JP2003531178A

JP2003531178A - 中枢神経系リンパ腫治療用のリツキシマブのクモ膜下投与

Info

Publication number: JP2003531178A
Application number: JP2001577981A
Authority: JP
Inventors: − ロペス、アントニオ、ジェイグリロ
Original assignee: アイデックファーマスーティカルズコーポレイション
Priority date: 2000-04-25
Filing date: 2001-04-25
Publication date: 2003-10-21
Also published as: US20020009444A1; CN1437478A; KR20030016250A; EP1286692A4; AU2001259142C1; ZA200208627B; AU5914201A; EP1286692A1; CA2405632A1; WO2001080884A1; CN101130078A; MXPA02010507A; BR0110364A; AU2001259142B2

Abstract

(57)【要約】本発明は、脳、特に中枢神経系リンパ腫（ＰＣＮＳＬ）のＢ細胞リンパ腫を治療するための、かつ髄膜再発を予防するための、抗Ｂ細胞抗体、好ましくは抗ＣＤ２０抗体、さらに好ましくはリツキシマブの使用方法を記載する。抗体は、免疫無防備状態および非免疫無防備状態患者の両方のＰＣＮＳＬを治療するために、クモ膜下に単独で、または他の化学療法剤（例えば、メソトレキセート）または他の抗Ｂ細胞抗体と組合せて投与することができる。これらの抗体はまた、ＣＮＳリンパ腫患者、特に免疫無防備状態患者を診断するのに使用することができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】（関連出願の相互参照）本出願は、米国仮出願第６０／１９９，３６５号（２０００年８月２５日出願
）の優先権を主張し、その全体が参照することにより本明細書に組み込まれる。

【０００２】（発明の分野）本発明は、中枢神経系リンパ腫を治療および／または予防するための、および
髄膜再発（meningeal relapse）を予防するための、Ｂ細胞標的に対する抗体（
例えば、抗ＣＤ２０、抗ＣＤ２１、抗ＣＤ２２、抗ＣＤ２３、抗ＣＤ４０、また
は抗ＣＤ３７抗体）、好ましくは抗ＣＤ２０抗体、さらに好ましくはリツキシマ
ブ（Rituximab）の使用法に関する。これらの抗Ｂ細胞抗体は、単独で、または
他の抗体、例えばＢ細胞活性化に関与するＴ細胞に対する抗体（例えば、抗ＣＤ
４０Ｌ）とともに、または他の治療法（例えば、化学療法または放射線療法）と
ともに、使用することができる。

【０００３】（発明の背景）Ｉ．抗ＣＤ２０抗体ＣＤ２０は、９０％を超えるＢ細胞リンパ腫に発現される細胞表面抗原であり
、新生細胞で落ちていったり変化したりしない（マクローリン（McLaughlin）ら
、J. Clin. Oncol. 16:2825-2833 (1998b)）。抗ＣＤ２０抗体は、研究と治療の
両方で使用するために調製されている。１つの抗ＣＤ２０抗体は、モノクロナー
ルＢ１抗体である（米国特許第５，８４３，３９８号）。抗ＣＤ２０抗体はまた
、Ｂ細胞リンパ腫を治療するための放射性核種の形（例えば、¹³¹Ｉ−標識抗Ｃ
Ｄ２０抗体）、ならびに前立腺癌や乳癌の転移による骨痛の一時的緩和のために⁸⁹ Ｓｒ標識型で調製されている（エンドウ（Endo）、癌と化学療法、26:744-748
(1999)）。

【０００４】マウスモノクロナール抗体であるＩＦ５（抗ＣＤ２０抗体の１つ）は、Ｂ細胞
リンパ腫患者に連続的静脈内注入により投与されたと報告されている。しかし、
循環する腫瘍細胞を枯渇させるためには極端に高レベル（＞２グラム）のＩＦ５
が必要であると報告されており、結果は「一過性」であると記載された（プレス
（Press）ら、Blood 69:584-591 (1987)）。モノクロナール抗体を治療に使用す
る時の問題は、一般にヒトのエフェクター機能が欠如した非ヒトモノクロナール
抗体（例えば、マウスモノクロナール抗体）であり、例えばこれらは、特に補体
依存性溶解を仲介したり、抗体依存性細胞毒性もしくはＦｃ受容体介在食作用に
よりヒト標的細胞を溶解することができないことである。さらに非ヒトモノクロ
ナール抗体は、ヒト宿主により外来タンパク質として認識され、従ってそのよう
な外来抗体の繰り返し注射により、免疫応答を誘発して有害な過敏症反応を引き
起こすことがある。マウスベースのモノクロナール抗体については、これは、し
ばしばヒト抗マウス抗体応答、または「ＨＡＭＡ」応答と呼ばれる。さらにこれ
らの「外来」抗体は、その標的部位に到達する前に、宿主の免疫系により攻撃さ
れ事実上中和されることがある。

【０００５】Ａ．リツキシマブリツキシマブ（リツキサン（Rituxan）（登録商標）、マブセラ（MabThera）
（登録商標）およびＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８としても知られている）は、ＦＤＡが認
可した最初のモノクロナール抗体であり、イデック・ファーマシューチカルズ（
IDEC Pharmaceuticals）で開発された（米国特許第５，８４３，４３９号；５，
７７６，４５６号および５，７３６，１３７号を参照）。リツキシマブは、軽度
のまたは濾胞性Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫の患者の治療に推奨されている、キメ
ラ抗ＣＤ２０モノクロナール抗体（ＭＡｂ）である（マクローリン（McLaughlin
）ら、Oncology (Huntingt) 12:1763-1777 (1998a)；レゲット（Leget）ら、Cur
r. Opin. Oncol. 10:548-551 (1998)）。ヨーロッパではリツキシマブは、再発
段階のIII/IV濾胞性リンパ腫の治療に認可されている（ホワイト（White）ら、P
harm. Sci. Technol. Today 2:95-101 (1991)）。リツキシマブで治療される他
の疾患には、濾胞性中心細胞リンパ腫（ＦＣＣ）、被膜細胞リンパ腫（ＭＣＬ）
、びまん性大細胞性リンパ腫（ＤＬＣＬ）、および小リンパ球性リンパ腫／慢性
リンパ球性白血病（ＳＬＬ／ＣＬＬ）がある（グエン（Nguyen）ら、(1999)）。
リツキシマブは、第Ｉ相および第II相臨床試験で軽度の非ホジキンリンパ腫（Ｎ
ＨＬ）において、毒性が小さく大きな治療活性を示した（ベリンスタイン（Beri
nstein）ら、Ann. Oncol. 9:995-1001 (1998)）。

【０００６】再発性もしくは難治性の軽度もしくは濾胞性ＮＨＬについて、毎週３７５mg/M² で４週間、Ｂ細胞ＮＨＬを治療するために単独で使用されたリツキシマブは、
充分許容され、大きな臨床活性があった（ピロ（Piro）ら、Ann. Oncol. 10:655
-61 (1999)；グエン（Nguyen）ら、Eur. J. Haematol. 62:76-82 (1999)；およ
びコイフィアー（Coiffier）ら、Blood 92:1927-1932 (1998)）。しかし、抗体
を使用して治験の間に最大５００mg/M²で４週間の投与も行われた（マロニー（M
aloney）ら、Blood 90:2188-2195 (1997)）。リツキシマブはまた、軽度のまた
は濾胞性Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ズクマン（Czuczman）ら、J. Clin. Oncol
. 17:268-76 (1999)；およびマクローリン（McLaughlin）ら、Oncology (Huntin
gt) 12:1763-1777 (1998)）の患者を治療するために、ＣＨＯＰ（例えば、シク
ロホスファミド、ドキソルビシン、バンクリスチンおよびプレドニソン）のよう
な化学療法剤と組合わされている。

【０００７】 II．ＣＤ４０とＣＤ４０ＬＣＤ４０は、成熟Ｂ細胞の細胞表面、ならびに白血病性およびリンパ球性Ｂ細
胞上、およびホジキン病（ＨＤ）のホジキンとリードスターンバーグ（ＲＳ）細
胞上で発現されている（バッレ（Valle）ら、Eur. J. Immunol. 19:1463-1467 (
1989)；およびグルス（Gruss）ら、Leuk. Lymphoma 24:393-422 (1997)）。ＣＤ
４０は、正常および悪性Ｂ細胞、例えば非ホジキン濾胞性リンパ腫の活性化と生
存に至るＢ細胞受容体である（ジョンソン（Johnson）ら。Blood 82:1848-1857
(1993)）。ＣＤ４０受容体を介するシグナル伝達は、未成熟Ｂ細胞およびＢ細胞
リンパ腫をＩｇＭまたはｆａｓ誘導性アポトーシスから防御する（ワング（Wang
）ら、J. Immuno. 155:3722-5 (1995)）。同様に被膜細胞リンパ腫細胞は高レベ
ルのＣＤ４０を有し、外因性ＣＤ４０Ｌの添加はその生存を増強し、フルダラビ
ン誘導性アポトーシスからこれらをレスキューした（クロディ（Clodi）ら、Bri
t. J. Haematol. 103:217-9 (1998)）。これに対して他の報告は、ＣＤ４０刺激
がインビトロ（フナコシ（Funakoshi）ら、Blood 83:2787-2794 (1994)）および
インビボ（マーフィー（Mruphy）ら、Blood 86:1946-1953 (1995)）の両方で、
新生Ｂ細胞増殖を阻害することを記載している。

【０００８】マウスに投与された抗ＣＤ４０抗体は、ヒトＢ細胞リンパ腫を有するマウスの
生存を増加させたと言われている（フナコシ（Funakoshi）ら、(1994)；および
タット（Tutt）ら、J. Immunol. 161:3176-3185 (1998)）。ＣＤ４０−ＣＤ４０
Ｌ相互作用を阻害するために抗ＣＤ４０抗体を使用する新生物（Ｂ細胞リンパ腫
およびＥＢＶ誘導リンパ腫を含む）の治療法が、米国特許第５，６７４，４９２
号（１９９７年）および国際ＰＣＴ出願ＷＯ９５／１７２０２（その全体が参照
することにより本明細書に組み込まれる）に記載されている。ＣＤ４０シグナル
は、ＣＤ２０との相乗的相互作用に関係があると報告されている（レッドベター
（Ledbetter）ら、Circ. Shock 44:67-72 (1994)）。抗ＣＤ４０抗体の調製と使
用を記載する追加の文献には、米国特許第５，８７４，０８５号（１９９９年）
、５，８７４，０８２号（１９９９年）、５，８０１，２２７号（１９９８年）
、および５，６７４，４９２号（１９９７年）（その全体が参照することにより
本明細書に組み込まれる）がある。

【０００９】ＣＤ４０リガンドであるｇｐ３９（ＣＤ４０リガンド、またはＣＤ４０Ｌとも
呼ばれる）は、活性化ｃｄ４⁺Ｔｈ細胞で発現されるが、休止細胞では発現され
ない（スプリグス（Spriggs）ら、J. Exp. Med. 176:1543-1550 (1992)；レーン
（Lane）ら、Eur. J. Immunol. 22:2573-2578 (1992)；およびロイ（Roy）ら、J
. Immunol. 151:1-14 (1993)）。ＣＤ４０とＣＤ４０Ｌの両方ともクローン化さ
れており、性状解析されている（スタメンコビ（Stamenkovi）ら、EMBO J. 8:14
03-1410 (1989)；アーミタージ（Armitage）ら、Nature 357:80-82 (1992)；レ
ーダーマン（Lederman）、J. Exp. Med. 175:1091-1101 (1992)；およびホレン
バー（Hollenbaugh）ら、EMBO J. 11:4313-4321 (1992)）。ＣＤ４０Ｌ遺伝子で
トランスフェクションされ、その表面にＣＤ４０Ｌタンパク質を発現する細胞は
、Ｂ細胞増殖を開始させ、他の刺激シグナルとともに、抗体産生を誘導すること
ができる（アーミタージ（Armitage）ら(1992)）。ＣＤ４０Ｌは、ホジキン病領
域の新生物濾胞とリードスターンバーグ細胞（ＣＤ４０⁺）内の腫瘍Ｂ細胞（Ｃ
Ｄ４０⁺）の細胞接触依存性相互作用において重要な役割を果たしているようで
ある（カーボン（Carbone）ら、Am. J. Pathol. 147:912-22 (1995)）。

【００１０】抗ＣＤ４０Ｌモノクロナール抗体は、ＬＰ−ＢＭ５感染マウスのマウスＡＩＤ
Ｓ（ＭＡＩＤＳ）の誘導を阻害するのに有効に使用されている（グリーン（Gree
n）ら、Virology 241:260-268 (1998)）。抗ＣＤ４０抗体はまた、抗体介在疾患
、例えば米国特許第５，８７４，０８２号（１９９９年）に記載されているよう
なアレルギーや自己免疫疾患を予防または治療するために調製されている。抗Ｃ
Ｄ４０抗体は、抗ＣＤ２０抗体と組合せて、細胞培養での非ホジキンＢ細胞リン
パ腫の増殖を阻害するのに付加的役割を示すことが報告されている（ベノイト（
Benoit）ら、(1996) Immunopharmacology 35:129-139 (1996)）。マウスでのイ
ンビトロ試験は、抗ＣＤ２０抗体が、個々に投与された抗ＣＤ４０より、ある（
すべてではない）リンパ腫系を有するマウスの生存を促進するのに、より有効で
あることを証明した（フナコシ（Funakoshi）ら、J. Immunother. Emphasis Tum
or Immunol. 19:93-101 (1996)）。抗ＣＤ１９はまた、２つの同系のマウスＢ細
胞リンパ腫（ＢＣＬ１とＡ３１）の治療にインビボで有効である（タット（Tutt
）ら(1998)）。

【００１１】ＣＤ４０Ｌに対する抗体は、Ｂ細胞活性化に関連する疾患の治療における使用
が記載されている（ヨーロッパ特許第５５５，８８０号（１９９３年））。抗Ｃ
Ｄ４０Ｌ抗体には、米国特許第５，７４７，０３７（１９９８年）に記載のモノ
クロナール抗体３Ｅ４、２Ｈ５、２Ｈ８、４Ｄ９−８、４Ｄ９−９、２４−３１
、２４−４３、８９−７６および８９−７９、および移植片対宿主病の治療に使
用される、米国特許第５，８７６，７１８号（１９９９年）に記載の抗ＣＤ４０
Ｌ抗体がある。

【００１２】 III．中枢神経系癌とその治療Ａ．原発性中枢神経系リンパ腫（ＰＣＮＳＬ）原発性中枢神経系リンパ腫（ＰＣＮＳＬ）は、全身性疾患の無い脳および脳幹
に限定されるリンパ腫として定義される。これは、中枢神経系（ＣＮＳ）で発生
しこれに限定される非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）に適用される用語である。こ
れまでこの腫瘍は、小神経膠細胞腫、細網肉腫または傍血管肉腫とも呼ばれてき
た。しかし今日では、そのリンパ系起源が充分確立している。

【００１３】ＰＣＮＳＬは以前は、通常先天性、後天性または医原性の免疫不全状態（例え
ば、ウィスコット−アルドリッチ症候群または腎移植に起因する免疫抑制）に関
連する頭蓋内新生物のわずかに０．５％〜１．２％を占めるまれな腫瘍であった
。ＰＣＮＳＬが最も高率に報告されたのは、後天性免疫不全症（ＡＩＤＳ）患者
であり、その１．９％〜６％に見られる（デアンゲリス（DeAngelis）ら、「原
発性中枢神経系リンパ腫」、Cancer: Principles & Practice of Oncology 2233
-2242（デビタ（DeVita）ら編、１９９７年）中）。しかし、免疫無防備状態で
はない患者で、ＰＣＮＳＬの頻度が増加している。

【００１４】ＡＩＤＳ患者では、全身性と原発性のＣＮＳ非ホジキンリンパ腫の両方が起き
る（クレーマー（Kramer）ら、Cancer 80:2469-2477 (1997)）。さらにＰＣＮＳ
Ｌを有するＡＩＤＳ患者と非ＡＩＤＳ患者の間には、臨床的、診断的および予後
的に大きな差がある（ファイン（Fine）ら、Ann. Intern. Med. 119:1093-1104
(1993)）。

【００１５】ＨＩＶ関連ＰＣＮＳＬは、進行性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）であり、もっ
ぱらＣＮＳ中に含まれる。多くのＨＩＶ関連ＰＣＮＳＬは、組織学的にＢ細胞起
源のびまん性、大細胞または大細胞免疫芽球性リンパ腫として分類される。さら
にＰＣＮＳＬの起源は疑問であり、これが浸潤性非悪性リンパ球のクモ膜内形質
転換から生じるのか、または末梢新生物細胞が移動してＣＮＳ内にのみ結合する
かについて疑問が継続している（モーゼス（Moses）ら、１９９９年）。

【００１６】ＰＣＮＳＬの最適な治療法もまた規定されている（レニ（Reni）ら、Ann. Onc
ol. 8:227-234 (1997)；およびレッサー（Lesser）ら、Cancer Treat. Rev. 19:
261-281 (1993)）。その局在性と多巣性のために、ＡＩＤＳの合併症として生じ
るＰＣＮＳＬは、一般に手術で切除することができない。一般的な治療は、４，
０００〜５，０００cGyの用量で外部ビーム放射線を含む頭蓋放射線照射である
。臨床およびＸ線撮影法の改善は急速であるが、平均生存率はわずかに２〜４ヶ
月である。脳全体放射線照射、および放射線照射前ＣＨＯＰ（例えば、シクロホ
スファミド、ドキソルビシン、バンクリスチンおよびプレドニソン）および放射
線照射後のシタラビンからなる補助化学療法も使用されているが、それでも多く
の患者は死に至る（オネイル（O'Neill）ら、Int'l J. Radiation Oncol. Biol.
Phys. 33:663-673 (1995)）。シタラビン（例えば、ＡＲＡ−Ｃ）、メソトレキ
セートおよび頭蓋放射線療法の組合せは、放射線療法単独より有効であると報告
されている（アブレイ（Abrey）ら、J. Clin. Oncol. 16:859-63 (1998)）。高
用量のメソトレキセート、ロイコボリン、チオテパ、ビンクリスチンおよびデキ
サメタゾンの組合せもまた、非免疫無防備状態患者の治療に有効であると報告さ
れている（サンドール（Sandor）ら、J. Clin. Oncol. 16:3000-3006 (1998)）
。オマヤレザバーを使用するメソトレキセートとシタラビン投与の組合せは、Ｃ
ＮＳ併発（with CNS involvement，ＣＮＳ関与）のある複合眼内リンパ腫の治療
に有効であると報告されている（バルリ（Valluri）ら、Retina 15:125-9 (1995
)）。眼の合併症はＰＣＮＳＬ患者の２０％で発生するため、そのような眼内リ
ンパ腫の新しい治療法は有用である（モンジュール（Monbjour）ら、Rev. Neuro
l. (Paris) 148:589-600 (1992)）。残念ながら、医原性白質脳症のために、こ
れらの集中治療で重症の認識欠陥が報告されている。遡及的データは、放射線療
法の前に化学療法を使用すると、痴呆のリスクが低下することを示唆する（ファ
イン（Fine）ら、Ann. Intern. Med. 119:1093-1104 (1993)；およびブレイ（Bl
ay）ら、J. Clin. Oncol. 16:864-871 (1998)）。他の研究は、ＰＣＮＳＬを治
療するために化学療法単独の使用を提唱している。脳血液関門を通過する化学療
法剤の透過性を上昇させる物質を使用して、化学療法の効果を増強することがで
きるといわれている（チェング（Chang）ら、Cancer 82:1946-51 (1998)）。

【００１７】これらの治療法の選択肢があるにもかかわらず、平均生存率は約４０ヶ月のま
まである（アブレイ（Abrey）ら、J. Clin. Oncol. 16:859-863 (1998)）。さら
に、これらの治療法は、遅延神経毒性の明確な一定のリスクの原因であり、６０
才以上の高齢患者１００％で重症となる（アブレイ（Abrey）ら、「原発性中枢
神経系リンパ腫における併用化学療法」（要旨）Proc. Am. Soc. Clin. Onc. (1
999)）。またＣＮＳの併発は、全身性ＮＨＬ症例の５〜２９％を重症にし、極端
に重大な予後の原因となる（ファイン（Fine）ら、Ann. Intern. Med. 119:1093
-1104 (1993)；およびバン・ベシエン（van Besien）ら、Blod 91:1178-1184 (1
998)）。

【００１８】Ｂ．他のＣＮＳ癌とその治療法他のＣＮＳ癌には、脳へのＮＨＬの転移、例えば軟髄膜転移（ＬＭ）がある。
ＬＭは、メソトレキセートと¹¹¹インジウム−ジエチレントリアミン四酢酸（¹¹¹ Ｉｎ−ＤＴＰＡ）のオマヤ内注入で治療されているが、結果はまちまちである（
メーソン（Mason）ら、Neurology 50:438-444 (1998)）。シタラビンとチオテパ
もまた、ＬＭを治療するために放射線療法と併用されている（シャーベット（Sc
habet）ら、Nervenarzt 63:317-27 (1992)）。ＬＭはまた、ステージIVのホジキ
ン病（ＨＤ）患者で診断されている；患者は、脳全体放射線照射とクモ膜下メソ
トレキセートでうまく治療されたと報告されている（オーロウスキー（Orlowski
）ら、Cancer 53:1833-1835 (1984)）。

【００１９】原発性脳腫瘍、脳転移、および軟髄膜癌の現在の治療法（モノクロナール抗体
の使用を含む）は、充分ではなく治療活性が低い。ＣＮＳ癌の治療のための物質
として、モノクロナール抗体をタンパク質毒素に結合させることが提唱されてい
る（ヨウレ（Youle）、Semin. Cancer Biol. 7:65-70 (1996)）。例えば抗ＣＤ
７リシンＡ鎖（ＤＡ７）のような免疫毒素が、ＬＭの動物モデルで報告されてい
る（ヘーリンガー（Herrlinger）ら、J. Neurooncol. 40:1-9 (1998)）。ＬＭＢ
−７（マウスモノクロナール抗体Ｂ３と末端切断型シュードモナス（Pseudomona
s）外毒素ＰＥ３８から作成された１本鎖免疫毒素）が、マウスモデルの新生物
髄膜炎を治療するのに使用されていると報告されている（パスタン（Pastan）ら
、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92:2765-2769 (1995)）。

【００２０】 IV．脳への薬剤送達任意の型の脳腫瘍を治療するための脳への治療薬の送達は、脳血液関門（ＢＢ
Ｂ）のために問題がある。脳腫瘍の治療法には以下がある：（１）可能な時は手
術；（２）脳全体の放射線療法；（３）非免疫無防備状態患者でコルチコステロ
イド；および（４）ＢＢＢを通過する能力を有する化学療法。化学療法剤の投与
は任意の注入経路でもよく、例えば脳間質注入（シン（Shin）ら、J. Neurosurg
. 82:1021-1029 (1995)）またはクモ膜下投与がある。脳内腫瘍を治療するため
に、浸透圧性ＢＢＢ破壊法も計画されている（クロール（Kroll）ら、Neurosurg
ery 42:1083-99 (1998)）。

【００２１】ＢＢＢを通過する他の物質もまた開発されている。例えば親油性送達ベクター
（例えば、プルカルバジン）ならびに高用量ＣＮＳ通過性物質（例えば、高用量
メソトレキセート）が、ＰＣＮＳＬの治療に推奨されている（デアンゲリス（De
Angelis）ら、１９９７年）。最近、ラットのＢＢＢを通過するベクター介在薬
剤送達を可能にする、モノクロナール抗体ＯＸ２６の使用が、脳腫瘍のターゲテ
ィングで提唱されている（パートリッジ（Partridge）ら、Pharm. Res. 15:576-
82 (1998)）。ＯＸ２６モノクロナール抗体は、結合ペプチド放射性医薬品を脳
に送達するのに利用できると報告されている（デグチ（Deguchi）ら、Bioconjug
. Chem. 10:32-37 (1999)）。インビボで、ＢＢＢを含む脳毛細管内皮細胞上の
細胞表面受容体（例えば、トランスフェリン受容体またはインスリン受容体）に
対する脳薬剤送達ベクターとして、他のモノクロナール抗体が調製されていると
言われている（ウー（Wu）ら、Drug. Metabl. Dispos. 26:937-9 (1998)）。

【００２２】ラットの脳に抗新生物剤であるダウノマイシンを送達することができると言わ
れる免疫リポソーム（抗体指令リポソーム）も調製されている（フイラー（Huwy
ler）ら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:14164-14169 (1996)）。活性物質を
哺乳動物の脳に送達することができると言われる、生体分子親油性複合体も記載
されている（米国特許第５，７１６，６１４号）。

【００２３】従って、従来の文献での報告にもかかわらず、ＰＣＮＳＬと脳の他のＢ細胞リ
ンパ腫について、改良された診断と治療法に対するニーズが存在する。さらに、
本発明者の知る限り、中枢神経系リンパ腫と髄膜再発を治療するために、抗ＣＤ
２０抗体をクモ膜下に単独で、または他の抗癌剤もしくは抗体（例えば、抗ＣＤ
４０または抗ＣＤ４０Ｌ抗体）と併用して投与することを提唱した人はいない。

【００２４】（本発明の目的と要約）本発明の目的は、Ｂ細胞標的に対する治療上有効量の抗体、例えば抗ＣＤ２２
、抗ＣＤ２１、抗ＣＤ２３、抗ＣＤ３７、抗ＣＤ４０、抗ＣＤ２０抗体、または
その断片を投与する工程を含む、リンパ腫を有する被験体の髄膜再発の治療また
は予防方法を提供する。本発明の別の目的は、Ｂ細胞に対する治療上有効量の抗
体、またはＢ細胞活性化に影響を与える治療上有効量の抗体、例えば抗ＣＤ２１
、抗ＣＤ２２、抗ＣＤ２３、抗ＣＤ４０、抗ＣＤ４０Ｌ、もしくは抗ＣＤ２０抗
体、またはその断片を投与する工程を含む、中枢神経系（ＣＮＳ）リンパ腫の治
療方法を提供する。治療の標的であるＣＮＳリンパ腫には以下がある：原発性Ｃ
ＮＳリンパ腫（ＰＣＮＳＬ）軟髄膜転移（ＬＭ）、またはＣＮＳ併発のあるホジ
キン病。

【００２５】本発明の具体的な目的は、ＣＮＳリンパ腫の治療のために、ヒト抗体、ヒト化
抗体、２特異的（bispecific）抗体、またはキメラ抗体である抗Ｂ細胞抗体を使
用することである。例えば、抗ＣＤ２０、抗ＣＤ２１、抗ＣＤ２２、抗ＣＤ２３
、抗ＣＤ４０、または抗ＣＤ４０Ｌ断片、例えばＦab、Ｆab'およびＦ(ab')₂は
、ＣＮＳリンパ腫の治療での使用が企図される。

【００２６】本発明のより好適な目的は、ＣＮＳリンパ腫の治療に使用される抗ＣＤ２０抗
体として、リツキシマブを使用することである。この抗ＣＤ２０抗体は、好まし
くは脳室内またはクモ膜下に、１週約１０mg〜約３７５mg/M²の用量で４週間投
与することができる。

【００２７】本発明の別の目的は、ＣＮＳリンパ腫の治療のために、抗ＣＤ２０抗体を、（
１）抗ＣＤ４０抗体、または別のＢ細胞結合抗体、（２）ＣＤ４０Ｌアンタゴニ
スト、（３）化学療法剤、および／または（４）抗Ｂ細胞抗体、の任意の１つ以
上と併用して投与することである。

【００２８】本発明のさらなる目的は、ＣＮＳリンパ腫の治療または診断の目的のために、
抗Ｂ細胞抗体、例えば抗ＣＤ２０抗体または上記で特定した他のＢ細胞標的に対
する抗体を、放射性アイソトープに結合させることである。抗ＣＤ２０抗体また
は他の抗Ｂ細胞抗体は、²¹¹Ａｔ、²¹²Ｂｉ、⁶⁷Ｃｕ、¹²³Ｉ、¹³¹Ｉ、¹¹¹Ｉｎ、³ ² Ｐ、²¹²Ｐｂ、¹⁸⁶Ｒｅ、¹⁸⁸Ｒｅ、¹⁵³Ｓｍ、⁹⁹mＴｃ、または⁹⁰Ｙに結合するこ
とができ、治療目的に投与されるなら、放射性免疫治療上有効量が被験体に投与
される。

【００２９】本発明の別の目的は、（Ａ）検出可能な標識物に結合した、Ｂ細胞に対する抗
体、例えば抗ＣＤ２０抗体または抗ＣＤ２０抗体断片を、被験体に投与する工程
；および（Ｂ）該標識物の局在を検出する工程を含む、被験体のＣＮＳリンパ腫
、例えばＰＣＮＳＬの診断方法である。

【００３０】ＣＮＳリンパ腫を治療するために投与される組成物は、脳血液関門（ＢＢＢ）
透過性増強試薬に組合せるかまたは結合することができる。

【００３１】（発明の詳細な説明）Ｉ．定義「ＣＮＳリンパ腫」とは、中枢神経系（ＣＮＳ）の任意のＢ細胞リンパ腫を意
味する。これは、ホジキン病（ＮＤ）リンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）
、軟髄膜転移、および原発性ＣＮＳリンパ腫（「ＰＣＮＳＬ」）を含む。

【００３２】本明細書において「抗体」という用語は、完全な無傷の抗体、およびそのＦab
断片、Ｆｖ、ｓｃＦｖおよびＦ(ab)₂断片を意味する。完全な無傷の抗体は、モ
ノクロナール抗体、例えばマウスモノクロナール抗体（ｍＡｂ）、キメラ抗体、
プライムした抗体、ヒト化抗体、およびヒト抗体を含む。抗体の産生、完全な無
傷の抗体、およびそのＦab断片とＦ(ab)₂断片のタンパク質構造、およびそのよ
うな分子をコードする遺伝子配列の構成は、公知であり、例えばハーロー（Harl
ow）ら、「抗体：実験室マニュアル（ANTIBODIES: A Laboratory Manual）」、
コールドスプリングハーバーラボラトリー（Cold Spring Harbor Laboratory）
、コールドスプリングハーバー（Cold Spring Harbor）、ニューヨーク州（１９
９８年）（これは参照することにより本明細書に組み込まれる）に記載されてい
る。抗体（例えば、抗ＣＤ２０抗体、抗Ｂ細胞抗体など）は、免疫毒素または２
特異的抗体の形の、完全な無傷の抗体または断片の形でもよい。

【００３３】「抗ＣＤ４０抗体」とは、ＣＤ４０タンパク質もしくはそのペプチドまたはＣ
Ｄ４０融合タンパク質と特異的に反応する、免疫グロブリンおよびその断片を含
む。抗ＣＤ４０抗体は、ヒト抗体、キメラ抗体、２特異的抗体、およびヒト化抗
体を含んでよい。

【００３４】「Ｂ細胞表面マーカー」または「Ｂ細胞標的」または「Ｂ細胞抗原」とは、そ
こに結合するアンタゴニストでターゲティングすることができる、Ｂ細胞の表面
上で発現される抗原を意味する。Ｂ細胞表面マーカーの例には、ＣＤ１０、ＣＤ
１４、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３７、ＣＤ５
３、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤ７５、ＣＤ７６、ＣＤ７７、ＣＤ７８
、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤｗ
８４、ＣＤ８５およびＣＤ８６白血球表面マーカーがある。目的のＢ細胞表面マ
ーカーは、哺乳動物の他の非Ｂ細胞組織と比較してＢ細胞上で優先的に発現され
、前駆体Ｂ細胞および成熟Ｂ細胞の両方の上で発現されてよい。好適な実施態様
において、Ｂ細胞マーカーはＣＤ１９、ＣＤ２０またはＣＤ２１を使用し、これ
らは幹細胞段階から形質細胞への終末分化のすぐ前の点まで、系統の分化の間Ｂ
細胞上に見いだされる。最も好適なＢ細胞マーカーはＣＤ２０である。

【００３５】「Ｂ細胞に対する抗体」または「Ｂ細胞抗体」は、Ｂ細胞上の抗原に特異的に
結合する抗体（例えば、上記で特定したもの）である。

【００３６】「Ｂ細胞アンタゴニスト」は、Ｂ細胞表面マーカーに結合すると、例えばＢ細
胞に誘発される体液性応答を低下または妨害することにより、哺乳動物のＢ細胞
を破壊するかまたは枯渇させる、および／または１つ以上のＢ細胞機能を妨害す
る分子である。アンタゴニストは、好ましくはこれで処理した哺乳動物中のＢ細
胞を枯渇（すなわち、循環Ｂ細胞レベルを低下）させることができる。そのよう
な枯渇は、種々の機構、例えば抗体依存性細胞障害（ＡＤＣＣ）および／または
補体依存性細胞障害（ＣＤＣ）、Ｂ細胞増殖の阻害および／またはＢ細胞死滅の
誘導（例えば、アポトーシスによる）により達成される。本発明の範囲に含まれ
るアンタゴニストには、抗体、合成または未変性の配列のペプチド、およびＢ細
胞マーカーに結合する小分子アンタゴニストであり、細胞障害性物質に随時結合
または融合している。好適なアンタゴニストは、抗体、さらに好ましくはＢ細胞
枯渇抗体を含む。

【００３７】「抗ＣＤ４０Ｌ抗体」は、ＣＤ４０Ｌタンパク質もしくはそのペプチド、また
はＣＤ４０Ｌ融合タンパク質と特異的に反応する免疫グロブリンおよびその断片
を含む。抗ＣＤ４０Ｌ抗体は、ヒト抗体、キメラ抗体、２特異的抗体、およびヒ
ト化抗体を含む。

【００３８】「抗ＣＤ２０抗体」は、ＣＤ２０もしくはそのペプチドと特異的に反応する免
疫グロブリンおよびその断片を含む。抗ＣＤ２０抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体
、キメラ抗体、２特異的もしくは３特異的抗体を含む。好適な抗ＣＤ２０抗体は
、リツキシマブである。

【００３９】「Ｂ細胞枯渇抗体」とは、治療的に投与した時、その抗体を投与された被験体
から多くのＢ細胞を枯渇させる任意の抗体（キメラおよびヒト化抗体を含む）ま
たはその断片、またはこれを含有する免疫毒素を意味する。そのようなＢ細胞枯
渇抗体には、例えば、特に限定されないが、上記で特定した任意のＢ細胞抗原に
結合する抗体があり、好ましくは抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２２
抗体、抗ＣＤ３８抗体（例えば、ＯＫＴ１０抗体、フラベル（Flavell）ら、Int
. J. Cancer 62:337-44 (1995)参照）、および主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨ
Ｃ）II抗体（イリッジ（Illidge）ら、Blood 94:233-43 (1999)参照）である。
Ｂ細胞枯渇抗体は、好ましくは抗ＣＤ２０抗体である。Ｂ細胞枯渇抗体は、Ｂ細
胞枯渇抗体の、治療用アイソトープに結合した放射性型、毒性物質に結合した免
疫毒素、全抗体またはその断片（例えば、Ｆab'）、ならびにキメラ抗体および
ヒト化抗体でもよい。

【００４０】「抗ＣＤ１９抗体抗体」とは、Ｂ細胞上に発現されるＣＤ１９抗原を認識しこ
れに結合する任意の抗体またはその断片または免疫毒素を意味する。好適な抗Ｃ
Ｄ１９抗体は、被験体からＢ細胞を治療的に枯渇させるか、またはＢ細胞を他の
物質の作用に対してより感受性にするかまたはその細胞の寿命を短くするように
Ｂ細胞に影響を与える抗体である。具体的な抗ＣＤ１９抗体には、特に限定され
ないが、モノクロナール抗体ＨＤ３７（ゲティー（Ghetie）ら、Clin. Cancer R
es. 5:3920-7 (1999)、モノクロナール抗体Ｂ４３またはその誘導１本鎖Ｆｖ（
ＶＦＳ１９１）（リー（Li）ら、Cancer Immunol. Immunother. 47:121-30 (199
8)）、モノクロナールマウス抗体ＨＤ３７（ストーン（Stone）ら、Blood 88:11
88-97 (1996)）、および１本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）抗体断片ＦＶＳ１９２（ベジセ
ック（Bejcek）ら、Cencer Res. 55:2346-51 (1995)）がある。

【００４１】「抗ＣＤ２２抗体」とは、Ｂ細胞上で発現されるＣＤ２２抗原を認識し、これ
に結合する抗体またはその断片または免疫毒素を意味する。好適な抗ＣＤ２２抗
体は、被験体からＢ細胞を治療的に枯渇させるか、またはＢ細胞を他の物質の作
用に対してより感受性にするかまたはその細胞の寿命を短くするようにＢ細胞に
影響を与える抗体である。具体的な抗ＣＤ２２抗体には、特に限定されないが、
ヒト化抗ＣＤ２２抗体ｈＬＬ２（ベー（Behr）ら、Clin. Cancer Res. 5:3304s-
14s (1999)）、モノクロナール抗体ＯＭ１２４（ボログネシ（Blognesi）ら、Br
. J. Haematol. 101:179-88 (1998)）、および抗ＣＤ２２ＩｇＧ₁ 抗体ＲＦＢ４
およびその免疫毒素（マスフィールド（Mansfield）ら、Bioconjug. Chem. 7:55
7-63 (1996)）がある。

【００４２】「２特異的抗体」とは、ある抗原に特異的な１つの抗原結合部位と、別の抗原
に特異的な別の抗原結合部位を有する抗体分子を意味する。

【００４３】「抗体依存性細胞障害」および「ＡＤＣＣ」は、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）を発現
する非特異的細胞障害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球
、およびマクロファージ）が、標的細胞上の結合抗体を認識し、次に標的細胞の
溶解を引き起こす、細胞性反応を意味する。ＡＤＣＣを仲介する主要な細胞であ
るＮＫ細胞はＦｃｙＲIIIのみを発現するが、単核細胞はＦｃｙＲＩ、ＦｃｙＲI
IおよびＦｃｙＲIIIを発現する。造血細胞上のＦｃＲ発現は、ラベッチ（Ravetc
h）とキネット（Kinet）、Annu. Rev. Immunol 9:457-92 (1991)の464頁の表３
に要約されている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、米国特許第５
，５００，３６２号または５，８２１，３３７号に記載のようなインビトロＡＤ
ＣＣ測定法が行われる。そのような測定法のための有用なエフェクター細胞には
、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞がある。
あるいはさらに、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、例えばクリネス（Clynes）ら、
PNAS (USA) 95:652-656 (1998)に開示されているような動物モデルでインビボで
評価してもよい。

【００４４】「ヒトエフェクター細胞」は、１つ以上のＦｃＲを発現し、エフェクター機能
を果たす白血球である。好ましくはこの細胞は、少なくともＦｃｙＲIIIを発現
し、ＡＤＣＣエフェクター機能を行う。ＡＤＣＣを仲介するヒト白血球の例は、
末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単核細胞、細胞
障害性Ｔ細胞および好中球であり、ＰＢＭＣとＮＫ細胞が好ましい。

【００４５】「Ｆｃ受容体」または「ＦＣＲ」という用語は、抗体のＦｃ領域に結合する受
容体を記載するのに使用される。

【００４６】好適なＦｃＲは、未変性配列のヒトＦｃＲである。さらに、好適なＦｃＲは、
ＩｇＧ抗体に結合するもの（ガンマ受容体）であり、ＦｃｒＲＩ、ＦｃｒＲII、
およびＦｃｙＲIIIサブクラスの受容体を含み、これらの受容体の対立遺伝子変
種および代替スプライス型を含む。ＦｃｒＲII受容体には、ＦｃｒＲIIＡ（「活
性化受容体」）とＦｃｒＲIIＢ（「阻害受容体」）があり、これらは、主にその
細胞質ドメインが異なる同様のアミノ酸配列を有する。活性化受容体ＦｃｒＲII
Ａは、その細胞質ドメイン中に免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（Ｉ
ＴＡＭ）を含有する。阻害受容体ＦｃｒＲIIＢは、その細胞質ドメイン中に免疫
受容体チロシンベースの阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）を含有する（ダエロン（Daer
on）、Annu. Rev. Immunol. 15:203-234 (1997)）。ＦｃＲは、ラベッチ（Ravet
ch）とキネット（Kinet）、Annu. Rev. Immunol 9:457-92 (1991)；カペル（Cap
el）ら、Immunomethods 4:25-34 (1994)；およびハース（Haas）ら、J. Lab. Cl
in. Med. 126:330-41 (1995)に総説がある。将来同定されるものを含む他のＦｃ
Ｒは、本明細書において「ＦＣＲ」という用語に包含される。この用語はまた、
母親のＩｇＧの胎児への移行に関与する、新生児受容体ＦｃＲｎを含む（グエア
（Guyer）ら、J. Immunol. 117:587 (1976) およびキム（Kim）ら、J. Immunol. 24:249 (1994)）。

【００４７】「補体依存性細胞障害性」または「ＣＤＣ」とは、補体の存在下で標的を溶解
する分子の能力を意味する。補体活性化経路は、同種の抗原と複合体を形成した
分子（例えば、抗体）への補体系の最初の成分（Ｃ１ｑ）の結合により開始され
る。補体活性化を評価するためには、例えばカザノ−サントロ（Cazzano-Santor
o）ら、J. Immunol. Methods 202:163 (1996)に記載のようなＣＤＣ測定法が行
われる。

【００４８】「増殖阻害性」アンタゴニストは、アンタゴニストが結合する抗原を発現する
細胞の増殖を妨害し低下させるものである。例えばアンタゴニストは、インビト
ロおよび／またはインビボでＢ細胞の増殖を妨害または低下させる。

【００４９】「アポトーシスを誘導する」アンタゴニストは、例えばＢ細胞のプログラムさ
れた細胞の死滅を誘導するものであり、標準的アポトーシス測定法、例えばアネ
キシンＶの結合、小胞体のＤＮＡの断片化、細胞縮小、拡張、膜小胞（アポトー
シス体と呼ばれる）の細胞断片化および／または形成により測定される。

【００５０】「抗体断片」は、完全な抗体の一部、好ましくは抗体の抗原結合領域または可
変領域を含む。抗体断片の例には、Ｆab、Ｆab'、Ｆ(ab')₂、およびＦｖ断片；
ダイアボディ（diabodies）；線状化抗体；１本鎖抗体分子；および抗体断片か
ら形成される多特異的抗体がある。

【００５１】「未変性の抗体」は通常、２つの同一の軽（Ｌ）鎖と２つの同一の重（Ｈ）鎖
からなる約１５０，０００ダルトンのヘテロテトラマーの糖タンパク質である。
各軽鎖は、１つの共有結合性ジスルフィド結合により重鎖に連結し、ジスルフィ
ド結合の数は、異なる免疫グロブリンイソタイプの重鎖の間で異なる。各重鎖と
軽鎖はまた、規則的なスペースを有する鎖間ジスルフィド結合を有する。各重鎖
は、一端に可変ドメイン（ＶＨ）を有し、次にいくつかの定常ドメインを有する
。各軽鎖は、一端に可変ドメイン（ＶＬ）、他端に定常ドメインを有する。軽鎖
の定常ドメインは、重鎖の最初の定常ドメインと並んでおり、軽鎖の可変ドメイ
ンは、重鎖の可変ドメインと並んでいる。特定のアミノ酸残基が、軽鎖と重鎖の
可変ドメインの境界面を形成すると考えられている。

【００５２】「可変」という用語は、可変ドメインのいくつかの部分が、抗体の間で大きく
異なり、その特定の抗原に対する各特定の抗体の結合と特異性に使用されるとい
う事実を意味する。しかし可変性は、抗体の可変ドメイン全体に均等に分布して
いるのではない。これは、軽鎖の可変ドメインと重鎖の可変ドメインの両方の、
超可変領域と呼ばれる３つのセグメントに集中している。可変ドメインのより保
存された部分は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。未変性の重鎖と軽鎖
の可変ドメインは、それぞれ、３つの超可変領域により連結された、主にＰシー
ト構造を取る４つのＦＲを含み、これは、（３シート構造を連結するループ、お
よびある場合にはその一部を形成する。各鎖の超可変領域は、ＦＲにより密接に
保持され、他の鎖からの超可変領域が、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（
カバト（Kabat）ら、「免疫学的関係のあるタンパク質の配列（Sequences of Pr
oteins of Immunological Interest）」、第５版、パブリックヘルスサービス（
Public Health Service）、国立衛生研究所（National Institutes of Health）
、ベセスダ、メリーランド州（１９９１年）参照）。定常ドメインは、抗原への
抗体の結合には直接関与しないが、種々のエフェクター機能（例えば、抗体依存
性細胞障害（ＡＤＣＣ）への抗体の参加）を示す。

【００５３】抗体をパパイン消化すると、２つの同一の抗原結合断片（「Ｆｏｂ」断片と呼
ばれる）を産生し、それぞれは、単一の抗原結合部位と残りの「Ｆｃ」断片（こ
の名前は、その容易に結晶化する能力を反映する）を有する。ペプシン処理は、
Ｆ(ab')₂断片を与え、これは２つの抗原結合部位を有し、まだ抗原を架橋するこ
とができる。

【００５４】「Ｆｖ」は、完全な抗原認識部位と抗原結合部位とを含有する最小の抗体断片
である。この領域は、堅く非共有結合した１つの重鎖と１つの軽鎖のダイマーか
らなる。この構成で、各可変ドメインの超可変領域が相互作用して、ＶＨ−ＶＬ
ダイマーの表面上の抗原結合部位を規定する。まとめると、６つの超可変領域が
、抗体に抗原結合特異性を付与する。しかし、単一の可変ドメイン（または、抗
原に特異的な３つの超可変領域のみを含むＦｖの半分）でも、抗原を認識し結合
する能力を有するが、完全な結合部位よりは親和性が低い。

【００５５】Ｆab断片はまた、軽鎖の定常ドメインと重鎖の最初の定常ドメイン（ＣＨＩ）
を含有する。Ｆab'断片は、重鎖ＣＨＩドメイン（abヒンジ領域からの１つ以上
のシステインを含む）のカルボキシ末端にいくつかの残基が付加されたことによ
り、Ｆab断片とは異なる。本明細書においてＦab'−ＳＨは、定常ドメインのシ
ステイン残基が少なくとも１つの遊離のチオール基を有することを示す、Ｆab'
の表示である。Ｆ(ab')Z抗体断片は、元々その間にヒンジシステインを有する一
対のＦab'断片として産生された。抗体断片の他の化学結合も知られている。

【００５６】任意の脊椎動物種の抗体（免疫グロブリン）の「軽鎖」は、その定常ドメイン
のアミノ酸配列に基づき、２つの明確に異なる型（カッパ（κ）とラムダ（λ）
と呼ぶ）の１つに割り当てることができる。

【００５７】その重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に依存して、抗体は、異なるクラスに
割り当てられる。完全な抗体には５つの大きなクラス（ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ
、ＩｇＧ、およびＩｇＭ）があり、これらのいくつかは、さらにサブクラス（イ
ソタイプ）に分類される（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、
ＩｇＡ、およびＩｇＡ２）。抗体の異なるクラスに対応する重鎖の定常ドメイン
は、それぞれａ、８、ｓ、ｙおよびＲと呼ばれる。種々のクラスの免疫グロブリ
ンのサブユニット構造と３次元構造は公知である。

【００５８】「１本鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」抗体断片は、抗体のＶＨとＶＬドメインを
含有し、これらのドメインは単一のポリペプチド鎖中に存在する。好ましくはＦ
ｖポリペプチドはさらに、ＶＨとＶＬドメインの間にポリペプチドリンカーを有
し、これは、ｓｃＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成することを可能にす
る。ｓｃＦｖの総説については、プルックツン（Pluckthun）、「モノクロナー
ル抗体の薬理学（Pharmacology of Monoclonal Antibodies）」、第１１３巻、
ローゼンバーグ（Rosenburg）とムーア（Moore）編、スプリンガー−フェアラー
ク（Springer-Verlag）、ニューヨーク州、269〜315頁（1994）を参照されたい
。

【００５９】「ダイアボディ」という用語は、２つの抗原結合部位を有する小さい抗体断片
を意味し、この断片は、同じポリペプチド鎖（ＶＨ−ＶＬ）中で軽鎖可変ドメイ
ン（ＶＬ）に結合した重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。同じ鎖の２つのドメイ
ンの間を対合を可能にするには短かすぎるリンカーを使用することにより、ドメ
インは、別の鎖の相補的ドメインと対合することを余儀なくされ、２つの抗原結
合部位が作成される。ダイアボディは、例えば、ＥＰ４０４，０９７号；ＷＯ９
３／１１１６１；およびホリンガー（Hollinger）ら、Proc. Natl. Acad. Sci.
USA 90:6444-6448 (1993)に、より詳細に説明されている。

【００６０】本明細書において「モノクロナール抗体」という用語は、実質的に均一な抗体
の集団から得られる抗体を意味し、すなわち集団の個々の抗体は、わずかに存在
するかも知れない天然の突然変異以外は同一である。モノクロナール抗体は、特
異性が高く、単一の抗原性部位に対するものである。さらに、異なる決定基（エ
ピトープ）に対する異なる抗体を含む従来の（ポリクロナール）抗体調製物と比
較して、各モノクロナール抗体は、抗原上の単一の決定基に対するものである。
その特異性以外に、モノクロナール抗体は、他の免疫グロブリンが混入していな
いハイブリドーマ培養物から合成される点で有利である。「モノクロナール」と
いう修飾語は、実質的に均一な集団の抗体から得られたという抗体の性質を示し
、特定の方法により抗体を産生する必要があることを示すものではない。例えば
、本発明で使用されるモノクロナール抗体は、コーラー（Kohler）ら、Nature 2
56:495 (1975)が記載した方法により作成されるか、または組換えＤＮＡ法（例
えば、米国特許第４，８１６，５６７号）により作成されてよい。「モノクロナ
ール抗体」はまた、クラックソン（Clackson）ら、Nature, 352:624-628 (1991)
およびマークス（Marks）ら、J. Mol. Biol. 222:581-597 (1991)に記載の技術
を使用して、ファージ抗体ライブラリーから単離してもよい。

【００６１】本明細書のモノクロナール抗体は、具体的には「キメラ」抗体（免疫グロブリ
ン）を含み、ここで重鎖および／または軽鎖の一部は、特定の種からのまたは特
定の抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一または相
同的であり、鎖の残りは、所望の生物活性を示す限り、別の種からのまたは別の
抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体と、ならびにそのような抗体の断片中
の対応する配列と同一であるかまたは相同的である（米国特許第４，８１６，５
６７号；モリソン（Morrison）ら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6851-6855
(1984)）。本明細書において目的のキメラ抗体は、非ヒト霊長類（例えば、旧世
界サル、例えばヒヒ、アカゲザル、カニクイザル）から得られる可変ドメイン抗
原結合配列と、ヒト定常領域配列（米国特許第５，６９３，７８０号）を含む、
「プライムされた」抗体を含む。

【００６２】非ヒト（例えば、マウス）抗体の「ヒト化」型は、非ヒト免疫グロブリン由来
の最小の配列を含有するキメラ抗体である。多くの場合、ヒト化抗体は、受容体
の超可変領域からの残基が、所望の特異性、親和性および能力を有するマウス、
ラット、ウサギまたは非ヒト霊長類のような非ヒト種（ドナー抗体）の超可変領
域からの残基で置換されている、ヒト免疫グロブリン（受容体抗体）である。あ
る場合には、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）残基が、対応す
る非ヒト残基で置換される。さらに、ヒト化抗体は、受容体抗体またはドナー抗
体には存在しない残基を含有することがある。これらの修飾は、抗体の性能をさ
らに改良するために行われる。一般にヒト化抗体は、少なくとも１つのおよび一
般的には２つの可変ドメインの、実質的にすべてを含有し、ここで超可変ループ
のすべてまたは実質的にすべては、非ヒト免疫グロブリン配列のものに対応し、
ＦＲのすべてまたは実質的にすべては、ヒト免疫グロブリン配列のものである。
ヒト化抗体はまた随時、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）（一般的にはヒト免疫
グロブリンの定常領域）の一部を含有してもよい。さらなる詳細については、ジ
ョーンズ（Jones）ら、Nature 321:522-525 (1986)；リーチマン（Riechmann）
ら、Nature 332:323-329 (1988)；およびプレスタ（Presta）、Curr. Op. Struc
t. Biol. 2:593-596 (1992)を参照されたい。

【００６３】本明細書において「超可変領域」という用語は、抗原結合に関与する抗体のア
ミノ酸残基を意味する。超可変領域は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」か
らのアミノ酸残基（例えば、軽鎖可変ドメイン中の残基２４〜３４（ＬＩ）、５
０〜５６（Ｌ２）および８９〜９７（Ｌ３）、および重鎖可変ドメイン中の３１
〜３５（Ｈ１）、５０〜６５（Ｈ２）および９５〜１０２（Ｈ３）；カバト（Ka
bat）ら、「免疫学的関係のあるタンパク質の配列（Sequences of Proteins of
Immunological Interest）」、第５版、パブリックヘルスサービス（Public Hea
lth Service）、国立衛生研究所（Nathional Institutes of Health）、ベセス
ダ、メリーランド州（１９９１年）参照）、および／または「超可変ループ」か
らの残基（例えば、軽鎖可変ドメイン中の残基２６〜３２（ＬＩ）、５０〜５２
（Ｌ２）および９１〜９６（Ｌ３）、および重鎖可変ドメイン中の２６〜３２（
Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）および９６〜１０１（Ｈ３）；チョチア（Chothia
）とレスク（Lesk）、J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)）を含む。「フレーム
ワーク」または「ＦＲ」残基は、本明細書で定義した超可変領域以外の可変ドメ
イン残基である。目的の抗原に「結合する」アンタゴニスト（例えば、Ｂ細胞表
面マーカー）は、アンタゴニストが、抗原を発現する細胞をターゲティングする
ための治療薬として有用であるように、充分な親和性および／またはアビディテ
ィを有する抗原に結合することができるものである。

【００６４】ＣＤ２０抗原に結合する抗体の例には以下がある：「Ｃ２Ｂ８」、現在は「リ
ツキシマブ」（「リツキサン（RITUXAN）（登録商標）」）（米国特許第５，７
３６，１３７号、参照することにより本明細書に組み込まれる）；「Ｙ２Ｂ８」
と呼ぶイットリウム−［９０］標識２１３８マウス抗体（米国特許第５，７３６
，１３７号、参照することにより本明細書に組み込まれる）；随時１３１１で標
識されて「１３１Ｉ−Ｂ１」抗体を生成するマウスＩｇＧ２ａ「１３１」（ＢＥ
ＸＸＡＲＴＭ）（米国特許第５，５９５，７２１号、参照することにより本明細
書に組み込まれる）；マウスモノクロナール抗体「１Ｆ５」（プレス（Press）
ら、Blood 69(2):584-591 (1987)）；「キメラ２Ｈ７」抗体（米国特許第５，６
７７，１８０号、参照することにより本明細書に組み込まれる）；およびモノク
ロナール抗体Ｌ２７、Ｇ２８−２、９３−１１３３、Ｂ−ＣｌまたはＮＵ−Ｂ２
、国際白血球型判定ワークショップ（International Leukocyte Typing Worksho
p）（バレンタイン（Valentine）ら、「白血球型判定III（Leukocyte Typing II
I）」（マクミカエル（McMichael）編、440頁、オックスフォード大学出版（１
９８７年））から入手できる。ＣＤ１９に結合する抗体の例には、ヘックマン（
Hekman）ら、Cancer Immunol. Immunother. 32:364-372 (1991)）およびブラス
ベルド(Vlasveld）ら、Cancer Immunol. Immunother. 40:37-47 (1995)）の抗Ｃ
Ｄ１９抗体、およびキーゼル（Kiesel）ら、Leukemia Research 11, 12:1119 (1
987)のＢ４抗体がある。

【００６５】本明細書において「リツキシマブ」または「リツキサン（登録商標）」という
用語は、ＣＤ２０抗原に対する遺伝子操作で作成したキメラマウス／ヒトモノク
ロナール抗体を意味し、米国特許第５，７３６，１３７号（参照することにより
本明細書に組み込まれる）で「Ｃ２Ｂ８」と呼ばれる。この抗体は、ＩｇＧ、カ
ッパ免疫グロブリンであり、マウス軽鎖と重鎖可変領域配列、およびヒトの定常
領域配列を有する、リツキシマブは、ＣＤ２０抗原に対して約８．０nMの結合親
和性を有する。

【００６６】「単離された」アンタゴニストは、同定され、および自然の環境から分離され
および／または回収されたものである。自然の環境の汚染成分は、アンタゴニス
トの診断または治療的用途を妨害する物質であり、酵素、ホルモン、および他の
タンパク質性もしくは非タンパク質性溶質がある。好適な実施態様においてアン
タゴニストは、（１）ローリー法で測定した時９５重量％を超えるアンタゴニス
ト、最も好ましくは９９重量％を超える、（２）スピニングカップシーケネータ
ー（spinning cup sequenator）を使用して、少なくとも１５残基のＮ末端また
は内部アミノ酸配列を得るのに充分な程度、または（３）クマシーブルー染色ま
たは好ましくは銀染色を使用して、還元または非還元条件下のＳＤＳ−ＰＡＧＥ
により均一、まで精製される。単離されたアンタゴニストは、アンタゴニストの
自然の環境の少なくとも１つの成分は存在しないであろうから、組換え細胞内の
インサイチューのアンタゴニストを含む。しかし通常、単離されたアンタゴニス
トは、少なくとも１つの精製工程により調製される。治療を目的とする「哺乳動
物」は、哺乳動物として分類される任意の動物、例えば家畜動物および農業動物
、および動物園の動物、スポーツ動物、ペット動物（例えば、イヌ、ウマ、ネコ
、ウシなど）を意味する。好ましくは哺乳動物はヒトである。

【００６７】「治療」とは、治療的処置および予防的処置の両方を意味する。治療の必要な
ものは、疾患または障害を有するもの、ならびに疾患または障害を予防すべきも
のを含む。従って哺乳動物は、疾患または障害を有すると診断されるか、または
疾患性向、または疾患に罹りやすいとされる。

【００６８】「治療上有効量」という用語は、問題の自己免疫疾患を予防、緩和または治療
するのに有効なアンタゴニストの量を意味する。補助的治療についての本明細書
の「免疫抑制剤」という用語は、本明細書で治療される哺乳動物の免疫系を抑制
または遮蔽する物質を意味する。これは、サイトカイン産生を抑制するか、自己
抗原発現をダウンレギュレーションまたは抑制するか、またはＭＨＣ抗原を遮蔽
する物質を含む。

【００６９】そのような物質の例には、２−アミノ−６−アリール−５−置換ピリミジン（
米国特許第４，６６５，０７７号を参照、これは参照することにより本明細書に
組み込まれる）；アザチオプリン；シクロホスファミド；ブロモクリプチン；ダ
ナゾール；ダプソン；グルタルアルデヒド（これは、米国特許第４，１２０，６
４９号に記載のように、ＭＨＣ抗原を遮蔽する）；ＭＨＣ抗原とＭＨＣ断片に対
する抗イディオタイプ抗体；シクロスポリンＡ；グルココルチコステロイド、例
えばプレドニソン、メチルプレドニソロン、およびデキサメタゾン；サイトカイ
ンまたはサイトカイン受容体アンタゴニスト、例えば抗インターフェロン−ｙ、
−（３、または−ａ抗体、抗腫瘍壊死因子−ａ抗体、抗腫瘍壊死因子−（ｉ抗体
、抗インターロイキン−２抗体、および抗ＩＬ−２受容体抗体；抗ＬＦＡ−１抗
体、例えば抗ＣＤ１１ａと抗ＣＤ１８抗体；抗Ｌ３Ｔ４抗体；異種抗リンパ球グ
ロブリン；パンＴ抗体、好ましくは抗ＣＤ３または抗ＣＤ４／ＣＤ４ａ抗体；Ｌ
ＦＡ−３結合ドメインを含む可溶性ペプチド（ＷＯ９０／０８１８７、７／２６
／９０公表）；ストレプトキナーゼ；ＴＧＦ−Ｏ；ストレプトドルナーゼ；宿主
からのＲＮＡまたはＤＮＡ；ＦＫ５０６；ＲＳ−６１４４３；デオキシペルグア
リン；ラパミシン；Ｔ細胞受容体（コーエン（Cohen）ら、米国特許第５，１１
４，７２１号）；Ｔ細胞受容体断片（オフナー（Offner）ら、Science 251:430-
432 (1991)；ＷＯ９０／１１２９４；イアンウェイ（Ianeway）、Nature, 341:4
82 (1989)；およびＷＯ９１／０１１３３）；およびＴ細胞受容体抗体（ＥＰ３
４０，１０９号）例えば、ＴＬＯＢ９がある。

【００７０】本明細書で使用される「細胞障害性物質」という用語は、細胞の機能を阻害ま
たは妨害するかおよび／または細胞の破壊を引き起こす物質を意味する。この用
語は、放射性アイソトープ（例えば、Ｉ¹³¹、Ｙ⁹⁰、Ａｒ²¹¹、Ｐ³²、Ｒｅ¹⁸⁸、
Ｒｅ¹⁸⁶、Ｓｍ¹⁵³、Ｂ²¹²など）、化学療法剤、および毒素、例えば細菌、真菌
、植物または動物起源の小分子毒素もしくは酵素活性のある毒素、またはこれら
の断片を含む。

【００７１】「化学療法剤」は、癌の治療に有用な化合物である。化学療法剤の例には、ア
ルキル化剤、例えばチオテアおよびシクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮＴＭ）
；アルキルスルホン酸塩、例えばブスルファン、イムプロスルファンおよびピポ
スルファン；アジリジン、例えばベンゾドーパ、カルボクオン、メツレドーパ、
およびウレドーパ；エチレンイミンとメチラメラミン、例えばアルトレタミン、
トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラ
ミドおよびトリメチロロメラミン；ナイトロジェンマスタード、例えばクロラン
ブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イフォス
ファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノ
ベンビエヒン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシ
ルマスタード；ニトロソ尿素、例えばカルムスチン、クロロゾトシン、ホテムス
チン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチン；抗生物質、例えばアクラシノマ
イシン、アクチノマイシン、アントラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、
カクチノマイシン、カリケアミシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノ
フィリン、クロモイニシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン
、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン、エピルビシン
、エソルビシン、イダンビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、ミコフェ
ノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイ
シン、プロマイシン、ケラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、スト
レプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメックス、ジノスタチン、ゾルビシン；抗
代謝物、例えばメソトレキセートおよび５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）；葉
酸類似体、例えばデノプテリン、メソトレキセート、プテロプテリン、トリメト
レキセート；プリン類似体、例えばフルダラビン、６−メルカプトプリン、チア
ミプリン、チオグアニン；ピリミジン類似体、例えばアンシタビン、アザシチジ
ン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキ
シフルリジン、エノシタビン、フロキスリジン、５−ＦＵ；アンドロゲン、例え
ばカルステロン、ドロモスタノロンプロピオネート、エピチオスタノール、メピ
チオスタン、テストラクトン；抗アドレナル、例えばアミノグルテチミド、ミト
タン、トリロスタン；葉酸補充物、例えばフロリン酸；アセグラトン；アルドホ
スファミドグリコシド；アミノレブリン酸；アムサクリン；ベストラブシル；ビ
サントレン；エダトラキセート；デホファミン；デメコルシン；ジアジクオン；
エルホルニチン；エリプチニウムアセテート；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒ
ドロキシ尿素；レンチナン；ロニダミン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モ
ピダモール；ニトラクリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ポ
ドフィリン酸；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）；
ラゾキサン；シゾフラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクオン
；２，２’，２”−トリクロロトリエチルアミン；ウレタン；ビンデシン；ダカ
ルバジン；マノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；
ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ
；タコソイド、例えばパクリタキセル（ＴＡＸＯＬＯ、ブリストル−マイヤーズ
スクイブオンコロジー（Bristol-Myers Squibb Oncology）、プリンストン、ニ
ュージャージー州）およびドキセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＷ、ローヌプーランロ
ーア（Rhoene-Poulenc Rorer）、アントニー（Antony）、フランス）；クロラン
ブシル；ゲンシタビン；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メソトレキセー
ト；白金類似体、例えばシスプラチンとカルボプラチン；ビンブラスチン；白金
；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；マイトマイシンＣ；ミトキサン
トロン；ビンクリスチン；ビノレルビン；ナベルビン；ノバントロン；テニポシ
ド；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼロダ；イバンドロネート；ＣＰＴ−１
１；トポイソメラーゼインヒビターＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチ
ン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸；エスペラミシン；カペシタビン；および前記い
ずれかの薬剤学的に許容される塩、酸または誘導体がある。またこの定義には、
腫瘍に対してのホルモン作用を制御または阻害する抗ホルモン剤、例えば抗エス
トロゲン、例えばタモキシフェン、ラロキシフェン、アロマターゼ阻害４（５）
−イミダゾール、４ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフ
ェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン、およびトレミフェン（Fareston）；
および抗アンドロゲン、例えばフルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプ
ロリド、およびゴセレリン；および前記いずれかの薬剤学的に許容される塩、酸
または誘導体がある。

【００７２】「サイトカイン」という用語は、細胞内メディエーターとして別の細胞に作用
する、１つの細胞集団から放出されるタンパク質の総称である。そのようなサイ
トカインの例には、リンホカイン、モノカイン、および従来のポリペプチドホル
モンがある。サイトカインには、成長ホルモン、例えばヒト成長ホルモン、Ｎ−
メチオニルヒト成長ホルモン、およびウシ成長ホルモン；副甲状腺ホルモン；チ
ロキシン；インスリン；プロインスリン；リラキシン；プロリラキシン；糖タン
パク質ホルモン、例えば卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（Ｔ
ＳＨ）、および黄体形成ホルモン（ＬＨ）；肝増殖因子；繊維芽細胞増殖因子；
プロラクチン；胎盤ラクトゲン；腫瘍壊死因子−ａと−ｏ；ミュラー管抑制物質
；マウスゴナドトロピン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；血管内皮増殖
因子；インテグリン；トロンボポエチン（ＴＰＯ）；神経増殖因子、例えばＮＧ
Ｆ−Ｐ；血小板増殖因子；トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）、例えばＴ
ＧＦ−ａとＴＧＦ−ｏ；インスリン様増殖因子−Ｉと−II；エリスロポエチン（
ＥＰＯ）；骨誘導性因子；インターフェロン、例えばインターフェロン−ａ、−
Ｐおよび−ｙ；コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、例えばマクロファージ−ＣＳＦ（
Ｍ−ＣＳＦ）；顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）；お
よび顆粒球コロニー刺激因子（ＧＣＳＦ）；インターロイキン（ＩＬ）、例えば
ＩＬ−１、ＩＬ−１ａ、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、
ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５；腫瘍壊
死因子、例えばＴＮＦ−ａまたはＴＮＦ−Ｐ；および他のポリペプチド因子、例
えばＬＩＦおよびキットリガンド（ＫＬ）が含まれる。本明細書においてサイト
カインという用語は、天然起源のタンパク質、または組換え細胞培養物起源のタ
ンパク質、および未変性の配列のサイトカインの生物活性のある同等物を含む。

【００７３】本出願において「プロドラッグ」という用語は、親薬剤と比較して腫瘍細胞に
対して細胞障害性の小さく、酵素的に活性化または変換されてより活性な親型に
なることができる、薬剤活性物質の、前駆体または誘導体型を意味する。例えば
、ウィーナン（Wihnan）、「癌の化学療法におけるプロドラッグ」、Biochemica
l Society Transactions, 14, pp. 375-382, 第６１５回ミーティング、ベルフ
ァスト（１９８６年）、およびステラ（Stella）ら、「プロドラッグ：標的化薬
剤送達への化学的アプローチ」、Directged Drujg Delivery、ボルチャルト（Bo
rchardt）ら（編）、247-267頁、ヒュマーナプレス（Humana Press）、（１９８
５年）を参照されたい。本発明のプロドラッグには、特に限定されないが、ホス
フェート含有プロドラッグ、チオホスフェート含有プロドラッグ、サルフェート
含有プロドラッグ、ペプチド含有プロドラッグ、Ｄ−アミノ酸修飾プロドラッグ
、グリコシル化プロドラッグ、（３−ラクタム含有プロドラッグ、随時置換され
たフェノキシアセトアミド含有プロドラッグ、または随時置換されたフェニルア
セトアミド含有プロドラッグ、５フルオロシトシン、およびより活性な細胞障害
性の遊離の薬剤に変換することができる他の５−フルオロウリジンプロドラッグ
がある。本発明で使用されるプロドラッグ型に誘導体化し得る細胞障害性薬剤の
例には、特に限定されないが、上記の化学療法剤がある。

【００７４】「リポソーム」は、哺乳動物への薬剤（例えば、上記のアンタゴニスト、およ
び場合により化学療法剤）の送達に有用な、種々の型の脂質、リン脂質および／
または界面活性剤からなる小さい小胞である。リポソームの成分は、一般に二重
層で配置され、生物膜の脂質配置と似ている。「添付文書」という用語は、治療
薬製品の市販の包装物中に通常含まれる説明書であり、そのような治療薬製品の
使用についての適応症、使用法、用量、投与、禁忌および／または警告を含む。

【００７５】「治療上有効量」または「予防上有効量」または「用量有効量」とは、ＣＮＳ
リンパ腫の進行を阻害する物質の量を意味する。そのような阻害は、リンパ腫の
存在を検出できなくする完全な応答でも、部分的応答でもよい。これは、投与を
容易にするためにおよび投与量を均一にするために、単位投与型の非経口組成物
を調製することが特に有効である。本明細書において「単位投与型」は、治療す
べき哺乳動物被験体の１回の投与に適した物理的に分かれた単位を意味する；あ
らかじめ決められた量の活性化合物を含有する各単位は、必要な医薬担体ととも
に、所望の治療効果を生み出すように計算されている。本発明の単位投与型の限
定は、（Ａ）活性化合物のユニークな性質、および達成すべき具体的な治療効果
；および（Ｂ）個体の感受性の治療についての活性化合物の配合技術の固有の制
限、により支配されかつ直接これに依存する。

【００７６】「放射性免疫療法上有効量」とは、ＣＮＳリンパ腫の治療のために被験体に投
与された時に、ＣＮＳリンパ腫の完全なまたは部分的な退縮を引き起こす、放射
性アイソトープに結合した抗ＣＤ２０抗体の量を意味する。一般的には、上記の
任意の抗体が、３００〜１５００mg/m³の用量範囲で投与される。

【００７７】「医薬賦形剤」とは、許容されるかまたは便利な剤形で調製するために、活性
薬剤、物質、または抗原と組合せた任意の不活性物質を意味する。

【００７８】「免疫原性」とは、被験体に投与された時、免疫応答（例えば、体液性または
細胞性）を誘発する、標的タンパク質または治療的部分の能力を意味する。

【００７９】 II．アンタゴニストの産生本発明の製造法と部品は、Ｂ細胞表面マーカーに結合するアンタゴニスト（例
えば、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ４０など）を使用するか
または取り込む。従ってそのようなアンタゴニストの作成法を本明細書に記載す
る。アンタゴニストの産生またはスクリーニングに使用されるＢ細胞表面マーカ
ーまたはサイトカインは、例えば所望のエピトープを含有する可溶性型の抗原ま
たはその一部でもよい。あるいは、またはさらに、その細胞表面でＢ細胞表面マ
ーカーを発現する細胞は、アンタゴニストを作成またはスクリーニングするため
に使用することができる。アンタゴニストの作成に有用な他の型のＢ細胞表面マ
ーカーは、当業者には明らかであろう。好ましくはＢ細胞表面マーカーは、ＣＤ
１９またはＣＤ２０抗原である。

【００８０】好適なアンタゴニストは抗体であるが、抗体以外のアンタゴニストが本明細書
において企図される。例えばアンタゴニストは、細胞障害性物質（例えば上記し
たもの）に随時融合、または結合した小分子アンタゴニストでもよい。小分子の
ライブラリーを、本明細書に記載の目的のＢ細胞表面マーカーに対してスクリー
ニングして、抗原に結合する小分子を同定する。この小分子はさらに、その拮抗
性についてスクリーニングされるかおよび／または細胞障害性物質と結合される
。

【００８１】アンタゴニストはまた、合理的な設計またはファージ表示（phage displya）
（例えば、１９９８年８月１３日に公表されたＷＯ９８／３５０３６を参照）に
より作成されたペプチドでもよい。ある実施態様において、選択される分子は、
「ＣＤＲ模倣物」または抗体のＣＤＲに基づいて設計された抗体類似体でもよい
。そのようなペプチドはそれ自身が拮抗性であるが、ペプチドは、そのペプチド
の拮抗性を付加または増強するように、細胞障害性物質に随時融合してもよい。

【００８２】本発明に従って使用される抗体アンタゴニストの産生についての技術の例を、
以下に説明する。

【００８３】ポリクロナール抗体ポリクロナール抗体は、好ましくは関連抗原とアジュバントの、多数回の皮下
（ｓｃ）または腹腔内（ｉｐ）注入により、動物で作成される。免疫すべき種に
おいて免疫原性であるタンパク質（例えば、キーホールリンペットヘモシアニン
、血清アルブミン、ウシサイログロブリン、またはダイズトリプシンインヒビタ
ー）を、２官能または誘導体化物質、例えばマレイミドベンゾイルスルホスクシ
ニミドエステル（システイン残基を介する結合）、Ｎ−ヒドロキシスクシニミド
（リジン残基を介する）、グルタルアルデヒド、無水コハク酸、ＳＯＣｌ２、ま
たはＲ１Ｎ＝Ｃ＝ＮＲ（ここでＲとＲ１は異なるアルキル基である）を使用して
、関連抗原に結合させることが有用なことがある。例えば１００pgまたは５wgの
タンパク質または結合体（それぞれウサギまたはマウスについて）を３倍量のフ
ロイントの完全アジュバントと一緒にして、複数の部位の皮内に溶液を注入して
、動物を、抗原、免疫原性結合体、または誘導体に対して免疫する。１ヶ月後、
元々の量の１／５または１／１０のフロイントの完全アジュバント中のペプチド
または結合体を、複数の部位に皮下注射して、動物を追加免疫する。７〜１４日
後、動物を放血させ、抗体力価について血清を測定する。力価が一定になるまで
動物を追加免疫する。好ましくは動物は、同じ抗原の結合体で追加免疫するが、
異なるタンパク質および／または異なる架橋試薬により結合してもよい。結合体
はまた、タンパク質融合体として組換え細胞培養物で作成することができる。ま
たミョウバンのような凝集性物質を適切に使用して、免疫応答を増強してもよい
。

【００８４】モノクロナール抗体モノクロナール抗体は、実質的に均一な抗体の集団から得られ、すなわち集団
の個々の抗体は、わずかに存在するかも知れない天然の突然変異以外は同一であ
る。「モノクロナール」という修飾語は、別個の抗体の混合物ではない抗体の性
質を示す。例えば、モノクロナール抗体は、コーラー（Kohler）ら、Nature 256
:495 (1975)が記載したハイブリドーマ法により作成されるか、または組換えＤ
ＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号）により作成されてよい。

【００８５】ハイブリドーマ法では、マウスまたは他の適切な宿主動物（例えば、ハムスタ
ー）を前記のように免疫して、免疫に使用されるタンパク質に特異的に結合する
抗体を産生するか産生することができるリンパ球を誘発する。あるいは、リンパ
球をインビトロで免疫してもよい。適当な融合物質（例えばポリエチレングリコ
ール）を使用して、リンパ球を骨髄腫細胞で融合して、ハイブリドーマ細胞を生
成する［ゴーディング（Goding）、「モノクロナール抗体：原理と実際（Monocl
onal Antibodies: Principles and Practice）」、５９〜１０３頁（アカデミッ
クプレス（Academic Press）、１９８６年）］。

【００８６】こうして調製したハイブリドーマ細胞を、好ましくは融合していない親骨髄腫
細胞の増殖または生存を阻害する１つ以上の物質を含有する適当な培地中に、接
種し増殖させる。例えば、もし親の骨髄腫細胞が、酵素ヒポキサンチングアニン
ホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴまたはＨＰＲＴ）が欠如してい
るなら、ハイブリドーマの培地にヒポキサンチン、アミノプテリンおよびチミジ
ン（ＨＡＴ培地）（ＨＧＰＲＴ欠損細胞の増殖を防ぐ物質）を含有させる。

【００８７】好適な骨髄腫細胞は、効率的に融合し、選択された抗体産生細胞により抗体の
安定で高レベルの産生を効率的に支持するものであり、ＨＡＴ培地のような培地
に感受性のものである。これらの中で、好適な骨髄腫細胞株は、マウス骨髄腫株
、例えばサルク研究所細胞分配センター（Salk Institute Cell Distribution C
enter）（サンジエゴ、カリホルニア州）から入手できるＭＯＰＣ−２１とＭＰ
Ｃ−１１マウス腫瘍、およびアメリカンタイプカルチャーコレクション（ロック
ビル、メリーランド州、アメリカ合衆国）から入手できるＳＰ−２またはＸ６３
−Ａｇ８−６５３細胞がある。ヒト骨髄腫およびマウスヒトヘテロ骨髄腫細胞株
も、ヒトモノクロナール抗体の産生について記載されている［コズボール（Kozb
or）、J. Immunol. 133:3001 (1984)；ブローダー（Brodeur）ら、「モノクロナ
ール抗体産生法と応用（Monoclonal Antibody Production Techniques and Appl
ications）」、５１〜６３頁（マーセルデッカー社（Marcel Dekker, Inc.）、
ニューヨーク州、１９８７年）］。

【００８８】ハイブリドーマ細胞が増殖している培地を、抗原に対するモノクロナール抗体
の産生について測定する。好ましくは、ハイブリドーマ細胞により産生されるモ
ノクロナール抗体の結合特異性を、免疫沈降またはインビトロ結合測定法、例え
ば放射免疫定量法（ＲＩＡ）または酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）によ
り測定する。モノクロナール抗体の結合親和性は、例えばムンソン（Munson）ら
、Anal. Biochem., 107:220 (1980)のスキャチャード解析により測定することが
できる。

【００８９】所望の特異性、親和性、および／または活性を有する抗体を産生するハイブリ
ドーマ細胞を同定した後、クローンを、限界希釈法によりサブクローニングし、
標準的方法で増殖させる（ゴーディング（Goding）、「モノクロナール抗体：原
理と実際（Monoclonal Antibodies: Principles and Practice）」、５９〜１０
３頁（アカデミックプレス（Academic Press）、１９８６年））。この目的に適
した培地には、Ｄ−ＭＥＭまたはＲＰＭＩ１６４０培地がある。さらにハイブリ
ドーマ細胞は、動物中の腹水腫瘍としてインビボで増殖させてもよい。

【００９０】サブクローンにより分泌されるモノクロナール抗体は、培地、腹水、または血
清から、従来の免疫グロブリン精製法、例えばプロテインＡ−セファロース、ヒ
ドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、または親和性ク
ロマトグラフィーにより、適切に分離される。

【００９１】モノクロナール抗体をコードするＤＮＡは、従来法を使用して容易に単離され
配列決定される（例えば、マウス抗体の重鎖と軽鎖をコードする遺伝子に特異的
に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用して）。ハイブリド
ーマ細胞は、そのようなＤＮＡの好適な供給源となる。いったん単離されると、
ＤＮＡは発現ベクター中に入れられ、これは、次に大腸菌細胞、サルＣＯＳ細胞
、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、または本来は免疫グロブリンタ
ンパク質を産生しない骨髄腫細胞のような宿主細胞にトランスフェクションされ
て、組換え宿主細胞中でモノクロナール抗体の合成が得られる。抗体をコードす
るＤＮＡの細菌中の組換え発現についての総説には、スケッラ（Skerra）ら、Cu
rr. Opinion in Immunol., 5:256-262 (1993)とフィックツン（Phickthun）、Im
munol. Revs., 130:151-188 (1992)がある。

【００９２】さらなる実施態様において、抗体または抗体断片は、マクファーティ（McCaff
erty）ら、Nature, 348:552-554 (1990)に記載の方法を使用して作成される抗体
ファージライブラリーから単離することができる。クラックソン（Clackson）ら
、Nature, 352:624-628 (1991)とマークス（Marks）ら、J. Mol. Biol., 222:58
1-597 (1991)は、ファージライブラリーを使用して、それぞれマウス抗体とヒト
抗体の単離を記載する。以後の文献は、鎖シャフリング（マークス（Marks）ら
、BiolTechnology, 10:779-783 (1992)）、ならびに非常に大きなファージライ
ブラリーを構築するための方策としてコンビナトリアル感染とインビボ組換え（
ウォーターハウス（Waterhouse）ら、Nucleic Acids Res., 21:2265-2266 (1993
)）により、高親和性（nMの範囲）のヒト抗体の産生を記載している。すなわち
、これらの方法は、モノクロナール抗体の単離のための従来のモノクロナール抗
体ハイブリドーマ法の優れた代替法である。

【００９３】ＤＮＡはまた、例えば相同的なマウス配列の代わりに、ヒト重鎖および軽鎖定
常ドメインのコード配列を使用することにより（米国特許第４，８１６，５６７
号；モリソン（Morrison）ら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851 (1984)）
、または免疫グロブリンコード配列に、非免疫グロブリンポリペプチドのコード
配列のすべてまたは一部を共有結合させることにより、修飾してもよい。一般的
にはそのような非免疫グロブリンポリペプチドは、抗体の定常ドメインの代用と
なるか、または抗体の抗原結合部位の可変ドメインの代用となり、抗原に対する
特異性を有する１つの抗原結合部位と、異なる抗原に対する特異性を有する別の
抗原結合部位とを含むキメラ２価抗体が作成される。

【００９４】ヒト化抗体非ヒト抗体をヒト化する方法は、当該分野で開示されている。好ましくはヒト
化抗体は、非ヒトである供給源から導入される１つ以上のアミノ酸残基を有する
。これらの非ヒトアミノ酸残基はしばしば、「インポート」残基と呼ばれ、これ
は一般的には、「インポート」可変ドメインから取られる。ヒト化は基本的に、
ウィンター（Winter）と共同研究者の方法（ジョーンズ（Jones）ら、Nature, 3
21:522-525 (1986)；リーチマン（Riechmann）ら、Nature 332:323-329 (1988)
；およびバーホエン（Verhoeyen）ら、Science, 239:1534-1536 (1988)）により
、ヒト抗体の対応する配列の代わりに超可変領域配列を置換することにより、行
われる。従ってそのような「ヒト化」抗体は、完全なヒト可変ドメインより実質
的に少ないドメインが、非ヒト種の対応する配列により置換されている、キメラ
抗体である（米国特許第４，８１６，５６７号）。実際、ヒト化抗体は一般的に
は、一部超可変領域残基とおそらく一部ＦＲ残基が、齧歯類抗体の類似の部位か
らの残基で置換されている、ヒト抗体である。

【００９５】ヒト化抗体の作成に使用されるヒト可変ドメイン（軽鎖と重鎖の両方を含む）
の選択は、抗原性を低下させるのに非常に重要である。いわゆる「ベストフィッ
ト」法に従って、齧歯類抗体の可変ドメインの配列が、既知のヒト可変ドメイン
配列の全ライブラリーに対してスクリーニングされる。齧歯類の配列に最も近い
ヒト配列が、ヒト化抗体のヒトフレームワーク領域（ＦＲ）として認められる（
シムズ（Sims）ら、J. Immunol., 151:2296 (1993)；チョチア（Chothia）ら、J
. Mol. Biol., 196:901 (1987)）。別の方法は、軽鎖または重鎖の特定のサブグ
ループのすべてのヒト抗体の共通配列から得られる特定のフレームワーク領域を
使用する。同じフレームワークが、いくつかの異なるヒト化抗体のために使用さ
れる（カーター（Carter）ら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992)；
プレスタ（Presta）ら、J. Immunol., 151:2633 (1993)）。

【００９６】抗原に対する高い親和性および他の好ましい生物学的性質を保持して、抗体を
ヒト化することがさらに重要である。本発明に従ってこの目標を達成するために
、ヒト化抗体は、親およびヒト化配列の３次元モデルを使用して、親配列と種々
の概念ヒト化生成物の解析のプロセスにより調製される。３次元の免疫グロブリ
ンモデルは一般的に入手でき、当業者に公知である。選択された免疫グロブリン
配列候補の可能な３次元コンフォメーション構造を例示し表示するコンピュータ
ープログラムが利用可能である。これらの表示を調べると、免疫グロブリン配列
候補の機能における残基の可能な役割の解析、すなわち免疫グロブリン候補が抗
原に結合する能力に影響を与える残基の解析が可能になる。こうして、ＦＲが選
択され、受容体とインポート配列から組合わされ、その結果所望の抗体の性質（
例えば、標的抗原に対する親和性の上昇）が達成される。一般的に、超可変領域
残基は、直接およびほとんど実質的に、抗原結合へ影響を与える。

【００９７】ヒト抗体ヒト化の代わりに、ヒト抗体を作成することができる。現在は、例えば免疫に
より、外因性免疫グロブリン産生の非存在下で、ヒト抗体の完全なレパートリー
を産生することができるトランスジェニック動物（例えば、マウス）を生成する
ことができる。例えば、キメラおよび生殖細胞系突然変異マウスの抗体重鎖結合
領域（ＪＨ）遺伝子のホモ接合性欠失は、内因性抗体産生を完全に阻害すると記
載されている。そのような生殖細胞系変異体マウス中のヒト生殖細胞系免疫グロ
ブリン遺伝子アレイを移動すると、抗原刺激によりヒト抗体が産生される。例え
ば、ジャコボビッツ（Jakobovits）ら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:2551
(1993)；ジャコボビッツ（Jakobovits）ら、Nature, 362:255-258 (1993)；ブル
ガーマン（Bruggermann）ら、Year in Immuno., 7:33 (1993)；および米国特許
第５，５９１，６６９号、５，５８９，３６９号、および５，５４５，８０７号
を参照されたい。あるいはファージ表示技術（マクファーティ（McCafferty）ら
、Nature 348:552-553 (1990)）を使用して、非免疫ドナーからの免疫グロブリ
ン可変（Ｖ）ドメイン遺伝子レパートリーから、インビトロでヒト抗体および抗
体断片を産生することができる。この方法に従って、抗体Ｖドメイン遺伝子は、
繊維性バクテリオファージ（例えば、Ｍ１３またはｆｄ）の大または小コートタ
ンパク質遺伝子中にフレーム内でクローン化され、ファージ粒子の表面で機能性
抗体断片として表示される。繊維性粒子は、ファージゲノムの１本鎖ＤＮＡコピ
ーを含有するため、抗体の機能性に基づく選択は、これらの性質を示す抗体をコ
ードする遺伝子の選択につながる。すなわち、ファージは、Ｂ細胞の一部の性質
を模倣する。ファージ表示は、種々のフォーマットで行われる；これらの総説に
ついては、例えばジョンソン（Johnson）、ケビン（Kevin S.）およびチスウェ
ル（Chiswell）、デービッド（David J.）、Current Opinion in Structural Bi
ology 3:564-571 (1993)を参照されたい。Ｖ遺伝子セグメントのいくつかの供給
源を、ファージ表示に使用することができる。クラックソン（Clackson）ら、Na
ture, 352:624-628 (1991)は、免疫マウスの脾臓から得られたＶ遺伝子の小さい
ランダムコンビナトリアルライブラリーから、抗オキサゾロン抗体の多様なアレ
イを単離した。非免疫ヒトドナーからのＶ遺伝子のレパートリーを構築すること
ができ、基本的に、抗原（自己抗原を含む）の多様なアレイに対する抗体を、マ
ークス（Marks）ら、J. Mol. Biol. 222:581-597 (1991)、またはグリフィス（G
riffith）ら、EMBO J. 12:725-734 (1993)に記載の技術に従って単離することが
できる。また米国特許第５，５６５，３３２号および５，５７３，９０５号も参
照されたい。ヒト抗体はまた、インビトロ活性化Ｂ細胞により作成してもよい（
米国特許第５，５６７，６１０号と５，２２９，２７５号を参照）。

【００９８】抗体断片抗体断片の産生のために種々の方法が開発されている。従来これらの断片は、
完全な抗体のタンパク質分解的消化により得られた（例えば、モリモト（Morimo
to）ら、Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24:107-117 (1992)
およびブレナン（Brennan）ら、Science, 229:81 (1985)を参照）。しかしこれ
らの断片は現在、組換え宿主細胞から直接産生される。例えば抗体断片は、上記
抗体ファージライブラリーから単離することができる。あるいは、Ｆab'-Sli断
片が、大腸菌から回収され、化学的に結合されてＦ(ab')₂断片を生成する［カー
ター（Carter）ら、Bio/Technology 10:163-167 (1992)］。別のアプローチに従
って、機能宿主細胞培養物からＦ(ab')₂断片を直接単離することができる。抗体
断片の産生のための他の方法は、熟練者には明らかであろう。他の実施態様にお
いて、選択される抗体は、１本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）である。ＷＯ９３／１６
１８５；米国特許第５，５７１，８９４号；および米国特許第５，５８７，４５
８号を参照されたい。抗体断片はまた、例えば米国特許第５，６４１，８７０号
に記載のような「線形抗体」でもよい。そのような線形抗体断片は、単一特異的
または２特異的でもよい。

【００９９】２特異的抗体２特異的抗体は、少なくとも２つの異なるエピトープに対する結合特異性を有
する抗体である。２特異的抗体の例は、Ｂ細胞表面マーカーの２つの異なるエピ
トープに結合する。他のそのような抗体は、最初のＢ細胞マーカーに結合し、さ
らに第２のＢ細胞表面マーカーに結合する。あるいは抗Ｂ細胞マーカー結合アー
ムは、Ｔ細胞受容体分子（例えば、ＣＤ２またはＣＤ３）、またはＩｇＧに対す
るＦｃ受容体（ＦｃｙＲ）、例えばＦｃｒＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃｒＲII（ＣＤ
３２）、およびＦｃｙＲIII（ＣＤ１６）のような白血球上の開始分子に結合す
るアームと一緒になり、細胞性防御機構をＢ細胞に向ける。２特異的抗体はまた
、細胞障害性物質をＢ細胞に向けるのに使用される。これらの抗体は、Ｂ細胞マ
ーカー結合アームと細胞障害性物質に結合するアームを有する（例えば、サポリ
ン、抗インターフェロン−ａ、ビンカ（vinca）アルカロイド、リシンＡ鎖、メ
ソトレキセートまたは放射性アイソトープハプテン）。２特異的抗体は、完全長
抗体または抗体断片（例えば、Ｆ(ab')Z特異的抗体）として調製することができ
る。

【０１００】２特異的抗体の作成法は、当該分野で公知である。完全長２特異的抗体の従来
の産生法は、２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の同時発現に基づき、ここで２
つの鎖は異なる特異性を有する（ミルスタイン（Milstein）ら、Nature, 305:53
7-539 (1983)）。免疫グロブリン重鎖と軽鎖がランダムに組合わされているため
、これらのハイブリドーマ（クアドローマ（quadromas））は、１０個の異なる
抗体分子（そのうち、１つだけが正しい２特異的構造を有する）の可能な混合物
を産生する。正しい分子の精製（これは通常、親和性クロマトグラフィー工程に
より行われる）はかなり面倒であり、生成物の収率は低い。同様の方法がＷＯ９
３／０８８２９とトラウネッカー（Traunecker）ら、EMBO J, 10:3655-3659 (19
91)に開示されている。

【０１０１】異なるアプローチでは、所望の結合特異性（抗体−抗原結合部位）を有する抗
体可変ドメインが、免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合される。融合は好ま
しくは、少なくともヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３領域の一部を含む免疫グロブリ
ン重鎖定常ドメインとで行われる。軽鎖結合に必要な部位を含有する最初の重鎖
定常領域（ＣＨＩ）を、少なくとも１つの融合体中に有することが好ましい。免
疫グロブリン重鎖融合体、および所望であれば免疫グロブリン軽鎖、をコードす
るＤＮＡは、別々の発現ベクター中に挿入され、適当な宿主生物中に同時トラン
スフェクションされる。これは、構築で使用される３つのポリペプチド鎖の等し
くない比が、最適の収率を与える時、実施態様中の３つのポリペプチド断片の相
互比率を調整する大きな柔軟性を与える。しかし、等しい比率の少なくとも２つ
のポリペプチド鎖が高収率を与える時、または比率が特に重要でない時に、２つ
または３つのポリペプチド鎖のコード配列を、１つの発現ベクター中に導入する
ことができる。

【０１０２】本発明の好適な実施態様において、２特異的抗体は、１つのアームに第１の結
合特異性を有するハイブリッド免疫グロブリン重鎖を有し、別のアームのハイブ
リッド免疫グロブリン重鎖軽鎖対（第２の結合特異性を与える）を有する。この
不斉構造は、２特異的分子の片方にのみ免疫グロブリン軽鎖が存在する時は簡単
な分離法を与えるため、不要な免疫グロブリン鎖組合せからの所望の２特異的化
合物の分離を促進する。このアプローチは、ＷＯ９４／０４６９０に開示されて
いる。２特異的抗体を作成するさらなる詳細については、スレシュ（Suresh）ら
、Methods in Enzymology, 121:210 (1987)を参照されたい。

【０１０３】米国特許第５，７３１，１６８号に記載の別のアプローチでは、一対の抗体分
子の間の境界面を、組換え細胞培養物から回収されるヘテロダイマーの割合を最
大にするように作成することができる。好適な境界面は、抗体定常ドメインのＣ
Ｈ３ドメインの少なくとも一部を含有する。この方法では、最初の抗体分子の境
界面からの１つ以上の小さいアミノ酸側鎖が、より大きな側鎖（例えば、チロシ
ンまたはトリプトファン）で置換される。大きなアミノ酸側鎖をより小さいもの
（例えば、アラニンまたはスレオニン）で置換することにより第２の抗体分子の
境界面上に、同一のまたは同様のサイズの補償「空隙」が作成される。これは、
他の不要な最終産物（例えば、ホモダイマー）よりもヘテロダイマーの収率を上
げるための機構を提供する。

【０１０４】２特異的抗体は、架橋抗体または「ヘテロ結合体」抗体を含む。例えばヘテロ
結合体中の抗体の１つはアビジンに結合させ、他の抗体をビオチンに結合させる
ことができる。そのような抗体は、例えば、免疫系が不要な細胞（米国特許第４
，６７６，９８０号）を標的とするように、およびＨＩＶ感染の治療（ＷＯ９１
／００３６０、ＷＯ９２／２００３７３、およびＥＰ０３０８９）について提唱
されている。任意の便利な架橋法を使用して、ヘテロ結合体抗体が作成される。
適切な架橋剤は当該分野で公知であり、多くの架橋法とともに、米国特許第４，
６７６，９８０号に開示されている。

【０１０５】抗体断片から２特異的抗体を作成する方法は、文献に記載されている。例えば
、２特異的抗体は、化学的結合を使用して調製することができる。ブレナン（Br
ennan）ら、Science, 229:81 (1985)は、完全な抗体をタンパク質分解により切
断してＦ(ab')₂断片を作成する方法を記載する。これらの断片は、ジチオール錯
化剤である亜砒酸ナトリウムの存在下で還元して、ビシナルジチールを安定化さ
せ、分子内ジスルフィド形成を防ぐ。次に、作成されたＦab'断片は、チオニト
ロ安息香酸（ＴＮＢ）誘導体に再変換される。Ｆab'−ＴＮＢ誘導体の１つは、
メルカプトエチルアミンで還元することによりＦab'−チオールに再変換され、
等量の他のＦab'−ＴＮＢ誘導体と混合されて、２特異的抗体を形成する。産生
される２特異的抗体は、酵素の選択的固定化のための物質として使用することが
できる。

【０１０６】最近の進展により、大腸菌からのＦab'−ＳＨ断片の直接回収が容易になり、
これは化学的に結合させて２特異的抗体を形成することができる。シャラビ（Sh
alaby）ら、J. Exp. Med., 175:217-225 (1992)は、完全にヒト化された２特異
的抗体Ｆ(ab')2分子の産生を記載する。各Ｆab'断片は大腸菌から別々に分泌さ
れ、インビトロで直接化学結合を受けて、２特異的抗体を形成した。こうして形
成された２特異的抗体は、ＥｒｂＢ２受容体を過剰に発現する細胞と正常なヒト
Ｔ細胞に結合することができ、ヒト乳癌標的に対するヒト細胞障害性リンパ球の
溶解活性を開始することができた。

【０１０７】組換え細胞培養物から直接２特異的抗体断片を作成し単離する種々の方法も、
開示されている。例えば、ロイシンジッパーを使用して、２特異的抗体が産生さ
れている。コステルニイ（Kostelny）ら、J. Immunol., 148(5):1547-1553 (199
2)。ＦｏｓおよびＪｕｎタンパク質からのロイシンジッパーペプチドが、遺伝子
融合により、２つの異なる抗体のＦab'部分に結合された。抗体ホモダイマーを
ヒンジ領域で還元して、モノマーを生成し、次に再度酸化して、抗体ヘテロダイ
マーを形成させた。この方法はまた、抗体ホモダイマーの産生に使用することも
できる。ホリンガー（Hollinger）ら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6
448 (1993) が記載した「ダイアボディ」技術は、２特異的抗体断片を作成する
ための代替機構を与えた。この断片は、同じ鎖上の２つのドメインの間で対合す
るには短かすぎるリンカーにより、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に結合した重鎖可
変ドメイン（ＶＨ）を含む。

【０１０８】従って、１つの断片のＶＨおよびＶＬドメインは、他の断片の相補的ＶＬおよ
びＶＨドメインと強制的に対合され、こうして２つの抗原結合部位が形成される
。１本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）ダイマーを使用して２特異的抗体断片を作成する別の方
法も、報告されている。グルーバー（Gruber）ら、J. Immunol., 152:5368 (199
4)を参照されたい。３つ以上の結合価を有する抗体が企図される。例えば３特異
的抗体を調製することができる。タット（Tutt）ら、J. Immunol. 147:60 (1991
)。

【０１０９】 III．アンタゴニストの結合体と他の修飾本明細書の製造法で使用され製造物に含まれるアンタゴニストは、随時細胞障
害性物質に結合される。そのようなアンタゴニスト−細胞障害性物質結合体の作
成に有用な化学療法剤は、上記した。

【０１１０】アンタゴニストと１つ以上の小分子毒素の結合体、例えばカリケアミシン（ca
licheamicin）、メイタンシン（maytansine）（米国特許第５，２０８，０２０
号）、トリコテン、およびＣＣ１０６５が、本明細書において企図される。本発
明のある実施態様においてアンタゴニストは、１つ以上のメイタンシン（maytan
sine）分子に結合される（例えば、１分子のアンタゴニストに対して約１〜１０
個のメイタンシン（maytansine）分子）。メイタンシン（maytansine）は、例え
ばＭａｙ−ＳＳ−Ｍｅに変換され、これは還元されてＭａｙ−ＳＨ３になり、修
飾アンタゴニスト（チャリ（Chari）ら、Cancer Research 52:127-131 (1992)）
と反応されて、メイタンシノイド−アンタゴニスト結合体を生成する。

【０１１１】あるいはアンタゴニストは、１つ以上のカリケアミシン（calicheamicin）と
結合される。カリケアミシン（calicheamicin）ファミリーの抗生物質は、ピコ
モル以下の濃度で２本鎖ＤＮＡブレークを産生することができる。使用されるカ
リケアミシン（calicheamicin）の構造類似体には、特に限定されないが、’ｙ
Ｊ１、ａ２１、ａ３１、Ｎ−アセチル−ｙｌ’、ＰＳＡＧおよび０１１がある（
ヒンマン（Hinman）ら、Cencer Research 53:3336-3342 (1993)およびローデ（L
ode）ら、Cencer Research 58:2925-2928 (1998)）。

【０１１２】使用可能な酵素活性のある毒素とその断片には、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア
毒素の非結合性活性断片、外毒素Ａ鎖（緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa）から
）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデッシンＡ鎖、アルファ−サルシン、４１エ
ウリテスフォルヂイ（euritesfordii）タンパク質、ジアンチンタンパク質、フ
ィトラカ・アメリカーナ（Phytolaca americana）タンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡ
ＰII、およびＰＡＰ−Ｓ）、ツルレイシ（Momordica charantia）インヒビター
、クルシン、クロチン、サパオナリアオフィシナリスインヒビター、ゲロニン、
ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシンおよびトリコテ
セネスがある。例えば、ＷＯ９３／２１２３２（１９９３年１０月２８日公表）
を参照されたい。

【０１１３】本発明はさらに、核分解活性を有する化合物（例えば、リボヌクレアーゼまた
はＤＮＡエンドヌクレアーゼ、例えばデオキシリボヌクレアーゼ；ＤＮａｓｅ）
と結合したアンタゴニストを企図する。放射結合アンタゴニストの産生のために
、種々の放射性アイソトープが利用可能である。例としては、Ａｔ²¹¹、Ｉ¹²⁵、
Ｒｅ¹⁸⁸、Ｉｎ¹¹¹、Ｔｃ^99m、Ｐｂ²¹²、Ｙ⁹⁰、Ｒｅ¹⁸⁶、Ｓｍ¹⁵³、Ｃｕ⁶⁷、Ｉ¹³ ¹ 、Ｐ⁵²、Ｂｉ²¹²、およびＬｕの放射性アイソトープがある。アンタゴニストと
細胞障害性物質との結合体は、種々の２官能タンパク質結合物質、例えば、Ｎ−
スクシニミジル−３−（２−ピリジルジチオール）プロピオネート（ＳＰＤＰ）
、スクシニミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボ
キシレート、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの２官能誘導体（例えば
、ジメチルアジピミデートＨＣＬ）、活性エステル（例えば、ジスクシニミジル
スベレート）、アルデヒド（例えば、グルタルアルデヒド）、ビスアジド化合物
（例えば、ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン）、ビス−ジアゾニ
ウム誘導体（例えば、ビス−（ｐジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミン
）、ジイソシアネート（例えば、トリエン２，６−ジイソシアネート）、および
ビス活性フッ素化合物（例えば、１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼ
ン）を使用して作成される。例えばリシン免疫毒素は、ビテッタ（VItetta）ら
、Science 238:1098 (1987)に記載されているように調製される。炭素14標識１
−イソチオシアネートベンジル−３−メチルジエチレントリアミン四酢酸（ＭＸ
−ＤＴＰＡ）は、放射性核種をアンタゴニストに結合させるためのキレート剤の
例である。例えば、ＷＯ９４／１１０２６を参照されたい。リンカーは、細胞中
への細胞障害性薬剤の放出を促進する「切断可能なリンカー」でもよい。例えば
酸不安定性リンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー、ジメチルリンカーまたはジ
スルフィド含有リンカー（チャリ（Chari）ら、Cancer Research 52:127-131 (1
992)）も使用できる。あるいはアンタゴニストと細胞障害性物質を含む融合タン
パク質を、例えば組換え法またはペプチド合成法により作成してもよい。

【０１１４】さらに別の実施態様においてアンタゴニストは、腫瘍プレターゲティングで使
用するために「受容体」（例えばストレプトアビジン）に結合してもよく、ここ
でアンタゴニスト−受容体結合体は患者に投与され、次に清澄化剤を使用して循
環中から非結合結合体を除去し、次に細胞障害性物質（例えば、放射性核種）に
結合した「リガンド」（例えば、アビジン）を投与する。本発明のアンタゴニス
トはまた、プロドラッグ（例えば、ペプチジル化学療法剤、ＷＯ８１／０１１４
５を参照）を活性抗癌剤に変換するプロドラッグ活性化酵素に結合してもよい。
例えば、ＷＯ８８／０７３７８および米国特許第４，９７５，２７８号を参照さ
れたい。

【０１１５】そのような結合体の酵素成分は、プロドラッグ上で、プロドラッグをより活性
の細胞障害性型に変換するように作用することができる酵素を含んでよい。本発
明の方法で有用な酵素には、特に限定されないが、ホスフェート含有プロドラッ
グを遊離の薬剤に変換するのに有用なアルカリホスファターゼ；サルフェート含
有プロドラッグを遊離の薬剤に変換するのに有用なアリールスルファターゼ；非
毒性５−フルオロシトシンを抗癌剤５−フルオロウラシルに変換するのに有用な
シトシンデアミナーゼ；ペプチド含有プロドラッグを遊離の薬剤に変換するのに
有用なプロテアーゼ、例えばセラチアプロテアーゼ、サーモリシン、サブチリシ
ン、カルボキシペプチダーゼおよびカテプシン（例えば、カテプシンＢとＬ）；
Ｄ−アミノ酸置換基を含有するプロドラッグを変換するのに有用なＤ−アラニル
カルボキシペプチダーゼ；グリコシル化プロドラッグを遊離の薬剤に変換するの
に有用な１ｉ−ガラクトシダーゼおよびノイラミニダーゼのような炭水化物切断
酵素；（３−ラクタムで誘導体化した薬剤を遊離の薬剤に変換するのに有用な（
３−ラクタマーゼ；および、そのアミン窒素で、それぞれフェノキシアセチルま
たはフェニルアセチル基で誘導体化した薬剤を遊離の薬剤に変換するのに有用な
、ペニシリンＶアミノダーゼまたはペニシリンＧアミダーゼのようなペニシリン
アミノダーゼがある。あるいは、酵素活性を有する抗体（当該分野で「アボザイ
ム」としても公知である）を使用して、本発明のプロドラッグを遊離の活性薬剤
に変換することができる（例えば、マッセイ（Massey）、Nature 328:457-458 (
1987)）。アボザイムを腫瘍細胞集団に送達するために、本明細書に記載のよう
に、アンタゴニスト−アボザイム結合体を調製することができる。

【０１１６】本発明の酵素は、当該分野で公知の方法、例えば上記のヘテロ２官能架橋試薬
の使用により、アンタゴニストに共有結合することができる。あるいは、本発明
の酵素の少なくとも機能的活性部分に結合した本発明のアンタゴニストの少なく
とも抗原結合領域を含む融合タンパク質を、当該分野で公知の組換えＤＮＡ技術
を使用して構築することができる［例えば、ノイバーガー（Neuberger）ら、Nat
ure 312:604-608 (1984)］。

【０１１７】アンタゴニストの他の修飾が本明細書で企図される。例えばアンタゴニストは
、種々の非タンパク質性ポリマー(例えば、ポリエチレングリコール、ポリプロ
ピレングリコール、ポリオキシアルキレン、またはポリエチレングリコールとポ
リプロピレングリコールのコポリマー）の１つに結合してもよい。本明細書に開
示されるアンタゴニストはまた、リポソームとして調製される。アンタゴニスト
を含有するリポソームは、当該分野で公知の方法、例えばエプスタイン（Epstei
n）ら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82:3688 (1985)；フワング（Hwang）ら、
Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77:4030 (1980)；米国特許第４，４８５，０４５
号と４，５４４，５４５号；および１９９７年１０月２３日公表のＷＯ９７／３
８７３１に記載のような方法により調製される。循環時間が増加したリポソーム
は、米国特許第５，０１３，５５６号に開示されている。

【０１１８】特に有用なリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロールおよびＰＥ
Ｇ−誘導体化ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＰＥ）を含む脂質組成
物を用いる逆相蒸発法により作成することができる。リポソームは規定の孔径の
フィルターを介して押し出すことにより、所望の直径を有するリポソームを与え
る。本発明の抗体のＦab'断片は、マーチン（Martin）ら、J. Biol. Chem. 257:
286-288 (1982)に記載のように、ジスルフィド交換反応によりリポソームに結合
することができる。リポソーム内に随時化学療法剤を含有させてもよい。ガビゾ
ン（Gabizon）ら、J. National Cancer Inst. 81(19)1484 (1989)を参照された
い。本明細書に記載のタンパク質またはペプチドアンタゴニストのアミノ酸配列
の修飾が、企図される。例えば、アンタゴニストの結合親和性および／または他
の生物学的性質を改善することが好ましいことがある。

【０１１９】適切なヌクレオチド変化をアンタゴニスト核酸に導入するか、またはペプチド
合成により、アンタゴニストのアミノ酸配列変種が調製される。そのような修飾
には、例えばアンタゴニストのアミノ酸配列内の残基の欠失、および／または挿
入および／または置換がある。最終構築体が所望の性質を有するなら、最終構築
体を得るのに、欠失、挿入および置換のどの組合せを使用してもよい。アミノ酸
の変化もまた、アンタゴニストの翻訳後プロセスを変化させる（例えば、グリコ
シル化部位の数または位置の変化）。

【０１２０】突然変異誘発の好適な位置であるアンタゴニストのいくつかの残基または領域
の同定のために有用な方法は、カニンガム（Cunningham）とウェルズ（Wells）
、Science 244:1081-1085 (1989)が記載した「アラニンスキャニング突然変異誘
発」と呼ばれるものである。ここでは、残基または標的残基が同定（例えば、ａ
ｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓおよびｇｌｕのような荷電残基）され、中性のま
たは負に荷電したアミノ酸（最も好ましくはアラニンまたはポリアラニン）で置
換され、アミノ酸と抗原との相互作用に影響を与える。次に、置換に対する機能
的感受性を示すアミノ酸の位置は、置換の部位にまたはそのために、さらにまた
は他の変種を導入することにより、改善される。すなわち、アミノ酸配列変種を
導入する部位はあらかじめ決められているが、突然変異自体の性質は決まっては
いない。例えば、ある部位での突然変異の実施を解析するために、標的コドンま
たは領域でａｌａスキャニングまたはランダム突然変異誘発を行い、発現された
アンタゴニスト変種を、所望の活性についてスクリーニングする。

【０１２１】アミノ酸配列挿入には、１つの残基から数百またはそれ以上の残基を含有する
ポリペプチドまでの長さ範囲のアミノ末端および／またはカルボキシ末端融合体
、ならびに単一のまたは複数のアミノ酸残基の配列内挿入を含む。末端挿入の例
には、Ｎ末端メチオニル残基を有するアンタゴニスト、または細胞障害性ポリペ
プチドに融合したアンタゴニストがある。アンタゴニスト分子の他の挿入変種に
は、酵素のアンタゴニストのＮ末端またはＣ末端への融合、またはアンタゴニス
トの血清半減期を延長させるポリペプチドがある。

【０１２２】他のタイプの変種は、アミノ酸置換変種である。これらの変種は、異なる残基
で置換されたアンタゴニスト分子に少なくとも１つのアミノ酸置換を有する。抗
体アンタゴニストの置換突然変異誘発のための目的の部位は、超可変領域を含む
が、ＦＲの変化も企図される。

【０１２３】保存的置換は、「好適な置換」の見出しで表１に示す。このような置換により
生物活性が変化するなら、表１の「置換の例」と記載したか、またはアミノ酸の
クラスに関してさらに後述するような、より実質的な変化を導入し、生成物をス
クリーニングしてもよい。

【０１２４】

【０１２５】アンタゴニストの生物学的性質の実質的な修飾は、（ａ）例えばシートまたは
らせんコンフォメーションとして、置換の領域のポリペプチド骨格の構造、（ｂ
）標的部位の分子の電荷または疎水性、または（ｃ）側鎖の大きさ、の維持への
影響が大きく異なる置換を選択することにより行われる。天然に存在する残基は
、通常の側鎖性に基づいて群に分類される：

【０１２６】（１）疎水性：ノルロイシン、ｍｅｔ、ａｌａ、ｖａｌ、ｌｅｕ、ｉｌｅ；（２）中性親水性：ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｈｒ；（３）酸性：ａｓｐ、ｇｌｕ；（４）塩基性：ａｓｎ、ｇｌｎ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、ａｒｇ；（５）鎖の配向に影響を与える残基：ｇｌｙ、ｐｒｏ；および（６）芳香族性：ｔｒｐ、ｔｙｒ、ｐｈｅ。非保存的置換は、これらのクラスの１つのメンバーと別のクラスと交換するこ
とを含む。

【０１２７】アンタゴニストの正しいコンフォメーションを維持するのに関与しない任意の
システイン残基も一般にセリンで置換されて、分子の酸化的安定性を改善し、異
常な架橋を防止する。逆に、システイン結合をアンタゴニストに付加して、その
安定性が改良される（特に、アンタゴニストがＦｖ断片のような抗体断片である
場合）。

【０１２８】特に好適な型の置換変種は、親抗体の１つ以上の超可変領域の残基を置換する
。一般に、さらなる開発のために選択される生じる変種は、それらが作成される
親抗体に対して改良された生物学的性質を有する。そのような置換変種を作成す
る便利な方法は、ファージ表示を使用する親和性成熟である。簡単に説明すると
、いくつかの超可変領域部位（例えば、６〜７部位）を突然変異させて、各部位
ですべての可能な置換体を作成する。こうして作成した抗体変種は、各粒子内に
パッケージングされたＭ１３の遺伝子III産物への融合体として、繊維性ファー
ジ粒子から１価で表示される。次に、ファージ表示変種は、本明細書に記載のよ
うにその生物活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。修飾
のための超可変領域部位候補を同定するために、アラニンスキャニング突然変異
誘発を行って、抗原結合に大きく寄与する超可変領域残基を同定することができ
る。あるいは、またはさらに、抗原−抗体複合体の結晶構造を分析して、抗体と
抗原との接触点を同定することが有効かも知れない。そのような接触残基および
隣接残基は、本明細書に記載の技術に従う置換の候補である。そのような変種が
いったん作成されると、変種のパネルを本明細書に記載のようにスクリーニング
して、１つ以上の関連する測定法で優れた性質を有する抗体を、さらなる開発の
ために選択する。

【０１２９】アンタゴニストの別のタイプのアミノ酸変種は、アンタゴニストの元々のグリ
コシル化パターンを変化させる。変化させるとは、アンタゴニスト中に存在する
１つ以上の炭水化物残基を欠失させるか、および／またはアンタゴニスト中に存
在しない１つ以上のグリコシル化部位を付加することを意味する。

【０１３０】ポリペプチドのグリコシル化は、一般にＮ結合またはＯ結合である。Ｎ結合は
、アスパラギン残基の側鎖への炭水化物残基の結合を意味する。トリペプチド配
列であるアスパラギン−Ｘ−セリンとアスパラギン−Ｘ−スレオニン（ここで、
Ｘは、プロリン以外の任意のアミノ酸である）は、アスパラギン側鎖への炭水化
物残基の酵素的結合のための認識配列である。すなわち、ポリペプチド中のこれ
らのトリペプチド配列のいずれかの存在により、グリコシル化部位候補が作成さ
れる。Ｏ結合グリコシル化は、糖であるＮ−アセチルガラクトサミン、ガラクト
ース、またはキシロースの１つの、ヒドロキシアミノ酸（最も一般的には、除放
性またはスレオニンであるが、５−ヒドロキシプロリンまたは５−ヒドロキシリ
ジンを使用してもよい）への結合を意味する。アンタゴニストへのグリコシル化
部位の付加は、上記トリペプチド配列の１つ以上（Ｎ結合グリコシル化部位につ
いて）を含有するように、アミノ酸配列を改変することにより行うことが便利で
ある。改変はまた、元々のアンタゴニストの配列への、１つ以上のセリンまたは
スレオニン残基の付加、または置換により作成される（Ｏ結合グリコシル化部位
について）。

【０１３１】アンタゴニストのアミノ酸配列変種をコードする核酸分子は、当該分野で公知
の種々の方法により調製される。これらの方法には、特に限定されないが、天然
起源からの単離（天然に存在するアミノ酸配列変種の場合）、またはオリゴヌク
レオチド介在（または部位特異的）突然変異誘発による調製、ＰＣＲ突然変異誘
発、および先に調製したアンタゴニストの変種または非変種体のカセット突然変
異誘発がある。

【０１３２】例えば、アンタゴニストの抗体依存性細胞障害（ＡＤＣＣ）および／または補
体依存性細胞障害（ＣＤＣ）を増強するように、エフェクター機能について、本
発明のアンタゴニストを修飾することが好ましいことがある。これは、抗体アン
タゴニストのＦｃ領域に１つ以上のアミノ酸置換を導入することにより行われる
。あるいは、またはさらに、システイン残基をＦｃ領域に導入して、この領域中
の鎖間ジスルフィド結合の結合を可能にしてもよい。こうして作成したホモダイ
マー抗体は、改良されたインターナリゼーション能力と上昇した補体性細胞死滅
および抗体依存性細胞障害（ＡＤＣＣ）を有する。キャロン（Caron）ら、J. Ex
p. Med. 176:1191-1195 (1992)およびショープス（Shopes, B.）、J. Immunol.
148:2918-2922 (1992)を有する。抗腫瘍活性が増強したホモダイマー抗体はまた
、ウルフ（Wolff）ら、Cancer Research 53:2560-2565 (1993)が記載したような
ヘテロ２官能架橋物質を使用して調製してもよい。あるいは、２つのＦｃ領域を
有し、従って補体溶解とＡＤＣＣ能が増強された抗体を作成することができる。
スチーブンソン（Stevenson）ら、Anti-Cancer Drug Design 3:219-230 (1989)
を参照されたい。

【０１３３】アンタゴニストの血清半減期を延長するために、例えば米国特許第５，７３９
，２７７号に記載のように、アンタゴニスト（特に抗体断片）中にサルベージ受
容体結合エピトープを取り込んでもよい。本明細書において「サルベージ受容体
結合エピトープ」という用語は、ＩｇＧ分子のインビボ血清半減期を延長するの
に関与するＩｇＧ分子（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ
４）のＦｃ領域のエピトープを意味する。

【０１３４】 IV．医薬調製物本発明で使用されるアンタゴニストの治療用調製物は、凍結乾燥調製物または
水溶液の形で、随時の薬剤学的に許容される担体、賦形剤または安定剤（「レミ
ントンの薬剤科学（Remington's Pharmaceutical Sciences）」、第１６版、オ
ソル（Osol A.）編（1980)）とともに、所望の程度の純度を有するアンタゴニス
トを混合することにより調製して保存される。許容される担体、賦形剤、または
安定剤は、使用される用量と濃度で受容者に無害なものであり、緩衝液、例えば
リン酸塩、クエン酸塩、および他の有機酸；抗酸化剤、例えばアスコルビン酸と
メチオニン；保存剤（例えば、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロ
リド；ヘキサメトニウムクロリド；ベンザルコニウムクロリド、ベンゼトニウム
クロリド；フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール；アルキルパラベン、
例えばメチルまたはプロピルパラベン；カテコール；レソルシノール；シクロヘ
キサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クロゾール）；低分子量（約１０残
基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば血清アルブミン、ゼラチン、または
免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えばポリビニルピロリドン；アミノ酸、例
えばグリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリ
ジン；単糖、二糖、および他の炭水化物、例えばグルコース、またはデキストリ
ン；キレート剤、例えばＥＤＴＡ；糖、例えばsuc、マンニトール、トレハロー
ス、またはソルビトール；塩形成対イオン、例えばナトリウム；金属錯体（例え
ば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；および／または非イオン性界面活性剤、例えばツ
イーン（登録商標）、プルロニクス（登録商標）、またはポリエチレングリコー
ル（ＰＥＧ）がある。

【０１３５】抗ＣＤ２０抗体調製物の例は、ＷＯ９８／５６４１８（これは参照することに
より本明細書に組み込まれる）に記載されている。この文献は、４０mg/mlリツ
キシマブ、２５mMアセテート、１５０mMトレハロース、０．９％ベンジルアルコ
ール、０．０２％ポリソルベート２０を含有するｐＨ５．０の、２〜８℃の保存
で２年間の最小保存期間を有する、液体の多回投与調製物を記載する。目的の別
の抗ＣＤ２０調製物は、９．０mg/ml塩化ナトリウム、７．３５mg/mlクエン酸ナ
トリウム二水塩、０．７mg/mlポリソルベート８０，および無菌注射水（ｐＨ６
．５）中１０mg/mlリツキシマブを含有する。皮下投与用の凍結乾燥調製物は、
ＷＯ９７／０４８０１に記載されている。そのような凍結乾燥調製物は、適当な
希釈剤で高タンパク質濃度に復元して、復元した調製物は、治療すべき哺乳動物
の皮下に投与される。

【０１３６】本明細書の調製物はまた、治療すべき特定の適応症に必要な２つ以上の活性化
合物、好ましくは互いに悪影響を与えない相補的活性を有するものを含有する。
例えば、細胞障害性物質、化学療法剤、サイトカインまたは免疫抑制剤（例えば
、Ｔ細胞に作用するもの、例えばシクロスポリンまたはＴ細胞に結合する抗体、
例えばＬＦＡ−１に結合するもの）をさらに含むことが好ましい。そのような物
質の有効量は、調製物中に存在するアンタゴニストの量、疾患または障害のタイ
プまたは治療法、および前記した他の要因に依存する。一般的には、従来使用さ
れているものと同じ用量と同じ投与経路、または従来使用されている用量の約１
〜９９％が使用される。

【０１３７】活性成分はまた、例えばコアセルベーションまたは界面重合により、例えばコ
ロイド薬剤送達系（例えば、リポソーム、アルブミン微小球、微小エマルジョン
、ナノ粒子、およびナノカプセル）またはマクロエマルジョン中の、ヒドロキシ
メチルセルロース、またはゼラチンマイクロカプセルおよびポリ（メチルメタク
リレート）マイクロカプセルで調製されたマイクロカプセル中に捕捉してもよい
。そのような技術は、「レミントンの薬剤科学（Remington's Pharmaceutical S
ciences）」、第１６版、オソル（Osol A.）編（1980)に開示されている。

【０１３８】除放性調製物を調製してもよい。除放性調製物の適当な例には、アンタゴニス
トを含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスがあり、そのようなマト
リックスは、成形物の形（例えば、フィルムまたはマイクロカプセル）でもよい
。除放性マトリックスの例には、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２
−ヒドロキシエチル−メタクリレート）、またはポリ（ビニルアルコール））、
ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌ−グルタミン酸とｙエチ
ルＬ−グルタミンのコポリマー、非分解性エチレン−ビニルアセテート、分解性
乳酸−グリコール酸コポリマー、例えばＬＵＰＲＯＮＤＥＰＯＴＴＭ（乳酸グリ
コール酸コポリマーとロイプロエリドアセテートからなる注射性微小球）および
ポリ−Ｄ−３−ヒドロキシ酢酸がある。

【０１３９】インビボ投与に使用される調製物は無菌でなければならない。これは、無菌ろ
過膜でろ過することにより容易に行われる。

【０１４０】Ｖ．抗Ｂ細胞抗体を投与するための方法と組成物Ａ．抗Ｂ細胞抗体を投与するための方法ＣＮＳリンパ腫の治療で使用するために抗Ｂ細胞抗体を投与する方法は、静脈
内（ｉｖ）、経口または腹腔内投与である。しかし、中枢神経系リンパ腫または
関連症状を治療するための、抗Ｂ細胞抗体（例えば、抗ＣＤ２０抗体、またはそ
の免疫原性活性断片）を投与するための好適な方法は、クモ膜下投与である。ク
モ膜下投与は、好ましくはオマヤレザバー（Ommaya reservoir）により行われる
が、腰椎穿刺または脳室内投与でもよい。抗Ｂ細胞抗体は、別の薬剤と併用して
同じ経路により投与することができる；別の経路により、２次物質を投与しても
よい。さらに企図される抗Ｂ細胞抗体は、頭蓋放射線照射の前または後に投与し
てもよい。

【０１４１】あるいは、脳血液関門（ＢＢＢ）を破壊した後、動脈内に薬剤を投与してもよ
い。抗Ｂ細胞抗体（例えばＢ細胞に結合する抗ＣＤ２０抗体、またはＢ細胞を阻
害する抗ＣＤ４０Ｌ抗体）は、単独または他の薬剤（例えば、抗ＣＤ４０抗体、
他の抗Ｂ細胞抗体、メソトレキセート、シクロホスファミド、プロカルバジンお
よびデキサメタゾン）とともに、動脈内に投与することができる。ＢＢＢの破壊
法は、クロール（Kroll）ら、Neurosurgery 42:1083-99 (1998)およびダールボ
ーグ（Dahlborg）ら、Cancer J. Sci. Am. 2:166 (1996)に記載されている。

【０１４２】前述のように抗Ｂ細胞抗体（例えば、抗ＣＤ２０抗体、例えばリツキシマブま
たはその治療上有効な断片（例えば、Ｆab、Ｆab'またはＦ(ab')₂））は、単独
で、または１つ以上の追加の活性物質とともに投与される。追加の活性物質には
、例えば前記したようなロイコボリン、ＣＨＯＰ、メソトレキセート、シタラビ
ン、チオテパまたはビンクリスチンのような他の化学療法剤がある。抗Ｂ細胞抗
体またはその治療上有効な断片はまた、ＣＤ４０とそのリガンドＣＤ４０Ｌとの
相互作用を阻害する物質と組合せて投与することもできる。ＣＤ４０／ＣＤ４０
Ｌインヒビターには、抗ＣＤ４０抗体またはその断片、抗ＣＤ４０Ｌ抗体または
その断片、およびＣＤ４０もしくはＣＤ４０Ｌのペプチド模倣物がある。さらに
抗ＣＤ２０抗体は、単独で、他の抗体と組合せて、または他の治療法（例えば、
化学療法および放射線療法）と組合せて、ならびにこれらの組合せで、投与する
ことができる。

【０１４３】これらの活性物質（例えば、抗ＣＤ２０抗体、例えばリツキシマブ）は、薬剤
学的に許容される担体またはベクター中でもよい。ベクターは、フイラー（Huwy
ler）ら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:14164-14169 (1996)および米国特許
第５，７１６，６１４号に記載のような、親油性ベクター（例えば、プロカルバ
ジン）または免疫親油性ベクターでもよい。あるいは、活性物質は、脳上皮上の
受容体をターゲティングするベクター（例えば、トランスフェリン受容体）に結
合してもよい（ウー（Wu）ら、Drug. Metabl. Dispos. 26:937-9 (1998)）。

【０１４４】 VI．抗ＣＤ２０抗体と他の物質または治療法との併用Ａ．放射線照射と組合せた抗Ｂ細胞抗体放射線照射単独では、他の治療法（例えば、化学療法）と組合せて使用した時
ほど、ＰＣＮＳＬを治療するのに有効ではないことが証明されている。本発明の
１つの態様は、脳リンパ腫の患者を、抗ＣＤ２０抗体単独、または他の物質（例
えば、ＣＨＯＰ）と組合せて脳放射線照射と組合せて治療することを企図する。
抗体は、脳放射線照射の前、または後、または前と後の両方に投与することがで
きる。例えば、全脳放射線療法（ＷＢＲＴ）を被験体に施し、次に高用量のシタ
ラビンと抗ＣＤ２０抗体単独、または他の抗Ｂ細胞抗体と組合せて投与すること
ができる。好ましくは４，０００〜５，０００cGyが、被験体に投与される。あ
るいは、デアンゲリス（DeAngelis）ら、1997が記載したように、４，０００cGy
放射線療法を脳に、そして２，０００cGyを関係の部位に追加して、被験体を治
療してもよい。被験体の眼に併発があるなら、眼に３，６００cGy を投与しても
よい。

【０１４５】放射線照射は最初に、または単独のまたは他の抗Ｂ細胞抗体と組合せた抗ＣＤ
２０による治療の後に行ってもよい。放射線照射後の抗ＣＤ２０抗体の投与は、
プロカルバジン、ロムスチンおよびビンクリスチン（ＰＣＶ）と組合せてもよい
。ＰＣＶの投与は、チェンバーライン（Chamberlain）ら、J. Neuro. Oncol. 14
:271-275 (1992)が記載したように実施してもよい。あるいは抗体は、シクロホ
スファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、およびプレドニソン（ＣＨＯＰ
）、またはシクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、およびデキ
サメタゾン（ＣＨＯＤ）と組合せることができる。これらの抗体と化学療法の組
合せは、全脳放射線療法の前に投与してもよい。本発明の抗ＣＤ２０抗体はまた
、頭蓋放射線照射の前に、メソトレキセート（４００mg/M²）、ドキソルビシン
、シクロホスファミド、ビンクリスチン、プレドニソン、およびブレオマイシン
（ＭＡＣＯＰ−Ｂ）と組合せてもよい。ＭＡＣＯＰ−Ｂ、ＣＨＯＰおよびＣＨＯ
Ｄの投与は、デアンゲリス（DeAngelis）ら、1997、およびそこに引用された文
献に記載のように行われる。

【０１４６】あるいは抗ＣＤ２０抗体自体を、医学的に有用なアイソトープに結合してもよ
い。そのような放射性核種は、以下に詳述する。

【０１４７】Ｂ．化学療法と組合せた抗ＣＤ２０抗体本発明の別の実施態様は、放射線療法無しで化学療法剤と組合せた、抗Ｂ細胞
抗体（例えば、抗ＣＤ２０抗体）またはその治療上有効な断片を使用した、脳リ
ンパ腫の治療である。

【０１４８】１つの例は、高用量メソトレキセートと一緒の抗ＣＤ２０抗体の投与である。
追加物質もまた、この組合せとともに投与ことができる。例えば本発明の抗ＣＤ
２０抗体は、高用量のメソトレキセート（２．５g/M²）、プロカルバジン、およ
びビンクリスチンとともに投与され、メソトレキセート、プロカルバジンおよび
ビンクリスチンは、フレイリッチ（Freilich）ら、Neurology 46:435-439 (1996
)に記載のように投与される。高用量のメソトレキセートはまた、ペレツ−ジャ
フェ（Perez-Jaffe）ら、Diagn. Cytopathol. 20:219-223 (1999)に記載のよう
に投与することができる。あるいは抗ＣＤ２０抗体はまた、高用量シタラビン（
３g/M²）とともに投与される。高用量シタラビンの投与は、ストラウチェン（St
rauchen）ら、Cancer 63:1918-21 (1989)に記載のように行われる。本発明の別
の実施態様は、抗ＣＤ２０抗体と化学療法剤との、または抗ＣＤ４０もしくは抗
ＣＤ４０Ｌとの、および／または他の抗Ｂ細胞抗体との併用投与を企図する。

【０１４９】Ｃ．脳血液関門透過性を上昇させる物質と組合せた抗ＣＤ２０抗体のような抗
Ｂ細胞抗体患者への薬剤の投与にあたって脳血液関門は問題となるため、クモ膜下投与が
好ましくない場合または抗ＣＤ２０抗体の別の投与法が好ましい場合、脳血液関
門（ＢＢＢ）透過性を上昇させる物質または方法が使用される。ＢＢＢ透過性を
上昇させる物質の１つの例は、脳毛細管内皮細胞上に存在するトランスフェリン
受容体と反応する抗体である。トランスフェリン受容体の少なくとも一部と反応
するモノクロナール抗体には、ＯＸ−２６、Ｂ２３／２５、Ｔｆ６／１４、ＯＫ
Ｔ−９、Ｌ５．１、５Ｅ−９、ＲＩ７２１７およびＴ５８／３０がある。これら
の抗トランスフェリン受容体抗体は、米国特許第５，１８２，１０７号（これは
参照することにより本明細書に組み込まれる）に記載のように使用される。

【０１５０】本発明で企図される組成物はまた、脳の標的部位への抗体の送達のための親油
性ベクター（例えば、プロカルバジン）を含む。免疫リポソームも企図される（
フイラー（Huwyler）ら、1996）。親油性分子は好ましくは、オメガ−３シリー
ズの脂肪酸またはその脂質誘導体である。他の親油性分子は、脂肪酸、ジアシル
グリセロール、ジアシルリン脂質、リソ−リン脂質、コレステロール、および１
８〜４６炭素原子の他のステロイド担持ポリ不飽和炭化水素基である。

【０１５１】好適なバイオポリマー担体は、ポリ（アルファ）アミノ酸（例えば、ＰＬＬ、
ポリＬ−アルギニン：ＰＬＡ、ポリＬ−オルニチン：ＰＬＯ）、ヒト血清アルブ
ミン、アミノデキストラン、カゼインなどである。これらの担体は、好ましくは
生分解性、生体適合性、および薬剤送達系の優れた候補である。そのような担体
とその投与についてのさらなる詳細は、米国特許第５，７１６，６１４号を参照
されたい（これは、参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる）。

【０１５２】 VII．ＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌ相互作用を妨害する物質と組合せた抗ＣＤ２０抗体
のような抗Ｂ細胞抗体の投与本発明で企図される別の方法は、Ｂ細胞抗体、好ましくはＢ細胞枯渇性抗体、
および最も好ましくは枯渇性の抗ＣＤ２０抗体と、ＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌ相互作
用を妨害する物質、好ましくは抗ＣＤ４０または抗ＣＤ４０Ｌ抗体との組合せを
使用する、脳リンパ腫の治療である。

【０１５３】本発明のこの態様において、ＣＤ４０Ｌとその結合パートナーＣＤ４０との相
互作用を妨害するために、Ｂ細胞抗体（例えば、リツキサン（登録商標））と組
合せて、「ＣＤ４０Ｌアンタゴニスト」が被験体に投与される。「ＣＤ４０Ｌア
ンタゴニスト」は、この相互作用を妨害する分子として定義される。ＣＤ４０Ｌ
アンタゴニストは、ＣＤ４０Ｌに対する抗体（例えば、ＣＤ４０Ｌに対するモノ
クロナール抗体）、ＣＤ４０Ｌに対する抗体の断片または誘導体（例えば、Ｆab
またはＦ(ab')₂断片、キメラ抗体またはヒト化抗体）、可溶性型のＣＤ４０、Ｃ
Ｄ４０を含む可溶性型の融合タンパク質、またはＣＤ４０Ｌ−ＣＤ４０相互作用
を破壊または妨害する医薬でもよい。

【０１５４】抗ＣＤ４０Ｌ抗体を調製するために、哺乳動物（例えば、マウス、ハムスター
、ウサギ、または有蹄動物）を、免疫原性型のＣＤ４０Ｌタンパク質またはその
タンパク質断片（例えば、ペプチド断片）で免疫し、哺乳動物で抗体応答を誘発
する。表面にＣＤ４０Ｌを発現する細胞はまた、免疫原として使用することがで
きる。代替免疫原には、精製ＣＤ４０Ｌタンパク質またはタンパク質断片がある
。ＣＤ４０Ｌは、ＣＤ４０Ｌ発現細胞から、標準的精製技術（アーミタージ（Ar
mitage）ら、Nature 357:80-82 (1992)；レーダーマン（Lederman）、J. Exp. M
ed. 175:1091-1101 (1992)；およびホレンバー（Hollenbaugh）ら、EMBO J. 11:
4313-4321 (1992)）により精製することができる。あるいは、ＣＤ４０Ｌペプチ
ドは、アーミタージ（Armitage）ら（1992）に開示されたＣＤ４０Ｌのアミノ酸
配列に基づいて調製することができる。タンパク質に免疫原性を付与する技術に
は、担体への結合または当該分野で公知の他の技術がある。例えば、タンパク質
はアジュバントの存在下で投与することができる。免疫の方法は、血漿または血
清中の抗体力価を検出して追跡することができる。標準的ＥＬＩＳＡまたは他の
免疫測定法を抗原として免疫原を使用して、抗体のレベルを評価することができ
る。免疫後、抗血清を得て、ポリクロナール抗体を単離する。モノクロナール抗
体を産生するためには、抗体産生細胞を採取し、米国特許第５，８３３，９８７
号（１９９８年）および５，７４７，０３７号（１９９７年）に記載のように、
標準的体細胞融合法を使用して、骨髄腫細胞と融合することができる。抗ＣＤ２
０抗体と抗ＣＤ４０抗体を、同様の方法により調製することができる。いくつか
の抗ＣＤ４０Ｌ抗体、抗ＣＤ４０抗体および抗ＣＤ２０抗体が文献で報告されて
おり、これらは公に入手できる。

【０１５５】抗体は、断片でもよく、断片は、全抗体について前記したものと同じ方法でそ
の有用性をスクリーニングすることができる。例えばＦ(ab')₂断片は、抗体をペ
プシンで処理することにより作成することができる。生じるＦ(ab')₂断片を処理
して、ジスルフィド結合を還元してＦab'断片を産生することができる。企図さ
れる他の抗体断片にはＦab'とｓｃＦｖがある。

【０１５６】ヒトで治療的に使用する時、一般的免疫抑制以外に、非ヒト抗体の認識を最小
にする方法は、キメラ抗体誘導体、すなわち非ヒト動物の可変領域とヒト定常領
域を組合せた抗体分子を産生することである。キメラ抗体分子は、例えば、マウ
ス、ラットまたは他の種の抗体からの抗原結合ドメインと、ヒト定常領域とを含
んでよい。キメラ抗体を作成する方法は、米国特許第５，８３３，９８７号（１
９９８年）に引用された文献に記載のものがある。

【０１５７】ヒトでの治療目的には、ヒト可変領域キメラ（ここで可変領域の部分、特に抗
原結合ドメインの保存されたフレームワーク領域はヒト起源であり、超可変領域
のみが非ヒト起源である）を産生することにより、ＣＤ４０Ｌタンパク質または
ペプチドと特異的に反応する抗体をさらにヒト化することができる。そのような
改変免疫グロブリン分子は、当該分野で公知のいくつかの技術（例えば、テング
（Teng）ら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80:7308-7312 (1983)；コズボール（
Kozbor）か、Immunology Today 4:7279 (1983)；オルソン（Olsson）ら、Meth.
Enzymol. 92:3-16 (1982)）の任意のものを使用して作成でき、好ましくはＰＣ
Ｔ公報ＷＯ０２／０６１９３またはＥＰ０２３９４００の教示に従って作成され
る。ヒト化抗体は、例えば、スコトゲン社（Scotgen Limited）（ホーリイロー
ド（Holly Road）、ツイッケンハム（Twickenham）、ミドルセックス（Middlese
x）、英国）により、商業的に産生することができる。

【０１５８】ＣＤ４０Ｌタンパク質またはペプチドに対して反応性の特異抗体、または抗原
断片の生成法は、細菌中でＣＤ４０Ｌタンパク質またはペプチドで発現した免疫
原遺伝子、またはその部分をコードする発現ライブラリーをスクリーニングする
ことである。例えば、ファージ発現ライブラリーを使用して、完全なＦab断片、
ＶH領域およびＦｖ領域を細菌中で発現することができる。例えば、ワード（War
d）ら、Nature 341:544-546 (1989)；フセ（Huse）ら、Science 246:1275-1281
(1989)；およびマクファーティ（McCafferty）ら、Nature 348:552-554 (1990)
を参照されたい。例えばＣＤ４０Ｌペプチドを用いるそのようなライブラリーの
スクリーニングは、ＣＤ４０Ｌに反応性の免疫グロブリン断片を同定することが
できる。あるいは、ＳＣＩＤ−ｈｕマウス（ゲンファーム（Genpharm）から入手
できる）を使用して、抗体またはその断片を産生することができる。

【０１５９】ＣＤ４０Ｌ（ヒトＣＤ４０ＬとマウスＣＤ４０Ｌを含む）に対するモノクロナ
ール抗体（ｍＡｂ）の産生方法、および本発明の方法で使用するのに適したモノ
クロナール抗体は、標題「抗ｇｐ３９抗体とその使用」のＰＣＴ特許出願第ＷＯ
９５／０６６６６（この教示内容は、その全体が参照することにより本明細書に
組み込まれる）に記載されている。本発明の特に好適な抗ヒトＣＤ４０Ｌ抗体は
、ハイブリドーマ２４〜３１と８９〜７６により産生される、それぞれモノクロ
ナール抗体２４〜３１と８９〜７６である（これらの抗体は、米国特許第５，７
４７，０３７号に記載のようにクローン化される）。８９〜７６と２４〜３１抗
体を産生するそれぞれ８９〜７６と２４〜３１ハイブリドーマは、ブダペスト条
約の規定に従って、１９９４年９月２日にアメリカンタイプカルチャーコレクシ
ョン（１０８０１ユニバーシティブルアード（University Blvd.）、マナサス
（Manassas）、バージニア州２０１１０−２２０９）に寄託されている。８９〜
７６ハイブリドーマはＡＴＣＣ受け入れ番号ＨＢ１１７１３を、そして２４〜３
１ハイブリドーマはＡＴＣＣ受け入れ番号ＨＢ１１７１２を割り当てられた。

【０１６０】組換え抗ＣＤ４０Ｌ抗体（例えば、キメラおよびヒト化抗体）は、抗ＣＤ４０
Ｌ抗体をコードする核酸（例えば、ＤＮＡまたはｃＤＮＡ）を、標準的組換えＤ
ＮＡ技術に従って操作することにより産生することができる。従って、本発明の
別の態様は、ＣＤ４０Ｌ、特にヒトＣＤ４０Ｌと反応性の、免疫グロブリン重鎖
もしくは軽鎖、またはその部分をコードする単離された核酸に関する。免疫グロ
ブリンをコードする核酸は、重鎖もしくは軽鎖定常領域（またはその部分）が結
合しているかまたは結合していない、免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶL）また
は重鎖可変領域（ＶH）をコードすることができる。そのような核酸は、標準的
方法により抗ヒトＣＤ４０Ｌモノクロナール抗体を産生する細胞（例えば、ハイ
ブリドーマ）から単離することができる。例えば、２４〜３１もしくは８９〜７
６モノクロナール抗体をコードする核酸を、それぞれ２４〜３１もしくは８９〜
７６ハイブリドーマから、ｃＤＮＡライブラリースクリーニング、ＰＣＲ増幅ま
たは他の標準的方法により単離することができる。さらに、抗ヒトＣＤ４０Ｌモ
ノクロナール抗体をコードする核酸は、発現ベクター中に取り込み、適当な宿主
細胞に導入して、組換え型の抗ヒトＣＤ４０Ｌ抗体の発現と産生を促進すること
ができる。

【０１６１】上記の方法は、抗ＣＤ２０、抗ＣＤ４０Ｌまたは抗ＣＤ４０抗体の調製に関し
て使用することができる。

【０１６２】ＣＤ４０Ｌを認識しかつこれに結合しＣ、Ｄ４０とのＣＤ４０の相互作用を阻
害する抗体以外に、他のＣＤ４０Ｌアンタゴニストが、単独でまたは他の治療法
（例えば、放射線療法または化学療法）と組合せて、Ｂ細胞リンパ腫および白血
病の治療における使用が企図される。ＣＤ４０Ｌアンタゴニストは、可溶性型の
ＣＤ４０Ｌリガンドでもよい。ＣＤ４０Ｌの１価の可溶性リガンド（例えば、可
溶性ＣＤ４０）はＣＤ４０Ｌに結合し、こうしてＢ細胞上でＣＤ４０Ｌと発現さ
れるＣＤ４０との相互作用が阻害される。「可溶性」という用語は、リガンドが
細胞膜に永久には結合していないことを示す。可溶性ＣＤ４０Ｌリガンドは、化
学合成、または好ましくは組換えＤＮＡ技術により、例えばリガンドの細胞外ド
メイン（膜貫通ドメインや細胞質ドメインではない）のみを発現することにより
、調製することができる。好適な可溶性ＣＤ４０Ｌリガンドは、可溶性ＣＤ４０
である。あるいは可溶性ＣＤ４０Ｌリガンドは、融合タンパク質の形でもよい。
そのような融合タンパク質は、第２の分子に結合したＣＤ４０Ｌリガンドの少な
くとも一部を含む。例えば、ＣＤ４０は、免疫グロブリンとの融合タンパク質（
例えば、ＣＤ４０Ｉｇ融合タンパク質）として発現することができる。ある実施
態様において、免疫グロブリン重鎖（例えばＣα１）のヒンジ（ＣＨ２とＣＨ３
領域）に対応する配列のアミノ酸残基に結合したＣＤ４０分子の細胞外ドメイン
部分のアミノ酸残基を含む融合タンパク質が産生されて、ＣＤ４０Ｉｇ融合タン
パク質が生成する（例えば、リンスレイ（Linsley）ら、J. Exp. Med. 1783:721
-730 (1991)；カポン（Capon）ら、Nature 337:525-531 (1989)；および米国特
許第５，１１６，９６４号（１９９２年）を参照）。このような融合タンパク質
は、化学合成、または好ましくはＣＤ４０のｃＤＮＡに基づく組換えＤＮＡ技術
により産生することができる（スタメンコビック（Stamenkovic）ら、EMBO J. 8
:1403-1410 (1989))。

【０１６３】ＣＤ４０ＬまたはＣＤ４０アンタゴニストは、インビボの薬剤投与に適した生
体適合性型で、被験体に投与される。「インビボの薬剤投与に適した生体適合性
型」とは、毒性作用よりタンパク質の治療作用の方が大きい、投与されるアンタ
ゴニストの型である。「被験体」という用語は、免疫応答が誘発される生物（例
えば、哺乳動物）を含む。好適な被験体の例には、ヒト、イヌ、ネコ、ウマ、ウ
シ、ブタ、ヤギ、ヒツジ、マウス、ラット、およびトランスジェニック種がある
。ＣＤ４０ＬまたはＣＤ４０アンタゴニストは、任意の剤型で、随時薬剤学的に
許容される担体中で投与することができる。治療上有効量のＣＤ４０ＬまたはＣ
Ｄ４０アンタゴニストの投与は、所望の結果（例えば、治療される脳リンパ腫の
進行または増殖の阻害）を達成するのに必要な、作用量、用量および時間として
定義される。例えば、治療上有効量のＣＤ４０Ｌアンタゴニストは、疾患段階（
例えば、ステージＩ体ステージIV）、年齢、性、合併症（例えば、ＡＩＤＳ）お
よび被験体の体重、および被験体で所望の応答を誘発するアンタゴニストの能力
などの要因に従って変化する。投与処方は、最適な治療応答を与えるように調整
される。例えばいくつかの分かれた用量を毎日投与するか、または用量は、治療
状況の緊急性により示されるように、比例して減少してもよい。活性化合物（例
えば、抗ＣＤ４０抗体）自体または他の活性物質と組合せて、便利な方法、例え
ば注射（皮下、筋肉内、クモ膜下、脳室内、静脈内など）、経口投与、吸入、経
皮適用、または直腸投与で投与される。投与経路に依存して、活性化合物は、酵
素の作用、酸、および化合物を不活性化させる他の天然の条件から、化合物を防
御するための材料で被覆される。好適な投与経路は、静脈内（i.v.）注射である
。

【０１６４】非経口投与以外によりＣＤ４０ＬアンタゴニストまたはＣＤ４０アンタゴニス
トを投与するためには、その不活性化を防ぐ物質でアンタゴニストを被覆するか
、この物質とともにアンタゴニストを投与することが必要かも知れない。例えば
、アンタゴニストは、適切な担体または希釈剤中で個体に投与されるか、酵素イ
ンヒビターまたは適切な担体もしくはベクター（例えば、リポソーム）と同時投
与される。薬剤学的に許容される希釈剤には、食塩水および緩衝水溶液がある。
酵素インヒビターには、膵臓トリプシンインヒビター、ジイソプロピルフルオロ
ホスフェート（ＤＥＰ）およびトラジロールがある。リポソームは、水中油中水
エマルジョン、ならびに従来のリポソームがある（ストレジャン（Strejan）ら
、J. Neuroimmunol. 7:27 (1984)）。さらなる薬剤学的に許容される担体と賦形
剤は、当該分野で公知である。

【０１６５】活性化合物はまた、非経口的または腹腔内に投与される。分散液は、グリセロ
ール、液体ポリエチレングリコール、およびこれらの混合物、そして油中で調製
される。通常の保存と使用条件下で、これらの調製物は、微生物の増殖を防ぐた
めの保存剤を含有してもよい。

【０１６６】注射に適した医薬組成物には、無菌水溶液（水溶性の場合）、分散液、および
無菌注射液または分散液の即時調製のための無菌粉末がある。すべての場合に、
組成物は無菌でなければならず、シリンジ操作が容易な程度まで流動性でなけれ
ばならない。これは、製造と保存条件下で安定であって、微生物（例えば、細菌
および真菌）の汚染作用に抗して保存されなければならない。担体は、例えば水
、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、お
よび液体ポリエチレングリコールなど）、およびこれらの適当な混合物を含有す
る溶媒または分散媒体である。例えば、レシチンのようなコーティングの使用、
分散物の場合は必要な粒子サイズの維持、および界面活性剤の使用により、正し
い流動性が維持される。微生物作用の予防は、種々の抗菌および抗真菌剤、例え
ば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサール
などにより、達成される。多くの場合に、組成物中に等張剤、例えば糖、ポリア
ルコール、例えばマンニトール、ソルビトール、または塩化ナトリウムを含有さ
せることが好ましい。吸収を遅らせる物質（例えば、モノステアリン酸アルミニ
ウムおよびゼラチン）を組成物中に含めることにより、注射組成物の長期吸収が
達成される。

【０１６７】無菌注射溶液は、活性化合物（例えば、ＣＤ４０ＬまたはＣＤ４０のアンタゴ
ニスト自体、または他の活性物質もしくは抗ＣＤ２０抗体および抗Ｂ細胞抗体と
組合せて）を、適当な溶媒中に必要な量を、上記の成分の１つまたは組合せを、
必要に応じてろ過滅菌した後に取り込むことにより調製することができる。一般
的に、分散液は、活性化合物を、無菌ビヒクル（基本的な分散媒体と、上記のも
のから必要な他の成分を含む）中に取り込むことにより調製される。無菌注射溶
液の調製用の無菌粉末の場合、好適な調製法は、真空乾燥と凍結乾燥（これは、
活性成分＋あらかじめ無菌ろ過したその溶液からの追加の所望の成分を与える）
である。

【０１６８】前述のように活性化合物が適当に防御されている時、タンパク質は、例えば不
活性の希釈剤または資化性の食用担体で、経口投与される。本明細書において「
薬剤学的に許容される担体」には、任意のかつすべての溶媒、分散媒体、コーテ
ィング、抗菌剤および抗真菌剤、等張物質および吸収遅延剤などを含む。薬剤学
的に許容される物質のためのこのような媒体および物質の使用は、当該分野で公
知である。任意の従来の膜または物質が活性化合物と非適合性である場合以外は
、治療組成物中のその使用が企図される。ＣＤ４０ＬまたはＣＤ４０アンタゴニ
ストとともに使用するための上記のすべての組成物はまた、組成物中に補足活性
化合物（例えば、化学療法剤）を含有してもよい。さらに上記医薬組成物はまた
、抗ＣＤ２０抗体を含む化合物の調製に使用される。

【０１６９】 VIII．放射性免疫療法を使用したＣＮＳの治療治療薬または診断薬として使用するための活性抗体（例えば、抗Ｂ細胞抗体な
ど）を放射能標識するために、いくつかの考慮すべきことがある。まず、放射性
アイソトープを選択しなければならず、次に放射性アイソトープを抗体に結合さ
せる手段を選択しなければならない。放射性アイソトープの選択について、考慮
すべき事項の総説が、マゲルスタット（Magerstadt）、「抗体結合体と悪性疾患
（Antibody Conjugates and Malignant Disease）」、９３〜１０９頁（１９９
１年）に提供される。主に、放射の所望の範囲（腫瘍の組織型、固体かまたは散
在性か、およびすべての腫瘍細胞が抗原陽性であると予測されるかなどのパラメ
ータにより影響を受ける）、エネルギー放出の速度、注入時間とクリアランス速
度と比較したアイソトープの半減期、標識抗体投与の目的がイメージングか治療
かなどを考慮する必要がある。本発明の診断的イメージング目的には、⁹⁹Ｔｃ、¹¹¹ Ｉｎ、¹²³Ｉまたは¹³¹Ｉが好ましく、¹¹¹Ｉまたは¹³¹Ｉ標識が最も好ましい
。本発明の治療的目的には、β放射体（例えば、⁹⁰Ｙまたは¹³¹Ｉ）による標識
が好ましいと考えられる。治療的または診断的用途のために考慮すべき他の医学
的に適したアイソトープには、¹⁸⁶Ｒｅ、¹⁸⁸Ｒｅ、¹⁵³Ｓｍ、²¹²Ｂｉ、³²Ｐ、²¹ ¹ Ａｔ、⁶⁷Ｃｕ、²¹²ＰｂおよびＬｕの放射性アイソトープである。

【０１７０】放射性アイソトープを抗体に結合させる手段を考慮する時、まずアイソトープ
の性質を考慮しなければならない。ヨウ素アイソトープは、アイソトープを直接
タンパク質に共有結合させる多くの方法により、抗体に結合させることができる
。クロラミンＴ標識法（グリーンウッド（Greenwood）ら、BIochem. J. 89:114
(1963)）とヨードゲン標識法（フレーカー（Fraker）ら、Biochem. Biophys. Re
s. Commun. 80:849-847 (1978)）は、一般的に使用される放射性ヨード標識の２
つの方法である。金属のアイソトープ（例えば、⁹⁰Ｙまたは¹⁸⁶Ｒｅ）では、一
般にアイソトープを、キレート残基を共有結合させて抗体に結合させ、次にキレ
ートで金属を配位させる。このような方法は、例えばガンソウ（Gansow）ら、米
国特許第４，８３１，１７５号；４，４５４，１０６号および４，４７２，５０
９号に記載されている（これらはそれぞれその全体が、参照することにより本明
細書に組み込まれる）。ヨードアイソトープ（例えば、¹³¹Ｉ）で標識された抗
体は、標的細胞へのインターナリゼーションにより脱ハロゲン化を受け、キレー
ト化により標識された抗体は、キレート剤の放射線誘導性の切断を受け、こうし
て配位錯体の解離により放射性アイソトープが失われる。ある場合には、錯体か
ら解離した金属は再度錯体を形成することができ、非特異的に局在化したアイソ
トープがより急速なクリアランスを受け、従って非標的組織への毒性は小さくな
る。例えば、キレート化合物（例えば、ＥＤＴＡまたはＤＴＰＡ）を患者に注入
して、キレート剤のプールを提供して放出された放射性金属を結合させ、尿への
放射性アイソトープの排泄を促進することができる。また、脱ハロゲン化から生
じる遊離のヨードおよび小さいヨード化されたタンパク質は、体内から急速に排
除されることに注目されたい。これは、正常組織（骨髄を含む）に放射毒性を与
えない点で有効である。

【０１７１】投与法はまた、マガースタット（Magerstadt）（1991）の総説がある。リンパ
腫の治療については、一方では、特に注射部位での放射能標識物の局所的高濃度
を避けるという点に関して、血流が標識抗体を迅速に分布させることが完全なた
め、静脈内注射が優れた方法であると考えられる。静脈内（ｉｖ）投与は、血管
の内皮細胞とＢＢＢにも関与する内皮下マトリックスを含む「血管バリア」によ
り制限される。前記注入経路のいずれかについての標識抗体の正しい組成の調製
法は、当業者に公知である。

【０１７２】投与の時期は、大きく変動する。全用量を一回で大量に与えてもよい。あるい
は、延長した注入方法を取るか、または数週間にわたって注射を繰り返すること
により、用量が与えられる。好ましい時間間隔は、放射性免疫療法用量の間の６
〜１２週間である。放射性免疫療法のために低い用量が使用されるなら、薬剤は
、２週間間隔で投与される。総治療用量を分けて投与するなら、２〜４日にわた
って投与してもよい。注入される用量が少ないため、微量標識用量を短い間隔で
投与することができる；臨床目的には、１〜２週間が好ましい。

【０１７３】投与される放射測定的用量は大きく変動する。免疫診断イメージングのために
は、微量標識抗体が使用され、一般には１〜２０mgの抗体を、約１〜約３５mCi
の放射性アイソトープで標識する。この用量は、いくぶんイメージングで使用さ
れるアイソトープに依存し、この範囲の高濃度側の量は、99mＴｃと¹²³Ｉについ
ては好ましくは約２０〜約３０mCiが使用され、この範囲の低濃度側では、¹³¹Ｉ
と¹¹¹Ｉｎについては好ましくは約１〜１０mCiが使用される。イメージング目的
には、このような微量標識抗体の約１〜約３０mgが被験体に投与される。放射性
免疫療法目的には、抗体は高比活性で標識される。得られる比活性は、使用され
る放射性アイソトープに依存する。¹³¹Ｉについては、活性は一般に１〜１０mCi
/mgである。抗体は、全身への用量が最大１，１００cGyになるように充分な量が
投与されるが、好ましくは５００cGy以下である。抗体（標識および非標識抗体
を含む）の量は、患者の体重１kg当たり約０．２〜約４０mgである。ＰＣＮＳＬ
または他の脳リンパ腫の局在化を診断または測定するために、標識抗ＣＤ２０ま
たは抗ＣＤ４０のいずれかが使用される。

【０１７４】全身に約５００cGyを与える放射活性の量は、約８２５mCiの¹³¹Ｉであると予
測される。再度、投与される放射活性の量は、一部は選択されるアイソトープに
依存する。¹³¹Ｉを使用する治療法では、約５〜約１，５００mCiが使用され、好
適な量は、約５〜約８００mCi、最も好ましくは約５〜約２５０mCiである。⁹⁰Ｙ
治療法では、約１〜約２００mCi量の放射活性が適切であり、さらに好ましくは
約１〜約１５０mCiであり、最も好ましくは約１〜約１００mCiである。投与され
た放射活性の量から組織用量を推定する好適な方法は、微量を用いてイメージン
グまたは他の薬物動態試験を行い、予測される用量の推定値を得ることである。

【０１７５】診断的または治療的投与のいずれかまたは両方の前に、非標識抗体の「プレ投
与」を行う。イメージングと治療法の両方に及ぼすプレ投与の作用は、患者毎に
変化する。一般に、増加するプレ用量の非標識抗体を使用して、一連の診断的イ
メージング投与を行うことが好ましい。次に腫瘍用量対全身用量の最適比を与え
るプレ用量を使用してから、放射性免疫療法的用量を投与する。

【０１７６】ゴールドバーグ（Goldberg）らは、抗癌胎児性抗原（ＣＥＡ）抗体を使用する
、固形腫瘍（癌）の放射免疫診断イメージングと放射性免疫療法を記載している
（J. Clin. Oncol. 9:548 (1991)）。米国特許第４，３４８，３７６号と４，４
６０，５５９号に記載の材料と方法の多くの態様（参照することによりその全体
が本明細書に組み込まれる）はまた、本発明に適用され、これは脳リンパ腫の診
断と治療に関する。患者が受ける放射免疫用量を推定する方法のさらなる説明は
、文献（シーゲル（Siegel）ら、Med. Phys. 20:579-582 (1993)）に記載されて
いる。

【０１７７】 IX．医薬組成物本発明の抗Ｂ細胞抗体（例えば、抗ＣＤ２０、抗ＣＤ２２、抗ＣＤ２１、抗Ｃ
Ｄ４０、もしくは抗ＣＤ４０Ｌ抗体抗体、またはその断片）の、検出可能なマー
カーまたは治療薬への結合または連結は、共有結合または他の化学結合手段によ
り行われる。化学結合手段には、例えばグルタルアルデヒド、ヘテロ２官能性、
およびホモ２官能性結合剤がある。ヘテロ２官能性結合剤には、例えばＳＭＰＴ
（スクシニミジルオキシカルボニル−α−メチル−α−（２−ピリジルジチオン
）−トルメ）、ＳＰＤＰ（Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジリリチオ）
プロピオネート）およびＳＭＣＣ（スクシニミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチ
ル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート）がある。ホモ２官能性結合剤には
、例えばＤＭＰ（ジメチルピメリミデート）、ＤＭＡ（ジメチルスベリニデート
）およびＤＴＢＰ（ジメチル３，３’−ジチオ−ビスプロピオニミデート）があ
る。

【０１７８】いくつかのタンパク質検出マーカーと治療薬は、本発明のモノクロナール抗体
の可変領域と組換え法で組合せて、融合タンパク質である組成物を構築すること
ができ、ここでモノクロナール抗体の可変領域は、その結合特異性を維持し、検
出マーカーまたは治療薬はその活性を保持している。これらの融合タンパク質を
構築するための組換え法は、当該分野で公知である。

【０１７９】モノクロナール抗体または組換え結合タンパク質（結合または非結合）を含む
医薬組成物は、本発明に包含される。医薬組成物は、モノクロナール抗体と薬剤
学的に許容される担体とを含んでよい。本発明の目的において、「薬剤学的に許
容される担体」は、当該分野で公知の任意の標準的担体である。例えば、適当な
担体には、リン酸緩衝化生理食塩水、水／油エマルジョンのようなエマルジョン
、および種々のタイプの湿潤剤がある。他の担体はまた、無菌溶液、錠剤、被覆
錠剤、およびカプセルを含む。一般的にはこのような担体は、デンプン、ミルク
、糖、種々の粘土、ゼラチン、ステアリン酸、もしくはその塩、ステアリン酸マ
グネシウムもしくはカルシウム、タルク、植物性脂肪もしくは油、ガム、グリセ
ロール、または他の賦形剤などの賦形剤を含有してもよい。このような担体を含
む組成物は、公知の従来法で調製される。「レミントンの薬剤科学（Remington'
s Pharmaceutical Sciences）」（第１５版、１９８０年）を参照されたい。

【０１８０】診断目的には、抗体と組換え結合タンパク質を標識するかまたは標識しない。
一般には診断測定法は、モノクロナール抗体または組換え結合タンパク質を、細
胞表面でヒトＣＤ２０に結合させることにより、複合体の形成を検出する。非標
識の時は、抗体と組換え結合タンパク質は、凝集測定法で使用される。さらに非
標識抗体は、モノクロナール抗体または組換え結合タンパク質（例えば、免疫グ
ロブリンに特異的な抗体）と特異的に反応するように、他の抗体（第２抗体）と
組合せて使用することができる。あるいは、モノクロナール抗体と組換え結合タ
ンパク質を、直接標識してもよい。広範な標識物が使用可能であり、例えば放射
性核種（上記）、蛍光性物質、酵素、酵素基質、酵素補助因子、酵素インヒビタ
ー、リガンド（特にハプテン）などがある。無数の免疫測定法が当該分野で公知
である。

【０１８１】一般に本発明のモノクロナール抗体と組換え結合タンパク質は、蛍光測定法で
使用される、ここで被験抗体または組換え結合タンパク質は、蛍光性分子（例え
ば、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ））に結合される。

【０１８２】以下の例は、決して本発明を限定するものではなく、本発明の好適な実施態様
を提供するものである。

【０１８３】例

【０１８４】例１非ヒト霊長類におけるクモ膜下リツキシマブ髄膜再発は、リンパ腫患者の再発の一般的な部位であり、リツキシマブの使用
は、髄膜再発を予防または阻害するのに有効である。

【０１８５】材料と方法。連続的に維持される非ヒト霊長類モデルがＮＣＩにより認可され
ており、これは、皮下オマヤレザバーに取り付けた永続留置プデンツ（Pudenz）
第４心室カテーテルを有する。このカテーテルは、麻酔していない動物の複数の
時点で髄液（ＣＳＦ）のサンプリングを可能にする（マキュリー（McCully）ら
、Lab. Animal Sci. 40:520-525 (1990)）。

【０１８６】最大１０mg用量のリツキシマブを、最大量（１０mg/ml）または保存剤を含ま
ない無菌食塩水で１mlまで希釈して投与する。希釈薬剤溶液の試料を、後のリツ
キシマブ濃度の分析のために取っておく。

【０１８７】使用される動物は、体重約１０kgのアカゲザル（Mucaca mulatta）である。動
物を、ＮＩＨオープン処方押出し非ヒト霊長類食（NIH Open Formula Extruded
Non-Human Primate Diet）であり、これを動物に毎日２回与える。動物＃１（Ｃ
ＳＦアクセス装置が無い）に、一時的腰部カテーテルを使用して、リツキシマブ
の腰内注入を行う。動物＃１がリツキシマブの投与を許容するなら、さらに３匹
の動物に、皮下アクセス装置を介して、側脳室にリツキシマブ用量を投与する。
これらの動物からの試料を、第４心室オマヤレザバーから得て、少なくとも１匹
の動物では腰部空間からも得る。各ＣＳＦ試料採取の前後に、オマヤレザバーを
ポンプで動かして、心室ＣＳＦと充分混合させる。オマヤレザバーを有する２匹
の動物にはまた、リツキシマブの腰部内投与後に第４心室ＣＳＦサンプリングを
行い、腰部空間から心室への薬剤の分散を評価する。薬物動態試験の完了後、３
匹の動物に６週間以上毎週腰部内にリツキシマブを投与して、クモ膜内のリツキ
シマブの許容度を評価する。

【０１８８】最大１０mg用量のクモ膜下または静脈内投与後に、４匹の動物でリツキシマブ
のＣＳＦ薬物動態を試験する。リツキシマブ投与前、投与後０．５、１、２、３
、４、６、８、１０および２４時間に、ＣＳＦ試料（０．３ml）を採取する。こ
れらの試料を−７０℃で直ちに凍結し、ポリプロピレン試験管中で凍結保存する
。

【０１８９】例２ラットモデルの原発性ＣＮＳリンパ腫の治療における髄液へのリツキシマブ投与材料と方法。大槽穿刺により投与する抗体の用量を増加させて、腫瘍の無いヌ
ードラットで毒性を評価する。ラットに、リツキシマブ（１０mg/ml）を５〜１
００μlの容量（ラットのＣＳＦ容量は約１mlである）でラットに投与する。毒
性が無いと仮定して、有効性試験を行う。明らかな抗ＣＤ２０感受性を有するＢ
リンパ球腫瘍細胞を、ラットの大槽に移植する。次に動物を１０匹ずつの２群に
分ける：対照と、腫瘍移植後１週間のリツキシマブ処理。終点は、神経能力、状
態減少、生存率、および抗リンパ腫活性の形態測定的および組織学的相関の測定
である。

【０１９０】例３ヒトＰＣＮＳＬ患者でのリツキシマブの試験材料と方法。リツキシマブを、５〜１０mlの注射としてオマヤレザバーに投与
する。注入の前に、等量のＣＳＦを取り、ＣＳＦ容量への大量の流入を最小にす
る（成人のＣＳＦの平均容量は１０４mlである）。他の化学療法または放射線療
法は行わない。治療は、５〜１０ml容量のオマヤレザバーへのリツキシマブの注
入からなる。リツキシマブのＣＳＦと血清レベルを、１、２、４、２４、４８、
７２時間目、７日目、および以後一定の間隔で測定する。

【０１９１】再発ＰＣＮＳＬ患者は、病理解析でＣＤ２０⁺のはずである。患者は、１７才
を超えていなければならず、ＫＰＳが５０未満であり、平均余命が２ヶ月未満で
あり、ＰＣＮＳＬの全身性発症があり、リツキシマブのＣＳＦ内投与の開始前５
週間以内には放射線照射または化学療法を受けていない者である。

【０１９２】試験患者を３人の群に分け、各群に、一定用量のリツキシマブを、オマヤレザ
バーを介して投与する。１週後、ＣＳＦへのリツキシマブ投与を繰り返し、霊長
類で計算されたクリアランスにより測定された間隔で開始する。リツキシマブ投
与は９０日間行い、この間、毒性と応答を継続して評価する。リツキシマブのＣ
ＳＦ内投与に起因するグレード４の神経毒性については、早期の中止が必要であ
る。神経毒性は、安全性を評価し、試験を停止すべきかまたは低用量を使用すべ
きかどうかを決定するための基礎である。一定の用量レベルで毒性が無いことを
仮定して、次に用量を次のレベルに上げる。目標は、ヒトでの活性に関連する最
低の血清レベルより少なくとも１０倍高い、ＣＳＦ中リツキシマブの低レベルを
達成する安全な用量を決定することである（マクローリン（McLaughlin）ら、J. Clin. Oncol. 16:2825-2833 (1998)）。

【０１９３】例４ＰＣＮＳＬを治療するためにヒト被験体でメソトレキセートと一緒にリツキシマ
ブを投与する方法リンパ腫を有するＣＮＳ併発のある患者は、毎週２５０mg/M²×４回から毎週
３５０mg/M²×４回の範囲の用量のリツキシマブと組合せたクモ膜下メソトレキ
セート（１５mg）で治療することができる。

【０１９４】例５放射能標識したリツキシマブとＣＨＯＰを用いるＰＣＮＳＬの治療法ＰＣＮＳＬ患者を、以下のように、放射能標識リツキシマブと化学療法併用Ｃ
ＨＯＰ（例えば、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよび
プレドニソン）で治療することができる。ＣＨＯＰ治療法は、標準的方法に従っ
て静脈内に行われる。１３１−ヨードで標識したリツキシマブは、被験体のクモ
膜下に約１〜約１０mCiの用量で、リツキシマブ（標識物と標識していないもの
の両方）の量が、患者の体重１kg当たり約０．２〜約４０mgとして投与する。放
射活性リツキシマブを、１回に大量に、または約２〜約４日間にわたって投与す
ることができる。

【０１９５】記載の文献は、参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｋ 31/7068 Ａ６１Ｋ 31/7068 38/00 Ａ６１Ｐ 35/00 51/00 Ａ６１Ｋ 43/00 Ａ６１Ｐ 35/00 37/02 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＢＺ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＯ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷＦターム(参考） 4C084 AA02 AA12 BA44 DA12 DA39 MA02 ZB022 ZB261 ZB262 4C085 AA13 AA14 BB01 BB41 BB43 DD63 DD88 4C086 AA01 AA02 CB09 CB21 DA10 DA35 DA38 EA10 EA17 MA02 MA03 MA04 MA07 NA05 ZB26

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】治療上有効量の抗ＣＤ２０抗体またはその断片を投与する工
程を含む、中枢神経系（ＣＮＳ）リンパ腫を治療方法。
【請求項２】治療上有効量の抗ＣＤ２０抗体またはその断片を投与する工
程を含む、リンパ腫を有する被験体中の髄膜再発を治療または予防する方法。
【請求項３】ＣＮＳリンパ腫は、原発性ＣＮＳリンパ腫（ＰＣＮＳＬ）軟
髄膜転移（ＬＭ）、またはＣＮＳ併発のあるホジキン病よりなる群から選択され
る、請求項１の方法。
【請求項４】ＣＮＳリンパ腫はＬＭであり、抗ＣＤ２０抗体またはその断
片は、シタラビンおよびチオテパまたはメソトレキセートおよび¹¹¹Ｉｎ−ジエ
チレントリアミン四酢酸とともに投与される、請求項３の方法。
【請求項５】抗ＣＤ２０抗体断片は、Ｆab、Ｆab'およびＦ(ab')₂よりな
る群から選択される、請求項１の方法。
【請求項６】抗ＣＤ２０抗体断片は、Ｆab、Ｆab'およびＦ(ab')₂よりな
る群から選択される、請求項２の方法。
【請求項７】抗ＣＤ２０抗体は、ヒト化、２特異的、またはキメラヒト抗
体である、請求項１の方法。
【請求項８】抗ＣＤ２０抗体は、ヒト化、２特異的、またはキメラヒト抗
体である、請求項２の方法。
【請求項９】抗ＣＤ２０はリツキシマブまたはＩＦ５である、請求項１の
方法。
【請求項１０】抗ＣＤ２０はリツキシマブまたはＩＦ５である、請求項２
の方法。
【請求項１１】抗ＣＤ２０抗体はリツキシマブであり、１週約１０mg〜約
３７５mg/M²の用量で４週間被験体に投与される、請求項９の方法。
【請求項１２】抗ＣＤ２０抗体はリツキシマブであり、１週約１０mg〜約
３７５mg/M²の用量で４週間被験体に投与される、請求項１１の方法。
【請求項１３】抗ＣＤ２０抗体は、クモ膜下または脳室内に投与される、
請求項１の方法。
【請求項１４】抗ＣＤ２０抗体は、クモ膜下または脳室内に投与される、
請求項２の方法。
【請求項１５】抗ＣＤ２０抗体は、メソトレキセート、ＣＨＯＰ、ＣＨＯ
Ｄシタラビン、ロイコボリン、チオテパ、およびビンクリスチン、またはこれら
の組合せとともに投与される、請求項１の方法。
【請求項１６】抗ＣＤ２０抗体は、メソトレキセート、ＣＨＯＰ、ＣＨＯ
Ｄシタラビン、ロイコボリン、チオテパ、およびビンクリスチン、またはこれら
の組合せとともに投与される、請求項２の方法。
【請求項１７】抗ＣＤ２０抗体は、全脳の放射線照射前に投与される、請
求項１の方法。
【請求項１８】抗ＣＤ２０抗体はリツキシマブであり、メソトレキセート
とともにクモ膜下に投与される、請求項１の方法。
【請求項１９】抗ＣＤ２０抗体はリツキシマブであり、抗体は標識されて
いる、請求項１の方法。
【請求項２０】リツキシマブは、²¹¹Ａｔ、²¹²Ｂｉ、⁶⁷Ｃｕ、¹²³Ｉ、¹³¹ Ｉ、¹¹¹Ｉｎ、³²Ｐ、²¹²Ｐｂ、¹⁸⁶Ｒｅ、¹⁸⁸Ｒｅ、¹⁵³Ｓｍ、⁹⁹mＴｃ、および⁹⁰ Ｙよりなる群から選択されるアイソトープで標識され、放射性免疫治療上有効量
で投与される、請求項１９の方法。
【請求項２１】放射性免疫治療上有効量は、患者の全身に約１０〜約２０
０cGyの範囲の用量の放射能を与える、請求項２０の方法。
【請求項２２】抗ＣＤ２０抗体は、抗ＣＤ４０抗体、またはＣＤ４０とＣ
Ｄ４０Ｌとの相互作用を阻害する物質とともに投与される、請求項２２の方法。
【請求項２３】抗ＣＤ２０抗体は、ヒトの体重１kg当たり約０．００１〜
約３０mgの範囲の、薬剤学的に許容される用量の抗体で投与される、請求項２２
の方法。
【請求項２４】抗ＣＤ２０抗体は、ヒトの体重１kg当たり約０．０１〜約
２５mgの範囲の、薬剤学的に許容される用量の抗体で投与される、請求項２３の
方法。
【請求項２５】抗ＣＤ２０抗体は、ヒトの体重１kg当たり約０．４〜約２
０．０mgの範囲の、薬剤学的に許容される用量の抗体で投与される、請求項２４
の方法。
【請求項２６】被験体のＰＣＮＳＬの診断方法であって、（Ａ）検出可能な標識物に結合した抗ＣＤ２０抗体または抗ＣＤ２０抗体断片
を、該被験体に投与する工程；および（Ｂ）該標識物の局在を検出する工程、を含む上記方法。
【請求項２７】検出可能な標識物は、²¹¹Ａｔ、²¹²Ｂｉ、⁶⁷Ｃｕ、¹²³Ｉ
、¹³¹Ｉ、¹¹¹Ｉｎ、³²Ｐ、²¹²Ｐｂ、¹⁸⁶Ｒｅ、¹⁸⁸Ｒｅ、¹⁵³Ｓｍ、⁹⁹mＴｃ、ま
たは⁹⁰Ｙである、請求項２６の方法。
【請求項２８】抗ＣＤ２０抗体はリツキシマブである、請求項２６の方法
。
【請求項２９】抗ＣＤ２０抗体は、脳血液関門（ＢＢＢ）透過性増強物質
に結合している、請求項１の方法。
【請求項３０】ＢＢＢ透過性増強物質は、ＯＸ−２６、Ｂ３／２５、Ｔｆ
６／１４、ＯＫＴ−９、Ｌ５．１、５Ｅ−９、ＲＩ７２１７またはＴ５８／３０
である、請求項２９の方法。
【請求項３１】抗ＣＤ２０抗体は、親油性ベクターまたは免疫親油性ベク
ターをさらに含む、請求項１の方法。
【請求項３２】親油性ベクターは、プロカルバジン、オメガ−３脂肪酸、
ジアシルグリセロール、ジアシルリン脂質、リソ−リン脂質、コレステロール、
またはステロイドである、請求項３１の方法。
【請求項３３】抗ＣＤ２０抗体またはその断片と組合せて、抗Ｂ細胞抗体
またはその断片を投与する工程をさらに含む、請求項１の方法。
【請求項３４】抗Ｂ細胞抗体は、抗ＣＤ１９抗体またはその断片、抗ＣＤ
２２抗体またはその断片、抗ＣＤ３８抗体またはその断片、または抗主要組織適
合遺伝子複合体（ＭＨＣ）II抗体またはその断片である、請求項３３の方法。
【請求項３５】抗ＣＤ２０抗体と抗Ｂ細胞抗体とを含む、クモ膜下投与の
ためのＣＮＳリンパ腫の治療用組成物であって、抗体は、ヒトの体重１kg当たり
約０．４〜約２０．０mgの範囲の用量で投与される、上記組成物。
【請求項３６】Ｂ細胞抗原に結合する、治療上有効量の抗体または抗体断
片をクモ膜下投与することを含む、中枢神経系（ＣＮＳ）リンパ腫の治療方法。
【請求項３７】抗原は、ＣＤ１０、ＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ
２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３７、ＣＤ５３、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７
４、ＣＤ７５、ＣＤ７６、ＣＤ７７、ＣＤ７８、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ
８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤｗ８４、ＣＤ８５およびＣＤ８６よ
りなる群から選択される、請求項３６の方法。
【請求項３８】抗体は、Ｂ細胞枯渇性抗体である、請求項３６の方法。
【請求項３９】抗体または抗体断片は、毒素に結合している、請求項３６
の方法。
【請求項４０】抗体または抗体断片は、薬剤に結合している、請求項３６
の方法。
【請求項４１】抗体または抗体断片は、酵素に結合している、請求項３６
の方法。
【請求項４２】抗体または抗体断片は、放射性核種に結合している、請求
項３６の方法。
【請求項４３】抗体または抗体断片は、少なくとも１つの化学療法剤とと
もに投与される、請求項３６の方法。
【請求項４４】化学療法は以下よりなる群から選択される、請求項４３の
方法：チオテア、シクロホスファミド、ブスルファン、イムプロスルファン、ピ
ポスルファン、ベンゾドーパ、カルボクオン、メツレドーパ、ウレドーパ、アル
トレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレン
チオホスホラミド、トリメチロロメラミン、クロランブシル、クロルナファジン
、クロロホスファミド、エストラムスチン、イフォスファミド、メクロレタミン
、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベンビエヒン、フェネステ
リン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード、カルムスチ
ン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチン、
アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アントラマイシン、アザセリン、ブレ
オマイシン、カクチノマイシン、カリケアミシン、カラビシン、カルミノマイシ
ン、カルジノフィリン、クロモイニシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、
デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン、
エピルビシン、エソルビシン、イダンビシン、マルセロマイシン、マイトマイシ
ン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポ
トフィロマイシン、プロマイシン、ケラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニ
グリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメックス、ジノスタチン、ゾ
ルビシン、メソトレキセート、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、デノプテリ
ン、メソトレキセート、プテロプテリン、トリメトレキセート、フルダラビン、
６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン、アンシタビン、アザシチ
ジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ド
キシフルリジン、エノシタビン、フロキスリジン、５−ＦＵ、カルステロン、ド
ロモスタノロンプロピオネート、エピチオスタノール、メピチオスタン、テスト
ラクトン、アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン、フロリン酸、アセグ
ラトン、アルドホスファミドグリコシド、アミノレブリン酸、アムサクリン、ベ
ストラブシル、ビサントレン、エダトラキセート、デホファミン、デメコルシン
、ジアジクオン、エルホルニチン、エリプチニウムアセテート、エトグルシド、
硝酸ガリウム、ヒドロキシ尿素、レンチナン、ロニダミン、ミトグアゾン、ミト
キサントロン、モピダモール、ニトラクリン、ペントスタチン、フェナメット、
ピラルビシン、ポドフィリン酸、２−エチルヒドラジド、プロカルバジン、ラゾ
キサン、シゾフラン、スピロゲルマニウム、テヌアゾン酸、トリアジクオン、２
，２’，２”−トリクロロトリエチルアミン、ウレタン、ビンデシン、ダカルバ
ジン、マノムスチン、ミトブロニトール、ミトラクトール、ピポブロマン、ガシ
トシン、アラビノシド、シクロホスファミド、チオテパ、パクリタキセル、ドキ
セタキセル、クロランブシル、ゲンシタビン、６−チオグアニン、メルカプトプ
リン、メソトレキセート、シスプラチン、カルボプラチン、ビンブラスチン、白
金、エトポシド（ＶＰ−１６）、イホスファミド、マイトマイシンＣ、ミトキサ
ントロン、ビンクリスチン、ビノレルビン、ナベルビン、ノバントロン、テニポ
シド、ダウノマイシン、アミノプテリン、ゼロダ、イバンドロネート、トポイソ
メラーゼインヒビター、ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）、レチノイン
酸、エスペラミシン、カペシタビン、タモキシフェン、ラロキシフェン、アロマ
ターゼ阻害４（５）−イミダゾール、４ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシ
フェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン、トレミフェン、
フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド、ゴセレリン；および前
記いずれかの薬剤学的に許容される塩、酸または誘導体。
【請求項４５】抗体または抗体断片は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、
ＣＤ２２、ＣＤ３７、およびＣＤ４０よりなる群から選択されるＢ細胞抗原に特
異的である、請求項３６の方法。
【請求項４６】抗体または抗体断片はリツキサンであり、該治療法はサイ
トカインの投与をさらに含む、請求項４５の方法。
【請求項４７】サイトカインはＩＬ−１０である、請求項４６の方法。
【請求項４８】枯渇性抗ＣＤ２０抗体とＣＤ４０Ｌアンタゴニストの投与
を含む、請求項３６の方法。
【請求項４９】ＣＤ４０Ｌアンタゴニストは、ＣＤ４０Ｌに特異的に結合
する抗体である、請求項４８の方法。
【請求項５０】ＣＤ２０に対する放射能標識抗体が投与される、請求項３
６の方法。