JP2018019654A - 培養用生成物、及び培養容器 - Google Patents
培養用生成物、及び培養容器 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2018019654A JP2018019654A JP2016153781A JP2016153781A JP2018019654A JP 2018019654 A JP2018019654 A JP 2018019654A JP 2016153781 A JP2016153781 A JP 2016153781A JP 2016153781 A JP2016153781 A JP 2016153781A JP 2018019654 A JP2018019654 A JP 2018019654A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- culture
- culture product
- cell
- extracellular matrix
- product
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 48
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims abstract description 43
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 claims abstract description 32
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 claims abstract description 32
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 claims abstract description 32
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims abstract description 29
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 claims abstract description 10
- 239000008101 lactose Substances 0.000 claims abstract description 10
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 claims abstract description 9
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 claims abstract description 9
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- 210000004263 induced pluripotent stem cell Anatomy 0.000 claims abstract description 6
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims description 14
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 claims description 4
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 claims description 3
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims description 3
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims description 3
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims description 3
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 claims description 2
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 claims description 2
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 claims description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 36
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 15
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 14
- 108010085895 Laminin Proteins 0.000 description 13
- 102000007547 Laminin Human genes 0.000 description 13
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 11
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 8
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 6
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 5
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 5
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 5
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 4
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 4
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 4
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 3
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 108010008217 nidogen Proteins 0.000 description 2
- 210000001778 pluripotent stem cell Anatomy 0.000 description 2
- -1 polypropylene Polymers 0.000 description 2
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 108010022355 Fibroins Proteins 0.000 description 1
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 1
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 102100037369 Nidogen-1 Human genes 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 108010067787 Proteoglycans Proteins 0.000 description 1
- 102000016611 Proteoglycans Human genes 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 238000004115 adherent culture Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 238000007876 drug discovery Methods 0.000 description 1
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 210000001988 somatic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000003656 tris buffered saline Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
【課題】人工多能性幹細胞（iPS細胞）などの接着細胞培養に好適に使用できる培養器材を提供する。【解決手段】接着細胞用の培養用生成物であって、その培養用表面は、細胞外マトリックス由来基質と、マルトース或いはラクトースの少なくとも1つ含む糖類を含む安定化剤を有する。好適には、培養用表面に安定化剤を0.03〜0.1 mg / cm2有する。【選択図】図１
Description
本発明は細胞培養に係り、特に接着細胞などを簡単に培養する技術に関する。
細胞を生体外で培養する際には、その細胞種特異的な機能や活性の維持に適した培養環境が重要であり、その環境因子として、培養器材、器材表面のコート剤、培地、液性因子などがある。生体内において細胞が分化・増殖する場合には、細胞外マトリックスが足場として機能して組織の構築が行われるため、足場材となる培養用器材や、器材表面の細胞外マトリックス由来基質などを含むコート剤は、生体外での細胞培養において重要な役割を果たす。
人工多能性幹細胞（以下、iPS細胞）は様々な細胞に分化できる多能性と無限に増殖できる自己複製能を有する細胞（非特許文献１）であるため、再生医療や創薬の分野においてiPS細胞の利用が期待されている。このiPS細胞を未分化能を維持したまま増殖させるためには、培養器材表面のコート剤や培地の組み合わせにより、適切な培養環境を維持することが特に重要となる（非特許文献２）。培養環境が適切でない場合には、iPS細胞の未分化の状態を維持できなかったり、細胞が死滅してしまったりすることがある。
未分化状態を維持する培養方法には、支持細胞であるフィーダ細胞と共培養するオンフィーダ培養法と、フィーダ細胞に替わる添加剤のみで未分化状態を維持するフィーダフリー培養法があり、支持細胞や細胞外マトリックス由来基質が必要である。更に、再生医療にiPS細胞を用いる際には、支持細胞由来の汚染や支持細胞自体の混入を防ぐ必要があるため、細胞外マトリックス由来基質の利用が不可欠である。このような技術に関連する特許文献としては、特許文献１がある。
Takahashi, K., Tanabe, K., Ohnuki, M., Narita, M., Ichisaka, T., Tomoda, K., and Yamanaka, S., Induction of pluripotent stem cells from adult human fibroblasts by defined factors., Cell, 131, 5, 861 - 72, (2007)
Higuchi, A., Ling, Q., Ko, Y., Chang, Y., and Umezawa, A., Biomaterials for the feeder-free culture of human embryonic stem cells and induced pluripotent stem cells., Chem.Rev., 111, 3021 - 3035, (2011)
上述した細胞外マトリックス由来基質であるラミニンは、iPS細胞を未分化な状態で安定的に増殖培養するための基質として広く利用されているが、コート時に表面で安定化させるために時間を要する。また表面が乾燥するとその培養機能が低下する。また、コートした表面の乾燥保存が難しいため、使用直前のコーティングが必要であるという課題がある。
本発明の目的は、上記の課題を解決し、作業工程を簡略化し、作業に費やす時間を低減することが可能な培養用生成物、及び培養容器を提供することにある。
本発明においては、上記の課題を解決するため、細胞の培養用表面を有する培養用生成物であって、培養用表面は、細胞外マトリックス由来基質と、マルトース或いはラクトースの少なくとも1つ含む糖類を含む安定化剤とを有する培養用生成物を提供する。
また、本発明においては、上記の課題を解決するため、培養容器であって、容器本体と、容器本体の表面に塗られた、細胞の培養用生成物とを備え、培養用生成物は、細胞外マトリックス由来基質と、マルトース或いはラクトースの少なくとも1つ含む糖類を含む安定化剤とを有する培養容器を提供する。
本発明により、細胞外マトリックス由来基質保持表面の乾燥保存が可能であり、培養使用直前の細胞外マトリックス由来基質のコーティング作業を省略可能であり、細胞培養開始時の時間と作業工程を短縮可能となる。
以下、本発明の培養生成物、及び培養容器の実施形態について詳述する。本発明者が検討を重ねた結果、細胞外マトリックス由来基質を乾燥状態で保存した表面でも細胞培養が可能であり、簡便に使用できることを見出し、本発明の培養生成物を完成させるに至った。本発明は、iPS細胞で代表される接着細胞の機能を維持したまま培養できる表面を提供するものであり、細胞外マトリックス由来基質と安定化剤を表面に有する培養用生成物、及び培養容器を構成する。すなわち、細胞の培養用表面を有する培養用生成物であって、培養用表面は、細胞外マトリックス由来基質と、マルトース或いはラクトースの少なくとも1つ含む糖類を含む安定化剤を有する培養用生成物、及びそれを利用した培養容器を構成する。
本発明は主として接着細胞を対象とし、接着細胞にはiPS細胞・ES細胞を含む幹細胞や体性幹細胞、各種初代培養細胞、株化細胞が含まれるが、この限りではない。また本発明は、細胞外マトリックス由来基質と安定化剤を含む培養用生成物であれば良く、細胞外マトリックス由来基質としては、ラミニン、コラーゲン、プロテオグリカン、エンタクチン/ニドゲン、フィブロネクチンなどの糖タンパク質や成長因子またはいずれかの混合物が挙げられるがこれに限定されない。細胞外マトリックス由来基質がラミニンの場合、ラミニンの全長を有しているもの、更には一部機能部位の断片などが含まれる。また本発明では特に、糖類を安定化剤として使用する。安定化剤として用いる糖類は、単糖、二糖、多糖類を、単独でも混合されて使用しても良く、特にマルトース、ラクトースを少なくとも1つ含むことが望ましい。
本発明によって提供される培養用生成物が使用される培養容器の容器本体は、培養皿、マルチウェルプレート、培養フラスコ、および同様の培養用の容器が全て含まれる。この培養容器の容器本体は、培養用生成物に含まれる細胞外マトリックス由来基質の吸着や結合を可能にできる物質でできたものであり、ポリスチレン、ポリカーボネート、ポリプロピレン、ポリエチレン、ガラス、セルロース、フィブロインなど高分子材料が含まれ、これらの組み合わせを含むことが出来る。
本発明により提供される培養用生成物は、細胞外マトリックス由来基質をコーティング後に安定化剤を塗布する場合や、細胞外マトリックス由来基質と安定化剤を同時に塗布することによって作製される生成物を含む。
また、本発明の培養用生成物を生成するため、細胞外マトリックス由来基質や安定化剤を調製する溶液は、リン酸緩衝生理食塩水（PBS）やトリス緩衝生理食塩水など細胞培養に使用する緩衝液であれば、特にその種類は問わない。この安定化剤を含む溶液は器材表面にコーティング前に、好適には0.22μｍのフィルターでろ過滅菌を行う。
本発明は、安定化剤いずれかを0.008〜0.3 mg / cm2有する生成物であり、より好ましくは0.01〜0.2 mg / cm2有する生成物であり、さらに好ましくは0.03〜0.1 mg / cm2有する生成物である。これら0.03 mg、0.1 mg、0.2 mg / cm2は本発明によって提供される培養用生成物の安定化剤保持量の計測値であり、0.03 mg / cm2を示す生成物の安定化剤濃度は解析に用いた装置の定量限界である。ここで言う安定化剤保持量とは安定化剤を培養表面に添加し、一定時間静置後、上清を除去後に培養表面に残っている安定化剤の量を所定の方法で計測した量である。ここで言う所定の方法とは作製した培養用生成物上に超純水を添加し、24時間静置することで安定化剤を抽出し、その安定化剤抽出溶液を回収し、HPLC溶離液で希釈し、0.45μｍメンブレンフィルターでろ過し、測定試料として用いて測定する方法である。表面保持量はそれぞれの安定化剤を用いて作成した検量線によって導かれ、各表面から抽出された糖量を生成物の表面積単位で示した。0.01 mg、0.008 mgは検量線を用いて本発明作製時の安定化剤の濃度から概算される値である。
＜細胞外マトリックス由来基質保持量の算出方法＞
安定化剤と同様に細胞外マトリックス由来基質の保持量は次のように測定した。作製した培養用生成物上に超純水を添加し、２４時間静置することで細胞外マトリックス由来基質を抽出した。細胞外マトリックス由来基質抽出溶液を回収し、HPLC溶離液で希釈し、0.45μｍメンブレンフィルターでろ過し、測定試料とした。
安定化剤と同様に細胞外マトリックス由来基質の保持量は次のように測定した。作製した培養用生成物上に超純水を添加し、２４時間静置することで細胞外マトリックス由来基質を抽出した。細胞外マトリックス由来基質抽出溶液を回収し、HPLC溶離液で希釈し、0.45μｍメンブレンフィルターでろ過し、測定試料とした。
本発明によって提供される培養用生成物は、37℃以下で保存可能であり、より好ましくは25℃以下で保存可能であり、さらに好ましくは4℃以下で保存可能である。特に単糖の一種であるマンノースを安定化剤として用いた本発明によって提供される生成物は、4℃で3カ月間保存後もラミニンの機能を維持しており、使用直前にラミニンコーティングした表面と同等の培養が可能であった。また、ラクトースを安定化剤として用いた本発明によって提供される生成物は、4℃で1カ月間保存後もラミニンの機能を維持しており、さらには37℃で高湿度環境下で1カ月間保存後もラミニンの機能を維持しており、使用直前にラミニンコーティングした表面と同等の培養が可能であった。
なお、本発明において培養に使用する培養液は、使用する細胞について良好な成育が得られる一般的な細胞培養液であれば、特にその種類を問わない。
以下、実施例により、本発明をより詳細に説明するが、本発明の技術範囲は以下の実施例に限定されるものではない。
実施例１の培養用生成物の生成について順次説明する。安定化剤溶液は各種糖を15 mM〜300 mMの濃度になるようにPBS溶液で溶解した。完全に糖が溶けたことを確認後、0.22 μmのフィルターに通しろ過滅菌を行った。
細胞外マトリックス由来基質としてiMatrix-511（カタログ番号892011；ニッピ）を使用し、PBSを400 μL添加した培養器材表面（24 well plate）にiMatrix-511を2 μL添加し、4℃で終夜コーティングした。iMatrix-511のコーティング液を除去し、調製した安定化剤を含むPBS溶液を400 μL添加し、コーティングした後、除去し乾燥保存した器材を本実施例によって提供される生成物とした。また、調整した安定化剤を含むPBS溶液を400 μL培養器材表面に添加し、iMatrix-511を2 μL添加し4℃で終夜コーティングした。その安定化剤とiMatrix-511の混合液を除去し乾燥保存した器材を本実施例によって提供される生成物とした。比較例１として、PBSを400 μL添加した培養器材表面にiMatrix-511を2 μL添加し、4℃で終夜コーティングし、コーティング液を除去し乾燥保存した器材を作製した。比較例２として、PBSを400 μL添加した培養器材表面にiMatrix-511を2 μL添加し、4℃で終夜コーティングし、コーティング液を除去した器材を作製した。
作製した器材上に超純水を添加し、２４時間静置することで安定化剤を抽出した。安定化剤抽出溶液を回収し、HPLC溶離液（アセトニトリル：超純水＝70：30 v/v）で希釈し測定試料とし、安定化剤の保持量を測定した。安定化剤の各濃度に応じた糖の保持量が検出された。これらの結果である器材表面の糖保持量を以下の表１に示す。
続いて、作製した培養用生成物上に超純水を添加し、２４時間静置することで表面吸着iMatrix-511を抽出した。iMatrix-511抽出溶液を回収し、HPLC溶離液（アセトニトリル：超純水＝70：30 v/v）で希釈し測定試料とし、iMatrix-511の保持量を測定した。安定化剤の有無や濃度はiMatrix-511の保持量に影響を与えないことが示された。これらの結果である器材表面のiMatrix-511の保持量を以下の表２に示す。
以上順次説明した実施例１で作製した培養用生成物である器材と、比較例１、２で作製した器材それぞれを用いてiPS細胞を培養した。iPS細胞の培養では細胞を1,400細胞/ cm2播種後、毎日培地交換を行った。1週間培養後の生細胞数を比較した。
その結果のグラフを図１に示す。図１は、培養使用直前にラミニンをコートした乾燥無表表面と、本実施例の細胞培養用生成物の表面とで、iPS細胞を培養後の細胞数比率データの比較を示すグラフである。同図で明らかなように、安定化剤無のラミニンのみをコーティングし乾燥させた器材（上述の比較例１に対応）よりも、本実施例の生成物の方が、生細胞数は多いことがわかった。また、使用直前にラミニンをコーティングした乾燥無の器材（上述の比較例２に対応）と同等の生細胞数が培養可能であった。
以上説明したように、本実施例の培養用生成物により、細胞外マトリックス由来基質保持表面の乾燥保存が可能であり、培養使用直前の細胞外マトリックス由来基質のコーティング作業を省略可能であり、細胞培養開始時の時間と作業工程を短縮可能となる。
なお、本発明は上記した実施例に限定されるものではなく、様々な変形例が含まれる。例えば、上記した実施例は本発明のより良い理解のために詳細に説明したのであり、必ずしも説明の全ての構成を備えるものに限定されものではない。また、ある実施例の構成の一部を他の実施例の構成に置き換えることが可能であり、また、ある実施例の構成に他の実施例の構成を加えることが可能である。また、各実施例の構成の一部について、他の構成の追加・削除・置換をすることが可能である。
本発明により、簡便に利用できる接着細胞培養表面が提供でき、iPS細胞などの接着細胞を簡単に培養することができるので、再生医療や創薬の分野で極めて有用である。
Claims (15)
- 細胞の培養用表面を有する培養用生成物であって、
前記培養用表面は、細胞外マトリックス由来基質と、マルトース或いはラクトースの少なくとも1つ含む糖類を含む安定化剤を有する、
ことを特徴とする培養用生成物。 - 請求項１に記載の培養用生成物であって、
前記細胞外マトリックス由来基質はラミニン、コラーゲン、あるいは接着タンパク質を少なくとも１つ含む、
ことを特徴とする培養用生成物。 - 請求項１に記載の培養用生成物であって、
前記細胞外マトリックス由来基質はラミニンを含む、
ことを特徴とする培養用生成物。 - 請求項１に記載の培養用生成物であって、
前記糖類は、単糖、多糖類、あるいは前記マルトース或いはラクトース以外の二糖類を更に含む、
ことを特徴とする培養用生成物。 - 請求項１に記載の培養用生成物であって、
前記安定化剤の濃度は0.008〜0.3 mg / cm2 である、
ことを特徴とする培養用生成物。 - 請求項１に記載の培養用生成物であって、
前記安定化剤の濃度は0.01〜0.2 mg / cm2 である、
ことを特徴とする培養用生成物。 - 請求項１に記載の培養用生成物であって、
前記安定化剤の濃度は0.03〜0.1 mg / cm2 である、
ことを特徴とする培養用生成物。 - 請求項１に記載の培養用生成物であって、
前記細胞は接着細胞である、
ことを特徴とする培養用生成物。 - 請求項１に記載の培養用生成物であって、
前記細胞は人工多能性幹細胞（iPS細胞）を含む、
ことを特徴とする培養用生成物。 - 請求項３に記載の培養用生成物であって、
前記細胞は人工多能性幹細胞（iPS細胞）であり、
前記安定化剤の濃度は0.03〜0.1 mg / cm2 である、
ことを特徴とする培養用生成物。 - 培養容器であって、
容器本体と、
前記容器本体の表面に塗られた、細胞の培養用生成物と、を備え、
前記培養用生成物は、細胞外マトリックス由来基質と、マルトース或いはラクトースの少なくとも1つ含む糖類を含む安定化剤を有する、
ことを特徴とする培養容器。 - 請求項１１に記載の培養容器であって、
前記細胞外マトリックス由来基質はラミニンを含む、
ことを特徴とする培養容器。 - 請求項１１に記載の培養容器であって、
前記糖類は、単糖、多糖類、あるいは前記マルトース或いはラクトース以外の二糖類を更に含む、
ことを特徴とする培養容器。 - 請求項１１に記載の培養容器であって、
前記細胞は人工多能性幹細胞（iPS細胞）である、
ことを特徴とする培養容器。 - 請求項１１に記載の培養容器であって、
前記安定化剤の濃度は0.03〜0.1 mg / cm2 である、
ことを特徴とする培養容器。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2016153781A JP6840951B2 (ja) | 2016-08-04 | 2016-08-04 | 培養用生成物、培養容器、及び培養容器の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2016153781A JP6840951B2 (ja) | 2016-08-04 | 2016-08-04 | 培養用生成物、培養容器、及び培養容器の製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2018019654A true JP2018019654A (ja) | 2018-02-08 |
| JP6840951B2 JP6840951B2 (ja) | 2021-03-10 |
Family
ID=61163962
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2016153781A Active JP6840951B2 (ja) | 2016-08-04 | 2016-08-04 | 培養用生成物、培養容器、及び培養容器の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP6840951B2 (ja) |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH05170664A (ja) * | 1991-12-25 | 1993-07-09 | Suntory Ltd | 安定なペプチド医薬組成物 |
| JPH05306235A (ja) * | 1991-12-09 | 1993-11-19 | Asahi Chem Ind Co Ltd | パラサイロイドホルモン類の安定化組成物 |
| JP2002315567A (ja) * | 2001-04-18 | 2002-10-29 | Yasuhiko Tabata | 細胞接着活性物質を含有してなる幹細胞培養用基材 |
| JP2003215127A (ja) * | 2002-01-28 | 2003-07-30 | Eiken Chem Co Ltd | 固相化免疫試薬の安定化方法およびこれに用いる安定化溶液 |
| WO2012137970A1 (ja) * | 2011-04-08 | 2012-10-11 | 国立大学法人大阪大学 | 改変ラミニンおよびその利用 |
| JP2013126405A (ja) * | 2011-12-19 | 2013-06-27 | Somar Corp | 細胞培養基材、およびそれを用いた細胞培養方法並びに多能性幹細胞の分化誘導方法 |
-
2016
- 2016-08-04 JP JP2016153781A patent/JP6840951B2/ja active Active
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH05306235A (ja) * | 1991-12-09 | 1993-11-19 | Asahi Chem Ind Co Ltd | パラサイロイドホルモン類の安定化組成物 |
| JPH05170664A (ja) * | 1991-12-25 | 1993-07-09 | Suntory Ltd | 安定なペプチド医薬組成物 |
| JP2002315567A (ja) * | 2001-04-18 | 2002-10-29 | Yasuhiko Tabata | 細胞接着活性物質を含有してなる幹細胞培養用基材 |
| JP2003215127A (ja) * | 2002-01-28 | 2003-07-30 | Eiken Chem Co Ltd | 固相化免疫試薬の安定化方法およびこれに用いる安定化溶液 |
| WO2012137970A1 (ja) * | 2011-04-08 | 2012-10-11 | 国立大学法人大阪大学 | 改変ラミニンおよびその利用 |
| JP2013126405A (ja) * | 2011-12-19 | 2013-06-27 | Somar Corp | 細胞培養基材、およびそれを用いた細胞培養方法並びに多能性幹細胞の分化誘導方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP6840951B2 (ja) | 2021-03-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Li et al. | 3D printing human induced pluripotent stem cells with novel hydroxypropyl chitin bioink: scalable expansion and uniform aggregation | |
| Ng et al. | Enhanced ex vivo expansion of adult mesenchymal stem cells by fetal mesenchymal stem cell ECM | |
| JP6513023B2 (ja) | 三次元細胞培養 | |
| US9249390B2 (en) | Method for producing polarized retinal progenitor cells from pluripotent stem cells and their differentiation into retinal pigment epithelium cells | |
| Mihaila et al. | Fabrication of endothelial cell-laden carrageenan microfibers for microvascularized bone tissue engineering applications | |
| Lin et al. | Three-dimensional tissues using human pluripotent stem cell spheroids as biofabrication building blocks | |
| Gepp et al. | Bioactive surfaces from seaweed-derived alginates for the cultivation of human stem cells | |
| Kumar et al. | The combined influence of substrate elasticity and surface-grafted molecules on the ex vivo expansion of hematopoietic stem and progenitor cells | |
| CN105829526A (zh) | 用于纯化视网膜色素上皮细胞的方法 | |
| Wang et al. | Efficient and scalable expansion of human pluripotent stem cells under clinically compliant settings: a view in 2013 | |
| Wang et al. | In vitro culture and directed osteogenic differentiation of human pluripotent stem cells on peptides-decorated two-dimensional microenvironment | |
| US10494601B2 (en) | Method for inducing three-dimensional osteogenic differentiation of stem cells using hydrogel | |
| JP2017023008A (ja) | ポリロタキサンブロック共重合体表面を有する培養器を用いた幹細胞の培養方法 | |
| KR101687291B1 (ko) | 3차원 세포배양 시스템 및 이를 이용한 세포 배양 방법 | |
| Wiley et al. | Generation of xeno‐free, cGMP‐compliant patient‐specific iPSCs from skin biopsy | |
| Kandasamy et al. | Polysulfone membranes coated with polymerized 3, 4-dihydroxy-l-phenylalanine are a versatile and cost-effective synthetic substrate for defined long-term cultures of human pluripotent stem cells | |
| Ohori-Morita et al. | Current perspectives on the dynamic culture of mesenchymal stromal/stem cell spheroids | |
| Higuchi et al. | Preparation of induced pluripotent stem cells on dishes grafted on oligopeptide under feeder-free conditions | |
| JP7541986B2 (ja) | 三次元マトリックスなしでのヒト多能性幹細胞由来人工組織構造体の生成 | |
| JP6840951B2 (ja) | 培養用生成物、培養容器、及び培養容器の製造方法 | |
| Sung et al. | Human pluripotent stem cell culture on polyvinyl alcohol-co-itaconic acid hydrogels with varying stiffness under xeno-free conditions | |
| JPWO2020067439A1 (ja) | 心筋細胞のシート化方法 | |
| JP7575392B2 (ja) | 心筋細胞のシート化方法 | |
| WO2017078029A1 (ja) | 筋衛星細胞培養用材料および筋衛星細胞の培養方法 | |
| CN105670990B (zh) | 一种用于促进骨髓间充质干细胞定向分化的组织工程材料的制备方法与应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20181024 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20191126 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20200121 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20200616 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20200817 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20210119 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20210201 |
|
| R151 | Written notification of patent or utility model registration |
Ref document number: 6840951 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R151 |
|
| S531 | Written request for registration of change of domicile |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313531 |
|
| S533 | Written request for registration of change of name |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313533 |
|
| R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
| S531 | Written request for registration of change of domicile |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313531 |
|
| R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
| S801 | Written request for registration of abandonment of right |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R311801 |
|
| ABAN | Cancellation due to abandonment | ||
| R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |