HUT70463A - Immunological method for determination of hemoglobin-derivate - Google Patents
Immunological method for determination of hemoglobin-derivate Download PDFInfo
- Publication number
- HUT70463A HUT70463A HU9300596A HU9300596A HUT70463A HU T70463 A HUT70463 A HU T70463A HU 9300596 A HU9300596 A HU 9300596A HU 9300596 A HU9300596 A HU 9300596A HU T70463 A HUT70463 A HU T70463A
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- hemoglobin
- reagent
- derivative
- content
- sample
- Prior art date
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/72—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood pigments, e.g. haemoglobin, bilirubin or other porphyrins; involving occult blood
- G01N33/721—Haemoglobin
- G01N33/723—Glycosylated haemoglobin
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/72—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood pigments, e.g. haemoglobin, bilirubin or other porphyrins; involving occult blood
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/962—Prevention or removal of interfering materials or reactants or other treatment to enhance results, e.g. determining or preventing nonspecific binding
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/815—Test for named compound or class of compounds
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By Optical Means (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
NÉMET
SZÖVETSÉGI KÖZTÁRSASÁG
A találmány vérminták meghatározott hemoglobinszármazék tartalmának meghatározási eljárására vonatkozik. A találmány speciálisan olyan hemoglobinszármazékok, úgymint glikózzal képzett hemoglobinszármazék tartalmának meghatározási eljárására vonatkozik, amelyek az összhemoglobin-tartalom külön meghatározását és a hemoglobinszármazék, meghatározását igénylik abból a célból, hogy meghatározzuk a vérben a származékká alakult hemoglobin részarányát. A találmány tárgyát képezi továbbá a meghatározásra alkalmas hemolízisreagens.
57.000/ZE
Immunológiai eljárás hemoglobin származék meghatározására
BOEHRINGER MANNHEIM GMBH, MANNHEIM,
NÉMET SZÖVETSÉGI KÖZTÁRSASÁG
Feltalálók: dr. KARL Johann, PEISSENBERG, dr. KERSCHER Lorenz, PENZBERG, dr. SCHNEIDER Erich, MANNHEIM,
NÉMET SZÖVETSÉGI KÖZTÁRSASÁG
Bejelentés napja: 1993. 03. 04.
Uniós elsőbbsége: 1992. 03. 05. (P 42 06 932.7)
NÉMET SZÖVETSÉGI KÖZTÁRSASÁG
A találmány vérminták meghatározott hemoglobinszármazék tartalmának meghatározási eljárására vonatkozik. A találmányspeciálisán olyan hemoglobinszármazékok, úgymint glükózzal képzett hemoglobinszármazék tartalmának a meghatározására ν
szolgáló eljárására vonatkozik, amely származékok az összes hemoglobintartalom külön meghatározását és a hemoglobinszármazék meghatározását igénylik abból a célból, hogy meghatározzuk a vérben a származékká alakult hemoglobin részarányát.
A vércukorszint nagyságától függően az eritrociták által felvett glükóz egy kis része egy nem enzimes reakcióban a globin β-láncának N-terminális valincsoportjához kapcsolódik. A reakció a HbA]_c stabil, glükózzal képzett hemoglobinszármazékká (ketoamin formává) két lépésben megy végbe. Először a glükóz egy gyors, reverzibilis kapcsolódással kötődik a hemoglobinhoz, ekkor egy labilis hemoglobinszármazék (Schiff-bázis) képződik a glükózzal. Egy irreverzibilis, lassú átrendeződési reakcióban (Amadoriátrendeződés) keletkezik a stabil forma. A HbAic részaránya az összhemoglobinra nézve egészséges anyagcsere esetén 3-6 %. Cukorbetegeknél a HbA^c részaránya a megelőző 4-12 hét alatti vércukorkoncentráció nagyságával arányosan egészen 12 %-ig, egyes esetekben még 20 %-ig is emelkedhet. A HbA^c-nek. az összhemoglobin tartalomra vonatkoztatott részarányának a meghatározása különösen integrális paraméterként kínálkozik a vércukor beállítás folyamatának ellenőrzésére.
A szakirodalom egy sor eljárást ismertet a glülózzal képzett hemoglobinszármazék meghatározására. A konvencionális módszerek olyan technikákon alapulnak mint az elektroforézis, izoelektromos fókuszálás és kolorimetriás meghatározások, valamint az ioncserélő kromatográfia és az affinitás kromatográfia. Miután leírták specifikus poliklonális antitestek (amerikai egyesült államokbeli 4 247 533 számú szabadalmi leírás) és monoklonális antitestek (EP-A-0 316 306, EP-A-0 201 187 számú európai szabadalmi bejelentések) előállítását, egy sor immunológiai eljárást fejlesztettek ki a HbA]_c kimutatására.
Az EP-A-0 185 870 számú európai szabadalmi bejelentés immunológiai eljárást ismertet fehérjék, többek között HbA]_c meghatározására. Olyan monoklonális antitesteket alkalmaznak, amelyek specifikus lineáris peptidepitópokat ismernek fel. Az epitóp felszabadításhoz denaturálást írnak elő, amit többek között chaotrop reagensekkel végeznek. 37°C alatti hőmérsékleten ez a denaturálási lépés egy órától több óráig terjedő időt, 50°C fölötti hőmérsékleten egy percet vesz igénybe. Nem ismertetik az összes hemoglobin egyidejű meghatározását a mintában.
Az EP-A-0 201 187 számú európai szabadalmi bejelentésben olyan eljárást ismertetnek HbA^c meghatározására, amely szerint HbAj_c-val szembeni monoklonális antitesteket alkalmaznak, amelyeket natív humán HbAic-val végzett immunizálással nyertek. A meghatározást 4°C és 37°C közötti hőmérsékleten végzik, mimellett minden inkubációs lépés legfeljebb 72 óráig tart. Nem ismertetik az összes hemoglobintartalom és a HbAic-tartalom azonos mi ntáhan végzett meghatározását.
Az EP-A-0 315 864 számú európai szabadalmi bejelentésben eljárást ismertetnek a HbAic relatív tartalmának meghatározására vérmintában. A hemoglobint tiocianáttal denaturálják, és egy további oxidációs szerrel, előnyösen ferricianiddal met-hemoglobinná alakítják. Az így kezelt vérmintában meghatározhatják az összhemoglobin-tartalmat, valamint a HbAic-tartalmat.
* • ·
Lítiumsók, előnyösen lítium-tiocianát alkalmazását az eritrociták lízisére és a hemoglobinszármazék denaturálására az EP-A-0 407 860 számú európai szabadalmi bejelentés ismerteti. A HbAj_c-tartalmat immunológiai úton határozzák meg. Az összhemoglobin meghatározására egy további oxidálószert, előnyösen ferricianidot kell alkalmazni, amely a hemoglobint met-hemoglobinná alakítja át.
Az utóbbi két eljárás hátránya abban áll, hogy a hemoglobinnak ciano-met-hemoglobinná való átalakításához cianidot kell alkalmazni. A cianidnak nátrium-lauril-szulfáttal (SLS) való helyettesítését az összhemoglobin meghatározására a Clin. Bio chem. 15 (1982) 83-88 közlemény ismerteti. E közlemény azonban nem tartalmaz adatot arra, hogy az SLS egy hemoglobinszármazék, speciálisan a HbA^c immunológiai meghatározásánál, alkalmas a minta előkezelésre.
Az EP-A-0 184 787 európai szabadalmi bejelentésben ugyancsak cianidmentes reagenst írnak le vérminta összhemoglobin-tartalmának meghatározására. A reagens egy ionos felületaktív szer, melynek pH-ja legalább 11,3, előnyösen 13,7-nél nagyobb érték. Nem említik valamely hemoglobinszármazék immunológiai meghatározását. A nagyon nagy pH-érték hátrányos lenne glükózzal képzett hemoglobinszármazék immunológiai meghatározásánál, mivel az erősen alkálikus közegben lehasadhat a cukorrész a hemoglobinról. Az alkalmazott antitestek enzimes jelzése esetén az enzimes reakció gátlása léphetne fel, mivel a leggyakrabban használt enzimek pH-optimuma pH = 6-8 érték között van. A közeg nagy pH-ja gátolhatja az immunológiai reakciót is.
• · ·
-4,
Fennállt ezért továbbra is az igény olyan immunológiai eljárás iránt egy, a vérben lévő hemoglobin származék meghatározására, melynek során alacsony hőmérsékleten - így például szobahőmérsékleten - végezhetjük el a hemolízist, nincs szükség hosszú inkubációs időre a minta előkészítéséhez és elkerüljük környezetre káros reagensek, így cianidok alkalmazását. Ezen kívül az is szükséges volt, hogy az összes hemoglobint egyidejűleg meghatározzuk ugyanabban a hemolizátumban, annak érdekében, hogy a hemoglobinszármazék arányát a vér összhemoglobin tartalmára vonatkoztatva további hemolízisminta nélkül meghatározhassuk. A találmány feladata volt ilyen immunológiai eljárás kidolgozása a vér egy hemoglobinszármazékának a meghatározására .
A feladatot az igénypontok által részletesebben jellemzett találmánnyal oldottuk meg. Lényegében ezt a feladatot olyan, egy vérminta egy hemoglobinszármazék tartalmának a meghatározására szolgáló eljárással oldottuk meg, amely eljárást az jellemez, hogy mintát olyan hemolízisreagenssel kezeljük, amely egy ionos detergenst - melynek pH-ja 5,0 és 9,5 közötti érték - tartalmaz, és a hemolizált vérmintában immunológiai úton meghatározzuk a hemoglobinszármazékot.
A találmány további tárgya eljárás vérminta egy hemoglobinszármazék tartalmának és összes hemoglobintartalmának a meghatározására, amely abban áll, hogy a vérmintát olyan hemolízis reagenssel kezeljük, amely egy ionos detergenst - melynek pH-ja 5,0 és 9,5 közötti érték - tartalmaz, a hemolizált mintában fotometriásan meghatározzuk az összhemoglobin tartalmat, és a hemolizált mintában immunológiai úton meghatározzuk a hemoglobinszármazékot .
A találmány további tárgya olyan hemolizisreagens, amely egy ionos detergenst - melynek pH-ja 5,0 és 9,5 közötti érték tartalmaz, e reagens alkalmazása vérminta előkészítésére a hemoglobinszármazék immunológiai meghatározására, valamint kívánt esetben az összhemoglobin származék meghatározására, továbbá a hemolizisreagenst tartalmazó reagenskészlet.
A hemolízisreagens hatása révén a vérmintában lévő eritrociták oldódnak (lizálódnak), és a hemoglobin átalakul egy specifikus hemoglobin-kromofórrá. A keletkező hemoglobinkromofórt karakterisztikus abszorpciója révén alkalmazhatjuk az összhemoglobin-tartalom meghatározására, és a specifikus epitóp immunológiai reakciója révén alkalmazhatjuk a hemoglobinszármazék meghatározására. Immunológiai meghatározási eljárásként elvben bármely használatos eljárást alkalmazhatunk, ilyenek például a szendvics-tesztek, IEMA-tesztek, lecsapás! vagy agglutinációs tesztek, valamint az FPIA- és CEDIA-elveken alapuló tesztek. Mind nedves, mind száraz tesztek alkamazhatók.
A hemolízisreagensben ionos detergensekként anionos detergenseket, előnyösen nátrium-dodecilszulfátot (SDS), nátriumdioktil-szulfoszukcinátot (DONS), kationos detergenseket, előnyösen tetradecil-trimetil-ammónium-bromidot (TTAB) vagy cetil-trimetil-ammónium-bromidot (CTAB) vagy zwitterionos detergenseket, előnyösen Zwittergent 3-14-et alkalmazhatunk. A hemolízisreagenst olyan mennyiségben adagoljuk a vérmintához, amely elegendő ahhoz, hogy az eritrociták lízisét elvégezzük, átalakítsuk a r
hemoglobint a specifikus hemoglobin-kromoforrá, és a hemoglobinszármazék epitópját felszabadítsuk. A hemolízisreagenst a vérmintához 1:10-tól 1:400-ig terjedő arányban adagoljuk úgy, hogy az ionos detergens koncentrációja a létrejött elegyben 0,01 - 5,0 tömeg%, előnyösen 0,5 - 1,5 tömeg% legyen. A hemolízisreagens pH-ja a gyengén savanyútól a gyengén alkálikusig terjedő tartományban van. A pH előnyösen 5,0 - 9,5 értékek között van, különösen előnyösen 7,4. A pH-érték beállítására a hemolízisreagensben valamennyi használatos puffért alkalmazhatjuk. Előnyösen HEPES-t, MES-t, TRIS-t vagy foszfátpuffért használunk.
A hemolízisreagens további reagenseket tartalmazhat, amelyek például az immunológiai reakciót zavaró^tényezők kiküszöbölésére, hemoglobin oxidációjára, a zavarosság kiküszöbölésére, a stabilizálásra vagy a konzerválásra szolgálnak. Egyes detergensek, többek között az SDS, zavarhatják az immunológiai reakciókat. Ritka esetekben a hemolízisreagens adagolása után zavarosodás és koaguláció léphet fel, amelyek különböző eredetűek. Alacsonyabb hőmérsékleten például nehezen oldódik az SDS. Meglepő módon azt találtuk, hogy ezeket a zavaró tényezőket elkerülhetjük nemionos detergensek adagolásával, így előnyösen polioxietilénéter, úgymint Brij 35 és 58 vagy Triton X100, valamint polioxietilénészter, úgymint Myrj 52 és 59 vagy Tween 20 hozzáadásával. Normál esetben a nemionos detergenst olyan mennyiségben adjuk a hemolízisreagenshez, hogy a mintához történő hozzáadás után a keletkezett elegyben a koncentrációja 0,01 - 5,0 tömeg%, előnyösen 0,1 - 0,5 tömeg% legyen.
A továbbiakban használatos ferricianid oxidálószert, például hexaciano-ferrát(III)-ot tartalmazhatja a hemolízisreagens. A kationos detergensekkel együtt kicsapódások léphetnek fel. A ferricianid alkalmazása során szükséges továbbá a fénytől való védelem is. Meglepő módon azt találtuk, hogy olyan konzerválószerek hozzáadása esetén, amelyek hatásmechanizmusa a tiolcsoport oxidációján alapul, mint például metil-izotiazolon vagy Bronidox^K alkalmazása esetén tökéletesen lemondhatunk a ferricianid hozzáadásáról. A kationos detergensekkel együtt ezek a konzerválószerek barnás-zöld színű hemoglobin-kromofórhoz vezetnek, amelynek abszorpciós maximuma 570 nm-nél van. A különleges előny abban van, hogy először is ezen konzerválószerek hozzáadása révén mind a hemoglobinnak egy speciális hemoglobin-kromofórrá való átalakítását, mind pedig a hemolízisreagens jó konzerválását érjük el, másodszor a hemolízis végpontját vörösből barnás-zöldbe való színátcsapás révén jól felismerhetjük. A konzerválószereket 0,005-0,2 tömeg%, előnyösen 0,01-0,02 tömeg% koncentrációban használjuk a hemolízisreagensben.
A hemolízist, a hemoglobinnak a specifikus hemoglobinkromof orrá való átalakítását, valamint a minta előkészítését a hemoglobinszármazék meghatározására a hemolízisreagens alkalmazásával, alacsony hőmérsékleten, előnyösen 4°C és 37°C között, különösen előnyösen szobahőmérsékleten (20°C-on) 1-10 perc alatt elvégezzük. A legtöbb esetben 2 perces inkubálás elegendő a teljes mintaelőkészítéshez.
Az így előkészített vérmintát ezt követően egy reakciópufferral 1:10 - 1:100 arányban felhígítjuk. Pufferként minden olyan általánosan használt puffér alkalmazható, amely nem zavarja az immunológiai reakciót. Előnyösen MES- vagy HEPES-puffért használunk 10-200 mmól/1 koncentrációban. A reakciópuffér pH-ja 5,0 - 8,0. Ha az immunológiai meghatározás enzimreakciót foglal magában, a reakciópuffér pH-ja előnyösen az enzimreakció pHoptimumának megfelelő érték. A reakciópuffér tartalmazhat továbbá már a'hemoglobinszármazék meghatározásához szükséges reagenseket, mindenekelőtt specifikus kötőpartnereket, előnyösen nagy specifitású poliklonális vagy monoklonális antitesteket.
Meglepő módon azt is találtuk, hogy egy további detergens, előnyösen-nemionos detergens adagolása előnyös annak érdekében, hogy optimális körülményeket hozzunk létre mind a hemoglobinszármazék, így a glükózzal képzett hemoglobinszármazék meghatározásához szükséges mintaelőkészítéshez, mind az immunológiai reakcióhoz, továbbá annak érdekében, hogy a zavaró hatásokat elkerüljük. A detergenst olyan mennyiségben adagoljuk a reakciópuf ferhoz, hogy a keletkezett elegyben koncentrációja 0,01-5,0 tömeg%, előnyösen 0,5 tömeg% legyen.
Ha ugyanabban a mintában meg kell határozni az összhemoglobin-tartalmat a hemoglobinszármazék mennyiségének meghatározása mellett, előnyösen a reakciópuffér hozzáadása után az összhemoglobin-tartalom meghatározására az abszorpciót 400-650 nm, előnyösen 500-650 nm hullámhosszon mérjük meg. Nedves meghatározás esetén az ext-inkciót ezen a hullámhosszon a küvettában fotometriásan határozzuk meg, száraz meghatározás esetén az abszorpciót refluxiós fotometriai úton határozzuk meg azután, hogy a keletkezett elegyetfelvittük egy mintahordozóra.
·· ·
···
Ilyen mintahordozót az összhemoglobin-tartalom meghatározására nagyon egyszerűen készíthetünk, mivel annak nem kell vegyszert tartalmaznia. Egy nedvfúvó, szövés nélküli textília (Vlies) - filc - melyet egy átlátszó hordozó fóliára viszünk fel, kielégíti az egyszerű követelményeket. A tesztcsíkok jobb kezelhetősége és értékelése céljából további hordozó rétegeket tartalmazhat a hordozó, pl. egy transzport textiliát (Transzportvlies) - transzportfilcet - vagy egy adagoló textiliát (Dosiervlies) adagolófilcet.
Az összhemoglobin-tartalmat és a hemoglobinszármazék tartalmat a minta különböző részleteiben is meghatározhatjuk a hemolízisreagens hozzáadása után. Ebben az esetben a mintából és a hemolízisreagensből álló elegy egy részében - szükség szerint megfelelő hígítás után - fotometriásan meghatározzuk az összhemoglobin-tartalmat. Az elegy második részéhez hozzáadjuk a reakciópuff ért, és ezt követően immunológiai úton meghatározzuk a hemoglobinszármazékot.
A hemoglobinszármazék, így a HbAic meghatározására elvileg minden általánosan használt immunológiai eljárás alkalmas. Amint azt az előbbiekben leírtuk, poli- és monoklonális antitesteket állíthatunk elő hemoglobinszármazékokkal , előnyösen HbA ic-val szemben, amelyek a hemoglobinszármazék karakterisztikus epitópját specifikusan kötik (ld. 4 247 533 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás, az EP-A-0 316 306 és EP-A-0 201 187 számú európai szabadalmi bejelentések).
Az immunológiai meghatározás variánsainál a jelzés fajtája, valamint a mérési jel detektálásának eljárása a technika állásá
·»·
- 11 hoz tartozó, ismert eljárásoknak felel meg. Alkalmasak például az enzimjelzéssel végzett szendvicstesztek (ELISA), IEMA-teszt eljárások, a RIA, a precipitációs és agglutinációs eljárások, valamint a homogén immunmeghatározások, úgymint a CEDIA^R^az EMIT- vagy az FPIA-eljárások.
A nedves eljárásban a hemoglobinszármazék immunológiai meghatározását előnyösen a TINIA-elv alapján végezzük, mivel itt nincs szükség elválasztási lépésre. A mintát egy analitikailag specifikus antitesttel és egy polihapténnel mint agglutinációs szerrel elegyítjük. A poliheptén egy olyan hordozóanyagból áll, pl. albuminból, dextránból vagy IgG-ből, amelyen több olyan epitóp van kapcsolva, amelyhez a specifikus antitestek kötődni tudnak. Mivel az antitestek kicsapódása csak a polihaptén révén következhet be, a mintában lévő meghatározandó anyag csökkenő mennyiségével növekvő zavarosodást kapunk, amelyet nefelometriásan vagy turbidimetriásan meghatározhatunk.
Előnyösen már a reakciópuffer tartalmazza a hemoglobinszármazékra nézve specifikus antitestet. A reakciópuffér hozzáadása után keletkezett elegyből először fotometriásan meghatározzuk az összhemoglobin-tartalmat. A lecsapási reakciót egy olyan oldat hozzáadásával indítjuk meg, amely a polihaptént tartalmazza. Egy rövid inkubációs idő után - 5 perc többnyire elegendő - a keletkezett zavarosodást megfelelő hullámhosszon, előnyösen 340 600 nm-en, különösen előnyösen 340 nm-en megmérjük, és ebből a hemoglobinszármazék koncentrációt meghatározzuk. Mivel az összhemoglobint 500-650 nm, előnyösen 546 vagy 570 nm hullámhosszon mérjük, a két mérés nem zavarja egymást, és egy küvettában, '5 ugyanabban a reakcióoldatban egymás után elvégezhető.
A polihaptén oldat, vagyis egy polihaptén vagy egy glükozilezett fehérje, illetve peptid folyékony galenusi formájának az előállítása során bebizonyosodott, hogy a polihaptén a szokásosan alkalmazott foszfátpufferokban pH = 7,0 - 7,5 értéken nem stabil, és hosszabb tárolás során a glükoprotein bomlására vezethet. A glükozilezett fehérjék ilyen instabilitása foszfátpufferban például Ahmed et al., J. Bioi. Chem. 261 (1986), 4889-4894 közleményéből ismert. MES-puffer alkalmazásával 5-200 mmól/1, elnyösen 20-50 mmól/1 koncentrációban és 5,0 - 8,0 pH értékek, előnyösen pH = 6,0 - 6,5 értéken, valamint EDTA vagy egy más ekvivalens komplexképző egyidejű hozzáadásával előnyösen 1-50 mmól/1, különösen előnyösen 0,1 - 20,0 mmól/1 koncentrációban, elértük a glükozilezett peptidek, fehérjék és polihaptének stbilizálását. Marha (bovin) szérum albumin (RSA) adagolása előnyösen 0,1 - 2 %, különösen előnyösen 1 % koncentrációban további pozitív hatást gyakorolt a polihaptén oldat stabilitására. Ez a polihaptén oldat több mint 12 hónapon át tárolható 4°C-on anélkül, hogy a polihaptén, illetve a glükozilezett fehérje vagy peptid említésre méltó instabilitása megfigyelhető lenne. Egy 3 héten át tartó 35°C-os stressz terhelésnél az eredeti extinkciós jelnek csupán 15-20 %-os jelcsökkenése lépett fel.
Száraz eljárásként a hemoglobinszármazék immunológiai meghatározását az IEMA meghatározási elv szerint végezzük. A reakciópuff ért hozzáadjuk a hemolizált vérmintához, és ezután adagoljuk a specifikus, enzimmel jelölt antitestet. Egy előnyös kiviteli formában a reakciópuffer már tartalmazza az antitestet.
• ·
Egy rövid inkubáció után az elegyet egy teszthordozóra visszük fel. Egy epitópmátrixon, vagyis egy olyan teszthordozó zónán, amelyen több epitóp van kapcsolva, amelyekre a specifikus antitestek kötődhetnek, a szabad, enzimmel jelzett antitestek befogódnak. Egy további zónában, a meghatározási zónában a hemoglobinszármazékból és a jelzett antitestből keletkezett komplexet egy alkalmas enzimszubsztrátum reakciója révén reflexiós fotometriai úton meghatározzuk. A szubsztrátumot tartalmazhatja a meghatározási zóna, vagy ha érintkezésbe hozzuk a meghatározási zónát egy további zónával, amely a szubsztrátumot tartalmazza, a szubsztrátum ide kerülhet.
Célszerűen a találmány szerinti eljáráshoz szükséges reagenseket reagenskészlet (testkit) formájában hozzuk forgalomba. A készlet legalább két, egymástól elválasztott csomagban a hemolízisreagens mellett a többi reagenst oldott vagy liofilezett formában vagy egy teszthordozóra felvive tartalmazza.
A találmányt a következő példákkal szemléltetjük.
1. példa
Összes hemoglobin és HbAic egyidejű meghatározása nedves élj árással
A kísérleteket egy Hitachi 717-on - Boehringer Mannheim. GmbH
- végezzük. Az összhemoglobin-tartalmat fotometriásan mérjük 546 nm hullámhossznál. A HbAic immunológiai meghatározását a TINIAeljárás elve szerint turbidiméteres méréssel 340 nm-nél végezzük. Minden mérést és inkubációt 37°C hőmérsékleten végzünk.
A következő oldatokat alkalmazzuk:
Hemolízisreagens:
mmól NaPO4~puffer pH = 7,0
1,0% SDS
0,1 % nátrium-azid
0,02 % kálium-[hexaciano-ferrát(III) ]
0,5 % Brij 35
Reakciópuffér:
mmól MES-puffer pH = 6,0
150 mmól nátrium-klorid
3,0 % PEG 6000
0,5 % Brij 35
0,1 % marhaszérum-albumin (RSA)
0,1 % nátrium-azid mmól EDTA mg/ml PAK<HbAic>S-igG (DE) (poliklonális birka-Ak
HbAic ellen) vagy
100 /txg/ml MAK<HbA]_c>M-IgG (DE) (monoklonális egér-Ak
HbA]_c ellen)
Polihaptén-oldat:
mmól MES-puffer pH = 6,0
150 mmól nátrium-klorid
6,0 %. PEG 6000
0,5 % Brij 35
0,1 % marhaszérum-albumin gg/ml polihaptén HbA^c - β-1-4 (cisz, MHS)-RSA 18:1.
4.
- 15 A vérmintához a hemolizinreagenst 1:100 arányban hozzáadjuk és 25°C-on 2 percig inkubáljuk. 5 μΐ hemolizált mintához 250 μΐ reakciópuffért adunk. 4 perc múlva mérjük az összhemoglobin abszorpcióját 546 nm-nál (El). Egy perccel később megmérjük az abszorpciót 340 nm-nél (E2) és ezt követően 50 μΐ polihapténoldatot pipettázunk hozzá, és öt percig inkubáljuk. Ezután mérjük a zavarosságot 340 nm-nél (E3). A HbA-^-érték meghatározására g/dl-ben a E = E3-k-E2 extinkció különbséget felvesszük a HbAlc koncentrációval szemben, és grafikusan ábrázoljuk.
térf ogatm-j_nta + térfogatreaj<c^(4)pUj jer k=térfogat korrekciós faktor=------------------------------------— össztérfogat
Az összhemoglobin koncentrációt egy K konstans faktorból El-gyel való szorzással számítjuk ki (k = a hemoglobin-kromofórmoláris extinkciós koefficiense x hígítási faktor).
Katalizátorknt egy ismert hemoglobin - és HbAlc -tartalmú EDTA-teljes vér szolgál. Az EDTA-teljes vért kalibrációs görbe felvételére használjuk, a hemolízisreagenssel különböző mértékben hígítva.
A kalibrációs görbéket az 1. és 2. ábrák mutatják be grafikusan. Az 1. ábrán, amely az összhemoglobin-tartalom meghatározásánk kalibrációs görbéjét mutatjuk be, az összhemoglobinkoncentráció függvényében ábrázoljuk az El értékeket.
Egy lineáris összefüggés adódik. A számításnál tehát egy konstans K faktorral szorozhatunk. A 2. ábrán - amely a HbAlct.
meghatározás kalibrációs görbéje a Δε - E3-k-E2 extinkciós koefficienst vesszük fel a HbA]_c tartalommal szemben.
További kísérletekben a hemolizált vérmintához először is hozzápipettázzuk a polihaptén oldatot és öt perces inkubáció után elindítjuk a leválasztási reakciót a reakciópuffér hozzáadásával, amely a specifikus antitestet tartalmazza. Ez a pipettázási sorrend összehasonlítva a fönt megadott pipettázási sorrenddel, melynél először az antitestet adagoljuk és azután a polihaptént, egy lényegesen kisebb érzékenységhez vezet a HbA^cmeghatározásnál. Ezt a 3. ábra mutatja be, amelyen a HbA^c immunológiai meghatározásának Hitachi fotométerrel mért adatait szemléltetjük.
2. példa
Próbacsíkok az összhemoglobin és a HbAic meghatározására μΐ teljes vérhez 300 μΐ hemolízisreagenst adunk és 10 percig inkubáljuk 20°C-on. A hemolízis reagens egy 0,18 %-os SDS-oldatból áll, melyet 7-es pH-ra pufferoltunk. Az összhemoglobin meghatározására 32 μΐ hemolizált vérmintát egy próbacsíkra viszünk. A próbacsík felépítését a 4. ábrán grafikusan ábrázoljuk. A csík csupán az 1 üvegszálból készült, kezeletlen adagolófilcből, a 2 kezeletlen üvegszál transzportfilcből, a 3 kezeletlen poliészterszövetből· és a 4 átlátszó polikarbonát fóliából áll. A próbacsík nem tartalmaz további vegyszert. Ezzel az eljárással a vérminta összes hemoglobintartalma 576 nm hullámhossznál igen pontosan mérhető.
2,5 % alatti variációs koefficiensek adódnak (1. táblázat).
1. Táblázat
Összes hemoglobin meghatározás
A variációs koeficiens (VK) mindig 10 egyes meghatározásra van számítva.
Hb - koncentrációVK (g/dl)(%)
14,11,0
17,52,5
13.71,9
14.71,8
A HbA]_c koncentráció meghatározására 32 μΐ hemolizált mintához 1200 μΐ reakció-puffért adagolunk és 10 percig inkubáljuk. A reakciópuffer 100 mmól Hepesből (pH = 7,4), 100 mmól NaCl-ból és 0,1 % Brij 35-ből - amely MAK-enzimkonjugátumot tartalmaz - áll. Az elegy 32 μΐ-ét a próbacsíkra visszük, amelyet az 5. ábrán mutatunk be. A 11 epitópmátrixon befogjuk a szabad antitest-enzim konjugátumot. Az erre csatlakozó rétegben, a 12 transzportfilcben a HbAic-antitest-enzimkomplexet reflexiós fotometriával meghatározzuk azáltal, hogy a szubsztrátumot reagáltatjuk a 13 szubsztrátumfilcnek - amely a szubsztrátumot tartalmazza - a 12 transzportfilccel való érintkeztetésével. (2. táblázat).
2. Táblázat
A HbAic-koncentráció meghatározása próbacsík segítségével
A VK értéket mindig 10 egyes mérésből állapítottuk meg.
HbA]_c -koncentráció
VK (g/dl)
0,8
1,1
1,4 (%)
6,8
5,4
6,0
3. példa
Különböző ionos detergensek hatása a HbA^c meghatározásra
A kísérleteket úgy végeztük, mint azt az 1. példában leírtuk. A hemolízisreagens a következő összetételű volt:
mmól NaPO4-puffér, pH = 7,2
0,1 % nátrium-azid
0,02 % kálium-[hexaciano-ferrát(III) ]
0,5% Brij 35
A 3. táblázatban megadott ionos detergensek mindig az ott megadott koncentrációt tartalmazzák.
• ·
- 19 - ....... ··· ··'
TTAB és CTAB esetében a hemolizis reagensben nem volt kálium-[hexaciano-ferrát(III) 1 , mivel ez ezekkel a detergensekkel kicsapódik.
A reakciópuffér és a polihaptén-oldat összetétele megfelel az 1. példának.
Vérmintaként standardot használtunk, mely 3,2 g/dl HbAic-t tartalmazott. Az összes vizsgált ionos detergens a sejtek lízisét és epitópfelszabadítást eredményezett. Legalkalmasabbnak bizonyult az SDS anionos detergens és a TTAB és a CTAB kationos detergensek.
* ···· ·· ·· • · · · · • · · · 4 « ·· · ·4 ·· *
3. Táblázat
HbAic-meghatározás
A hemolizisreagensben lévő különböző ionos detergensek hatása
Az abszorpciót 340 nm-nél mértük:
| Detergens | Konzentráció. hemolizisreagensben | El [0 g/dl HbA, c ] | E2 [3,2 g/dl HbA^] | A. E = E1-E2 |
| SDS | 0,5 % | 337 mE | 73 mE | 264 mE |
| SDS | 1,0 % | 338 mE | 80 mE | 258 mE |
| Zwittergerrt 3-14 | 0,5 % | 341 mE | 172 mE | 169 mE |
| Zwittergent 3-14 | 1,0 % | 343 mE | 139 mE | 204 mE |
| ΊΊΑΒ | 1,0 % | 377 ríE | 149 mE | 228 mE |
| CTAB | . 1,0 % | 374 mE | 137 mE | 237 mE |
| Kontroll ionos detergens 1 nélkül | 340 mE | 275 mE | 65 mE |
4. példa
A HbAic meghatározás dinamikus méréshatárának függése a Brij 35-koncentrációtól
A kísérleteket a 3. példa szerint végeztük. A hemolízisreagens konstansan 1 % SOS-t tartalmazott. A Brij 35 koncentrációját a reakciópufferben a 4. táblázatban adott tartományon belül változtattuk. Mintaként a 3. példában megnevezett HbAic-standard szolgált.
A méréshatár 47 mE kontrolitól már 0,1 % Brij 35 hozzáadására 233 mE-re terjed ki. Az előnyös Brij 35 koncentráció 0,1 1,0 % között van.
4. Táblázat
A reakciópuffér Brij-koncentrációjának hatása a HbA]_c meghatározásra
Az abszorpciót 340 nm-nél mértük.
| Brij 35 koncentráció a reakciópúfferban | EL [0 gr/dl HbAjc] | E2 [3,2 g/dl HbA,c] | Δ. E = E1-E2 |
| - | 240 mE | 193 kR | 47mE |
| 0,1 % | 266 mE | 33 mE | 233 mE |
| 0,25 % | 274 mE | 40 mE | 234 mE |
| 0,5 % | 302 mE | 57 mE | 245 mE |
| 1,0 % | 351 mE | 99 mE | 252 mE |
| 2,0 % | 385 mE | 242 mE | 143 mE |
5. példa
A reakciőpufferben lévő különböző detergensek befolyása a
HbAic-meghatározásra
A kísérleteket a 4. példával azonos módon végezzük. A reak ciópufferben az 5. táblázatban feltüntetett detergenseket alkalmaztuk. Brij 35,56 és 58, valamint Myrj 52 és 59 hozzáadásával vált a legszélesebbé a dinamikus méréstartomány. De más nem-ionos detergensek, mint a triton, valamint zwitterionos detergensek, mint a Zwittergent 3-14 is, összehasonlítva a kontrollal, jelentősen kifejezett pozitív effektust mutattak.
5. Táblázat
A reakciőpufferben lévő detergensek befolyása
| Detergens | Koncentráció a reakciópuff erban | El [0 g/dl HbA^] | E2 [3,2 g/dl HbA^] | Δ E = E1-E2 |
| Kontroll | - | 240 mE | 193 mE | 47 mE |
| Brij 35 | 0,5 % | 302 mE | 57 mE | 245 mE |
| Brij 56 | 0,5 % | 302 mE | 57 mE | 245 mE |
| Brij 53 | 0,5 % | 303 iiiE | 51 luE | 252 mE |
| Triton x 114 | 0,2 % | 523 mE | 275 iriE | 248 mE |
| Triton x 100 | 0,5 % | 298 mE | 202 mE | 96 mE |
| Tween 80 | 0,25 % | 277 mE | 143 mE | 134 mE |
| Tween 60 | 0,25 % | 266 mE | 75 mE | 191 mE 'ó |
| Tween 40 | 0,25 % | 276 mE | 86 mE | 189 mE. |
| Tween 20 | , 0,1 % | 266 mE | 131 mE | 135 mE j |
| Zwittergent 3-14 | 0,1 % | 308 mE | 155 mE | 153 mE |
| Myrj 52 | 0,5 % | 308 mE | 40 mE | 268 mE |
| Myrj 59 | 0,5 % . | 317 mE | 31 mE | 286 mE |
• · · · · ·
6. példa
Összes hemoglobin és HbAi c egyidejű meghatározása a specifikus barnás-zöld hemoglobin kromofórr.al
A kísérleteket egy Hitachi 717 (Boehringer Mannheim GmbH) készüléken végezzük. Az összes hemoglobintartalmat fotometriásan mérjük 570 nm hullámhosszon. A HbA]_c immunológiai meghatározását a TINIA-eljárás elve szerint turbidimetriás méréssel végezzük 340 nm-en. Az összes meghatározást és inkubációt 37°C hőmérsékleten végezzük.
A következő oldatokat használjuk:
Hemolízisreagens:
mmól NaPO4-puffér, pH = 7,4
1,0 % tetradecil-trimetil-ammónium-bromid (TTAB)
0,01 % metil-izotiazolon
0,02 % Bromidox ® K
0,5 % Brij 35 mmól EDTA
Reakciópuffér:
mmól MES-puffer pH = 6,0
150 mmól nátrium-klorid
3,0 % PEG 6000
0,5 % Brij 35
0,01 % metil-izotiazolon
0,02 % Bromidox ®K
1,2 mg/ml PAK<HbAic>S-IgG (DE) (poliklonális juh-AK HbAic-val szemben)
Polihaptén-oldat mmól MES puffer pH = 6,0
150 mmól nátrium-klorid
6,0% PEG 6000
0,5 % Brij 35 gg/ml Polihapten
A vérmintához 1:100 arányban hozzáadjuk a hemolízisreagenst, és 25°C-on 2 percig inkubáljuk. 10 μΐ hemolizált mintához 250 μΐ reagenspuffért adunk. 4 perc múlva 570 nm-nél mérjük az összes hemoglobin abszorpcióját (El). Egy perccel később mérjük az abszorpciót 340 nm-nél (E2) és ezután 50 μΐ polihaptén-oldatot pipettázunk hozzá, és 5 percig inkubáljuk. Ezután mérjük a zavarosságot 340 nm-nél (E3).
A HbA^c érték g/dl-ben való meghatározására a/\E = E3-k-E2 extinkció különbséget a HbA]_c koncentrációval szemben felvesszük, és grafikusan ábrázoljuk.
térfogatminta + térfogatr-gakdőpuffer k=térfogat korrekciós faktor=------------------------------------össztérfogat
Az összes hemoglobin koncentrációt egy K konstans faktorból El-gyel való szorzással számítjuk ki (k = a hemoglobin-kromofor extinkcióskoefficiense x hígítási faktor). A barnás-zöld hemoglobin-kromofór karakterisztikus abszorpciós spektrumát a 6. ábra ·· ♦
mutatja be. Katalizátorként ismert hemoglobin és HbA]_c tartalmid EDTA-teljes vér szolgált. Az EDTA teljes vért különböző mértékben hígítottuk fel egy kalibrációs görbe felvételére.
A kalibrációs görbék a 7. és 8. ábrán grafikusan vannak feltüntetve. A 7. ábrán az összes hemoglobin koncentráció El-gyel szemben van ábrázolva, ez a barnás-zöld hemoglobin-kromofór össz-Hb.kalibrációs görbéje. Lineáris összefüggés látható. A számításnál tehát egy K konstans faktorral szorozhatunk. A 8. ábrán a Δε = E3-k-E2 extinkciós különbség van HbA^c-tartalommal szemben felvéve, ez a barnás-zöld hemoglobin-kromfór HbAic kalibrációs görbéje.
Claims (17)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Eljárás vérminta hemoglobinszármazék tartalmának meghatározására, azzal jellemezve, hogya) a vérmintát olyan hemolízisreagenssel kezeljük, amely ionos detergenst -melynek pH-ja 5,0-től 9,5-ig terjedő érték - tartalmaz, majdb) a hemolizált vérmintában a hemoglobin-származékot immunológiai úton meghatározzuk.
- 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a vérmintát a hemolízisreagenssel 4°C - 37°C hőmérsékleten legfeljebb 10 percig kezeljük.
- 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a hemolízisreagens további, nemionos detergenst tartalmaz.
- 4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a hemolizált mintát olyan reakciópufferral elegyítjük, amely nemionos vagy zwitterionos detergenst tartalmaz, és a keletkezett elegyben a hemoglobin-származékot immunológiai úton meghatározzuk.
- 5. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a hemoglobinszármazék HbAic.
- 6. Eljárás vérminta hemoglobinszármazék tartalmának és összhemoglobin-tartalmának meghatározására, azzal jellemezve, hogya) a vérmintát olyan hemolízisreagenssel kezeljük, amely ionos detergenst - melynek pH-ja 5,0-tól 9,5-ig terjedő érték - tartalmaz,b) a hemolizált mintában meghatározzuk az összhemoglobin--tartalmat, majdc) a hemolizált mintában a hemoglobin-származékot immunológiai úton meghatározzuk.
- 7. A 6. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az összhemoglobin-tartalmat specifikus hemoglobin-kromofór karakterisztikus abszorpciójának mérésével határozzuk meg.
- 8. A 6. és 7. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy a hemolízisreagens további, nemionos detergenst tartalmaz.
- 9. A 6-8. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a hemolizált mintát olyan reakciópufferral elegyítjük, amely nemionos vagy zwitterionos detergenst tartalmaz, és a keletkezett elegyben meghatározzuk az összhemoglobint és a hemoglobinszármazékot.
- 10. Hemolízisreagens, amely pH = 5,0 - 9,5 értékű ionos detergenst tartalmaz.
- 11. A 10. igénypont szerinti hemolízisreagens, azzal jellemezve, hogy nemionos detergenst tartalmaz.
- 12. A 10. vagy 11. igénypont szerinti hemolízisreagens, azzal jellemezve, hogy olyan alkalmas oxidálószert vagy konzerválószert tartalmaz, melynek hatásmechanizmusa a tiolcsoportok oxidációján alapul.
- 13. A 10-12. igénypontok bármelyike szerinti hemolízisreagens alkalmazása hemoglobinszármazék immunológiai meghatározására vagy egy mintában a hemoglobinszármazék és az ossz···· 4· hemoglobin-tartalom egyidejű meghatározására.
- 14. Reagenskészlet (testkit) hemoglobin-származék immunológiai meghatározására, amely legalább két, egymástól elválasztott csomagból áll, amelyek egyike a 10-12. igénypontok bármelyike szerinti hemolízisreagenst, és a másika egy további reagenselegyet - amely a hemoglobinszármazék immunológiai meghatározásához szükséges reagenseket foglalja magában - tartalmaz.
- 15. A 14. igénypont szerinti reagenskészlet, azzal jellemezve, hogy az immunológiai meghatározáshoz szükséges reagenseket reagenshordozóra (teszthordozóra) felvitt állapotban tartalmazza.
- 16. Glikozilezett fehérje, peptid vagy polihaptén oldatának stabilizálása, azzal jellemezve, hogy pufferként pH = 5,0 - 8,0 értékű MES-puffert alkalmazunk, és az oldat EDTA-t tartalmaz.
- 17. A 16.igénypont szerinti oldat stabilizálása, azzal jellemezve, hogy marhaszérum-albumint (RSA) adunk az oldathoz.n oH.G óid'
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE4206932A DE4206932A1 (de) | 1992-03-05 | 1992-03-05 | Immunologische methode zur bestimmung eines haemoglobinderivates |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU9300596D0 HU9300596D0 (en) | 1993-05-28 |
| HUT70463A true HUT70463A (en) | 1995-10-30 |
Family
ID=6453281
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU9300596A HUT70463A (en) | 1992-03-05 | 1993-03-04 | Immunological method for determination of hemoglobin-derivate |
Country Status (23)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5541117A (hu) |
| EP (1) | EP0559164B1 (hu) |
| JP (1) | JP2637677B2 (hu) |
| KR (1) | KR930020162A (hu) |
| CN (1) | CN1081765A (hu) |
| AT (1) | ATE193378T1 (hu) |
| AU (1) | AU652092B2 (hu) |
| CA (1) | CA2090981C (hu) |
| CZ (1) | CZ29193A3 (hu) |
| DE (2) | DE4206932A1 (hu) |
| DK (1) | DK0559164T3 (hu) |
| ES (1) | ES2148190T3 (hu) |
| FI (1) | FI930975A (hu) |
| HR (1) | HRP930253A2 (hu) |
| HU (1) | HUT70463A (hu) |
| IL (1) | IL104902A0 (hu) |
| NO (1) | NO930770L (hu) |
| NZ (1) | NZ247054A (hu) |
| PL (1) | PL297915A1 (hu) |
| PT (1) | PT559164E (hu) |
| SI (1) | SI9300108A (hu) |
| SK (1) | SK14993A3 (hu) |
| ZA (1) | ZA931533B (hu) |
Families Citing this family (42)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5739037A (en) * | 1992-09-29 | 1998-04-14 | Drew Scientific Limited | Process for eliminating labile glycohaemoglobin from a sample |
| US5610076A (en) * | 1994-04-29 | 1997-03-11 | Alteon Inc. | Method for detecting hemoglobin advanced glycosylation endproducts |
| FR2721112B1 (fr) * | 1994-06-13 | 1996-08-14 | Gks Technologies | Dispositif de diagnostic rapide de toute molécule glyquée et procédé de mise en Óoeuvre. |
| JP3150857B2 (ja) * | 1994-10-19 | 2001-03-26 | 富士写真フイルム株式会社 | グリコヘモグロビン含有比測定用分析要素及び分析方法 |
| EP0729031A1 (en) * | 1995-02-24 | 1996-08-28 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Set of reagents determining the content of total haemoglobin |
| JP3269765B2 (ja) | 1995-12-14 | 2002-04-02 | 富士写真フイルム株式会社 | ヘモグロビン誘導体の免疫学的測定方法及びその方法に用いる処理試薬 |
| JP3551678B2 (ja) * | 1996-03-14 | 2004-08-11 | 東ソー株式会社 | ヘモグロビンＡ１ｃの測定法及びキット |
| US6855562B1 (en) * | 1996-07-30 | 2005-02-15 | Horiba, Ltd. | Immunoassay method for lyzed whole blood |
| JP3249919B2 (ja) * | 1996-07-30 | 2002-01-28 | 株式会社堀場製作所 | 免疫測定方法 |
| US5858794A (en) * | 1997-05-13 | 1999-01-12 | Bayer Corporation | Cyanide-containing hemoglobin reagent composition and method providing acceptable precision, accuracy and freedom from white cell interference on automated hematology analyzers |
| DE69819996T2 (de) * | 1997-09-27 | 2004-09-02 | Horiba Ltd. | Gerät für die Zählung von Blutzellen und zur immunologischen Bestimmung unter Verwendung von Vollblut |
| US6485923B1 (en) * | 2000-02-02 | 2002-11-26 | Lifescan, Inc. | Reagent test strip for analyte determination having hemolyzing agent |
| JPWO2002021142A1 (ja) * | 2000-09-07 | 2004-01-15 | 和光純薬工業株式会社 | 総ヘモグロビン及び糖化ヘモグロビンの測定方法 |
| US7670853B2 (en) * | 2002-11-05 | 2010-03-02 | Abbott Diabetes Care Inc. | Assay device, system and method |
| WO2004106930A1 (ja) * | 2003-05-27 | 2004-12-09 | Mitsubishi Kagaku Iatron, Inc. | イムノクロマトグラフ法 |
| CA2510277C (en) * | 2003-09-23 | 2012-07-24 | Epinex Diagnostics, Inc. | Rapid test for glycated albumin |
| AU2004286284B2 (en) * | 2003-10-29 | 2011-08-25 | Mec Dynamics Corp. | Micro mechanical methods and systems for performing assays |
| US7541190B2 (en) * | 2005-02-07 | 2009-06-02 | Beckman Coulter, Inc. | Method of measurement of cellular hemoglobin |
| JP4957547B2 (ja) * | 2005-04-14 | 2012-06-20 | パナソニック株式会社 | ヘモグロビン誘導体の測定方法、それに用いる試薬組成物、測定キット、分析デバイス、及び分析システム |
| US8268625B2 (en) * | 2006-03-24 | 2012-09-18 | Arkray, Inc. | Method of measuring glycated hemoglobin concentration and concentration measuring apparatus |
| WO2007111283A1 (ja) * | 2006-03-24 | 2007-10-04 | Arkray, Inc. | グリコヘモグロビン濃度測定方法および濃度測定装置 |
| WO2007127616A2 (en) * | 2006-04-12 | 2007-11-08 | Benjamin Pless | Cavitation heating system and method |
| WO2008016193A1 (en) | 2006-07-29 | 2008-02-07 | I-Sens, Inc. | Electrochemical determination system of glycated proteins |
| CN101595386B (zh) * | 2007-01-30 | 2012-05-09 | 爱科来株式会社 | 吩噻嗪衍生物色素的检测方法及用于该方法的显色剂试剂 |
| CN101755207B (zh) * | 2007-10-30 | 2013-07-31 | 松下电器产业株式会社 | 血红蛋白及血红蛋白衍生物的测定方法、测定试剂盒 |
| CN101493467A (zh) * | 2008-01-25 | 2009-07-29 | 上海伊思柏生物科技有限公司 | 定量测定糖化蛋白质的方法 |
| KR101005559B1 (ko) | 2008-07-15 | 2011-01-05 | 주식회사 아이센스 | 바이오센서를 이용한 단백질 측정 장치 |
| WO2010009459A1 (en) * | 2008-07-18 | 2010-01-21 | Bayer Healthcare Llc | Methods, devices, and systems for glycated hemoglobin analysis |
| WO2010067612A1 (ja) | 2008-12-11 | 2010-06-17 | 積水メディカル株式会社 | 糖化ヘモグロビン含有試料の前処理法 |
| US20100167306A1 (en) * | 2008-12-26 | 2010-07-01 | Henry John Smith | Rapid test for glycated albumin in saliva |
| ES2536112T3 (es) * | 2009-05-20 | 2015-05-20 | Relia Diagnostic Systems, Inc. | Sistemas y métodos para determinar el porcentaje de glucohemoglobina |
| ES2961300T3 (es) * | 2010-03-31 | 2024-03-11 | Sekisui Medical Co Ltd | Método para analizar hemoglobinas |
| JP5906604B2 (ja) * | 2011-08-11 | 2016-04-20 | 東洋紡株式会社 | 全血検体の成分測定方法 |
| KR101207418B1 (ko) | 2012-02-10 | 2012-12-04 | 주식회사 아이센스 | 효소법을 이용하는 당화혈색소 정량분석용 용혈시약 조성물 |
| KR102280411B1 (ko) | 2014-05-06 | 2021-07-23 | 디아시스 디아그노스틱 시스템즈 게엠베하 | 에이치비에이1씨의 효소적 측정 |
| CN104062430B (zh) * | 2014-06-30 | 2016-03-30 | 洛阳普莱柯万泰生物技术有限公司 | 一种用于检测样品中流感病毒的试剂盒及其检测方法和应用 |
| EP3397971B1 (en) | 2015-12-30 | 2021-08-04 | W. Health L.P. | Method for determining the quantity of an hba1c in a blood sample |
| US20210278422A1 (en) * | 2018-09-12 | 2021-09-09 | Sekisui Medical Co., Ltd. | Reagent and method for measuring hemoglobins |
| CN110702894A (zh) * | 2019-10-10 | 2020-01-17 | 南京欧凯生物科技有限公司 | 一种直接测定糖化血红蛋白含量的检测方法 |
| CN112067566A (zh) * | 2020-08-28 | 2020-12-11 | 南开大学 | 一种用于糖化血红蛋白定量分析的比色传感器 |
| CN114441750A (zh) * | 2020-10-30 | 2022-05-06 | 深圳市瑞图生物技术有限公司 | 用于全血样本免疫五项测定的试剂、试剂盒、方法和装置 |
| CN113984689B (zh) * | 2021-10-25 | 2023-11-03 | 中元汇吉生物技术股份有限公司 | 一种测定谷胱甘肽还原酶的试剂盒 |
Family Cites Families (25)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4247533A (en) * | 1978-05-01 | 1981-01-27 | The Rockefeller University | Hemoglobin A1c radioimmunoassay |
| US4200435A (en) * | 1978-12-26 | 1980-04-29 | Abbott Laboratories | Determination of glycosylated hemoglobin in blood |
| JPS5861465A (ja) * | 1981-10-07 | 1983-04-12 | Mitsubishi Chem Ind Ltd | 血液の分析方法 |
| US4478744A (en) * | 1982-01-25 | 1984-10-23 | Sherwood Medical Company | Method of obtaining antibodies |
| HU186976B (en) * | 1982-10-01 | 1985-10-28 | Reanal Finomvegyszergyar | Process for determation of glucose containt of glucolized in non-ensimatic way proteins and reagent lutes for this process |
| US4529705A (en) * | 1983-06-06 | 1985-07-16 | Coulter Electronics, Inc. | Reagent for combined diluting and lysing whole blood |
| US4647654A (en) * | 1984-10-29 | 1987-03-03 | Molecular Diagnostics, Inc. | Peptides useful in preparing hemoglobin A1c immunogens |
| US4727036A (en) * | 1985-08-08 | 1988-02-23 | Molecular Diagnostics, Inc. | Antibodies for use in determining hemoglobin A1c |
| US4658022A (en) * | 1985-08-08 | 1987-04-14 | Molecular Diagnostics, Inc. | Binding of antibody reagents to denatured protein analytes |
| CA1339952C (en) * | 1984-10-29 | 1998-07-14 | William J. Knowles | Immunoassays for denatured protein analytes, particularly hb alc, and monoclonal antibodies thereto |
| EP0184787B1 (en) * | 1984-12-06 | 1991-04-03 | TECHNICON INSTRUMENTS CORPORATION(a Delaware corporation) | Cyanide-free hemoglobin reagent |
| DK145385D0 (da) * | 1985-03-29 | 1985-04-01 | Novo Industri As | Monoklonalt antistof til immunkemisk analyse |
| DE3532868A1 (de) * | 1985-09-14 | 1987-03-26 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren und reagenz zur bestimmung von glykosiliertem haemoglobin sowie hierzu geeignete verbindungen und verfahren zu deren herstellung |
| US4806468A (en) * | 1987-02-05 | 1989-02-21 | Becton, Dickinson And Company | Measurement of glycosylated hemoglobin by immunoassay |
| US4861728A (en) * | 1987-07-24 | 1989-08-29 | Becton, Dickinson And Company | Immunoassay of glycosylated hemoglobin using a labeled boron reagent |
| DE3733084A1 (de) * | 1987-09-30 | 1989-04-13 | Boehringer Mannheim Gmbh | Testtraeger zur analytischen bestimmung eines bestandteils einer koerperfluessigkeit |
| US4970171A (en) * | 1987-11-09 | 1990-11-13 | Miles Inc. | Denaturant reagents for convenient determination of hemoglobin derivatives in blood |
| JP2619900B2 (ja) * | 1988-01-27 | 1997-06-11 | 東亜医用電子株式会社 | 血液中の白血球およびヘモグロビンの測定用試薬および方法 |
| NO890029D0 (no) * | 1989-01-04 | 1989-01-04 | Axis Research | Nye modifiserte peptider og proteiner for in vitro diagnoser (diabetes). |
| IL94724A (en) * | 1989-07-13 | 1994-02-27 | Miles Inc | Decomposition of red blood cells and denaturation of hemoglobin by the use of lithium salts |
| JP2836865B2 (ja) * | 1989-10-23 | 1998-12-14 | 東亜医用電子株式会社 | 血液中の白血球およびヘモグロビンの測定用試薬 |
| JP2891302B2 (ja) * | 1990-03-01 | 1999-05-17 | シスメックス株式会社 | 血液中の白血球およびヘモグロビンの測定用試薬 |
| US5242832A (en) * | 1990-03-01 | 1993-09-07 | Toa Medical Electronics Co., Ltd. | Reagent for measurement of leukocytes and hemoglobin in blood |
| EP0456088B1 (en) * | 1990-05-09 | 1996-08-21 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Stabilized uric acid reagent |
| DE4135542A1 (de) * | 1991-10-28 | 1993-04-29 | Boehringer Mannheim Gmbh | Lagerfaehige proteinloesungen |
-
1992
- 1992-03-05 DE DE4206932A patent/DE4206932A1/de not_active Withdrawn
-
1993
- 1993-02-26 CZ CZ93291A patent/CZ29193A3/cs unknown
- 1993-03-01 IL IL104902A patent/IL104902A0/xx unknown
- 1993-03-01 SK SK14993A patent/SK14993A3/sk unknown
- 1993-03-01 AU AU33871/93A patent/AU652092B2/en not_active Ceased
- 1993-03-02 PL PL29791593A patent/PL297915A1/xx unknown
- 1993-03-03 EP EP93103349A patent/EP0559164B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1993-03-03 DE DE59310046T patent/DE59310046D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1993-03-03 PT PT93103349T patent/PT559164E/pt unknown
- 1993-03-03 AT AT93103349T patent/ATE193378T1/de active
- 1993-03-03 ES ES93103349T patent/ES2148190T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1993-03-03 DK DK93103349T patent/DK0559164T3/da active
- 1993-03-03 HR HR930253A patent/HRP930253A2/hr not_active Application Discontinuation
- 1993-03-03 NZ NZ247054A patent/NZ247054A/en not_active IP Right Cessation
- 1993-03-03 NO NO93930770A patent/NO930770L/no unknown
- 1993-03-04 CN CN93104037A patent/CN1081765A/zh active Pending
- 1993-03-04 CA CA002090981A patent/CA2090981C/en not_active Expired - Lifetime
- 1993-03-04 US US08/026,464 patent/US5541117A/en not_active Expired - Lifetime
- 1993-03-04 FI FI930975A patent/FI930975A/fi unknown
- 1993-03-04 ZA ZA931533A patent/ZA931533B/xx unknown
- 1993-03-04 HU HU9300596A patent/HUT70463A/hu unknown
- 1993-03-05 JP JP5045130A patent/JP2637677B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1993-03-05 SI SI9300108A patent/SI9300108A/sl unknown
- 1993-03-05 KR KR1019930003336A patent/KR930020162A/ko not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE59310046D1 (de) | 2000-06-29 |
| NZ247054A (en) | 1995-02-24 |
| HU9300596D0 (en) | 1993-05-28 |
| IL104902A0 (en) | 1993-07-08 |
| AU3387193A (en) | 1993-09-16 |
| ES2148190T3 (es) | 2000-10-16 |
| JP2637677B2 (ja) | 1997-08-06 |
| CA2090981C (en) | 1999-11-16 |
| PT559164E (pt) | 2000-10-31 |
| DE4206932A1 (de) | 1993-09-09 |
| FI930975A0 (fi) | 1993-03-04 |
| EP0559164B1 (de) | 2000-05-24 |
| FI930975A (fi) | 1993-09-06 |
| US5541117A (en) | 1996-07-30 |
| KR930020162A (ko) | 1993-10-19 |
| NO930770L (no) | 1993-09-06 |
| SI9300108A (en) | 1993-09-30 |
| AU652092B2 (en) | 1994-08-11 |
| CN1081765A (zh) | 1994-02-09 |
| SK14993A3 (en) | 1993-10-06 |
| CA2090981A1 (en) | 1993-09-06 |
| ZA931533B (en) | 1994-09-04 |
| PL297915A1 (en) | 1993-09-06 |
| HRP930253A2 (en) | 1995-10-31 |
| ATE193378T1 (de) | 2000-06-15 |
| JPH0611510A (ja) | 1994-01-21 |
| NO930770D0 (no) | 1993-03-03 |
| EP0559164A2 (de) | 1993-09-08 |
| CZ29193A3 (en) | 1994-01-19 |
| EP0559164A3 (hu) | 1994-01-26 |
| DK0559164T3 (da) | 2000-10-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HUT70463A (en) | Immunological method for determination of hemoglobin-derivate | |
| Kouzuma et al. | Study of glycated amino acid elimination reaction for an improved enzymatic glycated albumin measurement method | |
| US8318501B2 (en) | Methods for assaying percentage of glycated hemoglobin | |
| EP2211175B1 (en) | Method for measurement of hemoglobin and hemoglobin derivative, and measurement kit | |
| EP0154276B1 (en) | Specific binding assay employing anti-g6pdh as label | |
| EP2360471A1 (en) | Method for pre-treating sample containing glycosylated hemoglobin | |
| JPH08122335A (ja) | グリコヘモグロビン含有比測定用分析要素及び分析方法 | |
| WO1980000455A1 (en) | Colorimetric immunoassay employing a chromoprotein label | |
| CA1131114A (en) | Method and composition for direct determination of iron in blood serum | |
| EP0779513B1 (en) | Method for immunological determination of hemoglobin derivative and treating reagent for use therein | |
| JP4214648B2 (ja) | 糖化蛋白質測定試薬 | |
| US5342788A (en) | Method and standard solution for the determination of thyroxine (T4) or triiodothyronine (T3) | |
| CZ244493A3 (en) | SIMULTANEOUS DETERMINATION OF HbAlc AND VARIANTS OF HEMOGLOBIN AND GLYCOSYLATED HbAlc ANALOGS | |
| CN113125749B (zh) | 一种用于检测血清糖化白蛋白的试剂盒 | |
| EP0061071B1 (en) | Activated apoglucose oxidase, method of preparing it, its use in specific binding assay methods and reagent means and test kits containing it | |
| CN113125759A (zh) | 糖化血红蛋白检测试剂盒 | |
| EP1162462B1 (en) | Assay method for hemoglobin using lipoproteins | |
| EP1243924B1 (en) | Method for the selection of reagents and solid phase components in specific binding assays free of advanced glycosylation endproducts | |
| SHIM et al. | Simple Enzyme-immunoassay for Haptoglobin | |
| CA2120348A1 (en) | Immunological method of analysis | |
| JPS60152955A (ja) | 抱合ビリルビンの定量方法 | |
| JP2691575C (hu) |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| DFD9 | Temporary protection cancelled due to non-payment of fee |