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JP2016515104A - 免疫原性融合ポリペプチド - Google Patents

免疫原性融合ポリペプチド Download PDF

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JP2016515104A JP2015560832A JP2015560832A JP2016515104A JP 2016515104 A JP2016515104 A JP 2016515104A JP 2015560832 A JP2015560832 A JP 2015560832A JP 2015560832 A JP2015560832 A JP 2015560832A JP 2016515104 A JP2016515104 A JP 2016515104A
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Abstract

一態様では、本発明は、担体ポリペプチドのアミノ酸配列およびＯＲＦ２０８６ポリペプチドのアミノ酸配列を含む単離ポリペプチドに関する。別の態様では、本発明は、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドおよび担体ポリペプチドを含む免疫原性コンジュゲートに関する。本発明は、哺乳動物における髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する免疫応答を誘導するための免疫原性組成物および方法をさらに含む。【図１】

Description

関連出願の相互参照
本願は、その全体が参照により本明細書に組み込まれている、２０１３年３月８日に出願された米国仮特許出願第６１／７７５，４７８号の利益を主張するものである。
本発明は、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）組成物およびこれらの方法に関する。
髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）は、敗血症、髄膜炎、および死亡を引き起こし得るグラム陰性被包性細菌である。髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）は、化学的かつ抗原的に独特の多糖莢膜に基づいて約１３の血清型に分類することができる。血清型の５種（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｙ、およびＷ１３５）が疾患の大部分の原因となる。髄膜炎菌性髄膜炎は、抗生物質が利用可能であるにもかかわらず数時間以内に小児および若年成人を死亡させ得る壊滅的な疾患である。
髄膜炎菌性髄膜炎に対する改善された免疫原性組成物の必要性がある。
これらおよび他の必要性を満たすために、本発明は、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ポリペプチド、および担体ポリペプチドを含む分子、組成物、および方法に関する。
一態様では、本発明は、担体ポリペプチドのアミノ酸配列およびＯＲＦ２０８６ポリペプチドのアミノ酸配列を含む単離ポリペプチドに関する。一実施形態では、単離ポリペプチドは、融合ポリペプチドである。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、サブファミリーＡポリペプチドである。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、サブファミリーＢポリペプチドである。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、脂質化されている。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、脂質化されていない。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ａ０５である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ａ１２である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ａ２２である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ｂ０１である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ｂ０９である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ｂ１５である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ｂ１６である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ｂ２２である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ｂ２４である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ｂ４４である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ａ６２である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ａ０４である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ａ０１である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ａ０６である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ａ０７である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ａ１５である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ａ１９である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ａ２０である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ａ２９である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ｂ０２である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、配列番号５、１９、および２２〜６５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
一実施形態では、担体ポリペプチドは、サイトリソイド（ｃｙｔｏｌｙｓｏｉｄ）である。一実施形態では、サイトリソイドは、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）由来のニューモリシンポリペプチド、ウェルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）由来のペルフリンゴリシンＯポリペプチド、ストレプトコッカス・インターメディウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｓ）由来のインターメディリシンポリペプチド、バチルス・アルベイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｌｖｅｉ）由来のアルベオリシンポリペプチド、炭疽菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ）由来のアンスロリシンポリペプチド、バチルス・セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ）由来の推定上のセレオリシンポリペプチド、リステリア・イバノビイ（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｉｖａｎｏｖｉｉ）由来のイバノリシンＯポリペプチド、アルカノバクテリウム・ピオゲネス（Ａｒｃａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）由来のピオリシンポリペプチド、リステリア・ゼーリゲリ（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｓｅｅｌｉｇｅｒｉ）由来のゼーリゲリオリシン（ｓｅｅｌｉｇｅｒｉｏｌｙｓｉｎ）Ｏポリペプチド、Ｓ．ピオゲネス（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）由来のストレプトリジンＯポリペプチド、ストレプトコッカス・スイス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｕｉｓ）由来のスイリシンポリペプチド、破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ）由来のテタノリジンポリペプチド、リステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）由来のリステリオリシンＯポリペプチド、ストレプトコッカス・エクイシミリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉｓｉｍｉｌｉｓ）由来のストレプトリジンＯポリペプチド、Ｓ．カニス（Ｓ．ｃａｎｉｓ）由来のストレプトリジンＯポリペプチド、バチルス・チューリンゲンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）由来のチューリンギオリシン（ｔｈｕｒｉｎｇｉｏｌｙｓｉｎ）Ｏポリペプチド、Ｂ．ラテロスポルス（Ｂ．ｌａｔｅｒｏｓｐｏｒｕｓ）由来のラテルスポロリシン（ｌａｔｅｒｓｐｏｒｏｌｙｓｉｎ）Ｏポリペプチド、ボツリヌス菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ）由来のボツリノリジンポリペプチド、Ｃ．ショウベイ（Ｃ．ｃｈａｕｖｏｅｉ）由来のショウベオリシン（ｃｈａｕｖｅｏｌｙｓｉｎ）ポリペプチド、Ｃ．バイファーメンタンス（Ｃ．ｂｉｆｅｒｍｅｎｔａｎｓ）由来のバイファーメントリシン（ｂｉｆｅｒｍｅｎｔｏｌｙｓｉｎ）ポリペプチド、Ｃ．ソルデリイ（Ｃ．ｓｏｒｄｅｌｌｉｉ）由来のソルデリリシンポリペプチド、ヒストリチクム菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｈｉｓｔｉｏｌｙｔｉｃｕｍ）由来のヒストリチコリシンポリペプチド、クロストリジウム・ノビイ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｎｏｖｙｉ）由来のノビリシン（ｎｏｖｙｌｙｓｉｎ）ポリペプチド、またはクロストリジウム・セプチカム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｓｅｐｔｉｃｕｍ）由来のセプチコリシンＯポリペプチドに由来する。一実施形態では、サイトリソイドは、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）由来のニューモリシンポリペプチドに由来する。一実施形態では、サイトリソイドは、配列番号１と少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含む。
一実施形態では、担体ポリペプチドは、対応する野生型担体ポリペプチドと比較して無毒化されており、破傷風毒素（ＴＴ）、熱帯熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）スポロゾイト周囲（ｃｉｒｃｕｍｓｐｏｒｏｚｉｔｅ）タンパク質、Ｂ型肝炎表面抗原、Ｂ型肝炎核コアポリペプチド、インフルエンザ菌（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）基質ポリペプチド、インフルエンザ菌（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）赤血球凝集素、ジフテリアトキソイド、ジフテリアトキソイド変異体ＣＲＭ１９７、Ｂ群髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）外膜ポリペプチド複合体（ＯＭＰＣ）、サイトリソイド、肺炎球菌毒素ニューモリシン、ウシ型結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｏｖｉｓ）由来の熱ショックポリペプチド、らい菌（Ｍ．ｌｅｐｒａｅ）由来の熱ショックポリペプチド、コレラトキソイド、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＬＴ、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＳＴ、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）由来の外毒素Ａ、肺炎球菌表面ポリペプチドＡ、肺炎球菌アドヘシンポリペプチド（ＰｓａＡ）、Ａ群またはＢ群連鎖球菌由来のＣ５ａペプチダーゼ、インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）ポリペプチドＤ、オボアルブミン、キーホールリンペットヘモシニアン（ＫＬＨ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、ツベルクリンの精製ポリペプチド誘導体（ＰＰＤ）、ＰｏｒＢ（髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）由来）、およびこれらの誘導体、バリアント、または断片からなる群から選択される。一実施形態では、担体ポリペプチドは、ＣＲＭ１９７でない。
一実施形態では、ポリペプチドは、肺炎球菌に由来するポリペプチド配列をさらに含む。一実施形態では、単離ポリペプチドは、肺炎球菌に由来するポリペプチド配列を含まない。
一実施形態では、単離ポリペプチドは、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドと相同である髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂバリアントに対する殺菌抗体を誘発する。一実施形態では、単離ポリペプチドは、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドと非相同である髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂバリアントに対する殺菌抗体を誘発する。
一実施形態では、融合ポリペプチドは、担体ポリペプチド、それが作動可能に連結したＯＲＦ２０８６ポリペプチドをこの順序で含む。一実施形態では、融合ポリペプチドは、ＯＲＦ２０８６ポリペプチド、それが作動可能に連結した担体ポリペプチドをこの順序で含む。一実施形態では、担体ポリペプチドは、配列番号１を含み、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、配列番号５を含む。一実施形態では、単離ポリペプチドは、配列番号２を含む。
第２の態様では、本発明は、本明細書に記載の本発明のポリペプチドのいずれか１つによるポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドに関する。
第３の態様では、本発明は、本明細書に記載の本発明のポリペプチドのいずれか１つによるポリペプチド、および薬学的に許容できる賦形剤を含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、ａ）髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ａの莢膜多糖のコンジュゲート；ｂ）髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｃの莢膜多糖のコンジュゲート；ｃ）髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｗ１３５の莢膜多糖のコンジュゲート；およびｄ）髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｙの莢膜多糖のコンジュゲートから選択される少なくとも１種のコンジュゲートをさらに含む。
第４の態様では、本発明は、哺乳動物における髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する免疫応答を誘導するための方法に関する。本方法は、哺乳動物に有効量の本明細書に記載の実施形態のいずれかによる単離ポリペプチドを投与するステップを含む。一実施形態では、免疫応答は、殺菌抗体を含む。一実施形態では、免疫応答は、同一条件下で評価されるとき、担体ポリペプチドの非存在下で対応する非脂質化ＯＲＦ２０８６ポリペプチドを投与される哺乳動物の免疫応答に等しい。一実施形態では、免疫応答は、同一条件下で評価されるとき、担体ポリペプチドの非存在下で対応する非脂質化ＯＲＦ２０８６ポリペプチドを投与される哺乳動物の免疫応答より大きい。一実施形態では、免疫応答は、同一条件下で評価されるとき、担体ポリペプチドの非存在下で対応する脂質化ＯＲＦ２０８６ポリペプチドを投与される哺乳動物の免疫応答より最大で１０％小さい。一実施形態では、免疫応答は、同一条件下で評価されるとき、担体ポリペプチドの非存在下で対応する脂質化ＯＲＦ２０８６ポリペプチドを投与される哺乳動物の免疫応答より最大で２０％小さい。
第５の態様では、本発明は、哺乳動物における髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する免疫応答を誘導するための方法に関する。本方法は、哺乳動物に有効量の本明細書に記載の免疫原性組成物を投与するステップを含む。一実施形態では、免疫応答は、殺菌抗体を含む。一実施形態では、免疫応答は、同一条件下で評価されるとき、担体ポリペプチドの非存在下で対応する脂質化ＯＲＦ２０８６ポリペプチドを投与される哺乳動物の免疫応答に等しい。一実施形態では、免疫応答は、同一条件下で評価されるとき、担体ポリペプチドの非存在下で対応する非脂質化ＯＲＦ２０８６ポリペプチドを投与される哺乳動物の免疫応答より大きい。一実施形態では、免疫応答は、同一条件下で評価されるとき、担体ポリペプチドの非存在下で対応する脂質化ＯＲＦ２０８６ポリペプチドを投与される哺乳動物の免疫応答より最大で１０％小さい。一実施形態では、免疫応答は、同一条件下で評価されるとき、担体ポリペプチドの非存在下で対応する脂質化ＯＲＦ２０８６ポリペプチドを投与される哺乳動物の免疫応答より最大で２０％小さい。
第６の態様では、本発明は、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドおよび担体ポリペプチドを含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、組成物は、コンジュゲートである。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、サブファミリーＡポリペプチドである。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、サブファミリーＢポリペプチドである。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、脂質化されている。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、脂質化されていない。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、脂質化されておらず、ピルビン酸化されていない（ｎｏｎ−ｐｙｒｕｖｙｌａｔｅｄ）。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ａ０５である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ａ１２である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ａ２２である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ｂ０１である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ｂ０９である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ｂ１５である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ｂ１６である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ｂ２２である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ｂ２４である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ｂ４４である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ａ６２である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ａ０４である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ａ０１である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ａ０６である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ａ０７である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ａ１５である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ａ１９である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ａ２０である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ａ２９である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ｂ０２である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、配列番号５、１９、および２２〜６５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
一実施形態では、担体ポリペプチドは、サイトリソイドである。一実施形態では、サイトリソイドは、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）由来のニューモリシンポリペプチド、ウェルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）由来のペルフリンゴリシンＯポリペプチド、ストレプトコッカス・インターメディウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｓ）由来のインターメディリシンポリペプチド、バチルス・アルベイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｌｖｅｉ）由来のアルベオリシンポリペプチド、炭疽菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ）由来のアンスロリシンポリペプチド、バチルス・セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ）由来の推定上のセレオリシンポリペプチド、リステリア・イバノビイ（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｉｖａｎｏｖｉｉ）由来のイバノリシンＯポリペプチド、アルカノバクテリウム・ピオゲネス（Ａｒｃａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）由来のピオリシンポリペプチド、リステリア・ゼーリゲリ（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｓｅｅｌｉｇｅｒｉ）由来のゼーリゲリオリシンＯポリペプチド、Ｓ．ピオゲネス（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）由来のストレプトリジンＯポリペプチド、ストレプトコッカス・スイス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｕｉｓ）由来のスイリシンポリペプチド、破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ）由来のテタノリジンポリペプチド、リステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）由来のリステリオリシンＯポリペプチド、ストレプトコッカス・エクイシミリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉｓｉｍｉｌｉｓ）由来のストレプトリジンＯポリペプチド、Ｓ．カニス（Ｓ．ｃａｎｉｓ）由来のストレプトリジンＯポリペプチド、バチルス・チューリンゲンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）由来のチューリンギオリシンＯポリペプチド、Ｂ．ラテロスポルス（Ｂ．ｌａｔｅｒｏｓｐｏｒｕｓ）由来のラテルスポロリシンＯポリペプチド、ボツリヌス菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ）由来のボツリノリジンポリペプチド、Ｃ．ショウベイ（Ｃ．ｃｈａｕｖｏｅｉ）由来のショウベオリシンポリペプチド、Ｃ．バイファーメンタンス（Ｃ．ｂｉｆｅｒｍｅｎｔａｎｓ）由来のバイファーメントリシンポリペプチド、Ｃ．ソルデリイ（Ｃ．ｓｏｒｄｅｌｌｉｉ）由来のソルデリリシンポリペプチド、ヒストリチクム菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｈｉｓｔｉｏｌｙｔｉｃｕｍ）由来のヒストリチコリシンポリペプチド、クロストリジウム・ノビイ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｎｏｖｙｉ）由来のノビリシンポリペプチド、またはクロストリジウム・セプチカム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｓｅｐｔｉｃｕｍ）由来のセプチコリシンＯポリペプチドに由来する。一実施形態では、サイトリソイドは、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）由来のニューモリシンポリペプチドに由来する。一実施形態では、サイトリソイドは、配列番号１と少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含む。
一実施形態では、担体ポリペプチドは、対応する野生型担体ポリペプチドと比較して無毒化されており、破傷風毒素（ＴＴ）、熱帯熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）スポロゾイト周囲タンパク質、Ｂ型肝炎表面抗原、Ｂ型肝炎核コアポリペプチド、インフルエンザ菌（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）基質ポリペプチド、インフルエンザ菌（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）赤血球凝集素、ジフテリアトキソイド、ジフテリアトキソイド変異体ＣＲＭ１９７、Ｂ群髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）外膜ポリペプチド複合体（ＯＭＰＣ）、サイトリソイド、肺炎球菌毒素ニューモリシン、ウシ型結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｏｖｉｓ）由来の熱ショックポリペプチド、らい菌（Ｍ．ｌｅｐｒａｅ）由来の熱ショックポリペプチド、コレラトキソイド、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＬＴ、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＳＴ、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）由来の外毒素Ａ、肺炎球菌表面ポリペプチドＡ、肺炎球菌アドヘシンポリペプチド（ＰｓａＡ）、Ａ群またはＢ群連鎖球菌由来のＣ５ａペプチダーゼ、インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）ポリペプチドＤ、オボアルブミン、キーホールリンペットヘモシニアン（ＫＬＨ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、ツベルクリンの精製ポリペプチド誘導体（ＰＰＤ）、ＰｏｒＢ（髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）由来）、およびこれらの誘導体、バリアント、または断片からなる群から選択される。一実施形態では、担体ポリペプチドは、ＣＲＭ１９７である。一実施形態では、担体ポリペプチドは、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドと非相同である。
一実施形態では、組成物は、肺炎球菌に由来するポリペプチド配列をさらに含む。一実施形態では、組成物は、肺炎球菌に由来するポリペプチド配列を含まない。
一実施形態では、組成物は、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドと相同であるＯＲＦ２０８６バリアントを発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ株に対する殺菌抗体応答を誘発する。一実施形態では、組成物は、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドと非相同であるＯＲＦ２０８６バリアントを発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ株に対する殺菌抗体応答を誘発する。
一実施形態では、組成物は、ａ）髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ａの莢膜糖のコンジュゲート；ｂ）髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｃの莢膜糖のコンジュゲート；ｃ）髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｗ１３５の莢膜糖のコンジュゲート；およびｄ）髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｙの莢膜糖のコンジュゲートから選択される少なくとも１種のコンジュゲートをさらに含む。一実施形態では、組成物は、薬学的に許容できる賦形剤をさらに含む。
第７の態様では、本発明は、哺乳動物における髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する免疫応答を誘導するための方法に関する。本方法は、哺乳動物に有効量の本明細書に記載の組成物を投与するステップを含む。一実施形態では、免疫応答は、殺菌抗体を含む。一実施形態では、免疫応答は、同一条件下で評価されるとき、担体ポリペプチドの非存在下で対応する脂質化ＯＲＦ２０８６ポリペプチドを投与される哺乳動物の免疫応答に等しい。一実施形態では、免疫応答は、同一条件下で評価されるとき、担体ポリペプチドの非存在下で対応する非脂質化ＯＲＦ２０８６ポリペプチドを投与される哺乳動物の免疫応答より大きい。一実施形態では、免疫応答は、同一条件下で評価されるとき、担体ポリペプチドの非存在下で対応する脂質化ＯＲＦ２０８６ポリペプチドを投与される哺乳動物の免疫応答より最大で１０％小さい。一実施形態では、免疫応答は、同一条件下で評価されるとき、担体ポリペプチドの非存在下で対応する脂質化ＯＲＦ２０８６ポリペプチドを投与される哺乳動物の免疫応答より最大で２０％小さい。
融合ポリペプチドの図的説明である。Ａ．Ｐｌｙ−Ａ０５融合物；Ｂ．Ａ０５−Ｐｌｙ融合物；Ｃ．ＣＲＭ１９７−Ａ０５融合物；Ｄ．Ａ０５−ＣＲＭ１９７融合物；Ｅ．ＤＴＡ−Ａ０５融合物。 小規模フラスコ培養における３０℃でのＰｌｙ−Ａ０５融合タンパク質の発現を示す図である。Ｔ０、誘導前試料；Ｔ３、誘導して３時間後；Ｔ２１、誘導して２１時間後；Ｓ、可溶性画分；Ｉ、不溶性画分；（−）、誘導の前；（＋）、誘導後 小規模フラスコ培養における２０℃でのＰｌｙ−Ａ０５融合タンパク質の発現を示す図である。パネルＡ：誘導の前（０）、ならびに誘導して１７時間後および４１時間後に集菌した細胞。パネルＢ：誘導して１７時間後のｐＤＤ２０の溶解度評価。レーン：１．Ｔ０ 全細胞溶解産物（ＷＣＬ）；２．Ｔ１７ ＷＣＬ；３．Ｔ１７ ＢＵＧＢＵＳＴＥＲ（商標）上清；４．Ｔ１７ ＢＵＧＢＵＳＴＥＲ（商標）ペレット；５．Ｔ１７ 超音波処理上清；６．Ｔ１７ 超音波処理ペレット。 ｐＤＤ２０／ＢＤ６８６の６つの１リットルフラスコ誘導を示す図である。レーン：０、誘導前；１８、誘導後の時間；Ｓ、可溶性画分；Ｉ、不溶性画分。
配列識別子
配列番号１は、ニューモリソイドのアミノ酸配列を示す。
配列番号２は、ニューモリソイドおよび非脂質化Ａ０５ポリペプチド（ＰＬＹ−Ａ０５）のアミノ酸配列を示す。
配列番号３は、配列番号１のニューモリソイドをコードするＤＮＡ配列を示す。
配列番号４は、配列番号２のポリペプチドをコードするＤＮＡ配列を示す。
配列番号５は、Ａ０５ポリペプチドのアミノ酸配列を示す。
配列番号６は、Ａ０５ポリペプチドをコードするＤＮＡ配列を示す。
配列番号７は、配列番号８のポリペプチドをコードするＤＮＡ配列を示す。
配列番号８は、非脂質化Ａ０５ポリペプチドおよびニューモリソイド（Ａ０５−ＰＬＹ）のアミノ酸配列を示す。
配列番号９は、ＣＲＭ１９７をコードするＤＮＡ配列を示す。
配列番号１０は、ＣＲＭ１９７のアミノ酸配列を示す。
配列番号１１は、ＣＲＭ１９７のアミノ酸残基１〜１９３（ＤＴ−Ａ）をコードするＤＮＡ配列を示す。
配列番号１２は、ＣＲＭ１９７の残基１〜１９３（ＤＴ−Ａ）のアミノ酸配列を示す。
配列番号１３は、配列番号１４のポリペプチドをコードするＤＮＡ配列を示す。
配列番号１４は、ＣＲＭ１９７および非脂質化Ａ０５ポリペプチド（ＣＲＭ１９７−Ａ０５）のアミノ酸配列を示す。
配列番号１５は、配列番号１６のポリペプチドをコードするＤＮＡ配列を示す。
配列番号１６は、非脂質化Ａ０５ポリペプチドおよびＣＲＭ１９７（Ａ０５−ＣＲＭ１９７）のアミノ酸配列を示す。
配列番号１７は、配列番号１８のポリペプチドをコードするＤＮＡ配列を示す。
配列番号１８は、ＣＲＭ１９７および非脂質化Ａ０５ポリペプチドの断片（ＤＴ−Ａ−Ａ０５）のアミノ酸配列を示す。
配列番号１９は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＡ０５のアミノ酸配列を示す。野生型Ａ０５と比較して、配列番号１９は、最初のシステイン後のグリシン、およびＮ末端における４個のアミノ酸の欠失を含む。
配列番号２０は、アミノ酸１位においてＮ末端Ｃｙｓを含む、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＢ０１のアミノ酸配列を示す。
配列番号２１は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）由来の野生型ニューモリシンのアミノ酸配列を示す。
配列番号２２は、アミノ酸１位においてＮ末端Ｃｙｓを含む、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＡ２２のアミノ酸配列を示す。
配列番号２３は、は、アミノ酸１位においてＮ末端Ｃｙｓを含む、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＡ０５のアミノ酸配列を示す。
配列番号２４は、は、アミノ酸１位においてＮ末端Ｃｙｓを含む、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＡ０４のアミノ酸配列を示す。
配列番号２５は、アミノ酸１位においてＮ末端Ｃｙｓを含む、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＡ０１のアミノ酸配列を示す。
配列番号２６は、アミノ酸１位においてＮ末端Ｃｙｓを含む、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＡ０６のアミノ酸配列を示す。
配列番号２７は、アミノ酸１位においてＮ末端Ｃｙｓを含む、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＡ０７のアミノ酸配列を示す。
配列番号２８は、アミノ酸１位においてＮ末端Ｃｙｓを含む、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＡ１２のアミノ酸配列を示す。
配列番号２９は、アミノ酸１位においてＮ末端Ｃｙｓを含む、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＡ１５のアミノ酸配列を示す。
配列番号３０は、アミノ酸１位においてＮ末端Ｃｙｓを含む、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＡ１９のアミノ酸配列を示す。
配列番号３１は、アミノ酸１位においてＮ末端Ｃｙｓを含む、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＡ２０のアミノ酸配列を示す。
配列番号３２は、アミノ酸１位においてＮ末端Ｃｙｓを含む、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＡ２９のアミノ酸配列を示す。
配列番号３３は、アミノ酸１位においてＮ末端Ｃｙｓを含む、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＢ０３のアミノ酸配列を示す。
配列番号３４は、アミノ酸１位においてＮ末端Ｃｙｓを含む、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＢ０２のアミノ酸配列を示す。
配列番号３５は、アミノ酸１位においてＮ末端Ｃｙｓを含む、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＢ０９のアミノ酸配列を示す。
配列番号３６は、アミノ酸１位においてＮ末端Ｃｙｓを含む、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＢ１５のアミノ酸配列を示す。
配列番号３７は、アミノ酸１位においてＮ末端Ｃｙｓを含む、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＢ１６のアミノ酸配列を示す。
配列番号３８は、アミノ酸１位においてＮ末端Ｃｙｓを含む、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＢ２２のアミノ酸配列を示す。
配列番号３９は、アミノ酸１位においてＮ末端Ｃｙｓを含む、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＢ２４のアミノ酸配列を示す。
配列番号４０は、アミノ酸１位においてＮ末端Ｃｙｓを含む、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＢ４４のアミノ酸配列を示す。
配列番号４１は、アミノ酸１位においてＮ末端Ｃｙｓを含む、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＡ６２のアミノ酸配列を示す。
Ｎ末端Ｃｙｓが存在しない
配列番号４２は、アミノ酸１位においてＮ末端Ｃｙｓを含まない、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＡ０１のアミノ酸配列を示す。
配列番号４３は、アミノ酸１位においてＮ末端Ｃｙｓを含まない、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＡ０４のアミノ酸配列を示す。
配列番号４４は、アミノ酸１位においてＮ末端Ｃｙｓを含まない、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＡ０５のアミノ酸配列を示す。
配列番号４５は、アミノ酸１位においてＮ末端Ｃｙｓを含まない、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＡ０６のアミノ酸配列を示す。
配列番号４６は、アミノ酸１位においてＮ末端Ｃｙｓを含まない、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＡ０７のアミノ酸配列を示す。
配列番号４７は、アミノ酸１位においてＮ末端Ｃｙｓを含まない、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＡ１２のアミノ酸配列を示す。
配列番号４８は、アミノ酸１位においてＮ末端Ｃｙｓを含まない、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＡ１５のアミノ酸配列を示す。
配列番号４９は、アミノ酸１位においてＮ末端Ｃｙｓを含まない、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＡ１９のアミノ酸配列を示す。
配列番号５０は、アミノ酸１位においてＮ末端Ｃｙｓを含まない、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＡ２０のアミノ酸配列を示す。
配列番号５１は、アミノ酸１位においてＮ末端Ｃｙｓを含まない、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＡ２２のアミノ酸配列を示す。
配列番号５２は、アミノ酸１位においてＮ末端Ｃｙｓを含まない、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＡ２９のアミノ酸配列を示す。
配列番号５３は、アミノ酸１位においてＮ末端Ｃｙｓを含まない、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＢ０１のアミノ酸配列を示す。
配列番号５４は、アミノ酸１位においてＮ末端Ｃｙｓを含まない、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＢ０２のアミノ酸配列を示す。
配列番号５５は、アミノ酸１位においてＮ末端Ｃｙｓを含まない、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＢ０９のアミノ酸配列を示す。
配列番号５６は、アミノ酸１位においてＮ末端Ｃｙｓを含まない、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＢ１５のアミノ酸配列を示す。
配列番号５７は、アミノ酸１位においてＮ末端Ｃｙｓを含まない、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＢ１６のアミノ酸配列を示す。
配列番号５８は、アミノ酸１位においてＮ末端Ｃｙｓを含まない、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＢ２２のアミノ酸配列を示す。
配列番号５９は、アミノ酸１位においてＮ末端Ｃｙｓを含まない、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＢ２４のアミノ酸配列を示す。
配列番号６０は、アミノ酸１位においてＮ末端Ｃｙｓを含まない、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＢ４４のアミノ酸配列を示す。
配列番号６１は、アミノ酸１位においてＮ末端Ｃｙｓを含まない、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＡ６２のアミノ酸配列を示す。
修飾：
配列番号６２は、配列番号３５と比較して、Ｎ末端システインが存在せず、配列が追加のＧｌｙ／Ｓｅｒ領域を含む、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＢ０９のアミノ酸配列を示す。
配列番号６３は、配列番号３８のアミノ酸１位におけるＮ末端Ｃｙｓがグリシンと置き換えられている、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＢ２２のアミノ酸配列を示す。
配列番号６４は、配列番号２２のアミノ酸１位におけるＮ末端Ｃｙｓがグリシンと置き換えられている、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＡ２２のアミノ酸配列を示す。
配列番号６５は、配列番号３８のアミノ酸１位のＮ末端Ｃｙｓのコドンがグリシンのコドンと置き換えられている、Ｂ２２遺伝子のＤＮＡ配列を示す。
ＯＲＦ２０８６ポリペプチドをコードする例示的なＤＮＡ配列
配列番号６６は、Ｎ末端Ｃｙｓをコードするコドンを含む、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＡ０１遺伝子のＤＮＡ配列を示す。
配列番号６７は、Ｎ末端Ｃｙｓをコードするコドンを含む、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＡ２９遺伝子のＤＮＡ配列を示す。
配列番号６８は、Ｎ末端Ｃｙｓをコードするコドンを含む、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＡ０４遺伝子のＤＮＡ配列を示す。
配列番号６９は、Ｎ末端Ｃｙｓをコードするコドンを含む、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＡ０５遺伝子のＤＮＡ配列を示す。
配列番号７０は、Ｎ末端Ｃｙｓをコードするコドンを含む、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＡ０６遺伝子のＤＮＡ配列を示す。
配列番号７１は、Ｎ末端Ｃｙｓをコードするコドンを含む、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＡ０７遺伝子のＤＮＡ配列を示す。
配列番号７２は、Ｎ末端Ｃｙｓをコードするコドンを含む、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＡ１２遺伝子のＤＮＡ配列を示す。
配列番号７３は、Ｎ末端Ｃｙｓをコードするコドンを含む、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＡ１５遺伝子のＤＮＡ配列を示す。
配列番号７４は、Ｎ末端Ｃｙｓをコードするコドンを含む、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＡ１９遺伝子のＤＮＡ配列を示す。
配列番号７５は、Ｎ末端Ｃｙｓをコードするコドンを含む、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＡ２０遺伝子のＤＮＡ配列を示す。
配列番号７６は、Ｎ末端Ｃｙｓをコードするコドンを含む、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＡ２２遺伝子のＤＮＡ配列を示す。
配列番号７７は、Ｎ末端Ｃｙｓをコードするコドンを含む、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＢ０１遺伝子のＤＮＡ配列を示す。
配列番号７８は、Ｎ末端Ｃｙｓをコードするコドンを含む、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＢ０２遺伝子のＤＮＡ配列を示す。
配列番号７９は、Ｎ末端Ｃｙｓをコードするコドンを含む、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＢ４４遺伝子のＤＮＡ配列を示す。
配列番号８０は、Ｎ末端Ｃｙｓをコードするコドンを含む、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＢ０３遺伝子のＤＮＡ配列を示す。
配列番号８１は、Ｎ末端Ｃｙｓをコードするコドンを含む、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＢ０９遺伝子のＤＮＡ配列を示す。
配列番号８２は、Ｎ末端Ｃｙｓをコードするコドンを含む、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＢ１５遺伝子のＤＮＡ配列を示す。
配列番号８３は、Ｎ末端Ｃｙｓをコードするコドンを含む、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＢ１６遺伝子のＤＮＡ配列を示す。
配列番号８４は、Ｎ末端Ｃｙｓをコードするコドンを含む、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＢ２２遺伝子のＤＮＡ配列を示す。
配列番号８５は、Ｎ末端Ｃｙｓをコードするコドンを含む、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＢ２４遺伝子のＤＮＡ配列を示す。
配列番号８６は、配列番号６９と比較して、Ｎ末端システインをコードするコドンが欠失している、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＡ０５遺伝子のＤＮＡ配列を示す。
配列番号８７は、Ｎ末端Ｃｙｓをコードするコドンを含む、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＡ１２−２遺伝子のＤＮＡ配列を示す。
担体ポリペプチド
配列番号８８は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）由来の野生型ニューモリシンのアミノ酸配列を示す。
配列番号８９は、ウェルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）由来の野生型ペルフリンゴリシンＯのアミノ酸配列を示す。
配列番号９０は、ストレプトコッカス・インターメディウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｓ）由来の野生型インターメディリシンのアミノ酸配列を示す。
配列番号９１は、バチルス・アルベイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｌｖｅｉ）由来の野生型アルベオリシンのアミノ酸配列を示す。
配列番号９２は、炭疽菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ）由来の野生型アンスロリシンのアミノ酸配列を示す。
配列番号９３は、バチルス・セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ）由来の野生型の推定上のセレオリシンのアミノ酸配列を示す。
配列番号９４は、リステリア・イバノビイ（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｉｖａｎｏｖｉｉ）由来の野生型イバノリシンＯのアミノ酸配列を示す。
配列番号９５は、アルカノバクテリウム・ピオゲネス（Ａｒｃａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）由来の野生型ピオリシンのアミノ酸配列を示す。
配列番号９６は、リステリア・ゼーリゲリ（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｓｅｅｌｉｇｅｒｉ）由来の野生型ゼーリゲリオリシン（ｓｅｅｌｉｇｅｒｉｏｌｙｓｉｎ）Ｏのアミノ酸配列を示す。
配列番号９７は、化膿連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）由来の野生型ストレプトリジンＯのアミノ酸配列を示す。
配列番号９８は、ストレプトコッカス・スイス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｕｉｓ）由来の野生型スイリシンのアミノ酸配列を示す。
配列番号９９は、破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ）由来の野生型テタノリジンのアミノ酸配列を示す。
配列番号１００は、リステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）由来の野生型リステリオリシンＯのアミノ酸配列を示す。
配列番号１０１は、バチルス・チューリンゲンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）由来の野生型チューリンギオリシン（以前にペルフリンゴリシンと注釈されていた）のアミノ酸配列を示す。
配列番号１０２は、野生型ニューモリシンの残基１４４〜１６１に対応するコンセンサス配列を含む、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）由来の野生型ニューモリシンの領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１０３は、野生型ニューモリシンの残基１４４〜１６１に対応するコンセンサス配列を含む、ウェルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）由来の野生型ペルフリンゴリシンＯの領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１０４は、野生型ニューモリシンの残基１４４〜１６１に対応するコンセンサス配列を含む、ストレプトコッカス・インターメディウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｓ）由来の野生型インターメディリシンの領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１０５は、野生型ニューモリシンの残基１４４〜１６１に対応するコンセンサス配列を含む、バチルス・アルベイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｌｖｅｉ）由来の野生型アルベオリシンの領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１０６は、野生型ニューモリシンの残基１４４〜１６１に対応するコンセンサス配列を含む、炭疽菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ）由来の野生型アンスロリシンの領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１０７は、野生型ニューモリシンの残基１４４〜１６１に対応するコンセンサス配列を含む、バチルス・セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ）由来の野生型の推定上のセレオリシンの領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１０８は、野生型ニューモリシンの残基１４４〜１６１に対応するコンセンサス配列を含む、リステリア・イバノビイ（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｉｖａｎｏｖｉｉ）由来の野生型イバノリシンＯの領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１０９は、野生型ニューモリシンの残基１４４〜１６１に対応するコンセンサス配列を含む、ウェルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）由来の野生型ペルフリンゴリシンＯの領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１１０は、野生型ニューモリシンの残基１４４〜１６１に対応するコンセンサス配列を含む、リステリア・ゼーリゲリ（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｓｅｅｌｉｇｅｒｉ）由来の野生型ゼーリゲリオリシンＯの領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１１１は、野生型ニューモリシンの残基１４４〜１６１に対応するコンセンサス配列を含む、化膿連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）由来の野生型ストレプトリジンＯの領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１１２は、野生型ニューモリシンの残基１４４〜１６１に対応するコンセンサス配列を含む、ストレプトコッカス・スイス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｕｉｓ）由来の野生型スイリシンの領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１１３は、野生型ニューモリシンの残基１４４〜１６１に対応するコンセンサス配列を含む、破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ）由来の野生型テタノリジンの領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１１４は、野生型ニューモリシンの残基１４４〜１６１に対応するコンセンサス配列を含む、リステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）由来の野生型リステリオリシンＯの領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１１５は、野生型ニューモリシンの残基１４４〜１６１に対応するコンセンサス配列を含む、バチルス・チューリンゲンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）由来の野生型チューリンギオリシン（以前にペルフリンゴリシンと注釈されていた）の領域のアミノ酸配列を示す。
配列番号１１６は、ウェルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）由来の野生型ペルフリンゴリシンＯのアミノ酸配列を示す。
配列番号１１７は、アミノ酸４６０位におけるリシンのアスパラギン酸残基への変異を含む、ニューモリソイドのバリアントのアミノ酸配列を示す。
配列番号１１８は、ニューモリソイドのバリアントのアミノ酸配列を示す。配列番号１１７と比較したとき、配列番号１１８は、２０８位におけるリシンからアルギニンへのアミノ酸変化を有する。
配列番号１１９は、野生型ニューモリシン配列のアミノ酸３８５位におけるアスパラギン酸の代わりにアスパラギンの置換、ならびにアラニン１４６およびアルギニン１４７の欠失を含む、例示的なニューモリソイドのアミノ酸配列を示す。
配列番号１２０は、野生型ニューモリシン配列のアミノ酸４３３位におけるトリプトファンの代わりにフェニルアラニンの置換を含む、例示的なニューモリソイドのアミノ酸配列を示す。
コドン最適化配列
配列番号１２１は、Ｂ４４遺伝子のコドン最適化ＤＮＡ配列を示す。
配列番号１２２は、配列番号８１と比較して、Ｎ末端システインがコードされておらず、配列が追加のＧｌｙ／Ｓｅｒ領域をコードするコドンを含む、Ｂ０９遺伝子のコドン最適化ＤＮＡ配列を示す。
配列番号１２３は、Ｎ末端システインがコードされていない、Ｂ０９遺伝子のコドン最適化ＤＮＡ配列を示す。
配列番号１２４は、Ｎ末端システインがコードされていない、Ｂ０９遺伝子のコドン最適化ＤＮＡ配列を示す。
配列番号１２５は、Ａ０５ポリペプチドをコードするコドン最適化ＤＮＡ配列を示す。
配列番号１２６は、Ａ０５ポリペプチドをコードするコドン最適化ＤＮＡ配列を示す。
配列番号１２７は、Ａ２２ポリペプチドをコードするコドン最適化ＤＮＡ配列を示す。
配列番号１２８は、Ａ６２ポリペプチドをコードするコドン最適化ＤＮＡ配列を示す。
配列番号１２９は、Ａ１２ポリペプチドをコードするコドン最適化ＤＮＡ配列を示す。
追加の配列
配列番号１３０は、Ｂ２４ポリペプチドのアミノ酸配列を示す。配列番号１３０は、配列番号３９の１〜３位における残基が欠失している配列番号３９と同一である。
配列番号１３１は、配列番号２２のアミノ酸１位におけるＮ末端Ｃｙｓのコドンがグリシンのコドンと置き換えられている、Ａ２２ポリペプチドのＤＮＡ配列を示す。
配列番号１３２は、配列番号２２のアミノ酸１位におけるＮ末端Ｃｙｓがグリシンと置き換えられている、Ａ２２のアミノ酸配列を示す。
配列番号１３３は、Ｎ末端システインをコードするコドンが存在しない、Ｂ０９遺伝子のＤＮＡ配列を示す。
配列番号１３４は、Ｎ末端システインをコードするコドンが存在しない、Ｂ４４遺伝子のＤＮＡ配列を示す。
配列番号１３５は、Ｎ末端システインが存在しない、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、血清型Ｂ、２０８６バリアントＡ０５のアミノ酸配列を示す。
配列番号１３６は、ニューモリソイドおよび非脂質化Ａ１２ポリペプチド（ＰＬＹ−Ａ１２）のアミノ酸配列を示す。
配列番号１３７は、配列番号１３６の１位におけるＮ末端メチオニンが除去されている、ニューモリソイドおよび非脂質化Ａ１２ポリペプチド（ＰＬＹ−Ａ１２）のアミノ酸配列を示す。
配列番号１３８は、ニューモリソイドおよび非脂質化Ｂ０１ポリペプチド（ＰＬＹ−Ｂ０１）のアミノ酸配列を示す。
配列番号１３９は、配列番号１３８の１位におけるＮ末端メチオニンが除去されている、ニューモリソイドおよび非脂質化Ｂ０１ポリペプチド（ＰＬＹ−Ｂ０１）のアミノ酸配列を示す。
配列番号１４０は、ニューモリソイドおよび非脂質化Ｂ０９ポリペプチド（ＰＬＹ−Ｂ０９）のアミノ酸配列を示す。
配列番号１４１は、配列番号１４０の１位におけるＮ末端メチオニンが除去されている、ニューモリソイドおよび非脂質化Ｂ０９ポリペプチド（ＰＬＹ−Ｂ０９）のアミノ酸配列を示す。
配列番号１４２は、ニューモリソイドおよび非脂質化Ｂ２４ポリペプチド（ＰＬＹ−Ｂ２４）のアミノ酸配列を示す。
配列番号１４３は、配列番号１４２の１位におけるＮ末端メチオニンが除去されている、ニューモリソイドおよび非脂質化Ｂ２４ポリペプチド（ＰＬＹ−Ｂ２４）のアミノ酸配列を示す。
配列番号１４４は、ニューモリソイドおよび非脂質化Ｂ４４ポリペプチド（ＰＬＹ−Ｂ４４）のアミノ酸配列を示す。
配列番号１４５は、配列番号１４４の１位におけるＮ末端メチオニンが除去されている、ニューモリソイドおよび非脂質化Ｂ４４ポリペプチド（ＰＬＹ−Ｂ４４）のアミノ酸配列を示す。
配列番号１４６は、ＧＮＡ２０９１ポリペプチドのアミノ酸配列を示す。
配列番号１４７は、配列番号１４６の１位におけるＮ末端メチオニンが除去されている、ＧＮＡ２０９１ポリペプチドのアミノ酸配列を示す。
配列番号１４８は、ＧＮＡ２０９１および非脂質化Ａ０５ポリペプチド（ＧＮＡ２０９１−Ａ０５）のアミノ酸配列を示す。
配列番号１４９は、配列番号１４８の１位におけるＮ末端メチオニンが除去されている、ＧＮＡ２０９１および非脂質化Ａ０５ポリペプチド（ＧＮＡ２０９１−Ａ０５）のアミノ酸配列を示す
配列番号１５０は、化膿連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）由来の連鎖球菌Ｃ５ａペプチダーゼ（ＳＣＰ）のアミノ酸配列を示す。
配列番号１５１は、配列番号１５０の１位におけるＮ末端メチオニンが除去されている、ＳＣＰのアミノ酸配列を示す。
配列番号１５２は、ＳＣＰおよび非脂質化Ａ０５ポリペプチド（ＳＣＰ−Ａ０５）のアミノ酸配列を示す。
配列番号１５３は、配列番号１５２の１位におけるＮ末端メチオニンが除去されている、ＳＣＰおよび非脂質化Ａ０５ポリペプチド（ＳＣＰ−Ａ０５）のアミノ酸配列を示す。
配列番号１５４は、ＣＲＭ１９７のアミノ酸配列を示す。
配列番号１５５は、配列番号１５４の１位におけるＮ末端メチオニンが除去されている、ＣＲＭ１９７のアミノ酸配列を示す。
配列番号１５６は、システインが１位に存在する、配列番号５と同様のＡ０５ポリペプチドのアミノ酸配列を示す。
配列番号１５７は、システインが２位に存在する、配列番号５と同様のＡ０５ポリペプチドのアミノ酸配列を示す。
配列番号１５８は、システインが６位に存在する、配列番号５と同様のＡ０５ポリペプチドのアミノ酸配列を示す。
本発明者らは、とりわけ、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドおよび担体ポリペプチドを含む分子および／または組成物を発見した。この分子および／または組成物は、遺伝子融合によって、もしくはコンジュゲーションによって作製され得、または合成的に作製され得る。
本発明のポリペプチドおよび本発明のコンジュゲートは、驚くべきことに、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する広い免疫応答の有効な誘導を可能にする。一部の実施形態では、本発明の融合ポリペプチドおよびコンジュゲートは、担体ポリペプチドの非存在下でＯＲＦ２０８６ポリペプチドを含む組成物と比較して、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する免疫応答の誘導において増強された有効性を呈する。例えば、本発明者らは、融合ポリペプチドが広い適用範囲をもたらすことができ、例えば、融合ポリペプチドが１種の髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株由来のＯＲＦ２０８６ポリペプチドを含むときでさえ、複数のＬＰ２０８６バリアント株に対する殺菌抗体を誘発することを発見した。本発明の組成物の増強された有効性は、担体ポリペプチドの非存在下でＯＲＦ２０８６ポリペプチドを含む組成物と比較して、対象に投与されるＯＲＦ２０８６ポリペプチドの用量または濃度を低減することを可能にし得る。本発明の組成物の増強された有効性はまた、ワクチン生産のコストを最小限にするのに役立ち、広い範囲の血清型に効力をもたらす設計を可能にする。
Ａ）単離ポリペプチドおよび融合ポリペプチド
一態様では、本発明は、担体ポリペプチドのアミノ酸配列およびＯＲＦ２０８６ポリペプチドのアミノ酸配列を含む単離ポリペプチドに関する。一実施形態では、単離ポリペプチドは、合成的に構築されたポリペプチドである。好適な実施形態では、単離ポリペプチドは、作動可能に連結されたポリペプチドを含む融合ポリペプチドである。所与の単離および／または融合ポリペプチドの少なくとも１種のポリペプチド成分は、担体ポリペプチド、またはその活性バリアントもしくは断片を含み、これは、ＯＲＦ２０８６ポリペプチド、またはその活性バリアントもしくは断片に作動可能に連結している。
本明細書において、「融合ポリペプチド」または「融合タンパク質」は、少なくとも２つのポリペプチドのインフレーム遺伝子連結を有するポリペプチドを指す。転写／翻訳後、単一のポリペプチドが作製される。したがって、複数のポリペプチドまたはこれらの断片が、単一のポリペプチド中に組み込まれ得る。複数の形態の融合ポリペプチドが、本明細書に開示されており、以下で詳細に論じられている。
「作動可能に連結された」は、２つ以上のエレメント間の機能的な連結を指す。例えば、２つのポリペプチド間の作動可能な連結は、両方のポリペプチドを一緒にインフレームで融合して単一の融合ポリペプチドを生じさせることができる。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドおよび担体ポリペプチドは、互いにインフレームで融合されている。
１）ＯＲＦ２０８６ポリペプチド。単離ポリペプチドは、任意のＯＲＦ２０８６ポリペプチドを含み得る。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、サブファミリーＡポリペプチドである。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、サブファミリーＢポリペプチドである。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、脂質化されている。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、脂質化されていない。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、脂質化されておらず、ピルビン酸化されていない。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ａ０４である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ａ０５である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ａ０６である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ａ０７である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ａ１２である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ａ１５である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ａ１９である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ａ２０である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ａ０１である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ａ２２である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ａ２９である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ｂ０１である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ｂ０２である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ｂ０９である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ｂ１５である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ｂ１６である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ｂ２２である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ｂ２４である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ｂ４４である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ａ６２である。好ましくは、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ａ０５である。ＯＲＦ２０８６ポリペプチドを以下でより詳細に記載する。ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、ＷＯ２０１２０３２４８９および米国特許公開第ＵＳ２０１２００９３８５２号に記載されており、これらのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、ＷＯ２０１３１３２４５２および米国特許公開ＵＳ２０１３０２４３８０７号にも記載されており、これらのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。
２）担体ポリペプチド。単離ポリペプチドは、任意の担体ポリペプチドを含み得る。好ましくは、担体ポリペプチドは、対応する野生型担体ポリペプチドと比較して、無毒化されており、または毒性の低下を呈する。一実施形態では、担体ポリペプチドは、サイトリソイドである。好適な実施形態では、サイトリソイドは、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）由来のニューモリシンポリペプチド、ウェルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）由来のペルフリンゴリシンＯポリペプチド、ストレプトコッカス・インターメディウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｓ）由来のインターメディリシンポリペプチド、バチルス・アルベイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｌｖｅｉ）由来のアルベオリシンポリペプチド、炭疽菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ）由来のアンスロリシンポリペプチド、バチルス・セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ）由来の推定上のセレオリシンポリペプチド、リステリア・イバノビイ（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｉｖａｎｏｖｉｉ）由来のイバノリシンＯポリペプチド、アルカノバクテリウム・ピオゲネス（Ａｒｃａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）由来のピオリシンポリペプチド、リステリア・ゼーリゲリ（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｓｅｅｌｉｇｅｒｉ）由来のゼーリゲリオリシンＯポリペプチド、化膿連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）由来のストレプトリジンＯポリペプチド、ストレプトコッカス・スイス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｕｉｓ）由来のスイリシンポリペプチド、破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ）由来のテタノリジンポリペプチド、リステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）由来のリステリオリシンＯポリペプチド、ストレプトコッカス・エクイシミリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉｓｉｍｉｌｉｓ）由来のストレプトリジンＯポリペプチド、Ｓ．カニス（Ｓ．ｃａｎｉｓ）由来のストレプトリジンＯポリペプチド、バチルス・チューリンゲンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）由来のチューリンギオリシンＯポリペプチド、Ｂ．ラテロスポルス（Ｂ．ｌａｔｅｒｏｓｐｏｒｕｓ）由来のラテルスポロリシンＯポリペプチド、ボツリヌス菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ）由来のボツリノリジンポリペプチド、クロストリジウム・ショウベイ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｃｈａｕｖｏｅｉ）由来のショウベオリシンポリペプチド、Ｃ．バイファーメンタンス（Ｃ．ｂｉｆｅｒｍｅｎｔａｎｓ）由来のバイファーメントリシンポリペプチド、クロストリジウム・ソルデリイ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｓｏｒｄｅｌｌｉｉ）由来のソルデリリシンポリペプチド、ヒストリチクム菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｈｉｓｔｉｏｌｙｔｉｃｕｍ）由来のヒストリチコリシンポリペプチド、クロストリジウム・ノビイ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｎｏｖｙｉ）由来のノビリシンポリペプチド、またはクロストリジウム・セプチカム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｓｅｐｔｉｃｕｍ）由来のセプチコリシンＯポリペプチドに由来する。
担体タンパク質の追加の例としては、化膿連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）由来の連鎖球菌Ｃ５ａペプチダーゼ（ＳＣＰ）、ナイセリア由来のＧＮＡ２０９１（アクセサリータンパク質９３６としても公知）、およびＣＲＭ１９７がある。担体タンパク質のさらなる例および説明は、セクションＣにおいて以下で提供されている。
好適な実施形態では、サイトリソイドは、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）由来のニューモリシンポリペプチドに由来する。より好適な実施形態では、サイトリソイドは、配列番号１と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれより高い配列同一性を有する配列を含む。最も好適な実施形態では、サイトリソイドは、配列番号１を含む。
別の実施形態では、担体ポリペプチドは、対応する野生型担体ポリペプチドと比較して無毒化されており、または毒性の低下を呈し、破傷風毒素（ＴＴ）、熱帯熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）スポロゾイト周囲タンパク質、Ｂ型肝炎表面抗原、Ｂ型肝炎核コアポリペプチド、インフルエンザ菌（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）基質ポリペプチド、インフルエンザ菌（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）赤血球凝集素、ジフテリアトキソイド、ジフテリアトキソイド変異体ＣＲＭ１９７、Ｂ群髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）外膜ポリペプチド複合体（ＯＭＰＣ）、サイトリソイド、肺炎球菌毒素ニューモリシン、ウシ型結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｏｖｉｓ）由来の熱ショックポリペプチド、らい菌（Ｍ．ｌｅｐｒａｅ）由来の熱ショックポリペプチド、コレラトキソイド、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＬＴ、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＳＴ、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）由来の外毒素Ａ、肺炎球菌表面ポリペプチドＡ、肺炎球菌アドヘシンポリペプチド（ＰｓａＡ）、Ａ群またはＢ群連鎖球菌由来のＣ５ａペプチダーゼ、インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）ポリペプチドＤ、オボアルブミン、キーホールリンペットヘモシニアン（ＫＬＨ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、ツベルクリンの精製ポリペプチド誘導体（ＰＰＤ）、ＰｏｒＢ（髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）由来）、およびこれらの誘導体、バリアント、または断片からなる群から選択される。
一実施形態では、融合ポリペプチドは、ＣＲＭ１９７を含まない。担体ポリペプチドは、以下でより詳細に記載されている。
３）アセンブリー：融合ポリペプチドは、直接的なもの、すなわち、経験的なリンカー分子の非存在下におけるものであり得、または融合は、リンカー分子によるものであってもよい。例えば、融合ポリペプチドは、ポリペプチド成分、例えば、融合ポリペプチドのポリペプチド間のリンカーペプチド、または親和性精製のためのペプチドタグ（例えば、ＮもしくはＣ末端における）などを含み得る。例示的なリンカーペプチドとしては、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ（ＧＳＧ）リンカーがある。リンカー分子は、１個または複数のアミノ酸残基、典型的には約２〜約３０個のアミノ酸残基、好ましくは３〜２５個の残基を含み得る。好適な実施形態では、融合ポリペプチドは、リンカーペプチドを含まない。リンカーを含まない例示的な融合ポリペプチドは、例えば、配列番号２におけるものなど、担体ポリペプチドおよびＯＲＦ２０８６ポリペプチドをこの順序で含む融合ポリペプチドである。追加の例としては、ＰＬＹ−Ａ１２（配列番号１２７）、ＰＬＹ−Ｂ０１（配列番号１３９）、ＰＬＹ−Ｂ０９（配列番号１４１）、ＰＬＹ−Ｂ２４（配列番号１４３）、ＰＬＹ−Ｂ４４（配列番号１４５）、ＧＮＡ２０９１−Ａ０５（配列番号１４９）、およびＳＣＰ−Ａ０５（配列番号１５３）がある。
融合ポリペプチドは、様々な組合せでアセンブルされ得る。担体ポリペプチドは、融合ポリペプチドのＮ末端もしくはＣ末端に存在してもよく、またはこれは、免疫原性細菌ポリペプチドに隣接している、例えば、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドに隣接していてもよい。ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、担体ポリペプチドのＮ末端またはＣ末端に融合され得る。例えば、一実施形態では、融合ポリペプチドは、担体ポリペプチド、それが作動可能に連結したＯＲＦ２０８６ポリペプチドをこの順序で含む。好適な実施形態では、融合ポリペプチドは、担体ポリペプチドがＯＲＦ２０８６ポリペプチドに、前記順序で作動可能に連結しているとき、リンカーを含まない。このような好適な実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドの天然ストーク領域が、ポリペプチド間のリンカーとして機能を果たし得る。ＯＲＦ２０８６ポリペプチドのストーク領域は、ＷＯ２０１２０３２４８９および米国特許公開第ＵＳ２０１２００９３８５２号に記載されており、これらのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。
別の実施形態では、融合ポリペプチドは、ＯＲＦ２０８６ポリペプチド、それが作動可能に連結した担体ポリペプチドをこの順序で含む。好適な実施形態では、担体ポリペプチドがＯＲＦ２０８６ポリペプチドに、前記順序で作動可能に連結しているとき、リンカーを含む。
一実施形態では、融合ポリペプチドは、１つの担体ポリペプチドに連結された１つのＯＲＦ２０８６ポリペプチドを含むが、他のコンホメーションも本発明の射程内である。例えば、別の実施形態では、融合ポリペプチドは、最大で１、２、３、４、または５つの免疫原性細菌ポリペプチドを含む。別の実施形態では、融合ポリペプチドは、最大で１、２、３、４、または５つの担体ポリペプチドを含む。
一部の実施形態では、融合ポリペプチドは、第３のまたはさらなるポリペプチドをさらに含む。第３のまたはさらなるポリペプチドの源として、それだけに限らないが、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）を挙げることができる。一実施形態では、第３のポリペプチドは、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドまたは担体ポリペプチドにインフレームで融合される。別の実施形態では、複数の担体ポリペプチド、またはこれらのバリアントもしくは断片が融合ポリペプチド中に含まれているとき、第３のポリペプチドは、融合ポリペプチドのＮ末端もしくはＣ末端に位置していてもよく、またはこれは、担体タンパク質ポリペプチドに隣接しているように、融合ポリペプチド中の内部に位置していてもよい。一実施形態では、融合ポリペプチドは、肺炎球菌に由来するポリペプチド配列を含む。別の実施形態では、融合ポリペプチドは、肺炎球菌に由来するポリペプチド配列を含まない。
好ましくは、融合ポリペプチドは、担体ポリペプチドが由来する細菌種と異なる細菌種に由来するポリペプチドを含む。したがって、一実施形態では、担体タンパク質は、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドと、かつ融合ポリペプチド中に含まれる任意の追加のポリペプチドと非相同である。ポリペプチドを参照した「非相同」は、異なるタンパク質および／または異なる細菌種が起源であるポリペプチドである。
４）例示的な単離および／または融合ポリペプチド
一態様では、本発明は、ニューモリソイド（例えば、配列番号１など）ならびに非脂質化ＯＲＦ２０８６ポリペプチド（例えば、配列番号４２〜６１から選択されるアミノ酸配列を有する任意の１つのポリペプチド、および以下のセクションＤ「ＯＲＦポリペプチド」に記載した任意の１つのポリペプチドなど）のアミノ酸配列を含む単離ポリペプチドに関する。例えば、一実施形態では、単離ポリペプチドは、ＰＬＹ−Ａ１２（配列番号１３６）を生成するためのニューモリソイド（配列番号１）および非脂質化Ａ１２（配列番号４７）を含む。別の実施形態では、単離ポリペプチドは、ＰＬＹ−Ｂ０１（配列番号１３８）を生成するためのニューモリソイド（配列番号１）および非脂質化Ｂ０１（配列番号５３）を含む。別の実施形態では、単離ポリペプチドは、ＰＬＹ−Ｂ０９（配列番号１４０）を生成するためのニューモリソイド（配列番号１）および非脂質化Ｂ０９（配列番号５５）を含む。別の実施形態では、単離ポリペプチドは、ＰＬＹ−Ｂ２４（配列番号１４２）を生成するためのニューモリソイド（配列番号１）および非脂質化Ｂ２４（配列番号５９）を含む。別の実施形態では、単離ポリペプチドは、ＰＬＹ−Ｂ４４（配列番号１４４）を生成するためのニューモリソイド（配列番号１）および非脂質化Ｂ４４（配列番号６０）を含む。
ａ）ＰＬＹおよびＡ０５：一態様では、本発明は、ニューモリソイドおよび非脂質化Ａ０５ポリペプチドのアミノ酸配列を含む単離ポリペプチドに関する。一実施形態では、ニューモリソイドは、配列番号１に示したアミノ酸配列を含む。好ましくは、ニューモリソイドは、配列番号３に示したＤＮＡ配列によってコードされる。一実施形態では、Ａ０５ポリペプチドは、配列番号５に示したアミノ酸配列を含む。一実施形態では、単離ポリペプチドは、融合ポリペプチドである。
一実施形態では、融合ポリペプチドは、担体ポリペプチド、それが作動可能に連結したＯＲＦ２０８６ポリペプチドをこの順序で含む。例えば、一実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２に示したアミノ酸配列（ＰＬＹ−Ａ０５）を含む。一実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号４に示したＤＮＡ配列によってコードされる。
別の実施形態では、融合ポリペプチドは、ＯＲＦ２０８６ポリペプチド、それが作動可能に連結した担体ポリペプチドをこの順序で含む。例えば、一実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号８に示したアミノ酸配列（Ａ０５−ＰＬＹ）を含む。一実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号７に示したＤＮＡ配列によってコードされる。
別の実施形態では、融合ポリペプチドは、リンカーペプチドをさらに含む。一実施形態では、リンカーは、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ（ＧＳＧ）ペプチドを含む。配列番号８に示したアミノ酸配列を有する融合ポリペプチドは、ＧＳＧリンカーを含む。
ｂ）ＣＲＭ１９７およびＡ０５：
一態様では、本発明は、ＣＲＭ１９７（例えば、配列番号１５５など）ならびに非脂質化ＯＲＦ２０８６ポリペプチド（例えば、配列番号４２〜６１から選択されるアミノ酸配列を有する任意の１つのポリペプチド、および以下のセクションＤ「ＯＲＦポリペプチド」に記載した任意の１つのポリペプチドなど）のアミノ酸配列を含む単離ポリペプチドに関する。
一態様では、本発明は、ＣＲＭ１９７および非脂質化Ａ０５ポリペプチドのアミノ酸配列を含む単離ポリペプチドに関する。一実施形態では、ＣＲＭ１９７は、配列番号１０に示したアミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＣＲＭ１９７は、配列番号１５５に示したアミノ酸配列を含む。好ましくは、ＣＲＭ１９７は、配列番号９に示したＤＮＡ配列によってコードされる。一実施形態では、Ａ０５ポリペプチドは、配列番号５に示したアミノ酸配列を含む。一実施形態では、単離ポリペプチドは、融合ポリペプチドである。
一実施形態では、融合ポリペプチドは、担体ポリペプチド、それが作動可能に連結したＯＲＦ２０８６ポリペプチドをこの順序で含む。例えば、一実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１４に示したアミノ酸配列（ＣＲＭ１９７−Ａ０５）を含む。一実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１３に示したＤＮＡ配列によってコードされる。
別の実施形態では、融合ポリペプチドは、ＯＲＦ２０８６ポリペプチド、それが作動可能に連結した担体ポリペプチドをこの順序で含む。例えば、一実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１６に示したアミノ酸配列（Ａ０５−ＣＲＭ１９７）を含む。一実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１５に示したＤＮＡ配列によってコードされる。
さらなる実施形態では、融合ポリペプチドは、リンカーペプチドをさらに含む。一実施形態では、リンカーは、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ（ＧＳＧ）ペプチドを含む。配列番号１６に示したアミノ酸配列を有する融合ポリペプチドは、ＧＳＧリンカーを含む。
一態様では、本発明は、ＣＲＭ１９７の断片および非脂質化Ａ０５ポリペプチドのアミノ酸配列を含む単離ポリペプチドに関する。一実施形態では、ＣＲＭ１９７の断片（例えば、配列番号１０に示したＣＲＭ１９７のアミノ酸残基１〜１９３；ＤＴ−Ａ領域）は、配列番号１２に示したアミノ酸配列を含む。好ましくは、ＣＲＭ１９７の断片は、配列番号１１に示したＤＮＡ配列によってコードされる。一実施形態では、Ａ０５ポリペプチドは、配列番号５に示したアミノ酸配列を含む。一実施形態では、単離ポリペプチドは、融合ポリペプチドである。
一実施形態では、融合ポリペプチドは、ＣＲＭ１９７の断片、それが作動可能に連結したＯＲＦ２０８６ポリペプチドをこの順序で含む。例えば、一実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１８に示したアミノ酸配列（ＤＴ−Ａ−Ａ０５）を含む。一実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１７に示したＤＮＡ配列によってコードされる。
ｃ）ＧＮＡ２０９１およびＡ０５：
一態様では、本発明は、ＧＮＡ２０９１（例えば、配列番号１４７など）ならびに非脂質化ＯＲＦ２０８６ポリペプチド（例えば、配列番号４２〜６１から選択されるアミノ酸配列を有する任意の１つのポリペプチド、および以下のセクションＤ「ＯＲＦポリペプチド」に記載した任意の１つのポリペプチドなど）のアミノ酸配列を含む単離ポリペプチドに関する。
一態様では、本発明は、ＧＮＡ２０９１および非脂質化Ａ０５ポリペプチドのアミノ酸配列を含む単離ポリペプチドに関する。一実施形態では、ＧＮＡ２０９１は、配列番号１４７に示したアミノ酸配列を含む。一実施形態では、Ａ０５ポリペプチドは、配列番号５に示したアミノ酸配列を含む。一実施形態では、単離ポリペプチドは、融合ポリペプチドである。
一実施形態では、融合ポリペプチドは、ＧＮＡ２０９１、それが作動可能に連結したＯＲＦ２０８６ポリペプチドをこの順序で含む。例えば、一実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１４９に示したアミノ酸配列（ＧＮＡ２０９１−Ａ０５）を含む。
ｄ）ＳＣＰおよびＡ０５：
一態様では、本発明は、ＳＣＰ（例えば、配列番号１５１など）ならびに非脂質化ＯＲＦ２０８６ポリペプチド（例えば、配列番号４２〜６１から選択されるアミノ酸配列を有する任意の１つのポリペプチド、および以下のセクションＤ「ＯＲＦポリペプチド」に記載した任意の１つのポリペプチドなど）のアミノ酸配列を含む単離ポリペプチドに関する。
一態様では、本発明は、ＳＣＰおよび非脂質化Ａ０５ポリペプチドのアミノ酸配列を含む単離ポリペプチドに関する。一実施形態では、ＳＣＰは、配列番号１５１に示したアミノ酸配列を含む。一実施形態では、Ａ０５ポリペプチドは、配列番号５に示したアミノ酸配列を含む。一実施形態では、単離ポリペプチドは、融合ポリペプチドである。
一実施形態では、融合ポリペプチドは、ＳＣＰ、それが作動可能に連結したＯＲＦ２０８６ポリペプチドをこの順序で含む。例えば、一実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１５３に示したアミノ酸配列（ＳＣＰ−Ａ０５）を含む。
５）融合ポリペプチドを含む免疫原性組成物：
一態様では、本発明は、上述した単離および／または融合ポリペプチドを含む免疫原性組成物に関する。免疫原性組成物は、薬学的に許容できる賦形剤をさらに含む。
一実施形態では、免疫原性組成物は、ａ）髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ａの莢膜糖のコンジュゲート；ｂ）髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｃの莢膜糖のコンジュゲート；ｃ）髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｗ１３５の莢膜糖のコンジュゲート；およびｄ）髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｙの莢膜糖のコンジュゲートから選択される少なくとも１種のコンジュゲートをさらに含む。髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）の莢膜糖のこのようなコンジュゲートは、当技術分野で公知である。髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜糖コンジュゲートおよび多糖コンジュゲートの説明は、以下に記載されている。
６）免疫応答：一態様では、融合ポリペプチドは、哺乳動物における髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する免疫応答を誘導する。一実施形態では、融合ポリペプチドは、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドと相同であるＯＲＦ２０８６バリアントを発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ株に対する殺菌抗体を誘導する。例えば、担体タンパク質およびＡ０５ポリペプチドを含む融合ポリペプチドは、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ Ａ０５発現株に対する殺菌抗体を誘導し得る。別の実施形態では、融合ポリペプチドは、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドと非相同であるＯＲＦ２０８６バリアントを発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ株に対する殺菌抗体応答を誘導する。例えば、担体タンパク質およびＡ０５ポリペプチドを含む融合ポリペプチドは、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ Ａ２２発現株に対する殺菌抗体応答を誘導し得る。
意外にも、本発明者らは、非脂質化ＯＲＦ２０８６ポリペプチドおよび担体ポリペプチドを含む融合ポリペプチドが、同一条件下で評価されるとき、担体ポリペプチドの非存在下で同じＯＲＦ２０８６ポリペプチドの非脂質化形態を含む組成物によって誘導される免疫応答より良好である哺乳動物における免疫応答を誘導し得ることを発見した。
一実施形態では、融合ポリペプチドによって誘導される免疫応答は、同一条件下で評価されるとき、担体ポリペプチドの非存在下で対応する非脂質化ＯＲＦ２０８６ポリペプチドを投与される哺乳動物における免疫応答に等しい。
別の実施形態では、融合ポリペプチドによって誘導される免疫応答は、同一条件下で評価されるとき、担体ポリペプチドの非存在下で対応する脂質化ＯＲＦ２０８６ポリペプチドを投与される哺乳動物における免疫応答に等しい。
一実施形態では、融合ポリペプチドによって誘導される免疫応答は、同一条件下で評価されるとき、担体ポリペプチドの非存在下で対応する非脂質化ＯＲＦ２０８６ポリペプチドを投与される哺乳動物における免疫応答より大きい。例えば、本発明のポリペプチドによって誘導される免疫応答は、少なくとも１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、またはそれより大きい場合がある。
別の実施形態では、融合ポリペプチドによって誘導される免疫応答は、同一条件下で評価されるとき、担体ポリペプチドの非存在下で対応する脂質化ＯＲＦ２０８６ポリペプチドを投与される哺乳動物における免疫応答より大きい。例えば、本発明のポリペプチドによって誘導される免疫応答は、少なくとも１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、またはそれより大きい場合がある。
別の実施形態では、融合ポリペプチドに対する免疫応答は、同一条件下で評価されるとき、担体ポリペプチドの非存在下で対応する脂質化ＯＲＦ２０８６ポリペプチドを投与される哺乳動物における免疫応答より、最大で３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、または５％小さい。
さらなる態様では、本発明は、哺乳動物における髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する免疫応答を誘導するための方法に関する。免疫応答は、任意の１つの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型、または髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型（例えば、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｗ１３５、Ｘ、および／もしくはＹ）の組合せに対するものであり得る。本方法は、哺乳動物に有効量の記載した単離ポリペプチドを投与するステップを含む。一実施形態では、単離ポリペプチドは、上述した融合ポリペプチドを含む。別の実施形態では、本方法は、哺乳動物に記載した単離および／または融合ポリペプチドを含む有効量の免疫原性組成物を投与するステップを含む。本方法によって誘導される免疫応答は、殺菌抗体を含み得る。殺菌抗体応答は、以下に記載されている。
Ｂ）コンジュゲート
一態様では、本発明は、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドおよび担体ポリペプチドを含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、担体ポリペプチドに連結されたＯＲＦ２０８６ポリペプチドのコンジュゲートを含む。ポリペプチドは、ポリペプチドが生理的条件下で安定であるように、任意の結合を介して連結され得る。一実施形態では、ポリペプチドは、共有結合によって連結される。別の実施形態では、ポリペプチドは、非共有結合によって連結される。コンジュゲートは、当技術分野で公知の方法を使用して調製され得る。
１）ＯＲＦ２０８６ポリペプチド。コンジュゲートは、任意のＯＲＦ２０８６ポリペプチドを含み得る。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、サブファミリーＡポリペプチドである。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、サブファミリーＢポリペプチドである。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、脂質化されている。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、脂質化されていない。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、脂質化されておらず、ピルビン酸化されていない。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ａ０４である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ａ０５である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ａ０６である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ａ０７である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ａ１２である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ａ１５である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ａ１９である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ａ２０である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ａ０１である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ａ２２である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ａ２９である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ｂ０１である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ｂ０２である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ｂ０９である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ｂ１５である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ｂ１６である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ｂ２２である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ｂ２４である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ｂ４４である。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ａ６２である。好ましくは、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、Ａ０５である。ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、以下でより詳細に記載されている。
好適な実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、ＷＯ２０１３１３２４５２および米国特許公開第ＵＳ２０１３０２４３８０７号に記載されているように、非ピルビン酸化非脂質化ＯＲＦ２０８６ポリペプチドであり、これらの文献のそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。用語「非ピルビン酸化」は、ピルビン酸含量を有さないポリペプチドを指す。ピルビン酸含量を有する非脂質化ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、典型的には、対応する野生型ポリペプチドと比較して＋７０または＋７１の質量シフトを呈した。一実施形態では、本発明のポリペプチドは、質量分析法によって測定されるとき、対応する野生型非脂質化ポリペプチドと比較して＋７０または＋７１の質量シフトを呈さない。別の実施形態では、本発明のポリペプチドは、質量分析法によって測定されるとき、Ｎ末端の１位において最初のシステインを有する対応する非脂質化ポリペプチドと比較して＋７０または＋７１の質量シフトを呈さない。
２）担体ポリペプチド。コンジュゲートは、任意の担体ポリペプチドを含み得る。好ましくは、担体ポリペプチドは、対応する野生型担体ポリペプチドと比較して、無毒化されており、または毒性の低下を呈する。一実施形態では、担体ポリペプチドは、サイトリソイドである。好適な実施形態では、サイトリソイドは、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）由来のニューモリシンポリペプチド、ウェルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）由来のペルフリンゴリシンＯポリペプチド、ストレプトコッカス・インターメディウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｓ）由来のインターメディリシンポリペプチド、バチルス・アルベイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｌｖｅｉ）由来のアルベオリシンポリペプチド、炭疽菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ）由来のアンスロリシンポリペプチド、バチルス・セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ）由来の推定上のセレオリシンポリペプチド、リステリア・イバノビイ（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｉｖａｎｏｖｉｉ）由来のイバノリシンＯポリペプチド、アルカノバクテリウム・ピオゲネス（Ａｒｃａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）由来のピオリシンポリペプチド、リステリア・ゼーリゲリ（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｓｅｅｌｉｇｅｒｉ）由来のゼーリゲリオリシンＯポリペプチド、化膿連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）由来のストレプトリジンＯポリペプチド、ストレプトコッカス・スイス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｕｉｓ）由来のスイリシンポリペプチド、破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ）由来のテタノリジンポリペプチド、リステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）由来のリステリオリシンＯポリペプチド、ストレプトコッカス・エクイシミリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉｓｉｍｉｌｉｓ）由来のストレプトリジンＯポリペプチド、ストレプトコッカス・カニス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｃａｎｉｓ）由来のストレプトリジンＯポリペプチド、バチルス・チューリンゲンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）由来のチューリンギオリシンＯポリペプチド、ブレビバチルス・ラテロスポルス（Ｂｒｅｖｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｌａｔｅｒｏｓｐｏｒｕｓ）由来のラテルスポロリシンＯポリペプチド、ボツリヌス菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ）由来のボツリノリジンポリペプチド、クロストリジウム・ショウベイ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｃｈａｕｖｏｅｉ）由来のショウベオリシンポリペプチド、クロストリジウム・バイファーメンタンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｉｆｅｒｍｅｎｔａｎｓ）由来のバイファーメントリシンポリペプチド、クロストリジウム・ソルデリイ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｓｏｒｄｅｌｌｉｉ）由来のソルデリリシンポリペプチド、ヒストリチクム菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｈｉｓｔｉｏｌｙｔｉｃｕｍ）由来のヒストリチコリシンポリペプチド、クロストリジウム・ノビイ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｎｏｖｙｉ）由来のノビリシンポリペプチド、またはクロストリジウム・セプチカム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｓｅｐｔｉｃｕｍ）由来のセプチコリシンＯポリペプチドに由来する。
好適な実施形態では、サイトリソイドは、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）由来のニューモリシンポリペプチドに由来する。より好適な実施形態では、サイトリソイドは、配列番号１と少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含む。
別の実施形態では、担体ポリペプチドは、対応する野生型担体ポリペプチドと比較して無毒化されており、または毒性の低下を呈し、破傷風毒素（ＴＴ）、熱帯熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）スポロゾイト周囲タンパク質、Ｂ型肝炎表面抗原、Ｂ型肝炎核コアポリペプチド、インフルエンザ菌（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）基質ポリペプチド、インフルエンザ菌（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）赤血球凝集素、ジフテリアトキソイド、ジフテリアトキソイド変異体ＣＲＭ１９７、Ｂ群髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）外膜ポリペプチド複合体（ＯＭＰＣ）、サイトリソイド、肺炎球菌毒素ニューモリシン、ウシ型結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｏｖｉｓ）由来の熱ショックポリペプチド、らい菌（Ｍ．ｌｅｐｒａｅ）由来の熱ショックポリペプチド、コレラトキソイド、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＬＴ、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＳＴ、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）由来の外毒素Ａ、肺炎球菌表面ポリペプチドＡ、肺炎球菌アドヘシンポリペプチド（ＰｓａＡ）、Ａ群またはＢ群連鎖球菌種由来のＣ５ａペプチダーゼ、インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）ポリペプチドＤ、オボアルブミン、キーホールリンペットヘモシニアン（ＫＬＨ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、ツベルクリンの精製ポリペプチド誘導体（ＰＰＤ）、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）由来のＰｏｒＢ、およびこれらの誘導体、バリアント、または断片からなる群から選択される。好適な実施形態では、コンジュゲートは、ＣＲＭ１９７を含む。担体ポリペプチドは、以下でより詳細に記載されている。
担体タンパク質のさらなる例としては、化膿連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）由来の連鎖球菌Ｃ５ａペプチダーゼ（ＳＣＰ）、ナイセリア由来のＧＮＡ２０９１（アクセサリータンパク質９３６としても公知）、およびＣＲＭ１９７がある。担体タンパク質のさらなる例および説明は、セクションＣにおいて以下で提供されている。
３）アセンブリー：一実施形態では、コンジュゲートは、担体ポリペプチドに直接連結されたＯＲＦ２０８６ポリペプチドを含む。例えば、コンジュゲートのポリペプチドは、リンカー分子の非存在下でカップリングされている。別の実施形態では、コンジュゲートは、担体ポリペプチドに間接的に連結されたＯＲＦ２０８６ポリペプチドを含む。例えば、担体ポリペプチドは、中間体に連結されている場合があり、その中間体は、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドに連結されている。
一実施形態では、コンジュゲートは、１つの担体ポリペプチドに連結された１つのＯＲＦ２０８６ポリペプチドを含むが、他のコンホメーションも本発明の射程内である。例えば、別の実施形態では、コンジュゲートは、最大で１、２、３、４、または５、６、７、８、９、または１０個の免疫原性細菌ポリペプチドを含む。一実施形態では、コンジュゲートは、最大で１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のＯＲＦ２０８６ポリペプチドを含む。別の実施形態では、コンジュゲートは、最大で１、２、３、４、または５つの担体ポリペプチドを含む。
一部の実施形態では、コンジュゲートは、第３または後続のさらなるポリペプチドをさらに含む。第３のまたはさらなるポリペプチドの源として、それだけに限らないが、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）を挙げることができる。一実施形態では、第３のポリペプチドは、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドまたは担体ポリペプチドにインフレームで融合される。一実施形態では、コンジュゲートは、肺炎球菌に由来するポリペプチド配列を含む。別の実施形態では、コンジュゲートは、肺炎球菌に由来するポリペプチド配列を含まない。
非ピルビン酸化非脂質化ＯＲＦ２０８６タンパク質は、ＷＯ２０１３１３２４５２および米国特許公開第ＵＳ２０１３０２４３８０７号に記載されており、これらのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。非脂質化ＯＲＦ２０８６タンパク質の発現後のピルビン酸化（ｐｙｒｕｖｙｌａｔｉｏｎ）修飾の可能性を除去または低減する方法もこれらの中に記載されている。
ピルビン酸化を除去するための追加の方法は、硫酸亜鉛でのタンパク質の処理を含む。
さらに別の方法は、Ｎ末端の１位における最初のシステインを欠失させ、Ｎ末端の任意のアミノ酸残基をシステイン残基で置き換える、非脂質化ＯＲＦ２０８６タンパク質の遺伝子改変を含む。例えば、一実施形態では、非脂質化ＯＲＦ２０８６タンパク質は、対応する野生型非脂質化ＯＲＦ２０８６タンパク質と比較して、システイン残基がＯＲＦ２０８６タンパク質のＮ末端の１位に存在せず、セリン残基がシステイン残基で置き換えられているアミノ酸配列を含む。
好ましくは、システイン残基によって置き換えられるアミノ酸残基は、Ｎ末端の最初の残基から最大で２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、または５個のアミノ酸である。
例えば、一実施形態では、非脂質化ＯＲＦ２０８６タンパク質は、対応する野生型非脂質化ＯＲＦ２０８６タンパク質と比較して、システイン残基がＯＲＦ２０８６タンパク質のＮ末端の１位に存在せず、２位の残基がシステイン残基で置き換えられているアミノ酸配列を含む。
好ましくは、システイン残基によって置き換えられるアミノ酸残基は、Ｎ末端の最初の残基から最大で２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、または５個のアミノ酸に位置したセリン残基である。例えば、非脂質化ＯＲＦ２０８６タンパク質は、対応する野生型非脂質化ＯＲＦ２０８６タンパク質と比較して、システイン残基がＯＲＦ２０８６タンパク質のＮ末端の１位に存在せず、２位のセリン残基がシステイン残基で置き換えられているアミノ酸配列を含む。例えば、配列番号５、配列番号１５６、および配列番号１５７を比較されたい。
別の実施形態では、非脂質化ＯＲＦ２０８６タンパク質は、対応する野生型非脂質化ＯＲＦ２０８６タンパク質と比較して、システイン残基がＯＲＦ２０８６タンパク質のＮ末端の１位に存在せず、６位のセリン残基がシステイン残基で置き換えられているアミノ酸配列を含む。例えば、配列番号５、配列番号１５６、および配列番号１５８を比較されたい。
好ましくは、コンジュゲートは、担体ポリペプチドが由来する細菌種と異なる細菌種に由来するポリペプチドを含む。したがって、一実施形態では、担体タンパク質は、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドと、かつコンジュゲート中に含まれる任意の追加のポリペプチドと非相同である。ポリペプチドを参照した「非相同」は、異なるタンパク質および／または異なる細菌種が起源であるポリペプチドである。
架橋剤を通じてでもよい担体ポリペプチドとＯＲＦ２０８６ポリペプチドとの間のコンジュゲーションは、当技術分野で公知の方法に従って行われ得る。好ましくは、担体ポリペプチドとＯＲＦ２０８６ポリペプチドとの間の結合は、求核中心（例えば、タンパク質のリシンまたはシステイン残基）との反応に適した少なくとも１つの活性化された末端を有する活性化された担体ポリペプチドを使用して達成される。
一実施形態では、担体タンパク質は、リシン残基への非特異的ＮＨＳ−エステル反応によってマレイミドで活性化されている。次いでＯＲＦ２０８６ポリペプチドの単一のＮ末端システインが、担体タンパク質のマレイミドにコンジュゲートされる。
当技術分野で公知であるように、マレイミドは、スルフヒドリル基と反応して安定なチオエーテル結合を形成する。Ｎ−エチルマレイミド（ＮＥＭ）は、チオール反応性試薬の一例である。例えば、ニューモリシンタンパク質は、ＮＥＭでのタンパク質の誘導体化、その後のＳＭ（ＰＥＧ）４での活性化によってコンジュゲーションのために調製され得る。
別の実施形態では、担体ポリペプチドは、スルホスクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（スルホ−ＳＭＣＣ）で活性化される。スルホ−ＳＭＣＣは、水溶性アミン−スルフヒドリル架橋剤である。これは、アミン反応性Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳエステル）およびスルフヒドリル反応性マレイミド基を含有する。一例では、ＳＣＰタンパク質は、スルホ−ＳＭＣＣで活性化され得る。
４）コンジュゲートを含む免疫原性組成物：一態様では、本発明は、上述したコンジュゲートを含む免疫原性組成物に関する。免疫原性組成物は、薬学的に許容できる賦形剤をさらに含む。
一実施形態では、免疫原性組成物は、ａ）髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ａの莢膜糖のコンジュゲート；ｂ）髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｃの莢膜糖のコンジュゲート；ｃ）髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｗ１３５の莢膜糖のコンジュゲート；およびｄ）髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｙの莢膜糖のコンジュゲートから選択される少なくとも１種のコンジュゲートをさらに含む。髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）の莢膜糖のこのようなコンジュゲートは、当技術分野で公知である。髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜糖コンジュゲートおよび多糖コンジュゲートの説明は、以下に記載されている。
５）免疫応答：一態様では、コンジュゲートは、哺乳動物における髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する免疫応答を誘導する。一実施形態では、コンジュゲートは、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドと相同である髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂバリアントに対する殺菌抗体を誘導する。例えば、担体タンパク質およびＡ０５ポリペプチドを含むコンジュゲートは、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ Ａ０５発現株に対する殺菌抗体を誘導し得る。別の実施形態では、コンジュゲートは、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドと非相同である髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂバリアントに対する殺菌抗体を誘導する。例えば、担体タンパク質およびＡ０５ポリペプチドを含むコンジュゲートは、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ Ａ２２発現株に対する殺菌抗体を誘導し得る。
一実施形態では、非脂質化ＯＲＦ２０８６ポリペプチドおよび担体ポリペプチドを含むコンジュゲートは、同一条件下で評価されるとき、担体ポリペプチドの非存在下で同じＯＲＦ２０８６ポリペプチドの脂質化形態を含む組成物によって誘導される免疫応答と同等である哺乳動物における免疫応答を誘導し得る。
一実施形態では、コンジュゲートによって誘導される免疫応答は、同一条件下で評価されるとき、担体ポリペプチドの非存在下で対応する非脂質化ＯＲＦ２０８６ポリペプチドを含む組成物を投与される哺乳動物の免疫応答に等しい。
別の実施形態では、コンジュゲートによって誘導される免疫応答は、同一条件下で評価されるとき、担体ポリペプチドの非存在下で対応する脂質化ＯＲＦ２０８６ポリペプチドを含む組成物を投与される哺乳動物の免疫応答に等しい。
別の実施形態では、コンジュゲートによって誘導される免疫応答は、同一条件下で評価されるとき、担体ポリペプチドの非存在下で対応する脂質化ＯＲＦ２０８６ポリペプチドを含む組成物を投与される哺乳動物の免疫応答より大きい。例えば、コンジュゲートによって誘導される免疫応答は、少なくとも１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、またはそれより大きい場合がある。
別の実施形態では、コンジュゲートによって誘導される免疫応答は、同一条件下で評価されるとき、担体ポリペプチドの非存在下で対応する非脂質化ＯＲＦ２０８６ポリペプチドを含む組成物を投与される哺乳動物の免疫応答より大きい。例えば、コンジュゲートによって誘導される免疫応答は、少なくとも１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、またはそれより大きい場合がある。
さらなる実施形態では、コンジュゲートの免疫応答は、同一条件下で評価されるとき、担体ポリペプチドの非存在下で対応する脂質化ＯＲＦ２０８６ポリペプチドを含む組成物を投与される哺乳動物の免疫応答より最大で３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、または５％小さい。
別の態様では、本発明は、哺乳動物における髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する免疫応答を誘導するための方法に関する。免疫応答は、任意の１つの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型、または髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型（例えば、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｗ１３５、Ｘ、および／もしくはＹ）の組合せに対するものであり得る。本方法は、哺乳動物に有効量の記載した単離ポリペプチドを投与するステップを含む。一実施形態では、単離ポリペプチドは、上述したコンジュゲートを含む。別の実施形態では、本方法は、哺乳動物に記載した単離ポリペプチドおよび／またはコンジュゲートを含む有効量の免疫原性組成物を投与するステップを含む。本方法によって誘導される免疫応答は、殺菌抗体を含み得る。殺菌抗体応答は、以下に記載されている。
Ｃ）担体ポリペプチド
担体タンパク質またはポリペプチドは、担体ポリペプチドに連結された分子に向けられる免疫応答を誘導するポリペプチド実体である。担体ポリペプチドを分子（例えば、ＯＲＦ２０８６ポリペプチド）に連結することによって、抗原性ポリペプチドの免疫原性を増大させることが可能である。
例示的な担体ポリペプチドは、以下のうちの無毒化された形態を含む：破傷風毒素（ＴＴ）、熱帯熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）スポロゾイト周囲タンパク質、Ｂ型肝炎表面抗原、Ｂ型肝炎核コアタンパク質、インフルエンザ菌（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）基質タンパク質、インフルエンザ菌（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）赤血球凝集素、ジフテリアトキソイド、ジフテリアトキソイド変異体ＣＲＭ１９７、Ｂ群髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）外膜タンパク質複合体（ＯＭＰＣ）、サイトリソイド、肺炎球菌毒素ニューモリシン、ウシ型結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｏｖｉｓ）由来の熱ショックタンパク質、らい菌（Ｍ．ｌｅｐｒａｅ）由来の熱ショックタンパク質、コレラトキソイド、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＬＴ、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＳＴ、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）由来の外毒素Ａ、肺炎球菌表面プロテインＡ、肺炎球菌アドヘシンプロテイン（ＰｓａＡ）、Ａ群またはＢ群連鎖球菌由来のＣ５ａペプチダーゼ、インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）プロテインＤ、オボアルブミン、キーホールリンペットヘモシニアン（ＫＬＨ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、ツベルクリンの精製タンパク質誘導体（ＰＰＤ）、ＰｏｒＢ（髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）由来）、およびこれらの誘導体、バリアント、または断片。担体ポリペプチドは、好ましくは、担体ポリペプチドの対応する野生型より低い毒性を呈する。
ジフテリアトキソイド：好適な実施形態では、担体ポリペプチドは、ジフテリアトキソイド、またはそのバリアントもしくは断片、より好ましくは、ＣＲＭ１９７である。ＣＲＭ１９７は、ジフテリア毒素の無毒性バリアント（すなわち、トキソイド）である。一実施形態では、ＣＲＭ１９７は、カザミノ酸および酵母エキス系培地中で増殖させたジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）株Ｃ７（β１９７）の培養物から単離される。別の実施形態では、ＣＲＭ１９７は、米国特許第５，６１４，３８２号に記載の方法に従って組換えで調製される。一部の実施形態では、ＣＲＭ１９７は、シュードモナス・フルオレッセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）中で調製される。当技術分野で公知の他のジフテリアトキソイド、例えば、ＣＲＭ１７６、ＣＲＭ２２８、ＣＲＭ４５、ＣＲＭ９、ＣＲＭ１０２、ＣＲＭ１０３、およびＣＲＭ１０７なども使用され得る。
ジフテリアトキソイドは、全長ジフテリアトキソイドポリペプチド、その活性バリアントもしくは断片、またはジフテリアトキソイドの任意の免疫原性断片を含み得る。例示的なジフテリアトキソイドとしては、米国特許第４，７０９，０１７号あるいは米国特許第４，９５０，７４０号に開示された、対応する野生型ジフテリア毒素と比較して、欠失、あるいはＧｌｕ１４８のＡｓｐ、Ｇｌｎ、もしくはＳｅｒへの、および／またはＡｌａ１５８のＧｌｙへの変異；米国特許第５，９１７，０１７号または米国特許第６，４５５，６７３号に開示された残基Ｌｙｓ５１６、Ｌｙｓ５２６、Ｐｈｅ５３０および／またはＬｙｓ５３４のうちの少なくとも１つまたは複数の変異、ならびに他の変異を有するトキソイド；あるいは米国特許第５，８４３，７１１号に開示された断片がある。
追加の例示的なジフテリアトキソイドは、「ＤＴ−Ａ」領域として公知の、配列番号１２に示したＣＲＭ１９７のアミノ酸１〜１９３を含むＣＲＭの断片を含む。
一実施形態では、ＣＲＭ１９７タンパク質は、配列番号１０と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれより高い配列同一性を有する配列を含む。最も好適な実施形態では、担体タンパク質は、配列番号１０を含む。
別の好適な実施形態では、ＣＲＭ１９７タンパク質は、配列番号１５５と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれより高い配列同一性を有する配列を含む。最も好適な実施形態では、ＣＲＭ１９７タンパク質は、配列番号１５５を含む。
サイトリソイド：別の好適な実施形態では、担体ポリペプチドは、サイトリソイドまたはそのバリアントもしくは断片である。より好適な実施形態では、担体ポリペプチドは、無毒化されており、または肺炎球菌毒素ニューモリシンの対応する野生型形態より低い毒性を呈する肺炎球菌毒素ニューモリシンである。
本明細書において、「サイトリソイド」は、修飾細胞溶解素であって、タンパク質の修飾が、免疫原性活性を保持しながら、サイトリソイドタンパク質の毒性、オリゴマー化、および／または溶血性を不活化、無毒化、または低減する、修飾細胞溶解素を指す。
細胞溶解素は、少なくともクロストリジウム属、連鎖球菌属、リステリア属、バチルス属、およびアルカノバクテリウム属に由来する様々な種によって生成される孔形成毒素のファミリーと関連する。細胞溶解素は、溶血性タンパク質として公知であり得る。例示的な野生型細胞溶解素のアミノ酸配列は、配列番号８８〜１０１に示されている。このような細胞溶解素は、コレステロール結合細胞溶解素である。
細胞溶解素タンパク質の毒性の低減（すなわち、毒性、オリゴマー化、および／または溶血の低減）は、対応する野生型細胞溶解素タンパク質と比較してなど、適切な対照と比べて、少なくとも１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、またはそれを超える統計的に有意な低下を含む。細胞溶解素活性をアッセイする方法は、当技術分野で公知である。
細胞溶解素の毒性活性（すなわち、オリゴマー化および／または溶血）を不活化または低減し得る修飾は、当技術分野で公知である。これらの修飾は、アミノ酸置換、欠失、および／または付加であり得る。このような修飾は、当技術分野で公知である。いくつかの例としては、それだけに限らないが、野生型ニューモリシンタンパク質の１４４〜１６１由来のアミノ酸残基に対応する領域内に変異（例えば、置換または欠失）を有するサイトリソイドを開示しているＷＯ２００５／１０８４１９およびＷＯ２００５／１０８５８０に記載されたものがある。ニューモリシンのこの領域は、細胞溶解素の中で共有されているコンセンサス配列を有する。変異体細胞溶解素は、野生型細胞溶解素と比較してオリゴマー化および／または溶血性活性が低減しており、したがって毒性が低い。変異体は、野生型ニューモリシン配列のアミノ酸１４４〜１６１に対応する領域内でアミノ酸残基の１個または複数の置換または欠失を有し得る。したがって、サイトリソイドは、野生型ニューモリシンのアミノ酸１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、または１６１に対応するアミノ酸残基の１個または複数において変異を有し得る。
野生型ニューモリシンの残基１４４〜１６１に対応する配列番号８８〜１０１によって記載される細胞溶解素の領域を以下に列挙する。
Figure 2016515104
Figure 2016515104
ある特定の好適な変異体細胞溶解素タンパク質は、野生型ニューモリシン配列のアミノ酸残基１４４〜１５１に対応する領域内の２つの隣り合ったアミノ酸の置換または欠失によって野生型タンパク質と異なる。このような二重変異体の例は、バリン１４４とプロリン１４５、アラニン１４６とアルギニン１４７、メチオニン１４８とグルタミン１４９、またはチロシン１５０とグルタミン酸１５１に対応するアミノ酸、すなわち、上記表に示した対応するアミノ酸の置換または欠失を含有するものである。好適な実施形態では、サイトリソイドは、対応する野生型細胞溶解素と比較してアラニン１４６とアルギニン１４７の欠失を含む。
変異体は、ペルフリンゴリシンのＹ１８１に対応する残基において置換を有し得る。この残基は、ニューモリシンのＹ１５０に対応する。このような変異体は、ペルフリンゴリシン、または他の細胞溶解素タンパク質に由来し得る。
溶血活性が低減された細胞溶解素のさらなる変異体は、ＷＯ９０／０６９５１に記載されており、野生型ニューモリシン配列のアミノ酸２５７〜２９７、３６７〜３９７、または４２４〜４３７に対応する領域の少なくとも１つにおいて、特に、ニューモリシン配列のアミノ酸３６７、３８４、３８５、４２８、４３３、および４３５に対応する位置において少なくとも１つのアミノ酸置換または欠失を含有する。したがって、本明細書に記載の方法および組成物で使用される細胞溶解素タンパク質は、ニューモリシン配列のアミノ酸１４４〜１６１に対応する領域中の変異に加えて、またはその代わりに１つまたは複数のこのような変異を含み得る。
細胞溶解素タンパク質は、野生型配列と比べて他の変異を含み得る。これらの変異は、細胞溶解素タンパク質の１つまたは複数の生物活性、例えば、溶血活性、オリゴマー化活性、もしくは補体を活性化する能力などをそれ自体で低減することができ、またはこれらは、表現型的にサイレントであり得る。
欠失および置換は、毒性が低減された本発明の変異タンパク質をもたらすのに使用され得る変異の例である。非保存的置換は、変異体の毒性を低減するのに特に適している場合があり、理由は、非保存的変異を有する変異体は、保存的置換を有するものと比べて野生型レベルの機能を保持する可能性が低いためである。当技術分野におけるサイトリソイドの追加の限定されない例は、米国特許出願公開第２００９／０２８５８４６Ａ１号（ＷＯ２０１２／１３４９７５）および米国特許出願公開第２０１０／０１６６７９５号（ＷＯ２００７／１４４６４７）に開示されている。
様々なサイトリソイドの活性バリアントまたは断片は、これらが担体ポリペプチド活性を維持する点で、本明細書に提供されるサイトリソイドポリペプチドと、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれより高い配列同一性を含み得る。サイトリソイドの活性バリアントは、当技術分野で公知である。例えば、配列番号１１７〜１２０および配列番号１を参照。例えば、米国特許出願第２００９／０２８５８４６Ａ１号および米国特許出願第２０１０／０１６６７９５号も参照。
担体ポリペプチド活性を保持する野生型または変異体細胞溶解素タンパク質の断片も使用され得る。このような断片は、これらが担体ポリペプチド活性を保持する限り、例えば、長さが少なくとも５０アミノ酸、長さが少なくとも１００アミノ酸、長さが少なくとも２００アミノ酸、長さが少なくとも３００アミノ酸、または長さが少なくとも４００アミノ酸であり得る。
ニューモリソイド：好適な実施形態では、担体ポリペプチドは、ニューモリソイドポリペプチドまたはそのバリアントもしくは断片を含む。ニューモリシンは、孔形成毒素であり、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）によって生成される主要な細胞溶解素である。野生型または天然ニューモリシンのアミノ酸配列は、配列番号２１に示されている。
本明細書において、「ニューモリソイド」は、修飾ニューモリシン（ニューモリシントキソイド）であって、タンパク質の修飾が、対応する野生型ニューモリシンと比較して、依然として担体ポリペプチド活性を保持しながら、ニューモリソイドタンパク質の毒性、オリゴマー化、溶血性および／または補体活性化性を不活化または低減する、修飾ニューモリシン（ニューモリシントキソイド）を指す。
本明細書に提供される様々な組成物中に用いられ得る例示的なニューモリソイドは、例えば、ＷＯ２００５／１０８４１９、ＷＯ２００５／１０８５８０、ＷＯ９０／０６９５１、米国特許出願第２００９／０２８５８４６Ａ１号、および米国特許出願第２０１０／０１６６７９５号に記載されている。ＷＯ２００５／１０８４１９およびＷＯ２００５／１０８５８０には、野生型ニューモリシンタンパク質のアミノ酸１４１〜１６１の領域内で変異（例えば、置換または欠失）を有するニューモリソイドが開示されている。これらの変異体は、野生型ニューモリシンと比較して、毒性、オリゴマー化および／または溶血活性が低減されており、したがって、毒性が低い。
変異体は、野生型ニューモリシン配列１４４〜１６１の１個または複数のアミノ酸の置換または欠失を有し得る。したがって、ニューモリソイドは、野生型ニューモリシンのアミノ酸残基１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、または１６１の１個または複数において変異を有し得る。さらに、溶血活性が低減されており、かつ野生型ニューモリシンのアミノ酸２５７〜２９７、３６７〜３９７、または４２４〜４３７に対応する領域の少なくとも１つにおいて少なくとも１つのアミン酸置換または欠失を有するニューモリソイドが、ＷＯ９０／０６９５１に記載されている。
ニューモリソイドのさらなる例としては、配列番号１、またはその活性バリアントもしくは断片がある。別の例には、対応する野生型ニューモリシン（配列番号２１）と比較して、アミノ酸４６０位のリシンのアスパラギン酸残基への変異を有するニューモリソイド（配列番号１１７）が含まれる。このようなバリアントニューモリソイドは、米国特許出願第２００９／０２８５８４６Ａ１号に開示されている。配列番号１１７のバリアントは、本明細書に提供されており、配列番号１１８に示されている。活性バリアントは、配列番号１１７と比較したとき、２０８位のリシンからアルギニンへのアミノ酸変化を含む。
配列番号１１９に示したニューモリソイド、またはその活性バリアントもしくは断片は、野生型ニューモリシン配列のアミノ酸３８５位のアスパラギン酸の代わりにアスパラギンの置換、ならびにアラニン１４６およびアルギニン１４７の欠失を含む。配列番号１１９に示したこのニューモリソイドは、溶血性および補体活性化の両方を欠乏している場合があり、米国特許出願第２０１０／０１６６７９５号に開示されている。
配列番号１２０に示したニューモリソイド、またはその活性バリアントもしくは断片は、野生型ニューモリシン配列のアミノ酸４３３位のトリプトファンの代わりにフェニルアラニンのアミノ酸置換を含む。配列番号１２０に示したこのニューモリソイドは、溶血性を欠乏している場合があり、米国特許第６７１６４３２号に開示されている。
最も好適な実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１を有するニューモリソイド、またはその活性バリアントもしくは断片を含む。配列番号１のポリペプチドは、野生型ニューモリソイドと比較してＡ１４６Ｒ１４７欠失を含む。
したがって、ニューモリソイドの活性バリアントまたは断片が本明細書に提供されている。このような活性バリアントは、配列番号８８〜１２０または配列番号２１と少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれより高い配列同一性を含み得る。ニューモリシンの活性バリアントは、参照により本明細書に組み込まれている、例えば、ＵＳ２０１０／０１６６７９５およびＵＳ２００９／０２８５８４６Ａ１にも記載されている。当技術分野では、本明細書の他の箇所で記載されているように、このようなバリアントの調製に関するガイダンスが提供されている。したがって、一実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号８８〜１０１、配列番号２１、もしくは配列番号１に示したアミノ酸配列のいずれか１つに示したニューモリソイド、または配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有するその活性バリアントを含む。
一実施形態では、担体タンパク質は、化膿連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）由来の連鎖球菌Ｃ５ａペプチダーゼ（ＳＣＰ）に由来する。好適な実施形態では、担体タンパク質は、配列番号１５１と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれより高い配列同一性を有する配列を含む。最も好適な実施形態では、担体タンパク質は、配列番号１５１を含む。
一実施形態では、担体タンパク質は、ＧＮＡ２０９１に由来する。好適な実施形態では、担体タンパク質は、配列番号１４７と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれより高い配列同一性を有する配列を含む。最も好適な実施形態では、担体タンパク質は、配列番号１４７を含む。
Ｄ）ＯＲＦ２０８６ポリペプチド
用語「ＯＲＦ２０８６」は、本明細書において、ナイセリア種細菌由来のオープンリーディングフレーム２０８６を指す。ナイセリアＯＲＦ２０８６、それからコードされるタンパク質、これらのタンパク質の断片、およびこれらのタンパク質を含む免疫原性組成物は、当技術分野で公知であり、例えば、ＷＯ２００３／０６３７６６に、ならびに米国特許出願公開第ＵＳ２００６０２５７４１３、同第ＵＳ２００９０２０２５９３号、ＷＯ２０１２０３２４８９、および米国特許出願公開第ＵＳ２０１２００９３８５２号に記載されており、これらのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、ＷＯ２０１３１３２４５２および米国特許公開第ＵＳ２０１３０２４３８０７号にも記載されており、これらのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。ＯＲＦ２０８６ポリペプチドの例としては、配列番号５、１９、２２〜６５に示したアミノ酸配列のいずれか１つなどの配列番号２２〜８７に示した配列のいずれか１つを有するポリペプチドがある。
用語「Ｐ２０８６」は一般に、ＯＲＦ２０８６にコードされるタンパク質を指す。「２０８６」の前の「Ｐ」は、「タンパク質」の略語である。本発明のＰ２０８６タンパク質は、脂質化されていても、脂質化されていなくてもよい。「ＬＰ２０８６」および「Ｐ２０８６」は典型的には、それぞれ２０８６タンパク質の脂質化および非脂質化形態を指す。本発明のＰ２０８６タンパク質は、組換え体であり得る。「ｒＬＰ２０８６」および「ｒＰ２０８６」は典型的には、それぞれ組換え２０８６タンパク質の脂質化および非脂質化形態を指す。「２０８６」は、Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）としても公知である。
用語「野生型非脂質化ＯＲＦ２０８６ポリペプチド」または「野生型非脂質化２０８６ポリペプチド」または「野生型非脂質化ポリペプチド」は、本明細書において、自然において見つかる対応する成熟脂質化ＯＲＦ２０８６ポリペプチドのアミノ酸配列と同一であるアミノ酸配列を有するＯＲＦ２０８６ポリペプチドを指す。非脂質化分子と脂質化分子との間の唯一の差異は、野生型非脂質化ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＮ末端システインにおいてトリパルミトイル脂質尾部で脂質化されていないことである。
用語「Ｎ末端システイン」は、ポリペプチドのＮ末端またはＮ末端尾部におけるシステイン（Ｃｙｓ）残基を指す。より具体的には、「Ｎ末端システイン」は、本明細書において、当技術分野で公知であるように、ＬＰ２０８６リポタンパク質がリパルミトイル脂質尾部で脂質化されているＮ末端システインを指す。
一実施形態では、本発明のポリペプチドおよび組成物は、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドを含み、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドのＮ末端でシステイン残基を含まない。Ｎ末端システインが存在しないＯＲＦ２０８６ポリペプチドの例としては、配列番号４２〜６５および配列番号１３１〜１３４に記載のポリペプチドがある。
一実施形態では、単離ポリペプチドは、システインがＯＲＦ２０８６ポリペプチドのＮ末端において存在しないＯＲＦ２０８６ポリペプチドを含む。
別の実施形態では、融合ポリペプチドは、システインがＯＲＦ２０８６ポリペプチドのＮ末端において存在しないＯＲＦ２０８６ポリペプチドを含む。
さらに別の実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチド−担体ポリペプチドコンジュゲート中のＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドのＮ末端においてシステインを含まない。
用語「Ｇｌｙ／Ｓｅｒストーク」は、本明細書において、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドのＮ末端における連続したＧｌｙおよびＳｅｒ残基を指す。Ｇｌｙ／Ｓｅｒストーク中に、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５個のＧｌｙおよびＳｅｒ残基、好ましくは５から１２個の間のＧｌｙおよびＳｅｒ残基が存在し得る。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、少なくとも２個および最大で１５個の連続したＧｌｙおよび／またはＳｅｒ残基を含む。ＯＲＦ２０８６ポリペプチドバリアントの天然Ｇｌｙ／Ｓｅｒストークは、ＷＯ２０１２０３２４８９および米国特許公開第ＵＳ２０１２００９３８５２号の図２Ａ〜２Ｃ中の下線が引かれた配列によって表され、これらの文献のそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。
一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドのＧｌｙ／Ｓｅｒストークは、野生型または天然ＯＲＦ２０８６ポリペプチドと比較して、修飾を含む。ＯＲＦ２０８６ポリペプチドの天然Ｇｌｙ／Ｓｅｒストークへの修飾の例としては、Ｇｌｙおよび／またはＳｅｒ残基の欠失、ＧｌｙのＳｅｒ残基との置換、またはＳｅｒ残基のＧｌｙ残基との置換、Ｇｌｙおよび／もしくはＳｅｒ残基の付加、ならびにこれらの任意の組合せがある。天然Ｇｌｙ／Ｓｅｒストーク領域の修飾を含むＯＲＦ２０８６ポリペプチドの例としては、例えば、配列番号６２〜６５および配列番号１３１〜１３４によって記載されるポリペプチドがある。
当技術分野で公知であるように、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドの非脂質化形態は、元のリーダー配列を欠いている場合があり、または宿主細胞内での脂肪酸アシル化の部位を指定しない配列の部分で置き換えられたリーダー配列を含み得る。例えば、ＷＯ２００３／０６３７６６、米国特許第８１０１１９４号、ＷＯ２０１２０３２４８９、および米国特許公開第ＵＳ２０１２００９３８５２号を参照。これらのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。非脂質化ＯＲＦ２０８６ポリペプチドの例としては、配列番号２２〜６５に示した配列のいずれか１つを有するポリペプチドがある。好適な実施形態では、非脂質化ＯＲＦ２０８６ポリペプチドとしては、配列番号４２〜６５に示した配列のいずれか１つを有するポリペプチドがある。
一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、配列番号６６〜８７に示したポリヌクレオチド配列のいずれか１つによってコードされる。好適な実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドのＮ末端またはアミノ酸残基１位においてシステインをコードしない配列によってコードされる。例示的なポリヌクレオチド配列としては、配列番号１３１〜１３４がある。
別の好適な実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、配列番号６６〜８７に示したポリヌクレオチド配列のいずれか１つのコドン最適化配列によってコードされる。ＯＲＦ２０８６ポリペプチドをコードするコドン最適化配列は、ＷＯ２０１２０３２４８９、米国特許公開第ＵＳ２０１２００９３８５２号、ＰＣＴ／ＩＢ２０１３／０５１７９１、および米国特許出願第１３／７８７５９４号に記載されており、これらのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。例示的なコドン最適化配列は、配列番号１２１〜１２９に示したポリヌクレオチド配列を含む。
ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）（血清型Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｗ−１３５、Ｘ、Ｙ、Ｚ、および２９Ｅ）、淋菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）、およびナイセリア・ラクタミカ（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｌａｃｔａｍｉｃａ）の株を含めたナイセリア属種、ならびに前記タンパク質の免疫原性部分および／または生物学的等価物に由来し得る。
ＯＲＦ２０８６ポリペプチドとしては、サブファミリーＡタンパク質、およびサブファミリーＢタンパク質、これらの免疫原性部分、および／またはこれらの生物学的等価物がある。ＯＲＦ２０８６ポリペプチドまたはこれらの等価物などは、脂質化されていても、脂質化されていなくてもよい。好ましくは、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、脂質化されていない。代わりに、免疫原性組成物は、脂質化および非脂質化ＯＲＦ２０８６ポリペプチドの組合せを含み得る。
ＯＲＦ２０８６サブファミリーＡタンパク質およびサブファミリーＢポリペプチドは、当技術分野で公知である。ＷＯ２００３／０６３７６６および米国特許第８１０１１９４号を参照。これらは、２０８６サブファミリーＡのタンパク質に関連するアミノ酸配列を代表するものとして、その中で配列番号２６０〜２７８を開示している。さらに、ＷＯ２００３／０６３７６６および米国特許第８１０１１９４号に開示の配列番号２７９〜２９９は、２０８６サブファミリーＢのタンパク質に関連するアミノ酸配列を代表する。ＷＯ２００３／０６３７６６および米国特許第８１０１１９４号はそれぞれ、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。ＯＲＦ２０８６サブファミリーＡおよびサブファミリーＢポリペプチドは、ＷＯ２０１２０３２４８９、米国特許公開第ＵＳ２０１２００９３８５２号、ＰＣＴ／ＩＢ２０１３／０５１７９１、現在、ＷＯ２０１３１３２４５２、および米国特許出願第１３／７８７５９４号、現在、公開第ＵＳ２０１３０２４３８０７号にも開示されており、これらのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。
一実施形態では、非脂質化ポリペプチドは、対応する脂質化ポリペプチドをコードする配列と少なくとも約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドのＮ末端において少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５個の連続したセリンおよび／またはグリシン残基を含む。好ましくは、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドのＮ末端において少なくとも３、４、５、６、７、８、９、または１０個、および最大で１５、１４、１３、１２、１１、または１０個の連続したセリンおよび／またはグリシン残基を含む。このような残基の存在は、融合ポリペプチドの構築を容易にすることができる。
例示的な実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、そのそれぞれの天然Ｇｌｙ／Ｓｅｒストーク領域を含む。例えば、Ｂ４４ポリペプチドは、ＷＯ２０１２０３２４８９および米国特許公開第ＵＳ２０１２００９３８５２号の図２Ｃ中で下線を引いて示されたストーク領域を含み、これらの文献のそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。例えば、配列番号４０の残基２〜１２および配列番号６０の残基１〜１１を参照。別の例として、Ａ１２ポリペプチドは、ＷＯ２０１２０３２４８９および米国特許公開第ＵＳ２０１２００９３８５２号の図２Ａ中に下線を引いて示されたストーク領域を含み、これらの文献のそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。例えば、配列番号２８の残基２〜７および配列番号４７の残基１〜６を参照。
一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、少なくとも約２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２５５、または２６０個の連続したアミノ酸、および最大で約２７０、２６９、２６８、２６７、２６６、２６５、２６４、２６３、２６０、２５９、２５８、２５７、２５６、または２５５個の連続したアミノ酸を含む。任意の最小値を任意の最大値と組み合わせて範囲を定義することができる。より好ましくは、ポリペプチドは、少なくとも２５４または２６２個の連続したアミノ酸を有する。一部の実施形態では、ポリペプチドは、最大で２５４個の連続したアミノ酸を有する。他の実施形態では、ポリペプチドは、最大で２６２個の連続したアミノ酸を有する。一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、対応するＯＲＦ２０８６ポリペプチドをコードする配列と少なくとも約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。例えば、例示的な実施形態では、Ａ６２ポリペプチドは、配列番号４１と少なくとも約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書において、用語「ピルビン酸化されていない」は、ピルビン酸含量をまったく有さないポリペプチドを指す。ピルビン酸含量を有する非脂質化ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、典型的には、対応する野生型ポリペプチドと比較して、＋７０の質量シフトを呈した。一実施形態では、本発明のポリペプチドは、質量分析法によって測定される場合、対応する野生型非脂質化ポリペプチドを比較して＋７０の質量シフトを呈さない。非ピルビン酸化ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、ＷＯ２０１２０３２４８９、米国特許公開第ＵＳ２０１２００９３８５２号、ＰＣＴ／ＩＢ２０１３／０５１７９１、および米国特許出願第１３／７８７５９４号にも記載されており、これらのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。
Ｅ）ポリヌクレオチド
一態様では、本発明は、本明細書に記載の単離ポリペプチドのいずれか１つをコードする単離ポリヌクレオチドに関する。一態様では、本発明は、本明細書に記載の融合ポリペプチドのいずれか１つをコードする単離ポリヌクレオチドに関する。一実施形態では、単離ポリヌクレオチド配列は、コドン最適化配列である。
一実施形態では、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、コドン最適化ポリヌクレオチド配列によってコードされる。ＯＲＦ２０８６ポリペプチドをコードするコドン最適化配列の例としては、配列番号１２１〜１２９に示した配列がある。好適な実施形態では、単離ポリペプチドは、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドをコードするコドン最適化ポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド配列によってコードされる。より好適な実施形態では、融合ポリペプチドは、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドをコードするコドン最適化ポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド配列によってコードされる。別の好適な実施形態では、担体−ＯＲＦ２０８６ポリペプチドコンジュゲート中のＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、コドン最適化ポリヌクレオチド配列によってコードされる。
Ｆ）ポリヌクレオチドおよびポリペプチドの断片
開示したポリヌクレオチドおよびポリペプチドの活性バリアントおよび断片も、本明細書に記載されている。「バリアント」は、実質的に同様の配列を指す。本明細書において、「バリアントポリペプチド」は、天然タンパク質の任意の位置における１個または複数のアミノ酸残基の修飾によって天然タンパク質に由来するポリペプチドを指す。修飾として、天然タンパク質のＮ末端および／もしくはＣ末端における１個もしくは複数のアミノ酸残基の欠失（いわゆる、トランケーション）、天然タンパク質中の１つもしくは複数の内部部位における１個もしくは複数のアミノ酸残基の欠失および／もしくは付加、または天然タンパク質中の１つもしくは複数の部位における１個もしくは複数のアミノ残基の置換を挙げることができる。バリアントポリペプチドは、天然ポリペプチドの所望の生物活性を保有し続け、すなわち、これらは、免疫原性である。本明細書に開示のポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列のバリアントは、典型的には、参照配列と少なくとも約６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれより高い配列同一性を有することになる。
用語「断片」は、指定数の連続したアミノ酸またはヌクレオチド残基を含むアミノ酸またはヌクレオチド配列の部分を指す。特定の実施形態では、本明細書に開示のポリペプチドの断片は、完全長ポリペプチドの生物活性を保持することができ、したがって免疫原性であり得る。ポリヌクレオチドの断片は、タンパク質の生物活性を保持するタンパク質断片をコードすることができ、したがって免疫原性であり得る。代わりに、ＰＣＲプライマーとして有用であるポリヌクレオチドの断片は一般に、生物活性を保持するタンパク質断片をコードしない。したがって、本明細書に開示のヌクレオチド配列の断片は、少なくとも約１５、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１１００、１２００、１３００、１４００、もしくは１５００個の連続したヌクレオチド、または最大で全長ポリヌクレオチドに及びうる。本明細書に開示のポリペプチド配列の断片は、少なくとも１０、１５、２０、２５、３０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、もしくは５００個の連続したアミノ酸、または最大で完全長ポリペプチド中に存在するアミノ酸の総数を含み得る。
Ｇ）髄膜炎菌コンジュゲート
一実施形態では、免疫原性組成物は、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ａの莢膜糖のコンジュゲート；髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｃの莢膜糖のコンジュゲート；髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｗ１３５の莢膜糖のコンジュゲート；および髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｙの莢膜糖のコンジュゲートからなる群から選択される少なくとも１種のコンジュゲートをさらに含む。
好適な実施形態では、免疫原性組成物は、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）の莢膜多糖のコンジュゲート、および担体タンパク質を含む。好ましくは、糖コンジュゲート中の担体タンパク質は、細菌毒素、例えば、ジフテリアもしくは破傷風毒素など、またはトキソイド、あるいはこれらの変異体である。最も好ましくは、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。例えば、一実施形態では、組成物は、（ａ）血清型Ａ髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）の莢膜多糖およびＣＲＭ１９７のコンジュゲート；（ｂ）血清型Ｃ髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）の莢膜多糖およびＣＲＭ１９７のコンジュゲート；（ｃ）血清型Ｗ１３５髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）の莢膜多糖およびＣＲＭ１９７のコンジュゲート；ならびに（ｄ）血清型Ｙ髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）の莢膜多糖およびＣＲＭ１９７のコンジュゲートから選択される少なくとも１種のコンジュゲートを含む。
血清型Ａ、Ｃ、Ｗ１３５、およびＹの莢膜糖は、特徴付けられており、当技術分野で公知であり、ＷＯ２０１２０３２４８９および米国特許公開第ＵＳ２０１２００９３８５２号に記載されており、これらの文献のそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。
Ｈ）殺菌免疫応答
別の態様では、本明細書に記載の単離ポリペプチドおよび組成物は、血清型Ｂ髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）由来のＯＲＦ２０８６ポリペプチドに対して、哺乳動物において殺菌免疫応答を誘発する。本組成物は、哺乳動物に投与された後、殺菌性抗髄膜炎菌抗体を誘導する能力を有し、好適な実施形態では、それぞれのサブファミリー由来のＬＰ２０８６バリアントを発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）の株に対して殺菌性である抗体を誘導することができる。殺菌応答に対するさらなる情報を以下に示す。
一実施形態では、本明細書に記載の単離ポリペプチドおよび／または組成物は、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドと相同であるＯＲＦ２０８６バリアントを発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ株に対して殺菌免疫応答を誘発する。好適な実施形態では、サブファミリーＡポリペプチドを含む組成物は、相同サブファミリーＡ ＬＰ２０８６バリアントを発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂの株に対して殺菌免疫応答を誘発する。別の好適な実施形態では、サブファミリーＡポリペプチドを含む組成物は、非相同サブファミリーＡ ＬＰ２０８６バリアントを発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂの株に対して殺菌免疫応答を誘発する。
別の好適な実施形態では、本明細書に記載の単離ポリペプチドおよび／または組成物は、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドと非相同であるＯＲＦ２０８６バリアントを発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ株に対して殺菌免疫応答を誘発する。
一実施形態では、本組成物は、非相同サブファミリーＬＰ２０８６バリアントを発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂの株に対して殺菌免疫応答を誘発する。例えば、サブファミリーＡポリペプチドを含む組成物は、サブファミリーＡまたはサブファミリーＢ ＬＰ２０８６バリアントを発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂの株に対して殺菌免疫応答を誘発し得る。
さらなる態様では、本明細書に記載の単離ポリペプチドおよび組成物は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）の血清型Ａ、血清型Ｂ、血清型Ｃ、血清型Ｗ１３５、血清型Ｘ、および／または血清型Ｙの株のうちの少なくとも１種に対して殺菌免疫応答を誘発する。好適な実施形態では、本組成物は、少なくとも髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）の血清型Ｂ、血清型Ｃ、および血清型Ｙに対して殺菌免疫応答を誘発する。
殺菌抗体は、ヒトにおける保護の指標であり、前臨床研究は、サロゲートとして機能を果たす。本明細書に記載の任意の新しい免疫原性組成物候補が好ましくは、これらの機能的な抗体を誘発する。
一実施形態では、殺菌抗体の免疫応答および／または誘導は、血清殺菌アッセイ（ＳＢＡ）によって測定される。例示的なＳＢＡは、以下に記載されている。
好適な実施形態では、本発明のポリペプチドおよび／または組成物は、哺乳動物において免疫応答を誘導し、応答は、本発明のポリペプチドおよび／または組成物の非存在下での哺乳動物における免疫応答より、少なくとも１倍の上昇、２倍の上昇、少なくとも３倍の上昇、もしくは好ましくは少なくとも４倍の上昇であり、またはそれより高い。例えば、一実施形態では、本発明のポリペプチドおよび／または組成物は、哺乳動物において免疫応答を誘導し、応答は、本発明のポリペプチドおよび／または組成物を投与する前の哺乳動物における免疫応答より、少なくとも１倍の上昇、２倍の上昇、３倍の上昇、もしくは好ましくは少なくとも４倍の上昇であり、またはそれより高い。例示的な実施形態では、配列番号２を含む単離ポリペプチドは、哺乳動物における免疫応答を誘導し、応答は、ポリペプチドの非存在下での哺乳動物における免疫応答より、少なくとも１倍、２倍、３倍、または好ましくは少なくとも４倍大きい。
一般的な記載
用語「哺乳動物」は、本明細書において、任意の哺乳動物、例えば、ヒト、マウス、ウサギ、または非ヒト霊長類などを指す。好適な実施形態では、哺乳動物は、ヒトである。
（実施例１）
Ａ０５を含む融合ポリペプチドのクローニングおよび発現
使用したｆＨＢＰ Ａ０５遺伝子を配列番号６（発現コンストラクトｐＥＢ０４２）に示す。
ＰＬＹ融合物の設計
これらの研究で使用したニューモリシンのバージョン（ＰＬＹ）をデルタ６（Δ６ＰＬＹ）と呼んだ。これは、アミノ酸残基の欠失Ａ１４６Ｒ１４７を含有する。結果として生じる遺伝子は、１４１０ｂｐ（配列番号３）および４７０アミノ酸（配列番号１）である。Ａ０５への２種のΔ６ＰＬＹ融合物を設計した。１つは、融合ポリペプチドのＮ末端においてΔ６ＰＬＹを有していた（配列番号４、ＤＮＡおよび配列番号２、タンパク質；図１Ａ）。Ａ０５のストーク領域は、タンパク質同士間の可動性リンカーとして機能を果たした。第２の融合物では、Ａ０５を、Ｎ末端に配置し、その後、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙリンカー（ＧＳＧ）を配置し、その後、ＰＬＹ遺伝子を配置した（配列番号７、ＤＮＡ；配列番号８、タンパク質、図１Ｂ）。
いくつかの追加のニューモリシン融合タンパク質コンストラクトを作製し、発現について検証した。これらの追加のコンストラクトは、可動性リンカーとしてそれぞれのｆＨＢＰバリアントのストーク領域を使用する。これらとしては、ＰＬＹ−Ａ１２（配列番号１３６）、ＰＬＹ−Ｂ０１（配列番号１３８）、ＰＬＹ−Ｂ０９（配列番号１４０）、ＰＬＹ−Ｂ２４（配列番号１４２）、ＰＬＹ−Ｂ４４（配列番号１４４）がある。
ＣＲＭ１９７−Ａ０５融合物の設計
ＣＲＭ１９７を、全長タンパク質（５３６アミノ酸、配列番号９、ＤＮＡ；配列番号１０、タンパク質）またはＤＴ−Ａ領域（ＣＲＭ１９７のアミノ酸１〜１９３；配列番号１１、ＤＮＡ；配列番号１２、タンパク質）の両方として使用した。全長ＣＲＭ１９７を使用して２種のＡ０５融合物、すなわち、（ｉ）Ａ０５に融合したＮ末端ＣＲＭ１９７（配列番号１３、ＤＮＡ；配列番号１４、タンパク質、図１Ｃ）、ならびに（ｉｉ）Ｎ末端Ａ０５、その後のＧＳＧリンカー、および次いでＣＲＭ１９７（配列番号１５、ＤＮＡ；配列番号１６；タンパク質、図１Ｄ）を作製した。一バージョンのＤＴ−Ａ−Ａ０５融合物を作製した：Ｃ末端でＡ０５に融合したＮ末端ＤＴ−Ａ（配列番号１７、ＤＮＡ；配列番号１８、タンパク質、図１Ｅ）。
代替のタンパク質担体を使用するＡ０５融合タンパク質コンストラクトの設計
追加のコンストラクトを設計して、Ａ０５ ｆＨＢＰバリアントと融合した代替のタンパク質担体を査定した。これらのタンパク質担体としては、（ｉ）髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）由来のＧＮＡ２０９１、および（ｉｉ）化膿連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）由来の連鎖球菌Ｃ５ａペプチダーゼ（ＳＣＰ）がある。前者の場合における融合タンパク質は、タンパク質同士間の可動性リンカーとしてＡ０５のストーク領域を使用して、Ｃ末端でＡ０５に融合したＮ末端におけるＧＮＡ２０９１（配列番号１４６）由来の１８０アミノ酸から構成されている（ＧＮＡ２０９１−Ａ０５ 配列番号１４８）。第２の例は、タンパク質同士間の可動性リンカーとしてＡ０５のストーク領域を使用して、Ｃ末端でＡ０５に融合したＮ末端におけるＳＣＰ（配列番号１５０）由来の９５０アミノ酸から構成されている（ＳＣＰ−Ａ０５ 配列番号１５２）。
これらの研究で使用した発現ベクター
最初の融合タンパク質を、ＩｎＦｕｓｉｏｎ（登録商標）（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）反応を介してＮｄｅＩ−ＢａｍＨＩ部位でｐＥＴ３０ａ中にクローニングした。融合物を６ベクターのパネル中に引き続きクローニングして異なるプロモーターを査定することによって、タンパク質発現を最適化した（ｒｈａＴ、ｌａｃ、およびアラビノースプロモーター）。ベクターは、翻訳開始を促進するシャインダルガーノ配列（Ｓｈｉｎｅ Ｄｅｌｇａｒｎｏ ｓｅｑｕｅｎｃｅ）の強度の点でも異なった。ベクターは、ｐＥＴ３０ａ骨格に基づき、Ｔ７プロモーターおよび調節遺伝子をこれらの特定のエレメントの代わりにする。
細胞系統および発現
すべての発現プラスミドを大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）中に形質転換した。発現株を、３０℃でＨｙＳｏｙ＋０．５％グルコースおよび５０μｇ／ｍｌカナマイシン中で一晩増殖させた。一晩培養物を、１：５０の希釈で新鮮なＨｙＳｏｙ培地＋５０μｇ／ｍｌカナマイシン中に播種した。細胞を３０℃または２０℃で増殖させた。ＯＤ６００約１．０で、培養物を適切な誘導因子で誘導し、同じ温度で一晩インキュベートした。細胞を集菌し、ＢＵＧＢＵＳＴＥＲ（商標）（ＥＭＤ）試薬の添加によって、または超音波処理、その後の遠心分離によって、試料を溶解度について評価した。全細胞溶解産物および可溶性／不溶性画分をＴｒｉｓ−Ｂｉｓ４〜１２％ゲル上で走らせ、クマシー染色で染色した。
結果
表１は、ＣＲＭ１９７−Ａ０５（配列番号１４）融合クローニングの結果を示す。一般に、ＣＲＭ１９７−Ａ０５クローンは、オープンリーディングフレーム内で複数の変異を有する生成物を与えた。すべての融合クローンが、１００％不溶性である組換えタンパク質を生成した。ＤＴ−Ａ−Ａ０５（配列番号１８）融合コンストラクトも、不溶性タンパク質を生成した。
表２は、Ｐｌｙ−Ａ０５融合タンパク質の結果を示す。３０℃でｐＥＴ３０ａからＰｌｙ−Ａ０５またはＡ０５−Ｐｌｙを発現させると、不溶性融合タンパク質が生成された一方、代替のベクターは、部分的に可溶性のタンパク質を生成した。特に、３０℃でｐＲＨＡＭ（ｐＤＤ１８）、ｐＲＡＭＥ（ｐＤＤ２１）、およびｐＤＫ３４７（ｐＤＤ２０）から発現されたＰｌｙ−Ａ０５融合タンパク質は、概ね可溶性であった（図２）。ｐＤＤ１８を発酵のために選択したが、使用した条件（Ａｐｏｌｌｏｎ培地、３０℃増殖、０．２％ラムノース誘導）により、不溶性タンパク質が生成された。ｐＤＤ１８、ｐＤＤ２０、およびｐＤＤ２１の小規模振盪フラスコ培養物を２０℃で増殖させて、より低い温度が融合タンパク質の溶解度を増強し得るか否かを判定した。ｐＤＤ２０と異なり、ｐＤＤ１８およびｐＤＤ２１培養物は、２０℃で検出可能な量のＰｌｙ−Ａ０５タンパク質を発現しなかった（図３）。したがって、ｐＤＤ２０の６つの１リットルフラスコ培養物を、タンパク質精製のために生成させた（図４）。ｐＤＤ２０から発現される融合タンパク質は、融合タンパク質のニューモリシン部分中に単一のアミノ酸変化（Ｌ３２Ｆ）を有する。
Figure 2016515104
Figure 2016515104
（実施例２）
血清殺菌アッセイ
機能的抗体価を、ワクチン中に含有されるものと相同または非相同の配列を有するＬＰ２０８６バリアントを発現する髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株に対する血清殺菌アッセイ（ＳＢＡ）によって判定した。
ＯＲＦ２０８６ワクチンで免疫されたマカクまたはウサギ由来の血清中の殺菌抗体を、ヒト補体を用いたＳＢＡを使用して検出した。ウサギ免疫血清またはマカク免疫血清を熱不活化して内因性の補体活性を除去し、引き続き、９６ウェルマイクロタイタープレート内のＣａ２＋およびＭｇ２＋を含むダルベッコＰＢＳ（Ｄ−ＰＢＳ）中で１：２に連続的に希釈して、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株に対する血清殺菌活性について試験した。アッセイで使用した細菌を、Ｋｅｌｌｏｇｇサプリメントを補充したＧＣ培地（ＧＣＫ）および４．２％ ＮａＨＣＯ３中で増殖させ、６５０ｎｍでの光学密度によって監視した。０．５０〜０．６０の最終的なＯＤ６５０で、アッセイで使用するために細菌を集菌し、Ｄ−ＰＢＳ中で希釈し、１０００〜３０００ＣＦＵを、２０％ヒト補体を含むアッセイ混合物中に添加した。
検出可能な殺菌活性をまったく有さないヒト血清を外因性補体源として使用した。それぞれの個々の髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）試験株に対する適性について補体源を試験した。補体源は、免疫血清を添加しない対照反応で生存する細菌の数が投入量の５０％超であった場合のみ使用した。
５％ ＣＯ２とともに、３７℃にてシェーカー上で７００ｒｐｍで撹拌しながら３０分インキュベートした後、Ｄ−ＰＢＳを反応混合物に添加し、アリコートを５０％ ＧＣＫ培地で満たされたマイクロフィルタープレートに移した。マイクロフィルタープレートを濾過し、５％ ＣＯ２とともに３７℃で一晩インキュベートし、微小コロニーを染色し、定量化した。血清殺菌力価は、これらのアッセイ条件を使用して、免疫血清を含まない対照ウェル中のコロニー形成単位（ＣＦＵ）と比較してＣＦＵの５０％の低減を生じた補間された血清希釈率の逆数（ｒｅｃｉｐｒｏｃａｌ ｓｅｒｕｍ ｄｉｌｕｔｉｏｎ）として定義した。免疫前の血清と比べたＯＲＦ２０８６免疫血清での殺傷に対する感受性の増強は、ＳＢＡ力価の４倍またはそれより高い上昇があった場合、記録した。出発希釈率においてアッセイ株に対して陰性であった血清は、アッセイの検出限界の半分の力価（すなわち、４）を割り当てた。
（実施例３）
融合ポリペプチド（配列番号２）の免疫原性
ｆＨＢＰタンパク質対立遺伝子の非脂質化バージョンで免疫されたマウス由来の血清試料の殺菌活性は、一般に、脂質化ｆＨＢＰ対応物で免疫されたマウス由来の血清試料より低い。同様に、２種の別個のサブファミリーＡ ｆＨＢＰバリアント（Ａ０５およびＡ２２）を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株に対するＳＢＡ応答は、非脂質化Ａ０５（配列番号４４）より、脂質化Ａ０５（配列番号１９）で非ヒト霊長類（ＮＨＰ）を免疫した後でより大きい（表３）。
Figure 2016515104
非脂質化タンパク質の組合せを使用して適用範囲を規定するために、追加の組成物を査定した。この調査では、本発明者らは、免疫原性が、担体タンパク質に遺伝的に融合されたｆＨＢＰの非脂質化バリアントから構成される組換えタンパク質で増強され得ることを実証する。同じ知見を、担体タンパク質にコンジュゲートされているｆＨＢＰバリアントに拡張することもできる。
本実施例では、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｆＨＢＰ Ａ０５バリアント（配列番号５）に遺伝的に融合された弱毒肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ニューモリシン（Δ６ＰＬＹ）から構成される組換え融合タンパク質（配列番号２）を試験する。
弱毒Δ６ＰＬＹ（配列番号１）は、部位特異的変異誘発によって生成される。具体的には、免疫原性Δ６ＰＬＹバリアント（Ａ１４６Ｒ１４７ジペプチドの欠失）は、野生型ＰＬＹ（配列番号２１）の特性である孔形成細胞溶解活性および炎症促進性表現型の両方を排除する。
弱毒Δ６ＰＬＹが非脂質化Ａ０５の免疫原性を安定化させ、したがって増強することができるか否かを探索するために、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｆＨＢＰバリアントＡ０５に遺伝的に融合された肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）Δ６ＰＬＹから構成される組換えタンパク質を、試験のために構築した（配列番号２）。本実施例では、非ヒト霊長類（ＮＨＰ）を、Δ６ＰＬＹ−Ａ０５融合タンパク質（配列番号２）または脂質化された二価のＡ０５（配列番号１９）／Ｂ０１（配列番号２０）組成物で免疫化し、４週目および８週目にブーストした。１０週間（投薬後３、ＰＤ３）に採取した動物由来の血清を、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）の株を発現するＡ０５に対する殺菌活性について査定した。両処置群からのＰＤ３試料中のＳＢＡ力価は、ワクチン接種前力価と比較して上昇した（表４）。Δ６ＰＬＹ−Ａ０５（配列番号２）に対する免疫応答は、脂質化Ａ０５（配列番号１９）／Ｂ０１（配列番号２０）組成物に対する応答と同様に強かった。
Figure 2016515104
Δ６ＰＬＹ−Ａ０５（配列番号２）でワクチン接種されたＮＨＰ由来のＰＤ３血清試料も、ｆＨＢＰ Ａ２２（配列番号２２）バリアントを発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）の株に対して強い殺菌活性を有していた（表４）。髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）のＡ２２標的株を使用してＳＢＡ力価が４倍以上上昇して応答する動物の百分率は、二価の脂質化ｆＨＢＰ処置群よりΔ６ＰＬＹ−Ａ０５で処置されたＮＨＰにおいてより大きかった。要約すると、非脂質化Δ６ＰＬＹ−Ａ０５融合タンパク質でワクチン接種されたＮＨＰ由来の血清を使用する、２種の別個のサブファミリーＡ ｆＨＢＰバリアントを発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株に対する機能的な殺菌活性は、脂質化された二価のｒＬＰ２０８６処置群からの活性と少なくとも同じぐらい強い。
非脂質化Ａ０５の免疫原性に対する他の担体タンパク質と比べた肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）Δ６ＰＬＹのインパクトをさらに探索するために、ｆＨＢＰバリアントＡ０５と融合された髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）由来のＧＮＡ２０９１から構成される組換えタンパク質を、試験のために調製した。さらに、ｆＨＢＰバリアントＡ０５（配列番号５）とカップリングされた、化膿連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）由来の組換え発現された連鎖球菌Ｃ５ａペプチダーゼ（ＳＣＰ）の化学的コンジュゲート（亜鉛処理した、実施例４を参照）も、免疫原性評価のために調製した。本実施例では、非ヒト霊長類（ＮＨＰ）を、それぞれのＡ０５融合タンパク質、ＳＣＰ−Ａ０５化学的コンジュゲート、脂質化された二価のＡ０５（配列番号１９）／Ｂ０１（配列番号２０）組成物、または非脂質化Ａ０５（配列番号５）で免疫化し、４週目および８週目でブーストした。抗原用量は、Ａ０５ １０ｍｃｇの等価物が各ワクチン接種で投与されるように調整した。１０週間（投薬後３、ＰＤ３）に採取した動物由来の血清を、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）の株を発現するＡ０５に対する殺菌活性について査定した。ＰＬＹ−Ａ０５（配列番号２）処置群からのＰＤ３試料中のＳＢＡ力価は、（ｉ）ワクチン接種前力価と比較して上昇しており、（ｉｉ）脂質化された二価のＡ０５／Ｂ０１組成物に対する応答と同等であり、（ｉｉｉ）非脂質化Ａ０５およびＧＮＡ２０９１−Ａ０５（配列番号１４９）融合タンパク質抗原の両方に対する免疫応答より優れていた（表５）。ＳＣＰ−Ａ０５化学的コンジュゲートでワクチン接種された動物は、抗原に対して確かに応答したが、免疫応答の規模は、ＰＬＹ−Ａ０５融合タンパク質処置群において検出されたものほどロバストではなかった。
Figure 2016515104
（実施例４）
翻訳後修飾除去
ｒＰ２０８６−Ａ０５−ｃｙｓ中のシステインがアミノ末端に位置している場合（配列番号１５６）、かなりの量のタンパク質が発酵中にピルビン酸化される。このピルビン酸化修飾を、硫酸亜鉛で処理することによってタンパク質から除去した。質量スペクトルにより、ピルビン酸化ｒＰ２０８６−Ａ０５−ｃｙｓ（配列番号１５６）は、硫酸亜鉛で処理されたｒＰ２０８６−Ａ０５−ｃｙｓタンパク質と比較して、＋７１Ｄａの質量シフトを呈するとして特徴付けられ、この硫酸亜鉛で処理されたタンパク質は、対応するピルビン酸化ｒＰ２０８６−Ａ０５−ｃｙｓと比較して、＋７１の質量シフトを呈さなかった。
システイン残基をタンパク質中の他の位置に移動させると（例えば、システインの２位または６位への移動、それぞれ配列番号１５７および配列番号１５８を参照）、ピルビン酸化問題が排除される。これらのコンストラクトの説明は、実施例９に提供されている。
標準的なクロマトグラフィー技法に加えて、ブロック化されたチオールを含有するタンパク質から天然ｒＰ２０８６−Ａ０５−ｃｙｓを分離するために、チオール反応性樹脂（Ｔｈｉｏｐｒｏｐｌｙ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ６Ｂ）を使用した。この技法では、天然ｒＰ２０８６−Ａ０５−ｃｙｓがカラムに結合し、ブロック化されたｒＰ２０８６−Ａ０５−ｃｙｓがフロースルーで溶出される。次いで天然ｒＰ２０８６−Ａ０５−ｃｙｓが、還元剤（好ましくはＤＴＴ）を使用してカラムから溶出される。
以下の実施例で使用するように、用語「ｒＰ２０８６−Ａ０５−ｃｙｓ」は、どのようにしてピルビン酸化修飾が存在しないか、例えば、発酵中に天然に、硫酸亜鉛処理によって、Ｎ末端の１位における最初のシステインを欠失し、２位または６位のセリン残基をシステイン残基で置き換えるためのタンパク質への遺伝子改変によって、にかかわらず、非ピルビン酸化非脂質化ｒＰ２０８５ Ａ０５タンパク質を指す。
以下に記載のプロセスのいずれも最適化されていない。したがって、記載したもの以外のタンパク質濃度、タンパク質比、反応時間、および温度も、ｒＰ２０８６−Ａ０５コンジュゲートを生成するのに使用することができる。
（実施例５）
可溶性ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）スペーサーアームとともにアミン−スルフヒドリル架橋剤を使用する、ニューモリシンのｒＰ２０８６−Ａ０５−ｃｙｓへのコンジュゲーション
ＳＭ（ＰＥＧ）４−活性化ニューモリシン−ＮＥＭ中間体の調製：
リン酸緩衝溶液中約１０ｍｇ／ｍｌのニューモリシンタンパク質を、Ｎ−エチルマレイミド（ＮＥＭ）を用いたタンパク質の誘導体化、その後のＳＭ（ＰＥＧ）４を用いた活性化によるコンジュゲーションのために調製する。１０倍モル過剰のＮＥＭを、２０〜２５℃のニューモリシン（ｐｎｅｍｏｌｙｓｉｎ）および１ｍＭ ＥＤＴＡとともに、ニューモリシンスルフヒドリルを完全にブロックするのに十分な時間にわたってインキュベートする。典型的には、２０分がニューモリシン−ＮＥＭ中間体を調製するのに十分である。１００ｍＭの濃度を有する溶液から得られ、ジメチルスルホキシド溶媒中に溶解したＳＭ（ＰＥＧ）４リンカーを、ニューモリシン−ＮＥＭ中間体に対して１０倍モル過剰で３０分間インキュベートする。活性化反応を、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ２５樹脂で充填されたカラムを使用してサイズ排除クロマトグラフィーによって終わらせる。ＳＭ（ＰＥＧ）４−活性化ニューモリシン−ＮＥＭ中間体を含有するクロマトグラフィー画分は、−８０℃で貯蔵することができ、または還元されたＭｎＢ ２０８６ Ａ０５システインステム（Ｃｙｓｔｅｉｎｅ−ｓｔｅｍ）変異タンパク質中間体に直ちにコンジュゲートすることができる。
ＮＥＭ修飾を使用して、ニューモリシン中のシステイン残基を、これがＳＭ（ＰＥＧ）リンカーと反応しないようにブロックする。
（実施例６）
還元されたｒＰ２０８６−Ａ０５−ｃｙｓの調製：
リン酸緩衝溶液中の約１．３ｍｇ／ｍｌのｒＰ２０８６−Ａ０５−ｃｙｓを、ＭｎＢタンパク質のスルフヒドリル（ｓｕｌｆｈｙｄｙｌ）を完全に還元するのに十分な量の定着固定化されたＴＣＥＰ樹脂および１ｍＭ ＥＤＴＡとともにインキュベートする。典型的には、等体積の定着した樹脂および１ｍＭ ＥＤＴＡを用いたｒＰ２０８６−Ａ０５−ｃｙｓの３０分のインキュベーションが、スルフヒドリルを完全に還元するのに十分である。還元されたＭｎＢタンパク質中間体を、０．２ミクロンポリエーテルスルホン膜に通して濾過することによって回収し、コンジュゲーションのために直ちに使用する。
（実施例７）
ＳＭ（ＰＥＧ）４−活性化ニューモリシン−ＮＥＭ中間体のｒＰ２０８６−Ａ０５−ｃｙｓへのコンジュゲーション：
還元されたｒＰ２０８６−Ａ０５−ｃｙｓ中間体をＳＭ（ＰＥＧ）４−活性化ニューモリシン−ＮＥＭ中間体と組み合わせて、それぞれおよそ１．２および０．６ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度で４：１のモル比を実現する。反応を２０〜２５℃で２時間進行し、システアミン−ＨＣｌの２ｍＭの最終濃度まで反応溶液にシステアミン−ＨＣｌ、ｐＨ５．５を添加することによって終わらせる。コンジュゲーション反応生成物であるｒＰ２０８６−Ａ０５−ｃｙｓ ＳＭ（ＰＥＧ）４ニューモリシン−ＮＥＭコンジュゲート反応生成物を、Ｎｉｃｋｅｌ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ６ファーストフロー樹脂を使用して固定化金属アフィニティークロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）によって非コンジュゲートＳＭ（ＰＥＧ）４−活性化ニューモリシン−ＮＥＭ中間体からクロマトグラフィーで精製する。反応生成物は、２０ｍＭ Ｔｒｉｓ、０．５Ｍ ＮａＣｌ、ｐＨ７．７から構成される緩衝液中で結合し、２０ｍＭ Ｔｒｉｓ、０．５Ｍ ＮａＣｌ、ｐＨ７．７、４０ｍＭイミダゾール中で溶出される。コンジュゲートのさらなる精製を、Ｑ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＨＰ樹脂を使用してイオン交換クロマトグラフィーによって、還元されたＭｎＢ ２０８６ Ａ０５システインステム変異タンパク質中間体を除去することによって実現する。反応生成物は、２０ｍＭ Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．７中で結合し、２０ｍＭ Ｔｒｉｓ、０．５Ｍ ＮａＣｌ、ｐＨ７．７の塩勾配溶出で回収する。コンジュゲートを含有するＱ画分を、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ２５樹脂を充填されたカラムを使用してサイズ排除クロマトグラフィーによって緩衝液交換し、滅菌濾過する。
（実施例８）
シクロヘキサンスペーサーアームとともにアミン−スルフヒドリル架橋剤を使用するＳＣＰのｒＰ２０８６−Ａ０５−ｃｙｓへのコンジュゲーション
ＳＭＣＣ−活性化ＳＣＰ中間体の調製：
リン酸緩衝溶液中約１２．６ｍｇ／ｍｌのＳＣＰタンパク質を、２５℃で、２０倍モル過剰のスルホスクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレートリンカー（スルホ−ＳＭＣＣ；１０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ６．８中で調製した２０ｍＭ原料から得られる）および１ｍＭ ＥＤＴＡとともに１時間インキュベートする。活性化反応を、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ２５樹脂を充填されたカラムを使用してサイズ排除クロマトグラフィーによって終わらせる。ＳＭＣＣ−活性化ＳＣＰ中間体を含有するクロマトグラフィー画分は、−８０℃で貯蔵することができ、または還元されたｒＰ２０８６−Ａ０５−ｃｙｓ中間体に直ちにコンジュゲートすることができる。
還元されたｒＰ２０８６−Ａ０５−ｃｙｓ中間体の調製：
リン酸緩衝溶液中約３．８ｍｇ／ｍｌのｒＰ２０８６−Ａ０５−ｃｙｓを、ＭｎＢタンパク質のスルフヒドリルを完全に還元するのに十分な４ｍＭ ＴＣＥＰおよび１ｍＭ ＥＤＴＡとともにインキュベートする。典型的には、ＭｎＢタンパク質のＴＣＥＰおよび１ｍＭ ＥＤＴＡとの１時間のインキュベーションが、スルフヒドリルを完全に還元するのに十分である。還元されたＭｎＢタンパク質をコンジュゲーションのために直ちに使用する。
ＳＭＣＣ−活性化ＳＣＰ中間体のｒＰ２０８６−Ａ０５−ｃｙｓへのコンジュゲーション：
還元されたｒＰ２０８６−Ａ０５−ｃｙｓをＳＭＣＣ−活性化ＳＣＰ中間体と組み合わせて、それぞれおよそ２．６ｍｇ／ｍｌおよび２．６ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度で、等重量比（４：１のモル比）を実現する。反応を２５℃で２．５時間進行し、システアミン−ＨＣｌの２ｍＭの最終濃度まで反応溶液にシステアミン−ＨＣｌ、ｐＨ５．５を添加することによって終わらせる。コンジュゲーション反応生成物であるＭｎＢ ２０８６ Ａ０５システイン−変異タンパク質ＳＭＣＣ−ＳＣＰコンジュゲート反応生成物を、Ｎｉｃｋｅｌ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ６ファーストフロー樹脂を使用して固定化金属アフィニティークロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）によって非コンジュゲートＳＭＣＣ−ＳＣＰ活性化中間体からクロマトグラフィーで精製する。反応生成物は、２０ｍＭ Ｔｒｉｓ、０．５Ｍ ＮａＣｌ、ｐＨ７．７から構成される緩衝液中で結合し、２０ｍＭ Ｔｒｉｓ、０．５Ｍ ＮａＣｌ、ｐＨ７．７、４０ｍＭイミダゾール中で溶出される。コンジュゲートのさらなる精製を、Ｑ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＨＰ樹脂を使用してイオン交換クロマトグラフィーによって、還元されたＭｎＢ ２０８６ Ａ０５システイン変異タンパク質中間体を除去することによって実現する。反応生成物は、２０ｍＭ Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．７中で結合し、２０ｍＭ Ｔｒｉｓ、０．５Ｍ ＮａＣｌ、ｐＨ７．７の塩勾配溶出で回収する。コンジュゲートを含有するＱ画分を、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ２５樹脂を充填されたカラムを使用してサイズ排除クロマトグラフィーによって緩衝液交換し、滅菌濾過する。
（実施例９）
ｒＰ２０８６−Ａ０５−ｃｙｓストーク変異体の作製
Ａ０５の非脂質化コンストラクトを設計して脂質化シグナルを除去し、Ｎ末端でシステインを有する組換えタンパク質を生成した。タンパク質は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）内で強く発現された。生成物関連バリアントの形成を監視する手段をもたらすために、四重極飛行時間型質量分析計（ＱＴＯＦ−ＭＳ）とインターフェースした逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）を使用して精製タンパク質を分析した。
システインをＡ０５のセリングリシンストーク領域内に移動させることにより、これをコンジュゲーションに利用可能に保ちながらシステイン上の修飾が低減されるか否かを評価するために、Ａ０５の２種のバリアント、すなわち、Ｎ末端システインが成熟タンパク質の２位に、この位置のセリン残基に置き代わって移動したもの（配列番号１５７を参照）、およびシステインが成熟タンパク質の６位に、この位置のセリン残基に置き代わって移動したもの（配列番号１５８を参照）を構築した。これは、遺伝子の増幅に使用される５’プライマー中にコドン変化を組み込むことによって達成した。Ａ０５を増幅するように設計された５’および３’プライマーはともに、ＮｄｅＩおよびＢａｍＨＩで切断されるｐＥＴ３０ａと相同性を伴って１５の塩基伸長を有していた。Ａ０５およびベクターを、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ ＩｎＦｕｓｉｏｎ（登録商標）キットを使用してライゲーションした。形質転換後、コロニーをインサートについてスクリーニングし、インサートを含有するものが、ＤＮＡ配列決定によってアミノ酸置換を含有することが検証された。
以下の条項は、本発明の追加の実施形態を記載するものである：
Ｃ１．担体ポリペプチドのアミノ酸配列およびＯＲＦ２０８６ポリペプチドのアミノ酸配列を含む単離ポリペプチド。
Ｃ２．単離ポリペプチドが融合ポリペプチドである、条項Ｃ１に記載のポリペプチド。
Ｃ３．ＯＲＦ２０８６ポリペプチドが、サブファミリーＡポリペプチドである、条項Ｃ１に記載のポリペプチド。
Ｃ４．ＯＲＦ２０８６ポリペプチドが、サブファミリーＢポリペプチドである、条項Ｃ１に記載のポリペプチド。
Ｃ５．ＯＲＦ２０８６ポリペプチドが、脂質化されている、条項Ｃ１に記載のポリペプチド。
Ｃ６．ＯＲＦ２０８６ポリペプチドが、脂質化されていない、条項Ｃ１に記載のポリペプチド。
Ｃ７．ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＡ０５である、条項Ｃ１に記載のポリペプチド。
Ｃ８．ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＡ１２である、条項Ｃ１に記載のポリペプチド。
Ｃ９．ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＡ２２である、条項Ｃ１に記載のポリペプチド。
Ｃ１０．ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＢ０１である、条項Ｃ１に記載のポリペプチド。
Ｃ１１．ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＢ０９である、条項Ｃ１に記載のポリペプチド。
Ｃ１２．ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＢ１５である、条項Ｃ１に記載のポリペプチド。
Ｃ１３．ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＢ１６である、条項Ｃ１に記載のポリペプチド。
Ｃ１４．ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＢ２２である、条項Ｃ１に記載のポリペプチド。
Ｃ１５．ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＢ２４である、条項Ｃ１に記載のポリペプチド。
Ｃ１６．ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＢ４４である、条項Ｃ１に記載のポリペプチド。
Ｃ１７．ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＡ６２である、条項Ｃ１に記載のポリペプチド。
Ｃ１８．ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＡ０４である、条項Ｃ１に記載のポリペプチド。
Ｃ１９．ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＡ０１である、条項Ｃ１に記載のポリペプチド。
Ｃ２０．ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＡ０６である、条項Ｃ１に記載のポリペプチド。
Ｃ２１．ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＡ０７である、条項Ｃ１に記載のポリペプチド。
Ｃ２２．ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＡ１５である、条項Ｃ１に記載のポリペプチド。
Ｃ２３．ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＡ１９である、条項Ｃ１に記載のポリペプチド。
Ｃ２４．ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＡ２０である、条項Ｃ１に記載のポリペプチド。
Ｃ２５．ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＡ２９である、条項Ｃ１に記載のポリペプチド。
Ｃ２６．ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＢ０２である、条項Ｃ１に記載のポリペプチド。
Ｃ２７．ＯＲＦ２０８６ポリペプチドが、配列番号５、１９、２２〜６５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、条項Ｃ１に記載のポリペプチド。
Ｃ２８．担体ポリペプチドがサイトリソイドである、条項Ｃ１に記載のポリペプチド。
Ｃ２９．サイトリソイドが、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）由来のニューモリシンポリペプチド、ウェルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）由来のペルフリンゴリシンＯポリペプチド、ストレプトコッカス・インターメディウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｓ）由来のインターメディリシンポリペプチド、バチルス・アルベイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｌｖｅｉ）由来のアルベオリシンポリペプチド、炭疽菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ）由来のアンスロリシンポリペプチド、バチルス・セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ）由来の推定上のセレオリシンポリペプチド、リステリア・イバノビイ（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｉｖａｎｏｖｉｉ）由来のイバノリシンＯポリペプチド、アルカノバクテリウム・ピオゲネス（Ａｒｃａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）由来のピオリシンポリペプチド、リステリア・ゼーリゲリ（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｓｅｅｌｉｇｅｒｉ）由来のゼーリゲリオリシンＯポリペプチド、Ｓ．ピオゲネス（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）由来のストレプトリジンＯポリペプチド、ストレプトコッカス・スイス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｕｉｓ）由来のスイリシンポリペプチド、破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ）由来のテタノリジンポリペプチド、リステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）由来のリステリオリシンＯポリペプチド、ストレプトコッカス・エクイシミリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉｓｉｍｉｌｉｓ）由来のストレプトリジンＯポリペプチド、Ｓ．カニス（Ｓ．ｃａｎｉｓ）由来のストレプトリジンＯポリペプチド、バチルス・チューリンゲンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）由来のチューリンギオリシンＯポリペプチド、Ｂ．ラテロスポルス（Ｂ．ｌａｔｅｒｏｓｐｏｒｕｓ）由来のラテルスポロリシンＯポリペプチド、ボツリヌス菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ）由来のボツリノリジンポリペプチド、Ｃ．ショウベイ（Ｃ．ｃｈａｕｖｏｅｉ）由来のショウベオリシンポリペプチド、Ｃ．バイファーメンタンス（Ｃ．ｂｉｆｅｒｍｅｎｔａｎｓ）由来のバイファーメントリシンポリペプチド、Ｃ．ソルデリイ（Ｃ．ｓｏｒｄｅｌｌｉｉ）由来のソルデリリシンポリペプチド、ヒストリチクム菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｈｉｓｔｉｏｌｙｔｉｃｕｍ）由来のヒストリチコリシンポリペプチド、クロストリジウム・ノビイ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｎｏｖｙｉ）由来のノビリシンポリペプチド、またはクロストリジウム・セプチカム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｓｅｐｔｉｃｕｍ）由来のセプチコリシンＯポリペプチドに由来する、条項Ｃ２８に記載のポリペプチド。
Ｃ３０．サイトリソイドが、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）由来のニューモリシンポリペプチドに由来する、条項２９に記載のポリペプチド。
Ｃ３１．サイトリソイドが、配列番号１と少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含む、条項Ｃ３０に記載のポリペプチド。
Ｃ３２．担体ポリペプチドが、対応する野生型担体ポリペプチドと比較して無毒化されており、破傷風毒素（ＴＴ）、熱帯熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）スポロゾイト周囲タンパク質、Ｂ型肝炎表面抗原、Ｂ型肝炎核コアポリペプチド、インフルエンザ菌（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）基質ポリペプチド、インフルエンザ菌（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）赤血球凝集素、ジフテリアトキソイド、ジフテリアトキソイド変異体ＣＲＭ１９７、Ｂ群髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）外膜ポリペプチド複合体（ＯＭＰＣ）、サイトリソイド、肺炎球菌毒素ニューモリシン、ウシ型結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｏｖｉｓ）由来の熱ショックポリペプチド、らい菌（Ｍ．ｌｅｐｒａｅ）由来の熱ショックポリペプチド、コレラトキソイド、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＬＴ、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＳＴ、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）由来の外毒素Ａ、肺炎球菌表面ポリペプチドＡ、肺炎球菌アドヘシンポリペプチド（ＰｓａＡ）、Ａ群またはＢ群連鎖球菌由来のＣ５ａペプチダーゼ、インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）ポリペプチドＤ、オボアルブミン、キーホールリンペットヘモシニアン（ＫＬＨ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、ツベルクリンの精製ポリペプチド誘導体（ＰＰＤ）、ＰｏｒＢ（髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）由来）、およびこれらの誘導体、バリアント、または断片からなる群から選択される、条項Ｃ１に記載のポリペプチド。
Ｃ３３．担体ポリペプチドがＣＲＭ１９７である、条項Ｃ１に記載のポリペプチド。
Ｃ３４．担体ポリペプチドがＣＲＭ１９７でない、条項Ｃ３２に記載のポリペプチド。
Ｃ３５．担体ポリペプチドが、化膿連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）由来の連鎖球菌Ｃ５ａペプチダーゼ（ＳＣＰ）である、条項Ｃ１に記載のポリペプチド。
Ｃ３６．担体ポリペプチドがＧＮＡ２０９１である、条項Ｃ１に記載のポリペプチド。
Ｃ３７．肺炎球菌に由来するポリペプチド配列をさらに含む、条項Ｃ１に記載のポリペプチド。
Ｃ３８．肺炎球菌に由来するポリペプチド配列を含まない、条項Ｃ１に記載のポリペプチド。
Ｃ３９．ＯＲＦ２０８６ポリペプチドと相同である髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂバリアントに対する殺菌抗体を誘発する、条項Ｃ１に記載のポリペプチド。
Ｃ４０．ＯＲＦ２０８６ポリペプチドと非相同である髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂバリアントに対する殺菌抗体を誘発する、条項Ｃ１に記載のポリペプチド。
Ｃ４１．融合ポリペプチドが、担体ポリペプチド、それが作動可能に連結したＯＲＦ２０８６ポリペプチドをこの順序で含む、条項Ｃ２に記載のポリペプチド。
Ｃ４２．融合ポリペプチドが、ＯＲＦ２０８６ポリペプチド、それが作動可能に連結した担体ポリペプチドをこの順序で含む、条項Ｃ２に記載のポリペプチド。
Ｃ４３．担体ポリペプチドが配列番号１を含み、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドが配列番号５を含む、条項Ｃ２に記載のポリペプチド。
Ｃ４４．単離ポリペプチドが配列番号２を含む、条項Ｃ４３に記載のポリペプチド。
Ｃ４５．条項Ｃ１〜Ｃ４４のいずれか一項に記載のポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチド。
Ｃ４６．条項Ｃ１〜Ｃ４４のいずれか一項に記載のポリペプチドおよび薬学的に許容できる賦形剤を含む免疫原性組成物。
Ｃ４７．ａ）髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ａの莢膜糖のコンジュゲート；ｂ）髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｃの莢膜糖のコンジュゲート；ｃ）髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｗ１３５の莢膜糖のコンジュゲート；およびｄ）髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｙの莢膜糖のコンジュゲートから選択される少なくとも１種のコンジュゲートをさらに含む、条項Ｃ４６に記載の組成物。
Ｃ４８．哺乳動物における髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する免疫応答を誘導するための方法であって、哺乳動物に有効量の条項Ｃ１〜Ｃ４４のいずれか一項に記載の単離ポリペプチドを投与するステップを含む、方法。
Ｃ４９．免疫応答が殺菌抗体を含む、条項Ｃ４８に記載の方法。
Ｃ５０．免疫応答が、同一条件下で評価されるとき、担体ポリペプチドの非存在下で対応する脂質化ＯＲＦ２０８６ポリペプチドを投与される哺乳動物の免疫応答に等しい、条項Ｃ４８に記載の方法。
Ｃ５１．免疫応答が、同一条件下で評価されるとき、担体ポリペプチドの非存在下で対応する非脂質化ＯＲＦ２０８６ポリペプチドを投与される哺乳動物の免疫応答より大きい、条項Ｃ４８に記載の方法。
Ｃ５２．免疫応答が、同一条件下で評価されるとき、担体ポリペプチドの非存在下で対応する脂質化ＯＲＦ２０８６ポリペプチドを投与される哺乳動物の免疫応答より最大で１０％小さい、条項Ｃ４８に記載の方法。
Ｃ５３．免疫応答が、同一条件下で評価されるとき、担体ポリペプチドの非存在下で対応する脂質化ＯＲＦ２０８６ポリペプチドを投与される哺乳動物の免疫応答より最大で２０％小さい、条項Ｃ４８に記載の方法。
Ｃ５４．哺乳動物における髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する免疫応答を誘導するための方法であって、哺乳動物に有効量の条項Ｃ４６〜Ｃ４７のいずれか一項に記載の免疫原性組成物を投与するステップを含む、方法。
Ｃ５５．免疫応答が殺菌抗体を含む、条項Ｃ５４に記載の方法。
Ｃ５６．免疫応答が、同一条件下で評価されるとき、担体ポリペプチドの非存在下で対応する脂質化ＯＲＦ２０８６ポリペプチドを投与される哺乳動物の免疫応答に等しい、条項Ｃ５４に記載の方法。
Ｃ５７．免疫応答が、同一条件下で評価されるとき、担体ポリペプチドの非存在下で対応する非脂質化ＯＲＦ２０８６ポリペプチドを投与される哺乳動物の免疫応答より大きい、条項Ｃ５４に記載の方法。
Ｃ５８．免疫応答が、同一条件下で評価されるとき、担体ポリペプチドの非存在下で対応する脂質化ＯＲＦ２０８６ポリペプチドを投与される哺乳動物の免疫応答より最大で１０％小さい、条項Ｃ５４に記載の方法。
Ｃ５９．免疫応答が、同一条件下で評価されるとき、担体ポリペプチドの非存在下で対応する脂質化ＯＲＦ２０８６ポリペプチドを投与される哺乳動物の免疫応答より最大で２０％小さい、条項Ｃ５４に記載の方法。
Ｃ６０．ＯＲＦ２０８６ポリペプチドおよび担体ポリペプチドを含む免疫原性組成物。
Ｃ６１．コンジュゲートである、条項Ｃ６０に記載の組成物。
Ｃ６２．ＯＲＦ２０８６ポリペプチドが、サブファミリーＡポリペプチドである、条項Ｃ６０に記載の組成物。
Ｃ６３．ＯＲＦ２０８６ポリペプチドが、サブファミリーＢポリペプチドである、条項Ｃ６０に記載の組成物。
Ｃ６４．ＯＲＦ２０８６ポリペプチドが、脂質化されている、条項Ｃ６０に記載の組成物。
Ｃ６５．ＯＲＦ２０８６ポリペプチドが、脂質化されていない、条項Ｃ６０に記載の組成物。
Ｃ６６．ＯＲＦ２０８６ポリペプチドが、脂質化されておらず、ピルビン酸化されていない、条項Ｃ６０に記載の組成物。
Ｃ６７．ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＡ０５である、条項Ｃ６０に記載の組成物。
Ｃ６８．ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＡ１２である、条項Ｃ６０に記載の組成物。
Ｃ６９．ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＡ２２である、条項Ｃ６０に記載の組成物。
Ｃ７０．ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＢ０１である、条項Ｃ６０に記載の組成物。
Ｃ７１．ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＢ０９である、条項Ｃ６０に記載の組成物。
Ｃ７２．ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＢ１５である、条項Ｃ６０に記載の組成物。
Ｃ７３．ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＢ１６である、条項Ｃ６０に記載の組成物。
Ｃ７４．ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＢ２２である、条項Ｃ６０に記載の組成物。
Ｃ７５．ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＢ２４である、条項Ｃ６０に記載の組成物。
Ｃ７６．ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＢ４４である、条項Ｃ６０に記載の組成物。
Ｃ７７．ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＡ６２である、条項Ｃ６０に記載の組成物。
Ｃ７８．ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＡ０４である、条項Ｃ６０に記載の組成物。
Ｃ７９．ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＡ０１である、条項Ｃ６０に記載の組成物。
Ｃ８０．ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＡ０６である、条項Ｃ６０に記載の組成物。
Ｃ８１．ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＡ０７である、条項Ｃ６０に記載の組成物。
Ｃ８２．ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＡ１５である、条項Ｃ６０に記載の組成物。
Ｃ８３．ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＡ１９である、条項Ｃ６０に記載の組成物。
Ｃ８４．ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＡ２０である、条項Ｃ６０に記載の組成物。
Ｃ８５．ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＡ２９である、条項Ｃ６０に記載の組成物。
Ｃ８６．ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＢ０２である、条項Ｃ６０に記載の組成物。
Ｃ８７．ＯＲＦ２０８６ポリペプチドが、配列番号５、１９、２２〜６５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、条項Ｃ６０に記載の組成物。
Ｃ８８．担体ポリペプチドがサイトリソイドである、条項Ｃ６０に記載の組成物。
Ｃ８９．サイトリソイドが、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）由来のニューモリシンポリペプチド、ウェルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）由来のペルフリンゴリシンＯポリペプチド、ストレプトコッカス・インターメディウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｓ）由来のインターメディリシンポリペプチド、バチルス・アルベイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｌｖｅｉ）由来のアルベオリシンポリペプチド、炭疽菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ）由来のアンスロリシンポリペプチド、バチルス・セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ）由来の推定上のセレオリシンポリペプチド、リステリア・イバノビイ（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｉｖａｎｏｖｉｉ）由来のイバノリシンＯポリペプチド、アルカノバクテリウム・ピオゲネス（Ａｒｃａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）由来のピオリシンポリペプチド、リステリア・ゼーリゲリ（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｓｅｅｌｉｇｅｒｉ）由来のゼーリゲリオリシンＯポリペプチド、Ｓ．ピオゲネス（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）由来のストレプトリジンＯポリペプチド、ストレプトコッカス・スイス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｕｉｓ）由来のスイリシンポリペプチド、破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ）由来のテタノリジンポリペプチド、リステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）由来のリステリオリシンＯポリペプチド、ストレプトコッカス・エクイシミリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉｓｉｍｉｌｉｓ）由来のストレプトリジンＯポリペプチド、Ｓ．カニス（Ｓ．ｃａｎｉｓ）由来のストレプトリジンＯポリペプチド、バチルス・チューリンゲンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）由来のチューリンギオリシンＯポリペプチド、Ｂ．ラテロスポルス（Ｂ．ｌａｔｅｒｏｓｐｏｒｕｓ）由来のラテルスポロリシンＯポリペプチド、ボツリヌス菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ）由来のボツリノリジンポリペプチド、Ｃ．ショウベイ（Ｃ．ｃｈａｕｖｏｅｉ）由来のショウベオリシンポリペプチド、Ｃ．バイファーメンタンス（Ｃ．ｂｉｆｅｒｍｅｎｔａｎｓ）由来のバイファーメントリシンポリペプチド、Ｃ．ソルデリイ（Ｃ．ｓｏｒｄｅｌｌｉｉ）由来のソルデリリシンポリペプチド、ヒストリチクム菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｈｉｓｔｉｏｌｙｔｉｃｕｍ）由来のヒストリチコリシンポリペプチド、クロストリジウム・ノビイ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｎｏｖｙｉ）由来のノビリシンポリペプチド、またはクロストリジウム・セプチカム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｓｅｐｔｉｃｕｍ）由来のセプチコリシンＯポリペプチドに由来する、条項Ｃ８８に記載の組成物。
Ｃ９０．サイトリソイドが、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）由来のニューモリシンポリペプチドに由来する、条項Ｃ８９に記載の組成物。
Ｃ９１．サイトリソイドが、配列番号１と少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含む、条項Ｃ９０に記載の組成物。
Ｃ９２．担体ポリペプチドが、対応する野生型担体ポリペプチドと比較して無毒化されており、破傷風毒素（ＴＴ）、熱帯熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）スポロゾイト周囲タンパク質、Ｂ型肝炎表面抗原、Ｂ型肝炎核コアポリペプチド、インフルエンザ菌（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）基質ポリペプチド、インフルエンザ菌（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）赤血球凝集素、ジフテリアトキソイド、ジフテリアトキソイド変異体ＣＲＭ１９７、Ｂ群髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）外膜ポリペプチド複合体（ＯＭＰＣ）、サイトリソイド、肺炎球菌毒素ニューモリシン、ウシ型結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｏｖｉｓ）由来の熱ショックポリペプチド、らい菌（Ｍ．ｌｅｐｒａｅ）由来の熱ショックポリペプチド、コレラトキソイド、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＬＴ、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＳＴ、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）由来の外毒素Ａ、肺炎球菌表面ポリペプチドＡ、肺炎球菌アドヘシンポリペプチド（ＰｓａＡ）、Ａ群またはＢ群連鎖球菌由来のＣ５ａペプチダーゼ、インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）ポリペプチドＤ、オボアルブミン、キーホールリンペットヘモシニアン（ＫＬＨ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、ツベルクリンの精製ポリペプチド誘導体（ＰＰＤ）、ＰｏｒＢ（髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）由来）、およびこれらの誘導体、バリアント、または断片からなる群から選択される、条項Ｃ６０に記載の組成物。
Ｃ９３．担体ポリペプチドがＣＲＭ１９７である、条項Ｃ６０に記載の組成物。
Ｃ９４．担体ポリペプチドがＣＲＭ１９７である、条項Ｃ９２に記載の組成物。
Ｃ９５．担体ポリペプチドが、化膿連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）由来の連鎖球菌Ｃ５ａペプチダーゼ（ＳＣＰ）である、条項Ｃ６０に記載の組成物。
Ｃ９６．担体ポリペプチドがＧＮＡ２０９１である、条項Ｃ６０に記載の組成物。
Ｃ９７．担体ポリペプチドが、ＯＲＦ２０８６ポリペプチドと非相同である、条項Ｃ６０に記載の組成物。
Ｃ９８．肺炎球菌に由来するポリペプチド配列をさらに含む、条項Ｃ６０に記載の組成物。
Ｃ９９．肺炎球菌に由来するポリペプチド配列を含まない、条項Ｃ６０に記載の組成物。
Ｃ１００．ＯＲＦ２０８６ポリペプチドと相同であるＯＲＦ２０８６バリアントを発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ株に対する殺菌抗体応答を誘発する、条項Ｃ６０に記載の組成物。
Ｃ１０１．ＯＲＦ２０８６ポリペプチドと非相同であるＯＲＦ２０８６バリアントを発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ株に対する殺菌抗体応答を誘発する、条項Ｃ６０に記載の組成物。
Ｃ１０２．ａ）髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ａの莢膜糖のコンジュゲート；ｂ）髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｃの莢膜糖のコンジュゲート；ｃ）髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｗ１３５の莢膜糖のコンジュゲート；およびｄ）髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｙの莢膜糖のコンジュゲートから選択される少なくとも１種のコンジュゲートをさらに含む、条項Ｃ６０に記載の組成物。
Ｃ１０３．薬学的に許容できる賦形剤をさらにふくむ条項Ｃ６０〜Ｃ１０２のいずれか一項に記載の組成物。
Ｃ１０４．哺乳動物における髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する免疫応答を誘導するための方法であって、哺乳動物に有効量の条項Ｃ６０〜Ｃ１０３のいずれか一項に記載の組成物を投与するステップを含む、方法。
Ｃ１０５．免疫応答が殺菌抗体を含む、条項１０４に記載の方法。
Ｃ１０６．免疫応答が、同一条件下で評価されるとき、担体ポリペプチドの非存在下で対応する脂質化ＯＲＦ２０８６ポリペプチドを投与される哺乳動物の免疫応答に等しい、条項Ｃ１０４に記載の方法。
Ｃ１０７．免疫応答が、同一条件下で評価されるとき、担体ポリペプチドの非存在下で対応する非脂質化ＯＲＦ２０８６ポリペプチドを投与される哺乳動物の免疫応答より大きい、条項Ｃ１０４に記載の方法。
Ｃ１０８．免疫応答が、同一条件下で評価されるとき、担体ポリペプチドの非存在下で対応する脂質化ＯＲＦ２０８６ポリペプチドを投与される哺乳動物の免疫応答より最大で１０％小さい、条項Ｃ１０４に記載の方法。
Ｃ１０９．免疫応答が、同一条件下で評価されるとき、担体ポリペプチドの非存在下で対応する脂質化ＯＲＦ２０８６ポリペプチドを投与される哺乳動物の免疫応答より最大で２０％小さい、条項Ｃ１０４に記載の方法。
Ｃ１１０．配列番号２を含む単離ポリペプチド。
Ｃ１１１．配列番号８を含む単離ポリペプチド。
Ｃ１１２．配列番号１４を含む単離ポリペプチド。
Ｃ１１３．配列番号１６を含む単離ポリペプチド。
Ｃ１１４．配列番号１８を含む単離ポリペプチド。
Ｃ１１５．配列番号１３７を含む単離ポリペプチド。
Ｃ１１６．配列番号１３９を含む単離ポリペプチド。
Ｃ１１７．配列番号１４１を含む単離ポリペプチド。
Ｃ１１８．配列番号１４３を含む単離ポリペプチド。
Ｃ１１９．配列番号１４５を含む単離ポリペプチド。
Ｃ１２０．配列番号１４９を含む単離ポリペプチド。
Ｃ１２１．配列番号１５３を含む単離ポリペプチド。
Ｃ１２２．配列番号４２〜配列番号６１に示したいずれか１つの配列に作動可能に連結された配列番号１を含む融合ポリペプチド。
Ｃ１２３．配列番号４２〜配列番号６１に示したいずれか１つの配列に作動可能に連結された配列番号１４７を含む融合ポリペプチド。
Ｃ１２４．配列番号４２〜配列番号６１に示したいずれか１つの配列に作動可能に連結された配列番号１５１を含む融合ポリペプチド。
Ｃ１２５．配列番号４２〜配列番号６１に示したいずれか１つの配列に作動可能に連結された配列番号１０を含む融合ポリペプチド。
Ｃ１２６．配列番号４２〜配列番号６１に示したいずれか１つの配列に作動可能に連結された配列番号１５５を含む融合ポリペプチド。
Ｃ１２７．配列番号１５６のアミノ酸配列を有するポリペプチドにコンジュゲートした化膿連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）由来の連鎖球菌Ｃ５ａペプチダーゼ（ＳＣＰ）を含む組成物。
Ｃ１２８．配列番号１５７のアミノ酸配列を有するポリペプチドにコンジュゲートした化膿連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）由来の連鎖球菌Ｃ５ａペプチダーゼ（ＳＣＰ）を含む組成物。
Ｃ１２９．配列番号１５８のアミノ酸配列を有するポリペプチドにコンジュゲートした化膿連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）由来の連鎖球菌Ｃ５ａペプチダーゼ（ＳＣＰ）を含む組成物。
Ｃ１３０．配列番号１５６のアミノ酸配列を有するポリペプチドにコンジュゲートしたニューモリソイドを含む組成物。
Ｃ１３１．配列番号１５７のアミノ酸配列を有するポリペプチドにコンジュゲートしたニューモリソイドを含む組成物。
Ｃ１３２．配列番号１５８のアミノ酸配列を有するポリペプチドにコンジュゲートしたニューモリソイドを含む組成物。
Ｃ１３３．非脂質化ＯＲＦ２０８６ Ａ０５に作動可能に連結されたニューモリソイドを含む第１の融合ポリペプチド、および非脂質化ＯＲＦ２０８６ Ｂ０１に作動可能に連結されたニューモリソイドを含む第２の融合ポリペプチドを含む組成物。
Ｃ１３４．配列番号２のアミノ酸配列を含む第１の融合ポリペプチド、および配列番号１３９のアミノ酸配列を含む第２の融合ポリペプチドを含む組成物。
Ｃ１３５．非脂質化ＯＲＦ２０８６ Ｂ０１に作動可能に連結されたニューモリソイドを含む第１の融合ポリペプチド、および非脂質化ＯＲＦ２０８６ Ｂ２４に作動可能に連結されたニューモリソイドを含む第２の融合ポリペプチドを含む組成物。
Ｃ１３６．非脂質化ＯＲＦ２０８６ Ｂ０９に作動可能に連結されたニューモリソイドを含む第１の融合ポリペプチド、および非脂質化ＯＲＦ２０８６ Ｂ４４に作動可能に連結されたニューモリソイドを含む第２の融合ポリペプチドを含む組成物。

Claims (25)

  1. 非脂質化ＯＲＦ２０８６ポリペプチドのアミノ酸配列に作動可能に連結された担体ポリペプチドの配列を含む単離ポリペプチド。
  2. 担体ポリペプチドが、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）由来のニューモリシンポリペプチドに由来するサイトリソイドである、請求項１に記載のポリペプチド。
  3. ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＡ０５である、請求項１に記載のポリペプチド。
  4. ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＡ１２である、請求項１に記載のポリペプチド。
  5. ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＡ２２である、請求項１に記載のポリペプチド。
  6. ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＢ０１である、請求項１に記載のポリペプチド。
  7. ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＢ０９である、請求項１に記載のポリペプチド。
  8. ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＢ１５である、請求項１に記載のポリペプチド。
  9. ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＢ１６である、請求項１に記載のポリペプチド。
  10. ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＢ２２である、請求項１に記載のポリペプチド。
  11. ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＢ２４である、請求項１に記載のポリペプチド。
  12. ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＢ４４である、請求項１に記載のポリペプチド。
  13. ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＡ６２である、請求項１に記載のポリペプチド。
  14. ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＡ０４である、請求項１に記載のポリペプチド。
  15. ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＡ０１である、請求項１に記載のポリペプチド。
  16. ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＡ０６である、請求項１に記載のポリペプチド。
  17. ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＡ０７である、請求項１に記載のポリペプチド。
  18. ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＡ１５である、請求項１に記載のポリペプチド。
  19. ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＡ１９である、請求項１に記載のポリペプチド。
  20. ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＡ２０である、請求項１に記載のポリペプチド。
  21. ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＡ２９である、請求項１に記載のポリペプチド。
  22. ＯＲＦ２０８６ポリペプチドがＢ０２である、請求項１に記載のポリペプチド。
  23. 融合ポリペプチドである、請求項１に記載のポリペプチド。
  24. 非脂質化ＯＲＦ２０８６ Ａ０５に作動可能に連結されたニューモリソイドを含む第１の融合ポリペプチド、および非脂質化ＯＲＦ２０８６に作動可能に連結されたニューモリソイドを含む第２の融合ポリペプチドを含む組成物。
  25. 非脂質化ＯＲＦ２０８６ Ｂ０９に作動可能に連結されたニューモリソイドを含む第１の融合ポリペプチド、および非脂質化ＯＲＦ２０８６に作動可能に連結されたニューモリソイドを含む第２の融合ポリペプチドを含む組成物。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2019526274A (ja) * 2016-07-21 2019-09-19 ヴァック４オール・ピーティーイー・リミテッドＶａｃ４Ａｌｌ Ｐｔｅ． Ｌｔｄ． 抗マラリアワクチンとしてのバイオ融合タンパク質

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX339524B (es) 2001-10-11 2016-05-30 Wyeth Corp Composiciones inmunogenicas novedosas para la prevencion y tratamiento de enfermedad meningococica.
PL3246044T5 (pl) 2010-08-23 2024-06-17 Wyeth Llc Stabilne preparaty antygenów rLP2086 Neisseria meningitidis
MX362802B (es) 2010-09-10 2019-02-13 Wyeth Llc Star Variantes no lipidadas de antigenos orf2086 de neisseria meningitidis.
SA115360586B1 (ar) 2012-03-09 2017-04-12 فايزر انك تركيبات لعلاج الالتهاب السحائي البكتيري وطرق لتحضيرها
EP4043029A1 (en) 2012-03-09 2022-08-17 Pfizer Inc. Neisseria meningitidis compositions and methods thereof
JP6446377B2 (ja) 2013-03-08 2018-12-26 ファイザー・インク 免疫原性融合ポリペプチド
KR102199096B1 (ko) 2013-09-08 2021-01-06 화이자 인코포레이티드 나이세리아 메닌지티디스 조성물 및 그의 방법
CN107249626A (zh) * 2015-02-19 2017-10-13 辉瑞大药厂 脑膜炎奈瑟球菌组合物及其方法
JP7010961B2 (ja) 2017-01-31 2022-02-10 ファイザー・インク 髄膜炎菌組成物およびその方法
CN109045292A (zh) * 2018-11-08 2018-12-21 山东大学 一种a群链球菌寡糖蛋白缀合物及其制备方法与应用
AU2020355401A1 (en) * 2019-09-27 2022-04-14 Pfizer Inc. Neisseria meningitidis compositions and methods thereof
KR20230096033A (ko) 2020-10-27 2023-06-29 화이자 인코포레이티드 에스케리키아 콜라이 조성물 및 그의 방법
US20220202923A1 (en) 2020-12-23 2022-06-30 Pfizer Inc. E. coli fimh mutants and uses thereof
JP2024521847A (ja) * 2021-05-28 2024-06-04 ファイザー・インク コンジュゲート化莢膜糖抗原を含む免疫原性組成物およびその使用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2010512792A (ja) * 2006-12-22 2010-04-30 ワイス エルエルシー 髄膜炎菌性疾患の予防および処置のための新規な免疫原性組成物
WO2012134975A1 (en) * 2011-03-28 2012-10-04 St. Jude Children's Research Hospital Methods and compositions employing immunogenic fusion proteins

Family Cites Families (234)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4376110A (en) 1980-08-04 1983-03-08 Hybritech, Incorporated Immunometric assays using monoclonal antibodies
US4554101A (en) 1981-01-09 1985-11-19 New York Blood Center, Inc. Identification and preparation of epitopes on antigens and allergens on the basis of hydrophilicity
CH660375A5 (it) 1983-02-08 1987-04-15 Sclavo Spa Procedimento per la produzione di proteine correlate alla tossina difterica.
JPS60500673A (ja) 1983-03-08 1985-05-09 コモンウエルス　セラム　ラボラトリ−ズ　コミツシヨン 抗原活性を有するアミノ酸配列
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4650764A (en) 1983-04-12 1987-03-17 Wisconsin Alumni Research Foundation Helper cell
JPS6147500A (ja) 1984-08-15 1986-03-07 Res Dev Corp Of Japan キメラモノクロ−ナル抗体及びその製造法
EP0173494A3 (en) 1984-08-27 1987-11-25 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Chimeric receptors by dna splicing and expression
GB8422238D0 (en) 1984-09-03 1984-10-10 Neuberger M S Chimeric proteins
GB8424757D0 (en) 1984-10-01 1984-11-07 Pasteur Institut Retroviral vector
SE8405493D0 (sv) 1984-11-01 1984-11-01 Bror Morein Immunogent komplex samt sett for framstellning derav och anvendning derav som immunstimulerande medel
FR2573436B1 (fr) 1984-11-20 1989-02-17 Pasteur Institut Adn recombinant comportant une sequence nucleotidique codant pour un polypeptide determine sous le controle d'un promoteur d'adenovirus, vecteurs contenant cet adn recombinant, cellules eucaryotes transformees par cet adn recombinant, produits d'excretion de ces cellules transformees et leurs applications, notamment a la constitution de vaccins
JPS61134325A (ja) 1984-12-04 1986-06-21 Teijin Ltd ハイブリツド抗体遺伝子の発現方法
US4797368A (en) 1985-03-15 1989-01-10 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Adeno-associated virus as eukaryotic expression vector
US4666829A (en) 1985-05-15 1987-05-19 University Of California Polypeptide marker for Alzheimer's disease and its use for diagnosis
US4709017A (en) 1985-06-07 1987-11-24 President And Fellows Of Harvard College Modified toxic vaccines
EP0232262A4 (en) 1985-08-15 1989-09-19 Stauffer Chemical Co MICROORGANISM PRODUCING TRYPTOPHANE.
US5078996A (en) 1985-08-16 1992-01-07 Immunex Corporation Activation of macrophage tumoricidal activity by granulocyte-macrophage colony stimulating factor
US5139941A (en) 1985-10-31 1992-08-18 University Of Florida Research Foundation, Inc. AAV transduction vectors
DE3689123T2 (de) 1985-11-01 1994-03-03 Xoma Corp Modulare einheit von antikörpergenen, daraus hergestellte antikörper und verwendung.
US4861719A (en) 1986-04-25 1989-08-29 Fred Hutchinson Cancer Research Center DNA constructs for retrovirus packaging cell lines
US5514581A (en) 1986-11-04 1996-05-07 Protein Polymer Technologies, Inc. Functional recombinantly prepared synthetic protein polymer
US4950740A (en) 1987-03-17 1990-08-21 Cetus Corporation Recombinant diphtheria vaccines
US4980289A (en) 1987-04-27 1990-12-25 Wisconsin Alumni Research Foundation Promoter deficient retroviral vector
US5057540A (en) 1987-05-29 1991-10-15 Cambridge Biotech Corporation Saponin adjuvant
JPH01125328A (ja) 1987-07-30 1989-05-17 Centro Natl De Biopreparados 髄膜炎菌ワクチン
WO1989007150A1 (en) 1988-02-05 1989-08-10 The Trustees Of Columbia University In The City Of Retroviral packaging cell lines and processes of using same
US4912094B1 (en) 1988-06-29 1994-02-15 Ribi Immunochem Research Inc. Modified lipopolysaccharides and process of preparation
EP0432216A1 (en) 1988-09-01 1991-06-19 Whitehead Institute For Biomedical Research Recombinant retroviruses with amphotropic and ecotropic host ranges
DE68929323T2 (de) 1988-12-16 2002-04-18 De Staat Der Nederlanden Vertegenwoordigd Door De Minister Van Welzijn, Volksgezondheid En Cultuur Pneumolysin-mutanten und pneumokokken-impfstoffe daraus
US6716432B1 (en) 1988-12-16 2004-04-06 James Cleland Paton Pneumolysin mutants and pneumococcal vaccines made therefrom
US7118757B1 (en) 1988-12-19 2006-10-10 Wyeth Holdings Corporation Meningococcal class 1 outer-membrane protein vaccine
US5124263A (en) 1989-01-12 1992-06-23 Wisconsin Alumni Research Foundation Recombination resistant retroviral helper cell and products produced thereby
DK0606921T3 (da) 1989-03-09 2000-09-04 American Cyanamid Co Fremgangsmåde til isolering af Haemophilus influenzae protein E
US5354844A (en) 1989-03-16 1994-10-11 Boehringer Ingelheim International Gmbh Protein-polycation conjugates
US5703055A (en) 1989-03-21 1997-12-30 Wisconsin Alumni Research Foundation Generation of antibodies through lipid mediated DNA delivery
JPH0832638B2 (ja) 1989-05-25 1996-03-29 カイロン コーポレイション サブミクロン油滴乳剤を含んで成るアジュバント製剤
US5399346A (en) 1989-06-14 1995-03-21 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Gene therapy
US5585362A (en) 1989-08-22 1996-12-17 The Regents Of The University Of Michigan Adenovirus vectors for gene therapy
CA2039921A1 (en) 1990-04-16 1991-10-17 Xandra O. Breakefield Transfer and expression of gene sequences into central nervous system cells using herpes simplex virus mutants with deletions in genes for viral replication
US5264618A (en) 1990-04-19 1993-11-23 Vical, Inc. Cationic lipids for intracellular delivery of biologically active molecules
WO1991018088A1 (en) 1990-05-23 1991-11-28 The United States Of America, Represented By The Secretary, United States Department Of Commerce Adeno-associated virus (aav)-based eucaryotic vectors
IE912559A1 (en) 1990-07-19 1992-01-29 Merck & Co Inc The class ii protein of the outer membrane of neisseria¹meningitidis, and vaccines containing same
ATE194657T1 (de) 1990-09-25 2000-07-15 Cantab Pharma Res Bei einer transkomplementenden zellinie erzeugter defektiver virenimpfstoff
US5173414A (en) 1990-10-30 1992-12-22 Applied Immune Sciences, Inc. Production of recombinant adeno-associated virus vectors
IL101715A (en) 1991-05-02 2005-06-19 Amgen Inc Recombinant dna-derived cholera toxin subunit analogs
EP0625052A4 (en) 1991-10-21 1995-07-19 Medimmune Inc SECRETION SIGNAL OF LIPOPROTEIN-ENCODING DNA CONTAINING BACTERIAL EXPRESSION VECTOR.
US5252479A (en) 1991-11-08 1993-10-12 Research Corporation Technologies, Inc. Safe vector for gene therapy
IT1253009B (it) 1991-12-31 1995-07-10 Sclavo Ricerca S R L Mutanti immunogenici detossificati della tossina colerica e della tossina lt, loro preparazione ed uso per la preparazione di vaccini
WO1993015115A1 (en) 1992-01-24 1993-08-05 Cornell Research Foundation, Inc. E. coli dna polymerase iii holoenzyme and subunits
WO1993021769A1 (en) 1992-05-06 1993-11-11 President And Fellows Of Harvard College Diphtheria toxin receptor-binding region
AU680459B2 (en) 1992-12-03 1997-07-31 Genzyme Corporation Gene therapy for cystic fibrosis
DK0616034T3 (da) 1993-03-05 2005-02-21 Wyeth Corp Plasmid til fremstilling af CRM-protein og diphtheria toxin
AU696336B2 (en) 1993-03-19 1998-09-10 Cantab Pharmaceuticals Research Limited Defective mutant non-retroviral virus (e.g. HSV) as vaccine
ES2145072T3 (es) 1993-05-13 2000-07-01 American Cyanamid Co Preparacion y usos de proteinas de membranas externas carentes de los de cocos gramnegativos.
FR2705361B1 (fr) 1993-05-18 1995-08-04 Centre Nat Rech Scient Vecteurs viraux et utilisation en thérapie génique.
FR2705686B1 (fr) 1993-05-28 1995-08-18 Transgene Sa Nouveaux adénovirus défectifs et lignées de complémentation correspondantes.
ATE399873T1 (de) 1993-07-13 2008-07-15 Centelion Defekte adenovirus-vektoren und deren verwendung in der gentherapie
AU7477394A (en) 1993-07-30 1995-03-27 University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey Efficient gene transfer into primary lymphocytes
FR2708622B1 (fr) 1993-08-02 1997-04-18 Raymond Hamers Vecteur recombinant contenant une séquence d'un gène de lipoprotéine de structure pour l'expression de séquences de nucléotides.
US5550213A (en) 1993-12-27 1996-08-27 Rutgers, The State University Of New Jersey Inhibitors of urokinase plasminogen activator
FR2714830B1 (fr) 1994-01-10 1996-03-22 Rhone Poulenc Rorer Sa Composition contenant des acides nucléiques, préparation et utilisations.
FR2715847B1 (fr) 1994-02-08 1996-04-12 Rhone Poulenc Rorer Sa Composition contenant des acides nucléiques, préparation et utilisations.
FR2716459B1 (fr) 1994-02-22 1996-05-10 Univ Paris Curie Système hôte-vecteur utilisable en thérapie génique.
WO1995026411A2 (en) 1994-03-25 1995-10-05 The Uab Research Foundation Composition and methods for creating syngeneic recombinant virus-producing cells
US5739118A (en) 1994-04-01 1998-04-14 Apollon, Inc. Compositions and methods for delivery of genetic material
EP0753069A1 (en) 1994-04-15 1997-01-15 Targeted Genetics Corporation Gene delivery fusion proteins
US5571515A (en) 1994-04-18 1996-11-05 The Wistar Institute Of Anatomy & Biology Compositions and methods for use of IL-12 as an adjuvant
US5917017A (en) 1994-06-08 1999-06-29 President And Fellows Of Harvard College Diphtheria toxin vaccines bearing a mutated R domain
US6455673B1 (en) 1994-06-08 2002-09-24 President And Fellows Of Harvard College Multi-mutant diphtheria toxin vaccines
US6207646B1 (en) 1994-07-15 2001-03-27 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
US5565204A (en) 1994-08-24 1996-10-15 American Cyanamid Company Pneumococcal polysaccharide-recombinant pneumolysin conjugate vaccines for immunization against pneumococcal infections
US5837533A (en) 1994-09-28 1998-11-17 American Home Products Corporation Complexes comprising a nucleic acid bound to a cationic polyamine having an endosome disruption agent
GB9422096D0 (en) 1994-11-02 1994-12-21 Biocine Spa Combined meningitis vaccine
FR2727679B1 (fr) 1994-12-05 1997-01-03 Rhone Poulenc Rorer Sa Nouveaux agents de transfection et leurs applications pharmaceutiques
BE1008978A5 (fr) 1994-12-27 1996-10-01 Solvay Adjuvants pour vaccins.
IL116816A (en) 1995-01-20 2003-05-29 Rhone Poulenc Rorer Sa Cell for the production of a defective recombinant adenovirus or an adeno-associated virus and the various uses thereof
FR2730637B1 (fr) 1995-02-17 1997-03-28 Rhone Poulenc Rorer Sa Composition pharmaceutique contenant des acides nucleiques, et ses utilisations
IL117483A (en) 1995-03-17 2008-03-20 Bernard Brodeur MENINGITIDIS NEISSERIA shell protein is resistant to proteinase K.
AU6043396A (en) 1995-06-05 1996-12-24 University Of Alabama At Birmingham Research Foundation, The Composition and methods for creating syngeneic recombinant v irus-producing cells
DE69636544T2 (de) 1995-06-07 2007-06-06 Sanofi Pasteur, Inc. Expression von lipoproteinen
FR2741358B1 (fr) 1995-11-17 1998-01-02 Centre Nat Rech Scient Production de vecteurs retroviraux par l'intermediaire de vecteurs viraux a base de virus a adn
US6355255B1 (en) 1998-12-07 2002-03-12 Regents Of The University Of Minnesota Streptococcal C5a peptidase vaccine
US5846547A (en) 1996-01-22 1998-12-08 Regents Of The University Of Minnesota Streptococcal C5a peptidase vaccine
PT939647E (pt) 1996-08-27 2002-04-29 Chiron Corp Glicpconjugados do serogrupo b de neisseria meningitidis e metodos de utilizacao dos mesmos
JP4150082B2 (ja) 1996-08-27 2008-09-17 カイロン コーポレイション 独特の髄膜炎菌性ｂエピトープを規定するモノクローナル抗体およびワクチン組成物の調製におけるそれらの使用
AU5426098A (en) 1996-10-24 1998-05-15 Emory University Invasion associated genes from (neisseria meningitidis) serogroup
GB9622159D0 (en) 1996-10-24 1996-12-18 Solvay Sociutu Anonyme Polyanionic polymers as adjuvants for mucosal immunization
GB9622660D0 (en) 1996-10-31 1997-01-08 Biocine Spa Immunogenic detoxified mutant toxin
US6113918A (en) 1997-05-08 2000-09-05 Ribi Immunochem Research, Inc. Aminoalkyl glucosamine phosphate compounds and their use as adjuvants and immunoeffectors
BR9810500A (pt) 1997-06-30 2000-09-05 Rhone Poulenc Rorer Sa Sistema e aparelho para a transferência de ácido nucléico in vivo para o interior de células de organismos eucarióticos pluricelulares
ATE275423T1 (de) 1997-06-30 2004-09-15 Aventis Pharma Sa Verabreichung der nukleinsäure in den quergestreiften muskel
WO1999001157A1 (fr) 1997-06-30 1999-01-14 Rhone-Poulenc Rorer S.A. Amelioration du transfert d'acide nucleique dans les cellules d'organismes eucaryotes pluricellulaires et combinaison permettant la mise en oeuvre du procede
JPH1144977A (ja) 1997-07-25 1999-02-16 Copyer Co Ltd 画像形成装置
JP4295431B2 (ja) 1997-08-27 2009-07-15 ノバルティス バクシンズ アンド ダイアグノスティックス，インコーポレーテッド 髄膜炎菌性ｂエピトープの分子模倣物
EP1900818A3 (en) 1997-11-06 2008-06-11 Novartis Vaccines and Diagnostics S.r.l. Neisserial antigens
TWI239847B (en) 1997-12-02 2005-09-21 Elan Pharm Inc N-terminal fragment of Abeta peptide and an adjuvant for preventing and treating amyloidogenic disease
JP4399112B2 (ja) 1998-01-14 2010-01-13 カイロン ソチエタ ア レスポンサビリタ リミタータ ＮｅｉｓｓｅｒｉａＭｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ抗原
PT1053329E (pt) 1998-02-03 2010-01-04 Ct Disease Contr & Prevention Proteína psaa lipidada recombinante, métodos de preparação e utilização
GB9806456D0 (en) 1998-03-25 1998-05-27 Smithkline Beecham Biolog Vaccine composition
GB9808734D0 (en) 1998-04-23 1998-06-24 Smithkline Beecham Biolog Novel compounds
GB9808932D0 (en) 1998-04-27 1998-06-24 Chiron Spa Polyepitope carrier protein
EP2261357A3 (en) 1998-05-01 2012-01-11 Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. Neisseria meningitidis antigens and compositions
BR9910749A (pt) 1998-05-29 2001-02-13 Chiron Corp Composições e vacinas imunogênicas combinadas para meningites b e c e método de induzir uma resposta imune por administração da mesma
BR9914160A (pt) 1998-09-30 2001-06-26 American Cyanamid Co Composição antigênica, método para aumentar a capacidade de uma composição antigênica que contenha um antìgeno selecionado de uma bactéria, vìrus, fungo ou parasita patogênicos, do haemophilus influenzae, do helicobacter pylori, do vìrus sincicial respiratório, do rotavìrus, e, do vìrus simples do herpes para evocar a resposta imune de um hospedeiro vertebrado, plasmìdeo, célula hospedeira, método para produzir uma holotoxina do cólera mutante imunogênica, e, uso de uma quantidade auxiliar eficaz de uma holotoxina do cólera mutante
ATE274353T1 (de) 1998-09-30 2004-09-15 Us Army Verwendung von aufgereinigtem invaplex als impfstoff für gram-negativebakterien
EP1144998A3 (en) 1998-10-09 2002-08-07 Chiron Corporation Neisseria genomic sequences and methods of their use
US6281337B1 (en) 1998-11-12 2001-08-28 Schering Corporation Methods for conversion of protein isoforms
JP2004537954A (ja) 1999-01-15 2004-12-24 グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム ナイセリア・メニンギティディス・ポリペプチドｂａｓｂ０５２
CA2360658A1 (en) 1999-01-22 2000-07-27 Smithkline Beecham Biologicals S.A. Neisseria meningitidis antigenic polypeptides, corresponding polynucleotides and protective antibodies
GB9902084D0 (en) 1999-01-29 1999-03-24 Smithkline Beecham Biolog Novel compounds
EP1150712B1 (en) 1999-02-05 2008-11-05 Merck & Co., Inc. Human papilloma virus vaccine formulations
AU2457100A (en) 1999-02-26 2000-09-14 Chiron S.P.A. Enhancement of bactericidal activity of neisseria antigens with oligonucleotidescontaining cg motifs
US6245568B1 (en) 1999-03-26 2001-06-12 Merck & Co., Inc. Human papilloma virus vaccine with disassembled and reassembled virus-like particles
US7115730B1 (en) 1999-04-27 2006-10-03 Chiron Srl Immunogenic detoxified mutant E. coli LT-A-toxin
CN1359426A (zh) 1999-04-30 2002-07-17 希龙公司 奈瑟球菌基因组序列及其用法
EP2278007B1 (en) 1999-04-30 2014-04-16 Novartis Vaccines and Diagnostics S.r.l. Conserved neisserial antigens
AU783894B2 (en) 1999-05-19 2005-12-22 Novartis Vaccines And Diagnostics S.R.L. Combination neisserial compositions
GB9911683D0 (en) 1999-05-19 1999-07-21 Chiron Spa Antigenic peptides
GB9916529D0 (en) 1999-07-14 1999-09-15 Chiron Spa Antigenic peptides
US7384640B1 (en) 1999-09-30 2008-06-10 Wyeth Holdings Corporation Mutant cholera holotoxin as an adjuvant
CA2863668A1 (en) 1999-10-29 2001-05-03 Novartis Vaccines And Diagnostics S.R.L. Neisserial antigenic peptides
WO2001038350A2 (en) 1999-11-29 2001-05-31 Chiron Spa 85kDa NEISSERIAL ANTIGEN
GB9928196D0 (en) 1999-11-29 2000-01-26 Chiron Spa Combinations of B, C and other antigens
ES2307553T3 (es) 1999-12-02 2008-12-01 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Composiciones y procedimientos para estabilizar moleculas biologicas tras liofilizacion.
ATE476988T1 (de) 2000-01-17 2010-08-15 Novartis Vaccines & Diagnostic Membranvesikel (omv) impfstoff, der n. meningitidis serogruppe b membranproteine enthält
CN101906413A (zh) 2000-02-28 2010-12-08 启龙有限公司 奈瑟球菌蛋白质的异源表达
RU2293573C2 (ru) 2000-06-08 2007-02-20 Интерселл Аг Иммуностимулирующие олигодезоксинуклеотиды
AT410635B (de) 2000-10-18 2003-06-25 Cistem Biotechnologies Gmbh Vakzin-zusammensetzung
PL226184B1 (pl) 2001-01-23 2017-06-30 Aventis Pasteur Poliwalentna sprzezona szczepionka meningokokowa polisacharyd- bialko
GB0103424D0 (en) 2001-02-12 2001-03-28 Chiron Spa Gonococcus proteins
WO2002079246A2 (en) 2001-03-30 2002-10-10 Geneprot, Inc. Human arginine-rich protein-related compositions
US6942802B2 (en) 2001-04-13 2005-09-13 Wyeth Holdings Corporation Removal of bacterial endotoxin in a protein solution by immobilized metal affinity chromatography
CA2439428C (en) 2001-04-17 2012-01-24 Chiron Corporation Molecular mimetics of meningococcal b epitopes which elicit functionally active antibodies
CN1541111A (zh) 2001-06-07 2004-10-27 ���Ͽع����޹�˾ 作为佐剂的霍乱全毒素的突变形式
CN1977971A (zh) 2001-06-07 2007-06-13 惠氏控股有限公司 作为佐剂的霍乱全毒素的突变体形式
GB0115176D0 (en) 2001-06-20 2001-08-15 Chiron Spa Capular polysaccharide solubilisation and combination vaccines
CA2452720C (en) 2001-07-26 2012-04-17 Chiron S.R.L. Vaccines comprising aluminium adjuvants and histidine
GB0121591D0 (en) 2001-09-06 2001-10-24 Chiron Spa Hybrid and tandem expression of neisserial proteins
WO2003025132A2 (en) 2001-09-14 2003-03-27 Invitrogen Corporation Dna polymerases and mutants thereof
MX339524B (es) 2001-10-11 2016-05-30 Wyeth Corp Composiciones inmunogenicas novedosas para la prevencion y tratamiento de enfermedad meningococica.
GB0129007D0 (en) 2001-12-04 2002-01-23 Chiron Spa Adjuvanted antigenic meningococcal compositions
BR0308768A (pt) 2002-03-26 2005-02-15 Chiron Srl Sacarìdeos modificados possuindo estabilidade melhorada em água
GB0302218D0 (en) 2003-01-30 2003-03-05 Chiron Sri Vaccine formulation & Mucosal delivery
EP1506007B1 (en) 2002-05-14 2011-06-22 Novartis Vaccines and Diagnostics S.r.l. Mucosal combination vaccines for bacterial meningitis
DE60328481D1 (de) 2002-05-14 2009-09-03 Novartis Vaccines & Diagnostic Schleimhautapplizierter impfstoff, der das adjuvanz chitosan und menigokokkenantigene enthält
US7785608B2 (en) 2002-08-30 2010-08-31 Wyeth Holdings Corporation Immunogenic compositions for the prevention and treatment of meningococcal disease
GB0220198D0 (en) 2002-08-30 2002-10-09 Chiron Spa Modified saccharides,conjugates thereof and their manufacture
GB0220194D0 (en) 2002-08-30 2002-10-09 Chiron Spa Improved vesicles
HUE031886T2 (en) 2002-10-11 2017-08-28 Glaxosmithkline Biologicals Sa Polypeptide vaccines for extensive protection against hypervirulent meningococcal lines
AU2003288660A1 (en) 2002-11-15 2004-06-15 Chiron Srl Unexpected surface proteins in neisseria meningitidis
GB0227346D0 (en) * 2002-11-22 2002-12-31 Chiron Spa 741
US20070148729A1 (en) 2003-01-15 2007-06-28 Farley John E Methods for increasing neisseria protein expression and compositions thereof
PT2191844E (pt) 2003-01-30 2014-06-04 Novartis Ag Vacinas injetáveis contra múltiplos serogrupos meningocócicos
CA2519511A1 (en) 2003-03-17 2004-09-30 Wyeth Holdings Corporation Mutant cholera holotoxin as an adjuvant and an antigen carrier protein
MXPA05011110A (es) * 2003-04-16 2006-01-24 Wyeth Corp Composiciones inmunogenicas novedosas para la prevencion y tratamiento de un padecimiento originado por meningococos.
PL1631264T5 (pl) 2003-06-02 2018-09-28 Glaxosmithkline Biologicals Sa Kompozycje immunogenne oparte na biodegradowalnych mikrocząstkach zawierających toksoid błonicy i tężca
AU2004251742A1 (en) 2003-06-23 2005-01-06 Sanofi Pasteur, Inc. Immunization method against Neisseria meningitidis serogroups A and C
GB0316560D0 (en) 2003-07-15 2003-08-20 Chiron Srl Vesicle filtration
GB0323103D0 (en) 2003-10-02 2003-11-05 Chiron Srl De-acetylated saccharides
EP1670506B1 (en) 2003-10-02 2012-11-21 Novartis AG Liquid vaccines for multiple meningococcal serogroups
WO2005065708A2 (en) 2003-12-30 2005-07-21 Wyeth Formulations of hydrophobic proteins in an immunogenic composition having improved tolerability
GB0406013D0 (en) 2004-03-17 2004-04-21 Chiron Srl Analysis of saccharide vaccines without interference
GB0408977D0 (en) 2004-04-22 2004-05-26 Chiron Srl Immunising against meningococcal serogroup Y using proteins
GB0408978D0 (en) 2004-04-22 2004-05-26 Chiron Srl Meningococcal fermentation for preparing conjugate vaccines
GB0409745D0 (en) 2004-04-30 2004-06-09 Chiron Srl Compositions including unconjugated carrier proteins
GB0500787D0 (en) 2005-01-14 2005-02-23 Chiron Srl Integration of meningococcal conjugate vaccination
EP1740217B1 (en) 2004-04-30 2011-06-15 Novartis Vaccines and Diagnostics S.r.l. Meningococcal conjugate vaccination
GB0410220D0 (en) 2004-05-07 2004-06-09 Kirkham Lea Ann Mutant pneumolysin proteins
WO2005108419A1 (en) 2004-05-07 2005-11-17 Lea-Ann Kirkham Mutant cholesterol-binding cytolysin proteins
GB0411387D0 (en) 2004-05-21 2004-06-23 Chiron Srl Analysis of saccharide length
GB0413868D0 (en) 2004-06-21 2004-07-21 Chiron Srl Dimensional anlaysis of saccharide conjugates
WO2006011060A2 (en) 2004-07-23 2006-02-02 Chiron Srl Polypeptides for oligomeric assembly of antigens
GB0419408D0 (en) 2004-09-01 2004-10-06 Chiron Srl 741 chimeric polypeptides
GB0419846D0 (en) 2004-09-07 2004-10-13 Chiron Srl Vaccine adjuvants for saccharides
GB0424092D0 (en) 2004-10-29 2004-12-01 Chiron Srl Immunogenic bacterial vesicles with outer membrane proteins
GB0428394D0 (en) 2004-12-24 2005-02-02 Chiron Srl Saccharide conjugate vaccines
LT2682126T (lt) 2005-01-27 2017-02-27 Children`s Hospital & Research Center at Oakland Gna1870 pagrindu gaminamos pūslelių pavidalo vakcinos, skirtos plataus spektro apsaugai nuo neisseria meningitidis sukeltų ligų
EP1855595A2 (en) 2005-03-07 2007-11-21 ID Biomedical Corporation of Quebec c.o.b. as Glaxosmithkline Biologicals North America Pharmaceutical liposomal compositions
US8062641B2 (en) 2005-05-06 2011-11-22 Novartis Ag Immunogens for meningitidis-A vaccines
WO2007000342A2 (en) 2005-06-27 2007-01-04 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Immunogenic composition
US8007807B2 (en) 2005-09-01 2011-08-30 Novartis Vaccines And Diagnostics Gmbh Multiple vaccination including serogroup C meningococcus
EP2208999B1 (en) 2005-09-05 2014-08-27 GlaxoSmithKline Biologicals SA Serum bactericidal assay for N. meningitidis specific antisera
GB0524066D0 (en) 2005-11-25 2006-01-04 Chiron Srl 741 ii
BRPI0620418A2 (pt) 2005-12-23 2011-11-08 Glaxosmithkline Biolog Sa método para imunizar um paciente humano contra uma doença, usos de pelo menos dois e de pelo menos sete, dez, onze, treze ou quatorze conjugados e das vacinas, e, kit
WO2007111940A2 (en) 2006-03-22 2007-10-04 Novartis Ag Regimens for immunisation with meningococcal conjugates
TW200806315A (en) 2006-04-26 2008-02-01 Wyeth Corp Novel formulations which stabilize and inhibit precipitation of immunogenic compositions
US20070253985A1 (en) 2006-04-26 2007-11-01 Wyeth Novel processes for coating container means which inhibit precipitation of polysaccharide-protein conjugate formulations
CA2654706A1 (en) 2006-06-12 2007-12-21 Nathalie Devos Neisseria meningitidis lipooligosaccharide vaccine
US9370557B2 (en) 2006-06-15 2016-06-21 The University Court Of The University Of Glasgow Adjuvant compounds
GB0612854D0 (en) 2006-06-28 2006-08-09 Novartis Ag Saccharide analysis
AU2007263531B2 (en) 2006-06-29 2012-03-15 J. Craig Venter Institute, Inc. Polypeptides from neisseria meningitidis
ES2788001T3 (es) 2006-07-27 2020-10-20 Wyeth Llc Procedimiento de fermentación de alimentación discontinua de alta densidad celular para producir proteínas recombinantes
GB0700562D0 (en) 2007-01-11 2007-02-21 Novartis Vaccines & Diagnostic Modified Saccharides
AU2008287286B2 (en) 2007-04-13 2013-10-10 The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma Mutants of cholesterol-dependent cytolysins and uses thereof
RU2009149359A (ru) 2007-06-04 2011-07-20 Новартис АГ (CH) Состав вакцин против менингита
GB0713880D0 (en) 2007-07-17 2007-08-29 Novartis Ag Conjugate purification
GB0714963D0 (en) 2007-08-01 2007-09-12 Novartis Ag Compositions comprising antigens
EP2185576A4 (en) 2007-08-02 2011-01-12 Childrens Hosp & Res Ct Oak FHBP- AND LPXL1-BASED VESICIUM VACCINES FOR BROADBAND PROTECTION AGAINST NEISSERIA MENINGITIDIS-RELATED DISEASES
CA2925217A1 (en) 2007-10-19 2009-04-23 Novartis Ag Meningococcal vaccine formulations
CA2716212A1 (en) 2008-02-21 2009-08-27 Novartis Ag Meningococcal fhbp polypeptides
EP2254594B1 (en) 2008-03-05 2015-06-03 Sanofi Pasteur Process for stabilizing an adjuvant containing vaccine composition
AU2009223613B2 (en) 2008-03-10 2014-09-25 Children's Hospital & Research Center At Oakland Chimeric factor H binding proteins (fHBP) containing a heterologous B domain and methods of use
US20100035234A1 (en) 2008-05-19 2010-02-11 Novartis Ag Vaccine assays
UA99659C2 (uk) 2008-05-30 2012-09-10 Дзе Ю.Ес.Ей., Ес Репрезентед Бай Дзе Секретарі Оф Дзе Армі, Он Бехаф Оф Уолтер Рід Армі Мультивалентна вакцина з нативних везикул зовнішньої мембрани менінгококів, способи її застосування
BRPI0917306A2 (pt) 2008-08-27 2016-04-19 Childrens Hosp & Res Ct Oak ensaios com base fator de complemento h para a atividade sérica bacterecida contra neisseria meningitidis
US8470340B2 (en) 2008-09-03 2013-06-25 Children's Hospital & Research Center Oakland Peptides presenting an epitope of a domain of factor H binding protein and methods of use
IT1394288B1 (it) 2008-09-12 2012-06-06 Novartis Vaccines & Diagnostic Immunogeni di proteine che legano il fattore h.
GB0822634D0 (en) 2008-12-11 2009-01-21 Novartis Ag Meningitis vaccines
WO2010070453A2 (en) 2008-12-17 2010-06-24 Novartis Ag Meningococcal vaccines including hemoglobin receptor
SI2411048T1 (sl) 2009-03-24 2020-08-31 Glaxosmithkline Biologicals Sa Meningokokni faktor H vezavni protein uporabljen kot adjuvans
BRPI1009829A2 (pt) 2009-03-24 2016-11-16 Novartis Ag combinações de proteína de ligação de fator h meningocócico e conjugados de sacarídeos pneumocócicos
BRPI1013902A2 (pt) 2009-04-30 2019-09-24 Children´S Hospital & Res Center At Oakland proteínas de ligação de fator quimérico h(fhbp) é método de uso
US9365885B2 (en) 2009-06-16 2016-06-14 Puiying Annie Mak High-throughput complement-mediated antibody-dependent and opsonic bactericidal assays
JP2013502918A (ja) 2009-08-27 2013-01-31 ノバルティス アーゲー 髄膜炎菌ｆＨＢＰ配列を含むハイブリッドポリペプチド
WO2011039631A2 (en) 2009-09-30 2011-04-07 Novartis Ag Expression of meningococcal fhbp polypeptides
GB0917647D0 (en) 2009-10-08 2009-11-25 Glaxosmithkline Biolog Sa Expression system
BR112012010531A2 (pt) 2009-10-27 2019-09-24 Novartis Ag "polipeptídeos de modificação meningocócica fhbp"
US9173954B2 (en) 2009-12-30 2015-11-03 Glaxosmithkline Biologicals Sa Polysaccharide immunogens conjugated to E. coli carrier proteins
GB201003922D0 (en) 2010-03-09 2010-04-21 Glaxosmithkline Biolog Sa Conjugation process
EP2544714A1 (en) 2010-03-10 2013-01-16 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Vaccine composition
JP2013522287A (ja) 2010-03-18 2013-06-13 ノバルティス アーゲー 血清群ｂ髄膜炎菌のためのアジュバント添加ワクチン
BR122021020829B8 (pt) 2010-03-30 2022-12-27 Children´S Hospital & Res Center At Oakland Proteína de ligação ao fator h de ocorrência não natural (fhbp), composição, e célula hospedeira de neisseria meningitidis geneticamente modificada
CA2803239A1 (en) 2010-06-25 2011-12-29 Novartis Ag Combinations of meningococcal factor h binding proteins
PL3246044T5 (pl) 2010-08-23 2024-06-17 Wyeth Llc Stabilne preparaty antygenów rLP2086 Neisseria meningitidis
US9057716B2 (en) 2010-09-04 2015-06-16 Novartis Ag Bactericidal antibody assays to assess immunogenicity and potency of meningococcal capsular saccharide vaccines
US9259462B2 (en) 2010-09-10 2016-02-16 Glaxosmithkline Biologicals Sa Developments in meningococcal outer membrane vesicles
MX362802B (es) * 2010-09-10 2019-02-13 Wyeth Llc Star Variantes no lipidadas de antigenos orf2086 de neisseria meningitidis.
GB201015132D0 (en) 2010-09-10 2010-10-27 Univ Bristol Vaccine composition
US20120070457A1 (en) 2010-09-10 2012-03-22 J. Craig Venter Institute, Inc. Polypeptides from neisseria meningitidis
GB201101665D0 (en) 2011-01-31 2011-03-16 Novartis Ag Immunogenic compositions
EP4043029A1 (en) 2012-03-09 2022-08-17 Pfizer Inc. Neisseria meningitidis compositions and methods thereof
JP6446377B2 (ja) 2013-03-08 2018-12-26 ファイザー・インク 免疫原性融合ポリペプチド
KR102199096B1 (ko) 2013-09-08 2021-01-06 화이자 인코포레이티드 나이세리아 메닌지티디스 조성물 및 그의 방법

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2010512792A (ja) * 2006-12-22 2010-04-30 ワイス エルエルシー 髄膜炎菌性疾患の予防および処置のための新規な免疫原性組成物
WO2012134975A1 (en) * 2011-03-28 2012-10-04 St. Jude Children's Research Hospital Methods and compositions employing immunogenic fusion proteins

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2019526274A (ja) * 2016-07-21 2019-09-19 ヴァック４オール・ピーティーイー・リミテッドＶａｃ４Ａｌｌ Ｐｔｅ． Ｌｔｄ． 抗マラリアワクチンとしてのバイオ融合タンパク質
JP2022116169A (ja) * 2016-07-21 2022-08-09 ヴァック４オール・ピーティーイー・リミテッド 抗マラリアワクチンとしてのバイオ融合タンパク質
JP7579298B2 (ja) 2016-07-21 2024-11-07 ヴァック４オール・ピーティーイー・リミテッド 抗マラリアワクチンとしてのバイオ融合タンパク質

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