ITMI20120471A1 - Composizione a base di ceppi di batteri bifidobacterium longum in grado di aiutare il prolungamento della vita - Google Patents
Composizione a base di ceppi di batteri bifidobacterium longum in grado di aiutare il prolungamento della vita Download PDFInfo
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Description
DESCRIZIONE dell'invenzione avente per titolo: "Composizione a base di ceppi di batteri Bifidobacterium longum in grado di aiutare il prolungamento della vita"
La presente invenzione si riferisce a una composizione a
base di batteri appartenenti alla specie Bifidobacterium
longum in grado di aiutare il prolungamento della vita e
promuovere una buona funzionalità renale e/o
intestinale, nonché garantire il benessere
dell 'organismo.
E' noto che la microflora intestinale (microbiota) gioca
un ruolo essenziale per il benessere dell'organismo e
per la salute umana. E' altresì noto che la microflora
intestinale à ̈ caratterizzata dalla presenza di un
delicato equilibrio tra una popolazione complessa di
specie di batteri patogeni e un'altrettanto complessa
popolazione di batteri che svolgono un'attività benefica
ed essenziale per l'organismo. Ad oggi, molti sforzi sono stati compiuti per conoscere e capire il complesso sistema microbiota al fine di determinare quali siano le popolazioni di patogeni che colonizzano l'apparato gastro-intestinale e le specie di batteri benefiche per l'organismo. Sopratutto, molti sforzi sono stati compiuti per capire e determinare quali siano i fattori che contribuiscono a modificare il complesso equilìbrio all'interno della popolazione delle specie patogene, all'interno della popolazione dei batteri che apportano beneficio all'organismo e tra queste due popolazioni. Pertanto, rimane la necessità di poter individuare e selezionare, all'interno della popolazione delle specie di batteri benefiche per l'organismo, le specie batteriche prevalenti che sono presenti nel complesso sistema microbiota e, una volta isolate, si rende altresì necessario poter determinare i loro effetti sull'organismo al fine di poter preparare specifiche composizioni farmaceutiche o prodotti integratori o dispositivi medici o composizioni alimentari.
La Richiedente ha condotto una fase sperimentale nella quale ha individuato, selezionato, isolato e caratterizzato alcuni ceppi di batteri i quali, una volta testati, hanno evidenziato eccellenti e inaspettate proprietà salutistiche nell' aiutare il prolungamento della vita, nel promuovere una buona funzionalità intestinale nonché garantire il benesssere dell'organismo e uno stato di salute prolungato nel tempo .
Forma oggetto della presente invenzione un ceppo di batterio appartenente alla specie Bifidobacterium longum, come rivendicato nell'unita rivendicazione.
Forma oggetto della presente invenzione un processo per la preparazione di colture batteriche appartenenti alla specie Bifidobacterium longum, in cui detto processo comprende una fase nella quale almeno due ceppi di batteri, appartenenti alla specie Bifidobacterium longum; preferìbilmente, scelti tra quelli selezionati e isolati nella presente invenzione, sono fatti concrescere assieme in maniera sinergica in uno stesso substrato colturale, come rivendicato nell'unita rivendicazione .
Forma un altro oggetto della presente invenzione una composizione farmaceutica o un dispositivo medico o un prodotto integratore o una composizione alimentare o una composizione cosmetica comprendente almeno due ceppi di batteri appartenenti alla stessa specie Bifidobacterium longum, ottenuti da un processo di concrescita di batteri, come rivendicato nell'unita rivendicazione.
Ulteriori realizzazioni preferite della presente invenzione saranno di seguito riportate e illustrate nella descrizione dettagliata che segue senza voler limitare in alcun modo la portata della presente invenzione .
La Richiedente ha condotto un'intensa attività di ricerca durante la quale ha individuato, selezionato, isolato e caratterizzato i seguenti ceppi di batteri che formano oggetto della presente invenzione, come rivendicato nella rivendicazione 1.
I seguenti ceppi di batteri sono stati depositati in data 16.02.2012 dalla Società Probiotical SpA Via Mattei, 3 -28100 Novara (NO) Italia in accordo con il Trattato di Budapest presso il DSMZ-Deutsche Sammlung von Mikro-organismen und Zellkulturen GmbH, Germany:
1) Bifidobacterium longum DLBL 07 = DSM 25669
2) Bifidobacterium longum DLBL 08 = DSM 25670
3) Bifidobacterium longum DLBL 09 = DSM 25671
4) Bifidobacterium longum DLBL 10 = DSM 25672
5) Bifidobacterium longum DLBL 11 = DSM 25673
6) Bifidobacterium longum DLBL 12 = DSM 25674
7) Bifidobacterium longum DLBL 13 = DSM 25675
8) Bifidobacterium longum DLBL 14 = DSM 25676
9) Bifidobacterium longum DLBL 15 = DSM 25677
10) Bifidobacterium longum DLBL 16 = DSM 25678
11) Bifidobacterium longum DLBL 17 = DSM 25679
Il seguente ceppo di batteri à ̈ stato depositato in data 24.02.2012 dalla Società Probiotical SpA Via Mattei, 3 -28100 Novara (NO) Italia in accordo con il Trattato di Budapest presso il DSMZ-Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Germany:
12) Bifidobacterium longum DLBL 18 = DSM 25708
I seguenti ceppi di batteri sono stati depositati in data 01.03.2012 dalla Società Probiotìcal SpA Via Mattei, 3 -28100 Novara (NO) Italia in accordo con il Trattato di Budapest presso il OSMZ-Deutsche Sammlung von Mikro-organismen und Zellkulturen GmbH, Germany:
13) Bifidobacterium longum DLBL 19 = DSM 25717
14) Bifidobacterium longum DLBL 20 = DSM 25718
I sopra citati ceppi di batteri sono validamente impiegati per preparare una composizione farmaceutica o un dispositivo medico o un prodotto integratore o una composizione alimentare o una composizione cosmetica (in breve nel prosieguo "le composizioni della presente invenzione"), come di seguito descritto e rivendicato. Tutte queste composizioni della presente invenzione comprendono o, alternativamente, consistono di almeno due ceppi di batteri appartenenti alla specie Bifidobacterium longum. Questi ceppi di batteri sono preparati con un processo di "concrescita" sinergica di singoli ceppi di batteri appartenenti alla stessa specie B. longum. Preferibilmente, detti ceppi sono scelti tra quelli indicati da (1) a (14), come di seguito descritto .
La Richiedente ha trovato utile eseguire una fermentazione mediante un processo di "concrescita" sinergica di singoli ceppi di batteri appartenenti alla stessa specie B. longum utilizzando un numero di ceppi uguale o maggiore di 2. Preferibilmente, il numero di ceppi utilizzati nel processo di concrescita à ̈ compreso da 2 a 14 ceppi; preferibilmente, detti ceppi sono scelti tra quelli indicati sopra da (1) a (14). Il numero dei ceppi utilizzati nel processo di concrescita varia da 2 a 14 (ad esempio, 2 ceppi o 3 ceppi o 4 ceppi o 5 ceppi o 6 ceppi o 7 ceppi o 8 ceppi o 9 ceppi o 10 ceppi o 11 ceppi o 12 ceppi o 13 ceppi o 14 ceppi). I ceppi utilizzati, in un processo di "concrescita" sinergica di batteri della stessa specie B. longum, sono scelti tra quelli che appartengono alla specie B. longum. Preferibilmente, detti ceppi sono quelli indicati sopra da (1) a (14). E' stato osservato che i singoli ceppi di batteri appartenenti alla stessa specie B. longum, durante la "concrescita" batterica, sinergizzano vantaggiosamente tra loro. In pratica, una fermentazione realizzata mediante una "-concrescita" di batteri della stessa specie B..longum (cioà ̈ realizzata utilizando più di 2 ceppi, ad esempio tra quelli indicati da (1) a (14)) produce un numero di cellule batteriche totale che à ̈ maggiore rispetto al numero di cellule batteriche totale ottenuto da una fermentazione realizzata utilizzando un singolo ceppo. Inoltre, si vengono a produrre, durante la concrescita batterica, metaboliti he caratterizzano il substrato di coltura sia da un punto di vista qualitativo e quantitativo sia da un punto di vista delle proprietà intrinseche del substrato di coltura stesso. Il processo di concrescìta sinergica di batteri della stessa specie B. longum produce in realtà effetti migliorativi sia in fase produttiva (fermentazione) che in fase di utilizzo in umano (in particolare nell'intestino) . Gli effetti migliorativi si riferiscono alla quantità e all'attività biologica delle cellule batteriche ottenute ma, si riferiscono, anche alla quantità e qualità dei metaboliti batterici .
Pertanto, tutte le composizioni della presente invenzione sono preparate utilizzando i ceppi di batteri prodotti mediante una fermentazione realizzata con un processo di "concrescita" di batteri della stessa specie B. longum ; preferibilmente, detti ceppi sono quelli indicati da (1) a (14). Per questo motivo le composizioni della presente invenzione si distinguono vantaggiosamente da quelle presenti nella tecnica nota. Tutti i ceppi di batteri preparati mediante la concrescita evidenziano eccellenti e inaspettate proprietà salutistiche nell'aiutare il prolungamento della vita, nel promuovere una buona funzionalità renale e/o intestinale, nonché garantire il benesssere dell'organismo e uno stato di salute prolungato nel tempo .
Nel contesto della presente invenzione, i ceppi di batteri appartenenti alla specie Bifidobacterium longum possono essere presenti in dette composizioni della presente invenzione sottoforma di cellule vive e/o cellule morte e/o come un loro metabolita e/o come un loro derivato cellulare e/o come un loro componente cellulare o enzimatico.
Le composizioni della presente invenzione possono essere somministrate a tutte le categorie di persone senza alcuna limitazione per aiutare il prolungamento della vita di un soggetto; per rallentare e/o contrastare e/o ridurre i processi biologici d'invecchiamento, ad esempio invecchiamento fisico e/o della cute; per ridurre i processi di invecchiamento che portano alla perdita di memoria o memoria visiva e/o capacità di concentrazione; per inibire la produzione di batteroidi (Bacteroides) mediante un meccanismo di inibizione aspecifico (produzione di metaboliti) e/o specifico (produzione di batteriocine) ; per stimolare la produzione di Clostridi butirrici in grado di produrre butirrati che sono in grado di inibire i fenomeni che portano all'insorgere di coliti, coliche ulcerose, IBD (Inflammatory Bowel Disease) e malattia di Crohn; per inibire e/o ridurre la produzione di Enterobatteri appartenenti alla famiglia delle Enterobacteriaceae, in particolare ridurre il numero degli enterobatteri normalmente presenti in un microbiota; per modificare l'equilibrio presente nella microflora intestinale al fine di far prevalere la specie Bifidobacterium longum; per influenzare in modo positivo l'attività antiossidante, l'attività immunomodulante con produzione di citochine; per ridurre il contenuto dei metaboliti tossici prodotti o derivati dalla degradazione proteica aiutando in questo modo la funzionalità renale o migliorando la stessa funzionalità renale.
Vantaggiosamente, tutte le composizioni della presente invenzione trovano valida applicazione nel mantenere una buona ed efficiente funzionalità renale e/o nel trattamento della funzionalità renale in soggetti che soffrono di patologie e/o disturbi renali. I disturbi connessi a un'alterazione della funzionalità renale o a un<'>insufficienza renale (spesso presenti negli anziani) comportano un aumento dei metaboliti tossici dovuti alla degradazione proteica. Questi disturbi sono principalmente collegati alle cardiopatie e alle encefalopatie .
I ceppi di batteri appartenenti alla specie Bifidobacterium longum, oggetto della presente invenzione, possono aiutare a contribuire al prolungamento della vita di un essere umano in quanto detti ceppi possono intervenire in modo significativo grazie al loro proteasoma (UPS= ubiquitina-proteasomasystem) . L'azione del proteasoma consente di contrastare i fenomeni biologici che portano all'invecchimento preservando lo stato fisico e/o mentale di un essere umano .
Vantaggiosamente, tutte le composizioni della presente invenzione comprendono o, alternativamente, consistono di un numero variabile di ceppi di batteri, appartenenti alla specie B. longum, compreso da 2 a 14 (ad esempio, 2 ceppi o 3 ceppi o 4 ceppi o 5 ceppi o 6 ceppi o 7 ceppi o 8 ceppi o 9 ceppi o 10 ceppi o 11 ceppi o 12 ceppi o 13 ceppi o 14 ceppi) i quali sono prodotti mediante un processo di "concrescita" di singoli ceppi di batteri appartenenti alla stessa specie B. longum; preferibilmente, detti ceppi sono scelti tra quelli indicati sopra da (1) a (14).
Vantaggiosamente, le composizioni della presente invenzione possono comprendere la N-acetilcisteina (NAC) come tale o una sostanza a base di N-acetilcisteina (NAC) o un suo derivato in associazione con almeno due ceppi di batteri prodotti mediante un processo di "concrescita" di singoli ceppi di batteri appartenenti alla stessa specie B. longum; preferibilmente, detti ceppi sono scelti tra quelli indicati sopra da (1) a (14).
In questo caso si ha un ulteriore miglioramento della funzionalità renale dovuto anche alla diminuzione di metaboliti tossici da alterata degradazione proteica prodotti da decarbossilazione di amminoacidi (ammine biogene prodotte da E.coli). Pertanto, à ̈ previsto nella presente invenzione l'utilizzo di N-acetilcisteina sia in forma libera che microincapsulata gastroprotetta (da 10 a 1000 mg/die) che ha un effetto di barriera meccanica nei contrastare le capacità adesive di E.coli alla parete intestinale. Inoltre, 1'N-acetilcisteina stimola la produzione di glutatione e, quindi, ha capacità antiossidante. Le composizioni della presente invenzione sono in grado di preservare l'attività del proteasoma . Per questo motivo possono essere validamente somministrate alle persone per aiutarle nel prolungamento della vita.
Detti ceppi di batteri sono presenti in una quantità compresa da 0,1 a 65% in peso, preferibilmente da 0,5 al 15% in peso; ancora più preferibilmente da 1 a 10% in peso, rispetto al peso totale della composizione. Tuttavia, detta percentuale rispetto al peso totale della composizione, dipende dalla tipologia merceologica della composizione che s'intende preparare. Ad esempio, in una capsula la quantità di detti batteri à ̈ preferibilmente superiore al 40%.
Le composizioni della presente invenzione contengono una carica batterica avente una concentrazione compresa da lxlO<6>a lxlO<11>UFC /g, preferibilmente da lxlO<8>a lxlO<10>UFC /g.
Le composizioni possono contenere batteri in una concentrazione compresa da lxlO<6>a lxlO<11>UFC/dose, preferibilmente da lxlO<8>a lxlO<10>UFC/dose.
La dose può essere compresa da 0,2 a 10 g, ad esempio à ̈ di 0,25 g, 1 g, 3 g, 5 g o 7 g.
I batteri utilizzati nella presente invenzione possono essere in forma solida, in particolare sottoforma di polvere, polvere disidratata, sprayzzata o liofilizzata. La composizione alimentare o il prodotto integratore o il dispositivo medico o la composizione farmaceutica possono inoltre comprendere anche alcune fibre prebiotiche e carboidrati ad azione bifidogena quali ad esempio inulina, frutto-oligosaccaridi (FOS), gaiatto e trans-galatto-oligosaccaridi (GOS e TOS), glucool igosaccaridi (GOSa), xilo-oligosaccaridi , (XOS), chitosan-oligosaccaridi (COS), soia-oligosaccaridi (SOS), isomalto-oligosaccaridi (IMOS), amido resistente, pectine, psyllium, arabino-galattani , gluco-mannani , galatto-mannani , xilani, lattosaccarosio , lattulosio, lattitolo e vari altri tipi di gomme, preferibilmente la gomma di tara, fibra di acacia, di carruba, di avena, di bamboo, fibre di agrumi e, in generale, fibre contenenti una porzione solubile e una insolubile, in rapporto variabile tra di loro.
Vantaggiosamente, detta fibra à ̈ scelta dal gruppo comprendente FOS, inulina e fibre di agrumi, preferibilmente in un rapporto in peso da 1:3 a 3:1.
La quantità delle fibre prebiotiche e/o dei carboidrati ad azione bifidogena, se presenti, risulta compresa in peso dallo 0,5 al 75%, preferibilmente dall<1>1% al 40% ed ancora più preferibilmente dal 2 al 20% rispetto al peso totale della composizione. In questo caso si ha una composizione o integratore ad attività simbiotica.
Le composizioni della presente invenzione possono inoltre comprendere uno o più additivi o eccipienti fisiologicamente accettabili nonché comprendere inoltre anche altri ingredienti e/o componenti attivi quali vitamine, minerali, peptidi bioattivi, sostanze ad attività antiossidante, ipocolesterolemizzante , ipoglicemizzante , antiinfiammatoria, edulcoranti in una quantità in peso generalmente compresa da 0,001% al 10% in peso, preferibilmente da 0,5 al 5% in peso, comunque dipendente dal tipo di componente attivo e dalla sua eventuale dose giornaliera consigliata, rispetto al peso totale della composizione.
Le composizioni della presente invenzione sono preparate mediante le tecniche note e alla portata del tecnico del settore il quale à ̈ in grado di utilizzare i macchinari e le apparecchiature note e i metodi di produzione idonei. Le composizioni della presente invenzione possono contenere elementi o sostanze ad attività antiossidante in una quantità in peso compresa da 0,0001% a 30% rispetto al peso della composizione finale, in funzione della concentrazione delle sostanze ad attività antiossidante e/o della dose giornaliera raccomandata (RDA), ove definita.
Il selenio può essere presente in forma di sodio seleniato, L-seleniometionina , sodio selenito, selenito acido di sodio, acido selenioso, nonché in forma di microrganismi, ad esempio lieviti, arricchiti in selenio, in una quantità in peso compresa da 0,0005% a 0,005% rispetto al peso della composizione finale, in ogni caso sufficiente ad apportare un quantitativo di selenio preferibilmente compreso da 10 pg a 150 pg. Vantaggiosamente, il selenio à ̈ presente sottoforma di selenio internalizzato in cellule di batteri probioticì. La composizione della presente invenzione può inoltre comprendere almeno un ceppo di batterio depositato dalla Società BIOMAN S.r.l., Via Alfieri 18, 10100 Torino, Italia, quali:
- Lactobacillus buchneri LB26BM, depositato in data 05/04/2004 presso la DSMZ e avente numero di deposito DSM 16341, e/o
- Lactobacillus ferintoshensis LB6BM, depositato in data 17/01/2004 presso la DSMZ e avente numero di deposito DSM 16144, e/o
- Lactobacillus reuteri LB2BM, depositato in data 17/01/2004 presso la DSMZ e avente numero di deposito DSM 16143.
Le composizioni della presente invenzione possono inoltre contenere almeno un'altro ceppo scelto tra quelli che seguono.
I seguenti ceppi di batteri sono stati depositati in data 16.02.2012 dalla Società Probiotical SpA Via Mattei, 3 -28100 Novara (NO) Italia in accordo con il Trattato di Budapest presso il DSMZ-Deutsche Sammlung von Mikro-organismen und Zellkulturen GmbH, Germany: i) Lactobacillus johnsonii DLLJO 01 = DSM 25680
ii) Lactobacillus rhamnosus DLLR 07 = DSM 25681
iii) Lactobacillus rhamnosus DLLR 08 = DSM 25682
iv) Lactobacillus reuteri DLLRE 07 = DSM 25683
v) Lactobacillus reuteri DLLRE 08 = DSM 25684
vi) Lactobacillus reuteri DLLRE 09 = DSM 25685
vii) Bifidobacterium infantis BI 03 = DSM 25709
vili) Lactobacillus plantarum LP 09 = DSM 25710
Forma oggetto della presente invenzione un processo per la preparazione di colture batteriche appartenenti alla specie Bifidobacterium longum in cui detto processo comprende una fase di concrescita sinergica di singoli ceppi di batteri appartenenti alla specie B. longum nel quale almeno due ceppi di batteri; preferibilmente, detti ceppi sono scelti tra quelli indicati da (1) a (14), sono fatti concrescere e replicare assieme in uno stesso substrato colturale.
La composizione farmaceutica o cosmetica o il dispositivo medico o il prodotto integratore o la composizione alimentare (in breve le composizioni della presente invenzione) comprende almeno due ceppi di batteri. Detti ceppi sono ottenuti mediante una "concrescita" sinergica di batteri della stessa specie B. longum; preferibilmente, detti ceppi sono scelti tra quelli indicati da (1) a (14). Detti almeno due ceppi di batteri sono ottenuti da un processo di fermentazione che prevede una fase di concrescita batterica nella quale detti almeno due ceppi di batteri sono fatti concrescere e replicare assieme in uno stesso substrato colturale. Le composizioni sono per uso in un trattamento per aiutare il prolungamento della vita di un essere umano; o per uso in un trattamento per rallentare e/o contrastare e/o ridurre i processi biologici di invecchiamento fisico e della pelle o della cute; o per uso in un trattamento per rallentare e/o contrastare e/o ridurre i processi biologici di invecchiamento che portano alla perdita di memoria e/o capacità di concentrazione.
In una realizzazione, la composizione farmaceutica o cosmetica o il dispositivo medico o il prodotto integratore o la composizione alimentare (in breve le composizioni della presente invenzione) comprende almeno due ceppi di batteri appartenenti alla specie B. longum; preferibilmente, detti ceppi sono scelti tra quelli indicati da (1) a (14), ottenuti mediante una "concrescita batterica", per uso in un trattamento di inibizione della produzione di batteroidi mediante un meccanismo di inibizione aspecifico che prevede la produzione di metaboliti da parte di detto batterio e/o mediante un meccanismo specifico che prevede la produzione di batteriocine da parte di detto batterio; o per uso in un trattamento di stimolazione della produzione di Clostridi butirrici in grado di produrre butirrati per contrastare l'insorgere di una colite, una colica ulcerosa, un'infiammazione dell'intestino o del tratto grastro-intestinale o della malattia di Crohn . In una realizzazione, la composizione farmaceutica o cosmetica o il dispositivo medico o il prodotto integratore o la composizione alimentare (in breve le composizioni della presente invenzione) comprende almeno due ceppi di batteri appartenenti alla specie B. longum; preferibilmente, detti ceppi sono scelti tra quelli indicati da (1) a (14), ottenuti mediante una "concrescita", per uso in trattamento di inibizione e/o riduzione di Enterobatteri , appartenenti alla famiglia delle Enterobacteriaceae , presenti in microbiota.
In una realizzazione, la composizione farmaceutica o cosmetica o il dispositivo medico o il prodotto integratore o la composizione alimentare (in breve le composizioni della presente invenzione) comprende almeno due ceppi dì batteri appartenenti alla specie B. longum; preferibilmente, detti ceppi sono scelti tra quelli indicati da (1) a (14), ottenuti mediante una "concrescita", per uso in un trattamento antiossidante o immunomodulante con produzione di citochine.
Detta composizione, preferibilmente, può inoltre comprendere due o tre o quattro o cinque o sei ceppi di batteri in accordo con quelli indicati da (1) a (14) ottenuti mediante una "concrescita"; preferibilmente in associazione con la N-acetilcisteina o una sostanza a base di N-acetilcisteina o un suo derivato; preferibilmente in associazione con il selenio sottoforma di sodio seleniato, L-seleniometionina, sodio selenito, selenito acido di sodio, acido selenioso o selenio ìnternalizzato in cellule di batteri scelti dal gruppo comprendente o, alternativamente consistente di:
Lactobacillus buchneri LB26BM, depositato in data 05/04/2004 presso la DSMZ e avente numero di deposito DSM 16341, e/o
- Lactobacillus ferintoshensis LB6BM, depositato in data 17/01/2004 presso la DSMZ e avente numero di deposito DSM 16144, e/o
Lactobacillus reuteri LB2BM, depositato in data 17/01/2004 presso la DSMZ e avente numero di deposito DSM 16143.
Detta composizione, preferibilmente, può inoltre comprendere almeno due ceppi di batteri da (1) a (14), in associazione con almeno un altro ceppo di batterio scelto dal gruppo comprendente:
i) Lactobacillus johnsonii DLLJO 01 = DSM 25680
ii) Lactobacillus rhamnosus DLLR 07 = DSM 25681
iii) Lactobacillus rhamnosus DLLR 08 = DSM 25682
iv) Lactobacillus reuteri DLLRE 07 = DSM 25683
v) Lactobacillus reuteri DLLRE 08 = DSM 25684
vi) Lactobacillus reuteri DLLRE 09 = DSM 25685
vii) Bifidobacterium infantis BI 03 = DSM 25709
vili) Lactobacillus plantarum LP 09 = DSM 25710
Le composizioni della presente invenzione possono inoltre contenere almeno un altro ceppo scelto tra quelli indicati nelle Tabelle A.
Parte sperimentale
E'stato preso in esame il microbiota intestinale di 14 persone aventi un'età compresa da 100 a 104 anni (gruppo dei soggetti centerari) e il microbiota intestinale di 10 persone aventi un'età compresa 27 a 54 anni (gruppo dei soggetti adulti). Sono stati analizzati i batteri appartenenti ai seguenti gruppi: Enterococcus, Staphylococcus, Lactobacillus, Bifidobacterium, Clostridia, Bacteroides, yeasts. La Tabella 1, in maniera statisticamente significativa, riporta: Anaerobi totali, Enterobacteriaceae, Bifidobacteria, Bacteroides e Clostridia. Un mese prima dell'inizio dello studio clinico (raccolta dei campioni), nessuno dei soggetti ha assunto antibiotici, anti-stipsi o anti-diarroici , farmaci inibitori della pompa protionica o prodotti contenenti batteri probiotici. I soggetti affetti da malattie croniche intestinali o malattie metaboliche (diabete, obesità , malattie connesse a un male assorbimento) sono stati esclusi dallo studio clinico. I campioni fecali freschi sono stati raccolti in tubi sterili e conservati a -80°C per un periodo massimo di un mese prima della loro analisi. Ogni soggetto ha fornito due campioni in due settimane successive. Il valore principale dei due campioni à ̈ stato valutato. I campioni sono stati omogeneizzati in una soluzione sterile di un sale peptone (caseina digerita con enzimi 1 g/1, cloruro di sodio 8,5 g/1). Una diluizione seriale (10 volte) à ̈ stata eseguita e 100 Î1⁄4Î di tre appropriate diluizioni sono state piastrate nei seguenti mezzi: Tryptic Soy Agar (TSA) 5% sangue per gli aerobi totali; Schaedler agar (SCH) 5% sangue per gli anaerobi totali; De Man Rogosa and Sharpe agar (MRS) per Lattobacilli; Bifidobacterium Selective Medium (BSM) per Bifidobatteri ; MacConkey agar (MC) per Enterobatteriaceae; Slanetz agar (SZ) per enterococchi ; Schaedler Kanamicina/Vancomicina (KV) per Batteroidi: Clostrisel agar (CLOS) per Clostridia; Sabouraud agar (SAB) Cloramphenicol 500 mg/1 per lieviti. Le piastre sono state incubate come segue: TSA a 37°C per 24 ore in aria arricchita al 10% in C02 ;MC, SZ e SAB a 37°C in anaerobiosi per 24 ore, 24 e 48 ore rispettivamente; SCH, MRS, BSM, KV e CLOS a 37°C in anaerobiosi per 72 ore. Dopo 1 "incubazione le colonie visibili sono state inizialmente identificate in accordo alla loro morfologia, colorazione per Gram positivi, colorazione per Gram negativi, test per la catalasi e ossidasi. Successivamente, sono stati cresciuti in condizioni selezionate. Poi le colonie sono state contate e il numero dei microorganismi à ̈ stato espresso come unità formanti colonie per grammo di feci umide (UFC/g). Il livello di detezione era IO<2>UFC/g. I Bifidobatteri e i Lattobacilli, per i quali le colonie sono state precedentemente contate e differenziate in accordo con la loro morfologia, sono stati ulteriormente identificati a livello di specie attraverso il sequenziamento 16S rDNA usando la metodica denominata tecnicamente Pyrosequencing . Il DNA batterico à ̈ stato estratto da una coltura pura. Le sospensioni di circa IO<10>UFC/ml sono state riscaldate a 100°C per 10 minuti e centrigufate a 18000 giri per 2 minuti. I sopranatanti sono stati conservati a -20°C fino all'analisi. Il 16S rDNA batterico à ̈ stato sequenziato e confrontato con il database online descritto da Jonasson et al.; (Classification, Identification and subtyping of bacteria based on pyrosequencing and signatura matching of 16S rDNA fragments APMIS2002; 110:263-272) . Le differenze tra le conte batteriche determinate nei 14 soggetti centenari e nei 10 soggetti adulti più giovani sono state analizzate statisticamente (Wilcoxon-Mann-Whitney Test) . I risultati sono riportati in Tabella 2.
Tabella 1: Conta batterica principale (valore principale ± SD loglO per grammo di feci umide) per i 14 soggetti centenari e per i 10 soggetti adulti più giovani.
Centenari Adulti
(Età 100-104 anni) (Età 24-57 anni)
Totale Aerobi 7.7 0.8 8.2 ± 1.2 n.s.
Totale Anaerobi 8.3 ± 0.6 9.1 ± 0.2 p < 0.05
Enterobacteriaceae 4.2 ± 1.7 6.6 ± 1.4 p < 0.05
Enterococci 6.3 ± 1.8 6.9 ± 1.4 n.s.
Staphylococci 3.6 1.2 4.9 ± 1.2 n.s.
Lactobacilli 4.8 ± 2.3 5.4 ± 1.2 n.s.
Bif idobacteria 6.7 1.4 8.3 ± 0.7 p<0.05
Bacteroides 5.9 ± 1.3 7.7 0.8 p<0.05
Clostridia 4.1 ± 2.3 2.0 ± 0.0 * p < 0.05 Yeasts 2.5 ± 0.9 2.0 ± 0.0 * n.s.
n.s. = non statisticamente significativo
* Le counte piu basse del limite di rilevabilità (IO<2>UFC/g) sono state considerate come 90 UFC/g.
Tabella 2 : Specie di batteri appartenenti al genere Lactobacillus e Bifidobacterium isolati dai centenarie e dai soggetti adulti più giovani.
Species Numero dei soggetti e intervalli di conta Centenari Adulti (100-104 anni) (24-57 anni)
Lactobacillus reuteri 3 (IO<5>- IO<7>) 0
Lactobacillus johnsonii 2 (IO<6>- IO<7>) 0
Lactobacillus rhamnosus 2 (IO<3>- IO<4>) 0
Lactobacillus sakei 2 (IO<5>) 2 (IO<5>- IO<6>)
Lactobacillus case i 1 (IO<4>) 2 (IO<4>-IO<5>)
Lactobacillus fermentum 0 1 (IO<3>)
Lactobacillus plantarum 0 2 (IO<4>-IO<5>)
Lactobacillus
paralimentarius 0 1 (IO<4>)
Lactobacillus gasseri 0 2 (IO<3>- IO<4>)
Bifidobacterium longum 14 (IO<3>- IO<8>) 3 (IO<8>)
Bifidobacterium
adolescentis 2 (IO<4>-IO<8>) 6 (IO<7>-IO<8>) Bifidobacterium bifìdum 1 (IO<5>) 4 (IO<7>)
Bifìdobacterium
pseudocatenulatum 0 4 (IO<7>)
Bifìdobacterium catenulatum 0 2 (IO<7>-IO<8>)
E' stata inoltre valutata la concrescita di alcuni ceppi della stessa specie di Bifidobacterium longum isolati da soggetti centenari, cresciuti singolarmente e concresciuti in associazione. Il presente studio si riferisce ai 5 differenti biotipi di Bifidobacterium longum riportati nella seguente Tabella 3.
Tabella 3
Sigla ID ceppoteca Numero deposito
DLBL 07 1820 DSM 25669
DLBL 08 1823 DSM 25670
DLBL 09 1821 DSM 25671
DLBL 10 1824 DSM 25672
DLBL 11 1825 DSM 25673
I suddetti ceppi sono stati prelevati dal freezer a -80°C e scongelati alla temperatura di 37°C per 5 minuti. In seguito sono stati trapiantati sia singolarmente alla percentuale del 3%, sia in miscela in ragione dello 0,6% per ciascun ceppo (per ottenere un 3% di inoculo complessivo) nel brodo colturale per bifidobatteri TPY (secondo Scardovi) la cui composizione viene descritta di seguito :
Trypticase peptone 10 g
Soytone peptone 5 g
Glucosio 10 g
Estratto di lievito 5 g
Tween 80 1 mi
K2HP042 g
MgCl20,50 g
ZnS040,25 g
CaCl20,15 g
Acqua distillata 1000 mi
Soluzione L(-) cisteina cloridrato al 5%*
sterilizzata con filtro 0.20 Î1⁄4τη
(2,5g in 50 mi di acqua) 10 mi
Il terreno à ̈ stato precedentemente ricostituito e sterilizzato a 121°C per 15 minuti. Il pH dopo sterilizzazione era pari a 6.60 (25°C) . Al momento dell 'utilizzo à ̈ stata aggiunta asetticamente al terreno base la soluzione di L(-) cisteina cloridrato al 5%.
L'incubazione dei 5 ceppi e della loro miscela à ̈ avvenuta alla temperatura di 37°C in condizioni di anaerobiosi, mediante giare Gaspack contenenti sistemi per anaerobiosi AnaeroGen Oxoid (cod.AN0035A) . Dopo 5 ore di incubazione le colture dei bif idobatteri sono state raffreddate e sottoposte alla valutazione di pH, densità ottica alla lunghezza d'onda di 560 nm e conteggio del numero di cellule vitali secondo metodica ISO 29981:2010 (E) IDF 220:2010 (E) con il terreno TOS-propionate agar medium mupirocina di seguito descritto:
Trypticase peptone 10 9
Estratto di lievito 1,0 g
K2HP044,8 g
KH2PO43 g
(NH4)2S043 g
MgSO· 7H20 0,20 g
(R)-cisteina»HCl*H20 0,5 g
Sodio propionato 15,0 g
TOS * 10,0 g
Acqua distillata 965 mi
*TOS : miscela di galattosio e glucosio ottenuta per idrolisi enzimatica del lattosio utilizzando una βgalattosidasi da Aspergillus oryceae.
Il brodo di cui sopra à ̈ stato ricostituito e sterilizzato a 121°C per 15 minuti. Prima dell'utilizzo à ̈ stata aggiunta una soluzione di mupirocina filtrata per sterilizzazione in modo tale da ottenere una concentrazione finale dell'antibiotico nel terreno pari a 50 mg/litro.
Risultati
I risultati ottenuti sono riferiti ai ceppi cresciuti singolarmente e in miscela (dopo 5 ore di incubazione), vedi Tabella 4.
Tabella 4
Sigla PH OD Cellule vitali DLBL 07 5,54 0,239 27 milioni/ml DLBL 08 5,67 0,316 38 milioni/ml DLBL 09 5,66 0,178 21 milioni/ml DLBL 10 5,53 0,288 29 milioni/ml DLBL 11 5,82 0,385 47 milioni/ml Miscela di (DLBL 07, DLBL 5,41 0,405 53 milioni/ml 08, DLBL 09, DLBL 10,
DLBL 11)
Come si può notare, i valori della carica in cellule vitali dei bifidobatteri cresciuti singolarmente sono inferiori a quella della loro miscela. La media aritmetica dei valori riferiti ai ceppi singoli risulta essere 32,4 milioni / mi, mentre nella miscela sono stati riscontrati 53 milioni/ml, pari ad un incremento del 63%. I risultati migliori in termini di pH, densità ottica e carica in cellule vitali riscontrati nella miscela dei 5 bifidobatteri concresciuti sono ascrivibili ad un effetto sinergico tra i ceppi.
Tabella A
Sigla Istituto Numero Data No. Nome comm di di di deposito deposito deposito
1 Lactobacillus casei LFli CNCM I.P. 1-785 21.07.1988 2 Lactobciciìlus gasseri LF2i CNCM I.P. 1-786 21.07.1988 3 Lactobacillus crispatus LF3ì CNCM I.P. 1-787 21.07.1988 4 Lactobacillus fermentimi LF4i CNCM I.P. 1-788 21.07.1988 5 Lactobacillus fermentimi LF5 CNCM I.P. 1-789 21.07.1988 6 Lactobacillus casei ssp. LFH i CNCM I.P. 1-790 21.07.1988 pseudopìantarum
7 Streptococcus thermophilus BCCM LMG LMG P- 18383 5.05.1998 B39
8 Streptococcus thermophilus BCCM LMG LMG P- 18384 5.05.1998 T003
9 Lactobacillus pentosus 9 / 1 BCCM LMG LMG P-21019 16.10.2001 ei
10 Lactobacillus plantarum BCCM LMG LMG P-21020 16.10.2001 776 /I bi LP 02
11 Lactobacillus plantarum BCCM LMG LMG P-21021 16.10.2001 476LL 20 bi LP 01
12 Lactobacììlus plantanim PR BCCM LMG LMG P-21022 16.10.2001 ci
13 Lactobacììlus plantarum BCCM LMG LMG P-21023 16.10.2001 776 12 hi
14 Lactobacììlus casei ssp. LPC00 BCCM LMG LMG P-21380 31.01.2002 paracasei 181 A/3 aiai
15 Lactobacììlus belonging to LA 02 BCCM LMG LMG P-21381 31.01.2002 thà ̈ acidophilus group
192A/1 aiai
16 Bifidobacterìum longum BCCM LMG LMG P-21382 31.01.2002 175 A/l aiai
17 Bifidobacterìum breve BCCM LMG LMG P-21383 31.01.2002 195A/1 aici
18 Bifidobacterìum lactis BS 01 BCCM LMG LMG P-21384 31.01.2002 32A/3 aiai
19 Lactobacììlus plantarum COARTI BCCM LMG LMG P-21385 31.01.2002 501/2 gi V
20 Lactococcus lactis ssp. lactis BCCM LMG LMG P-21388 31.01.2002 501/4 ci
21 Lactococcus lactis ssp. lactis BCCM LMG LMG P-21387 15.03.2002 501/4 hi
22 Lactococcus lactis ssp. lactis BCCM LMG LMG P-21388 31.01.2002 501/4 ci
23 Lactobacillus plantarum BCCM LMG LMG P-21389 15.03.2002 501/4 li
24 Lactobacillus acidophilus LA08 BCCM LMG LMG P-26144 03.11.2010 25 Lactobacillus paracasei ssp. LPC10 BCCM LMG LMG P-26143 03.11.2010 Paracasei
26 Streptococcus thermophilus GB1 DSMZ DSM 16506 18.06.2004 27 Streptococcus thermophilus GB5 DSMZ DSM 16507 18.06.2004 28 Streptococcus thermophilus Y02 DSMZ DSM 16590 20.07.2004 29 Streptococcus thermophilus Y03 DSMZ DSM 16591 20.07.2004 30 Streptococcus thermophilus Y04 DSMZ DSM 16592 20.07.2004 31 Streptococcus thermophilus Y05 DSMZ DSM 16593 20.07.2004 32 Bifidobacterium BA 03 DSMZ DSM 16594 21.07.2004 adolescentis
56
33 Bifidobacterium BA 04 DSMZ DSM 16595 21.07.2004 adolescentis
34 Bifìdobacterium breve BR 04 DSMZ DSM 16596 21.07.2004 35 Bifidobacterium BP 01 DSMZ DSM 16597 21.07.2004 pseudocatenulatum
36 Bifidobacterium BP 02 DSMZ DSM 16598 21.07.2004 pseudocatenulatum
37 Bifidobacterium longoni BL 03 DSMZ DSM 16603 20.07.2004 38 Bifidobacterium. breve BR 03 DSMZ DSM 16604 20.07.2004 39 Lactobacillus casei ssp. LR 04 DSMZ DSM 16605 20.07.2004 rhamnosus
40 Lactobacillus delbrueckii LDB 01 DSMZ DSM 16606 20.07.2004 ssp. bulgaricus
41 Lactobacillus delbrueckii LDB 02 DSMZ DSM 16607 20.07.2004 ssp. bulgaricus
42 Staphyìococcus xylosus SX 01 DSMZ DSM 17102 01.02.2005 43 Bifidobacterium BA 02 DSMZ DSM 17103 01.02.2005 adolescentis
57
44 Lactobacillus plantarum LP 07 DSMZ DSM 17104 01.02.2005 45 Streptococcus thermophilus Y08 DSMZ DSM 17843 21.12.2005 46 Streptococcus thermophilus Y09 DSMZ DSM 17844 21.12.2005 47 Streptococcus thermophilus YOIOO DSMZ DSM 17845 21.12.2005 48 Lactobacillus fermentimi LF06 DSMZ DSM 18295 24.05.2006 49 Lactobacillus fermentimi LF07 DSMZ DSM 18296 24.05.2006 50 Lactobacillus fermentimi LF08 DSMZ DSM 18297 24.05.2006 51 Lactobacil lusfc rmen timi LF09 DSMZ DSM 18298 24.05.2006 52 Lactobacillus gasseri LGS01 DSMZ DSM 18299 24.05.2006 53 Lactobacillus gasseri LGS02 DSMZ DSM 18300 24.05.2006 54 Lactobacillus gas seri LGS03 DSMZ DSM 18301 24.05.2006 55 Lactobacillus gasseri LGS04 DSMZ DSM 18302 24.05.2006 56 Bifidobacterium BA 03 DSMZ DSM 18350 15.06.2006 adolescenti EI-3
32 Bifìdobacterium
catenulatum
sp./pseudocatenulatum EI-31, ID 09-255
57 Bifìdobacterium BA 02 DSMZ DSM 18351 15.06.2006 adolescenti EI- 15
43
58 Bifìdobacterium BA 05 DSMZ DSM 18352 15.06.2006 adolescenti EI- 18
Bifìdobacterium animali
subsp. lactis EI-18, ED 09-256
59 Bifìdobacterium BC 01 DSMZ DSM 18353 15.06.2006 catenulatum EI-20
60 Streptococcus thermophilus MOl DSMZ DSM 18613 13.09.2006 FRai
61 Streptococcus thermophilus M02 DSMZ DSM 18614 13.09.2006 LB2bi
62 Streptococcus thermophilus M03 DSMZ DSM 18615 13.09.2006 LRci
63 Streptococcus thermophilus M04 DSMZ DSM 18616 13.09.2006 FP4
64 Streptococcus thermophilus M05 DSMZ DSM 18617 13.09.2006 ZZ5F8
65 Streptococcus thermophilus M06 DSMZ DSM 18618 13.09.2006 TE04
66 Streptococcus thermophilus M07 DSMZ DSM 18619 13.09.2006 Slci
67 Streptococcus thermophilus M08 DSMZ DSM 18620 13.09.2006 64 Ibi
68 Streptococcus thermophilus M09 DSMZ DSM 18621 13.09.2006 277A/lai
69 Streptococcus thermophilus MOIO DSMZ DSM 18622 13.09.2006 277A/2ai
70 Streptococcus thermophilus MOl 1 DSMZ DSM 18623 13.09.2006 IDC11
71 Streptococcus thermophilus M014 DSMZ DSM 18624 13.09.2006 ML3di
72 Streptococcus thermophilus M015 DSMZ DSM 18625 13.09.2006 TE03
73 Streptococcus thermophilus GG1 DSMZ DSM 19057 21.02.2007 G62
74 Streptococcus thermophilus GG2 DSMZ DSM 19058 21.02.2007 Gl 192
75 Streptococcus thermophilus GG3 DSMZ DSM 19059 21.02.2007 GB 18 M02
76 Streptococcus thermophilus GG4 DSMZ DSM 19060 21.02.2007 CCR21
77 Streptococcus thermophilus GG5 DSMZ DSM 19061 21.02.2007 G92
78 Streptococcus thermophilus GG6 DSMZ DSM 19062 21.02.2007 G69
79 Streptococcus thermophilus YO 10 DSMZ DSM 19063 21.02.2007 80 Streptococcus thermophilus YO 11 DSMZ DSM 19064 21.02.2007 81 Streptococcus thermophilus YO 12 DSMZ DSM 19065 21.02.2007 82 Streptococcus thermophilus YO 13 DSMZ DSM 19066 21.02.2007 83 Weissella ssp. EX DSMZ DSM 19067 21.02.2007 WSP 01
84 Weissella ssp. DSMZ DSM 19068 21.02.2007
EX
WSP 02
85 Lactohacillus ssp. DSMZ DSM 19069 21.02.2007
EX
WSP 03
86 Lactobociìlus plantarum OY DSMZ DSM 19070 21.02.2007 LP 09
87 Lactohacillus plantarum OY DSMZ DSM 19071 21.02.2007 LP 10
88 Lactococcus lactis NS 01 DSMZ DSM 19072 21.02.2007 89 Lactohacillus fermentum LF 10 DSMZ DSM 19187 20.03.2007 90 Lactobacillus fermentimi LF 11 DSMZ DSM 19188 20.03.2007 91 Lactobacillus casei ssp. LR05 DSMZ DSM 19739 27.09.2007 rhamnosus
92 Bifidobacterium bifìdum BB01 DSMZ DSM 19818 30.10.2007 93 Lactobacillus delbrueckii Lb DSMZ DSM 19948 28.11.2007 LD 01
94 Lactobacillus delbrueckii Lb DSMZ DSM 19949 28.11.2007 LD 02
95 Lactobacillus delbrueckii Lb DSMZ DSM 19950 28.1 1.2007 LD 03
96 Lactobacillus delbrueckii Lb DSMZ DSM 19951 28.11.2007 LD 04
97 Lactobacillus delbrueckii Lb DSMZ DSM 19952 28.11.2007 LD 05
98 Bifidobacterium B660 DSMZ DSM 21444 13.05.2008 pseudocatenuìatum
99 Lactobacillus acidophilus LA02 DSMZ DSM 21717 06.08.2008 100 Lactobacillus paracasei LPC 08 DSMZ DSM 21718 06.08.2008 101 Lactobacillus pentosus LPS 01 DSMZ DSM 21980 14.1 1.2008 102 Lactobacillus rahmnosus LR 06 DSMZ DSM 21981 14.11.2008 103 Lactobacillus delbrueckii DSMZ DSMZ DSM 22106 10.12.2008 ssp. Delbrueckii 20074
104 Lactobacillus plantarum LP1 DSMZ DSM 22107 10.12.2008 105 Lactobacillus salivarius LS01 DSMZ DSM 22775 23.07.2009 106 Lactobacillus salivarius LS03 DSMZ DSM 22776 23.07.2009 107 Bifidobacterium bifidum BB01 DSMZ DSM 22892 28.08.2009 108 Bifidobacterium bifidum DSMZ DSM 22893 28.08.2009 109 Bifidnhactcrium bifidum BB03 DSMZ DSM 22894 28.08.2009 110 Bifidobacterium lactis BS05 DSMZ DSM 23032 13.10.2009 111 Lactobacillus acidophilus LA 06 DSMZ DSM 23033 13.10.2009 112 Lactobacillus brevis LBR01 DSMZ DSM 23034 13.10.2009 113 Bifidobacterium animalis BS06 DSMZ DSM 23224 12.01.2010 ssp. lactis
114 Bifidobacterium longum BL04 DSMZ DSM 23233 12.01.2010 115 Bifidobacterium longum BL05 DSMZ DSM 23234 12.01.2010 116 Bifidobacterium bifidum MB 109 DSMZ DSM 23731 29.06.2010 117 Bifidobacterium breve MB 113 DSMZ DSM 23732 29.06.2010 118 Bifidobacterium lactis MB 2409 DSMZ DSM 23733 29.06.2010 119 Lactobacillus reuteri LRE01 DSMZ DSM 23877 05.08.2010 120 Lactobacillus reuteri LRE02 DSMZ DSM 23878 05.08.2010 121 Lactobacillus reuteri LRE03 DSMZ DSM 23879 05.08.2010 122 Lactobacillus reuteri LRE04 DSMZ DSM 23880 05.08.2010 123 Lactobacillus paracasei ssp. LPC09 DSMZ DSM 24243 23.11.2010 paracasei
124 Lactobacillus acidophilus LA 07 DSMZ DSM 24303 23.11.2010 125 Bifidobacterium bifidum. BB04 DSMZ DSM 24437 04.01.2011 126 Lactobacillus crispatus CRL DSMZ DSM 24438 04.01.2011
1251
127 Lactobacillus crispatus CRL DSMZ DSM 24439 04.01.2011
1266
128 Lactobacillus paracasei CRL DSMZ DSM 24440 04.01.2011
1289
129 Lactobacillus salivarius CRL DSMZ DSM 24441 04.01.2011
1328
130 Lactobacillus gasseri CRL DSMZ DSM 24512 25.01.2011
1259
131 Lactobacillus acidophihts CRL DSMZ DSM 24513 25.01.2011
1294
132 Lactobacillus salivarius LS04 DSMZ DSM 24618 02.03.2011 133 Lactobacillus crispatus LCR01 DSMZ DSM 24619 02.03.2011 134 Lactobacillus crispatus LCR02 DSMZ DSM 24620 02.03.2011 135 Lacotbacillus acidophilus LA09 DSMZ DSM 24621 02.03.2011 »
136 Lactobacillus gasseri LGS05 DSMZ DSM 24622 02.03.2011 137 Lactobacillus paracasei LPC11 DSMZ DSM 24623 02.03.2011 138 Bifidobacterium infantis BI 02 DSMZ DSM 24687 29.03.2011 139 Bifidobacterium bifidum. BB 06 DSMZ DSM 24688 29.03.2011 140 Bifidobacterium longum BL 06 DSMZ DSM 24689 29.03.2011 141 Bifidobacterium. lactis BS 07 DSMZ DSM 24690 29.03.2011 142 Bifidobacterium longum PCB133 DSMZ DSM 24691 29.03.2011 143 Bifidobacterium breve B632 DSMZ DSM 24706 07.04.2011 144 Bifidobacterium breve B2274 DSMZ DSM 24707 07.04.2011 145 Bifidobacterium breve B7840 DSMZ DSM 24708 07.04.201 1 146 Bifidobacterium longum B1975 DSMZ DSM 24709 07.04.2011 147 Lactobacillus salivarius DLV1 DSMZ DSM 25138 02.09.2011 148 Lactobacillus LRE05 DSMZ DSM 25139 02.09.2011 Reuteri
149 Lactobacillus LRE06 DSMZ DSM 25140 02.09.2011 Reuteri
150 Lactobacillus RC 14 DSMZ DSM 25141 02.09.2011 Reuteri
151 Streptococcus thermophilus ST 10 DSMZ DSM 25246 19.09.2011 152 Streptococcus thermophilus ST 11 DSMZ DSM 25247 19.09.2011 153 Streptococcus thermophilus ST 12 DSMZ DSM 25282 20.10.2011 154 Lactobacillus salivarius DLV8 DSMZ DSM 25545 12.01.2012
Claims (1)
- RIVENDICAZIONI 1. Un ceppo di batterio appartenente alla specie Bifidobacterium longum depositato presso il DSMZ-Deutsche Sammlung von Mìkro-organismen und Zellkulturen GmbH - Germany, scelto dal gruppo comprendente: 1) Bifidobacterium longum DLBL 07 = DSM 25669 2) Bifidobacterium longum DLBL 08 = DSM 25670 3) Bifidobacterium longum DLBL 09 = DSM 25671 4) Bifidobacterium longum DLBL 10 = DSM 25672 5) Bifidobacterium longum DLBL 11 = DSM 25673 6) Bifidobacterium longum DLBL 12 = DSM 25674 7) Bifidobacterium longum DLBL 13 = DSM 25675 8) Bifidobacterium longum DLBL 14 = DSM 25676 9) Bifidobacterium longum DLBL 15 = DSM 25677 10) Bifidobacterium longum DLBL 16 = DSM 25678 11) Bifidobacterium longum DLBL 17 = DSM 25679 12) Bifidobacterium longum DLBL 18 = DSM 25708 13) Bifidobacterium longum DLBL 19 = DSM 25717 14) Bifidobacterium longum DLBL 20 = DSM 25718 2. Un processo per la preparazione di colture batteriche appartenenti alla specie Bifidobacterium longum, in cui detto processo comprende una fase nella quale almeno due ceppi di batteri appartenenti_ alla_ specie Bifidobacterium longum; preferibilmente, detti ceppi di batteri sono scelti tra quelli rivendicati nella rivendicazione 1, sono fatti concrescere assieme in maniera sinergica in uno stesso substrato colturale. 3. Una composizione farmaceutica o cosmetica o un dispositivo medico o un prodotto integratore o una composizione alimentare comprendente almeno due ceppi di batteri ottenuti da un processo in accordo con la rivendicazione 2, per uso in un trattamento per aiutare il prolungamento della vita di un essere umano; o per uso in un trattamento per rallentare e/o contrastare e/o ridurre i processi biologici di invecchiamento fìsico e della pelle o della cute; o per uso in un trattamento per rallentare e/o contrastare e/o ridurre i processi biologici di invecchiamento che portano alla perdita di memoria e/o capacità di concentrazione. 4. La composizione farmaceutica o cosmetica o un dispositivo medico o un prodotto integratore o una composizione alimentare comprendente almeno due ceppi di batteri ottenuti da un processo in accordo con la rivendicazione 2, per uso in un trattamento di inibizione della produzione di batteroidi mediante un meccanismo di inibizione aspecifico che prevede la produzione di metaboliti da parte di detto batterio e/o mediante un meccanismo specifico che prevede la produzione di batteriocine da parte di detto batterio; o per uso in un trattamento di stimolazione della produzione di Clostridi butirrici in grado di produrre butirrati per contrastare l'insorgere di una colite, una colica ulcerosa, un'infiammazione dell'intestino o del tratto grastro-intestinale o della malattia di Crohn. 5. La composizione farmaceutica o cosmetica o un dispositivo medico o un prodotto integratore o una composizione alimentare comprendente almeno due ceppi di batteri ottenuti da un processo in accordo con la rivendicazione 2, per uso in un trattamento per ridurre il contenuto dei metaboliti tossici prodotti o derivati dalla degradazione proteica per migliorare la funzionalità renale. 6. La composizione farmaceutica o cosmetica o un dispositivo medico o un prodotto integratore o una composizione alimentare comprendente almeno due ceppi di batteri ottenuti da un processo in accordo con la rivendicazione 2, per uso in un trattamento antiossidante o immunomodulante con produzione di citochine . 7. La composizione in accordo con una qualsiasi delle rivendicazioni 3-6, in cui detta composizione inoltre comprende la N-acetilcisteina o una sostanza a base di N-acet ilcisteina o un suo derivato. 8 . La composizione in accordo con una qualsiasi delle rivendicazioni 3-7, in cui detta composizione inoltre comprende il selenio sottoforma di sodio seleniato, L-seleniomet ionina, sodio selenito, selenìto acido di sodio, acido selenioso o selenio internalizzato in cellule di batteri scelti dal gruppo comprendente o, alternativamente consistente di: Lactobacillus buchneri LB26BM, depositato in data 05/04/2004 presso la DSMZ e avente numero di deposito DSM 16341, e/o - Lactobacillus ferintoshensis LB6BM, depositato in data 17/01/2004 presso la DSMZ e avente numero di deposito DSM 16144, e/o Lactobacillus reuteri LB2BM, depositato in data 17/01/2004 presso la DSMZ e avente numero di deposito DSM 16143. 9. Una composizione in accordo con una qualsiasi delle rivendicazioni 3-8, in cui detta composizione inoltre comprende almeno un altro ceppo di batterio scelto dal gruppo comprendente : i) Lactobacillus johnsonii DLLJO 01 = DSM 25680 ii) Lactobacillus rhamnosus DLLR 07 = DSM 25681 iii) Lactobacillus rhamnosus DLLR 08 = DSM 25682 iv) Lactobacillus reuteri DLLRE 07 = DSM 25683 v) Lactobacillus reuteri DLLRE 08 = DSM 25684 vi) Lactobacillus reuteri DLLRE 09 = DSM 25685 vii) Bifidobacterium infantis BI 03 = DSM 25709 vili) Lactobacillus plantarum LP 09 = DSM 25710
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