JP2006217801A - NEW USE OF COMPOUND HAVING TGFbeta INHIBITORY ACTIVITY - Google Patents

Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a method for efficiently producing an EPC (an endothelial progenitor cell) or an EC (an endothelial cell) and to provide a method for treating ischemic diseases and diseases accompanied with vascular hyperpermeability. <P>SOLUTION: The method for producing the EPC or EC comprises culturing a cell or a cell fraction in a culture medium containing a compound having a TGFβ (a transforming growth factor-β) inhibitory activity. The method for treating the ischemic diseases and a method for ameliorating the vascular permeability in the diseases accompanied with the vascular hyperpermeability comprise administering the compound having the TGFβ inhibitory activity to a subject. <P>COPYRIGHT: (C)2006,JPO&NCIPI

Description

［上記式（Ｉ）中、
Ｘは、ＣＨまたはＮを表し、
Ｚは、−Ｏ−、−ＮＨ−、−Ｓ−または−Ｃ(＝Ｏ)−を表し、
Ｒ^１およびＲ^２は、同一または異なっていてもよく、水素原子、−(ＣＨ_２)ｍ−Ｒ^ａで表し｛ここでＲ^ａは、水素原子、ハロゲン原子、水酸基、飽和もしくは不飽和の３〜６員の炭素環式基もしくは複素環式基、または−ＮＲ^ｂＲ^ｃ（Ｒ^ｂおよびＲ^ｃは、同一または異なっていてもよく、水素原子、または水酸基により置換されていてもよいＣ_１−６アルキル基を表し、Ｒ^ｂとＲ^ｃとは、それらが結合している窒素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員複素環式基を形成していてもよく（この複素環式基は１以上の異種原子をさらに含んでいてもよい）、この複素環式基は、水酸基に置換されていてもよいＣ_１−４アルキル基、または飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基により置換されていてもよい）を表し、ｍは１〜５の整数を表し、かつ、この基におけるアルキル鎖部分−(ＣＨ_２)ｍ−は、水酸基、酸素原子、または−ＯＲ^ｄ基（ここでＲ^ｄはＣ_１−４アルキル基またはＣ_１−４アルキルカルボニル基を表す）により置換されていてもよい｝、
Ａは、下式(a1)〜(a4)からなる群より選択されるいずれかの基を表す：
(1) 式(a1)の基：
【化２３】

（上記式(a1)において、
Ｒ^３〜Ｒ^６は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
ハロゲン原子、
Ｃ_１−６アルキル基、
ハロゲン原子またはフェニル基により置換されていてもよいＣ_１−１０アルコキシ基、
Ｃ_２−６アルケニルカルボニルオキシ基、
Ｃ_１−４アルキルカルボニル基、または
ハロゲン原子により置換されていてもよいフェニル基を表し、
Ｒ^３とＲ^４、Ｒ^４とＲ^５、およびＲ^５とＲ^６とはそれぞれ、それらが結合している炭素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員炭素環式基または複素環式基を形成してもよく、
Ｒ^７は、
水素原子、
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基により置換されていてもよいＣ_１−８アルキル基、
フェニル基により置換されていてもよいＣ_２−６アルケニル基、
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員の炭素環式基もしくは複素環式基（この炭素環式基または複素環式基はＣ_１−４アルキル基により置換されていてもよい）、または
下記式(a1-i)または(a1-ii)、のいずれかの基を表し：
【化２４】

（上記式において、
Ｒ^８は、
フェニル基により置換されていてもよいＣ_１−１０アルキル基、
Ｃ_２−８アルケニル基、または
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基（この炭素環式基はハロゲン原子により置換されていてもよい）を表し、
Ｒ^９およびＲ^１０は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
Ｃ_１−６アルキル基、
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基（この炭素環式基はハロゲン原子により置換されていてもよい）、または
ハロゲン原子により置換されていてもよいナフチルを表し、
Ｒ^９とＲ^１０とは、それらが結合している窒素原子と一緒になって飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基を形成していてもよく（この複素環式基は１以上の異種原子をさらに含んでいてもよい）、この複素環式基は、水酸基に置換されていてもよいＣ_１−４アルキル基、または飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基により置換されていてもよい）、
(2) 式(a2)の基：
【化２５】

（上記式(a2)において、
Ｒ^３〜Ｒ^６は、上記式(a1)と同じであり、
Ｒ^１１およびＲ^１２は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
Ｃ_１−６アルキル基、
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基（この炭素環式基はハロゲン原子により置換されていてもよい）、または
ハロゲン原子により置換されていてもよいナフチルを表し、
Ｒ^１１とＲ^１２とは、それらが結合している窒素原子と一緒になって飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基を形成していてもよく（この複素環式基は１以上の異種原子をさらに含んでいてもよい）、この複素環式基は、水酸基に置換されていてもよいＣ_１−４アルキル基、または飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基により置換されていてもよい）、
(3) 式(a3)の基：
【化２６】

（上記式(a3)において、
Ｒ^１３〜Ｒ^１６は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
ハロゲン原子、
Ｃ_１−６アルキル基、
Ｃ_１−８アルコキシ基、
Ｃ_１−４アルキルカルボニル基、または
フェニルカルボニル基を表し、
Ｒ^１３とＲ^１４、およびＲ^１４とＲ^１５とはそれぞれ、それらが結合している炭素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員炭素環式基または複素環式基を形成してもよい）、および
(4) 式(a４)の基：
【化２７】

（上記式(a4)において、
Ｒ^１７〜Ｒ^２１は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
ハロゲン原子、
水酸基もしくはフェニル基により置換されていてもよいＣ_１−６アルキル基、
Ｃ_１−８アルコキシ基、
Ｃ_１−４アルキル基、Ｃ_１−４アルコキシ基、酸素原子もしくはフェニル基により置換されていてもよいＣ_２−６アルケニル基、
Ｃ_１−４アルキル基により置換されていてもよいフェニルカルボニル基、
フェニル基により置換されていてもよいアミノ基、
ニトロ基、または
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員の炭素環式基もしくは複素環式基（この炭素環式基または複素環式基はＣ_１−６アルキル基により置換されていてもよい）を表し、
Ｒ^１７とＲ^１８、または、Ｒ^２０とＲ^２１とは、それらが結合している炭素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員炭素環式基または複素環式基を形成してもよく、
Ｒ^１８とＲ^１９、または、Ｒ^１９とＲ^２０とは、それらが結合している炭素原子と一緒になって、ハロゲン原子、Ｃ_１−４アルキル基、Ｃ_１−４アルキルカルボニル基、Ｃ_１−６アルコキシカルボニル基または酸素原子により置換されていてもよい、飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基もしくは複素環式基を形成してもよく、この炭素環式基もしくは複素環式基はさらに他の飽和または不飽和の５または６員の炭素環式基または複素環式基と縮合して、式(a4)の６員炭素環と共に三環式基を形成してもよい）］。
【００４８】
式（Ｉ）の化合物において、基または基の一部としての「アルキル」、「アルコキシ」、および「アルケニル」という語は、基が直鎖または分枝鎖のアルキル基、アルコキシ基、およびアルケニル基を意味する。
【００４９】
また、式（Ｉ）の化合物において、基または基の一部としての「アルキルカルボニル」、「アルコキシカルボニル」、および「アルケニルカルボニルオキシ」という語は、基が直鎖または分枝鎖のアルキルカルボニル基、アルコキシカルボニル基、およびアルケニルカルボニルオキシ基を意味する。
【００５０】
従って、式（Ｉ）の化合物において、例えば、基または基の一部としての「Ｃ_１−１０アルキル」および「Ｃ_１−１０アルコキシ」という場合は、基が直鎖または分枝鎖の炭素数１〜１０のアルキル基およびアルコキシ基を意味する。
【００５１】
式（Ｉ）の化合物において、「Ｃ_１−１０アルキル」は、好ましくはＣ_１−８アルキル、より好ましくはＣ_１−６アルキル、さらに好ましくはＣ_１−４アルキルである。「Ｃ_１−８アルキル」は、好ましくはＣ_１−６アルキル、より好ましくはＣ_１−４アルキルである。「Ｃ_１−６アルキル」は、好ましくはＣ_１−４アルキル、より好ましくはＣ_１−２アルキルである。「Ｃ_１−４アルキル」は、好ましくはＣ_１−２アルキルである。
【００５２】
式（Ｉ）の化合物において、「Ｃ_１−１０アルコキシ」は、好ましくはＣ_１−８アルコキシ、より好ましくはＣ_１−６アルコキシ、さらに好ましくはＣ_１−４アルコキシである。「Ｃ_１−８アルコキシ」は、好ましくはＣ_１−６アルコキシ、より好ましくはＣ_１−４アルコキシである。「Ｃ_１−４アルコキシ」は、好ましくはＣ_１−２アルコキシである。
【００５３】
式（Ｉ）の化合物において、「Ｃ_２−８アルケニル」は、好ましくはＣ_２−６アルケニル、より好ましくはＣ_２−４アルケニルである。「Ｃ_２−６アルケニル」は、好ましくはＣ_２−４アルケニルである。
【００５４】
式（Ｉ）の化合物において、「Ｃ_１−４アルキルカルボニル」は、好ましくはＣ_１−２アルキルカルボニルである。
【００５５】
式（Ｉ）の化合物において、「Ｃ_１−６アルコキシカルボニル」は、好ましくはＣ_１−４アルコキシカルボニル、より好ましくはＣ_１−２アルコキシカルボニルである。
【００５６】
式（Ｉ）の化合物において、「Ｃ_２−６アルケニルカルボニルオキシ」は、好ましくはＣ_２−４アルケニルカルボニルオキシである。
【００５７】
上記Ｃ_１−１０アルキルの例としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｓ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチル、ｎ−ノニル、ｎ−デシル等が挙げられる。
【００５８】
上記Ｃ_１−１０アルコキシの例としては、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、ｉ−プロポキシ、ｎ−ブトキシ、ｉ−ブトキシ、ｓ−ブトキシ、ｔ−ブトキシ等が挙げられる。
【００５９】
上記Ｃ_２−６アルケニルの例としては、アリル基、ブテニル基、ペンテニル基、ヘキセニル基が挙げられる。
【００６０】
上記Ｃ_１−４アルキルカルボニルの例としては、アルデヒド基、メチルカルボニル、エチルカルボニル、ｎ−プロピルカルボニル、イソプロピルカルボニル、ｎ−ブチルカルボニル、ｉ−ブチルカルボニル、ｓ−ブチルカルボニルが挙げられる。
【００６１】
上記Ｃ_１−６アルコキシカルボニルの例としては、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、ｎ−プロポキシカルボニル、ｉ−プロポキシカルボニル、ｎ−ブトキシカルボニル、ｉ−ブトキシカルボニル、ｓ−ブトキシカルボニル、ｔ−ブトキシカルボニル等が挙げられる。
【００６２】
上記Ｃ_２−６アルケニルカルボニルオキシの例としては、アリルカルボニルオキシ、ブテニルカルボニルオキシ、ペンテニルカルボニルオキシ、ヘキセニルカルボニルオキシが挙げられる。
【００６３】
式（Ｉ）の化合物において「により置換されていてもよいアルキル」とは、アルキル上の１またはそれ以上の水素原子が１またはそれ以上の置換基（同一または異なっていてもよい）により置換されたアルキルおよび非置換アルキルを意味する。置換基の最大数はアルキル上の置換可能な水素原子の数に依存して決定できることは当業者に明らかであろう。これらはアルキル基以外であって置換可能な基を有する基、例えば、アルコキシ、アルケニル、フェニル、フェニルカルボニル、ナフチル等についても同様である。
【００６４】
式（Ｉ）の化合物において、「ハロゲン原子」とは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、またはヨウ素原子を意味する。
【００６５】
式（Ｉ）の化合物において、「不飽和の炭素環」および「不飽和の複素環」とは、二重結合等の不飽和結合を１以上有する炭素環および複素環を意味する。
【００６６】
式（Ｉ）の化合物において「飽和または不飽和の５または６員の炭素環式基」は、好ましくは飽和または不飽和の６員炭素環であることができる。飽和または不飽和の５または６員炭素環の例としては、フェニル、シクロペンチル、およびシクロヘキシルが挙げられる。
【００６７】
式（Ｉ）の化合物において「飽和または不飽和の５または６員の複素環式基」は、飽和または不飽和の５または６員の単環性複素環式基を意味する。すなわち、飽和または不飽和の５または６員複素環は、１〜３個、好ましくは１または２個の異種原子を含み、残りの環員原子が炭素原子である複素環であることができる。複素環式基は、酸素原子、窒素原子および硫黄原子から選択される異種原子を１個以上含む。複素環基の例としては、ピリジル、フリル、チエニル、ピロリル、ピリダジル、ピリミジル、モルホリニル、モルホリノ、イソオキサゾリル、オキサゾリル、チアゾリル、イミダゾイル、イソチアゾリルおよびピラジルが挙げられる。
【００６８】
また、この複素環式基は、必要に応じて、Ｃ_１−６アルキル基、水酸基に置換されていてもよいＣ_１−４アルキル基、または飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基により置換されていてもよい。
【００６９】
飽和または不飽和の３〜６員炭素環式基は、好ましくは、飽和または不飽和の３〜５員炭素環式基、より好ましくは飽和または不飽和の３員炭素環式基であることができる。
【００７０】
飽和または不飽和の３〜６員複素環式基は、酸素原子、窒素原子、および硫黄原子から選択される異種原子（好ましくは酸素原子）を１個以上含む。好ましくは、飽和または不飽和の３〜６員複素環式基は、異種原子を１または２個含み、残りの環員原子が炭素原子である複素環式基であることができる。飽和または不飽和の３〜６員複素環は、好ましくは、飽和または不飽和の３〜５員複素環式基、より好ましくは飽和または不飽和の３員複素環式基であることができる。
【００７１】
飽和または不飽和の炭素環式基および複素環式基は、他の飽和または不飽和の炭素環式基もしくは複素環式基と縮合して二環式基、好ましくは飽和または不飽和の９〜１２員の二環性炭素環式基または複素環式基、を形成していてもよい。このような二環式基としては、ナフチル、キノリル、１，２，３，４−テトラヒドロキノリル、１，４−ベンゾオキサニル、インダニル、インドリル、および１，２，３，４−テトラヒドロナフチルが挙げられる。
【００７２】
本発明の好ましい実施態様によれば、Ｒ^１およびＲ^２は、同一または異なっていてもよく、Ｃ_１−６アルキル基、および下式(i)〜(iv)の基からなる群より選択されるいずれかの基を表す：
【化２８】

（これらの式において、
式(i)におけるアルキル鎖の部分は、水酸基、または−ＯＲ^ｅ基（ここでＲ^ｅはＣ_１−４アルキル基またはＣ_１−４アルキルカルボニル基を表す）により置換されていてもよく（好ましくはこのアルキル鎖の部分は、水酸基により置換されているか、または置換されておらず）、
Ｒ^２２とＲ^２３、またはＲ^２４とＲ^２５は、同一または異なっていてもよく、水素原子、または水酸基により置換されていてもよいＣ_１−６アルキル基を表し、
Ｒ^２２とＲ^２３、またはＲ^２４とＲ^２５は、それらが結合している窒素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員複素環式基を形成していてもよく（この複素環式基は１以上の異種原子をさらに含んでいてもよい）、この複素環式基は、水酸基に置換されていてもよいＣ_１−４アルキル基、または飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基により置換されていてもよく、
Ｈａｌはハロゲン原子を表し、
ｎは１〜４の整数を表す）。
【００７３】
本発明の一つの好ましい実施態様によれば、Ｒ^１およびＲ^２の少なくとも一方が、式(i)〜(iv)からなる群より選択されるいずれかの基を表す場合には、Ａは、前記式(a1)〜(a3)のいずれかの基を表し、より好ましくは式(a1)基を表す。
【００７４】
本発明のより好ましい実施態様によれば、Ｒ^１およびＲ^２は、同一または異なっていてもよく、Ｃ_１−６アルキル基、および下式(i-a)〜(iv)の基からなる群より選択されるいずれかの基を表す：
【００７５】
【化２９】

（これらの式において、
Ｒ^２２とＲ^２３、またはＲ^２４とＲ^２５は、同一または異なっていてもよく、水素原子、または水酸基により置換されていてもよいＣ_１−６アルキル基を表し、
Ｒ^２２とＲ^２３、またはＲ^２４とＲ^２５は、それらが結合している窒素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員複素環式基を形成していてもよく（この複素環式基は１以上の異種原子をさらに含んでいてもよい）、この複素環式基は、水酸基に置換されていてもよいＣ_１−４アルキル基、または飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基により置換されていてもよく、
ｎ１は２〜４の整数を表す）。
【００７６】
Ｒ^１およびＲ^２の少なくともいずれか一方が、前記(iv)である場合には、好ましくは、Ｒ^２４とＲ^２５は、それらが結合している窒素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員複素環式基を形成し（この複素環式基は１以上の異種原子をさらに含んでいてもよい）、例えば、モルホリンを形成することができる。
【００７７】
Ｒ^１およびＲ^２の少なくともいずれか一方が、Ｃ_１−６アルキル基である場合には、Ｃ_１−６アルキルは好ましくはＣ_１−４アルキル、より好ましくはメチルまたはエチル、最も好ましくはメチルである。
【００７８】
Ａが式(a1)である場合において、該式(a1)におけるＲ^３〜Ｒ^６は、同一または異なっていてもよく、水素原子、ハロゲン原子、Ｃ_１−６アルキル基、ハロゲン原子またはフェニル基により置換されていてもよいＣ_１−１０アルコキシ基、Ｃ_２−６アルケニルカルボニルオキシ基、Ｃ_１−４アルキルカルボニル基、またはハロゲン原子により置換されていてもよいフェニル基を表し、
Ｒ^３とＲ^４、Ｒ^４とＲ^５、およびＲ^５とＲ^６とはそれぞれ、それらが結合している炭素原子と一緒になって飽和または不飽和（好ましくは不飽和）の５または６員炭素環式基または複素環式基を形成してもよい。このように、Ｒ^３とＲ^４、Ｒ^４とＲ^５、およびＲ^５とＲ^６とが炭素環式基または複素環式基を形成する場合には、Ｒ^３とＲ^４、Ｒ^４とＲ^５、およびＲ^５とＲ^６のいずれか１つの組み合わせの位置において環式基を形成しても良いが、Ｒ^３とＲ^４、Ｒ^４とＲ^５、およびＲ^５とＲ^６のいずれか２以上の位置において、それぞれ環式基を形成してもよい。この場合、式(a1)の炭素環と共に、三環式基を形成することができる。
【００７９】
本発明の一つの好ましい実施態様によれば、該式(a1)におけるＲ^３〜Ｒ^６の少なくとも１つは水素原子以外の基である。
【００８０】
本発明の別の好ましい実施態様によれば、Ｒ^１およびＲ^２がＣ_１−６アルキル基である場合に、該式(a1)におけるＲ^３〜Ｒ^６の少なくとも１つは水素原子以外の基である。
【００８１】
Ａが式(a1)である場合において、該式(a1)におけるＲ^７は、水素原子、飽和の５もしくは６員炭素環式基により置換されていてもよいＣ_１−８アルキル基、フェニル基により置換されていてもよいＣ_２−６アルケニル基、飽和もしくは不飽和の５もしくは６員の炭素環式基もしくは複素環式基（この炭素環式基または複素環式基はＣ_１−４アルキル基により置換されていてもよい）、または式(a1-i)または(a1-ii)の基、のいずれかの基を表す。
ここで、飽和もしくは不飽和の５もしくは６員の炭素環式基もしくは複素環式基は、好ましくは、Ｃ_１−４アルキル基により置換されていてもよいフェニル基、飽和の５または６員の炭素環式基、または、不飽和の５または６員の複素環式基を表す。
【００８２】
好ましくは、該式(a1)中のＲ^７は、飽和もしくは不飽和の５もしくは６員の炭素環式基もしくは複素環式基（この炭素環式基または複素環式基はＣ_１−４アルキル基により置換されていてもよい）、式(a1-i)の基、または式(a1-ii)の基のいずれかの基を表す。
【００８３】
別の好ましい実施態様によれば、式(a1)におけるＲ^７は、フェニル基により置換されていてもよいＣ_２−６アルケニル基、または式(a1-i)または(a1-ii)の基のいずれかの基を表す。
【００８４】
本発明の別の好ましい実施態様によれば、Ｒ^１およびＲ^２がＣ_１−６アルキル基である場合に、該式(a1)におけるＲ^７は、式(a1-i)または(a1-ii)の基のいずれかの基を表す。
【００８５】
Ａが式(a1)である場合において、該式(a1)におけるＲ^８は、好ましくは、非置換Ｃ_１−８アルキル基、フェニル基により置換されたＣ_１−４アルキル基、Ｃ_２−６アルケニル基、またはハロゲン原子により置換されていてもよいフェニル基を表す。
【００８６】
Ａが式(a1)である場合において、該式(a1)におけるＲ^９およびＲ^１０は、好ましくは、同一または異なっていてもよく、水素原子、Ｃ_１−６アルキル基、飽和の５または６員炭素環式基、ハロゲン原子により置換されていてもよいフェニル基、またはナフチル基を表し、
Ｒ^９とＲ^１０とは、それらが結合している窒素原子と一緒になって飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基を形成していてもよく（この複素環式基は１以上の異種原子をさらに含んでいてもよい）、この複素環式基は、メチル基、ヒドロキシメチル基、または飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基により置換されていてもよい。
【００８７】
Ａが式(a2)である場合において、Ｒ^１１およびＲ^１２は、好ましくは、同一または異なっていてもよく、水素原子、Ｃ_１−６アルキル基、飽和の５または６員炭素環式基、またはフェニル基を表し、
Ｒ^１１とＲ^１２とは、それらが結合している窒素原子と一緒になって飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基を形成していてもよい（この複素環式基は１以上の異種原子をさらに含んでいてもよい）、この複素環式基は、メチル基、ヒドロキシメチル基、または飽和の５もしくは６員複素環式基により置換されていてもよい。
【００８８】
より好ましくは、Ｒ^１１およびＲ^１２は、それらが結合している窒素原子と一緒になって飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基を形成し（この複素環式基は１以上の異種原子をさらに含んでいてもよい）、この複素環式基は、メチル基、ヒドロキシメチル基、または飽和の５もしくは６員複素環式基により置換されていてもよい。Ｒ^１１およびＲ^１２は、例えば、飽和の６員複素環式基を形成することができる。
【００８９】
Ａが式(a3)である場合において、好ましくは、Ｒ^１３およびＲ^１４が水素原子であって、Ｒ^１５およびＲ^１６が、同一または異なっていてもよく、水素原子、ハロゲン原子、Ｃ_１−４アルキル基、Ｃ_１−８アルコキシ基、Ｃ_１−３アルキルカルボニル基、またはフェニルカルボニル基を表す。
より好ましくは、Ｒ^１３およびＲ^１４が水素原子であって、Ｒ^１５が、Ｃ_１−４アルキル基を表し、Ｒ^１６が、水素原子、ハロゲン原子、Ｃ_１−４アルキル基、Ｃ_１−８アルコキシ基、またはＣ_１−３アルキルカルボニル基を表す。
【００９０】
ここでＲ^１６がＣ_１−３アルキルカルボニル基を表す場合には、Ｒ^１６は−Ｃ(＝Ｏ)Ｒ^３６で表すことができる。このとき、Ｒ^３６はメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、またはｉ−プロピル基であることができ、好ましくはＲ^３４はメチル基である。
【００９１】
Ａが式(a4)である場合において、好ましくは、Ｒ^１７、Ｒ^１８、Ｒ^２０、およびＲ^２１は、前記した通りであって、かつ、Ｒ^１９が、
Ｃ_１−４アルキル基、Ｃ_１−４アルコキシ基、酸素原子もしくはフェニル基により置換されていてもよいＣ_２−６アルケニル基、
ニトロ基、または
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員の炭素環式基もしくは複素環式基（この炭素環式基または複素環式基はＣ_１−６アルキル基により置換されていてもよい）を表すか、または
Ｒ^１８とＲ^１９、または、Ｒ^１９とＲ^２０とが、それらが結合している炭素原子と一緒になって、ハロゲン原子、Ｃ_１−６アルコキシカルボニル基または酸素原子により置換されていてもよい、飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基もしくは複素環式基を形成する（この炭素環式基もしくは複素環式基はさらに他の飽和または不飽和の５または６員の炭素環式基または複素環式基と縮合して、式(a4)の６員炭素環と共に三環式基を形成してもよい）。
【００９２】
本発明のより好ましい実施態様によれば、上記の場合に、Ｒ^１７、Ｒ^１８、Ｒ^２０、およびＲ^２１は、
水素原子、
ハロゲン原子、
水酸基もしくはフェニル基により置換されていてもよいＣ_１−６アルキル基、
Ｃ_１−８アルコキシ基、
Ｃ_１−４アルキル基、Ｃ_１−４アルコキシ基、酸素原子もしくはフェニル基により置換されていてもよいＣ_２−６アルケニル基、
Ｃ_１−６アルキル基により置換されていてもよいフェニル基、
フェニル基により置換されていてもよいアミノ基（ここでフェニル基は水酸基、ハロゲン原子、Ｃ_１−４アルキル基によりさらに置換されていてもよい）、
ニトロ基、または、
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員の炭素環式基もしくは複素環式基を表し、
Ｒ^１７とＲ^１８、または、Ｒ^２０とＲ^２１とは、それらが結合している炭素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員炭素環式基または複素環式基を形成してもよい。
【００９３】
Ｒ^１７またはＲ^２１が置換されていてもよいＣ_２−６アルケニル基である場合には、好ましくは、これらは−Ｃ＝Ｃ(Ｒ^２６)(Ｒ^２７)で表すことができる。ここで、Ｒ^２６およびＲ^２７は、同一または異なっていてもよく、水素原子、Ｃ_１−４アルキル基、Ｃ_１−４アルコキシ基、Ｃ_１−４アルコキシカルボニル基、またはフェニル基を表し、より好ましくは、Ｒ^２６およびＲ^２７は、同一または異なっていてもよく、水素原子、Ｃ_１−２アルコキシカルボニル基、またはフェニル基を表す。
【００９４】
Ｒ^１７またはＲ^２１がフェニル基により置換されていてもよいアミノ基である場合には、好ましくは、これらは下記式で表すことができる
【化３０】

（上記式中、
Ｒ^２８〜Ｒ^３２は、同一または異なっていてもよく、水素原子、水酸基、ハロゲン原子、またはＣ_１−４アルキル基を表し、より好ましくは、Ｒ^２８〜Ｒ^３２は全て水素原子を表す）。
【００９５】
Ｒ^１８とＲ^１９、または、Ｒ^１９とＲ^２０とが、それらが結合している炭素原子と一緒になって、炭素環式基または複素環式基を形成することができる場合には、式(a4)の炭素環と共に、二環式基、例えばナフチル、インドール、ベンズイミダゾール、キノリン等の基を形成することができる。
例えば、該二環式基がインドール環の形態である場合、式(a4)は下記式で表すことができる。
【化３１】

（上記式中、
Ｒ^３３〜Ｒ^３５は、同一または異なっていてもよく、水素原子、水酸基、ハロゲン原子、Ｃ_１−２アルキルカルボニル、Ｃ_１−２アルコキシカルボニル基またはＣ_１−４アルキル基を表し、より好ましくは、Ｒ^３５は水素原子を表す）。
【００９６】
ハロゲン原子、Ｃ_１−６アルコキシカルボニル基または酸素原子により置換されていてもよい、飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基もしくは複素環式基を形成する（この炭素環式基もしくは複素環式基はさらに他の飽和または不飽和の５または６員の炭素環式基または複素環式基と縮合して、式(a4)の６員炭素環と共に三環式基を形成してもよい）。
【００９７】
本発明の好ましい実施態様によれば、Ｚは、−Ｏ−、−ＮＨ−または−Ｃ(＝Ｏ)−を表し、より好ましくは−Ｏ−、または−Ｃ(＝Ｏ)−を表す。
【００９８】
本発明の好ましい実施態様によれば、
ＸがＣＨを表し、かつＺが−Ｏ−を表す場合には、Ａは式(a1)〜(a4)の基から選択され、
ＸがＮを表し、かつＺが−Ｏ−を表す場合には、Ａは式(a1)であり、または
ＸがＣＨを表し、かつＺが−Ｃ(＝Ｏ)−を表す場合には、Ａは式(a1)である。
【００９９】
本発明の一つの好ましい実施態様によれば、式（Ｉ）の化合物は、下記式（１００）の化合物であることができる。
【化３２】

［上記式中、
Ｘは、ＣＨまたはＮを表し、
Ｚは、−Ｏ−、−ＮＨ−、−Ｓ−または−Ｃ(＝Ｏ)−を表し、
Ｒ^１０１およびＲ^１０２は、同一または異なっていてもよく、
Ｃ_１−６アルキル基、または
式(i-a)〜(iv)の基からなる群より選択されるいずれかの基を表し：
Ｒ^１０３〜Ｒ^１０６は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
ハロゲン原子、
Ｃ_１−６アルキル基、
ハロゲン原子またはフェニル基により置換されていてもよいＣ_１−１０アルコキシ基、
Ｃ_２−６アルケニルカルボニルオキシ基、
Ｃ_１−４アルキルカルボニル基、または
ハロゲン原子により置換されていてもよいフェニル基を表し、
Ｒ^１０３とＲ^１０４、Ｒ^１０４とＲ^１０５、およびＲ^１０５とＲ^１０６とはそれぞれ、それらが結合している炭素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員炭素環式基または複素環式基を形成してもよく、
Ｒ^１０８は、
フェニル基により置換されていてもよいＣ_１−１０アルキル基、
Ｃ_２−８アルケニル基、または
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基（この炭素環式基はハロゲン原子により置換されていてもよい）を表す］。
【０１００】
本発明の一つのより好ましい実施態様によれば、式（１００）において、Ｒ^１０３〜Ｒ^１０６の少なくとも一つは、水素原子以外の基であり、かつ、Ｒ^１０８は、非置換Ｃ_１−８アルキル基、フェニル基により置換されたＣ_１−４アルキル基、Ｃ_２−８アルケニル基、またはハロゲン原子により置換されていてもよいフェニル基を表す。
【０１０１】
本発明の一つの好ましい実施態様によれば、式（Ｉ）の化合物は、下記式（２００）の化合物であることができる。
【化３３】

［上記式中、
Ｘは、ＣＨまたはＮ、好ましくはＣＨを表し、
Ｚは、−Ｏ−、−ＮＨ−、−Ｓ−または−Ｃ(＝Ｏ)−、好ましくは−Ｏ−を表し、
Ｒ^２０１およびＲ^２０２は、同一または異なっていてもよく、
Ｃ_１−６アルキル基、または
式(i-a)〜(iv)の基からなる群より選択されるいずれかの基を表し、
Ｒ^２０３〜Ｒ^２０６は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
ハロゲン原子、
Ｃ_１−６アルキル基、
ハロゲン原子またはフェニル基により置換されていてもよいＣ_１−１０アルコキシ基、
Ｃ_２−６アルケニルカルボニルオキシ基、
Ｃ_１−４アルキルカルボニル基、または
ハロゲン原子により置換されていてもよいフェニル基を表し、
Ｒ^２０３とＲ^２０４、Ｒ^２０４とＲ^２０５、およびＲ^２０５とＲ^２０６とはそれぞれ、それらが結合している炭素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員炭素環式基または複素環式基を形成してもよく、
Ｒ^２０９およびＲ^２１０は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
Ｃ_１−６アルキル基、
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基（この炭素環式基はハロゲン原子により置換されていてもよい）、または
ハロゲン原子により置換されていてもよいナフチルを表し、
Ｒ^２０９とＲ^２１０とは、それらが結合している窒素原子と一緒になって飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基を形成していてもよく（この複素環式基は１以上の異種原子をさらに含んでいてもよい）、この複素環式基は、水酸基に置換されていてもよいＣ_１−４アルキル基、または飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基により置換されていてもよい］。
【０１０２】
本発明の一つのより好ましい実施態様によれば、式（２００）において、
Ｒ^２０３〜Ｒ^２０６の少なくとも一つが水素原子以外の基であり、かつ
Ｒ^２０９とＲ^２１０とが、その少なくとも一方が水素原子であって、他方が水素原子、Ｃ_１−４アルキル基、飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基（この炭素環式基はハロゲン原子により置換されていてもよい）、またはナフチルを表すか、または
Ｒ^２０９とＲ^２１０とが、それらが結合している窒素原子と一緒になって飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基を形成する（この複素環式基は１以上の異種原子をさらに含んでいてもよく、水酸基に置換されていてもよいＣ_１−４アルキル基、または飽和の５もしくは６員複素環式基により置換されていてもよい）］。
【０１０３】
本発明の一つの好ましい実施態様によれば、式（Ｉ）の化合物は、下記式（３００）の化合物であることができる。
【化３４】

［上記式中、
Ｘは、ＣＨまたはＮ、好ましくはＣＨを表し、
Ｚは、−Ｏ−、−ＮＨ−、−Ｓ−または−Ｃ(＝Ｏ)−、好ましくは−Ｏ−を表し、
Ｒ^３０１およびＲ^３０２は、同一または異なっていてもよく、
Ｃ_１−６アルキル基、または
式(i-a)〜(iv)の基からなる群より選択されるいずれかの基を表し、
Ｒ^３０３〜Ｒ^３０６は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
ハロゲン原子、
Ｃ_１−６アルキル基、
ハロゲン原子またはフェニル基により置換されていてもよいＣ_１−１０アルコキシ基、
Ｃ_２−６アルケニルカルボニルオキシ基、
Ｃ_１−４アルキルカルボニル基、または
ハロゲン原子により置換されていてもよいフェニル基を表し、
Ｒ^３０３とＲ^３０４、Ｒ^３０４とＲ^３０５、およびＲ^３０５とＲ^３０６とはそれぞれ、それらが結合している炭素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員炭素環式基または複素環式基を形成してもよく、
Ｒ^３１１およびＲ^３１２は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
Ｃ_１−６アルキル基、
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基（この炭素環式基はハロゲン原子により置換されていてもよい）、または
ハロゲン原子により置換されていてもよいナフチルを表し、
Ｒ^３１１とＲ^３１２とは、それらが結合している窒素原子と一緒になって飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基を形成していてもよく（この複素環式基は１以上の異種原子をさらに含んでいてもよい）、この複素環式基は、水酸基に置換されていてもよいＣ_１−４アルキル基、または飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基により置換されていてもよい］。
【０１０４】
本発明の一つのより好ましい実施態様によれば、式（３００）において、
Ｒ^３０３〜Ｒ^３０６の少なくとも一つが水素原子以外の基であり、かつ
Ｒ^３１１とＲ^３１２とが、それらが結合している窒素原子と一緒になって飽和もしくは不飽和の５もしくは６員複素環式基を形成する（この複素環式基は、１以上の異種原子をさらに含んでいてもよく、かつ、水酸基に置換されていてもよいＣ_１−４アルキル基、または飽和の５もしくは６員複素環式基により置換されていてもよい）。
【０１０５】
本発明の一つの好ましい実施態様によれば、式（Ｉ）の化合物は、下記式（４００）の化合物であることができる。
【化３５】

［上記式中、
Ｘは、ＣＨまたはＮ、好ましくはＣＨを表し、
Ｚは、−Ｏ−、−ＮＨ−、−Ｓ−または−Ｃ(＝Ｏ)−、好ましくは−Ｏ−を表し、
Ｒ^４０１およびＲ^４０２は、同一または異なっていてもよく、
Ｃ_１−６アルキル基、または
式(i-a)〜(iv)の基からなる群より選択されるいずれかの基を表し、
Ｒ^４１３およびＲ^４１４は、水素原子を表し、
Ｒ^４１５は、ハロゲン原子、Ｃ_１−６アルキル基、Ｃ_１−８アルコキシ基、Ｃ_１−４アルキルカルボニル基、またはフェニルカルボニル基を表し、
Ｒ^４１６は、水素原子、ハロゲン原子、Ｃ_１−６アルキル基、Ｃ_１−８アルコキシ基、Ｃ_１−４アルキルカルボニル基、またはフェニルカルボニル基を表す］。
【０１０６】
本発明の一つのより好ましい実施態様によれば、式（４００）において、
Ｒ^４１５は、Ｃ_１−６アルキル基、さらに好ましくはメチル基、エチル基、特に好ましくはメチル基を表し、
Ｒ^４１６は、水素原子、ハロゲン原子、またはＣ_１−４アルキルカルボニル基を表す。
【０１０７】
本発明の一つの好ましい実施態様によれば、式（Ｉ）の化合物は、下記式（５００）の化合物であることができる。
【化３６】

［上記式中、
Ｘは、ＣＨまたはＮ、好ましくはＣＨを表し、
Ｚは、−Ｏ−、−ＮＨ−、−Ｓ−または−Ｃ(＝Ｏ)−、好ましくは−Ｏ−を表し、
Ｒ^５０１およびＲ^５０２は、同一または異なっていてもよく、
Ｃ_１−６アルキル基、または
式(i-a)〜(iv)の基からなる群より選択されるいずれかの基を表し、
Ｒ^５１７、Ｒ^５１８、Ｒ^５２０および、Ｒ^５２１は、同一または異なっていてもよく、
水素原子、
ハロゲン原子、
水酸基もしくはフェニル基により置換されていてもよいＣ_１−６アルキル基、
Ｃ_１−８アルコキシ基、
Ｃ_１−４アルキル基、Ｃ_１−４アルコキシ基、酸素原子もしくはフェニル基により置換されていてもよいＣ_２−６アルケニル基、
Ｃ_１−４アルキル基により置換されていてもよいフェニルカルボニル基、
フェニル基により置換されていてもよいアミノ基、
ニトロ基、または
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員の炭素環式基もしくは複素環式基（この炭素環式基または複素環式基はＣ_１−６アルキル基により置換されていてもよい）を表し、
Ｒ^５１７とＲ^５１８、または、Ｒ^５２０とＲ^５２１とは、それらが結合している炭素原子と一緒になって飽和または不飽和の５または６員炭素環式基または複素環式基を形成してもよく、
Ｒ^５１９は、
Ｃ_１−４アルキル基、Ｃ_１−４アルコキシ基、酸素原子もしくはフェニル基により置換されていてもよいＣ_２−６アルケニル基、
ニトロ基、または
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員の炭素環式基もしくは複素環式基（この炭素環式基または複素環式基はＣ_１−６アルキル基により置換されていてもよい）を表すか、または
Ｒ^５１８とＲ^５１９、または、Ｒ^５１９とＲ^５２０とが、それらが結合している炭素原子と一緒になって、ハロゲン原子、Ｃ_１−６アルコキシカルボニル基または酸素原子により置換されていてもよい、飽和もしくは不飽和の５もしくは６員炭素環式基もしくは複素環式基を形成する（この炭素環式基もしくは複素環式基はさらに他の飽和または不飽和の５または６員の炭素環式基または複素環式基と縮合して、Ｒ^５１７基が結合している６員炭素環と共に三環式基を形成してもよい）］。
【０１０８】
本発明の一つのより好ましい実施態様によれば、式（５００）において、
Ｒ^５１９は、
Ｃ_１−４アルキル基、Ｃ_１−４アルコキシ基、酸素原子もしくはフェニル基により置換されていてもよいＣ_２−６アルケニル基、
ニトロ基、または
飽和もしくは不飽和の５もしくは６員の炭素環式基もしくは複素環式基（この炭素環式基または複素環式基はＣ_１−６アルキル基により置換されていてもよい）を表す。
【０１０９】
式（Ｉ）の化合物は、塩の形態とすることができ、これを治療および医薬用途に用いる場合には薬学上許容される塩とすることができる。好ましい例としては、ナトリウム塩、カリウム塩またはカルシウム塩のようなアルカリ金属またはアルカリ土類金属塩、フッ化水素酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩のようなハロゲン化水素酸塩、硝酸塩、過塩素酸塩、硫酸塩、リン酸塩などの無機酸塩、メタンスルホン酸塩、トリフルオロメタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩のような低級アルキルスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩のようなアリールスルホン酸塩、フマル酸、コハク酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、シュウ酸塩、マレイン酸塩、酢酸塩、リンゴ酸塩、乳酸塩、アスコルビン酸塩のような有機酸塩、およびグリシン塩、フェニルアラニン塩、グルタミン酸塩、アスパラギン酸塩のようなアミノ酸塩などが挙げられる。
【０１１０】
式（Ｉ）の化合物は、溶媒和物とすることができる。このような溶媒和物としては、水和物、アルコール和物（例えば、メタノール和物、エタノール和物）、およびエーテル和物（例えば、ジエチルエーテル和物）が挙げられる。
【０１１１】
式（Ｉ）のＴＧＦβ阻害化合物の製造
式（Ｉ）の化合物は、例えば、スキーム１からスキーム１３に従って製造できる。式（Ｉ）の化合物の合成に必要な出発物質は市販されているか、または常法によって容易に製造できる。なお、スキーム中のＲ^１〜Ｒ^３６は上記において定義された内容と同義である。
【０１１２】
下記スキーム中において、中間体であるキノロン誘導体は、例えば、ＷＯ９７／１７３２９号等に従って合成することができる。
また、４−クロロキノリン誘導体は、例えば、Org. Synth. Col. Vol.3, 272 (1955), Acta Chim. Hung., 112, 241 (1983) またはＷＯ９８／４７８７３号に記載されているような慣用方法に従って合成することができる。
４−クロロキナゾリン誘導体は、J. Am. Chem. Soc., 68, 1299 (1946), J. Am. Chem. Soc., 68, 1305 (1946) や小竹監修、大有機化学、１７巻、１５０頁、朝倉書店（１９６７年発行）に記載されているような慣用方法に従って合成することができる。
【０１１３】
式（Ｉ）において、Ａが式(a4）の基を表す化合物は、例えば、下記スキーム１およびスキーム２に従って製造することができる。
スキーム１：
【化３７】

【０１１４】
スキーム２：
【化３８】

【０１１５】
目的とする４−フェノキシキノリン誘導体、４−アニリノキノリン誘導体、または相当するキナゾリン誘導体は、適当な溶媒（例えばｏ−ジクロロベンゼン）中または無溶媒中において、フェノール誘導体または相当するアニリン誘導体に対して、４−クロロキノリン誘導体または相当するキナゾリン誘導体を作用させることによって合成することができる。なお上記スキーム１において塩素化剤としては塩化ホスホリルが挙げられる。
【０１１６】
式（Ｉ）において、Ａが式(a1）の基を表す化合物（特にオルトケトン類の化合物）は、例えば、下記スキーム３に従って製造することができる。
スキーム３：
【化３９】

【０１１７】
このスキームにおいては、下記のような３通りの経路により、目的とする式（Ｉ）の化合物を合成することができる：
（ｉ） ４−クロロキノリン誘導体または相当するキナゾリン誘導体に対して、適当な溶媒（例えばｏ−ジクロロベンゼン）中または無溶媒中において、フェノール誘導体または相当するアニリン誘導体を作用させることにより、目的とする式（Ｉ）の化合物を合成することができる（上記工程(1)）；
（ii） ４−クロロキノリン誘導体または相当するキナゾリン誘導体に対して、適当な溶媒（例えばｏ−ジクロロベンゼン）中または無溶媒中において、オルトブロモフェノール誘導体または相当するオルトブロモアニリン誘導体と反応させ（上記工程(2)）、次いで、金属塩基（例えばｎ−ブチルリチウム）を用いてブロム部位を極性転換し、発生したアニオンと酸クロリドを反応させる（上記工程(3)）ことにより、目的とする式（Ｉ）の化合物を製造することができる；
（iii） ４−クロロキノリン誘導体または相当するキナゾリン誘導体に対して、適当な溶媒（例えばｏ−ジクロロベンゼン）中または無溶媒中において、オルトヒドロキシベンズアルデヒド誘導体または相当するオルトアミノベンズアルデヒド誘導体と反応させる（上記工程(4)）。次いで、そこにアルキル化剤（例えばメチルマグネシウムブロミド）を反応させて（上記工程(5)）、生成したアルコールを酸化する（上記工程(6)）ことにより、目的とする式（Ｉ）の化合物を製造することができる。
【０１１８】
式（Ｉ）において、Ａが式(a1）の基を表す化合物（特にアミド化合物）は、例えば、下記スキーム４に従って製造することができる。
スキーム４：
【化４０】

【０１１９】
４−クロロキノリン誘導体または相当するキナゾリン誘導体に対して、適当な溶媒（例えばｏ−ジクロロベンゼン）中または無溶媒中において、オルトヒドロキシ安息香酸エステル誘導体または相当するオルトアミノ安息香酸エステル誘導体を作用させ、エステル型の式（Ｉ）の化合物を製造することができる（上記工程(1)）。次いで、該エステル型の化合物をアルカリを用いて加水分解し（上記工程(2)）、縮合剤（例えば１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩）を用いてアミンと反応させる（上記工程(3)）ことにより、目的とする式（Ｉ）の化合物を合成することができる。
【０１２０】
式（Ｉ）において、７位に所望の置換基を有する化合物は、例えば、下記スキーム５に従って製造することができる。
スキーム５：
【化４１】

【０１２１】
用意した７−ベンジルオキシ−４−クロロキノリン誘導体または相当するキナゾリン誘導体に対して、適当な溶媒（例えばｏ−ジクロロベンゼン）中または無溶媒中において、フェノール誘導体あるいは相当するアニリン誘導体を作用させる（上記工程(1)）。次いで、この得られた中間体３に、酸を用いてベンジル基を脱保護して（上記工程(2)）、得られた中間体４を塩基存在下アルキル化剤（例えば１ブロモ−２−クロロエタン）と反応させる（上記工程(3)）ことにより、目的とする式（Ｉ）の化合物を合成することができる。
【０１２２】
式（Ｉ）において Ｚが−Ｃ(＝Ｏ)−である化合物は、例えば、下記スキーム６に従って製造することができる。
スキーム６：
【化４２】

【０１２３】
用意した４−キノロン誘導体または相当するキナゾロン誘導体に対して、臭素化剤（例えば臭化ホスホリル）を作用させる（上記工程(1)）。次いで、金属塩基（例えばｎ−ブチルリチウム）を用いてブロム部位を極性転換して、発生したアニオンと酸クロリドを反応させる（上記工程(2)）ことにより、目的とする式（Ｉ）の化合物を製造することができる。
【０１２４】
式（Ｉ）において、Ａが式(a4）の基を表し、かつそのＲ^２１が置換されていてもよいアルケニル基である化合物は、例えば、下記スキーム７に従って製造することができる。
スキーム７：
【化４３】

【０１２５】
４−クロロキノリン誘導体または相当するキナゾリン誘導体に対して、適当な溶媒（例えばｏ−ジクロロベンゼン）中または無溶媒中において、オルトヒドロキシベンズアルデヒド誘導体または相当するオルトアミノベンズアルデヒド誘導体を作用させ（上記工程(1)）、次いで、リンイリドと反応させる（上記工程(2)）ことにより、目的とする式（Ｉ）の化合物を合成することができる。
【０１２６】
式（Ｉ）において、Ａが式(a2）の基を表す化合物は、例えば、下記スキーム８に従って製造することができる。
スキーム８：
【化４４】

【０１２７】
４−クロロキノリン誘導体または相当するキナゾリン誘導体に対して、適当な溶媒（例えばｏ−ジクロロベンゼン）中または無溶媒中において、オルトヒドロキシベンズアルデヒド誘導体または相当するオルトアミノベンズアルデヒド誘導体を作用させて（上記工程(1)）、次いで、アミン（Ｒ^１１Ｒ^１２ＮＨ）と反応させ、イミン形成後に還元する（上記工程(2)）ことにより、目的とする式（Ｉ）の化合物を合成することができる。
【０１２８】
式（Ｉ）において、Ａが式(a4）の基を表し、かつその置換基としてフェニル基により置換されたアミノ基を有する化合物は、例えば、下記スキーム９に従って製造することができる。
スキーム９：
【化４５】

【０１２９】
４−クロロキノリン誘導体または相当するキナゾリン誘導体に対して、適当な溶媒（例えばｏ−ジクロロベンゼン）中または無溶媒中において、オルトニトロフェノール誘導体または相当するオルトニトロアニリン誘導体を作用させ（上記工程(i)）、次いで、ニトロ基を還元し（上記工程(ii)）、フェニルボロン酸誘導体と反応させる（上記工程(iii)）ことにより、目的とする式（Ｉ）の化合物を合成することができる。
【０１３０】
式（Ｉ）において、Ａが式(a4）の基を表し、かつその置換基として窒素を含む５員環複素環式基を有する化合物は、例えば、下記スキーム１０に従って製造することができる。
スキーム１０：
【化４６】

【０１３１】
４−クロロキノリン誘導体または相当するキナゾリン誘導体に対して、適当な溶媒（例えばｏ−ジクロロベンゼン）中または無溶媒中において、５−ヒドロキシインドール誘導体または相当する５−アミノインドール誘導体を作用させ（上記工程(i)）、次いでそのアミノ基を、アルキル化剤（例えばヨウ化メチル）を用いてアルキル化するか、またはアシル化剤（例えば塩化アセチル）を用いてアシル化することにより（上記工程(ii)）、目的とする式（Ｉ）の化合物を合成することができる。
【０１３２】
式（Ｉ）において、Ａが式(a4）の基を表す化合物は、例えば、下記スキーム１１によっても製造することができる。
スキーム１１：
【化４７】

【０１３３】
４−クロロキノリン誘導体または相当するキナゾリン誘導体に対して、適当な溶媒（例えばｏ−ジクロロベンゼン）中または無溶媒中において、３−ヒドロキシ−６−ニトロベンズアルデヒド誘導体または相当する５−アミノ−２−ニトロベンズアルデヒド誘導体を作用させ（上記工程(i)）、次いでそのホルミル基を還元する（上記工程(ii)）。次に、得られた化合物のニトロ基を還元して（上記工程(iii)）、そこにカルボニル化剤（例えばトリホスゲン）を作用させる（上記工程(iv)）ことにより、目的とする化合物を合成することができる。
【０１３４】
式（Ｉ）において、Ａが式(a1）の基を表す化合物は、例えば、下記スキーム１２によっても製造することができる。
スキーム１２：
【化４８】

【０１３５】
アニソール誘導体を、ルイス酸存在下酸クロリドと作用させ（上記工程(i)）、そのメトキシ基を脱保護する（上記工程(ii)）。次いで、これを、４−クロロキノリン誘導体または相当するキナゾリン誘導体に対して、適当な溶媒（例えばｏ−ジクロロベンゼン）中または無溶媒中において作用させる（上記工程(iii)）ことにより、目的とする化合物を合成することができる。
【０１３６】
式（Ｉ）において、Ａがピリジン環、すなわち式(a3）の基を表す化合物は、例えば、下記スキーム１３に従って製造することができる。
スキーム１３：
【化４９】

【０１３７】
４−クロロキノリン誘導体または相当するキナゾリン誘導体に対して、適当な溶媒（例えばｏ−ジクロロベンゼン）中または無溶媒中において、３−ヒドロキシピリジン誘導体または相当する３−アミノピリジン誘導体を作用させる（上記工程(i)）ことにより、目的とする化合物を合成することができる。
【０１３８】
あるいは、４−クロロキノリン誘導体または相当するキナゾリン誘導体に対して、適当な溶媒（例えばｏ−ジクロロベンゼン）中または無溶媒中において、３−ヒドロキシ−２−ピリジンカルボアルデヒド誘導体または相当する３−アミノ−２−ピリジンカルボアルデヒド誘導体を作用させ（上記工程(ii)）、次いでアルキル化剤（例えばメチルマグネシウムブロミド）を反応させる（上記工程(iii)）。次に、得られたアルコール性化合物を酸化する（上記工程(iv)）ことにより、目的とする化合物を合成することができる。
【０１３９】
式（ＩＩ）のＴＧＦβ阻害化合物
本発明の他の好ましい態様によれば、ＴＧＦβ阻害化合物は、国際公開第０１／７２７３７号パンフレットにおいてＴＧＦβ阻害活性を有することが確認されている下記の式（ＩＩ）で示される化合物またはその塩とされる：
【０１４０】
【化５０】

【０１４１】
｛上記式中、Ｒ_１は、ハロ、−Ｏ−Ｃ_１−６アルキル、−Ｓ−Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_１−６ハロアルキル、−Ｏ−（ＣＨ_２）_ｎ−Ｐｈ、−Ｓ−（ＣＨ_２）_ｎ−Ｐｈ、シアノ、フェニルおよびＣＯ_２Ｒ（ここで、Ｒは水素またはＣ_１−６アルキルであり、ｎは０、１、２または３である）からなる群から選択される１以上の置換基で置換されていてもよいナフチルまたはフェニルであるか、あるいはＲ_１は５〜７員の芳香環または非芳香環（ここで、該環はＮ、ＯおよびＳから独立に選択されるヘテロ原子を３個まで含んでいてもよい）と縮合したフェニルであり；
Ｒ_２はＨ、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_１−６アルコキシ、フェニル、ＮＨ（ＣＨ_２）_ｎ−Ｐｈ、ＮＨ−Ｃ_１−６アルキル、ハロ、またはアルコキシであり；
Ｒ_３はＣＯＯＨ、テトラゾール、ＣＮ、ＮＯ_２、ＯＨ、−Ｓ−Ｃ_１−６アルキル、−ＳＯ−Ｃ_１−６アルキル、−Ｏ−Ｃ_１−６アルキル、ＳＯＮＨ_２、ＣＨＯ、ＣＨ_２ＯＨ、（ＣＨ_２）_ｎＮＨ_２、ＣＯＮＨＯＲ’、Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＣＯ_２Ｒ’、Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＣＯＮＨＲ’、ＣＯＮＨＲ’、（ＣＨ_２）_ｎＣＯ_２Ｒ’、または（ＣＨ_２）_ｎ−ＣＯＮＨＲ’（ここで、Ｒ’は水素またはＣ_１−６アルキルであり、ｎは０、１、２または３である ）であり；かつ、
Ｘ_１およびＸ_２の一方はＮまたはＣＲ”であり、他方はＮＲ”またはＣＨＲ”（ここでＲ”は水素、Ｃ_１−６アルキル、またはＣ_３−７シクロアルキルである）であるか、あるいはＸ_１およびＸ_２の一方がＮまたはＣＲ”であるとき、他方はＳまたはＯであってもよい｝。
【０１４２】
本発明の好ましい実施態様によれば、上記式（ＩＩ）の化合物としては、Ｒ_１が、ハロ、−Ｏ−Ｃ_１−６アルキル、−Ｓ−Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_１−６アルキル、−Ｏ−（ＣＨ_２）_ｎ−Ｐｈ、−Ｓ−（ＣＨ_２）_ｎ−Ｐｈ、シアノ、フェニルおよびＣＯ_２Ｒ（ここで、Ｒは水素またはＣ_１−６アルキルであり、ｎは０、１、２または３である）からなる群から選択される１以上の置換基で置換されていてもよいナフチルまたはフェニルであるか、あるいはＲ_１が５〜７員の芳香環または非芳香環（ここで、該環はＮ、ＯおよびＳから独立に選択されるヘテロ原子を２個まで含んでいてもよい）と縮合したフェニルであり；
Ｒ_２がＨ、ＮＨ（ＣＨ_２）_ｎ−ＰｈまたはＮＨ−Ｃ_１−６アルキルであり；かつ
Ｒ_３がＣＯ_２Ｈ、ＣＯＮＨ_２、ＣＮ、ＮＯ_２、Ｃ_１−６アルキルチオ、ＳＯ_２−Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_１−６アルコキシ、ＳＯＮＨ_２、ＣＯＮＨＯＨ、ＮＨ_２、ＣＨＯ、ＣＨ_２ＯＨ、ＣＨ_２ＮＨ_２、またはＣＯ_２Ｒ（ここで、Ｒは水素またはＣ_１−６アルキルである）である化合物は除かれる。
【０１４３】
式（ＩＩ）の点線で示されている二重結合は、互変体環型の化合物を表す。Ｘ_１またはＸ_２のいずれかが炭素であるとき、この二重結合は炭素またはヘテロ原子のいずれかに対するものであり得ると理解される。Ｘ_１およびＸ_２の両者が炭素であるとき、この二重結合はＸ_１またはＸ_２のいずれかに対するものであり得る。Ｘ_１およびＸ_２の両者がヘテロ原子であるとき、この二重結合は置換されていないヘテロ原子に対するものである。
【０１４４】
好ましくは、Ｒ_１は置換されていてもよいナフチルまたはフェニルである。より好ましくは、Ｒ_１は、ハロ、Ｃ_１−６アルコキシ、Ｃ_１−６アルキルチオおよびフェニルからなる群から選択される１以上の置換基で置換されていてもよいフェニルであるか、あるいはＲ_１は５〜７員の芳香環または非芳香環（ここで、該環は、Ｎ、ＯおよびＳから独立に選択されるヘテロ原子を２個まで含んでいてもよい）と縮合したフェニル（＝Ｏにより置換されていてもよい）であり、例えば、Ｒ_１は、ベンゾ［１，３］ジオキソリル、２，３−ジヒドロベンゾ［１，４］ジオキシニル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、キノキサリニル、ベンゾ［１，２，５］オキサジアゾリル、ベンゾ［１，２，５］チアジアゾリル、［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジル、ジヒドロベンゾフラニル、ベンゾ［１，４］オキサジニル−３−オンまたはベンゾオキサゾリル−２−オンを表す。
【０１４５】
好ましくは、Ｒ_２は水素以外のものである。Ｒ_２が水素以外であるとき、それはピリジル環の窒素に対してオルトに位置するのが好ましい。Ｒ_２は、好ましくはメチルである。
【０１４６】
好ましくは、Ｒ_３はＣＯ_２Ｈ、ＣＯＮＨ_２、ＣＯＮＨＯＨ、ＣＨ_２ＯＨ、ＣＮまたはテトラゾールである。
【０１４７】
好ましくは、Ｘ_１およびＸ_２の一方はＮまたはＣＲ”であり、他方はＮＲ”またはＣＨＲ’であり、ここで、Ｒ”は水素、Ｃ_１−６アルキルまたはＣ_３−７シクロアルキルである（ただし、Ｘ_１およびＸ_２の少なくとも一方はＮまたはＮＲ”である）か、あるいはＸ_１およびＸ_２の一方がＮであり、他方がＯである。より好ましくは、Ｘ_１およびＸ_２の一方はＮであり、他方はＮＲ”である。
【０１４８】
好ましくは各Ｒ”は水素である。
【０１４９】
式（ＩＩ）の化合物は、好ましくは８００未満、より好ましくは６００未満の分子量を有する。
【０１５０】
式（ＩＩ）の具体的化合物としては、以下の化合物およびその塩が挙げられる：
４−（４−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル−５−ピリジン−２−イル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）フェノール、
４−（４−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル−５−ピリジン−２−イル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−Ｎ−メチル−ベンズアミド、
４−（４−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル−５−ピリジン−２−イル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−Ｎ−メトキシ−ベンズアミド、
２−｛４−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル−２−［４−（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェニル］−１Ｈ−イミダゾール−５−イル｝−ピリジン、
［４−（４−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル−５−ピリジン−２−イル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−フェノキシ］−酢酸、
４−［４−（４−フルオロ−３−メトキシフェニル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］ベンゾニトリル、
４−［４−（４−フルオロ−３−メトキシフェニル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］ベンズアミド、
４−［４−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］ベンゾニトリル、
４−［４−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］ベンズアミド、
４−［４−ベンゾ［１，２，５］オキサジアゾール−５−イル−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］ベンゾニトリル、
４−［４−ベンゾ［１，２，５］オキサジアゾール−５−イル−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］ベンズアミド、
４−［４−（６−メトキシナフタレン−２−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］ベンゾニトリル、
４−［４−（６−メトキシナフタレン−２−イル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］ベンズアミド、
４−［４−ベンゾ［１，２，５］チアジアゾール−５−イル−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］ベンゾニトリル、
４−［４−ベンゾ［１，２，５］チアジアゾール−５−イル−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］ベンズアミド、
４−［４−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］ベンゾニトリル、
４−［４−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］ベンズアミド、
６−［２−（４−シアノフェニル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル］−キノキサリン、および
６−［２−（４−カルボキシアミドフェニル）−５−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル］−キノキサリン。
【０１５１】
式（ＩＩ）の化合物の安定な塩としては、限定されるものではないが、塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩、二リン酸塩、臭化水素酸塩、および硝酸塩などの無機酸との塩、またはリンゴ酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、パルミチン酸塩、サリチル酸塩、およびステアリン酸塩などの有機酸との塩が挙げられる。治療または医薬用途においては、これらの塩は薬学上許容されるものとすることが好ましい。
【０１５２】
式（ＩＩ）の化合物のいくつかは水性溶媒および有機溶媒などの溶媒から結晶化または再結晶させることができる。このような場合、溶媒和物を形成してもよい。前記溶媒和物には、水和物ならびに凍結乾燥などの過程で生じ得る種々の水分量を含んだ化合物をはじめとする化学量論溶媒和物が含まれる。治療または医薬用途においては、これらの溶媒和物は薬学上許容されるものとすることが好ましい。
【０１５３】
式（ＩＩ）の化合物の幾つかは、光学異性体、例えばジアステレオ異性体およびあらゆる比率での異性体混合物（例えば、ラセミ混合物）の形態で存在し得る。本発明では、このような総ての形態、特に純粋な異性体を用いることができる。種々の異性体は、常法によりあるものを他のものから分離または分割することもでき、あるいはいずれかの所定の異性体を従来の合成法または立体特異的または不斉合成により得ることもできる。
【０１５４】
式（ＩＩ）の化合物は医薬組成物としての使用が意図されることから、実質的に純粋な形態とすることが好ましく、例えば、少なくとも６０重量％の純度、より好ましくは少なくとも７５重量％の純度、さらに好ましくは少なくとも８５重量％の純度、さらに好ましくは少なくとも９８重量％の純度とされる。式（ＩＩ）の化合物の、医薬組成物で用いられるより純粋な形態を調製するために、純度の低い化合物調製物を用いてもよく、このような化合物調製物は、好ましくは少なくとも１重量％、より好ましくは少なくとも５重量％、さらに好ましくは１０〜５９重量％の式（ＩＩ）の化合物またはその誘導体を含んでいなければならない。
式（ＩＩ）の化合物において「Ｃ_１−６アルキル」とは、単独であれ、より大きな基、例えばＣ_１−６アルコキシの一部であれ、その鎖長が限定されない限り、限定されるものではないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチルおよびｔｅｒｔ−ブチルをはじめとする、１〜６個の炭素原子の直鎖または分枝鎖の基を意味する。
【０１５５】
式（ＩＩ）の化合物において、Ｃ_１−６ハロアルキル基は１以上のハロ原子、ＣＦ_３をはじめとする特定のＣ_１−６ハロアルキル基を含んでもよい。
【０１５６】
式（ＩＩ）の化合物において「ハロ」または「ハロゲン」とは、塩素、フッ素、ヨウ素および臭素元素に由来する基を意味するのに互換的に用いる。
【０１５７】
式（ＩＩ）の化合物において「シクロアルキル」とは、限定されるものではないが、シクロプロピル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルをはじめとする、好ましくは炭素３〜７個の環式基を意味するのに用いる。
【０１５８】
式（ＩＩ）の化合物において「アリール」とは、５〜１４員の置換または非置換芳香環、または限定されるものではないがフェニル、ナフチルをはじめ、二環もしくは三環を含む環構造を意味するのに用いる。
【０１５９】
式（ＩＩ）のＴＧＦβ阻害化合物の製造
式（ＩＩ）のＴＧＦβ阻害化合物は、国際公開第０１／７２７３７号パンフレットに記載の方法に従って製造することができる。
【０１６０】
【実施例】
以下に実施例を示して本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に記載の態様に限定されるものではない。
【０１６１】
例１：ＴＧＦβ阻害化合物の製造
化合物１：
４−［４−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル−５−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ベンズアミド
【０１６２】
【化５１】

国際公開第０１／７２７３７号パンフレットの「Example 17」に記載されている方法に従って、表題の化合物を合成した。
【０１６３】
化合物２：
｛４−［４−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル−５−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−フェニル｝−メタノール
【０１６４】
【化５２】

【０１６５】
１−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル−２−（６−メチル−ピリジン−２−イル）エタン−１，２−ジオン（２．０４ｇ）、テレフタルアルデヒド酸メチル（１０ｍｌ）、酢酸アンモニウム（３．０８ｇ）をＴＨＦ／メタノール（１０ｍｌ／２ｍｌ）に溶解し、６０℃にて１８時間撹拌した。室温に冷却後、減圧下にて溶媒を留去し、残渣に炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した後、酢酸エチル層を水および飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下にて溶媒を留去し、得られた残渣をクロロホルム−メタノール系のシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することにより、４−［４−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル−５−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］安息香酸メチルを得た（１．７２ｇ、収率５６％）。
【０１６６】
４−［４−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル−５−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］安息香酸メチル（１．７２ｇ）をＴＨＦ（２０ｍｌ）に溶解し、−７８℃に冷却し、１Ｍ ＤＩＢＡＬ溶液（２０ｍｌ）をゆっくり加えた。−７８℃にて１時間撹拌した後、反応液に水を加えた。酢酸エチルで抽出した後、酢酸エチル層を水および飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下にて溶媒を留去し、得られた残渣をクロロホルム−メタノール系のシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することにより、表題の化合物を得た（１．５８ｇ、収率９９％）。
【０１６７】
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，４００ＭＨｚ）：δ２．４７（ｓ，３Ｈ），４．６３（ｓ，２Ｈ），５．９３（ｓ，２Ｈ），６．８０（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８９（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．０６−７．０９（ｍ，２Ｈ），７．２５−７．２９（ｍ，３Ｈ），７．３６（ｍ，１Ｈ），７．８０（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ）；質量分析値（ＥＳＩ−ＭＳ，ｍ／ｚ）： ３８６（Ｍ＋１）^＋
【０１６８】
化合物３：
１−［２−（６，７−ジメトキシキノリン−４−イルオキシ）−４，５−ジメチルフェニル］−１−エタノン
【０１６９】
【化５３】

【０１７０】
４−クロロ−６，７−ジメトキシキノリン（１００ｍｇ）、４，５−ジメチル−２−ヒドロキシアセトフェノン（２２０ｍｇ）、４−ジメチルアミノピリジン（１６４ｍｇ）をｏ−ジクロロベンゼン（６ｍｌ）に懸濁し、１２０℃にて２４時間撹拌した。室温に冷却後、反応液に水を加え、酢酸エチルで抽出した後、酢酸エチル層を水および飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下にて溶媒を留去し、得られた残渣をアセトン−ヘキサン系のカラムクロマトグラフィーで精製することにより、表題の化合物を得た（３４ｍｇ、収率２２％）。
【０１７１】
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，４００ＭＨｚ）：δ２．２２（ｓ，３Ｈ）， ２．２６（ｓ，３Ｈ）， ２．４０（ｓ，３Ｈ）， ３．９７（ｓ，３Ｈ）， ３．９８（ｓ，３Ｈ）， ６．３３（ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１Ｈ），６．８５（ｓ，１Ｈ），７．３７（ｓ，１Ｈ），７．４８（ｓ，１Ｈ），７．６５（ｓ，１Ｈ），８．４１（ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１Ｈ）；質量分析値（ＥＳＩ−ＭＳ，ｍ／ｚ）：３５２（Ｍ＋１）^＋
【０１７２】
化合物４：
４−［（２−ヨード−６−メチル−３−ピリジル）オキシ］−６，７−ジメトキシキノリン
【０１７３】
【化５４】

【０１７４】
４−クロロ−６，７−ジメトキシキノリン（２２９ｍｇ）、３−ヒドロキシ−２−ヨード−６−メチルピリジン（４８６ｍｇ）、４−ジメチルアミノピリジン（３９０ｍｇ）をｏ−ジクロロベンゼン（５ｍｌ）に懸濁し、１４０℃にて一晩撹拌した。室温に冷却後、アセトン−クロロホルム系のカラムクロマトグラフィーで精製することにより、表題の化合物を得た（４７ｍｇ、収率１１％）。
【０１７５】
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，４００ＭＨｚ）：δ２．６２（ｓ，３Ｈ），４．０６（ｓ，３Ｈ），４．０７（ｓ，３Ｈ），６．３５（ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１Ｈ），７．１９（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．３１（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．４６（ｓ，１Ｈ），７．５８（ｓ，１Ｈ），８．５１（ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１Ｈ）；質量分析値（ＥＳＩ−ＭＳ，ｍ／ｚ）：４２３（Ｍ＋１）^＋
【０１７６】
化合物５：
１−｛２−［７−（２−イミダゾール−１−イルエトキシ）−６−メトキシキノリン−４−イルオキシ］−４，５−ジメチルフェニル｝エタノン
【０１７７】
【化５５】

【０１７８】
７−ベンジルオキシ−４−クロロ−６−メトキシキノリン（１．５０ｇ）、２−ヒドロキシ−４，５−ジメチルアセトフェノン（３．６３ｇ）、４−ジメチルアミノピリジン（２．７１ｇ）をｏ−ジクロロベンゼン（３０ｍｌ）に懸濁し、１２０℃にて一晩撹拌した。室温に冷却後、反応液に水を加え、クロロホルムで抽出した後、クロロホルム層を水および飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下にて溶媒を留去し、得られた残渣をアセトン−ヘキサン系の薄層クロマトグラフィーで精製することにより、１−［２−（７−ベンジルオキシ−６−メトキシキノリン−４−イルオキシ）−４，５−ジメチルフェニル］エタノンを得た（１．１０ｇ、収率３７％）。
【０１７９】
１−［２−（７−ベンジルオキシ−６−メトキシキノリン−４−イルオキシ）−４，５−ジメチルフェニル］エタノン（１．１０ｇ）をメタンスルホン酸（０．８５ｍｌ）とトリフルオロ酢酸（１０ｍｌ）の混合溶液に懸濁し、７０℃にて１．０時間撹拌した。減圧下にて溶媒を留去し、得られた残渣に水を加え、炭酸水素ナトリウム粉末で中和した後、クロロホルムで抽出した。次いで、クロロホルム層を水および飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下にて溶媒を留去し、得られた残渣をアセトン−ヘキサン系のカラムクロマトグラフィーで精製することにより、１−［２−（７−ヒドロキシ−６−メトキシキノリン−４−イルオキシ）−４，５−ジメチルフェニル］エタノン（１５０ｍｇ）および１−ブロモ−２−クロロエタン（７００ｍｇ）を得た（収率８３％）。
【０１８０】
１−［２−（７−ヒドロキシ−６−メトキシキノリン−４−イルオキシ）−４，５−ジメチルフェニル］エタノン（１５０ｍｇ）、１−ブロモ−２−クロロエタン（１９１ｍｇ）、炭酸カリウム（３０７ｍｇ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（６ｍｌ）に懸濁し、室温にて一晩撹拌した。反応液に水を加え、酢酸エチルで抽出した後、酢酸エチル層を水および飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下にて溶媒を留去し、得られた残渣をアセトン−ヘキサン系の薄層クロマトグラフィーで精製することにより、１−｛２−［７−（２−クロロエトキシ）−６−メトキシキノリン−４−イルオキシ］−４，５−ジメチルフェニル｝エタノンを得た（１２２ｍｇ、収率６８％）。
【０１８１】
１−｛２−［７−（２−クロロエトキシ）−６−メトキシキノリン−４−イルオキシ］−４，５−ジメチルフェニル｝エタノン（５２ｍｇ）、イミダゾール（４９ｍｇ）、炭酸カリウム（９０ｍｇ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２ｍｌ）に懸濁し、８０℃にて一晩撹拌した。室温に冷却後、反応液に水を加え、酢酸エチルで抽出した後、酢酸エチル層を水および飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下にて溶媒を留去し、得られた残渣をメタノール−クロロホルム系の薄層クロマトグラフィーで精製することにより、表題の化合物を得た（２９ｍｇ、収率５２％）。
【０１８２】
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３−ｄ_１，４００ＭＨｚ）：δ２．２２（ｓ，３Ｈ），２．２５（ｓ，３Ｈ），２．３９（ｓ，３Ｈ），３．９５（ｓ，３Ｈ），４．３５（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，２Ｈ），４．４４（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，２Ｈ），６．３２（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），６．８５（ｓ，１Ｈ），７．００（ｓ，１Ｈ），７．０７（ｓ，１Ｈ），７．２９（ｓ， １Ｈ），７．４９（ｓ，１Ｈ），７．６３（ｍ，２Ｈ），８．４０（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ）；質量分析値（ＥＳＩ−ＭＳ，ｍ／ｚ）： ４３２（Ｍ^＋＋１）
【０１８３】
例２：化合物１〜５のＴＧＦβ阻害活性
J. Boil. Chem., 273, 21145-21152 (1998)に記載の方法に準じて、化合物１〜５のＴＧＦβシグナル抑制作用を評価した。
【０１８４】
具体的には、ルシフェラーゼ遺伝子の上流に、プロモーターとしてＴＧＦβシグナル伝達因子であるＳｍａｄの結合配列をタンデムに４個繋げたものをレポーター遺伝子（(SBE)4-Luc）として用いた。このレポーター遺伝子を、ヒト肺ガン上皮細胞（A549）（ATCCより入手可能）に導入して、安定的に発現可能な細胞株を構築した。
【０１８５】
この細胞に、被験化合物と、ＴＧＦβ−１（２ｎｇ／ｍｌ）とを添加して４時間培養した。なおここで被験化合物としては、前記例で合成した本発明による化合物をそれぞれ使用した。培養後、細胞のルシフェラーゼ活性を化学発光法（Steady Glo(商標） Luciferase assay system, プロメガ）により測定した。
【０１８６】
同様にして、ＴＧＦβのみを添加して細胞を培養した場合と、ＴＧＦβおよび被験化合物のいずれも添加しないで培養した場合（コントロール）とについてもルシフェラーゼ活性を測定した。
【０１８７】
これらの測定結果に基づいて、下記の式に従ってＴＧＦβ阻害率（％）を算出した。
【０１８８】
ＴＧＦβ阻害率（％）＝（Ａ−Ｂ）／（Ａ−Ｃ）×１００
［式中、Ａ、ＢおよびＣはそれぞれ下記を意味する：
Ａ： ＴＧＦβ１を添加し、かつ被験化合物は添加しない場合におけるルシフェラーゼ活性（Relative Luciferase unit）
Ｂ： ＴＧＦβ１および被験化合物の両方を添加した場合におけるルシフェラーゼ活性（Relative Luciferase unit）
Ｃ： ＴＧＦβ１および被験化合物を共に添加しない場合におけるルシフェラーゼ活性（Relative Luciferase unit）］
【０１８９】
試験は、被験化合物の濃度３μＭおよび１０μＭの場合についてそれぞれ行った。
【０１９０】
結果は、表１に示されるとおりであった。
結果に示されるように、本発明による化合物がＴＧＦβの作用に拮抗する活性を有することが明らかとなった。
【０１９１】
【表１】

【０１９２】
例３：血管内皮細胞の細胞増殖に対するＴＧＦβ阻害化合物の促進作用
ＥＳ細胞から分化したＦｌｋ−１陽性細胞を内皮細胞に分化させる過程においてＴＧＦβ阻害化合物を作用させ、血管内皮細胞の細胞増殖に対するＴＧＦβ阻害化合物の効果を検討した。実験方法及び培養は、前述のYamashitaらの方法（Nature 408: 92-96, 2000）に従った。
【０１９３】
すなわち、1×10⁴個のＥＳ細胞（クローン名：ＣＣＥ細胞）をＥＳ細胞分化用培地（αＭＥＭ (GIBCO)、５０μＭ ２−メルカプトエタノール (GIBCO) 、５０Ｕ／ｍｌ ペニシリン／ストレプトマイシン(GIBCO)、１０％牛胎児血清（ＦＣＳ）） に懸濁後、10cm collagen IV-coated plate (IWAKI)上に播種し、５％ＣＯ_２存在下、３７℃にて４日間培養を行った。４日後、分化したＦｌｋ−１陽性細胞を含む細胞集団より、PE-conjugatedマウス抗Ｆｌｋ−１抗体（Pharmingen）を結合させた後、ＭＡＣＳカラムを用いてＦｌｋ−１陽性細胞を分取した。こうして得た1×10⁴個のＦｌｋ−１陽性細胞を、被験物質として化合物１（１μＭ）、化合物４（５μＭ）または化合物３（５μＭ）を含む血管分化用培地（αＭＥＭ、５０μＭ ２−メルカプトエタノール、５０Ｕ／ｍｌ ペニシリン／ストレプトマイシン、１０％ＦＣＳ、３０ｎｇ／ｍｌ ＶＥＧＦ−Ａ (R&D)）に懸濁して、フィブロネクチンコートを行った２４穴組織培養用プレート（IWAKI）上に播種し、３７℃で３日間培養することにより内皮細胞へと分化させ、被験物質の効果を検討した。
【０１９４】
３日後、細胞の特徴付けのために以下の方法に従って免疫染色を実施した。細胞をプレートに固定化させるため、上清を吸引後、４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）を加え、室温で５〜１０分間静置した。細胞固定化後、ＰＢＳで２回洗浄し、０．３％Ｈ_２Ｏ_２／メタノールを加え、室温で２０〜３０分間静置し、脱色させた。脱色後、ＰＢＳで２回洗浄し、その後２％スキムミルク／ＰＢＳを加え、室温で３０分間静置し、ブロッキングを施した。その後、１次抗体として２％スキムミルクで２００倍に希釈したラット抗PECAM1抗体（Mec13.3: Pharmingen）及び３００倍希釈したマウス抗平滑筋アクチン−α（ＳＭＡ−α）抗体（1A4: Sigma）を加え、室温で２時間インキュベートした。２時間のインキュベート後、ＰＢＳ−Ｔ（０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含むＰＢＳ）で３回洗浄し、さらに２次抗体として２％スキムミルクでそれぞれ２００倍希釈したヤギ抗マウスIgG-HRP（Zymed）とヤギ抗ラットIgG-Alkali Phosphatase (AP)（Zymed）を加え、室温で２時間インキュベートした。２時間のインキュベート後、ＰＢＳ−Ｔ（０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含むＰＢＳ）で３回洗浄し、その後０．０２５％ＤＡＢを含むＰＢＳ−Ｔを加え、室温で１０〜２０分間静置した。ＳＭＡ−α染色用のＨＲＰ発色は、０．１５％Ｈ_２Ｏ_２／ＰＢＳ−Ｔを加えることによって行い、適当な発色（茶色）が得られたところでＰＢＳ−Ｔで２回洗浄し、反応を停止させた。さらに、NBT/BCIP stock solution（Roche）を含むＡＰ液（100mM Tris (pH9.5)、100mM NaCl、50mM MgCl₂、5mM Levamisole）を加えることにより、ＡＰ染色（ＰＥＣＡＭ１用）を施した。適当な発色（紫色）が得られたところで、ＰＢＳ−Ｔで２回洗浄し、反応を停止させた。検体は、４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）を用いて再度固定化させた後、保存した。
【０１９５】
その結果、ＶＥＧＦ単独で培養したものと比較し、ＴＧＦβ阻害化合物の共存群では、いずれの化合物においても明確な細胞数の増加が認められた。骨格の異なる化合物で同じ結果が得られたことより、本作用はＴＧＦβ阻害化合物に共通の現象であることが示唆された。以上のことより、ＴＧＦβ阻害化合物は、血管内皮細胞の細胞増殖に対して促進的に働くことが明らかとなった。
【０１９６】
例４：ＴＧＦβ阻害化合物のもつ血管内皮細胞分化促進作用
ＥＳ細胞から分化したＦｌｋ−１陽性細胞を内皮細胞に分化させる過程にＴＧＦβ阻害化合物を作用させ、ＴＧＦβ阻害化合物の血管内皮細胞分化に対する効果を検討した。実験方法及び培養は例３の方法に従って行ったが、ただし、後半の培養（血管分化用培地での培養）に供したＦｌｋ−１陽性細胞の細胞数は1×10³個とした。被験物質としては化合物１を用い、後半の培養より終濃度１μＭで添加した。
【０１９７】
まず、例３によって得られた免疫染色データにより、ＶＥＧＦ単独で培養したものと比較し、ＴＧＦβ阻害化合物共存下で培養したものは、紫で染色された内皮細胞コロニーが顕著に増加し、さらにそのコロニーも大きいことが分かる。
【０１９８】
次に、下記の表１は、本例における培養により出現したコロニーを、免疫染色データおよび形態に基づいて、３つの集団（シート状にコロニーを形成した血管内皮細胞群、分散してコロニーを形成した血管内皮細胞群、平滑筋コロニー群）に分類し、コロニーの内訳をまとめたものである。
【０１９９】
【表２】

【０２００】
表１から明らかなように、ＶＥＧＦ単独で培養したものと比較し、ＴＧＦβ阻害化合物共存下で培養したものでは、シート状の血管内皮細胞のコロニー形成率が増加し、反対に分散型の血管内皮細胞コロニーおよび平滑筋コロニーの形成率が減少していた。この結果より、ＴＧＦβ阻害化合物には、平滑筋細胞への分化に比較し、血管内皮細胞への分化を促進させる作用があることが明らかとなった。
【０２０１】
例５：ＴＧＦβ阻害化合物の細胞間接着性亢進作用
例３により得られた培養細胞の写真を高倍率で拡大したところ、ＶＥＧＦのみで培養した血管内皮細胞シートでは、細胞と細胞の境界線が不鮮明であったのに対し、ＴＧＦβ阻害化合物を含む条件で培養した血管内皮細胞シートでは、細胞と細胞の境界線が明瞭であった。ＶＥＧＦ単独で培養した細胞での結果は、ＶＥＧＦ投与により形成された血管は脆弱で、血管透過性が高い（細胞間接着性が弱い）というin vivoでの知見と一致するものであった。一方で、ＴＧＦβ阻害化合物共存下における結果は、ＴＧＦβ阻害化合物が脆弱な（細胞間接着性が弱い）血管を正常化させることを示唆するものであった。
【０２０２】
例６：ＴＧＦβ阻害化合物添加による Claudin5 蛋白質の発現亢進
ＴＧＦβ阻害化合物として化合物１を用い、例３の実験条件に従って形成された４日目の内皮細胞シートに対し、抗Claudin5染色を実施した。免疫染色は例３の方法に従って行った。抗Claudin5抗体はZymedより入手したものを使用した。
【０２０３】
その結果、ＶＥＧＦのみで培養した内皮細胞シートの染色に比し、ＴＧＦβ阻害化合物添加により形成されたシートは強く染色され、顕著にClaudin5蛋白質が発現亢進していることが明らかとなった。このことより、例５で観察された血管内皮シート内の細胞間接着性亢進は、Claudin5の発現亢進を介したものであることが示唆された。
【０２０４】
例７：血管内皮前駆細胞培養に対するＴＧＦβ阻害化合物の効果
ヒト末梢血単核球を血管内皮前駆細胞へ分化・増幅させる培養を行い、そこへＴＧＦβ阻害化合物を添加することにより、ＴＧＦβ阻害化合物の血管内皮前駆細胞の分化・増幅培養に対する効果を検討した。被験物質としては、化合物１、２、４および５を用いた。培養はKalkaらの方法（Proc. Natl. Acd. Sci. USA 97: 3422-3427, 2000）に従い、培養３日目から被験物質を添加した。
【０２０５】
すなわち、健常人ボランティアの末梢血２００ｍｌをリン酸緩衝生理食塩水で２倍に希釈した後、リンホプレップ（d=1.077；第一化学薬品社より購入）に重層して、密度勾配比重遠心（４００×ｇ、２５分間）を行い、単核球画分を得た。この画分をリン酸緩衝生理食塩水で洗浄後、混入した赤血球を除くために溶血し、リン酸緩衝生理食塩水で洗浄した。こうして得た単核球を５％のＦＣＳを添加したＥＧＭ−２培地（購入時に添付されてきたＶＥＧＦ、ＥＧＦ、ｂＦＧＦ、ＩＧＦ−１、アスコルビン酸、およびＧＡ−１０００を添加。Clonetics社製）に懸濁して、あらかじめフィブロネクチンコートを行った２４穴組織培養用プレート（Falcon社製）に、５０００個/ｍｍ^２、総培地量５００μｌとなるように播種し、５％ＣＯ_２存在下、３７℃にて培養を開始した。被験物質は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ；和光純薬社製）に溶解し、３日目に添加した（被験物質終濃度１０μＭ、ＤＭＳＯ終濃度０．０５％）。４日目に、接着していない細胞と培養上清を静かに除き、被験物質をそれぞれ１０μＭの濃度となるように懸濁した新しいＥＧＭ−２培地５００μｌを添加した。さらに、５％ＣＯ_２存在下、３７℃にて３日間培養（計７日間培養）した後、培養上清を除き、ＤｉＩ標識アセチルＬＤＬ（１０μｇ／ｍｌ）（Molecular Probes社製）を溶解した新しいＥＧＭ−２培地を添加し、３７℃で２時間培養を行い、ＤｉＩ標識アセチルＬＤＬを取り込ませた。その後、上清を除去し、洗浄および固定化を行なった後、１００倍希釈したＦＩＴＣ標識化ＵＥＡ−１（Sigma社製）を添加し、室温で１時間反応させ、洗浄した。その後、それぞれのウェルを蛍光顕微鏡で観察した。陽性対照にはヒト臍帯静脈内皮細胞（Clonetics社より入手）を用い、陰性対照にBalb/c 3T3細胞（アメリカンタイプカルチャーコレクション（ATCC）より入手）を用いた。顕微鏡観察において、倍率２００倍で５視野観察し、ＤｉＩ標識アセチルＬＤＬの取り込みおよびＦＩＴＣ標識化ＵＥＡ−１染色の二重染色像が確認された紡錘形細胞を血管内皮前駆細胞として、その細胞数を数えた。
【０２０６】
結果を図１に示した。図１から明らかなように、被験物質はいずれも、１０μＭの濃度で血管内皮前駆細胞数を増加させた。
【０２０７】
例８：ＴＧＦβ阻害活性を有する化合物の in vivo 血管新生促進作用
ＴＧＦβ阻害化合物の血管新生に対する作用を評価するため、マトリゲル・プラグ・アッセイを実施した。１ｍｌのマトリゲル（BD Biosciences Bedford, MA）に４００ｎｇのhuman basic FGF（R&D）、５０μｇのheparin（アヴェンティス・ファーマ株式会社）および被験物質としての化合物１（終濃度１μＭ）（もしくはＤＭＳＯ）を氷上で加え、調製されたゲルをBL/6マウスの下腹部皮下に０．２ｍｌずつ注射した。６〜８日後、マトリゲル中に陥入した血管を実体顕微鏡で観察した。
【０２０８】
その結果、ｂＦＧＦ単独の対照と比較し、ＴＧＦβ阻害化合物を含むマトリゲル内において、顕著な血管数の増加が認められ、ＴＧＦβ阻害化合物に血管新生促進作用があることが明らかとなった。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、血管内皮前駆細胞の増幅培養に対するＴＧＦβ阻害化合物の効果を示す図である。[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
Field of Invention
The present invention relates to a method for in vitro differentiation / amplification of vascular endothelial progenitor cells and vascular endothelial cells using a TGFβ inhibitory compound. Furthermore, the present invention relates to a method for treating ischemic diseases or diseases associated with enhanced vascular permeability using a TGFβ inhibitory compound.
[0002]
Background
For patients with ischemic heart disease or chronic obstructive arteriosclerosis, drug therapy and exercise therapy are given in addition to lifestyle improvement recommendations. For severe patients with Fontane III or IV, transvascular angioplasty and further surgical bypass surgery are attempted after angiography. These series of methods are established and effective treatments, but with a certain probability (30-40%), dilated blood vessels and bypass restenosis and occlusion are seen. In particular, when the internal diameter of the organic thrombus is small, such as in patients with obstructive thromboangiitis (TAO), known as Buerger's disease, angioplasty and bypass surgery are prone to restenosis and are not recommended. Is possible. For these patients, new treatments are needed (latest medicine, Vol. 57, No. 1, 2002).
[0003]
Fetal angiogenesis is said to have two stages: angiogenesis and angiogenesis. Angiogenesis is known as vascular endothelial progenitor cells (EPC;EndothelialProgenitorCell) is a process of forming blood vessels while differentiating at a target site. Differentiated or differentiating vascular endothelial cells (EC;EndothelialCell) form vascular cavities and fuse together to form a vascular plexus. On the other hand, angiogenesis refers to a process in which an existing blood vessel is stimulated and a new blood vessel is created through cell proliferation and migration. In other words, fetal angiogenesis begins with the development of blood vessels and is later completed by angiogenesis. On the other hand, in adults, wound healing, pathological angiogenesis such as cancer, or physiological angiogenesis in the uterus ovary, etc., seems to have only an angiogenic mechanism that creates new blood vessels from existing blood vessels. It was. Recently, however, vascular endothelial progenitor cells have been discovered in adult blood, and it has been found that angiogenesis occurs in the adult as well as in the fetus by the same mechanism (the mechanism of angiogenesis and angiogenesis) ( Latest Medicine, Vol.57, No.1, 2002).
[0004]
Human vascular endothelial progenitor cells are peripheral blood, G-CSF mobilized peripheral blood, umbilical cord blood or bone marrow CD34 + cells, AC133 + cells or Flk-1 + cells (also referred to as VEGFR2 cells, or KDR + cells if derived from humans) ) Or a mononuclear cell fraction containing these cells (Blood 95: 952, 2000; J. Clin. Invest. 105: 1527, 2000; Pro. Nat. Acad. Sci. USA 97 : 3422, 2000), therefore, these cells or cell fractions can be used as a source of vascular endothelial progenitor cells.
[0005]
In the circulatory organ region, a method (cell medicine) in which proliferated vascular endothelial progenitor cells are administered as angiogenesis therapy at an ischemic site or vascular endothelial regeneration therapy at an arteriosclerotic site is considered. Kalka et al. Cultured human peripheral blood to obtain vascular endothelial cells, which were then used to administer human vascular endothelial progenitor cells to the lower limb ischemia model of immunodeficient mice, resulting in an increase in new blood vessels. It was confirmed that blood flow improvement in ischemic muscle tissue was promoted (Proc. Natl. Acd. Sci. USA 97: 3422-3427, 2000). This therapy has also been applied to a myocardial infarction model in immunodeficient rats, and has been histologically induced to induce neovascularization and myocardial necrosis, and has also been shown to play a role in improving myocardial function (Circulation 103 : 634-637, 2001). The greatest advantage of this vascular endothelial progenitor cell treatment is that its own cells can be collected from peripheral blood and applied to the treatment. Therefore, vascular endothelial progenitor cell treatment has no ethical or immunological problems, and has attracted attention as a powerful and physiological advanced treatment utilizing proliferation and differentiation of vascular endothelial progenitor cells as progenitor cells. However, since there are quantitative limitations on vascular endothelial progenitor cells derived from adult peripheral blood, it is necessary to establish an efficient method for amplifying vascular endothelial progenitor cells in order to put this treatment into clinical use. (Latest Medicine, Vol.57, No.1, 2002).
[0006]
As a trial other than cell therapy to administer vascular endothelial progenitor cells, in the cardiovascular region, basic and clinical research on angiogenesis therapy using VEGF genes and proteins, which are positive factors for angiogenesis, is rapidly progressing. It is out. However, the blood vessel formed by VEGF has been found to be a fragile tube having a high permeability and easily perforated as compared with a normal one, and problems have been pointed out (latest medicine, Vol. 57, No. 1). 2002; Vascular biology, Tatsuhiko Kodama et al., Kodansha, 1997).
[0007]
Examples of the disease accompanied by increased vascular permeability include diabetic microangiopathy (for example, retinopathy, nephropathy, neuropathy, etc.), which is a complication of diabetes, and diabetic macroangiopathy (for example, ischemic heart). Diseases, cerebrovascular disorders, obstructive arteriosclerosis, etc.) are known. Microangiopathy is attributed to the loss of elasticity and strength of the vascular endothelial cells constituting the microvascular wall and the basement membrane supporting the cells, and increased vascular permeability (latest medicine, Vol. 57, No. 6, 2002). Vascular permeability in other diseases such as vascular cerebral edema after stroke and cerebral contusion, cytotoxic cerebral edema after cerebral ischemia and hypoxemia, systemic edema, retinal edema, pulmonary edema, diabetes, etc. Since all the diseases are serious, development of a method for improving vascular permeability and a therapeutic agent therefor is desired.
[0008]
TGFβ (Transforming Growth Factor-β) is a powerful cell growth inhibitory factor and is known to suppress the function and proliferation of many cells. The cell growth inhibitory action of TGFβ1 is due to inhibition of the transition from the G1 phase to the S phase of the cell cycle. This is because the Rb protein, which is one of the factors that control the cell cycle, is maintained in a low phosphorylated state by the action of TGFβ. Phosphorylation of the Rb protein involved in the transition from the G1 phase to the S phase is regulated by cyclin-dependent kinase (Cdk) and cyclin binding thereto. TGFβ suppresses the synthesis of Cdk4 and, when acting downstream of Cdk, suppresses the activity of the Cdk2-cyclin E complex. Furthermore, TGFβ is known to promote the expression of Cdk inhibitors such as p21cip / WAF1 and p15INK4B, and consequently promote the activity of p27Kip1. These series of reactions are thought to cause cell cycle arrest by TGFβ (J. Lab. Clin. Med. 128: 355-360, 1996). Such action is mediated by two types of serine / threonine kinase type receptors (type I and type II), and ALK-5 (activin receptor-like kinases-5) is identified as a type I receptor for TGFβ. Has been.
[0009]
Regarding the relationship between TGFβ and vascular endothelial cells, severe vascular development abnormalities have been reported in ALK-5 knockout mice, and the involvement of TGFβ in angiogenesis has been clarified (Non-patent Document 1: EMBO, 20 : 1663-1673, 2001). In in vitro experiments using cells, it has been reported that TGFβ acts to suppress the gene expression of Flk-1, which is a receptor for VEGF (Non-patent Document 2: J. Biol. Chem. 271). 11500-11505, 1996). However, there are many unclear points about the mechanism of angiogenesis by TGFβ. Several research groups have reported that TGFβ is involved in the induction of angiogenesis through the production of extracellular matrix, production of substrate-degrading enzymes, and increased expression of adhesion factors (Non-Patent Document 3: Genes Dev). 10: 2462-2477, 1996; Non-Patent Document 4: Jpn. J. Cancer Res. 84: 589-593, 1993), on the other hand, it is also reported that angiogenesis is enhanced by TGFβ inhibition (Non-Patent Document 5). : Cell Growth & Differ. 1; 367-374, 1990). Furthermore, both vascular endothelial cells and smooth muscle cells are known to be generated from vascular endothelial progenitor cells, but the involvement of TGFβ signal in their differentiation has not been clarified.
[0010]
A wide variety of compounds having TGFβ inhibitory activity are known, and examples thereof include those described in the following PCT international pamphlets: WO99 / 05109, WO99 / 51623, WO00 / 44743, WO00. / 55129, WO01 / 62756, WO01 / 72737 (Patent Document 1), WO01 / 76604, WO02 / 40462, WO02 / 40467, WO02 / 40468, WO02 / 40486, WO02 / 40476, WO02 / 55077, WO02 / 66462, WO02 / 062753, WO02 / 062776, WO02 / 062787, WO02 / 062793, WO02 / 062794, WO02 / 094833, and WO02 / 10131.
[0011]
[Non-Patent Document 1]
EMBO, 20: 1663-1673, 2001
[Non-Patent Document 2]
J. Biol. Chem. 271; 11500-11505, 1996
[Non-Patent Document 3]
Genes Dev. 10: 2462-2477, 1996
[Non-Patent Document 4]
Jpn. J. Cancer Res. 84: 589-593, 1993
[Non-Patent Document 5]
Cell Growth & Differ. 1; 367-374, 1990
[Patent Document 1]
International Publication No. 01/72737 Pamphlet
[0012]
SUMMARY OF THE INVENTION
First, the present inventors used Flk-1 positive cells differentiated from mouse embryonic stem cells (ES cells) to determine whether vascular endothelial cells can be amplified by TGFβ inhibition using TGFβ neutralizing antibodies. The vascular endothelial cell differentiation system (Yamashita et al., Nature 408: 92-96, 2000) was examined. However, no such activity could be found in the TGFβ neutralizing antibody. Usually, when a receptor is expressed in a cell, it is known that a very small amount of signal is constantly transmitted without a ligand. In addition, when TGFβ produced by a cell binds to a receptor of the cell and a signal is transmitted, it is known that it is difficult to inhibit the signal from the outside with a neutralizing antibody or the like. Thus, when the effect of suppressing the TGFβ signal transmitted into the cell with a compound having kinase inhibitory activity was examined, the following phenomenon was observed.
[0013]
(1) The TGFβ inhibitory compound promoted differentiation into vascular endothelial cells as compared to differentiation into smooth muscle cells.
(2) The TGFβ inhibitory compound acted positively on the cell proliferation of vascular endothelial cells.
(3) The TGFβ inhibitory compound increased the expression of claudin-5, which is an adhesion factor, and enhanced intercellular adhesion.
(4) The TGFβ inhibitory compound acted not only on ES cell-derived vascular endothelial progenitor cells but also on human peripheral blood mononuclear cells, and promoted proliferation and differentiation of vascular endothelial progenitor cells.
(5) The TGFβ inhibitory compound promoted angiogenesis.
[0014]
These phenomena have been observed for TGFβ-inhibiting low-molecular compounds having different skeletons in the molecular structure, and thus have also been shown to be common to TGFβ-inhibiting compounds.
[0015]
Based on the above phenomenon, the present inventors have found that a compound having TGFβ inhibitory activity is effective for in vitro differentiation / amplification of vascular endothelial progenitor cells and vascular endothelial cells with respect to the in vitro differentiation / amplification method of vascular endothelial progenitor cells and vascular endothelial cells. The knowledge that it is. Furthermore, the present inventors have found that a compound having TGFβ inhibitory activity is effective as a therapeutic agent for ischemic diseases and diseases associated with increased vascular permeability. The present invention is based on these findings.
[0016]
Accordingly, a first object of the present invention is to provide a vascular endothelial progenitor cell and a method for efficiently producing vascular endothelial cells using a TGFβ inhibitory compound. The method for producing vascular endothelial progenitor cells or vascular endothelial cells according to the present invention comprises culturing cells or cell fractions in a medium containing a compound having TGFβ inhibitory activity.
[0017]
The second object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for the treatment of ischemic diseases using a TGFβ inhibitory compound and a pharmaceutical composition for improving vascular permeability in diseases accompanied by increased vascular permeability. There is. The pharmaceutical composition for treating ischemic disease according to the present invention comprises vascular endothelial precursor cells and / or vascular endothelial cells produced by the production method according to the present invention, or a compound having TGFβ inhibitory activity. is there. Furthermore, the pharmaceutical composition for improving vascular permeability in a disease associated with enhanced vascular permeability according to the present invention comprises a compound having TGFβ inhibitory activity.
[0018]
The third object of the present invention is to provide a tissue engineering technique using vascular endothelial precursor cells and vascular endothelial cells produced by the method according to the present invention.
[0019]
According to the present invention, the production efficiency of vascular endothelial progenitor cells and vascular endothelial cells is improved, and a novel therapeutic method for ischemic diseases and diseases associated with increased vascular permeability and a medicament therefor are provided.
[0020]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
In the method for producing vascular endothelial progenitor cells or vascular endothelial cells according to the present invention, the cells or cell fractions are cultured in a medium comprising a TGFβ inhibitory compound.
[0021]
In the present specification, the term “compound having TGFβ inhibitory activity” or “TGFβ inhibitory compound” means TGFβ inhibitory activity, that is, a compound having an action of inhibiting the activity of TGFβ, which is a kind of cytokine, in cells or tissues. Say. TGFβ inhibitory activity is determined by methods known to those skilled in the art, for example,J. Boil. Chem., 273, 21145-21152 (1998), the method described in International Publication No. 01/72737 pamphlet, and the like.
[0022]
The cell or cell fraction is not particularly limited as long as it can differentiate into vascular endothelial progenitor cells or vascular endothelial cells, but preferably Flk-1⁺Cell, mononuclear cell fraction, CD34⁺Cells, or AC133⁺Cell. Flk-1⁺The cells are preferably obtained from embryonic stem cells. CD34⁺Cells and AC133⁺The cell is preferably obtained from a mononuclear cell fraction. The mononuclear cell fraction is preferably obtained from peripheral blood or umbilical cord blood, and the peripheral blood is obtained from a human administered with G-CSF or GM-CSF. Is preferred.
[0023]
The medium is not particularly limited as long as it enables cell differentiation. A wide variety of such media are known in the art, and many are commercially available. Therefore, those skilled in the art can select or prepare an appropriate medium according to the type of cells or cell fractions used for culture and the type of target differentiated cells. The medium is preferably a medium for vascular endothelial precursor cell differentiation or a medium for vascular endothelial cell differentiation.
[0024]
The amount of the TGFβ inhibitor compound added to the medium is not particularly limited, but is preferably 0.1 to 50 μM, more preferably 0.5 to 20 μM.
[0025]
According to a preferred embodiment of the present invention, the medium comprises at least one cytokine that promotes the proliferation of vascular endothelial progenitor cells or vascular endothelial cells, such cytokine being, for example, VEGF-A , VEGF-C, VEGF-E, aFGF, bFGF, EGF, TGFα, PD-ECGF, PDGF, TNFα, HGF, and IGF-1. Furthermore, the medium preferably contains at least one cytokine selected from the group consisting of VEGF-A, VEGF-C, and VEGF-E, and more preferably, in addition to these, bFGF, IGF -1 and EGF.
[0026]
Other culture conditions are not particularly limited as long as they are generally used for the purpose of cell proliferation. That is, the amount of cells or cell fraction added to the medium, the culture temperature, the CO₂Conditions such as concentration and culture period can be appropriately set by those skilled in the art. The culture temperature is preferably about 37 ° C. If necessary, CO₂The concentration may be adjusted and is preferably about 5%.
[0027]
Vascular endothelial progenitor cells and / or vascular endothelial cells obtained by the above method can be used in cell therapy as described in the background section for the purpose of treating ischemic diseases.
[0028]
Thus, according to the present invention, a method for treating ischemic disease comprising administering to a subject a therapeutically effective amount of vascular endothelial progenitor cells and / or vascular endothelial cells produced by the method according to the present invention. Is provided. The subject is preferably a mammal, for example, a human or non-human mammal.
[0029]
Examples of the ischemic disease include trauma, rejection at the time of transplantation, ischemic cerebrovascular disorder (eg, stroke, cerebral infarction, etc.), ischemic kidney disease, ischemic lung disease, ischemic disease related to infection And limb ischemic diseases (eg, obstructive arteriosclerosis), ischemic heart diseases (eg, ischemic cardiomyopathy, myocardial infarction, ischemic heart failure, etc.).
[0030]
Vascular endothelial progenitor cells and / or vascular endothelial cells produced by the method according to the present invention can be administered in administration routes and therapeutically effective amounts generally used in the field of cell medicine. Therefore, the administration route is not particularly limited, but is preferably parenteral administration, more preferably subcutaneous administration, intravenous administration, coronary catheterization, intramuscular administration, or intramyocardial administration. The therapeutically effective amount is also not particularly limited, and is appropriately determined in consideration of the condition of the subject, for example, the patient's age, weight, sex, disease difference, symptom level, and the like.
[0031]
The present invention also provides the use of vascular endothelial progenitor cells and / or vascular endothelial cells produced by the method according to the present invention for the manufacture of a medicament for treating ischemic diseases.
[0032]
Furthermore, according to the present invention, there is provided a pharmaceutical composition for treating ischemic diseases, comprising vascular endothelial progenitor cells and / or vascular endothelial cells produced by the method according to the present invention. This pharmaceutical composition can be appropriately produced by those skilled in the art according to the administration route and dosage described above or according to well-known techniques in cell medicine.
[0033]
TGFβ inhibitory compounds promote the differentiation and amplification of vascular endothelial progenitor cells and / or vascular endothelial cells not only ex vivo but also in vivo. Therefore, ischemic diseases can also be treated by directly administering a TGFβ inhibitory compound to a subject. In addition, the direct administration of a TGFβ inhibitory compound can improve vascular permeability in diseases accompanied by increased vascular permeability.
[0034]
Thus, according to the present invention, vascular permeability is improved in a method for treating ischemic disease or a disease associated with increased vascular permeability comprising administering to a subject a therapeutically effective amount of a TGFβ inhibitory compound. A method is provided. The subject is preferably a mammal, for example, a human or non-human mammal.
[0035]
The present invention also provides use of a TGFβ-inhibiting compound for the manufacture of a medicament for treating ischemic disease or a medicament for improving vascular permeability in a disease associated with enhanced vascular permeability.
[0036]
Furthermore, according to the present invention, there is provided a pharmaceutical composition for treating an ischemic disease or a pharmaceutical composition for improving vascular permeability in a disease accompanied by enhanced vascular permeability, comprising a TGFβ inhibitor compound. Is done.
[0037]
Examples of the ischemic disease include trauma, rejection at the time of transplantation, ischemic cerebrovascular disorder (eg, stroke, cerebral infarction, etc.), ischemic kidney disease, ischemic lung disease, ischemic disease related to infection Limb ischemic disease (eg, obstructive arteriosclerosis), ischemic heart disease (eg, ischemic cardiomyopathy, myocardial infarction, ischemic heart failure, etc.).
[0038]
Examples of the disease accompanied by increased vascular permeability include diabetic microangiopathy (for example, retinopathy, nephropathy, neuropathy, etc.), which is a complication of diabetes, and diabetic macroangiopathy (for example, ischemic heart). Diseases, cerebrovascular disorders, obstructive arteriosclerosis, etc.), angiocerebral edema (known to occur after stroke and cerebral contusion, etc.), cytotoxic cerebral edema (cerebral ischemia and hypoxemia, etc.) Known to occur later), systemic edema, retinal edema, pulmonary edema, diabetes and the like.
[0039]
The TGFβ-inhibiting compound can be administered by any route of oral and parenteral (eg, intravenous administration, intramuscular administration, subcutaneous administration, rectal administration, transdermal administration). Therefore, a pharmaceutical composition comprising a TGFβ inhibitor compound is formulated into an appropriate dosage form according to the administration route. Specifically, examples of the oral preparation include tablets, capsules, scattered powders, granules, and syrups, and examples of the parenteral preparation include injections, suppositories, tapes, and ointments.
[0040]
These various preparations can be produced by conventional methods using commonly used excipients, disintegrants, binders, lubricants, colorants, diluents and the like.
[0041]
Examples of excipients include lactose, glucose, corn starch, sorbit, and crystalline cellulose. Examples of disintegrants include starch, sodium alginate, gelatin powder, calcium carbonate, calcium citrate, and dextrin as binders. Examples include dimethyl cellulose, polyvinyl alcohol, polyvinyl ether, methyl cellulose, ethyl cellulose, gum arabic, gelatin, hydroxypropyl cellulose, polyvinyl pyrrolidone and the like, and examples of lubricants include talc, magnesium stearate, polyethylene glycol and hydrogenated vegetable oil. Each is listed.
[0042]
Moreover, the said injection can be manufactured by adding a buffer, a pH adjuster, a stabilizer, an isotonic agent, a preservative, etc. as needed.
[0043]
In the pharmaceutical composition comprising the TGFβ inhibitory compound according to the present invention, the content of the TGFβ inhibitory compound varies depending on the dosage form, but is usually 0.5 to 50% by weight, preferably 1 to 20% in the total composition. % By weight.
[0044]
The dose of the TGFβ-inhibiting compound is appropriately determined depending on the individual case in consideration of the patient's age, weight, sex, disease difference, symptom level, etc., for example, 0.1-100 mg / kg, The dose is preferably in the range of 0.1 to 30 mg / kg, which is administered once or divided into several times a day.
[0045]
According to a preferred embodiment of the present invention, in the use of a TGFβ inhibitor compound for treating ischemic disease, the TGFβ inhibitor compound is used in combination with at least one cytokine that promotes the proliferation of vascular endothelial progenitor cells or vascular endothelial cells, such as The cytokine can be selected from the group consisting of, for example, VEGF-A, VEGF-C, VEGF-E, aFGF, bFGF, EGF, TGFα, PD-ECGF, PDGF, TNFα, HGF, and IGF-1. Furthermore, the cytokine used in combination with the TGFβ inhibitory compound is preferably at least one cytokine selected from the group consisting of VEGF-A, VEGF-C, and VEGF-E. More preferably, the cytokine used in combination with the TGFβ inhibitory compound is at least one cytokine selected from the group consisting of VEGF-A, VEGF-C, and VEGF-E, and bFGF, IGF-1 and EGF. Accordingly, in the use of a TGFβ inhibitory compound for ischemic disease treatment, the TGFβ inhibitory compound is administered with such cytokines, contained in a pharmaceutical composition, or used in the manufacture of a medicament.
[0046]
These cells produced by the method for producing vascular endothelial progenitor cells or vascular endothelial cells according to the present invention can be used in tissue engineering. For example, by using these vascular endothelial precursor cells or vascular endothelial cells, a blood vessel can be produced and used for bypass surgery, or a blood vessel or a tissue containing a blood vessel can be produced and used for treatment. Can be used for transplant surgery.
[0047]
TGFβ inhibitory compound of formula (I)
According to a preferred embodiment of the present invention, the TGFβ-inhibiting compound is a compound represented by the following formula (I) or a salt or solvate thereof, which has been confirmed by the present inventors to have TGFβ-inhibiting activity. :
Embedded image

[In the above formula (I),
X represents CH or N;
Z represents -O-, -NH-, -S- or -C (= O)-;
R¹And R²May be the same or different and are a hydrogen atom,-(CH₂m-R^a{{Where R^aIs a hydrogen atom, a halogen atom, a hydroxyl group, a saturated or unsaturated 3- to 6-membered carbocyclic group or heterocyclic group, or —NR^bR^c(R^bAnd R^cMay be the same or different and may be substituted with a hydrogen atom or a hydroxyl group._1-6Represents an alkyl group, R^bAnd R^cAnd together with the nitrogen atom to which they are attached may form a saturated or unsaturated 5- or 6-membered heterocyclic group (the heterocyclic group further contains one or more heteroatoms The heterocyclic group may be substituted with a hydroxyl group._1-4Represents an alkyl group, or may be substituted by a saturated or unsaturated 5- or 6-membered heterocyclic group), m represents an integer of 1 to 5 and the alkyl chain moiety — (CH₂m- is a hydroxyl group, an oxygen atom, or -OR^dGroup (where R^dIs C_1-4Alkyl group or C_1-4Which may be substituted by an alkylcarbonyl group),
A represents any group selected from the group consisting of the following formulas (a1) to (a4):
(1) Group of formula (a1):
Embedded image

(In the above formula (a1),
R³~ R⁶May be the same or different,
Hydrogen atom,
Halogen atoms,
C_1-6An alkyl group,
C optionally substituted by a halogen atom or a phenyl group_1-10An alkoxy group,
C_2-6An alkenylcarbonyloxy group,
C_1-4An alkylcarbonyl group, or
Represents a phenyl group optionally substituted by a halogen atom,
R³And R⁴, R⁴And R⁵And R⁵And R⁶Each may form a saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic or heterocyclic group together with the carbon atom to which they are attached,
R⁷Is
Hydrogen atom,
C optionally substituted by a saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic group_1-8An alkyl group,
C optionally substituted by a phenyl group_2-6An alkenyl group,
A saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic or heterocyclic group (the carbocyclic or heterocyclic group is C_1-4Optionally substituted by an alkyl group), or
Represents any group of the following formula (a1-i) or (a1-ii):
Embedded image

(In the above formula,
R⁸Is
C optionally substituted by a phenyl group_1-10An alkyl group,
C_2-8An alkenyl group, or
Represents a saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic group, which may be substituted by a halogen atom,
R⁹And R¹⁰May be the same or different,
Hydrogen atom,
C_1-6An alkyl group,
A saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic group, which may be substituted by a halogen atom, or
Represents naphthyl optionally substituted by a halogen atom;
R⁹And R¹⁰Together with the nitrogen atom to which they are attached may form a saturated or unsaturated 5- or 6-membered heterocyclic group (the heterocyclic group further contains one or more heteroatoms The heterocyclic group may be substituted with a hydroxyl group._1-4Optionally substituted by an alkyl group or a saturated or unsaturated 5- or 6-membered heterocyclic group),
(2) Group of formula (a2):
Embedded image

(In the above formula (a2)
R³~ R⁶Is the same as the above formula (a1),
R¹¹And R¹²May be the same or different,
Hydrogen atom,
C_1-6An alkyl group,
A saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic group, which may be substituted by a halogen atom, or
Represents naphthyl optionally substituted by a halogen atom;
R¹¹And R¹²Together with the nitrogen atom to which they are attached may form a saturated or unsaturated 5- or 6-membered heterocyclic group (the heterocyclic group further contains one or more heteroatoms The heterocyclic group may be substituted with a hydroxyl group._1-4Optionally substituted by an alkyl group or a saturated or unsaturated 5- or 6-membered heterocyclic group),
(3) Group of formula (a3):
Embedded image

(In the above formula (a3),
R¹³~ R¹⁶May be the same or different,
Hydrogen atom,
Halogen atoms,
C_1-6An alkyl group,
C_1-8An alkoxy group,
C_1-4An alkylcarbonyl group, or
Represents a phenylcarbonyl group,
R¹³And R¹⁴And R¹⁴And R¹⁵Each may form a saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic or heterocyclic group together with the carbon atom to which they are attached), and
(4) Group of formula (a4):
Embedded image

(In the above formula (a4),
R¹⁷~ R²¹May be the same or different,
Hydrogen atom,
Halogen atoms,
C optionally substituted by a hydroxyl group or a phenyl group_1-6An alkyl group,
C_1-8An alkoxy group,
C_1-4Alkyl group, C_1-4C optionally substituted by an alkoxy group, an oxygen atom or a phenyl group_2-6An alkenyl group,
C_1-4A phenylcarbonyl group optionally substituted by an alkyl group,
An amino group optionally substituted by a phenyl group,
A nitro group, or
A saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic or heterocyclic group (the carbocyclic or heterocyclic group is C_1-6Which may be substituted by an alkyl group)
R¹⁷And R¹⁸Or R²⁰And R²¹Together with the carbon atom to which they are attached may form a saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic or heterocyclic group,
R¹⁸And R¹⁹Or R¹⁹And R²⁰Together with the carbon atom to which they are attached, a halogen atom, C_1-4Alkyl group, C_1-4Alkylcarbonyl group, C_1-6It may form a saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic group or heterocyclic group which may be substituted by an alkoxycarbonyl group or an oxygen atom, and this carbocyclic group or heterocyclic group is And may be condensed with other saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic or heterocyclic groups to form tricyclic groups with the 6-membered carbocycle of formula (a4)].
[0048]
In the compounds of formula (I), the terms “alkyl”, “alkoxy”, and “alkenyl” as a group or part of a group refer to straight-chain or branched alkyl groups, alkoxy groups, and alkenyl groups. Means.
[0049]
In the compounds of formula (I), the terms “alkylcarbonyl”, “alkoxycarbonyl”, and “alkenylcarbonyloxy” as a group or part of a group are alkylcarbonyl groups in which the group is a straight chain or branched chain , An alkoxycarbonyl group, and an alkenylcarbonyloxy group.
[0050]
Thus, in a compound of formula (I), for example, “C as a group or part of a group_1-10Alkyl "and" C_1-10The term “alkoxy” means a linear or branched alkyl group having 1 to 10 carbon atoms and an alkoxy group.
[0051]
In the compound of formula (I), “C_1-10“Alkyl” is preferably C_1-8Alkyl, more preferably C_1-6Alkyl, more preferably C_1-4Alkyl. "C_1-8“Alkyl” is preferably C_1-6Alkyl, more preferably C_1-4Alkyl. "C_1-6“Alkyl” is preferably C_1-4Alkyl, more preferably C_1-2Alkyl. "C_1-4“Alkyl” is preferably C_1-2Alkyl.
[0052]
In the compound of formula (I), “C_1-10“Alkoxy” is preferably C_1-8Alkoxy, more preferably C_1-6Alkoxy, more preferably C_1-4Alkoxy. "C_1-8“Alkoxy” is preferably C_1-6Alkoxy, more preferably C_1-4Alkoxy. "C_1-4“Alkoxy” is preferably C_1-2Alkoxy.
[0053]
In the compound of formula (I), “C_2-8“Alkenyl” is preferably C_2-6Alkenyl, more preferably C_2-4Alkenyl. "C_2-6“Alkenyl” is preferably C_2-4Alkenyl.
[0054]
In the compound of formula (I), “C_1-4“Alkylcarbonyl” is preferably C_1-2Alkylcarbonyl.
[0055]
In the compound of formula (I), “C_1-6“Alkoxycarbonyl” is preferably C_1-4Alkoxycarbonyl, more preferably C_1-2Alkoxycarbonyl.
[0056]
In the compound of formula (I), “C_2-6“Alkenylcarbonyloxy” is preferably C_2-4Alkenylcarbonyloxy.
[0057]
C above_1-10Examples of alkyl include methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, i-butyl, s-butyl, t-butyl, n-pentyl, n-hexyl, n-heptyl, n-octyl, n- Nonyl, n-decyl, etc. are mentioned.
[0058]
C above_1-10Examples of alkoxy include methoxy, ethoxy, n-propoxy, i-propoxy, n-butoxy, i-butoxy, s-butoxy, t-butoxy and the like.
[0059]
C above_2-6Examples of alkenyl include an allyl group, a butenyl group, a pentenyl group, and a hexenyl group.
[0060]
C above_1-4Examples of alkylcarbonyl include an aldehyde group, methylcarbonyl, ethylcarbonyl, n-propylcarbonyl, isopropylcarbonyl, n-butylcarbonyl, i-butylcarbonyl, s-butylcarbonyl.
[0061]
C above_1-6Examples of alkoxycarbonyl include methoxycarbonyl, ethoxycarbonyl, n-propoxycarbonyl, i-propoxycarbonyl, n-butoxycarbonyl, i-butoxycarbonyl, s-butoxycarbonyl, t-butoxycarbonyl and the like.
[0062]
C above_2-6Examples of alkenylcarbonyloxy include allylcarbonyloxy, butenylcarbonyloxy, pentenylcarbonyloxy, hexenylcarbonyloxy.
[0063]
In the compound of formula (I), “optionally substituted alkyl” means that one or more hydrogen atoms on the alkyl are substituted by one or more substituents (which may be the same or different). And alkyl and unsubstituted alkyl. It will be apparent to those skilled in the art that the maximum number of substituents can be determined depending on the number of substitutable hydrogen atoms on the alkyl. The same applies to groups having a substitutable group other than an alkyl group, such as alkoxy, alkenyl, phenyl, phenylcarbonyl, naphthyl and the like.
[0064]
In the compound of formula (I), “halogen atom” means a fluorine atom, a chlorine atom, a bromine atom, or an iodine atom.
[0065]
In the compound of the formula (I), “unsaturated carbocycle” and “unsaturated heterocycle” mean a carbocycle and a heterocycle having one or more unsaturated bonds such as a double bond.
[0066]
In the compound of formula (I), the “saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic group” can preferably be a saturated or unsaturated 6-membered carbocyclic ring. Examples of saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocycles include phenyl, cyclopentyl, and cyclohexyl.
[0067]
In the compound of the formula (I), “saturated or unsaturated 5- or 6-membered heterocyclic group” means a saturated or unsaturated 5- or 6-membered monocyclic heterocyclic group. That is, a saturated or unsaturated 5- or 6-membered heterocycle can be a heterocycle containing 1 to 3, preferably 1 or 2, heteroatoms, with the remaining ring member atoms being carbon atoms. The heterocyclic group contains one or more hetero atoms selected from an oxygen atom, a nitrogen atom and a sulfur atom. Examples of heterocyclic groups include pyridyl, furyl, thienyl, pyrrolyl, pyridazyl, pyrimidyl, morpholinyl, morpholino, isoxazolyl, oxazolyl, thiazolyl, imidazolyl, isothiazolyl and pyrazyl.
[0068]
In addition, this heterocyclic group is optionally substituted with C_1-6Alkyl group, C optionally substituted by hydroxyl group_1-4It may be substituted by an alkyl group or a saturated or unsaturated 5- or 6-membered heterocyclic group.
[0069]
The saturated or unsaturated 3 to 6 membered carbocyclic group is preferably a saturated or unsaturated 3 to 5 membered carbocyclic group, more preferably a saturated or unsaturated 3 membered carbocyclic group. it can.
[0070]
The saturated or unsaturated 3- to 6-membered heterocyclic group contains one or more hetero atoms (preferably oxygen atoms) selected from an oxygen atom, a nitrogen atom, and a sulfur atom. Preferably, the saturated or unsaturated 3-6 membered heterocyclic group can be a heterocyclic group containing 1 or 2 heteroatoms and the remaining ring member atoms are carbon atoms. The saturated or unsaturated 3- to 6-membered heterocyclic ring can preferably be a saturated or unsaturated 3- to 5-membered heterocyclic group, more preferably a saturated or unsaturated 3-membered heterocyclic group.
[0071]
Saturated or unsaturated carbocyclic and heterocyclic groups may be condensed with other saturated or unsaturated carbocyclic or heterocyclic groups to form bicyclic groups, preferably saturated or unsaturated 9 to A 12-membered bicyclic carbocyclic group or heterocyclic group may be formed. Such bicyclic groups include naphthyl, quinolyl, 1,2,3,4-tetrahydroquinolyl, 1,4-benzoxanyl, indanyl, indolyl, and 1,2,3,4-tetrahydronaphthyl. .
[0072]
According to a preferred embodiment of the present invention, R¹And R²May be the same or different and C_1-6Represents an alkyl group and any group selected from the group consisting of groups of the following formulas (i) to (iv):
Embedded image

(In these equations,
The alkyl chain moiety in formula (i) is a hydroxyl group or -OR^eGroup (where R^eIs C_1-4Alkyl group or C_1-4Which represents an alkylcarbonyl group) (preferably part of this alkyl chain is substituted or unsubstituted by a hydroxyl group),
R²²And R²³Or R²⁴And R²⁵May be the same or different and may be substituted with a hydrogen atom or a hydroxyl group._1-6Represents an alkyl group,
R²²And R²³Or R²⁴And R²⁵May form a saturated or unsaturated 5- or 6-membered heterocyclic group together with the nitrogen atom to which they are attached (the heterocyclic group further comprising one or more heteroatoms The heterocyclic group may be substituted with a hydroxyl group._1-4Optionally substituted by an alkyl group or a saturated or unsaturated 5- or 6-membered heterocyclic group,
Hal represents a halogen atom,
n represents an integer of 1 to 4).
[0073]
According to one preferred embodiment of the invention, R¹And R²When at least one of the groups represents any group selected from the group consisting of formulas (i) to (iv), A represents any group of the above formulas (a1) to (a3); More preferably, it represents the group of formula (a1).
[0074]
According to a more preferred embodiment of the present invention, R¹And R²May be the same or different and C_1-6Represents an alkyl group and any group selected from the group consisting of groups of the following formulas (i-a) to (iv):
[0075]
Embedded image

(In these equations,
R²²And R²³Or R²⁴And R²⁵May be the same or different and may be substituted with a hydrogen atom or a hydroxyl group._1-6Represents an alkyl group,
R²²And R²³Or R²⁴And R²⁵May form a saturated or unsaturated 5- or 6-membered heterocyclic group together with the nitrogen atom to which they are attached (the heterocyclic group further comprising one or more heteroatoms The heterocyclic group may be substituted with a hydroxyl group._1-4Optionally substituted by an alkyl group or a saturated or unsaturated 5- or 6-membered heterocyclic group,
n1 represents an integer of 2 to 4).
[0076]
R¹And R²When at least one of the above is (iv), preferably R²⁴And R²⁵Together with the nitrogen atom to which they are attached form a saturated or unsaturated 5- or 6-membered heterocyclic group, which may further contain one or more heteroatoms ), For example, morpholine can be formed.
[0077]
R¹And R²At least one of C_1-6In the case of an alkyl group, C_1-6Alkyl is preferably C_1-4Alkyl, more preferably methyl or ethyl, most preferably methyl.
[0078]
When A is the formula (a1), R in the formula (a1)³~ R⁶May be the same or different and are each a hydrogen atom, a halogen atom, C_1-6C optionally substituted by an alkyl group, a halogen atom or a phenyl group_1-10Alkoxy group, C_2-6Alkenylcarbonyloxy group, C_1-4Represents an alkylcarbonyl group or a phenyl group optionally substituted by a halogen atom,
R³And R⁴, R⁴And R⁵And R⁵And R⁶Each together with the carbon atom to which they are attached may form a saturated or unsaturated (preferably unsaturated) 5- or 6-membered carbocyclic or heterocyclic group. Thus, R³And R⁴, R⁴And R⁵And R⁵And R⁶R and R form a carbocyclic or heterocyclic group, R³And R⁴, R⁴And R⁵And R⁵And R⁶A cyclic group may be formed at the position of any one of R,³And R⁴, R⁴And R⁵And R⁵And R⁶In any two or more positions, a cyclic group may be formed. In this case, a tricyclic group can be formed with the carbocycle of formula (a1).
[0079]
According to one preferred embodiment of the present invention, R in the formula (a1)³~ R⁶At least one of is a group other than a hydrogen atom.
[0080]
According to another preferred embodiment of the invention, R¹And R²Is C_1-6In the case of an alkyl group, R in the formula (a1)³~ R⁶At least one of is a group other than a hydrogen atom.
[0081]
When A is the formula (a1), R in the formula (a1)⁷Is optionally substituted by a hydrogen atom, a saturated 5- or 6-membered carbocyclic group_1-8C which may be substituted by alkyl group or phenyl group_2-6An alkenyl group, a saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic or heterocyclic group (the carbocyclic or heterocyclic group is C_1-4Which may be substituted by an alkyl group) or a group of formula (a1-i) or (a1-ii).
Here, the saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic or heterocyclic group is preferably C_1-4It represents a phenyl group which may be substituted with an alkyl group, a saturated 5- or 6-membered carbocyclic group, or an unsaturated 5- or 6-membered heterocyclic group.
[0082]
Preferably, R in the formula (a1)⁷Is a saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic or heterocyclic group (this carbocyclic or heterocyclic group is C_1-4An optionally substituted alkyl group), a group of formula (a1-i), or a group of formula (a1-ii).
[0083]
According to another preferred embodiment, R in formula (a1)⁷Is optionally substituted by a phenyl group_2-6It represents an alkenyl group or any one of the groups of the formula (a1-i) or (a1-ii).
[0084]
According to another preferred embodiment of the invention, R¹And R²Is C_1-6In the case of an alkyl group, R in the formula (a1)⁷Represents one of the groups of formula (a1-i) or (a1-ii).
[0085]
When A is the formula (a1), R in the formula (a1)⁸Is preferably unsubstituted C_1-8C substituted by alkyl group or phenyl group_1-4Alkyl group, C_2-6An alkenyl group or a phenyl group optionally substituted by a halogen atom is represented.
[0086]
When A is the formula (a1), R in the formula (a1)⁹And R¹⁰Are preferably the same or different and may be a hydrogen atom, C_1-6Represents an alkyl group, a saturated 5- or 6-membered carbocyclic group, a phenyl group optionally substituted by a halogen atom, or a naphthyl group;
R⁹And R¹⁰And may form a saturated or unsaturated 5- or 6-membered heterocyclic group together with the nitrogen atom to which they are attached (this heterocyclic group further contains one or more heteroatoms. The heterocyclic group may be substituted by a methyl group, a hydroxymethyl group, or a saturated or unsaturated 5- or 6-membered heterocyclic group.
[0087]
In the case where A is the formula (a2), R¹¹And R¹²Are preferably the same or different and may be a hydrogen atom, C_1-6Represents an alkyl group, a saturated 5- or 6-membered carbocyclic group, or a phenyl group;
R¹¹And R¹²And may form a saturated or unsaturated 5- or 6-membered heterocyclic group together with the nitrogen atom to which they are bonded (this heterocyclic group further contains one or more heteroatoms. The heterocyclic group may be substituted by a methyl group, a hydroxymethyl group, or a saturated 5- or 6-membered heterocyclic group.
[0088]
More preferably, R¹¹And R¹²Together with the nitrogen atom to which they are attached form a saturated or unsaturated 5- or 6-membered heterocyclic group, which may further contain one or more heteroatoms. ), This heterocyclic group may be substituted by a methyl group, a hydroxymethyl group, or a saturated 5- or 6-membered heterocyclic group. R¹¹And R¹²Can form, for example, a saturated 6-membered heterocyclic group.
[0089]
In the case where A is the formula (a3), preferably R¹³And R¹⁴Is a hydrogen atom and R¹⁵And R¹⁶May be the same or different and are each a hydrogen atom, a halogen atom, C_1-4Alkyl group, C_1-8Alkoxy group, C_1-3An alkylcarbonyl group or a phenylcarbonyl group is represented.
More preferably, R¹³And R¹⁴Is a hydrogen atom and R¹⁵But C_1-4Represents an alkyl group, R¹⁶Is hydrogen atom, halogen atom, C_1-4Alkyl group, C_1-8An alkoxy group or C_1-3Represents an alkylcarbonyl group.
[0090]
Where R¹⁶Is C_1-3R represents an alkylcarbonyl group.¹⁶Is -C (= O) R³⁶Can be expressed as At this time, R³⁶Can be methyl, ethyl, n-propyl, or i-propyl, preferably R³⁴Is a methyl group.
[0091]
In the case where A is the formula (a4), preferably R¹⁷, R¹⁸, R²⁰And R²¹Is as described above and R¹⁹But,
C_1-4Alkyl group, C_1-4C optionally substituted by an alkoxy group, an oxygen atom or a phenyl group_2-6An alkenyl group,
A nitro group, or
A saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic or heterocyclic group (the carbocyclic or heterocyclic group is C_1-6Optionally substituted by an alkyl group), or
R¹⁸And R¹⁹Or R¹⁹And R²⁰Together with the carbon atom to which they are attached, a halogen atom, C_1-6Forms a saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic or heterocyclic group which may be substituted by an alkoxycarbonyl group or an oxygen atom (this carbocyclic or heterocyclic group is Condensed with a saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic or heterocyclic group to form a tricyclic group with the 6-membered carbocycle of formula (a4)).
[0092]
According to a more preferred embodiment of the present invention, in the above case, R¹⁷, R¹⁸, R²⁰And R²¹Is
Hydrogen atom,
Halogen atoms,
C optionally substituted by a hydroxyl group or a phenyl group_1-6An alkyl group,
C_1-8An alkoxy group,
C_1-4Alkyl group, C_1-4C optionally substituted by an alkoxy group, an oxygen atom or a phenyl group_2-6An alkenyl group,
C_1-6A phenyl group optionally substituted by an alkyl group,
An amino group optionally substituted by a phenyl group (wherein the phenyl group is a hydroxyl group, a halogen atom, C_1-4May be further substituted with an alkyl group),
A nitro group or
Represents a saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic or heterocyclic group,
R¹⁷And R¹⁸Or R²⁰And R²¹Together with the carbon atom to which they are attached may form a saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic or heterocyclic group.
[0093]
R¹⁷Or R²¹May be substituted C_2-6When they are alkenyl groups, preferably they are —C═C (R²⁶) (R²⁷). Where R²⁶And R²⁷May be the same or different and are a hydrogen atom, C_1-4Alkyl group, C_1-4Alkoxy group, C_1-4Represents an alkoxycarbonyl group or a phenyl group, more preferably R²⁶And R²⁷May be the same or different and are a hydrogen atom, C_1-2Represents an alkoxycarbonyl group or a phenyl group.
[0094]
R¹⁷Or R²¹Is an amino group optionally substituted by a phenyl group, preferably these can be represented by the formula
Embedded image

(In the above formula,
R²⁸~ R³²May be the same or different and are a hydrogen atom, a hydroxyl group, a halogen atom, or C_1-4Represents an alkyl group, more preferably R²⁸~ R³²All represent hydrogen atoms).
[0095]
R¹⁸And R¹⁹Or R¹⁹And R²⁰Together with the carbon atom to which they are attached to form a carbocyclic or heterocyclic group, together with the carbocyclic ring of formula (a4), a bicyclic group, For example, groups such as naphthyl, indole, benzimidazole, quinoline and the like can be formed.
For example, when the bicyclic group is in the form of an indole ring, the formula (a4) can be represented by the following formula.
Embedded image

(In the above formula,
R³³~ R³⁵May be the same or different and are a hydrogen atom, a hydroxyl group, a halogen atom, C_1-2Alkylcarbonyl, C_1-2An alkoxycarbonyl group or C_1-4Represents an alkyl group, more preferably R³⁵Represents a hydrogen atom).
[0096]
Halogen atom, C_1-6Forms a saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic or heterocyclic group which may be substituted by an alkoxycarbonyl group or an oxygen atom (this carbocyclic or heterocyclic group is Condensed with a saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic or heterocyclic group to form a tricyclic group with the 6-membered carbocycle of formula (a4)).
[0097]
According to a preferred embodiment of the present invention, Z represents —O—, —NH— or —C (═O) —, more preferably —O— or —C (═O) —.
[0098]
According to a preferred embodiment of the present invention,
When X represents CH and Z represents —O—, A is selected from the groups of formulas (a1) to (a4);
When X represents N and Z represents —O—, A is the formula (a1), or
When X represents CH and Z represents -C (= O)-, A is the formula (a1).
[0099]
According to one preferred embodiment of the invention, the compound of formula (I) can be a compound of formula (100)
Embedded image

[In the above formula,
X represents CH or N;
Z represents -O-, -NH-, -S- or -C (= O)-;
R¹⁰¹And R¹⁰²May be the same or different,
C_1-6An alkyl group, or
Represents any group selected from the group consisting of groups of formulas (i-a) to (iv):
R¹⁰³~ R¹⁰⁶May be the same or different,
Hydrogen atom,
Halogen atoms,
C_1-6An alkyl group,
C optionally substituted by a halogen atom or a phenyl group_1-10An alkoxy group,
C_2-6An alkenylcarbonyloxy group,
C_1-4An alkylcarbonyl group, or
Represents a phenyl group optionally substituted by a halogen atom,
R¹⁰³And R¹⁰⁴, R¹⁰⁴And R¹⁰⁵And R¹⁰⁵And R¹⁰⁶Each may form a saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic or heterocyclic group together with the carbon atom to which they are attached,
R¹⁰⁸Is
C optionally substituted by a phenyl group_1-10An alkyl group,
C_2-8An alkenyl group, or
A saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic group, which may be substituted by a halogen atom.
[0100]
According to one more preferred embodiment of the present invention, in formula (100), R¹⁰³~ R¹⁰⁶At least one of the groups is a group other than a hydrogen atom, and R¹⁰⁸Is unsubstituted C_1-8C substituted by alkyl group or phenyl group_1-4Alkyl group, C_2-8An alkenyl group or a phenyl group optionally substituted by a halogen atom is represented.
[0101]
According to one preferred embodiment of the invention, the compound of formula (I) may be a compound of formula (200)
Embedded image

[In the above formula,
X represents CH or N, preferably CH,
Z represents —O—, —NH—, —S— or —C (═O) —, preferably —O—,
R²⁰¹And R²⁰²May be the same or different,
C_1-6An alkyl group, or
Represents any group selected from the group consisting of groups of formulas (i-a) to (iv);
R²⁰³~ R²⁰⁶May be the same or different,
Hydrogen atom,
Halogen atoms,
C_1-6An alkyl group,
C optionally substituted by a halogen atom or a phenyl group_1-10An alkoxy group,
C_2-6An alkenylcarbonyloxy group,
C_1-4An alkylcarbonyl group, or
Represents a phenyl group optionally substituted by a halogen atom,
R²⁰³And R²⁰⁴, R²⁰⁴And R²⁰⁵And R²⁰⁵And R²⁰⁶Each may form a saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic or heterocyclic group together with the carbon atom to which they are attached,
R²⁰⁹And R²¹⁰May be the same or different,
Hydrogen atom,
C_1-6An alkyl group,
A saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic group, which may be substituted by a halogen atom, or
Represents naphthyl optionally substituted by a halogen atom;
R²⁰⁹And R²¹⁰Together with the nitrogen atom to which they are attached may form a saturated or unsaturated 5- or 6-membered heterocyclic group (the heterocyclic group further contains one or more heteroatoms The heterocyclic group may be substituted with a hydroxyl group._1-4Optionally substituted by an alkyl group or a saturated or unsaturated 5- or 6-membered heterocyclic group].
[0102]
According to one more preferred embodiment of the present invention, in formula (200):
R²⁰³~ R²⁰⁶At least one of the groups is a group other than a hydrogen atom, and
R²⁰⁹And R²¹⁰And at least one of them is a hydrogen atom, the other is a hydrogen atom, C_1-4Represents an alkyl group, a saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic group (which may be substituted by a halogen atom), or naphthyl; or
R²⁰⁹And R²¹⁰Together with the nitrogen atom to which they are attached form a saturated or unsaturated 5- or 6-membered heterocyclic group (which may further contain one or more heteroatoms). Well, C may be substituted with a hydroxyl group_1-4Optionally substituted by an alkyl group or a saturated 5- or 6-membered heterocyclic group)].
[0103]
According to one preferred embodiment of the invention, the compound of formula (I) may be a compound of formula (300)
Embedded image

[In the above formula,
X represents CH or N, preferably CH,
Z represents —O—, —NH—, —S— or —C (═O) —, preferably —O—,
R³⁰¹And R³⁰²May be the same or different,
C_1-6An alkyl group, or
Represents any group selected from the group consisting of groups of formulas (i-a) to (iv);
R³⁰³~ R³⁰⁶May be the same or different,
Hydrogen atom,
Halogen atoms,
C_1-6An alkyl group,
C optionally substituted by a halogen atom or a phenyl group_1-10An alkoxy group,
C_2-6An alkenylcarbonyloxy group,
C_1-4An alkylcarbonyl group, or
Represents a phenyl group optionally substituted by a halogen atom,
R³⁰³And R³⁰⁴, R³⁰⁴And R³⁰⁵And R³⁰⁵And R³⁰⁶Each may form a saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic or heterocyclic group together with the carbon atom to which they are attached,
R³¹¹And R³¹²May be the same or different,
Hydrogen atom,
C_1-6An alkyl group,
A saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic group, which may be substituted by a halogen atom, or
Represents naphthyl optionally substituted by a halogen atom;
R³¹¹And R³¹²Together with the nitrogen atom to which they are attached may form a saturated or unsaturated 5- or 6-membered heterocyclic group (the heterocyclic group further contains one or more heteroatoms The heterocyclic group may be substituted with a hydroxyl group._1-4Optionally substituted by an alkyl group or a saturated or unsaturated 5- or 6-membered heterocyclic group].
[0104]
According to one more preferred embodiment of the present invention, in formula (300):
R³⁰³~ R³⁰⁶At least one of the groups is a group other than a hydrogen atom, and
R³¹¹And R³¹²Together with the nitrogen atom to which they are attached to form a saturated or unsaturated 5- or 6-membered heterocyclic group, which heterocyclic group further comprises one or more heteroatoms C which may be substituted with a hydroxyl group_1-4Optionally substituted by an alkyl group or a saturated 5- or 6-membered heterocyclic group).
[0105]
According to one preferred embodiment of the invention, the compound of formula (I) can be a compound of formula (400)
Embedded image

[In the above formula,
X represents CH or N, preferably CH,
Z represents —O—, —NH—, —S— or —C (═O) —, preferably —O—,
R⁴⁰¹And R⁴⁰²May be the same or different,
C_1-6An alkyl group, or
Represents any group selected from the group consisting of groups of formulas (i-a) to (iv);
R⁴¹³And R⁴¹⁴Represents a hydrogen atom,
R⁴¹⁵Is a halogen atom, C_1-6Alkyl group, C_1-8Alkoxy group, C_1-4Represents an alkylcarbonyl group or a phenylcarbonyl group,
R⁴¹⁶Is a hydrogen atom, a halogen atom, C_1-6Alkyl group, C_1-8Alkoxy group, C_1-4Represents an alkylcarbonyl group or a phenylcarbonyl group].
[0106]
According to one more preferred embodiment of the present invention, in formula (400):
R⁴¹⁵Is C_1-6Represents an alkyl group, more preferably a methyl group, an ethyl group, particularly preferably a methyl group,
R⁴¹⁶Is a hydrogen atom, a halogen atom, or C_1-4Represents an alkylcarbonyl group.
[0107]
According to one preferred embodiment of the invention, the compound of formula (I) can be a compound of formula (500)
Embedded image

[In the above formula,
X represents CH or N, preferably CH,
Z represents —O—, —NH—, —S— or —C (═O) —, preferably —O—,
R⁵⁰¹And R⁵⁰²May be the same or different,
C_1-6An alkyl group, or
Represents any group selected from the group consisting of groups of formulas (i-a) to (iv);
R⁵¹⁷, R⁵¹⁸, R⁵²⁰And R⁵²¹May be the same or different,
Hydrogen atom,
Halogen atoms,
C optionally substituted by a hydroxyl group or a phenyl group_1-6An alkyl group,
C_1-8An alkoxy group,
C_1-4Alkyl group, C_1-4C optionally substituted by an alkoxy group, an oxygen atom or a phenyl group_2-6An alkenyl group,
C_1-4A phenylcarbonyl group optionally substituted by an alkyl group,
An amino group optionally substituted by a phenyl group,
A nitro group, or
A saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic or heterocyclic group (the carbocyclic or heterocyclic group is C_1-6Which may be substituted by an alkyl group)
R⁵¹⁷And R⁵¹⁸Or R⁵²⁰And R⁵²¹Together with the carbon atom to which they are attached may form a saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic or heterocyclic group,
R⁵¹⁹Is
C_1-4Alkyl group, C_1-4C optionally substituted by an alkoxy group, an oxygen atom or a phenyl group_2-6An alkenyl group,
A nitro group, or
A saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic or heterocyclic group (the carbocyclic or heterocyclic group is C_1-6Optionally substituted by an alkyl group), or
R⁵¹⁸And R⁵¹⁹Or R⁵¹⁹And R⁵²⁰Together with the carbon atom to which they are attached, a halogen atom, C_1-6Forms a saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic or heterocyclic group which may be substituted by an alkoxycarbonyl group or an oxygen atom (this carbocyclic or heterocyclic group is Condensed with a saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic or heterocyclic group to give R⁵¹⁷A tricyclic group may be formed with a 6-membered carbocycle to which the group is attached)].
[0108]
According to one more preferred embodiment of the present invention, in formula (500):
R⁵¹⁹Is
C_1-4Alkyl group, C_1-4C optionally substituted by an alkoxy group, an oxygen atom or a phenyl group_2-6An alkenyl group,
A nitro group, or
A saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic or heterocyclic group (the carbocyclic or heterocyclic group is C_1-6Optionally substituted by an alkyl group).
[0109]
The compounds of formula (I) can be in the form of salts, which can be pharmaceutically acceptable salts when used for therapeutic and pharmaceutical applications. Preferable examples include alkali metal or alkaline earth metal salt such as sodium salt, potassium salt or calcium salt, halogenated salt such as hydrofluoride, hydrochloride, hydrobromide and hydroiodide. Inorganic acid salts such as hydrogenates, nitrates, perchlorates, sulfates, phosphates, lower alkyl sulfonates such as methanesulfonate, trifluoromethanesulfonate, ethanesulfonate, benzenesulfonic acid Salts, aryl sulfonates such as p-toluenesulfonate, fumaric acid, succinate, citrate, tartrate, oxalate, maleate, acetate, malate, lactate, ascorbic acid Examples include organic acid salts such as salts, and amino acid salts such as glycine salts, phenylalanine salts, glutamate salts, and aspartates.
[0110]
The compound of formula (I) may be a solvate. Examples of such solvates include hydrates, alcohol solvates (eg, methanol solvate, ethanol solvate), and ether solvates (eg, diethyl ether solvate).
[0111]
Production of TGFβ inhibitory compounds of formula (I)
Compounds of formula (I) can be prepared, for example, according to Scheme 1 to Scheme 13. The starting materials necessary for the synthesis of the compounds of formula (I) are commercially available or can be readily prepared by conventional methods. R in the scheme¹~ R³⁶Is synonymous with the content defined above.
[0112]
In the following scheme, an quinolone derivative that is an intermediate can be synthesized according to, for example, WO 97/17329.
Further, 4-chloroquinoline derivatives are described in, for example, Org. Synth. Col. Vol. 3, 272 (1955), Acta Chim. Hung., 112, 241 (1983) or WO 98/47873. It can be synthesized according to conventional methods.
4-Chloroquinazoline derivatives are described in J. Am. Chem. Soc., 68, 1299 (1946), J. Am. Chem. Soc., 68, 1305 (1946), supervised by Kotake, Dai Organic Chemistry, Vol. 17, 150. Page, Asakura Shoten (published in 1967).
[0113]
In the formula (I), the compound in which A represents a group of the formula (a4) can be produced, for example, according to the following scheme 1 and scheme 2.
Scheme 1:
Embedded image

[0114]
Scheme 2:
Embedded image

[0115]
The desired 4-phenoxyquinoline derivative, 4-anilinoquinoline derivative, or the corresponding quinazoline derivative can be used for the phenol derivative or the corresponding aniline derivative in an appropriate solvent (for example, o-dichlorobenzene) or in the absence of a solvent. , 4-chloroquinoline derivatives or the corresponding quinazoline derivatives can be synthesized. In the above scheme 1, the chlorinating agent includes phosphoryl chloride.
[0116]
In the formula (I), a compound in which A represents a group of the formula (a1) (particularly a compound of an orthoketone) can be produced, for example, according to the following scheme 3.
Scheme 3:
Embedded image

[0117]
In this scheme, the desired compound of formula (I) can be synthesized by the following three routes:
(I) Targeting a 4-chloroquinoline derivative or a corresponding quinazoline derivative by allowing a phenol derivative or a corresponding aniline derivative to act in a suitable solvent (for example, o-dichlorobenzene) or in the absence of a solvent. A compound of formula (I) can be synthesized (step (1) above);
(Ii) A 4-chloroquinoline derivative or a corresponding quinazoline derivative is reacted with an orthobromophenol derivative or a corresponding orthobromoaniline derivative in a suitable solvent (for example, o-dichlorobenzene) or in the absence of a solvent (described above) Step (2)), then, using a metal base (eg, n-butyllithium) to polarize the bromine moiety and reacting the generated anion with acid chloride (step (3) above) yields the desired formula. Compounds of (I) can be prepared;
(Iii) A 4-chloroquinoline derivative or a corresponding quinazoline derivative is reacted with an orthohydroxybenzaldehyde derivative or a corresponding orthoaminobenzaldehyde derivative in a suitable solvent (for example, o-dichlorobenzene) or in the absence of a solvent (described above) Step (4)). Next, an alkylating agent (for example, methylmagnesium bromide) is reacted therewith (the above step (5)), and the resulting alcohol is oxidized (the above step (6)) to obtain the target compound of the formula (I). Can be manufactured.
[0118]
In the formula (I), a compound in which A represents a group of the formula (a1) (particularly an amide compound) can be produced, for example, according to the following scheme 4.
Scheme 4:
Embedded image

[0119]
An ester can be produced by reacting a 4-chloroquinoline derivative or a corresponding quinazoline derivative with an orthohydroxybenzoic acid ester derivative or a corresponding orthoaminobenzoic acid ester derivative in a suitable solvent (for example, o-dichlorobenzene) or in the absence of a solvent. A type of compound of formula (I) can be prepared (step (1) above). Next, the ester type compound is hydrolyzed with an alkali (step (2) above), and reacted with an amine using a condensing agent (for example, 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride). By carrying out (step (3) above), the desired compound of formula (I) can be synthesized.
[0120]
In the formula (I), a compound having a desired substituent at the 7-position can be produced, for example, according to the following scheme 5.
Scheme 5:
Embedded image

[0121]
A phenol derivative or a corresponding aniline derivative is allowed to act on the prepared 7-benzyloxy-4-chloroquinoline derivative or the corresponding quinazoline derivative in an appropriate solvent (for example, o-dichlorobenzene) or in the absence of a solvent (described above). Step (1)). Next, the benzyl group is deprotected with the obtained intermediate 3 using an acid (step (2) above), and the resulting intermediate 4 is converted to an alkylating agent (for example, 1 bromo-2- By reacting with (chloroethane) (the above step (3)), the desired compound of formula (I) can be synthesized.
[0122]
In the formula (I), a compound in which Z is —C (═O) — can be produced, for example, according to the following scheme 6.
Scheme 6:
Embedded image

[0123]
A brominating agent (for example, phosphoryl bromide) is allowed to act on the prepared 4-quinolone derivative or the corresponding quinazolone derivative (the above step (1)). Next, the bromine moiety is polar-converted using a metal base (eg, n-butyllithium), and the generated anion and acid chloride are reacted (step (2) above) to give the desired compound of formula (I) Can be manufactured.
[0124]
In formula (I), A represents a group of formula (a4) and R²¹A compound in which is an optionally substituted alkenyl group can be produced, for example, according to Scheme 7 below.
Scheme 7:
Embedded image

[0125]
An orthohydroxybenzaldehyde derivative or a corresponding orthoaminobenzaldehyde derivative is allowed to act on a 4-chloroquinoline derivative or a corresponding quinazoline derivative in a suitable solvent (for example, o-dichlorobenzene) or in the absence of a solvent (the above step (1)). )) And then reacting with phosphorus ylide (step (2) above), the desired compound of formula (I) can be synthesized.
[0126]
In the formula (I), a compound in which A represents a group of the formula (a2) can be produced, for example, according to the following scheme 8.
Scheme 8:
Embedded image

[0127]
An orthohydroxybenzaldehyde derivative or a corresponding orthoaminobenzaldehyde derivative is allowed to act on a 4-chloroquinoline derivative or a corresponding quinazoline derivative in an appropriate solvent (for example, o-dichlorobenzene) or in the absence of a solvent (the above-mentioned step ( 1)), then amine (R¹¹R¹²NH) and reduction after imine formation (the above-mentioned step (2)), the target compound of formula (I) can be synthesized.
[0128]
In the formula (I), a compound in which A represents a group of the formula (a4) and has an amino group substituted by a phenyl group as a substituent thereof can be produced, for example, according to the following scheme 9.
Scheme 9:
Embedded image

[0129]
An orthonitrophenol derivative or a corresponding orthonitroaniline derivative is allowed to act on a 4-chloroquinoline derivative or a corresponding quinazoline derivative in an appropriate solvent (for example, o-dichlorobenzene) or in the absence of a solvent (the above step (i )), And then reducing the nitro group (step (ii) above) and reacting with a phenylboronic acid derivative (step (iii) above), the desired compound of formula (I) can be synthesized. .
[0130]
In the formula (I), a compound in which A represents a group of the formula (a4) and has a 5-membered heterocyclic group containing nitrogen as a substituent thereof can be produced, for example, according to the following scheme 10.
Scheme 10:
Embedded image

[0131]
A 5-hydroxyindole derivative or a corresponding 5-aminoindole derivative is allowed to act on a 4-chloroquinoline derivative or a corresponding quinazoline derivative in an appropriate solvent (for example, o-dichlorobenzene) or in the absence of a solvent (the above step). (i)) and then the amino group is alkylated with an alkylating agent (eg methyl iodide) or acylated with an acylating agent (eg acetyl chloride) (step (ii) above). )), The desired compound of formula (I) can be synthesized.
[0132]
In the formula (I), the compound in which A represents a group of the formula (a4) can also be produced, for example, according to the following scheme 11.
Scheme 11:
Embedded image

[0133]
For the 4-chloroquinoline derivative or the corresponding quinazoline derivative, the 3-hydroxy-6-nitrobenzaldehyde derivative or the corresponding 5-amino-2-nitro derivative in a suitable solvent (for example, o-dichlorobenzene) or in the absence of a solvent. A benzaldehyde derivative is allowed to act (the above step (i)), and then the formyl group is reduced (the above step (ii)). Next, the target compound is synthesized by reducing the nitro group of the obtained compound (the above step (iii)) and allowing a carbonylating agent (for example, triphosgene) to act thereon (the above step (iv)). can do.
[0134]
In the formula (I), the compound in which A represents a group of the formula (a1) can also be produced, for example, according to the following scheme 12.
Scheme 12:
Embedded image

[0135]
The anisole derivative is reacted with an acid chloride in the presence of a Lewis acid (the above step (i)) to deprotect the methoxy group (the above step (ii)). Next, this is reacted with a 4-chloroquinoline derivative or a corresponding quinazoline derivative in an appropriate solvent (for example, o-dichlorobenzene) or in the absence of a solvent (the above step (iii)), thereby achieving the intended purpose. Compounds can be synthesized.
[0136]
In the formula (I), a compound in which A represents a pyridine ring, that is, a group of the formula (a3) can be produced, for example, according to the following scheme 13.
Scheme 13:
Embedded image

[0137]
A 3-hydroxypyridine derivative or a corresponding 3-aminopyridine derivative is allowed to act on a 4-chloroquinoline derivative or a corresponding quinazoline derivative in an appropriate solvent (for example, o-dichlorobenzene) or in the absence of a solvent (the above step). (i)), the target compound can be synthesized.
[0138]
Alternatively, the 4-chloroquinoline derivative or the corresponding quinazoline derivative, in a suitable solvent (eg, o-dichlorobenzene) or in the absence of solvent, the 3-hydroxy-2-pyridinecarbaldehyde derivative or the corresponding 3-amino- A 2-pyridinecarbaldehyde derivative is allowed to act (the above step (ii)), and then an alkylating agent (for example, methylmagnesium bromide) is reacted (the above step (iii)). Next, the target compound can be synthesized by oxidizing the obtained alcoholic compound (step (iv) above).
[0139]
TGFβ inhibitory compound of formula (II)
According to another preferred embodiment of the present invention, the TGFβ-inhibiting compound is a compound represented by the following formula (II) or a salt thereof that has been confirmed to have TGFβ-inhibiting activity in WO 01/72737. Is:
[0140]
Embedded image

[0141]
{In the above formula, R₁Is halo, —O—C_1-6Alkyl, -S-C_1-6Alkyl, C_1-6Alkyl, C_1-6Haloalkyl, -O- (CH₂)_n-Ph, -S- (CH₂)_n-Ph, cyano, phenyl and CO₂R (where R is hydrogen or C_1-6Naphthyl or phenyl optionally substituted with one or more substituents selected from the group consisting of alkyl and n is 0, 1, 2 or 3; or R₁Is phenyl fused with a 5-7 membered aromatic or non-aromatic ring, wherein the ring may contain up to 3 heteroatoms independently selected from N, O and S;
R₂H, C_1-6Alkyl, C_1-6Alkoxy, phenyl, NH (CH₂)_n-Ph, NH-C_1-6Alkyl, halo, or alkoxy;
R₃Is COOH, tetrazole, CN, NO₂, OH, -S-C_1-6Alkyl, -SO-C_1-6Alkyl, -O-C_1-6Alkyl, SONH₂, CHO, CH₂OH, (CH₂)_nNH₂, CONHOR ’, O (CH₂)_nCO₂R ', O (CH₂)_nCONHR ', CONHR', (CH₂)_nCO₂R 'or (CH₂)_n-CONHR '(where R' is hydrogen or C_1-6And n is 0, 1, 2 or 3); and
X₁And X₂One is N or CR ″ and the other is NR ″ or CHR ″ (where R ″ is hydrogen, C_1-6Alkyl or C_3-7Cycloalkyl) or X₁And X₂When one is N or CR ″, the other may be S or O}.
[0142]
According to a preferred embodiment of the present invention, the compound of formula (II) includes R₁Is halo, -O-C_1-6Alkyl, -S-C_1-6Alkyl, C_1-6Alkyl, -O- (CH₂)_n-Ph, -S- (CH₂)_n-Ph, cyano, phenyl and CO₂R (where R is hydrogen or C_1-6Naphthyl or phenyl optionally substituted with one or more substituents selected from the group consisting of alkyl and n is 0, 1, 2 or 3; or R₁Is a phenyl fused with a 5-7 membered aromatic or non-aromatic ring, wherein the ring may contain up to 2 heteroatoms independently selected from N, O and S;
R₂Is H, NH (CH₂)_n-Ph or NH-C_1-6Alkyl; and
R₃Is CO₂H, CONH₂, CN, NO₂, C_1-6Alkylthio, SO₂-C_1-6Alkyl, C_1-6Alkoxy, SONH₂, CONHOH, NH₂, CHO, CH₂OH, CH₂NH₂Or CO₂R (where R is hydrogen or C_1-6Compounds that are alkyl) are excluded.
[0143]
The double bond indicated by the dotted line in formula (II) represents a tautomeric ring type compound. X₁Or X₂It is understood that when either is carbon, this double bond can be to either a carbon or a heteroatom. X₁And X₂When both are carbon, this double bond is X₁Or X₂Can be for any of the following. X₁And X₂When both are heteroatoms, this double bond is to an unsubstituted heteroatom.
[0144]
Preferably R₁Is optionally substituted naphthyl or phenyl. More preferably, R₁Halo, C_1-6Alkoxy, C_1-6Phenyl optionally substituted with one or more substituents selected from the group consisting of alkylthio and phenyl, or R₁Is phenyl (= O) fused to a 5-7 membered aromatic or non-aromatic ring, wherein the ring may contain up to 2 heteroatoms independently selected from N, O and S For example, R₁Are benzo [1,3] dioxolyl, 2,3-dihydrobenzo [1,4] dioxinyl, benzoxazolyl, benzothiazolyl, quinoxalinyl, benzo [1,2,5] oxadiazolyl, benzo [1,2,5] Represents thiadiazolyl, [1,2,4] triazolo [1,5-a] pyridyl, dihydrobenzofuranyl, benzo [1,4] oxazinyl-3-one or benzoxazolyl-2-one.
[0145]
Preferably R₂Is other than hydrogen. R₂When is other than hydrogen, it is preferably located ortho to the nitrogen of the pyridyl ring. R₂Is preferably methyl.
[0146]
Preferably R₃Is CO₂H, CONH₂, CONHOH, CH₂OH, CN or tetrazole.
[0147]
Preferably, X₁And X₂One is N or CR ″ and the other is NR ″ or CHR ′, where R ″ is hydrogen, C_1-6Alkyl or C_3-7Cycloalkyl (where X is₁And X₂Or at least one of N is NR ″) or X₁And X₂One of these is N and the other is O. More preferably, X₁And X₂One is N and the other is NR ″.
[0148]
Preferably each R ″ is hydrogen.
[0149]
The compound of formula (II) preferably has a molecular weight of less than 800, more preferably less than 600.
[0150]
Specific compounds of formula (II) include the following compounds and salts thereof:
4- (4-benzo [1,3] dioxol-5-yl-5-pyridin-2-yl-1H-imidazol-2-yl) phenol,
4- (4-benzo [1,3] dioxol-5-yl-5-pyridin-2-yl-1H-imidazol-2-yl) -N-methyl-benzamide,
4- (4-benzo [1,3] dioxol-5-yl-5-pyridin-2-yl-1H-imidazol-2-yl) -N-methoxy-benzamide,
2- {4-benzo [1,3] dioxol-5-yl-2- [4- (2H-tetrazol-5-yl) -phenyl] -1H-imidazol-5-yl} -pyridine,
[4- (4-Benzo [1,3] dioxol-5-yl-5-pyridin-2-yl-1H-imidazol-2-yl) -phenoxy] -acetic acid,
4- [4- (4-fluoro-3-methoxyphenyl) -5- (6-methylpyridin-2-yl) -1H-imidazol-2-yl] benzonitrile,
4- [4- (4-fluoro-3-methoxyphenyl) -5- (6-methylpyridin-2-yl) -1H-imidazol-2-yl] benzamide,
4- [4- (3-fluoro-4-methoxyphenyl) -5- (6-methylpyridin-2-yl) -1H-imidazol-2-yl] benzonitrile,
4- [4- (3-fluoro-4-methoxyphenyl) -5- (6-methylpyridin-2-yl) -1H-imidazol-2-yl] benzamide,
4- [4-benzo [1,2,5] oxadiazol-5-yl-5- (6-methylpyridin-2-yl) -1H-imidazol-2-yl] benzonitrile,
4- [4-benzo [1,2,5] oxadiazol-5-yl-5- (6-methylpyridin-2-yl) -1H-imidazol-2-yl] benzamide,
4- [4- (6-methoxynaphthalen-2-yl) -5- (6-methylpyridin-2-yl) -1H-imidazol-2-yl] benzonitrile,
4- [4- (6-methoxynaphthalen-2-yl) -5- (6-methylpyridin-2-yl) -1H-imidazol-2-yl] benzamide,
4- [4-benzo [1,2,5] thiadiazol-5-yl-5- (6-methylpyridin-2-yl) -1H-imidazol-2-yl] benzonitrile,
4- [4-benzo [1,2,5] thiadiazol-5-yl-5- (6-methylpyridin-2-yl) -1H-imidazol-2-yl] benzamide,
4- [4-benzo [1,3] dioxol-5-yl-5- (6-methylpyridin-2-yl) -1H-imidazol-2-yl] benzonitrile,
4- [4-benzo [1,3] dioxol-5-yl-5- (6-methylpyridin-2-yl) -1H-imidazol-2-yl] benzamide,
6- [2- (4-cyanophenyl) -5- (6-methylpyridin-2-yl) -1H-imidazol-4-yl] -quinoxaline, and
6- [2- (4-Carboxamidophenyl) -5- (6-methylpyridin-2-yl) -1H-imidazol-4-yl] -quinoxaline.
[0151]
Stable salts of the compound of formula (II) include, but are not limited to, inorganic acids such as hydrochloride, sulfate, phosphate, diphosphate, hydrobromide, and nitrate. Salt or malate, maleate, fumarate, tartrate, succinate, citrate, acetate, lactate, methanesulfonate, p-toluenesulfonate, palmitate, salicylate And salts with organic acids such as stearates. For therapeutic or pharmaceutical applications, these salts are preferably pharmaceutically acceptable.
[0152]
Some of the compounds of formula (II) can be crystallized or recrystallised from solvents such as aqueous and organic solvents. In such cases, solvates may be formed. The solvates include hydrates and stoichiometric solvates including compounds containing various amounts of water that can be generated in a process such as lyophilization. For therapeutic or pharmaceutical use, these solvates are preferably pharmaceutically acceptable.
[0153]
Some of the compounds of formula (II) may exist in the form of optical isomers, for example diastereoisomers and isomer mixtures in all proportions (for example racemic mixtures). In the present invention, all such forms, in particular pure isomers, can be used. Various isomers can be separated or resolved from one another by conventional methods, or any given isomer can be obtained by conventional synthetic methods or by stereospecific or asymmetric synthesis. .
[0154]
Since the compound of formula (II) is intended for use as a pharmaceutical composition, it is preferably in a substantially pure form, for example, a purity of at least 60% by weight, more preferably a purity of at least 75% by weight. More preferably, the purity is at least 85% by weight, more preferably at least 98% by weight. In order to prepare a more pure form of the compound of formula (II) for use in pharmaceutical compositions, a less pure compound preparation may be used, preferably such a compound preparation is at least 1% by weight. More preferably at least 5% by weight, still more preferably 10 to 59% by weight of the compound of formula (II) or a derivative thereof.
In the compound of formula (II), “C_1-6“Alkyl”, when used alone, refers to larger groups such as C_1-6Any part of alkoxy is not limited as long as its chain length is not limited, but includes methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, sec-butyl, isobutyl and tert-butyl. , Means a straight or branched group of 1 to 6 carbon atoms.
[0155]
In the compound of formula (II), C_1-6A haloalkyl group is one or more halo atoms, CF₃Specific C including_1-6It may contain a haloalkyl group.
[0156]
In the compounds of formula (II), “halo” or “halogen” are used interchangeably to mean groups derived from the elements chlorine, fluorine, iodine and bromine.
[0157]
In the compound of formula (II), “cycloalkyl” is used to mean a cyclic group, preferably 3 to 7 carbons, including but not limited to cyclopropyl, cyclopentyl and cyclohexyl. .
[0158]
In the compound of formula (II), “aryl” means a 5- to 14-membered substituted or unsubstituted aromatic ring, or a ring structure including but not limited to phenyl, naphthyl, bicyclic or tricyclic. Used to do.
[0159]
Production of a TGFβ inhibitory compound of formula (II)
The TGFβ-inhibiting compound of the formula (II) can be produced according to the method described in WO 01/72737.
[0160]
【Example】
EXAMPLES Hereinafter, the present invention will be described more specifically with reference to examples. However, the present invention is not limited to the modes described in these examples.
[0161]
Example 1: Preparation of TGFβ inhibitory compound
Compound 1:
4- [4-Benzo [1,3] dioxol-5-yl-5- (6-methyl-pyridin-2-yl) -1H-imidazol-2-yl] -benzamide
[0162]
Embedded image

The title compound was synthesized according to the method described in “Example 17” of WO 01/72737.
[0163]
Compound 2:
{4- [4-Benzo [1,3] dioxol-5-yl-5- (6-methyl-pyridin-2-yl) -1H-imidazol-2-yl] -phenyl} -methanol
[0164]
Embedded image

[0165]
1-Benzo [1,3] dioxol-5-yl-2- (6-methyl-pyridin-2-yl) ethane-1,2-dione (2.04 g), methyl terephthalaldehyde (10 ml), ammonium acetate (3.08 g) was dissolved in THF / methanol (10 ml / 2 ml) and stirred at 60 ° C. for 18 hours. After cooling to room temperature, the solvent was distilled off under reduced pressure. Aqueous sodium hydrogen carbonate solution was added to the residue, and the mixture was extracted with ethyl acetate. did. The solvent was distilled off under reduced pressure, and the obtained residue was purified by silica gel column chromatography using chloroform / methanol to give 4- [4-benzo [1,3] dioxol-5-yl-5- ( 6-methyl-pyridin-2-yl) -1H-imidazol-2-yl] methyl benzoate was obtained (1.72 g, yield 56%).
[0166]
4- [4-Benzo [1,3] dioxol-5-yl-5- (6-methyl-pyridin-2-yl) -1H-imidazol-2-yl] methyl benzoate (1.72 g) was added to THF ( 20 ml), cooled to −78 ° C., and 1M DIBAL solution (20 ml) was slowly added. After stirring at −78 ° C. for 1 hour, water was added to the reaction solution. After extraction with ethyl acetate, the ethyl acetate layer was washed successively with water and saturated brine, and dried over anhydrous sodium sulfate. The solvent was distilled off under reduced pressure, and the resulting residue was purified by silica gel column chromatography of chloroform-methanol system to obtain the title compound (1.58 g, yield 99%).
[0167]
¹H-NMR (CDCl₃, 400 MHz): δ 2.47 (s, 3H), 4.63 (s, 2H), 5.93 (s, 2H), 6.80 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.89 ( d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.06-7.09 (m, 2H), 7.25-7.29 (m, 3H), 7.36 (m, 1H), 7.80 ( d, J = 8.0 Hz, 2H); mass analysis value (ESI-MS, m / z): 386 (M + 1)⁺
[0168]
Compound 3:
1- [2- (6,7-Dimethoxyquinolin-4-yloxy) -4,5-dimethylphenyl] -1-ethanone
[0169]
Embedded image

[0170]
4-Chloro-6,7-dimethoxyquinoline (100 mg), 4,5-dimethyl-2-hydroxyacetophenone (220 mg), 4-dimethylaminopyridine (164 mg) were suspended in o-dichlorobenzene (6 ml), and 120 ° C. For 24 hours. After cooling to room temperature, water was added to the reaction mixture and the mixture was extracted with ethyl acetate. The ethyl acetate layer was washed successively with water and saturated brine, and dried over anhydrous sodium sulfate. The solvent was distilled off under reduced pressure, and the resulting residue was purified by acetone-hexane column chromatography to obtain the title compound (34 mg, yield 22%).
[0171]
¹H-NMR (CDCl₃, 400 MHz): δ 2.22 (s, 3H), 2.26 (s, 3H), 2.40 (s, 3H), 3.97 (s, 3H), 3.98 (s, 3H), 6 .33 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 6.85 (s, 1H), 7.37 (s, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.65 (s, 1H), 8.41 (d, J = 5.4 Hz, 1H); mass analysis value (ESI-MS, m / z): 352 (M + 1)⁺
[0172]
Compound 4:
4-[(2-Iodo-6-methyl-3-pyridyl) oxy] -6,7-dimethoxyquinoline
[0173]
Embedded image

[0174]
4-chloro-6,7-dimethoxyquinoline (229 mg), 3-hydroxy-2-iodo-6-methylpyridine (486 mg), 4-dimethylaminopyridine (390 mg) were suspended in o-dichlorobenzene (5 ml), Stir at 140 ° C. overnight. After cooling to room temperature, the title compound was obtained by purification by acetone-chloroform column chromatography (47 mg, yield 11%).
[0175]
¹H-NMR (CDCl₃, 400 MHz): δ 2.62 (s, 3H), 4.06 (s, 3H), 4.07 (s, 3H), 6.35 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 7.19 ( d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.31 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 8.51 (d, J = 5.4 Hz, 1H); mass analysis value (ESI-MS, m / z): 423 (M + 1)⁺
[0176]
Compound 5:
1- {2- [7- (2-imidazol-1-ylethoxy) -6-methoxyquinolin-4-yloxy] -4,5-dimethylphenyl} ethanone
[0177]
Embedded image

[0178]
7-Benzyloxy-4-chloro-6-methoxyquinoline (1.50 g), 2-hydroxy-4,5-dimethylacetophenone (3.63 g), 4-dimethylaminopyridine (2.71 g) were mixed with o-dichlorobenzene. (30 ml) and stirred at 120 ° C. overnight. After cooling to room temperature, water was added to the reaction mixture, and the mixture was extracted with chloroform. The chloroform layer was washed successively with water and saturated brine, and dried over anhydrous sodium sulfate. The solvent was distilled off under reduced pressure, and the resulting residue was purified by acetone-hexane thin layer chromatography to give 1- [2- (7-benzyloxy-6-methoxyquinolin-4-yloxy). -4,5-dimethylphenyl] ethanone was obtained (1.10 g, 37% yield).
[0179]
1- [2- (7-Benzyloxy-6-methoxyquinolin-4-yloxy) -4,5-dimethylphenyl] ethanone (1.10 g) was added to methanesulfonic acid (0.85 ml) and trifluoroacetic acid (10 ml). And stirred at 70 ° C. for 1.0 hour. The solvent was distilled off under reduced pressure, water was added to the resulting residue, neutralized with sodium bicarbonate powder, and extracted with chloroform. Next, the chloroform layer was washed successively with water and saturated brine, and dried over anhydrous sodium sulfate. The solvent was distilled off under reduced pressure, and the resulting residue was purified by acetone-hexane column chromatography to give 1- [2- (7-hydroxy-6-methoxyquinolin-4-yloxy) -4. , 5-Dimethylphenyl] ethanone (150 mg) and 1-bromo-2-chloroethane (700 mg) were obtained (yield 83%).
[0180]
1- [2- (7-Hydroxy-6-methoxyquinolin-4-yloxy) -4,5-dimethylphenyl] ethanone (150 mg), 1-bromo-2-chloroethane (191 mg), potassium carbonate (307 mg) was added to N , N-dimethylformamide (6 ml) and stirred at room temperature overnight. Water was added to the reaction mixture, and the mixture was extracted with ethyl acetate. The ethyl acetate layer was washed successively with water and saturated brine, and dried over anhydrous sodium sulfate. The solvent was distilled off under reduced pressure, and the resulting residue was purified by acetone-hexane thin layer chromatography to give 1- {2- [7- (2-chloroethoxy) -6-methoxyquinoline- 4-yloxy] -4,5-dimethylphenyl} ethanone was obtained (122 mg, 68% yield).
[0181]
1- {2- [7- (2-Chloroethoxy) -6-methoxyquinolin-4-yloxy] -4,5-dimethylphenyl} ethanone (52 mg), imidazole (49 mg), potassium carbonate (90 mg) in N, It was suspended in N-dimethylformamide (2 ml) and stirred at 80 ° C. overnight. After cooling to room temperature, water was added to the reaction mixture and the mixture was extracted with ethyl acetate. The ethyl acetate layer was washed successively with water and saturated brine, and dried over anhydrous sodium sulfate. The solvent was distilled off under reduced pressure, and the resulting residue was purified by methanol-chloroform thin layer chromatography to obtain the title compound (29 mg, 52% yield).
[0182]
¹H-NMR (CDCl₃-D₁, 400 MHz): δ 2.22 (s, 3H), 2.25 (s, 3H), 2.39 (s, 3H), 3.95 (s, 3H), 4.35 (t, J = 6. 2 Hz, 2H), 4.44 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 6.32 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 6.85 (s, 1H), 7.00 (s, 1H), 7.07 (s, 1H), 7.29 (s, 1H), 7.49 (s, 1H), 7.63 (m, 2H), 8.40 (d, J = 5.6 Hz) , 1H); mass spectrometry (ESI-MS, m / z): 432 (M⁺+1)
[0183]
Example 2: TGFβ inhibitory activity of compounds 1-5
J. Boil. Chem., 273, 21145-21152 (1998), the TGFβ signal inhibitory action of compounds 1 to 5 was evaluated.
[0184]
Specifically, a reporter gene ((SBE) 4-Luc) in which four binding sequences of Smad, which is a TGFβ signaling factor, were linked in tandem as a promoter upstream of the luciferase gene was used. This reporter gene was introduced into human lung cancer epithelial cells (A549) (available from ATCC) to construct a cell line that can be stably expressed.
[0185]
The test compound and TGFβ-1 (2 ng / ml) were added to the cells and cultured for 4 hours. In addition, the compound by this invention synthesize | combined in the said example was each used as a test compound here. After the culture, the luciferase activity of the cells was measured by a chemiluminescence method (Steady Glo ™ Luciferase assay system, Promega).
[0186]
Similarly, luciferase activity was also measured when cells were cultured with only TGFβ added and when cells were cultured without adding any of TGFβ and test compound (control).
[0187]
Based on these measurement results, the TGFβ inhibition rate (%) was calculated according to the following formula.
[0188]
TGFβ inhibition rate (%) = (A−B) / (A−C) × 100
[Wherein A, B and C each mean the following:
A: Luciferase activity when TGFβ1 is added and no test compound is added (Relative Luciferase unit)
B: Luciferase activity when both TGFβ1 and test compound are added (Relative Luciferase unit)
C: Luciferase activity when TGFβ1 and test compound are not added (Relative Luciferase unit)]
[0189]
The test was conducted for test compound concentrations of 3 μM and 10 μM, respectively.
[0190]
The results were as shown in Table 1.
As shown in the results, it was revealed that the compound according to the present invention has an activity to antagonize the action of TGFβ.
[0191]
[Table 1]

[0192]
Example 3: Promoting effect of a TGFβ inhibitory compound on cell proliferation of vascular endothelial cells
In the process of differentiating Flk-1 positive cells differentiated from ES cells into endothelial cells, a TGFβ inhibitory compound was allowed to act, and the effect of the TGFβ inhibitory compound on cell proliferation of vascular endothelial cells was examined. The experimental method and culture were in accordance with the aforementioned Yamashita et al. Method (Nature 408: 92-96, 2000).
[0193]
That is, 1 × 10^FourES cells (clone name: CCE cells) were cultured in ES cell differentiation medium (αMEM (GIBCO), 50 μM 2-mercaptoethanol (GIBCO), 50 U / ml penicillin / streptomycin (GIBCO), 10% fetal calf serum (FCS). ) And then seeded on 10cm collagen IV-coated plate (IWAKI) and 5% CO₂In the presence, the cells were cultured at 37 ° C. for 4 days. Four days later, a PE-conjugated mouse anti-Flk-1 antibody (Pharmingen) was bound from a cell population containing differentiated Flk-1 positive cells, and then Flk-1 positive cells were collected using a MACS column. 1 × 10 obtained in this way^FourOne Flk-1 positive cell was used as a test substance for compound for vascular differentiation (αMEM, 50 μM 2-mercaptoethanol, 50 U / ml penicillin / streptomycin containing Compound 1 (1 μM), Compound 4 (5 μM) or Compound 3 (5 μM). 10% FCS, 30 ng / ml VEGF-A (R & D)), seeded on a fibronectin-coated 24-well tissue culture plate (IWAKI), and cultured at 37 ° C. for 3 days for endothelial cells The effect of the test substance was examined.
[0194]
Three days later, immunostaining was performed according to the following method for cell characterization. In order to immobilize the cells on the plate, the supernatant was aspirated, 4% paraformaldehyde (PFA) was added, and the mixture was allowed to stand at room temperature for 5 to 10 minutes. After cell fixation, wash twice with PBS, 0.3% H₂O₂/ Methanol was added and allowed to stand at room temperature for 20-30 minutes for decolorization. After decolorization, the plate was washed twice with PBS, then 2% skim milk / PBS was added, and allowed to stand at room temperature for 30 minutes for blocking. Thereafter, rat anti-PECAM1 antibody (Mec13.3: Pharmingen) diluted 200-fold with 2% skim milk as a primary antibody and mouse anti-smooth muscle actin-α (SMA-α) antibody (1A4: Sigma) diluted 300-fold. In addition, it was incubated at room temperature for 2 hours. After 2 hours of incubation, goat anti-mouse IgG-HRP (Zymed) and goat were washed 3 times with PBS-T (PBS containing 0.05% Tween 20) and further diluted 200-fold with 2% skim milk as a secondary antibody. Anti-rat IgG-Alkali Phosphatase (AP) (Zymed) was added and incubated at room temperature for 2 hours. After incubation for 2 hours, the plate was washed three times with PBS-T (PBS containing 0.05% Tween 20), and then PBS-T containing 0.025% DAB was added and allowed to stand at room temperature for 10 to 20 minutes. HRP color for SMA-α staining is 0.15% H₂O₂/ PBS-T was added, and when an appropriate color (brown) was obtained, the plate was washed twice with PBS-T to stop the reaction. Furthermore, AP solution containing NBT / BCIP stock solution (Roche) (100 mM Tris (pH 9.5), 100 mM NaCl, 50 mM MgCl₂, 5 mM Levamisole) was added to perform AP staining (for PECAM1). When an appropriate color (purple) was obtained, the reaction was stopped by washing twice with PBS-T. The specimen was fixed again with 4% paraformaldehyde (PFA) and stored.
[0195]
As a result, a clear increase in the number of cells was observed in any of the compounds in the coexisting group of TGFβ-inhibiting compounds, compared with those cultured with VEGF alone. The same results were obtained with compounds having different skeletons, suggesting that this action is a phenomenon common to TGFβ-inhibiting compounds. From the above, it has been clarified that the TGFβ inhibitory compound works to promote the proliferation of vascular endothelial cells.
[0196]
Example 4: Vascular endothelial cell differentiation promoting effect of a TGFβ inhibitory compound
A TGFβ inhibitory compound was allowed to act on the process of differentiating Flk-1 positive cells differentiated from ES cells into endothelial cells, and the effect of the TGFβ inhibitory compounds on vascular endothelial cell differentiation was examined. The experimental method and culture were performed according to the method of Example 3, except that the number of Flk-1-positive cells used for the latter half of the culture (culture in a medium for vascular differentiation) was 1 × 10^ThreeIndividual. Compound 1 was used as a test substance, and added at a final concentration of 1 μM from the latter half of the culture.
[0197]
First, according to the immunostaining data obtained in Example 3, as compared with those cultured with VEGF alone, those cultured in the presence of a TGFβ-inhibiting compound significantly increased the number of endothelial cell colonies stained with purple. It can be seen that the colony is also large.
[0198]
Next, Table 1 below shows the colonies that emerged from the culture in this example based on the immunostaining data and morphology. Three groups (a group of vascular endothelial cells that formed colonies in a sheet form, dispersed to form colonies) Vascular endothelial cell group, smooth muscle colony group), and the breakdown of colonies is summarized.
[0199]
[Table 2]

[0200]
As is apparent from Table 1, the colony formation rate of the sheet-like vascular endothelial cells is increased in the case of culturing in the presence of the TGFβ inhibitory compound as compared with the case of culturing with VEGF alone, and on the contrary, the dispersed vascular endothelium. The formation rate of cell colonies and smooth muscle colonies was decreased. From this result, it was revealed that the TGFβ inhibitory compound has an action of promoting differentiation into vascular endothelial cells as compared with differentiation into smooth muscle cells.
[0201]
Example 5: Intercellular adhesion enhancing action of TGFβ inhibitory compound
When the photograph of the cultured cells obtained in Example 3 was magnified at a high magnification, the vascular endothelial cell sheet cultured only with VEGF showed that the boundary line between the cells was not clear, whereas the condition containing a TGFβ inhibitor compound In the vascular endothelial cell sheet cultured in, the boundary line between cells was clear. The results of cells cultured with VEGF alone were consistent with the in vivo findings that blood vessels formed by VEGF administration are fragile and have high vascular permeability (low intercellular adhesion). On the other hand, the results in the presence of a TGFβ inhibitory compound suggested that the TGFβ inhibitory compound normalizes fragile blood vessels (weak intercellular adhesion).
[0202]
Example 6: By adding a TGFβ inhibitor compound Claudin5 Increased protein expression
Compound 1 was used as a TGFβ-inhibiting compound, and anti-Claudin5 staining was performed on the 4th day endothelial cell sheet formed according to the experimental conditions of Example 3. Immunostaining was performed according to the method of Example 3. The anti-Claudin5 antibody obtained from Zymed was used.
[0203]
As a result, it was revealed that the sheet formed by adding the TGFβ inhibitory compound was strongly stained and the expression of Claudin5 protein was remarkably enhanced as compared with the staining of the endothelial cell sheet cultured only with VEGF. This suggests that the enhanced intercellular adhesion in the vascular endothelial sheet observed in Example 5 is mediated by the enhanced expression of Claudin5.
[0204]
Example 7: Effect of TGFβ inhibitory compound on vascular endothelial progenitor cell culture
The effect of the TGFβ inhibitory compound on the differentiation / amplification culture of vascular endothelial progenitor cells was examined by culturing to differentiate and amplify human peripheral blood mononuclear cells into vascular endothelial progenitor cells and adding a TGFβ inhibitory compound thereto. As test substances, compounds 1, 2, 4 and 5 were used. Culture was carried out according to the method of Kalka et al. (Proc. Natl. Acd. Sci. USA 97: 3422-3427, 2000), and the test substance was added from the third day of culture.
[0205]
That is, 200 ml of peripheral blood of healthy volunteers was diluted 2-fold with phosphate buffered saline, and then overlaid on lymphoprep (d = 1.077; purchased from Daiichi Chemical Co., Ltd.), and density gradient specific gravity centrifugation (400 × g, 25 minutes) to obtain a mononuclear cell fraction. This fraction was washed with phosphate buffered saline, then hemolyzed to remove the mixed red blood cells, and washed with phosphate buffered saline. The mononuclear cells thus obtained were added to EGM-2 medium supplemented with 5% FCS (VEGF, EGF, bFGF, IGF-1, ascorbic acid, and GA-1000, which were attached at the time of purchase, were added, manufactured by Clonetics). 5000 pieces / mm on a 24-well tissue culture plate (manufactured by Falcon) that was suspended and previously coated with fibronectin.²Seeded to a total volume of 500 μl, 5% CO₂The culture was started at 37 ° C. in the presence. The test substance was dissolved in dimethyl sulfoxide (DMSO; manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) and added on the third day (test substance final concentration 10 μM, DMSO final concentration 0.05%). On day 4, cells that had not adhered and the culture supernatant were gently removed, and 500 μl of fresh EGM-2 medium in which the test substance was suspended to a concentration of 10 μM was added. In addition, 5% CO₂After culturing at 37 ° C. for 3 days (total 7 days) in the presence, the culture supernatant was removed, and a new EGM-2 medium in which DiI-labeled acetyl LDL (10 μg / ml) (Molecular Probes) was dissolved was added. Then, the cells were cultured at 37 ° C. for 2 hours to incorporate DiI-labeled acetyl LDL. Thereafter, the supernatant was removed, washed and immobilized, and then 100-fold diluted FITC-labeled UEA-1 (manufactured by Sigma) was added, reacted at room temperature for 1 hour, and washed. Thereafter, each well was observed with a fluorescence microscope. Human umbilical vein endothelial cells (obtained from Clonetics) were used as positive controls, and Balb / c 3T3 cells (obtained from American Type Culture Collection (ATCC)) were used as negative controls. In the microscopic observation, five fields of view were observed at a magnification of 200 ×, and spindle cells in which DiI-labeled acetyl LDL uptake and FITC-labeled UEA-1-stained double-stained images were confirmed were counted as vascular endothelial progenitor cells. It was.
[0206]
The results are shown in FIG. As is clear from FIG. 1, all the test substances increased the number of vascular endothelial progenitor cells at a concentration of 10 μM.
[0207]
Example 8: Compound having TGFβ inhibitory activity in vivo Angiogenesis promoting effect
To evaluate the effect of TGFβ inhibitory compounds on angiogenesis, a Matrigel plug assay was performed. To 1 ml of Matrigel (BD Biosciences Bedford, MA), 400 ng of human basic FGF (R & D), 50 μg of heparin (Aventis Pharma Co., Ltd.) and compound 1 (final concentration 1 μM) as a test substance (or DMSO) on ice In addition, the prepared gel was injected 0.2 ml each into the lower abdomen of BL / 6 mice. Six to eight days later, the blood vessels invaded into Matrigel were observed with a stereomicroscope.
[0208]
As a result, a significant increase in the number of blood vessels was observed in the Matrigel containing the TGFβ inhibitory compound as compared with the control of bFGF alone, and it became clear that the TGFβ inhibitory compound has an angiogenesis promoting action.
[Brief description of the drawings]
FIG. 1 is a graph showing the effect of a TGFβ-inhibiting compound on the amplification culture of vascular endothelial progenitor cells.

Claims (30)

A method for producing vascular endothelial progenitor cells or vascular endothelial cells, comprising culturing a cell or a cell fraction in a medium containing a compound having TGFβ inhibitory activity. 2. The method of claim 1, wherein the cell or cell fraction is a Flk-1 ⁺ cell. The method according to claim 2, wherein the Flk-1 ⁺ cells are obtained from embryonic stem cells. 2. The method of claim 1, wherein the cell or cell fraction is a mononuclear cell fraction. The method according to claim 4, wherein the mononuclear cell fraction is obtained from peripheral blood or umbilical cord blood. 6. The method according to claim 5, wherein the peripheral blood is obtained from a human administered with G-CSF or GM-CSF. 2. The method of claim 1, wherein the cell or cell fraction is a CD34 ⁺ cell. The method according to claim 7, wherein the CD34 ⁺ cells are obtained from a mononuclear cell fraction derived from peripheral blood or umbilical cord blood. The method according to claim 8, wherein the peripheral blood is obtained from a human administered with G-CSF or GM-CSF. 2. The method of claim 1, wherein the cell or cell fraction is an AC133 ⁺ cell. The method according to claim 10, wherein the AC133 ⁺ cells are obtained from a mononuclear cell fraction derived from peripheral blood or umbilical cord blood. The method according to claim 11, wherein the peripheral blood is obtained from a human administered with G-CSF or GM-CSF. The medium further comprises at least one cytokine selected from the group consisting of VEGF-A, VEGF-C, VEGF-E, aFGF, bFGF, EGF, TGFα, PD-ECGF, PDGF, TNFα, HGF, and IGF-1. The method of claim 1, comprising: The method according to claim 13, wherein the culture medium comprises at least one cytokine selected from the group consisting of VEGF-A, VEGF-C, and VEGF-E. 15. The method according to claim 14, wherein the medium comprises at least one cytokine selected from the group consisting of VEGF-A, VEGF-C, and VEGF-E, and bFGF, IGF-1 and EGF. . The method according to claim 1, wherein the compound having TGFβ inhibitory activity is a compound of formula (I), or a salt or solvate thereof:

[In the above formula (I),
X represents CH or N;
Z represents -O-, -NH-, -S- or -C (= O)-;
R ¹ and R ² may be the same or different and are each represented by ^a hydrogen atom, — (CH ₂ ) m—R ^a {where R ^a is a hydrogen atom, a halogen atom, a hydroxyl group, saturated or unsaturated 3 6-membered carbocyclic or heterocyclic group or -NR ^{b R} c ^(R b and R ^c, which may be the same or different, a hydrogen atom or an optionally substituted by hydroxyl C _{1,, Represents a -6} alkyl group, and R ^b and R ^c together with the nitrogen atom to which they are bonded may form a saturated or unsaturated 5- or 6-membered heterocyclic group (this The heterocyclic group may further comprise one or more heteroatoms), the heterocyclic group may be a C _1-4 alkyl group optionally substituted by a hydroxyl group, or a saturated or unsaturated 5 or 6 Optionally substituted by a membered heterocyclic group) Represents, m represents an integer of 1 to 5, and the alkyl chain moiety of this group - (CH ₂₎ m-represents a hydroxyl, an oxygen atom or a -OR ^d group (wherein ^{R d} is _{C 1-4} alkyl, Which may be substituted by a group or a C _1-4 alkylcarbonyl group),
A represents any group selected from the group consisting of the following formulas (a1) to (a4):
(1) Group of formula (a1):

(In the above formula (a1),
R ^{3 to} R ⁶ may be the same or different,
Hydrogen atom,
A halogen atom,
A C _1-6 alkyl group,
A C _1-10 alkoxy group optionally substituted by a halogen atom or a phenyl group,
A C _2-6 alkenylcarbonyloxy group,
A C _1-4 alkylcarbonyl group or a phenyl group optionally substituted by a halogen atom;
R ³ and R ⁴ , R ⁴ and R ⁵ , and R ⁵ and R ⁶ are each a saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic group or complex together with the carbon atom to which they are attached. May form a cyclic group,
R ⁷ is
Hydrogen atom,
A C _1-8 alkyl group _optionally substituted by a saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic group,
A C _2-6 alkenyl group _optionally substituted by a phenyl group,
A saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic or heterocyclic group (this carbocyclic or heterocyclic group may be substituted by a C _1-4 alkyl group), or a1-i) or (a1-ii) represents one of the groups:

(In the above formula,
R ⁸ is
A C _1-10 alkyl group _optionally substituted by a phenyl group,
A C _2-8 alkenyl group, or a saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic group, which carbocyclic group may be substituted by a halogen atom,
R ⁹ and R ¹⁰ may be the same or different,
Hydrogen atom,
A C _1-6 alkyl group,
Represents a saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic group (this carbocyclic group may be substituted by a halogen atom), or naphthyl optionally substituted by a halogen atom;
R ⁹ and R ¹⁰ may form a saturated or unsaturated 5- or 6-membered heterocyclic group together with the nitrogen atom to which they are bonded (the number of the heterocyclic group is 1 or more). The heterocyclic group may be substituted with a C _1-4 alkyl group optionally substituted with a hydroxyl group, or a saturated or unsaturated 5- or 6-membered heterocyclic group. May be)
(2) Group of formula (a2):

(In the above formula (a2)
R ^{3 to} R ⁶ are the same as the above formula (a1),
R ¹¹ and R ¹² may be the same or different,
Hydrogen atom,
A C _1-6 alkyl group,
Represents a saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic group (this carbocyclic group may be substituted by a halogen atom), or naphthyl optionally substituted by a halogen atom;
R ¹¹ and R ¹² may form a saturated or unsaturated 5- or 6-membered heterocyclic group together with the nitrogen atom to which they are bonded (the number of the heterocyclic group is 1 or more). The heterocyclic group may be substituted with a C _1-4 alkyl group optionally substituted with a hydroxyl group, or a saturated or unsaturated 5- or 6-membered heterocyclic group. May be)
(3) Group of formula (a3):

(In the above formula (a3),
R ^{13 to} R ¹⁶ may be the same or different,
Hydrogen atom,
A halogen atom,
A C _1-6 alkyl group,
A C _1-8 alkoxy group,
A C _1-4 alkylcarbonyl group or a phenylcarbonyl group;
R ¹³ and R ¹⁴ , and R ¹⁴ and R ¹⁵ together with the carbon atom to which they are attached, form a saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic or heterocyclic group, respectively. And)
(4) Group of formula (a4):

(In the above formula (a4),
R ^{17 to} R ²¹ may be the same or different,
Hydrogen atom,
A halogen atom,
A C _1-6 alkyl group _optionally substituted by a hydroxyl group or a phenyl group,
A C _1-8 alkoxy group,
A C _1-4 alkyl group, a C _1-4 alkoxy group, a C _2-6 alkenyl group optionally substituted by an oxygen atom or a phenyl group,
A phenylcarbonyl group optionally substituted by a C _1-4 alkyl group,
An amino group optionally substituted by a phenyl group,
A nitro group or a saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic or heterocyclic group, which carbocyclic or heterocyclic group may be substituted by a C _1-6 alkyl group Represent,
R ¹⁷ and R ¹⁸ , or R ²⁰ and R ²¹ together with the carbon atom to which they are attached form a saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic or heterocyclic group. You can,
R ¹⁸ and R ¹⁹ , or R ¹⁹ and R ²⁰ , together with the carbon atom to which they are bonded, are a halogen atom, a C _1-4 alkyl group, a C _1-4 alkylcarbonyl group, C _{1 A} saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic or heterocyclic group which may be substituted by an _-6 alkoxycarbonyl group or an oxygen atom may form a carbocyclic or heterocyclic group The group may be further condensed with other saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic or heterocyclic groups to form a tricyclic group with the 6-membered carbocycle of formula (a4)) ]. The method according to claim 1, wherein the compound having TGFβ inhibitory activity is a compound of formula (II), or a salt or solvate thereof:

{Wherein R ₁ is halo, —O—C _1-6 alkyl, —S—C _1-6 alkyl, C _1-6 alkyl, C _1-6 haloalkyl, —O— (CH ₂ ) _n —Ph , —S— (CH ₂ ) _n —Ph, cyano, phenyl, and CO ₂ R, where R is hydrogen or C _1-6 alkyl, and n is 0, 1, 2, or 3. R ₁ is a 5- to 7-membered aromatic ring or non-aromatic ring (wherein the rings are N, O and S), which may be substituted with one or more substituents selected from Phenyl fused with optionally containing up to 3 heteroatoms independently selected from:
R ₂ is H, C _1-6 alkyl, C _1-6 alkoxy, phenyl, NH (CH ₂ ) _n —Ph, NH—C _1-6 alkyl, halo, or alkoxy;
R ₃ is COOH, tetrazole, CN, NO ₂ , OH, —S—C _1-6 alkyl, —SO—C _1-6 alkyl, —O—C _1-6 alkyl, SONH ₂ , CHO, CH ₂ OH, (CH ₂ ) _n NH ₂ , CONHOR ′, O (CH ₂ ) _n CO ₂ R ′, O (CH ₂ ) _n CONHR ′, CONHR ′, (CH ₂ ) _n CO ₂ R ′, or (CH ₂ ) _n -CONHR '(wherein, R' is hydrogen or _{C 1-6} alkyl, n represents a is 0, 1, 2 or 3); and and
One of X ₁ and X ₂ is N or CR ″ and the other is NR ″ or CHR ″ (where R ″ is hydrogen, C _1-6 alkyl, or C _3-7 cycloalkyl), Alternatively, when _one of X ₁ and X ₂ is N or CR ″, the other may be S or O}. A pharmaceutical composition for treating an ischemic disease, comprising vascular endothelial progenitor cells or vascular endothelial cells produced by the method according to any one of claims 1 to 17. Ischemic disease from trauma, transplant rejection, ischemic cerebrovascular disorder, ischemic kidney disease, ischemic lung disease, ischemic disease related to infection, limb ischemic disease, and ischemic heart disease The pharmaceutical composition according to claim 18, which is selected from the group consisting of: A pharmaceutical composition for treating ischemic diseases, comprising a compound having TGFβ inhibitory activity. Ischemic disease from trauma, transplant rejection, ischemic cerebrovascular disorder, ischemic kidney disease, ischemic lung disease, ischemic disease related to infection, limb ischemic disease, and ischemic heart disease The pharmaceutical composition according to claim 20, which is selected from the group consisting of: Further comprising at least one cytokine selected from the group consisting of VEGF-A, VEGF-C, VEGF-E, aFGF, bFGF, EGF, TGFα, PD-ECGF, PDGF, TNFα, HGF, and IGF-1. The pharmaceutical composition according to claim 20. The pharmaceutical composition according to claim 22, comprising at least one cytokine selected from the group consisting of VEGF-A, VEGF-C, and VEGF-E. 24. The pharmaceutical composition according to claim 23, comprising at least one cytokine selected from the group consisting of VEGF-A, VEGF-C, and VEGF-E, and bFGF, IGF-1 and EGF. The pharmaceutical composition according to claim 20, wherein the compound having TGFβ inhibitory activity is a compound of formula (I), or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof:

[In the above formula (I),
X represents CH or N;
Z represents -O-, -NH-, -S- or -C (= O)-;
R ¹ and R ² may be the same or different and are each represented by ^a hydrogen atom, — (CH ₂ ) m—R ^a {where R ^a is a hydrogen atom, a halogen atom, a hydroxyl group, saturated or unsaturated 3 6-membered carbocyclic or heterocyclic group or -NR ^{b R} c ^(R b and R ^c, which may be the same or different, a hydrogen atom or an optionally substituted by hydroxyl C _{1,, Represents a -6} alkyl group, and R ^b and R ^c together with the nitrogen atom to which they are bonded may form a saturated or unsaturated 5- or 6-membered heterocyclic group (this The heterocyclic group may further comprise one or more heteroatoms), the heterocyclic group may be a C _1-4 alkyl group optionally substituted by a hydroxyl group, or a saturated or unsaturated 5 or 6 Optionally substituted by a membered heterocyclic group) Represents, m represents an integer of 1 to 5, and the alkyl chain moiety of this group - (CH ₂₎ m-represents a hydroxyl, an oxygen atom or a -OR ^d group (wherein ^{R d} is _{C 1-4} alkyl, Which may be substituted by a group or a C _1-4 alkylcarbonyl group),
A represents any group selected from the group consisting of the following formulas (a1) to (a4):
(1) Group of formula (a1):

(In the above formula (a1),
R ^{3 to} R ⁶ may be the same or different,
Hydrogen atom,
A halogen atom,
A C _1-6 alkyl group,
A C _1-10 alkoxy group optionally substituted by a halogen atom or a phenyl group,
A C _2-6 alkenylcarbonyloxy group,
A C _1-4 alkylcarbonyl group or a phenyl group optionally substituted by a halogen atom;
R ³ and R ⁴ , R ⁴ and R ⁵ , and R ⁵ and R ⁶ are each a saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic group or complex together with the carbon atom to which they are attached. May form a cyclic group,
R ⁷ is
Hydrogen atom,
A C _1-8 alkyl group _optionally substituted by a saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic group,
A C _2-6 alkenyl group _optionally substituted by a phenyl group,
A saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic or heterocyclic group (this carbocyclic or heterocyclic group may be substituted by a C _1-4 alkyl group), or a1-i) or (a1-ii) represents one of the groups:

(In the above formula,
R ⁸ is
A C _1-10 alkyl group _optionally substituted by a phenyl group,
A C _2-8 alkenyl group, or a saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic group, which carbocyclic group may be substituted by a halogen atom,
R ⁹ and R ¹⁰ may be the same or different,
Hydrogen atom,
A C _1-6 alkyl group,
Represents a saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic group (this carbocyclic group may be substituted by a halogen atom), or naphthyl optionally substituted by a halogen atom;
R ⁹ and R ¹⁰ may form a saturated or unsaturated 5- or 6-membered heterocyclic group together with the nitrogen atom to which they are bonded (the number of the heterocyclic group is 1 or more). The heterocyclic group may be substituted with a C _1-4 alkyl group optionally substituted with a hydroxyl group, or a saturated or unsaturated 5- or 6-membered heterocyclic group. May be)
(2) Group of formula (a2):

(In the above formula (a2)
R ^{3 to} R ⁶ are the same as the above formula (a1),
R ¹¹ and R ¹² may be the same or different,
Hydrogen atom,
A C _1-6 alkyl group,
Represents a saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic group (this carbocyclic group may be substituted by a halogen atom), or naphthyl optionally substituted by a halogen atom;
R ¹¹ and R ¹² may form a saturated or unsaturated 5- or 6-membered heterocyclic group together with the nitrogen atom to which they are bonded (the number of the heterocyclic group is 1 or more). The heterocyclic group may be substituted with a C _1-4 alkyl group optionally substituted with a hydroxyl group, or a saturated or unsaturated 5- or 6-membered heterocyclic group. May be)
(3) Group of formula (a3):

(In the above formula (a3),
R ^{13 to} R ¹⁶ may be the same or different,
Hydrogen atom,
A halogen atom,
A C _1-6 alkyl group,
A C _1-8 alkoxy group,
A C _1-4 alkylcarbonyl group or a phenylcarbonyl group;
R ¹³ and R ¹⁴ , and R ¹⁴ and R ¹⁵ together with the carbon atom to which they are attached, form a saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic or heterocyclic group, respectively. And)
(4) Group of formula (a4):

(In the above formula (a4),
R ^{17 to} R ²¹ may be the same or different,
Hydrogen atom,
A halogen atom,
A C _1-6 alkyl group _optionally substituted by a hydroxyl group or a phenyl group,
A C _1-8 alkoxy group,
A C _1-4 alkyl group, a C _1-4 alkoxy group, a C _2-6 alkenyl group optionally substituted by an oxygen atom or a phenyl group,
A phenylcarbonyl group optionally substituted by a C _1-4 alkyl group,
An amino group optionally substituted by a phenyl group,
A nitro group or a saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic or heterocyclic group, which carbocyclic or heterocyclic group may be substituted by a C _1-6 alkyl group Represent,
R ¹⁷ and R ¹⁸ , or R ²⁰ and R ²¹ together with the carbon atom to which they are attached form a saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic or heterocyclic group. You can,
R ¹⁸ and R ¹⁹ , or R ¹⁹ and R ²⁰ , together with the carbon atom to which they are bonded, are a halogen atom, a C _1-4 alkyl group, a C _1-4 alkylcarbonyl group, C _{1 A} saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic or heterocyclic group which may be substituted by an _-6 alkoxycarbonyl group or an oxygen atom may form a carbocyclic or heterocyclic group The group may be further condensed with other saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic or heterocyclic groups to form a tricyclic group with the 6-membered carbocycle of formula (a4)) ]. The pharmaceutical composition according to claim 20, wherein the compound having TGFβ inhibitory activity is a compound of formula (II), or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof:

{Wherein R ₁ is halo, —O—C _1-6 alkyl, —S—C _1-6 alkyl, C _1-6 alkyl, C _1-6 haloalkyl, —O— (CH ₂ ) _n —Ph , —S— (CH ₂ ) _n —Ph, cyano, phenyl, and CO ₂ R, where R is hydrogen or C _1-6 alkyl, and n is 0, 1, 2, or 3. R ₁ is a 5- to 7-membered aromatic ring or non-aromatic ring (wherein the rings are N, O and S), which may be substituted with one or more substituents selected from Phenyl fused with optionally containing up to 3 heteroatoms independently selected from:
R ₂ is H, C _1-6 alkyl, C _1-6 alkoxy, phenyl, NH (CH ₂ ) _n —Ph, NH—C _1-6 alkyl, halo, or alkoxy;
R ₃ is COOH, tetrazole, CN, NO ₂ , OH, —S—C _1-6 alkyl, —SO—C _1-6 alkyl, —O—C _1-6 alkyl, SONH ₂ , CHO, CH ₂ OH, (CH ₂ ) _n NH ₂ , CONHOR ′, O (CH ₂ ) _n CO ₂ R ′, O (CH ₂ ) _n CONHR ′, CONHR ′, (CH ₂ ) _n CO ₂ R ′, or (CH ₂ ) _n -CONHR '(wherein, R' is hydrogen or _{C 1-6} alkyl, n represents a is 0, 1, 2 or 3); and and
One of X ₁ and X ₂ is N or CR ″ and the other is NR ″ or CHR ″ (where R ″ is hydrogen, C _1-6 alkyl, or C _3-7 cycloalkyl), Alternatively, when _one of X ₁ and X ₂ is N or CR ″, the other may be S or O}. A pharmaceutical composition for improving vascular permeability in a disease associated with enhanced vascular permeability, comprising a compound having TGFβ inhibitory activity. The disease with increased vascular permeability is selected from the group consisting of diabetic microangiopathy, diabetic macroangiopathy, angiocerebral edema, cytotoxic brain edema, systemic edema, retinal edema, pulmonary edema, and diabetes 28. The pharmaceutical composition according to claim 27, wherein 28. The pharmaceutical composition according to claim 27, wherein the compound having TGFβ inhibitory activity is a compound of formula (I), or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof:

[In the above formula (I),
X represents CH or N;
Z represents -O-, -NH-, -S- or -C (= O)-;
R ¹ and R ² may be the same or different and are each represented by ^a hydrogen atom, — (CH ₂ ) m—R ^a {where R ^a is a hydrogen atom, a halogen atom, a hydroxyl group, saturated or unsaturated 3 6-membered carbocyclic or heterocyclic group or -NR ^{b R} c ^(R b and R ^c, which may be the same or different, a hydrogen atom or an optionally substituted by hydroxyl C _{1,, Represents a -6} alkyl group, and R ^b and R ^c together with the nitrogen atom to which they are bonded may form a saturated or unsaturated 5- or 6-membered heterocyclic group (this The heterocyclic group may further comprise one or more heteroatoms), the heterocyclic group may be a C _1-4 alkyl group optionally substituted by a hydroxyl group, or a saturated or unsaturated 5 or 6 Optionally substituted by a membered heterocyclic group) Represents, m represents an integer of 1 to 5, and the alkyl chain moiety of this group - (CH ₂₎ m-represents a hydroxyl, an oxygen atom or a -OR ^d group (wherein ^{R d} is _{C 1-4} alkyl, Which may be substituted by a group or a C _1-4 alkylcarbonyl group),
A represents any group selected from the group consisting of the following formulas (a1) to (a4):
(1) Group of formula (a1):

(In the above formula (a1),
R ^{3 to} R ⁶ may be the same or different,
Hydrogen atom,
A halogen atom,
A C _1-6 alkyl group,
A C _1-10 alkoxy group optionally substituted by a halogen atom or a phenyl group,
A C _2-6 alkenylcarbonyloxy group,
A C _1-4 alkylcarbonyl group or a phenyl group optionally substituted by a halogen atom;
R ³ and R ⁴ , R ⁴ and R ⁵ , and R ⁵ and R ⁶ are each a saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic group or complex together with the carbon atom to which they are attached. May form a cyclic group,
R ⁷ is
Hydrogen atom,
A C _1-8 alkyl group _optionally substituted by a saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic group,
A C _2-6 alkenyl group _optionally substituted by a phenyl group,
A saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic or heterocyclic group (this carbocyclic or heterocyclic group may be substituted by a C _1-4 alkyl group), or a1-i) or (a1-ii) represents one of the groups:

(In the above formula,
R ⁸ is
A C _1-10 alkyl group _optionally substituted by a phenyl group,
A C _2-8 alkenyl group, or a saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic group, which carbocyclic group may be substituted by a halogen atom,
R ⁹ and R ¹⁰ may be the same or different,
Hydrogen atom,
A C _1-6 alkyl group,
Represents a saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic group (this carbocyclic group may be substituted by a halogen atom), or naphthyl optionally substituted by a halogen atom;
R ⁹ and R ¹⁰ may form a saturated or unsaturated 5- or 6-membered heterocyclic group together with the nitrogen atom to which they are bonded (the number of the heterocyclic group is 1 or more). The heterocyclic group may be substituted with a C _1-4 alkyl group optionally substituted with a hydroxyl group, or a saturated or unsaturated 5- or 6-membered heterocyclic group. May be)
(2) Group of formula (a2):

(In the above formula (a2)
R ^{3 to} R ⁶ are the same as the above formula (a1),
R ¹¹ and R ¹² may be the same or different,
Hydrogen atom,
A C _1-6 alkyl group,
Represents a saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic group (this carbocyclic group may be substituted by a halogen atom), or naphthyl optionally substituted by a halogen atom;
R ¹¹ and R ¹² may form a saturated or unsaturated 5- or 6-membered heterocyclic group together with the nitrogen atom to which they are bonded (the number of the heterocyclic group is 1 or more). The heterocyclic group may be substituted with a C _1-4 alkyl group optionally substituted with a hydroxyl group, or a saturated or unsaturated 5- or 6-membered heterocyclic group. May be)
(3) Group of formula (a3):

(In the above formula (a3),
R ^{13 to} R ¹⁶ may be the same or different,
Hydrogen atom,
A halogen atom,
A C _1-6 alkyl group,
A C _1-8 alkoxy group,
A C _1-4 alkylcarbonyl group or a phenylcarbonyl group;
R ¹³ and R ¹⁴ , and R ¹⁴ and R ¹⁵ together with the carbon atom to which they are attached, form a saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic or heterocyclic group, respectively. And)
(4) Group of formula (a4):

(In the above formula (a4),
R ^{17 to} R ²¹ may be the same or different,
Hydrogen atom,
A halogen atom,
A C _1-6 alkyl group _optionally substituted by a hydroxyl group or a phenyl group,
A C _1-8 alkoxy group,
A C _1-4 alkyl group, a C _1-4 alkoxy group, a C _2-6 alkenyl group optionally substituted by an oxygen atom or a phenyl group,
A phenylcarbonyl group optionally substituted by a C _1-4 alkyl group,
An amino group optionally substituted by a phenyl group,
A nitro group or a saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic or heterocyclic group, which carbocyclic or heterocyclic group may be substituted by a C _1-6 alkyl group Represent,
R ¹⁷ and R ¹⁸ , or R ²⁰ and R ²¹ together with the carbon atom to which they are attached form a saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic or heterocyclic group. You can,
R ¹⁸ and R ¹⁹ , or R ¹⁹ and R ²⁰ , together with the carbon atom to which they are bonded, are a halogen atom, a C _1-4 alkyl group, a C _1-4 alkylcarbonyl group, C _{1 A} saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic or heterocyclic group which may be substituted by an _-6 alkoxycarbonyl group or an oxygen atom may form a carbocyclic or heterocyclic group The group may be further condensed with other saturated or unsaturated 5- or 6-membered carbocyclic or heterocyclic groups to form a tricyclic group with the 6-membered carbocycle of formula (a4)) ]. 28. The pharmaceutical composition according to claim 27, wherein the compound having TGFβ inhibitory activity is a compound of formula (II), or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof:

{Wherein R ₁ is halo, —O—C _1-6 alkyl, —S—C _1-6 alkyl, C _1-6 alkyl, C _1-6 haloalkyl, —O— (CH ₂ ) _n —Ph , —S— (CH ₂ ) _n —Ph, cyano, phenyl, and CO ₂ R, where R is hydrogen or C _1-6 alkyl, and n is 0, 1, 2, or 3. R ₁ is a 5- to 7-membered aromatic ring or non-aromatic ring (wherein the rings are N, O and S), which may be substituted with one or more substituents selected from Phenyl fused with optionally containing up to 3 heteroatoms independently selected from:
R ₂ is H, C _1-6 alkyl, C _1-6 alkoxy, phenyl, NH (CH ₂ ) _n —Ph, NH—C _1-6 alkyl, halo, or alkoxy;
R ₃ is COOH, tetrazole, CN, NO ₂ , OH, —S—C _1-6 alkyl, —SO—C _1-6 alkyl, —O—C _1-6 alkyl, SONH ₂ , CHO, CH ₂ OH, (CH ₂ ) _n NH ₂ , CONHOR ′, O (CH ₂ ) _n CO ₂ R ′, O (CH ₂ ) _n CONHR ′, CONHR ′, (CH ₂ ) _n CO ₂ R ′, or (CH ₂ ) _n -CONHR '(wherein, R' is hydrogen or _{C 1-6} alkyl, n represents a is 0, 1, 2 or 3); and and
One of X ₁ and X ₂ is N or CR ″ and the other is NR ″ or CHR ″ (where R ″ is hydrogen, C _1-6 alkyl, or C _3-7 cycloalkyl), Alternatively, when _one of X ₁ and X ₂ is N or CR ″, the other may be S or O}.

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