JP2002509444A

JP2002509444A - Ｗｆ１４５７３またはその塩、それらの製法および用途

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Publication number: JP2002509444A
Application number: JP54684499A
Authority: JP
Inventors: 康宏堀; 茂弘高瀬; 泰久鶴海; 道真橋本; 資弘日野
Original assignee: 藤沢薬品工業株式会社
Priority date: 1998-03-16
Filing date: 1999-03-12
Publication date: 2002-03-26
Also published as: US6730776B1; WO1999047551A1; EP1064299A1

Abstract

(57)【要約】本発明は、新規抗菌性化合物ＷＦ１４５７３、並びに(a)ＷＦ１４５７３Ａおよび／またはＢ生産性微生物を栄養培地中で培養し、得られる培養液からＷＦＩ４５７３Ａおよび／またはＢを回収するか、あるいは(b)ＷＦ１４５７３Ａおよび／またはＢを脱アシル化し得る微生物性物質の存在下に、ＷＦ１４５７３Ａおよび／またはＢを脱アシル化することによるＷＦ１４５７３の製造方法を提供する。また、ＷＦ１４５７３および担体を含む抗菌剤、有効量のＷＦ１４５７３および医薬上許容される担体を含む医薬組成物、ＷＦ１４５７３を微生物に適用することによる微生物の殺菌方法および病原性微生物によって惹き起こされる感染症の治療のためのＷＦ１４５７３の使用を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】ＷＦ１４５７３またはその塩、それらの製法および用途技術分野本発明は新規抗菌性化合物、ＷＦ１４５７３またはその塩に関する。より詳細には、本発明は、病原性微生物、特に病原性真菌に対して抗菌活性を有する新規な抗菌性化合物、ＷＦ１４５７３またはその塩、それらの調製方法、並びにそれらを含有する医薬組成物に関する。発明の開示新規化合物ＷＦ１４５７３は下式：式中、Ｒ¹は水素またはメチル、Ｒ²は水素またはパルミトイルである。本明細書においては、下記の特定化合物の命名を便宜的に使用する。化合物名Ｒ¹ Ｒ² ＷＦ１４５７３Ａ −Ｈ −ＣＯ（ＣＨ₂）₁₄ＣＨ₃ ＷＦ１４５７３Ｂ −ＣＨ₃ −ＣＯ（ＣＨ₂）₁₄ＣＨ₃ デアシルＷＦ１４５７３Ａ −Ｈ −ＨデアシルＷＦ１４５７３Ｂ −ＣＨ₃ −Ｈ新規化合物ＷＦ１４５７３Ａは以下の理化学的性質を有する。 a）分子量： ESI-MS(-)m/z 1143(M-H) b）元素分析： C 48.39;H 7.15;N 8.95 c）融点： 230-240℃（分解） d）比旋光度： [α]_D ²³＝-12°（c 0.5，メタノール） e）紫外吸収スペクトル： λmax(ε)=276nm（メタノール） f）赤外吸収スペクトル： νmax(KBr)=3360，2920，2830，1670，1630，1540，1440，1270，1240， 1050cm^-1 i）溶解性：可溶：水，メタノール，ジメチルスルホキシド不溶：ｎ−ヘキサン，クロロホルム j）薄層クロマトグラフィー：担体：シリカゲル６０Ｆ２５４（Merck）溶媒：１−ブタノール：酢酸：水=４：１：２Ｒｆ=０．３９新規化合物ＷＦ１４５７３Ｂは（そのナトリウム塩として）以下の理化学的性質を有する。 a）分子量： ESI-MS(-)m/z 1157（M-H） b）元素分析： C 48.79;H 7.34;N 8.96;S 2.80;Na 1.69 c）融点： 220-225℃（分解） d）比旋光度： [α]_D ²³=-15°（c 0.9，メタノール） e）紫外吸収スペクトル： λmax(ε)=276nm（メタノール） f）赤外吸収スペクトル： νmax(KBr)=3360，2940，2830，1670，1630，1530，1440，1270，1240， 1050cm^-1 i）溶解性：可溶：水，メタノール，ジメチルスルホキシド不溶：ｎ−ヘキサン，クロロホルム j）薄層クロマトグラフィー：担体：シリカゲル６０Ｆ２５４（Merck）溶媒：１−ブタノール：酢酸：水=４：１：２Ｒｆ=０．４５上記の理化学的性質およびさらなる調査の結果から、ＷＦ１４５７３ＡおよびＢの化学構造はそれぞれ上記のように決定される。発明を実施するための最良の様式本発明によれば、化合物ＷＦ１４５７３ＡおよびＢはコレオフォーマ（Coleop homa）属に属するＷＦ１４５７３Ａおよび／またはＢ生産菌株を、栄養培地中で培養することによって調製することができる。ＷＦ１４５７３ＡおよびＢの製造に使用される微生物および該化合物の製造の詳細について以下で説明する。微生物ＷＦ１４５７３ＡおよびＢの製造に使用することができる微生物は、コレオフォーマ属に属するＷＦ１４５７３Ａおよび／またはＢ生産菌株であり、このうちコレオフォーマ・エンペトリ（Coleophoma empetri）Ｎｏ．１４５７３は、日本国長崎県上県郡美津島町で採取された落葉試料から新たに分離された。新規分離微生物、コレオフォーマ・エンペトリＮｏ．１４５７３の凍結乾燥サンプルはブダペスト条約に基づく国際寄託機関である工業技術院生命工学研究所（〒３０５日本国茨城県つくば市東１丁目１−３）に１９９８年２月１２日付で寄託され、生命研条寄第６２５２号（ＦＥＲＭＢＰ−６２５２）の受託番号が付されている。ここに記載した特定の生物は単に説明のためにのみ記載したものであり、新規化合物ＷＦ１４５７３Λおよび／またはＢの産生がこの特定の生物の使用に限定されるものでないことが理解されるべきである。本発明はまた、自然突然変異体、並びに遺伝子工学、Ｘ線、紫外線照射、Ｎ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン処理等の慣用の手段により記載された生物から作製することができる人工突然変異体を含めて、ＷＦ１４５７３Ａおよび／またはＢを産生し得るいかなる変異体の使用も包含する。Ｎｏ．１４５７３株は下記の形態学的、培養的および生理学的特徴を有する。本菌株は各種培地上でやや抑制的に生育し灰色がかったコロニーを形成した。本菌株は培地上および培地中にテレオモルフおよびアナモルフのいずれも形成しなかったが、寒天培地上に置かれたオートクレイブ滅菌した葉片上で分生子殼状ないし子座状の分生子果を生成した。分生子果は凸面状ないし円盤状の暗茶ないし黒色で、その内壁下部の細胞上にアンプル形ないしフラスコ形の分生子形成細胞を形成した。分生子は透明、一細胞、円筒形であった。フォン・アークス（J ．A．von Arx:The Genera of Fungi-Sporulating in Pure Culture．3rd ed.，p p．315，J．Cramer，Vaduz，1974）およびサットン（B．C．Sutton:The Coelomy cetes-Fungi Imperfecti with Pycnidia，Acervuli and Storoma.，pp．696，Co mmonwealth Mycological Institute，Kew，1980）による菌類の分類基準を用いた形態学的特徴の比較に基づくと、Ｎｏ．１４５７３株は分生子果不完全菌類コレオフォーマと考えられた。その菌学的性質は以下の通りであった。種々の寒天培地上での培養上の特徴を表１にまとめる。ポテトデキストロース寒天上での培養は抑制的に生育し、２５℃で２週間後に直径１．５〜２．５ｃｍに達した。このコロニーの表面は平坦ないし隆起し、フェルト状ないし綿状、明灰ないし暗灰で、周縁部が黄味白であった。裏面の色はオリーブであった。分生子構造は観察されなかった。コーンミール寒天上のコロニーはやや抑制的に生育し、同じ条件下で直径２．５〜３．５ｃｍに達した。表面は平坦ないし中心部が隆起し、暗灰で光沢があった。コロニーの中心はフェルト状ないし綿状、紫味灰ないし暗紫であった。周縁部付近の菌糸は埋没し白色であった。裏面は暗灰ないし暗緑で、周縁部は黄味白であった。分生子構造は生じなかった。形態学的特徴は三浦のLCA平板培地（Miura，K．とM．Kudo:Trans．Mycol．Soc ．Japan，11:116-118，1970）に置かれた滅菌葉片上での培養から決定した。分生子果は葉片上でのみ形成された。それらは分生子殻状ないし子座状、表在性ないし半埋没性、分離しており、暗茶ないし黒であった。それらの形状は凸面状ないし円盤状、ときには乳頭状で、孔口がないか不明瞭な孔口を有し、単室から成り、基部は平坦、上部に薄壁があり、直径７０〜１７０μｍ、高さ４０〜９０μ ｍであった。分生子殻内壁の下部の細胞は厚壁があり、暗茶、不規則な形状で、多角菌糸組織を形成した。内壁細胞は分生子形成細胞を直接産生するが、ときには分生子柄を形成する。分生子柄は透明、滑面で隔壁を有し、単純ないしわずかに分枝し、１０〜１７×３．５〜４．５μｍであった。分生子形成細胞は分離して、頂生もしくは間生、透明、滑面で、アンプル形ないしフラスコ形、ときには円筒形で、５〜１１（〜１６）×２〜４．５μｍであった。分生子は全出芽型、透明、滑面、一細胞、円筒形で、頂端が丸く、基部に小突起を有し、（１１〜）１３〜２０×２〜３μｍであった。側糸はしばしば分生子柄上もしくは分生子柄間に形成され、それらの構造は分生子形成細胞および分生子を覆っている鞘に似ていた。それらは透明で、薄壁があり、釣鐘形ないし円筒形、培養後期には壊れ、１８〜３０（〜３５）×２．５〜５μｍであった。栄養菌糸は滑面で隔壁を有し、茶色で分枝していた。菌糸細胞は円筒形で幅２〜７μｍであった。厚壁胞子は観察されなかった。Ｎｏ．１４５７３株は３〜３０℃の温度範囲で生育可能であり、２１〜２４℃ が生育に最適であった。これらの生育温度データはポテトデキストロース寒天（ニッスイ製）上で決定した。ウーら（W．Wu，B．C．Sutton and A．C．Gange:Mycol．Res．100:943-947，1 996）-によるコレオフォーマ属の分類基準によれば、Ｎｏ．１４５７３株はコレオフォーマ・エンペトリ（Coleophoma empetri（Rostr.）Petrak 1929）に類似する。上記の性質とこの種の記載との間には、表在性および不明瞭な孔口のある分生子果といった少しの相違しかなかった。これらに加えて、側糸として記載された構造について疑問が残っている。この属の分生子の発生過程を決定するにはもっと多くの観察が必要であった。結論として、我々はこの分離株をコレオフォーマ・エンペトリの一菌株であると同定して、これをコレオフォーマ・エンペトリＮｏ．１４５７３（Coleophoma empetri No．14573）と名付けた。表１．Ｎｏ．１４５７３株の培養上の特徴略語 G:生育，コロニーの大きさを直径で計測，S:コロニー表面，R:裏面^*:麦芽抽出寒天、ツァペック氏液寒天およびＭＹ２０寒天の組成は、ＪＣＭ菌株カタログ（Nakase，T.，6th ed.，pp．617，Japan Collection of Microorganisms，th e Institute of Physical and Chemical Research，Saitama，1995）に基づいた。これらの性質は２５℃で１４日間培養した後に観察した。色調の記載はMethue n Handbook of Color（Kornerup，A．and J．H．Wanscher，3rd ed.，pp．252， Methuen，London，1978）に基づいた。ＷＦ１４５７３ＡおよびＢの製造化合物ＷＦ１４５７３ＡおよびＢは、ＷＦ１４５７３Ａおよび／またはＢ生産菌株を栄養培地中で培養することにより調製することができる。一般に、ＷＦ１４５７３ＡおよびＢは、同化し得る炭素源および窒素源を含む栄養培地中でＷＦ１４５７３Λおよび／またはＢ生産菌株を、好ましくは好気的条件下（例えば、振盪培養、液内培養等）で培養することにより製造することができる。好ましい炭素源は、シュークロース、グルコース、可溶性デンプン等のような炭水化物ある。好ましい窒素源は、綿実粉、大豆粉、酵母エキス、ペプトン、グルテン粉、コーンスティープリカー、乾燥酵母等、並びにアンモニウム塩類（例えば、硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、リン酸アンモニウム等）、尿素、アミノ酸などのような無機および有機窒素化合物である。炭素源および窒素源は、痕跡量の生育因子および相当量の無機栄養素を含む純度の低い物質もまた使用に適しているので、それらを純粋な形で使用する必要はない。さらに培地に添加してもよいものがある。炭酸カルシウム、リン酸ナトリウムまたはリン酸カリウム、マグネシウム塩等のような無機塩類である。培養培地が著しく発泡する場合には、液状パラフィン、高級アルコール、植物油、鉱物油およびシリコーンのような消泡剤を加えてもよい。ＷＦ１４５７３Ａおよび／またはＢの大量生産の好ましい条件としては液内好気培養条件が挙げられる。ＷＦ１４５７３Ａおよび／またはＢの少量生産の好ましい条件としてはフラスコまたは瓶中での振盪または表面培養が挙げられる。大型タンク内で製造する場合には、増殖遅延を避けるために、菌を栄養型で使用して製造タンク内に接種することが好ましい。培養液の攪拌および通気は種々の方法で行うことができる。攪拌はプロペラまたはこれに類似の機械的攪拌装置を用いて、ファーメンターの回転または振盪によって、種々のポンプ装置を用いて、あるいは滅菌エアーを培地中に通過させることによって行えばよい。発酵は、通常２０℃と３５℃の間、好ましくは約２５℃で５０〜１００時間行われるが、これらは発酵条件と発酵規模に応じて変化させてもよい。このようにして生産されたＷＦ１４５７３ＡおよびＢは、抗生物質のような他の発酵生産物の回収に通常使用される常法によって、培養液から回収することができる。一般的には、生産されたＷＦ１４５７３ＡおよびＢのほとんどは培養濾液中および細胞内に見出される。したがって、ＷＦ１４５７３ＡおよびＢは、培養液を濾過または遠心分離することにより得られる濾液および細胞から、減圧濃縮、凍結乾燥、溶媒抽出、ｐＨ調整、樹脂（例えば、陰イオンまたは陽イオン交換樹脂、非イオン性吸着樹脂）による処理、吸着剤（例えば、活性炭、ケイ酸、シリカゲル、セルロース、アルミナ）による処理、結晶化、再結晶等のような常法によって単離することができる。遊離の形態で得られるＷＦ１４５７３ＡおよびＢは、水酸化ナトリウムまたは水酸化カリウム、アンモニア水、エタノールアミン等のような無機または有機の塩基で、また、グリシン、リジン、グルタミン酸等のようなアミノ酸でＷＦ１４５７３ＡおよびＢを処理することにより、その塩に変換してもよい。ＷＦ１４５７３ＡおよびＢは病原性微生物、特に、病原性酵母（例えば、カンディダ・アルビカンス（Candida albicans）等）などのような病原性真菌に対して強い抗菌活性を有する。したがって、ＷＦ１４５７３ＡおよびＢおよび医薬上許容されるその塩は抗菌剤、特に、ヒトおよび動物の感染症の治療に使用される抗真菌剤として有用である。ＷＦ１４５７３ΛおよびＢのこのような薬理効果を示す例として、いくつかの薬理試験データを以下で説明する。試験１（抗菌活性）９６穴マイクロタイタープレートを用いて、連続ブロス希釈法により、ＷＦ１４５７３ＡまたはＢの抗菌活性を酵母窒素ベース・デキストロース培地１００μ ｌ中で測定した。接種量は１×１０⁵コロニー形成単位／ｍｌに調整した。カンディダ・アルビカンスおよびアスペルギルス・フミガーツス（Aspergillus fumi gatus）は３７℃で２４時間、またクリプトコッカス・ネオフォルマンス（Crypt ococcus neoformans）は３７℃で４８時間、５％ＣＯ₂インキュベーター中で培養した。培養後、各ウェル中の微生物の生育阻害を顕微鏡観察により測定した。結果をＭＥＣ（最小有効濃度：μｇ／ｍｌ）値として示した(表１)。表１．ＷＦ１４５７３ＡおよびＢの抗菌活性デアシルＷＦ１４５７３ＡもしくはＢまたはそれらの塩は、ＷＦ１４５７３ＡもしくはＢまたはそれらの塩を脱アシル化することにより、特に、ＷＦ１４５７３ＡまたはＢをデアシルＷＦ１４５７３ＡまたはＢに脱アシル化し得る微生物［例えば、ストレプトマイセス属に属する微生物（例えば、ストレプトマイセス・アヌラツス（Streptomyces anulatus）Ｎｏ．４８１１(ＦＥＲＭＢＰ−５８０８ )］の培養液またはその加工処理物の存在下に、ＷＦ１４５７３ＡもしくはＢまたはそれらの塩をそれぞれ脱アシル化することにより調製することができる。培養液の加工処理物としては、菌糸およびそれから得られる粗もしくは精製デァシラーゼ調製物が挙げられる。酵素反応は、例えば下記実施例に記載されるような、常法により行われる。デアシルＷＦ１４５７３ＡまたはＢは通常のアシル化によりそれらのアシル誘導体に変換することができる。アシル誘導体は上記式（Ｉ）(式中、Ｒ²はパルミトイルを除くアシルである)で表すことができる。ＷＦ１４５７３（Ｉ）または医薬上許容されるその塩を含有する本抗菌剤は、ヒトを含む動物の感染症の治療薬として有用である。ＷＦ１４５７３（Ｉ）の医薬上許容される塩としては上記のような塩が挙げられる。該抗菌性組成物は、ＷＦ１４５７３（Ｉ）またはその塩を、外用、腸管内または非経口適用に適した有機または無機の医薬用の担体または賦形剤と混合して含有する医薬製剤の形態、例えば固形、半固形または液状の形態で使用することができる。例えば、有効成分を通常の無毒な医薬上許容される担体と混合して、錠剤、ペレット剤、カプセル剤、坐剤、液剤、乳剤、懸濁液剤、軟膏および使用に適した他のいかなる形態にしてもよい。医薬上許容される担体は、水、グルコース、ラクトース、アラビアゴム、ゼラチン、マンニトール、スターチペースト、トリケイ酸マグネシウム、タルク、コーンスターチ、ケラチン、コロイド性シリカ、ポテトスターチ、尿素および製剤の製造における使用に適した他の担体であり、さらに、補助剤、安定化剤、増粘剤、着色剤および香料である。該抗菌性組成物はまた保存剤または静菌剤を含んでもよく、それによって所望の製剤中で有効成分の活性が保たれる。活性な目的化合物は、菌に感染する過程または感染した状態に対して所望の治療効果を生じるのに十分な量が該抗菌性組成物中に含まれる。本組成物をヒト患者に適用する場合、それを静脈内、筋肉内、経口または経皮投与の形で適用することが望ましい。ＷＦ１４５７３（Ｉ）または医薬上許容されるその塩の投与量や治療上有効な量は、治療すべき個々の患者の年齢、条件によって変化するが、ＷＦ１４５７３（Ｉ）の好ましい１日投与量は患者の体重１ｋｇあたり０．１〜１００ｍｇの範囲から選択することができる。以下の実施例は本発明を説明するためのものであるが、何ら本発明を限定するものではない。実施例１ (1)ＷＦ１４５７３Ａ生産のためのコレオフォーマ・エンペトリＮｏ．１４５７３の発酵シュークロース４％、グルコース１％、可溶性デンプン２％、綿実粉３％、大豆粉１．５％、ＫＨ₂ＰＯ₄１％、ＣａＣＯ₃０．２％、アデカノールＬＧ−１０９（消泡剤，旭電化）０．０５％およびシリコーンＫＭ−７０（消泡剤，信越化学）０．０５％を含む種培地液（３０ｍｌ）を３本の１００ｍｌ三角フラスコのそれぞれに入れ、１２０℃で３０分間滅菌した。ＹｐＳｓ寒天上で２５℃、２週間生育させたコレオフォーマ・エンペトリＮｏ．１４５７３の１白金耳を種培養フラスコのそれぞれに接種した。接種したフラスコをロータリーシェーカー（２２０ｒｐｍ，振幅５．１ｃｍ）上、２５℃で５日間振盪した後、種培養８ｍｌを５００ｍｌ三角フラスコ中の同じ滅菌種培地１６０ｍｌに移した。このフラスコをロータリーシェーカー（２２０ｒｐｍ，振幅５．１ｃｍ）上、２５℃で２日間振盪した後、３０リットルジャーファーメンター中の、改変デンプン５％、綿実粉２％、オートミール０．５％、ＫＨ₂ＰＯ₄３．５％、Ｎａ₂ＨＰＯ₄・１２Ｈ₂Ｏ２．６３％、（ＮＨ₄）₂ＳＯ₄０．６％、Ｌ−イソロイシン０．５％、Ｌ −プロリン０．５％、アデカノールＬＧ−１０９０．０５％およびシリコーンＫＭ−７００．０５％からなる滅菌した生産培地２０リットルに、二段目の種培養６４０ｍｌ（フラスコ４本）を接種した。発酵は、通気２０リットル／分、攪拌２５０ｒｐｍの下、２５℃で５日間行った。発酵液中のＷＦ１４５７３Ａの生産を以下に示したＨＰＬＣ分析によりモニタリングした。 #分析用ＨＰＬＣ条件カラム：ＹＭＣパックＯＤＳ−ＡＭ３０３，Ｓ−５１２０Ａ（２５０×４．６ｍｍ内径，ＹＭＣ社）移動相：０．１％ＴＦＡ含有５０％アセトニトリル水溶液流速：１ｍｌ／分検出：２１０ｎｍにおけるＵＶ保持時間：ＷＦ１４５７３Ａ１１．９分 (2)ＷＦ１４５７３Ａの単離および精製培養液（８０リットル）を等容のアセトンを加えて室温で２時間攪拌することにより抽出した。混合物を珪藻土の補助下に濾過した。濾液を等容の水で希釈し、水を充填したダイアイオンＨＰ−２０（三菱化学）のカラム（６Ｌ）に通した。カラムを５０％メタノール水溶液（１９Ｌ）で洗浄し、次いでメタノール（３４Ｌ）で溶出した。活性画分（０〜２０Ｌ）を等容の水で希釈し、５０％メタノール水溶液を充填したＹＭＣ−ＧＥＬ（ＯＤＳ−ＡＭ１２０−Ｓ５０，ＹＭＣ社）のカラム（４Ｌ）に通した。カラムを５０％（６．５Ｌ）および６０％メタノール水溶液（１２Ｌ）で洗浄した後、７０％メタノール水溶液（１５．９Ｌ）で溶出した。活性画分（５．８〜１５．９Ｌ）を５．３Ｌに減圧濃縮した。この溶液１リットルを等容の水で希釈し、２０％メタノール水溶液を充填したＹＭＣ− ＧＥＬ（ＯＤＳ−ＡＭ１２０−Ｓ５０，ＹＭＣ社）のカラム（１Ｌ）に通した。０．５％ＮＨ₄Ｈ₂ＰＯ₄を含む４０％アセトニトリル水溶液（３Ｌ）でカラムを洗浄し、０．５％ＮＨ₄Ｈ₂ＰＯ₄を含む５０％アセトニトリル水溶液（２．９Ｌ）で溶出した。活性画分（１．０５〜１．３５Ｌ）を等容の水で希釈し、２５％アセトニトリル水溶液を充填したＹＭＣ−ＧＥＬ（ＯＤＳ−ＡＭ１２０−Ｓ５０，ＹＭＣ社）のカラム（２Ｌ）に通した。カラムを４０％メタノール水溶液で洗浄し、８０％メタノール水溶液で溶出した。活性画分を減圧濃縮して水溶液にし、凍結乾燥して粗ＷＦ１４５７３Ａ７９８ｍｇを得た。この粉末を少量の水に溶解し、０．５％ＮａＨ₂ＰＯ₄・２Ｈ₂Ｏを含む５０％アセトニトリル水溶液を移動相としてＹＭＣ充填カラム（ＯＤＳ−ＡＭＳＨ−３４３−５ＡＭＳ− ５，２５０×２０ｍｍ内径，ＹＭＣ社）を用いて、分取用ＨＰＬＣによりさらに精製した。流速は９．９ｍｌ／分であった。ＷＦ１４５７３Ａ含有画分を集めた。これらの活性画分を等容の水で希釈し、０．２５％ＮａＨ₂ＰＯ₄・２Ｈ₂Ｏを含む２５％アセトニトリル水溶液で平衡化したＹＭＣ充填カラム(ＯＤＳ−ＡＭＳＨ−３４３−５ＡＭＳ−５，２５０×２０ｍｍ内径，ＹＭＣ社)に通した。カラムを３０％メタノール水溶液で洗浄した後、７０％メタノール水溶液を用いて流速９．９ｍｌ／分で溶出した。溶出液を減圧濃縮し、凍結乾燥してＷＦ１４５７３Ａ１２１ｍｇを白色粉末として得た。実施例２ (1)ＷＦ１４５７３Ｂ生産のためのコレオフォーマ・エンペトリＮｏ．１４５７３の発酵シュークロース４％、グルコース１％、可溶性デンプン２％、綿実粉３％、大豆粉１．５％、ＫＨ₂ＰＯ₄１％、ＣａＣＯ₃ ０．２％、アデカノールＬＧ−１０９（消泡剤，高級アルコール，旭電化）０．０５％およびシリコーンＫＭ−７０（消泡剤，信越化学）０．０５％を含む種培地液（３０ｍｌ）を３本の１００ｍｌ三角フラスコのそれぞれに入れ、１２０℃で３０分間滅菌した。ＹｐＳｓ寒天上で２５℃、２週間生育させたコレオフォーマ・エンペトリＮｏ．１４５７３の１白金耳を種培養フラスコのそれぞれに接種した。接種したフラスコをロータリーシェーカー（２２０ｒｐｍ，振幅５．１ｃｍ）上、２５℃で５日間振盪した後、種培養８ｍｌを５００ｍｌ三角フラスコ中の同じ滅菌種培地１６０ｍｌに移した。このフラスコをロータリーシェーカー（２２０ｒｐｍ，振幅５．１ｃｍ）上、２５℃で２日間振盪した後、３０リットルジャーファーメンター中の、シュークロース８％、乾燥酵母４％、ＣａＣＯ₃０．５％、アデカノールＬＧ−１０９０．０５％およびシリコーンＫＭ−７００．０５％からなる滅菌した生産培地（１ＮＮａＯＨでｐＨ６．３に調整）２０リットルに、二段目の種培養６４０ｍｌ（フラスコ４本）を接種した。発酵は、通気２０リットル／分、攪拌２５０ｒｐｍの下、２５℃で５日間行った。発酵液中のＷＦ１４５７３Ｂの生産を以下に示したＨＰＬＣ分析によりモニタリングした。 #分析用ＨＰＬＣ条件カラム：ＹＭＣパックＯＤＳ−ＡＭ３０３，Ｓ−５１２０Ａ（２５０×４．６ｍｍ内径，ＹＭＣ社）移動相：０．１％ＴＦＡ含有５０％アセトニトリル水溶液流速：１ｍｌ／分検出：２１０ｎｍにおけるＵＶ保持時間：ＷＦ１４５７３Ｂ１３．２分 (2)ＷＦ１４５７３Ｂの単離および精製培養液（４０リットル）を等容のアセトンを加えて室温で２時間攪拌することにより抽出した。混合物を珪藻土の補助下に濾過した。濾液を等容の水で希釈し、水を充填したダイアイオンＨＰ−２０（三菱化学）のカラム（３Ｌ）に通した。カラムを水（９Ｌ）および５０％メタノール水溶液（１０Ｌ）で洗浄し、次いでメタノール（２９Ｌ）で溶出した。活性画分（０〜２０Ｌ）を等容の水で希釈し、水を充填したＹＭＣ−ＧＥＬ（ＯＤＳ−ＡＭ１２０−Ｓ５０，ＹＭＣ社）のカラム（１Ｌ）に通した。カラムを６０％（５Ｌ）および７０％メタノール水溶液（２．８Ｌ）で洗浄した後、８０％メタノール水溶液（２．８Ｌ）で溶出した。活性画分（０．８〜２．８Ｌ）を等容の水で希釈し、水を充填したＹＭＣ−ＧＥＬ（０ＤＳ−ＡＭ１２０−Ｓ５０，ＹＭＣ社）のカラム（１Ｌ）に通した。カラムを４０％メタノール水溶液（１Ｌ）で洗浄し、０．５％ＮＨ₄Ｈ₂ＰＯ₄を含む５０％アセトニトリル水溶液（３．３Ｌ）で溶出した。活性画分（２．０〜２．５Ｌ）を等容の水で希釈し、水を充填したＹＭＣ−ＧＥＬ（ＯＤＳ−ＡＭ１２０−Ｓ５０，ＹＭＣ社）のカラム（２Ｌ）に通した。カラムを４０％メタノール水溶液（６Ｌ）で洗浄し、８０％メタノール水溶液（４．３５Ｌ）で溶出した。活性画分(２．５〜４.３５Ｌ)を減圧濃縮して水溶液にし、凍結乾燥して粗ＷＦ１４５７３Ｂ４１１ｍｇを得た。この粉末の一部（１２０ｍｇ）を少量の水に溶解し、０．５％ＮａＨ₂ＰＯ₄・２Ｈ₂Ｏを含む５０％アセトニトリル水溶液を移動相としてＹＭＣ充填カラム（ＯＤＳ−ＡＭＳＨ−３４３−５ＡＭＳ−５，２５０×２０ｍｍ内径，ＹＭＣ社）を用いて、分取用ＨＰＬＣによりさらに精製した。流速は９．９ｍｌ／分であった。ＷＦ１４５７３Ｂ含有画分を集めた。これらの活性画分を等容の水で希釈し、０．２５％ＮａＨ₂ＰＯ₄・２Ｈ₂Ｏを含む２５％アセトニトリル水溶液で平衡化したＹＭＣ充填カラム（ＯＤＳ−ＡＭＳＨ− ３４３−５ＡＭＳ− ５，２５０×２０ｍｍ内径，ＹＭＣ社）に通した。カラムを３０％メタノール水溶液（２４０ｍｌ）で洗浄した後、８０％メタノール水溶液を用いて流速９．９ｍｌ／分で溶出した。溶出液を減圧濃縮し、凍結乾燥してＷＦ１４５７３Ｂ７０ｍｇを白色粉末として得た。実施例３デアシルＷＦ１４５７３Ａの調製 (1）ストレプトマイセス・アヌラツスＮｏ．４８１１（ＦＥＲＭＢＰ−５８０８）の発酵ストレプトマイセス・アヌラツスＮｏ．４８１１のストック培養を斜面寒天上で調製、維持した。２２５ｍｌ三角フラスコ中の、マルトース３％、乾燥酵母１％、ＣａＣＯ₃０．５％からなる滅菌した種培地６０ｍｌに、斜面培養物１白金耳を接種した。、該フラスコをロータリーシェーカー(２２０ｒｐｍ，振幅５．１ｃｍ)上、３０℃で３日間培養した後、３本の２２５ｍｌ三角フラスコのそれぞれの中の、マルトース３％、乾燥酵母１％、ＣａＣＯ₃０．５％、アデカノールＬＧ−１０９（旭電化）０．１％およびシリコーンＫＭ−７０（信越化学）０．１％からなる滅菌した種培地６０ｍｌに接種（０．１％）した。該フラスコをロータリーシェーカー（２２０ｒｐｍ，振幅５．１ｃｍ）上、３０℃で２日間培養した。次いで、５０本の２２５ｍｌ三角フラスコのそれぞれの中の、マルトース８％、大豆粉２％、小麦胚芽２％、馬鈴薯タンパク質２％、ＣａＣＯ₃０．５％、アデカノールＬＧ−１０９０．１％およびシリコーンＫＭ−７００．１％からなる滅菌した生産培地６０ｍｌに、得られた種培養を接種（５％）した。該フラスコをロータリーシェーカー（２２０ｒｐｍ，振幅５．１ｃｍ）上、３０℃で６日間培養した。発酵液を濾過して栄養菌糸体を集め、水で１回洗浄した。洗浄した菌糸体を用いてデアシルＷＦ１４５７３Ａを得た。 (2)ＷＦ１４５７３Ａ生産のためのコレオフォーマ・エンペトリＮｏ．１４５７３の発酵シュークロース４％、グルコース１％、可溶性デンプン２％、綿実粉３％、大豆粉１．５％、ＫＨ₂ＰＯ₄１％、ＣａＣＯ₃ ０．２％、アデカノールＬＧ−１０９（消泡剤，旭電化）０．０５％およびシリコーンＫＭ−７０（消泡剤，信越化学）０．０５％を含む水性種培地（３０ｍｌ）を３本の１００ｍｌ三角フラスコのそれぞれに入れ、１２０℃で３０分間滅菌した。ＹｐＳｓ寒天上で２５℃、２週間生育させたコレオフォーマ・エンペトリＮｏ．１４５７３の１白金耳を種培養フラスコのそれぞれに接種した。接種したフラスコをロータリーシェーカー（２２０ｒｐｍ，振幅５．１ｃｍ）上、２５℃で５日間振盪した後、種培養８ｍｌを５００ｍｌ三角フラスコ中の同じ滅菌種培地１６０ｍｌに移した。このフラスコをロータリーシェーカー（２２０ｒｐｍ，振幅５．１ｃｍ）上、２５℃で２日間振盪した後、３０リットルジャーファーメンター中の、改変デンプン５％、綿実粉２％、オートミール０．５％、ＫＨ₂ＰＯ₄３．５％、Ｎａ₂ＨＰＯ₄・１２Ｈ₂ Ｏ２．６３％、（ＮＨ₄）₂ＳＯ₄０．６％、Ｌ−イソロイシン０．５％、Ｌ− プロリン０．５％、アデカノールＬＧ−１０９０．０５％およびシリコーンＫＭ−７００．０５％からなる滅菌した生産培地２０リットルに、二段目の種培養６４０ｍｌ（フラスコ４本）を接種した。発酵は、通気２０リットル／分、攪拌２５０ｒｐｍの下、２５℃で５日間行った。発酵液中のＷＦ１４５７３Ａの生産を以下に示したＨＰＬＣ分析によりモニタリングした。 #分析用ＨＰＬＣ条件カラム：ＹＭＣパックＯＤＳ−ＡＭ３０３，Ｓ−５１２０Ａ（２５０×４．６ｍｍ内径，ＹＭＣ社）移動相：０．１％ＴＦＡ含有５０％アセトニトリル水溶液流速：１ｍｌ／分検出：２１０ｎｍにおけるＵＶ保持時間：ＷＦ１４５７３Ａ１１．９分 (3)粗ＷＦ１４５７３Ａの調製培養液（８０リットル）を等容のアセトンを加えて室温で２時間攪拌することにより抽出した。混合物を珪藻土の補助下に濾過した。濾液を等容の水で希釈し、水を充填したダイアイオンＨＰ−２０（三菱化学）のカラム（６Ｌ）に通した。カラムを５０％メタノール水溶液（１９Ｌ）で洗浄し、次いでメタノール（３４Ｌ）で溶出した。活性画分（０〜２０Ｌ）を等容の水で希釈し、５０％メタノール水溶液を充填したＹＭＣ−ＧＥＬ（ＯＤＳ−ＡＭ１２０−Ｓ５０，ＹＭＣ社）のカラム（４Ｌ）に通した。カラムを５０％（６．５Ｌ）および６０％メタノール水溶液（１２Ｌ）で洗浄した後、７０％メタノール水溶液（１５．９Ｌ）で溶出した。活性画分（５．８〜１５．９Ｌ）を５．３Ｌに減圧濃縮した。この溶液の一部（４．３Ｌ）を用いてデアシルＷＦ１４５７３Ａを得た。 (4)ＷＦ１４５７３Ａの脱アシル化３０リットルジャーファーメンター内で、この溶液に、１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．８）９００ｍｌおよびストレプトマイセス・アヌラツスＮｏ．４８１１の栄養菌糸体４００ｇを加えた。該反応混合物を水で２０Ｌに合わせた。反応は攪拌しながら５０℃で２時間行った。ＷＦ１４５７３Ａの減少を先に示した分析用ＨＰＬＣによりモニタリングし、デアシルＷＦ１４５７３Ａの増加を以下に示す分析用ＨＰＬＣによりモニタリングした。 #分析用ＨＰＬＣ条件カラム：ＹＭＣパックＯＤＳ−ＡＭ３０３，Ｓ−５１２０Ａ（２５０×４．６ｍｍ内径，ＹＭＣ社）移動相：０．１％ＴＦＡ含有６．７％アセトニトリル水溶液流速：１ｍｌ／分検出：２１０ｎｍにおけるＵＶ保持時間：デアシルＷＦ１４５７３Ａ８．８分 (5)デアシルＷＦ１４５７３Ａの単離上記反応混合物を珪藻土の補助下に濾過した。菌糸塊は廃棄した。このようにして得られた濾液を減圧濃縮して１１Ｌにし、水を充填したＳＥＰＡＢＥＡＤＳＳＰ−２０７（三菱化学）のカラム（１Ｌ）に通した。カラムを水（３Ｌ）で洗浄した後、５０％メタノール水溶液（３Ｌ）で溶出した。活性画分（０〜２Ｌ）を減圧濃縮して水溶液とした。この溶液を水を充填したＹＭＣＧＥＬ（ＯＤＳ −ＡＭ１２０−Ｓ５０，ＹＭＣ社）のカラム（２Ｌ）に通した。カラムを水、０．５％ＮａＨ₂ＰＯ₄・２Ｈ₂Ｏを含む５％メタノール水溶液（５Ｌ）および０．５％ＮａＨ₂ＰＯ₄・２Ｈ₂Ｏを含む７％メタノール水溶液（３．８Ｌ）で洗浄し、０．５％ＮａＨ₂ＰＯ₄・２Ｈ₂Ｏを含む１０％メタノール水溶液（１３．６Ｌ）で溶出した。活性画分（１．９〜１１．６Ｌ）を３Ｌに減圧濃縮した。この溶液１リットルを水を充填したＹＭＣＧＥＬ（ＯＤＳ−ＡＭ１２０−Ｓ５０，ＹＭＣ社）のカラム（２Ｌ）に通した。カラムを水および０．５％ＮａＨ₂ＰＯ₄ ・２Ｈ₂Ｏを含む７％メタノール水溶液（４Ｌ）で洗浄し、０．５％ＮａＨ₂ＰＯ₄・２Ｈ₂Ｏを含む１１％メタノール水溶液（９．２Ｌ）で溶出した。活性画分（５．３〜６．８Ｌ）を等容の水で希釈し、水を充填したＹＭＣＧＥＬ（ＯＤＳ−ＡＭ１２０−Ｓ５０）のカラム（２Ｌ）に通した。カラムを水で洗浄し、２０％メタノール水溶液で溶出した。溶出液を減圧濃縮および凍結乾燥してデアシルＷＦ１４５７３Ａ８２０ｍｇを白色粉末として得た。この粉末１２０ミリグラムを少量の水に溶解し、０．５％ＮａＨ₂ＰＯ₄・２Ｈ₂Ｏを含む１１％メタノール水溶液を移動相としてＹＭＣ充填カラム（ＯＤＳ−ＡＭＳＨ−３４３−５ＡＭＳ−５，２５０×２０ｍｍ内径，ＹＭＣ社）を用いて、流速９．９ｍｌ／分で、分取用ＨＰＬＣによりさらに精製した。活性画分を等容の水で希釈し、水で平衡化したＹＭＣ充填カラム（ＯＤＳ−ＡＭＳＨ−３４３−５ＡＭＳ−５，２５０×２０ｍｍ内径，ＹＭＣ社）に通した。カラムを水（２４０ｍｌ）で洗浄した後、２０％メタノール水溶液を用いて流速９．９ｍｌ／分で溶出した。溶出液を減圧濃縮および凍結乾燥してデアシルＷＦ１４５７３Ａ６７．７ｍｇを白色粉末として得た。実施例４デアシルＷＦ１４５７３Ｂの調製 (1)ストレプトマイセス・アヌラツスＮｏ．４８１１（ＦＥＲＭＢＰ−５８０８）の発酵ストレプトマイセス・アヌラツスＮｏ．４８１１のストック培養を斜面寒天上で調製、維持した。２２５ｍｌ三角フラスコ中の、マルトース３％、乾燥酵母１％、ＣａＣＯ₃ ０．５％からなる滅菌した種培地６０ｍｌに、斜面培養物１白金耳を接種した。該フラスコをロータリーシェーカー（２２０ｒｐｍ，振幅５．１ｃｍ）上、３０℃で３日間培養した後、３本の２２５ｍｌ三角フラスコのそれぞれの中の、マルトース３％、乾燥酵母１％、ＣａＣＯ₃０．５％、アデカノールＬＧ −１０９（旭電化）０．１％およびシリコーンＫＭ−７０(信越化学)０．１％からなる滅菌した種培地６０ｍｌに接種（０．１％）した。該フラスコをロータリーシェーカー（２２０ｒｐｍ，振幅５．１ｃｍ）上、３０℃で２日間培養した。次いで、５０本の２２５ｍｌ三角フラスコのそれぞれの中の、マルトース８％、大豆粉２％、小麦胚芽２％、馬鈴薯タンパク質２％、ＣａＣＯ₃０．５％、アデカノールＬＧ−１０９０．１％およびシリコーンＫＭ−７００．１％からなる滅菌した生産培地６０ｍｌに、得られた種培養を接種（５％）した。該フラスコをロータリーシェーカー（２２０ｒｐｍ，振幅５．１ｃｍ）上、３０℃で６日間培養した。発酵液を濾過して栄養菌糸体を集め、水で１回洗浄した。洗浄した菌糸体を用いてデアシルＷＦ１４５７３Ｂを得た。 (2)ＷＦ１４５７３Ｂ生産のためのコレオフォーマ・エンペトリＮｏ．１４５７３の発酵３本の２２５ｍｌ三角フラスコのそれぞれの中の、シュークロース４％、グルコース１％、可溶性デンプン２％、綿実粉３％、大豆粉１．５％、ＫＨ₂ＰＯ₄１％、ＣａＣＯ₃０．２％、アデカノールＬＧ−１０９０．０５％およびシリコーンＫＭ−７００．０５％からなる滅菌した種培地６０ｍｌに、斜面培養物（Ｃ．エンペトリＮｏ．１４５７３）の１白金耳を接種した。該フラスコをロータリーシェーカー（２２０ｒｐｍ，振幅５．１ｃｍ）上で２５℃、５日間培養した後、２０本の５００ｍｌ三角フラスコのそれぞれの中の同じ滅菌種培地１６０ｍｌに接種（５％）した。該フラスコをロータリーシェーカー（２２０ｒｐｍ，振幅５．１ｃｍ）上で２５℃、２日間培養した。５つの３０リットルジャーファーメンターのそれぞれの中の滅菌した生産培地２０リットルに、得られた種培養を接種（３％）した。該生産培地は、シュークロース８％、乾燥酵母４％、ＣａＣＯ₃０．５％、アデカノールＬＧ−１０９０．０５％およびシリコーンＫＭ−７００．０５％からなっていた。滅菌前にｐＨを６．３に調整した。発酵は、通気２０リットル／分、攪拌２５０ｒｐｍの下、２５℃で５日間行った。発酵液中のＷＦ１４５７３Ｂ物質の生産を以下に示すＨＰＬＣ分析によりモニタリングした。＃分析用ＨＰＬＣ条件カラム：ＹＭＣパックＯＤＳ−ＡＭ３０３，Ｓ−５１２０Ａ（２５０×４．６ｍｍ内径，ＹＭＣ社）移動相：０．１％ＴＦＡ含有５０％アセトニトリル水溶液流速：１ｍｌ／分検出：２１０ｎｍにおけるＵＶ保持時間：ＷＦ１４５７３Ｂ１３．２分 (3)粗ＷＦ１４５７３Ｂ物質の調製培養終了後、等容のアセトンを培養液に添加した。該混合物を攪拌下、室温で約１時間放置した。得られた混合物を珪藻土の補助下に濾過した。濾液を等容の水で希釈し、水を充填したダイアイオンＨＰ−２０（三菱化学）のカラム（７Ｌ）に通した。カラムを水（１８Ｌ）および５０％メタノール水溶液（２０Ｌ）で洗浄した後、メタノール（３５Ｌ）で溶出した。溶出液を減圧濃縮して水溶液とした。この溶液を水を充填したＹＭＣ−ＧＥＬ（ＯＤＳ−ＡＭ１２０−Ｓ５０，ＹＭＣ社）のカラム（２Ｌ）に通した。カラムを水（６Ｌ）および５０％メタノール水溶液（４Ｌ）で洗浄した後、８０％メタノール水溶液（８Ｌ）で溶出した。溶出液を減圧濃縮して水溶液（６００ｍｌ）とした。 (4)ＷＦ１４５７３Ｂの脱アシル化この溶液に、１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．８）３０ｍｌとストレプトマイセス・アヌラツスＮｏ．４８１１（ＦＥＲＭＢＰ−５８０８）の栄養菌糸体６０ｇを添加した。反応は、攪拌下、５０℃で１時間行った。ＷＦ１４５７３Ｂの減少を先に示した分析用ＨＰＬＣによりモニタリングし、デアシルＷＦ１４５７３Ｂの増加を以下に示す分析用ＨＰＬＣによってモニタリングした。ＷＦ１４５７３Ｂ６６３ｍｇから、デアシルＷＦ１４５７３Ｂ３６２ｍｇが反応混合物中に形成した。 #分析用ＨＰＬＣ条件カラム：ＹＭＣパックＯＤＳ−ＡＭ３０３，Ｓ−５１２０Ａ（２５０×４．６ｍｍ内径，ＹＭＣ社）移動相：０．１％ＴＦＡ含有１０％メタノール水溶液流速：１ｍｌ／分検出：２１０ｎｍにおけるＵＶ保持時間：デアシルＷＦ１４５７３Ｂ１１．４分 (5)デアシルＷＦ１４５７３Ｂの単離上記反応混合物を珪藻土の補助下に濾過した。菌糸塊は廃棄した。このようにして得られた濾液を水を充填したＳＥＰＡＢＥＡＤＳＳＰ−２０７（三菱化学）のカラム（１５０ｍｌ）に通した。カラムを水（４５０ｍｌ）で洗浄した後、５０％メタノール水溶液（４５０ｍｌ）で溶出した。溶出液を減圧濃縮して水溶液（１００）とした。この溶液を水を充填したＹＭＣＥＬ（ＯＤＳ−ＡＭ１２０−Ｓ５０，ＹＭＣ社）のカラム（１８０ｍｌ）に通した。カラムを水、０．５％ＮａＨ₂ＰＯ₄・２Ｈ₂Ｏを含む５％メタノール水溶液（６００ｍｌ）で洗浄し、０．５％ＮａＨ₂ＰＯ₄・２Ｈ₂Ｏを含む７．５および１０％メタノール水溶液でそれぞれ溶出した。溶出を先に示した分析用ＨＰＬＣによりモニタリングした。デアシルＷＦ１４５７３Ｂに相当する部分を減圧濃縮して残渣水を得た。この残渣を水を充填したＹＭＣＧＥＬ（ＯＤＳ−ＡＭ１２０−Ｓ５０）のカラム（１８０ｍｌ）に通した。カラムを水および５％メタノール水溶液（６００ｍｌ）で洗浄し、７．５および１０％メタノール水溶液で溶出した。溶出液を減圧濃縮および凍結乾燥してデアシルＷＦ１４５７３Ｂ２２８ｍｇを白色粉末として得た。この粉末８０ｍｇを少量の水に溶解し、０．５％ＮａＨ₂ＰＯ₄・２Ｈ₂Ｏを含む１２％メタノール水溶液を移動相としてＹＭＣ充填カラム（ＯＤＳ−ＡＭＳＨ−３４３−５ＡＭＳ−５，２５０×２０ｍｍ内径，ＹＭＣ社）を用いて、流速９．９ｍｌ／分で、分取用ＨＰＬＣによりさらに精製した。デアシルＷＦ１４５７３Ｂ含有画分を回収し、減圧濃縮して残渣水を得た。この残渣を水で平衡化したＹＭＣ充填カラム（ＯＤＳ−ＡＭＳＨ−３４３−５ＡＭＳ−５，２５０×２０ｍｍ内径，ＹＭＣ社）に通した。カラムを水（２４０ｍｌ）で洗浄した後、２０％メタノール水溶液を用いて流速９．９ml／分で溶出した。溶出液を減圧濃縮および凍結乾燥してデアシルＷＦ１４５７３Ｂ４１ｍｇを白色粉末として得た。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＡＬ，ＪＰ，ＬＴ，ＬＶ，ＭＫ，ＲＯ，ＳＩ，ＵＳ (72)発明者日野資弘茨城県土浦市東崎町13―３―1003

Claims

【特許請求の範囲】１．下式の新規化合物ＷＦ１４５７３：式中、Ｒ¹は水素またはメチルであり、Ｒ²は水素またはパルミトイルであるまたはその塩。２．請求の範囲１のＷＦ１４５７３またはその塩の製造方法であって、 (a) ＷＦ１４５７３Ａおよび／またはＢ生産性微生物を栄養培地中で培養し、得られる培養液からＷＦ１４５７３Ａおよび／またはＢあるいははその塩を回収する、または、 (b) ＷＦ１４５７３ＡまたはＢを脱アシル化し得る微生物の培養液またはその加工処理物の存在下に、ＷＦ１４５７３ＡまたはＢあるいはその塩を脱アシル化してデアシルＷＦ１４５７３ＡまたはＢあるいはその塩をそれぞれ得ることを含む方法。３．請求の範囲１のＷＦ１４５７３またはその塩、および担体を含む抗菌剤。４．有効量の請求の範囲１のＷＦ１４５７３または医薬上許容されるその塩、および医薬上許容される担体を含む医薬組成物。５．請求の範囲１のＷＦ１４５７３またはその塩を微生物に適用することによる微生物の殺菌方法。６．請求の範囲１のＷＦ１４５７３またはその塩を真菌に適用することによる真菌の殺菌方法。７．病原性微生物によって惹き起こされる感染症の治療のための、請求の範囲１のＷＦ１４５７３または医薬上許容されるその塩の使用。