JP2003248008A - 反応液の攪拌方法 - Google Patents
反応液の攪拌方法Info
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- JP2003248008A JP2003248008A JP2002339344A JP2002339344A JP2003248008A JP 2003248008 A JP2003248008 A JP 2003248008A JP 2002339344 A JP2002339344 A JP 2002339344A JP 2002339344 A JP2002339344 A JP 2002339344A JP 2003248008 A JP2003248008 A JP 2003248008A
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- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01F—MIXING, e.g. DISSOLVING, EMULSIFYING OR DISPERSING
- B01F33/00—Other mixers; Mixing plants; Combinations of mixers
- B01F33/45—Magnetic mixers; Mixers with magnetically driven stirrers
- B01F33/451—Magnetic mixers; Mixers with magnetically driven stirrers wherein the mixture is directly exposed to an electromagnetic field without use of a stirrer, e.g. for material comprising ferromagnetic particles or for molten metal
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- B01F33/30—Micromixers
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- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Automatic Analysis And Handling Materials Therefor (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Sampling And Sample Adjustment (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】微小容器内の反応液を効率よく攪拌できる方法
を提供すること。 【解決手段】微小反応容器内の反応液を攪拌する方法で
あって、前記反応液中に含まれる磁気ビーズに前記反応
容器の外部から磁場の変動を与えることで反応液を攪拌
する方法。
を提供すること。 【解決手段】微小反応容器内の反応液を攪拌する方法で
あって、前記反応液中に含まれる磁気ビーズに前記反応
容器の外部から磁場の変動を与えることで反応液を攪拌
する方法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、微小反応容器内の
反応液を攪拌する方法に関する。
反応液を攪拌する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】ＤＮＡチップまたはＤＮＡマイクロアレ
イは、ＤＮＡチップまたはＤＮＡマイクロアレイを事業
として供給する者もいくつか現れていることから、比較
的容易に入手できるようになり、遺伝子診断等の分野に
おいても広く利用されるようになると期待されている。
ＤＮＡチップまたはＤＮＡマイクロアレイは、スライド
ガラスあるいはシリコン等の基板上に数千から数万の指
標となるＤＮＡ（プローブＤＮＡ）を高密度に配置した
ものであり、これを検出すべきＤＮＡ（ターゲットＤＮ
Ａ）溶液中に浸漬または振りかけてハイブリダイゼーシ
ョンさせる。ハイブリダイゼーションには、一部自動化
装置も出現してはいるものの、安定性、高価さ等の観点
から、依然としてマニュアル（手動）ハイブリダイゼー
ションが広く行われている。
イは、ＤＮＡチップまたはＤＮＡマイクロアレイを事業
として供給する者もいくつか現れていることから、比較
的容易に入手できるようになり、遺伝子診断等の分野に
おいても広く利用されるようになると期待されている。
ＤＮＡチップまたはＤＮＡマイクロアレイは、スライド
ガラスあるいはシリコン等の基板上に数千から数万の指
標となるＤＮＡ（プローブＤＮＡ）を高密度に配置した
ものであり、これを検出すべきＤＮＡ（ターゲットＤＮ
Ａ）溶液中に浸漬または振りかけてハイブリダイゼーシ
ョンさせる。ハイブリダイゼーションには、一部自動化
装置も出現してはいるものの、安定性、高価さ等の観点
から、依然としてマニュアル（手動）ハイブリダイゼー
ションが広く行われている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】ＤＮＡチップまたはＤ
ＮＡマイクロアレイにターゲットＤＮＡをハイブリダイ
ゼーションさせるためにはターゲットＤＮＡを含む数〜
数十μｌのサンプルをＤＮＡチップまたはＤＮＡマイク
ロアレイに滴下し、カバーガラスでカバーして数時間置
く必要がある。信頼できるハイブリダイゼーションの結
果を得るためには、ＤＮＡチップまたはＤＮＡマイクロ
アレイ上のプローブＤＮＡにターゲットＤＮＡがハイブ
リダイゼーション可能な状態で接近できる必要がある。
しかし、液量が微量であることから、液の攪拌は容易で
はなく、無攪拌の場合、ハイブリダイゼーションの完了
には１８〜２４時間必要であり、市販の攪拌機能を有す
るハイブリダイゼーション機器でもハイブリダイゼーシ
ョンの完了には４時間程度必要である。また、市販の攪
拌機能を有するハイブリダイゼーション機器では、１０
０〜４００μｌのサンプル液量が必要である。さらに、
市販の攪拌機能を有するハイブリダイゼーション機器は
機構が複雑であることから高価であるという欠点もあ
る。
ＮＡマイクロアレイにターゲットＤＮＡをハイブリダイ
ゼーションさせるためにはターゲットＤＮＡを含む数〜
数十μｌのサンプルをＤＮＡチップまたはＤＮＡマイク
ロアレイに滴下し、カバーガラスでカバーして数時間置
く必要がある。信頼できるハイブリダイゼーションの結
果を得るためには、ＤＮＡチップまたはＤＮＡマイクロ
アレイ上のプローブＤＮＡにターゲットＤＮＡがハイブ
リダイゼーション可能な状態で接近できる必要がある。
しかし、液量が微量であることから、液の攪拌は容易で
はなく、無攪拌の場合、ハイブリダイゼーションの完了
には１８〜２４時間必要であり、市販の攪拌機能を有す
るハイブリダイゼーション機器でもハイブリダイゼーシ
ョンの完了には４時間程度必要である。また、市販の攪
拌機能を有するハイブリダイゼーション機器では、１０
０〜４００μｌのサンプル液量が必要である。さらに、
市販の攪拌機能を有するハイブリダイゼーション機器は
機構が複雑であることから高価であるという欠点もあ
る。
【０００４】また、マニュアルでのハイブリダイゼーシ
ョンではハイブリダイゼーション不良により再現性良い
データが得られない場合があり、また、ハンドリングす
る個人によっても、結果にばらつきが生じる、という問
題もあった。ＤＮＡチップまたはＤＮＡマイクロアレイ
が益々普及するには、ＤＮＡチップまたはＤＮＡマイク
ロアレイにターゲットＤＮＡをハイブリダイゼーション
させる場合のように、微小容器内の反応液を効率よく攪
拌できる方法の出現が望まれていた。
ョンではハイブリダイゼーション不良により再現性良い
データが得られない場合があり、また、ハンドリングす
る個人によっても、結果にばらつきが生じる、という問
題もあった。ＤＮＡチップまたはＤＮＡマイクロアレイ
が益々普及するには、ＤＮＡチップまたはＤＮＡマイク
ロアレイにターゲットＤＮＡをハイブリダイゼーション
させる場合のように、微小容器内の反応液を効率よく攪
拌できる方法の出現が望まれていた。
【０００５】そこで本発明の目的は、微小容器内の反応
液を効率よく攪拌できる方法を提供することにある。
液を効率よく攪拌できる方法を提供することにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】上記課題を解決する発明
は以下の通りである。 ［請求項１］微小反応容器内の反応液を攪拌する方法で
あって、前記反応液中に含まれる磁気ビーズに前記反応
容器の外部から磁場の変動を与えることで反応液を攪拌
する方法。 ［請求項２］磁場の変動は、反応容器の外部に置かれた
複数の電磁石を順次励磁するか、または永久磁石の移動
により行う請求項１に記載の方法。 ［請求項３］微小反応容器がＤＮＡチップまたはＤＮＡ
マイクロアレイのハイブリダイゼーション容器である請
求項１または２に記載の方法。 ［請求項４］微小反応容器の内部の厚みが０．１ｍｍ〜
１ｍｍの範囲であり、磁気ビーズの直径が前記厚みの
０．１〜２０％の範囲である請求項１〜３のいずれか１
項に記載の方法。 ［請求項５］微小反応容器の容量が１０〜１０００μＬ
の範囲である請求項１〜４のいずれか１項に記載の方
法。 ［請求項６］反応液量の０．１〜１０容量％の範囲の磁
気ビーズを用いる請求項１〜５のいずれか１項に記載の
方法。
は以下の通りである。 ［請求項１］微小反応容器内の反応液を攪拌する方法で
あって、前記反応液中に含まれる磁気ビーズに前記反応
容器の外部から磁場の変動を与えることで反応液を攪拌
する方法。 ［請求項２］磁場の変動は、反応容器の外部に置かれた
複数の電磁石を順次励磁するか、または永久磁石の移動
により行う請求項１に記載の方法。 ［請求項３］微小反応容器がＤＮＡチップまたはＤＮＡ
マイクロアレイのハイブリダイゼーション容器である請
求項１または２に記載の方法。 ［請求項４］微小反応容器の内部の厚みが０．１ｍｍ〜
１ｍｍの範囲であり、磁気ビーズの直径が前記厚みの
０．１〜２０％の範囲である請求項１〜３のいずれか１
項に記載の方法。 ［請求項５］微小反応容器の容量が１０〜１０００μＬ
の範囲である請求項１〜４のいずれか１項に記載の方
法。 ［請求項６］反応液量の０．１〜１０容量％の範囲の磁
気ビーズを用いる請求項１〜５のいずれか１項に記載の
方法。
【０００７】
【発明の実施の形態】本発明は、微小反応容器内の反応
液を攪拌する方法であって、反応液中に含まれる磁気ビ
ーズに反応容器の外部から磁場の変動を与えることで反
応液を攪拌することを特徴とする方法である。本発明に
おいて微小反応容器とは、例えば、ＤＮＡチップまたは
ＤＮＡマイクロアレイのハイブリダイゼーション容器で
あることができる。但し、微小反応容器は、ハイブリダ
イゼーション容器に限定されるものではない。微小反応
容器は、例えば、容量が１０〜１０００μＬの範囲であ
ることができ、好ましくは、１００〜３００μＬの範囲
である。また、ハイブリダイゼーション容器などの場
合、微小反応容器は、対向する２枚のプレート（例え
ば、スライドガラス）とプレートの間のスペーサーとな
り、かつプレート間に反応液を封入できるスペーサー部
材（例えば、Ｏリング）からなることができる。この場
合、微小反応容器の内部の厚み（即ち、スペーサー部材
の厚みに相当する）は、例えば、０．１ｍｍ〜１ｍｍの
範囲であることができる。
液を攪拌する方法であって、反応液中に含まれる磁気ビ
ーズに反応容器の外部から磁場の変動を与えることで反
応液を攪拌することを特徴とする方法である。本発明に
おいて微小反応容器とは、例えば、ＤＮＡチップまたは
ＤＮＡマイクロアレイのハイブリダイゼーション容器で
あることができる。但し、微小反応容器は、ハイブリダ
イゼーション容器に限定されるものではない。微小反応
容器は、例えば、容量が１０〜１０００μＬの範囲であ
ることができ、好ましくは、１００〜３００μＬの範囲
である。また、ハイブリダイゼーション容器などの場
合、微小反応容器は、対向する２枚のプレート（例え
ば、スライドガラス）とプレートの間のスペーサーとな
り、かつプレート間に反応液を封入できるスペーサー部
材（例えば、Ｏリング）からなることができる。この場
合、微小反応容器の内部の厚み（即ち、スペーサー部材
の厚みに相当する）は、例えば、０．１ｍｍ〜１ｍｍの
範囲であることができる。
【０００８】上記微小反応容器を構成する２枚のプレー
トの少なくとも一方は、その表面にＤＮＡを固定したＤ
ＮＡチップまたはＤＮＡマイクロアレイであることがで
きる。また、反応液は、ターゲットＤＮＡを含有するハ
イブリダイゼーション溶液であることができる。
トの少なくとも一方は、その表面にＤＮＡを固定したＤ
ＮＡチップまたはＤＮＡマイクロアレイであることがで
きる。また、反応液は、ターゲットＤＮＡを含有するハ
イブリダイゼーション溶液であることができる。
【０００９】本発明の方法では上記微小反応容器内に反
応液と磁気ビーズとを封入し、反応容器の外部から磁場
の変動を与えることで反応液を攪拌する。磁気ビーズの
直径は、磁気ビーズの流動が容易に起こりかつ反応液の
攪拌も効率的に行えるという観点から、上記微小反応容
器の厚みの０．１〜２０％の範囲であることが適当であ
り、好ましくは１〜１０％の範囲である。具体的には磁
気ビーズの直径は、０．００１〜０．１ｍｍの範囲であ
ることができる。また、磁気ビーズは直径の揃ったもの
を使用することも、直径の不揃いのものを意図的に使用
することもできる。使用する磁気ビーズの種類は、反応
の種類に応じて適宜決定できる。但し、反応液に含まれ
る成分やプレートに固定化されている成分との意図しな
い反応を回避するという観点から、磁気ビーズは、表面
がそれらの成分と反応しにくい樹脂（例えば、ポリプロ
ピレン）等で処理されたものであることが好ましい。
応液と磁気ビーズとを封入し、反応容器の外部から磁場
の変動を与えることで反応液を攪拌する。磁気ビーズの
直径は、磁気ビーズの流動が容易に起こりかつ反応液の
攪拌も効率的に行えるという観点から、上記微小反応容
器の厚みの０．１〜２０％の範囲であることが適当であ
り、好ましくは１〜１０％の範囲である。具体的には磁
気ビーズの直径は、０．００１〜０．１ｍｍの範囲であ
ることができる。また、磁気ビーズは直径の揃ったもの
を使用することも、直径の不揃いのものを意図的に使用
することもできる。使用する磁気ビーズの種類は、反応
の種類に応じて適宜決定できる。但し、反応液に含まれ
る成分やプレートに固定化されている成分との意図しな
い反応を回避するという観点から、磁気ビーズは、表面
がそれらの成分と反応しにくい樹脂（例えば、ポリプロ
ピレン）等で処理されたものであることが好ましい。
【００１０】また、磁気ビーズの量は、磁気ビーズの流
動が容易に起こりかつ反応液の攪拌も効率的に行えると
いう観点から、反応液量の０．１〜２０容量％の範囲で
あることが適当であり、好ましくは１〜１０容量％の範
囲である。
動が容易に起こりかつ反応液の攪拌も効率的に行えると
いう観点から、反応液量の０．１〜２０容量％の範囲で
あることが適当であり、好ましくは１〜１０容量％の範
囲である。
【００１１】磁気ビーズを流動させるための磁場の変動
は、反応容器の外部に置かれた複数の電磁石を順次励磁
するか、または永久磁石の移動により行うことができ
る。反応容器の外部から磁場の変動を与えることで磁気
ビーズを反応液内で移動させ反応液を攪拌する場合を、
図１に基づいて説明する。
は、反応容器の外部に置かれた複数の電磁石を順次励磁
するか、または永久磁石の移動により行うことができ
る。反応容器の外部から磁場の変動を与えることで磁気
ビーズを反応液内で移動させ反応液を攪拌する場合を、
図１に基づいて説明する。
【００１２】図１は、本発明の方法を実施するためのハ
イブリステーションの概略図である。上図は平面図、下
図は側面図である。ハイブリステーション１０は、スラ
イドガラス１１(例えば、ＤＮＡがアレイされたスライ
ドガラス)、スライドガラス１１と対向して設けられ、
少なくとも１つの電磁石１３が埋設されたカバープレー
ト１２、スライドガラス１１とカバープレート１２との
間隔を保つためのスペーサー部材であるＯリング１４、
反応容器１５への注入口１６、排出口１７、サーモモジ
ュール１８から構成されている。反応容器１５は、スラ
イドガラス１１、カバープレート１２及びＯリング１４
により構成され、その範囲は、約２０ｍｍ×６０ｍｍ、
その厚みは約０．２ｍｍであり、容量は約２５０μＬで
ある。
イブリステーションの概略図である。上図は平面図、下
図は側面図である。ハイブリステーション１０は、スラ
イドガラス１１(例えば、ＤＮＡがアレイされたスライ
ドガラス)、スライドガラス１１と対向して設けられ、
少なくとも１つの電磁石１３が埋設されたカバープレー
ト１２、スライドガラス１１とカバープレート１２との
間隔を保つためのスペーサー部材であるＯリング１４、
反応容器１５への注入口１６、排出口１７、サーモモジ
ュール１８から構成されている。反応容器１５は、スラ
イドガラス１１、カバープレート１２及びＯリング１４
により構成され、その範囲は、約２０ｍｍ×６０ｍｍ、
その厚みは約０．２ｍｍであり、容量は約２５０μＬで
ある。
【００１３】反応容器１５に磁気ビーズ２０を含む所定
量（２５０μＬ）反応液が注入口１６から注入される。
複数の電磁石１３は、図１の上図から分かるように、カ
バープレート１２中にスライドガラス１１上を周回する
ように配置（埋設）されている。反応液の注入完了後、
複数の電磁石１３に順次励磁され、それに伴って、磁気
ビーズは、周回する電磁石１３に沿って移動する。この
反応液中での磁気ビーズの移動（流動）に伴って反応液
も回転し、攪拌される。
量（２５０μＬ）反応液が注入口１６から注入される。
複数の電磁石１３は、図１の上図から分かるように、カ
バープレート１２中にスライドガラス１１上を周回する
ように配置（埋設）されている。反応液の注入完了後、
複数の電磁石１３に順次励磁され、それに伴って、磁気
ビーズは、周回する電磁石１３に沿って移動する。この
反応液中での磁気ビーズの移動（流動）に伴って反応液
も回転し、攪拌される。
【００１４】この状態を図２に示す。図２では、電磁石
１３が左から右に順次励磁され、励磁された電磁石に磁
気ビーズ２０が吸引され、励磁された電磁石がシフトす
るのに伴って、磁気ビーズ２０も左から右に順次移動す
る。
１３が左から右に順次励磁され、励磁された電磁石に磁
気ビーズ２０が吸引され、励磁された電磁石がシフトす
るのに伴って、磁気ビーズ２０も左から右に順次移動す
る。
【００１５】図１では、複数の電磁石１３を、スライド
ガラス１１上を周回するようにカバープレート１２中に
配置（埋設）したが、周回するような配置以外に、例え
ば、スライドガラス１１の長手方向の一方の端から他方
の端に、直線上に位置するように、カバープレート１２
中に配置したり、ジグザクに配置したりすることもでき
る。また、上記例では、磁気ビーズの移動を、電磁石を
用いて行ったが、電磁石以外の手段、例えば、永久磁石
を利用することもできる。
ガラス１１上を周回するようにカバープレート１２中に
配置（埋設）したが、周回するような配置以外に、例え
ば、スライドガラス１１の長手方向の一方の端から他方
の端に、直線上に位置するように、カバープレート１２
中に配置したり、ジグザクに配置したりすることもでき
る。また、上記例では、磁気ビーズの移動を、電磁石を
用いて行ったが、電磁石以外の手段、例えば、永久磁石
を利用することもできる。
【００１６】磁気ビーズの移動（流動）による反応液の
攪拌中、反応液の温度は、反応に適した温度にサーモモ
ジュール１８を用いて調整することができる。反応液の
温度は、ハイブリダイゼーションの場合、例えば、常温
〜９０℃であることができる。また、反応時間は、反応
の種類に応じて適宜決定できる。但し、本発明の方法に
よれば、微少量の反応液であってもより効率よく攪拌で
きるので、反応時間を短縮することは可能である。
攪拌中、反応液の温度は、反応に適した温度にサーモモ
ジュール１８を用いて調整することができる。反応液の
温度は、ハイブリダイゼーションの場合、例えば、常温
〜９０℃であることができる。また、反応時間は、反応
の種類に応じて適宜決定できる。但し、本発明の方法に
よれば、微少量の反応液であってもより効率よく攪拌で
きるので、反応時間を短縮することは可能である。
【００１７】反応終了後、反応液は、排出口１７から排
出され、反応容器内は適宜洗浄及び乾燥される。スライ
ドガラス１１が、ＤＮＡチップまたはＤＮＡマイクロア
レイである場合、スライドガラス１１は回収され、ハイ
ブリダイゼーションの検出操作（例えば、ハイブリダイ
ズしたＤＮＡの検出のための蛍光分析等）にまわされ
る。また、反応液とともに回収された磁気ビーズは、反
応液から分離され、洗浄及び乾燥されて、再利用する事
ができる。
出され、反応容器内は適宜洗浄及び乾燥される。スライ
ドガラス１１が、ＤＮＡチップまたはＤＮＡマイクロア
レイである場合、スライドガラス１１は回収され、ハイ
ブリダイゼーションの検出操作（例えば、ハイブリダイ
ズしたＤＮＡの検出のための蛍光分析等）にまわされ
る。また、反応液とともに回収された磁気ビーズは、反
応液から分離され、洗浄及び乾燥されて、再利用する事
ができる。
【００１８】上記図１には、１つの反応容器を示した
が、本発明の方法に使用する装置は、複数の反応容器と
反応容器に反応液、洗浄液を供給するためのユニット
（反応液タンク、洗浄液タンク、送液パイプ及びポンプ
等）並びに廃液及び磁気ビーズ回収のためのユニット
（廃液タンク、磁気ビーズ回収タンク、送液パイプ及び
ポンプ等）を備えた複合装置とすることもできる。図３
参照。尚、図３に示す装置は、１０個の反応容器１５を
備える。
が、本発明の方法に使用する装置は、複数の反応容器と
反応容器に反応液、洗浄液を供給するためのユニット
（反応液タンク、洗浄液タンク、送液パイプ及びポンプ
等）並びに廃液及び磁気ビーズ回収のためのユニット
（廃液タンク、磁気ビーズ回収タンク、送液パイプ及び
ポンプ等）を備えた複合装置とすることもできる。図３
参照。尚、図３に示す装置は、１０個の反応容器１５を
備える。
【００１９】
【実施例】以下、本発明を実施例によりさらに詳細に説
明する。プロトコール １．下記プローブをスタンプしたスライドガラス（DNA
マイクロアレイ）を図１に示すようにハイブリカセット
にセットし６５℃に加熱した。スライドガラスへのプロ
ーブのスタンプは、１つのドットの直径が約１００〜１
５０μｍとなるようにし、かつ１つのスライドガラスに
４４１個のドットを形成した。 ２．加熱後、下記ターゲット溶液（350μl）をスライド
ガラス上に注入した。 ３．その後１６時間加熱（ハイブリダイゼーション）し
た。実施例（攪拌あり）では加熱中、ハイブリカセット
上部で永久磁石を往復運動させることにより溶液中の磁
気ビーズを移動させ溶液を攪拌した。攪拌速度は５ｍｍ
／ｓとした。比較例（攪拌なし）は、永久磁石の往復運
動を行わない以外は実施例と同様に行った。 ４．１６時間後、スライドガラスを２ｘＳＳＣ、１ｘＳ
ＳＣ、０．２ｘＳＳＣを用いて順次洗浄した。 ５．公知の方法でスキャナー解析（数値化）した。結果
を図４に示す。
明する。プロトコール １．下記プローブをスタンプしたスライドガラス（DNA
マイクロアレイ）を図１に示すようにハイブリカセット
にセットし６５℃に加熱した。スライドガラスへのプロ
ーブのスタンプは、１つのドットの直径が約１００〜１
５０μｍとなるようにし、かつ１つのスライドガラスに
４４１個のドットを形成した。 ２．加熱後、下記ターゲット溶液（350μl）をスライド
ガラス上に注入した。 ３．その後１６時間加熱（ハイブリダイゼーション）し
た。実施例（攪拌あり）では加熱中、ハイブリカセット
上部で永久磁石を往復運動させることにより溶液中の磁
気ビーズを移動させ溶液を攪拌した。攪拌速度は５ｍｍ
／ｓとした。比較例（攪拌なし）は、永久磁石の往復運
動を行わない以外は実施例と同様に行った。 ４．１６時間後、スライドガラスを２ｘＳＳＣ、１ｘＳ
ＳＣ、０．２ｘＳＳＣを用いて順次洗浄した。 ５．公知の方法でスキャナー解析（数値化）した。結果
を図４に示す。
【００２０】プローブ、ターゲットの成分および濃度
１．プローブ( スタンプ濃度 )
Cy3-gapdh in 1×PBS濃度 308 ng/μl
【００２１】
【表１】
２．ターゲット
濃度 攪拌あり 攪拌なし 最終濃度
Cy5-dUTP-gapdh 254ng/μl 1.93 1.93 1.4ng/μl
20×SSC 42.5 52.5 3×SSC
yeast tRNA 10μg/μl 35 35 1μg/μl
10×blocking solution 35 35 1×b. s.
10%SDS 7 7 0.2%SDS
ビーズ in 20×SSC 10 ------
DW 218.57 218.57
Total 350μl 350μl
＊ビーズ in 20×SSC ： ビーズ 0.05g ＋ 20×SSC 1000μl
【００２２】図４はハイブリダイゼーション時にターゲ
ット溶液をビーズ攪拌した場合としなかった場合のプロ
ーブ強度に対するハイブリドしたターゲット強度の比を
示したものである。ビーズ攪拌をしなかった場合、０．
０５２（比）であったのに対して、ビーズ攪拌をした場
合、０．１１１（比）であった。即ち、ｃDNAマイクロ
アレイにおいて磁気ビーズ攪拌法（反応液の攪拌方法）
(実施例)を用いることによって、攪拌なし(比較例)でハ
イブリダイゼーションを行った場合と比較して、ターゲ
ットDNA溶液の濃度が同量であっても、ハイブリダイゼ
ーションを促進する効果（攪拌効果）によって高感度に
均一なハイブリットシグナルを得ることができた。
ット溶液をビーズ攪拌した場合としなかった場合のプロ
ーブ強度に対するハイブリドしたターゲット強度の比を
示したものである。ビーズ攪拌をしなかった場合、０．
０５２（比）であったのに対して、ビーズ攪拌をした場
合、０．１１１（比）であった。即ち、ｃDNAマイクロ
アレイにおいて磁気ビーズ攪拌法（反応液の攪拌方法）
(実施例)を用いることによって、攪拌なし(比較例)でハ
イブリダイゼーションを行った場合と比較して、ターゲ
ットDNA溶液の濃度が同量であっても、ハイブリダイゼ
ーションを促進する効果（攪拌効果）によって高感度に
均一なハイブリットシグナルを得ることができた。
【００２３】
【発明の効果】本発明の方法によれば、ＤＮＡチップま
たはＤＮＡマイクロアレイにターゲットＤＮＡをハイブ
リダイゼーションさせる場合のように、微小容器内の反
応液を効率よく攪拌できる。特に、ＤＮＡチップまたは
ＤＮＡマイクロアレイにターゲットＤＮＡをハイブリダ
イゼーションさせる方法の場合、安定したハイブリダイ
ゼーションの結果を、より短い時間で得ることができ
る。
たはＤＮＡマイクロアレイにターゲットＤＮＡをハイブ
リダイゼーションさせる場合のように、微小容器内の反
応液を効率よく攪拌できる。特に、ＤＮＡチップまたは
ＤＮＡマイクロアレイにターゲットＤＮＡをハイブリダ
イゼーションさせる方法の場合、安定したハイブリダイ
ゼーションの結果を、より短い時間で得ることができ
る。
【図１】本発明の方法を実施するためのハイブリステー
ションの概略図。
ションの概略図。
【図２】本発明の方法における磁気ビースによる攪拌の
想像図。
想像図。
【図３】本発明の方法を実施するための微小容器を複数
設けたハイブリステーションの概略図。
設けたハイブリステーションの概略図。
【図４】実施例におけるハイブリダイゼーション実験の
結果。
結果。
１０ ハイブリステーション
１１ スライドガラス１１
１２ カバープレート
１３ 電磁石
１４ Ｏリング
１５ 反応容器
１６ 注入口
１７ 排出口
１８ サーモモジュール
２０ 磁気ビーズ
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(72)発明者 近藤 恭光
埼玉県和光市広沢２番１号 理化学研究所
内
(72)発明者 小池 力
埼玉県和光市広沢２番１号 理化学研究所
内
Ｆターム(参考） 2G052 AB20 AD26 AD52 CA03 CA12
DA08 EB12 FB02 FB10 FC06
FC11 FC15 GA11 JA07
2G058 BB02 BB09 BB15 CC02 CC09
CC14 FA02 FB03 FB12 GA02
4B063 QA01 QA17 QA18 QA19 QQ42
QQ52 QR32 QR55 QR82 QS34
QS36 QX01
Claims (6)
- 【請求項１】微小反応容器内の反応液を攪拌する方法で
あって、前記反応液中に含まれる磁気ビーズに前記反応
容器の外部から磁場の変動を与えることで反応液を攪拌
する方法。 - 【請求項２】磁場の変動は、反応容器の外部に置かれた
複数の電磁石を順次励磁するか、または永久磁石の移動
により行う請求項１に記載の方法。 - 【請求項３】微小反応容器がＤＮＡチップまたはＤＮＡ
マイクロアレイのハイブリダイゼーション容器である請
求項１または２に記載の方法。 - 【請求項４】微小反応容器の内部の厚みが０．１ｍｍ〜
１ｍｍの範囲であり、磁気ビーズの直径が前記厚みの
０．１〜２０％の範囲である請求項１〜３のいずれか１
項に記載の方法。 - 【請求項５】微小反応容器の容量が１０〜１０００μＬ
の範囲である請求項１〜４のいずれか１項に記載の方
法。 - 【請求項６】反応液量の０．１〜１０容量％の範囲の磁
気ビーズを用いる請求項１〜５のいずれか１項に記載の
方法。
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