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JP2012526097A - Ｇｐｒ１１９調節因子 - Google Patents

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Abstract

Ｇタンパク質共役受容体ＧＰＲ１１９の活性を調節する式（Ｉ）の化合物、および動物における、Ｇタンパク質共役受容体ＧＰＲ１１９の調節と関連付けられる疾患の治療のためのその使用が本明細書に記載される。
【化１】

Description

本発明は、新規な部類の縮合ピロリジン、それらの化合物を含有する医薬組成物、およびＧタンパク質共役受容体ＧＰＲ１１９の活性を調節するためのその使用に関する。
糖尿病は、異常なグルコース恒常性の結果として高濃度の血中グルコースが存在する障害である。最も一般的な形態の糖尿病は、Ｉ型糖尿病（インスリン依存型糖尿病とも呼ばれる）およびＩＩ型糖尿病（インスリン非依存型糖尿病とも呼ばれる）である。すべての糖尿病症例のおよそ９０％を占めるＩＩ型糖尿病は、微小血管合併症（網膜症、神経障害、および腎障害を含める）、ならびに大血管合併症（加速性のアテローム性動脈硬化症、冠動脈心疾患、および卒中を含める）をもたらす深刻な進行性疾患である。
現在、糖尿病の治療法は存在しない。この疾患の標準的な治療は限られており、血中グルコース濃度をコントロールして、合併症を最小限に抑える、または遅らせることに集中している。現行の治療は、インスリン抵抗性（メトホルミン、チアゾリジンジオン）、またはβ細胞からのインスリン放出（スルホニル尿素、エキサナチド（ｅｘａｎａｔｉｄｅ））のどちらかをターゲットとしている。β細胞の脱分極を介して働くスルホニル尿素および他の化合物は、循環グルコース濃度とは無関係にインスリン分泌を刺激するので、低血糖を促進する。認可されている薬物の１つであるエキサナチドは、高グルコースの存在下でのみインスリン分泌を刺激するが、経口による生物学的利用能を欠くので、注射しなければならない。ジペプチジルペプチダーゼＩＶ阻害剤であるシタグリプチンは、インクレチンホルモンの血中濃度を上昇させる新しい薬物であり、そのインクレチンホルモンは、インスリン分泌を増加させ、グルカゴン分泌を減少させることができ、あまり特徴付けられていない他の効果ももち得る。しかし、シタグリプチンおよび他のジペプチジルペプチダーゼＩＶ阻害剤は、他のホルモンおよびペプチドの組織濃度にも影響を及ぼすことがあり、このより広範な影響による長期的な結果については、十分な調査がなされていない。
ＩＩ型糖尿病では、筋細胞、脂肪細胞、および肝細胞がインスリンに正常に反応しない。この状態（インスリン抵抗性）は、細胞のインスリン受容体の数の減少、細胞のシグナル伝達経路の破綻、またはこの両方に起因する可能性がある。最初のうち、β細胞は、インスリン産生量を増加させてインスリン抵抗性の埋め合わせをする。しかし結局、β細胞は、正常なグルコース濃度（正常血糖）を維持するのに十分なインスリンを産生できなくなり、ＩＩ型糖尿病への進行を示す。
ＩＩ型糖尿病では、β細胞の機能不全と相まったインスリン抵抗性により空腹時高血糖が生じる。β細胞異常機能不全には２つの態様がある。すなわち、１）（非刺激性の低グルコース濃度で起こる）基礎インスリン放出の増加（これは、ＩＩ型糖尿病だけでなく、肥満のインスリン抵抗性前糖尿病段階でも認められる）、および２）高血糖負荷に反応して、インスリン放出が、すでに上昇している基礎レベルを上回って増加しないこと（この現象は、前糖尿病段階では起こらず、正常血糖のインスリン抵抗性段階から明らかなＩＩ型糖尿病へと移行する前兆となる場合もある）。後者の態様を治療する現行の療法としては、内在性の貯蔵インスリンの放出を誘発するためのＡＴＰ感受性β細胞カリウムチャネルの阻害剤、および外因性インスリンの投与が挙げられる。どちらも血中グルコース濃度の的確な正常化を実現するものでなく、また低血糖を惹起するリスクを伴う。
したがって、グルコース依存的に機能する薬剤の発見に大きな関心が寄せられている。このように機能する生理学的なシグナル伝達経路は、腸管ペプチドのＧＬＰ−１およびＧＩＰを含めて、よく知られている。これらのホルモンは、同種のＧタンパク質共役受容体を介して信号を送って、膵臓β細胞におけるｃＡＭＰの産生を刺激する。ｃＡＭＰが増加しても、空腹時または食事前の状態の間はインスリン放出が刺激されないようである。しかし、ＡＴＰ感受性カリウムチャネル、電位感受性カリウムチャネル、および開口分泌機構を含めた、ｃＡＭＰのいくつかの生化学的ターゲットは、食後のグルコース刺激によるインスリン分泌が顕著に強化されるように調節される。したがって、同様に機能する、ＧＰＲ１１９を含めた新規なβ細胞ＧＰＣＲのアゴニスト調節因子も、ＩＩ型糖尿病患者において、内在性インスリンの放出を刺激し、グルコース濃度の正常化を促進するということになる。たとえばＧＬＰ−１が刺激された結果としてｃＡＭＰが増加すると、β細胞増殖が促進され、β細胞死が抑制され、したがって膵島質量が向上することもわかっている。β細胞質量に対するこのプラスの効果は、インスリンが十分に産生されないＩＩ型糖尿病において有益となるはずである。
代謝性疾患が他の生理系に悪影響を及ぼすことはよく知られており、複合的な疾患状態（たとえば、「シンドロームＸ」におけるＩ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、不十分な耐糖能、インスリン抵抗性、高血糖、高脂血症、高トリグリセリド血症、高コレステロール血症、異脂肪症、肥満、または心血管疾患）、または腎疾患や末梢神経障害などの、糖尿病に引き続いて生じる続発性疾患がしばしば併発される。したがって、糖尿病状態の治療は、このような相互に関連した疾患状態にとって有益であるはずである。
本発明によれば、新規な部類のＧＰＲ調節因子が発見された。これらの化合物は、以下に示す式（Ｉ）
Figure 2012526097
 ［式中、
Ｘは、
Figure 2012526097
 であり、
Ｒ１は、ＣＯ−Ｏ−Ｒ５、または
Figure 2012526097
 であり、
Ｒ２は、水素、シアノ、またはメチルであり、
Ｒ３は、水素、ＯＨ、ハロゲン、シアノ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、Ｃ１〜Ｃ５アルコキシ、またはＣ１〜Ｃ５アルキルであり、
Ｒ４は、存在しない、または−ＣＯ−ＮＲ８Ｒ９、トリアゾール、テトラゾール、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、ＮＨ２、−ＮＨ−Ｃ１〜Ｃ５アルキル、−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＯ−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ５アルキル、−ＮＨ−ＣＯ−Ｃ１〜Ｃ５アルキル、もしくは−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＯ−Ｃ１〜Ｃ５アルキルであり、
Ｒ５は、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、またはシクロアルキル部分の１個の炭素原子がメチルもしくはエチルで置換されていてもよいＣ３〜Ｃ６シクロアルキルであり、
Ｒ６は、ＣＦ３、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、ハロゲン、シアノ、またはＣ３〜Ｃ６シクロアルキルであり、
Ｒ７は、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、ＮＨ２、または（ＣＨ２）２−ＯＨであり、
Ｒ８は、水素またはＣ１〜Ｃ５アルキルであり、
Ｒ９は、水素、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＯＨ、３−オキセタニル、または３−ヒドロキシシクロブチルであり、
Ｒ１０は、水素、シアノ、ニトロ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ５アルコキシ、またはＣ１〜Ｃ５アルキルであり、
Ｒ１１は、水素、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、またはハロゲンであり、
Ａ１、Ａ２、Ａ３、およびＡ４は、それぞれ独立に、ＣＨ、Ｎ−オキシド、またはＮであり、
但し、
ａ）Ａ１、Ａ２、Ａ３、およびＡ４のうちの２つ以下は、Ｎであり、
ｂ）Ａ１、Ａ２、Ａ３、およびＡ４のうちの１つ以下は、Ｎ−オキシドである］
または薬学的に許容できるその塩
によって表すことができる。
式Ｉの化合物は、Ｇタンパク質共役受容体の活性を調節する。より詳細には、式Ｉの化合物は、ＧＰＲ１１９を調節する。そのため、前記化合物は、糖尿病などの、ＧＰＲ１１９の活性が疾患の病理または症状の一因となる疾患の治療に有用である。そのような状態の例として、高脂血症、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、特発性Ｉ型糖尿病（Ｉｂ型）、成人潜在性自己免疫性糖尿病（ＬＡＤＡ）、早発性２型糖尿病（ＥＯＤ）、若年性非定型糖尿病（ＹＯＡＤ）、若年発症成人型糖尿病（ＭＯＤＹ）、栄養不良関連糖尿病、妊娠糖尿病、冠動脈心疾患、虚血発作、血管形成術後の再狭窄、末梢血管疾患、間欠性跛行、心筋梗塞（たとえば、壊死およびアポトーシス）、異脂肪症、食後脂肪血症、耐糖能障害（ＩＧＴ）状態、空腹時血漿グルコース異常（ｉｍｐａｉｒｅｄ ｆａｓｔｉｎｇ ｐｌａｓｍａ ｇｌｕｃｏｓｅ）状態、代謝性アシドーシス、ケトーシス、関節炎、肥満、骨粗鬆症、高血圧、うっ血性心不全、左室肥大、末梢動脈疾患、糖尿病性網膜症、黄斑変性、白内障、糖尿病性腎症、糸球体硬化症、慢性腎不全、糖尿病性ニューロパシー、メタボリック症候群、シンドロームＸ、月経前症候群、冠動脈心疾患、狭心症、血栓症、アテローム性動脈硬化症、一過性脳虚血発作、卒中、血管再狭窄、高血糖、高インスリン血症、高脂血症、高トリグリセリド血症、インスリン抵抗性、グルコース代謝障害、耐糖能障害状態、空腹時血漿グルコースの異常状態、肥満、勃起機能不全、皮膚および結合組織の障害、足の潰瘍化および潰瘍性大腸炎、内皮障害、ならびに血管伸展性の障害が挙げられる。式Ｉの化合物は、アルツハイマー病、統合失調症、認知障害などの神経障害の治療に使用することもできる。式Ｉの化合物は、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、過敏性腸症候群などの胃腸疾患においても有益となる。上述のように、式Ｉの化合物は、肥満患者、特に糖尿病に罹患している肥満患者において体重減少を刺激するのにも使用することができる。
本発明の別の実施形態は、式Ｉの化合物を含有する医薬組成物を対象とする。そのような製剤は通常、少なくとも１種の薬学的に許容できる賦形剤と混和された式Ｉの化合物を含有する。そうした製剤はまた、少なくとも１種の追加の（本明細書に記載の）薬剤を含有してもよい。そのような薬剤の例として、（後述する）抗肥満薬および／または抗糖尿病薬が挙げられる。本発明の追加の態様は、糖尿病および本明細書に記載の関連状態を治療する医薬の調製における式Ｉの化合物の使用に関する。
本発明は、本発明の例示的な実施形態についての以下の詳細な記述およびその中に含まれる実施例を参照することにより、より一層容易に理解することができる。
本発明は、当然様々に異なり得る、特定の合成的製造方法に限定されないことを理解されたい。本明細書で使用する専門用語は、特定の実施形態について述べるためのものにすぎず、限定するものではないことも理解されたい。複数形および単数形は、数を示す以外では、交換可能であるとして扱うべきである。
本文書内の見出しは、読者が文書に手早く目を通せるようにするために利用されるにすぎない。それらの見出しは、本発明または特許請求の範囲をいかなる形でも限定しないものと解釈すべきである。
定義および例示
ａ．「ハロゲン」とは、塩素、フッ素、ヨウ素、または臭素原子を指す。
ｂ．「Ｃ１〜Ｃ５アルキル」とは、１〜５個の炭素原子を含んでいる分枝状または直鎖状アルキル基、たとえば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ペンチルなどを指す。
ｃ．「Ｃ１〜Ｃ５アルコキシ」とは、１〜５個の炭素原子を含んでいる直鎖または分枝鎖アルコキシ基、たとえば、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、イソブトキシ、ペントキシなどを指す。
ｄ．「Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル」とは、完全に水素化され、単環として存在する、非芳香族の環を指す。そのような炭素環の例として、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、およびシクロヘキシルが挙げられる。
ｅ．「治療有効量」とは、（ｉ）特定の疾患、状態、または障害を治療もしくは予防する、（ｉｉ）特定の疾患、状態、または障害の１つまたは複数の症状を緩和し、寛解させ、もしくは除去する、または（ｉｉｉ）本明細書に記載の特定の疾患、状態、または障害の１つまたは複数の症状の発症を予防し、もしくは遅らせる、本発明の化合物の量を意味する。
ｆ．「患者」とは、温血動物、たとえば、モルモット、マウス、ラット、アレチネズミ、ネコ、ウサギ、イヌ、サル、チンパンジー、およびヒトを指す。
ｇ．「治療する」とは、化合物が、患者の疾患（もしくは状態）または疾患に関連する任意の組織損傷を軽減し、解消し、またはその進行を緩慢にし得ることを指す。
ｈ．用語「調節された」、「調節すること」、または「調節する」とは、本明細書では、別段指摘しない限り、本発明の化合物を用いた、Ｇタンパク質共役受容体ＧＰＲ１１９の活性化を指す。
ｉ．「薬学的に許容できる」とは、物質または組成物が、製剤を構成する他の成分および／またはそれによる治療を受ける哺乳動物と化学的および／または毒物学的に適合性でなければならないことを示す。
ｊ．「塩」とは、薬学的に許容できる塩、および化合物の調製などの工業的プロセスでの使用に適する塩を指すものとする。
ｋ．「薬学的に許容できる塩」とは、化合物の実際の構造に応じて、薬学的に許容できる酸付加塩」または「薬学的に許容できる塩基付加塩」のどちらかを指すものとする。
ｌ．「薬学的に許容できる酸付加塩」とは、式Ｉまたはその中間体のいずれかによって表される塩基化合物の非毒性のいかなる有機酸または無機酸付加塩にも該当するものとする。適切な塩を形成する無機酸の実例として、塩化水素酸、臭化水素酸、硫酸、およびリン酸、ならびにオルトリン酸一水素ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ ｍｏｎｏｈｙｄｒｏｇｅｎ ｏｒｔｈｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ）や硫酸水素カリウムなどの酸金属塩が挙げられる。適切な塩を形成する有機酸の実例として、モノ、ジ、およびトリカルボン酸が挙げられる。そのような酸の実例は、たとえば、酢酸、グリコール酸、乳酸、ピルビン酸、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、安息香酸、ヒドロキシ−安息香酸、フェニル酢酸、ケイ皮酸、サリチル酸、２−フェノキシ安息香酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ならびにメタンスルホン酸や２−ヒドロキシエタンスルホン酸などのスルホン酸である。このような塩は、水和した形態または実質的に無水の形態のどちらで存在してもよい。一般に、こうした化合物の酸付加塩は、水および種々の親水性有機溶媒に可溶性である。
ｍ．「薬学的に許容できる塩基付加塩」とは、式Ｉまたはその中間体のいずれかによって表される化合物の非毒性のいかなる有機または無機塩基付加塩にも該当するものとする。適切な塩を形成する塩基の実例として、水酸化ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、バリウムなどの、アルカリ金属またはアルカリ土類金属水酸化物；アンモニア；ならびにメチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、ピコリンなどの、脂肪族、脂環式、または芳香族有機アミンが挙げられる。
ｎ．「式Ｉの化合物」、「本発明の化合物」、および「化合物」は、本出願全体にわたり区別なく使用しており、同義語として扱うべきである。
「異性体」とは、以下で定義するような「立体異性体」および「幾何異性体」を意味する。
ｏ．「立体異性体」とは、１つまたは複数のキラル中心を有する化合物を指し、各中心は、ＲまたはＳ立体配置で存在し得る。立体異性体として、すべてのジアステレオ異性体、鏡像異性体、およびエピマーの形態、ならびにそのラセミ体および混合物が挙げられる。
ｐ．「幾何異性体」とは、シス、トランス、アンチ、シン、エントゲーゲン（Ｅ）、およびツザンメン（Ｚ）の形態、ならびにその混合物として存在し得る化合物を指す。
式（Ｉ）の化合物のいくつかは、幾何異性体として存在し得る。式（Ｉ）の化合物は、１つまたは複数の不斉中心を有し、したがって２種以上の立体異性体形態として存在することもある。本発明は、式（Ｉ）の化合物のすべての個々の立体異性体および幾何異性体ならびにその混合物を包含する。個々の鏡像異性体は、キラル分離によって、または合成の際に関連する鏡像異性体を使用して得ることができる。
加えて、本発明の化合物は、溶媒和していない形で存在しても、水、エタノールなどの薬学的に許容できる溶媒と溶媒和した形で存在してもよい。一般に、本発明の目的では、溶媒和した形態は、溶媒和していない形態と同等であるとみなす。化合物は、１種または複数の結晶状態、すなわち多形体で存在する場合もあり、または非晶質固体として存在する場合もある。そのようなすべての形態が特許請求の範囲に包含される。
式Ｉの化合物の多くは、以下で図示するように、エーテル結合を介してピリミジン環に結合した３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン環を含んでいる。このアザビシクロ−ノナンは、幾何異性体として存在し、以下で図示するシンまたはアンチ異性体のいずれかとして存在し得る。
Figure 2012526097
式Ｉの化合物はすべて、以下で図示するように、ピロリジン部分に縮合したフェニル環または含窒素芳香族を含んでいる。
Figure 2012526097
Ａ１〜Ａ４は、２個まで窒素原子とすることができ、残りはＣＨとなる。すなわち、この縮合環の芳香族部分は、たとえば、フェニル、ピリジル、ピリミジニル、ピリダジニル、またはピラジニルになることができる。Ｒ３は、水素、または上で規定した置換基の１つでよい。Ｒ３は、水素でないとき、（環縮合における（すなわち、縮合ピロリジニル部分を形成している）２個の炭素を除いて）縮合環のどの炭素原子に結合していてもよい２個までの置換基とすることができる。Ｒ４は、存在しても存在しなくてもよく、存在する場合、（縮合ピロリジニル部分を形成している２個の炭素を除いて）環上のどの炭素原子に結合していてもよい。
加えて、Ａ１〜Ａ４の１つは、Ｎ−オキシド部分であってもよい。Ａ１〜Ａ４によって表されるアリール部分が置換されている任意の状況では、当業者には容易にわかるとおり、関連する炭素原子は、ＣＲ３またはＣＲ４となり、ＣＨではない。
そのような含窒素縮合環の例として、以下のものが挙げられる。
Figure 2012526097
本発明のより詳細な実施形態では、Ｘは、以下に示す３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナンであり、残りの変数は、上で規定したとおりである。
Figure 2012526097
 他の実施形態では、Ｘは、
Figure 2012526097
 によって表されるピペリジンである。
より詳細な実施形態では、
ａ）Ｒ１は−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ５であり、Ｘはピペリジンまたは３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナンであり、Ｒ２は水素またはシアノであり、Ａ１〜Ａ４は、フェニル環を形成している、
ｂ）Ｒ１は−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ５であり、Ｘはピペリジンまたは３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナンであり、Ｒ２は水素またはシアノであり、Ａ１〜Ａ４は、ピリジル環を形成している、
ｃ）Ｒ１は−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ５であり、Ｘはピペリジンまたは３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナンであり、Ｒ２は水素またはシアノであり、Ａ１〜Ａ４は、ピリジル環を形成しており、Ｒ３は水素、メチルまたはシアノであり、Ｒ４は存在しない、
ｄ）Ｒ１は−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ５であり、Ｘはピペリジンまたは３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナンであり、Ｒ２は水素またはシアノであり、Ｒ１０は水素であり、Ａ１〜Ａ４は、フェニル環を形成しており、Ｒ３は水素であり、Ｒ４は存在し、ＮＨ−（ＣＨ２）２−ＯＨで表される。
他の実施形態では、Ａ１〜Ａ４は、フェニル環を形成している。
別の実施形態では、Ａ１〜Ａ４は、Ａ１、Ａ２、Ａ３およびＡ４の１つまたは２つがＮである環を形成している。
さらに他の実施形態では、Ａ１〜Ａ４は、ピリジル環を形成している。
他の実施形態では、Ｒ４は存在しないか、または−ＣＯ−ＮＲ８Ｒ９である。
他の実施形態では、Ｒ１は−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ５である。
他の実施形態では、Ｒ３はフルオロまたは水素である。
他の実施形態では、Ｒ２は水素またはシアノである。
合成
本発明の化合物は、化学分野でよく知られている方法と類似した方法を包含する合成経路によって、特に本明細書に収められている記述に照らして、合成することができる。出発材料は、Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（ウィスコンシン州ミルウォーキー）などの市販品供給元から一般に入手可能であり、または当業者に知られている方法を使用して容易に調製される（たとえば、Ｌｏｕｉｓ Ｆ．ＦｉｅｓｅｒおよびＭａｒｙ Ｆｉｅｓｅｒ、Ｒｅａｇｅｎｔｓ ｆｏｒ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、１〜１９巻、Ｗｉｌｅｙ、ニューヨーク（１９６７〜１９９９年版）、またはＢｅｉｌｓｔｅｉｎｓ Ｈａｎｄｂｕｃｈ ｄｅｒ ｏｒｇａｎｉｓｃｈｅｎ Ｃｈｅｍｉｅ、第４版、ベルリン、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ編（増刊を含める）（Ｂｅｉｌｓｔｅｉｎオンラインデータベースからも入手可能）に一般に記載されている方法によって調製される）。
例示する目的で、以下で図示する反応スキームにより、本発明の化合物ならびに重要中間体を合成する潜在的経路を示す。個々の反応ステップのより詳細な説明については、以下の実施例の部を参照されたい。当業者なら、本発明の化合物の合成に他の合成経路を使用してもよいことがわかるであろう。詳細な出発材料および試薬をスキームの中で示し、以下で論じるが、他の出発材料および試薬で容易に置き換えて、様々な誘導体および／または反応条件を準備することができる。加えて、以下で述べる方法によって調製される化合物の多くは、当業者によく知られている従来の化学を使用し、この開示に照らしてさらに改変することができる。
式Ｉの化合物は、当技術分野で同様に知られているエーテル生成の方法を使用して調製することができる。１）Ｈｕｇｈｅｓ，Ｄ．Ｌ．、Ｏｒｇａｎｉｃ Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ １９９２、４２、米国ニュージャージー州ホーボーケン、２）Ｔｉｋａｄ，Ａ．、Ｒｏｕｔｉｅｒ，Ｓ．、Ａｋｓｓｉｒａ，Ｍ．、Ｌｅｇｅｒ，Ｊ．−Ｍ．ｌ、Ｊａｒｒｙ，Ｃ．、Ｇｕｉｌｌａｕｍｅｔ，Ｇ．、Ｓｙｎｌｅｔｔ ２００６、１２、１９３８〜４２、および３）Ｌｏｋｓｈａ，Ｙ．Ｍ．、Ｇｌｏｂｉｓｃｈ，Ｄ．、Ｐｅｄｅｒｓｅｎ，Ｅ．Ｂ．、Ｌａ Ｃｏｌｌａ，Ｐ．、Ｃｏｌｌｕ，Ｇ．、Ｌｏｄｄｏ，Ｒ．、Ｊ．Ｈｅｔ．Ｃｈｅｍ．２００８、４５、１１６１〜６などの、そうした反応についてより詳細に記載している教本に目を向けられたい。
すぐ下の反応スキームＩは、式Ｉの化合物を組み立てるための代替方法を例示するものである。分子の中心部分は、置換されていてもよいピリミジン環である。式Ｉの化合物は、以下に示すように、ピリミジンとエーテル結合およびアミノ結合の両方を形成することにより生成される。この一連の反応を実施する順序は重要でない。
Figure 2012526097
反応スキームＩの出発材料は、Ｒ２およびＲ１０が、通常は最終生成物で所望されるのと同じ置換基である、構造１のジヒドキシ−ピリミジンである。このようなピリミジンの生成方法は、当技術分野で知られている。
ステップＡの塩素化反応は、当技術分野で知られているとおりに実施する。構造１の化合物をＰＯＣｌ３（オキシ塩化リン）などの塩素化試薬と反応させて（Ｍａｔｕｌｅｎｋｏ，Ｍ．Ａ．ら、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００７、１５、１５８６〜１６０５）、構造２のジクロロピリミジンを生成する。塩素化剤は、トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン、ジイソプロピルエチルアミンなどの添加剤を加えまたは加えずに、過剰に使用するか、またはトルエン、ベンゼン、キシレンなどの溶媒中で使用する。この反応は、条件の選択に応じて、室温〜１４０℃の範囲の温度で実施することができる。代替塩素化試薬として、ＰＣｌ３（三塩化リン）、ＰＯＣｌ３／ＰＣｌ５（五塩化リン）、塩化チオニル、塩化オキサリル、またはホスゲンが挙げられる。場合によっては、構造２のジクロロピリミジンは、市販品供給元から入手することもできる。任意選択により、構造２のジクロロピリミジンを反応液から単離および回収し、さらに当技術分野で知られているとおりに精製してもよい。別法として、以下で記載するステップＢにおいて未精製材料を使用してもよい。
ステップＢでは、構造３の縮合ピロリジンと構造２のジクロロピリミジン間にアミノ結合を形成する。構造３の縮合ピロリジンにおいて、Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４、Ｒ３、およびＲ４は通常、最終生成物で所望されるのと同じ置換基となる。このようなピロリジン誘導体は、当技術分野で知られており、（ａ）Ｚｈａｏ，Ｈ．、Ｔｈｕｒｋａｕｆ，Ａ．、Ｈｅ，Ｘ．、Ｈｏｄｇｅｔｔｓ，Ｋ．、Ｚｈａｎｇ，Ｘｉ．、Ｒａｃｈｗａｌ，Ｓ．、Ｋｏｖｅｒ，Ｒ．Ｘ．、Ｈｕｔｃｈｉｓｏｎ，Ａ．、Ｐｅｔｅｒｓｏｎ，Ｊ．、Ｋｉｅｌｔｙｋａ，Ａ．、Ｂｒｏｄｂｅｃｋ，Ｒ．、Ｐｒｉｍｕｓ，Ｒ．、Ｗａｓｌｅｙ，Ｊ．Ｗ．Ｆ．、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２００２、１２、３１０５、（ｂ）Ｎｏｍｕｒａ，Ｓ．、Ｙａｍａｍｏｔａ，Ｙ．、ＷＯ２００６０８０５７７、（ｃ）Ｇｒｉｂｂｌｅ，Ｇ．、Ｈｏｆｆｍａｎ，Ｊ．Ｈ．、Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ １９８３、１３、４８９、（ｄ）Ｓａｓｓａｔｅｌｌｉ，Ｍ．、Ｂｏｕｃｈｉｋｈｉ，Ｆ．、Ｍｅｓｓａｏｕｄｉ，Ｓ．、Ａｎｉｚｏｎ，Ｆ．、Ｄｅｂｉｔｏｎ，Ｅ．、Ｂａｒｔｈｏｍｅｕｆ，Ｃ．、Ｐｒｕｄｈｏｍｍｅ、Ｍｏｒｅａｕ，Ｐ．、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００６、４１、８８に記載されている。実施例においても、追加の教示およびそのような調製の参考文献を示す。
アミノ結合は、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノールなどの極性プロトン性溶媒中にて、当量の構造２と３の化合物を、どの溶媒を使用するかに応じて０℃〜１２０℃の範囲の温度で０．５〜２４時間接触させることにより形成する。この反応に利用する典型的な条件は、１０８℃で１時間加熱を行う溶媒としてのイソプロパノールの使用である。別法として、トリエチルアミンやジエチルイソプロピルアミンなどのアミン塩基、または炭酸水素ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸ナトリウムなどの無機塩基をこの反応に加えてもよい。上記アミンまたは無機塩基の１種を使用する場合では、溶媒をアセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（「ＤＭＦ」）、テトラヒドロフラン（「ＴＨＦ」）、１，４−ジオキサンなどの極性非プロトン性溶媒（０℃〜１００℃で０．５〜２４時間）に変更することができる。この反応に利用する典型的な条件として、アセトニトリル中にて室温で３時間のジエチルイソプロピルアミンの使用が挙げられる。また、水、メタノール、エタノール、プロパノールなどの単独または組合せの極性プロトン性溶媒中での塩酸の使用も、０℃〜１１０℃の温度でのこの変換に使用することができる。典型的な条件は、エタノール中にて７８℃で水を使用するものである。構造５の中間体は、反応液から単離および回収し、当技術分野で知られているとおりにさらに精製することができる。別法として、以下で記載するステップＢにおいて未精製材料を使用してもよい。
ステップＣでは、構造５の中間体と構造４のアルコール間にエーテル結合を形成して、式Ｉの化合物を生成する。構造４のアルコールは、所望の最終生成物に応じて、３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナノールまたはヒドロキシ置換ピペリジンとなる。これらのヘテロ環において、Ｒ１およびＲ１１は通常、最終生成物で所望されるのと同じ置換基となる。以下の反応スキームＩＩでは、３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナノールの生成方法を教示する。ヒドロキシル置換ピペリジンは、当技術分野でよく知られており、（ａ）Ｇｈａｒｂａｏｕｉ，Ｔ．、Ｓｅｎｇｕｐｔａ，Ｄ．、Ｌａｌｌｙ，Ｅ．Ａ．、Ｋａｔｏ，Ｎ．Ｓ．、Ｃａｒｌｏｓ，Ｍ．、Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ，Ｎ．、ＵＳ２００６１５４９４０、（ｂ）Ｗｅｓｓｉｇ，Ｐ．、Ｍｏｅｌｌｎｉｔｚ，Ｋ．、Ｅｉｓｅｒｂｅｃｋ，Ｃ．、Ｃｈｅｍ．Ｅｕｒ．Ｊ．２００７、１３、４８５９、（ｃ）Ｋｒｅｉｄｌｅｒ，Ｂ．、Ｂａｒｏ，Ａ．、Ｃｈｒｉｓｔｏｆｆｅｒｓ，Ｊ．、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２００５、２４、５３３９、（ｄ）Ｊｉｎｇｙｕａｎ，Ｍ．Ａ．、Ｒａｂｂａｔ，Ｃ．Ｊ．、Ｓｏｎｇ，Ｊ．、Ｃｈｅｎ，Ｘ．、Ｎａｓｈａｓｈｉｂｉ，Ｉ．、Ｚｈａｏ，Ｚ．、Ｎｏｖａｃｋ，Ａ．、Ｓｈｉ，Ｄ．Ｆ．、Ｃｈｅｎｇ，Ｐ．、Ｚｈｕ，Ｙ．、Ｍｕｒｐｈｙ，Ａ．、ＷＯ２００９０１４９１０、（ｅ）Ｓｃｈｌｉｅｎｇｅｒ，Ｎ．、Ｔｈｙｇｅｓｅｎ，Ｍ．Ｂ．、Ｐａｗｌａｓ，Ｊ．、Ｂａｄａｌａｓｓｉ，Ｆ．、Ｌｅｗｉｎｓｋｙ，Ｒ．、Ｌｕｎｄ，Ｂ．Ｗ．、Ｏｌｓｓｏｎ，Ｒ．、ＷＯ２００６０７６３１７などの刊行物に記載されている。
ステップＣでは、ＤＭＦ、ＴＨＦ、１，２−ジメトキシエタン、１，４−ジオキサン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、ジメチルスルホキシド（「ＤＭＳＯ」）などの溶媒中にて、水素化ナトリウム；ナトリウムおよびカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド；ナトリウム、カリウム、およびリチウムビス（トリメチルシリル）アミド；ナトリウム、カリウム、およびリチウムｔｅｒｔ−アミルオキシドなどの塩基の存在下、当量の反応物を接触させる。この変換の典型的な条件として、ジオキサン中にて１０５℃で１時間のナトリウムビス（トリメチルシリル）アミドの使用が挙げられる。
反応が完了した後、所望の式Ｉの化合物は、当技術分野で知られているとおりに回収し、単離することができる。化合物は、当技術分野で知られているように、蒸発、抽出などによって回収することができる。化合物は、場合により、クロマトグラフィー、再結晶、蒸留、または先行技術で知られている他の技術によって精製してもよい。
これも当業者には容易にわかるとおり、Ｒ１およびＲ４で表される置換基の多くは、式Ｉの核を生成した後に操作することができる。たとえば、チオエーテルを酸化することにより、スルホニル部分を生成することができる。このような変形形態は、当業者によく知られており、本発明の一部とみなすべきである。
上で反応スキームＩに示した代替合成では、構造２のジクロロ−ピリミジンを構造４のアルコールと最初に接触させて、構造６によって示される中間体を生成する。ステップＣでのように、構造４のアルコールは、所望の最終生成物に応じて、３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナノールまたはヒドロキシル置換ピペリジンとなる。これらのヘテロ環において、Ｒ１は通常、最終生成物で所望されるのと同じ置換基となる。
当量の構造２と構造４の化合物を極性非プロトン性溶媒および塩基の存在下で反応させて、ステップＤに示す構造６の中間体を生成する。適切な系として、０℃〜１４０℃の温度で、ＤＭＦ、ＴＨＦ、１，２−ジメトキシエタン、１，４−ジオキサン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、ＤＭＳＯなどの溶媒中の、水素化ナトリウム；ナトリウムおよびカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド；ナトリウム、カリウム、およびリチウムビス（トリメチルシリル）アミド；ナトリウム、カリウム、およびリチウムｔｅｒｔ−アミルオキシドなどの塩基が挙げられる。この変換の典型的な条件として、ＴＨＦ中にて０℃〜室温で１４時間のカリウムｔｅｒｔ−ブトキシドの使用が挙げられる。構造６の中間体は、反応液から単離および回収し、当技術分野で知られているとおりにさらに精製することができる。別法として、以下で記載するステップＥにおいて未精製材料を使用してもよい。
次いで、構造６の中間体を、上で予め記載した構造３の縮合ピロリジンと接触させることにより、式Ｉの化合物を生成することができる。通常、塩基の存在下で、当量の構造３の縮合ピロリジンを式６のクロロ中間体と反応させる。適切な塩基は、ＤＭＦ、ＴＨＦ、１，２−ジメトキシエタン、１，４−ジオキサン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、もしくはＤＭＳＯ、またはこれらの混合物などの溶媒中の、水素化ナトリウム；ナトリウムまたはカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド；ナトリウム、カリウム、またはリチウムビス（トリメチルシリル）アミド；およびナトリウム、カリウム、またはリチウムｔｅｒｔ−アミルオキシドとすることができる。これらの反応は、使用する溶媒に応じて、−１０℃〜１５０℃の範囲の温度で実施することができる。通常、反応は、不活性雰囲気中にて１５分〜２４時間の範囲の時間をかけて進行させる。適切な条件として、１０５℃で１時間、ジオキサン中の、ナトリウムビス（ジメチルシリル）アミドが挙げられる。
別法として、この反応は、構造６の中間体と構造３の縮合ピロリジンを、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノールなどの極性非プロトン性溶媒中で０．５〜２４時間加熱することにより実施してもよい。この変換の典型的な条件は、イソプロパノール中にて１０８℃で２時間加熱するものである。
この反応は、式Ｉの化合物中に見られる重要な置換アミン結合の形成に遷移金属触媒を使用して実施することもできる。遷移金属触媒は、限定はしないが、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４、ＰｄＣｌ２、Ｐｄ（ＯＡｃ）２、Ｐｄ２（ｄｂａ）３、ＣｕＩ、Ｃｕ（ＯＡｃ）２、およびＣｕ（ＯＴｆ）２からなるものとすることができる。通常、これらの反応では塩基を利用する。パラジウム触媒と共に使用するのに適する塩基は、ジオキサン、ＴＨＦ、１，２−ジメトキシエタン、トルエンなどの適切な溶媒中のナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド、カリウムｔｅｒｔ−アミルオキシド、またはＫ３ＰＯ４とすることができる。銅触媒の使用について、適切な塩基は、ＤＭＦ、ＤＭＳＯ、ジメチルアセトアミドなどの適切な溶媒中の炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウムなどのアルカリ塩基からなるものとすることができる。
通常、配位子を加えると、アミン生成反応を促進することができる。パラジウムを触媒とする反応のための配位子として、限定はしないが、９，９−ジメチル−４，５−ビス（ジフェニルホスフィノ）キサンテン（キサントホス）、２，２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’−ビナフチル（ＢＩＮＡＰ）、１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン（ＤＰＰＦ）、２，８，９−トリイソブチル−２，５，８，９−テトラアザ−１−ホスファビシクロ［３．３．３］ウンデカン（Ｐ［Ｎ（ｉ−Ｂｕ）ＣＨ２ＣＨ３］３Ｎ）、トリ−ｔｅｒｔ−ブチルホスフィン（ｔＢｕ３Ｐ）、（ビフェニル−２−イル）ビス（ｔｅｒｔ−ブチル）ホスフィン（ＪｏｈｎＰｈｏｓ）、Ｐｄ−ＰＥＰＰＳＩ（商標）−ＳＩＰｒ：（１，３−ビス（２，６−ジイソプロピルフェニル）−４，５−ジヒドロイミダゾール−２−イリデン）（３−クロロピリジル）パラジウム（ＩＩ）ジクロリドを挙げることができる。銅を触媒とする反応に適する配位子として、限定はしないが、Ｌ−プロリン、Ｎ−メチルグリシン、ジエチルサリチルアミドを挙げることができる。式Ｉの化合物の生成に適する条件は、トルエン中にてＰｄ２（ｄｂａ）３をナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシドと共に１２０℃で１２時間使用するものである。
反応を完了した後、所望の式Ｉの化合物は、当技術分野で知られているとおりに回収および単離することができる。化合物は、当技術分野で知られているような蒸発、抽出などによって回収することができる。化合物は、クロマトグラフィー、再結晶、蒸留、または先行技術で知られている他の技術によって、場合により精製してもよい。
また、当業者には容易に理解されるように、Ｒ１およびＲ４によって表される置換基の多くは、式Ｉの核を生成した後に操作することができる。そのような変形形態は、当業者によく知られており、本発明の一部とみなすべきである。多くの場合では、式Ｉの化合物は、チオアルキル（Ｓ−アルキル）部分と同等のＲ３またはＲ４で置換される。この基を酸化して、アルキルスルホン（ＳＯ２−アルキル）基と同等のＲ３またはＲ４にすることができる。メタクロロ過安息香酸（ｍＣＰＢＡ）などの２〜４当量の酸化剤をジクロロメタン、クロロホルム、１，２−ジクロロエタンなどの塩素化溶媒中で利用することが、この酸化では典型的である。適切な条件として、２．７当量のｍＣＰＢＡをジクロロメタン中にて室温で１時間使用するものが挙げられる。
すぐ後の反応スキームＩＩでは、上で構造４として記載した３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナノールの生成方法を教示する。下記に示す構造７の化合物は、当技術分野で知られている。その合成は、Ａｒｊｕｎａｎ，Ｐ．、Ｂｅｒｌｉｎ，Ｋ．Ｄ．、Ｂａｒｎｅｓ Ｃ．Ｌ．、Ｖａｎ ｄｅｒ Ｈｅｌｍ、Ｄ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、１９８１、４６、３１９６〜３２０４で教示されている。
Figure 2012526097
上に示すとおり、反応の最初のステップは、構造７からベンジル保護基を除去することである。これを水素化分解によって実現して、化合物８を得ることができる。この反応の典型的な条件として、水素、および５〜２０％パラジウム担持炭素や１０〜２０％水酸化パラジウムなどのパラジウム触媒の利用が挙げられる。この反応の典型的な溶媒は、エタノール、メタノール、テトラヒドロフラン、または酢酸エチルである。
最終生成物中にピリミジン置換基が所望される場合、エタノールやメタノールなどのプロトン性溶媒中、または１，４−ジオキサン、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシドなどの極性非プロトン性溶媒中にて、炭酸セシウムやジイソプロピルエチルアミンなどの塩基の存在下、化合物８を、構造９として示す適切に置換された２−クロロピリミジンに付加して、構造１０を生成することができる。こうした反応は、室温〜１１０℃の範囲の温度で実施することができる。別法として、溶媒を使用せずジイソプロピルエチルアミンなどの塩基の存在下、または化合物８を過剰に使用する場合では塩基または溶媒を使用せずに、構造８と構造９の化合物を一緒に加熱することもできる。
最終生成物中にカルバメート置換基が所望される場合、ジクロロメタンまたはクロロホルム中にて、ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、ピリジンなどの塩基の存在下、等価な量の構造１１のアルキルハロホルメートホルメートを、構造８の化合物と接触させる。別法として、ジクロロメタン、クロロホルム、テトラヒドロフランなどの溶媒中にて、ジイソプロピルエチルアミン、ピリジン、２，６−ルチジン、トリエチルアミンなどのアミン塩基の存在下、二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（ＢＯＣ無水物）や二炭酸ジイソプロピルなどの二炭酸ジアルキルを使用して、構造８の化合物から構造１２の化合物を生成することもできる。
最終の構造１０または１２（すなわち、反応スキーム１の構造＃１）は、当技術分野で知られているとおりに単離し、精製することができる。所望なら、この最終構造を分離ステップにかけて所望のシンまたはアンチ異性体を得てから、反応スキームＩで利用することもできる。
当業者には容易にわかるように、中間体の遠位官能基（たとえば、第一級または第二級アミン）を保護する必要がある場合もある。そのような保護の必要性は、その遠位官能基の性質および調製方法の条件に応じて異なってくる。適切なアミノ保護基（ＮＨ−Ｐｇ）として、アセチル、トリフルオロアセチル、ｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢＺ）、および９−フルオレニルメチレンオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）が挙げられる。同様に、「ヒドロキシ保護基」とは、ヒドロキシ官能基を封鎖または保護する、ヒドロキシ基の置換基を指す。適切なヒドロキシル保護基（Ｏ−Ｐｇ）として、たとえば、アリル、アセチル、シリル、ベンジル、ｐａｒａ−メトキシベンジル、トリチルなどが挙げられる。このような保護の必要性は、当業者によって容易に決定される。保護基およびその使用に関する総説については、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、ニューヨーク、１９９１を参照されたい。
上述のとおり、本発明の化合物の一部は、酸性であり、薬学的に許容できるカチオンと塩を形成する。本発明の化合物の一部は、塩基性であり、薬学的に許容できるアニオンと塩を形成する。そのような塩はすべて、本発明の範囲内にあり、従来の方法によって、たとえば、適宜、水性、非水性、または部分的に水性の媒質中にて、酸性実体と塩基性実体とを、通常は化学量論比で合わせるなどして調製することができる。塩は、適宜、濾過、非溶媒で沈殿させてからの濾過、溶媒の蒸発、または水溶液の場合では凍結乾燥によって回収する。化合物は、エタノール、ヘキサン、水／エタノール混合物などの適切な（１種または複数の）溶媒に溶解させるなどの、当技術分野で知られている手順に従って、結晶の形で得る。
上述のとおり、化合物の一部は、異性体として存在する。そうした異性体混合物は、その物理化学的差異に基づき、クロマトグラフィーおよび／または分別結晶などの当業者によく知られている方法によって、その個々の異性体に分離することができる。鏡像異性体は、鏡像異性体混合物を、光学活性のある適切な化合物（たとえば、キラルアルコールやＭｏｓｈｅｒの酸塩化物などのキラル助剤）と反応させてジアステレオ異性体混合物に変換し、ジアステレオ異性体を分離し、個々のジアステレオ異性体を対応する純粋な鏡像異性体に変換する（たとえば、加水分解する）ことにより、分離することができる。鏡像異性体は、キラルなＨＰＬＣカラムを使用して分離することもできる。別法として、光学活性のある出発材料の使用、光学活性のある試薬、基質、触媒、もしくは溶媒を使用する不斉合成、または不斉転位による一方の立体異性体の他方への変換によって、特定の立体異性体を合成することもできる。
本発明は、原子質量または質量数が自然界で通常見られる原子質量または質量数と異なっている原子で１個または複数の原子が置き換えられていること以外は本明細書で列挙したものと同一である、同位体標識された本発明の化合物も包含する。本発明の化合物に組み込むことのできる同位体の例として、２Ｈ、３Ｈ、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１３Ｎ、１５Ｎ、１５Ｏ、１７Ｏ、１８Ｏ、３１Ｐ、３２Ｐ、３５Ｓ、１８Ｆ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、３６Ｃｌなどの、それぞれ、水素、炭素、窒素、酸素、リン、硫黄、フッ素、ヨウ素、および塩素の同位体が挙げられる。
特定の同位体標識された本発明の化合物（たとえば、３Ｈおよび１４Ｃで標識された化合物）は、化合物および／または基質の組織分布アッセイにおいて有用である。トリチウム、１４Ｃ、３５Ｓ、および１２５Ｉが組み込まれている特定の同位体標識されたリガンドは、放射リガンド結合アッセイにおいて有用となり得るはずである。トリチウム化（すなわち３Ｈ）およびカーボン１４（すなわち１４Ｃ）同位体は、調製しやすく、検出性がよいので、特に好ましい。さらに、ジュウテリウム（すなわち２Ｈ）などのより重い同位体での置換は、代謝安定性がより高いために生じる特定の治療上の優位性（たとえば、ｉｎ ｖｉｖｏ半減期の延長または投与必要量の減少）をもたらす場合もあり、したがって、状況によっては好ましいこともある。１５Ｏ、１３Ｎ、１１Ｃ、１８Ｆなどの陽電子放射同位体は、受容体占有率を調べるための陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）研究に有用である。本発明の同位体標識された化合物は、一般に、同位体標識されていない試薬の代わりに同位体標識された試薬を用いて、スキームおよび／または後述の実施例で開示する手順と類似した手順に従って調製することができる。
特定の本発明の化合物は、２種以上の結晶形で存在する場合もある（一般に「多形体」と呼ばれる）。多形体は、種々の条件下での結晶化によって、たとえば、結晶化の際に、異なる再結晶用溶媒もしくは溶媒混合物、異なる温度での結晶化、および／または超急速冷却から超緩速冷却の範囲の種々の冷却モードを使用して、調製することができる。多形体は、本発明の化合物を加熱または溶融した後、徐々にまたは急速に冷却して得ることもできる。多形体の存在は、固体プローブＮＭＲ分光法、ＩＲ分光法、示差走査熱量測定、粉末Ｘ線回折、または他のそのような技術によって判定することができる。
医学的使用
本発明の化合物は、Ｇタンパク質共役受容体ＧＰＲ１１９の活性を調節する。そのため、前記化合物は、糖尿病などの、ＧＰＲ１１９の活性が疾患の病理または症状の一因となる疾患の予防および治療に有用である。したがって、本発明の別の態様は、個体において代謝性疾患および／または代謝関連障害を治療する方法であって、そのような治療が必要である個体に、治療有効量の本発明の化合物、前記化合物の塩、またはそのような化合物を含有する医薬組成物を投与することを含む方法を包含する。代謝性疾患および代謝関連障害は、限定はしないが、高脂血症、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、特発性Ｉ型糖尿病（Ｉｂ型）、成人潜在性自己免疫性糖尿病（ＬＡＤＡ）、早発性２型糖尿病（ＥＯＤ）、若年性非定型糖尿病（ＹＯＡＤ）、若年発症成人型糖尿病（ＭＯＤＹ）、栄養不良関連糖尿病、妊娠糖尿病、冠動脈心疾患、虚血発作、血管形成術後の再狭窄、末梢血管疾患、間欠性跛行、心筋梗塞（たとえば、壊死およびアポトーシス）、異脂肪症、食後脂肪血症、耐糖能障害（ＩＧＴ）状態、空腹時血漿グルコースの異常状態、代謝性アシドーシス、ケトーシス、関節炎、肥満、骨粗鬆症、高血圧、うっ血性心不全、左室肥大、末梢動脈疾患、糖尿病性網膜症、黄斑変性、白内障、糖尿病性腎症、糸球体硬化症、慢性腎不全、糖尿病性ニューロパシー、メタボリック症候群、シンドロームＸ、月経前症候群、冠動脈心疾患、狭心症、血栓症、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、一過性脳虚血発作、卒中、血管再狭窄、高血糖、高インスリン血症、高脂血症、高トリグリセリド血症、インスリン抵抗性、グルコース代謝障害、耐糖能障害状態、空腹時血漿グルコースの異常状態、肥満、勃起機能不全、皮膚および結合組織の障害、足の潰瘍化、内皮障害、高アポＢリポタンパク質血症（ｈｙｐｅｒ ａｐｏ Ｂ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｅｍｉａ）、ならびに血管伸展性の障害から選択される。さらに、本発明の化合物は、アルツハイマー病、統合失調症、認知障害などの神経障害の治療に使用することもできる。本発明の化合物は、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、過敏性腸症候群などの胃腸疾患においても有益となる。上述のように、本発明の化合物は、肥満患者、特に糖尿病に罹患している肥満患者において体重減少を刺激するのにも使用することができる。
前述の内容によれば、本発明はさらに、その必要がある対象において、上述の疾患または障害のいずれかの症状を予防し、または寛解させる方法であって、治療有効量の本発明の化合物を対象に投与することを含む方法を提供する。本発明の別の態様は、糖尿病およびその関連合併症を治療する医薬の調製を包含する。
上述の治療特性を示すためには、化合物は、Ｇタンパク質共役受容体ＧＰＲ１１９の活性化を調節するのに十分な量で投与する必要がある。この量は、治療する特定の疾患／状態、患者の疾患／状態の重症度、患者、投与する特定の化合物、投与経路、および患者内の他の基礎病態の存在などに応じて様々となり得る。全身に投与するとき、化合物は通常、上で挙げた疾患または状態のいずれに対しても、約０．１ｍｇ／ｋｇ／日〜約１００ｍｇ／ｋｇ／日の投与量範囲でその効果を示す。毎日の連続投与が望ましい場合もあり、上で概略を述べた状態に応じて異なってくる。
本発明の化合物は、様々な経路によって投与することができる。本発明の化合物は、経口投与することができる。本発明の化合物は、非経口（すなわち、皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内、またはくも膜下腔内）、直腸、または局所投与することもできる。
共投与
本発明の化合物は、本明細書に記載の疾患、状態、および／または障害を治療するための他の薬剤と共に使用することもできる。したがって、本発明の化合物を他の薬剤と組み合わせて投与することを含む治療方法も提供する。本発明の化合物と組み合わせて使用することのできる適切な薬剤として、抗肥満薬（食欲抑制薬を含める）、抗糖尿病薬、抗高血糖薬（ａｎｔｉ−ｈｙｐｅｒｇｌｙｃｅｍｉｃ ａｇｅｎｔ）、高脂血症治療薬、および降圧薬が挙げられる。
適切な抗糖尿病薬として、アセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ２（ＡＣＣ−２）阻害剤、ジアシルグリセロールＯ−アシルトランスフェラーゼ１（ＤＧＡＴ−１）阻害剤、ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）１０阻害剤、スルホニル尿素（たとえば、アセトヘキサミド、クロルプロパミド、ジアビネース（ｄｉａｂｉｎｅｓｅ）、グリベンクラミド、グリピジド、グリブリド、グリメピリド、グリクラジド、グリペンチド（ｇｌｉｐｅｎｔｉｄｅ）、グリキドン、グリソラミド、トラザミド、およびトルブタミド）、メグリチニド、α−アミラーゼ阻害剤（たとえば、テンダミスタット（ｔｅｎｄａｍｉｓｔａｔ）、トレスタチン、およびＡＬ−３６８８）、α−グルコシドヒドロラーゼ阻害剤（たとえば、アカルボース）、α−グルコシダーゼ阻害剤（たとえば、アジポシン、カミグリボース、エミグリテート、ミグリトール、ボグリボース、プラジミシンＱ、およびサルボスタチン（ｓａｌｂｏｓｔａｔｉｎ））、ＰＰＡＲγ作動薬（たとえば、バラグリタゾン、シグリタゾン、ダルグリタゾン、エングリタゾン、イサグリタゾン（ｉｓａｇｌｉｔａｚｏｎｅ）、ピオグリタゾン、ロシグリタゾン、およびトログリタゾン）、ＰＰＡＲα／γ作動薬（たとえば、ＣＬＸ−０９４０、ＧＷ−１５３６、ＧＷ−１９２９、ＧＷ−２４３３、ＫＲＰ−２９７、Ｌ−７９６４４９、ＬＲ−９０、ＭＫ−０７６７、およびＳＢ−２１９９９４）、ビグアナイド（たとえば、メトホルミン）、グルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ−１）作動薬（たとえば、エキセンディン３およびエキセンディン４）、タンパク質チロシンホスファターゼ１Ｂ（ＰＴＰ−１Ｂ）阻害剤（たとえば、トロダスケミン（ｔｒｏｄｕｓｑｕｅｍｉｎｅ）、ヒルチオサール抽出物（ｈｙｒｔｉｏｓａｌ ｅｘｔｒａｃｔ）、およびＺｈａｎｇ，Ｓ．ら、Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｔｏｄａｙ、１２（９／１０）、３７３〜３８１（２００７）で開示されている化合物）、ＳＩＲＴ−１阻害剤（たとえば、レセルバトロール（ｒｅｓｅｒｖａｔｒｏｌ））、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ−ＩＶ）阻害剤（たとえば、シタグリプチン、ビルダグリプチン、アログリプチン、およびサクサグリプチン）、インスリン分泌刺激物質、脂肪酸酸化阻害剤、Ａ２拮抗薬、ｃ−ｊｕｎアミノ末端キナーゼ（ＪＮＫ）阻害剤、インスリン、インスリン模倣物、グリコーゲンホスホリラーゼ阻害剤、ＶＰＡＣ２受容体作動薬、およびＳＧＬＴ２阻害剤（ナトリウム依存性グルコース輸送体阻害剤、たとえば、ダパグリフロジンなど）が挙げられる。好ましい抗糖尿病薬は、メトホルミンおよびＤＰＰ−ＩＶ阻害剤（たとえば、シタグリプチン、ビルダグリプチン、アログリプチン、およびサクサグリプチン）である。
適切な抗肥満薬として、１１β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ１（１１β−ＨＳＤ１型）阻害剤、ステアロイルＣｏＡデサチュラーゼ１（ＳＣＤ−１）阻害剤、ＭＣＲ−４作動薬、コレシストキニンＡ（ＣＣＫ−Ａ）作動薬、モノアミン再取込み阻害剤（シブトラミンなど）、交感神経様作動薬、β３アドレナリン作動薬、ドーパミン作動薬（ブロモクリプチンなど）、メラノサイト刺激ホルモン類似体、５ＨＴ２ｃ作動薬、メラニン濃縮ホルモン拮抗薬、レプチン（ＯＢタンパク質）、レプチン類似体、レプチン作動薬、ガラニン拮抗薬、リパーゼ阻害剤（テトラヒドロリプスタチン、すなわちオルリスタットなど）、食欲抑制薬（ボンベシン作動薬など）、ニューロペプチドＹ拮抗薬（たとえば、ＮＰＹ Ｙ５拮抗薬、ＰＹＹ３−３６（その類似体を含める）、甲状腺模倣薬（ｔｈｙｒｏｍｉｍｅｔｉｃ ａｇｅｎｔ）、デヒドロエピアンドロステロンまたはその類似体、糖質コルチコイド作動薬または拮抗薬、オレキシン拮抗薬、グルカゴン様ペプチド１作動薬、毛様体神経栄養因子（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．、ニューヨーク州タリータウン、およびＰｒｏｃｔｅｒ＆Ｇａｍｂｌｅ Ｃｏｍｐａｎｙ、オハイオ州シンシナティーから入手可能なＡｘｏｋｉｎｅ（商標）など）、ヒトアグーチ関連タンパク質（ＡＧＲＰ）阻害剤、グレリン拮抗薬、ヒスタミン３拮抗薬または逆作動薬、ニューロメジンＵ作動薬、ＭＴＰ／ＡｐｏＢ阻害剤（たとえば、ジルロタピド（ｄｉｒｌｏｔａｐｉｄｅ）などの消化管選択的ＭＴＰ阻害剤）、オピオイド拮抗薬、オレキシン拮抗薬などが挙げられる。
本発明の組み合わせ態様で使用するのに好ましい抗肥満薬として、消化管選択的ＭＴＰ阻害剤（たとえば、ジルロタピド（ｄｉｒｌｏｔａｐｉｄｅ）、ミトラタピド（ｍｉｔｒａｔａｐｉｄｅ）およびイミプリタピド（ｉｍｐｌｉｔａｐｉｄｅ）、Ｒ５６９１８（ＣＡＳ番号４０３９８７）、およびＣＡＳ番号９１３５４１−４７−６）、ＣＣＫａ作動薬（たとえば、ＰＣＴ公開第ＷＯ２００５／１１６０３４号または米国公開第２００５−０２６７１００Ａ１号に記載のＮ−ベンジル−２−［４−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）−５−オキソ−１−フェニル−４，５−ジヒドロ−２，３，６，１０ｂ−テトラアザ−ベンゾ［ｅ］アズレン−６−イル］−Ｎ−イソプロピル−アセトアミド）、５ＨＴ２ｃ作動薬（たとえば、ロルカセリン）、ＭＣＲ４作動薬（たとえば、ＵＳ６，８１８，６５８に記載の化合物）、リパーゼ阻害剤（たとえば、セチリスタット）、ＰＹＹ３−３６（本明細書では、「ＰＹＹ３−３６」は、ベグ化ＰＹＹ３−３６（たとえば、米国公開２００６／０１７８５０１に記載のもの）などの類似体を包含する）、オピオイド拮抗薬（たとえば、ナルトレキソン）、オレオイル−エストロン（ＣＡＳ番号１８０００３−１７−２）、オビネピチド（ｏｂｉｎｅｐｉｔｉｄｅ）（ＴＭ３０３３８）、プラムリンチド（Ｓｙｍｌｉｎ（登録商標））、テソフェンシン（ＮＳ２３３０）、レプチン、リラグルチド、ブロモクリプチン、オルリスタット、エクセナチド（Ｂｙｅｔｔａ（登録商標））、ＡＯＤ−９６０４（ＣＡＳ番号２２１２３１−１０−３）、およびシブトラミンが挙げられる。本発明の化合物および併用療法は、運動および賢明な食生活と合わせて投与することが好ましい。
上で引用した米国特許および公開はすべて、参照により本明細書に援用する。
医薬製剤
本発明は、少なくとも１種の薬学的に許容できる賦形剤と混和された治療有効量の化合物または薬学的に許容できるその塩を含む医薬組成物も提供する。医薬組成物は、経口、局所、または非経口の使用に適合させた形態の組成物を包含し、上述のような糖尿病および関連状態の治療に使用することができる。
医薬組成物は、皮下、吸入、経口、局所、非経口などの、当技術分野で知られている任意の経路による投与用に製剤することができる。医薬組成物は、限定はしないが、錠剤、カプセル剤、粉末、顆粒、ロゼンジ、または経口もしくは滅菌非経口溶液もしくは懸濁液などの液体製剤を含めて、当技術分野で知られているどんな形態でもよい。
経口投与用の錠剤およびカプセル剤は、単位用量体裁にすることができ、従来の賦形剤、たとえば、シロップ、アカシア、ゼラチン、ソルビトール、トラガカント、ポリビニルピロリドンなどの結合剤；ラクトース、糖、トウモロコシデンプン、リン酸カルシウム、ソルビトール、グリシンなどの充填剤；ステアリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレングリコール、シリカなどの打錠滑沢剤；バレイショデンプンなどの崩壊剤；またはラウリル硫酸ナトリウムなどの許容される湿潤剤を含有してよい。錠剤は、標準の薬務でよく知られている方法に従ってコーティングしてもよい。
経口液体製剤は、たとえば、水性もしくは油性の懸濁液、溶液、乳濁液、シロップ、もしくはエリキシルの形にすることもでき、または使用前に水もしくは適切な他のビヒクルで再形成する乾燥製品としての体裁にすることもできる。このような液体製剤は、従来の添加剤、たとえば、ソルビトール、メチルセルロース、グルコースシロップ、ゼラチン、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ステアリン酸アルミニウムゲル、水素添加食用脂などの懸濁化剤；レシチン、モノオレイン酸ソルビタン、アカシアなどの乳化剤；扁桃油、グリセリンのような油性エステル、プロピレングリコール、エチルアルコールなどの非水性ビヒクル（食用油を含めてもよい）；ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルもしくはプロピル、ソルビン酸などの保存剤、および所望なら、従来の着香剤または着色剤を含有してよい。
非経口投与では、化合物および無菌ビヒクル（水が好ましい）を利用して、流動性の単位剤形を調製する。化合物は、使用するビヒクルおよび濃度に応じて、ビヒクルまたは適切な他の溶媒に懸濁または溶解させることができる。溶液の調製では、化合物を、注射用の水に溶解させ、濾過滅菌した後、適切なバイアルまたはアンプルに充填し、密封することができる。有利にするため、局所麻酔剤、保存剤、緩衝剤などの薬品をビヒクルに溶解させることができる。安定性を高めるために、組成物をバイアルに充填した後凍結させ、真空中で水を除去することができる。次いで、凍結乾燥した乾燥粉末をバイアルに密閉し、使用前に液体を再形成するための付属のバイアルの注射用水を支給することができる。非経口懸濁液は、化合物をビヒクルに溶解させる代わりに懸濁させること、および滅菌が濾過によって実現できないことを除き、実質上同じようにして調製する。無菌ビヒクルに懸濁させる前にエチレンオキシドにさらすことにより、化合物を滅菌することができる。組成物に界面活性剤または湿潤剤を組み込んで、化合物の均一な分布を促進すると有利である。
組成物は、投与方法に応じて、たとえば約０．１重量％〜約９９重量％の活性材料を含有してよい。組成物が投与量単位を構成する場合、各単位は、たとえば、約０．１〜９００ｍｇ、より典型的な場合では１ｍｇ〜２５０ｍｇの活性成分を含有することになる。
本発明の化合物は、他の抗糖尿病薬による類推によって、ヒト医学または獣医学で使用するための好都合な任意の方法における投与用に製剤することができる。そのような方法は、当技術分野で知られており、上で概略を述べている。そうした製剤の調製に関するより詳細な論述については、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｉｎ ＰｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａによるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第２１版に目を向けられたい。
以下の実施例によって、本発明の実施形態を例示する。しかし、本発明の実施形態は、実施例の詳細な項目を限定せず、このためそれらの他の変形形態が、当業者には知るところとなり、またはこの開示に照らして明白となることを理解されたい。
（実施例）
別段指定しない限り、出発材料は一般に、Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ Ｃｏ．（ウィスコンシン州ミルウォーキー）、Ｌａｎｃａｓｔｅｒ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｉｎｃ．（ニューハンプシャー州Ｗｉｎｄｈａｍ）、Ａｃｒｏｓ Ｏｒｇａｎｉｃｓ（ニュージャージー州フェアローン）、Ｍａｙｂｒｉｄｇｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｌｔｄ．（英国コーンウォール）、Ｔｙｇｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（ニュージャージー州プリンストン）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ（英国ロンドン）、Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ Ｂａｋｅｒ（ニュージャージー州フィリップスバーグ）、ＥＭＤ（ニュージャージー州Ｇｉｂｂｓｔｏｗｎ）などの市販品供給元から入手可能である。
一般実験手順
プロトン分析について、ＮＭＲスペクトルは、Ｖａｒｉａｎ Ｕｎｉｔｙ（商標）４００（ＤＧ４００−５プローブ）または５００（ＤＧ５００−５プローブ）（共にＶａｒｉａｎ Ｉｎｃ．、カリフォルニア州パロアルトから入手可能）を用い、室温にてそれぞれ４００ＭＨｚまたは５００ＭＨｚで記録した。化学シフトは、内部標準としての残存溶媒を基準とした百万分率（δ）で表示する。ピーク形状は、次のとおりに表記する。すなわち、ｓ：一重線、ｄ：二重線、ｄｄ：二重二重線、ｔ：三重線、ｑ：四重線、ｍ：多重線、ｂｓ：ブロード一重線、２ｓ：２本の一重線。
大気圧化学イオン化質量スペクトル（ＡＰＣＩ）は、Ｗａｔｅｒｓ（商標）分光計（Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ ＺＭＤ、キャリヤーガス：窒素）（Ｗａｔｅｒｓ Ｃｏｒｐ．、米国マサチューセッツ州ミルフォードから入手可能）を用い、０．３ｍＬ／分の流量で、５０：５０の水／アセトニトリル溶離液系を利用して取得した。エレクトロスプレーイオン化質量スペクトル（ＥＳ）は、Ｗａｔｅｒｓ（商標）（Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ ＺＱまたはＺＭＤ機器（キャリヤーガス：窒素）（Ｗａｔｅｒｓ Ｃｏｒｐ．、米国マサチューセッツ州ミルフォード）の液体クロマトグラフィー質量分析計を用い、各溶媒に０．０１％のギ酸を加えた９５：５〜０：１００の勾配の水アセトニトリル溶液を利用して取得した。これらの機器には、３．７５分間１ｍＬ／分または１．９５分間２ｍＬ／分の流量で、Ｖａｒｉａｎ Ｐｏｌａｒｉｓ ５ Ｃ１８−Ａ２０×２．０ｍｍカラム（Ｖａｒｉａｎ Ｉｎｃ．、カリフォルニア州パロアルト）を用いた。
カラムクロマトグラフィーは、Ｆｌａｓｈ ４０ Ｂｉｏｔａｇｅ（商標）カラム（ＩＳＣ，Ｉｎｃ．、コネティカット州シェルトン）またはＢｉｏｔａｇｅ（商標）ＳＮＡＰカートリッジＫＰｓｉｌまたはＲｅｄｉｓｅｐ Ｒｆシリカ（Ｔｅｌｅｄｙｎｅ Ｉｓｃｏ Ｉｎｃより）のいずれかを用い、シリカゲルを使用して窒素圧下で実施した。分取ＨＰＬＣは、フォトダイオードアレイ（Ｗａｔｅｒｓ ２９９６）および質量分析計（Ｗａｔｅｒｓ／Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ ＺＱ）検出スキームを備えたＷａｔｅｒｓ ＦｒａｃｔｉｏｎＬｙｎｘシステムを使用して実施した。分析ＨＰＬＣ作業は、フォトダイオードアレイ、単収束四極子質量検出および蒸発光散乱検出スキームを備えたＷａｔｅｒｓ ２７９５ Ａｌｌｉａｎｃｅ ＨＰＬＣまたはＷａｔｅｒｓ ＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣを用いて行った。
真空中での濃縮とは、ロータリーエバポレーターを使用して、減圧下で溶媒を蒸発させることを指す。
別段言及しない限り、化学反応は室温（摂氏約２３度）で実施した。また、別段言及しない限り、化学反応は窒素雰囲気中で進めた。
薬理学的データ
Ｇタンパク質共役受容体ＧＰＲ１１９の本発明の化合物によるアゴニスト活性化によって調節される疾患を治療する本発明の実施は、後述する機能アッセイの１つまたは複数における活性によって証明することができる。供給元は括弧内に示す。
ｉｎ−ｖｉｔｒｏ機能アッセイ
β−ラクタマーゼ：
ＧＰＲ１１９アゴニストについてのアッセイでは、ヒトＧＰＲ１１９のアゴニスト活性化を、環状ＡＭＰ反応要素（ＣＲＥ）によってβ−ラクタマーゼ産生と合体させた、細胞を主体とした（ｈＧＰＲ１１９ ＨＥＫ２９３−ＣＲＥ β−ラクタマーゼ）レポーター構築物を利用する。そしてＧＰＲ１１９活性は、ＦＲＥＴを可能にするβ−ラクタマーゼ基質であるＣＣＦ４−ＡＭ（Ｌｉｖｅ Ｂｌａｚｅｒ ＦＲＥＴ−Ｂ／Ｇ Ｌｏａｄｉｎｇキット、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎカタログ番号Ｋ１０２７）を利用して測定する。詳細には、ｈＧＰＲ１１９−ＨＥＫ−ＣＲＥ−β−ラクタマーゼ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ２．５×１０７／ｍＬ）を液体窒素貯蔵庫から取り出し、プレーティング培地（ダルベッコ変法イーグル培地高グルコース（ＤＭＥＭ、Ｇｉｂｃｏカタログ番号１１９９５−０６５）、１０％熱不活性化ウシ胎児血清（ＨＩＦＢＳ、Ｓｉｇｍａカタログ番号Ｆ４１３５）、１×ＭＥＭ非必須アミノ酸（Ｇｉｂｃｏカタログ番号１５６３０−０８０）、２５ｍＭのＨＥＰＥＳ ｐＨ７．０（Ｇｉｂｃｏカタログ番号１５６３０−０８０）、２００ｎＭのクラブラン酸カリウム（Ｓｉｇｍａカタログ番号Ｐ３４９４）に希釈した。細胞プレーティング培地を使用して細胞濃度を調節し、この細胞懸濁液（１２．５×１０４生細胞）５０μＬを、ポリ−ｄ−リシンでコートされた黒色透明底３８４ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ−Ｏｎｅカタログ番号７８１９４６）の各ウェルに加え、５％の二酸化炭素を含有する加湿した環境において３７℃でインキュベートした。４時間後、プレーティング培地を除去し、４０μＬのアッセイ培地（アッセイ培地は、クラブラン酸カリウムおよびＨＩＦＢＳを含有しないプレーティング培地である）と入れ替えた。次いで、試験対象の様々な濃度の各化合物を１０ｕＬの体積（最終ＤＭＳＯ≦０．５％）で加え、５％の二酸化炭素を含有する加湿した環境において細胞を３７℃で１６時間インキュベートした。プレートをインキュベーターから取り出し、約１５分間かけて室温に平衡化させた。１０ｕＬの６×ＣＣＦ４／ＡＭ作用色素溶液（Ｌｉｖｅ Ｂｌａｚｅｒ ＦＲＥＴ−Ｂ／Ｇ Ｌｏａｄｉｎｇキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎカタログ番号Ｋ１０２７）に入っている説明書に従って調製）をウェル毎に加え、暗所にて室温で２時間インキュベートした。ＥｎＶｉｓｉｏｎ蛍光定量プレートリーダー（励起４０５ｎｍ、発光４６０ｎｍ／５３５ｎｍ）で蛍光を測定した。４パラメータロジスティック用量反応方程式を使用した曲線適合プログラムで分析を行ったアゴニスト反応曲線から、ＥＣ５０を決定した。
ｃＡＭＰ：
細胞中のｃＡＭＰレベルを測定するＨＴＲＦ（均一時間分解蛍光）ｃＡＭＰ検出キット（ｃＡＭＰ ｄｙｎａｍｉｃ ２アッセイキット Ｃｉｓ Ｂｉｏカタログ番号６２ＡＭ４ＰＥＣ）を利用する細胞アッセイでも、ＧＰＲ１１９アゴニスト活性を求めた。この方法は、細胞によって産生される自然なｃＡＭＰと、色素ｄ２で標識したｃＡＭＰの競合イムノアッセイである。トレーサー結合を、クリプテートで標識したＭａｂ抗ｃＡＭＰによって可視化する。特異的シグナル（すなわち、エネルギー移動）は、標準またはサンプル中のｃＡＭＰの濃度に反比例する。
詳細には、ｈＧＰＲ１１９ ＨＥＫ−ＣＲＥβ−ラクタマーゼ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ２．５×１０７／ｍＬ、上述のβ−ラクタマーゼアッセイで使用した同じ細胞系）を凍結保存から取り出し、増殖培地（ダルベッコ変法イーグル培地高グルコース（ＤＭＥＭ、Ｇｉｂｃｏカタログ番号１１９９５−０６５）、１％チャコールデキストラン処理ウシ胎児血清（ＣＤ血清、ＨｙＣｌｏｎｅカタログ番号ＳＨ３００６８．０３）、１×ＭＥＭ非必須アミノ酸（Ｇｉｂｃｏカタログ番号１５６３０−０８０）、および２５ｍＭのＨＥＰＥＳ ｐＨ７．０（Ｇｉｂｃｏカタログ番号１５６３０−０８０））中に希釈する。細胞濃度を１．５×１０５細胞／ｍＬに調整し、この懸濁液３０ｍＬをＴ−１７５フラスコに加え、５％二酸化炭素の加湿環境において３７℃でインキュベートした。１６時間（一晩経過）後、細胞をＴ−１７５フラスコから（フラスコの側面を叩いて）取り出し、８００×ｇで遠心分離し、次いでアッセイ培地（１×ＨＢＳＳ＋ＣａＣｌ２＋ＭｇＣｌ２（Ｇｉｂｃｏカタログ番号１４０２５−０９２）および２５ｍＭのＨＥＰＥＳ ｐＨ７．０（Ｇｉｂｃｏカタログ番号１５６３０−０８０））に再懸濁した。アッセイ培地を用いて細胞濃度を６．２５×１０５細胞／ｍＬに調整し、この細胞懸濁液８μｌ（５０００細胞）を、Ｇｒｅｉｎｅｒ３８４ウェル白色小体積アッセイプレート（ＶＷＲカタログ番号８２０５１−４５８）の各ウェルに加えた。
試験対象の様々な濃度の各化合物を３−イソブチル−１−メチルキサンチン（ＩＢＭＸ、Ｓｉｇｍａカタログ番号Ｉ５８７９）を含有するアッセイ緩衝液に希釈し、２μＬの体積でアッセイプレートウェルに加えた（最終ＩＢＭＸ濃度は４００μＭとし、最終ＤＭＳＯ濃度は０．５８％とした）。室温で３０分間のインキュベートに続いて、５μＬの標識したｄ２ｃＡＭＰおよび５μＬの抗ｃＡＭＰ抗体（両方とも細胞溶解緩衝液に１：２０希釈したもの、製造者のアッセイプロトコールに記載のとおり）をアッセイプレートの各ウェルに加えた。次いでプレートを室温でインキュベートし、６０分後、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ ２１０４マルチラベルプレートリーダーで、励起波長３３０ｎｍ、発光波長６１５ｎｍおよび６６５ｎｍを使用し、ＨＴＲＦシグナルの変化を読み取った。生データを、ｃＡＭＰ検量線からの内挿によってｎＭ ｃＡＭＰに変換し（製造者のアッセイプロトコールに記載のとおり）、４パラメータロジスティック用量反応式を使用して曲線適合プログラムで分析したアゴニスト反応曲線から、ＥＣ５０を決定した。
ＧＰＲ１１９の活性化によるｃＡＭＰ反応は、ここで使用した特定の細胞系以外の細胞でも発生し得ることが認められている。
β−アレスチン：
ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ ＰａｔｈＨｕｎｔｅｒβ−アレスチン細胞アッセイ技術およびそのＵ２ＯＳ ｈＧＰＲ１１９β−アレスチン細胞系（ＤｉｓｃｏｖｅｒＸカタログ番号９３−０３５６Ｃ３）を利用する細胞アッセイでも、ＧＰＲ１１９アゴニスト活性を求めた。このアッセイでは、アゴニストによって誘発される、β−アレスチンと活性化型ＧＰＲ１１９の相互作用を測定することにより、アゴニスト活性化を判定する。ＰｒｏＬｉｎｋと呼ばれる、小さい４２アミノ酸の酵素断片を、ＧＰＲ１１９のＣ末端に付加した。アレスチンを、ＥＡ（酵素アクセプター）と呼ばれるより大きい酵素断片に融合した。ＧＰＲ１１９が活性化すると、アレスチンの結合が刺激され、２つの酵素断片の相補性が引き出される結果、基質を加水分解し、化学発光シグナルを発生させることのできる機能性β−ガラクトシダーゼ酵素が生成する。
詳細には、Ｕ２ＯＳ ｈＧＰＲ１１９β−アレスチン細胞（ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ １×１０７／ｍＬ）を凍結保存から取り出し、増殖培地（最小必須培地（ＭＥＭ、Ｇｉｂｃｏカタログ番号１１０９５−０８０）、１０％熱不活化ウシ胎児血清（ＨＩＦＢＳ、Ｓｉｇｍａカタログ番号Ｆ４１３５−１００）、１００ｍＭのピルビン酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａカタログ番号Ｓ８６３６）、５００μｇ／ｍＬのＧ４１８（Ｓｉｇｍａカタログ番号Ｇ８１６８）、および２５０μｇ／ｍＬのハイグロマイシンＢ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎカタログ番号１０６８７−０１０）中に希釈する。細胞濃度を１．６６×１０５細胞／ｍＬに調整し、この懸濁液３０ｍＬをＴ−１７５フラスコに加え、５％二酸化炭素の加湿環境において３７℃でインキュベートした。２４時間後、酵素不使用の細胞解離緩衝液（Ｇｉｂｃｏカタログ番号１３１５１−０１４）を用いて細胞をＴ−１７５フラスコから取り出し、８００×ｇで遠心分離し、次いでプレーティング培地（Ｏｐｔｉ−ＭＥＭ Ｉ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ／ＢＲＬカタログ番号３１９８５−０７０）および２％チャコールデキストラン処理ウシ胎児血清（ＣＤ血清、ＨｙＣｌｏｎｅカタログ番号ＳＨ３００６８．０３））に再懸濁した。プレーティング培地を用いて細胞濃度を２．５×１０５細胞／ｍＬに調整し、この細胞懸濁液２０マイクロリットル（５０００細胞）を、Ｇｒｅｉｎｅｒ ３８４ウェル白色小体積アッセイプレート（ＶＷＲカタログ番号８２０５１−４５８）の各ウェルに加え、プレートを５％二酸化炭素の加湿環境において３７℃でインキュベートした。
１６時間（一晩経過）後、インキュベーターからアッセイプレートを取り出し、試験対象の様々な濃度の各化合物（アッセイ緩衝液（１×ＨＢＳＳ＋ＣａＣｌ２＋ＭｇＣｌ２（Ｇｉｂｃｏカタログ番号１４０２５−０９２）、２０ｍＭのＨＥＰＥＳ ｐＨ７．０（Ｇｉｂｃｏカタログ番号１５６３０−０８０）、および０．１％のＢＳＡ（Ｓｉｇｍａカタログ番号Ａ９５７６）中に希釈したもの）を５マイクロリットルの体積でアッセイプレートウェルに加えた（最終ＤＭＳＯ濃度を０．５％とした）。５％二酸化炭素の加湿環境において３７℃で９０分インキュベートした後、１２マイクロリットルのＧａｌａｃｔｏｎ Ｓｔａｒβ−ガラクトシダーゼ基質（ＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ＤｉｓｃｏｖｅＲｘカタログ番号９３−０００１）、製造者のアッセイプロトコールに記載のとおりに調製）をアッセイプレートの各ウェルに加えた。プレートを室温でインキュベートし、６０分後、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ ２１０４マルチラベルプレートリーダーを用い、ウェルあたり０．１秒で発光の変化を読み取った。４−パラメータロジスティック用量反応式を使用して曲線適合プログラムで分析したアゴニスト反応曲線から、ＥＣ５０を決定した。
ＢａｃＭａｍを使用したＧＰＲ１１９の発現およびＧＰＲ１１９結合アッセイ
鋳型としてのｐＩＲＥＳ−ｐｕｒｏ−ｈＧＰＲ１１９および以下のプライマーを使用するポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）（Ｐｆｕ Ｔｕｒｂｏ Ｍａｔｅｒ Ｍｉｘ、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ、カリフォルニア州ラホーヤ）によって、野生型ヒトＧＰＲ１１９（図１）を増幅した。
ｈＧＰＲ１１９ ＢａｍＨ１、上流
５’−ＴＡＡＡＴＴＧＧＡＴＣＣＡＣＣＡＴＧＧＡＡＴＣＡＴＣＴＴＴＣＴＣＡＴＴＴＧＧＡＧ−３’
（５’末端にＢａｍＨＩ部位を挿入する）
ｈＧＰＲ１１９ ＥｃｏＲＩ、下流
５’−ＴＡＡＡＴＴＧＡＡＴＴＣＴＴＡＴＣＡＧＣＣＡＴＣＡＡＡＣＴＣＴＧＡＧＣ−３’
（３’末端にＥｃｏＲＩ部位を挿入する）
製造者のプロトコールに従い、増幅産物を精製し（Ｑｉａｑｕｉｃｋ Ｋｉｔ、Ｑｉａｇｅｎ、カリフォルニア州バレンシア）、ＢａｍＨ１およびＥｃｏＲＩ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ ＢｉｏＬａｂｓ、マサチューセッツ州イプスウィッチ）で消化した。ベクターｐＦＢ−ＶＳＶＧ−ＣＭＶ−ポリ（図２）をＢａｍＨＩおよびＥｃｏＲＩ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ ＢｉｏＬａｂｓ、マサチューセッツ州イプスウィッチ）で消化した。消化したＤＮＡを１％アガロースゲルでの電気泳動によって分離し、断片をゲルから切り出し、精製した（Ｑｉａｑｕｉｃｋ Ｋｉｔ、Ｑｉａｇｅｎ、カリフォルニア州バレンシア）。ベクターと遺伝子断片を連結し（Ｒａｐｉｄ Ｌｉｇａｓｅ Ｋｉｔ、Ｒｏｃｈｅ、カリフォルニア州プレザントン）、ＯｎｅＳｈｏｔ ＤＨ５αＴ１Ｒ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールスバッド）に形質転換した。８つのアンピシリン耐性コロニー（「クローン１〜８」）をミニプレップ（Ｑｉａｇｅｎ Ｍｉｎｉｐｒｅｐ Ｋｉｔ、Ｑｉａｇｅｎ、カリフォルニア州バレンシア）用に成長させ、配列決定して、同一性および正しい挿入の方向を確認した。
製造者のプロトコールに従い、ｐＦＢ−ＶＳＶＧ−ＣＭＶ−ポリ−ｈＧＰＲ１１９構築物（クローン＃１）をＯｎｅＳｈｏｔ ＤＨ１０Ｂａｃ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールスバッド）に形質転換した。８つの陽性（すなわち白色）のコロニーを画線し直して、「陽性」であると確認し、引き続いてバクミド単離に向けて成長させた。組み換え型ｈＧＰＲ１１９バクミドは、Ｑｉａｇｅｎ Ｍｉｎｉｐｒｅｐ Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ、カリフォルニア州バレンシア）の緩衝液を使用する変法アルカリ溶解手順によって単離した。簡潔に述べると、ペレット化した細胞を緩衝液Ｐ１に溶解させ、緩衝液Ｐ２中で中和し、緩衝液Ｎ３で沈殿させた。沈殿を遠心分離（１７，９００×ｇで１０分間）によってペレット化し、上清をイソプロパノールと合わせてＤＮＡを沈殿させた。
ＤＮＡを遠心分離（１７，９００×ｇで３０分間）によってペレット化し、７０％エタノールで１回洗浄し、５０マイクロリットルの緩衝液ＥＢ（Ｔｒｉｓ−ＨＣＬ、ｐＨ８．５）に再懸濁した。市販のプライマー（Ｍ１３Ｆ、Ｍ１３Ｒ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールスバッド）を用いたポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を使用して、バクミド中にｈＧＰＲ１１９挿入断片が存在することを確認した。
ｈＧＰＲ１１９組み換え型バキュロウイルスの生成
Ｐ０ウイルスストックの作製
Ｓｆ９００ＩＩ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールスバッド）で増殖させた、懸濁液に適合させたＳｆ９細胞に、製造者のプロトコール（Ｃｅｌｌｆｅｃｔｉｎ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールスバッド）に従って１０μＬのｈＧＰＲ１１９バクミドＤＮＡをトランスフェクトした。５日間インキュベートした後、条件培地（すなわち「Ｐ０」ウイルスストック）を遠心分離し、０．２２μｍフィルター（Ｓｔｅｒｉｆｌｉｐ、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、マサチューセッツ州ビルリカ）で濾過した。
凍結ウイルス（ＢＩＩＣ）ストックの作製
長期間のウイルス貯蔵および作業（すなわち「Ｐ１」）ウイルスストック生成に備えて、凍結ＢＩＩＣ（バキュロウイルスを感染させた昆虫細胞）ストックを以下のとおりに作製した。懸濁液に適合させたＳｆ９細胞をＳｆ９００ＩＩ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールスバッド）で増殖させ、ｈＧＰＲ１１９ Ｐ０ウイルスストックで感染させた。２４時間増殖させた後、感染した細胞を穏やかに遠心分離し（約１００×ｇ）、凍結用培地（１０％のＤＭＳＯ、１％のアルブミンを含有するＳｆ９００ＩＩ培地）に再懸濁して、最終密度を１×１０７細胞／ｍＬとし、標準の凍結用プロトコールに従って、１ｍＬずつの一定分量にして凍結させた。
作業（「Ｐ１」）ウイルスストックの作製
Ｓｆ９００ＩＩ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールスバッド）で増殖させた、懸濁液に適合させたＳｆ９細胞を、解凍したｈＧＰＲ１１９ ＢＩＩＣストックの１：１００希釈物で感染させ、数日間インキュベートした（振盪しながら２７℃）。細胞の生存度が７０％に到達したとき、条件培地を遠心分離によって回収し、ＥＬＩＳＡ（ＢａｃｕｌｏＥｌｉｓａ Ｋｉｔ、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、カリフォルニア州マウンテンヴュー）によってウイルス力価を決定した。
懸濁液に適合させたＨＥＫ ２９３ＦＴ細胞におけるｈＧＰＲ１１９の過剰発現
振盪フラスコにおいて、ＨＥＫ２９３ＦＴ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールスバッド）を、５０μｇ／ｍＬのネオマイシンおよび１０ｍＭのＨＥＰＥＳを補充した２９３Ｆｒｅｅｓｔｙｌｅ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で増殖させた（３７Ｃ、８％二酸化炭素、振盪）。細胞を穏やかに遠心分離し（約５００×ｇ、１０分）、ペレットを、１８％ウシ胎児血清（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）を補充したダルベッコＰＢＳ（Ｍｇ＋＋／−Ｃａ＋＋なし）とＰ１ウイルスの混合物に再懸濁して、感染多重度（ＭＯＩ）が１０になり、最終細胞密度が１．３×１０６／ｍＬ（合計体積２．５リットル）になるようにした。細胞を５リットルのＷａｖｅ Ｂｉｏｒｅａｃｔｏｒ Ｗａｖｅｂａｇ（Ｗａｖｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、マサチューセッツ州）に移し、２７℃で４時間インキュベートし（１７振動（ｒｏｃｋ）／分、乗せ台角度７°）、インキュベート期間の終わりに、３０ｍＭの酪酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）を補充した等体積（２．５リットル）の２９３Ｆｒｅｅｓｔｙｌｅ培地を加え（最終濃度＝１５ｍＭ）、細胞を２０時間増殖させた（３７℃、８％ＣＯ２［０．２リットル／分｝、２５振動（ｒｏｃｋ）／分、乗せ台角度７°）。細胞を遠心分離（３，０００×ｇ、１０分）によって収集し、ＤＰＢＳ（Ｃａ＋＋／Ｍｇ＋＋なし）で１回洗浄し、０．２５Ｍのスクロース、２５ｍＭのＨＥＰＥＳ、０．５ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ７．４に再懸濁し、−８０℃で凍結させた。
放射リガンド結合アッセイに向けた膜調製
凍結した細胞を氷上で解凍し、４℃で１０分間７００×ｇ（１４００ｒｐｍ）で遠心分離した。細胞ペレットを２０ｍＬのリン酸緩衝溶液に再懸濁し、１４００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。次いで細胞ペレットをホモジナイズ緩衝液（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ（Ｇｉｂｃｏ ＃１５６３０）、ｐＨ７．５、１ｍＭのＥＤＴＡ（ＢｉｏＳｏｌｕｔｉｏｎｓ、＃ＢＩＯ２６０−１５）、１ｍＭのＥＧＴＡ（Ｓｉｇｍａ、＃Ｅ−４３７８）、０．０１ｍｇ／ｍＬのベンズアミジン（Ｓｉｇｍａ ＃Ｂ６５０６）、０．０１ｍｇ／ｍＬのバシトラシン（Ｓｉｇｍａ ＃Ｂ０１２５）、０．００５ｍｇ／ｍＬのロイペプチン（Ｓｉｇｍａ ＃Ｌ８５１１）、０．００５ｍｇ／ｍＬのアプロチニン（Ｓｉｇｍａ ＃Ａ１１５３））に再懸濁し、氷上で１０分間インキュベートした。次いで細胞を、タイトフィット型ガラス製Ｄｏｕｎｃｅホモジナイザーで１５回の穏やかなストロークで溶解させた。ホモジネートを４℃で１０分間１０００×ｇ（２２００ｒｐｍ）で遠心分離した。上清を氷上の新たな遠心管に移した。細胞ペレットをホモジナイズ緩衝液に再懸濁し、４℃で１０分間１０００×ｇ（２２００ｒｐｍ）で再び遠心分離し、その後上清を取り出し、ペレットをホモジナイズ緩衝液に再懸濁した。この過程を３回目も繰り返し、その後上清を合わせ、Ｂｅｎｚｏｎａｓｅ（Ｎｏｖａｇｅｎ ＃７１２０６）およびＭｇＣｌ２（Ｆｌｕｋａ ＃６３０２０）を加えて最終濃度をそれぞれ１Ｕ／ｍＬおよび６ｍＭとし、氷上で１時間インキュベートした。次いで溶液を４℃で２０分間２５，０００×ｇ（１５０００ｒｐｍ）で遠心分離し、上清を廃棄し、ペレットを新鮮なホモジナイズ緩衝液（ＢｅｎｚｏｎａｓｅおよびＭｇＣｌ２なし）に再懸濁した。２５，０００×ｇでの遠心分離ステップを繰り返した後、最終膜ペレットをホモジナイズ緩衝液に再懸濁し、−８０℃で凍結させた。Ｐｉｅｒｃｅ ＢＣＡタンパク質アッセイキット（Ｐｉｅｒｃｅ試薬Ａ ＃２３２２３およびＢ ＃２３２２４）を使用して、タンパク質濃度を決定した。
［３Ｈ］−化合物Ａの合成および精製
Figure 2012526097
 化合物Ａ（４−（１−（４−（メチルスルホニル）フェニル）−３ａ，７ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルオキシ）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル、上で示したとおり）（４ｍｇ、０．００９ｍｍｏｌ）を０．５ｍＬのジクロロメタンに溶解させ、得られる溶液を（１，５−シクロオクタジエン）（ピリジン）（トリシクロヘキシルホスフィン）−イリジウム（Ｉ）ヘキサフルオロホスフェート（Ｊ．Ｏｒｇａｎｏｍｅｔａｌ．Ｃｈｅｍ．１９７９、１６８、１８３）（５ｍｇ、０．００６ｍｍｏｌ）で処理した。反応容器を密封し、溶液をトリチウムガス雰囲気中で１７時間撹拌した。減圧下で反応溶媒を除去し、得られる残渣をエタノールに溶解させた。未精製の［３Ｈ］−化合物Ａの精製を、以下の条件を使用する分取ＨＰＬＣによって実施した。
カラム：Ａｔｌａｎｔｉｓ、４．６×１５０ｍｍ、５μｍ
移動相Ａ：水／アセトニトリル／ギ酸（９８／２／０．１）
移動相Ｂ：アセトニトリル
勾配： 時間 ％Ｂ
０．００ ３０．０
１．００ ３０．０
１３．００ ８０．０
分析時間：１６分
ポストタイム：５分
流量：１．５ｍＬ／分
注入体積：２０〜５０μＬ
注入溶媒：ＤＭＳＯ
検出：２１０ｎｍおよび２４５ｎｍでのＵＶ
精製した［３Ｈ］−化合物Ａの比活性は、質量分析によって、７０Ｃｉ／ｍｍｏｌと決定した。
別法として、結合アッセイは、［３Ｈ］−化合物Ｂで実施してもよい。
［３Ｈ］−化合物Ｂの合成および精製
Figure 2012526097
 化合物Ｂ（４−（１−（４−（メチルスルホニル）フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルオキシ）ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル、上で示したとおり）（５ｍｇ、１０．６μｍｏｌ）を１．０ｍＬのジクロロメタンに溶解させ、得られる溶液をＣｒａｂｔｒｅｅ触媒（５ｍｇ、６．２μｍｏｌ）で処理した。反応容器を密封し、溶液をトリチウムガス雰囲気中で１７時間撹拌した。減圧下で反応溶媒を除去し、得られる残渣をエタノールに溶解させた。未精製の［３Ｈ］−化合物Ｂの精製を、７０％のヘキサン／３０％の酢酸エチルを溶離液とするシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーに続いて、６０％の石油エーテル／４０％の酢酸エチルを溶離液とするシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーによって実施した。
精製した［３Ｈ］−化合物Ｂの比活性は、質量分析によって、５７．８Ｃｉ／ｍｍｏｌと決定した。
ＧＰＲ１１９放射リガンド結合アッセイ
試験化合物を１００％ＤＭＳＯ（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ ＃９２２４０１）に段階希釈した。各希釈液２μＬを９６ウェルプレートの適切なウェルに加えた（各濃度３通りにして）。未標識化合物Ａ（または化合物Ｂ）を最終濃度１０μＭで使用して、非特異的結合を測定した。
［３Ｈ］−化合物Ａ（または［３Ｈ］−化合物Ｂ）を結合緩衝液（５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５（Ｓｉｇｍａ ＃Ｔ７４４３）、１０ｍＭのＭｇＣｌ２（Ｆｌｕｋａ ６３０２０）、１ｍＭのＥＤＴＡ（ＢｉｏＳｏｌｕｔｉｏｎｓ ＃ＢＩＯ２６０−１５）、０．１５％のウシ血清アルブミン（Ｓｉｇｍａ ＃Ａ７５１１）、０．０１ｍｇ／ｍＬのベンズアミジン（Ｓｉｇｍａ ＃Ｂ６５０６）、０．０１ｍｇ／ｍＬのバシトラシン（Ｓｉｇｍａ ＃Ｂ０１２５）、０．００５ｍｇ／ｍＬのロイペプチン（Ｓｉｇｍａ ＃Ｌ８５１１）、０．００５ｍｇ／ｍＬのアプロチニン（Ｓｉｇｍａ ＃Ａ１１５３））中に希釈して濃度を６０ｎＭとし、９６ウェルプレート（Ｎａｌｇｅ Ｎｕｎｃ ＃２６７２４５）のすべてのウェルに１００μＬを加えた。
ＧＰＲ１１９を発現する膜を解凍し、結合緩衝液に希釈して最終濃度を２０μｇ／各ウェル１００μＬとし、希釈した膜１００μＬを９６ウェルプレートの各ウェルに加えた。
プレートを振盪しながら室温（約２５℃）で６０分間インキュベートした。Ｐａｃｋａｒｄハーベスターを使用した、０．３％ポリエチレンアミンに予浸したＧＦ／Ｃフィルタープレート（Ｐａｃｋａｒｄ ＃６００５１７４）での真空濾過によって、アッセイを終結させた。次いで、洗浄緩衝液（５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、４℃に保ったもの）を使用してフィルターを６回洗浄した。次いでフィルタープレートを室温で終夜風乾した。３０μιχｐｏλιτερのシンチレーション液（Ｒｅａｄｙ Ｓａｆｅ、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ ＃１４１３４９）を各ウェルに加え、プレートを密封し、Ｗａｌｌａｃ Ｔｒｉｌｕｘ ＭｉｃｒｏＢｅｔａプレートベースのシンチレーションカウンターを使用して、各フィルターに付随する放射能を測定した。
［３Ｈ］−化合物Ａ（または［３Ｈ］−化合物Ｂ）のＫｄは、一部位双曲線（Ｇｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍ）に適合させる非線形回帰によるデータ解析を用いた飽和結合実験を実施して求めた。ＩＣ５０は、専有の曲線適合プログラム（ＳＩＧＨＴＳ）および４パラメータロジスティック用量反応式を用いて分析した競合曲線から求めた。Ｋｉ値は、Ｃｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｏｆｆ式を使用してＩＣ５０値から算出した。
上述のアッセイについて、以下の結果が得られた。
Figure 2012526097
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Figure 2012526097
ｉｎ ｖｉｖｏ薬理学
ｉｎ ｖｉｖｏプロトコールはすべて、Ｐｆｉｚｅｒの動物愛護委員会が承認したものである。未処置の雄Ｗｉｓｔａｒラット（受取時体重２２５〜２５０ｇ）をＨａｒｌａｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（インディアナ州インディアナポリス）から入手し、吊り下げ式のプラスチックケージにおいて、おがくずＳａｎｉ−ｃｈｉｐｓを床敷材として敷いてつがいで飼育し、Ｐｕｒｉｎａ５００１固形飼料を制約なく与えた。ラットは、制御された照明サイクル（午前６時〜午後６時点灯）のもと、制御された温度および湿度条件下で飼育した。研究前に少なくとも１週間ラットを設備に順化させた。
化合物の調製
実施例１７を０．５％メチルセルロースに配合した。最大用量（３０ｍｇ／ｋｇ）は、５ｍＬ／ｋｇでの投与用に６ｍｇ／ｍＬで製剤し、必要な原体を乳鉢に加え、少量の０．５％メチルセルロースと共に乳棒ですり潰して滑らかなペーストとし、混合物が流動的になるまで追加の０．５％メチルセルロースを加え、撹拌容器に移す際、乳鉢を残りの量の０．５％メチルセルロースで数回すすぎ、ふたを被せて蒸発を防いだ。懸濁液は、研究の前に磁気撹拌子で終夜絶え間なく撹拌し、より少ない用量は、６ｍｇ／ｍＬの懸濁液から、適切な体積の０．５％メチルセルロースを使用して希釈した。投与用懸濁液はすべて、投与手順の間終始撹拌した。
経口グルコース負荷試験（ＯＧＴＴ）プロトコール
ラット（ｎ＝８／群）を１日目の体重に従ってビヒクル（０．５％メチルセルロース）または３用量群（１ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、または３０ｍｇ／ｋｇ）の１つに分けて、確実に各群の群平均体重値が等しくなるようにした。経口グルコース負荷試験前に、ラットを清潔なケージで終夜（約１５時間）絶食させた。用量体積算出のために、研究日の朝（絶食後）に体重を記録した。すべてのラットから血液サンプルを採取してから、ビヒクルまたは試験化合物を経口経管栄養（５ｍＬ／ｋｇ）によって投与した。３０分後、ラットから血液を採取し、経口用量のグルコース（２ｇ／ｋｇ）を直ちに投与した。グルコース負荷後１５、３０、６０、および１２０分の時点でラットから再び採血した。血液サンプル（約２５０μＬ／１時点）を、アプロチニン／ＤＰＰＩＶｉ（全血１ｍＬあたり０．６ＴＩＵ／２０μＬ）を含有するＥＤＴＡ管に収集した。収集後直ちに血液入りの管を数回反転させ、氷上に置き、次いで冷却遠心機において１４，０００ｒｐｍで５分間スピンにかけた。Ｒｏｃｈｅ ９１２臨床化学分析計を使用して血漿サンプルのグルコースレベルを分析し、Ａｌｐｃｏ Ｕｌｔｒａ−ＳｅｎｓｉｔｉｖｅインスリンＲａｔ ＥＬＩＳＡを使用して血漿インスリン濃度を決定し、ＭＳＤ ＥＬＩＳＡキットを使用して総アミドＧＬＰ−１濃度を決定した。
結果は、別段記載しない限り、平均＋／−ＳＥＭ（平均値の標準誤差）として示す。データの統計学的評価は、ビヒクル群と治療群の適切な事後分析を用いた一方向分散分析（ＡＮＯＶＡ）を使用して実施する。ＤｕｎｎｅｔｔのＴ検定を使用して、ビヒクルと比較した差がｐ＞０．０５であるものを統計学的に有意であるとみなした。
Figure 2012526097
腹腔内グルコース負荷試験（ＩＰＧＴＴ）プロトコール
ラット（ｎ＝８／群）を１日目の体重に従ってビヒクルまたは３用量群（１ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇ）の１つに割り振って、確実に各群の群平均体重値が等しくなるようにした。腹腔内グルコース負荷試験前に、ラットを清潔なケージで終夜（約１５時間）絶食させた。用量体積算出のために、研究日の朝（絶食後）に体重を記録した。すべてのラットから血液サンプルを採取してから、ビヒクル（０．５％メチルセルロース）または試験化合物を経口経管栄養（５ｍＬ／ｋｇ）によって投与した。６０分後、ラットから血液を採取し、ＩＰ用量のグルコース（２ｇ／ｋｇ）を直ちに投与した。グルコース負荷後１５、３０、６０、および１２０分の時点でラットから再び採血した。血漿グルコース、インスリン、および総アミドＧＬＰ−１濃度を求めるために、血液サンプル（約２５０μＬ／１時点）を、アプロチニン／ＤＰＰＩＶｉ（全血１ｍＬあたり０．６ＴＩＵ／２０μＬ）を含有するＥＤＴＡ管に収集した。収集後直ちに血液入りの管を数回反転させ、氷上に置き、次いで冷却遠心機において１４，０００ｒｐｍで５分間スピンにかけた。Ｒｏｃｈｅ９１２臨床化学分析計を使用して血漿サンプルのグルコースレベルを分析し、Ａｌｐｃｏ Ｕｌｔｒａ−ＳｅｎｓｉｔｉｖｅインスリンＲａｔ Ｅｌｉｓａを使用して血漿インスリン濃度を決定した。
結果は、別段記載しない限り、平均＋／−ＳＥＭ（平均値の標準誤差）として示す。データの統計学的評価は、ビヒクル群と治療群の適切な事後分析を用いた一方向分散分析（ＡＮＯＶＡ）を使用して実施する。ＤｕｎｎｅｔｔのＴ検定を使用して、ビヒクルと比較した差がｐ＜０．０５であるものを統計学的に有意であるとみなした。
Figure 2012526097
実施例３を上述のように調製したもの（０．５％メチルセルロース懸濁液として投与）、またはヒドロキシプロイルメチルセルロース（ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｙｌｍｅｔｈｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）−アセテートスクシネートを用いて非晶質分散液（２５％活性）として調製したもの（０．５％メチルセルロース／０．１％ポリソルベート８０懸濁液として投与）で、ＩＰＧＴＴ研究を実施した。表２に群平均値を示すが、結果は、ビヒクル反応に対するパーセントとして表示する。統計学的有意性は、ビヒクル群との比較に基づく。
Figure 2012526097
出発材料の調製
調製例１：スキームＡに、シンおよびアンチの−９−ヒドロキシ−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸イソプロピルの調製を図解する。実験の細目は以下で詳述する。
調製例１：−９−ヒドロキシ−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸イソプロピル（シンおよびアンチ異性体の混合物）
Figure 2012526097
スキームＡのステップＡ． ７−ベンジル−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−オン−塩酸塩（２）の合成：
テトラヒドロ−４Ｈ−ピラン−４−オン１（６０．０ｇ、０．６０ｍｏｌ）、ベンジルアミン（６３．４ｇ、０．６０ｍｏｌ）、および氷酢酸（３５．９ｇ、０．６０ｍｏｌ）を無水メタノール（１．２Ｌ）に溶かした溶液を、パラホルムアルデヒド（３９．６ｇ、１．３ｍｏｌ）を無水メタノール（１．２Ｌ）に懸濁させた撹拌した懸濁液に、６５℃で７５分間かけて加えた。２回目の分のパラホルムアルデヒド（３９．６ｇ、１．３ｍｏｌ）を加え、混合物を６５℃で１時間撹拌した。反応を水（１．２Ｌ）および１Ｍ水酸化カリウム水溶液（６００ｍＬ）で失活させた。混合物を酢酸エチル（３Ｌ×３）で抽出した。有機層を合わせて硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を真空中で濃縮乾燥した。残渣をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝２０：１〜２：１）によって精製して、褐色の油状物を得た。残渣を６Ｍ無水塩酸１，４ジオキサン溶液（５００ｍＬ）で希釈し、混合物を３０分間撹拌した。真空中で溶媒を除去し、アセトン（５００ｍＬ）を加えた。得られる混合物を３０分間音波処理して白色の沈殿物を生成させた。混合物を濾過し、固体をアセトンで洗浄し、次いで真空中で乾燥させて、所望の生成物を白色の固体（２１ｇ、１３％）として得た。1H NMR (400 MHz, 酸化重水素) δ 7.43 - 7.42 (m, 5H), 4.66 (s, 2H), 3.95
- 3.90 (m, 4H), 3.54 - 3.47 (m, 4H); 1.96 (bs, 2H); LCMS (ES+): 232.0 (M + 1).
スキームＡのステップＢ． ７−ベンジル−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−オール（シンおよびアンチ異性体の混合物）（３）の合成：
７−ベンジル−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−オン塩酸塩（４．４０ｇ、１６．９ｍｍｏｌ）をエタノール（４０ｍＬ）および無水テトラヒドロフラン（４０ｍＬ）に懸濁させた。混合物を氷浴で冷却し、水素化ホウ素ナトリウム（１．５ｇ、３７．３ｍｍｏｌ）を１回で加えた。混合物を４時間かけてゆっくりと室温に温めた。次いで反応液を真空中で濃縮して、エタノールおよびテトラヒドロフランの大部分を除去した。混合物をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルと１．０Ｍ水酸化ナトリウム水溶液とに分配した。溶液を３０分間撹拌した後、２つの層を分離した。水層をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルで抽出した。有機抽出物を合わせ、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。混合物を濾過し、真空中で濾液を濃縮して透明な油状物を得、これを静置すると部分的に凝固して油性の白色固体（３．７１ｇ、９４％）になった。このシンおよびアンチの７−ベンジル−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−オール異性体の混合物を、それ以上精製せずに次のステップで使用した。LCMS (ES+): 234.1 (M+1).
代替手順を以下のとおりに実施した。
還流冷却器を備え付けた２０Ｌの反応器に、メタノール（８．００Ｌ、６．３３ｋｇ）、ベンジルアミン（４．００モル、４２８．１２ｇ）、テトラヒドロ−４Ｈ−ピラン−４−オン（４００ｇ、４．００モル）、および酢酸（４．００モル、２３９．９３ｇ）を加えた。加える間、ジャケット温度は１５〜２５℃に保った。反応混合物を加熱還流した（６６℃）。
ホルムアルデヒド水溶液（７．９９モル、６００．４２ｍＬ、６４８．４６ｇ）をメタノール（２Ｌ）と合わせた。得られる溶液を１時間かけて反応液に加え、その間反応液を引き続き還流させた。ホルムアルデヒドを加え終えた後、反応液を還流温度で１０分間加熱し、１０〜２０℃に冷却した。炭酸水素ナトリウム（４．００モル、３３５．６３ｇ）を加えた。反応液を１０℃に冷却し、水素化ホウ素ナトリウム（４．２０モル、１５８．７１ｇ）を少量ずつ加えた（水素化ホウ素ナトリウムタブレットを使用、各タブレット約１ｇ）。水素化ホウ素ナトリウムを加え終えた後、反応液を１５〜２５℃で４０分間撹拌した。反応混合物に珪藻土（４００ｇ）を加え、続いて水（２Ｌ）および１Ｎ水酸化ナトリウム溶液（４．００Ｌ）を加えた。反応混合物を１５〜２５℃で１時間撹拌し、濾過した。フィルターケーキをメタノール／水（１：１混合物、８００ｍＬ）ですすいだ。濾液を真空中にて４０〜４５℃で濃縮して、メタノールの大部分を除去した。得られる水性混合物を２−メチルテトラヒドロフラン（１×６．００Ｌ）で抽出した。２−メチルテトラヒドロフラン層をブライン（２．００Ｌ、２．３８ｋｇ）で洗浄し、部分真空下にてポット温度４０〜４５℃で濃縮して油状物を得、これを５Ｌ容器（Ｎａｌｊｕｇ）に収集した。反応器を１Ｌのアセトニトリルですすぎ、すすぎ液を未精製の油状生成物と合わせた。１０〜１５℃で静置して１２時間後、Ｎａｌｊｕｇにおいて結晶化が起こった。混合物を濾過すると、シン−ジアステレオ異性体（１９３ｇ、９８％ｄｅ）が得られた。濾液をシリカゲルクロマトグラフィー（移動相：トルエン／ヘプタン／ジエチルアミン ７０／３０／５、定組成）によって精製した後、ＣｈｉｒａｌＰａｋ ＡＤ（移動相：イソプロパノール／ヘプタン／ジエチルアミン ５／９５／０．２）を使用する別のクロマトグラフィーによって精製して、追加分のシン−ジアステレオ異性体（８６．３ｇ）およびアンチ−ジアステレオ異性体（１４５ｇ）を得た。
これに代わる酵素的還元手順も、以下のように実施した。
酵素的手順Ａ
反応バイアルに、７５マイクロリットルのニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＨ）の溶液（５３ｍｇ／ｍＬ、０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液、ｐＨ７）、２０マイクロリットルのＣｏｄｅｘｉｓ ＫＲＥＤ−ＮＡＤＨ１０１（Ｃｏｄｅｘｉｓ，Ｉｎｃ．、２００ Ｐｅｎｏｂｓｃｏｔ Ｄｒｉｖｅ、カリフォルニア州レッドウッドシティ９４０６３）の溶液（５０ｍｇ／ｍＬ、０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液、ｐＨ７）、および５マイクロリットルの７−ベンジル−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−オンの溶液（２００ｍｇ／ｍＬ、ＤＭＳＯ溶液）を投入した。得られる混合物を３０℃で２０時間撹拌した。反応液を酢酸エチル（９００マイクロリットル）で希釈し、混合し、遠心分離した。超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）による分析のために、有機層（６００マイクロリットル）を収集し、蒸発乾燥させ、メタノール（６００マイクロリットル）に再懸濁した。ＳＦＣ分析によって、変換収率９７％で、アンチ−７−ベンジル−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−オール異性体の生成だけが示された。シン異性体の形跡は見出されなかった。
酵素的手順Ｂ
反応バイアルに、７５マイクロリットルのＮＡＤＨの溶液（５３ｍｇ／ｍＬ、０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液、ｐＨ７）、２０マイクロリットルのＤＡＩＣＥＬ−Ｅ００２（株式会社ダイセル、ＣＰＩカンパニー、日本、〒１０８−８２３０ 東京都港区港南２−１８−１ ＪＲ品川イーストビル）の溶液（５０ｍｇ／ｍＬ、０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液、ｐＨ７）、および５マイクロリットルの７−ベンジル−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−オンの溶液（２００ｍｇ／ｍＬ、ＤＭＳＯ溶液）を投入した。得られる混合物を３０℃で２０時間撹拌した。反応液を酢酸エチル（９００マイクロリットル）で希釈し、混合し、遠心分離した。有機層（６００マイクロリットル）を収集し、蒸発乾燥させ、メタノール（６００マイクロリットル）に再懸濁して、ＳＦＣ分析に備えた。ＳＦＣ分析によって、変換収率９９％で、シン−７−ベンジル−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−オール異性体の生成だけが示された。アンチ異性体の形跡は見出されなかった。
スキームＡのステップＣ． ３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−オール（シンおよびアンチ異性体の混合物）（４）の合成：
シンおよびアンチの７−ベンジル−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−オール異性体の出発混合物（３．７１ｇ、１５．９ｍｍｏｌ）をエタノール（１２０ｍＬ）に溶解させ、Ｐｄ（ＯＨ）２（４５０ｍｇ）を加えた。Ｐａｒｒシェーカーにおいて混合物を５０ｐｓｉの水素中で２．５時間振盪した。混合物を珪藻土で濾過し、収集した固体をメタノールで３回洗浄した。真空中で濾液を濃縮して油性の固体を得た。この油性の固体を酢酸エチルに溶解させ、ヘプタンを加えた。真空中で溶液を濃縮して、３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−オールのシンおよびアンチ異性体混合物を白色の固体（２．０８ｇ、９１％）として得た。この材料をそれ以上精製せずに次のステップで使用した。LCMS (ES+): 144.1 (M+1).
スキームＡのステップＤ．９−ヒドロキシ−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸イソプロピル（シンおよびアンチ異性体の混合物）（５）の合成：
３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−オールのシンおよびアンチ異性体混合物（２．０８ｇ、１４．５ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎジイソプロピルエチルアミン（２．８０ｍＬ、１６．０ｍｍｏｌ）の０℃のジクロロメタン（１５ｍＬ）溶液に、クロロギ酸イソプロピル（１４．２ｍＬ、１４．２ｍｍｏｌ、１．０Ｍトルエン溶液）を滴下した。反応混合物を１４時間かけて室温に温めた。次いで反応液を１Ｍ塩酸水溶液（５０ｍＬ）で希釈し、水層を分離した。有機層を水（５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）で順次洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。混合物を濾過し、濾液を真空中で濃縮して無色の油状物を得た。この油状物を酢酸エチルに溶解させ、ヘプタンを加え、混合物を濃縮した。得られる油状物を真空中で乾燥させて、９−ヒドロキシ−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸イソプロピルのシンおよびアンチ異性体混合物を透明な油状物（２．７４ｇ、８２％）として得た。LCMS (ES+): 230.1 (M+1).
ステップＥ．９−ヒドロキシ−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボキン酸イソプロピルのシンおよびアンチ異性体の分離：
それぞれ６５ｍＬ／分の流量の８５：１５の二酸化炭素およびメタノールを移動相とした、Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ−Ｈカラム（２１×２５０ｍｍ）を利用する分取高圧液体クロマトグラフィーによって、９−ヒドロキシ−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸イソプロピルのシンおよびアンチ異性体混合物（５．０４ｇ、３５．１ｍｍｏｌ）を分離した。分離をモニターする波長は２１０ｎｍとした。それぞれ２．５ｍＬ／分の流量の８５：１５の二酸化炭素およびメタノールを移動相とした、Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ−Ｈ（４．６ｍｍ×２５ｃｍ）カラムを用いた分析用高圧クロマトグラフィーを使用して、分析による各異性体の純度を決定した。ピークをモニターする波長は２１０ｎｍとした。以下の２種の異性体が得られた。
−９−シン−ヒドロキシ−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸イソプロピル（６）（１．３４ｇ）：透明な油状物であったが、静置すると凝固した。保持時間（Ｒｔ）＝２．３分、1H NMR (400 MHz, 重水素化-DMSO): δ 5.12 (d, 1H, J=2.8Hz), 4.76 - 4.71
(m, 1H), 4.20 (d, 1H, J=13Hz), 4.16 (d, 1H, J=13Hz), 3.96 - 3.92 (m, 2H), 3.79
(d, 1H, J=3Hz), 3.55 (s, 1H), 3.52 (S, 1H), 3.08 (d, 1H, J=13Hz), 2.98 (d, 1H,
J=13Hz), 1.47 (m, 2H) 1.16 (d, 3H, J=3Hz), 1.15 (d, 3H, J=3Hz); LCMS (ES+):
230.2 (M+1).
−９−アンチ−ヒドロキシ−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸イソプロピル（７）（１．７０ｇ）：琥珀色の油状物、Ｒｔ＝３．０８分、1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 5.11 (d, 1H, J=2.8Hz), 4.74 - 4.67 (m, 1H), 3.89 (d, 1H, J=13Hz),
3.84 - 3.78 (m, 2H, J=11Hz), 3.80 (d, 1H, J=6Hz), 3.78 (d, 1H, J=3Hz), 3.52 -
3.47 (m, 2H), 3.35 - 3.30 (m, 1H), 3.24 - 3.20 (m, 1H), 1.53 (s, 1H), 1.51 (s,
1H), 1.13 (d, 3H, J=1Hz), 1.16 (d, 3H, J=1Hz); LCMS (ES+): 230.2 (M+1)
別法として、上記反応スキームＡのステップＡとＢを以下で述べるように組み合わせて、７−ベンジル−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−オール（シンおよびアンチ異性体の混合物）を合成することもできる。
ベンジルアミン（２１．３５ｇ、１９９．２７ｍｍｏｌ）、テトラヒドロ−４Ｈ−ピラン−４−オン（１）（１９．９５ｇ、１９９．２７ｍｍｏｌ）、および酢酸（１１．９７ｇ、１９９．２７ｍｍｏｌ）をメタノール（４００ｍＬ）に溶解させた。混合物を還流加熱した。反応混合物に、ホルムアルデヒド水溶液（３７％、３２．３４ｇ、３９８．５３ｍｍｏｌ）およびメタノール（１００ｍＬ）を、反応液を還流させたまま６０分かけて加えた。反応液を室温に冷却した。次いで炭酸水素ナトリウム（１６．７４ｇ、１９９．２７ｍｍｏｌ）を少量ずつ加えた。引き続いて、反応温度を２５℃以下に保ちながら、水素化ホウ素ナトリウム（７．９２ｇ ２０９．２３ｍｍｏｌ）を少量ずつ加えた。混合物を周囲温度で３０分間撹拌した。珪藻土（２０ｇ）を加えた後、水（１００ｍＬ）および１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）を加えた。これを１時間撹拌した後、混合物を濾過し、フィルターケーキをメタノールおよび水（各２０ｍＬ）で順次すすいだ。濾液を真空中で濃縮して、メタノールの大部分を除去した。得られる水性混合物を２−メチルテトラヒドロフラン（３００ｍＬ）で抽出した。有機相をブライン溶液（１００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空中で濃縮して、シンおよびアンチ−７−ベンジル−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−オール異性体の混合物を油状物として得たが、油状物は室温で静置すると凝固した（２２．０ｇ、４７．３％）。
調製例２：９−ヒドロキシ−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（シンおよびアンチ異性体の混合物）
Figure 2012526097
 ３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−オール（シンおよびアンチ異性体の混合物）（３．７８ｇ、２６．４ｍｍｏｌ）を水（３０ｍＬ）およびテトラヒドロフラン（３０ｍＬ）に溶かした０℃の溶液に、二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（５．７６ｇ、２６．４ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（２０ｍＬ）溶液を滴下した。溶液を徐々に室温に温めながら約１５時間撹拌した。反応液をジクロロメタンおよび水で希釈した。層を分離し、水層をジクロロメタンで抽出した。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させた。混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮すると、表題化合物が透明な油状物（６．５５ｇ）として現れ、これをそれ以上精製せずに使用した。
調製例３：９−ヒドロキシ−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルのシンおよびアンチ異性体の分離
Figure 2012526097
 ９−ヒドロキシ−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（５．０４ｇ、３５．１ｍｍｏｌ）のシンおよびアンチ異性体の混合物を、それぞれ８５：１５の二酸化炭素およびメタノールを移動相とし、流量を６５ｍＬ／分としたＣｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ−Ｈカラム（２１×２５０ｍｍ）を利用する分取高圧液体クロマトグラフィーによって分離した。分離をモニターする波長は２１０ｎｍとした。各異性体の純度分析値は、それぞれ８５：１５の二酸化炭素およびメタノールを移動相とし、流量を２．５ｍＬ／分としたＣｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ−Ｈ（４．６ｍｍ×２５ｃｍ）カラムを使用する分析高速クロマトグラフィーを使用して求めた。ピークをモニターする波長は２１０ｎｍとした。以下の２種の異性体が得られた。
９−アンチ−ヒドロキシ−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：（１．３０ｇ、１００％ｄｅ）、静置すると白色の固体に凝固した透明な油状物、保持時間（Ｒｔ）＝３．１５分。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 1.44 (s, 9 H),
1.66 (d, J=16.79 Hz, 2 H), 1.84 (d, J=2.93 Hz, 1 H), 3.30 - 3.52 (m, 2 H), 3.64
(t, J=11.03 Hz, 2 H), 3.93 - 4.21 (m, 5 H).
９−シン−ヒドロキシ−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：（１．６４ｇ、８９％ｄｅ）、静置すると白色の固体に凝固した透明な油状物、Ｒｔ＝３．５５分。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 1.47 (s, 9 H),
1.64 (d, J=13.47 Hz, 2 H), 2.12 (d, J=3.32 Hz, 1 H), 2.92 - 3.22 (m, 2 H), 3.71
- 3.83 (m, 2 H), 3.99 (d, J=3.32 Hz, 1 H), 4.09 - 4.19 (m, 2 H), 4.32 (d,
J=13.66 Hz, 1 H), 4.48 (d, J=13.66 Hz, 1 H).
調製例４：１−（６−クロロピリミジン−４−イル）−５−（メチルチオ）インドリン：
Figure 2012526097
 ４，６−ジクロロピリミジン（８．６０ｇ、５７．７ｍｍｏｌ）をｎ−プロパノール（１１０ｍＬ）に溶かした１０７℃の撹拌した溶液に、５−（メチルチオ）インドリン（ＷＯ１９９５０１９７６）（８．８１ｇ）のｎ−プロパノール（６０ｍＬ）溶液を速やかに加えた。反応混合物を１０７℃で４５分間加熱した。これを室温に冷却した後、混合物をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（１２５ｍＬ）で希釈した。得られる固体を濾過によって収集し、フィルターケーキをメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルで洗浄した。濾液を廃棄し、フィルターケーキを飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２００ｍＬ）とクロロホルム（５００ｍＬ）とに分配した。二相性混合物を４０℃の水浴で加熱して、残存するすべての固体を溶解させた。次いで有機溶液を分離し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮して、１−（６−クロロピリミジン−４−イル）−５−（メチルチオ）インドリンを黄色の固体（１４．８ｇ、８４％）として得た。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 2.49 (s, 3 H) 3.27 (t, J=8.5 Hz ,2 H), 4.02 (t, J=8.5 Hz, 2 H),
6.59 (s, 1H), 7.17 - 7.20 (m, 2 H), 8.35 (d, J=8.7 Hz, 1H), 8.58 (s, 1H); LCMS
(ES+): 278.4 (M+1).
調製例５：１−（６−クロロピリミジン−４−イル）−５−（メチルスルホニル）インドリン
Figure 2012526097
 １−（６−クロロピリミジン−４−イル）−５−（メチルチオ）インドリン（１２．４ｇ、４４．５ｍｍｏｌ）をクロロホルム（３００ｍＬ）に溶かした５０℃の撹拌した溶液に、ｍｅｔａ−クロロペルオキシ安息香酸（２７．４ｇ、１１１ｍｍｏｌ）をクロロホルム（１５０ｍＬ）に溶かした無水溶液（温クロロホルムに溶解させ、分離した水層を廃棄することにより調製）を加えた。１時間後、反応混合物をジメチルスルフィド（１．７ｍＬ）で失活させ、１０分間撹拌し、次いで１０％炭酸ナトリウム水溶液（１５０ｍＬ）中に注いだ。水層を分離し、有機層を１０％炭酸ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮した。得られる残渣を熱アセトニトリルに溶解させた。冷却すると、１−（６−クロロピリミジン−４−イル）−５−（メチルスルホニル）インドリンが白色の固体（１３．８ｇ、８５％）として沈殿した。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 3.05 (s, 3 H), 3.36 (t, J=8.7 Hz, 2 H), 4.12 (t, J=8.7 Hz, 2 H),
6.68 (s, 1 H), 7.74 - 7.85 (m, 1H), 7.81 (d, J=8.4 Hz 1H), 8.66 (s, 1H), 8.63
(d, J=8.4 Hz, 1H); LCMS (ES+) 310.4 (M+1).
調製例６：４−クロロ−６−［５−（メチルチオ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ピリミジン−５−カルボニトリル
Figure 2012526097
 ５−（メチルチオ）インドリン（５０ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）を含有するアセトニトリル（１ｍＬ）を８０℃で２分間加熱し、次いで室温に冷却した。反応混合物に４，６−ジクロロピリミジン−５−カルボニトリル（ＷＯ２００６１１８７４９）（５３ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（０．１０ｍＬ、０．４５ｍｍｏｌ）を加え、次いでこれを３時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、残渣をヘプタンで摩砕した。混合物を濾過して、４−クロロ−６−［５−（メチルチオ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ピリミジン−５−カルボニトリルを白色の固体（４０ｍｇ、４３％）として得た。1H NMR (400 MHz, 重水素化-DMSO) δ 8.63 (s, 1 H), 8.09 (d, 1 H, J=8.8 Hz,), 7.24 (s, 1 H), 7.12 (d, 1
H, J=8.4 Hz), 4.49 (t, 2 H, J=8.2 Hz), 3.21 (t, 2 H, J=8.0Hz), 2.45 (s, 3 H).
調製例７：４−［（６−クロロ−５−メトキシピリミジン−４−イル）オキシ］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
Figure 2012526097
 ４，６−ジクロロ−５−メトキシピリミジン（２４０ｍｇ、１．３４ｍｍｏｌ）および４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（３２６ｍｇ、１．７４ｍｍｏｌ）を無水１，４−ジオキサン（３ｍＬ）に溶かした１００℃の溶液に、１Ｍのナトリウムビス（トリメチルシリル）アミドテトラヒドロフラン溶液（１．３４ｍＬ、１．３４ｍｍｏｌ、１．０Ｍ）を加えた。反応混合物を１０時間加熱し、次いで室温に冷ました。次いで反応を水（３ｍＬ）で失活させ、酢酸エチル（２０ｍＬ）で希釈した。次いで溶液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１０ｍＬ）およびブライン（１０ｍＬ）で順次洗浄した後、硫酸ナトリウムで乾燥させた。混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮した。未精製残渣を、カラムクロマトグラフィー（０〜１００％の酢酸エチルヘプタン溶液）によって精製して、４−［（６−クロロ−５−メトキシピリミジン−４−イル）オキシ］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルを油状物（２６０ｍｇ、５９％）として得た。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 8.25 (1 H, s) 5.29 - 5.44 (1 H, m) 4.84 - 5.01 (1 H, m) 3.90 (3 H,
s) 3.72 - 3.82 (2 H, m) 3.31 - 3.47 (2 H, m) 1.93 - 2.10 (2 H, m) 1.72 - 1.89
(2 H, m) 1.25 (6 H, d, J=6.24 Hz); LCMS (ES+): 329.0 (M+1).
調製例８：４−［（６−クロロ−５−メチルピリミジン−４−イル）オキシ］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
Figure 2012526097
 ４，６−ジクロロ−５−メチル−ピリミジン（３．０ｇ、１８．４ｍｍｏｌ）および４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（３．７９ｇ、２０．２ｍｍｏｌ）を無水テトラヒドロフラン（１００ｍＬ）に溶かした０℃の溶液に、１Ｍのカリウムｔｅｒｔ−ブトキシドテトラヒドロフラン溶液（３．１ｇ、２７．６ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を撹拌しながら１８時間かけて室温に温めた。次いで水で反応を失活させ、酢酸エチルで４回抽出した。有機抽出物を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させた。混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮した。得られる材料をカラムクロマトグラフィー（０〜５０％の酢酸エチルヘプタン溶液）によって精製して、４−［（６−クロロ−５−メチルピリミジン−４−イル）オキシ］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルを白色の固体（４．４ｇ、７６％）として得た。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 1.23 (d, J=6.4 Hz, 6 H) 1.70 - 1.79 (m, 2 H) 1.91 - 2.01 (m, 2 H)
2.20 (s, 3 H) 3.34 - 3.42 (m, 2 H) 3.67 - 3.77 (m, 2 H) 4.86 - 4.95 (m, 1 H)
5.29 - 5.35 (m, 1 H) 8.36 (s, 1 H); LCMS (ES+): 314.2 (M+1).
調製例９：４−［（６−クロロ−ピリミジン−４−イル）オキシ］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
Figure 2012526097
 ４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（６６０ｍｇ、３．５２ｍｍｏｌ）および４，６−ジクロロピリミジン（５００ｍｇ、３．３６ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１５ｍＬ）に溶かした溶液に、１Ｍのカリウムｔｅｒｔ−ブトキシドテトラヒドロフラン溶液（５．０３ｍＬ、５．０３ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。反応混合物を一晩かけてゆっくりと室温に温めた。１８時間後、反応混合物を水で希釈し、酢酸エチルで３回抽出した。有機層を合わせて硫酸ナトリウムで乾燥させ、次いで濾過し、濾液を減圧下で濃縮した。未精製残渣をカラムクロマトグラフィー（０〜５０％の酢酸エチルヘプタン溶液）によって精製して、４−［（６−クロロ−ピリミジン−４−イル）オキシ］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（７００ｍｇ、６９．６％）を無色の油状物として得た。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 1.25 (d, J=6.25 Hz, 6 H) 1.68 - 1.79 (m, 2 H) 1.94 - 2.03 (m, 2 H)
3.29 - 3.37 (m, 2 H) 3.75 - 3.83 (m, 2 H) 4.88 - 4.97 (m, 1 H) 5.28 - 5.36 (m,
1 H) 6.75 (d, J=0.78 Hz, 1 H) 8.55 (d, J=0.98 Hz, 1 H). LCMS (ES+): 300.3
(M+1).
調製例１０：１−（６−クロロ−ピリミジン−４−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−カルボン酸メチルエステル
Figure 2012526097
 ４，６−ジクロロピリミジン（８１５ｍｇ、４．６０ｍｍｏｌ）のｎ−プロパノール（１２．０ｍＬ）溶液に、２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−カルボン酸メチルエステル（Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２００８、１８、５６８４〜８）（７５４ｍｇ、５．０６ｍｍｏｌ）を加えた。得られる黄色の溶液を２時間加熱還流した。反応液を室温に冷ました後、反応混合物をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルで希釈し、次いで濾過した。収集した固体をクロロホルムと飽和炭酸水素ナトリウム水溶液とに分配した。分離した有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濾液を減圧下で濃縮して、１−（６−クロロ−ピリミジン−４−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−カルボン酸メチルエステル（９２９ｍｇ、６９．７％）をオフホワイトの固体として得た。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 3.32 (t, J=8.49 Hz, 2 H) 3.91 (s, 3 H) 4.08 (t, J=8.69 Hz, 2 H)
6.67 (s, 1 H) 7.90 (d, J=0.98 Hz, 1 H) 7.96 (dd, J=8.49, 1.46 Hz, 1 H) 8.46 (d,
J=8.59 Hz, 1 H) 8.65 (s, 1 H).
調製例１１：１−（６−クロロ−ピリミジン−４−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−カルボン酸
Figure 2012526097
 １−（６−クロロ−ピリミジン−４−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−カルボン酸メチルエステル（１００ｍｇ、０．３４５ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（３ｍＬ）と水（１ｍＬ）からなる溶液に溶かした溶液に、水酸化リチウム一水和物（１６．８ｍｇ、０．３８０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を６０℃に加熱した。４時間後、反応混合物を室温に冷まし、溶液中に沈殿を生じさせた。混合物を濾過し、収集した固体を減圧下で乾燥させて、１−（６−クロロ−ピリミジン−４−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−カルボン酸（６７ｍｇ、７０％）を白色の固体として得た。1H NMR (400 MHz, 重水素化-DMSO) δ 3.24 (t, J=8.78 Hz, 2 H) 4.10 (t, J=8.69 Hz, 2 H) 7.02 (s, 1 H)
7.77 (d, J=1.17 Hz, 1 H) 7.81 (dd, J=8.49, 1.85 Hz, 1 H) 8.44 (d, J=8.59 Hz, 1
H) 8.62 (s, 1 H) 12.60 (広幅. s.,
1 H). LCMS (ES+): 276.5 m/z (M+1).
調製例１２：１−（６−クロロ−５−メチルピリミジン−４−イル）インドリン−５−カルボン酸メチル
Figure 2012526097
 ４，６−ジクロロ−５−メチルピリミジン（１０１ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ）をｎ−プロパノール（２．０ｍＬ）に溶かした撹拌した溶液に、２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−カルボン酸メチルエステル（Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２００８、１８、５６８４〜８）（１００ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）を加えた。得られる黄色の溶液を還流加熱（１００℃）した。還流させながら４時間経過後、反応混合物を室温に冷却し、真空中で濃縮した。残渣を、ヘプタンに対して１０〜４０％の酢酸エチルからなる勾配混合物を溶離液とするフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、１−（６−クロロ−５−メチルピリミジン−４−イル）インドリン−５−カルボン酸メチルを白色の固体（６０ｍｇ）として得た。
調製例１３：５−［（２−ヒドロキシエチル）チオ］インドリン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
Figure 2012526097
 ５−ブロモ−２，３−ジヒドロ−インドール−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（９３３ｍｇ、３．１３ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（１．１ｍＬ、６．２６ｍｍｏｌ）を無水１，４−ジオキサン（２０ｍＬ）に溶かした溶液を、窒素流で１０分間パージした。次いで４，５−ビス（ジフェニルホスフィノ）−９，９−ジメチルキサンテン（２０１．４ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（１４８．４ｍｇ、０．１６２ｍｍｏｌ）、および２−メルカプトエタノール（０．２２０ｍＬ．３．１３ｍｍｏｌ）を順次加え、反応混合物を１１０℃で２４時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、珪藻土パッドで濾過した。次いで濾液を水（５０ｍＬ）で２回洗浄した。有機層を合わせて硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濾液を減圧下で濃縮して、未精製の黄色の油状物を得、これをカラムクロマトグラフィーによって精製して、５−［（２−ヒドロキシエチル）チオ］インドリン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（８９８ｍｇ、９７％）を濃厚な黄色の油状物として得た。1H NMR (500 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 1.57 (s, 9 H) 3.02 (t, 2 H) 3.08 (t, 2 H) 3.69 (br. s., 2 H) 3.96 -
4.03 (m, 2 H) 7.25 (s, 1 H) 7.26 (s, 1 H) 7.28 (s, 1 H) 7.79 (広幅 s, 1 H).
調製例１４：２−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イルチオ）エタノール
Figure 2012526097
 ５−［（２−ヒドロキシエチル）チオ］インドリン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（８９０ｍｇ、３．０１ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（８．０ｍＬ）溶液に、４Ｍの塩酸１，４−ジオキサン溶液（２．０ｍＬ）を加えた。反応液を１５分間撹拌した後、２０分間５０℃に、次いで３０分間７５℃に順次加熱した。反応液を室温に冷まし、固体を濾過して、２−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イルチオ）エタノール（３７６ｍｇ、６４％）を淡褐色がかった橙色の固体として得た。1H NMR (400 MHz, 重水素化メタノール) δ 3.11 (t, 2 H)
3.30 - 3.33 (m, 2 H) 3.69 (t, 2 H) 3.84 (t, 2 H) 7.38 - 7.39 (m, 2 H) 7.48 -
7.50 (m, 1 H).
調製例１５：５−［（２−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝エチル）チオ］インドリン
Figure 2012526097
 ２−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イルチオ）エタノールのジクロロメタン（８ｍＬ）懸濁液に、トリエチルアミン（０．６ｍＬ、４．０ｍｍｏｌ）、４−ジメチルアミノピリジン（２１．８ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）、および塩化ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（２４４ｍｇ、１．６２ｍｍｏｌ）を順次加えた。反応液を３時間撹拌し、減圧下で濃縮した。残渣を酢酸エチル（２０ｍＬ）で希釈した。混合物を濾過し、濾液を濃縮して、未精製の橙色の油状物を得、これをカラムクロマトグラフィーによって精製して、５−［（２−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］−オキシ｝エチル）−チオ］インドリン（１４５ｍｇ．３４％）を油状物として得た。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 0.01 (s, 6 H) 0.85 (s, 9 H) 2.83 - 2.90 (m, 2 H) 2.99 (t, J=8.39
Hz, 2 H) 3.55 (t, J=8.49 Hz, 2 H) 3.67 - 3.75 (m, 2 H) 6.52 (d, J=8.00 Hz, 1 H)
7.10 (dd, J=8.00, 1.95 Hz, 1 H) 7.19 (d, J=1.37 Hz, 1 H).
調製例１６：２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン
Figure 2012526097
 ステップＡ：１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
Figure 2012526097
 赤色の固体としての４−アザインドール（５０．０５ｇ、４２６ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（３８０ｍＬ）に溶解させて、濃赤色の溶液を得た。ジ−ｔｅｒｔブチルカーボネート（９５．２４ｇ、４３０ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（５０ｍＬ）に溶解させ、アザインドールの溶液に、添加漏斗で７５分かけてゆっくりと滴下した。流量は約２ｍＬ／分とした。時間をかけた滴下を用いて、二酸化炭素の発生を調節した。滴下によって、反応混合物の色がより淡く橙色の色目に変わった。混合物を室温で１６時間撹拌した後、反応液を真空中で濃縮乾燥した。橙色の残渣が凝固して、９３．８４ｇの黄褐色の固体（MS ES+:163.2[M-tBu]）が得られた。この材料をそれ以上精製せずに後続のステップで使用した。
ステップＢ：２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
Figure 2012526097
 最小限のエタノールで湿らせた水酸化パラジウム（３．２２ｇ、約１３ｍｏｌ％のパラジウム、Ａｌｄｒｉｃｈ、３３００９４）を、窒素雰囲気中で５００ｍＬのＰａｒｒボトルに加えた。これに、固体としての未精製の１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１０．０ｇ）を加えた。エタノール（１６０ｍＬ）を加え、混合物を２０ｐｓｉの水素雰囲気中で振盪した。混合物を６０℃で加熱し、水素圧を５０ｐｓｉに上げた。熱い混合物を５０ｐｓｉの水素雰囲気中で３０時間振盪した後、混合物を室温に冷却し、Ｐａｌｌ ＧＨＰ膜（０．４５マイクロメートル）で濾過し、エタノールですすいだ。濾液を真空中で濃縮して、９．９５ｇの２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルを黄色の油状物として得、これをそれ以上精製せずに後続のステップで使用した。
ステップＣ：２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン
Figure 2012526097
 ２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（９．９５ｇ）を４５ｍＬのメタノールに溶かした撹拌した溶液に、室温で塩化水素（４５．２ｍＬ、４Ｎジオキサン溶液）を加えた。混合物を１時間６０℃に加熱した。混合物を室温に冷却し、ジエチルエーテルで希釈し、固体沈殿を濾過によって収集した。収集した固体を真空中で乾燥させると、塩酸塩が黄褐色の固体として得られた。この塩１．０ｇを１０ｍＬのメタノールに溶解させた。混合物を０℃に冷却し、水酸化カリウム水溶液（０．９７ｍＬ、１１．８Ｍ、１１．４５ｍｍｏｌ、２．２当量）を加えた。塩基を加えたなら、冷浴を取り外し、反応混合物を室温で５分間撹拌した。混合物を真空中で濃縮してほぼ乾燥させた後、２０ｍＬのジクロロメタンを加えた。混合物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、目の粗いフリットガラス漏斗で濾過し、固体をジクロロメタンですすいだ。濾液を真空中で濃縮乾燥して、２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジンを橙色の油状物として得たが、放置するとこれが凝固して、０．６ｇ、９６％が得られた。1H NMR (500 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 3.16 (t, 2 H) 3.65 (td, J=8.66, 1.71 Hz, 2 H) 3.78 (br. s., 1 H)
6.79 - 6.84 (m, 1 H) 6.89 (dd, J=7.56, 5.37 Hz, 1 H) 7.87 (dd, J=5.00, 1.10 Hz,
1 H)
調製例１７：１−（６−クロロピリミジン−４−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン
Figure 2012526097
 ２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン（２００ｍｇ、１．６６ｍｍｏｌ）（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、１９９８、４１、１５９８）と１−プロパノール（６ｍＬ）の混合物を１１０℃で加熱して、溶液を生成した。溶液を室温に冷まし、４，６−ジクロロピリミジン（２４８ｍｇ、１．６６ｍｍｏｌ）を加え、反応液を１１５℃で３時間加熱し、次いで室温に冷ました。反応液を酢酸エチルおよび水で希釈し、水相を酢酸エチルで２回抽出した。抽出物を合わせて水、次いでブラインで順次洗浄した後、硫酸ナトリウムで乾燥させた。混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮して固体とし、これをカラムクロマトグラフィー（５％メタノール／０．５％トリエチルアミンのジクロロメタン溶液）によって精製して、１−（６−クロロピリミジン−４−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン（１００ｍｇ、２６％）を泡沫として得た。1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ 8.64 ppm (d, J=8.31 Hz, 1 H) 8.60 ppm (s, 1 H) 8.15 ppm (d, J=4.98
Hz, 1H) 7.15 ppm (d, J=8.31 Hz, 1 H) 6.62 ppm (s, 1 H) 4.04 ppm (t, 2 H) 3.42
ppm (t, 2 H). LCMS (ES+): 233 (M+1)
調製例１８：１−（６−クロロ−５−メチルピリミジン−４−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン
Figure 2012526097
 この化合物は、２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジンと４，６−ジクロロ−５−メチルピリミジンから、調製例１７の手順と類似した手順を使用して調製した。１−（６−クロロ−５−メチルピリミジン−４−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン（１００ｍｇ、２６％）を黄褐色の固体として単離した。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 8.49 (s, 1H), 8.09 (d, J=4.98 Hz, 1H), 7.21 (d, J=7.89 Hz, 1H), 7.05
(d, J=7.89 Hz, 1H), 4.20 (t, 2 H), 3.31 (t, 2 H), 2.29 (s, 3 H). LCMS (ES+):
247 (M+1).
代替手順は以下のとおりである。
２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン（９．０５ｇ、７５．３ｍｍｏｌ）およびジクロロピリミジン（１２．３ｇ、７５．３ｍｍｏｌ）をｔｅｒｔ−ブタノール（９０ｍＬ）およびトルエン（９０ｍＬ）に溶かした溶液に、炭酸セシウム（３７．６ｇ）を加えた。混合物を窒素ガス流で脱気した。ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）ジクロリド（１．５９ｇ）を加え、混合物を窒素で数分間再び脱気した。得られる混合物を１８時間還流加熱した（１１５℃）。混合物を室温に冷却し、酢酸エチルで希釈し、混合物を珪藻土で濾過した。濾液を真空中で濃縮して油状物とした。この油状物を２−メチルテトラヒドロフラン（４００ｍＬ）に溶解させ、３００ｍＬの１Ｎ塩酸水溶液を加えた。水層を分離し、２−メチルテトラヒドロフランで２回抽出した。有機抽出物を合わせて水で洗浄した。水層を合わせて氷浴で冷却し、ｐＨが８〜９に調整されるまでトリエチルアミンをゆっくりと加えた。沈殿が生成し、それら固体を濾過によって収集した。水性の濾液を２−メチルテトラヒドロフランで２回抽出した。これら有機抽出物を合わせてブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を真空中で濃縮した。残渣を予め収集されている固体と合わせ、２−メチルテトラヒドロフランに溶解させ、真空中で濃縮した。３３０ｇのシリカゲルを使用し、ヘプタンと酢酸エチルの勾配混合物（３０分かけて５０〜１００％、次いで３０分間１００％の酢酸エチル）を溶離液とするフラッシュクロマトグラフィーによって残渣（ｒｅｓｉｄｅ）を精製して、１−（６−クロロ−５−メチルピリミジン−４−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジンをオフホワイトの固体（２５．５ｇ）として得た。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 2.27 (s, 3 H) 3.29 (t, J=8.39 Hz, 2 H) 4.18 (t, J=8.39 Hz, 2 H)
7.03 (dd, J=8.10, 4.98 Hz, 1 H) 7.20 (dd, J=8.10, 1.27 Hz, 1 H) 8.07 (dd, J=5.08,
1.37 Hz, 1 H) 8.47 (s, 1 H)
調製例１９：２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン
Figure 2012526097
 ７−アザインドール（３．０１ｇ、２５．５ｍｍｏｌ）、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（４．８６ｇ、２５．５ｍｍｏｌ）、およびギ酸（９５％溶液１４ｍＬ）を３０ｍＬの１−プロパノールに溶解させた。反応混合物を撹拌しながら、予熱した１２５℃の浴に浸した。ラネーニッケル（６ｍＬの２８００活性触媒懸濁液、Ａｌｄｒｉｃｈ）を加え、混合物を１２５℃で１時間加熱し続けた。次いで混合物を２５℃に冷まし、珪藻土で濾過した。固体を１−プロパノールで洗浄して、透明な淡緑色の濾液を得た。エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム（ＥＤＴＡ）二水和物（２．５ｇ）を濾液に溶解させた後、６Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）を加えた。混合物を２０分間還流加熱し、室温に冷却し、１−プロパノール相を分離し、減圧下で濃縮した。残存する塩基性の水相を５０ｍＬのメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルで抽出し、分離した。１−プロパノール相からの濃縮された残渣を５０ｍＬのメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルおよび１０ｍＬの水に溶かした。層を分離し、２つのメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル相を合わせ、１０ｍＬの２回分の水、１０ｍＬの１回分のブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮して、白色の固体を得た。これを１０ｍＬのヘキサンから再結晶させて、２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（１．８７ｇ、６１％）を淡い黄褐色の固体として得た。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 3.06 (t, J=8.4 Hz, 2 H), 3.61 (t, J=8.3 Hz, 2 H), 4.51 (広幅 s., 1 H), 6.50 (dd, J=7.0, 5.3 Hz, 1 H),
7.24 (dd, J=7.0, 1.4 Hz, 1 H), 7.82 (d, J=5.3 Hz, 1 H). LCMS (ES): 121 (M+1).
調製例２０：５−（メチルチオ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン
Figure 2012526097
 この化合物は、２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンを出発材料として利用し、５−（メチルチオ）インドリン（ＷＯ１９９５０１９７６）と同様にして合成した。1H NMR (500 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 2.37 (s, 3 H), 3.06 (t, J=8.4 Hz, 2 H), 3.64 (td, J=8.4, 1.3 Hz, 2
H), 4.60 (br. s., 1 H), 7.33 (s, 1 H), 7.90 (s, 1 H). LCMS (ES+): 167 (M+1).
調製例２１：１−（６−クロロピリミジン−４−イル）−５−（メチルチオ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン
Figure 2012526097
 ５−（メチルチオ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（３５６ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ）および４，６−ジクロロピリミジン（３５４ｍｇ、２．４ｍｍｏｌ）を４ｍＬの無水１，４−ジオキサンに溶解させ、混合物を、予熱した１００℃の油浴に浸した。１Ｍのナトリウムビス（トリメチルシリル）アミドテトラヒドロフラン溶液（２．１ｍＬ）を速やかに滴下して加え、黒ずんだ混合物を速やかに生成させた。混合物を３０分間加熱し、室温に冷まし、減圧下で濃縮した。残渣を酢酸エチルと水とに分配した。有機層を分離し、水で２回、次いでブラインで順次洗浄した後、硫酸マグネシウムで乾燥させた。混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮して赤色の固体を得、これをカラムクロマトグラフィー（ヘプタン−酢酸エチル勾配）によって精製して、１−（６−クロロピリミジン−４−イル）−５−（メチルチオ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンをオフホワイトの固体（３６３ｍｇ、６１％）として得た。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 2.49 (s, 3 H), 3.18 (t, J=8.6 Hz, 2 H), 4.30 - 4.36 (m, 2 H), 7.49
(d, J=2.1 Hz, 1 H), 8.15 (d, J=2.1 Hz, 1 H), 8.61 (d, J=0.8 Hz, 1 H), 8.80 (d,
J=1.0 Hz, 1 H). LCMS (ES+): 279 (M+1).
調製例２２：１−（６−クロロピリミジン−４−イル）−５−（メチルスルホニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン
Figure 2012526097
 ３−クロロ過安息香酸（７０％、８５１ｍｇ、３．５ｍｍｏｌ）を４ｍＬのクロロホルムに溶解させ、分離した水を除去した。有機溶液を、１−（６−クロロピリミジン−４−イル）−５−（メチルチオ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（３６３ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）を８ｍＬのクロロホルムに溶かした撹拌状態の溶液に１回で加えた。１時間後、ジメチルスルフィドを加えて、反応液中の過剰の３−クロロ過安息香酸を失活させた。混合物を５分間撹拌し、次いで０．５Ｍ水酸化ナトリウム（２０ｍＬ）で洗浄した。クロロホルム層を分離し、水で再び洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮して、１−（６−クロロピリミジン−４−イル）−５−（メチルスルホニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（３６６ｍｇ、９０％）を白色の粉末として得た。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム): 3.11 (s, 3 H), 3.29 (t, J=8.6
Hz, 2 H), 4.40 - 4.49 (m, 2 H), 7.92 (d, J=2.1 Hz, 1 H), 8.70 (d, J=1.0 Hz, 1
H), 8.75 (d, J=2.1 Hz, 1 H), 8.86 (d, J=0.8 Hz, 1 H). LCMS (ES+): 311 (M+1).
調製例２３：３−フルオロ−４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルの異性体（４および５）。実験の細目を以下のスキームＢで詳述する。
Figure 2012526097
ステップＡ．４−［（トリメチルシリル）オキシ］−３，６−ジヒドロピリジン−１（２Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（２）
Figure 2012526097
 Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−４−ピペリドン（３０．０ｇ、０．１５ｍｏｌ）を無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３００ｍＬ）に溶かした室温の溶液に、塩化トリメチルシリル（２２．９ｍＬ、０．１８ｍｏｌ）およびトリエチルアミン（５０．４ｍＬ、０．３６ｍｏｌ）を添加漏斗で連続的に加えた。得られる溶液を８０℃で終夜加熱し、次いで室温に冷却した。反応混合物を水およびヘプタンで希釈した。層を分離し、水層をヘプタンで抽出した。ヘプタン層を合わせて水およびブラインで順次洗浄し、次いで硫酸マグネシウムで乾燥させた。混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮して、粗生成物を黄色の油状物として得た。油状物を９０：１０のヘプタン／酢酸エチルの溶液としてシリカゲル充填物に通すことにより精製して、表題化合物を無色の油状物（３３．６ｇ、８２％）として得た。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 4.78 (br s, 1H), 3.86 (br s, 2 H), 3.51 (t, 2 H), 2.09 (br s, 2 H),
1.45 (s, 9 H), 0.18 (s, 9 H).
ステップＢ．３−フルオロ−４−オキソピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（３）
Figure 2012526097
 ４−［（トリメチルシリル）オキシ］−３，６−ジヒドロピリジン−１（２Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（２８．８ｇ、０．１１ｍｏｌ）をアセトニトリル（３００ｍＬ）に溶かした室温の撹拌した溶液に、Ｓｅｌｅｃｔｆｌｕｏｒ（商標）（４１．４ｇ、０．１２ｍｏｌ）を加えた。得られる淡黄色の懸濁液を室温で１．５時間撹拌した。飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（３００ｍＬ）および酢酸エチル（３００ｍＬ）を加え、層を分離した。水層を酢酸エチルで２回抽出し、すべての有機層を合わせ、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液およびブラインで順次洗浄し、次いで硫酸マグネシウムで乾燥させた。混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮して、粗生成物を淡黄色の油状物として得た。この材料を、ヘプタン／酢酸エチルの勾配（２：１〜１：１）をかけたシリカゲルでのカラムクロマトグラフィーに繰り返しかけて精製すると、表題化合物が白色の固体（１５．５ｇ、６７％）として得られた。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム): δ 4.88 (dd, 0.5 H), 4.77 (dd, 0.5 H), 4.47 (br s, 1H), 4.17 (ddd,
1H), 3.25 (br s, 1H), 3.23 (ddd, 1H), 2.58 (m, 1H), 2.51 (m, 1H), 1.49 (s, 9
H).
ステップＢは、ケトンの水和物を単離し、以下のようにも実施した。
４−［（トリメチルシリル）オキシ］−３，６−ジヒドロピリジン−１（２Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（４１．３ｇ、０．１５ｍｏｌ）をアセトニトリル（５００ｍＬ）に溶かした室温の撹拌した溶液に、Ｓｅｌｅｃｔｆｌｕｏｒ（商標）（５６．９ｇ、０．１６ｍｏｌ）を加えた。得られる淡黄色の懸濁液を室温で４時間１０分撹拌した。飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および酢酸エチルを加え、層を分離した。水層を酢酸エチルで２回抽出し、すべての有機層を合わせ、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液およびブラインで順次洗浄し、次いで硫酸マグネシウムで乾燥させた。混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮して、未精製の３−フルオロ−４−オキソピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルを白色の固体として得た。未精製の３−フルオロ−４−オキソピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルをテトラヒドロフラン（１２０ｍＬ）に懸濁させ、水（１２０ｍＬ）を加えた。得られる溶液を室温で５．５時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮した。残渣を高真空中で乾燥させ、三角フラスコに移し、ジクロロメタン（２５０ｍＬ）に懸濁させた。得られる懸濁液を５分間撹拌し、焼結ガラス漏斗を使用する濾過によって固体を収集した。得られるフィルターケーキをジクロロメタン（２００ｍＬ）、ジクロロメタン（２００ｍＬ）とヘプタン（１００ｍＬ）の１：１混合物で十分に洗浄した。次いで固体を高真空中で乾燥させて、３−フルオロ−４，４−ジヒドロキシピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（２６．４ｇ）を得た。1H NMR (500 MHz, 重水素化ジメチルスルホキシド) δ 1.38 (s, 9 H), 1.49-1.52 (m, 1H), 1.63-1.68 (m, 1 H), 2.82 -3.20
(m, 2 H) 3.75 (br, 1 H), 3.97 (br, 1 H), 4.12 (d, J = 45, 1 H), 5.92 (s, 1 H),
5.97 (s, 1 H).
ステップＣ．（Ｒ＊）−３−（Ｓ）−フルオロ−４−（Ｒ）−ヒドロキシピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルの異性体（４および５）（ラセミ体）
Figure 2012526097
 ３−フルオロ−４−オキソピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１５．５ｇ、７１．３ｍｍｏｌ）をメタノール（１５０ｍＬ）に溶かした０℃の溶液に、水素化ホウ素ナトリウム（３．５１ｇ、９３．７ｍｍｏｌ）を加えた。得られる混合物を０℃で２時間撹拌し、次いで室温に温めた。飽和塩化アンモニウム水溶液（２００ｍＬ）を加え、混合物を酢酸エチルで３回抽出した。抽出物を合わせてブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮して粗生成物の混合物を得、これを、ヘプタン−酢酸エチル（３：２〜１：１）を溶離液とするシリカゲルでのカラムクロマトグラフィーによって精製して、第一の溶出生成物である（３，４−トランス）−３−フルオロ−４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（３．８１ｇ、２４％）を淡黄色の油状物として得たが、油状物は静置すると白色の固体に凝固した。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 4.35 (ddd, 0.5 H), 4.18 (ddd, 0.5 H), 4.15 (br s, 1H), 3.89-3.74
(m, 2 H), 2.97 (br s, 1H), 2.93 (ddd, 1H), 2.47 (s, 1H), 2.05-1.92 (m, 1H),
1.58-1.46 (m, 1H), 1.44 (s, 9 H).
次いで、第二の溶出化合物である（３，４−シス）−３−フルオロ−４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１０．５７ｇ、６８％）を白色の固体として単離した。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 4.69 - 4.65 (m, 0.5 H), 4.53-4.49 (m, 0.5 H), 3.92 - 3.86 (m, 2 H),
3.69 (br s, 1H), 3.39 (br s, 1H), 3.16 (br s, 1H), 2.13 (s, 1H), 1.88 - 1.73
(m, 2 H), 1.44 (s, 9 H).
ステップＣは、以下のように水和物３−フルオロ−４，４−ジヒドロキシピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルを出発材料としても実施した。
３−フルオロ−４，４−ジヒドロキシピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（２０．０ｇ、８５ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（５００ｍＬ）に溶かした−３５℃の撹拌した溶液に、Ｌ−ｓｅｌｅｃｔｒｉｄｅのテトラヒドロフラン溶液（１７０ｍＬ、１Ｍ、１７０ｍｍｏｌ）を３０分かけて滴下した。反応混合物を１．５時間かけて０℃に温めた。反応混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液（１５０ｍＬ）で失活させ、１５分間激しく撹拌した。この０℃の混合物にｐＨ７のリン酸緩衝液（１５０ｍＬ）を加えた後、３５％過酸化水素水溶液（１５０ｍＬ）を滴下した。得られる混合物を３０分間撹拌し、酢酸エチルで希釈した。有機層を分離し、水、飽和チオ硫酸ナトリウム水溶液、およびブラインで順次洗浄した。次いで有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濾液を減圧下で濃縮して粗生成物の混合物を得、これを、ヘプタン−酢酸エチル（１０〜６０％勾配）を溶離液とするシリカゲルでのカラムクロマトグラフィー［ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ ＩＳＣＯ ３３０ｇカラム］によって精製して、（３，４−シス）−３−フルオロ−４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１３．９ｇ）を得た。
ステップＤ．（３，４−シス）−３−フルオロ−４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルの鏡像異性体
ラセミ体の（３，４−シス）−３−フルオロ−４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルの１グラムのサンプルを、それぞれ９０：１０の二酸化炭素およびエタノールを移動相とし、流量を１０ｍＬ／分としたＣｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ−Ｈカラム（１０×２５０ｍｍ）を利用する分取高圧液体クロマトグラフィーによって、その鏡像異性体に精製した。分離をモニターする波長は２１０ｎｍとした。各鏡像異性体の純度分析値は、それぞれ９０：１０の二酸化炭素およびエタノールからなる定組成移動相を用い、流量を２．５ｍＬ／分としたＣｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ−Ｈ（４．６ｍｍ×２５ｃｍ）カラムを使用する分析高速クロマトグラフィーを使用して求めた。ピークをモニターする波長は２１０ｎｍとした。以下の２種の異性体が得られた。
（３Ｓ，４Ｒ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル、鏡像異性体１（３６３ｍｇ）：Ｒｔ＝２．６７分（１００％ｅｅ）（ジクロロメタン中での旋光＝＋２１．２°）
Figure 2012526097
 （３Ｒ，４Ｓ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル、鏡像異性体２（４０３ｍｇ）：Ｒｔ＝２．９９分（８８％ｅｅ）
Figure 2012526097
（３，４−シス）−３−フルオロ−４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル異性体の絶対立体化学は、上記鏡像異性体１を使用して調製した５−（６−（（３Ｓ，４Ｒ）−３−フルオロピペリジン−４−イルオキシ）−５−メチルピリミジン−４−イル）−１−メチル−１，４，５，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾールの（１Ｓ）−（＋）−カンファーカンファースルホン酸塩（以下のラセミ体における調製を類推によって参照されたい）を生成することにより決定した。
Figure 2012526097
５−（６−｛［（３，４−シス）−３−フルオロピペリジン−４−イル］オキシ｝−５−メチルピリミジン−４−イル）−１−メチル−１，４，５，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール（ラセミ体）の調製
ａ．５−（６−クロロ−５−メチルピリミジン−４−イル）−１−メチル−１，４，５，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾールの調製
Figure 2012526097
 １−メチル−１，４，５，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール二塩酸塩（２．００ｇ、１０．２ｍｍｏｌ）および４，６−ジクロロ−５−メチルピリミジン（１．６６ｇ、１０．２ｍｍｏｌ）を室温でテトラヒドロフラン（５１ｍＬ）に懸濁させた。これにトリエチルアミン（４．４１ｍＬ、３１．６ｍｍｏｌ）を加えると、混合物が濁り、フラスコの壁面に褐色の固体が固着した。この混合物を室温で４時間撹拌し、次いでさらに１９時間５０℃に加熱した。反応混合物を室温に冷却し、水（１００ｍＬ）で希釈した。この混合物を酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出した。有機抽出物をプールし、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。真空中で濾液を乾燥状態まで減少させて、表題化合物を淡褐色の固体（１．９５ｇ、７８％）として得、これをそれ以上精製せずに次のステップで使用した。1H NMR (500 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 2.54 (s, 3 H) 3.88 (s, 3 H) 4.90 (見かけd, J=3.66 Hz, 4 H) 7.28 (s, 1 H) 8.29 (s, 1 H).
ｂ．（３，４−シス）−３−フルオロ−４−｛［５−メチル−６−（１−メチル−４，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ）−イル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ラセミ体）の調製
Figure 2012526097
 （３，４−シス）−３−フルオロ−４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１．６７ｇ、７．６２ｍｍｏｌ）と上で調製した５−（６−クロロ−５−メチルピリミジン−４−イル）−１−メチル−１，４，５，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール（９００ｍｇ、３．６０ｍｍｏｌ）の混合物を１，４−ジオキサン（２０ｍＬ）に溶解させ、１０５℃に加熱した。１０分間加熱した後、すべての材料が溶液になり、ナトリウムビス（トリメチルシリル）アミド（４．３ｍＬ、４．３ｍｍｏｌ、１Ｍトルエン溶液）を混合物に速やかに加えると、濁った黄色の混合物が得られ、次いでこれを１０５℃で２時間撹拌した。次いで反応液を室温に冷却し、水と飽和炭酸水素ナトリウム水溶液の等体積混合物を加えて失活させた。混合物を酢酸エチル（３×１５ｍＬ）で抽出した。有機抽出物を合わせてブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を真空中で濃縮して黄色の残渣を得、これを、６０〜１００％の酢酸エチルヘプタン溶液を溶離液とするシリカゲルでのカラムクロマトグラフィーによって精製した。表題化合物と出発材料の５−（６−クロロ−５−メチルピリミジン−４−イル）−１−メチル−１，４，５，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾールの混合物を白色の固体（１．２０ｇ）として単離し、それ以上精製せずに後続の反応で使用した。
同じ条件下で進めた別個の反応からの１回分の未精製（３，４−シス）−３−フルオロ−４−｛［５−メチル−６−（１−メチル−４，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ）−イル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルを、ＨＰＬＣによって精製した。未精製サンプル（９．５ｍｇ）をジメチルスルホキシド（１ｍＬ）に溶解させ、Ｗａｔｅｒｓ ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８ １９×１００ｍｍ、０．００５ｍｍカラムでの分取逆相ＨＰＬＣによって、８０％の水／アセトニトリル（０．０３％の水酸化アンモニウム改質剤）から８．５分で０％の水／アセトニトリルへの線形勾配、続いて０％の水／アセトニトリルで１．５分間、流量：２５ｍＬ／分で溶離を行って精製した。そうして表題化合物（５ｍｇ）が得られた。分析ＬＣＭＳ：保持時間２．８１分（Ｗａｔｅｒｓ ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８ ４．６×５０ｍｍ、０．００５ｍｍカラム、４．０分かけて９０％の水／アセトニトリルから５％の水／アセトニトリルへの線形勾配、続いて５％の水／アセトニトリルで１分間、０．０３％の水酸化アンモニウム改質剤、流量：２．０ｍＬ／分）、LCMS (ES+) 433.2 (M+1).
ｃ．５−（６−｛［（３，４−シス）−３−フルオロピペリジン−４−イル］オキシ｝−５−メチルピリミジン−４−イル）−１−メチル−１，４，５，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール（ラセミ体）
Figure 2012526097
 上で調整した未精製の（３，４−シス）−３−フルオロ−４−｛［５−メチル−６−（１−メチル−４，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ）−イル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１．２０ｇ）をジクロロメタン（１２ｍＬ）に溶解させ、この溶液にトリフルオロ酢酸（５ｍＬ）を加えた。反応液を室温で１時間撹拌した。真空中で溶媒を除去し、残渣を水（５０ｍＬ）および１Ｎ塩酸水溶液（１０ｍＬ）に溶解させた。混合物をジクロロメタン（１０×３０ｍＬ）で抽出した。次いで１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（２０ｍＬ）を加えて水層がｐＨ１２になるようにし、ジクロロメタン（４０ｍＬ）で３回抽出した。有機抽出物を合わせてブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を減圧下で濃縮して、５−（６−｛［（３，４−シス）−３−フルオロピペリジン−４−イル］オキシ｝−５−メチルピリミジン−４−イル）−１−メチル−１，４，５，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール（０．７２ｇ、２ステップで６０％）を白色の固体として得、これをさらに精製することなく使用した。
1H NMR (500 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 1.84 - 2.08 (m,
2 H) 2.33 (s, 3 H) 2.69 - 2.84 (m, 1 H) 2.83 - 3.01 (m, 1 H) 3.16 (d, J=13.66
Hz, 1 H) 3.27 - 3.44 (m, 1 H) 3.86 (s, 3 H) 4.78-4.91 (m, 1 H) 4.86 (d, J=1.95
Hz, 2 H) 4.88 (d, J=1.95 Hz, 2 H) 5.21 - 5.32 (m, 1 H) 7.26 (s, 1 H) 8.18 (s, 1
H); LCMS (ES+) 333.4 (M+1).
ラセミ体の（３，４−シス）−３−フルオロ−４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルは、以下のようにも調製した。
Ｂｉｏｔａｇｅ Ａｔｌａｎｔｉｓ反応器に、３−フルオロピリジン−４−オール（２．０ｇ、１７．７ｍｍｏｌ）、ヘキサメチルジシラザン（３．７ｍＬ、１７．７ｍｍｏｌ）、および２０ｍＬのテトラヒドロフランを加えた。反応器を窒素ガス（４×）でパージし、５０ｐｓｉに加圧した後、ガス抜きした。混合物を８０℃に加熱しながら１０００ｒｐｍで撹拌した。混合物を８０℃で１時間加熱した後、混合物を室温に冷却した。二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（７．７ｇ、３５．４ミリモル）およびルテニウム（４００ｍｇ、５％炭素担持、１９８マイクロモル、ＪＭ ＵＫ−３５）を加えた。反応器を窒素ガス（４×）、次いで水素ガス（４×）でパージした。混合物を１０５℃に加熱し、水素ガスで２４時間２００ｐｓｉに加圧した。混合物を３０℃に冷却し、窒素ガス（４×）でパージした。混合物を濾過し、テトラヒドロフランで洗浄した。濾液をＧＣＭＳ分析にかけると、８９％の３−フルオロ−４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルが示された。
調製例２４：４−ニトロフェニル炭酸１−メチルシクロプロピル
Figure 2012526097
 ステップＡ）１−メチルシクロプロパノール
１Ｌのフラスコに、チタンメトキシド（１００ｇ）、シクロヘキサノール（２３２ｇ）、およびトルエン（４６１ｍＬ）を投入した。フラスコにＤｅａｎ−Ｓｔａｒｋトラップおよび冷却器を備え付けた。メタノールが除去されるまで混合物を１４０℃で加熱した。１８０℃でトルエンを除去した。トルエンをさらに加え、この過程を２回繰り返した。すべてのトルエンを除去した後、フラスコを高真空中で乾燥させた。フラスコにジエチルエーテル（５８０ｍＬ）を加えて、１Ｍジエチルエーテル溶液を調製した。５Ｌの３口フラスコにオーバーヘッド撹拌子、不活性ガス導入口、および均圧添加漏斗を備え付けた。フラスコを窒素ガスでフラッシュし、酢酸メチル（６０．１ｍＬ、７５６ｍｍｏｌ）、チタンシクロヘキシルオキシド（１Ｍエーテル溶液７５．６ｍＬ）、およびジエチルエーテル（１５００ｍＬ）を投入した。反応フラスコを室温の水浴に浸した状態で溶液を撹拌した。添加漏斗に３Ｍの臭化エチルマグネシウム溶液（５５４ｍＬ、１．６６モル）を投入した。グリニャール試薬を室温で３時間かけて滴下した。混合物が淡黄色の溶液になり、次いで徐々に沈殿が生成し、最終的に濃い緑色／褐色／黒色の混合物に変わった。さらに１５分撹拌した後、グリニャールを加えたのに続き、混合物を、１０％濃硫酸を１Ｌの水に混ぜた混合物中に慎重に注いだ。得られる混合物を、すべての固体が溶解するまで撹拌した。水層を分離し、ジエチルエーテル２×５００ｍＬで抽出した。有機抽出物を合わせて水、ブラインで順次洗浄し、炭酸カリウム（５００ｇ）で３０分間乾燥させ、濾過し、濾液を真空中で濃縮して油状物とした。炭酸水素ナトリウム（２００ｍｇ）を加え、未精製材料を蒸留し、１００℃付近で沸騰する画分を収集して、少量の不純物としてメチルエチルケトンおよび２−ブタノールを伴う表題化合物（２３グラム）を得た。1H NMR (500 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 0.45 (見かけt, J=6.59
Hz, 2 H), 0.77 (見かけt, J=5.61
Hz, 2 H), 1.46 (s, 3 H).表題化合物の調製は、ＷＯ０９１０５７１７にも記載されている。
ステップＢ）４−ニトロフェニル炭酸１−メチルシクロプロピル
１−メチルシクロプロパノール（１０ｇ、１３７ｍｍｏｌ）、４−ニトロフェヒルクロロホルメート（３２ｇ、１５２ｍｍｏｌ）、および数片の結晶の４−ジメチルアミノピリジン（１５０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（４６２ｍＬ）に溶かした溶液を、０℃に冷却した。トリエチルアミン（３６．５ｇ、３６１ｍｍｏｌ）を滴下した。１０分後、氷浴を取り外し、反応液を室温で１４時間撹拌した。反応混合物を飽和した炭酸ナトリウム水溶液で２回洗浄した。水相をジクロロメタンで抽出した。有機抽出物を合わせて水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濾液を真空中で濃縮した。残渣を、酢酸エチルヘプタン溶液からなる勾配混合物（最初の１０分間でヘプタンに対して０〜５％の酢酸エチル、次いで５％の酢酸エチルの定組成）を溶離液とするフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、２０．８ｇの所望の炭酸エステルを透明な油状物として得た。この油状物は静置すると凝固した。
1H NMR
(500 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 0.77 (見かけt, J=6.59 Hz, 2 H), 1.09 (見かけt, J=7.07 Hz, 2 H), 1.67 (s, 3 H), 7.40 (見かけdt, J=9.27, 3.17 Hz, 2 H), 8.29 (見かけdt, J=9.27, 3.17 Hz, 2 H).
別法として、１−メチルシクロプロパノールは、以下のように調製することもできる。
１−メチルシクロプロパノール
２０００ｍＬの４口フラスコに機械撹拌子、不活性ガス導入口、温度計、および２つの均圧添加漏斗を備え付けた。フラスコを窒素でフラッシュし、４９０ｍＬのジエチルエーテルに続いて、１８．２ｍＬ（３０ｍｍｏｌ）のチタンテトラ（２−エチルヘキシルオキシド）を投入した。一方の添加漏斗には、２８．６ｍＬ（３６０ｍｍｏｌ）の酢酸メチルをエーテルで１２０ｍＬに希釈して調製した溶液を投入した。第二の添加漏斗には、３Ｍの臭化エチルマグネシウムエーテル溶液２００ｍＬを投入した。反応フラスコを氷水浴で冷却して、内部温度を１０℃以下に保った。酢酸メチル溶液４０ミリリットルをフラスコに加えた。次いで添加漏斗から、毎秒約２滴、かつ毎分２ｍＬ以下の速度でグリニャール試薬を滴下した。最初の４０ｍＬのグリニャール試薬を加えた後、別の２０ｍＬ分の酢酸メチルエーテル溶液を加えた。２番目の４０ｍＬのグリニャール試薬を加えた後、別の２０ｍＬ分の酢酸メチルジエチルエーテル溶液を加えた。３番目の４０ｍＬのグリニャール試薬を加えた後、別の２０ｍＬ分の酢酸メチルエーテル溶液を加えた。４番目の４０ｍＬのグリニャール試薬を加えた後、最後の２０ｍＬ分の酢酸メチルエーテル溶液を加えた。グリニャール試薬を加え終えたのに続いて、混合物をさらに１５分間撹拌した。次いで混合物を６６０ｇの氷と６０ｍＬの濃硫酸の混合物中にすばやく撹拌しながら注いで、すべての固体を溶解させた。相を分離し、水相を５０ｍＬのジエチルエーテルで再び抽出した。エーテル抽出物を合わせて１５ｍＬの１０％炭酸ナトリウム水溶液、１５ｍＬのブラインで洗浄し、撹拌しながら３０グラムの硫酸マグネシウムで１時間乾燥させた。次いでエーテル溶液を濾過した。トリ−ｎ−ブチルアミン（１４．３ｍＬ、６０ｍｍｏｌ）およびメシチレン（１０ｍＬ）を加えた。２．５ｃｍ×３０ｃｍジャケット付きＶｉｇｒｅｕｘカラムを使用して大気圧で蒸留することにより、ジエチルエーテルの大部分を除去した。残存する液体を、円滑に移すために２回分の１０ｍＬのヘキサンを使用して、より小さい蒸留フラスコに移した。２ｃｍ×２０ｃｍジャケット付きＶｉｇｒｅｕｘカラムを用いた大気圧での蒸留を続けた。９８〜１０５℃で蒸留される液体を収集して、１４ｇの表題化合物を無色の液体として得た。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 0.42 - 0.48 (m, 2 H), 0.74 - 0.80 (m, 2 H), 1.45 (s, 3 H), 1.86
(br. s., 1 H).
調製例２５：４−ニトロフェニル炭酸１−メチルシクロブチル
Figure 2012526097
 ステップＡ：１−メチルシクロブタノール
臭化マグネシウムエーテル錯塩（４．２４ｇ、１６．４ｍｍｏｌ）をジエチルエーテル（７１ｍＬ）に溶かした−７８℃の溶液に、メチルリチウム（９．８１ｍＬ、１５．７ｍｍｏｌ、１．６Ｍジエチルエーテル溶液）を加えた。混合物を１５分間撹拌し、その後シクロブタノン（１．１ｍＬ、１４ｍｍｏｌ）を滴下した。混合物を−７８℃で２時間撹拌した後、１．０Ｍ塩酸水溶液（１６ｍＬ）で反応を失活させた。混合物を１時間かけて室温に温めた後、１．０Ｍ水酸化ナトリウム水溶液でｐＨを弱アルカリ性にした。水層を分離し、ジエチルエーテル（２×４０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせて水（５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を真空中で濃縮して１−メチルシクロブタノールを得、これを精製せずに後続のステップで使用した。
ステップＢ：４−ニトロフェニル炭酸１−メチルシクロブチル
未精製の１−メチルシクロブタノール（１．２０ｇ、１３．９ｍｍｏｌ）およびピリジン（１．３４ｍＬ、１６．７ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（４６ｍＬ）に溶かした撹拌した溶液に、カルボノクロリド酸４−ニトロフェニル（３．３７ｇ、１６．７ｍｍｏｌ）を０℃で１０分かけて滴下した。混合物を３時間かけて室温に温めた。水で反応を失活させ、水層をジクロロメタン（３×）で抽出した。有機層を合わせて硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を真空中で濃縮した。未精製残渣をＩＳＣＯ ＭＰＬＣ（０〜２０％の酢酸エチルヘプタン溶液）によって精製して、４−ニトロフェニル炭酸１−メチルシクロブチル（１．６７ｇ、２ステップで４８％）を透明な油状物として得た。1H NMR (500 MHz, 重水素化クロロホルム): δ 8.29 (m, 2 H), 7.40 (m, 2 H), 2.53-2.44 (m, 2 H), 2.26-2.19 (m, 2
H), 1.96-1.86 (m, 1 H), 1.77-1.67 (m, 1 H), 1.67 (s, 3 H).
調製例２６：４−ニトロフェニル炭酸１−エチルシクロプロピル
Figure 2012526097
 ステップＡ：１−エチルシクロプロパノール
クロロヨードメタン（１１．６ｇ、６６ｍｍｏｌ）、塩化プロピオニル（２．７８ｇ、３０ｍｍｏｌ）、および臭化リチウム（５．７９ｇ、６６ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１２０ｍＬ）に溶かした撹拌した溶液に、窒素雰囲気中にて、メチルリチウムの溶液（１．６Ｍジエチルエーテル溶液、４１．２ｍＬ、６６ｍｍｏｌ）を−７８℃（浴温度）で２０分かけて加えた。反応混合物を−７８℃で３時間撹拌した。次いでリチウム粉末（５．９３ｇ、２７０ｍｍｏｌ）を慎重に加え、混合物を１６時間撹拌し、温度をゆっくりと室温に上げた。次いで混合物を０℃に冷却し、水（１４５ｍＬ）および濃塩酸（３０ｍＬ）で希釈した。水性混合物をジエチルエーテル（３×２００ｍＬ）で抽出した。有機抽出物を合わせて硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濾液を濃縮して、１−エチルシクロプロパノールを黄色の油状物（２．５ｇ）として得た。この材料をそれ以上精製せずに次のステップで使用した。1H NMR (500 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 0.37 - 0.43 (m, 2 H) 0.65 - 0.73 (m, 2 H) 1.01 (t, J=7.44 Hz, 3 H)
1.56 (q, J=7.48 Hz, 2 H).
ステップＢ：４−ニトロフェニル炭酸１−エチルシクロプロピル
未精製の１−エチルシクロプロパノール（１．０ｇ、１１．６ｍｍｏｌ）およびピリジン（１．１２ｍＬ、１３．９ｍｍｏｌ）を含有する０℃のジクロロメタン（５ｍＬ）に、クロロホルメート４−ニトロフェニル（２．８１ｇ、１３．９ｍｍｏｌ）を１０分かけて滴下した。氷浴を温め、混合物を室温で１８時間撹拌した。水で反応を失活させ、混合物をジクロロメタン（３×）で抽出した。有機抽出物を合わせて硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濾液を真空中で濃縮した。残渣を、酢酸エチルとヘプタンからなる５％〜２５％の勾配混合物を溶離液とする４０ｇシリカゲルカラムでのクロマトグラフィーによって精製して、黄色の油状物（１．０ｇ）を得た。この材料をＨＰＬＣ（条件：カラムＣｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ−Ｈ、溶媒メタノール、流量１０．０ｍＬ／分、波長２１０ｎｍ）によってさらに精製して、４５０ｍｇの４−ニトロフェニル炭酸１−エチルシクロプロピルを淡黄色の油状物として得た。1H NMR (500 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 0.75 - 0.81 (m, 2 H) 1.01 - 1.09 (m, 5 H) 1.92 (q, J=7.48 Hz, 2 H)
7.36 - 7.42 (m, 2 H) 8.24 - 8.30 (m, 2 H).
調製例２７：４−［（６−クロロ−５−メチルピリミジン−４−イル）オキシ］ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
Figure 2012526097
 ２０ｍＬのＢｉｏｔａｇｅ（商標）マイクロ波対応管を窒素パージし、４，６−ジクロロ−５−メチルピリミジン（０．６００ｇ、２．９８ｍｍｏｌ）および４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（５３４ｍｇ、３．２８ｍｍｏｌ）を投入した。１，４−ジオキサン（１４．９ｍＬ）を加え、混合物を１００℃に加熱した。混合物にナトリウムビス（トリメチルシリル）アミド（３．５８ｍＬ、３．５８ｍｍｏｌ、１．０Ｍテトラヒドロフラン溶液）を１０分かけて滴下した。混合物を６０分間撹拌し、次いで室温で１２時間撹拌した。水で反応を失活させ、水層を酢酸エチルで３回抽出した。有機抽出物を合わせて硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を真空中で濃縮した。未精製材料をシリカゲルクロマトグラフィー（４０ｇのＳｉＯ２カラム、０〜５０％の酢酸エチルヘプタン溶液の勾配）によって精製して、表題化合物（８４２ｍｇ、８６％）を得た。
調製例２８：（３Ｒ，４Ｓ）−４−［（６−クロロ−５−メチルピリミジン−４−イル）オキシ］−３−フルオロピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ラセミ体）
Figure 2012526097
 （３，４−シス）−３−フルオロ−４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ラセミ体）（１．０ｇ、４．６ｍｍｏｌ）および４，６−ジクロロ−５−メチルピリミジン（８１８ｍｇ、５．０２ｍｍｏｌ）を無水テトラヒドロフラン（２３ｍＬ）に溶かした溶液に、水素化ナトリウム（２０１ｍｇ、５．０２ｍｍｏｌ、６０％鉱油分散液）を０℃にて２回で加えた。１８時間後、反応混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液で失活させ、水で希釈した。得られる混合物を酢酸エチルで３回抽出した。有機層を合わせて硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を減圧下で濃縮して、表題化合物を淡黄色の油状物（１．５６ｇ、９９％）として得た。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 1.46 (s, 9 H), 1.84 - 1.91 (m, 1 H), 2.04 - 2.17 (m, 1 H), 2.24 (s,
3 H), 3.09 - 3.22 (m, 1 H), 3.29 - 3.43 (m, 1 H), 3.78 - 4.01 (m, 1 H), 4.09 -
4.20 (m, 1 H), 4.74 - 4.93 (m, 1 H), 5.31 - 5.43 (m, 1 H), 8.36 (s, 1 H). LCMS:
(ES+): 346.4 (M+1).
調製例２９：４−クロロ−６−｛［（３Ｒ，４Ｓ）−３−フルオロピペリジン−４−イル］オキシ｝−５−メチルピリミジン
Figure 2012526097
 （３Ｒ，４Ｓ）−４−［（６−クロロ−５−メチルピリミジン−４−イル）オキシ］−３−フルオロピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１．４ｇ、４．０ｍｍｏｌ）の無水１，２−ジクロロエタン（２０ｍＬ）溶液に、窒素流を吹きかけながら、トリフルオロ酢酸（４．０ｍＬ、５２．０ｍｍｏｌ）を室温で加えた。２時間後、減圧下で揮発性物質を除去し、加熱して無色の残渣を得た。残渣をジクロロメタンに溶かし、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で塩基性化した。次いで混合物をジクロロメタンで３回抽出した。有機層を合わせて硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、生成物をオフホワイトの固体（９３０ｍｇ、９３％）として得た。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 1.88 - 2.07 (m, 2 H) 2.25 (s, 3 H) 2.73 - 2.82 (m, 1 H) 2.86 - 2.99
(m, 1 H) 3.12 - 3.20 (m, 1 H) 3.31 - 3.39 (m, 1 H) 4.76 - 4.93 (m, 1 H) 5.24 -
5.37 (m, 1 H) 8.36 (s, 1 H) LCMS: (ES+): 246.2 (M+1).
調製例３０：（３Ｒ，４Ｓ）−４−［（６−クロロ−５−メチルピリミジン−４−イル）オキシ］−３−フルオロピペリジン−１−カルボン酸１−メチルシクロプロピル
Figure 2012526097
 ４−クロロ−６−｛［（３Ｒ，４Ｓ）−３−フルオロピペリジン−４−イル］オキシ｝−５−メチルピリミジン（９２５ｍｇ、３．７６ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１．５７ｍＬ、１１．３ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２０．０ｍＬ）に溶かした溶液に、４−ニトロフェニル炭酸１−メチルシクロプロピル（１．７９ｍｇ、７．５３ｍｍｏｌ）を室温で加えた。７２時間後、水で反応を失活させ、ジクロロメタンで３回抽出した。有機層を合わせて飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で黄色が消えるまで継続的に洗浄した。次いで有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。得られる未精製残渣をフラッシュクロマトグラフィー（シリカ：１０〜５０％の酢酸エチル：ヘプタン）によって精製して、８３０ｍｇ（６４％）の所望の生成物を白色の固体として得た。1H NMR (500 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 0.63 - 0.68 (m, 2 H), 0.87 - 0.94 (m, 2 H), 1.60 (s, 3 H), 1.86 -
1.97 (m, 1 H), 2.08 - 2.19 (m, 1 H), 2.27 (s, 3 H), 3.11 - 3.27 (m, 1 H) 3.27 -
3.49 (m, 1 H), 3.78 - 4.11 (m, 1 H), 4.11 - 4.27 (m, 1 H), 4.77 - 4.96 (m, 1
H), 5.33 - 5.46 (m, 1 H), 8.40 (s, 1 H) LCMS: (ES+): 344.4 (M+1).
調製例３１：６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリダジン
Figure 2012526097
 ステップＡ：３−オキソ−４，４ａ，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリダジン−５（３Ｈ）−カルボン酸ベンジル
２−（２−エトキシ−２−オキソエチル）−３−オキソピロリジン−１−カルボン酸ベンジル（Ｓｙｎｌｅｔｔ １９９８、１３７８に記載のとおりに調製）（６．４７ｇ、２１．２ｍｍｏｌ）をエタノール（６６ｍＬ）、酢酸（１１ｍＬ）、およびヒドラジン（０．７３ｍＬ、２３．３ｍｍｏｌ）に溶かした溶液を、６時間還流加熱した（１００℃）。混合物を室温に冷却し、真空中で濃縮して、濃褐色の粘稠な油状物８．１３ｇを得た。この未精製材料を、酢酸エチルとヘプタンからなる４０％〜９０％の酢酸エチルの勾配混合物を溶離液とするシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、３−オキソ−４，４ａ，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリダジン−５（３Ｈ）−カルボン酸ベンジル（３．７０ｇ、６４％）を淡い黄褐色の泡沫として得た。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 2.29 (t, J=15.34 Hz, 1 H) 2.65 - 2.80 (m, 1 H) 2.80 - 2.97 (m, 1 H)
3.05 - 3.52 (m, 1 H) 3.65 (br. d, J=6.60 Hz, 1 H) 4.04 (br. s., 1 H) 4.49 (br.
s., 1 H) 5.08 - 5.27 (m, 2 H) 7.38 (s, 4 H) 8.27 (br. s., 1 H).
ステップＢ：３−オキソ−６，７−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリダジン−５（３Ｈ）−カルボン酸ベンジル
３−オキソ−４，４ａ，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリダジン−５（３Ｈ）−カルボン酸ベンジル（３．６５ｇ、１３．３ｍｍｏｌ）および塩化銅（ＩＩ）（３．５９ｇ、２６．７ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（５３ｍＬ）に混ぜた混合物を１時間１００℃に加熱した。混合物を室温に冷却し、次いで１５０ｍＬの水中に注いだ。水性混合物を１５分間撹拌し、Ｐａｌｌ ＧＨＰ膜（０．４５マイクロメートル）での濾過によって固体を収集し、真空中で乾燥させて、３−オキソ−６，７−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリダジン−５（３Ｈ）−カルボン酸ベンジル（２．０６ｇ、５７％）をオフホワイトの固体として得た。この材料を精製せずに後続のステップで使用した。1H NMR (400 MHz, 重水素化メタノール) δ 3.04 (t, J=8.21 Hz, 2 H) 4.07 (t, J=8.11 Hz, 2 H) 5.29 (s, 2 H)
6.81 (br. s, 1 H) 7.19 - 7.60 (m, 5 H).
ステップＣ：３−クロロ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリダジン−５−カルボン酸ベンジル
３−オキソ−６，７−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリダジン−５（３Ｈ）−カルボン酸ベンジル（２．０６ｇ、２．４７ｍｍｏｌ）とオキシ塩化リン（２２．５ｍＬ）の混合物を１１０℃で２０分間加熱した。真空中で過剰のオキシ塩化リンを除去し、濃い黒みがかった青色の残渣を７０ｍＬの水で希釈し、ジクロロメタン（３×２５ｍＬ）で抽出した。有機抽出物を合わせて乾燥させ（硫酸ナトリウム）、濾過し、濾液を真空中で濃縮した。残渣（濃い青色の固体２．２２ｇ）を、酢酸エチルとヘプタンからなる２５％〜７０％の酢酸エチルの勾配混合物を溶離液とするシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、３−クロロ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリダジン−５−カルボン酸ベンジル（１．８３８５ｇ、８４％）を黄褐色の固体として得た。MS:ES+: 290.0.1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 3.43 (t, J=8.79
Hz, 2 H) 4.17 (t, J=8.70 Hz, 2 H) 5.25 - 5.40 (m, 2 H) 7.35 - 7.47 (m, 6 H).
ステップＤ：６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリダジン
３−クロロ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリダジン−５−カルボン酸ベンジル（３２０ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）、Ｐｄ／Ｃ（１０重量％、５９ｍｇ）、およびエタノール（１４ｍＬ）からなる混合物を、水素雰囲気中（５０ｐｓｉ）にて室温で１６時間振盪した。Ｐｄ／Ｃ触媒を濾過によって除去し、濾液を真空中で濃縮して、１７５ｍｇの黄褐色の固体を得た。この固体をメタノール（１０ｍＬ）および水（１ｍＬ）に溶解させ、炭酸水素カリウム（２２０ｍｇ、２．２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を１時間撹拌した後、濾過によって固体を除去し、濾液を真空中で濃縮した。残渣をメタノールに溶解させ、塩基性アルミナ（２ｇ）と共に３０分間撹拌し、真空中で溶媒を除去した。この固体を塩基性アルミナのカラムの頂上に置き、メタノールとジクロロメタンからなる０〜５％のメタノールの勾配混合物で溶離を行って、１１２ｍｇ（８４％）の６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリダジンを黄色の固体として得た。1H NMR (400 MHz, 重水素化メタノール) δ 3.23 (t, J=8.50 Hz, 2 H) 3.71 (t, J=8.50 Hz, 2 H) 6.40 (d, J=5.86
Hz, 1 H) 8.24 (d, J=5.86 Hz, 1 H).
調製例３２：５−（６−クロロ−５−メチルピリミジン−４−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリダジン
Figure 2012526097
 ４，６−ジクロロ−５−メチルピリミジン（１９ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）、６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリダジン（１４ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）、および炭酸セシウム（３８ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．２ｍＬ）に混ぜた混合物を室温で４０時間撹拌した。この反応混合物を、４，６−ジクロロ−５−メチルピリミジン（８４ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）、６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリダジン（７４ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）、および炭酸セシウム（１７２ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）を含有するＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）を使用して実施した実験の反応混合物を室温で１５時間撹拌しておいたものと合わせた。合わせた混合物を水（２５ｍＬ）で希釈し、酢酸エチルで３回抽出した。有機抽出物を合わせてブラインで洗浄し、乾燥させ（硫酸ナトリウム）、濾過し、濾液を真空中で濃縮した。残渣を、メタノールとジクロロメタンからなる０〜５％のメタノールの勾配混合物を溶離液とするシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、７９ｍｇ（５４％）の５−（６−クロロ−５−メチルピリミジン−４−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリダジンを黄褐色の固体として得た。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 2.32 (s, 3 H) 3.55 (t, J=8.39 Hz, 2 H) 4.29 (t, J=8.39 Hz, 2 H)
6.72 (d, J=5.66 Hz, 1 H) 8.63 (s, 1 H) 8.77 (d, J=5.66 Hz, 1 H).
調製例３３：４−（６−クロロピリミジン−４−イルオキシ）ピペリジン−１−カルボン酸１−メチルシクロプロピル
Figure 2012526097
 ４−（６−クロロピリミジン−４−イルオキシ）ピペリジン−１−カルボン酸１−メチルシクロプロピルは、４−［（６−クロロ−ピリミジン−４−イル）オキシ］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルと同様にして調製した。1H NMR (500 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 0.51 - 0.74 (m, 2 H) 0.77 - 1.00 (m, 2 H) 1.57 (s, 3 H) 1.74 (br.
s., 2 H) 1.98 (br. s., 2 H) 3.31 (br. s., 2 H) 3.78 (br. s, 2 H) 5.28 - 5.37
(m, 1 H) 6.76 (s, 1 H) 8.55 (s, 1 H).
調製例３４：（３Ｒ，４Ｓ）−４−（６−クロロピリミジン−４−イルオキシ）−３−フルオロピペリジン−１−カルボン酸１−メチルシクロプロピル（ラセミ体）
Figure 2012526097
 （３Ｒ，４Ｓ）−４−（６−クロロピリミジン−４−イルオキシ）−３−フルオロピペリジン−１−カルボン酸１−メチルシクロプロピル（ラセミ体）は、４−［（６−クロロ−ピリミジン−４−イル）オキシ］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルと同様にして調製した。1H NMR (重水素化クロロホルム) δ 8.52 (d, J = 0.8
Hz, 1H), 6.83 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 5.20 - 5.52 (m, 1H), 4.68 - 5.02 (m, 1H),
3.72 - 4.31 (m, 2H), 2.93 - 3.44 (m, 2H), 1.97 - 2.22 (m, 1H), 1.88 (br. s.,
1H), 1.54 (s, 3H), 0.75 - 0.97 (m, 2H), 0.52 - 0.70 (m, 2H).
調製例３５：２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−５−カルボン酸メチルおよび５−メチル２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−１，５−ジカルボン酸１−ｔｅｒｔ−ブチル
Figure 2012526097
 １Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−５−カルボン酸メチル（Ａｄｅｓｉｓ Ｉｎｃ．、デラウェア州Ｎｅｗ Ｃａｓｔｌｅ）（１．０ｇ、５．６８ｍｍｏｌ）および二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１．７５ｇ、７．９５ｍｍｏｌ）をメタノール（３０ｍＬ）に溶かした溶液を、１０％Ｐｄ／Ｃカートリッジを備え付けたＨ−ｃｕｂｅ水素化装置に、８０℃、８０バールにて１．０ｍＬ／分で通した。次いで流出液をＨ−ｃｕｂｅ装置にさらに３回通した。未精製材料を濃縮し、残渣を、ヘプタンに対して５０％〜９０％の酢酸エチルからなる勾配混合物を溶離液とするシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、２３０ｍｇの２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−５−カルボン酸メチルおよび３００ｍｇの５−メチル２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−１，５−ジカルボン酸１−ｔｅｒｔ−ブチルを得た。
２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−５−カルボン酸メチル：1H NMR (重水素化クロロホルム) δ 7.77 (d, J = 8.2
Hz, 1H), 6.67 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 4.42 (br. s., 1H), 3.88 (s, 3H), 3.69 (td, J
= 8.6, 1.5 Hz, 2H), 3.17 (t, J = 8.7 Hz, 2H).
５−メチル２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−１，５−ジカルボン酸１−ｔｅｒｔ−ブチル：1H NMR (重水素化クロロホルム) δ 7.92 (d, J = 8.2
Hz, 2H), 4.00 (t, J = 8.9 Hz, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.25 (t, J = 1.0 Hz, 2H), 1.52
(br. s., 9H).
調製例３６：Ｎ，Ｎ−ジメチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−５−カルボキサミド
Figure 2012526097
 ステップＡ：１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−５−カルボン酸
５−メチル２，３−ジヒドロピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−１，５−ジカルボン酸１−ｔｅｒｔ−ブチル（２５０ｍｇ、０．８９８ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフランと水からなる溶液（３：１、４ｍＬ）に溶かした撹拌した溶液に、水酸化リチウム一水和物（５９ｍｇ、１．３５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１８時間撹拌した後、溶液がほぼｐＨ２になるまで１Ｎ塩酸水溶液を加えた。混合物を酢酸エチルで２回抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濾液を濃縮して、１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−５−カルボン酸をピンク色の固体（２４０ｍｇ）として得た。この材料を精製せずに次のステップで使用した。1H NMR (重水素化クロロホルム) δ 7.91 - 8.20 (m,
2H), 4.01 - 4.10 (m, 2H), 3.25 (t, J = 1.0 Hz, 2H), 1.48 - 1.67 (m, 9H).
ステップＢ：５−（ジメチルカルバモイル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−５−カルボン酸（１２０ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（３ｍＬ）に溶かした撹拌した溶液に、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩（１３１ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ）および１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（１０４ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ）を加えた。得られる混合物を５分間撹拌した後、ジメチルアミン（２Ｍテトラヒドロフラン溶液、０．９１ｍＬ、１．８２ｍｍｏｌ）を加えた。得られる溶液を室温で１８時間、５０℃で６時間撹拌した。次いで混合物を室温に冷却し、ジクロロメタンで希釈した。有機混合物を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液およびブラインで洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を真空中で濃縮した。残渣を、ジクロロメタンとメタノールからなる０％〜５％のメタノールの勾配混合物を溶離液とするシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、５−（ジメチルカルバモイル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルを白色の固体（６０ｍｇ）として得た。MS (m/z): 292.1 (M+1). 1H NMR (重水素化クロロホルム) δ 7.49 - 8.12 (m,
1H), 7.41 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.01 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 3.21 (t, J = 8.9 Hz,
2H), 3.08 (br. s., 6H), 1.54 (br. s., 9H).
ステップＣ：Ｎ，Ｎ−ジメチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−５−カルボキサミド
５−（ジメチルカルバモイル）−２，３−ジヒドロピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（６０ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（０．５ｍＬ）に溶かした撹拌した溶液に、トリフルオロ酢酸（０．５ｍＬ）を加えた。得られる溶液を室温で２時間撹拌した。反応混合物を真空中で濃縮し、残渣を高真空中で乾燥させて、Ｎ，Ｎ−ジメチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−５−カルボキサミドをピンク色の固体（３９ｍｇ）として得た。この材料を精製せずに使用した。
（実施例１）
９−アンチ−（｛６−［５−（メチルスルホニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ピリミジン−４−イル｝オキシ）−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸イソプロピル
Figure 2012526097
 ９−アンチ−ヒドロキシ−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸イソプロピル（３０ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）および１−（６−クロロピリミジン−４−イル）−５−（メチルスルホニル）インドリン（３４ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）を無水１，４−ジオキサン（１ｍＬ）に溶解させた。褐色の混合物を１０５℃で加熱し、１Ｍのナトリウムビス（トリメチルシリル）アミドテトラヒドロフラン溶液（０．１３ｍＬ、０．１３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を１０５℃で１．５時間加熱し、次いで混合物を室温に冷却した。１０％リン酸水溶液（０．５ｍＬ）で反応を失活させた。減圧下で有機溶媒を濃縮し、得られる残渣をクロロホルムと水とに分配した。層を分離し、有機層を水およびブラインで順次洗浄し、次いで硫酸マグネシウムで乾燥させた。混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮して褐色の泡沫を得た。未精製材料をカラムクロマトグラフィー（０〜１０％のアセトンジクロロメタン溶液）によって精製すると、９−アンチ−（｛６−［５−（メチルスルホニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ピリミジン−４−イル｝オキシ）−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸イソプロピルが白色の固体（３０ｍｇ、５４％）として得られた。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 1.25 (d, J=5.2 Hz, 3 H), 1.26 (d, J=5.2 Hz, 3 H), 2.01 - 2.06 (m, 2
H), 3.04 (s, 3 H), 3.32 (m, 2 H), 3.41 (d, J=13.4 Hz, 1 H), 3.48 (d, J=13.4 Hz,
1 H), 3.85 (m, 2 H), 4.06 - 4.20 (m, 5 H), 4.29 (d, J=13.4 Hz, 1 H), 4.97 (m, 1
H), 5.41 (br. s., 1 H), 6.05 (s, 1 H), 7.72 (s, 1 H), 7.79 (d, J=8.4 Hz 1 H),
8.50 (s, 1 H), 8.59 (d, J=8.4 Hz, 1 H); LCMS (ES +) 503.3 (M+1).
（実施例２）
９−シン−（｛６−［５−（メチルスルホニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ピリミジン−４−イル｝オキシ）−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸イソプロピル
Figure 2012526097
 この化合物は、９−シン−ヒドロキシ−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸イソプロピルと１−（６−クロロピリミジン−４−イル）−５−（メチルスルホニル）インドリンから、実施例１について記載したのと同様にして調製した。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（０〜１０％のアセトンジクロロメタン溶液）によって精製して、９−シン−（｛６−［５−（メチルスルホニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ピリミジン−４−イル｝オキシ）−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸イソプロピルを白色の固体（収率２４％）として得た。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 1.27 (d, J=6.1 Hz, 6 H), 1.96 (d, J=18.0Hz, 2 H), 3.05 (s, 3 H),
3.24 (d, , J=13.7 Hz, 1 H), 3.33 (m, 3 H), 3.85 (d, J=11.2 Hz, 1 H), 3.92 (d,
J=11.4 Hz, 1 H), 4.08-4.12 (m, 4 H), 4.47 (d, J=13.9 Hz, 1 H), 4.63 (d, J=13.4
Hz, 1 H), 4.98 (m, 1 H), 5.36 (br. s., 1 H), 6.08 (s, 1 H), 7.73 (s, 1 H), 7.80
(d, J=8.4 Hz, 1 H), 8.51 (s, 1 H), 8.59 (d, J=8.4 Hz, 1 H); LCMS (ES +) 503.2
(M+1).
（実施例３）
４−（｛６−［５−（メチルスルホニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ピリミジン−４−イル｝オキシ）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
Figure 2012526097
 この化合物は、４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルと１−（６−クロロピリミジン−４−イル）−５−（メチルスルホニル）インドリンから、実施例１について記載したのと同様にして調製した。この化合物は、カラムクロマトグラフィー（１：１のジクロロメタンアセトン溶液）によって精製して、濃黄褐色の固体を得、これをメチルエチルケトン中で加熱してさらに精製した。室温に冷却した後、混合物をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルで希釈し、続いて濾過した。収集した材料をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルで洗浄し、次いで真空中で乾燥させて、４−（｛６−［５−（メチルスルホニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ピリミジン−４−イル｝オキシ）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（７．８９ｇ、６０％）を白色の固体として得た。1H NMR (500 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 1.27 (d, J=6.1 Hz, 6 H), 1.70 - 1.80 (m, 2 H), 1.97 - 2.07 (m, 2
H), 3.05 (s, 3 H), 3.28-3.38 (m, 2 H), 3.33 (d, J=8.8 Hz, 2 H), 3.78 - 3.89 (m,
2 H), 4.07 (t, J=8.7 Hz, 2 H), 4.88 - 4.98 (m, 1 H), 5.34 (dd, J=8.0, 3.9 Hz, 1
H), 5.99 (s, 1 H), 7.73 (s, 1 H), 7.79 (dd, J=8.5, 1.7 Hz, 1 H), 8.52 (s, 1 H),
8.58 (d, J=8.5 Hz, 1 H); LCMS (ES+): 461 (M+1).
（実施例４）
９−シン−（｛５−シアノ−６−［５−（メチルスルホニル）−１Ｈ−インドール−１−イル］ピリミジン−４−イル｝オキシ）−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸イソプロピル
Figure 2012526097
 ステップＡ：９−シン−（｛５−シアノ−６−［５−（メチルチオ）−１Ｈ−インドール−１−イル］ピリミジン−４−イル｝オキシ）−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸イソプロピル
Figure 2012526097
 ９−シン−ヒドロキシ−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸イソプロピル（９５ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）を含有するテトラヒドロフラン（１ｍＬ）を、１Ｍのナトリウムビス（トリメチルシリル）アミドテトラヒドロフラン溶液（０．６９ｍＬ、０．４１ｍｍｏｌ）で処理した。反応液を３０分間撹拌し、次いで４−クロロ−６−［５−（メチルチオ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ピリミジン−５−カルボニトリル（５０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（１．５ｍＬ）溶液に滴下した。得られる混合物を７０℃で３０分間撹拌した。反応混合物を室温に冷まし、飽和塩化アンモニウム水溶液を加えて失活させた。反応混合物をジクロロメタンおよび水で希釈した。有機層を分離し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液およびブラインで順次洗浄し、次いで硫酸ナトリウムで乾燥させた。混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（２０〜１００％の酢酸エチルヘプタン溶液）によって精製して、９−シン−（｛５−シアノ−６−［５−（メチルチオ）−１Ｈ−インドール−１−イル］ピリミジン−４−イル｝オキシ）−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸イソプロピルを白色の固体（５０ｍｇ、６１％）として得た。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 8.38 (s, 1 H,), 8.14 (d, 1 H, J=8.6 Hz), 7.17 (d, 1 H, J=1.9 Hz),
7.11 - 7.16 (m, 1 H), 5.47 (t, 1 H, J=3.7 Hz), 4.91 - 5.01 (m, 1 H,), 4.54 (dd,
2 H, J=8.6, 7.9 Hz), 4.35 (d, 1 H, J=14 Hz), 4.21 (br. s., 1 H), 4.18 (s, 1 H),
4.10 - 4.15 (m, 1 H), 3.78 - 3.87 (m, 2 H), 3.53 - 3.61 (m, 1 H), 3.24 (t, 2 H,
J=8.2 Hz), 2.47 (s, 3 H), 2.07 (br. s.,1 H), 1.98 (1 br. s., 1 H), 1.25 (d, 6
H, J=6.8 Hz). LCMS (ES+) = 517.8 (M+Na).
ステップＢ：９−シン−（｛５−シアノ−６−［５−（メチルスルホニル）−１Ｈ−インドール−１−イル］ピリミジン−４−イル｝オキシ）−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸エステル
９−シン−（｛５−シアノ−６−［５−（メチルチオ）−１Ｈ−インドール−１−イル］ピリミジン−４−イル｝オキシ）−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］−ノナン−７−カルボン酸イソプロピル（５０ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１０ｍＬ）溶液に、ｍｅｔａ−クロロペルオキシ安息香酸（６７ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）を１回で加えた。１時間後、３滴のジメチルスルフィドで反応を失活させた。反応混合物をジクロロメタンで希釈し、０．５Ｍ水酸化ナトリウム水溶液で洗浄した。有機層を分離し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。混合物を濾過し、濾液を真空中で濃縮して白色の粉末を得、これをカラムクロマトグラフィー（２０〜９０％の酢酸エチルヘプタン溶液）によって精製して、９−シン−（｛５−シアノ−６−［５−（メチルスルホニル）−１Ｈ−インドール−１−イル］ピリミジン−４−イル｝オキシ）−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸エステルを黄色の固体（３５ｍｇ、６６％）として得た。この材料の一部を、不純な材料のサンプルをジクロロメタンに溶解させ、ヘプタンを加えて生成物を白色の固体として沈殿させることにより、さらに精製した。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 8.47 (s, 1 H), 8.32 (d, 1 H, J=8.6 Hz), 7.72 - 7.86 (m, 2 H), 5.45
(t, 1 H, J=3.5 Hz), 4.87 - 5.05 (m, 1 H), 4.56 - 4.72 (m, 3 H), 4.48 (d, 1 H,
J=14 Hz), 4.07 - 4.27 (m, 2 H), 3.93 (d, 1 H, J=12 Hz), 3.86 (d, 1 H, J=12 Hz),
3.15 - 3.41 (m, 4 H), 3.04 (s, 3 H), 2.00 (br. s., 1 H), 1.94 (br. s., 1 H),
1.25 (d, 6 H, J=7.0Hz): LCMS (ES+) = 528.0 (M+1).
（実施例５）
９−アンチ−（｛５−シアノ−６−［５−（メチルスルホニル）−１Ｈ−インドール−１−イル］ピリミジン−４−イル｝オキシ）−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸イソプロピル
Figure 2012526097
 この化合物は、９−シン−（｛５−シアノ−６−［５−（メチルスルホニル）−１Ｈ−インドール−１−イル］ピリミジン−４−イル｝オキシ）−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸エステルの調製手順と同様の２ステップ手順で調製した。最初のステップでは、９−アンチ−ヒドロキシ−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸エステルを４−クロロ−６−［５−（メチルチオ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ピリミジン−５−カルボニトリルと合わせて、９−アンチ−（｛５−シアノ−６−［５−（メチルチオ）−１Ｈ−インドール−１−イル］ピリミジン−４−イル｝オキシ）−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸イソプロピルを得た。次のステップでは、この中間体を酸化して、９−アンチ−（｛５−シアノ−６−［５−（メチルスルホニル）−１Ｈ−インドール−１−イル］ピリミジン−４−イル｝オキシ）−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸イソプロピルを得、これをカラムクロマトグラフィー（３０％〜１００％の酢酸エチルヘプタン溶液）によって精製して、生成物を白色の固体（４５ｍｇ、８４％）として得た。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 8.47 (s, 1 H) 8.27 - 8.38 (m, 1 H) 7.72 - 7.88 (m, 2 H) 5.51 (t, 1
H, J=3.6 Hz) 4.89 - 5.02 (m, 1 H) 4.63 (t, 2 H, J=8.5 Hz) 4.37 (d, 1 H, J=14
Hz) 4.17 - 4.28 (m, 2 H) 4.14 (d, 1 H, J=11 Hz) 3.77 - 3.88 (m, 2 H) 3.51 -
3.63 (m, 1 H) 3.39 - 3.49 (m, 1 H) 3.34 (t, 2 H, J=8.4 Hz) 3.04 (s, 3 H) 2.07
(br. s., 1 H) 2.00 (br. s., 1 H) 1.25 (d, 6 H, J=6.2 Hz); LCMS (ES+) = 528.0
(M+1).
（実施例６）
４−（｛５−シアノ−６−［５−（メチルスルホニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ピリミジン−４−イル｝オキシ）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
Figure 2012526097
 この化合物は、９−シン−（｛５−シアノ−６−［５−（メチルスルホニル）−１Ｈ−インドール−１−イル］ピリミジン−４−イル｝オキシ）−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸エステルの調製に使用した手順と同様の２ステップ手順で調製した。最初のステップでは、４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルを４−クロロ−６−［５−（メチルチオ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ピリミジン−５−カルボニトリルと合わせて、４−（｛５−シアノ−６−［５−（メチルチオ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ピリミジン−４−イル｝オキシ）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルを得た。次のステップでは、この中間体を酸化して、４−（｛５−シアノ−６−［５−（メチルスルホニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ピリミジン−４−イル｝オキシ）ピペリジン−１−カルボン酸エステルを得、これをカラムクロマトグラフィー（２０〜９０％の酢酸エチルヘプタン溶液）によって精製して、４−（｛５−シアノ−６−［５−（メチルスルホニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ピリミジン−４−イル｝オキシ）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルを固体として得た。この化合物をジクロロメタンとヘプタンからなる溶液から沈殿させることによりさらに精製して、黄色の固体（３０ｍｇ、８２％）を得た。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 8.46 (s, 1 H), 8.29 (d, J=8.60 Hz, 1 H), 7.73 - 7.85 (m, 2 H), 5.40
- 5.54 (m, 1 H), 4.86 - 5.00 (m, 1 H), 4.61 (t, J=8.40 Hz, 2 H), 3.66 - 3.82
(m, 2 H), 3.40 - 3.53 (m, 2 H), 3.33 (t, J=8.40 Hz, 2 H), 3.04 (s, 3 H), 1.92 -
2.09 (m, 2 H), 1.76 - 1.90 (m, 2 H), 1.25 (d, J=6.25 Hz, 6 H); LCMS (ES+):
486.3 (M+1).
（実施例７）
４−（｛５−メトキシ−６−［５−（メチルスルホニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ピリミジン−４−イル｝オキシ）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
Figure 2012526097
 ステップＡ：４−（｛５−メトキシ−６−［５−（メチルチオ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ピリミジン−４−イル｝オキシ）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
Figure 2012526097
 Ｔｅｆｌｏｎセプタムを収容しているキャップで密封したバイアルに、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（４３ｍｇ、０．０４６ｍｍｏｌ）、２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，４’，６’−トリイソプロピルビフェニル（３３ｍｇ、０．０６８ｍｍｏｌ）、ナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（２１ｍｇ、０．２１３ｍｍｏｌ）、４−［（６−クロロ−５−メトキシピリミジン−４−イル）オキシ］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（５０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）、および５−（メチルチオ）インドリン（３０ｍｇ ０．１８２ｍｍｏｌ）を投入した。脱気した（酸素をパージした）トルエン（２ｍＬ）を加え、得られる混合物を１２０℃で１２時間加熱した。得られる混合物を酢酸エチル（３０ｍＬ）で希釈し、水、飽和炭酸水素ナトリウム、およびブラインで順次洗浄した。次いで有機溶液を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を減圧下で濃縮した。未精製材料をカラムクロマトグラフィー（１０〜９０％の酢酸エチルヘプタン溶液）によって精製して、不純な４−（｛５−メトキシ−６−［５−（メチルチオ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ピリミジン−４−イル｝オキシ）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルを固体（５５ｍｇ、７５％）として得、これをそれ以上精製せずに次のステップで使用した。LCMS (ES+): 459.0 (M+1).
ステップＢ：４−（｛５−メトキシ−６−［５−（メチルスルホニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ピリミジン−４−イル｝オキシ）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
この化合物は、４−（｛５−メトキシ−６−［５−（メチルチオ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ピリミジン−４−イル｝オキシ）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルを出発材料として使用し、９−シン−（｛５−シアノ−６−［５−（メチルスルホニル）−１Ｈ−インドール−１−イル］ピリミジン−４−イル｝オキシ）−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸エステル（実施例４、ステップＢ）の調製と同様にして調製した。未精製材料を、カラムクロマトグラフィー（２０〜９０％の酢酸エチルヘプタン溶液）にかけ、引き続き酢酸エチルとヘプタンからなる溶液から沈殿させることにより精製して、４−（｛５−メトキシ−６−［５−（メチルスルホニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ピリミジン−４−イル｝オキシ）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルを白色の固体（２５ｍｇ、４２％）として得た。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 8.21 (1 H, s), 7.65 - 7.73 (3 H, m), 5.31 - 5.42 (1 H, m), 4.86 -
4.97 (1 H, m), 4.32 (2 H, t, J=8.59 Hz), 3.77 - 3.86 (2 H, m), 3.75 (3 H, s),
3.33 - 3.44 (2 H, m), 3.22 (2 H, t, J=8.59 Hz), 3.01 (3 H, s), 1.97 - 2.11 (2
H, m), 1.73 - 1.91 (2 H, m), 1.25 (6 H, d, J=6.25 Hz); LCMS (ES+): 491.2 (M+1).
（実施例８）
４−（｛５−メチル−６−［５−（メチルスルホニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ピリミジン−４−イル｝オキシ）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
Figure 2012526097
 この化合物は、４−（｛５−メトキシ−６−［５−（メチルスルホニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ピリミジン−４−イル｝オキシ）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（実施例７）の調製に使用した手順と同様の２ステップ手順で調製した。最初のステップでは、４−［（６−クロロ−５−メチルピリミジン−４−イル）オキシ］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルを５−（メチルチオ）インドリンと合わせて、４−（｛５−メチル−６−［５−（メチルチオ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ピリミジン−４−イル｝オキシ）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルを得た。次のステップでは、この中間体を酸化して、４−（｛５−メチル−６−［５−（メチルスルホニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ピリミジン−４−イル｝オキシ）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルを得、これをカラムクロマトグラフィー（５０〜７０％の酢酸エチルヘプタン溶液）によって精製して、オフホワイトの固体（８８ｍｇ、８１％）を得た。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 1.22 (d, J=6.3 Hz, 6 H) 1.71 - 1.85 (m, 2 H) 2.01 (br. s., 5 H)
2.98 (s, 3 H) 3.17 (t, J=8.3 Hz, 2 H) 3.39 (br. s., 2 H) 3.73 (br. s., 2 H)
4.15 (t, J=8.3 Hz, 2 H) 4.84 - 4.97 (m, 1 H) 5.30 - 5.41 (m, 1 H) 6.66 (d,
J=8.2 Hz, 1 H) 7.63 (d, J=8.4 Hz, 1 H) 7.66 (s, 1 H) 8.38 (s, 1 H). LCMS (ES+):
475.4 (M+1).
（実施例９）
４−［６−（５−ジメチルカルバモイル−２，３−ジヒドロインドール−１−イル）−ピリミジン−４−イルオキシ］−ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル
Figure 2012526097
 ステップＡ：１−［６−（１−イソプロポキシカルボニル−ピペリジン−４−イルオキシ）−ピリミジン−４−イル］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−カルボン酸
Figure 2012526097
 １−（６−クロロ−ピリミジン−４−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−カルボン酸（６２．０ｍｇ、０．２２５ｍｍｏｌ）および４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル（５４．９ｍｇ、０．２９３ｍｍｏｌ）を無水１，４−ジオキサン（２．０ｍＬ）に混ぜた混合物を１０５℃に加熱した。５分間撹拌した後、１Ｍのナトリウムビス（トリメチルシリル）アミドテトラヒドロフラン溶液（０．５４ｍＬ、０．５４ｍｍｏｌ）を加えた。２時間後、反応混合物を水で希釈し、減圧下で濃縮した。得られる残渣をジクロロメタンに溶かし、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄した。水相をジクロロメタンで３回抽出し、有機層を合わせて硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、未精製残渣をカラムクロマトグラフィー（２０〜７０％の酢酸エチルヘプタン溶液）によって精製して、１−［６−（１−イソプロポキシカルボニル−ピペリジン−４−イルオキシ）−ピリミジン−４−イル］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−カルボン酸（３０ｍｇ、３１％）を白色の泡沫として得た。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 1.24 (d, J=6.25 Hz, 6 H) 1.67 - 1.79 (m, 2 H) 1.93 - 2.05 (m, 2 H)
3.22 - 3.36 (m, 4 H) 3.75 - 3.87 (m, 2 H) 4.03 (t, J=8.69 Hz, 2 H) 4.87 - 4.97
(m, 1 H) 5.27 - 5.35 (m, 1 H) 5.97 (s, 1 H) 7.89 (s, 1 H) 7.98 (d, J=10.15 Hz,
1 H) 8.43 (d, J=8.00 Hz, 1 H) 8.49 (s, 1 H)
ステップＢ：４−［６−（５−ジメチルカルバモイル−２，３−ジヒドロインドール−１−イル）−ピリミジン−４−イルオキシ］−ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル
カルボン酸（３０ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（０．０２４ｍＬ、０．１４ｍｍｏｌ）、およびＯ−ベンゾトリアゾール−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウム−ヘキサフルオロ−ホスフェート（３５ｍｇ、０．０９１ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．０ｍＬ）に混ぜた混合物に、２Ｍのジメチルアミンテトラヒドロフラン溶液（０．０５２ｍＬ、０．１０５ｍｍｏｌ）を加えた。２時間後、反応混合物を水で希釈し、酢酸エチルで３回抽出した。有機層を合わせて硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を減圧下で濃縮した。未精製残渣をカラムクロマトグラフィー（２０〜７０％の酢酸エチルヘプタン溶液）によって精製して、４−［６−（５−ジメチルカルバモイル−２，３−ジヒドロインドール−１−イル）−ピリミジン−４−イルオキシ］−ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル（８ｍｇ、３０％）を白色の固体として得た。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 1.25 (d, J=6.05 Hz, 6 H) 1.68 - 1.78 (m, 2 H) 1.95 - 2.04 (m, 2 H)
3.06 (br. s., 6 H) 3.24 (t, J=8.69 Hz, 2 H) 3.28 - 3.36 (m, 2 H) 3.81 (広幅 s., 2 H) 3.99 (t, J=8.59 Hz, 2 H) 4.89 -
4.96 (m, 1 H) 5.27 - 5.34 (m, 1 H) 5.93 (s, 1 H) 7.29 (d, 1 H) 7.32 (s, 1 H)
8.36 (d, J=8.40 Hz, 1 H) 8.46 (s, 1 H). LCMS (ES+): 454.4 (M+1).
（実施例１０）
４−｛［６−（５−シアノ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
Figure 2012526097
 ４−（６−クロロ−ピリミジン−４−イルオキシ）−ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル（５０．４ｍｇ、０．１６８ｍｍｏｌ）および２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−カルボニトリル（２２．０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を無水１，４−ジオキサン（２．０ｍＬ）に混ぜた混合物を１０５℃に加熱した。５分間撹拌した後、１Ｍのナトリウムビス（トリメチルシリル）アミドテトラヒドロフラン溶液（０．１８４ｍＬ、０．１８４ｍｍｏｌ）を加えた。３０分後、反応混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液で失活させ、減圧下で濃縮した。得られる残渣をジクロロメタンに溶解させ、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄した。水相をジクロロメタンで３回抽出し、有機層を合わせて硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、未精製残渣をカラムクロマトグラフィー（２０〜６０％の酢酸エチルヘプタン溶液）によって精製して、４−｛［６−（５−シアノ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（３８ｍｇ、６１％）を白色の固体として得た。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 1.25 (d, J=6.25 Hz, 6 H) 1.68 - 1.78 (m, 2 H) 1.96 - 2.04 (m, 2 H)
3.24 - 3.36 (m, 4 H) 3.78 - 3.87 (m, 2 H) 4.03 (t, J=8.79 Hz, 2 H) 4.89 - 4.97
(m, 1 H) 5.29 - 5.36 (m, 1 H) 5.96 (s, 1 H) 7.43 (s, 1 H) 7.51 (dd, J=8.79,
1.17 Hz, 1 H) 8.48 - 8.53 (m, 2 H). LCMS (ES+): 408.4 (M+1).
（実施例１１）
４−［（６−｛５−［（２−ヒドロキシエチル）スルホニル］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル｝ピリミジン−４−イル）オキシ］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
Figure 2012526097
 ステップＡ：４−［（６−｛５−［（２−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝エチル）チオ］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル｝ピリミジン−４−イル）オキシ］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
Figure 2012526097
 Ｔｅｆｌｏｎセプタム付きのバイアルにおいて、化合物５−［（２−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝エチル）チオ］インドリン（１４３ｍｇ、０．４６２ｍｍｏｌ）と４−［（６−クロロ−ピリミジン−４−イル）オキシ］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（１４６．９ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ）を無水１，４−ジオキサン（２．０ｍＬ）中で合わせた。溶液を５分間１００℃に加熱し、次いで１Ｍのナトリウムビス（トリメチルシリル）アミドテトラヒドロフラン溶液（０．５５ｍＬ、０．５５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を１００℃で１時間撹拌した。次いで反応液を室温に冷まし、減圧下で濃縮し、残渣を酢酸エチル（４０ｍＬ）で希釈した。次いで溶液を飽和炭酸水素ナトリウム（２５ｍＬ）で２回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮して褐色の油状物を得、これをカラムクロマトグラフィーによって精製して、４−［（６−｛５−［（２−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝エチル）チオ］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル｝ピリミジン−４−イル）オキシ］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（１６４．１ｍｇ、６２％）を得た。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 0.02 (s, 6 H) 0.86 (s, 9 H) 1.24 (d, 6 H) 1.65 - 1.77 (m, 2 H) 1.92
- 2.04 (m, 2 H) 2.94 - 2.99 (m, 2 H) 3.19 (t, J=8.59 Hz, 2 H) 3.26 - 3.35 (m, 2
H) 3.71 - 3.77 (m, 2 H) 3.77 - 3.88 (m, 2 H) 3.95 (t, J=8.59 Hz, 2 H) 4.87 -
4.96 (m, 1 H) 5.27 - 5.29 (m, 1 H) 5.89 (d, J=0.98 Hz, 1 H) 7.24 - 7.25 (m, 2
H) 8.25 (d, J=8.98 Hz, 1 H) 8.43 (d, J=0.78 Hz, 1 H).
ステップＢ：４−［（６−｛５−［（２−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝エチル）スルホニル］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル｝ピリミジン−４−イル）オキシ］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
Figure 2012526097
 ４−［（６−｛５−［（２−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝エチル）チオ］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル｝ピリミジン−４−イル）オキシ］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（８０ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）をクロロホルム（３．０ｍＬ）に溶解させ、−５℃に冷却した。ｍｅｔａ−クロロ過安息香酸（８１．６ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）を１回で加え、反応液を４５分かけてゆっくりと室温に温めた。次いで反応混合物を減圧下で濃縮し、未精製残渣をカラムクロマトグラフィーによって精製して、４−［（６−｛５−［（２−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝エチル）スルホニル］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル｝ピリミジン−４−イル）オキシ］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（７８ｍｇ、９２％）を透明な油状物として得た。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 0.03 (s, 6 H) 0.77 (s, 9 H) 1.23 (s, 3 H) 1.25 (s, 3 H) 1.66 - 1.79
(m, 2 H) 1.97 (br. s., 2 H) 3.24 - 3.30 (m, 2 H) 3.29 - 3.35 (m, 4 H) 3.75 -
3.87 (m, 2 H) 3.96 (t, J=6.54 Hz, 2 H) 4.03 (t, J=8.78 Hz, 2 H) 4.86 - 4.97 (m,
1 H) 5.27 - 5.35 (m, 1 H) 5.96 (d, J=0.78 Hz, 1 H) 7.66 (d, J=1.56 Hz, 1 H)
7.72 (dd, J=8.69, 2.05 Hz, 1 H) 8.49 (d, J=0.78 Hz, 1 H) 8.53 (d, J=8.78 Hz, 1
H).
ステップＣ：４−［（６−｛５−［（２−ヒドロキシエチル）スルホニル］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル｝ピリミジン−４−イル）オキシ］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
４−［（６−｛５−［（２−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝エチル）スルホニル］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル｝ピリミジン−４−イル）オキシ］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（７５ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（３ｍＬ）に溶解させ、４Ｍの塩酸１，４−ジオキサン溶液（０．２５ｍＬ）を加えた。反応液を２５分間撹拌し、次いで濾過して、４−［（６−｛５−［（２−ヒドロキシエチル）スルホニル］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル｝ピリミジン−４−イル）オキシ］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（２１ｍｇ、３５％）を白色の固体として得た。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 1.24 (d, J=6.25 Hz, 6 H) 1.70 - 1.82 (m, 2 H) 2.05 - 2.14 (m, 2 H)
3.31 - 3.43 (m, 6 H) 3.84 - 3.93 (m, 2 H) 3.99 - 4.03 (m, 2 H) 4.20 - 4.27 (m,
2 H) 4.91 (q, 1 H) 5.52 - 5.59 (m, 1 H) 6.14 (s, 1 H) 7.80 (s, 1 H) 7.84 (d,
J=8.59 Hz, 1 H) 8.43 (d, J=8.39 Hz, 1 H) 8.69 (s, 1 H). LCMS (ES+): 491 (M+1).
（実施例１２）
４−｛［６−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−１−イル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
Figure 2012526097
 ４−ヒドロキシピペリジンカルボン酸イソプロピル（８０．５ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）と無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）からなる溶液に、水素化ナトリウム（１９ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）を加え、混合物を２０分間撹拌した。１−（６−クロロピリミジン−４−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン（１００ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）を加え、反応液を６０℃で１４時間加熱した。反応液をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルで希釈し、水で洗浄した。相を分離し、水層をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルおよび酢酸エチルで順次抽出した。有機抽出物を合わせて水に続いてブラインで洗浄し、次いで硫酸ナトリウムで乾燥させた。混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（５％のメタノール／０．５％のトリエチルアミン酢酸エチル溶液）によって精製して、４−｛［６−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−１−イル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルを濃厚な油状物（９０ｍｇ、５５％）として得た。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム): δ 8.63 (d, J=8.3 Hz, 0.5 H), 8.57 (d, J=8.3 Hz, 0.5 H), 8.60 (s, 0.5
H), 8.45 (s, 0.5 H), 8.16 (d, J=4.98 Hz, 0.5 H), 8.07 (d, J=4.98 Hz, 0.5 H),
7.10-7.15 (m, 1H), 6.62 (s, 0.5 H), 5.92 (s, 0.5 H), 4.87-4.94 (m, 2 H),
4.00-4.13 (m, 2 H), 3.81-3.98 (m, 2 H), 3.30-3.4 (m, 2 H), 3.03-3.11 (m, 2 H),
1.83-2.03 (m, 2 H), 1.41-1.51 (m, 2 H), 1.17-1.26 (m, 6 H). LCMS (ES+): 384
(M+1).
（実施例１３）
４−｛［６−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−１−イル）−５−メチルピリミジン−４−イル］オキシ｝−ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
Figure 2012526097
 この化合物は、１−（６−クロロ−５−メチルピリミジン−４−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジンと４−ヒドロキシピペリジンカルボン酸イソプロピルから、４−｛［６−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−１−イル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（実施例１２）の調製について記載したのと同様にして調製した。粗生成物をジエチルエーテルに溶解させた。ヘプタンをゆっくりと加え、純粋な−４−｛［６−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−１−イル）−５−メチルピリミジン−４−イル］オキシ｝−ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（７５ｍｇ、８５％）を溶液から油状物として生じさせた。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム): δ 8.37 (s, 1H), 8.00 (d, J=5.8 Hz, 1H), 6.97-7.04 (m, 2 H), 4.87-4.96
(m, 2 H), 4.14 (t, 1H), 3.72-3.88 (m, 3 H), 3.37-3.42 (m,1H), 3.28 (t, 1H), 3.03-3.09
(m, 2 H), 2.05 (s, 3 H), 1.74-1.87 (m, 2 H), 1.42-1.50 (m, 2 H),1.02-1.26 (m. 6
H). LCMS (ES+): 398 (M+1).
（実施例１４）
４−（｛６−［５−（メチルスルホニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−１−イル］ピリミジン−４−イル｝オキシ）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
Figure 2012526097
 この化合物は、４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルと１−（６−クロロピリミジン−４−イル）−５−（メチルスルホニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンから、実施例１について記載したのと同様にして調製した。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（酢酸エチルヘプタン溶液の勾配）によって精製して白色の固体を得、これをアセトニトリル中で加熱し、冷ました。混合物を濾過し、単離した白色の固体を真空中で乾燥させて、４−（｛６−［５−（メチルスルホニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−１−イル］ピリミジン−４−イル｝オキシ）ピペリジン−１−カルボン酸エステル（２８２ｍｇ、収率５２％）を得た。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム): δ 1.27 (d, J=6.2 Hz, 6 H), 1.73 - 1.84 (m, 2 H), 1.96 - 2.06 (m, 2
H), 3.09 (s, 3 H), 3.24 (t, J=8.7 Hz, 2 H), 3.31 - 3.41 (m, 2 H), 3.78 - 3.89
(m, 2 H), 4.44 (dd, J=9.4, 8.1 Hz, 2 H), 4.90 - 4.99 (m, 1 H), 5.32 (tt, J=7.9,
3.8 Hz, 1 H), 7.84 (dt, J=2.4, 1.3 Hz, 1 H), 8.12 (d, J=1.0 Hz, 1 H), 8.53 (d,
J=1.0 Hz, 1 H), 8.70 (dt, J=2.1, 0.7 Hz, 1 H). LCMS (ES+): 462 (M+1).
（実施例１５）
３−フルオロ−４−（｛６−［５−（メチルスルホニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ピリミジン−４−イル｝オキシ）ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
Figure 2012526097
 １−（６−クロロピリミジン−４−イル）−５−（メチルスルホニル）インドリン（３３．８ｍｇ、０．１０９ｍｍｏｌ）および３−フルオロ−４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（シスおよびトランス異性体のラセミ混合物）（２０ｍｇ、０．０９１ｍｍｏｌ）を１．５ｍＬの１，４−ジオキサンに溶かした、マイクロ波バイアル中の熱（１０５℃）溶液に、ナトリウムビス（トリメチルシリル）アミド（０．１４ｍＬ、１Ｍテトラヒドロフラン溶液）を加えた。撹拌した混合物を窒素雰囲気中にて１０５℃で４時間加熱した後、これを室温に冷却し、水および酢酸エチルで希釈した。有機相を取り出し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄した。水相を合わせて酢酸エチルで抽出した。有機層を合わせて硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濾液を真空中で濃縮した。残渣をジメチルスルホキシド（１ｍＬ）に溶解させ、逆相ＨＰＬＣ（カラム：Ｗａｔｅｒｓ ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８ １９×１００ｍｍ、５マイクロメートル；移動相Ａ：０．０３％の水酸化アンモニウム水溶液（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：０．０３％の水酸化アンモニウムアセトニトリル溶液（ｖ／ｖ）；勾配：８０％の水／２０％のアセトニトリルから８．５分で線形に０％の水／１００％のアセトニトリル、０％の水／１００％のアセトニトリルで１０．０分まで保持；流量：２５ｍＬ／分）によって精製した。この方法で精製すると、１７ｍｇの３−フルオロ−４−（｛６−［５−（メチルスルホニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ピリミジン−４−イル｝オキシ）ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルが得られた。LCMS (M+H)): 493.0
（実施例１６）
（３Ｒ，４Ｓ）−４−｛［６−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−１−イル）−５−メチルピリミジン−４−イル］オキシ｝−３−フルオロピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ラセミ体）
Figure 2012526097
 ラセミ体の（３Ｒ，４Ｓ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（３１．３ｍｇ、０．０８１ｍｍｏｌ）を３ｍＬの無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶かした撹拌した溶液に、水素化ナトリウム（６．５ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）を室温で加えた。混合物を窒素中にて室温で２０分間撹拌した。１−（６−クロロ−５−メチルピリミジン−４−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン（２０ｍｇ、０．０８１ｍｍｏｌ）を加え、反応液を窒素中にて１６時間６０℃に加熱した。混合物を室温に冷却し、水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。抽出物を合わせて水、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を真空中で濃縮した。残渣を、２０〜８０％の酢酸エチルとヘプタンからなる定組成混合物を溶離液とするフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、黄色のゴム質（１２ｍｇ）を得た。このゴム質をジメチルスルホキシド（１ｍＬ）に溶解させ、逆相ＨＰＬＣカラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｓｕｎｆｉｒｅ Ｃ１８ １９×１００ｍｍ、５マイクロメートル；移動相Ａ：０．０５％のトリフルオロ酢酸水溶液（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：０．０５％のトリフルオロ酢酸アセトニトリル溶液（ｖ／ｖ）；勾配：９５％の水／５％のアセトニトリルから８．５分で線形に０％の水／１００％のアセトニトリル、０％の水／１００％のアセトニトリルで１０．０分まで保持；流量：２５ｍＬ／分によって精製した。LCMS (M+H): 430.2.
この実施例は、以下のようにも調製した。
３口丸底フラスコに、１−（６−クロロ−５−メチルピリミジン−４−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン（１．０ｇ ４．０５ｍｍｏｌ）、（３Ｒ，４Ｓ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（０．９８ｇ、４．４７ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（１．５８ｇ、４．８５ｍｍｏｌ）、およびアセトニトリル（５ｍＬ）を加えた。混合物を約４８時間還流加熱した。水（３体積）を加え、次いで混合物を真空中で濃縮してアセトニトリルを除去した。残渣を酢酸エチル（１０体積）で希釈し、層を分離した。水層を酢酸エチル（１体積）で抽出した。有機層を合わせて硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濾液を濃縮して、（３Ｒ，４Ｓ）−４−｛［６−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−１−イル）−５−メチルピリミジン−４−イル］オキシ｝−３−フルオロピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ラセミ体）を濃褐色の油状物（未精製１．６ｇ、９２％）として得た。
この実施例は、以下のようにも調製した。
３口丸底フラスコに、１−（６−クロロ−５−メチルピリミジン−４−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン（１９ｇ、７７．０２ｍｍｏｌ）および２−メチルテトラヒドロフラン（９５ｍＬ）を加えた。フラスコを窒素パージし、混合物を還流加熱した。別個のフラスコにおいて、（３Ｒ，４Ｓ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（キラル）（１８．６ｇ、８４．８３ｍｍｏｌ）と２−メチルテトラヒドロフラン（１９ｍＬ）を合わせて濃厚なスラリーとした。ナトリウムビス（トリメチルシリル）アミド（９２．４ｍＬ、９２．４０ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を数分間撹拌し、時間と共に色が橙色になった。得られるこの橙色の溶液を１−（６−クロロ−５−メチルピリミジン−４−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジンの熱（還流）溶液に１５分かけてゆっくりと滴下した。得られる溶液を約１．５時間還流加熱した。次いで反応液を室温に冷却し、水（７６ｍＬ）で希釈した。混合物を室温で終夜撹拌した。層を分離した。水層を２−メチルテトラヒドロフラン（４０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせて０℃の冷１Ｎ塩酸（６０ｍＬ）で洗浄した。層を分離した。橙色の水層を１Ｎ水酸化ナトリウムで直ちにｐＨ９〜１０に調整した。この層を２−メチルテトラヒドロフラン（１１０ｍＬ）で抽出した。この最終有機抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濾液を真空中で濃縮して、（３Ｒ，４Ｓ）−４−（６−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−１−イル）−５−メチルピリミジン−４−イルオキシ）−３−フルオロピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルを橙色の油状物（未精製３９ｇ、１１７．９％）として得た。この材料をそれ以上精製せずに後続のステップで使用した。
（実施例１７）
（３Ｒ，４Ｓ）−４−｛［６−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−１−イル）−５−メチルピリミジン−４−イル］オキシ｝−３−フルオロピペリジン−１−カルボン酸１−メチルシクロプロピル
Figure 2012526097
 ステップＡ：１−（６−（（３Ｒ，４Ｓ）−３−フルオロピペリジン−４−イルオキシ）−５−メチルピリミジン−４−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン
Figure 2012526097
 （３Ｒ，４Ｓ）−４−（６−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−１−イル）−５−メチルピリミジン−４−イルオキシ）−３−フルオロピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（３１．７ｇ、７３．８１ｍｍｏｌ）とｐ−トルエンスルホン酸一水和物（５６．１６ｇ、２９５．２４ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン（３１７ｍＬ、３．９０モル）および水（３１ｍＬ、１．７２モル）の中で合わせた。得られる溶液を３時間還流加熱した。遊離アミン生成物は単離せず、次のステップにそのまま進めた。
ステップＢ：（３Ｒ，４Ｓ）−４−｛［６−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−１−イル）−５−メチルピリミジン−４−イル］オキシ｝−３−フルオロピペリジン−１−カルボン酸１−メチルシクロプロピル
Figure 2012526097
 ステップＡからの１−（６−（（３Ｒ，４Ｓ）−３−フルオロピペリジン−４−イルオキシ）−５−メチルピリミジン−４−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジンの混合物を撹拌したものに、トリエチルアミン（６１．７３ｍＬ、４４２．８５ｍｍｏｌ）を室温で加えた。この撹拌した溶液（ｐＨ９〜１０）に、４−ニトロフェニル炭酸１−メチルシクロプロピル（１７．６６ｇ、７３．８１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を４０℃で３時間撹拌した。次いで混合物を１Ｎ水酸化ナトリウム（３体積）で希釈し、溶液を濃縮してテトラヒドロフランを除去した。水層を２−メチルテトラヒドロフラン（５体積）で抽出した。有機抽出物を合わせて１Ｎ水酸化ナトリウム（２体積）、飽和炭酸ナトリウム水溶液（１体積）、およびブライン（１体積）で２回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濾液を真空中で濃縮して油状物とした。油状物をｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル中で１６時間撹拌して粒状化した。黄色の固体を濾過によって収集した。これらの固体を０．２Ｎ水酸化ナトリウム（２体積）懸濁液として２時間撹拌した。濾過すると、１９．８ｇの（３Ｒ，４Ｓ）−４−｛［６−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−１−イル）−５−メチルピリミジン−４−イル］オキシ｝−３−フルオロピペリジン−１−カルボン酸１−メチルシクロプロピル（６３％）が得られた。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 0.56 - 0.68 (m, 2 H) 0.83 - 0.93 (m, 2 H) 1.54 (s, 3 H) 1.83 - 2.22
(m, 5 H) 3.04 - 3.49 (m, 4 H) 3.96 - 4.29 (m, 4 H) 4.74 - 4.99 (m, 1 H) 5.30 -
5.46 (m, 1 H) 6.98 (dd, J=8.10, 4.98 Hz, 1 H) 7.03 - 7.11 (m, 1 H) 8.00 (dd,
J=4.88, 1.37 Hz, 1 H) 8.33 (s, 1 H).
（実施例１８）
（３Ｓ，４Ｒ）−４−｛［６−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−１−イル）−５−メチルピリミジン−４−イル］オキシ｝−３−フルオロピペリジン−１−カルボン酸１−メチルシクロプロピル
Figure 2012526097
 実施例１８は、適切な出発材料を用い、実施例１７と同様にして調製した。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 0.56 - 0.68 (m,
2 H) 0.83 - 0.93 (m, 2 H) 1.54 (s, 3 H) 1.83 - 2.22 (m, 5 H) 3.04 - 3.49 (m, 4
H) 3.96 - 4.29 (m, 4 H) 4.74 - 4.99 (m, 1 H) 5.30 - 5.46 (m, 1 H) 6.98 (dd,
J=8.10, 4.98 Hz, 1 H) 7.03 - 7.11 (m, 1 H) 8.00 (dd, J=4.88, 1.37 Hz, 1 H) 8.33
(s, 1 H)
（実施例１９）
（３Ｒ，４Ｓ）−４−｛［６−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−１−イル）−５−メチルピリミジン−４−イル］オキシ｝−３−フルオロピペリジン−１−カルボン酸１−メチルシクロプロピル（ラセミ体）
Figure 2012526097
 実施例１９（実施例１７および１８のラセミ混合物）は、ラセミ体の（３Ｒ，４Ｓ）−４−（６−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−１−イル）−５−メチルピリミジン−４−イルオキシ）−３−フルオロピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルを使用したことを除き、実施例１７と同様にして調製した。未精製材料をジメチルスルホキシド（１ｍＬ）に溶解させ、逆相ＨＰＬＣ（カラム：Ｗａｔｅｒｓ ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８ １９×１００ｍｍ、５マイクロメートル；移動相Ａ：０．０３％の水酸化アンモニウム水溶液（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：０．０３％の水酸化アンモニウムアセトニトリル溶液（ｖ／ｖ）；勾配：９０％の水／１０％のアセトニトリルから８．５分で線形に０％の水／１００％のアセトニトリル、０％の水／１００％のアセトニトリルで１０．０分まで保持；流量：２５ｍＬ／分）によって精製した。LCMS (M+H): 428.2
（実施例２０）
４−｛［６−（５−カルバモイル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル）−５−メチルピリミジン−４−イル］オキシ｝−３−フルオロピペリジン−１−カルボン酸１−メチルシクロプロピル（ラセミ体）
Figure 2012526097
 ステップＡ：１−（６−（１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−３−フルオロピペリジン−４−イルオキシ）−５−メチルピリミジン−４−イル）インドリン−５−カルボン酸
Figure 2012526097
 ３−フルオロ−４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（４８ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（１ｍＬ）溶液に、ナトリウムビス（トリメチルシリル）アミド（０．２４ｍＬ、１Ｍテトラヒドロフラン溶液）を室温で滴下した。混合物を５分間撹拌した後、１−（６−クロロ−５−メチルピリミジン−４−イル）インドリン−５−カルボン酸メチル（６０ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１ｍＬ）に溶かした撹拌した溶液に、これを６０℃で滴下した。反応混合物を６０℃で２時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、水および酢酸エチルで希釈した。水層を酢酸エチルで抽出し、有機抽出物を合わせて硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濾液を真空中で濃縮した。未精製の１−（６−（１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−３−フルオロピペリジン−４−イルオキシ）−５−メチルピリミジン−４−イル）インドリン−５−カルボン酸を精製せずに次のステップで使用した。
ステップＢ：４−（６−（５−カルバモイルインドリン−１−イル）−５−メチルピリミジン−４−イルオキシ）−３−フルオロピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
Figure 2012526097
 １−（６−（１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−３−フルオロピペリジン−４−イルオキシ）−５−メチルピリミジン−４−イル）インドリン−５−カルボン酸（３０ｍｇ、０．０６３ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（２ｍＬ）に溶かした撹拌した溶液に、炭酸ジ−ｔｅｒｔブチル（１８．４ｍｇ、０．０８２ｍｍｏｌ）に続いてピリジン（０．００５ｍＬ、０．０６３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で３０分間撹拌した後、炭酸水素アンモニウム（６．５ｍｇ、０．０８２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を窒素中にて室温で１９時間撹拌した後、水および酢酸エチルで希釈した。水層を酢酸エチルで抽出し、有機抽出物を合わせて硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濾液を真空中で濃縮した。未精製の４−（６−（５−カルバモイルインドリン−１−イル）−５−メチルピリミジン−４−イルオキシ）−３−フルオロピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルを精製せずに次のステップで使用した。
ステップＣ：４−｛［６−（５−カルバモイル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル）−５−メチルピリミジン−４−イル］オキシ｝−３−フルオロピペリジン−１−カルボン酸１−メチルシクロプロピル（ラセミ体）
４−（６−（５−カルバモイルインドリン−１−イル）−５−メチルピリミジン−４−イルオキシ）−３−フルオロピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（３０ｍｇ、０．０６４ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（０．５ｍＬ）に溶かした撹拌した溶液に、トリフルオロ酢酸（０．５ｍＬ）を加えた。混合物を室温で２時間撹拌した後、真空中で濃縮した。残渣をテトラヒドロフラン（１ｍＬ）およびトリエチルアミン（０．０５ｍＬ）に溶解させ、４−ニトロフェニル炭酸１−メチルシクロプロピル（２２ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）を室温で加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌した後、水および酢酸エチルで希釈した。水層を酢酸エチルで２回抽出した。有機抽出物を合わせて飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を真空中で濃縮した。残渣をジメチルスルホキシド（１ｍＬ）に溶解させ、逆相ＨＰＬＣ（カラム：Ｗａｔｅｒｓ ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８ １９×１００ｍｍ、５マイクロメートル；移動相Ａ：０．０３％の水酸化アンモニウム水溶液（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：０．０３％の水酸化アンモニウムアセトニトリル溶液（ｖ／ｖ）；勾配：８０％の水／２０％のアセトニトリルから１０．５分で線形に０％の水／１００％のアセトニトリル、０％の水／１００％のアセトニトリルで１２．０分まで保持；流量：２５ｍＬ／分）によって精製した。LCMS (M+H): 470.1
（実施例２１）
（９−アンチ）−９−｛［６−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−１−イル）−５−メチルピリミジン−４−イル］オキシ｝−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
Figure 2012526097
 １−（６−クロロ−５−メチルピリミジン−４−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン（１．０ｇ、４．０５ｍｍｏｌ）および９−アンチ−ヒドロキシ−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１．０８ｇ、４．４６ｍｍｏｌ）を２０ｍＬの１，４−ジオキサンに溶かした撹拌した熱（１００℃）溶液に、窒素雰囲気中でナトリウムビス（トリメチルシリル）アミドの溶液（４．８６ｍＬ、４．８６ｍｍｏｌ、１．０Ｍテトラヒドロフラン溶液）を５分かけて滴下した。混合物を９０℃で２時間撹拌した後、室温に冷却し、水で希釈した。水相を酢酸エチルで３回抽出した。抽出物を合わせて硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を真空中で濃縮した。残渣を、ヘプタンに対して５０％〜１００％の酢酸エチルからなる勾配混合物を溶離液とする８０ｇシリカゲルカラムでのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、（９−アンチ）−９−｛［６−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−１−イル）−５−メチルピリミジン−４−イル］オキシ｝−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルを黄色の固体（１．３５ｇ）として得た。LCMS: 2.05分で454.5.
1H NMR (500 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 1.50 (s, 9 H) 1.98 - 2.10 (m, 2 H) 2.11 -
2.18 (m, 3 H) 3.31 (t, J=8.54 Hz, 2 H) 3.38 (d, J=13.66 Hz, 1 H) 3.50 (d,
J=13.66 Hz, 1 H) 3.88 (dd, J=14.39, 12.69 Hz, 2 H) 4.08 - 4.26 (m, 5 H) 4.33
(d, J=13.66 Hz, 1 H) 5.45 (t, J=3.66 Hz, 1 H) 6.96 - 7.05 (m, 1 H) 7.05 - 7.12
(m, 1 H) 8.04 (dd, J=4.88, 1.22 Hz, 1 H) 8.38 (s, 1 H).
（実施例２２）
（９−アンチ）−９−｛［６−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−１−イル）−５−メチルピリミジン−４−イル］オキシ｝−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸イソプロピル
Figure 2012526097
 ９−アンチ−ヒドロキシ−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸イソプロピル（１３９ｍｇ、０．６１ｍｍｏｌ）を１ｍＬのテトラヒドロフランに溶かした撹拌した溶液に、ナトリウムビス（トリメチルシリル）アミド（０．８１ｍＬ、０．８１ｍｍｏｌ、１．０Ｍテトラヒドロフラン溶液）を室温で滴下した。混合物を５分間撹拌した後、１−（６−クロロ−５−メチルピリミジン−４−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン（１００ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）を１ｍＬのテトラヒドロフランに溶かした撹拌した熱（６０℃）溶液に加えた。反応混合物を６０℃で２時間撹拌した後、室温に冷却し、水および酢酸エチルで希釈した。水相を酢酸エチルで抽出し、有機層を合わせて硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濾液を真空中で濃縮した。残渣を、ヘプタンに対して５０％〜１００％の酢酸エチルからなる勾配混合物を使用するフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、（９−アンチ）−９−｛［６−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−１−イル）−５−メチルピリミジン−４−イル］オキシ｝−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸イソプロピルを白色の固体（１１０ｍｇ）として得た。LCMS: 440.3. 1H NMR (500 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 1.23 - 1.32 (m,
6 H) 2.02 - 2.07 (m, 1 H) 2.07 - 2.12 (m, 1 H) 2.13 (s, 3 H) 3.32 (t, J=8.42
Hz, 2 H) 3.37 - 3.48 (m, 1 H) 3.51 (d, J=13.91 Hz, 1 H) 3.88 (t, J=11.59 Hz, 2
H) 4.11 - 4.27 (m, 5 H) 4.36 (d, J=13.42 Hz, 1 H) 4.93 - 5.06 (m, 1 H) 5.47 (t,
J=3.66 Hz, 1 H) 6.96 - 7.05 (m, 1 H) 7.06 - 7.14 (m, 1 H) 8.05 (dd, J=5.00,
1.34 Hz, 1 H) 8.39 (s, 1 H).
（実施例２３）
（９−シン）−９−（｛５−メチル−６−［５−（メチルスルホニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ピリミジン−４−イル｝オキシ）−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸イソプロピル
Figure 2012526097
 実施例２３は、適切な出発材料を用い、実施例１と同様にして調製した。粗生成物を、ヘプタンと酢酸エチルからなる３０％〜１００％の酢酸エチルの勾配混合物を溶離液とするシリカゲルクロマトグラフィーによって精製した。これによって、２００ｍｇの（９−シン）−９−（｛５−メチル−６−［５−（メチルスルホニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ピリミジン−４−イル｝オキシ）−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸イソプロピルが得られた。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 1.23 - 1.31 (m, 6 H) 1.95 - 2.03 (m, 2 H) 2.12 - 2.15 (m, 2 H) 3.04
(s, 3 H) 3.19 - 3.29 (m, 2H) 3.34 (d, J=13.66 Hz, 1 H) 3.89 (d, J=14.45 Hz, 1
H) 3.97 (d, J=12.30 Hz, 1 H) 4.25 (br. s., 6 H) 4.50 (d, J=13.86 Hz, 1 H) 4.66
(d, J=12.30 Hz, 1 H) 4.95 - 5.03 (m, 1 H) 5.39 - 5.43 (m, 1 H) 6.74 (d, J=8.39
Hz, 1 H) 7.70 (dd, J=8.49, 1.85 Hz, 1 H) 7.73 (d, J=1.95 Hz, 1 H) 8.44 (s, 1
H).
（実施例２４）
（９−アンチ）−９−（｛５−メチル−６−［５−（メチルスルホニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ピリミジン−４−イル｝オキシ）−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸イソプロピル
Figure 2012526097
 実施例２４は、適切な出発材料を用い、実施例１と同様にして調製した。粗生成物を、ヘプタンと酢酸エチルからなる３０％〜１００％の酢酸エチルの勾配混合物を溶離液とするシリカゲルクロマトグラフィーによって精製した。これによって、１００ｍｇの（９−アンチ）−９−（｛５−メチル−６−［５−（メチルスルホニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ピリミジン−４−イル｝オキシ）−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸イソプロピルが得られた。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 1.23 - 1.31 (m, 6 H) 1.95 - 2.03 (m, 2 H) 2.12 - 2.15 (m, 2 H) 3.04
(s, 3 H) 3.19 - 3.29 (m, 2H) 3.34 (d, J=13.66 Hz, 1 H) 3.40 (d, J=14.45 Hz, 1
H) 3.50 (d, J=12.30 Hz, 1 H) 3.90 (d, J=13.86 Hz, 2 H) 4.18-4.38 (br. s., 6H)
4.95 - 5.03 (m, 1 H) 5.39 - 5.43 (m, 1 H) 6.74 (d, J=8.39 Hz, 1 H) 7.70 (dd,
J=8.49, 1.85 Hz, 1 H) 7.73 (d, J=1.95 Hz, 1 H) 8.44 (s, 1 H).
（実施例２５）
（９−アンチ）−９−｛［６−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−１−イル）−５−メチルピリミジン−４−イル］オキシ｝−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸１−メチルシクロプロピル
Figure 2012526097
 ステップＡ：（９−アンチ）−９−｛［６−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−１−イル）−５−メチルピリミジン−４−イル］オキシ｝−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン
Figure 2012526097
 （９−アンチ）−９−｛［６−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−１−イル）−５−メチルピリミジン−４−イル］オキシ｝−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１．３０ｇ、２．８７ｍｍｏｌ）を６ｍＬのジクロロメタンに溶かした撹拌した溶液に、３ｍＬのトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を室温で加えた。得られる溶液を室温で２時間撹拌し、次いで真空中で濃縮した。残渣を精製せずに次のステップで使用した。
ステップＢ：（９−アンチ）−９−｛［６−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−１−イル）−５−メチルピリミジン−４−イル］オキシ｝−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸１−メチルシクロプロピル
（９−アンチ）−９−｛［６−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−１−イル）−５−メチルピリミジン−４−イル］オキシ｝−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン（６０ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）を１ｍＬのテトラヒドロフランに溶かした撹拌した溶液に、トリエチルアミン（０．０６ｍＬ、０．４１ｍｍｏｌ）に続いて４−ニトロフェニル炭酸１−メチルシクロプロピル（４９ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）を室温で加えた。反応混合物を窒素雰囲気中で１６時間撹拌した後、水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機層を合わせて飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、ブラインで２回洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を真空中で濃縮した。未精製残渣をフラッシュクロマトグラフィー（４ｇシリカ、酢酸エチルに対して５０％〜１００％のヘプタン）によって精製して、（９−アンチ）−９−｛［６−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−１−イル）−５−メチルピリミジン−４−イル］オキシ｝−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸１−メチルシクロプロピルを白色の固体（２０ｍｇ）として得た。LCMS m/z: 452.3.1H NMR (500 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 0.58 - 0.70 (m,
2 H) 0.84 - 1.01 (m, 2 H) 1.59 (s, 3 H) 2.01 (br. s., 1 H) 2.04 - 2.10 (m, 1 H)
2.10 - 2.17 (m, 3 H) 3.31 (t, J=8.42 Hz, 2 H) 3.37 - 3.54 (m, 2 H) 3.86 (t,
J=11.34 Hz, 2 H) 4.06 - 4.26 (m, 5 H) 4.30 - 4.44 (m, 1 H) 4.36 (d, J=13.66 Hz,
1 H) 5.45 (t, J=3.66 Hz, 1 H) 6.95 - 7.05 (m, 1 H) 7.05 - 7.13 (m, 1 H) 8.04
(dd, J=4.88, 0.98 Hz, 1 H) 8.38 (s, 1 H).
（実施例２６）
（９−アンチ）−９−｛［６−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−１−イル）−５−メチルピリミジン−４−イル］オキシ｝−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸１−エチルシクロプロピル
Figure 2012526097
 実施例２６は、４−ニトロフェニル炭酸１−エチルシクロプロピルを使用し、実施例２５と同様にして調製した。未精製材料をジメチルスルホキシド（１ｍＬ）に溶解させ、逆相ＨＰＬＣ（カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｓｕｎｆｉｒｅ Ｃ１８ １９×１００ｍｍ、５マイクロメートル；移動相Ａ：０．０５％のトリフルオロ酢酸水溶液（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：０．０５％のトリフルオロ酢酸アセトニトリル溶液（ｖ／ｖ）；勾配：８５％の水／１５％のアセトニトリルから８．５分で線形に０％の水／１００％のアセトニトリル、０％の水／１００％のアセトニトリルで１０．０分まで保持；流量：２５ｍＬ／分）によって精製した。この方法で精製すると、２３ｍｇの（９−アンチ）−９−｛［６−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−１−イル）−５−メチルピリミジン−４−イル］オキシ｝−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸１−エチルシクロプロピルが得られた。LCMS (M+H): 466.3
（実施例２７）
（９−アンチ）−９−｛［６−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−１−イル）−５−メチルピリミジン−４−イル］オキシ｝−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸１−メチルシクロブチル
Figure 2012526097
 実施例２７は、４−ニトロフェニル炭酸１−メチルシクロブチルを使用し、実施例２５と同様にして調製した。未精製残渣をジメチルスルホキシド（１ｍＬ）に溶解させ、逆相ＨＰＬＣ（カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｓｕｎｆｉｒｅ Ｃ１８ １９×１００ｍｍ、５マイクロメートル；移動相Ａ：０．０５％のトリフルオロ酢酸水溶液（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：０．０５％のトリフルオロ酢酸アセトニトリル溶液（ｖ／ｖ）；勾配：８５％の水／１５％のアセトニトリルから８．５分で線形に０％の水／１００％のアセトニトリル、０％の水／１００％のアセトニトリルで１０．０分まで保持；流量：２５ｍＬ／分）によって精製した。この方法で精製すると、１８ｍｇの（９−アンチ）−９−｛［６−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−１−イル）−５−メチルピリミジン−４−イル］オキシ｝−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸１−メチルシクロブチルが得られた。LCMS (M+H): 466.3
（実施例２８）
（９−シン）−９−｛［６−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−１−イル）−５−メチルピリミジン−４−イル］オキシ｝−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸１−メチルシクロプロピル
Figure 2012526097
 実施例２８は、９−シン−ヒドロキシ−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルを使用し、実施例２５と同様にして調製した。
1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 0.55 - 0.65 (m,
2 H) 0.82 - 0.97 (m, 2 H) 1.55 (s, 3 H) 1.87 - 2.01 (m, 2 H) 2.11 (s, 3 H) 3.18
(d, J=13.68 Hz, 1 H) 3.22 - 3.34 (m, 3 H) 3.79 (d, J=11.53 Hz, 1 H) 3.93 (d,
J=11.33 Hz, 1 H) 4.02 - 4.21 (m, 4 H) 4.35 (d, J=13.88 Hz, 1 H) 4.61 (d,
J=13.68 Hz, 1 H) 5.34 (t, J=3.32 Hz, 1 H) 6.92 - 7.02 (m, 1 H) 7.02 - 7.10 (m,
1 H) 8.00 (dd, J=4.98, 1.47 Hz, 1 H) 8.34 (s, 1 H).
（実施例２９）
（９−シン）−９−｛［６−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−１−イル）−５−メチルピリミジン−４−イル］オキシ｝−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸イソプロピル
Figure 2012526097
 実施例２９は、９−シン−ヒドロキシ−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸イソプロピルを使用し、実施例２８と同様にして調製した。未精製残渣をジメチルスルホキシド（１ｍＬ）に溶解させ、逆相ＨＰＬＣ（カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｓｕｎｆｉｒｅ Ｃ１８ １９×１００ｍｍ、５マイクロメートル；移動相Ａ：０．０５％のトリフルオロ酢酸水溶液（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：０．０５％のトリフルオロ酢酸アセトニトリル溶液（ｖ／ｖ）；勾配：８０％の水／２０％のアセトニトリルから１０．０分かけて線形に４０％の水／６０％のアセトニトリル、１０．５分で０％の水／１００％のアセトニトリル、０％の水／１００％のアセトニトリルで１２．０分まで保持；流量：２５ｍＬ／分）によって精製した。この方法で精製すると、１４ｍｇの（９−シン）−９−｛［６−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−１−イル）−５−メチルピリミジン−４−イル］オキシ｝−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸イソプロピルがトリフルオロ酢酸塩として得られた。LCMS (M+H): 440.3.
（実施例３０）
（３Ｓ，４Ｒ）−４−｛［６−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリダジン−５−イル）−５−メチルピリミジン−４−イル］オキシ｝−３−フルオロピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
Figure 2012526097
 （３Ｓ，４Ｒ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（３４ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（０．５ｍＬ）に溶かした撹拌した溶液に、ナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（０．１７ｍＬ、０．１７ｍｍｏｌ、１Ｍテトラヒドロフラン溶液）を室温で加えた。２０分後、この混合物を、５−（６−クロロ−５−メチルピリミジン−４−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリダジン（調製例３２）（３５ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（０．５ｍＬ）に溶かした撹拌した冷（０℃）懸濁液に加えた。得られる溶液を０℃で８０分間撹拌した。冷浴を取り外し、反応液を室温に温めた。室温で５．５時間経過後、反応混合物を水およびブラインで希釈し、酢酸エチル（３×１５ｍＬ）で抽出した。有機抽出物を合わせてブラインで洗浄し、１体積の水で希釈し、乾燥させ（硫酸ナトリウム）、濾過し、濾液を真空中でで濃縮して淡黄色の残渣６０ｍｇとした。この材料を、４０ｇの塩基性アルミナを使用し、２０％のメタノールジクロロメタン溶液を溶離液とするクロマトグラフィーによって精製した。得られる材料をジメチルスルホキシド（１ｍＬ）に溶解させ、逆相ＨＰＬＣ（カラム：Ｗａｔｅｒｓ ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８ １９×１００ｍｍ、５マイクロメートル；移動相Ａ：０．０３％の水酸化アンモニウム水溶液（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：０．０３％の水酸化アンモニウムアセトニトリル溶液（ｖ／ｖ）；勾配：８５％の水／１５％のアセトニトリルから８．５分で線形に０％の水／１００％のアセトニトリル、０％の水／１００％のアセトニトリルで１０．０分まで保持；流量：２５ｍＬ／分）によって精製した。LCMS (M+H): 431.28.
（実施例３１）
（３Ｓ，４Ｒ）−４−｛［６−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリダジン−５−イル）−５−メチルピリミジン−４−イル］オキシ｝−３−フルオロピペリジン−１−カルボン酸１−メチルシクロプロピル
Figure 2012526097
 実施例３１は、（３Ｓ，４Ｒ）−４−｛［６−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリダジン−５−イル）−５−メチルピリミジン−４−イル］オキシ｝−３−フルオロピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルを出発材料とし、実施例１７と同様にして調製した。MS (M+H): 429.2.1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 0.66 (br. s., 2
H) 0.91 (br. s., 2 H) 1.58 (s, 3 H) 1.93 (br. s., 1 H) 2.09 (s, 3 H) 2.17 (d,
J=11.53 Hz, 1 H) 3.19 (br. s., 1 H) 3.41 (br. s., 1 H) 3.52 (t, J=8.40 Hz, 2 H)
3.79 - 4.12 (m, 1 H) 4.14 - 4.35 (m, 3 H) 4.75 - 5.05 (m, 1 H) 5.44 (d, J=14.07
Hz, 1 H) 6.59 (d, J=5.86 Hz, 1 H) 8.44 (s, 1 H) 8.69 (d, J=5.67 Hz, 1 H).
（実施例３２）
（３Ｒ，４Ｓ）−４−｛［６−（５−カルバモイル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−１−イル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝−３−フルオロピペリジン−１−カルボン酸１−メチルシクロプロピル
Figure 2012526097
 ステップＡ：１−（６−（（３Ｒ，４Ｓ）−３−フルオロ−１−（（１−メチルシクロプロポキシ）カルボニル）ピペリジン−４−イルオキシ）ピリミジン−４−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−５−カルボン酸メチル（ラセミ体）
２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−５−カルボン酸メチル（３５ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）および（３Ｒ，４Ｓ）−４−（６−クロロピリミジン−４−イルオキシ）−３−フルオロピペリジン−１−カルボン酸１−メチルシクロプロピル（ラセミ体）（６４．６ｍｇ、０．０２０ｍｍｏｌ）をｔｅｒｔ−ブタノール（１ｍＬ）およびトルエン（１ｍＬ）に溶かした溶液に、炭酸セシウム（１６３ｍｇ）を加えた。混合物を窒素ガス流で脱気した。ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）ジクロリド（１４ｍｇ）を加え、混合物を窒素で数分間再び脱気した。得られる混合物を１８時間還流加熱した（１１５℃）。混合物を室温に冷却し、酢酸エチルで希釈し、混合物を珪藻土で濾過した。濾液を水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濾液を真空中で濃縮した。残渣を、ヘプタンに対して５０％〜９０％の酢酸エチルからなる勾配混合物を溶離液とするシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、１−（６−（（３Ｒ，４Ｓ）−３−フルオロ−１−（（１−メチルシクロプロポキシ）カルボニル）ピペリジン−４−イルオキシ）ピリミジン−４−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−５−カルボン酸メチル（ラセミ体）を淡黄色の固体（８０ｍｇ）として得た。LCMS (M+H): 472.0.
ステップＢ：１−（６−（（３Ｒ，４Ｓ）−３−フルオロ−１−（（１−メチルシクロプロポキシ）カルボニル）ピペリジン−４−イルオキシ）ピリミジン−４−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−５−カルボン酸（ラセミ体）
１−（６−（（３Ｒ，４Ｓ）−３−フルオロ−１−（（１−メチルシクロプロポキシ）カルボニル）ピペリジン−４−イルオキシ）ピリミジン−４−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−５−カルボン酸メチル（ラセミ体）（５０ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフランと水からなる３：１の溶液（２ｍＬ）に溶かした撹拌した溶液に、水酸化リチウム一水和物（１０ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１８時間撹拌した後、溶液がおよそｐＨ２になるまで１Ｎ塩酸水溶液を加えた。沈殿を濾過（ｆｉｌｔｒａｔａｔｉｏｎ）によって収集して、４０ｍｇの１−（６−（（３Ｒ，４Ｓ）−３−フルオロ−１−（（１−メチルシクロプロポキシ）カルボニル）ピペリジン−４−イルオキシ）ピリミジン−４−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−５−カルボン酸（ラセミ体）を白色の固体として得た。この材料を精製せずに後続のステップで使用した。
ステップＣ：（３Ｒ，４Ｓ）−４−｛［６−（５−カルバモイル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−１−イル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝−３−フルオロピペリジン−１−カルボン酸１−メチルシクロプロピル（ラセミ体）
１−（６−（（３Ｒ，４Ｓ）−３−フルオロ−１−（（１−メチルシクロプロポキシ）カルボニル）ピペリジン−４−イルオキシ）ピリミジン−４−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−５−カルボン酸（ラセミ体）（２５ｍｇ、０．０５５ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（２ｍＬ）に溶かした撹拌した溶液に、炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（２５ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）およびピリジン（８．９マイクロリットル、０．１１ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で３０分間撹拌した後、炭酸水素アンモニウム（８．７ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を窒素雰囲気中にて室温で１９時間撹拌した。この反応混合物からの固体を濾過によって収集し、すすいで、真空中で乾燥後、（３Ｒ，４Ｓ）−４−｛［６−（５−カルバモイル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−１−イル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝−３−フルオロピペリジン−１−カルボン酸１−メチルシクロプロピル（ラセミ体）を白色の固体（２０ｍｇ）として得た。LCMS (M+H): 457.1.1H NMR (メタノール-d4) δ 8.71 (d, J =
8.4 Hz, 1H), 8.46 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 7.90 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 6.23 (d, J =
0.8 Hz, 1H), 5.29 - 5.45 (m, 1H), 4.84 - 5.03 (m, 1H), 4.22 (br. S., 1H), 4.07
- 4.14 (m, 2H), 3.94 (br. S., 1H), 3.36 (t, J = 8.6 Hz, 2H), 3.11 (br. S., 2H),
1.87 - 2.02 (m, 2H), 1.51 (s, 3H), 0.81 - 0.91 (m, 2H), 0.58 - 0.68 (m, 2H).
（実施例３３）
４−（｛６−［５−（ジメチルカルバモイル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−１−イル］ピリミジン−４−イル｝オキシ）ピペリジン−１−カルボン酸１−メチルシクロプロピル
Figure 2012526097
 実施例３３は、Ｎ，Ｎ−ジメチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−５−カルボキサミドと４−（６−クロロピリミジン−４−イルオキシ）ピペリジン−１−カルボン酸１−メチルシクロプロピルから、実施例３２、ステップＡと同様にして調製した。未精製材料をジメチルスルホキシド（１ｍＬ）に溶解させ、逆相ＨＰＬＣ（カラム：Ｗａｔｅｒｓ ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８ １９×１００ｍｍ、５マイクロメートル）；移動相Ａ：０．０５％のトリフルオロ酢酸水溶液（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：０．０５％のトリフルオロ酢酸アセトニトリル溶液（ｖ／ｖ）；勾配：８５％の水／１５％のアセトニトリルから８．５分で線形に０％の水／１００％のアセトニトリル、０％の水／１００％のアセトニトリルで１０．０分まで保持；流量：２５ｍＬ／分）によって精製した。LCMS (M+H): 467.3.
本出願では終始、様々な刊行物を参照文献として引用している。それらの刊行物の開示は、その全体が、あらゆる目的で参照により本出願に援用される。
本発明の範囲および精神から逸脱することなく、本発明に様々な変更および変化を添えてよいことは、当業者に明白となろう。本発明の他の実施形態は、本明細書を検討し、本明細書で開示する本発明を実践する中で、当業者に明らかとなろう。本明細書および実施例は、例示的なものにすぎないとみなし、本発明の真の範囲および精神は、以下の特許請求の範囲によって示すものとする。

Claims (22)

  1. 式（Ｉ）の化合物
    Figure 2012526097
     ［式中、
    Ｘは、
    Figure 2012526097
     であり、
    Ｒ１は、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ５または
    Figure 2012526097
     であり、
    Ｒ２は、水素、シアノ、またはメチルであり、
    Ｒ３は、水素、ＯＨ、ハロゲン、シアノ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、Ｃ１〜Ｃ５アルコキシ、またはＣ１〜Ｃ５アルキルであり、
    Ｒ４は、存在しない、または−ＣＯ−ＮＲ８Ｒ９、トリアゾール、テトラゾール、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、ＮＨ２、−ＮＨ−Ｃ１〜Ｃ５アルキル、−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＯ−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ５アルキル、−ＮＨ−ＣＯ−Ｃ１〜Ｃ５アルキル、もしくは−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＯ−Ｃ１〜Ｃ５アルキルであり、
    Ｒ５は、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、またはシクロアルキル部分の１個の炭素原子がメチルもしくはエチルで置換されていてもよいＣ３〜Ｃ６シクロアルキルであり、
    Ｒ６は、ＣＦ３、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、ハロゲン、シアノ、またはＣ３〜Ｃ６シクロアルキルであり、
    Ｒ７は、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、ＮＨ２、または−（ＣＨ２）２−ＯＨであり、
    Ｒ８は、水素またはＣ１〜Ｃ５アルキルであり、
    Ｒ９は、水素、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＯＨ、３−オキセタニル、または３−ヒドロキシシクロブチルであり、
    Ｒ１０は、水素、シアノ、ニトロ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ５アルコキシ、またはＣ１〜Ｃ５アルキルであり、
    Ｒ１１は、水素、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、またはハロゲンであり、
    Ａ１、Ａ２、Ａ３およびＡ４は、それぞれ独立に、ＣＨ、Ｎ−オキシド、またはＮであり、
    但し、
    ｃ）Ａ１、Ａ２、Ａ３およびＡ４の２つ以下が、Ｎであり、
    ｄ）Ａ１、Ａ２、Ａ３およびＡ４の１つ以下が、Ｎ−オキシドである］
    または薬学的に許容できるその塩。
  2. Ｘが
    Figure 2012526097
     である、請求項１に記載の化合物。
  3. Ｘが
    Figure 2012526097
     である、請求項１に記載の化合物。
  4. Ａ１〜Ａ４がフェニル環を形成している、請求項１、２、または３に記載の化合物。
  5. Ａ１〜Ａ４が、Ａ１、Ａ２、Ａ３およびＡ４の１つまたは２つがＮである環を形成している、請求項１、２、または３に記載の化合物。
  6. Ａ１〜Ａ４がピリジル環を形成している、請求項１、２、３または５に記載の化合物。
  7. Ｒ４が存在しないか、または−ＣＯ−ＮＲ８Ｒ９である、請求項１から６のいずれかに記載の化合物。
  8. Ｒ１が−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ５アルキルである、請求項１から６のいずれかに記載の化合物。
  9. Ｒ３がフルオロまたは水素であり、Ｒ２が水素またはシアノである、請求項１から８のいずれかに記載の化合物。
  10. （９−シン）−９−｛［６−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−１−イル）−５−メチルピリミジン−４−イル］オキシ｝−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸１−メチルシクロプロピル；
    （９−アンチ）−９−｛［６−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−１−イル）−５−メチルピリミジン−４−イル］オキシ｝−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸１−エチルシクロプロピル；
    （９−アンチ）−９−｛［６−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−１−イル）−５−メチルピリミジン−４−イル］オキシ｝−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸１−メチルシクロプロピル；
    （３Ｓ，４Ｒ）−４−｛［６−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−１−イル）−５−メチルピリミジン−４−イル］オキシ｝−３−フルオロピペリジン−１−カルボン酸１−メチルシクロプロピル；
    （３Ｒ，４Ｓ）−４−｛［６−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−１−イル）−５−メチルピリミジン−４−イル］オキシ｝−３−フルオロピペリジン−１−カルボン酸１−メチルシクロプロピル；
    ４−｛［６−（５−シアノ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル；
    （３Ｒ，４Ｓ）−４−｛［６−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−１−イル）−５−メチルピリミジン−４−イル］オキシ｝−３−フルオロピペリジン−１−カルボン酸１−メチルシクロプロピル（ラセミ体）；
    ４−｛［６−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−１−イル）−５−メチルピリミジン−４−イル］オキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル；
    （９−アンチ）−９−｛［６−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−１−イル）−５−メチルピリミジン−４−イル］オキシ｝−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸１−メチルシクロブチル；および
    ４−（｛６−［５−（ジメチルカルバモイル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ピリミジン−４−イル｝オキシ）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
    からなる群から選択される化合物または薬学的に許容できるその塩、または薬学的に許容できる共結晶。
  11. 少なくとも１種の薬学的に許容できる賦形剤と混和された、治療有効量で存在する請求項１から１０のいずれかに記載の化合物を含む医薬組成物。
  12. 抗肥満薬および抗糖尿病薬からなる群から選択される少なくとも１種の追加の薬剤をさらに含む、請求項１１に記載の組成物。
  13. 前記抗肥満薬が、ジルロタピド、ミトラタピド、イミプリタピド、Ｒ５６９１８（ＣＡＳ番号４０３９８７）、ＣＡＳ番号９１３５４１−４７−６、ロルカセリン、セチリスタット、ＰＹＹ３−３６、ナルトレキソン、オレオイル−エストロン、オビネピチド、プラムリンチド、テソフェンシン、レプチン、リラグルチド、ブロモクリプチン、オルリスタット、エクセナチド、ＡＯＤ−９６０４（ＣＡＳ番号２２１２３１−１０−３）、およびシブトラミンからなる群から選択される、請求項１２に記載の組成物。
  14. 前記抗糖尿病薬が、メトホルミン、アセトヘキサミド、クロルプロパミド、ジアビネース、グリベンクラミド、グリピジド、グリブリド、グリメピリド、グリクラジド、グリペンチド、グリキドン、グリソラミド、トラザミド、トルブタミド、テンダミスタット、トレスタチン、アカルボース、アジポシン、カミグリボース、エミグリテート、ミグリトール、ボグリボース、プラジミシンＱ、サルボスタチン、バラグリタゾン、シグリタゾン、ダルグリタゾン、エングリタゾン、イサグリタゾン、ピオグリタゾン、ロシグリタゾン、トログリタゾン、エキセンディン３、エキセンディン４、トロダスケミン、レセルバトロール、ヒルチオサール抽出物、シタグリプチン、ビルダグリプチン、アログリプチン、およびサクサグリプチンからなる群から選択される、請求項１２に記載の組成物。
  15. 有効量の請求項１から１０のいずれかに記載の化合物の、その必要がある患者への投与を含む、糖尿病の治療方法。
  16. 治療有効量の請求項１から１０のいずれか一項に記載の化合物を患者に投与するステップを含む、代謝性または代謝関連の疾患、状態、または障害の治療方法。
  17. 高脂血症、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、特発性Ｉ型糖尿病（Ｉｂ型）、成人潜在性自己免疫性糖尿病（ＬＡＤＡ）、早発性２型糖尿病（ＥＯＤ）、若年性非定型糖尿病（ＹＯＡＤ）、若年発症成人型糖尿病（ＭＯＤＹ）、栄養不良関連糖尿病、妊娠糖尿病、冠動脈心疾患、虚血発作、血管形成術後の再狭窄、末梢血管疾患、間欠性跛行、心筋梗塞（たとえば、壊死およびアポトーシス）、異脂肪症、食後脂肪血症、耐糖能障害（ＩＧＴ）状態、空腹時血漿グルコース異常状態、代謝性アシドーシス、ケトーシス、関節炎、肥満、骨粗鬆症、高血圧、うっ血性心不全、左室肥大、末梢動脈疾患、糖尿病性網膜症、黄斑変性、白内障、糖尿病性腎症、糸球体硬化症、慢性腎不全、糖尿病性ニューロパシー、メタボリック症候群、シンドロームＸ、月経前症候群、冠動脈心疾患、狭心症、血栓症、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、一過性脳虚血発作、卒中、血管再狭窄、高血糖、高インスリン血症、高脂血症、高トリグリセリド血症、インスリン抵抗性、グルコース代謝障害、耐糖能障害状態、空腹時血漿グルコース異常状態、肥満、勃起機能不全、皮膚および結合組織の障害、足の潰瘍化および潰瘍性大腸炎、内皮障害および血管伸展性の障害、高アポＢリポタンパク質血症、アルツハイマー病、統合失調症、認知障害、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、ならびに過敏性腸症候群からなる群から選択される状態の治療方法であって、有効量の請求項１から１０のいずれかに記載の化合物の投与を含む方法。
  18. 代謝性または代謝関連の疾患、状態、または障害の治療方法であって、そのような治療の必要がある患者に、
    （ｉ）請求項１３に記載の第一の組成物、および
    （ｉｉ）抗肥満薬および抗糖尿病薬からなる群から選択される少なくとも１種の追加の薬剤と少なくとも１種の薬学的に許容できる賦形剤とを含む第二の組成物
    を含む２種の別個の医薬組成物を投与するステップを含む方法。
  19. 前記第一の組成物と前記第二の組成物が同時に投与される、請求項２０に記載の方法。
  20. 前記第一の組成物と前記第二の組成物が逐次的に、任意の順序で投与される、請求項２０に記載の方法。
  21. Ｇタンパク質共役受容体ＧＰＲ１１９の活性を調節する疾患、状態、または障害を治療するための医薬の製造における、請求項１から１０に記載の化合物の使用。
  22. 糖尿病または前記糖尿病に付随する病的状態を治療するための医薬の調製における、請求項１から１２のいずれかに記載の化合物の使用。
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