渉メディエーターである。細胞におけるｓｈＲＮＡの発現は、典型的には、ｓｈＲＮＡをコードするプラスミドを送達することによって達成されるか、あるいはｓｈＲＮＡをコードするウイルスベクター（例えば、アデノ随伴ウイルスベクター、アデノウイルスベクター、もしくはレンチウイルスベクター）または細菌ベクターを介して達成される。ｓｈＲＮＡ及び遺伝子治療におけるその使用については、当該技術分野で報告されている（例えば、Ｐａｄｄｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．１６：９４８−９５８、Ｘｉａｎｇ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：６９７−７０２、Ｂｕｒｎｅｔｔ ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｊｏｕｒｎａｌ ６：１１３０−１１４６を参照のこと）。したがって、一実施形態では、脂質ベースの組成物（例えば、ＬＮＰ）と結合／によってカプセル化される薬剤は、ｓｈＲＮＡをコードするか、またはｓｈＲＮＡである核酸（例えば、ＲＮＡまたはＤＮＡ）である。
ロックド核酸
ロックド核酸は、閉鎖ＲＮＡとも称され、２’位の酸素と４’位の炭素とを連結する架橋が加わることで自体のリボース部分が修飾された修飾ＲＮＡヌクレオチド分子である。この架橋によって、リボースが３’−エンド（ノース）立体配座に「ロック」される。ＬＮＡヌクレオチドは、いつでも必要に応じて、オリゴヌクレオチドにおいてＤＮＡ残基またはＲＮＡ残基と組み合わせることができる上、ワトソン・クリックの塩基対形成則に従ってＤＮＡまたはＲＮＡとハイブリダイゼーションすることも可能である。ロックドリボース立体配座は、塩基のスタッキング及び骨格の事前形成を増進するものである。このことによって、ＬＮＡヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーション特性（例えば、融解温度）が顕著に向上する。ＬＮＡ分子及びその特性については、当該技術分野で報告されている（例えば、Ｏｂｉｋａ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．３８：８７３５−８７３８、Ｋｏｓｈｋｉｎ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ５４：３６０７−３６３０、Ｅｌｍｅｎ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．３３：４３９−４４７を参照のこと）。したがって、一実施形態では、脂質ベースの組成物（例えば、ＬＮＰ）と結合／によってカプセル化される薬剤は、１つ以上のロックド核酸（ＬＮＡ）ヌクレオチドを含む核酸（例えば、ＲＮＡまたはＤＮＡ）である。
ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９剤
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の脂質ベースの組成物（例えば、脂質ナノ粒子）は、ＣＲＩＳＰＲ（規則的な間隔でクラスター化した短鎖反復回文配列）−Ｃａｓ９系と関連する方法において有用である。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９は、ゲノムの編集に使用されており、Ｃａｓ９酵素によってＤＮＡが切断され、新たな遺伝配列を挿入することが可能になる。切断が望まれる特定のＤＮＡ箇所へのＣａｓ９の指向化にはシングルガイドＲＮＡが使用される。しかしながら、免疫細胞、具体的にはＴ細胞におけるゲノム編集は相当困難な課題であることが報告されている。
ｉｎ ｖｉｔｒｏで細胞の電気穿孔を行うことによってＴ細胞におけるＣＸＣＲ４及びＰＤ−１の発現を下方制御する能力をＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９が有することが最近の研究によって示されている（Ｓｃｈｕｍａｎｎ、Ｋ．ｅｔ ａｌ．ＰＮＡＳ，Ｖｏｌ．１１２（３３）：１０４３７−１０４４３，Ａｕｇｕｓｔ １８，２０１５、Ｒｕｐｐ，Ｌ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ，Ｖｏｌ．７，Ａｒｔｉｃｌｅ ｎｕｍｂｅｒ ７３７，２０１７（これらの文献はそれぞれ、参照によって本明細書に組み込まれる））。ｉｎ ｖｉｖｏで免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、骨髄系細胞）にＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９を導入することについては、未だにニーズが満たされていない状況である。したがって、本開示は、本明細書に記載の免疫細胞送達脂質を含む脂質ベースの組成物を使用することによってＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９系を用いて免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、骨髄系細胞）のゲノムを編集する方法を提供する。したがって、いくつかの実施形態では、脂質（例えば、ＬＮＰ）と結合／によってカプセル化される薬剤（複数可）は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９系の構成要素の１つ以上である。例えば、Ｃａｓ９酵素及びシングルガイドＲＮＡが、本明細書に記載の脂質ベースの組成物と結合／にカプセル化され得る。必要に応じて、修飾対象の目的遺伝物質（例えば、ＤＮＡ）もまた、脂質ベースの組成物にカプセル化され得るか、または代替的に、脂質ベースの組成物によって送達されるＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９系が、標的免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、骨髄系細胞）における内在性の目的遺伝物質に作用し得る。
標的タンパク質の例
標的分子（例えば、ＬＮＰに含められる核酸によってコードされるもの、またはノックダウンの標的とされるもの）は、所望の結果に基づいて選択され得る。免疫細胞が本発明のＬＮＰの標的となることが今回明らかになったことを考慮すれば、当業者は、当該技術分野で認知されている多くの免疫調節分子を免疫細胞に送達して免疫応答を増進または低減することができる。そのような免疫調節分子（例えば、核酸分子（ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ＲＮＡｉなど））の例は当該技術分野でよく知られており、さらに、そのような分子の標的の例もまた当該技術分野でよく知られており、そのような分子の例は本明細書に開示される。タンパク質を（例えばｍＲＮＡを使用して）発現させる場合、そのようなタンパク質は、全長タンパク質であるか、または代替的には、その機能性フラグメント（例えば、全長タンパク質の機能活性が保持されるように１つ以上の機能性ドメインを含む、当該全長タンパク質のフラグメント）であり得る。さらに、ある特定の実施形態では、ＬＮＰに含まれる核酸によってコードされるタンパク質は、修飾タンパク質であり得、例えば、１つ以上の異種ドメインを含み得、例えば、こうしたタンパク質は、当該タンパク質に天然には生じないドメインを当該タンパク質の機能が改変されるように１つ以上含む融合タンパク質であり得る。異種ドメインを含むタンパク質の例は、キメラ抗原受容体（以下にさらに記載される）である。
核酸（例えば、ｍＲＮＡ）によってコードされるか、または核酸分子（例えば、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ）によって抑制され、それによって免疫応答が調節（上方制御または下方制御）され得る特定のタンパク質（例えば、サイトカイン、ケモカイン、共刺激分子、ＴｃＲ、ＣＡＲ、動員因子、転写因子、エフェクター分子）については、下記のサブセクションに詳述される。
免疫細胞中または免疫細胞上の目的タンパク質の誘導または低減は、当該技術分野で知られる標準的な方法（免疫蛍光法またはフローサイトメトリーなど）によって測定され得る。
天然起源の標的
一実施形態では、脂質ベースの組成物（例えば、ＬＮＰ）と結合／によってカプセル化される薬剤は、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、骨髄系細胞、樹状細胞）の天然起源の標的を調節する（例えば、天然起源の標的の活性を上方制御または下方制御する）。薬剤は、それ自体が天然起源の標的をコードし得るか、または（例えば、ｉｎ ｖｉｖｏの細胞（対象における細胞など）において）天然起源の標的を調節するように機能し得る。天然起源の標的は、全長標的（全長タンパクなど）であり得るか、または天然起源の標的のフラグメントもしくは一部（タンパク質のフラグメントもしくは一部など）であり得る。天然起源の標的を調節する（例えば、標的自体をコードすることによって調節するか、または標的の活性を調節するように機能することによって調節する）薬剤は、オートクリン様式で作用し得、すなわち、薬剤は、当該薬剤が送達される細胞に直接的に作用を及ぼす。付加的または代替的に、天然起源の標的を調節する薬剤は、パラクリン様式で機能し得、すなわち、薬剤は、当該薬剤が送達される細胞以外の細胞に間接的に作用を及ぼす（例えば、ある型の細胞に薬剤が送達される結果、別の型の細胞（バイスタンダー細胞など）に影響を及ぼす分子が分泌される）。天然起源の標的を調節する薬剤には、タンパク質発現を誘導する（例えば、増進する、刺激する、上方制御する）核酸分子（ｍＲＮＡ及びＤＮＡなど）が含まれる。天然起源の標的を調節する薬剤には、タンパク質発現を低減する（例えば、抑制する、減少させる、下方制御する）核酸分子（ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、及びアンタゴｍｉｒなど）も含まれる。天然起源の標的の例としては、限定されないが、可溶性タンパク質（例えば、分泌タンパク質）、細胞内タンパク質（例えば、細胞内シグナル伝達タンパク質、転写因子）、及び膜結合型または膜貫通型のタンパク質（例えば、受容体）が挙げられる。
可溶性標的
一実施形態では、脂質ベースの組成物（例えば、ＬＮＰ）と結合／によってカプセル化される薬剤は、天然起源の可溶性標的の活性を調節し、この調節は、例えば、可溶性標的自体をコードすることによって行われるか、または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、骨髄系細胞）における可溶性標的の発現（例えば、転写もしくは翻訳）を調節することによって行われる。一実施形態では、細胞は、リンパ球である。天然起源の可溶性標的の例としては、限定されないが、サイトカイン及びケモカインが挙げられる。免疫応答の刺激または抑制における特定の使用に適したサイトカイン及びケモカインについては、以下にさらに記載される。実施例１９に示されるように、本開示の脂質ベースの組成物は、可溶性標的をコードするｍＲＮＡを免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）が当該可溶性標的を発現するように当該免疫細胞に送達する上で有効である。
一実施形態では、脂質ベースの組成物（例えばＬＮＰ）を使用する方法は、免疫細胞の活性化または活性を刺激する（上方制御する、増進する）ために使用され、この刺激は、例えば、免疫応答を刺激することが望ましい状況（がん治療、または感染性疾患（例えば、ウイルス感染症、細菌感染症、真菌感染症、原虫感染症、もしくは寄生虫感染症）の治療など）において行われる。別の実施形態では、脂質ベースの組成物（例えばＬＮＰ）を使用する方法は、免疫細胞の活性化または活性を抑制する（下方制御する、低減する）ために使用され、この抑制は、例えば、免疫応答を抑制することが望ましい状況（自己免疫疾患、アレルギー、及び移植など）において行われる。
免疫細胞の活性化または活性を刺激する一実施形態では、標的タンパク質は、サイトカインである。サイトカインは、免疫系を制御する細胞内シグナル伝達のメディエーターである。免疫細胞の活性化または活性を刺激し得るサイトカインの例としては、限定されないが、ＩＬ−１（炎症誘発性サイトカイン）、ＩＬ−２（Ｔ細胞の分化を促進するＴ細胞増殖因子）、ＩＬ−３（骨髄系細胞の増殖を刺激する）、ＩＬ−４（Ｂ細胞及びＴ細胞の増殖ならびにＢ細胞の分化を刺激する）、ＩＬ−５（Ｂ細胞の増殖を刺激する）、ＩＬ−６（炎症誘発性）、ＩＬ−７（リンパ球系細胞の分化を刺激する）、ＩＬ−１２（ナイーブＴ細胞をＴｈ１細胞に分化させる）、ＩＬ−１３（活性化したＢ細胞及びＴ細胞の増殖ならびにＢ細胞の分化を刺激する）、ＩＬ−１５（Ｔ細胞及びＮＫ細胞の活性化及び増殖を制御する）、ＩＬ−１７（炎症誘発性であり、ケモカインを誘導する）、ＩＬ−１８（炎症誘発性であり、ＩＦＮの放出を促進する）、ＩＬ−２１（炎症誘発性であり、ＮＫ及びＣＴＬの増殖を制御する）、ＩＬ−２３（炎症誘発性）、ＴＮＦα（全身性の炎症を刺激し、腫瘍発生及びウイルス複製を抑制する）、ＴＮＦβ（二次リンパ器官の発達を制御する）、ＩＦＮα（ウイルス感染に対する自然免疫に関与する）、ＩＦＮβ（ウイルス感染に対する自然免疫に関与する）、ＩＦＮγ（ウイルス及び他の感染性病原体に対する自然免疫及び適応免疫に関与する）、ＧＭ−ＣＳＦ（白血球産生を刺激し、抗腫瘍性Ｔ細胞を増強する）、Ｇ−ＣＳＦ（白血球産生を刺激する）、ならびにそれらの組み合わせが挙げられる。
一実施形態では、サイトカインは、炎症誘発性サイトカインである。炎症誘発性サイトカインの例としては、限定されないが、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＴＮＦα、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、及びＩＦＮ−γが挙げられる。炎症誘発性サイトカインは、炎症応答の刺激が望まれる状況において使用することができ、例えば、がん治療またはウイルス感染症において抗腫瘍免疫を亢進させるために使用される。一実施形態では、サイトカインは、Ｔ細胞の活性化を促進する。Ｔ細胞の活性化または分化を促進するサイトカインの例としては、限定されないが、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、及びＩＦＮ−αが挙げられる。一実施形態では、サイトカインは、Ｔｈ２応答を促進する。Ｔｈ２応答を促進するサイトカインの例としては、限定されないが、ＩＬ−４及びＩＬ−１０が挙げられる。一実施形態では、サイトカインは、Ｂ細胞の活性化を促進する。Ｂ細胞の活性化を促進するサイトカインの例としては、限定されないが、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、及びＩＦＮが挙げられる。
免疫細胞の活性化または活性を刺激する一実施形態では、タンパク質は、ケモカインまたはケモカイン受容体である。ケモカインは、様々な免疫細胞（リンパ球、ナチュラルキラー細胞、及び樹状細胞を含む）の移動の制御に加えて、炎症性細胞（顆粒球及び単球／単球を含む）の輸送を制御する物質であることが実証されている。したがって、ケモカインは、炎症応答の制御にも免疫応答の制御にも関与する。さらに、ケモカインは、がん細胞の増殖性及び浸潤特性に影響を及ぼすことが示されている（ケモカインの総説については、例えば、Ｍｕｋａｉｄａ、Ｎ．ｅｔ ａｌ．（２０１４）Ｍｅｄｉａｔｏｒｓ ｏｆ Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，Ａｒｔｉｃｌｅ ＩＤ １７０３８１，ｐｇ．１−１５を参照のこと）。一実施形態では、ケモカインまたはケモカイン受容体は、制御性Ｔ細胞に作用し、こうしたケモカインまたはケモカイン受容体の例としては、限定されないが、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２８、ＣＣＲ４、及びＣＣＲ１０が挙げられる。別の実施形態では、ケモカインまたはケモカイン受容体は、細胞傷害性Ｔ細胞に作用し、こうしたケモカインまたはケモカイン受容体の例としては、限定されないが、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、及びＣＸＣＲ３が挙げられる。別の実施形態では、ケモカインまたはケモカイン受容体は、ナチュラルキラー細胞に作用し、こうしたケモカインまたはケモカイン受容体の例としては、限定されないが、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ２、ＣＣＬ８、ＣＣＬ１２、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、ＣＸ３ＣＬ１、ＣＸＣＲ３、ＣＣＲ１、ＣＣＲ５、ＣＣＲ２、及びＣＸ３ＣＲ１が挙げられる。別の実施形態では、ケモカインまたはケモカイン受容体は、未熟樹状細胞に作用し、こうしたケモカインまたはケモカイン受容体の例としては、限定されないが、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ２、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ１、ＣＣＬ１７、ＣＸＣＬ１２、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ８、及びＣＸＣＲ４が挙げられる。別の実施形態では、ケモカインまたはケモカイン受容体は、成熟樹状細胞に作用し、こうしたケモカインまたはケモカイン受容体の例としては、限定されないが、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、ＣＸＣＬ１２、ＣＣＲ７、及びＣＸＣＲ４が挙げられる。別の実施形態では、ケモカインまたはケモカイン受容体は、腫瘍関連マクロファージに作用し、こうしたケモカインまたはケモカイン受容体の例としては、限定されないが、ＣＣＬ２、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＸＣＬ１２、ＣＣＲ２、ＣＣＲ５、及びＣＸＣＲ４が挙げられる。
免疫細胞の活性化または活性を刺激する一実施形態では、タンパク質は、動員因子である。本明細書で使用される「動員因子」は、所望の位置（例えば、腫瘍部位または炎症部位）への免疫細胞の動員を促進する任意のタンパク質を指す。例えば、ある特定のケモカイン、ケモカイン受容体、及びサイトカインは、リンパ球の動員に関与することが示されている（例えば、Ｏｅｌｋｒｕｇ、Ｃ．ａｎｄ Ｒａｍａｇｅ，Ｊ．Ｍ．（２０１４）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７８：１−８を参照のこと）。動員因子の例としては、限定されないが、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ５、ＣＣＲ５、ＣＣＬ５、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１６、及びＩＦＮ−□が挙げられる。
免疫応答を抑制するための一実施形態では、タンパク質は、抑制性サイトカインであるか、または刺激性サイトカインのアンタゴニストである。一実施形態では、抑制性サイトカインは、抗炎症性タンパク質であり、こうした抗炎症性タンパク質は、ＩＬ−１０（例えば、炎症性腸疾患、関節リウマチ、及び他の自己免疫疾患の治療向け）、ＩＬ−１１（例えば、炎症性腸疾患及び他の自己免疫疾患の治療向け）、ＩＦＮ−β（例えば、多発性硬化症及び他の自己免疫疾患の治療向け）などである。別の実施形態では、タンパク質は、前述の刺激性サイトカインのいずれかのアンタゴニスト（抗サイトカイン抗体など）である。例えば、下記のサイトカインのいずれかのアンタゴニスト（例えば、抗サイトカイン抗体）が使用されることで、自己免疫疾患及び／またはアレルギーにおける免疫細胞活性が下方調節され得る：ＩＬ−５（例えば、アレルギーの治療向け）、ＩＬ−６（例えば、関節リウマチ及び他の自己免疫疾患の治療向け）、ＩＬ−１２（自己免疫の治療向け）、ＩＬ−１３（例えば、アレルギーの治療向け）、ＩＬ−１７（例えば、尋常性乾癬及び他の自己免疫疾患の治療向け）、ＩＬ−１８（例えば、自己免疫向け）、ＩＬ−２３（例えば、自己免疫向け）、ＴＮＦ−α（例えば、関節リウマチ、乾癬、炎症性腸疾患、及び他の自己免疫疾患の治療向け）、ならびにＩＦＮ−γ（例えば、自己免疫向け）。
細胞内標的
一実施形態では、脂質ベースの組成物（例えば、ＬＮＰ）と結合／によってカプセル化される薬剤は、天然起源の細胞内標的の活性を調節し、この調節は、例えば、細胞内標的自体をコードすることによって行われるか、または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、骨髄系細胞）における細胞内標的の発現（例えば、転写もしくは翻訳）を調節することによって行われる。一実施形態では、細胞は、リンパ球系細胞である。天然起源の細胞内標的の例としては、限定されないが、転写因子及び細胞シグナル伝達カスケード分子（酵素を含む）が挙げられる。免疫応答の刺激及び抑制における特定の使用に適した転写因子及び細胞内シグナル伝達カスケード分子については、以下にさらに記載される。実施例２０に示されるように、本開示の脂質ベースの組成物は、細胞内標的（例えば、転写因子）をコードするｍＲＮＡを免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）が当該細胞内標的を発現するように当該免疫細胞に送達する上で有効である。
免疫細胞の活性化または活性を刺激する一実施形態では、タンパク質標的は、転写因子である。本明細書で使用される「転写因子」は、遺伝子の転写を制御するＤＮＡ結合タンパク質を指す。一実施形態では、タンパク質は、免疫応答を亢進または極性化させる転写因子である。一実施形態では、タンパク質は、Ｉ型ＩＦＮ応答を刺激する転写因子である。別の実施形態では、タンパク質は、ＮＦκＢ介在性の炎症誘発応答を刺激する転写因子である。転写因子の例としては、限定されないが、インターフェロン制御因子（ＩＲＦ−１、ＩＲＦ−３、ＩＲＦ−５、ＩＲＦ−７、ＩＲＦ−８、及びＩＲＦ−９を含むＩＲＦ）、ＣＲＥＢ、ＲＯＲｇ、ＲＯＲｇｔ、ＳＯＣＳ、ＮＦκＢ、ＦｏｘＰ３、Ｔ−ｂｅｔ、ＳＴＡＴ３、ならびにＡｈＲが挙げられる。
免疫細胞の活性化または活性を刺激する一実施形態では、タンパク質標的は、細胞内アダプタータンパク質である。一実施形態では、細胞内アダプタータンパク質は、Ｉ型ＩＦＮ応答を刺激する。別の実施形態では、細胞内アダプタータンパク質は、ＮＦκＢ介在性の炎症誘発応答を刺激する。Ｉ型ＩＦＮ応答を刺激し、及び／またはＮＦκＢ介在性の炎症誘発応答を刺激する細胞内アダプタータンパク質の例としては、限定されないが、ＳＴＩＮＧ、ＭＡＶＳ、及びＭｙＤ８８が挙げられる。
免疫細胞の活性化または活性を刺激する一実施形態では、タンパク質標的は、細胞内シグナル伝達タンパク質である。一実施形態では、タンパク質は、ＴＬＲシグナル伝達経路の細胞内シグナル伝達タンパク質である。一実施形態では、細胞内シグナル伝達タンパク質は、Ｉ型ＩＦＮ応答を刺激する。別の実施形態では、細胞内シグナル伝達タンパク質は、ＮＦκＢ介在性の炎症誘発応答を刺激する。Ｉ型ＩＦＮ応答を刺激し、及び／またはＮＦκＢ介在性の炎症誘発応答を刺激する細胞内シグナル伝達タンパク質の例としては、限定されないが、ＭｙＤ８８、ＩＲＡＫ１、ＩＲＡＫ２、ＩＲＡＫ４、ＴＲＡＦ３、ＴＲＡＦ６、ＴＡＫ１、ＴＡＢ２、ＴＡＢ３、ＴＡＫ−ＴＡＢ１、ＭＫＫ３、ＭＫＫ４、ＭＫＫ６、ＭＫＫ７、ＩＫＫα、ＩＫＫβ、ＴＲＡＭ、ＴＲＩＦ、ＲＩＰＫ１、及びＴＢＫ１が挙げられる。
免疫応答を上方制御または下方制御するための細胞内シグナル伝達分子の他の例としては、限定されないが、Ｍｃｌ−１、ＡＭＰＫａ１、ＡＭＰＫａ２、ＧＩＬＺ、ＰＰＡＲｇ、ＨＤＡＣ１０、ＡＥＰ、ＳＨＰ−１、ＳＨＰ−２、ＣＡＭＫＫ２ ＩＤＯ１、ＩＤＯ２、及びＴＤＯが挙げられる。
免疫細胞の活性化または活性を抑制する一実施形態では、タンパク質は、転写因子であり、こうした転写因子は、例えば、免疫寛容を促進する免疫寛容原性転写因子（ＲｅｌＡ、Ｒｕｎｘ１、Ｒｕｎｘ３、及びＦｏｘＰ３など）である。
膜結合型／膜貫通型標的
一実施形態では、脂質ベースの組成物（例えば、ＬＮＰ）と結合／によってカプセル化される薬剤は、天然起源の膜結合型／膜貫通型標的の活性を調節し、この調節は、例えば、膜結合型／膜貫通型標的自体をコードすることによって行われるか、または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、骨髄系細胞）における膜結合型／膜貫通型標的の発現（例えば、転写もしくは翻訳）を調節することによって行われる。天然起源の膜結合型／膜貫通型標的の例としては、限定されないが、共刺激分子、免疫チェックポイント分子、ホーミングシグナル、及びＨＬＡ分子が挙げられる。免疫応答の刺激または抑制における特定の使用に適した膜結合型／膜貫通型標的については、以下にさらに記載される。実施例（例えば、実施例３）に示されるように、本開示の脂質ベースの組成物は、膜貫通型標的（例えば、受容体リガンド）をコードするｍＲＮＡを免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）が当該膜貫通型標的を発現するように当該免疫細胞に送達する上で有効である。
免疫細胞の活性化または活性を刺激する一実施形態では、タンパク質標的は、免疫応答を上方制御する共刺激因子であるか、または免疫応答を下方制御する共刺激因子のアンタゴニストである。免疫応答を上方制御する共刺激因子の例としては、限定されないが、ＣＤ２８、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳＬ、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ１３７、及びＣＤ１３７Ｌが挙げられる。免疫応答を下方制御することから、そのアンタゴニスト（例えば、特異的抗体）を使用することによって免疫応答を刺激できる共刺激分子の例としては、限定されないが、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、及びＣＴＬＡ−４が挙げられる。いくつかの実施形態では、本開示のＬＮＰ及び方法は、ユニバーサル免疫受容体またはＵｎｉｖＩＲ（例えば、ビオチン結合免疫受容体（ＢＢＩＲ））をコードするｍＲＮＡを発現するようにエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）を修飾する上で有用である。（例えば、米国特許公開公報ＵＳ２０１４０２３４３４８Ａ１（当該文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。ユニバーサルキメラ受容体及び／またはユニバーサルキメラ受容体を発現するエフェクター細胞と関連する他の組成物は、国際特許出願ＷＯ２０１６１２３１２２Ａ１、同ＷＯ２０１７１４３０９４Ａ１、同ＷＯ２０１３０７４９１６Ａ１、米国特許出願ＵＳ２０１６０３４８０７３Ａ１に記載されており、これらの文献はすべて、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
免疫細胞の活性化または活性を抑制する一実施形態では、タンパク質標的は、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）を下方制御する免疫チェックポイントタンパク質であり、こうした免疫チェックポイントタンパク質の例としては、限定されないが、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、及びＰＤ−Ｌ１が挙げられる。別の実施形態では、タンパク質は、免疫応答を上方制御する共刺激分子のアンタゴニスト（例えば、共刺激分子に結合するアンタゴニスト抗体）であり、こうしたアンタゴニストの例としては、限定されないが、下記の共刺激分子のアンタゴニストが挙げられる：ＣＤ２８、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳＬ、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ１３７、及びＣＤ１３７Ｌ。
一実施形態では、膜結合型／膜貫通型タンパク質標的は、ホーミングシグナルである。
一実施形態では、膜結合型／膜貫通型タンパク質標的は、ＨＬＡ分子（ＨＬＡ−Ｇなど）である。非古典的ＨＬＡクラスＩ分子であるＨＬＡ−Ｇは、ＨＬＡ−Ｇを発現する細胞を細胞溶解から保護する強力な抑制分子である。この機能は、母体免疫系による破壊からの胎児の栄養膜細胞層の保護、レシピエント免疫系による細胞溶解に対する同種移植片の保護、及び抗腫瘍免疫に対する腫瘍の保護に極めて重要であることが報告されている。したがって、ＨＬＡ−Ｇを上方制御する薬剤（ＨＬＡ−ＧをコードするｍＲＮＡなど）を使用することで、免疫介在性の細胞溶解から細胞を保護することができ、この保護は、例えば、移植レシピエントにおいて行われる。あるいは、ＨＬＡ−Ｇを下方制御する薬剤（ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、及びアンタゴｍｉｒなど）を使用することで、免疫介在性の細胞溶解を促進することができ、この促進の目的は、腫瘍を有する対象において抗腫瘍免疫を刺激することなどである。
修飾標的
一実施形態では、脂質ベースの組成物（例えば、ＬＮＰ）と結合／によってカプセル化される薬剤は、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、骨髄系細胞、樹状細胞）の修飾標的を調節する（例えば、非天然起源の標的の活性を上方制御または下方制御する）。典型的には、薬剤は、それ自体が修飾標的であるか、またはそれ自体が修飾標的をコードする。あるいは、細胞が修飾標的を発現するのであれば、薬剤は、細胞におけるこの修飾標的の活性を調節するように機能し得る。非天然起源の標的は、全長標的（全長修飾タンパク質など）であり得るか、または非天然起源の標的のフラグメントもしくは一部（修飾タンパク質のフラグメントもしくは一部など）であり得る。修飾標的を調節する薬剤は、オートクリン様式で作用し得、すなわち、薬剤は、当該薬剤が送達される細胞に直接的に作用を及ぼす。付加的または代替的に、修飾標的を調節する薬剤は、パラクリン様式で機能し得、すなわち、薬剤は、当該薬剤が送達される細胞以外の細胞に間接的に作用を及ぼす（例えば、ある型の細胞に薬剤が送達される結果、別の型の細胞（バイスタンダー細胞など）に影響を及ぼす分子が分泌される）。自体が修飾標的である薬剤には、修飾タンパク質をコードする核酸分子（ｍＲＮＡまたはＤＮＡなど）が含まれる。修飾タンパク質の例としては、限定されないが、修飾された可溶性タンパク質（例えば、分泌タンパク質）、修飾された細胞内タンパク質（例えば、細胞内シグナル伝達タンパク質、転写因子）、及び修飾された膜結合型タンパク質または膜貫通型タンパク質（例えば、受容体）が挙げられる。
修飾された可溶性標的
一実施形態では、脂質ベースの組成物（例えば、ＬＮＰ）と結合／によってカプセル化される薬剤は、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、骨髄系細胞、樹状細胞）の修飾された可溶性標的を調節する（例えば、非天然起源の可溶性標的の活性を上方制御または下方制御する）。一実施形態では、薬剤（例えば、ｍＲＮＡ）は、修飾された可溶性標的をコードする。一実施形態では、修飾された可溶性標的は、修飾されている可溶性タンパク質であり、この修飾によって、当該タンパク質の半減期（例えば、血清中半減期）が改変（例えば、長時間化または短時間化）される。半減期が改変された修飾可溶性タンパク質には、修飾サイトカイン及び修飾ケモカインが含まれる。別の実施形態では、修飾された可溶性標的は、自体が細胞表面に繋留されるようにテザーを組み込んで修飾されている可溶性タンパク質である。テザーが組み込まれた修飾可溶性タンパク質には、テザー付きサイトカイン及びテザー付きケモカインが含まれる。
修飾された細胞内標的
一実施形態では、脂質ベースの組成物（例えば、ＬＮＰ）と結合／によってカプセル化される薬剤は、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、骨髄系細胞、樹状細胞）の修飾された細胞内標的を調節する（例えば、非天然起源の細胞内標的の活性を上方制御または下方制御する）。一実施形態では、細胞は、リンパ球系細胞である。一実施形態では、薬剤（例えば、ｍＲＮＡ）は、修飾された細胞内標的をコードする。一実施形態では、修飾された細胞内標的は、細胞内タンパク質の構成的に活性な変異体（構成的に活性な転写因子または細胞内シグナル伝達分子など）である。別の実施形態では、修飾された細胞内標的は、細胞内タンパク質のドミナントネガティブな変異体（転写因子または細胞内シグナル伝達分子のドミナントネガティブな変異体など）である。別の実施形態では、修飾された細胞内標的は、改変（例えば、変異導入）された酵素（細胞内シグナル伝達カスケード内での活性が上昇または低下した変異体酵素など）である。
修飾された膜結合型／膜貫通型標的
一実施形態では、脂質ベースの組成物（例えば、ＬＮＰ）と結合／によってカプセル化される薬剤は、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、骨髄系細胞、樹状細胞）の修飾された膜結合型／膜貫通型標的を調節する（例えば、非天然起源の膜結合型／膜貫通型標的の活性を上方制御または下方制御する）。一実施形態では、薬剤（例えば、ｍＲＮＡ）は、修飾された膜結合型／膜貫通型標的をコードする。一実施形態では、修飾された膜結合型／膜貫通型標的は、膜結合型／膜貫通型タンパク質の構成的に活性な変異体（構成的に活性な細胞表面受容体（すなわち、リガンドの結合を必要とせずに当該受容体を介して細胞内シグナル伝達を活性化する）など）である。別の実施形態では、修飾された膜結合型／膜貫通型標的は、膜結合型／膜貫通型タンパク質のドミナントネガティブな変異体（細胞表面受容体のドミナントネガティブな変異体など）である。別の実施形態では、修飾された膜結合型／膜貫通型標的は、免疫シナプスのシグナル伝達を反転させる（例えば、Ｔ細胞受容体、Ｂ細胞受容体、または他の免疫細胞受容体のシグナル伝達をアゴナイズまたはアンタゴナイズする）分子である。別の実施形態では、修飾された膜結合型／膜貫通型標的は、キメラ膜結合型／膜貫通型タンパク質（キメラ細胞表面受容体など）である。
一実施形態では、修飾された膜結合型／膜貫通型標的は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）（キメラＴ細胞受容体など）であり、ＣＡＲについては、以下にさらに詳述される。
免疫細胞の活性化または活性を刺激する一実施形態では、タンパク質標的は、Ｔ細胞受容体（ＴｃＲ）またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）（当該技術分野ではキメラ免疫受容体、キメラＴ細胞受容体、人工Ｔ細胞受容体、またはＣＡＲ−Ｔとしても知られる）である。一実施形態では、タンパク質標的は、がん抗原を認識するＴｃＲまたはＣＡＲである。がん抗原を認識するＴｃＲ及びＣＡＲならびにがん免疫療法におけるその使用については、当該技術分野で報告されている（総説については、例えば、Ｎｅｗｉｃｋ，Ｋ．ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｍｅｄ．６８：１３９−１５２、Ｊａｃｋｓｏｎ，Ｈ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１３：３７０−３８３、Ｓｍｉｔｈ，Ａ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：５９−６８を参照のこと）。がん抗原を認識するＴｃＲまたはＣＡＲの例としては、限定されないが、下記の抗原のいずれかに結合するものが挙げられる：ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、ＣＥＡ、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、メソテリン、及びＰＳＭＡ。
本明細書で使用される「キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）」という用語は、所定のＣＡＲリガンドまたは抗原に結合することが可能な細胞外ドメインと、細胞外ドメインの由来元であるポリペプチドとは異なるシグナル伝達タンパク質に由来する１つ以上の細胞質ドメインを含む細胞内セグメントと、膜貫通型ドメインと、を含む人工的な膜貫通型タンパク質受容体を指す。「キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）」は、「キメラ受容体」、「Ｔ体（Ｔ−ｂｏｄｙ）」、または「キメラ免疫受容体（ＣＩＲ）」と呼ばれることもある。
「ＣＡＲ抗原」と互換的に使用される「ＣＡＲリガンド」という語句は、ＣＡＲに特異的に結合し得る任意の天然分子もしくは合成分子（例えば、小分子、タンパク質、ペプチド、脂質、糖質、核酸）またはその一部もしくはフラグメントを意味する。「細胞内シグナル伝達ドメイン」は、細胞における生物学的プロセスの活性化または抑制（例えば、免疫細胞（Ｔ細胞またはＮＫ細胞）の活性化）を生じさせるシグナルを伝達するように機能することが知られる任意のオリゴペプチドドメインまたはポリペプチドドメインを意味する。例としては、ＩＬＲ鎖、ＣＤ２８、及び／またはＣＤ３ζが挙げられる。
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、遺伝子操作された人工的な膜貫通型受容体であり、この膜貫通型受容体は、リガンドに対する任意の特異性を免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、または他の免疫細胞）に付与し、その結果、当該リガンドを認識し、それに結合すると当該エフェクター細胞を活性化する。こうした受容体は、典型的には、モノクローナル抗体の抗原特異性を免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）に付与し、それによって所望の標的集団を当該免疫細胞の標的とするために使用される。
典型的には、ＣＡＲは、１）シグナルペプチド、リガンド認識領域または抗原認識領域（例えば、ｓｃＦｖ）、及び可動性スペーサーを典型的には含む外部ドメイン、２）膜貫通型（ＴＭ）ドメイン、３）１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインを典型的には含む内部ドメイン（あるいは「活性化ドメイン」としても知られる）、という３つのドメインを含む。ＣＡＲの外部ドメインは、細胞の外側に存在し、細胞外空間に露出しており、それによって、外部ドメインは、その関連リガンドと接近して相互作用することが可能である。ＴＭドメインは、エフェクター細胞の細胞膜へのＣＡＲの固定化を可能にする。第３の内部ドメイン（「活性化ドメイン」としても知られる）は、ＣＡＲがその特定のリガンドに結合した際にエフェクター細胞が活性化することを支援する。エフェクター細胞の型に応じて、エフェクター細胞の活性化は、サイトカイン産生及びケモカイン産生の誘導、ならびに細胞の細胞溶解活性の活性化を含み得る。
したがって、本開示のＬＮＰ及び方法は、がん細胞の免疫認識及び排除を増進するための手段を提供する。一態様では、本開示のＬＮＰは、腫瘍細胞へと細胞傷害性を再指向化するＣＡＲをコードするｍＲＮＡを発現するように免疫エフェクター細胞を遺伝子操作する上で有用である。ＣＡＲは、特定の標的リガンドまたは標的抗原に結合するリガンド特異的または抗原特異的な認識ドメイン（結合ドメインとも称される）を含む。結合ドメインは、典型的には、一本鎖抗体可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、テザー付きリガンド、または共受容体の細胞外ドメインが膜貫通型ドメインに融合しており、この膜貫通型ドメインが、次に、シグナル伝達ドメイン（典型的には、ＣＤ３ζまたはＦｃＲｙに由来するシグナル伝達ドメイン）ならびに必要に応じてタンパク質（ＣＤ２８、ＣＤ１３７（４−１ＢＢとしても知られる）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０としても知られる）、及びＣＤ２７８（ＩＣＯＳとしても知られる）など）に由来する１つ以上の共刺激ドメインに連結されたものである。ＣＡＲの抗原結合ドメインが標的細胞の表面上のその標的抗原に結合すると、ＣＡＲがクラスター化し、活性化刺激がＣＡＲ含有細胞に送達される。ＣＡＲの主要な特徴は、免疫エフェクター細胞の特異性を再指向化し、それによって、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）非依存的な様式で標的抗原発現細胞の細胞死を媒介し得る分子の増殖、サイトカイン産生、食作用、または産生を引き起こすことで、モノクローナル抗体、可溶性リガンド、または細胞特異的共受容体の細胞特異的標的化能力を利用する能力をＣＡＲが有することである。典型的には、ＣＡＲは、結合ドメイン、ヒンジ、膜貫通部、ならびにＣＤ３ζまたはＦｃＲｙに由来するシグナル伝達ドメインが１つ以上の共刺激シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＣＤ１３４、及びＣＤ２７８に由来する細胞内共刺激ドメイン）と一緒になったものを含む。ＣＡＲは、ＣＡＲを発現するＴ細胞のサイトカイン分泌、溶解活性、生存、及び増殖を向上させることに加えて、抗腫瘍活性をより効率的に誘導することが、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、動物モデル、及びがん患者において示されている（例えば、Ｍｉｌｏｎｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，２００９；１７：１４５３−１４６４、Ｚｈｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，２０１０；１８：４１３−４２０、Ｃａｒｐｅｎｉｔｏ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ，２００９，１０６：３３６０−３３６５、及びＣｈａｎｇ ａｎｄ Ｃｈｅｎ（２０１７）Ｔｒｅｎｄｓ Ｍｏｌ Ｍｅｄ ２３（５）：４３０−４５０を参照のこと）。
いくつかの態様では、ＣＡＲをコードするｍＲＮＡを発現する本開示のＬＮＰは、疾患または病状を有する患者から得られたＴ細胞をｅｘ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｖｏのいずれかで修飾するために使用される。一態様では、Ｔ細胞は、少なくとも１つのエフェクター機能（例えば、サイトカインまたはサイトカインの誘導）を調節するタンパク質をコードするｍＲＮＡを発現するように修飾される。Ｔ細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞またはヘルパーＴ細胞であり得る。
Ｔ細胞がその関連抗原に長期間曝露されると、エフェクター機能の疲弊を招き、感染細胞またはがん化細胞の残留を許す結果となり得る。Ｔ細胞の疲弊が、ＣＡＲ Ｔ細胞による抗腫瘍活性を長期的に維持する上でも著しく障害になり得ることを示唆する証拠が得られてきている。さらに、患者から収集されたＴ細胞にＣＡＲを形質導入する前の当該Ｔ細胞の分化状態、ならびにＣＡＲ Ｔ細胞を再導入する前に患者が受けるコンディショニングレジメン（例えば、アルキル化剤、フルダラビン、全身照射の適用または適用除外）もまた、ＣＡＲ Ｔ細胞の維持及び細胞傷害性潜在力に大いに影響を与え得る。Ｔ細胞集団の刺激（抗ＣＤ３／ＣＤ２８または刺激細胞を介するもの）及び増殖（サイトカイン（ＩＬ−２など）を介するもの）を行うｉｎ ｖｉｔｒｏの培養条件によっても、ＣＡＲ Ｔ細胞の分化状態及びエフェクター機能は変化し得る（Ｇｈｏｎｅｉｍ ｅｔ ａｌ．，（２０１６）Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２２（１２）：１０００−１０１１）。
したがって、本開示のＬＮＰ及び方法は、治療的ＣＡＲ Ｔ細胞の生成に対する新たな手法を提供する。治療的ＣＡＲ−Ｔ細胞を調製する現存の方法は、養子細胞移入に向けて十分な数の修飾細胞を得るためにｉｎ ｖｉｔｒｏでの大々的な細胞培養を必要とすることが多く、こうして細胞培養を行っている間に、Ｔ細胞の元の同一性または分化状態が変化し得、Ｔ細胞機能が損なわれている可能性がある。さらに、疾患の進行を阻止するために患者が治療の必要に迫られている場合、十分な量のＣＡＲ Ｔ細胞を得るために時間を要することで患者を治療する機会を逃し、その結果、治療は失敗し、患者は死亡し得る。本開示のＬＮＰ及び方法では、ＣＡＲをコードするｍＲＮＡをｉｎ ｖｉｖｏでＴ細胞に送達する方法を提供することによってこうしたハードルが回避される。さらに、現在のＣＡＲ−Ｔ細胞療法レジメンでは事前にリンパ球を枯渇させることが必要であるが、これをしてしまうと、患者の健康が損なわれ、ＣＡＲ−Ｔの効力を改善し得る育成環境が破壊される。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰ及び方法は、養子移入されたＣＡＲ−Ｔ細胞の刺激に有用であり、その結果、養子移入されたＣＡＲ−Ｔ細胞は生着して残り、活性に増殖し、ｉｎ ｖｉｖｏで増殖し得る。例えば、一実施形態では、リンパ球の増殖及び／または生存を促進する核酸分子（例えば、サイトカイン）を免疫細胞に送達してそのような増殖を促すことができる。
ある特定の実施形態では、本開示は、血液癌を治療するためのＣＡＲ−Ｔを提供し、こうした血液癌には、限定されないが、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ、例えば、Ｂ−ＡＬＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、及び多発性骨髄腫が含まれる。いくつかの実施形態では、ＬＮＰと結合／によってカプセル化されるｍＲＮＡによってコードされるＣＡＲの構造は、Ｎ末端からＣ末端の順に、ｓｃＦｖドメイン、ヒンジ及び膜貫通型ドメイン（Ｈ／ＴＭ）、共刺激（ＣＳ）ドメイン、ならびにＴＣＲシグナル伝達ドメインを含む。
ある特定の実施形態、具体的にはＡＭＬの治療のための実施形態では、適切なＣＡＲは、ＣＤ３３またはＣＤ１２３を標的とする。例としては、限定されないが、下記の構造のうちの１つを含むＣＡＲが挙げられる：（ｉ）抗ＣＤ３３ ｓｃＦｖ、ＣＤ８ Ｈ／ＴＭドメイン、４−１ＢＢ ＣＳドメイン、及びＣＤ３ζ ＴＣＲシグナル伝達ドメイン、（ｉｉ）抗ＣＤ３３ ｓｃＦｖ、ＣＤ２８ Ｈ／ＴＭドメイン、ＣＤ２８ ＣＳドメイン、及びＣＤ３ζ ＴＣＲシグナル伝達ドメイン、ならびに（ｉｉｉ）抗ＣＤ１２３ ｓｃＦｖ、ＣＤ８ Ｈ／ＴＭドメイン、４−１ＢＢ ＣＳドメイン、及びＣＤ３ζ ＴＣＲシグナル伝達ドメイン。本開示のＣＡＲ−Ｔ細胞は、当該技術分野で報告されているものでＣＤ３３またはＣＤ１２３を標的とする他の調製物と組み合わせて使用することができ、こうした調製物には、限定されないが、ゲムツズマブオゾガマイシン、リンツズマブ、バダスツキシマブタリリン、及び２Ｈ１２（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）が含まれる。
ある特定の実施形態、具体的にはＡＬＬ及び／またはＮＨＬの治療のための実施形態では、適切なＣＡＲは、ＣＤ１９またはＣＤ２０を標的とする。例としては、限定されないが、下記の構造のうちの１つを含むＣＡＲが挙げられる：（ｉ）抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ、ＣＤ８ Ｈ／ＴＭドメイン、４−１ＢＢ ＣＳドメイン、及びＣＤ３ζ ＴＣＲシグナル伝達ドメイン、（ｉｉ）抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ、ＣＤ２８ Ｈ／ＴＭドメイン、ＣＤ２８ ＣＳドメイン、及びＣＤ３ζ ＴＣＲシグナル伝達ドメイン、ならびに（ｉｉｉ）抗ＣＤ２０ ｓｃＦｖ、ＩｇＧ Ｈ／ＴＭドメイン、ＣＤ２８／４−１ＢＢ ＣＳドメイン、及びＣＤ３ζ ＴＣＲシグナル伝達ドメイン。本開示のＣＡＲ−Ｔ細胞は、当該技術分野で報告されているものでＣＤ１９またはＣＤ２０を標的とする他の調製物と組み合わせて使用することができ、こうした調製物には、限定されないが、Ｋｙｍｒｉａｈ（商標）（チサゲンレクルユーセル；Ｎｏｖａｒｔｉｓ；ｆｏｒｍｅｒｌｙＣＴＬ０１９）、Ｙｅｓｃａｒｔａ（商標）（アキシカブタゲンシロロイセル；Ｋｉｔｅ Ｐｈａｒｍａ）、及びリツキシマブが挙げられる。
ある特定の実施形態、具体的には多発性骨髄腫の治療のための実施形態では、適切なＣＡＲは、ＢＣＭＡを標的とする。例としては、限定されないが、抗ＢＣＭＡ ｓｃＦｖ、ＣＤ８ Ｈ／ＴＭドメイン、４−１ＢＢ ＣＳドメイン、及びＣＤ３ζ ＴＣＲシグナル伝達ドメインという構造を含むＣＡＲが挙げられる。本開示のＣＡＲ−Ｔ細胞は、当該技術分野で報告されているものでＢＣＭＡを標的とする他の調製物と組み合わせて使用することができ、こうした調製物には、限定されないが、Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｎｏ．７４２に記載のＢＣＭＡ標的化ＣＡＲ−Ｔ調製物（ＭＣＡＲＨ１７１と称される）、及びＨａｒｒｉｎｇｔｏｎ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｎｏ．１８１３に記載のＢＣＭＡ標的化ＣＡＲ−Ｔ調製物（ＪＣＡＲＨ１２５と称される）が含まれる。
いくつかの実施形態では、本開示のＬＮＰ及び方法は、ユニバーサルなモジュラー式の抗タグキメラ抗原受容体（ＵｎｉＣＡＲ）を移植した免疫細胞を複数の抗原に対して再標的化することを可能にするＵｎｉＣＡＲをコードするｍＲＮＡを発現するようにエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）を修飾する上で有用である（例えば、米国特許公開公報ＵＳ２０１７０２４０６１２Ａ１（当該文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）、Ｃａｒｔｅｌｌｉｅｒｉ ｅｔ ａｌ．，（２０１６）Ｂｌｏｏｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｊｏｕｒｎａｌ ６，ｅ４５８（当該文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。
いくつかの実施形態では、本開示のＬＮＰ及び方法は、切替可能なキメラ抗原受容体及びキメラ抗原受容体エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）スイッチをコードするｍＲＮＡを発現するようにエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）を修飾する上で有用である。この系では、ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、ＣＡＲ−ＥＣ上のキメラ抗原受容体が結合する第１の領域と、標的細胞上の細胞表面分子に結合する第２の領域と、を有しており、それによって、結合した標的細胞に対して細胞傷害性の免疫応答がＣＡＲ−ＥＣから生じるように刺激する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−ＥＣは、Ｔ細胞であり、ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、ＣＡＲ−ＥＣ活性の「オン・スイッチ」として働き得る。活性は、スイッチの投与を減らすか、または中止することによって「オフ」になり得る。こうしたＣＡＲ−ＥＣスイッチは、現存するＣＡＲ Ｔ細胞に加えて、本明細書に開示のＣＡＲ−ＥＣと共に、疾患または病状（がんなど）の治療に使用することができ、標的細胞は、悪性細胞である。そのような治療は、本明細書では切替可能な免疫療法（米国特許公開公報ＵＳ９６２４２７６Ｂ２（当該文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる））と称され得る。
いくつかの実施形態では、本開示のＬＮＰ及び方法は、ヒト免疫グロブリンのＦｃ部分に結合する受容体（例えば、ＣＤ１６Ｖ−ＢＢ−ζ）をコードするｍＲＮＡを発現するようにエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）を修飾する上で有用である（Ｋｕｄｏ ｅｔ ａｌ．，（２０１４）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ７４（１）：９３−１０３（当該文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる））。
いくつかの実施形態では、本開示のＬＮＰ及び方法は、ペプチドネオエピトープ（ＰＮＥ）に結合するユニバーサル免疫受容体（例えば、切替可能なＣＡＲ（ｓＣＡＲ））をコードするｍＲＮＡを発現するようにエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）を修飾する上で有用である。いくつかの実施形態では、ペプチドネオエピトープ（ＰＮＥ）は、抗原を標的とする抗体（抗体スイッチ）内の異なる規定位置に組み込まれている。ｓＣＡＲ−Ｔ細胞の特異性は、ヒトプロテオームには生じないＰＮＥに対して再指向化されており、それ故に、ｓＣＡＲ−Ｔ細胞と抗体スイッチとの間での独立した相互作用が可能となる。このようにして、ｓＣＡＲ−Ｔ細胞は、抗体スイッチの存在に厳密に依存して完全に活性化され、これによって、抗体スイッチの非存在下では内在性の組織または抗原をＣＡＲ Ｔ細胞がオフターゲット認識することがなくなる（Ａｒｃａｎｇｅｌｉ ｅｔ ａｌ．，（２０１６）Ｔｒａｎｓｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ５（Ｓｕｐｐｌ ２）：Ｓ１７４−Ｓ１７７（当該文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる））。切替可能なＣＡＲの他の例は、米国特許出願ＵＳ２０１６０２７２７１８Ａ１（当該文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）によって提供されている。
脂質ベースの組成物の使用
本開示は、免疫細胞への核酸の送達増進をもたらす脂質ベースの改良型組成物、具体的にはＬＮＰ組成物を提供する。本開示は、ＬＮＰの構成成分が免疫細胞（リンパ球系細胞及び骨髄系細胞など）（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、単球、及び樹状細胞）へのカプセル化核酸分子（例えば、ｍＲＮＡ）の送達を増進する免疫細胞送達増強脂質として働くという発見に少なくとも部分的には基づく。
本開示の脂質ベースの改良型組成物、具体的にはＬＮＰは、ｉｎ ｖｉｔｒｏでもｉｎ ｖｉｖｏでも様々な目的に有用であり、こうした目的は、免疫細胞への核酸の送達、免疫細胞中または免疫細胞上でのタンパク質発現、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、単球、及び／または樹状細胞）の活性化または活性の調節、目的タンパク質（例えば、感染性疾患またはがんの抗原）に対する免疫応答の亢進（例えば、ワクチン接種目的または治療目的）、ならびに自己免疫の低減（例えば、Ｔ細胞の免疫寛容化）のための免疫細胞応答低減などである。
ｉｎ ｖｉｔｒｏでのタンパク質発現については、免疫細胞は、ＬＮＰと免疫細胞とをｅｘ ｖｉｖｏでインキュベートすることによってＬＮＰと接触する。その後、そのような免疫細胞は、ｉｎ ｖｉｖｏに導入され得る。
ｉｎ ｖｉｖｏでのタンパク質発現については、免疫細胞は、ＬＮＰを対象に投与することによってＬＮＰと接触し、それによって対象内の免疫細胞中または免疫細胞上のタンパク質発現が増加または誘導される。例えば、一実施形態では、ＬＮＰは、静脈内投与される。別の実施形態では、ＬＮＰは、筋肉内投与される。さらに他の実施形態では、ＬＮＰは、皮下、節内、及び腫瘍内からなる群から選択される経路によって投与される。
ｉｎ ｖｉｔｒｏでの送達については、一実施形態では、免疫細胞は、ＬＮＰと免疫細胞とをｅｘ ｖｉｖｏでインキュベートすることによってＬＮＰと接触する。一実施形態では、免疫細胞は、ヒトの免疫細胞である。別の実施形態では、免疫細胞は、霊長類の免疫細胞である。別の実施形態では、免疫細胞は、ヒトまたは非ヒト霊長類の免疫細胞である。ＬＮＰによって様々な型の免疫細胞へのトランスフェクションが可能であることが実証されている（例えば、実施例３、実施例５、実施例６、実施例９、及び実施例１０を参照のこと）。一実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞（例えば、ＣＤ３＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、またはＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｌｏｗＴｒｅｇ細胞）である。一実施形態では、免疫細胞は、Ｂ細胞（例えば、ＣＤ１９＋Ｂ細胞）である。一実施形態では、免疫細胞は、樹状細胞（例えば、ＣＤ１１ｃ＋ＣＤ１１ｂ−樹状細胞）である。一実施形態では、免疫細胞は、単球／マクロファージ（例えば、ａＣＤ１１ｃ−ＣＤ１１ｂ＋単球／マクロファージ）である。一実施形態では、免疫細胞は、未熟ＮＫ細胞（例えば、ＣＤ５６ＨＩＧＨ未熟ＮＫ細胞）である。一実施形態では、免疫細胞は、活性化ＮＫ細胞（例えば、ＣＤ５６ＤＩＭ活性化ＮＫ細胞）である。一実施形態では、免疫細胞は、ＮＫ Ｔ細胞（例えば、ＣＤ３＋ＣＤ５６＋ＮＫ Ｔ細胞）である。一実施形態では、免疫細胞は、ＡＭＬ白血病細胞（例えば、ＣＤ３３＋ＡＭＬ細胞）である。一実施形態では、免疫細胞は、骨髄形質細胞（例えば、ＣＤ４５＋ＣＤ３８＋ＣＤ１３８＋ＣＤ１９＋ＣＤ２０−骨髄形質細胞）である。
一実施形態では、免疫細胞は、血清またはＣ１ｑの存在下で少なくとも１５分間、ＬＮＰと接触し、この接触時間は、ｅｘ ｖｉｖｏで細胞へのトランスフェクションを行う上で十分な時間であることが示されている（実施例１３を参照のこと）。別の実施形態では、免疫細胞とＬＮＰとの接触時間は、例えば、少なくとも３０分、少なくとも１時間、少なくとも２時間、少なくとも３時間、少なくとも４時間、少なくとも５時間、少なくとも６時間、少なくとも１２時間、または少なくとも２４時間である。
一実施形態では、処理／トランスフェクションを１回行うために免疫細胞とＬＮＰと接触が行われる。別の実施形態では、処理／トランスフェクションを複数回行うために（例えば、同じ細胞に対する処理／トランスフェクションを２回、３回、４回、または５回以上行うために）免疫細胞とＬＮＰと接触が行われる。同じ細胞へのトランスフェクションを繰り返すことで、トランスフェクションされる細胞のパーセントと、トランスフェクションされた核酸によってコードされるタンパク質の発現レベルと、が細胞生存率に影響を与えることなく用量と関連して増加することが実証されている（実施例１２を参照のこと）。
別の実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでの送達については、免疫細胞は、ＬＮＰを対象に投与することによってＬＮＰと接触し、それによって対象内の免疫細胞に核酸が送達される。例えば、一実施形態では、ＬＮＰは、静脈内投与される。別の実施形態では、ＬＮＰは、筋肉内投与される。さらに他の実施形態では、ＬＮＰは、皮下、節内、及び腫瘍内からなる群から選択される経路によって投与される。
一実施形態では、免疫細胞における核酸分子の細胞内濃度が増進する。一実施形態では、免疫細胞における核酸分子の活性が増進する。一実施形態では、免疫細胞における核酸分子の発現が増進する。一実施形態では、核酸分子によって免疫細胞の活性化または活性が調節される。一実施形態では、核酸分子によって免疫細胞の活性化または活性が増加する。一実施形態では、核酸分子によって免疫細胞の活性化または活性が低減される。
ある特定の実施形態では、免疫細胞送達増強脂質含有ＬＮＰによって免疫細胞に核酸が送達されると、検出可能な量の免疫細胞への送達（例えば、ある特定パーセントの免疫細胞への送達）が生じ、この送達は、例えば、対象への投与後にｉｎ ｖｉｖｏで生じる。いくつかの実施形態では、免疫細胞送達増強脂質含有ＬＮＰは、免疫細胞に対する標的化部分を含まない（例えば、免疫細胞マーカーに対する特異性を有する抗体を含まないか、または免疫細胞へとＬＮＰを標的化する受容体リガンドを含まない）。例えば、一実施形態では、免疫細胞送達増強脂質含有ＬＮＰを投与すると、単回の静脈内注射後に脾臓Ｔ細胞の少なくとも約１５％に核酸がｉｎ ｖｉｖｏで送達される（この送達は、例えば、マウスモデル（実施例１５に記載のものなど）または非ヒト霊長類モデル（実施例８に記載のものなど）において生じる）。別の実施形態では、免疫細胞送達増強脂質含有ＬＮＰを投与すると、単回の静脈内注射後に脾臓Ｂ細胞の少なくとも約１５％〜２５％に核酸がｉｎ ｖｉｖｏで送達される（この送達は、例えば、マウスモデル（実施例１５に記載のものなど）または非ヒト霊長類モデル（実施例８に記載のものなど）において生じる）。別の実施形態では、免疫細胞送達増強脂質含有ＬＮＰを投与すると、単回の静脈内注射後に脾臓樹状細胞の少なくとも約３５％〜４０％に核酸がｉｎ ｖｉｖｏで送達される（この送達は、例えば、マウスモデル（実施例１５に記載のものなど）または非ヒト霊長類モデル（実施例８に記載のものなど）において生じる）。別の実施形態では、免疫細胞送達増強脂質含有ＬＮＰを投与すると、単回の静脈内注射後に骨髄細胞（大腿骨及び／または上腕骨）の少なくとも約５％〜２０％に核酸がｉｎ ｖｉｖｏで送達される（この送達は、例えば、マウスモデル（実施例１５に記載のものなど）または非ヒト霊長類モデル（実施例８に記載のものなど）において生じる）。本明細書に示される送達レベルは、ｉｎ ｖｉｖｏでの免疫療法を可能にするものである。
一実施形態では、免疫細胞による核酸分子の取り込みが増進する。取り込みは、当業者に知られる方法によって決定され得る。例えば、会合／結合及び／または取り込み／内部移行は、検出可能なように標識（蛍光標識など）されたＬＮＰを使用し、様々な時間インキュベートした後、免疫細胞中または免疫細胞上のそのようなＬＮＰの位置を追跡して評価され得る。さらに、数学モデル（Ｒａｄｕ Ｍｉｈａｉｌａ，ｅｔ ａｌ．，（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ，Ｖｏｌ．７：２４６−２５５，２０１７（当該文献は、参照によって本明細書に組み込まれる））によって報告された常微分方程式（ＯＤＥ）ベースのモデルなど）によって送達及び取り込みを定量化することが可能である。
別の実施形態では、核酸分子の送達の指標として核酸分子の機能または活性が使用され得る。例えば、ｓｉＲＮＡの場合、ある特定の免疫細胞集団におけるタンパク質発現の減少を測定することで、その細胞集団にｓｉＲＮＡが送達されたことが示され得る。同様に、ｍＲＮＡの場合、ある特定の免疫細胞集団におけるタンパク質発現の増加を測定することで、その細胞集団にｓｉＲＮＡが送達されたことが示され得る。免疫細胞への他の核酸分子の送達を測定する様々な方法を当業者なら認識するであろう。
ある特定の実施形態では、免疫細胞に送達される核酸は、目的タンパク質をコードする。したがって、一実施形態では、核酸分子によってコードされる目的タンパク質の活性が、免疫細胞において増進する。一実施形態では、核酸分子によってコードされるタンパク質の発現が、免疫細胞において増進する。一実施形態では、タンパク質によって免疫細胞の活性化または活性が調節される。一実施形態では、タンパク質によって免疫細胞の活性化または活性が増加する。一実施形態では、タンパク質によって免疫細胞の活性化または活性が低減される。
一実施形態では、細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、単球、または樹状細胞）を標識してその特定の免疫細胞集団への送達を測定するために様々な薬剤が使用され得る。例えば、ＬＮＰによってレポーター核酸（例えば、検出可能なレポータータンパク質をコードするｍＲＮＡ）をカプセル化することができ、レポーター核酸が発現すると、レポーター核酸が送達されている細胞集団が標識される。検出可能なレポータータンパク質の例としては、限定されないが、高感度緑色蛍光タンパク質（ＥＧＦＰ）及びルシフェラーゼが挙げられる。
免疫細胞送達増強脂質含有ＬＮＰによる免疫細胞への核酸の送達は、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏで測定することができ、この測定は、例えば、ＬＮＰと結合／によってカプセル化された核酸によってコードされるタンパク質の発現を検出するか、またはＬＮＰと結合／によってカプセル化された核酸によって媒介される作用（例えば、生物学的作用）を検出することによって行われる。タンパク質の検出については、タンパク質は、例えば、検出可能な細胞表面タンパク質であり得、こうした細胞表面タンパク質は、例えば、当該細胞表面タンパク質に特異的に結合する抗体を使用する免疫蛍光法またはフローサイトメトリーによって検出可能である。あるいは、検出可能なレポータータンパク質をコードするレポーター核酸を使用することができ、レポータータンパク質の発現は、当該技術分野で知られる標準的な方法によって測定され得る。
本開示の方法は、正常な免疫細胞及び悪性の免疫細胞を含めて、様々な免疫細胞型に核酸分子を送達する上で有用である。一実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞、樹状細胞、単球、及びＢ細胞からなる群から選択される。
方法は、免疫細胞に核酸を送達するために使用することができ、送達対象の免疫細胞は、例えば、脾臓、末梢血、及び／または骨髄に位置する。一実施形態では、免疫細胞は、免疫前駆細胞である。一実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞である。Ｔ細胞は、当該技術分野で知られるＴ細胞マーカー（典型的にはＣＤ３）の１つ以上の発現によって同定され得る。追加のＴ細胞マーカーには、ＣＤ４またはＣＤ８が含まれる。一実施形態では、免疫細胞は、Ｂ細胞である。Ｂ細胞は、当該技術分野で知られるＢ細胞マーカー（典型的にはＣＤ１９）の１つ以上の発現によって同定され得る。追加のＢ細胞マーカーには、ＣＤ２４及びＣＤ７２が含まれる。一実施形態では、免疫細胞は、単球及び／または組織マクロファージである。単球及び／またはマクロファージは、当該技術分野で知られる単球及び／またはマクロファージマーカー（ＣＤ２、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１４、及び／またはＣＤ１６など）の１つ以上の発現によって同定され得る。一実施形態では、免疫細胞は、樹状細胞である。樹状細胞は、当該技術分野で知られる樹状細胞マーカー（典型的にはＣＤ１１ｃ）の１つ以上の発現によって同定され得る。追加の樹状細胞マーカーには、ＢＤＣＡ−１及び／またはＣＤ１０３が含まれる。
本開示の方法は、骨髄内の免疫細胞を含む骨髄細胞（例えば、ｉｎ ｖｉｖｏのもの）、ならびに他の骨髄細胞（造血幹細胞、免疫細胞前駆体、及び線維芽細胞など）に核酸分子を送達する上で有用である。一実施形態では、免疫細胞は、骨髄形質細胞である。一実施形態では、免疫細胞は、骨髄単球である。一実施形態では、細胞は、骨髄初期前駆細胞（例えば、前赤芽球、単芽球／骨髄芽球、及び／または間葉系幹細胞）である。
一実施形態では、免疫細胞は、悪性細胞、がん細胞であり、こうした細胞であることは、例えば、Ｇ１期の進行の制御が解除されていることによって示される。一実施形態では、免疫細胞は、悪性Ｔ細胞、がん性Ｔ細胞、またはＧ１期の進行の制御が解除されているＴ細胞である。一実施形態では、免疫細胞は、白血病細胞またはリンパ腫細胞である。一実施形態では、免疫細胞は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞である。他の実施形態では、免疫細胞は、悪性Ｂ細胞であり、例えば、ホジキンリンパ腫細胞、非ホジキンリンパ腫細胞、未分化大細胞リンパ腫細胞、前駆Ｔ細胞リンパ芽球性リンパ腫、濾胞性リンパ腫細胞、小リンパ球性リンパ腫細胞、辺縁帯リンパ腫細胞、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫細胞、マントル細胞リンパ腫細胞、バーキットリンパ腫細胞、急性リンパ芽球性白血病細胞、または慢性リンパ球性白血病細胞である。
本開示のＬＮＰを含めて、脂質ベースの改良型組成物は、１つ以上の核酸分子を免疫細胞または異なる免疫細胞集団に送達する上で有用であり、この送達は、例えば、２つ以上の異なるＬＮＰを投与することによって行われる。一実施形態では、本開示の方法は、免疫細胞と第１のＬＮＰ及び第２のＬＮＰとを同時もしくは連続的に接触させること（または第１のＬＮＰ及び第２のＬＮＰを同時もしくは連続的に対象に投与すること）を含み、第１のＬＮＰ及び第２のＬＮＰには、同じまたは異なる核酸分子がカプセル化され、第１のＬＮＰ及び第２のＬＮＰは、構成成分としてフィトステロールを含む。他の実施形態では、本開示の方法は、免疫細胞と第１のＬＮＰ及び第２のＬＮＰとを同時もしくは連続的に接触させること（または第１のＬＮＰ及び第２のＬＮＰを同時もしくは連続的に対象に投与すること）を含み、第１のＬＮＰ及び第２のＬＮＰには、同じまたは異なる核酸分子がカプセル化され、第１のＬＮＰは、構成成分としてフィトステロールを含み、第２のＬＮＰは、フィトステロールを含まない。
骨髄系細胞
樹状細胞及び／または骨髄系細胞の活性の下方調節
免疫応答を抑制するための方法の一実施形態では、本開示の脂質ベースの組成物（ＬＮＰを含む）と結合／によってカプセル化される核酸は、免疫応答が抑制されるように樹状細胞または骨髄系細胞の活性を調節する（例えば、上方制御するか、または下方制御する）核酸である。核酸は、それ自体が樹状細胞または骨髄系細胞の活性を調節するもの（例えば、ｓｉＲＮＡ、ｍＩＲ、及び／またはアンタゴｍｉｒなど）であり得るか、あるいは樹状細胞または骨髄系細胞の活性を調節するタンパク質をコードするもの（例えば、ｍＲＮＡ）であり得る。樹状細胞もしくは骨髄系細胞への核酸の標的化は、免疫応答の抑制を引き起こす作用を直接的にもたらし得るか、または代替的に、樹状細胞もしくは骨髄系細胞への核酸の標的化は、１つ以上の他の細胞型（複数可）（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞）の活性を調節することによってその後に免疫応答の抑制を引き起こす作用をもたらし得る。例えば、いくつかの態様では、樹状細胞または骨髄系細胞への核酸の標的化は、制御性Ｔ細胞の活性を調節する作用、または他の免疫細胞を調節する応答（例えば、サイトカイン産生）を刺激する作用、を引き起こし、その結果、免疫応答が抑制される。
一実施形態では、核酸は、天然起源の分子をコードするか、または天然起源の分子の活性を調節する（例えば、上方制御するか、もしくは下方制御する）。一実施形態では、天然起源の分子は、細胞内分子（転写因子または細胞シグナル伝達カスケード分子など）である。別の実施形態では、天然起源の分子は、分泌分子（サイトカインまたはケモカインなど）である。別の実施形態では、天然起源の分子は、膜貫通型分子（表面受容体、ホーミング分子、シグナル伝達分子、または免疫調節分子（例えば、ＨＬＡ分子）など）である。
一実施形態では、核酸は、修飾された（すなわち、非天然起源の）分子をコードする。修飾タンパク質の例としては、限定されないが、半減期が改変（例えば、長時間化または短時間化）されたタンパク質、及び自体が細胞表面に繋留されるように修飾されたタンパク質（例えば、可溶性タンパク質に膜貫通型ドメインが付加され、その結果、修飾タンパク質となることで、可溶性タンパク質が細胞表面に繋留される）が挙げられる。
別の実施形態では、核酸は、修飾された（すなわち、非天然起源の）膜貫通型タンパク質または細胞内タンパク質をコードする。修飾された膜貫通型タンパク質の例としては、限定されないが、キメラ受容体、ドミナントネガティブな受容体、及び構成的に活性な変異受容体が挙げられる。修飾された細胞内タンパク質の例としては、限定されないが、シグナル伝達カスケードに関与する変異／改変酵素（例えば、キナーゼ、ホスファターゼ、ジオキシゲナーゼ、及び同様のもの）（免疫シナプスにおけるシグナル伝達を改変し得る（例えば、反転させ得る）分子（例えば、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）またはＢ細胞受容体（ＢＣＲ）を介してシグナル伝達をアゴナイズまたはアンタゴナイズし得る分子）を含む）、ならびにアポトーシスを調節（例えば、誘導）し得る分子、が挙げられる。
樹状細胞及び／または骨髄系細胞の活性を調節し、それによって免疫応答を抑制するための特定の手法の非限定的な例は、以下にさらに詳述される。
免疫寛容原性樹状細胞の誘導
免疫応答を抑制するための方法の一実施形態では、本開示の脂質ベースの組成物（ＬＮＰを含む）と結合／によってカプセル化される核酸は、免疫応答が抑制されるように免疫寛容原性樹状細胞（ｔｏｌＤＣ）の誘導を刺激する（例えば、促進する、増進する、上方制御する）核酸（例えば、ｔｏｌＤＣの誘導を刺激するタンパク質をコードする核酸）である。樹状細胞（ＤＣ）は、Ｔ細胞性免疫応答及びＢ細胞性免疫応答の重要な制御因子であると共に、免疫寛容を誘導する能力も有する。免疫寛容原性となるようにＤＣをプログラムする細胞内ネットワークがいくつか同定されている。例えば、未熟ＤＣに適用される免疫寛容原性シグナル（ＴＧＦβ、ＩＬ−１０、またはＰＧＥなど）は、制御性ＤＣの発生を刺激し、この場合、シグナル伝達経路（例えば、ＩＬ−１０、ＴＧＦβ、ＩＤＯ、ＰＤ−１、及び／またはＡＲＧによって媒介されるもの）は、制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞及び／またはＩ型制御性Ｔ（Ｔｒ１）細胞の産生を刺激すると共に、通常のＣＤ４＋Ｔ細胞及び／またはＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を抑制し得る免疫寛容原性ＤＣを誘導し得る。具体的には、重複するシグナル伝達ネットワークノードを利用してｔｏｌＤＣが誘導され得る。免疫寛容原性ＤＣを誘導し、それによって免疫応答を抑制するための特定の手法の非限定的な例は、以下にさらに詳述される。
（ｉ）ＮＦｋＢの阻害
エフェクターＴ細胞の活性化及び分化を媒介し、炎症誘発性サイトカインを産生する細胞へとＤＣが成熟することは、転写因子であるＮＦｋＢによって制御されることとして当該技術分野では確立されている。したがって、ＮＦｋＢ活性を抑制することは、ＤＣ免疫寛容原性を誘導し、自己免疫疾患における免疫応答を抑制するための手法として当該技術分野で報告されている。例えば、ＮＦｋＢ誘導キナーゼ（ＮＩＫ）の阻害は、実験的ループスの治療に有効であることが示されている（Ｂｒｉｇｈｔｂｉｌｌ ｅｔ ａｌ．（２０１８）Ｎａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｕｎ．９：１７９）。さらに、ＤＥＮ−１８１（ＮＦｋＢ阻害剤を含む脂質ナノ粒子ベースの免疫療法剤）は、関節リウマチ向けの第Ｉ相試験の段階にある。
したがって、一実施形態では、本開示のＬＮＰは、ＮＦｋＢ活性を直接的または間接的に抑制することによって免疫寛容原性ＤＣを誘導する核酸を提供する。樹状細胞におけるＮＦｋＢ活性を妨害するための標的となり得る経路の例としては、限定されないが、ＰＰＡＲｇが介在する経路、ＳＴＡＴ３が介在する経路、ＧＩＬＺが介在する経路、ＧＲが介在する経路、ＳＨＰ１／２が介在する経路、ＨＯ１が介在する経路、Ａ２０が介在する経路、ＳＯＣＳ１が介在する経路、ＳＯＣＳ２が介在する経路、ＡＭＰＫが介在する経路、及びＡｈＲが介在する経路が挙げられる。したがって、本開示のいくつかの態様では、ｔｏｌＤＣを誘導するために、ＮＦｋＢの活性化を抑制する免疫寛容原性核酸（例えば、ｍＲＮＡ）が使用される。ＮＦｋＢの活性を抑制する免疫寛容原性ｍＲＮＡの例としては、限定されないが、ＳＯＣＳ１をコードするｍＲＮＡ、ＳＯＣＳ２をコードするｍＲＮＡ、ＡＭＰＫａ１をコードするｍＲＮＡ、ＡＭＰＫａ２をコードするｍＲＮＡ、ＣＡＭＫＫ２をコードするｍＲＮＡ、ＬＫＢ１をコードするｍＲＮＡ、ＦＯＸＯ３をコードするｍＲＮＡ、ＰＰＡＲｇをコードするｍＲＮＡ、ＨＭＯＸ１をコードするｍＲＮＡ、ＧＩＬＺをコードするｍＲＮＡ、及びＳＴＡＴ３をコードするｍＲＮＡが挙げられる。
（ｉｉ）アミノ酸代謝の調節
別の実施形態では、本開示のＬＮＰは、アミノ酸代謝を調節することによって免疫寛容原性ＤＣを誘導する核酸を提供する。免疫系進化の過程を経ることで、アルギニン及びトリプトファンという２つの一次性アミノ酸代謝制御ノードが選択された。アルギニンを代謝する制御酵素は、誘導型一酸化窒素合成酵素（ｉＮＯＳ）、アルギナーゼ−１（Ａｒｇ１）、及びアルギナーゼ−２（Ａｒｇ２）であり、トリプトファンを代謝する制御酵素は、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ１及びＩＤＯ２）ならびにトリプトファン−２，３−ジオキシゲナーゼ（ＴＤＯ）である。
トリプトファンは、ＩＤＯ及びＴＤＯによって異化されることで免疫抑制性キヌレニン（ＫＹＮ）となり、ＫＹＮは、Ｔｒｅｇ誘導を刺激する。Ｔｒｅｇ細胞におけるＫＹＮの主要標的は、アリール炭化水素受容体（ＡｈＲ）であり、ＡｈＲは、炎症の抑制（Ｃｒｕｎｋｈｏｒｎ（２０１８）Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ．Ｄｉｓｃ．１７：４７０）を含めて、免疫応答の制御に関与するリガンド活性化転写因子である（例えば、Ｓｔｏｃｋｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．（２０１４）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：４０３−４３２、Ｇｕｔｉｅｒｒｅｚ−Ｖａｚｑｕｅｚ ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ４８：１９−３３を参照のこと）。したがって、いくつかの態様では、本開示は、トリプトファン代謝を調節し、それによってｔｏｌＤＣを誘導する核酸（例えば、ｍＲＮＡ）を提供する。例としては、限定されないが、ＩＤＯ１、ＩＤＯ２、ＴＤＯ、またはＡｈＲを刺激またはコードする核酸が挙げられる。
アルギニン代謝は、樹状細胞が免疫寛容を誘導する能力においても役割を担う。ｉＮＯＳ及びアルギナーゼの阻害剤を使用して樹状細胞におけるアルギニン代謝を下方制御すると、外来性抗原に対する免疫寛容が誘導されることが示されている（Ｓｉｍｉｏｎｉ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３０：４４−５７）。したがって、いくつかの態様では、本開示は、アルギニン代謝を調節し、それによってｔｏｌＤＣを誘導する核酸（例えば、ｍＲＮＡ）を提供する。例としては、限定されないが、ｉＮＯＳ、Ａｒｇ１、もしくはＡｒｇ２を阻害する核酸（例えば、阻害剤）、またはｉＮＯＳ、Ａｒｇ１、もしくはＡｒｇ２をコードする核酸が挙げられる。
（ｉｉｉ）Ｗｎｔ／ベータカテニン経路の活性化
Ｗｎｔ／ベータカテニン経路は、ＤＣ活性の制御において重要な役割を担う。Ｗｎｔは、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ（ＦＺＤ）受容体に結合し、複数のシグナル伝達経路を活性化する分泌型の脂質修飾糖タンパク質である。ある特定のＷｎｔ（例えば、Ｗｎｔ３ａ、Ｗｎｔ５ｂ、Ｗｎｔ１６）は、ＤＣにおける古典的なベータカテニン／ＴＣＦ経路を活性化する一方で、他のＷｎｔ（例えば、Ｗｎｔ５ａ）は、非古典的なベータカテニン非依存的経路を活性化する。低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質５（ＬＲＰ５）共受容体及び低密度ＬＲＰ６共受容体は、古典的なＷｎｔ−シグナル伝達経路の重要なシグナル伝達メディエーターである。ＷｎｔリガンドがＦＺＤ及びＬＲＰ５／６共受容体と相互作用すると、細胞質においてベータカテニンが活性化すると共にＷｎｔリガンドが核に転位し、そこでＴ細胞因子／リンパ系エンハンサー因子（ＴＣＦ／ＬＥＦ）ファミリーのメンバーと相互作用し、様々な標的遺伝子の転写を制御する。ＤＣ細胞におけるＷｎｔ／ベータカテニン経路シグナル伝達及びその作用の総説については、例えば、Ｓｗａｆｆｏｒｄ ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｄｉｓｃｏｖ．Ｍｅｄ．１９：３０３−３１０、及びＳｕｒｙａｗａｎｓｈｉ ｅｔ ａｌ（２０１６）Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：４６０を参照のこと。
ＤＣにおける古典的なベータカテニン経路がＷｎｔ介在性に活性化されると、ＤＣが免疫寛容原性の表現型に偏り、免疫抑制（例えば、抗炎症）遺伝子の発現が誘導されることが示されている。例えば、Ｗｎｔ３ａは、ＤＣにおける古典的なベータカテニンシグナル伝達を引き起こし、抗炎症性サイトカイン（ＴＧＦ−ベータ及びＶＥＧＦなど）の産生を刺激することが示されている（Ｏｄｅｒｕｐ ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９０：６１２６−６１３４）。Ｗｎｔ１６ｂは、ＤＣにおけるベータカテニンシグナル伝達介して制御性Ｔ細胞の分化を誘導することが示されている（Ｓｈｅｎ ｅｔ ａｌ．２０１４）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｓｃｉ．１５：１２９２８−１２９３９）。ＤＣにおける古典的なＷｎｔシグナル伝達は、Ｔｈ１／Ｔｈ１７応答を制御し、自己免疫性の神経炎症を抑制することも示されている（Ｓｕｒｙａｗａｎｓｈｉ ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９４：３２９５−３３０４）。さらに、樹状細胞におけるベータカテニン経路の活性化は、腸における粘膜免疫寛容の重要な制御因子であることが示されている（Ｍａｎｉｃａｓｓａｍｙ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３２９：８４９−８５３）。したがって、いくつかの態様では、本開示は、ＤＣにおけるＷｎｔ介在性のベータカテニン経路を調節（例えば、活性化）し、それによってｔｏｌＤＣを誘導する核酸（例えば、ｍＲＮＡ）を提供する。例としては、限定されないが、Ｗｎｔ３ａをコードするｍＲＮＡ、Ｗｎｔ１６ｂをコードするｍＲＮＡ、構成的に活性なベータカテニンをコードするｍＲＮＡ、構成的に活性なＬＲＰ５をコードするｍＲＮＡ、及び構成的に活性なＬＲＰ６をコードするｍＲＮＡが挙げられる。
ＤＣにおける非古典的なベータカテニン非依存的経路がＷｎｔ介在性に活性化されることでも、ＤＣが免疫寛容原性の表現型に偏り、免疫抑制（例えば、抗炎症）遺伝子の発現が誘導されることが示されている。例えば、Ｗｎｔ５ａは、免疫寛容原性特徴を有する通常では見られない表現型へと樹状細胞の分化を偏らせることが示されている（Ｖａｌｅｎｃｉａ ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８７：４１２９−４１３９）。さらに、Ｗｎｔ５ａは、抗炎症性サイトカインであるＩＬ−１０の発現をＤＣにおいて誘導すると共に、炎症誘発性サイトカインであるＩＬ−６の産生を抑制することが示されている（Ｏｄｅｒｕｐ ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９０：６１２６−６１３４）。したがって、いくつかの態様では、本開示は、ＤＣにおけるＷｎｔ介在性の非古典的なベータカテニン非依存的経路を調節（例えば、活性化）し、それによってｔｏｌＤＣを誘導する核酸（例えば、ｍＲＮＡ）を提供する。例としては、限定されないが、Ｗｎｔ５ａをコードするｍＲＮＡが挙げられる。
さらに、ＤＣにおけるベータカテニン経路がＷｎｔ非依存的に活性化されると、免疫寛容原性状態になるようにＤＣがプログラムされることが示されている。例えば、ＤＣにおけるＥ−カドヘリン介在性の接着を乱すと、ベータカテニンシグナル伝達が活性化されることで、免疫寛容原性の表現型へとＤＣが偏ることが示されており、こうしたことには、抗炎症性サイトカインであるＩＬ−１０が高レベルで産生すること、実験的自己免疫性脳炎からマウスを保護する能力が得られること、が含まれる（Ｊｉａｎｇ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ２７：６１０−６２４）。さらに、ＴＬＲ２介在性のシグナル伝達は、ＤＣにおいてベータカテニンを活性化することで、ＩＬ−１０の産生及びＴｒｅｇ細胞分化の促進を引き起こすことが示されている（Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ．（２０１４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９３：４２０３−４２１３、Ｍａｎｉｃａｓｓａｍｙ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３２９：８４９−８５３）。さらに、ＤＣにおいてベータカテニンを活性化または制御し、適応免疫を制御するシグナル伝達経路は他にも示されており、こうしたシグナル伝達経路には、ＴＬＲ３（Ｇａｎｔｎｅｒ ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．．１８９：３１０４−３１１１）、ＴＬＲ９（Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ．（２０１４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９３：４２０３−４２１３）、ＦＡＳ（Ｑｉａｎ ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８８：２７８２５−２７８３５）、ＴＧＦ−β（Ｖａｎｄｅｒ Ｌｕｇｔ ｅｔ ａｌ．（２０１１）ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ６（５）：ｅ２００９９）、及びＰＬＣ−γ２（Ｃａｐｉｅｔｔｏ ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２１０：２２５７−２２７１）が含まれる。したがって、いくつかの態様では、本開示は、ＤＣにおけるＷｎｔ非依存的なベータカテニンシグナル伝達を調節（例えば、活性化）し、それによってｔｏｌＤＣを誘導する核酸（例えば、ｍＲＮＡ）を提供する。例としては、限定されないが、ＴＬＲ２をコードするｍＲＮＡ、ＴＬＲ３をコードするｍＲＮＡ、ＴＬＲ９をコードするｍＲＮＡ、ＦＡＳをコードするｍＲＮＡ、ＴＧＦ−βをコードするｍＲＮＡ、ＰＬＣ−γ２をコードするｍＲＮＡ、及びＥ−カドヘリンの阻害剤をコードするｍＲＮＡが挙げられる。
（ｉｖ）ＴＧＦ−β／ＳＭＡＤシグナル伝達の活性化
トランスフォーミング増殖因子ベータ（ＴＧＦ−β）は、ＤＣにおける免疫寛容の誘導において中心的な役割を担うものとして当該技術分野で確立されている多面的なサイトカインである。ＴＧＦ−βは、樹状細胞を含む免疫細胞の発生、分化、免疫寛容誘導、及び恒常性に影響を与えることによって免疫抑制因子として機能することが見出されている。樹状細胞におけるＴＧＦ−βの役割の総説については、例えば、Ｅｓｅｂａｎｍｅｎ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｓ．６５：９８７−９９４、Ｓａｎｊａｂｉ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ Ｂｉｏｌ．９（６）、Ｓｅｅｇｅｒ ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｖ．２６：６４７−６５７、Ｓｈｅｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒｓ ３３：９２−１０１を参照のこと。ＴＧＦ−βは、ＤＣによる抗原提示機能及び共刺激分子の発現を下方制御することがｉｎ ｖｉｔｒｏで示されている（Ｓｔｒｏｂｌ及びＫｎａｐｐ（１９９９）Ｍｉｃｒｏｂｅｓ Ｉｎｆｅｃｔ．１：１２８３−１２９０）。さらに、樹状細胞におけるＴＧＦ−βシグナル伝達は、自己免疫性脳炎の制御に必要な前提要因であることが示されている（Ｌａｏｕａｒ ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０５：１０８６５−１０８７０）。ＴＧＦ−βファミリーの受容体の主要なシグナル伝達因子は、ＳＭＡＤ（ＳＭＡＤ１、ＳＭＡＤ２、ＳＭＡＤ３、ＳＭＡＤ５、及びＳＭＡＤ８／９を含む）である。したがって、いくつかの態様では、本開示は、ＴＧＦ−β／ＳＭＡＤシグナル伝達を活性化し、それによってｔｏｌＤＣを誘導する核酸（例えば、ｍＲＮＡ）を提供する。例としては、限定されないが、構成的に活性なＴＧＦ−β（例えば、構成的に活性なＴＧＦ−β１）、ＴＧＦ−β受容体、ＳＭＡＤ１、ＳＭＡＤ２、ＳＭＡＤ３、ＳＭＡＤ５、またはＳＭＡＤ８／９をコードするｍＲＮＡが挙げられる。
（ｖ）ＩＬ−１０／ＳＴＡＴ３シグナル伝達の活性化
サイトカインであるインターロイキン−１０（ＩＬ−１０）は、ＤＣ活性化の重要な負の制御因子として確立されている（総説については、例えば、Ｍａ ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｆ１０００ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ４：１４６５を参照のこと）。ＩＬ−１０は、未熟樹状細胞に対する免疫寛容原性シグナルとして働くことで未熟樹状細胞が免疫寛容原性ＤＣへと分化するように仕向ける。ＤＣにおけるＩＬ−１０の作用は、転写因子であるＳＴＡＴ３を介して媒介される（例えば、Ｍｅｌｉｌｌｏ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８４：２６３８−２６４５を参照のこと）。したがって、いくつかの態様では、本開示は、ＩＬ−１０／ＳＴＡＴ３シグナル伝達を活性化し、それによってｔｏｌＤＣを誘導する核酸（例えば、ｍＲＮＡ）を提供する。例としては、限定されないが、ＩＬ−１０またはＳＴＡＴ３（例えば、構成的に活性なＳＴＡＴ３）をコードするｍＲＮＡが挙げられる。
（ｖｉ）ＰＤ−Ｌ１の発現
樹状細胞は、ＰＤ−１のリガンドであるＰＤ−Ｌ１を自体の表面上に発現することによってＴ細胞上のＰＤ−１共抑制受容体を刺激してＴ細胞免疫寛容を誘導することが示されている（例えば、Ｐｒｏｂｓｔ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：２８０−２８６、Ｓａｇｅ ｅｔ ａｌ．（２０１８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００：２５９２−２６０２を参照のこと）。したがって、いくつかの態様では、本開示は、ＰＤ−Ｌ１をコードするか、またはＤＣ細胞表面上のＰＤ−Ｌ１の発現もしくは活性を刺激し、それによってｔｏｌＤＣを誘導する核酸（例えば、ｍＲＮＡ）を提供する。
（ｖｉｉ）ＰＰＡＲγ活性の調節
ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマ（ＰＰＡＲγ）は、ＤＣの免疫寛容原性作用の上方制御にも下方制御にも関与している核内受容体である。例えば、ＰＰＡＲγは、アレルギー性炎症及び好酸球の活性化を下方制御することが実証されている（Ｗｏｅｒｌｙ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９８：４１１−４２１）。
さらに、他の研究では、樹状細胞においてＰＰＡＲγが活性化すると、マウスの喘息モデルにおける好酸球性気道炎症の発症が抑制されることが示されている（Ｈａｍｍａｄ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ａｍ Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１６４：２６３−２７１）。さらに最近では、樹状細胞におけるＰＰＡＲγの発現は、２型免疫応答の発生において役割を担うことが示されており、このことは、ある特定の場合には樹状細胞においてＰＰＡＲγが炎症誘発の役割を担うことを示している（Ｎｏｂｓ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２１４：３０１５−３０３５）。したがって、いくつかの態様では、本開示は、ＰＰＡＲγをコードするか、またはＤＣにおけるＰＰＡＲγの発現もしくは活性を調節（例えば、上方制御もしくは下方制御）し、それによってｔｏｌＤＣを誘導する核酸（例えば、ｍＲＮＡ）を提供する。
（ｖｉｉｉ）ＡＭＰＫの活性化
５’ＡＭＰ活性化タンパク質キナーゼ（ＡＭＰＫ）は、グルコース活性化ならびに脂肪酸の取り込み及び酸化を含めて、細胞エネルギーの恒常性において役割を担う酵素である。ＡＭＰＫが薬理学的に活性化されると、ＴＬＲ誘導性のグルコース消費及び樹状細胞の活性化が抑制されることが示されていることに加えて、ＡＭＰＫシグナル伝達を活性化する薬物を全身投与すると、いくつかの炎症性疾患モデルにおいて免疫寛容原性の免疫応答の誘導が進むことが示されている（このことは、Ｅｖｅｒｔｓ ａｎｄ Ｐｅａｒｃｅ（２０１４）Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：２０３に概説されている）。したがって、いくつかの態様では、本開示は、ＡＭＰＫをコードするか、またはＤＣにおけるＡＭＰＫの発現もしくは活性を活性化し、それによってｔｏｌＤＣを誘導する核酸（例えば、ｍＲＮＡ）を提供する。
樹状細胞及び骨髄系細胞によるＴｒｅｇ細胞の制御
免疫応答を抑制するための方法の一実施形態では、本開示の脂質ベースの組成物（ＬＮＰを含む）と結合／によってカプセル化される核酸は、免疫応答が抑制されるようにＴｒｅｇ細胞を制御する（Ｔｒｅｇ細胞を誘導し、増殖させ、及び／または維持などする）機能を有する核酸（例えば、Ｔｒｅｇ細胞を誘導し、増殖させ、及び／または維持するように機能するタンパク質をコードするｍＲＮＡ）である。一実施形態では、Ｔｒｅｇ細胞を誘導し、増殖させ、及び／または維持するように機能する核酸は、樹状細胞及び／または骨髄系細胞において発現し、その結果、Ｔｒｅｇ細胞が誘導され、増殖し、及び／または維持される。一実施形態では、Ｔｒｅｇ細胞を誘導し、増殖させ、及び／または維持するように機能する核酸は、樹状細胞及び／または骨髄系細胞において発現するものであり、Ｔｒｅｇ誘導性サイトカインをコードする。
Ｔｒｅｇ細胞の誘導、増殖、及び／または維持に関与することが実証されているサイトカインは、当該技術分野で多く報告されている。例えば、Ｔｒｅｇ細胞は、ＩＬ−２受容体を豊富に発現するが、ＩＬ−２自体を発現する能力を有さない。したがって、Ｔｒｅｇ細胞は、他の細胞が産生するＩＬ−２に依存している。したがって、一実施形態では、本開示は、ＩＬ−２をコードする核酸（例えば、ＩＬ−２をコードするｍＲＮＡ）を提供し、この核酸は、樹状細胞及び／または骨髄系細胞によって発現し、それによってＴｒｅｇ細胞を誘導し、増殖させ、及び／または維持する。
ＩＬ−２に加えて、ＴＧＦ−βもまた、ＩＬ−２と組み合わせた場合を含めて、Ｔｒｅｇの誘導を促進することが実証されている（例えば、Ｌｕ ｅｔ ａｌ．（２０１０）ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ５：ｅ１５１５０、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８６：６３２９−６３３７を参照のこと）。したがって、一実施形態では、本開示は、ＴＦＧ−βをコードする核酸（例えば、ｍＲＮＡ）を、単独で提供するか、またはＩＬ−２をコードする核酸（例えば、ｍＲＮＡ）と組み合わせて提供し、こうした核酸は、樹状細胞及び／または骨髄系細胞において発現し、それによってＴｒｅｇ細胞を誘導し、増殖させ、及び／または維持する。
抗炎症性サイトカインであるＩＬ−１０は、Ｔｒｅｇ細胞の産生を促進することが示されている（例えば、Ｈｅｏ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｌｅｔｔｅｒｓ １２７：１５０−１５６を参照のこと）。ＩＬ−１０は、病原性Ｔｈ１７細胞応答を抑制する能力をＴｒｅｇ細胞に付与することも実証されている（Ｃｈａｕｄｈｒｙ ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ３４：５６６−５７８）。さらに、ＩＬ−１０は、誘導性Ｔｒｅｇ細胞（ｉＴｒｅｇ）の分化を増強する（Ｈｓｕ ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９５：３６６５−３６７４）。したがって、一実施形態では、本開示は、ＩＬ−１０をコードする核酸（例えば、ｍＲＮＡ）を、単独で提供するか、または他のサイトカイン（例えば、ＩＬ−２、ＴＦＧ−β）をコードするｍＲＮＡと組み合わせて提供し、こうした核酸は、樹状細胞及び／または骨髄系細胞において発現し、それによってＴｒｅｇ細胞を誘導し、増殖させ、及び／または維持する。
ＩＬ−３５を用いてナイーブヒトＴ細胞を処理すると、ＩＬ−３５を介して免疫抑制を媒介する制御性Ｔ細胞集団（ｉＴＲ３５制御性細胞と称される）（この免疫抑制は、ＩＬ−１０またはＴＦＧ−βを介しては媒介されない）が誘導されることが実証されている（Ｃｏｌｌｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１：１０９３−１１０１）。こうしたｉＴＲ３５制御性細胞は、転写因子であるＦｏｘｐ３を発現しないか、または必要とせず、ｉｎ ｖｉｖｏでの抑制性及び安定性が高い（Ｃｏｌｌｉｓｏｎ（前出の文献））。しかしながら、ヒトＴｒｅｇは、ＩＬ−３５を構成的に発現しない（Ｂａｒｄｅｌ ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８１：６８９８−６９０５）。したがって、ｉＴＲ３５制御性細胞は、他の細胞が産生するＩＬ−３５に依存している。したがって、一実施形態では、本開示は、ＩＬ−３５をコードする核酸（例えば、ＩＬ−３５をコードするｍＲＮＡ）を提供し、この核酸は、樹状細胞及び／または骨髄系細胞において発現し、それによってＴｒｅｇ細胞（例えば、ｉＴＲ３５制御性細胞）を誘導し、増殖させ、及び／または維持する。
ＧＭ−ＣＳＦ処理は、樹状細胞の増殖及びＴｒｅｇ細胞の蓄積を引き起こすことが示されており、これによって自己免疫が抑制されることが様々なｉｎ ｖｉｖｏモデルにおいて実証されている。こうして自己免疫が抑制されたｉｎ ｖｉｖｏモデルには、糖尿病（Ｇａｕｄｒｅａｕ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７９：３６３８−３６４７）、重症筋無力症（Ｓｈｅｎｇ ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２８：１７２−１８０）、及び自己免疫性甲状腺炎（Ｇａｎｅｓｈ ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２１：２６９−２８２）が含まれる。したがって、いくつかの態様では、本開示は、ＧＭ−ＣＳＦをコードする核酸（例えば、ＧＭ−ＣＳＦをコードするｍＲＮＡ）を提供し、この核酸は、樹状細胞及び／または骨髄系細胞において発現し、それによってＴｒｅｇ細胞を誘導し、増殖させ、及び／または維持する。
樹状細胞及び／または骨髄系細胞の活性の上方調節
一実施形態では、本開示の免疫細胞送達増強脂質組成物は、免疫細胞（樹状細胞または骨髄系細胞など）の活性化または活性を刺激する（上方制御する、増進する）ために使用され、この刺激は、例えば、免疫応答を刺激することが望ましい状況（がん治療、または感染性疾患（例えば、ウイルス感染症、細菌感染症、真菌感染症、原虫感染症、もしくは寄生虫感染症）の治療など）において行われる。
免疫細胞（樹状細胞または骨髄系細胞など）の活性化または活性を刺激する一実施形態では、脂質ナノ粒子と結合／によってカプセル化される薬剤（例えば、ｍＲＮＡ）は、サイトカインであるタンパク質をコードし、こうしたタンパク質の例としては、限定されないが、本明細書の可溶性標的セクションに記載のサイトカインが挙げられる。
免疫細胞（樹状細胞または骨髄系細胞など）の活性化または活性を刺激する一実施形態では、脂質ナノ粒子と結合／によってカプセル化される薬剤（例えば、ｍＲＮＡ）は、ケモカインまたはケモカイン受容体であるタンパク質をコードし、こうしたタンパク質の例は、限定されないが、本明細書の可溶性標的セクションに記載のものである。
免疫細胞（樹状細胞または骨髄系細胞など）の活性化または活性を刺激する一実施形態では、脂質ナノ粒子と結合／によってカプセル化される薬剤（例えば、ｍＲＮＡ）は、免疫応答を上方制御する共刺激因子であるタンパク質をコードするか、または免疫応答を下方制御する共刺激因子のアンタゴニストであるタンパク質をコードし、こうしたタンパク質の例は、限定されないが、本明細書に記載のものである。
免疫細胞（樹状細胞または骨髄系細胞など）の活性化または活性を刺激する一実施形態では、脂質ナノ粒子と結合／によってカプセル化される薬剤（例えば、ｍＲＮＡ）は、抗原（ワクチン抗原（例えば、ウイルス抗原、細菌抗原、腫瘍抗原）など）であるタンパク質をコードする。例えば、実施例１４に記載のように、本発明の脂質ベースの組成物は、ウイルス抗原をコードするｍＲＮＡワクチンの免疫原性を増進することが実証されている。したがって、一実施形態では、脂質ナノ粒子と結合／によってカプセル化される薬剤（例えば、ｍＲＮＡ）は、目的抗原（がん抗原または感染性疾患抗原（例えば、細菌抗原、ウイルス抗原、真菌抗原、原生動物抗原、もしくは寄生生物抗原）など）をコードする。
リンパ球系細胞
Ｂ細胞の活性の調節
免疫応答を抑制するための方法の一実施形態では、本開示の脂質ベースの組成物（ＬＮＰを含む）と結合／によってカプセル化される核酸は、免疫応答が抑制されるようにＢ細胞の活性を調節する（例えば、上方制御するか、または下方制御する）核酸である。核酸は、それ自体がＢ細胞の活性を調節するもの（例えば、アンチセンス核酸、ｓｉＲＮＡ、ｍＩＲ、及び／またはアンタゴｍｉｒなど）であるか、あるいはＢ細胞の活性を調節するタンパク質をコードするもの（例えば、ｍＲＮＡ）であり得る。Ｂ細胞への核酸の標的化は、免疫応答の抑制（例えば、Ｂ細胞による抗体産生の下方制御）を引き起こす作用を直接的にもたらし得る。あるいは、Ｂ細胞への核酸の標的化は、１つ以上の他の細胞型（複数可）（例えば、他のエフェクター細胞）の活性を調節することによってその後に免疫応答の抑制を引き起こす作用をもたらし得る。さらに、非Ｂ細胞（例えば、樹状細胞、骨髄系細胞、またはＴ細胞）への核酸の標的化は、Ｂ細胞の活性の抑制を引き起こす作用をもたらし得、その結果、Ｂ細胞介在性の免疫応答が抑制される（抗体産生の下方制御などが生じる）。
一実施形態では、核酸は、天然起源の分子をコードするか、または天然起源の分子の活性を調節する（例えば、上方制御するか、もしくは下方制御する）。一実施形態では、天然起源の分子は、細胞内分子（転写因子または細胞シグナル伝達カスケード分子など）である。別の実施形態では、天然起源の分子は、分泌分子（サイトカインまたはケモカインなど）である。別の実施形態では、天然起源の分子は、膜貫通型分子（表面受容体、ホーミング分子、シグナル伝達分子、または免疫調節分子（例えば、ＨＬＡ分子）など）である。
一実施形態では、核酸は、修飾された（すなわち、非天然起源の）分子をコードする。修飾タンパク質の例としては、限定されないが、半減期が改変（例えば、長時間化または短時間化）されたタンパク質、及び自体が細胞表面に繋留されるように修飾されたタンパク質（例えば、可溶性タンパク質に膜貫通型ドメインが付加され、その結果、修飾タンパク質となることで、可溶性タンパク質が細胞表面に繋留される）が挙げられる。
別の実施形態では、核酸は、修飾された（すなわち、非天然起源の）膜貫通型タンパク質または細胞内タンパク質をコードする。修飾された膜貫通型タンパク質の例としては、限定されないが、キメラ受容体、ドミナントネガティブな受容体、及び構成的に活性な変異受容体が挙げられる。修飾された細胞内タンパク質の例としては、限定されないが、シグナル伝達カスケードに関与する変異／改変酵素（例えば、キナーゼ、ホスファターゼ、ジオキシゲナーゼ、及び同様のもの）（免疫シナプスにおけるシグナル伝達を改変する（例えば、反転させる）分子（例えば、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）またはＢ細胞受容体（ＢＣＲ）を介してシグナル伝達をアゴナイズまたはアンタゴナイズする分子）を含む）、ならびにアポトーシスを調節する（例えば、誘導する）分子、が挙げられる。
Ｂ細胞の活性を調節し、それによって免疫応答を調節するための特定の手法の非限定的な例は、以下にさらに詳述される。
Ｂ細胞の枯渇
Ｂ細胞の枯渇は、免疫応答（例えば、自己免疫疾患におけるもの）を抑制するための優れた手法として報告されている（このことについては、例えば、Ｓａｎｚ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１２：２５４６−２５６７、Ｄｏｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．（２００９）Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ．Ｒｅｖ．９：８２−８９、Ｐａｔｅｉｎａｋｉｓ ｅｔ ａｌ．（２０１４）Ｂｉｏｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｉｎｔｌ．２０１４：Ａｒｔｉｃｌｅ ＩＤ９７３６０９に概説されている）。したがって、免疫応答を抑制するための方法の一実施形態では、本開示の脂質ベースの組成物（ＬＮＰを含む）と結合／によってカプセル化される核酸は、免疫応答が抑制されるようにＢ細胞を枯渇させる機能を有する核酸（例えば、Ｂ細胞が枯渇するように機能するタンパク質をコードするｍＲＮＡ）である。一実施形態では、核酸は、Ｂ細胞自体に送達され、それによってＢ細胞を枯渇させる（直接的な枯渇と称される）。付加的または代替的に、ある特定の実施形態では、核酸は、非Ｂ細胞（例えば、樹状細胞、骨髄系細胞、Ｔ細胞）に送達され、その結果、Ｂ細胞が枯渇する（間接的な枯渇と称される）。一実施形態では、Ｂ細胞が直接的または間接的に枯渇する結果、抗体産生（例えば、自己免疫反応に関与する抗原特異的抗体産生）が下方制御（すなわち、阻害、低減、抑制）される。
一実施形態では、Ｂ細胞を枯渇させるための核酸は、Ｂ細胞特異的抗体をコードするか、またはＢ細胞表面マーカーのシグナル伝達経路を標的とする。Ｂ細胞特異的抗体は、様々な自己免疫疾患の治療における使用を含めて、ｉｎ ｖｉｖｏでのＢ細胞の枯渇を達成するために当該技術分野で使用されている。例えば、抗ＣＤ２０抗体（例えば、リツキシマブ、オクレリズマブ）は、治療においてＢ細胞を枯渇させるために使用されており、こうした治療の対象は、例えば、関節リウマチ（例えば、Ｐａｖｅｌｋａ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ａｒｔｈｒ．Ｒｈｅｕｍ．５２：Ｓ１３１、Ｃｏｈｅｎ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ａｒｔｈｒ．Ｒｈｅｕｍ．５２：Ｓ６７７、Ｋｅｙｓｔｏｎｅ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ａｒｔｈｒ．Ｒｈｅｕｍ．５２：Ｓ１４１を参照のこと）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）（例えば、Ｌｅａｎｄｒｏ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．４４：１５４２−１５４５、Ａｎｏｌｉｋ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ａｒｔｈｒ．Ｒｈｅｕｍ．５０：３５８０−３５９０、Ｓｆｉｋａｋｉｓ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ａｒｔｈｒ．Ｒｈｅｕｍ．５２：５０１−５１３を参照のこと）、血管炎（Ｋｅｏｇｈ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ａｒｔｈｒ．Ｒｈｅｕｍ．５２：２６２−２６８、Ｅｒｉｋｓｓｏｎ（２００５）Ｊ．Ｉｎｔｅｒ．Ｍｅｄ．２５７：５４０−５４８、Ｇｕｉｌｌｅｖｉｎ ｅｔ ａｌ．（２０１４）Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３７１：１７７１−１７８０）、天疱瘡（例えば、Ｊｏｌｙ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ｌａｎｃｅｔ ３８９：２０３１−２０４０を参照のこと）、及び多発性硬化症（Ｈａｕｓｅｒ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３７６：２２１−２３４、Ｍｏｎｔａｌｂａｎ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３７６：２０９−２２０）である。したがって、一実施形態では、Ｂ細胞を枯渇させる核酸（例えば、ｍＲＮＡ）は、抗ＣＤ２０抗体をコードする核酸であるか、またはＢ細胞におけるＣＤ２０シグナル伝達経路を標的とする核酸である。
抗ＣＤ１９抗体（例えば、イネビリズマブ）もまた、ｉｎ ｖｉｖｏでのＢ細胞の枯渇を達成するために使用されており、例えば、多発性硬化症の治療において使用される（例えば、Ａｇｉｕｓ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ｍｕｌｔ．Ｓｃｌｅｒ．ｄｏｉ：１０．１１７７／１３５２４５８５１７７４０６４１を参照のこと）。したがって、一実施形態では、Ｂ細胞を枯渇させる核酸（例えば、ｍＲＮＡ）は、抗ＣＤ１９抗体をコードする核酸であるか、またはＢ細胞におけるＣＤ１９シグナル伝達経路を標的とする核酸である。
抗ＣＤ２２抗体（例えば、エプラツズマブ）もまた、ｉｎ ｖｉｖｏでのＢ細胞の枯渇を達成するために使用されており、例えば、ＳＬＥの治療において使用される（例えば、Ｗａｌｌａｃｅ ｅｔ ａｌ．（２０１４）Ａｎｎ．Ｒｈｅｕｍ．Ｄｉｓ．７３：１８３−１９０を参照のこと）。したがって、一実施形態では、Ｂ細胞を枯渇させる核酸（例えば、ｍＲＮＡ）は、抗ＣＤ２２抗体をコードする核酸であるか、またはＢ細胞におけるＣＤ２２シグナル伝達経路を標的とする核酸である。
ＢＡＦＦ（Ｂ細胞活性化因子（当該技術分野ではＴＡＬＬ−１、ＴＨＡＮＫ、ＢｌｙＳ、及びｚＴＮＦ４としても知られる））に対する抗体（例えば、ベリムマブ）もまた、ＳＬＥの治療における使用（例えば、Ｊａｃｏｂｉ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ａｒｔｈｒ．Ｒｈｅｕｍ．６２：２０１−２１０を参照のこと）を含めて、ｉｎ ｖｉｖｏでのＢ細胞の枯渇に使用されている（例えば、Ｒａｕｃｈ ｅｔ ａｌ．（２００９）ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ４（５）：ｅ５４５６、Ｋｏｗａｌｃｚｙｋ−Ｑｕｉｎｔａｓ ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２９１：１８８２６−１８８３４を参照のこと）。したがって、一実施形態では、Ｂ細胞を枯渇させるための核酸（例えば、ｍＲＮＡ）は、抗ＢＡＦＦ抗体をコードする核酸であるか、またはＢ細胞におけるＢＡＦＦシグナル伝達経路を標的とする核酸である。
Ｂ細胞を枯渇させるための別の手法は、Ｂ細胞における制御経路を１つ以上活性化させてＢ細胞をアポトーシスさせるものである。したがって、一実施形態では、Ｂ細胞を枯渇させるための核酸は、Ｂ細胞においてアポトーシスを誘導する。例えば、抗原非依存的にＢ細胞上の抑制性ＦｃｇＲＩＩＢ受容体を介してシグナル伝達を生じさせると（例えば、当該受容体を過剰発現させるか、または抗原非依存的に当該受容体にリガンドを結合させることによって行われる）、Ｂ細胞のアポトーシスが引き起こされることが示されている（例えば、Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｂｌｏｏｄ １１４：３７３６、Ｔｚｅｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｓｃｉ．２２：８７を参照のこと）。したがって、一実施形態では、Ｂ細胞を枯渇させるために使用される核酸（例えば、ｍＲＮＡ）はＦｃｇＲＩＩＢ受容体をコードし、その結果、Ｂ細胞においてアポトーシスを誘導するための手段としてＢ細胞においてＦｃｇＲＩＩＢが過剰発現し、それによってＢ細胞が枯渇する。
アポトーシスを介してＢ細胞を枯渇させるための別の手法は、Ｍｃｌ−１のアンタゴニストを使用するものである。Ｍｃｌ−１タンパク質は、Ｂｃｌ−２タンパク質ファミリーの生存促進性メンバーである。Ｍｃｌ−１は、アポトーシス促進性タンパク質であるＢａｘ及びＢａｋの活性化を遮断するものであり、複数の造血細胞型の生存及び維持に重要であることが報告されている（Ａｎｓｔｅｅ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ Ｄｉｆｆ．２４：３９７−４０８）。Ｍｃｌ−１が過剰発現すると、マウスにおいて自己免疫性腎疾患を増悪させることが示されている（Ａｎｓｔｅｅ ｅｔ ａｌ．（前出の文献））。さらに、Ｍｃｌ−１は、形質細胞の生存に必須であることが示されている（Ｐｅｐｅｒｚａｋ ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４：２９０−２９７）。したがって、一実施形態では、Ｂ細胞を枯渇させるために使用される核酸は、Ｍｃｌ−１アンタゴニストであるか、またはＭｃｌ−１アンタゴニストをコードするもの（例えば、ｍＲＮＡ）であり、その結果、Ｂ細胞においてアポトーシスを誘導するための手段としてＢ細胞においてＭｃｌ−１が下方制御され、それによってＢ細胞が枯渇する。Ｍｃｌ−１アンタゴニストは、例えば、抑制性ＲＮＡ（例えば、アンチセンスＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲ）であり得る。一実施形態では、Ｍｃｌ−１アンタゴニストは、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲ）である。ｍｉｒ−２９は、Ｍｃｌ−１タンパク質の発現及びアポトーシスを制御することが報告されており、ｍｉｒ−２９ｂを強制発現させると、細胞でのＭｃｌ−１タンパク質の発現が低減され、ＴＲＡＩＬ介在性のアポトーシスに対する感作が生じる（Ｍｏｔｔ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ２６：６１３３−６１４０）。したがって、一実施形態では、Ｍｃｌ−１アンタゴニスト核酸は、ｍｉｒ−２９ファミリーのメンバー（ｍｉｒ−２９ｂなど）である。
ＣＡＲ−Ｔ細胞もまた、Ｂ細胞を枯渇させ、それによって免疫応答（例えば、自己免疫疾患におけるもの）を抑制する目的で使用され得る。例えば、Ｄｓｇ３細胞外ドメインの切断型フラグメントがＣＤ１３７／ＣＤ３シグナル伝達ドメインに融合したものを含むキメラ抗原受容体を発現するＣＡＲ−Ｔ細胞は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及び天疱瘡マウスモデルにおいて抗Ｄｓｇ３特異的Ｂ細胞を枯渇させるために使用されている（例えば、Ｅｌｌｅｂｒｅｃｈｔ ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３５３：１７９−１８４を参照のこと）。したがって、一実施形態では、Ｂ細胞を枯渇させるために使用される核酸（例えば、ｍＲＮＡ）は、Ｂ細胞に特異的なＣＡＲ（例えば、Ｂ細胞の表面に発現した自己抗体に特異的なＣＡＲ、またはＢ細胞の表面に発現するＢ細胞マーカー（ＣＤ１９、ＣＤ２０、もしくはＣＤ２２など）に特異的なＣＡＲ）をコードし、その結果、ＣＡＲ−Ｔ細胞がＣＡＲを発現するとＢ細胞が枯渇する（間接的にＢ細胞が枯渇する）。
抗原の免疫寛容化
抗原特異的免疫寛容化は、免疫寛容原性形態の抗原（例えば、免疫寛容原性形態の自己抗原）を単独で送達するか、または追加の免疫修飾因子と組み合わせて送達することによってｉｎ ｖｉｖｏで達成されている。具体的には、自己細胞及びナノ粒子をうまく利用して免疫寛容原性抗原を送達することで抗原特異的免疫寛容化が達成されている（このことについては、例えば、Ｐｅａｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．１１４：２４０−２５５、Ｋｉｓｈｉｍｏｔｏ ａｎｄ Ｍａｌｄｏｎａｄｏ（２０１８）Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：２３０に概説されている）。したがって、免疫応答を抑制するための方法の一実施形態では、本開示の脂質ベースの組成物（ＬＮＰを含む）と結合／によってカプセル化される核酸は、免疫応答が抑制されるように抗原特異的免疫寛容化を達成する機能を有する核酸（例えば、抗原特異的免疫寛容化を達成するように機能するタンパク質をコードするｍＲＮＡ）である。一実施形態では、核酸は、Ｂ細胞自体に送達されることで抗原特異的免疫寛容化を達成する。付加的または代替的に、ある特定の実施形態では、核酸は、非Ｂ細胞（例えば、樹状細胞、骨髄系細胞、Ｔ細胞）に送達されることで抗原特異的免疫寛容化を達成する。いくつかの態様では、核酸は、抗原提示細胞（例えば、樹状細胞、単球、マクロファージ）に送達され、それによってＢ細胞の抗原特異的免疫寛容化を達成する。
一実施形態では、抗原の免疫寛容化を達成するために使用される核酸（例えば、ｍＲＮＡ）は、１つ以上の免疫寛容原性抗原（例えば、１つ以上の免疫寛容原性自己抗原）をコードする。例えば、脳炎誘発性ペプチドを輸送する微粒子は、免疫寛容を誘導し実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）を改善させることが示されている（Ｇｅｔｔｓ ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３０：１２１７−１２２４）。自己ミエリンペプチド結合型の細胞は、多発性硬化症において抗原特異的免疫寛容を誘導することが示されている（Ｌｕｔｔｅｒｏｔｔｉ ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．５：１８８）。
別の実施形態では、抗原の免疫寛容化は、１つ以上の免疫寛容原性抗原（例えば、１つ以上の免疫寛容原性自己抗原）をコードする核酸を、抗原特異的免疫寛容化を促進する１つ以上の追加の薬剤と組み合わせて使用して達成され、こうした追加の薬剤の例としては、限定されないが、免疫抑制剤、抑制性サイトカイン、及び免疫修飾因子が挙げられる。例えば、ラパマイシンを免疫寛容原性抗原と組み合わせて使用することでＥＡＥにおいて抗原特異的免疫寛容が達成されている（Ｍａｌｄｏｎａｎｄｏ ｅｔ ａｌ．（２０１４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １１２：Ｅ１５６−１６５）。さらに、アリール炭化水素受容体（ＡｈＲ）の小分子活性化因子を免疫寛容原性 抗原と組み合わせて使用することでＥＡＥにおける抗原特異的免疫寛容が達成されている（Ｙｅｓｔｅ ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０９：１１２７０−１１２７５）。さらに、サイトカインであるＩＬ−１０を免疫寛容原性抗原と組み合わせて使用することでＥＡＥにおける抗原特異的免疫寛容が達成されている（Ｃａｐｐｅｌｌａｎｏ ｅｔ ａｌ．（２０１４）Ｖａｃｃｉｎｅ ３２：５６８１−５６８９）。したがって、いくつかの態様では、抗原の免疫寛容化は、１つ以上の免疫寛容原性抗原をコードする核酸を使用して達成され、この免疫寛容化は、当該核酸を、例えば、ラパマイシン、ＡｈＲ阻害剤、またはＩＬ−１０と組み合わせて使用することで達成される。
抗体産生の抑制
免疫応答を抑制するための方法の一実施形態では、本開示の脂質ベースの組成物（ＬＮＰを含む）と結合／によってカプセル化される核酸は、免疫応答が抑制されるように抗体産生を抑制する（すなわち、阻害する、下方制御する）機能を有する核酸（例えば、抗体産生を抑制するように機能するタンパク質をコードするｍＲＮＡ）である。一実施形態では、核酸は、Ｂ細胞自体に送達され、それによって抗体産生を抑制する（直接的な抗体産生抑制と称される）。付加的または代替的に、いくつかの実施形態では、核酸は、非Ｂ細胞（例えば、抗体産生Ｂ細胞を制御するＴ細胞）に送達され、その結果、抗体産生が抑制される（間接的な抗体産生抑制と称される）。
一実施形態では、抗体産生は、Ｂ細胞における抗体遺伝子の転写または翻訳を抑制または阻害する核酸を使用してＢ細胞において直接的に抑制される。例えば、Ｂ細胞における抗体重鎖または抗体軽鎖のｍＲＮＡを標的とし、それによってＢ細胞による抗体産生を抑制する抑制性ＲＮＡ（例えば、ｓｉＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、ｍｉＲ）が使用される。したがって、一実施形態では、本開示の脂質ベースの組成物（ＬＮＰを含む）と結合／によってカプセル化される核酸は、Ｂ細胞における抗体産生を抑制するように機能する抗抗体核酸である。
Ｂ細胞による抗体産生を直接的に抑制するための別の手法は、Ｂ細胞における制御経路を１つ以上活性化することでＢ細胞による抗体産生を抑制するものである。例えば、抗原非依存的にＢ細胞上の抑制性ＦｃｇＲＩＩＢ受容体を介してシグナル伝達を生じさせると（例えば、当該受容体を過剰発現させるか、または抗原非依存的に当該受容体にリガンドを結合させることによって行われる）、Ｂ細胞における抗体産生が抑制されることが示されている（例えば、Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｂｌｏｏｄ １１４：３７３６、Ｔｚｅｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｓｃｉ．２２：８７を参照のこと）。したがって、一実施形態では、抗体産生を抑制するために使用される核酸（例えば、ｍＲＮＡ）は、ＦｃｇＲＩＩＢ受容体をコードし、その結果、Ｂ細胞による抗体産生を抑制するための手段としてＢ細胞においてＦｃｇＲＩＩＢが過剰発現する。
別の実施形態では、抗体産生は、抗体産生の制御に関与するＴ細胞の活性を調節する核酸を使用して間接的に抑制される。具体的には、濾胞性ヘルパーＴ細胞（ＴＦＨ細胞）は、抗体産生を支援する機能をＢ細胞に与えることを担っており、一方、濾胞性制御性Ｔ細胞（ＴＦＲ細胞）は、ＴＦＨ細胞介在性の抗体産生を抑制する能力を有する（例えば、Ｓａｇｅ ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７：１４３６−１４４６を参照のこと）。したがって、一実施形態では、本開示の脂質ベースの組成物（ＬＮＰを含む）と結合／によってカプセル化される核酸は、Ｂ細胞による抗体産生が抑制されるように濾胞性ヘルパーＴ細胞の活性を抑制する機能を有する核酸（例えば、ｍＲＮＡ）である。一実施形態では、核酸は、ＴＦＨ細胞活性を抑制することが当該技術分野で知られるサイトカインをコードする。別の実施形態では、本開示の脂質ベースの組成物（ＬＮＰを含む）と結合／によってカプセル化される核酸は、Ｂ細胞による抗体産生が抑制されるように濾胞性制御性Ｔ細胞の活性を刺激する機能を有する核酸（例えば、ｍＲＮＡ）である。例えば、一態様では、核酸は、ＴＦＲ細胞活性を刺激することが当該技術分野で知られるサイトカインをコードする。
ＢＲｅｇ分化の調節
ＢＲｅｇ細胞は、免疫応答を下方調節するように機能するＢ細胞亜集団である。ＢＲｅｇ細胞の抑制機能は、抗原提示細胞機能の下方制御、エフェクターＴ細胞機能の抑制、及び制御性Ｔ細胞の誘導を引き起こすサイトカイン（ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−３５、及びＴＧＦβなど）の放出によって媒介される。多数の自己免疫疾患においてＢＲｅｇ細胞のレベルが低下していることが報告されており（例えば、Ｍａｖｒｏｐｏｕｌｏｓ ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ａｒｔｈｒ．Ｒｈｅｕｍ．６８：４９４−５０４、Ｍａｖｒｏｐｏｕｌｏｓ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８４：３３−４１、Ａｙｂａｒ ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８０：１７８−１８８を参照のこと）、このことは、ＢＲｅｇ細胞のレベルを上昇させることが、自己免疫の軽減に有益であり得ることを示唆している。
したがって、免疫応答を抑制するための方法の一実施形態では、本開示の脂質ベースの組成物（ＬＮＰを含む）と結合／によってカプセル化される核酸は、免疫応答が抑制されるようにＢＲｅｇ細胞を制御する（ＢＲｅｇ細胞を誘導し、増殖させ、及び／または維持などする）機能を有する核酸（例えば、ＢＲｅｇ細胞を誘導し、増殖させ、及び／または維持するように機能するタンパク質をコードするｍＲＮＡ）である。一実施形態では、ＢＲｅｇ細胞を誘導し、増殖させ、及び／または維持するように機能する核酸はＢ細胞において発現し、その結果、ＢＲｅｇ細胞が誘導され、増殖し、及び／または維持される。付加的または代替的に、別の実施形態では、ＢＲｅｇ細胞を誘導し、増殖させ、及び／または維持するように機能する核酸は、非Ｂ細胞（例えば、樹状細胞、骨髄系細胞、及び／またはＴ細胞）において発現し、その結果、ＢＲｅｇ細胞が誘導され、増殖し、及び／または維持される。一実施形態では、ＢＲｅｇ細胞を誘導し、増殖させ、及び／または維持するように機能する核酸は、ＢＲｅｇ誘導性サイトカインである。別の実施形態では、ＢＲｅｇ細胞を誘導し、増殖させ、及び／または維持するように機能する核酸は、ＢＲｅｇ発生に関与するシグナル伝達経路を調節する。
ＢＲｅｇ細胞の誘導、増殖、及び／または維持に関与することが実証されているサイトカインは、当該技術分野で多く報告されている。例えば、ＩＬ−６及びＩＬ−１βは、ＢＲｅｇ細胞の分化を直接的に促進することが示されている（例えば、Ｒｏｓｓｅｒ ｅｔ ａｌ．（２０１４）Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ．２０：１３３４−１３３９を参照のこと）。したがって、一実施形態では、ＩＬ−６及び／またはＩＬ−１βをコードする核酸（例えば、ＩＬ−６及び／またはＩＬ−１βをコードするｍＲＮＡ）は、免疫細胞において発現し、それによってＢＲｅｇ細胞を誘導し、増殖させ、及び／または維持する。
さらに、ＩＬ−２１は、ＢＲｅｇ細胞の発生を促進することが実証されている（例えば、Ｙｏｓｈｉｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｎａｔｕｒｅ ４９１：２６４−２６８を参照のこと）。したがって、一実施形態では、ＩＬ−２１をコードする核酸（例えば、ｍＲＮＡ）は、免疫細胞において発現し、それによってＢＲｅｇ細胞を誘導し、増殖させ、及び／または維持する。
さらに、ＧＭ−ＣＳＦ及びＩＬ−１５は、ＢＲｅｇ細胞の分化に関与している（例えば、Ｒａｆｅｉ ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ．１５：１０３８−１０４５を参照のこと）。したがって、一実施形態では、ＧＭ−ＣＳＦ及び／またはＩＬ−１５をコードする核酸（例えば、ＧＭ−ＣＳＦ及び／またはＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ）は、免疫細胞において発現し、それによってＢＲｅｇ細胞を誘導し、増殖させ、及び／または維持する。
さらに、ＩＬ−３５は、ＢＲｅｇ細胞を誘導し、誘導したＢＲｅｇ細胞の変換を促進することでＩＬ−３５ならびにＩＬ−１０を産生するＢＲｅｇ細胞サブセットを生じさせることが示されている（例えば、Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０１４）Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ．２０：６３３−６４１を参照のこと）。したがって、一実施形態では、ＩＬ−３５をコードする核酸（例えば、ｍＲＮＡ）は、免疫細胞において発現し、それによってＢＲｅｇ細胞を誘導し、増殖させ、及び／または維持する。
ＢＲｅｇ細胞促進性サイトカインに加えて、Ｂ細胞におけるある特定のシグナル伝達経路の活性化は、ＢＲｅｇ細胞の発生と関連している。例えば、ＣＤ４０刺激（すなわち、ＣＤ４０介在性のシグナル伝達経路の活性化）は、ＢＲｅｇ細胞の誘導に関与することが示されている（例えば、Ｙｏｓｈｉｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｎａｔｕｒｅ ４９１：２６４−２６８を参照のこと）。したがって、一実施形態では、ＣＤ４０シグナル伝達経路を刺激するように機能する核酸（例えば、ｍＲＮＡ）は、Ｂ細胞において発現し、それによってＢＲｅｇ細胞を誘導し、増殖させ、及び／または維持する。
さらに、Ｔｏｌｌ様受容体（例えば、ＴＬＲ９、ＴＬＲ４、ＴＬＲ２）へのリガンドの結合は、ＢＲｅｇ細胞の発生に関与することが実証されている（例えば、Ｍｉｌｅｓ ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０９：８８７−８９２、Ｍｅｙｅｒ−Ｂａｈｌｂｕｒｇ ａｎｄ Ｒａｗｌｉｎｇｓ（２０１２）Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１７：１４９９−１５１６、ｖａｎ ｄｅｒ Ｖｌｕｇｔ ｅｔ ａｌ．（２０１４）Ｍｅｔｈ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１１９０：１２７−１４１を参照のこと）。したがって、一実施形態では、ＴＬＲシグナル伝達経路（例えば、ＴＬＲ９シグナル伝達経路、ＴＬＲ４シグナル伝達経路、及び／またはＴＬＲ２シグナル伝達経路）を刺激するように機能する核酸（例えば、ｍＲＮＡ）は、Ｂ細胞において発現し、それによってＢＲｅｇ細胞を誘導し、増殖させ、及び／または維持する。
エフェクターＴ細胞の調節
免疫応答を抑制するための方法の一実施形態では、本開示の脂質ベースの組成物（ＬＮＰを含む）と結合／によってカプセル化される核酸は、免疫応答が抑制されるようにエフェクターＴ細胞の活性を調節する（例えば、上方制御するか、または下方制御する）核酸である。いくつかの実施形態では、核酸は、それ自体がエフェクターＴ細胞の活性を調節するもの（例えば、ｓｉＲＮＡ、ｍＩＲ、及び／またはアンタゴｍｉｒなど）である。いくつかの実施形態では、核酸は、エフェクターＴ細胞の活性を調節するペプチドまたはポリペプチドをコードするもの（例えば、ｍＲＮＡ）である。いくつかの実施形態では、エフェクターＴ細胞への核酸の標的化は、免疫応答の抑制を直接的にもたらす。いくつかの実施形態では、非エフェクターＴ細胞（例えば、樹状細胞、Ｂ細胞、Ｔｒｅｇ）への核酸の標的化は、エフェクターＴ細胞の活性の調節、及び免疫応答の抑制をもたらす。例えば、いくつかの実施形態では、樹状細胞または骨髄系細胞への核酸の標的化は、エフェクターＴ細胞の活性の調節をもたらす。
一実施形態では、核酸は、天然起源の分子をコードするか、または天然起源の分子の活性を調節する（例えば、上方制御するか、もしくは下方制御する）。一実施形態では、天然起源の分子は、細胞内分子（転写因子または細胞シグナル伝達カスケード分子など）である。別の実施形態では、天然起源の分子は、分泌分子（サイトカインまたはケモカインなど）である。別の実施形態では、天然起源の分子は、膜貫通型分子（表面受容体、ホーミング分子、シグナル伝達分子、または免疫調節分子（例えば、ＨＬＡ分子）など）である。
一実施形態では、核酸は、修飾された（すなわち、非天然起源の）分子をコードする。修飾タンパク質の例としては、限定されないが、半減期が改変（例えば、長時間化または短時間化）されたタンパク質、及び自体が細胞表面に繋留されるように修飾されたタンパク質（例えば、可溶性タンパク質に膜貫通型ドメインが付加され、その結果、修飾タンパク質となることで、可溶性タンパク質が細胞表面に繋留される）が挙げられる。
別の実施形態では、核酸は、修飾された（すなわち、非天然起源の）膜貫通型タンパク質または細胞内タンパク質をコードする。修飾された膜貫通型タンパク質の例としては、限定されないが、キメラ受容体、ドミナントネガティブな受容体、及び構成的に活性な変異受容体が挙げられる。修飾された細胞内タンパク質の例としては、限定されないが、シグナル伝達カスケードに関与する変異／改変酵素（例えば、キナーゼ、ホスファターゼ、ジオキシゲナーゼ、及び同様のもの）（免疫シナプスにおけるシグナル伝達を改変し得る（例えば、反転させ得る）分子（例えば、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）またはＢ細胞受容体（ＢＣＲ）を介してシグナル伝達をアゴナイズまたはアンタゴナイズし得る分子）を含む）、ならびにアポトーシスを調節（例えば、誘導）し得る分子、が挙げられる。
エフェクターＴ細胞の活性を調節し、それによって免疫応答を抑制するための特定の手法の非限定的な例は、以下にさらに詳述される。
エフェクターＴ細胞アネルギーの誘導
免疫応答を抑制するための方法の一実施形態では、本開示の脂質ベースの組成物（ＬＮＰを含む）と結合／によってカプセル化される核酸は、免疫応答が抑制されるようにエフェクターＴ細胞アネルギーの誘導を刺激する（例えば、促進する、増進する、上方制御する）核酸（例えば、エフェクターＴ細胞アネルギーの誘導を刺激するタンパク質をコードする核酸）である。胸腺では、自己抗原を認識する高親和性のＴ細胞受容体を有するＴ細胞は、負の選択を通じて除去される。自己反応性Ｔ細胞は、負の選択を回避し得、抹消において自己免疫反応を引き起こす可能性があり、このことが自己免疫疾患に繋がる。Ｔ細胞アネルギーは、最適に満たない刺激に応答して確立される低応答性の状態を長期的に誘導することによって自己反応性成熟Ｔ細胞の活性化を制御する末梢性免疫寛容機構である。Ｔ細胞は、抗原認識及び共刺激からだけでなく、サイトカイン受容体、抑制性受容体、または代謝センサーを含む他のシグナル源からもシグナルを受容する。そうしたシグナルがすべて統合されることによってＴ細胞の運命が決まる。アネルギーが誘導される条件下では、Ｔ細胞受容体のシグナル伝達を遮断すると共にサイトカイン遺伝子の発現を抑制するタンパク質を産生させる遺伝子発現プログラムがＴ細胞によって活性化される。
Ｔ細胞アネルギーの機構
Ｔ細胞の運命（活性化するか、またはアネルギー性となるか）を決定付ける一次要因は、ＣＤ２８がそのリガンド（抗原提示細胞上に発現するＣＤ８０及びＣＤ８６）に結合することによって生じる共刺激の存在または強度である（Ｓｃｈｗａｒｔｚ（２００３）Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２１：３０５−３３４、Ｈａｒｄｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，（１９９２）Ｎａｔｕｒｅ ３５６：６０７−６０９、Ｊｅｎｋｉｎｓ ｅｔ ａｌ．，（１９８７）Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １６５：３０２−３１９、Ｑｕｉｌｌ ｅｔ ａｌ．，（１９８７）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １３８：３７０４−３７１２、Ｍａｃｉａｎ ｅｔ ａｌ．，（２００４）Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６：２０９−２１６）。
したがって、一実施形態では、エフェクターＴ細胞アネルギーを誘導する核酸は、ＣＤ２８共刺激を直接的または間接的に抑制する。別の実施形態では、核酸は、ＣＤ２８共刺激を抑制するタンパク質をコードする。ＣＤ２８とＣＴＬＡ−４とは相同性が高く、同じリガンド（ＣＤ８０及びＣＤ８６）に対して競合する（Ｌｉｎｓｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，（１９９０）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８７（１３）：５０３１−５）。こうしたリガンドにＣＴＬＡ４が結合する親和性はＣＤ２８のものと比較して高く、このことによってＣＴＬＡ４がリガンドに対してＣＤ２８と競合することが可能になり、エフェクターＴ細胞応答を抑制する（Ｅｎｇｅｌｈａｒｄｔ ｅｔ ａｌ．，（２００６）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １７７（２）：１０５２−６１）。一実施形態では、ＣＤ２８共刺激を抑制する核酸は、ＣＴＬＡ−４をコードする。別の実施形態では、ＣＤ２８共刺激を抑制する核酸は、リガンド結合を抑制するＣＤ２８結合タンパク質をコードする。別の実施形態では、ＣＤ２８共刺激を抑制する核酸は、ＣＤ２８結合を抑制するＣＤ８０／ＣＤ８６結合タンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、ＣＤ８０／ＣＤ８６−結合タンパク質は、ＣＴＬＡ４−Ｉｇである。
ＣＤ２８がリガンドと結合すると、Ｉｌ２のｍＲＮＡの発現し、当該ｍＲＮＡの安定性が向上するようになる（Ｌｉｎｄｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：３３９−３４３）。ＩＬ−２が産生するとアネルギーの回避が進むと共に、ＩＬ−２受容体を介するシグナル伝達は、ＣＤ２８共刺激の非存在下でのアネルギーの確立を阻止することが示されている（Ｂｏｕｓｓｉｏｔｉｓ ｅｔ ａｌ．，（１９９４）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６６：１０３９−１０４２）。したがって、いくつかの実施形態では、エフェクターＴ細胞アネルギーを誘導する核酸は、ＩＬ−２の産生を低減する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２の産生を低減する核酸は、ＩＬ２のｍＲＮＡの転写を抑制する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２の産生を低減する核酸は、Ｉｌ２のｍＲＮＡの翻訳を抑制する。
エフェクターＴ細胞の遊走の抑制
免疫応答を抑制するための方法の一実施形態では、本開示の脂質ベースの組成物（ＬＮＰを含む）と結合／によってカプセル化される核酸は、免疫応答が抑制されるようにエフェクターＴ細胞の遊走を抑制する（例えば、低減する、下方制御する）核酸（例えば、エフェクターＴ細胞の遊走を抑制するタンパク質をコードする核酸）である。免疫監視、及び有効な適応免疫応答の発達には、リンパ球の輸送を空間的かつ時間的に正確に制御することが必要である。リンパ球の活性化及び遊走の制御がうまくいかなくなると、適応免疫が損なわれ、慢性炎症が生じ得る。いくつかの自己免疫疾患（例えば、関節リウマチ）では、病的炎症は、炎症性細胞が遊走し、炎症部位に留まることに部分的には依存している（Ｐｏｐｅ（２００２）Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２（７）：５２７−３５）。炎症部位へのＴ細胞の輸送は、滑膜の血管内の局所的な活性化によって可能になるものであり、この局所的な活性化は、白血球の動員に必要な機構であるが、こうした機構が変化すると、慢性炎症及び自己免疫が生じ得る。炎症誘発性メディエーターに対する応答では、白血球及び血管細胞が活性化される。その他の免疫細胞の中では特に、Ｔ細胞（Ｔｈ１、Ｔｈ１７、Ｔｒｅｇ、及び可能性としてはＴｈ２２）が系列カスケード（ローリング、停止接着、伸展、クローリング、及び血管外遊走）を開始し、最終的に血管外遊出して炎症部位に到達する。Ｔ細胞の動員及び保持には、多数のサイトカイン、セレクチン、インテグリン、接着分子、ケモカイン、及びケモカイン受容体が関与する。したがって、いくつかの実施形態では、エフェクターＴ細胞の遊走を抑制する核酸は、サイトカイン、セレクチン、インテグリン、インテグリン、接着分子、ケモカイン、及びケモカイン受容体からなる群から選択されるタンパク質の発現を抑制する。
白血球が接着するには、ローリング事象、接着事象、及び血管外遊走事象が協調的に作用することが必要である。適切な接着分子及び走化性因子を発現及びディスプレイする白血球サブセットは、特定の部位に動員される。白血球ローリングはセレクチンによって媒介され、セレクチン（Ｌ−セレクチン）は、ほとんどの白血球集団が発現しており、炎症内皮細胞もまた、セレクチン（Ｅ−セレクチン及びＰ−セレクチン）を発現している（Ｐａｔｅｌ ｅｔ ａ．，（２００２）Ｓｅｍｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４（２）：７３−８１）。ローリングには、白血球及び炎症内皮細胞が発現するセレクチン及びＰ−セレクチン糖タンパク質リガンド−１（ＰＳＧＬ−１）が必要である。白血球間相互作用にはＰＳＬＧ１とＬ−セレクチンとの間の相互作用が必要であり、この相互作用によって、血液が流れる条件の下で炎症内皮に白血球が繋留され、接着することが可能になる（Ｚａｒｂｏｃｋ ｅｔ ａｌ，（２０１１）Ｂｌｏｏｄ １１８（２６）：６７４３−６７５１）。
したがって、いくつかの実施形態では、エフェクターＴ細胞の遊走を抑制する核酸は、セレクチンの発現を抑制する。いくつかの実施形態では、セレクチンは、Ｌ−セレクチン、Ｅ−セレクチン、またはＰ−セレクチンである。いくつかの実施形態では、セレクチンは、Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド−１（ＰＳＧＬ−１）である。
インテグリンは、ローリングならびに白血球の堅固な接着及び停止接着に関与する（Ｎｏｕｒｓｈａｒｇｈ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（２０１４）４１（５）：６９４−７０７）。異なる細胞型は、特定のインテグリンを発現する。例えば、α１インテグリンは、活性化したＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞において強固に発現する。Ｔｈ１７細胞は、α２インテグリンを上方制御する。インテグリンのアンタゴニスト及びインテグリンのリガンドは、マウスのコラーゲン誘導関節炎モデルにおける炎症を阻止することが示されている（ｄｅ Ｆｏｕｇｅｒｏｌｌｅｓ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ １０５（６）：７２１−９）。走化性因子の濃度勾配に沿う経内皮遊走が、細胞間隙経路または経細胞経路を通じて白血球が炎症組織に遊走する最終ステップである。このプロセスの特異性は、この白血球接着カスケードの異なる構成要素が差次的に発現することによって達成されるものであり、こうした構成要素には、セレクチン、インテグリン、ケモカイン、及びそのそれぞれのリガンドまたは受容体が含まれる。例えば、ナイーブＴ細胞におけるＬＦＡ−１、α４インテグリン、及びＣＣＲ７の発現レベルは低く、これらの発現レベルが低いことは、リンパ系組織を通じた細胞再循環を可能にするが、炎症組織への細胞の移行を可能にするには不十分である。対照的に、ＬＦＡ−１、α−インテグリン、Ｅ−セレクチンリガンド及びＰ−セレクチンリガンド、ＣＣＲ１、ＣＣＲ５、ならびにＣＸＣＲ３の発現が高まったエフェクターＴ細胞及びメモリーＴ細胞は、こうした組織に移行する。
したがって、いくつかの実施形態では、エフェクターＴ細胞の遊走を抑制する核酸は、インテグリンの発現を抑制する。
ケモカイン
ケモカイン及びケモカイン受容体は、炎症部位に免疫細胞を選択的に動員し、そこで活性化させることにおいて中心的な役割を担うため、現在、いくつかの慢性自己免疫障害における有望な治療標的と見なされている。例えば、Ｔｈ１７細胞は、いくつかの自己免疫障害（例えばＲＡ）の初期段階及び炎症段階に寄与している。Ｔｈ１７細胞は、他のケモカイン受容体（ＣＣＲ４、ＣＣＲ１０、及びＣＸＣＲ３など）も発現する（１２６，１２７）ものの、ＣＣＲ６を発現することによって特徴付けられる（Ｌｉｍ ｅｔ ａｌ．，（２００８）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １８０（１）：１２２−９）。ＣＣＬ２０（ＣＣＲ６のリガンド）は、Ｔ細胞、ナイーブＢ細胞、及び未熟ＤＣの選択的走化性因子である。ＣＣＲ６＋Ｔｈ１７細胞は、末梢血、滑液、及び炎症組織において同定されている。ＣＣＲ６＋Ｔｈ細胞における他のケモカイン受容体の発現もまた、特定のセットのサイトカインの発現と関連している。ＣＣＲ４＋／ＣＣＲ６＋Ｔｈ細胞はＩＬ−１７Ａを高レベルで発現する一方で、このインターロイキンのレベルはＣＸＣＲ３＋／ＣＣＲ６＋細胞では低いが、ＣＸＣＲ３＋／ＣＣＲ６＋細胞のＩＦＮ−γレベルは高い。ＣＣＲ６＋／ＣＣＲ１０＋Ｔｈ細胞のＩＬ−２２の発現レベルは高く、このことによってＴｈ２２細胞集団が定義付けられる。ＣＣＲ６＋Ｔｈ細胞において見られる他のケモカイン受容体はＣＣＲ５、ＣＸＣＲ４、及びＣＸＣＲ６であるが、これらのケモカイン受容体は特定のサイトカインプロファイルとは関連していない。こうしてサイトカインが産生されることで、単球、好中球、滑膜線維芽細胞、及び破骨細胞を含めて、他の細胞型が炎症部位に誘引され、そこで活性化され、こうした細胞型が疾患の進行に寄与する（Ｐａｕｌｉｓｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，（２０１５）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ ７４（１）：４３−５３）。
したがって、いくつかの実施形態では、エフェクターＴ細胞の遊走を抑制する核酸は、免疫細胞におけるケモカインまたはケモカイン受容体の発現を抑制する。
エフェクターＴ細胞の枯渇
免疫応答を抑制するための方法の一実施形態では、本開示の脂質ベースの組成物（ＬＮＰを含む）と結合／によってカプセル化される核酸は、免疫応答が抑制されるようにエフェクターＴ細胞の枯渇を誘導する（例えば、促進する、増加させる）核酸である。
活性化Ｔ細胞は、１）活性化誘導細胞死（ＡＩＣＤ）、及び２）生存シグナルの消失、という２つの異なる経路を介してアポトーシスによって死滅することが知られている。活性化Ｔ細胞がＴＣＲシグナルを受容すると、自体がＦａｓＬを上方制御し、Ｆａｓ−ＦａｓＬ相互作用を介して自体を死滅させるか、またはその隣接細胞を死滅させる（Ａｌｄｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９５）Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １９９５；１８１：７１−７７、Ｂｒｕｎｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，（１９９５）Ｎａｔｕｒｅ １９９５；３７３：４４１−４４４、Ｄｈｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９５）Ｎａｔｕｒｅ ３７３：４３８−４４１、Ｊｕ ｅｔ ａｌ．，（１９９５）Ｎａｔｕｒｅ １９９５；３７３：４４４−４４８）。
したがって、いくつかの実施形態では、核酸は、Ｔ細胞のアポトーシスを誘導することによってエフェクターＴ細胞の枯渇を誘導する。いくつかの実施形態では、核酸は、ＦａｓまたはＦａｓＬを上方制御することによってＴ細胞のアポトーシスを誘導する。いくつかの実施形態では、核酸は、生存シグナルを下方制御することによってＴ細胞のアポトーシスを誘導する。
リンパ球系細胞の活性の上方調節
一実施形態では、本開示の免疫細胞送達増強脂質組成物は、免疫細胞（リンパ球系細胞（例えば、Ｔ細胞及び／またはＢ細胞）など）の活性化または活性を刺激する（上方制御する、増進する）ために使用され、この刺激は、例えば、免疫応答を刺激することが望ましい状況（がん治療、または感染性疾患（例えば、ウイルス感染症、細菌感染症、真菌感染症、原虫感染症、もしくは寄生虫感染症）の治療など）において行われる。
免疫細胞（リンパ球系細胞（例えば、Ｔ細胞及び／またはＢ細胞）など）の活性化または活性を刺激する一実施形態では、脂質ナノ粒子と結合／によってカプセル化される薬剤（例えば、ｍＲＮＡ）は、サイトカインであるタンパク質をコードし、こうしたタンパク質の例としては、限定されないが、本明細書の可溶性標的セクションに記載のサイトカインが挙げられる。
免疫細胞（リンパ球系細胞（例えば、Ｔ細胞及び／またはＢ細胞）など）の活性化または活性を刺激する一実施形態では、脂質ナノ粒子と結合／によってカプセル化される薬剤（例えば、ｍＲＮＡ）は、ケモカインまたはケモカイン受容体であるタンパク質をコードし、こうしたタンパク質の例は、限定されないが、本明細書の可溶性標的セクションに記載のものである。
免疫細胞（リンパ球系細胞（例えば、Ｔ細胞及び／またはＢ細胞）など）の活性化または活性を刺激する一実施形態では、脂質ナノ粒子と結合／によってカプセル化される薬剤（例えば、ｍＲＮＡ）は、免疫応答を上方制御する共刺激因子であるタンパク質をコードするか、または免疫応答を下方制御する共刺激因子のアンタゴニストであるタンパク質をコードし、こうしたタンパク質の例は、限定されないが、本明細書に記載のものである。
免疫細胞（リンパ球系細胞（例えば、Ｔ細胞及び／またはＢ細胞）など）の活性化または活性を刺激する一実施形態では、脂質ナノ粒子と結合／によってカプセル化される薬剤（例えば、ｍＲＮＡ）は、抗原受容体（Ｔ細胞受容体またはＢ細胞受容体など）（例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ））をコードする。ＣＡＲの例としては、限定されないが、本明細書の修飾された膜結合型／膜貫通型標的セクションに記載のものが挙げられる。
医薬組成物
本発明の脂質ナノ粒子を含む製剤は、医薬組成物として全体的または部分的に製剤化し得る。医薬組成物は、１つ以上の脂質ナノ粒子を含み得る。例えば、医薬組成物は、１つ以上の異なる治療薬及び／または予防薬を含む１つ以上の脂質ナノ粒子を含み得る。医薬組成物は、本明細書に記載されるような１つ以上の薬学的に許容される賦形剤または副成分をさらに含んでもよい。医薬組成物及び薬剤の製剤及び製造に関する一般的なガイドラインは、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ， ２１ｓｔ Ｅｄｉｔｉｏｎ， Ａ． Ｒ． Ｇｅｎｎａｒｏ；Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ， Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ， Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ， ＭＤ， ２００６におけるものが利用可能である。任意の従来の賦形剤または副成分が本開示の製剤中のＬＮＰの１つ以上の成分と適合しない場合を除いて、従来の賦形剤及び副成分を任意の医薬組成物に使用することができる。賦形剤または副成分は、成分またはＬＮＰとの組み合わせにより、望ましくない生物学的効果またはさもなくば有害な効果が生じる可能性がある場合、製剤のＬＮＰの成分と適合しない可能性がある。
製剤化されて医薬組成物となる本開示の脂質ナノ粒子には、単一の核酸または複数の核酸がカプセル化され得る。複数の核酸がカプセル化される場合、そうした核酸は、同じ型の核酸（例えば、すべてｍＲＮＡ）であり得るか、または異なる型の核酸（例えば、ｍＲＮＡ及びＤＮＡ）であり得る。さらに、同じまたは別々の医薬組成物に複数のＬＮＰが製剤化され得る。例えば、同じまたは別々の医薬組成物は、第１のＬＮＰ及び第２のＬＮＰを含み得、第１のＬＮＰ及び第２のＬＮＰには、同じまたは異なる核酸分子がカプセル化され、第１のＬＮＰ及び第２のＬＮＰは、免疫細胞送達増強脂質を構成成分として含む。他の実施形態では、同じまたは異なる医薬組成物は、第１のＬＮＰ及び第２のＬＮＰを含み得、第１のＬＮＰ及び第２のＬＮＰには、同じまたは異なる核酸分子がカプセル化され、第１のＬＮＰは、免疫細胞送達増強脂質を構成成分として含み、第２のＬＮＰは、免疫細胞送達増強脂質を含まない。
いくつかの実施形態では、１つ以上の賦形剤または副成分は、ＬＮＰを含む医薬組成物の総質量または体積の５０％超を構成する場合がある。例えば、１つ以上の賦形剤または副成分は、製薬上の慣習の５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、またはそれ以上を構成し得る。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される賦形剤は、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％純粋である。いくつかの実施形態では、賦形剤は、ヒトでの使用及び獣医学での使用が承認されている。いくつかの実施形態では、賦形剤は米国食品医薬品局によって承認されている。いくつかの実施形態では、賦形剤は医薬品グレードである。いくつかの実施形態では、賦形剤は、米国薬局方（ＵＳＰ）、欧州薬局方（ＥＰ）、英国薬局方、及び／または国際薬局方の基準を満たしている。
本開示による医薬組成物中の１つ以上の脂質ナノ粒子、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤、及び／または任意の追加の成分の相対量は、その同一性、サイズ、及び／または治療される対象の状態によって異なり、さらに組成物が投与される経路にも依存する。例として、医薬組成物は、０．１％〜１００％（ｗｔ／ｗｔ）の１つ以上の脂質ナノ粒子を含んでもよい。別の例として、医薬組成物は、０．１％〜１５％（ｗｔ／ｖｏｌ）の１つ以上の両親媒性ポリマー（例えば、０．５％、１％、２．５％、５％、１０％、または１２．５％ｗ／ｖ）を含み得る。
ある特定の実施形態では、本開示の脂質ナノ粒子及び／または医薬組成物は、貯蔵及び／または輸送のために冷蔵または冷凍される（例えば、約−１５０℃〜約０℃または約−８０℃〜約−２０℃（例えば、約−５℃、−１０℃、−１５℃、−２０℃、−２５℃、−３０℃、−４０℃、−５０℃、−６０℃、−７０℃、−８０℃、−９０℃、−１３０℃、または−１５０℃）の温度などの４℃以下の温度で貯蔵される）。例えば、１つ以上の脂質ナノ粒子を含む医薬組成物は、例えば約−２０℃、−３０℃、−４０℃、−５０℃、−６０℃、−７０℃、または−８０℃での貯蔵及び／または輸送のために冷蔵される溶液または固体（例えば、凍結乾燥による）である。ある特定の実施形態では、本開示はまた、脂質ナノ粒子の安定性を増加させる方法に関し、例えば、約−１５０℃〜約０℃または約−８０℃〜約−２０℃、例えば、約−５℃、−１０℃、−１５℃、−２０℃、−２５℃、−３０℃、−４０℃、−５０℃、−６０℃、−７０℃、−８０℃、−９０℃、−１３０℃、または−１５０℃の温度などの４℃以下の温度で、脂質ナノ粒子及び／またはその医薬組成物を貯蔵することによる。
脂質ナノ粒子及び／または１つ以上の脂質ナノ粒子を含む医薬組成物は、１つ以上の特定の細胞、組織、臓器、または腎臓系などの系もしくは群への治療薬及び／または予防薬の送達によって提供される治療効果から利益を得る可能性がある患者または対象を含む任意の患者または対象に投与することができる。本明細書で提供される脂質ナノ粒子及び脂質ナノ粒子を含む医薬組成物の説明は、ヒトへの投与に適した組成物を主に対象としているが、このような組成物は一般に任意の他の哺乳動物への投与に適していることを当業者は理解するであろう。組成物を様々な動物への投与に適するようにするためのヒトへの投与に適する組成物の修正はよく理解されており、通常の獣医薬理学者は、もしあれば、通常に過ぎない実験でそのような修正を設計及び／または実施できる。組成物の投与が企図される対象には、ヒト、他の霊長類、ならびにウシ、ブタ、ホース、ヒツジ、ネコ、イヌ、マウス、及び／またはラットなどの商業的に適切な哺乳動物を含む他の哺乳動物が含まれるが、これらに限定されない。
１つ以上の脂質ナノ粒子を含む医薬組成物は、薬理学の分野で知られているかまたは今後開発される任意の方法によって調製することができる。一般に、そのような調製方法には、活性成分を賦形剤及び／または１つ以上の他の副成分と組み合わせ、その後、必要ならばまたは必要に応じて、製品を所望の単回用量単位または複数回用量単位に分割、成形、及び／または包装することが含まれる。
本開示による医薬組成物は、単回単位用量として、及び／または複数の単回単位用量として、大量に調製、包装、及び／または販売することができる。本明細書で使用されるとき、「単位用量」は、所定量の活性成分（例えば、脂質ナノ粒子）を含む医薬組成物の個別の量である。活性成分の量は、一般に、対象に投与される活性成分の投与量及び／または例えばそのような投与量の半分もしくは３分の１などのそのような投与量の便利な画分に等しい。
医薬組成物は、様々な投与経路及び方法に適した様々な形態で調製することができる。一実施形態では、そのような組成物は、液体形態で調製されるか、または凍結乾燥され、さらに（例えば、４℃または氷点下で保管される）。例えば、医薬組成物は、液体剤形（例えば、エマルジョン、マイクロエマルジョン、ナノエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップ、及びエリキシル）、注射可能な形態、固体剤形（例えば、カプセル、錠剤、丸薬、粉末、及び顆粒）、局所及び／または経皮投与用の剤形（例えば、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、粉末、溶液、スプレー、吸入剤、及びパッチ）、懸濁液、粉末、ならびに他の形態で調製され得る。
経口及び非経口投与用の液体剤形には、薬学的に許容されるエマルジョン、マイクロエマルジョン、ナノエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップ、及び／またはエリキシルが含まれるが、これらに限定されない。活性成分に加えて、液体剤形は、例えば水または他の溶媒、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油（特に綿実油、落花生油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油、ゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール、ソルビタンの脂肪酸エステル、及びそれらの混合物などの可溶化剤及び乳化剤など、当技術分野で一般的に使用される不活性希釈剤を含んでもよい。不活性希釈剤に加えて、経口組成物は、追加の治療薬及び／または予防薬、湿潤剤、乳化剤及び懸濁剤、甘味料、香味料、及び／または香料などの追加の薬剤を含むことができる。非経口投与のためのある特定の実施形態では、組成物は、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）、アルコール、油、改質油、グリコール、ポリソルベート、シクロデキストリン、ポリマー、及び／またはそれらの組み合わせなどの可溶化剤と混合される。
注射用製剤、例えば、滅菌注射用水性または油性懸濁液は、適切な分散剤、湿潤剤、及び／または懸濁剤を使用して、公知の技術に従って製剤化することができる。滅菌注射用製剤は、例えば１，３−ブタンジオール溶液として、非毒性の非経口的に許容される希釈剤及び／または溶媒中の滅菌注射用溶液、懸濁液、及び／またはエマルジョンであり得る。使用され得る許容可能な媒体及び溶媒は、水、リンガー液、Ｕ．Ｓ．Ｐ、及び生理食塩液である。滅菌の不揮発性油が、従来、溶媒または懸濁媒体として使用されている。この目的のために、合成モノグリセリドまたはジグリセリドを含む任意の無刺激性不揮発性油が使用され得る。オレイン酸などの脂肪酸も注射剤の調製に使用することができる。
注射用製剤は、例えば、細菌保持フィルターを通しての濾過により、及び／または使用前に滅菌水もしくは他の滅菌注射用媒体に溶解もしくは分散できる滅菌固体組成物の形態で滅菌剤を組み込むことにより滅菌することができる。
活性成分の効果を長引かせるために、皮下または筋肉内注射からの活性成分の吸収を遅延させることがしばしば望ましい。これは、水への溶解度が低い結晶性またはアモルファス材料の液体懸濁液を使用することで実現できる。したがって、薬物の吸収速度はその溶解速度に依存し、結果として、結晶サイズ及び結晶形に依存し得る。代替的に、非経口投与された薬物形態の遅延吸収は、薬物を油性媒体に溶解または懸濁することにより達成される。注射可能なデポー剤は、ポリラクチド−ポリグリコリドなどの生分解性ポリマー中に薬物のマイクロカプセル化されたマトリックスを形成することにより作製される。薬物のポリマーに対する比率及び使用する特定のポリマーの性質に応じて、薬物放出の速度を制御できる。他の生分解性ポリマーの例には、ポリ（オルソエステル）及びポリ（無水物）が含まれる。デポー注射製剤は、薬物を体組織に適合するリポソームまたはマイクロエマルジョンに捕捉することにより調製される。
直腸または膣投与用の組成物は、典型的には、周囲温度では固体であるが体温では液体であり、したがって直腸または膣腔で溶解して活性成分を放出するカカオバター、ポリエチレングリコールまたは坐薬ワックスなどの適切な非刺激性賦形剤と組成物を混合することによって調製できる坐薬である。
組成物の局所及び／または経皮投与用の剤形には、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、粉末、溶液、スプレー、吸入剤、及び／またはパッチが含まれ得る。一般に、活性成分は、滅菌条件下で、薬学的に許容される賦形剤及び／または必要に応じて必要な保存剤及び／または緩衝液と混合される。さらに、本開示は、経皮パッチの使用を企図しており、これは、身体への化合物の制御された送達を提供するという追加の利点をしばしば有する。そのような剤形は、例えば、適切な媒体に化合物を溶解及び／または分配することにより調製することができる。代替的または追加的に、速度制御膜を提供することにより、及び／または化合物をポリマーマトリックス及び／またはゲルに分散させることにより、速度を制御することができる。
本明細書に記載の皮内医薬組成物を送達する際に使用するのに適したデバイスには、米国特許第４，８８６，４９９号；同第５，１９０，５２１号；同第５，３２８，４８３号；同第５，５２７，２８８号；同第４，２７０，５３７号；同第５，０１５，２３５号；同第５，１４１，４９６号；及び同第５，４１７，６６２号に記載されるもののような、短針デバイスが含まれる。皮内組成物は、ＰＣＴ公開ＷＯ９９／３４８５０及びその機能的同等物に記載されているものなど、針の皮膚への有効な浸透長を制限するデバイスによって投与することができる。液体ジェット注射器及び／または角質層を突き刺して真皮に到達するジェットを生成する針を介して真皮に液体組成物を送達するジェット注射装置が適切である。ジェット噴射装置は、例えば、米国特許第５，４８０，３８１号、同第５，５９９，３０２号；同第５，３３４，１４４号；同第５，９９３，４１２号；同第５，６４９，９１２号；同第５，５６９，１８９号；同第５，７０４，９１１号；同第５，３８３，８５１号；同第５，８９３，３９７号；同第５，４６６，２２０号；同第５，３３９，１６３号；同第５，３１２，３３５号；同第５，５０３，６２７号；同第５，０６４，４１３号；同第５，５２０，６３９号；同第４，５９６，５５６号；同第４，７９０，８２４号；同第４，９４１，８８０号；同第４，９４０，４６０号；ならびにＰＣＴ公開ＷＯ９７／３７７０５及び同ＷＯ９７／１３５３７に記載されている。圧縮ガスを使用して粉末形態のワクチンを皮膚の外層から真皮まで加速する弾道粉末／粒子送達装置が適切である。代替的または追加的に、従来の注射器を皮内投与の古典的なマントー法で使用してもよい。
局所投与に適した製剤には、リニメント、ローション、クリーム、軟膏及び／またはペーストなどの水中油及び／または油中水エマルジョン、及び／または溶液及び／または懸濁液などの液体及び／または半液体製剤が含まれるが、これらに限定されない。局所投与可能な製剤は、例えば、約１％〜約１０％（ｗｔ／ｗｔ）の活性成分を含んでもよいが、活性成分の濃度は、溶媒中の活性成分の溶解限度と同じくらい高くてもよい。局所投与用の製剤は、本明細書に記載の１つ以上の追加の成分をさらに含んでもよい。
医薬組成物は、口腔を介した肺投与に適した製剤で調製、包装、及び／または販売することができる。そのような製剤は、活性成分を含む乾燥粒子を含んでもよい。そのような組成物は、好都合には、噴射剤の流れが粉末を分散するように向けられ得る乾燥粉末リザーバーを含むデバイスを使用するか、及び／または密封容器内の低沸点噴射剤に溶解及び／または懸濁した活性成分を含むデバイスなどの自己推進溶媒／粉末分配容器を使用する投与用の乾燥粉末の形態である。乾燥粉末組成物には、砂糖などの固体微粉末希釈剤を含むことができ、単位用量形態で便利に提供される。
低沸点噴射剤には、一般に、大気圧で沸点が６５°Ｆ未満の液体噴射剤が含まれる。一般に、推進剤は組成物の５０％〜９９．９％（ｗｔ／ｗｔ）を構成してもよく、活性成分は組成物の０．１％〜２０％（ｗｔ／ｗｔ）を構成してもよい。噴射剤は、液体非イオン性及び／または固体アニオン性界面活性剤及び／または固体希釈剤（活性成分を含む粒子と同程度の粒径を有し得る）などの追加成分をさらに含み得る。
肺送達用に製剤化された医薬組成物は、溶液及び／または懸濁液の液滴の形態で活性成分を提供し得る。そのような製剤は、活性成分を含む、必要に応じて滅菌された水性及び／または希釈アルコール溶液及び／または懸濁液として調製、包装、及び／または販売され得、任意の噴霧及び／または噴霧デバイスを使用して都合よく投与され得る。そのような製剤は、サッカリンナトリウムなどの香味剤、揮発性油、緩衝剤、界面活性剤、及び／またはメチルヒドロキシベンゾエートなどの保存剤を含むがこれらに限定されない１つ以上の追加成分をさらに含んでもよい。この投与経路により提供される液滴は、約１ｎｍ〜約２００ｎｍの範囲の平均直径を有し得る。
本明細書で肺送達に有用であると記載されている製剤は、医薬組成物の鼻腔内送達に有用である。鼻腔内投与に適した別の製剤は、活性成分を含み、約０．２μｍ〜５００μｍの平均粒子を有する粗い粉末である。そのような製剤は、嗅ぎタバコを摂取する方法で、すなわち鼻の近くに保持された粉末の容器から鼻道を介して急速に吸入することにより投与される。
経鼻投与に適した製剤は、例えば、約０．１％（ｗｔ／ｗｔ）という少量から約１００％（ｗｔ／ｗｔ）という多量までの活性成分を含んでもよく、本明細書に記載の１つ以上の追加成分を含んでもよい。医薬組成物は、頬側投与に適した製剤で調製、包装、及び／または販売することができる。そのような製剤は、例えば、従来の方法を使用して作られた錠剤及び／またはロゼンジの形態であり得、例えば、０．１％〜２０％（ｗｔ／ｗｔ）の活性成分であり得、残りは経口溶解性及び／または分解性組成物、ならびに必要に応じて、本明細書に記載の１つ以上の追加成分を含む。代替的に、口腔投与に適した製剤は、活性成分を含む粉末及び／またはエアロゾル化及び／または噴霧化された溶液及び／または懸濁液を含み得る。そのような粉末、エアロゾル化、及び／またはエアロゾル化された製剤は、分散されるとき、約０．１ｎｍ〜約２００ｎｍの範囲の平均粒子及び／または液滴サイズを有し、さらに本明細書に記載の１つ以上の追加成分を含んでもよい。
医薬組成物は、点眼に適した製剤で調製、包装、及び／または販売することができる。そのような製剤は、例えば、水性または油性液体賦形剤中の活性成分の０．１／１．０％（ｗｔ／ｗｔ）溶液及び／または懸濁液を含む点眼薬の形態であってもよい。そのような液滴は、緩衝剤、塩、及び／または本明細書に記載の任意の追加の成分のうちの１つ以上をさらに含み得る。有用な他の眼科的に投与可能な製剤には、微結晶形態及び／またはリポソーム製剤中の活性成分を含むものが含まれる。点耳薬及び／または点眼薬は、本開示の範囲内であると考えられる。
本開示の他の実施形態
本開示は、下記の実施形態に関する。このセクションを通じて、実施形態という用語は、「Ｅ」と略されており、「Ｅ」の後には序数が付く。例えば、Ｅ１は、実施形態１と同義である。
Ｅ１．（ｉ）イオン化可能な脂質、
（ｉｉ）有効量のフィトステロール、
（ｉｉｉ）任意選択の非カチオン性ヘルパー脂質、
（ｉｖ）任意選択のＰＥＧ脂質、
（ｖ）任意選択の構造脂質、及び
（ｖｉ）核酸分子
を含む脂質ナノ粒子であって、
前記有効量の前記フィトステロールが、前記フィトステロールを含まない脂質ナノ粒子と比較して免疫細胞への前記核酸分子の送達を増進する、前記脂質ナノ粒子。
Ｅ２．前記免疫細胞における前記核酸分子の細胞内濃度が増進する、Ｅ１に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ３．前記免疫細胞による前記核酸分子の取り込みが増進する、Ｅ１に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ４．前記免疫細胞における前記核酸分子の活性が増進する、Ｅ１に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ５．前記免疫細胞における前記核酸分子の発現が増進する、Ｅ１に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ６．前記核酸分子によって前記免疫細胞の活性化または活性が調節される、Ｅ１〜Ｅ５のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ７．前記核酸分子によって前記免疫細胞の活性化または活性が増加する、Ｅ６に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ８．前記核酸分子によって前記免疫細胞の活性化または活性が低減される、Ｅ６に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ９．前記核酸分子によってコードされるタンパク質の活性が、前記免疫細胞において増進する、Ｅ１に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ１０．前記核酸分子によってコードされるタンパク質の発現が、前記免疫細胞において増進する、Ｅ１に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ１１．前記タンパク質によって前記免疫細胞の活性化または活性が調節される、Ｅ９〜Ｅ１０のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ１２．前記タンパク質によって前記免疫細胞の活性化または活性が増加する、Ｅ１１に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ１３．前記タンパク質によって前記免疫細胞の活性化または活性は低減される、Ｅ１１に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ１４．前記免疫細胞が、Ｔ細胞、樹状細胞、マクロファージ、及びＢ細胞からなる群から選択される、Ｅ１〜Ｅ１３のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ１５．前記免疫細胞が、Ｔ細胞である、Ｅ１４に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ１６．前記免疫細胞が、Ｂ細胞である、Ｅ１４に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ１７．送達が、ｉｎ ｖｉｖｏで増進する、Ｅ１〜Ｅ１６のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ１８．前記フィトステロールが、７０％超、８０％超、または９０％超の純度を有する、Ｅ１〜Ｅ１７のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ１９．前記フィトステロールが、９５％超の純度を有する、Ｅ１〜Ｅ１７のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ２０．前記フィトステロールが、９７％、９８％、または９９％の純度を有する、Ｅ１〜Ｅ１７のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ２１．前記フィトステロールが、シトステロール、スチグマステロール、またはそれらの組み合わせである、Ｅ１〜Ｅ２０のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ２２．前記フィトステロールが、シトステロールまたはその塩もしくはエステルを含む、Ｅ２１に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ２３．前記フィトステロールが、スチグマステロール またはその塩もしくはエステルを含む、Ｅ２１に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ２４．前記フィトステロールが、ベータ−シトステロール
Figure 2021512090
 またはその塩もしくはエステルである、Ｅ１〜Ｅ２０のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ２５．前記ベータ−シトステロールが、７０％超または８０％超の純度を有する、Ｅ２４に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ２６．前記ベータ−シトステロールが、９０％超の純度を有する、Ｅ２４に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ２７．前記ベータ−シトステロールが、９５％超の純度を有する、Ｅ２４に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ２８．前記ベータ−シトステロールが、９７％、９８％、または９９％の純度を有する、Ｅ２４に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ２９．構造脂質を含まない、Ｅ１〜Ｅ２８のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ３０．構造脂質またはその塩を含む、Ｅ１〜Ｅ２８のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ３１．前記構造脂質が、コレステロールまたはその塩である、Ｅ３０に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ３２．コレステロールのｍｏｌ％が、前記脂質ナノ粒子に存在するフィトステロールのｍｏｌ％の約１％〜５０％である、Ｅ３１に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ３３．コレステロールのｍｏｌ％が、前記脂質ナノ粒子に存在するフィトステロールのｍｏｌ％の約１０％〜４０％である、Ｅ３１に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ３４．コレステロールのｍｏｌ％が、前記脂質ナノ粒子に存在するフィトステロールのｍｏｌ％の約２０％〜３０％である、Ｅ３１に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ３５．コレステロールのｍｏｌ％が、前記脂質ナノ粒子に存在するフィトステロールのｍｏｌ％の約３０％である、Ｅ３１に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ３６．前記イオン化可能な脂質が、式（Ｉ）、式（ＩＡ）、式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、式（ＩＩｂ）、式（ＩＩｃ）、式（ＩＩｄ）、式（ＩＩｅ）、式（ＩＩＩ）、及び式（ＩＩＩａ１−８）のいずれかの化合物、及び／または化合物Ｘ、化合物Ｙ、化合物Ｚ、化合物Ｑ、もしくは化合物Ｍのいずれか、を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ３７．前記イオン化可能な脂質が、３−（ジドデシルアミノ）−Ｎ１，Ｎ１，４−トリドデシル−１−ピペラジンエタンアミン（ＫＬ１０）、Ｎ１−［２−（ジドデシルアミノ）エチル］−Ｎ１，Ｎ４，Ｎ４−トリドデシル−１，４−ピペラジンジエタンアミン（ＫＬ２２）、１４，２５−ジトリデシル−１５，１８，２１，２４−テトラアザ−オクタトリアコンタン（ＫＬ２５）、１，２−ジリノレイルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ−ＤＭＡ）、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノメチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−Ｋ−ＤＭＡ）、ヘプタトリアコンタ−６，９，２８，３１−テトラエン−１９−イル４−（ジメチルアミノ）ブタノエート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）、２，２−ジリノレイル−４−（２−ジメチルアミノエチル）−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、１，２−ジオレイルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン（ＤＯＤＭＡ）、２−（｛８−［（３β）−コレスト−５−エン−３−イルオキシ］オクチル｝オキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−１−アミン（Ｏｃｔｙｌ−ＣＬｉｎＤＭＡ）、（２Ｒ）−２−（｛８−［（３β）−コレスト−５−エン−３−イルオキシ］オクチル｝オキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−１−アミン（Ｏｃｔｙｌ−ＣＬｉｎＤＭＡ（２Ｒ））、及び（２Ｓ）−２−（｛８−［（３β）−コレスト−５−エン−３−イルオキシ］オクチル｝オキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−１−アミン（Ｏｃｔｙｌ−ＣＬｉｎＤＭＡ（２Ｓ））からなる群から選択される少なくとも１つの脂質である、先行実施形態のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ３８．前記イオン化可能な脂質が、
Figure 2021512090
 またはその塩である、先行実施形態のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ３９．前記イオン化可能な脂質が、
Figure 2021512090
 またはその塩である、先行実施形態のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ４０．非カチオン性ヘルパー脂質を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ４１．前記非カチオン性ヘルパー脂質が、リン脂質である、Ｅ４０に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ４２．前記リン脂質が、１，２−ジリノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１，２−ジウンデカノイル−ｓｎ−グリセロ−ホスホコリン（ＤＵＰＣ）、１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、１，２−ジ−Ｏ−オクタデセニル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：０ Ｄｉｅｔｈｅｒ ＰＣ）、１−オレオイル−２−コレステリルヘミスクシノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＯＣｈｅｍｓＰＣ）、１−ヘキサデシル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｃ１６ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、１，２−ジリノレノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジアラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、１，２−ジフィタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＭＥ １６．０ ＰＥ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、１，２−ジリノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、１，２−ジリノレノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、１，２−ジアラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、１，２−ジドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｒａｃ−（１−グリセロール）ナトリウム塩（ＤＯＰＧ）、スフィンゴミエリン、及びそれらの混合物からなる群から選択される、Ｅ４１に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ４３．前記リン脂質が、ＤＳＰＣである、Ｅ４２に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ４４．前記非カチオン性ヘルパー脂質が、オレイン酸である、Ｅ４０に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ４５．ＰＥＧ脂質を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ４６．前記ＰＥＧ脂質が、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、ＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロール、及びそれらの混合物からなる群から選択される、Ｅ４５に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ４７．前記ＰＥＧ脂質が、ＰＥＧ−ｃ−ＤＯＭＧ脂質、ＰＥＧ−ＤＭＧ脂質、ＰＥＧ−ＤＬＰＥ脂質、ＰＥＧ−ＤＭＰＥ脂質、ＰＥＧ−ＤＰＰＣ脂質、及びＰＥＧ−ＤＳＰＥ脂質からなる群から選択される、Ｅ４５に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ４８．前記ＰＥＧ脂質が、ＰＥＧ−ＤＭＧである、Ｅ４７に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ４９．イオン化可能な脂質を約３０ｍｏｌ％〜約６０ｍｏｌ％含み、リン脂質を約０ｍｏｌ％〜約３０ｍｏｌ％含み、ステロールを約１８．５ｍｏｌ％〜約４８．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％〜約１０ｍｏｌ％含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ５０．イオン化可能な脂質を約３５ｍｏｌ％〜約５５ｍｏｌ％含み、リン脂質を約５ｍｏｌ％〜約２５ｍｏｌ％含み、ステロールを約３０ｍｏｌ％〜約４０ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％〜約１０ｍｏｌ％含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ５１．イオン化可能な脂質を約５０ｍｏｌ％含み、リン脂質を約１０ｍｏｌ％含み、ステロールを約３８．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ５２．前記核酸分子が、ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ＲＮＡｉ、ｄｓＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９、ｓｓＤＮＡ、及びＤＮＡからなる群から選択される、Ｅ１〜Ｅ５１のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ５３．前記核酸が、ショートマー、アンタゴｍｉｒ、アンチセンス、リボザイム、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、非対称干渉ＲＮＡ（ａｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ダイサー基質ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、及びそれらの混合物からなる群から選択されるＲＮＡである、Ｅ５２に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ５４．前記核酸が、ｍＲＮＡである、Ｅ５３に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ５５．前記ｍＲＮＡが、１つ以上の修飾核酸塩基を含む修飾ｍＲＮＡである、Ｅ５４に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ５６．前記ｍＲＮＡが、ステムループ、鎖終結ヌクレオシド、ポリＡ配列、ポリアデニル化シグナル、及び／または５’キャップ構造、のうちの１つ以上を含む、Ｅ５４またはＥ５５に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ５７．前記ｍＲＮＡが、前記免疫細胞において発現させるためのタンパク質をコードする、Ｅ５４〜Ｅ５６のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ５８．前記免疫細胞が、Ｔ細胞、樹状細胞、マクロファージ、及びＢ細胞からなる群から選択される、Ｅ５７に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ５９．前記免疫細胞が、Ｔ細胞である、Ｅ５８に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ６０．前記免疫細胞が、Ｇ１期の進行の制御が解除されたものである、Ｅ５７に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ６１．前記ｍＲＮＡによってコードされる前記タンパク質が、前記タンパク質を発現する前記免疫細胞の活性化または活性を増加させる、Ｅ５７〜Ｅ６０のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ６２．前記ｍＲＮＡによってコードされる前記タンパク質が、前記タンパク質を発現する前記免疫細胞の活性化または活性を低減する、Ｅ５７〜Ｅ６０のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ６３．前記ｍＲＮＡによってコードされる前記タンパク質が、前記タンパク質を発現する前記免疫細胞に対する免疫応答を増進する、Ｅ５７〜Ｅ６０のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ６４．前記ｍＲＮＡによってコードされる前記タンパク質が、前記タンパク質を発現する前記免疫細胞による免疫応答を増進する、Ｅ５７〜Ｅ６０のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ６５．前記ｍＲＮＡによってコードされる前記タンパク質が、サイトカイン、ケモカイン、共刺激因子、Ｔ細胞受容体（ＴｃＲ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、動員因子、転写因子、エフェクター分子、及び酵素からなる群から選択される、Ｅ５７〜Ｅ６０のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ６６．前記タンパク質が、ＣＤ２８、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳからなる群から選択される共刺激因子である、Ｅ６５に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ６７．前記免疫細胞が、Ｔ細胞であり、前記タンパク質が、がん抗原を認識するＴ細胞受容体またはキメラ抗原受容体である、Ｅ６５に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ６８．前記タンパク質が、サイトカインである、Ｅ６５に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ６９．前記サイトカインが、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、Ｉｌ−１８、ＩＬ−２１、ＴＮＦα、ＧＭ−ＣＳＦ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、Ｅ６８に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ７０．前記タンパク質が、免疫応答を亢進または極性化させる転写因子である、Ｅ６５に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ７１．前記タンパク質が、ＴＧＦβの発現または活性を低減する、Ｅ６５に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ７２．前記免疫細胞が、Ｔ細胞であり、前記タンパク質が、グランザイムＡ／Ｂまたはパーフォリンである、Ｅ６５に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ７３．前記免疫細胞が、Ｔ細胞であり、前記タンパク質が、ＣＴＬＡ４である、Ｅ６２に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ７４．前記ＬＮＰが、第１のタンパク質及び第２のタンパク質をコードする少なくとも２つのｍＲＮＡ分子を含み、前記第１のタンパク質及び／または第２のタンパク質が、免疫細胞の活性化または活性を増加させる、Ｅ６５に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ７５．前記免疫細胞が、Ｂ細胞である、Ｅ５８に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ７６．（ｉ）イオン化可能な脂質、
（ｉｉ）有効量のフィトステロール、
（ｉｉｉ）非カチオン性ヘルパー脂質、
（ｉｖ）ＰＥＧ脂質、及び
（ｖ）目的タンパク質をコードするｍＲＮＡ
を含む脂質ナノ粒子であって、
前記有効量の前記フィトステロールが、前記フィトステロールを含まない脂質ナノ粒子と比較して免疫細胞への前記ｍＲＮＡの送達を増進する、前記脂質ナノ粒子。
Ｅ７７．前記免疫細胞における前記ｍＲＮＡの細胞内濃度が増進する、Ｅ７６に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ７８．前記免疫細胞による前記ｍＲＮＡの取り込みが増進する、Ｅ７６に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ７９．前記免疫細胞における前記ｍＲＮＡの活性が増進する、Ｅ７６に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ８０．前記免疫細胞における前記ｍＲＮＡの発現が増進する、Ｅ７６に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ８１．前記ｍＲＮＡによってコードされる前記タンパク質の活性が、前記免疫細胞において増進する、Ｅ７６に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ８２．前記ｍＲＮＡによってコードされる前記タンパク質の発現が、前記免疫細胞において増進する、Ｅ７６に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ８３．前記タンパク質によって前記免疫細胞の活性化または活性が調節される、Ｅ８１またはＥ８２のいずれかに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ８４．前記タンパク質によって前記免疫細胞の活性化または活性が増加する、Ｅ８３に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ８５．前記タンパク質によって前記免疫細胞の活性化または活性は低減される、Ｅ８３に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ８６．前記免疫細胞が、Ｔ細胞、樹状細胞、マクロファージ、及びＢ細胞からなる群から選択される、Ｅ７６〜Ｅ８５のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ８７．前記免疫細胞が、Ｔ細胞である、Ｅ８５に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ８８．前記免疫細胞が、Ｂ細胞である、Ｅ８５に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ８９．送達が、ｉｎ ｖｉｖｏで増進する、Ｅ７６〜Ｅ８８のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ９０．前記フィトステロールが、７０％超、８０％超、または９５％超の純度を有する、Ｅ７６〜Ｅ８９のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ９１．前記フィトステロールが、９７％、９８％、または９９％の純度を有する、Ｅ７６〜Ｅ８９のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ９２．前記フィトステロールが、シトステロール、スチグマステロール、またはそれらの組み合わせである、Ｅ７６〜Ｅ９１のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ９３．前記フィトステロールが、シトステロールまたはその塩もしくはエステルを含む、Ｅ９２に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ９４．前記フィトステロールが、スチグマステロールまたはその塩もしくはエステルを含む、Ｅ９２に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ９５．前記フィトステロールが、ベータ−シトステロール
Figure 2021512090
 またはその塩もしくはエステルである、Ｅ７６〜Ｅ９１のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ９６．前記ベータ−シトステロールが、７０％超、８０％超、または９０％超の純度を有する、Ｅ７５〜Ｅ９０のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ９７．前記ベータ−シトステロールが、９５％超の純度を有する、Ｅ９５に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ９８．前記ベータ−シトステロールが、９７％、９８％、または９９％の純度を有する、Ｅ９５に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ９９．構造脂質を含まない、Ｅ７６〜Ｅ９８のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ１００．構造脂質またはその塩をさらに含む、Ｅ７６〜Ｅ９８のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ１０１．前記構造脂質が、コレステロールまたはその塩である、Ｅ１００に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ１０２．コレステロールのｍｏｌ％が、前記脂質ナノ粒子に存在するフィトステロールのｍｏｌ％の約１％〜５０％である、Ｅ１０１に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ１０３．コレステロールのｍｏｌ％が、前記脂質ナノ粒子に存在するフィトステロールのｍｏｌ％の約１０％〜４０％である、Ｅ１０１に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ１０４．コレステロールのｍｏｌ％が、前記脂質ナノ粒子に存在するフィトステロールのｍｏｌ％の約２０％〜３０％である、Ｅ１０１に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ１０５．コレステロールのｍｏｌ％が、前記脂質ナノ粒子に存在するフィトステロールのｍｏｌ％の約３０％である、Ｅ１０１に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ１０６．前記イオン化可能な脂質が、式（Ｉ）、式（ＩＡ）、式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、式（ＩＩｂ）、式（ＩＩｃ）、式（ＩＩｄ）、式（ＩＩｅ）、式（ＩＩＩ）、及び式（ＩＩＩａ１−８）のいずれかの化合物、及び／または化合物Ｘ、化合物Ｙ、化合物Ｚ、化合物Ｑ、もしくは化合物Ｍのいずれか、を含む、Ｅ７６〜Ｅ１０５のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ１０７．前記イオン化可能な脂質が、３−（ジドデシルアミノ）−Ｎ１，Ｎ１，４−トリドデシル−１−ピペラジンエタンアミン（ＫＬ１０）、Ｎ１−［２−（ジドデシルアミノ）エチル］−Ｎ１，Ｎ４，Ｎ４−トリドデシル−１，４−ピペラジンジエタンアミン（ＫＬ２２）、１４，２５−ジトリデシル−１５，１８，２１，２４−テトラアザ−オクタトリアコンタン（ＫＬ２５）、１，２−ジリノレイルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ−ＤＭＡ）、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノメチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−Ｋ−ＤＭＡ）、ヘプタトリアコンタ−６，９，２８，３１−テトラエン−１９−イル４−（ジメチルアミノ）ブタノエート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）、２，２−ジリノレイル−４−（２−ジメチルアミノエチル）−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、１，２−ジオレイルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン（ＤＯＤＭＡ）、２−（｛８−［（３β）−コレスト−５−エン−３−イルオキシ］オクチル｝オキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−１−アミン（Ｏｃｔｙｌ−ＣＬｉｎＤＭＡ）、（２Ｒ）−２−（｛８−［（３β）−コレスト−５−エン−３−イルオキシ］オクチル｝オキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−１−アミン（Ｏｃｔｙｌ−ＣＬｉｎＤＭＡ（２Ｒ））、及び（２Ｓ）−２−（｛８−［（３β）−コレスト−５−エン−３−イルオキシ］オクチル｝オキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−１−アミン（Ｏｃｔｙｌ−ＣＬｉｎＤＭＡ（２Ｓ））からなる群から選択される少なくとも１つの脂質である、Ｅ７６〜Ｅ１０６のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ１０８．前記イオン化可能な脂質が、
Figure 2021512090
 またはその塩である、Ｅ７６〜Ｅ１０７のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ１０９．前記イオン化可能な脂質が、
Figure 2021512090
 またはその塩である、Ｅ７６〜Ｅ１０７のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ１１０．前記非カチオン性ヘルパー脂質が、リン脂質である、Ｅ７６〜Ｅ１０９のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ１１１．前記リン脂質が、１，２−ジリノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１，２−ジウンデカノイル−ｓｎ−グリセロ−ホスホコリン（ＤＵＰＣ）、１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、１，２−ジ−Ｏ−オクタデセニル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：０ Ｄｉｅｔｈｅｒ ＰＣ）、１−オレオイル−２−コレステリルヘミスクシノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＯＣｈｅｍｓＰＣ）、１−ヘキサデシル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｃ１６ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、１，２−ジリノレノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジアラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、１，２−ジフィタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＭＥ １６．０ ＰＥ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、１，２−ジリノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、１，２−ジリノレノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、１，２−ジアラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、１，２−ジドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｒａｃ−（１−グリセロール）ナトリウム塩（ＤＯＰＧ）、スフィンゴミエリン、及びそれらの混合物からなる群から選択される、Ｅ１１０に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ１１２．前記リン脂質が、ＤＳＰＣである、Ｅ１１１に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ１１３．前記非カチオン性ヘルパー脂質が、オレイン酸である、Ｅ７６〜Ｅ１０９のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ１１４．前記ＰＥＧ脂質が、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、ＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロール、及びそれらの混合物からなる群から選択される、Ｅ７６〜Ｅ１１３のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ１１５．前記ＰＥＧ脂質が、ＰＥＧ−ｃ−ＤＯＭＧ脂質、ＰＥＧ−ＤＭＧ脂質、ＰＥＧ−ＤＬＰＥ脂質、ＰＥＧ−ＤＭＰＥ脂質、ＰＥＧ−ＤＰＰＣ脂質、及びＰＥＧ−ＤＳＰＥ脂質からなる群から選択される、Ｅ１１４に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ１１６．前記ＰＥＧ脂質が、ＰＥＧ−ＤＭＧである、Ｅ１１５に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ１１７．イオン化可能な脂質を約３０ｍｏｌ％〜約６０ｍｏｌ％含み、リン脂質を約０ｍｏｌ％〜約３０ｍｏｌ％含み、ステロールを約１８．５ｍｏｌ％〜約４８．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％〜約１０ｍｏｌ％含む、Ｅ７６〜Ｅ１１６のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ１１８．イオン化可能な脂質を約３５ｍｏｌ％〜約５５ｍｏｌ％含み、リン脂質を約５ｍｏｌ％〜約２５ｍｏｌ％含み、ステロールを約３０ｍｏｌ％〜約４０ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％〜約１０ｍｏｌ％含む、Ｅ７６〜Ｅ１１７のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ１１９．イオン化可能な脂質を約５０ｍｏｌ％含み、リン脂質を約１０ｍｏｌ％含み、ステロールを約３８．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む、Ｅ７６〜Ｅ１１８のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ１２０．前記ｍＲＮＡが、１つ以上の修飾核酸塩基を含む修飾ｍＲＮＡである、Ｅ７６〜Ｅ１１９のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ１２１．前記ｍＲＮＡが、ステムループ、鎖終結ヌクレオシド、ポリＡ配列、ポリアデニル化シグナル、及び／または５’キャップ構造、のうちの１つ以上を含む、Ｅ７６〜Ｅ１２０のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ１２２．免疫細胞が、Ｇ１期の進行の制御が解除されたものである、Ｅ７６〜Ｅ１２１のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ１２３．前記ｍＲＮＡによってコードされる前記タンパク質が、前記タンパク質を発現する前記免疫細胞の活性化または活性を増加させる、Ｅ７６〜Ｅ１２２のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ１２４．前記ｍＲＮＡによってコードされる前記タンパク質が、前記タンパク質を発現する前記免疫細胞の活性化または活性を低減する、Ｅ７６〜Ｅ１２２のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ１２５．前記ｍＲＮＡによってコードされる前記タンパク質が、前記タンパク質を発現する前記免疫細胞に対する免疫応答を増進する、Ｅ７６〜Ｅ１２２のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ１２６．前記ｍＲＮＡによってコードされる前記タンパク質が、前記タンパク質を発現する前記免疫細胞による免疫応答を増進する、Ｅ７６〜Ｅ１２２のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ１２７．前記ｍＲＮＡによってコードされる前記タンパク質が、サイトカイン、ケモカイン、共刺激因子、Ｔ細胞受容体（ＴｃＲ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、動員因子、転写因子、エフェクター分子、及び酵素からなる群から選択される、Ｅ７６〜Ｅ１２２のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ１２８．前記タンパク質が、ＣＤ２８、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳからなる群から選択される共刺激因子である、Ｅ１２７に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ１２９．前記免疫細胞が、Ｔ細胞であり、前記タンパク質が、がん抗原を認識するＴ細胞受容体またはキメラ抗原受容体である、Ｅ１２７に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ１３０．前記タンパク質が、サイトカインである、Ｅ１２７に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ１３１．前記サイトカインが、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、Ｉｌ−１８、ＩＬ−２１、ＴＮＦα、ＧＭ−ＣＳＦ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、Ｅ１３０に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ１３２．前記タンパク質が、免疫応答を亢進または極性化させる転写因子である、Ｅ１２７に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ１３３．前記タンパク質が、ＴＧＦβの発現または活性を低減する、Ｅ１２７に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ１３４．前記免疫細胞が、Ｔ細胞であり、前記タンパク質が、グランザイムＡ／Ｂまたはパーフォリンである、Ｅ１２７に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ１３５．前記免疫細胞が、Ｔ細胞であり、前記タンパク質が、ＣＴＬＡ４である、Ｅ１２４に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ１３６．前記ＬＮＰが、第１のタンパク質及び第２のタンパク質をコードする少なくとも２つのｍＲＮＡ分子を含み、前記第１のタンパク質及び／または第２のタンパク質が、前記免疫細胞の活性化または活性を増加させる、Ｅ１２７に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ１３７．免疫細胞に核酸分子を送達する方法であって、前記方法が、前記免疫細胞を脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）と接触させることを含み、
前記ＬＮＰが、
（ｉ）イオン化可能な脂質、
（ｉｉ）フィトステロール、
（ｉｉｉ）任意選択の非カチオン性ヘルパー脂質、
（ｉｖ）任意選択のＰＥＧ脂質、
（ｖ）任意選択の構造脂質、及び
（ｖｉ）核酸分子
を含み、
その結果、前記核酸分子が前記免疫細胞に送達される、前記方法。
Ｅ１３８．前記核酸分子が、ｉｎ ｖｉｖｏで前記免疫細胞に送達される、Ｅ１３７に記載の方法。
Ｅ１３９．前記免疫細胞における前記核酸分子の細胞内濃度が増進する、Ｅ１３７に記載の方法。
Ｅ１４０．前記免疫細胞による前記核酸分子の取り込みが増進する、Ｅ１３７に記載の方法。
Ｅ１４１．前記免疫細胞における前記核酸分子の活性が増進するか、または前記免疫細胞における前記核酸分子の発現が増進する、Ｅ１３７に記載の方法。
Ｅ１４２．前記核酸分子によって前記免疫細胞の活性化または活性が調節される、Ｅ１３７〜Ｅ１４１のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１４３．前記核酸分子によって前記免疫細胞の活性化または活性が増加する、Ｅ１４２に記載の方法。
Ｅ１４４．前記核酸分子によって前記免疫細胞の活性化または活性が低減される、Ｅ１４２に記載の方法。
Ｅ１４５．前記核酸分子によってコードされるタンパク質の活性が、前記免疫細胞において増進する、Ｅ１３７に記載の方法。
Ｅ１４６．前記核酸分子によってコードされるタンパク質の発現が、前記免疫細胞において増進する、Ｅ１３７に記載の方法。
Ｅ１４７．前記タンパク質によって前記免疫細胞の活性化または活性が調節される、Ｅ１４５またはＥ１４６のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１４８．前記タンパク質によって前記免疫細胞の活性化または活性が増加する、Ｅ１４７に記載の方法。
Ｅ１４９．前記タンパク質によって前記免疫細胞の活性化または活性は低減される、Ｅ１４７に記載の方法。
Ｅ１５０．前記免疫細胞が、Ｔ細胞である、Ｅ１３７〜Ｅ１４９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１５１．前記免疫細胞が、Ｂ細胞である、Ｅ１３７〜Ｅ１４９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１５２．前記免疫細胞が、Ｂ細胞、マクロファージ、及び樹状細胞からなる群から選択される、Ｅ１３７〜Ｅ１４９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１５３．同じまたは異なる核酸分子がカプセル化された第２のＬＮＰを同時または連続的に投与することをさらに含み、前記第２のＬＮＰが、フィトステロールを含まない、Ｅ１３７〜Ｅ１５２のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１５４．異なる核酸分子がカプセル化された第２のＬＮＰを同時または連続的に投与することをさらに含み、前記第２のＬＮＰが、フィトステロールを含む、Ｅ１３７〜Ｅ１５２のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１５５．免疫細胞中または免疫細胞上での目的タンパク質の発現を誘導する方法であって、前記方法が、前記免疫細胞を脂質ナノ粒子と接触させることを含み、
前記脂質ナノ粒子が、
（ｉ）イオン化可能な脂質、
（ｉｉ）フィトステロール、
（ｉｉｉ）任意選択の非カチオン性ヘルパー脂質、
（ｉｖ）任意選択のＰＥＧ脂質、
（ｖ）任意選択の構造脂質、及び
（ｖｉ）前記目的タンパク質をコードする核酸分子
を含み、
その結果、前記免疫細胞中または前記免疫細胞上で前記目的タンパク質の発現が誘導される、前記方法。
Ｅ１５６．前記核酸によってコードされる前記タンパク質が、前記タンパク質を発現する前記免疫細胞の活性化または活性を増加させる、Ｅ１５５に記載の方法。
Ｅ１５７．前記核酸によってコードされる前記タンパク質が、前記タンパク質を発現する前記免疫細胞の活性化または活性を低減する、Ｅ１５５に記載の方法。
Ｅ１５８．前記核酸によってコードされる前記タンパク質が、前記タンパク質を発現する前記免疫細胞に対する免疫応答を増進する、Ｅ１５５に記載の方法。
Ｅ１５９．前記核酸によってコードされる前記タンパク質が、前記タンパク質を発現する前記免疫細胞による免疫応答を増進する、Ｅ１５５に記載の方法。
Ｅ１６０．前記核酸によってコードされる前記タンパク質が、サイトカイン、ケモカイン、共刺激因子、Ｔ細胞受容体（ＴｃＲ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、動員因子、転写因子、エフェクター分子からなる群から選択される、Ｅ１５５に記載の方法。
Ｅ１６１．前記免疫細胞が、Ｔ細胞である、Ｅ１５５〜Ｅ１６０のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１６２．前記免疫細胞が、Ｂ細胞である、Ｅ１５５〜Ｅ１６０のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１６３．同じまたは異なる核酸分子がカプセル化された第２のＬＮＰを同時または連続的に投与することをさらに含み、前記第２のＬＮＰが、フィトステロールを含まない、Ｅ１５５〜Ｅ１６２のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１６４．異なる核酸分子がカプセル化された第２のＬＮＰを同時または連続的に投与することをさらに含み、前記第２のＬＮＰが、フィトステロールを含む、Ｅ１５５〜Ｅ１６２のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１６５．Ｔ細胞の活性化または活性を調節する方法であって、前記方法がＴ細胞を脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）と接触させることを含み、
前記ＬＮＰが、
（ｉ）イオン化可能な脂質、
（ｉｉ）フィトステロール、
（ｉｉｉ）任意選択の非カチオン性ヘルパー脂質、
（ｉｖ）任意選択のＰＥＧ脂質、
（ｖ）任意選択の構造脂質、及び
（ｖｉ）核酸分子、
を含み、
その結果、Ｔ細胞の活性化または活性が調節される、前記方法。
Ｅ１６６．Ｔ細胞の活性化または活性が増進する、Ｅ１６５に記載の方法。
Ｅ１６７．Ｔ細胞の活性化または活性が低減される、Ｅ１６５に記載の方法。
Ｅ１６８．同じまたは異なる核酸分子がカプセル化された第２のＬＮＰを同時または連続的に投与することをさらに含み、前記第２のＬＮＰが、フィトステロールを含まない、Ｅ１６５〜Ｅ１６７のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１６９．異なる核酸分子がカプセル化された第２のＬＮＰを同時または連続的に投与することをさらに含み、前記第２のＬＮＰが、フィトステロールを含む、Ｅ１６５〜Ｅ１６７のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１７０．タンパク質に対する免疫応答を亢進させる方法であって、前記方法が、免疫細胞を脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）と接触させることを含み、前記ＬＮＰが、
（ｉ）イオン化可能な脂質、
（ｉｉ）フィトステロール、
（ｉｉｉ）任意選択の非カチオン性ヘルパー脂質、
（ｉｖ）任意選択のＰＥＧ脂質、
（ｖ）任意選択の構造脂質、及び
（ｖｉ）核酸分子
を含み、
その結果、前記タンパク質に対する前記免疫応答が亢進する、前記方法。
Ｅ１７１．前記タンパク質が、抗原である、Ｅ１７０に記載の方法。
Ｅ１７２．前記タンパク質が、がん抗原である、Ｅ１７１に記載の方法。
Ｅ１７３．前記タンパク質が、感染性疾患抗原である、Ｅ１７１に記載の方法。
Ｅ１７４．前記免疫細胞が、Ｔ細胞である、Ｅ１７０に記載の方法。
Ｅ１７５．前記免疫細胞が、Ｂ細胞である、Ｅ１７０に記載の方法。
Ｅ１７６．自体に対する免疫応答が増進する前記タンパク質を前記核酸分子がコードする、Ｅ１７１に記載の方法。
Ｅ１７７．自体に対する免疫応答が増進する前記タンパク質とは異なるタンパク質を前記核酸分子がコードする、Ｅ１７１に記載の方法。
Ｅ１７８．同じまたは異なる核酸分子がカプセル化された第２のＬＮＰを同時または連続的に投与することをさらに含み、前記第２のＬＮＰが、フィトステロールを含まない、Ｅ１６９〜Ｅ１７７のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１７９．異なる核酸分子がカプセル化された第２のＬＮＰを同時または連続的に投与することをさらに含み、前記第２のＬＮＰが、フィトステロールを含む、Ｅ１６９〜Ｅ１７７のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１８０．がん抗原に対するＴ細胞応答を亢進させる方法であって、前記方法が、前記Ｔ細胞を脂質ナノ粒子と接触させることを含み、前記脂質ナノ粒子が、
（ｉ）イオン化可能な脂質、
（ｉｉ）フィトステロール、
（ｉｉｉ）任意選択の非カチオン性ヘルパー脂質、
（ｉｖ）任意選択のＰＥＧ脂質、
（ｖ）任意選択の構造脂質、及び
（ｖｉ）前記がん抗原に結合するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードするｍＲＮＡ
を含み、
その結果、前記がん抗原に対する前記Ｔ細胞応答が亢進する、前記方法。
Ｅ１８１．前記がん抗原が、ＣＤ３３であり、前記ＣＡＲが、抗ＣＤ３３ ＣＡＲである、Ｅ１８０に記載の方法。
Ｅ１８２．ＣＤ３３＋急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞に対する前記Ｔ細胞応答が亢進する、Ｅ１８１に記載の方法。
Ｅ１８３．同じまたは異なるｍＲＮＡがカプセル化された第２のＬＮＰを同時または連続的に投与することをさらに含み、前記第２のＬＮＰが、フィトステロールを含まない、Ｅ１８０〜Ｅ１８２のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１８４．異なるｍＲＮＡがカプセル化された第２のＬＮＰを同時または連続的に投与することをさらに含み、前記第２のＬＮＰが、フィトステロールを含む、Ｅ１８０〜Ｅ１８３のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１８５．前記免疫細胞またはＴ細胞が、前記脂質ナノ粒子とｉｎ ｖｉｔｒｏで接触する、Ｅ１３７〜Ｅ１８４のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１８６．前記免疫細胞またはＴ細胞が、前記脂質ナノ粒子を対象に投与することによって、前記脂質ナノ粒子とｉｎ ｖｉｖｏで接触する、Ｅ１３７〜Ｅ１８４のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１８７．前記脂質ナノ粒子が、静脈内投与される、Ｅ１８６に記載の方法。
Ｅ１８８．前記脂質ナノ粒子が、筋肉内投与される、Ｅ１８６に記載の方法。
Ｅ１８９．前記脂質ナノ粒子が、皮下、節内、及び腫瘍内からなる群から選択される経路によって投与される、Ｅ１８６に記載の方法。
Ｅ１９０．前記免疫細胞またはＴ細胞における前記核酸分子の細胞内濃度が増進する、Ｅ１５５〜Ｅ１７９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１９１．前記免疫細胞またはＴ細胞における前記核酸分子の活性が増進する、Ｅ１５５〜Ｅ１７９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１９２．前記免疫細胞またはＴ細胞における前記核酸分子の発現が増進する、Ｅ１５５〜Ｅ１７９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１９３．前記核酸分子によって前記免疫細胞またはＴ細胞の活性化または活性が調節される、Ｅ１５５〜Ｅ１７９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１９４．前記核酸分子によって前記免疫細胞またはＴ細胞の活性化または活性が増加する、Ｅ１５５〜Ｅ１７９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１９５．前記核酸分子によって前記免疫細胞またはＴ細胞の活性化または活性が低減される、Ｅ１５５〜Ｅ１７９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１９６．前記免疫細胞が、Ｔ細胞、樹状細胞、マクロファージ、及びＢ細胞からなる群から選択される、Ｅ１５５〜Ｅ１６４及びＥ１７０〜Ｅ１７９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１９７．前記免疫細胞が、Ｔ細胞である、Ｅ１９６に記載の方法。
Ｅ１９８．前記免疫細胞が、Ｂ細胞である、Ｅ１９６に記載の方法。
Ｅ１９９．前記フィトステロールが、７０％超、８０％超、９０％超、または９５％超の純度を有する、Ｅ１３７〜Ｅ１９８のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２００．前記フィトステロールが、９７％、９８％、または９９％の純度を有する、Ｅ１３７〜Ｅ１９８のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２０１．前記フィトステロールが、シトステロール、スチグマステロール、またはそれらの組み合わせである、Ｅ１３７〜Ｅ２００のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２０２．前記フィトステロールが、シトステロールまたはその塩もしくはエステルを含む、Ｅ２０１に記載の方法。
Ｅ２０３．前記フィトステロールが、スチグマステロールまたはその塩もしくはエステルを含む、Ｅ２０１に記載の方法。
Ｅ２０４．前記フィトステロールが、ベータ−シトステロール
Figure 2021512090
 またはその塩もしくはエステルである、Ｅ１３７〜Ｅ２００のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２０５．前記ベータ−シトステロールが、７０％超または８０％超または９０％超の純度を有する、Ｅ２０３に記載の方法。
Ｅ２０６．前記ベータ−シトステロールが、９５％超の純度を有する、Ｅ２０４に記載の方法。
Ｅ２０７．前記ベータ−シトステロールが、９７％、９８％、または９９％の純度を有する、Ｅ２０４に記載の方法。
Ｅ２０８．構造脂質を含まない、Ｅ１３７〜Ｅ２０７のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２０９．前記脂質ナノ粒子が、構造脂質またはその塩を含む、Ｅ１３７〜Ｅ２０８のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２１０．前記構造脂質が、コレステロールまたはその塩である、Ｅ２０９に記載の方法。
Ｅ２１１．コレステロールのｍｏｌ％が、前記脂質ナノ粒子に存在するフィトステロールのｍｏｌ％の約１％〜５０％である、Ｅ２１０に記載の方法。
Ｅ２１２．コレステロールのｍｏｌ％が、前記脂質ナノ粒子に存在するフィトステロールのｍｏｌ％の約１０％〜４０％である、Ｅ２１０に記載の方法。
Ｅ２１３．コレステロールのｍｏｌ％が、前記脂質ナノ粒子に存在するフィトステロールのｍｏｌ％の約２０％〜３０％である、Ｅ２１０に記載の方法。
Ｅ２１４．コレステロールのｍｏｌ％が、前記脂質ナノ粒子に存在するフィトステロールのｍｏｌ％の約３０％である、Ｅ２１０に記載の方法。
Ｅ２１５．前記イオン化可能な脂質が、式（Ｉ）、式（ＩＡ）、式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、式（ＩＩｂ）、式（ＩＩｃ）、式（ＩＩｄ）、式（ＩＩｅ）、式（ＩＩＩ）、及び式（ＩＩＩａ１−８）のいずれかの化合物、及び／または化合物Ｘ、化合物Ｙ、化合物Ｚ、化合物Ｑ、もしくは化合物Ｍのいずれか、を含む、Ｅ１３７〜Ｅ２１４のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２１６．前記イオン化可能な脂質が、３−（ジドデシルアミノ）−Ｎ１，Ｎ１，４−トリドデシル−１−ピペラジンエタンアミン（ＫＬ１０）、Ｎ１−［２−（ジドデシルアミノ）エチル］−Ｎ１，Ｎ４，Ｎ４−トリドデシル−１，４−ピペラジンジエタンアミン（ＫＬ２２）、１４，２５−ジトリデシル−１５，１８，２１，２４−テトラアザ−オクタトリアコンタン（ＫＬ２５）、１，２−ジリノレイルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ−ＤＭＡ）、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノメチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−Ｋ−ＤＭＡ）、ヘプタトリアコンタ−６，９，２８，３１−テトラエン−１９−イル４−（ジメチルアミノ）ブタノエート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）、２，２−ジリノレイル−４−（２−ジメチルアミノエチル）−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、１，２−ジオレイルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン（ＤＯＤＭＡ）、２−（｛８−［（３β）−コレスト−５−エン−３−イルオキシ］オクチル｝オキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−１−アミン（Ｏｃｔｙｌ−ＣＬｉｎＤＭＡ）、（２Ｒ）−２−（｛８−［（３β）−コレスト−５−エン−３−イルオキシ］オクチル｝オキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−１−アミン（Ｏｃｔｙｌ−ＣＬｉｎＤＭＡ（２Ｒ））、及び（２Ｓ）−２−（｛８−［（３β）−コレスト−５−エン−３−イルオキシ］オクチル｝オキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−１−アミン（Ｏｃｔｙｌ−ＣＬｉｎＤＭＡ（２Ｓ））からなる群から選択される少なくとも１つの脂質である、Ｅ１３７〜Ｅ２１４のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２１７．前記イオン化可能な脂質が、
Figure 2021512090
 またはその塩である、Ｅ１３７〜Ｅ２１４のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２１８．前記イオン化可能な脂質が、
Figure 2021512090
 またはその塩である、Ｅ１３７〜Ｅ２１４のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２１９．前記脂質ナノ粒子が、非カチオン性ヘルパー脂質を含む、Ｅ１３７〜Ｅ２１４のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２２０．前記非カチオン性ヘルパー脂質が、リン脂質である、Ｅ２１９に記載の方法。
Ｅ２２１．前記リン脂質が、１，２−ジリノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１，２−ジウンデカノイル−ｓｎ−グリセロ−ホスホコリン（ＤＵＰＣ）、１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、１，２−ジ−Ｏ−オクタデセニル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：０ Ｄｉｅｔｈｅｒ ＰＣ）、１−オレオイル−２−コレステリルヘミスクシノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＯＣｈｅｍｓＰＣ）、１−ヘキサデシル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｃ１６ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、１，２−ジリノレノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジアラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、１，２−ジフィタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＭＥ １６．０ ＰＥ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、１，２−ジリノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、１，２−ジリノレノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、１，２−ジアラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、１，２−ジドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｒａｃ−（１−グリセロール）ナトリウム塩（ＤＯＰＧ）、スフィンゴミエリン、及びそれらの混合物からなる群から選択される、Ｅ２２０に記載の方法。
Ｅ２２２．前記リン脂質が、ＤＳＰＣである、Ｅ２２１に記載の方法。
Ｅ２２３．前記非カチオン性ヘルパー脂質が、オレイン酸である、Ｅ２１９に記載の方法。
Ｅ２２４．前記脂質ナノ粒子が、ＰＥＧ脂質を含む、Ｅ１３７〜Ｅ２２３のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２２５．前記ＰＥＧ脂質が、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、ＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロール、及びそれらの混合物からなる群から選択される、請求項Ｅ２２４に記載の方法。
Ｅ２２６．前記ＰＥＧ脂質が、ＰＥＧ−ｃ−ＤＯＭＧ脂質、ＰＥＧ−ＤＭＧ脂質、ＰＥＧ−ＤＬＰＥ脂質、ＰＥＧ−ＤＭＰＥ脂質、ＰＥＧ−ＤＰＰＣ脂質、及びＰＥＧ−ＤＳＰＥ脂質からなる群から選択される、Ｅ２２４に記載の方法。
Ｅ２２７．前記ＰＥＧ脂質が、ＰＥＧ−ＤＭＧである、Ｅ２２６に記載の方法。
Ｅ２２８．前記脂質ナノ粒子が、イオン化可能な脂質を約３０ｍｏｌ％〜約６０ｍｏｌ％含み、リン脂質を約０ｍｏｌ％〜約３０ｍｏｌ％含み、ステロールを約１８．５ｍｏｌ％〜約４８．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％〜約１０ｍｏｌ％含む、Ｅ１３７〜Ｅ２２７のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２２９．前記脂質ナノ粒子が、イオン化可能な脂質を約３５ｍｏｌ％〜約５５ｍｏｌ％含み、リン脂質を約５ｍｏｌ％〜約２５ｍｏｌ％含み、ステロールを約３０ｍｏｌ％〜約４０ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％〜約１０ｍｏｌ％含む、Ｅ１３７〜Ｅ２２７のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２３０．前記脂質ナノ粒子が、イオン化可能な脂質を約５０ｍｏｌ％含み、リン脂質を約１０ｍｏｌ％含み、ステロールを約３８．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む、Ｅ１３７〜Ｅ２２７のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２３１．前記核酸分子が、ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ＲＮＡｉ、ｄｓＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９、ｓｓＤＮＡ、及びＤＮＡからなる群から選択される、Ｅ１３７〜１８０及びＥ１８５〜２３０のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２３２．前記核酸が、ショートマー、アンタゴｍｉｒ、アンチセンス、リボザイム、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、非対称干渉ＲＮＡ（ａｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ダイサー基質ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、及びそれらの混合物からなる群から選択されるＲＮＡである、Ｅ２３１に記載の方法。
Ｅ２３３．前記核酸が、ｍＲＮＡである、Ｅ２３２に記載の方法。
Ｅ２３４．前記ｍＲＮＡが、１つ以上の修飾核酸塩基を含む修飾ｍＲＮＡである、Ｅ２３３に記載の方法。
Ｅ２３５．前記ｍＲＮＡが、ステムループ、鎖終結ヌクレオシド、ポリＡ配列、ポリアデニル化シグナル、及び／または５’キャップ構造、のうちの１つ以上を含む、Ｅ２３３またはＥ２３４に記載の方法。
Ｅ２３６．前記ｍＲＮＡが、前記免疫細胞において発現させるためのタンパク質をコードする、Ｅ２３３〜Ｅ２３５のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２３７．前記免疫細胞が、Ｔ細胞、樹状細胞、マクロファージ、及びＢ細胞からなる群から選択される、Ｅ２３６に記載の方法。
Ｅ２３８．前記免疫細胞が、Ｔ細胞である、Ｅ２３７に記載の方法。
Ｅ２３９．前記免疫細胞が、Ｂ細胞である、Ｅ２３７に記載の方法。
Ｅ２４０．前記免疫細胞が、Ｇ１期の進行の制御が解除されたものである、Ｅ２３６に記載の方法。
Ｅ２４１．対象における目的抗原に対する免疫応答を増進する方法であって、前記方法が、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を前記対象に投与することを含み、
前記ＬＮＰが、
（ｉ）イオン化可能な脂質、
（ｉｉ）フィトステロール、
（ｉｉｉ）任意選択の非カチオン性ヘルパー脂質、
（ｉｖ）任意選択のＰＥＧ脂質、
（ｖ）任意選択の構造脂質、及び
（ｖｉ）前記目的抗原をコードするｍＲＮＡ
を含み、
前記ＬＮＰが、フィトステロールを含み、その結果、前記目的抗原をコードする前記ｍＲＮＡがカプセル化されているが、前記フィトステロールを含まないＬＮＰによって誘導される前記目的抗原に対する前記免疫応答と比較して、前記対象における前記目的抗原に対する前記免疫応答が増進する、前記方法。
Ｅ２４２．前記目的抗原が、がん抗原である、Ｅ２４１に記載の方法。
Ｅ２４３．前記目的抗原が、感染性疾患抗原である、Ｅ２４１に記載の方法。
Ｅ２４４．前記目的抗原が、細菌抗原、ウイルス抗原、真菌抗原、原生動物抗原、または寄生生物抗原である、Ｅ２４３に記載の方法。
Ｅ２４５．前記脂質ナノ粒子が、筋肉内投与される、Ｅ２４１に記載の方法。
Ｅ２４６．前記脂質ナノ粒子が、皮内投与される、Ｅ２４１に記載の方法。
Ｅ２４７．前記脂質ナノ粒子が、節内投与される、Ｅ２４１に記載の方法。
Ｅ２４８．前記免疫応答が、抗原特異的抗体応答である、Ｅ２４１に記載の方法。
Ｅ２４９．前記免疫応答が、抗原特異的Ｔ細胞応答である、Ｅ２４１に記載の方法。
Ｅ２５０．同じまたは異なるｍＲＮＡがカプセル化された第２のＬＮＰを同時または連続的に投与することをさらに含み、前記第２のＬＮＰが、フィトステロールを含まない、Ｅ２４１〜Ｅ２４９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２５１．異なるｍＲＮＡがカプセル化された第２のＬＮＰを同時または連続的に投与することをさらに含み、前記第２のＬＮＰが、フィトステロールを含む、Ｅ２４１〜Ｅ２４９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２５２．前記フィトステロールが、７０％超の純度を有する、Ｅ２４１〜Ｅ２５１のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２５３．前記フィトステロールが、８０％超の純度を有する、Ｅ２４１〜Ｅ２５１のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２５４．前記フィトステロールが、９０％超の純度を有する、Ｅ２４１〜Ｅ２５１のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２５５．前記フィトステロールが、９５％超の純度を有する、Ｅ２４１〜Ｅ２５１のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２５６．前記フィトステロールが、９７％、９８％、または９９％の純度を有する、Ｅ２４１〜Ｅ２５１のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２５７．前記フィトステロールが、シトステロール、スチグマステロール、またはそれらの組み合わせである、Ｅ２４１〜Ｅ２５６のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２５８．前記フィトステロールが、シトステロールまたはその塩もしくはエステルを含む、Ｅ２５７に記載の方法。
Ｅ２５９．前記フィトステロールが、スチグマステロールまたはその塩もしくはエステルを含む、Ｅ２５７に記載の方法。
Ｅ２６０．前記フィトステロールが、ベータ−シトステロール
Figure 2021512090
 またはその塩もしくはエステルである、Ｅ２４１〜Ｅ２５６のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２６１．前記ベータ−シトステロールが、７０％超または８０％超の純度を有する、Ｅ２６０に記載の方法。
Ｅ２６２．前記ベータ−シトステロールが、９０％超の純度を有する、Ｅ２６０に記載の方法。
Ｅ２６３．前記ベータ−シトステロールが、９５％超の純度を有する、Ｅ２６０に記載の方法。
Ｅ２６４．前記ベータ−シトステロールが、９７％、９８％、または９９％の純度を有する、Ｅ２６０に記載の方法。
Ｅ２６５．構造脂質を含まない、Ｅ２４１〜Ｅ２６４のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２６６．前記脂質ナノ粒子が、構造脂質またはその塩を含む、Ｅ２４１〜Ｅ２６４のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２６７．前記構造脂質が、コレステロールまたはその塩である、Ｅ２６６に記載の方法。
Ｅ２６８．コレステロールのｍｏｌ％が、前記脂質ナノ粒子に存在するフィトステロールのｍｏｌ％の約１％〜５０％である、Ｅ２６７に記載の方法。
Ｅ２６９．コレステロールのｍｏｌ％が、前記脂質ナノ粒子に存在するフィトステロールのｍｏｌ％の約１０％〜４０％である、Ｅ２６７に記載の方法。
Ｅ２７０．コレステロールのｍｏｌ％が、前記脂質ナノ粒子に存在するフィトステロールのｍｏｌ％の約２０％〜３０％である、Ｅ２６７に記載の方法。
Ｅ２７１．コレステロールのｍｏｌ％が、前記脂質ナノ粒子に存在するフィトステロールのｍｏｌ％の約３０％である、Ｅ２６７に記載の方法。
Ｅ２７２．前記イオン化可能な脂質が、式（Ｉ）、式（ＩＡ）、式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、式（ＩＩｂ）、式（ＩＩｃ）、式（ＩＩｄ）、式（ＩＩｅ）、式（ＩＩＩ）、及び式（ＩＩＩａ１−８）のいずれかの化合物、及び／または化合物Ｘ、化合物Ｙ、化合物Ｚ、化合物Ｑ、もしくは化合物Ｍのいずれか、を含む、Ｅ２４１〜Ｅ２７１のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２７３．前記イオン化可能な脂質が、３−（ジドデシルアミノ）−Ｎ１，Ｎ１，４−トリドデシル−１−ピペラジンエタンアミン（ＫＬ１０）、Ｎ１−［２−（ジドデシルアミノ）エチル］−Ｎ１，Ｎ４，Ｎ４−トリドデシル−１，４−ピペラジンジエタンアミン（ＫＬ２２）、１４，２５−ジトリデシル−１５，１８，２１，２４−テトラアザ−オクタトリアコンタン（ＫＬ２５）、１，２−ジリノレイルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ−ＤＭＡ）、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノメチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−Ｋ−ＤＭＡ）、ヘプタトリアコンタ−６，９，２８，３１−テトラエン−１９−イル４−（ジメチルアミノ）ブタノエート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）、２，２−ジリノレイル−４−（２−ジメチルアミノエチル）−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、１，２−ジオレイルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン（ＤＯＤＭＡ）、２−（｛８−［（３β）−コレスト−５−エン−３−イルオキシ］オクチル｝オキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−１−アミン（Ｏｃｔｙｌ−ＣＬｉｎＤＭＡ）、（２Ｒ）−２−（｛８−［（３β）−コレスト−５−エン−３−イルオキシ］オクチル｝オキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−１−アミン（Ｏｃｔｙｌ−ＣＬｉｎＤＭＡ（２Ｒ））、及び（２Ｓ）−２−（｛８−［（３β）−コレスト−５−エン−３−イルオキシ］オクチル｝オキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−１−アミン（Ｏｃｔｙｌ−ＣＬｉｎＤＭＡ（２Ｓ））からなる群から選択される少なくとも１つの脂質である、Ｅ２４１〜Ｅ２７１のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２７４．前記イオン化可能な脂質が、
Figure 2021512090
 またはその塩である、Ｅ２４１〜Ｅ２７１のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２７５．前記イオン化可能な脂質が、
Figure 2021512090
 またはその塩である、Ｅ２４１〜Ｅ２７１のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２７６．前記脂質ナノ粒子が、非カチオン性ヘルパー脂質を含む、Ｅ２４１〜Ｅ２７５のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２７７．前記非カチオン性ヘルパー脂質が、リン脂質である、Ｅ２７６に記載の方法。
Ｅ２７８．前記リン脂質が、１，２−ジリノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１，２−ジウンデカノイル−ｓｎ−グリセロ−ホスホコリン（ＤＵＰＣ）、１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、１，２−ジ−Ｏ−オクタデセニル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：０ Ｄｉｅｔｈｅｒ ＰＣ）、１−オレオイル−２−コレステリルヘミスクシノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＯＣｈｅｍｓＰＣ）、１−ヘキサデシル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｃ１６ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、１，２−ジリノレノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジアラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、１，２−ジフィタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＭＥ １６．０ ＰＥ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、１，２−ジリノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、１，２−ジリノレノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、１，２−ジアラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、１，２−ジドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｒａｃ−（１−グリセロール）ナトリウム塩（ＤＯＰＧ）、スフィンゴミエリン、及びそれらの混合物からなる群から選択される、Ｅ２７７に記載の方法。
Ｅ２７９．前記リン脂質が、ＤＳＰＣである、Ｅ２７８に記載の方法。
Ｅ２８０．前記非カチオン性ヘルパー脂質が、オレイン酸である、Ｅ２７６に記載の方法。
Ｅ２８１．前記脂質ナノ粒子が、ＰＥＧ脂質を含む、Ｅ２４１〜Ｅ２８０のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２８２．前記ＰＥＧ脂質が、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、ＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロール、及びそれらの混合物からなる群から選択される、Ｅ２８１に記載の方法。
Ｅ２８３．前記ＰＥＧ脂質が、ＰＥＧ−ｃ−ＤＯＭＧ脂質、ＰＥＧ−ＤＭＧ脂質、ＰＥＧ−ＤＬＰＥ脂質、ＰＥＧ−ＤＭＰＥ脂質、ＰＥＧ−ＤＰＰＣ脂質、及びＰＥＧ−ＤＳＰＥ脂質からなる群から選択される、２８１に記載の方法。
Ｅ２８４．前記ＰＥＧ脂質が、ＰＥＧ−ＤＭＧである、Ｅ２８３に記載の方法。
Ｅ２８５．前記脂質ナノ粒子が、イオン化可能な脂質を約３０ｍｏｌ％〜約６０ｍｏｌ％含み、リン脂質を約０ｍｏｌ％〜約３０ｍｏｌ％含み、ステロールを約１８．５ｍｏｌ％〜約４８．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％〜約１０ｍｏｌ％含む、Ｅ２４１〜Ｅ２８４のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２８６．前記脂質ナノ粒子が、イオン化可能な脂質を約３５ｍｏｌ％〜約５５ｍｏｌ％含み、リン脂質を約５ｍｏｌ％〜約２５ｍｏｌ％含み、ステロールを約３０ｍｏｌ％〜約４０ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％〜約１０ｍｏｌ％含む、Ｅ２４１〜Ｅ２８４のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２８７．前記脂質ナノ粒子が、イオン化可能な脂質を約５０ｍｏｌ％含み、リン脂質を約１０ｍｏｌ％含み、ステロールを約３８．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む、Ｅ２４１〜Ｅ２８４のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２８８．前記ｍＲＮＡが、１つ以上の修飾核酸塩基を含む修飾ｍＲＮＡである、Ｅ２４１〜Ｅ２８７のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２８９．前記ｍＲＮＡが、ステムループ、鎖終結ヌクレオシド、ポリＡ配列、ポリアデニル化シグナル、及び／または５’キャップ構造、のうちの１つ以上を含む、Ｅ２４１〜Ｅ２８８のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２９０．Ｂ細胞の活性化または活性を調節する方法であって、前記方法が、Ｂ細胞を脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）と接触させることを含み、前記ＬＮＰが、
（ｉ）イオン化可能な脂質、
（ｉｉ）フィトステロール、
（ｉｉｉ）任意選択の非カチオン性ヘルパー脂質、
（ｉｖ）任意選択のＰＥＧ脂質、
（ｖ）任意選択の構造脂質、及び
（ｖｉ）核酸分子
を含み、
その結果、Ｂ細胞の活性化または活性が調節される．
Ｅ２９１．Ｂ細胞の活性化または活性が増進する、Ｅ２９０に記載の方法。
Ｅ２９２．Ｂ細胞の活性化または活性が低減される、Ｅ２９０に記載の方法。
Ｅ２９３．同じまたは異なる核酸分子がカプセル化された第２のＬＮＰを同時または連続的に投与することをさらに含み、前記第２のＬＮＰが、フィトステロールを含まない、Ｅ２９０〜Ｅ２９２のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２９４．異なる核酸分子がカプセル化された第２のＬＮＰを同時または連続的に投与することをさらに含み、前記第２のＬＮＰが、フィトステロールを含む、Ｅ２９０〜Ｅ２９２のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２９５．前記Ｂ細胞が、前記脂質ナノ粒子とｉｎ ｖｉｔｒｏで接触する、Ｅ２９０〜Ｅ２９４のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２９６．前記Ｂ細胞が、前記脂質ナノ粒子を対象に投与することによって、前記脂質ナノ粒子とｉｎ ｖｉｖｏで接触する、Ｅ２９０〜Ｅ２９４のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２９７．前記脂質ナノ粒子が、静脈内投与される、Ｅ２９６に記載の方法。
Ｅ２９８．前記脂質ナノ粒子が、筋肉内投与される、Ｅ２９６に記載の方法。
Ｅ２９９．前記脂質ナノ粒子が、皮下、節内、及び腫瘍内からなる群から選択される経路によって投与される、Ｅ２９６に記載の方法。
Ｅ３００．前記Ｂ細胞における前記核酸分子の細胞内濃度が増進する、Ｅ２９０〜Ｅ２９９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ３０１．前記Ｂ細胞における前記核酸分子の活性が増進する、Ｅ２９０〜Ｅ２９９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ３０２．前記Ｂ細胞における前記核酸分子の発現が増進する、Ｅ２９０〜Ｅ２９９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ３０３．前記核酸分子によって前記Ｂ細胞の活性化または活性が調節される、Ｅ２９０〜Ｅ２９９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ３０４．前記核酸分子によって前記Ｂ細胞の活性化または活性が増加する、Ｅ２９０〜Ｅ２９９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ３０５．前記核酸分子によって前記Ｂ細胞の活性化または活性が低減される、Ｅ２９０〜Ｅ２９９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ３０６．前記フィトステロールが、７０％超、８０％超、９０％超、または９５％超の純度を有する、Ｅ２９０〜Ｅ３０５のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ３０７．前記フィトステロールが、９７％、９８％、または９９％の純度を有する、Ｅ２９０〜Ｅ３０５のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ３０８．前記フィトステロールが、シトステロール、スチグマステロール、またはそれらの組み合わせである、Ｅ２９０〜Ｅ３０７のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ３０９．前記フィトステロールが、シトステロールまたはその塩もしくはエステルを含む、Ｅ３０８に記載の方法。
Ｅ３１０．前記フィトステロールが、スチグマステロールまたはその塩もしくはエステルを含む、Ｅ３０８に記載の方法。
Ｅ３１１．前記フィトステロールが、ベータ−シトステロール
Figure 2021512090
 またはその塩もしくはエステルである、Ｅ２９０〜Ｅ３０７のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ３１２．前記ベータ−シトステロールが、７０％超または８０％超または９０％超の純度を有する、Ｅ３１１に記載の方法。
Ｅ３１３．前記ベータ−シトステロールが、９５％超の純度を有する、Ｅ３１１に記載の方法。
Ｅ３１４．前記ベータ−シトステロールが、９７％、９８％、または９９％の純度を有する、Ｅ３１１に記載の方法。
Ｅ３１５．構造脂質を含まない、Ｅ２９０〜Ｅ３１４のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ３１６．前記脂質ナノ粒子が、構造脂質またはその塩を含む、Ｅ２９０〜Ｅ３１５のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ３１７．前記構造脂質が、コレステロールまたはその塩である、Ｅ３１６に記載の方法。
Ｅ３１８．コレステロールのｍｏｌ％が、前記脂質ナノ粒子に存在するフィトステロールのｍｏｌ％の約１％〜５０％である、Ｅ３１７に記載の方法。
Ｅ３１９．コレステロールのｍｏｌ％が、前記脂質ナノ粒子に存在するフィトステロールのｍｏｌ％の約１０％〜４０％である、Ｅ３１７に記載の方法。
Ｅ３２０．コレステロールのｍｏｌ％が、前記脂質ナノ粒子に存在するフィトステロールのｍｏｌ％の約２０％〜３０％である、Ｅ３１７に記載の方法。
Ｅ３２１．コレステロールのｍｏｌ％が、前記脂質ナノ粒子に存在するフィトステロールのｍｏｌ％の約３０％である、Ｅ３１７に記載の方法。
Ｅ３２２．前記イオン化可能な脂質が、式（Ｉ）、式（ＩＡ）、式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、式（ＩＩｂ）、式（ＩＩｃ）、式（ＩＩｄ）、式（ＩＩｅ）、式（ＩＩＩ）、及び式（ＩＩＩａ１−８）のいずれかの化合物、及び／または化合物Ｘ、化合物Ｙ、化合物Ｚ、化合物Ｑ、もしくは化合物Ｍのいずれか、を含む、Ｅ２９０〜Ｅ３２１のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ３２３．前記イオン化可能な脂質が、３−（ジドデシルアミノ）−Ｎ１，Ｎ１，４−トリドデシル−１−ピペラジンエタンアミン（ＫＬ１０）、Ｎ１−［２−（ジドデシルアミノ）エチル］−Ｎ１，Ｎ４，Ｎ４−トリドデシル−１，４−ピペラジンジエタンアミン（ＫＬ２２）、１４，２５−ジトリデシル−１５，１８，２１，２４−テトラアザ−オクタトリアコンタン（ＫＬ２５）、１，２−ジリノレイルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ−ＤＭＡ）、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノメチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−Ｋ−ＤＭＡ）、ヘプタトリアコンタ−６，９，２８，３１−テトラエン−１９−イル４−（ジメチルアミノ）ブタノエート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）、２，２−ジリノレイル−４−（２−ジメチルアミノエチル）−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、１，２−ジオレイルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン（ＤＯＤＭＡ）、２−（｛８−［（３β）−コレスト−５−エン−３−イルオキシ］オクチル｝オキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−１−アミン（Ｏｃｔｙｌ−ＣＬｉｎＤＭＡ）、（２Ｒ）−２−（｛８−［（３β）−コレスト−５−エン−３−イルオキシ］オクチル｝オキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−１−アミン（Ｏｃｔｙｌ−ＣＬｉｎＤＭＡ（２Ｒ））、及び（２Ｓ）−２−（｛８−［（３β）−コレスト−５−エン−３−イルオキシ］オクチル｝オキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−１−アミン（Ｏｃｔｙｌ−ＣＬｉｎＤＭＡ（２Ｓ））からなる群から選択される少なくとも１つの脂質である、Ｅ２９０〜Ｅ３２１のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ３２４．前記イオン化可能な脂質が、
Figure 2021512090
 またはその塩である、Ｅ２９０〜Ｅ３２１のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ３２５．前記イオン化可能な脂質が。
Figure 2021512090
 またはその塩である、Ｅ２９０〜Ｅ３２１のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ３２６．前記脂質ナノ粒子が、非カチオン性ヘルパー脂質を含む、Ｅ２９０〜Ｅ３２５のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ３２７．前記非カチオン性ヘルパー脂質が、リン脂質である、Ｅ３２６に記載の方法。
Ｅ３２８．前記リン脂質が、１，２−ジリノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１，２−ジウンデカノイル−ｓｎ−グリセロ−ホスホコリン（ＤＵＰＣ）、１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、１，２−ジ−Ｏ−オクタデセニル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：０ Ｄｉｅｔｈｅｒ ＰＣ）、１−オレオイル−２−コレステリルヘミスクシノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＯＣｈｅｍｓＰＣ）、１−ヘキサデシル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｃ１６ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、１，２−ジリノレノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジアラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、１，２−ジフィタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＭＥ １６．０ ＰＥ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、１，２−ジリノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、１，２−ジリノレノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、１，２−ジアラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、１，２−ジドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｒａｃ−（１−グリセロール）ナトリウム塩（ＤＯＰＧ）、スフィンゴミエリン、及びそれらの混合物からなる群から選択される、Ｅ３２７に記載の方法。
Ｅ３２９．前記リン脂質が、ＤＳＰＣである、Ｅ３２８に記載の方法。
Ｅ３３０．前記非カチオン性ヘルパー脂質が、オレイン酸である、Ｅ３２６に記載の方法。
Ｅ３３１．前記脂質ナノ粒子が、ＰＥＧ脂質を含む、Ｅ２９０〜Ｅ３３０のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ３３２．前記ＰＥＧ脂質が、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、ＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロール、及びそれらの混合物からなる群から選択される、Ｅ３３１に記載の方法。
Ｅ３３３．前記ＰＥＧ脂質が、ＰＥＧ−ｃ−ＤＯＭＧ脂質、ＰＥＧ−ＤＭＧ脂質、ＰＥＧ−ＤＬＰＥ脂質、ＰＥＧ−ＤＭＰＥ脂質、ＰＥＧ−ＤＰＰＣ脂質、及びＰＥＧ−ＤＳＰＥ脂質からなる群から選択される、Ｅ３３２に記載の方法。
Ｅ３３４．前記ＰＥＧ脂質が、ＰＥＧ−ＤＭＧである、Ｅ３３３に記載の方法。
Ｅ３３５．前記脂質ナノ粒子が、イオン化可能な脂質を約３０ｍｏｌ％〜約６０ｍｏｌ％含み、リン脂質を約０ｍｏｌ％〜約３０ｍｏｌ％含み、ステロールを約１８．５ｍｏｌ％〜約４８．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％〜約１０ｍｏｌ％含む、Ｅ２９０〜Ｅ３３４のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ３３６．前記脂質ナノ粒子が、イオン化可能な脂質を約３５ｍｏｌ％〜約５５ｍｏｌ％含み、リン脂質を約５ｍｏｌ％〜約２５ｍｏｌ％含み、ステロールを約３０ｍｏｌ％〜約４０ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約０ｍｏｌ％〜約１０ｍｏｌ％含む、Ｅ２９０〜Ｅ３３５のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ３３７．前記脂質ナノ粒子が、イオン化可能な脂質を約５０ｍｏｌ％含み、リン脂質を約１０ｍｏｌ％含み、ステロールを約３８．５ｍｏｌ％含み、ＰＥＧ脂質を約１．５ｍｏｌ％含む、Ｅ２９０〜Ｅ３３６のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ３３８．前記核酸分子が、ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ＲＮＡｉ、ｄｓＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９、ｓｓＤＮＡ、及びＤＮＡからなる群から選択される、Ｅ２９０〜Ｅ３３７のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ３３９．前記核酸が、ショートマー、アンタゴｍｉｒ、アンチセンス、リボザイム、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、非対称干渉ＲＮＡ（ａｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ダイサー基質ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、及びそれらの混合物からなる群から選択されるＲＮＡである、Ｅ３３８に記載の方法。
Ｅ３４０．前記核酸が、ｍＲＮＡである、Ｅ３３９に記載の方法。
Ｅ３４１．前記ｍＲＮＡが、１つ以上の修飾核酸塩基を含む修飾ｍＲＮＡである、Ｅ３４０に記載の方法。
Ｅ３４２．前記ｍＲＮＡが、ステムループ、鎖終結ヌクレオシド、ポリＡ配列、ポリアデニル化シグナル、及び／または５’キャップ構造、のうちの１つ以上を含む、Ｅ３４０またはＥ３４１に記載の方法。
Ｅ３４３．前記ｍＲＮＡが、前記免疫細胞において発現させるためのタンパク質をコードする、Ｅ３４０〜Ｅ３４２のいずれか１つに記載の方法。
定義
本明細書で使用される「Ｔ細胞アネルギー」という用語は、共刺激を伴わない抗原認識が生じると確立される低応答状態へとＴ細胞が移行する末梢性免疫寛容機構を指す。そのような状態の下では、Ｔ細胞は、完全に活性化した状態となることができず、抗原に再び遭遇しても、それに応じた細胞増殖及びサイトカイン産生が阻止される無応答状態となる。
本明細書で使用される「自己抗原」は、液性（Ｂ細胞）またはＴ細胞介在性の自己免疫応答の標的となる体内の正常な組織構成要素であり、こうした自己免疫応答は、組織に損傷を与え、及び／または自己免疫疾患を引き起こすことが多い。本明細書で使用される「自己」は、細胞もしくは組織が、同じ個体に由来するものであるか、または細胞もしくは組織が、免疫学的に適合性である（例えば、同一のＭＨＣ／ＨＬＡハプロタイプを有する）ものであることを指す。
本明細書で使用される「自己免疫障害」は、１つ以上の内在性抗原（すなわち、１つ以上の自己抗原）に対する白血球（例えば、Ｂ細胞、Ｔ細胞、マクロファージ、単球、または樹状細胞）の作用（病的な免疫応答（例えば、持続期間及び／または程度が病的なもの））を介する疾患状態を指し、そのような作用の結果、１つ以上の自己抗原を有する細胞に対する直接的な攻撃、免疫複合体形成、または局所的な炎症に起因し得る組織損傷がもたらされる。自己免疫疾患は、自己抗原に対する免疫系の活性化に起因して炎症が進むことによって特徴付けられる。
「同種移植片（ａｌｌｏｇｒａｆｔ）」、「同種移植片（ｈｏｍｏｇｒａｆｔ）」、及び「同種異系移植片（ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ ｇｒａｆｔ）」という用語は、ある個体から、遺伝子型が異なる同じ種の別個体へと移植される臓器移植片または組織移植片を指し、こうした移植片には、死体ドナー、生体血縁ドナー、及び生体非血縁ドナーに由来する移植片が含まれる。ある個体から同じ個体に移植される移植片は、「自家移植片（ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ ｇｒａｆｔ）」または「自家移植片（ａｕｔｏｇｒａｆｔ）」と称される。遺伝的に同一または同系の二個体の間で移植される移植片は、「同系移植片」と称される。種が異なる個体の間で移植される移植片は、「異種移植片（ｘｅｎｏｇｅｎｅｉｃ ｇｒａｆｔ）」または「異種移植片（ｘｅｎｏｇｒａｆｔ）」と称される。
本明細書で使用される「免疫応答」という語句またはその同義の語句である「免疫学的応答」は、自己抗原または自己抗原の関連エピトープに対して指向化された細胞が生じること（抗原特異的Ｔ細胞またはその分泌産物によって媒介される）を指す。細胞性免疫応答は、ポリペプチドエピトープがＭＨＣクラスＩ分子またはＭＨＣクラスＩＩ分子と結合して提示されることによって誘発され、その結果、抗原特異的ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞及び／またはＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞を活性化する。この応答には、他の構成要素の活性化も伴い得る。
本明細書で使用される「免疫細胞」という用語は、免疫応答において役割を担う細胞を指し、こうした細胞には、リンパ球（Ｂ細胞及びＴ細胞など）、ナチュラルキラー細胞、骨髄系細胞（単球、マクロファージ、好酸球、マスト細胞、好塩基球、及び顆粒球など）が含まれる。
「免疫応答」は、外来物質に対して脊椎動物内で生じる生物学的応答を指し、この応答が生じることで、こうした物質及びそれによって引き起こされる疾患から生物が保護される。免疫応答は、免疫系の細胞（例えば、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、好酸球、マスト細胞、樹状細胞、または好中球）、ならびにこうした細胞のいずれかまたは肝臓によって産生される可溶性巨大分子（抗体、サイトカイン、及び補体を含む）が作用することによって媒介され、こうした作用の結果、侵入病原体、病原体に感染した細胞もしくは組織、がん性細胞もしくは他の異常細胞、または自己免疫もしくは病的炎症の場合は、正常なヒト細胞もしくはヒト組織が、選択的に標的となり、結合を受け、損傷を受け、破壊され、及び／または脊椎動物の体から排除される。免疫反応には、例えば、Ｔ細胞（例えば、エフェクターＴ細胞もしくはＴｈ細胞（ＣＤ４＋Ｔ細胞もしくはＣＤ８＋Ｔ細胞など））の活性化もしくは抑制、またはＴｒｅｇ細胞の抑制が含まれる。
「免疫療法」は、疾患に罹患している対象、または疾患が再発する状態となるリスクを有する対象もしくは疾患の再発を患うリスクを有する対象を、免疫応答を誘導するか、増進するか、抑制するか、またはその他の様式で修飾することを含む方法によって治療することを指す。
「自己免疫障害を発症するリスクを有する」ヒトは、自己免疫障害の家族歴を有するヒト（例えば、１つ以上の炎症性障害に対する遺伝的素因を有するヒト）、または１つ以上の自己免疫障害／自己抗体誘導条件に曝露されたヒトを指す。例えば、志賀毒素に曝露されたヒトは、典型的なＨＵＳを発症するリスクを有する。ある特定のがん（例えば、液性腫瘍（多発性骨髄腫または慢性リンパ球性白血病など））を有するヒトは、ある特定の自己免疫性溶血性疾患を発症しやすい患者となり得る。例えば、様々な感染症（例えば、梅毒）または新生物（非ホジキンリンパ腫など）に罹患した後にはＰＣＨが生じ得る。別の例では、ＣＡＤは、ＨＩＶ感染症、マイコプラズマ肺炎感染症、非ホジキンリンパ腫、またはワルデンストレームマクログロブリン血症と関連し得る。さらに別の例では、自己免疫性溶血性貧血は、ヒト慢性リンパ球性白血病のよく知られる合併症であり、疾患が進行したＣＬＬ患者の約１１％がＡＩＨＡを発症することになる。ＣＬＬの３０％もが、ＡＩＨＡを発症するリスクを有し得る。例えば、Ｄｉｅｈｌ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｓｅｍｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２５（１）：８０−９７、及びＧｕｐｔａ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｌｅｕｋｅｍｉａ １６（１０）：２０９２−２０９５を参照のこと。
「自己免疫障害を有する疑いがある」ヒトは、自己免疫障害の症状を１つ以上示すヒトである。自己免疫障害の症状は、特定の自己免疫障害の重症度及び型によって異なり得るものであり、自己免疫障害の症状には、限定されないが、発赤、腫れ（例えば、関節腫脹）、関節に触れると感じられる温かみ、関節痛、こわばり、関節機能の喪失、発熱、悪寒、疲労、エネルギーの喪失、痛み、発熱、蒼白、黄疸、じん麻疹様皮疹、ヘモグロビン尿症、ヘモグロビン血症、及び貧血（例えば、重症貧血）、頭痛、食欲の喪失、筋肉のこわばり、不眠、かゆみ、鼻詰まり、くしゃみ、咳、１つ以上の神経症状（めまい、てんかん発作、疼痛など）が含まれる。上記の内容から、すべてのヒトに「自己免疫障害を有する疑いがある」わけではないことが明らかであろう。
投与：本明細書で使用される「投与」は、対象または患者に組成物を送達する方法を指す。投与方法は、体の特定の領域または系へと送達が標的化される（例えば、体の特定の領域または系への特異的な送達が生じる）ように選択され得る。例えば、投与は、非経口のもの（例えば、皮下注射、皮内注射、静脈内注射、腹腔内注射、筋肉内注射、関節内注射、動脈内注射、関節滑液嚢内注射、胸骨内注射、くも膜下腔内注射、病巣内注射、または頭蓋内注射、及び任意の適切な注入手法）、経口のもの、経皮もしくは皮内、皮下、直腸、膣内、局所（例えば、粉末、軟膏、クリーム、ゲル、ローション、及び／または液滴によるもの）、粘膜、鼻、頬、腸内、硝子体内、腫瘍内、舌下、鼻腔内へのもの、気管内点滴、気管支点滴、及び／または吸入によるもの、経口スプレー及び／または粉末、鼻スプレー、及び／またはエアロゾルとしてのもの、及び／または門脈カテーテルを介するもの、であり得る。
およそ、約：本明細書で使用されるとき、「およそ」または「約」という用語は、目的の１つ以上の値に適用される場合、言及された参照値に類似する値を指す。ある特定の実施形態では、「およそ」または「約」という用語は、特に明記されていない限り、または文脈から明らかでない限り（そのような数が可能な値の１００％を超える場合を除いて）、言及された参照値の２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％またはそれ以下のいずれかの方向（より大きいまたはより小さい）の範囲内の値の範囲を指す。例えば、ＬＮＰの脂質成分中の所定の化合物の量の文脈で使用されるとき、「約」は、言及された値の＋／−５％を意味し得る。例えば、所与の化合物の約４０％を有する脂質成分を含むＬＮＰは、化合物の３０〜５０％を含み得る。別の例では、Ｔ細胞の少なくとも約１５％への送達は、Ｔ細胞の１０〜２０％への送達を含み得る。
がん：本明細書で使用される「がん」は、異常及び／または無制御な細胞増殖を伴う状態であり、例えば、細胞のＧ１期の進行の制御が解除されている状態である。がんの例としては、限定されないが、副腎皮質癌、進行癌、肛門癌、再生不良性貧血、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨転移、脳腫瘍、脳癌、乳癌、小児癌、原発不明癌、キャッスルマン病、子宮頸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、食道癌、ユーイングファミリー腫瘍、眼癌、胆嚢癌、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍、妊娠性絨毛性疾患、ホジキン病、カポジ肉腫、腎細胞癌、喉頭癌及び下咽頭癌、急性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄単球性白血病、骨髄異形成症候群（難治性貧血及び難治性血球減少を含む）、骨髄増殖性の新生物または疾患（真性赤血球増加症、本態性血小板増加症、及び原発性骨髄線維症を含む）、肝癌（例えば、肝細胞癌）、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肺カルチノイド腫、皮膚のリンパ腫、悪性中皮腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、鼻腔癌及び副鼻腔癌、鼻咽頭癌、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、口腔癌及び中咽頭癌、骨肉腫、卵巣癌、膵癌、陰茎癌、下垂体腫瘍、前立腺癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、成人軟部組織における肉腫、皮膚の基底細胞癌及び扁平上皮細胞癌、メラノーマ、小腸癌、胃癌、精巣癌、咽喉癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宮肉腫、腟癌、外陰癌、ワルデンストレームマクログロブリン血症、ウイルムス腫瘍、ならびにがん治療によって生じる二次がんが挙げられる。特定の実施形態では、がんは、肝癌（例えば、肝細胞癌）または結腸直腸癌である。他の実施形態では、がんは、血液ベースの癌または造血と関連する癌である。
複合体化された：本明細書に記載の「複合体化された」という用語は、２つ以上の部分に関して使用されるとき、それらの部分が互いに物理的に結合または連結される（直接的に結合もしくは連結されるか、または連結基として働く１つ以上の追加部分を介して結合もしくは連結される）ことで十分に安定な構造が形成され、その結果、それらの部分が、当該構造が使用される条件（例えば、生理学的条件）の下で物理的に結合した状態を保つことを意味する。いくつかの実施形態では、２つ以上の部分は、直接的な共有化学結合によって複合体化され得る。他の実施形態では、２つ以上の部分は、イオン結合または水素結合によって複合体化され得る。
接触：本明細書で使用される「接触」という用語は、２つ以上の実体の間で物理的な繋がりが確立されることを意味する。例えば、細胞をｍＲＮＡまたは脂質ナノ粒子組成物と接触させることは、細胞とｍＲＮＡまたは脂質ナノ粒子とが物理的な繋がりを共有するようにされること意味する。ｉｎ ｖｉｖｏ、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、及びｅｘ ｖｉｖｏのいずれにおいても、細胞を細胞外の実体と接触させる方法は、生物学的分野でよく知られている。本開示の実施形態例では、哺乳動物細胞を組成物（例えば、本開示のナノ粒子または医薬組成物）と接触させるステップは、ｉｎ ｖｉｖｏで実施される。例えば、脂質ナノ粒子組成物と細胞（例えば、哺乳動物細胞）（生物（例えば、哺乳動物）内の特定の位置に存在する細胞であり得る）との接触は、任意の適切な投与経路（例えば、静脈内投与、筋肉内投与、皮内投与、及び皮下投与を含む、生物への非経口投与）によって実施され得る。ｉｎ ｖｉｔｒｏに存在する細胞については、組成物（例えば、脂質ナノ粒子）と細胞との接触は、例えば、細胞の培地に組成物を添加することによって行うことができ、この接触は、トランスフェクションを伴うか、またはトランスフェクションを引き起こし得る。さらに、ナノ粒子組成物と接触する細胞は複数であり得る。
送達：本明細書で使用する場合、「送達」という用語は、実体を目的地に提供することを意味する。例えば、治療薬及び／または予防薬を対象に送達することは、治療薬及び／または予防薬を含むＬＮＰを対象に投与すること（例えば、静脈内、筋肉内、皮内、または皮下経路による）を含み得る。哺乳動物または哺乳動物細胞へのＬＮＰの投与は、１つ以上の細胞を脂質ナノ粒子と接触させることを含み得る。
カプセル化する：本明細書で使用される「カプセル化する」という用語は、封入すること、囲い込むこと、または包み込むことを意味する。いくつかの実施形態では、化合物、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）、または他の組成物は、完全にカプセル化されるか、部分的にカプセル化されるか、または実質的にカプセル化され得る。例えば、いくつかの実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、脂質ナノ粒子（例えば、リポソーム）にカプセル化され得る。
カプセル化効率：本明細書で使用されるとき、「カプセル化効率」とは、ＬＮＰの調製に使用される治療薬及び／または予防薬の初期総量に対する、ＬＮＰの一部となる治療薬及び／または予防薬の量を指す。例えば、組成物に最初に提供された合計１００ｍｇの治療薬及び／または予防薬のうち９７ｍｇの治療薬及び／または予防薬がＬＮＰにカプセル化される場合、カプセル化効率は９７％として与えられ得る。本明細書で使用されるとき、「カプセル化」は、完全、実質的、または部分的に、封入すること、閉じ込めること、囲い込むこと、または包み込むことを指し得る。
送達増進：本明細書で使用される「送達増進」という用語は、対照ナノ粒子によって核酸（例えば、治療的及び／または予防的ｍＲＮＡ）が目的の標的細胞（例えば、免疫細胞）に送達されるレベルと比較して、ナノ粒子による目的の標的細胞（例えば、免疫細胞）への核酸（例えば、治療的及び／または予防的ｍＲＮＡ）の送達が増加すること（例えば、少なくとも１０％増加すること、少なくとも２０％増加すること、少なくとも３０％増加すること、少なくとも４０％増加すること、少なくとも５０％増加すること、少なくとも１．５倍に増加すること、少なくとも２倍に増加すること、少なくとも３倍に増加すること、少なくとも４倍に増加すること、少なくとも５倍に増加すること、少なくとも６倍に増加すること、少なくとも７倍に増加すること、少なくとも８倍に増加すること、少なくとも９倍に増加すること、少なくとも１０倍に増加すること）を意味する。例えば、本開示の免疫細胞送達増強脂質含有ＬＮＰによる「送達増進」は、免疫細胞送達増強脂質を含まない同じＬＮＰと比較することによって評価され得る。免疫細胞送達増強脂質含有ＬＮＰが特定の細胞（例えば、免疫細胞）に送達されるレベルは、フィトステロール含有ＬＮＰを使用することで標的細胞において産生するタンパク質の量を、免疫細胞送達増強脂質を含まない同じＬＮＰを使用した場合のものと比較することによって（例えば、フローサイトメトリーを使用して平均蛍光強度による比較を行うことによって）測定されるか、免疫細胞送達増強脂質含有ＬＮＰを使用してトランスフェクションされる標的細胞の％を、免疫細胞送達増強脂質を含まない同じＬＮＰを使用した場合のものと比較することによって（例えば、定量的フローサイトメトリーによる比較を行うことによって）測定されるか、あるいは免疫細胞送達増強脂質含有ＬＮＰを使用したときのｉｎ ｖｉｖｏの標的細胞における治療薬及び／または予防薬の量を、免疫細胞送達増強脂質を含まない同じＬＮＰを使用した場合のものと比較することによって測定され得る。標的細胞へのナノ粒子の送達増進は、治療される対象において決定される必要はなく、代用物（動物モデル（例えば、マウスモデルまたは非ヒト霊長類モデル）など）において決定され得ることが理解されよう。例えば、免疫細胞への送達増進の決定については、マウスモデルまたはＮＨＰモデル（例えば、実施例に記載のもの）を使用することができ、免疫細胞送達増強脂質含有ＬＮＰによる目的タンパク質コードｍＲＮＡの送達は、免疫細胞送達増強脂質を含まない同じＬＮＰと比較して免疫細胞（例えば、脾臓、末梢血、及び／または骨髄に由来するもの）において評価され得る（例えば、フローサイトメトリー、蛍光顕微鏡法、及び同様のものによる評価が行われる）。
有効量：本明細書で使用される薬剤の「有効量」という用語は、有利な結果または所望の結果（例えば、臨床結果）をもたらす上で十分な量であり、したがって、「有効量」は、それが適用される文脈に依存する。例えば、本開示の脂質組成物（例えば、ＬＮＰ）における免疫細胞送達増強脂質の量の文脈では、免疫細胞送達増強脂質の有効量は、免疫細胞送達増強脂質を含まない脂質組成物（例えば、ＬＮＰ）と比較して有利な結果または所望の結果をもたらす上で十分な量である。脂質組成物（例えば、ＬＮＰ）によってもたらされる有利な結果または所望の結果の例としては、限定されないが、トランスフェクションされる細胞のパーセントが増加すること、及び／または脂質組成物（例えば、ＬＮＰ）と結合／によってカプセル化された核酸によってコードされるタンパク質の発現レベルが増加すること、が挙げられる。対象における免疫細胞によって有効量の脂質ナノ粒子が取り込まれるように免疫細胞送達増強脂質含有脂質ナノ粒子を投与する文脈では、免疫細胞送達増強脂質含有ＬＮＰの有効量は、免疫細胞送達増強脂質を含まないＬＮＰと比較して有利な結果または所望の結果をもたらす上で十分な量である。対象における有利な結果または所望の結果の例としては、限定されないが、免疫細胞送達増強脂質を含まないＬＮＰと比較して、トランスフェクションされる細胞のパーセントが増加すること、免疫細胞送達増強脂質含有ＬＮＰと結合／によってカプセル化された核酸によってコードされるタンパク質の発現レベルが増加すること、及び／または免疫細胞送達増強脂質含有ＬＮＰと結合／によってカプセル化された核酸もしくはそのコードタンパク質の予防作用もしくは治療作用がｉｎ ｖｉｖｏで増加すること、が挙げられる。いくつかの実施形態では、免疫細胞送達増強脂質含有ＬＮＰの治療的に有効な量は、感染症、疾患、障害、及び／または状態を患うか、またはそれに罹患しやすい対象に投与されると、そうした感染症、疾患、障害、及び／または状態の治療、症状改善、診断、阻止、及び／または発症遅延に十分なものである。別の実施形態では、脂質ナノ粒子の有効量は、免疫細胞の少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、またはそれを超える％において所望のタンパク質を発現させる上で十分なものである。例えば、免疫細胞送達増強脂質含有ＬＮＰの有効量は、単回の静脈内注射の後に、マウスモデル（例えば、実施例９に記載のもの）において、脾臓Ｔ細胞の少なくとも５％、少なくとも１０％、もしくは少なくとも１５％、脾臓Ｂ細胞の少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、もしくは少なくとも２５％、脾臓樹状細胞の少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、もしくは少なくとも４０％、及び／または総骨髄細胞の少なくとも５％にトランスフェクションを生じさせる量であり得る。
発現：本明細書で使用される核酸配列の「発現」は、下記の事象の１つ以上を指す：（１）ＤＮＡ配列からのＲＮＡ鋳型の産生（例えば、転写によるもの）、（２）ＲＮＡ転写物のプロセシング（例えば、スプライシング、編集、５’キャップ形成、及び／または３’末端プロセシングによるもの）、（３）ポリペプチドまたはタンパク質へのＲＮＡの翻訳、ならびに（４）ポリペプチドまたはタンパク質の翻訳後修飾。
ｅｘ ｖｉｖｏ：本明細書で使用されるとき、「ｅｘ ｖｉｖｏ」という用語は、生物（例えば、動物、植物、微生物、またはそれらの細胞もしくは組織）の外で発生する事象を指す。ｅｘ ｖｉｖｏ事象は、天然（ｉｎ ｖｉｖｏなど）環境から最小限に変更された環境で発生し得る。
フラグメント：本明細書で使用される「フラグメント」は、一部分を指す。例えば、タンパク質のフラグメントには、培養細胞から単離された全長タンパク質を消化することによって得られるポリペプチド、または組換えＤＮＡ手法を介して得られるポリペプチドが含まれ得る。タンパク質のフラグメントは、例えば、タンパク質の一部分であり得、この一部分は、１つ以上の機能性ドメインを含み、その結果、当該タンパク質の当該フラグメントは、当該タンパク質の機能活性を保持する
ＧＣ高含有：本明細書で使用される「ＧＣ高含有」という用語は、グアニン（Ｇ）核酸塩基及び／またはシトシン（Ｃ）核酸塩基、あるいはその誘導体または類似体を含むポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）またはその任意の部分（例えば、ＲＮＡエレメント）がＧＣ含量約５０％超の核酸塩基組成を有することを指す。「ＧＣ高含有」という用語は、限定されないが、遺伝子、非コード領域、５’ＵＴＲ、３’ＵＴＲ、オープンリーディングフレーム、ＲＮＡエレメント、配列モチーフ、またはその任意の個別の配列、フラグメント、もしくはセグメントを含めて、ポリヌクレオチドのすべてまたは一部がＧＣ含量約５０％の組成を有することを指す。本開示の実施形態のいくつかでは、ＧＣ高含有ポリヌクレオチドまたはその任意の部分は、グアニン（Ｇ）核酸塩基及び／またはシトシン（Ｃ）核酸塩基から排他的に構成される。
ＧＣ含量：本明細書で使用される「ＧＣ含量」という用語は、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）またはその一部（例えば、ＲＮＡエレメント）における核酸塩基の中でグアニン（Ｇ）核酸塩基及びシトシン（Ｃ）核酸塩基、またはその誘導体もしくは類似体が占めるパーセント（ＤＮＡ及びＲＮＡにおける、アデニン（Ａ）及びチミン（Ｔ）またはウラシル（Ｕ）、ならびにその誘導体または類似体を含めて考え得る核酸塩基の総数から得られる）を指す。「ＧＣ含量」という用語は、限定されないが、遺伝子、非コード領域、５’ＵＴＲもしくは３’ＵＴＲ、オープンリーディングフレーム、ＲＮＡエレメント、配列モチーフ、またはその任意の個別の配列、フラグメント、もしくはセグメントを含めた、ポリヌクレオチドのすべてまたは一部を指す。
異種：本明細書で使用される「異種」は、配列（例えば、アミノ酸配列、またはアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド）が、所与のポリペプチドまたはポリヌクレオチドに通常は存在しないものであることを示す。例えば、あるタンパク質のドメインまたはモチーフに対応するアミノ酸配列は、第２のタンパク質に対して異種であり得る。
単離された：本明細書で使用される「単離された」という用語は、物質または実体が、（天然または実験的状況であるかを問わず）それと結び付いていた成分の少なくともいくつかから分離されていることを指す。単離された物質は、それと結び付いていた物質に対する純度レベルが異なり得る。単離された物質及び／または実体は、それと最初に結び付いていた他の成分の少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、またはそれを超える％が分離されたものであり得る。いくつかの実施形態では、単離された薬剤の純度は、約８０％超、約８５％超、約９０％超、約９１％超、約９２％超、約９３％超、約９４％超、約９５％超、約９６％超、約９７％超、約９８％超、約９９％超、またはそれを超える％であり得る。本明細書で使用されるように、物質が他の成分を実質的に含まないのであれば、当該物質は、「純粋」である。
コザック配列：「コザック配列」（「コザックコンセンサス配列」とも称される）という用語は、遺伝子またはオープンリーディングフレームの発現を増進するための翻訳開始エンハンサーエレメントを指し、翻訳開始エンハンサーエレメントは、真核生物では５’ＵＴＲに位置する。コザックコンセンサス配列は、プレプロインスリン遺伝子の翻訳に対して開始コドン（ＡＵＧ）周辺の単一変異が与える影響が解析された後、
Figure 2021512090
 （Ｒ＝プリン）という配列として元々は定義された（Ｋｏｚａｋ（１９８６）Ｃｅｌｌ ４４：２８３−２９２）。本明細書に開示のポリヌクレオチドは、コザックコンセンサス配列またはその誘導体もしくは修飾を含む（翻訳エンハンサーの構成及びその使用方法の例については、Ａｎｄｒｅｗｓ ｅｔ ａｌ．に付与された米国特許第５，８０７，７０７号（当該文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）、Ｃｈｅｒｎａｊｏｖｓｋｙに付与された米国特許第５，７２３，３３２号（当該文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）、Ｗｉｌｓｏｎに付与された米国特許第５，８９１，６６５号（当該文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。
リーキースキャニング：「リーキースキャニング」として知られる現象は、ＰＩＣが開始コドンを読み飛ばし、代わりに、別または代替の開始コドンが認識されるまで下流へとスキャニングを継続することによって生じ得る。発生頻度に応じて、ＰＩＣによる開始コドンの読み飛ばしは、翻訳効率の低下を招き得る。さらに、この下流ＡＵＧコドンから翻訳が開始される可能性があり、こうして翻訳が始まると、所望の治療応答を誘発する能力を有し得ない望ましくない異常な翻訳産物が産生することになる。場合によっては、こうした異常な翻訳産物は、有害な応答を実際に引き起こし得る（Ｋｒａｃｈｔ ｅｔ ａｌ．，（２０１７）Ｎａｔ Ｍｅｄ ２３（４）：５０１−５０７）。
リポソーム：本明細書で使用される「リポソーム」は、水性内部を封入する脂質含有膜を含む構造を意味する。リポソームは、１つ以上の脂質膜を有し得る。リポソームには、単一の層を有するリポソーム（当該技術分野では単層リポソームとしても知られる）及び複数の層を有するリポソーム（当該技術分野では多重層リポソームとしても知られる）が含まれる。
転移：本明細書で使用される「転移」という用語は、がんが、それが最初に原発腫瘍として生じた場所から体内の遠位へと拡散するプロセスを意味する。このプロセスの結果として生じる二次腫瘍は、「転移物」と称され得る。
修飾された：本明細書で使用される「修飾された」または「修飾」は、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）の状態変化または組成変化もしくは構造変化を指す。ポリヌクレオチドは、化学的、構造的、及び／または機能的なものを含めて、様々な方法で修飾され得る。例えば、ＲＮＡエレメントを１つ以上含めることによってポリヌクレオチドを構造的に修飾することができ、ＲＮＡエレメントは、１つ以上の機能（例えば、翻訳制御活性）を与える配列及び／またはＲＮＡ二次構造（複数可）を含む。したがって、本開示のポリヌクレオチドは、１つ以上の修飾を含み得る（例えば、１つ以上の化学的修飾、構造的修飾、または機能的修飾（それらの任意の組み合わせを含む）を含み得る）。
修飾された：本明細書で使用される「修飾された」は、本開示の分子の状態変化または構造変化を指す。分子は、化学的、構造的、及び機能的なものを含めて、多くの方法で修飾され得る。一実施形態では、本開示のｍＲＮＡ分子は、非天然のヌクレオシド及び／またはヌクレオチドを導入することによって修飾され、例えば、天然のリボヌクレオチドであるＡ、Ｕ、Ｇ、及びＣに関してこうした導入による修飾が行われる。非古典的ヌクレオチド（キャップ構造など）は、Ａリボヌクレオチド、Ｃリボヌクレオチド、Ｇリボヌクレオチド、Ｕリボヌクレオチドとは化学構造が異なるが、「修飾された」とは見なされない。
ｍＲＮＡ：本明細書で使用される「ｍＲＮＡ」は、メッセンジャーリボ核酸を指す。ｍＲＮＡは、天然起源または非天然起源のものであり得る。例えば、ｍＲＮＡは、修飾された及び／または非天然起源の構成要素（１つ以上の核酸塩基、ヌクレオシド、ヌクレオチド、またはリンカーなど）を含み得る。ｍＲＮＡは、キャップ構造、鎖終結ヌクレオシド、ステムループ、ポリＡ配列、及び／またはポリアデニル化シグナルを含み得る。ｍＲＮＡは、ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を有し得る。ｍＲＮＡの翻訳（例えば、哺乳動物細胞内でのｍＲＮＡのｉｎ ｖｉｖｏでの翻訳）によってポリペプチドが生じ得る。従来的には、ｍＲＮＡ分子の基本的構成要素には、コード領域、５’−非翻訳領域（５’−ＵＴＲ）、３’ＵＴＲ、５’キャップ、及びポリＡ配列が少なくとも含まれる。
ナノ粒子：本明細書で使用される「ナノ粒子」は、同じ材料のバルク試料と比較して、約１０００ｎｍ未満の尺度で新規の特性を示す任意の構造的特徴を１つ有する粒子を指す。日常的には、ナノ粒子は、約５００ｎｍ未満、約２００ｎｍ未満、または約１００ｎｍ未満の尺度で任意の構造的特徴を１つ有する。同様に日常的には、ナノ粒子は、約５０ｎｍ〜約５００ｎｍ、約５０ｎｍ〜約２００ｎｍ、または約７０〜約１２０ｍｎの尺度で任意の構造的特徴を１つ有する。実施形態例では、ナノ粒子は、約１〜１０００ｎｍのオーダーの寸法を１つ以上有する粒子である。他の実施形態例では、ナノ粒子は、約１０〜５００ｎｍのオーダーの寸法を１つ以上有する粒子である。他の実施形態例では、ナノ粒子は、約５０〜２００ｎｍのオーダーの寸法を１つ以上有する粒子である。球形のナノ粒子であれば、例えば、約５０〜１００ナノメートルまたは７０〜１２０ナノメートルの直径を有することになる。ナノ粒子は、ほとんどの場合、その輸送及び特性に関して一単位として挙動する。ナノ粒子を対応バルク材料と差別化する新規の特性は、典型的には、１０００ｎｍ未満のサイズ尺度または約１００ｎｍのサイズで生じるものであるが、ナノ粒子のサイズが大きくなることもあり得る（例えば、楕円形、管状、及び同様の形状の粒子については、ナノ粒子のサイズは大きくなり得る）ことに留意されたい。上記の概要には、ほとんどの分子のサイズが当てはまることになるが、通常、個々の分子がナノ粒子と称されることはない。
核酸：本明細書で使用される「核酸」という用語は、その広い意味において使用され、ヌクレオチドのポリマーを含む任意の化合物及び／または物質を包含する。こうしたポリマーは、ポリヌクレオチドと称されることが多い。本開示の核酸またはポリヌクレオチドの例としては、限定されないが、リボ核酸（ＲＮＡ）、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、ＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッド、ＲＮＡｉ誘導剤、ＲＮＡｉ剤、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、触媒ＤＮＡ、三重らせん形成を誘導するＲＮＡ、トレオース核酸（ＴＮＡ）、グリコール核酸（ＧＮＡ）、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、ロックド核酸（ＬＮＡ（β−Ｄ−リボ立体配置を有するＬＮＡ、α−Ｌ−リボ立体配置を有するα−ＬＮＡ（ＬＮＡのジアステレオマー）、２’−アミノ官能基を有する２’−アミノ−ＬＮＡ、及び２’−アミノ官能基を有する２’−アミノ−α−ＬＮＡを含む））、またはそれらのハイブリッドが挙げられる。
核酸構造：本明細書で使用される「核酸構造」という用語（「ポリヌクレオチド構造」と互換的に使用される）は、核酸（例えば、ｍＲＮＡ）を構成する原子、化学的要素、エレメント、モチーフ、及び／またはヌクレオチドもしくはその誘導体もしくは類似体が連結された配列、が配置または構造化されたものを指す。この用語は、核酸の二次元状態または三次元状態も指す。したがって、「ＲＮＡ構造」という用語は、ＲＮＡ分子（例えば、ｍＲＮＡ）を構成する原子、化学的要素、エレメント、モチーフ、及び／またはヌクレオチドもしくはその誘導体もしくは類似体が連結された配列、が配置または構造化されたものを指し、及び／またはＲＮＡ分子の二次元状態及び／または三次元状態を指す。核酸構造は、構造化の複雑性の高まりに応じて、「分子構造」、「一次構造」、「二次構造」、及び「三次構造」と本明細書で称される４つの構造化カテゴリーにさらに分けることができる。
核酸塩基：本明細書で使用される「核酸塩基」（あるいは「ヌクレオチド塩基」または「窒素塩基」）という用語は、核酸に見られるプリン複素環式化合物またはピリミジン複素環式化合物を指し、こうした複素環式化合物には、核酸またはその一部もしくはセグメントの特性（例えば、結合親和性、ヌクレアーゼ抵抗性、化学的安定性）を改善する天然起源のプリン及びピリミジンの任意の誘導体または類似体が含まれる。アデニン、シトシン、グアニン、チミン、及びウラシルは、天然の核酸によく見られる核酸塩基である。天然、非天然、及び／または合成の核酸塩基は、他にも当該技術分野で知られ、及び／または本明細書に記載されており、こうした他の核酸塩基が核酸に組み込まれることもあり得る。
ヌクレオシド／ヌクレオチド：本明細書で使用される「ヌクレオシド」という用語は、核酸塩基（例えば、プリンもしくはピリミジン）またはその誘導体もしくは類似体（本明細書では「核酸塩基」とも称される）に共有結合で連結された糖分子（例えば、ＲＮＡではリボースもしくはＤＮＡではデオキシリボース）またはその誘導体もしくは類似体を含むが、ヌクレオシド間連結基（例えば、リン酸基）は含まない化合物を指す。本明細書で使用される「ヌクレオチド」という用語は、ヌクレオシド間連結基（例えば、リン酸基）に共有結合で結合したヌクレオシドを指すか、あるいは核酸またはその一部もしくはセグメントの化学的及び／または機能的な特性（例えば、結合親和性、ヌクレアーゼ抵抗性、化学的安定性）を改善するヌクレオシド間連結基（例えば、リン酸基）の任意の誘導体、類似体、または修飾体に共有結合で結合したヌクレオシドを指す。
オープンリーディングフレーム：本明細書で使用される「オープンリーディングフレーム」（「ＯＲＦ」と略される）という用語は、ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ分子のセグメントまたは領域を指す。ＯＲＦは、フレーム内コドンがオーバーラップせずに連続する区間を含み、開始コドンから始まり、終止コドンで終わる。ＯＲＦは、リボソームによって翻訳される。
患者：本明細書で使用されるとき、「患者」とは、治療を求めるかもしくは治療を必要とする、治療を要求する、治療を受けている、治療を受けようとする対象、または特定の疾患もしくは状態について訓練を受けた専門家による治療を受けている対象を指す。特定の実施形態では、患者は、ヒト患者である。いくつかの実施形態では、患者は、がん（例えば、肝癌または結腸直腸癌）を患う患者である。
薬学的に許容される：「薬学的に許容される」という語句は、妥当な医学的判断の範囲内で、妥当な利益／リスク比に見合って、過剰な毒性、刺激、アレルギー反応、またはその他の問題もしくは合併症もなくヒト及び動物の組織と接触させて使用するのに適した化合物、物質、組成物、及び／または剤形を指すために本明細書で用いられる。
薬学的に許容される賦形剤：本明細書で使用されるとき、「薬学的に許容される賦形剤」という語句は、本明細書に記載の化合物以外の任意の成分（例えば、活性化合物を懸濁または溶解することができる媒体）を指し、患者において、実質的に無毒で非炎症性の特性を有する。賦形剤には、例えば、付着防止剤、酸化防止剤、結合剤、コーティング、圧縮補助剤、崩壊剤、染料（着色剤）、皮膚軟化剤、乳化剤、充填剤（希釈剤）、皮膜形成剤またはコーティング剤、香味剤、香料、流動促進剤（流動促進剤）、潤滑剤、保存剤、印刷インク、吸着剤、懸濁剤または分散剤、甘味料、及び水和水が含まれ得る。例示的な賦形剤には、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム（二塩基性）、ステアリン酸カルシウム、クロスカルメロース、架橋ポリビニルピロリドン、クエン酸、クロスポビドン、システイン、エチルセルロース、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ラクトース、ステアリン酸マグネシウム、マルチトール、マンニトール、メチオニン、メチルセルロース、メチルパラベン、微結晶セルロース、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、ポビドン、アルファ化デンプン、プロピルパラベン、パルミチン酸レチニル、シェラック、二酸化ケイ素、カルボキシメチルセルロースナトリウム、クエン酸ナトリウム、ナトリウムデンプングリコール酸、ソルビトール、デンプン（トウモロコシ）、ステアリン酸、スクロース、タルク、二酸化チタン、ビタミンＡ、ビタミンＥ、ビタミンＣ、及びキシリトールが含まれるが、これらに限定されない。
薬学的に許容される塩：本明細書で使用されるとき、「薬学的に許容される塩」とは、既存の酸または塩基部分をその塩形態に変換することにより（例えば、遊離塩基基を適切な有機酸と反応させることにより）親化合物が修飾された、開示される化合物の誘導体を指す。薬学的に許容される塩の例には、アミンなどの塩基性残基の無機または有機酸塩、カルボン酸などの酸性残基のアルカリまたは有機塩などが含まれるが、これらに限定されない。代表的な酸付加塩には、酢酸塩、酢酸、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、樟脳酸塩、樟脳スルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプトン酸塩、ヘキサン酸塩、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバレート、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸、吉草酸塩などが含まれる。代表的なアルカリまたはアルカリ土類金属塩には、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなど、ならびに無毒のアンモニウム、第４級アンモニウム、及びアンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、エチルアミンなどを含むがこれらに限定されないアミンカチオンが含まれる。本開示の薬学的に許容される塩には、例えば、非毒性の無機酸または有機酸から形成される親化合物の従来の非毒性の塩が含まれる。本開示の薬学的に許容される塩は、従来の化学的方法により、塩基性または酸性部分を含む親化合物から合成することができる。一般的に、このような塩は、これらの化合物の遊離酸または塩基形態を、水中もしくは有機溶媒または２つの混合物中の化学量論的な量の適切な塩基または酸と反応させることによって調製することができ、一般に、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、またはアセトニトリルのような非水性媒体が好ましい。適切な塩のリストは、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， １７ｔｈ ｅｄ．， Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ， Ｅａｓｔｏｎ， Ｐａ．， １９８５， ｐ． １４１８、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ： Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ， Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ， ａｎｄ Ｕｓｅ， Ｐ．Ｈ． Ｓｔａｈｌ ａｎｄ Ｃ．Ｇ． Ｗｅｒｍｕｔｈ （ｅｄｓ．）， Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ， ２００８、及びＢｅｒｇｅ ｅｔ ａｌ．， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ， ６６， １−１９ （１９７７）に見出され、その各々は参照により本明細書に組み込まれる。
ポリペプチド：本明細書で使用されるとき、「ポリペプチド」または「目的ポリペプチド」という用語は、天然に（例えば、単離または精製）または合成的に生成できるペプチド結合により典型的に連結されるアミノ酸残基のポリマーを指す。
開始前複合体（ＰＩＣ）：本明細書で使用される「開始前複合体」（あるいは「４３Ｓ開始前複合体」（「ＰＩＣ」と略される））という用語は、４０Ｓリボソームサブユニット、真核生物開始因子（ｅＩＦ１、ｅＩＦ１Ａ、ｅＩＦ３、ｅＩＦ５）、及びｅＩＦ２−ＧＴＰ−Ｍｅｔ−ｔＲＮＡｉ Ｍｅｔ三元複合体を含み、ｍＲＮＡ分子の５’キャップに結合し、結合後に５’ＵＴＲのリボソームスキャニングを実施するという固有の能力を有するリボ核タンパク質複合体を指す。
ＲＮＡ：本明細書で使用されるとき、「ＲＮＡ」とは、天然に存在するかまたは天然に存在しないリボ核酸を指す。例えば、ＲＮＡは、１つ以上の核酸塩基、ヌクレオシド、ヌクレオチド、またはリンカーなどの修飾された、及び／または天然に存在しない成分を含んでもよい。ＲＮＡは、キャップ構造、鎖終結ヌクレオチド、ステムループ、ポリＡ配列、及び／またはポリアデニル化シグナルを含み得る。ＲＮＡは、目的のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を有し得る。例えば、ＲＮＡはメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）であってもよい。特定のポリペプチドをコードするｍＲＮＡの翻訳、例えば、哺乳動物細胞内のｍＲＮＡのｉｎ ｖｉｖｏ翻訳は、コードされたポリペプチドを産生し得る。ＲＮＡは、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、非対称干渉ＲＮＡ（ａｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ダイサー基質ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、ｍＲＮＡ、長鎖非コードＲＮＡ（ｌｎｃＲＮＡ）、及びその混合物からなる非制限的な群から選択され得る。
ＲＮＡエレメント：本明細書で使用される「ＲＮＡエレメント」という用語は、生物学的機能を与え、及び／または生物学的活性（例えば、翻訳制御活性）を有する、ＲＮＡ分子の一部、フラグメント、またはセグメントを指す。ＲＮＡエレメント（本明細書に記載のものなど）を１つ以上含めることによってポリヌクレオチドを修飾することで、望ましい機能特性が修飾ポリヌクレオチドに１つ以上付与される。ＲＮＡエレメントは、本明細書に記載されており、天然起源のもの、非天然起源のもの、合成のもの、操作されたもの、またはそれらの任意の組み合わせであり得る。例えば、制御活性を与える天然起源のＲＮＡエレメントには、ウイルス、原核生物、及び真核生物（例えば、ヒト）のトランスクリプトームを通じて見られるエレメントが含まれる。特定の真核生物ｍＲＮＡ及び翻訳されるウイルスＲＮＡにおけるＲＮＡエレメントは、細胞における多くの機能の媒介に関与することが示されている。天然のＲＮＡエレメントの例としては、限定されないが、翻訳開始エレメント（例えば、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）（Ｋｉｅｆｔ ｅｔ ａｌ．，（２００１）ＲＮＡ ７（２）：１９４−２０６を参照のこと））、翻訳エンハンサーエレメント（例えば、ＡＰＰ ｍＲＮＡ翻訳エンハンサーエレメント（Ｒｏｇｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，（１９９９）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７４（１０）：６４２１−６４３１を参照のこと））、ｍＲＮＡ安定エレメント（例えば、ＡＵ高含有エレメント（ＡＲＥ）（Ｇａｒｎｅａｕ ｅｔ ａｌ．，（２００７）Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ ８（２）：１１３−１２６）を参照のこと））、翻訳抑制エレメント（例えば、Ｂｌｕｍｅｒ ｅｔ ａｌ．，（２００２）Ｍｅｃｈ Ｄｅｖ １１０（１−２）：９７−１１２を参照のこと）、タンパク質結合ＲＮＡエレメント（例えば、鉄応答性エレメント（Ｓｅｌｅｚｎｅｖａ ｅｔ ａｌ．，（２０１３）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ４２５（１８）：３３０１−３３１０）を参照のこと））、細胞質ポリアデニル化エレメント（Ｖｉｌｌａｌｂａ ｅｔ ａｌ．，（２０１１）Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｇｅｎｅｔ Ｄｅｖ ２１（４）：４５２−４５７）、及び触媒ＲＮＡエレメント（例えば、リボザイム（Ｓｃｏｔｔ ｅｔ ａｌ．，（２００９）Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ １７８９（９−１０）：６３４−６４１）を参照のこと））が挙げられる。
滞留する時間：本明細書で使用される「滞留する時間」という用語は、開始前複合体（ＰＩＣ）またはリボソームが、ｍＲＮＡ分子に沿って個別の位置または場所を占有する時間を指す。
特異的送達：本明細書で使用される「特異的送達」、「特異的に送達する」、または「特異的に送達すること」という用語は、オフターゲット細胞（例えば、非免疫細胞）と比較して、ナノ粒子による目的の標的細胞（例えば、哺乳動物免疫細胞）への治療薬及び／または予防薬の送達が増加すること（例えば、少なくとも１０％増加すること、少なくとも２０％増加すること、少なくとも３０％増加すること、少なくとも４０％増加すること、少なくとも５０％増加すること、少なくとも１．５倍に増加すること、少なくとも２倍に増加すること、少なくとも３倍に増加すること、少なくとも４倍に増加すること、少なくとも５倍に増加すること、少なくとも６倍に増加すること、少なくとも７倍に増加すること、少なくとも８倍に増加すること、少なくとも９倍に増加すること、少なくとも１０倍に増加すること）を意味する。ナノ粒子が特定の細胞に送達されるレベルは、標的細胞において産生するタンパク質の量を、非標的細胞において産生するタンパク質の量と比較することによって（例えば、フローサイトメトリーを使用して平均蛍光強度による比較を行うことによって）測定されるか、タンパク質を発現する標的細胞の％を、タンパク質を発現する非標的細胞の％と比較することによって（例えば、定量的フローサイトメトリーによる比較を行うことによって）測定されるか、非標的細胞において産生するタンパク質の量に対する標的細胞において産生するタンパク質の量と、非標的細胞における総タンパク質量に対する当該標的細胞における総タンパク質量と、を比較することによって測定されるか、あるいは非標的細胞における治療薬及び／または予防薬の量に対する標的細胞における治療薬及び／または予防薬の量と、非標的細胞における治療薬及び／または予防薬の総量に対する当該標的細胞における治療薬及び／または予防薬の総量と、を比較することによって測定され得る。ナノ粒子が標的細胞への特異的送達を行う能力は、治療される対象において決定される必要はなく、代用物（動物モデル（例えば、マウスモデルまたはＮＨＰモデル）など）において決定され得ることが理解されよう。例えば、免疫細胞への特異的送達の決定については、マウスモデルまたはＮＨＰモデル（例えば、実施例に記載のもの）を使用することができ、目的タンパク質をコードするｍＲＮＡの送達は、標準的な方法（例えば、フローサイトメトリー、蛍光顕微鏡法、及び同様のもの）によって、非免疫細胞と比較して免疫細胞（例えば、脾臓、末梢血、及び／または骨髄に由来するもの）において評価され得る。
実質的に：本明細書で使用される「実質的に」という用語は、目的の特徴または特性が示される程度または度合いが完全またはほぼ完全である定性的な状態を指す。生物学的現象及び化学的現象が、皆無ではないにせよ、完了に至り、及び／または完全な状態まで進行するか、あるいは絶対的な結果を達成または回避することは稀であることを生物学分野の当業者なら理解するであろう。それ故に、「実質的に」という用語は、多くの生物学的現象及び化学的現象に固有の潜在的な完全性欠如をとらえるために本明細書で使用される。
を患う：疾患、障害、及び／または状態「を患う」個体は、疾患、障害、及び／または状態を有すると診断されているか、あるいは疾患、障害、及び／または状態の症状を１つ以上示す。
標的細胞：本明細書で使用されるとき、「標的細胞」とは、目的の任意の１つ以上の細胞を指す。細胞は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｉｎ ｖｉｖｏ、ｉｎ ｓｉｔｕ、または生物の組織もしくは臓器に見出し得る。生物は、動物、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒト、最も好ましくは患者であり得る。標的免疫細胞には、例えば、例えば、ＣＤ３＋Ｔ細胞、ＣＤ１９＋Ｂ細胞、及びＣＤ１１ｃ＋樹状細胞、ならびに単球、組織マクロファージ、及び骨髄細胞（骨髄内の免疫細胞、造血幹細胞、免疫細胞前駆体、及び線維芽細胞を含む）が含まれる。
標的化部分：本明細書で使用される「標的化部分」は、特定の細胞型、組織型、及び／または臓器型へとナノ粒子を標的化し得る化合物または薬剤である。
治療薬：「治療薬」という用語は、対象に投与されたとき、治療効果、診断効果、及び／または予防効果を有し、及び／または所望の生物学的効果及び／または薬理効果を誘発する任意の薬剤を指す。
トランスフェクション：本明細書で使用される「トランスフェクション」という用語は、種（例えば、ポリヌクレオチド（ｍＲＮＡなど））を細胞に導入するための方法を指す。
翻訳制御活性：本明細書で使用される「翻訳制御活性」（「翻訳制御機能」と互換的に使用される）という用語は、ＰＩＣ及び／またはリボソームの活性を含めて、翻訳装置の活性を調節する（例えば、制御する、影響を与える、管理する、変える）生物学的な機能、機構、またはプロセスを指す。いくつかの態様では、所望の翻訳制御活性は、ｍＲＮＡ翻訳の翻訳忠実度を促進及び／または増進するものである。いくつかの態様では、所望の翻訳制御活性は、リーキースキャニングを低減及び／または抑制するものである。対象：本明細書で使用されるとき、「対象」という用語は、例えば実験、診断、予防、及び／または治療目的で、本開示による組成物または製剤を投与することができる任意の生物を指す。典型的な対象には、動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、非ヒト霊長類、及びヒトなどの哺乳動物）及び／または植物が含まれる。いくつかの実施形態では、対象は、患者であり得る。
治療：本明細書で使用されるとき、「治療」という用語は、特定の感染、疾患、障害、及び／または状態の、１つ以上の症状または特徴を部分的もしくは完全に軽減、改善、改善、緩和、その発症の遅延、その進行の阻害、その重症度の低下、及び／またはその発生率の低下を指す。例えば、がんの「治療」とは、腫瘍の生存、増殖、及び／または拡大を抑制することを指し得る。治療は、疾患、障害、及び／または状態に関連する病態の発生のリスクを低減する目的で、疾患、障害、及び／または状態の兆候を示さない対象に、及び／または疾患、障害、及び／または状態の初期兆候のみを示す対象に投与され得る。
阻止：本明細書で使用される「阻止」という用語は、特定の感染症、疾患、障害、及び／または状態の症状または特徴の１つ以上の発症を部分的または完全に抑制することを指す。
腫瘍：本明細書で使用される「腫瘍」は、良性または悪性を問わず、組織が異常に増殖したものである。
非修飾：本明細書で使用される「非修飾」は、任意の物質、化合物、または分子が、任意の方法で変更される前の状態であることを指す。非修飾は、常にではないが、生体分子が野生型または天然形態であることを指し得る。分子は、それぞれの修飾分子が後続の修飾のための「非修飾」出発分子として働き得る一連の修飾を受け得る。
ウリジン含量：「ウリジン含量」または「ウラシル含量」という用語は、互換可能であり、ある特定の核酸配列に存在するウラシルまたはウリジンの量を指す。ウリジン含量またはウラシル含量は、絶対値（配列におけるウリジンもしくはウラシルの総数）または相対値（核酸配列における核酸塩基の総数に対するウリジンもしくはウラシルのパーセント）として表現され得る。
ウリジン修飾配列：「ウリジン修飾配列」という用語は、ウリジン含量が全体的または局所的に異なる（ウリジン含量が上昇または低下する）ように配列が最適化された核酸（例えば、合成ｍＲＮＡ配列）を指すか、あるいは候補核酸配列のウリジン含量及び／またはウリジンパターンに対してウリジンパターンが異なる（例えば、分布に勾配が付くか、またはクラスター化する）ように配列が最適化された核酸を指す。本開示の内容では、「ウリジン修飾配列」及び「ウラシル修飾配列」という用語は、同義かつ互換可能であると見なされる。
「ウリジン高含有コドン」は、ウリジンを２つまたは３つ含むコドンとして定義され、「ウリジン低含有コドン」は、ウリジンを１つ含むコドンとして定義され、「ウリジン非含有コドン」は、ウリジンを全く含まないコドンである。いくつかの実施形態では、ウリジン修飾配列は、ウリジン高含有コドンをウリジン低含有コドンで置き換えたコドン、ウリジン高含有コドンをウリジン非含有コドンで置き換えたコドン、ウリジン低含有コドンをウリジン高含有コドンで置き換えたコドン、ウリジン低含有コドンをウリジン非含有コドンで置き換えたコドン、ウリジン非含有コドンをウリジン低含有コドンで置き換えたコドン、ウリジン非含有コドンをウリジン高含有コドンで置き換えたコドン、及びそれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、ウリジン高含有コドンは、別のウリジン高含有コドンで置き換えられ得る。いくつかの実施形態では、ウリジン低含有コドンは、別のウリジン低含有コドンで置き換えられ得る。いくつかの実施形態では、ウリジン非含有コドンは、別のウリジン非含有コドンで置き換えられ得る。ウリジン修飾配列は、ウリジン高含有化配列であるか、またはウリジン低含有化配列であり得る。
ウリジン高含有化：本明細書で使用される「ウリジン高含有化」という用語及び文法的に変化した表現は、配列が最適化される核酸（例えば、合成ｍＲＮＡ配列）のウリジン含量（絶対値で表現されるか、またはパーセント値として表現される）が、対応する候補核酸配列のウリジン含量に対して高められることを指す。ウリジン高含有化は、ウリジン核酸塩基の含量が低い同義語コドンで候補核酸配列中のコドンを置き換えることによって実施され得る。ウリジン高含有化は、全体的（すなわち、候補核酸配列の全長に対するもの）または局所的（すなわち、候補核酸配列の部分配列もしくは領域に対するもの）に行われ得る。
ウリジン低含有化：本明細書で使用される「ウリジン低含有化」という用語及び文法的に変化した表現は、配列が最適化される核酸（例えば、合成ｍＲＮＡ配列）のウリジン含量（絶対値で表現されるか、またはパーセント値として表現される）が、対応する候補核酸配列のウリジン含量に対して低減されることを指す。ウリジン低含有化は、ウリジン核酸塩基の含量が低い同義語コドンで候補核酸配列中のコドンを置き換えることによって実施され得る。ウリジン低含有化は、全体的（すなわち、候補核酸配列の全長に対するもの）または局所的（すなわち、候補核酸配列の部分配列もしくは領域に対するもの）に行われ得る。
均等物及び範囲
当業者は、日常的な実験にすぎないものを用いて、本明細書において記載される本開示による具体的な実施形態に対する多くの均等物を認識するか、またはそれを確かめることができるであろう。本開示の範囲を以下の説明に限定することは意図されておらず、本開示の範囲は、添付の特許請求の範囲に示されるものである。
特許請求の範囲において、「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」などの冠詞は、反対の指示がない限り、または文脈から明白でない限り、１つ以上を意味し得る。グループの１つ以上のメンバー間の「または」を含むクレームまたは記載は、反対の指示がない限り、または文脈から明白でない限り、グループの１つ、１つを超える、または全てのメンバーが所与の製品またはプロセスに存在、採用、またはさもなくば関連する場合、満たされているとみなされる。本開示は、グループの厳密に１つのメンバーが、所与の製品またはプロセス存在、採用、またはさもなくば関連する実施形態を含む。本開示は、グループの１つを超える、または全てのメンバーが、所与の製品またはプロセス存在、採用、またはさもなくば関連する実施形態を含む。
また、「含む」という用語は、オープンであることを意図しており、追加の要素またはステップの包含を許可するものであるが、その包含は必ずしも必要ではないことに留意されたい。本明細書で「含む」という用語が使用されるとき、「からなる」という用語もそれによって包含され、開示される。
範囲が指定されている場合、端点が含まれている。さらに、別段の指示がない限り、または文脈及び当業者の理解から明白でない限り、範囲として表される値は、本開示の異なる実施形態で述べられた範囲内の任意の特定の値または部分範囲を、文脈の別段の定めがない限り、範囲の下限の単位の１０分の１までをとることができることを理解されたい。
全ての引用元、例えば、参照文献、出版物、データベース、データベース登録、及びここに引用された技術は、引用に明示的に記載されていない場合でも、参照により本出願に組み込まれる。引用された情報源及び本出願の記述が矛盾する場合、本出願の記述が優先するものとする。
下記の実施例を参照することによって本開示の理解がさらに深まるであろう。しかしながら、それらの実施例を、本開示の範囲を限定するものと解釈すべきではない。本明細書に記載の実施例及び実施形態の目的は例示にすぎず、それらを踏まえれば様々な改変または変更を当業者なら思い付くであろうし、そうした改変または変更は、本出願の趣旨及び視野ならびに添付の特許請求の範囲に含まれることになることが理解されよう。
実施例は、免疫細胞送達ＬＮＰの生理学的効果を実証するものであり、免疫細胞によって本開示のＬＮＰが取り込まれるかをさらに試験するために設計されたものである。こうした実験は、患者の免疫細胞においてｉｎ ｖｉｖｏで発現させるための治療分子、または患者由来の免疫細胞においてｅｘ ｖｉｖｏで発現させるための治療分子、を送達するためのＬＮＰの開発を支援するものである。本明細書で例示される分子は、膜貫通型分子（例えば、細胞受容体または修飾された細胞受容体（ＣＡＲＴなど））、細胞内分子（例えば、転写因子）、及び可溶性分子（例えば、サイトカイン／増殖因子）を送達するための本開示のＬＮＰの生理学的効果を実証するものである。
実施例１：化合物の合成
本発明の代表的なイオン化可能な脂質（例えば、式（Ｉ）、式（ＩＡ）、式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、式（ＩＩｂ）、式（ＩＩｃ）、式（ＩＩｄ）、式（ＩＩｅ）、式（ＩＩＩ）、及び式（ＩＩＩａ１−８）のいずれかを有する化合物、及び／または化合物Ｘ、化合物Ｙ、化合物Ｚ、化合物Ｑ、もしくは化合物Ｍのいずれか）の合成については、同時係属出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０５２３５２及び同ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０６８３００に記載されており、これらの文献のそれぞれの内容は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
実施例２：ナノ粒子組成物の生成
Ａ．ナノ粒子組成物の生成
細胞への治療薬及び／または予防薬の送達における使用のためのナノ粒子組成物の安全性及び効率を調べるために、様々な薬剤を調製し、試験した。具体的には、ナノ粒子組成物の脂質成分における特定の要素及びその比率を最適化した。
ナノ粒子は、混合プロセス（治療薬及び／または予防薬を一方が含み、もう一方が脂質成分を有する２つの液体流を、マイクロ流体工学及びＴ字合流を使用して混合するものなど）を用いて調製することができる。
脂質組成物は、式（Ｉ）、式（ＩＡ）、式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、式（ＩＩｂ）、式（ＩＩｃ）、式（ＩＩｄ）、式（ＩＩｅ）、式（ＩＩＩ）、及び式（ＩＩＩａ１−８）による脂質、及び／または化合物Ｘ、化合物Ｙ、化合物Ｚ、化合物Ｑ、もしくは化合物Ｍのいずれか、もしくは非カチオン性ヘルパー脂質（Ａｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ，Ａｌａｂａｓｔｅｒ，ＡＬから入手可能なＤＯＰＥ、ＤＳＰＣ、またはオレイン酸など）と、ＰＥＧ脂質（Ａｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ，Ａｌａｂａｓｔｅｒ，ＡＬから入手可能な１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロールメトキシポリエチレングリコール（ＰＥＧ−ＤＭＧとしても知られる）など）と、フィトステロール（必要に応じて構造脂質（コレステロールなど）を含む）とを、溶媒（例えば、エタノール）中濃度が例えば約５０ｍＭとなるように混合されることによって調製される。溶液は、保管時には冷却すべきであり、その際の冷却温度は、例えば、−２０℃である。脂質は、所望のモル比（例えば、以下の表２１を参照のこと）が得られるように混合され、水及びエタノールで希釈されることで、最終脂質濃度が、例えば、約５．５ｍＭ〜約２５ｍＭとなるように調整される。表２１中のフィトステロール＊は、フィトステロールを指すか、またはフィトステロールと構造脂質とを必要に応じて組み合わせたもの（ベータ−フィトステロールとコレステロールとを組み合わせたものなど）を指す。
表２１．式（Ｉ）、式（ＩＡ）、式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、式（ＩＩｂ）、式（ＩＩｃ）、式（ＩＩｄ）、式（ＩＩｅ）、式（ＩＩＩ）、及び式（ＩＩＩａ１−８）による化合物、及び／または化合物Ｘ、化合物Ｙ、化合物Ｚ、化合物Ｑ、もしくは化合物Ｍのいずれか、を含む製剤の例。
Figure 2021512090
治療薬及び／または予防薬と脂質成分とを含むナノ粒子組成物は、脂質溶液と、治療薬及び／または予防薬を含む溶液とを、脂質成分と治療薬及び／または予防薬との比（ｗｔ：ｗｔ）が約５：１〜約５０：１となるように混合することによって調製される。ＮａｎｏＡｓｓｅｍｂｌｒ（ミクロ流体ベースのシステム）を使用して約１０ｍｌ／分〜約１８ｍｌ／分の流速で脂質溶液を治療薬及び／または予防薬溶液に迅速に注入することで、水とエタノールとの比が約１：１〜約４：１の懸濁液が得られる。
ＲＮＡを含むナノ粒子組成物については、０．１ｍｇ／ｍｌの濃度で脱イオン水中にＲＮＡを含む溶液をｐＨ３〜４の緩衝液（例えば、５０ｍＭのクエン酸ナトリウム緩衝液）で希釈することで貯蔵液が形成される。
透析によってナノ粒子組成物を処理してエタノールを除去し、緩衝液交換を達成することができる。製剤は、カットオフ分子量が１０ｋＤａのＳｌｉｄｅ−Ａ−Ｌｙｚｅｒカセット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）を使用して一次生成物の体積の２００倍の体積のリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）（ｐＨ７．４）に対して２回透析される。最初の透析は室温で３時間行われる。次に、４℃で一晩、製剤の透析が行われる。得られたナノ粒子懸濁液は、孔径０．２μｍの滅菌フィルター（Ｓａｒｓｔｅｄｔ，Ｎｕｍｂｒｅｃｈｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を介してろ過してガラスバイアルに充填され、巻き締めして密封される。一般には、０．０１ｍｇ／ｍｌ〜０．１０ｍｇ／ｍｌのナノ粒子組成物溶液が得られる。
上記の方法では、ナノ沈殿及び粒子形成が誘導される。代替プロセスには、限定されないが、Ｔ字合流及び直接注入が含まれ、こうした代替プロセスを使用しても同じナノ沈殿を達成することができる。
Ｂ．ナノ粒子組成物の特徴付け
ナノ粒子組成物の粒径、多分散性指数（ＰＤＩ）、及びゼータ電位を決定には、Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ Ｎａｎｏ ＺＳ（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｌｔｄ，Ｍａｌｖｅｒｎ，Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒｓｈｉｒｅ，ＵＫ）を使用することができる（粒径の決定は１×ＰＢＳ中で行われ、ゼータ電位の決定は１５ｍＭのＰＢＳ中で行われる）。
ナノ粒子組成物における治療薬及び／または予防薬（例えば、ＲＮＡ）の濃度決定には、紫外・可視分光法を使用することができる。１×ＰＢＳに含めた希釈製剤１００μＬに対してメタノールとクロロホルムとの４：１（ｖ／ｖ）混合物９００μＬが添加される。混合後、溶液の吸収スペクトルが記録され、この記録は、例えば、ＤＵ８００分光光度計（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｂｒｅａ，ＣＡ）で行われ、２３０ｎｍ〜３３０ｎｍの波長範囲が使用される。ナノ粒子組成物における治療薬及び／または予防薬の濃度は、組成物において使用される治療薬及び／または予防薬の吸光係数、ならびにある波長（例えば、２６０ｎｍ）での吸光度とある波長（例えば、３３０ｎｍ）でのベースライン値との差に基づいて計算することができる。
ＲＮＡを含むナノ粒子組成物については、ナノ粒子組成物によるＲＮＡのカプセル化の評価にＱＵＡＮＴ−ＩＴ（商標）ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡアッセイ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を使用することができる。試料は、ＴＥ緩衝液（１０ｍＭのトリス−ＨＣｌ、１ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ７．５）で約５μｇ／ｍＬ濃度に希釈される。ポリスチレンの９６ウェルプレートに希釈試料５０μＬが移され、ＴＥ緩衝液５０μＬまたは２％のＴｒｉｔｏｎＸ−１００溶液５０μＬのいずれかがウェルに添加される。温度３７℃で１５分間、プレートのインキュベートが行われる。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）試薬がＴＥ緩衝液で１：１００となるように希釈され、この溶液１００μＬが各ウェルに添加される。蛍光強度は、励起波長を例えば約４８０ｎｍとし、発光波長を例えば約５２０ｎｍとして蛍光プレートリーダー（Ｗａｌｌａｃ Ｖｉｃｔｏｒ １４２０ Ｍｕｌｔｉｌａｂｌｅｌ Ｃｏｕｎｔｅｒ；Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）を使用して測定することができる。試料のそれぞれの蛍光値から試料ブランクの蛍光値が差し引かれ、無処理試料（ＴｒｉｔｏｎＸ−１００の添加なしのもの）の蛍光強度を破壊試料（ＴｒｉｔｏｎＸ−１００の添加によって破壊したもの）の蛍光値で割ることによって遊離ＲＮＡのパーセントが決定される。
Ｃ．ｉｎ ｖｉｖｏでの製剤試験
様々なナノ粒子組成物が治療薬及び／または予防薬をどのくらい効率的に標的細胞に送達するかを監視するために、特定の治療薬及び／または予防薬（例えば、修飾ＲＮＡまたは天然起源のＲＮＡ（ｍＲＮＡなど））を含む異なるナノ粒子組成物が調製され、げっ歯類集団に投与される。ナノ粒子組成物を含む単回用量が脂質ナノ粒子製剤としてマウスの静脈内、筋肉内、動脈内、または腫瘍内に投与される。場合によっては、用量をマウスに吸入させることができる。用量サイズの範囲は、０．００１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇであり得、１０ｍｇ／ｋｇは、マウスの体重１ｋｇごとにつき１０ｍｇの治療薬及び／または予防薬をナノ粒子組成物に含む用量であることを示す。ＰＢＳを含む対照組成物を用いることもできる。
ナノ粒子組成物をマウスに投与する際には、特定の製剤及びその用量の用量送達プロファイル、用量応答、及び毒性を酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、生物発光画像化法、または他の方法によって測定することができる。ｍＲＮＡを含むナノ粒子組成物については、タンパク質発現の経時変化を評価することもできる。評価用にげっ歯類から採取される試料には、血液、血清、及び組織（例えば、筋肉内注射部位から得られる筋組織、及び内部組織）が含まれ得る。試料採取には、動物の屠殺が伴い得る。
ｍＲＮＡを含むナノ粒子組成物は、治療薬及び／または予防薬を送達するための様々な製剤の効力及び有用性の評価において有用である。ｍＲＮＡを含む組成物を投与することによって誘導されるタンパク質発現のレベル上昇は、ｍＲＮＡの翻訳の増加及び／またはナノ粒子組成物によるｍＲＮＡ送達の効率の上昇の指標となる。非ＲＮＡ成分は翻訳機構自体には影響を与えないと考えられるため、タンパク質発現のレベル上昇は、所与のナノ粒子組成物による治療薬及び／または予防薬の送達効率が他のナノ粒子組成物または当該ナノ粒子組成物が不在の場合と比較して上昇することの指標である可能性がある。
実施例３：ヒト急性骨髄性白血病細胞へのｅｘ ｖｉｖｏでの膜結合型タンパク質のｍＲＮＡの送達
第１の一連の実験では、ヒト患者から得られたヒト急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞へとベータ−シトステロール／コレステロール含有ＬＮＰがｍＲＮＡを送達する能力を他のＬＮＰと比較してｅｘ ｖｉｖｏで試験した。様々なＬＮＰに製剤化されたマウスＯＸ４０ＬコードｍＲＮＡ（５０ｎｇ）、またはＰＢＳの存在下でＡＭＬ細胞を３７℃でインキュベートした。２４時間後、細胞がマウスＯＸ４０Ｌタンパク質を発現したかをフローサイトメトリーによって分析した。フィコエリトリン（ＰＥ）で標識された抗ｍＯＸ４０Ｌ抗体を使用して、蛍光顕微鏡法によっても細胞のｍＯＸ４０Ｌ発現について調べた。下記のＬＮＰ製剤を試験した：ＬＮＰ１（化合物Ｘ−ＤＳＰＣ−ＰＥＧ ＤＭＧから構成される）、ＬＮＰ２（化合物Ｘ−ＤＳＰＣ−化合物４２８から構成される）、及びＬＮＰ３（化合物Ｘ−ＤＳＰＣ−ベータ−シトステロール／コレステロール−ＰＥＧ ＤＭＧから構成される（化合物Ｘ５０ｍｏｌ％、ＤＳＰＣ１０ｍｏｌ％、ベータ−シトステロール／コレステロール３８．５ｍｏｌ％（ｂ−シトステロール２８．５ｍｏｌ％、コレステロール１０ｍｏｌ％）、及びＰＥＧ ＤＭＧ１．５ｍｏｌ％））。
フローサイトメトリーの結果は、図１Ａにまとめられており、ベータ−シトステロール／コレステロール含有ＬＮＰ（ＬＮＰ３）で処理した細胞の約５０％がｍＯＸ４０Ｌを発現したことを示す。ＬＮＰ３によるこの発現は、試験したその他の２つのＬＮＰ（ＬＮＰ１及びＬＮＰ２）で観測されたものと比較して約１０倍高いトランスフェクションレベルのものであった。蛍光顕微鏡法の結果は、図１Ｂにまとめられており、この結果から、ベータ−シトステロール／コレステロール含有ＬＮＰ（ＬＮＰ３）で処理した細胞が、試験したその他の２つのＬＮＰ（ＬＮＰ１及びＬＮＰ２）での処理と比較して有意に高いレベルでｍＯＸ４０Ｌを発現することが確認された。
図１Ａ〜１Ｂの結果から、試験したその他のＬＮＰ（ＬＮＰ１及びＬＮＰ２）と比較して、ｍＲＮＡコンストラクトをｅｘ ｖｉｖｏでヒトＡＭＬ細胞に送達する上でベータ−シトステロール／コレステロール含有ＬＮＰ（ＬＮＰ３）が有意に良好なものであることが実証された。こうした結果に基づいて、ＡＭＬマウスモデルにおけるｉｎ ｖｉｖｏでのｍＲＮＡ送達についてベータ−シトステロール／コレステロール含有ＬＮＰ（ＬＮＰ３）を試験した（実施例４を参照のこと）。
実施例４：急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）患者から得られた末梢血単核球（ＰＢＭＣ）で再構成されたＰＤＸマウスにおけるｍＲＮＡ送達
第２の一連の実験では、タンパク質をコードするｍＲＮＡを様々なＬＮＰ組成物がｉｎ ｖｉｖｏで細胞に送達する能力を試験するために、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の患者由来異種移植（ＰＤＸ）マウスモデルを使用した。このＰＤＸモデルでは、ＡＭＬ患者から得られた末梢血単核球（ＰＢＭＣ）が免疫不全マウスに投与される。次に、このマウスにおいて薬剤の作用を試験することができる。
５週齢の雌性ＮＯＤ．Ｃｇ−Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ Ｉｌ２ｒｇｔｍ１Ｓｕｇ／ＪｉｃＴａｃ（ＮＯＧ；Ｔａｃｏｎｉｃ 番号ＮＯＧ−Ｆ）マウスに対して亜致死性の照射（１７５ｃＧｙの全身照射）を行った（ＲＳ２０００−Ｘ−ｒａｙ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｒｒａｄｉａｔｏｒ，ＲａｄＳｏｕｒｃｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．）。並行して、ＡＭＬ患者由来のＰＢＭＣを３７℃で解凍し、血球計算板を使用して生細胞数を計測した。照射マウスの外側尾静脈に最大で２×１０６個のヒトＡＭＬ細胞（ＰＢＳ中体積０．２ｍｌ）を注射し、マウスへの注射を行った。個々の動物の末梢血１μｌ当たりのＣＤ３３＋芽球数が２０〜２０００に達したときに、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡコンストラクトが様々な異なるＬＮＰ組成物に製剤化（カプセル化）されたものをマウスに静脈内注射した。注射から２４時間後、マウスを安楽死させ、その脾臓を採取し、ｍＲＮＡコンストラクトによってコードされるｍＯＸ４０Ｌタンパク質の発現についてフローサイトメトリーによって分析した。
脾細胞の最初のフローサイトメトリー分析から、ＬＮＰによってカプセル化されたｍＲＮＡによってコードされるｍＯＸ４０Ｌを脾臓内のＴ細胞集団が発現することが示唆された。このことの確証をさらに得るために、ＣＤ３及びｍＯＸ４０Ｌに対する二重染色を実施した。こうしたフローサイトメトリーの結果は、図２Ａ〜２Ｄに示されており、Ｘ軸は、ヒトＣＤ３を発現する細胞を示し、Ｙ軸は、マウスＯＸ４０Ｌを発現する細胞を示す。図２Ａは、負の対照としてＰＢＳを投与したマウスの結果を示す。図２Ｂは、化合物Ｘ−ＤＳＰＣ−ＰＥＧ ＤＭＧを含むＬＮＰ（ＬＮＰ１）にｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡコンストラクトがカプセル化されたものを投与したマウスの結果を示す。図２Ｃは、化合物Ｘ−ＤＳＰＣ−化合物４２８を含むＬＮＰ（ＬＮＰ２）にｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡコンストラクトがカプセル化されたものを投与したマウスの結果を示す。図２Ｄは、化合物Ｘ−ベータ−シトステロール／コレステロール−ＤＳＰＣ−ＰＥＧ ＤＭＧを含むＬＮＰ（ＬＮＰ３）にｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡコンストラクトがカプセル化されたものを投与したマウスの結果を示す。
図２Ａ〜２Ｄの結果から、ｈＣＤ３が陽性であり、かつｍＯＸ４０Ｌ（ＬＮＰによってカプセル化されたｍＲＮＡコンストラクトによってコードされるもの）も発現する細胞の観測レベルは、ベータ−シトステロール／コレステロール含有ＬＮＰを使用したときに最も高い（図２Ｄ、右上の四分部）ことが実証された。したがって、こうした最初の結果から、ベータ−シトステロール／コレステロール含有ＬＮＰがｍＲＮＡコンストラクトをｉｎ ｖｉｖｏで効率的にＴ細胞に送達することが示された。
上記のＰＤＸマウスモデルを使用して確認試験を繰り返したところ、ベータ−シトステロール／コレステロール含有ＬＮＰ（ＬＮＰ３）によるｍＯＸ４０Ｌのトランスフェクションが効率的であることが、複数の細胞型で観測された。具体的には、フローサイトメトリーで染色を分析したところ、ヒトＣＤ３＋細胞集団（ヒトＴ細胞）、ヒトＣＤ３３＋細胞集団（ヒトＡＭＬ細胞）、及びマウスＣＤ４５＋細胞集団（マウス白血球）の中でのｍＯＸ４０Ｌ＋細胞のレベルが高いことが実証され（データ非掲載）、このことによって、ベータ−シトステロール／コレステロール含有ＬＮＰによって免疫細胞へのトランスフェクションがｉｎ ｖｉｖｏで生じることが確認された。
実施例５：ヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）へのｅｘ ｖｉｖｏでのｍＲＮＡ送達
ベータ−シトステロール／コレステロール含有ＬＮＰがｍＲＮＡコンストラクトをｉｎ ｖｉｖｏでＴ細胞に効率的に送達することが示されたＰＤＸモデルでの最初のｉｎ ｖｉｖｏ試験に続き、このＬＮＰによるＴ細胞へのｍＲＮＡコンストラクトの送達をさらに確認するために、追加試験をｅｘ ｖｉｖｏで実施した。
この実施例では、実施例３で試験した３つの異なるＬＮＰ組成物のそれぞれにマウスＯＸ４０Ｌ（ｍＯＸ４０Ｌ）をコードするｍＲＮＡ（２０ｎｇまたは５０ｎｇ）がカプセル化されたものの存在下で、２人の異なるドナー（ドナー１及びドナー２）から得られたヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）をインキュベートした。ＰＢＳを負の対照として使用した。様々なＬＮＰと共にヒトＰＢＭＣを３７℃、ｅｘ ｖｉｖｏでインキュベートした。２４時間後、ＣＤ３＋Ｔ細胞におけるｍＯＸ４０Ｌタンパク質の発現についてフローサイトメトリーによって細胞を分析した。
図３Ａ〜３Ｂにはドナー１の結果が示され、図４Ａ〜４Ｂにはドナー２の結果が示される。図３Ａ及び図４Ａは、ｍＲＮＡを２０ｎｇ使用した結果を示し、図３Ｂ及び図４Ｂは、ｍＲＮＡを５０ｎｇ使用した結果を示す。各フローサイトメトリーグラフについて、Ｘ軸は、ｍＯＸ４０Ｌを発現する細胞を示し、Ｙ軸は、ヒトＣＤ３を発現する細胞を示す。これらのフローサイトメトリーグラフでは、（ｉ）ＰＢＳを投与したマウスの結果、（ｉｉ）化合物Ｘ−ＤＳＰＣ−ＰＥＧ ＤＭＧ、及び構造脂質としてのコレステロールを含むＬＮＰ（ＬＮＰ１）を投与したマウスの結果、（ｉｉｉ）化合物Ｘ−ＤＳＰＣ−化合物４２８、及び構造脂質としてのコレステロールを含むＬＮＰ（ＬＮＰ２）を投与したマウスの結果、または（ｉｖ）化合物Ｘ−ベータ−シトステロール／コレステロール−ＤＳＰＣ−ＰＥＧ ＤＭＧを含むＬＮＰ（ＬＮＰ３）を投与したマウスの結果が左から右に示される。
図３Ａ〜３Ｂ及び図４Ａ〜４Ｂに示される結果から、ＣＤ３＋が陽性であり、かつｍＯＸ４０Ｌ（ＬＮＰによってカプセル化されたｍＲＮＡコンストラクトによってコードされるもの）も発現する細胞のレベルが、ベータ−シトステロール／コレステロール含有ＬＮＰで処理したＰＢＭＣにおいて最も高いことが確認された。したがって、この試験では、ベータ−シトステロール／コレステロール含有ＬＮＰがｍＲＮＡコンストラクトをｅｘ ｖｉｖｏでヒト末梢血Ｔ細胞に効率的に送達することが実証された。
ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡがカプセル化されたベータ−シトステロール／コレステロール含有ＬＮＰの３つの異なるロットを用いてｅｘ ｖｉｖｏでのヒトＰＢＭＣへのトランスフェクションを行うことによって、ＰＢＳ対照と比較して上記の試験を繰り返し実施した。フローサイトメトリーの結果は、図５Ａ〜５Ｄに示されており、図５Ａ、図５Ｂ、図５Ｃ、及び図５Ｄは、４回の技術的反復測定を示しており、パネルは、それぞれＰＢＳ、ＬＮＰのロット１、ＬＮＰのロット２、またはＬＮＰのロット３での処理を示す（左から右に示される）。各フローサイトメトリーグラフについて、Ｘ軸は、ｍＯＸ４０Ｌを発現する細胞を示し、Ｙ軸は、ヒトＣＤ３を発現する細胞を示す。図５Ａ〜５Ｄの結果から、ベータ−シトステロール／コレステロール含有ＬＮＰの３つの異なるロットのそれぞれが、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡをＣＤ３＋Ｔ細胞に送達する上で有効であることが確認された。
ベータ−シトステロール／コレステロール含有ＬＮＰによるヒトＰＢＭＣへの異なるｍＲＮＡコンストラクトのｅｘ ｖｉｖｏでの送達を調べるために別の試験を実施した。したがって、この試験については、高感度緑色蛍光タンパク質（ＥＧＦＰ）をコードするｍＲＮＡコンストラクトをＬＮＰにカプセル化し、上記のようにＬＮＰまたはＰＢＳのいずれかと共にヒトＰＢＭＣをｅｘ ｖｉｖｏでインキュベートした。２４時間後、フローサイトメトリーを実施した。この結果は、図６Ａ〜６Ｂに示されており、図６Ａは、ＰＢＳでの処理の結果を示し、図６Ｂは、ベータ−シトステロール／コレステロール含有ＬＮＰでの処理の結果を示す。パネルは、４回の異なる反復測定、及びそれらを重ね合わせて合成表示したものを左から右に示す。各フローサイトメトリーグラフについて、Ｘ軸は、ＥＧＦＰを発現する細胞を示し、Ｙ軸は、ヒトＣＤ３を発現する細胞を示す。この結果は、この第２のｍＲＮＡコンストラクトがベータ−シトステロール／コレステロール含有ＬＮＰによってＣＤ３＋Ｔ細胞に効率的に送達されたことを実証するものである。
ベータ−シトステロール／コレステロール含有ＬＮＰによるマウスＰＢＭＣへのｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡのｅｘ ｖｉｖｏでの送達を調べるために同様の試験を実施した。上記の３つの異なるＬＮＰ組成物（ＬＮＰ１、ＬＮＰ２、ＬＮＰ３）のそれぞれにカプセル化された５０ｎｇのｍＲＮＡの存在下、３７℃、ｅｘ ｖｉｖｏでマウスＰＢＭＣをインキュベートした。ＰＢＳを負の対照として使用した。２４時間後、ＣＤ３＋Ｔ細胞におけるｍＯＸ４０Ｌタンパク質の発現についてフローサイトメトリーによって細胞を分析した。この結果は、図７に示されており、この結果は、ベータ−シトステロール／コレステロール含有ＬＮＰを含めて、試験したＬＮＰのいずれによってもマウスＴ細胞へのｅｘ ｖｉｖｏでのトランスフェクションは生じなかったことを実証するものである。
実施例６：ヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）内の様々な異なる免疫細胞へのｅｘ ｖｉｖｏでのｍＲＮＡ送達
この実施例では、ヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）内の異なる免疫細胞集団へのベータ−シトステロール／コレステロール含有ＬＮＰ（ｍＯＸ４０Ｌがカプセル化されたもの）によるトランスフェクションをフローサイトメトリーによって調べた。４人の異なるドナー（ドナー１〜４）から得られたＰＭＢＣを使用した。ＰＢＳを負の対照として使用した。トランスフェクションは、実施例５に記載のように実施した。下記の細胞表面マーカー（複数可）の発現に対するゲートを行うことによって下記の細胞集団を調べた：（ｉ）活性化ＮＫ細胞−ＣＤ５６ＤＩＭ、（ｉｉ）未熟ＮＫ細胞−ＣＤ５６ＨＩＧＨ、（ｉｉｉ）樹状細胞（ＤＣ）−ＣＤ１１ｃ＋，ＣＤ１１ｂ−、（ｉｖ）単球−ＣＤ１１ｃ＋，ＣＤ１１ｂ＋、（ｖ）Ｔ細胞−ＣＤ３＋、（ｖｉ）ＮＫ Ｔ細胞−ＣＤ３＋，ＣＤ５６＋、及び（ｖｉｉ）Ｂ細胞−ＣＤ１９＋。
ドナー１〜４の結果は、それぞれ図８Ａ〜８Ｄに示される。負の対照（ＰＢＳ）によってトランスフェクションが生じた％は、調べたすべての細胞サブセットで１％未満であった（データ非掲載）。対照的に、ベータ−シトステロール／コレステロール含有ＬＮＰを使用すると、調べたヒト免疫細胞型の７つすべてにおいてｅｘ ｖｉｖｏでトランスフェクションが生じた。具体的には、活性化ＮＫ細胞では１９％（８〜３１％）にトランスフェクションが生じ、未熟ＮＫ細胞では３％（２〜５％）にトランスフェクションが生じ、ＤＣでは５８％（４７〜６３％）にトランスフェクションが生じ、単球では６６％（５７〜７３％）にトランスフェクションが生じ、Ｔ細胞では２７％（１０〜３９％）にトランスフェクションが生じ、ＮＫ Ｔ細胞では２７％（１１〜３１％）にトランスフェクションが生じ、Ｂ細胞では３％（１〜５％）にトランスフェクションが生じた。
追加試験では、ヒトＣＤ３＋Ｔ細胞集団内のＴ細胞の異なるサブセットへのベータ−シトステロール／コレステロール含有ＬＮＰ（ＬＮＰ３（ｍＯＸ４０Ｌがカプセル化されたもの））によるｅｘ ｖｉｖｏでのトランスフェクションをフローサイトメトリーによって調べた。ＰＢＳを負の対照として使用した。トランスフェクションは、実施例５に記載のように実施した。指定の細胞表面マーカー（複数可）の発現に対するゲートを行うことによって下記の細胞集団を調べた：（ｉ）ＣＤ３＋Ｔ細胞（総Ｔ細胞）、（ｉｉ）ＣＤ４＋Ｔ細胞、（ｉｉｉ）ＣＤ８＋Ｔ細胞、及び（ｉｖ）ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｌｏｗＴｒｅｇ細胞。ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、及びＴｒｅｇｓの結果は、それぞれ図９Ａ〜９Ｃに示される。この結果は、ベータ−シトステロール／コレステロール含有ＬＮＰを使用することで、総Ｔ細胞（ＣＤ３＋）集団内で調べたＴ細胞サブセットのすべてが効率的にトランスフェクションされ、ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞ではトランスフェクションされた細胞のパーセントがＴｒｅｇと比較して高かったことを示す。
ヒトＰＢＭＣへのトランスフェクションをｅｘ ｖｉｖｏで繰り返しても、細胞生存率に対する影響は観測されなかった。さらに、サイトカイン産生、活性化、または増殖に対する影響も観測されなかった。こうした結果は、ベータ−シトステロール／コレステロール含有ＬＮＰによるｍＲＮＡ送達の増進が、細胞生存率、サイトカイン産生、活性化、または増殖に有害な影響を全く与えなかったことを示すものである。
実施例７：非ヒト霊長類におけるｉｎ ｖｉｖｏでのｍＲＮＡ送達
この実施例では、ベータ−シトステロール／コレステロール含有ＬＮＰがｍＲＮＡをｉｎ ｖｉｖｏで非ヒト霊長類（ＮＨＰ）Ｔ細胞に送達する能力を他のＬＮＰと比較して試験した。マウスＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡを様々なＬＮＰに製剤化した。次に、この製剤化ＬＮＰを、試験の１日目に、適切な末梢静脈を介して５ｍＬ／ｋｇ／時間の用量速度で単回の６０分間の静脈内注入を行ってＮＨＰに投与した。それぞれの動物に対する用量体積は、直近の体重測定を基準にした。用量は、末梢静脈に挿入された短期留置カテーテル、及び注射セットを使用して投与した。
以下の表２２には、実験設計のまとめが示される。
Figure 2021512090
静脈内注射から２４時間後、脾臓を摘出し、解離処理を行い、単一細胞溶液をフローサイトメトリーによって分析した。大腿骨及び上腕骨から骨髄細胞も収集し、単一細胞溶液を洗浄後、フローサイトメトリーによって分析した。
図１０は、脾臓におけるｍＯＸ４０Ｌ＋細胞のパーセントを示しており、ベータ−シトステロール／コレステロール含有ＬＮＰで処理した動物では、脾臓におけるｍＯＸ４０Ｌ＋細胞のパーセントが、その他３つのＬＮＰで処理した動物と比較して有意に高かったことを実証している。こうした結果から、ベータ−シトステロール／コレステロール含有ＬＮＰが、脾臓における免疫細胞にｍＲＮＡを効率的に送達することが示された。脾臓における免疫細胞のどの型がｉｎ ｖｉｖｏでトランスフェクションされたかを調べるために、ｍＯＸ４０Ｌと、ＣＤ３（脾臓Ｔ細胞が対象）、ＣＤ２０（脾臓Ｂ細胞が対象）、またはＣＤ１１ｃ（脾臓樹状細胞が対象）のいずれかと、の共発現に対するゲートを行って追加のフローサイトメトリー試験を実施した。
ｍＯＸ４０Ｌ＋ＣＤ３＋脾臓Ｔ細胞についてのフローサイトメトリーの結果は図１１Ａ〜１１Ｃに示される。図１１Ａ及び図１１Ｂは、２匹の異なる動物から得られた結果を示し、図１１Ｃは、これら２つの結果を重ね合わせて合成表示したものを示す。パネル（左から右に示される）は、それぞれ処理群１、処理群２、処理群３、及び処理群４の結果を示す。各フローサイトメトリーグラフについて、Ｘ軸は、ｍＯＸ４０Ｌを発現する細胞を示し、Ｙ軸は、ＣＤ３を発現する細胞を示す。図１１Ａ〜１１Ｃの結果から、試験したその他３つのＬＮＰのいずれと比較しても、ｍＲＮＡコンストラクトをｉｎ ｖｉｖｏでＮＨＰ脾臓Ｔ細胞に送達する上でベータ−シトステロール／コレステロール含有ＬＮＰが有意に良好なものであることが実証された。
ｍＯＸ４０Ｌ＋ＣＤ２０＋脾臓Ｂ細胞についてのフローサイトメトリーの結果は図１２Ａ〜１２Ｃに示される。図１２Ａ及び図１２Ｂは、２匹の異なる動物から得られた結果を示し、図１２Ｃは、これら２つの結果を重ね合わせて合成表示したものを示す。パネル（左から右に示される）は、それぞれ処理群１、処理群２、処理群３、及び処理群４の結果を示す。各フローサイトメトリーグラフについて、Ｘ軸は、ｍＯＸ４０Ｌを発現する細胞を示し、Ｙ軸は、ＣＤ２０を発現する細胞を示す。図１２Ａ〜１２Ｃの結果から、試験したその他３つのＬＮＰのいずれと比較しても、ｍＲＮＡコンストラクトをｉｎ ｖｉｖｏでＮＨＰ脾臓Ｂ細胞に送達する上でベータ−シトステロール／コレステロール含有ＬＮＰが有意に良好なものであることが実証された。
ｍＯＸ４０Ｌ＋ＣＤ１１ｃ＋脾臓樹状細胞についてのフローサイトメトリーの結果は図１３Ａ〜１３Ｃに示される。図１３Ａ及び図１３Ｂは、２匹の異なる動物から得られた結果を示し、図１３Ｃは、これら２つの結果を重ね合わせて合成表示したものを示す。パネル（左から右に示される）は、それぞれ処理群１、処理群２、処理群３、及び処理群４の結果を示す。各フローサイトメトリーグラフについて、Ｘ軸は、ｍＯＸ４０Ｌを発現する細胞を示し、Ｙ軸は、ＣＤ１１ｃを発現する細胞を示す。図１３Ａ〜１３Ｃの結果から、試験したその他３つのＬＮＰのいずれと比較しても、ｍＲＮＡコンストラクトをｉｎ ｖｉｖｏでＮＨＰ脾臓樹状細胞に送達する上でベータ−シトステロール／コレステロール含有ＬＮＰが有意に良好なものであることが実証された。
ｍＯＸ４０Ｌ＋骨髄細胞についてのフローサイトメトリーの結果は図１４Ａ〜１４Ｂに示され、図１４Ａは、大腿骨から得られた骨髄におけるｍＯＸ４０Ｌ＋細胞の％を示し、図１４Ｂは、上腕骨から得られた骨髄におけるｍＯＸ４０Ｌ＋細胞の％を示す。図１４Ａ〜１４Ｂの結果から、試験したその他３つのＬＮＰのいずれと比較しても、ｍＲＮＡコンストラクトをｉｎ ｖｉｖｏでＮＨＰ骨髄細胞（特に上腕骨の骨髄のもの）に送達する上でベータ−シトステロール／コレステロール含有ＬＮＰが有意に良好なものであることが実証された。
したがって、この試験では、試験したその他のＬＮＰと比較して、ベータ−シトステロール／コレステロール含有ＬＮＰが、タンパク質コードｍＲＮＡコンストラクトを非ヒト霊長類脾細胞に効率的に送達することで、脾臓内の複数の異なる型の免疫細胞（Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞）におけるタンパク質発現のレベルを有意に高めることに加えて、ｍＲＮＡコンストラクトを非ヒト霊長類骨髄細胞にも効率的に送達することが実証された。
実施例８：非ヒト霊長類におけるｉｎ ｖｉｖｏの確認試験
この実施例では、ベータ−シトステロール／コレステロール含有ＬＮＰによる免疫細胞へのｍＲＮＡのｉｎ ｖｉｖｏでの送達をさらに調べるために、非ヒト霊長類（カニクイザル）において確認試験を実施した。別々の材料調製物を用いて２回の連続試験を、実施例７に記載のものと同様に実施した（ｎ＝４）。動物の静脈内投与を０．２ｍｇ／ｋｇで行い、２４時間経過観察してから剖検を行った。ｍＯＸ４０Ｌ ｍＲＮＡをＬＮＰ３（化合物Ｘ／ベータ−シトステロール／コレステロール／ＰＥＧ ＤＭＧ）にカプセル化したもので動物を処理した。ＰＢＳ及びＬＮＰ１（化合物Ｘ／ＰＥＧ ＤＭＧ）を対照として使用した。造血系（骨髄（２つの部位）、脾臓、胸腺、及びリンパ節を含む）ならびに肝臓の完全な病理組織診断を実施した。いずれの試験についても有害な臨床所見は報告されなかった。
組織学的染色から、２４時間の時点で、脾臓及び骨髄では発現が確認されたが、リンパ節または胸腺では発現は見られなかった（データ非掲載）。脾臓Ｂ細胞（ＣＤ２０＋）、Ｔ細胞（ＣＤ３＋）、及び樹状細胞（ＣＤ１１ｃ＋）における発現はフローサイトメトリーによって調べた。この結果は、図１５Ａ〜１５Ｃに示される。こうした結果から、ＬＮＰ３を使用することで、ＬＮＰ１と比較してＢ細胞（図１５Ａ；１７％対３％）、Ｔ細胞（図１５Ｂ；１５％対３％）、及び樹状細胞（図１５Ｃ；３６％対５％）において有意に高いレベルでｍＲＮＡが発現することが実証された。大腿骨及び上腕骨における骨髄発現についてもフローサイトメトリーによって調べた。この結果は、図１６Ａ〜１６Ｂに示される。こうした結果から、ＬＮＰ３を使用することで、ＬＮＰ１と比較して大腿骨の骨髄（図１６Ａ；２４％対４％）及び上腕骨の骨髄（図１６Ｂ；２１％対５％）において有意に高いレベルでｍＲＮＡが発現することが実証された。
トランスフェクションされたｍＲＮＡの発現について骨髄内の様々な異なる免疫細胞が陽性であることが骨髄細胞の免疫表現型検査によって決定された。具体的には、単球の約３０％、形質細胞の約１５％、ならびに初期前駆細胞（前赤芽球、単芽球／骨髄芽球、及び間葉系幹細胞を含む）の約５％が発現陽性であった一方で、発現が生じた未熟Ｂ細胞またはＢ細胞前駆体の発現％は５％未満であった。
実施例９：非ヒト霊長類末梢血単核球（ＰＢＭＣ）へのｅｘ ｖｉｖｏでのｍＲＮＡ送達
この実施例では、ベータ−シトステロール／コレステロール含有ＬＮＰがｍＲＮＡを非ヒト霊長類（ＮＨＰ）ＰＢＭＣに送達する能力を他のＬＮＰと比較してｅｘ ｖｉｖｏで試験した。様々なＬＮＰに製剤化されたｍＯＸ４０ＬコードｍＲＮＡ、またはＰＢＳの存在下でＮＨＰ ＰＢＭＣを３７℃でインキュベートした。２４時間後、ＣＤ３＋Ｔ細胞におけるｍＯＸ４０Ｌタンパク質の発現についてフローサイトメトリーによって細胞を分析した。
結果は、図１７に示される。示されるように、パネル（左から右に示される）は、それぞれ（ｉ）ＰＢＳと共にインキュベートしたＰＢＭＣ、または（ｉｉ）化合物Ｘ／ＰＥＧ ＤＭＧを含むＬＮＰ（ＬＮＰ１）と共にインキュベートしたＰＢＭＣ、（ｉｉｉ）化合物Ｘ／化合物４２８含むＬＮＰ（ＬＮＰ２）と共にインキュベートしたＰＢＭＣ、もしくは（ｉｖ）化合物Ｘ／ベータ−シトステロール／コレステロール／ＰＥＧ ＤＭＧを含むＬＮＰ（ＬＮＰ３）と共にインキュベートしたＰＢＭＣを示す。各フローサイトメトリーグラフについて、Ｘ軸は、ｍＯＸ４０Ｌを発現する細胞を示し、Ｙ軸は、ＣＤ３を発現する細胞を示す。
図１７の結果から、試験したその他のＬＮＰと比較して、ｍＲＮＡコンストラクトをｅｘ ｖｉｖｏでＮＨＰ ＰＢＭＣ Ｔ細胞に送達する上でベータ−シトステロール／コレステロール含有ＬＮＰが有意に良好なものであることが実証された。
実施例１０：ヒト骨髄形質細胞へのｅｘ ｖｉｖｏでのｍＲＮＡ送達
非ヒト霊長類においてｉｎ ｖｉｖｏで観測された骨髄形質細胞へのトランスフェクション（実施例８に記載のもの）について、ヒト骨髄試料を使用してｅｘ ｖｉｖｏでのトランスフェクションについてもさらに調べた。ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡをベータ−シトステロール／コレステロール含有ＬＮＰ（ＬＮＰ３）に製剤化したものを用いて、５つのヒトドナー骨髄試料へのトランスフェクションを行った。ＰＢＳを対照として使用した。３つの代表的なドナー試料から得られたＣＤ４５＋ＣＤ３８＋ＣＤ１３８＋ＣＤ１９＋ＣＤ２０−形質細胞についてのフローサイトメトリーの結果は図１８Ａ〜１８Ｄに示される（図１８Ａは、ＰＢＳ対照を示し、図１８Ｂ〜１８Ｄは、ドナー１〜３を示す）。２人の追加ドナーについても同様の結果が得られた（データ非掲載）。こうした結果は、ＬＮＰ３を使用することで形質細胞の約６０〜８０％がトランスフェクションされたことを実証するものであり、これによって、ヒト骨髄形質細胞を効果的にトランスフェクションする能力をＬＮＰ３が有することが確認された。
実施例１１：ラットにおけるＬＮＰ３の薬理学的プロファイル
この実施例では、ベータ−シトステロール／コレステロール含有ＬＮＰ（ＬＮＰ３）を使用することで、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡを様々な用量でラットにおける脾細胞にｉｎ ｖｉｖｏで送達し、異なる処理レジメンを使用してＬＮＰ３の薬理学的プロファイルを調べた。
第１の一連の実験では、ＰＢＳ対照、またはｍＯＸ４０Ｌ ｍＲＮＡがカプセル化されたＬＮＰ３のいずれかを、０．１５ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、または０．６ｍｇ／ｋｇでラットに静脈内投与し、ＣＤ３＋脾臓Ｔ細胞、ＣＤ１９＋脾臓Ｂ細胞、またはＣＤ１１ｂ＋脾臓マクロファージにおけるトランスフェクションされたｍＲＮＡの発現をフローサイトメトリーによって調べた。結果は図１９Ａ〜１９Ｃに示されており、この結果は、ラットにおける薬理作用が用量依存的であり、０．３ｍｇ／ｋｇを超えると薬理作用が飽和に達する可能性がある（すなわち、トランスフェクションレベルは、０．３ｍｇ／ｋｇ及び０．６ｍｇ／ｋｇではほぼ等しかったが、０．１５ｍｇ／ｋｇでは低下した）ことを実証している。
第２の一連の実験では、ＰＢＳ対照、またはｍＯＸ４０Ｌ ｍＲＮＡがカプセル化されたＬＮＰ３のいずれかを０．６ｍｇ／ｋｇでラットに静脈内投与した。投与から２４時間後、９６時間後、及び１６８時間後に、ｍＯＸ４０Ｌ陽性の脾細胞のパーセントを決定した。結果は図２０に示されており、この結果から、トランスフェクションされた細胞のパーセントは投与から２４時間後及び９６時間後の時点ではほぼ等しいが、投与から１６８時間後の時点ではトランスフェクションされた細胞のパーセントの低下が観測されることが実証された。
第３の一連の実験では、ＰＢＳ対照、またはｍＯＸ４０Ｌ ｍＲＮＡがカプセル化されたＬＮＰ３のいずれかを０．６ｍｇ／ｋｇでラットに静脈内投与した。単回用量（ＳＤ）、１日１回の用量を３日間投与する合計３回の用量（ＱＤ×３）、または１回の用量を３日ごとに投与する合計３回の用量（Ｑ３Ｄ×３）、のいずれかでラットを処理した。最終用量の投与から２４時間後にｍＯＸ４０Ｌ陽性の脾細胞のパーセントを決定した。結果は図２１に示されており、この結果から、すべての投与レジメンで脾細胞へのトランスフェクションが生じ、ＱＤ×３レジメンを用いるとトランスフェクションされる細胞のパーセントが最も高まることが実証された。
実施例１２：ヒトＰＢＭＣへのトランスフェクションを繰り返すことの効果
この実施例では、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡがカプセル化されたベータ−シトステロール／コレステロール含有ＬＮＰ（ＬＮＰ３）を用いてヒトＰＢＭＣへのトランスフェクションを行い、細胞へのトランスフェクションを繰り返すことの効果を、単回のトランスフェクションと比較した。実施例５に記載のように細胞へのトランスフェクションを行った。単回のトランスフェクションの試料については、トランスフェクションから２４時間後、４８時間後、及び７２時間後にｍＯＸ４０Ｌ＋細胞の％及び蛍光強度の中央値（ＭＦＩ）を測定した。複数回のトランスフェクションの試料については、細胞へトランスフェクションを３回行い、各トランスフェクションから２４時間後にｍＯＸ４０Ｌ＋細胞の％及びＭＦＩを測定した。単回のトランスフェクションの結果は図２２Ａに示され、複数回のトランスフェクションの結果は図２２Ｂに示され、これらの図では、トランスフェクションの％が左軸に示され、ＭＦＩが右軸に示される。この結果は、ヒトＰＢＭＣへのトランスフェクションを繰り返すことで、トランスフェクションの％もＭＦＩも用量依存的に増加したことを実証している。単回のトランスフェクションまたは複数回のトランスフェクションのいずれによっても細胞生存率が影響を受けることはなかった。
実施例１３：ヒトＴ細胞へのトランスフェクションをｅｘ ｖｉｖｏで行うためのＬＮＰとの相互作用時間
この実施例では、ヒトＴ細胞へのトランスフェクションの達成に必要なＬＮＰとの最短相互作用時間を決定するために、ＰＢＭＣへのｅｘ ｖｉｖｏでのトランスフェクションを、時間を変えて行った。ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡがカプセル化されたＬＮＰ３（１００ｎｇ）と共に２×１０５個のヒトＰＢＭＣを１５分、６０分、４時間、または２４時間インキュベートした。ＰＢＳ及びＬＮＰ１を対照として使用した。各時点でのｍＯＸ４０Ｌ＋Ｔ細胞についてのフローサイトメトリーの結果は、それぞれ図２３Ａ〜２３Ｄに示される。この結果は、Ｔ細胞へのトランスフェクションには１５分のインキュベート時間で十分であり、４時間まではトランスフェクションレベルが増加したことを実証している。４時間及び２４時間の時点で観測されたトランスフェクションレベルはほぼ等しかった。こうした結果は、ＬＮＰの相互作用時間がわずか１５分であってもヒトＴ細胞へのトランスフェクションをｅｘ ｖｉｖｏで行うには十分であることを実証している。
実施例１４：ベータ−シトステロール／コレステロール含有脂質ナノ粒子を使用する免疫応答の増進
この実施例では、ベータ−シトステロール／コレステロール含有ＬＮＰがｍＲＮＡワクチンの免疫原性をｉｎ ｖｉｖｏで増進する能力を、ベータ−シトステロール／コレステロール非含有ＬＮＰと比較して調べた。サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）糖タンパク質Ｂ（ｇＢ）をコードするｍＲＮＡが、化合物Ｙを含むＬＮＰ、または化合物Ｙもベータ−シトステロール／コレステロールも含むＬＮＰ、のいずれかにカプセル化されたものをワクチン組成物として使用した。これらの２つのＬＮＰにはそれぞれ、ＤＳＰＣ、ＰＥＧ−ＤＭＧ、及びコレステロールも含めた。
これら２つのＬＮＰのそれぞれにカプセル化されたｍＲＮＡワクチン（０．５μｇ）を１日目に筋肉内投与してマウスを免疫化し、このマウスを２１日目に追加で免疫化した。ｇＢをコートしたプレートを使用するＥＬＩＳＡによって２１日目（初回免疫から３週間後）及び３６日目（追加免疫から２週間後）に血清中のｇＢ特異的ＩｇＧ力価をアッセイした。結果は図２４に示される。この結果から、ベータ−シトステロール／コレステロール非含有ＬＮＰと比較して、ベータ−シトステロール／コレステロール含有ＬＮＰで処理したマウスでは３６日目までに抗ｇＢ ＩｇＧ応答が亢進することが示された。
したがって、図２４の結果から、ｍＲＮＡワクチンに使用されるＬＮＰにベータ−シトステロール／コレステロールを含めると、ベータ−シトステロール／コレステロール非含有ＬＮＰと比較して、ｍＲＮＡワクチンによってコードされる抗原に対する免疫応答がｉｎ ｖｉｖｏで増進することが実証された。
実施例１５：マウスにおけるｉｎ ｖｉｖｏでのｍＲＮＡ送達
この実施例では、ベータ−シトステロール／コレステロール含有ＬＮＰがマウスの脾臓Ｔ細胞、脾臓Ｂ細胞、脾臓樹状細胞、及び骨髄細胞にｍＲＮＡをｉｎ ｖｉｖｏで送達する能力を、ベータ−シトステロール／コレステロール非含有の同じＬＮＰと比較して試験した。
マウスＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡを、化合物Ｘ／ＤＳＰＣ／ＰＥＧ ＤＭＧ（ＬＮＰ１）または化合物Ｘ／ベータ−シトステロール／コレステロール／ＤＳＰＣ／ＰＥＧ ＤＭＧ（ＬＮＰ３）のいずれかに製剤化した。ＬＮＰ１またはＬＮＰ２のいずれかにカプセル化したｍＲＮＡを０．５ｍｇ／ｋｇでＣ５７Ｂｌ６／Ｊマウスに静脈内投与した。ＰＢＳを負の対照として使用した。２４時間時点で脾細胞及び骨髄細胞を収集し、フローサイトメトリーによってｍＯＸ４０Ｌの発現について分析した。
ｍＯＸ４０Ｌ＋ＣＤ３＋脾臓Ｔ細胞についてのフローサイトメトリーの結果は図２５Ａ〜２５Ｂにまとめられており、図２５Ａは、ｍＯＸ４０Ｌを発現するＣＤ３＋細胞のパーセントを示し、図２５Ｂは、ＣＤ３＋細胞におけるｍＯＸ４０Ｌの平均蛍光指数（ＭＦＩ）を示す。この結果は、ベータ−シトステロール／コレステロール非含有ＬＮＰと比較して、ベータ−シトステロール／コレステロール含有ＬＮＰが、高いパーセントの脾臓Ｔ細胞にｍＲＮＡコンストラクトを送達し、トランスフェクションされたＴ細胞のＭＦＩを高めたことを実証するものである。
ｍＯＸ４０Ｌ＋ＣＤ１９＋脾臓Ｂ細胞についてのフローサイトメトリーの結果は図２６Ａ〜２６Ｂにまとめられており、図２６Ａは、ｍＯＸ４０Ｌを発現するＣＤ１９＋細胞のパーセントを示し、図２６Ｂは、ＣＤ１９＋細胞におけるｍＯＸ４０ＬのＭＦＩを示す。この結果は、ベータ−シトステロール／コレステロール非含有ＬＮＰと比較して、ベータ−シトステロール／コレステロール含有ＬＮＰが、高いパーセントの脾臓Ｂ細胞にｍＲＮＡコンストラクトを送達し、トランスフェクションされたＢ細胞のＭＦＩを高めたことを実証するものである。
ｍＯＸ４０Ｌ＋ＣＤ１１ｃ＋脾臓樹状細胞についてのフローサイトメトリーの結果は図２７Ａ〜２７Ｂにまとめられており、図２７Ａは、ｍＯＸ４０Ｌを発現するＣＤ１１ｃ＋細胞のパーセントを示し、図２７Ｂは、ＣＤ１１ｃ＋細胞におけるｍＯＸ４０ＬのＭＦＩを示す。この結果は、ベータ−シトステロール／コレステロール非含有ＬＮＰと比較して、ベータ−シトステロール／コレステロール含有ＬＮＰが、高いパーセントの脾臓樹状細胞にｍＲＮＡコンストラクトを送達し、トランスフェクションされた樹状細胞のＭＦＩを高めたことを実証するものである。
ｍＯＸ４０Ｌ＋骨髄細胞についてのフローサイトメトリーの結果は図２８Ａ〜２８Ｂにまとめられており、図２８Ａは、ｍＯＸ４０Ｌを発現する骨髄細胞のパーセントを示し、図２８Ｂは、骨髄細胞におけるｍＯＸ４０ＬのＭＦＩを示す。この結果は、ベータ−シトステロール／コレステロール非含有ＬＮＰと比較して、ベータ−シトステロール／コレステロール含有ＬＮＰが、高いパーセントの骨髄細胞にｍＲＮＡコンストラクトを送達し、トランスフェクションされた骨髄細胞のＭＦＩを高めたことを実証するものである。
マウスにおけるｉｎ ｖｉｖｏの投与を繰り返し行った結果、マウスの脾臓Ｔ細胞、脾臓Ｂ細胞、脾臓樹状細胞、及び骨髄細胞においてｍＲＮＡコンストラクトが発現することが確認され、それによって、マウスにおける複数の免疫細胞型がｉｎ ｖｉｖｏでトランスフェクションされることが確認された。
したがって、こうした試験から、ベータ−シトステロール／コレステロール非含有の同じＬＮＰと比較して、ベータ−シトステロール／コレステロール含有ＬＮＰが、タンパク質コードｍＲＮＡコンストラクトをマウスの脾臓Ｔ細胞、脾臓Ｂ細胞、脾臓樹状細胞、及び骨髄細胞にｉｎ ｖｉｖｏで効率的に送達することで、トランスフェクションされる細胞のパーセントを有意に高め、調べたすべての細胞型におけるタンパク質発現のレベルを有意に高めることが実証された。興味深いことに、このことは、マウスＰＢＭＣをベータ−シトステロール／コレステロール含有ＬＮＰとｅｘ ｖｉｖｏでインキュベートしたときにマウスＴ細胞へのトランスフェクションが観測されなかったこと（このことは、実施例５及び図７において実証された）とは対照的である。
実施例１６：トランスフェクションされたＴ細胞において、修飾膜タンパク質（ＣＡＲ）をコードするｍＲＮＡによって誘導される細胞傷害性の誘導
この実施例では、ベータ−シトステロール／コレステロール含有ＬＮＰ（ＬＮＰ３）を使用して抗ＣＤ３３ ＣＡＲ Ｔ ｍＲＮＡコンストラクトをｅｘ ｖｉｖｏでＴ細胞にトランスフェクションし、トランスフェクションされたＴ細胞がＣＤ３３＋ＡＭＬ細胞をｉｎ ｖｉｔｒｏで死滅させる能力を試験した。
ＬＮＰ３にカプセル化された抗ＣＤ３３ ＣＡＲ Ｔ ｍＲＮＡコンストラクトをヒトＰＢＭＣにｅｘ ｖｉｖｏでトランスフェクションし、このヒトＰＢＭＣを一晩インキュベートした。ＣＤ３４ｍＲＮＡコンストラクトを対照として使用した。インキュベート後、ＥａｓｙＳｅｐ（商標）ヒトＴ細胞単離キット（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用してＴ細胞を単離した。次に、単離したＴ細胞をＣＤ３３＋ＡＭＬ細胞と共に１：１または１：５の比でプレートに播種した（播種の際、ＡＭＬ細胞の数は１×１０５個細胞／ウェルとして一定にした）。細胞傷害性検出色素であるＩｎｃｕｃｙｔｅを２５０ｎＭで培養物に含めて細胞の死滅を評価した。細胞をＩｎｃｕｃｙｔｅ色素と共にインキュベートし、緑色蛍光（細胞死の指標）を２時間間隔で読み取った。細胞をＴｒｉｔｏｎ１００で処理した後、最後の読み取りを行って最大細胞傷害性を決定した。次に、細胞傷害性指数（ＣＩ）をＣＩ＝（ｘ時間時点の細胞傷害性／最大細胞傷害性）×１００に従って計算した。
結果は図２９に示されており、この結果は、ＬＮＰ３を使用して抗ＣＤ３３ ＣＡＲ Ｔ ｍＲＮＡをトランスフェクションしたＴ細胞が、ｉｎ ｖｉｔｒｏでＣＤ３３＋ＡＭＬ細胞を死滅させる上で有効であったことを実証するものである。
実施例１７：Ｔ細胞へのトランスフェクションのための免疫細胞送達増強脂質
この実施例では、様々な脂質成分を異なる比で用いてＬＮＰを調製し、そうしたＬＮＰがＴ細胞へのトランスフェクションをｉｎ ｖｉｔｒｏで生じさせる能力について試験した。トランスフェクションは、マウスＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡがカプセル化されたＬＮＰを使用して、実施例５に記載のように実施した。
第１の一連の実験では、フィトステロールを免疫細胞送達増強脂質として使用し、ＬＮＰの他の脂質成分を変えた。以下の表２３に示されるように、化合物Ｘまたは化合物Ｙのいずれをイオン化可能な脂質として用いてもＴ細胞への送達増進が観測され、このことは、マウスＯＸ４０Ｌ陽性細胞のパーセントによって証拠付けられた。さらに、ＰＥＧ ＤＭＧまたは化合物４２８のいずれをＰＥＧ脂質として使用してもＴ細胞への送達増進が観測された。フィトステロールのｍｏｌパーセントが１８．５％または２８．５％のいずれのときにもＴ細胞への送達増進が観測された（構造脂質の総ｍｏｌ％は３８．５％に固定し、一定とした）。
Figure 2021512090
ＬＮＰ成分の比が異なる個々の試料の結果は、以下の表２４（トリス緩衝液についての結果）及び表２５（ＰＢＳ緩衝液についての結果）に示される。
Figure 2021512090
Figure 2021512090
第２の一連の実験では、Ｔ細胞への送達を増進する能力について、追加の化合物をＬＮＰに含めて試験した。こうした実験については、ＬＮＰと細胞との結合、ならびにｍＲＮＡがコードするタンパク質のトランスフェクション細胞内での発現について、個々の細胞レベルで評価した。ヒトドナーから得られた末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を使用した。ＰＢＭＣは、主にＴ細胞（４０〜６０％）、Ｂ細胞（３〜１５％）、及び単球（１５〜３５％）であったが、少数の他の細胞型も含んでいた。ＬＮＰを血清またはＰＢＳと共に３０分間インキュベートした後、ＰＢＭＣに添加した。ＬＮＰの濃度は０．０５０ｍｇ／ｍｌとし、ＬＮＰの体積は０．１ｍｌとした。
検出を容易にするために、その他のＬＮＰ成分に加えてローダミン−ＤＯＰＥをＬＮＰに０．１％含めた。したがって、以下の表に示される比は、ローダミン標識を０．１含む。例えば、５０：１０：１０：２７．９：２：０．１ ＡＬ：ＤＳＰＣ：コレステロール：ステロール：Ｃｍｐ４２８は、イオン化可能な脂質としてのアミノ脂質の含量が５０％、リン脂質としてのＤＳＰＣの含量が１０％、コレステロールの含量が１０％、フィトステロールの含量が２７．９％、ＰＥＧ脂質としての化合物４２８の含量が２％、ローダミン−ＤＯＰＥ標識の含量が０．１％であることを示す。非標識ＬＮＰの調製には、０．１％のローダミン標識を含められず、構造脂質（コレステロールまたはコレステロール／フィトステロール混合物）が０．１％追加使用される（例えば、２７．９％が２８％になる）ことを除いて同じ比が使用される。
ある特定のマーカー（ＣＤ３（Ｔ細胞）、ＣＤ２０（Ｂ細胞）、及びＣＤ３−，ＣＤ２０−，ＣＤ１４＋（単球））の発現に基づいて、フローサイトメトリーによって細胞をサブセットへと選別した。
ＧＦＰをコードするｍＲＮＡをモデル薬剤として使用して細胞内タンパク質を発現させた。
フローサイトメトリーの実施時には、ＬＮＰ上のローダミンタグに由来するシグナルをＹ軸にとり、ＧＦＰの発現を示すＧＦＰシグナルをＸ軸にとった。
「結合」集団は、任意のローダミン＋及び／またはＧＦＰ＋細胞であり、こうした細胞のパーセントは、細胞の総数で割ることによって計算した。「発現」集団は、任意のＧＦＰ＋細胞であり、こうした細胞のパーセントは、細胞の総数で割ることによって計算した。結合細胞の発現パーセントは、発現細胞の％を結合細胞の％で割ることによって得た。
ＬＮＰのイオン化可能な脂質成分として試験したアミノ脂質の一団についての結果は図３０に示される。図３０の結果から、具体的にはアミノ脂質である化合物Ｘ、化合物Ｙ、化合物Ｉ−３２１、化合物Ｉ−２９２、化合物Ｉ−３２６、化合物Ｉ−１８２、化合物Ｉ−３０１、化合物Ｉ−４８、化合物Ｉ−５０、化合物Ｉ−３２８、化合物Ｉ−３３０、化合物Ｉ−１０９、化合物Ｉ−１１１、及び化合物Ｉ−１８１がＴ細胞に対する免疫細胞送達増強能力を示すことが実証された。さらに、実験２に示されるように、イオン化可能な脂質として化合物Ｉ−３２１または化合物Ｉ−３２６のいずれかを含み、構造脂質としてコレステロールのみを含む（他のステロールは含まない）ＬＮＰが、送達及びＴ細胞による取り込みを増強する上で有効であり、このことは、イオン化可能な脂質として化合物Ｘ（化合物Ｉ−１８）を含み、構造脂質としてβ−シトステロールを含むＬＮＰである正の対照のものとｍＲＮＡ発現細胞の平均％を比較することによって示された。
ＬＮＰの構造脂質成分として試験したステロールの一団についての結果は図３１に示される。図３１の結果から、β−シトステロールに加えて、具体的には、ステロール化合物であるカンペステロール及びβ−シトスタノールが、Ｔ細胞に対する免疫細胞送達増強能力を示すことが実証された。
ＬＮＰのリン脂質成分として試験したヘルパー脂質の一団についての結果は図３２に示される。図３２の結果から、具体的には、リン脂質化合物であるＨ−４０９、ＤＳＰＣ、及びＤＭＰＥが、Ｔ細胞に対する免疫細胞送達増強能力を示すことが実証された。
ＬＮＰのＰＥＧ脂質成分として試験したＰＥＧ化合物の一団についての結果は図３３に示される。ＰＥＧ脂質スクリーニングの結果から、具体的には、ＰＥＧ脂質化合物であるＰ４１５、Ｐ４１６、Ｐ４１７、Ｐ４１９、Ｐ４２０、Ｐ４２３、Ｐ４２４、Ｐ４２８、ＰＬ１、ＰＬ２、ＰＬ１６、ＰＬ１７、ＰＬ１８、ＰＬ１９、ＰＬ２２、及びＰＬ２３、ＤＭＧ、ＤＰＧ、ならびにＤＳＧが、Ｔ細胞に対する免疫細胞送達増強能力を示すことが実証された。
ＬＮＰの構成成分として上記のスクリーニングにおいて同定された様々な化合物を使用して製剤化された組成物の一団についての結果は図３４に示される。
図３４に示される実験１３で試験した製剤では、アミノ脂質として化合物Ｉ−１８２を使用し、ヘルパー脂質としてＤＳＰＣを使用し、構造脂質としてコレステロール／β−シトステロールを使用し、ＰＥＧ脂質として化合物Ｐ−４２８を使用し、これらの比を、図３４に示されるように変更した。アミノ脂質として化合物Ｉ−１８を使用し、構造脂質として単独のコレステロール（負の対照）またはコレステロール／β−シトステロール（正の対照）を使用するＬＮＰを対照とした。実験１３の結果から、化合物Ｉ−１８２を含むＬＮＰのすべてにおいて、ｍＲＮＡを発現する細胞の平均％及びｍＲＮＡを発現する結合細胞の％が、負の対照と比較して高まることが実証された。さらに、化合物Ｉ−１８２を含むＬＮＰの多くでは、化合物Ｉ−１８を含む正の対照と比較して、ＬＮＰ結合が高まり、及び／またはｍＲＮＡを発現する細胞の％が高まった。具体的には、化合物Ｉ−１８２／ＤＳＰＣ／コレステロール／β−シトステロール／Ｐ４２８を５０：１０：２０：１７．９：２または５０：２０：１０：１７．９：２の比で含むＬＮＰ製剤では、ｍＲＮＡを発現する細胞の平均％及びｍＲＮＡを発現する結合細胞の％が、正の対照と比較して有意に高まった。
図３４に示される実験１４で試験した製剤では、アミノ脂質として化合物Ｉ−３２６または化合物Ｉ−３２１を使用し、ヘルパー脂質としてＤＳＰＣを使用し、構造脂質としてコレステロール／β−シトステロールまたは化合物Ｓ−１４３もしくは化合物Ｓ−１４４を使用し、ＰＥＧ脂質として化合物Ｐ−４２８または化合物Ｐ４２４を使用した。アミノ脂質として化合物Ｉ−１８を使用し、構造脂質として単独のコレステロール（負の対照）またはコレステロール／β−シトステロール（正の対照）を使用するＬＮＰを対照とした。実験１４の結果から、試験した製剤のすべてにおいて、ｍＲＮＡを発現する細胞の平均％及び／またはｍＲＮＡを発現する結合細胞の％が、正の対照と比較してほぼ等しいか、または高まることが実証された。具体的には、化合物Ｉ−３２１／ＤＳＰＣ／コレステロール／β−シトステロールまたは化合物Ｓ−１４３または化合物Ｓ−１４４／Ｐ４２８を含む製剤では、ｍＲＮＡを発現する細胞の平均％及びｍＲＮＡを発現する結合細胞の％が、正の対照と比較して有意に高まった。
図３４に示される実験１５で試験した製剤では、アミノ脂質として化合物Ｉ−１８を使用し、ヘルパー脂質としてＤＳＰＣを使用し、構造脂質としてコレステロール／β−シトステロール及び／または化合物Ｓ−１４３及び／または化合物Ｓ−１４４を使用し、ＰＥＧ脂質として化合物Ｐ−４２８を使用した。アミノ脂質として化合物Ｉ−１８を使用し、構造脂質として単独のコレステロール（負の対照）またはコレステロール／β−シトステロール（正の対照）を使用するＬＮＰを対照とした。実験１５の結果から、試験した製剤のすべてにおいて、ｍＲＮＡを発現する細胞の平均％及び／またはｍＲＮＡを発現する結合細胞の％が、正の対照と比較して高まることが実証された。具体的には、化合物Ｉ−１８／ＤＳＰＣ／コレステロール／β−シトステロール＋化合物Ｓ−１４３、化合物Ｓ−１４４、または化合物Ｓ−１４３と化合物Ｓ−１４４との両方、のいずれか／Ｐ４２８を含む製剤では、ｍＲＮＡを発現する細胞の平均％及びｍＲＮＡを発現する結合細胞の％が、正の対照と比較して有意に高まった。
図３４に示される実験１６で試験した製剤では、アミノ脂質として化合物Ｉ−１８または化合物Ｉ−１８２または化合物Ｉ−３０１を使用し、ヘルパー脂質としてＤＳＰＣを使用し、構造脂質としてコレステロール／β−シトステロール及び／または化合物Ｓ−１４３及び／または化合物Ｓ−１４４を使用し、ＰＥＧ脂質として化合物Ｐ−４２８またはＰＥＧ−ＤＭＧを使用した。アミノ脂質として化合物Ｉ−１８または化合物Ｉ−１８２または化合物Ｉ−３０１を使用し、構造脂質として単独のコレステロール（負の対照）またはコレステロール／β−シトステロール（正の対照）を使用するＬＮＰを対照とした。実験１６の結果から、試験した製剤のすべてにおいて、ｍＲＮＡを発現する細胞の平均％及び／またはｍＲＮＡを発現する結合細胞の％が、適切な正の対照と比較してほぼ等しいか、または高まることが実証された。
図３４の結果からは、ＬＮＰの構成成分の比を変えても（例えば、アミノ脂質のｍｏｌ％を５０ｍｏｌ％から４０ｍｏｌ％もしくは４５ｍｏｌ％に減らすか、またはヘルパー脂質のｍｏｌ％を１０％から１８．４ｍｏｌ％もしくは２０ｍｏｌ％に増やしても）、Ｔ細胞へのＬＮＰの免疫増強送達に負の影響を与えないことも示された。
第３の一連の実験では、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのＴ細胞への送達について、ステロール化合物の追加の一団をＬＮＰに含めて試験した。ＬＮＰの構造脂質成分として試験したこのステロール一団についての結果は図３５に示される。図３５の結果から、具体的には、フィトステロールであるブラシカステロール（化合物Ｓ−１４８）が、Ｔ細胞に対する免疫細胞送達増強能力を示すことが実証された。
実施例１８：免疫細胞送達増強脂質を使用するｉｎ ｖｉｖｏでのＴ細胞へのトランスフェクション
この実施例では、実施例１７に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏスクリーニングにおいて同定された様々な脂質成分を用いてＬＮＰを調製し、マウスＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡがカプセル化されたＬＮＰをマウスに投与した。以下の表２６には試験した組成物が示され、これらの組成物では、各組成物の構成成分の比率を、イオン化可能な脂質５０％、リン脂質１０％、構造脂質３８．５％、及びＰＥＧ脂質１．５％とした。
Figure 2021512090
０．１ｍｇ／ｍｌの用量濃度及び０．５ｍｇ／ｋｇの用量レベルで単回の注射を行ってマウスの静脈内投与を実施した。ＰＢＳを負の対照として使用した。化合物Ｘ（化合物Ｉ−１８）（免疫細胞送達増強脂質として既に実証されていたもの）を正の対照として使用した。注射から２４時間時点での脾臓におけるＴ細胞へのトランスフェクションのレベルは、脾細胞集団におけるＣＤ３＋ｍＯＸ４０Ｌ＋細胞のパーセントによって決定した。
結果は図３６に示されており、１〜９の名称が付けられた棒／レーンは、それぞれ群１〜９（上に示されるもの）に対応し、１０の名称が付けられた棒は、ＰＢＳ対照に対応する。この結果は、イオン化可能な脂質成分として化合物Ｉ−３０１、化合物Ｉ−３２１、または化合物Ｉ−３２６のいずれかを含むＬＮＰはすべて、化合物Ｘを含む正の対照ＬＮＰと比較して、脾臓ＣＤ３＋Ｔ細胞へのトランスフェクションをｉｎ ｖｉｖｏで生じさせる能力がさらに高かったことを実証するものである。さらに、図３６に示されるように、イオン化可能な脂質として化合物Ｉ−３２１または化合物Ｉ−３２６のいずれかを含み、構造脂質としてコレステロールのみを含む（他のステロールは含まない）ＬＮＰ（レーン６及びレーン８）は、イオン化可能な脂質として化合物Ｘ（化合物Ｉ−１８）を含み、構造脂質としてβ−シトステロールを含む正の対照ＬＮＰと比較して、ｉｎ ｖｉｖｏでのＣＤ３＋Ｔ細胞へのトランスフェクションを増強する上で有効であった。
実施例１９：単球へのトランスフェクションのための免疫細胞送達増強脂質
この実施例では、様々な脂質成分を異なる比で用いてＬＮＰを調製し、そうしたＬＮＰが単球へのトランスフェクションをｉｎ ｖｉｔｒｏで生じさせる能力について試験した。こうした実験については、ＬＮＰと細胞との結合、ならびにｍＲＮＡがコードするタンパク質のトランスフェクション細胞内での発現について、個々の細胞レベルで評価した。ヒトドナーから得られた末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を使用した。ＰＢＭＣは、主にＴ細胞（４０〜６０％）、Ｂ細胞（３〜１５％）、及び単球（１５〜３５％）であったが、少数の他の細胞型も含んでいた。ＬＮＰを血清またはＰＢＳと共に３０分間インキュベートした後、ＰＢＭＣに添加した。ＬＮＰの濃度は０．０５０ｍｇ／ｍｌとし、ＬＮＰの体積は０．１ｍｌとした。
検出を容易にするために、その他のＬＮＰ成分に加えてローダミン−ＤＯＰＥをＬＮＰに０．１％含めた。したがって、以下の表に示される比は、ローダミン標識を０．１含む。例えば、５０：１０：１０：２７．９：２：０．１ ＡＬ：ＤＳＰＣ：コレステロール：ステロール：Ｃｍｐ４２８は、イオン化可能な脂質としてのアミノ脂質の含量が５０％、リン脂質としてのＤＳＰＣの含量が１０％、コレステロールの含量が１０％、フィトステロールの含量が２７．９％、ＰＥＧ脂質としての化合物４２８の含量が２％、ローダミン−ＤＯＰＥ標識の含量が０．１％であることを示す。非標識ＬＮＰの調製には、０．１％のローダミン標識を含められず、構造脂質（コレステロールまたはコレステロール／フィトステロール混合物）が０．１％追加使用される（例えば、２７．９％が２８％になる）ことを除いて同じ比が使用される。
ある特定のマーカー（ＣＤ３（Ｔ細胞）、ＣＤ２０（Ｂ細胞）、及びＣＤ３−，ＣＤ２０−，ＣＤ１４＋（単球））の発現に基づいて、フローサイトメトリーによって細胞をサブセットへと選別した。
ＧＦＰをコードするｍＲＮＡをモデル薬剤として使用して細胞内タンパク質を発現させた。
フローサイトメトリーの実施時には、ＬＮＰ上のローダミンタグに由来するシグナルをＹ軸にとり、ＧＦＰの発現を示すＧＦＰシグナルをＸ軸にとった。
「結合」集団は、任意のローダミン＋及び／またはＧＦＰ＋細胞であり、こうした細胞のパーセントは、細胞の総数で割ることによって計算した。「発現」集団は、任意のＧＦＰ＋細胞であり、こうした細胞のパーセントは、細胞の総数で割ることによって計算した。結合細胞の発現パーセントは、発現細胞の％を結合細胞の％で割ることによって得た。
ＬＮＰのイオン化可能な脂質成分として試験したアミノ脂質の一団についての結果は図３７に示される。図３７の結果から、具体的には、アミノ脂質である化合物Ｘ、化合物Ｉ−１０９、化合物Ｉ−１１１、化合物Ｉ−１８１、化合物Ｉ−１８２、及び化合物Ｉ−２４４が、単球に対する免疫細胞送達増強能力を示すことが実証された。
ＬＮＰの構造脂質成分として試験したステロールの一団についての結果は図３８に示される。図３８の結果から、β−シトステロールに加えて、具体的には、ステロール化合物であるカンペステロール、β−シトスタノール、及びスチグマステロールが、単球に対する免疫細胞送達増強能力を示すことが実証された。
ＬＮＰのリン脂質成分として試験したヘルパー脂質の一団についての結果は図３９に示される。図３９の結果から、具体的には、リン脂質化合物であるＤＯＰＣ、ＤＭＰＥ、及びＨ−４０９が、単球に対する免疫細胞送達増強能力を示すことが実証された。
第２の一連の実験では、ｉｎ ｖｉｖｏでの単球への送達について、ステロール化合物の追加の一団をＬＮＰに含めて試験した。ＬＮＰの構造脂質成分として試験したこのステロール一団についての結果は、図４０の棒グラフに示される。Ｙ軸は、脾臓におけるＣＤ３＋細胞の中で、ＬＮＰによってカプセル化されたｍＲＮＡによってコードされるｍＯＸ４０Ｌを発現したＣＤ３＋細胞のパーセントを示す。１〜９の名称が付けられたＸ軸上の棒／レーンは、ｉｎ ｖｉｖｏでのｍＲＮＡ送達について試験した下記のＬＮＰ組成物に対応する：レーン１は、ＰＢＳである。レーン２は、Ｃｍｐｄ Ｘ／Ｃｍｐｄ ４２８であり、レーン３は、Ｃｍｐｄ Ｘ／βシトステロール／Ｃｍｐｄ ４２８であり、レーン４は、Ｃｍｐｄ Ｘ／β−シトステロール−ｄ７／Ｃｍｐｄ ４２８であり、レーン５は、Ｃｍｐｄ Ｘ／ブラシカステロール／Ｃｍｐｄ ４２８であり、レーン６は、Ｃｍｐｄ Ｘ／名称なしのステロール／Ｃｍｐｄ ４２８であり、レーン７は、Ｃｍｐｄ Ｘ／Ｃｍｐｄ Ｓ−３０／Ｃｍｐｄ ４２８であり、レーン８は、Ｃｍｐｄ Ｘ／Ｃｍｐｄ Ｓ−３２／Ｃｍｐｄ ４２８であり、レーン９は、Ｃｍｐｄ Ｘ／Ｃｍｐｄ Ｓ−３１／Ｃｍｐｄ ４２８である。こうした結果から、ステロール化合物であるブラシカステロールを含むＬＮＰ（レーン５に示される）、ステロール化合物であるＣｍｐｄ Ｓ−３０を含むＬＮＰ（レーン７に示される）、及びステロール化合物であるＣｍｐｄ Ｓ−３１を含むＬＮＰ（レーン９に示される）が、単球に対する免疫細胞送達増強能力を示すことが実証された。
実施例２０：免疫細胞送達増強脂質を使用して行う、Ｔ細胞への分泌タンパク質をコードするｍＲＮＡのトランスフェクション
この実施例では、分泌タンパク質（ヒトエリスロポエチン（ｈｕＥＰＯ））をコードするｍＲＮＡを、免疫細胞送達増強脂質を含むＬＮＰ（ＬＮＰ３（実施例３に記載のもの））にカプセル化した。こうしたＬＮＰによってＴ細胞へのトランスフェクションをｉｎ ｖｉｔｒｏで行った後、このトランスフェクションを、免疫細胞送達増強脂質を含まないＬＮＰ（ＬＮＰ１（実施例３に記載のもの））にカプセル化された同じｍＲＮＡのトランスフェクションと比較した。
ｈｕＥＰＯのトランスフェクション実験については、ｈＰＢＭＣを解凍し、ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を１０％含むＲＰＭＩで洗浄した。次に、市販のＴ細胞単離キット（ＳＴＥＭＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用してｈＰＢＭＣからＴ細胞を選別した。ＦＢＳを１０％含むＲＰＭＩ中でＴ細胞を一晩休ませた後、ＲＰＭＩで洗浄し、１００μｌのＲＰＭＩに再浮遊させた。最終濃度が２％となるようにヒト血清を細胞に添加した。トランスフェクションについては、ｈｕＥＰＯをコードするｍＲＮＡがカプセル化されたＬＮＰ１またはＬＮＰ３（１００ｎｇ）を、細胞を含む５０μｌのＲＰＭＩに添加した。細胞を３７℃で２４時間インキュベートした後、上清を収集した。Ｔ細胞の上清中のｈｕＥＰＯ濃度を測定するために、上清の１：５０希釈液及び１：２５０希釈液に市販のヒトＥＰＯ ＥＬＩＳＡキット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を適用した。
結果は、図４１Ａ（１：５希釈）及び図４１Ｂ（１：２５０希釈）に示される。この結果は、免疫細胞送達増強脂質を含むＬＮＰ（ＬＮＰ３）を使用すると、免疫細胞送達増強脂質を含まないＬＮＰ（ＬＮＰ１）を使用したときと比較して、Ｔ細胞の上清でのｈｕＥＰＯのレベルが有意に高まったことを実証するものである。したがって、こうした実験は、免疫細胞送達増強脂質を含むＬＮＰが、分泌タンパク質をコードするｍＲＮＡをＴ細胞に送達する上で有効であり、その結果、Ｔ細胞が分泌タンパク質を発現することを実証するものである。
実施例２１：免疫細胞送達増強脂質を使用して行う、Ｔ細胞への細胞内タンパク質をコードするｍＲＮＡのトランスフェクション
この実施例では、細胞内タンパク質（転写因子Ｆｏｘｐ３）をコードするｍＲＮＡを、免疫細胞送達増強脂質を含むＬＮＰ（ＬＮＰ３（実施例３に記載のもの））にカプセル化した。こうしたＬＮＰによってＴ細胞へのトランスフェクションをｉｎ ｖｉｔｒｏで行った後、このトランスフェクションを、免疫細胞送達増強脂質を含まないＬＮＰ（ＬＮＰ１（実施例３に記載のもの））にカプセル化されたｍＲＮＡのトランスフェクションと比較した。
Ｆｏｘｐ３のトランスフェクション実験については、ｈＰＢＭＣを解凍し、ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を１０％含むＲＰＭＩで洗浄した後、市販のＴ細胞単離キット（ＳＴＥＭＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用してｈＰＢＭＣからＴ細胞を選別した。ＦＢＳを１０％含むＲＰＭＩ中でＴ細胞を一晩休ませた後、ＲＰＭＩで洗浄し、１００μｌのＲＰＭＩに再浮遊させた。最終濃度が２％となるようにヒト血清を細胞に添加した。トランスフェクションについては、Ｆｏｘｐ３をコードするｍＲＮＡがカプセル化されたＬＮＰ１またはＬＮＰ３（１００ｎｇ）を、細胞を含む５０μｌのＲＰＭＩに添加した。膜結合型タンパク質であるｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡがＬＮＰ３にカプセル化されたものを正の対照として使用した。
結果は、図４２に示される。この結果は、免疫細胞送達増強脂質を含むＬＮＰ（ＬＮＰ３）を使用すると、免疫細胞送達増強脂質を含まないＬＮＰ（ＬＮＰ１）を使用したときと比較して、ＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＦｏｘｐ３の発現レベルが有意に高まったことを実証するものである。したがって、こうした実験は、免疫細胞送達増強脂質を含むＬＮＰが、細胞内タンパク質（例えば、転写因子）をコードするｍＲＮＡをＴ細胞に送達する上で有効であり、その結果、Ｔ細胞が細胞内タンパク質を発現することを実証するものである。
実施例２２：免疫細胞へのトランスフェクションのための免疫細胞送達増強脂質である追加の脂質
この実施例では、様々な脂質成分を異なる比で含むＬＮＰを追加で調製し、そうしたＬＮＰがＴ細胞へのトランスフェクションをｉｎ ｖｉｔｒｏで生じさせる能力について試験した。トランスフェクションは、マウスＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡがカプセル化されたＬＮＰを使用して実施例５に記載のように実施した。前述のように、ＬＮＰを標識し、ＬＮＰが結合した細胞の平均％、ｍＯＸ４０Ｌを発現する細胞の平均％、及びｍＯＸ４０Ｌを発現するＬＮＰ結合細胞の％について結果を決定した。
ＬＮＰのイオン化可能な脂質成分として試験したアミノ脂質の一団についての結果は図４３に示される。図４３の結果から、具体的には、アミノ脂質である化合物Ｉ−４８、化合物Ｉ−１８１、化合物Ｉ−１８２、化合物Ｉ−２９２、化合物Ｉ−３０１、化合物Ｉ−３０９、化合物Ｉ−３１７、化合物Ｉ−３２１、化合物Ｉ−３２６、化合物Ｉ−３４７、化合物Ｉ−３４８、化合物Ｉ−３４９、化合物Ｉ−３５０、化合物Ｉ−３５１、及び化合物Ｉ−３５２が、Ｔ細胞に対する免疫細胞送達増強能力を示すことが実証された。
ＬＮＰの構造成分として試験したステロールの一団についての結果は図４４に示される。図４４の結果から、具体的には、ステロールである化合物Ｓ−１４０、化合物Ｓ−１４３、化合物Ｓ−１４４、化合物Ｓ−１４８、化合物Ｓ−１５１、化合物Ｓ−１５６、化合物Ｓ−１５７、化合物Ｓ−１５９、化合物Ｓ−１６０、化合物Ｓ−１６４、化合物Ｓ−１６５、化合物Ｓ−１６６、化合物Ｓ−１６７、化合物Ｓ−１７０、化合物Ｓ−１７３、及び化合物Ｓ−１７５が、Ｔ細胞に対する免疫細胞送達増強能力を示すことが実証された。
ＬＮＰのリン脂質成分として試験したヘルパー脂質の一団についての結果は図４５に示される。図４５の結果から、具体的には、ヘルパー脂質であるＤＰＰＣ、ＤＭＰＣ、化合物Ｈ−４１８、化合物Ｈ−４２０、化合物Ｈ−４２１、化合物Ｈ−４２２、及び化合物Ｈ−４０９が、Ｔ細胞に対する免疫細胞送達増強能力を示すことが実証された。
ＬＮＰのＰＥＧ脂質成分として試験したＰＥＧ脂質の一団についての結果は図４６に示される。図４６の結果から、具体的には、ＰＥＧ脂質である化合物Ｐ−Ｌ１、化合物Ｐ−Ｌ３、化合物Ｐ−Ｌ４、化合物Ｐ−Ｌ６、化合物Ｐ−Ｌ８、化合物Ｐ−Ｌ９、及び化合物Ｐ−Ｌ２５が、Ｔ細胞に対する免疫細胞送達増強能力を示すことが実証された。
ＬＮＰ組成物の異なる製剤の一団についての結果は図４７に示される。この図は、３つの異なる型の製剤を試験した３回の異なる実験から得られた結果を報告するものであり、これについては以下に記載される。
第１の一連の実験では、イオン化可能な脂質（アミノ脂質）として化合物Ｉ−１８２を含む製剤の一団を、イオン化可能な脂質（アミノ脂質）として化合物Ｉ−１８を含む製剤と比較した。こうした実験から、化合物Ｉ−１８２を含むＬＮＰが、Ｔ細胞に対する免疫細胞送達増強能力を示すことが実証された。具体的には、下記の製剤／比が、Ｔ細胞に対する免疫細胞送達増強能力を示す上で特に有効であった：化合物Ｉ−１８２／ＤＳＰＣ／コレステロール／Ｐ−４２８（４０：３０：２８：２の比のもの）、及び化合物Ｉ−１８２／ＩＳＰＣ／コレステロール／β−シトステロール／Ｐ−４２８（５０：１０：２０：１８：２の比または５０：２０：１０：１８：２の比または４０：２０：２０：１８：２の比のいずれかのもの）。
第２の一連の実験では、構造成分としてコレステロール／組成物Ｓ−１８３（化合物Ｓ−１４１を約４０％含み、化合物Ｓ−１４０を約２５％含み、化合物Ｓ−１４３を約２５％含み、ブラシカステロールを約１０％含む）を含む製剤の一団を、構造成分としてコレステロール／β−シトステロールを有する製剤と比較して試験した。これらの製剤には、イオン化可能な脂質４５％／ヘルパー脂質２０％／構造脂質３３．５％／ＰＥＧ脂質１．５％の比を使用した。こうした実験から、コレステロール／組成物Ｓ−１８３を含む製剤が、Ｔ細胞に対する免疫細胞送達増強能力を示すことが実証された。製剤は、構造脂質成分としての組成物Ｓ−１８３の含有率が少なくとも１５％であるとき（例えば、構造脂質としての組成物Ｓ−１８３の含有率が１５％、２０％、２５％、３０％、または３３．５％であり、構造脂質としての残りの含有率である１８．５％、１３．５％、８．５％、３．５％、または０％をコレステロールが占めるとき）に最も有効であった。さらに、化合物Ｉ−１８を４５％含み、ＤＳＰＣを２０％含み、コレステロールを１３．５％含み、４つの異なるステロールの混合物を２０％含み、Ｐ−４２８を１．５％含む製剤もまた、Ｔ細胞に対する免疫細胞送達増強能力を示す上で有効であった。４つのステロールの上記混合物が占めた２０％の構成内訳は、５％が化合物Ｓ−１４０であり、８％がβ−シトステロールであり、５％が化合物Ｓ−１４３であり、２％が化合物Ｓ−１４８である。
第３の一連の実験では、様々な異なるイオン化可能な脂質（アミノ脂質）を含む製剤の一団を、イオン化可能な脂質（アミノ脂質）として化合物Ｉ−１８を有する製剤と比較して試験した。この結果から、イオン化可能な脂質（アミノ脂質）としてＭＣ３（（（６Ｚ，９Ｚ，２８Ｚ，３１Ｚ）−ヘプタトリアコンタ−６，９，２８，３１−テトラエン−１９−イル４−（ジメチルアミノ）ブタノエート）（ＵＳ８，１５８，６０１（当該文献は、参照によって本明細書に組み込まれる）））またはＣＫＫ−Ｅ１２（Ｄｏｎｇ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．ＰＮＡＳ Ｍａｒｃｈ １９，２０１４，Ｖｏｌ １１１（１１）：３９５５−３９６０（当該文献は、参照によって本明細書に組み込まれる））を含む製剤が、Ｔ細胞に対する免疫細胞送達増強能力を示すことが実証された。
他の実施形態
本開示は、その詳細な説明と関連付けて記載されているが、前述の説明の意図は、例示であり、本開示の範囲の限定ではなく、本開示の範囲は、添付の特許請求の範囲によって定義されることが理解されよう。他の態様、利点、及び改変は、添付の特許請求の範囲に含まれる。
本明細書に記載の参考文献はすべて、その全体が参照によって組み込まれる。
配列をまとめた表
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Claims (18)

  1. 免疫療法の方法における使用のための脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）であって、前記ＬＮＰが、免疫細胞への送達増進をもたらし、
    前記ＬＮＰが、
    （ｉ）ステロールまたは他の構造脂質、
    （ｉｉ）イオン化可能な脂質、及び
    （ｉｉｉ）免疫細胞に送達するための薬剤
    を含み、
    （ｉ）前記ステロールもしくは他の構造脂質、及び／または（ｉｉ）前記イオン化可能な脂質、のうちの１つ以上が、免疫細胞への前記ＬＮＰの送達を増進する上で有効な量で免疫細胞送達増強脂質を含み、
    前記送達増進が、前記免疫細胞送達増強脂質を含まない対照ＬＮＰと比較したときの前記ＬＮＰの特徴である、前記ＬＮＰ。
  2. 前記ステロールまたは他の構造脂質が、フィトステロールまたはコレステロールである、請求項１に記載の使用のためのＬＮＰ。
  3. 前記免疫細胞送達増強脂質が、Ｃ１ｑに結合し、及び／または前記免疫細胞送達増強脂質を含まない対照ＬＮＰと比較して、前記脂質を含む前記ＬＮＰがＣ１ｑに結合することを促進し、及び／または前記免疫細胞送達増強脂質を含まない対照ＬＮＰと比較して、Ｃ１ｑと結合したＬＮＰが免疫細胞に取り込まれることを増加させる、先行請求項のいずれか１項に記載の使用のためのＬＮＰ。
  4. 免疫細胞に送達するための前記薬剤が、核酸分子である、先行請求項のいずれか１項に記載の使用のためのＬＮＰ。
  5. 前記方法において、前記薬剤が、前記免疫細胞における目的タンパク質の発現を刺激する、先行請求項のいずれか１項に記載の使用のためのＬＮＰ。
  6. 免疫細胞に送達するための前記薬剤が、目的タンパク質をコードする核酸分子である、先行請求項のいずれか１項に記載の使用のためのＬＮＰ。
  7. 免疫細胞に送達するための前記薬剤が、目的タンパク質をコードするｍＲＮＡである、先行請求項のいずれか１項に記載の使用のためのＬＮＰ。
  8. 前記方法において、前記免疫細胞における前記目的タンパク質の前記発現が、前記免疫細胞送達増強脂質を含まない対照ＬＮＰと比較して増進する、請求項５〜７のいずれか１項に記載の使用のためのＬＮＰ。
  9. 前記薬剤が、免疫細胞活性を調節するタンパク質をコードする、先行請求項のいずれか１項に記載の使用のためのＬＮＰ。
  10. 前記免疫細胞が、リンパ球である、先行請求項のいずれか１項に記載の使用のためのＬＮＰ。
  11. 前記免疫細胞が、Ｔ細胞またはＢ細胞である、先行請求項のいずれか１項に記載の使用のためのＬＮＰ。
  12. 前記免疫細胞が、樹状細胞または骨髄系細胞である、先行請求項のいずれか１項に記載の使用のための脂質ナノ粒子。
  13. 前記脂質ナノ粒子が、
    （ｖｉ）非カチオン性ヘルパー脂質もしくはリン脂質、及び／または
    （ｖ）ＰＥＧ脂質
    をさらに含む、先行請求項のいずれか１項に記載の使用のためのＬＮＰ。
  14. 前記方法を用いることで、免疫細胞の活性化または活性が調節される、先行請求項のいずれか１項に記載の使用のためのＬＮＰ。
  15. 前記方法を用いることで、Ｔ細胞またはＢ細胞の活性化または活性が調節される、先行請求項のいずれか１項に記載の使用のためのＬＮＰ。
  16. 前記方法を用いることで、目的抗原に対する免疫応答が亢進し、任意選択でがん抗原に対するＴ細胞応答が亢進する、先行請求項のいずれか１項に記載の使用のためのＬＮＰ。
  17. 免疫細胞に薬剤を送達するｉｎ ｖｉｔｒｏの方法であって、前記方法が、前記免疫細胞を、免疫細胞送達増強脂質を含む請求項１〜１３のいずれか１項に記載のＬＮＰと接触させること含む、前記方法。
  18. 前記方法を用いることで、
    ａ．免疫細胞（例えば、Ｔ細胞もしくはＢ細胞）の活性化もしくは活性が調節され、及び／または
    ｂ．目的抗原に対する免疫応答が亢進し、任意選択でがん抗原に対するＴ細胞応答が亢進する、請求項１７に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏの方法。
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