HU231426B1 - Syndecan-3 45-384 aminosav közti régiójára specifikus ligandok alkalmazása neurodegenerativ kórképek kezelésére - Google Patents
Syndecan-3 45-384 aminosav közti régiójára specifikus ligandok alkalmazása neurodegenerativ kórképek kezelésére Download PDFInfo
- Publication number
- HU231426B1 HU231426B1 HUP1800420A HUP1800420A HU231426B1 HU 231426 B1 HU231426 B1 HU 231426B1 HU P1800420 A HUP1800420 A HU P1800420A HU P1800420 A HUP1800420 A HU P1800420A HU 231426 B1 HU231426 B1 HU 231426B1
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- syndecan
- region
- antibody
- amino acids
- brain
- Prior art date
Links
- 102000003698 Syndecan-3 Human genes 0.000 title claims description 50
- 108090000068 Syndecan-3 Proteins 0.000 title claims description 50
- 239000003446 ligand Substances 0.000 title claims description 25
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 title claims description 12
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 title claims description 7
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 title claims description 5
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 claims description 16
- 230000008499 blood brain barrier function Effects 0.000 claims description 8
- 210000001218 blood-brain barrier Anatomy 0.000 claims description 8
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 claims description 8
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 claims description 6
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 6
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 4
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims description 3
- 230000001839 systemic circulation Effects 0.000 claims description 3
- 239000002502 liposome Substances 0.000 claims description 2
- 239000002539 nanocarrier Substances 0.000 claims description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 17
- 108050006774 Syndecan Proteins 0.000 description 10
- 101000692107 Homo sapiens Syndecan-3 Proteins 0.000 description 9
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 9
- 102100035721 Syndecan-1 Human genes 0.000 description 8
- 102000043969 human SDC3 Human genes 0.000 description 8
- 229920002971 Heparan sulfate Polymers 0.000 description 6
- 108010004469 allophycocyanin Proteins 0.000 description 6
- DIOQZVSQGTUSAI-UHFFFAOYSA-N n-butylhexane Natural products CCCCCCCCCC DIOQZVSQGTUSAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 4
- 102000019361 Syndecan Human genes 0.000 description 4
- 108090000054 Syndecan-2 Proteins 0.000 description 4
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 4
- 102000008055 Heparan Sulfate Proteoglycans Human genes 0.000 description 3
- 102100037220 Syndecan-4 Human genes 0.000 description 3
- 108010055215 Syndecan-4 Proteins 0.000 description 3
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 3
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 3
- 102000054930 Agouti-Related Human genes 0.000 description 2
- 101710127426 Agouti-related protein Proteins 0.000 description 2
- CJLHTKGWEUGORV-UHFFFAOYSA-N Artemin Chemical compound C1CC2(C)C(O)CCC(=C)C2(O)C2C1C(C)C(=O)O2 CJLHTKGWEUGORV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 2
- 108090000368 Fibroblast growth factor 8 Proteins 0.000 description 2
- 102100021584 Neurturin Human genes 0.000 description 2
- 108010015406 Neurturin Proteins 0.000 description 2
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 description 2
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 2
- 230000000626 neurodegenerative effect Effects 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 102000005162 pleiotrophin Human genes 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- SQDAZGGFXASXDW-UHFFFAOYSA-N 5-bromo-2-(trifluoromethoxy)pyridine Chemical group FC(F)(F)OC1=CC=C(Br)C=N1 SQDAZGGFXASXDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010174 APPSwe Methods 0.000 description 1
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 1
- 108010090849 Amyloid beta-Peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000013455 Amyloid beta-Peptides Human genes 0.000 description 1
- 102100026376 Artemin Human genes 0.000 description 1
- 101710205806 Artemin Proteins 0.000 description 1
- 241000212384 Bifora Species 0.000 description 1
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001287 Chondroitin sulfate Polymers 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 description 1
- 102000010956 Glypican Human genes 0.000 description 1
- 108050001154 Glypican Proteins 0.000 description 1
- 101000874179 Homo sapiens Syndecan-1 Proteins 0.000 description 1
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101000692103 Mus musculus Syndecan-3 Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 description 1
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 108090000058 Syndecan-1 Proteins 0.000 description 1
- 102000003711 Syndecan-2 Human genes 0.000 description 1
- 102100026084 Syndecan-3 Human genes 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N alprazolam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N2C(C)=NN=C2CN=C1C1=CC=CC=C1 VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 235000011089 carbon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 230000008568 cell cell communication Effects 0.000 description 1
- 230000033077 cellular process Effects 0.000 description 1
- 229940059329 chondroitin sulfate Drugs 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000002121 endocytic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003038 endothelium Anatomy 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 229930004094 glycosylphosphatidylinositol Natural products 0.000 description 1
- 229910052734 helium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001307 helium Substances 0.000 description 1
- SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N helium atom Chemical compound [He] SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 1
- 210000004088 microvessel Anatomy 0.000 description 1
- 229910052754 neon Inorganic materials 0.000 description 1
- GKAOGPIIYCISHV-UHFFFAOYSA-N neon atom Chemical compound [Ne] GKAOGPIIYCISHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 1
- 210000004180 plasmocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000008054 signal transmission Effects 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L sulfate group Chemical group S(=O)(=O)([O-])[O-] QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 210000003478 temporal lobe Anatomy 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 1
- YFDSDPIBEUFTMI-UHFFFAOYSA-N tribromoethanol Chemical compound OCC(Br)(Br)Br YFDSDPIBEUFTMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229950004616 tribromoethanol Drugs 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/39541—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against normal tissues, cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2896—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against molecules with a "CD"-designation, not provided for elsewhere
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/569—Single domain, e.g. dAb, sdAb, VHH, VNAR or nanobody®
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Description
P1800420
Syndecan-3 45-384 aminosav közti régiójára specifikus ligandok alkalmazása neurodegenerativ kórképek kezelésére.
Találmányunk syndecan-3 45-384 aminosav közti régiójára specifikus antitestek, nanotestek, makromolekuláris ligandok (együttesen ligandok) önmagukban vagy egy aktív hatóanyaggal együtt neurodegenerativ kórképek kezelésére való alkalmazására vonatkozik.
A sejtek és környezetük közötti kommunikáció, mely biztosítja a többsejtű szervezet integritását, a sejtfelszíni receptor-ligand kölcsönhatásokon alapszik. A sejtfelszíni membránfehérjék egyik legnépesebb családja, a heparán szulfát proteoglikánok (HSPGk) rendkívül változatos térszerkezetű heparán szulfát (HS) oldalláncaiknak köszönhetően nagyszámú ligand (citokin, növekedési faktor stb.) receptorául szolgálva fontos szerepet töltenek be a sejtélettani folyamatokban [Williams and Fuki 1997 (Curr. Opin. Lipidol 8(5), 253-262), Bishop, Schuksz etal. 2007 (Nature 446(7139) 1030-1037), Couchman 2010 (Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 26, 89-114), lozzo and Karamanos 2010 (FEBS J. 277(19), 3863)].
Az emlős sejteken kétfajta HSPG található: az elsősorban a központi idegrendszerben (KIR-ben) kifejeződő, a membránhoz a glikozil-foszfatidil-inozitol által lehorgonyzóit glypicanok, és a mindenütt jelen lévő transzmembrán syndecanok [Christianson and Belting 2014(Matrix Bioi. 35, 51-55)].
A syndecanok (SDC) négy izoformája ismert: a hám- és plazmasejteken kifejeződő syndecan-1, az endotélen és fibroblasztokon megtalálható syndecan-2, a központi idegrendszerben expresszálódó syndecan-3, és az általánosan kifejeződő syndecan-4 [Tkachenko, Rhodes et al. 2005 (Circ. Res. 96(5), 488-500), Afratis, Nikitovicetal. 2017 (FEBS. J. 284(1), 27-41)] (Lábra). (Sl: szignál szekvencia; HS: heparán-szulfát kötő régió; SKD: sejtkötő domain; TM: transzmembrán domain; I II: heparán-szulfát láncok; «: kondroitin-szulfát láncok).
A jelátvitelben betöltött szerepük mellett azonban a SDC-ok a sejtek endocitózisában is részt vesznek, specifikus ligandokhoz (fehérjék, peptidek, vírusok) történő kötődésük !
m SZTNH-100369149
CM (Η © N Θ W (N ugyanis egy részleteiben még nem teljesen tisztázott endocitikus folyamatot indukál [Christianson and Belting 2014(Matrix Bioi. 35, 51-55]).
Kiemelendő, hogy a syndecan dependens endocitózist ezidáig a syndecan-4 esetében jellemezték, egyéb syndecanok esetében ez a folyamat még kevésbé ismert [Letoha, Keller-Pinteretal. 2010 (Biochim. Biophys. Acta 1798(12), 2258-2265), Letoha, Kolozsi et al. 2013 (Eur. J. Pharm. Sci 49(4), 550-555), Szilák, Letoha et al. 2013 (Ther. Deliv. 4(12), 1479-1481), EP 2078195],
Syndecan-3 (N-syndecan) egy 442 aminosav hosszú transzmembrán fehérje, amely leginkább az idegsejteken fejeződik ki [Tkachenko, Rhodes et al. 2005 (Ther. Deliv. 4(12), 1479-1481)]. A syndecan-3 N-terminálisan négy konzervált glükózaminoglikán kötőhelyet ill. a membránhoz közel egyedi treonin-gazdag és mucinszerű régiókat tartalmaz. A syndecan-3 heparán szulfát régiója számos növekedési faktor, így az AgRP (Agouti related protein), HB-GAM (heparin binding growth associated molecule), a GDNF (glial cell line derived growth factor), NRTN (neurturin), artemin és a NOTCH kötőhelyéül szolgál [Bespalov, Sidorova etal. 2011 (J Cell Biol. 192(1):153-169), Creemers, Pritchard etal. 2006 (Endocrinology. 147(4): 1621-1631), Nolo, Kaksonen et al. 1995 (Neurosci Lett. 191(1-2): 39-42), Pisconti, Cornelison et al. 2010 (J Cell Biol. 190(3): 427-441), Reizes, Benoit et al. 2003 (Ann N Y Acad Sci. 994: 66-73)]. A syndecan-3 a vírusfertőzésekben is fontos szerepet tölt be: a syndecan-3 a HIV-1 virus receptoraként segíti annak T-sejtekhez történő transmisszióját [de Witte, Bobardt et al. 2007 (Nat. Acad. Sci. USA 10449, 19464-19469)].
A syndecan-3 a memória és a testsúly/metabolizmus szabályozásában is szerepet játszik [Kaksonen, Pavlov et al. 2002 (Mol. Cell. Neurosci. 21(1), 158-172), Strader, Reizes et al. 2004 (J. Clin. Invest. 114(9(, 1354-1360), Reizes, Benoit et al. 2008 (Int. J. Bioche. Cell. Bioi. 40(1), 28-45)].
A syndecan-3 szintje, a syndecan-4-gyel egyetemben megemelkedik Alzheimeres betegek agyában [Liu, Zhao et al. 2016 (Sci. Trans. Med. 8(332), 332-344)].
Ismert, hogy a syndecan-3 jelen van a vér-agy-gát alapját jelentő erekben, receptorként segítve a gyulladásos fehérvérsejtek vér-agy-gáton történő átjutását, de irodalmi adatok a syndecan-3 jelenlétét a nagyobb agyi erekre teszik [Floris, van den Born et al. 2003 (J. Neuropathol. Exp. Neurol. 62(7), 780-790)].
Kísérleteink során humán halántéklebeny mikroerekböl izolált hCMEC/D3 endotél sejtek syndecan expresszióját vizsgáltuk: 6 x 105 sejtet inkubáltuk APC (allophycocyanin)-jelölt humán syndecan ellenanyagokkal (humán syndecan APC-konjugált antitestek, gyártó R&D Systems) a gyártó előírásai szerint, majd a kötődést FACScan Becton Dickinson flow citométerrel vizsgáltuk. A relatív syndecan expressziót a kontrolhoz viszonyítva mértük. A hCMEC/D3 endotél sejtek syndecan expressziójának vizsgálata magas syndecan-3 expressziót mutatott (2. ábra)
Humán hCMEC/D3 endotél sejtek fluoreszcensen jelölt syndecan-3 ellenanyaggal (humán syndecan-3 APC-konjugált antitest [a rekombináns human syndecan-3 Gln48Lys383 régiója ellen termelt poliklonális kecske IgG, gyártó R&D Systems, cat. no. FAB3539A]) történő kezelésekor (inkubáció 3 h-ig 37 °C-on, 1.25 ug/mL koncentráció mellett) a fluoreszcensen jelölt syndecan-3 ellenanyag megjelent a sejtek belsejében, ami arra utalt, hogy a syndecan-3 a rá specifikus ellenanyagot kötve endocitálódik az endotél sejtek belsejébe (3 ábra).
A kísérlet során hCMEC/D3 endotél sejteket kezeltünk APC-jelölt syndecan-3 ellenanyaggal (humán syndecan-3 APC-konjugált antitest [rekombináns human syndecan-3 Gln48-Lys383 régiója ellen termelt poliklonális kecske IgG, gyártó R&D Systems, cat. no. FAB3539A]) 37°C-on 3 h-ig 1.25 ug/mL koncentráció mellett. A 3 órás syndecan-3 ellenanyag kezelést követően a sejteket 15 percig tripszineztük (Nakase et al. Biochemistry 46(2) (2007) 492-501), így távolítva el a külsőleg tapadt ellenanyagot, lehetővé téve, hogy a flow citométer csak az intracelluláris fluoreszcenciát mérje. (3. ábra: A: Konfokális mikroszkóp felvételek a 37°C-on syndecan-3 ellenanyaggal kezelt hCMEC/D3 endotél sejtekről. B: Flow cytometriás mérési eredmények).
In vivo vizsgálatok során minimum 6 hónapos nőstény és hím C57BL/6 ill. APPSWETau egereket (Taconic Biosciences) injektáltuk intravénásán (farokvénába oltva, dózis 750 ug/kg) syndecan-3 elleni antitesttel (egér syndecan-3 Ala45-Glu384 régiója ellen termelt monoklonális patkány lgG2A vagy poliklonális nyúl IgG, R&D Systems, cat. no. AF2734 ill. MAB2734, 200 uL steril PBS-be feloldva). A kontroll egereket 200 uL PBSsel kezeltük ugyanígy. A vad típusú C57BL/6 ill. APPSWE-Tau egereket random soroltuk be a syndecan-3 elleni antitesttel kezelt ill. a kontroll csoportokba. A kezelés után 1 órával az egereket Avertinnel elaltattuk, transzkardinálisan perfundáltuk jéghideg PBS-sel (2 ml/perc, 8 percig). A perfundálás után az agyat izoláltuk, frontálisan
Irt H
W &
ft Η far ft © ft ft kettévágtuk és szárazjégben lefagyasztottuk a további Western blot és mikroszkópos vizsgálatokhoz. A Western blothoz az agymintákat in Complete Mini EDTA-free protease inhibitor koktéllal (Roche) kiegészített, 1% NP-40/PBS-ben elkészített lízis pufferben (QIAGEN) homogenizáltuk, majd a szöveti lizátumokat 15%-os gélen megfuttattuk. A syndecan-3 Western blottal történő kimutatáshoz HRP-jelölt anti-nyúl IgG-t (SinoBiological) használtunk (4A. ábra). Az immunhisztokémiához az egerek agyi mintáit 48 óráig 4% paraformaldehidben fixáltuk, majd 30 pm vastagságú szagitális metszeteket szeltünk szánkás Leica mikrotómmal (n = 4 egér per csoport). A metszeteket Alexa 635 jelölt anti-nyúl ellenanyaggal kezeltük. A fluoreszcencia eloszlását Olympus FV1000 konfokális mikroszkóppal vizsgáltuk. A vörös fluoreszcencia jel gerjesztésére hélium / neon lézert (gerjesztés 543 nm-én) és 550-635 nm sávszűrőt használtuk. A felvételek készítésekor használt lézer teljesítmény mindegyik kísérletben azonos volt. Az így kapott agymetszetek áttanulmányozásakor azt kaptuk, hogy syndecan-3 elleni antitest megjelent az egerek agyában és ott a neuronokbán feldúsult (4B. ábra). A kontrol (PBS) ill. syndecan-3 ellenanyaggal kezelt egerek (vad típus és APPSwe) agyi homogenizátumaival végzett Westem-blot (A) és mikroszkópos (B) vizsgálatok igazolták a syndecan-3 elleni antitest jelenlétét a syndecan-3 kezelt egerek agyában.
A következőkben a syndecan-3 ellenanyag beta-amyloid (Αβ) idegsejtekhez történő kötődését vizsgáltuk. A syndecan-3-at endogén módon expresszáló SH-SY5Y sejteket egyik 5 pM fluoreszcensen jelölt (FITC) Αβ1 -42-vel 37C°C-on 18 órán át humán 1.25 ug/mL syndecan-3 antitest (rekombináns human syndecan-3 Gln48-Lys383 régiója ellen termelt poliklonális kecske IgG, gyártó R&D Systems, cat. no. FAB3539A) jelenlétében vagy antitest nélkül vizsgáltuk. Az inkubációt követően a sejteket FACScan flow cytométerrel (Becton Dickinson FACScan) vizsgáltuk. A vizsgálatok azt mutatták, hogy syndecan-3 ellenanyag szignifikánsan (~ 40%-kal) gátolta az Αβ1-42 SH-SY5Y sejtekhez való kötődését (5A. ábra). A flow cytometriás eredményeket pásztázó elektronmikroszkóppal (JEOL JSM-7100F/LV) is igazoltuk: a humán syndecan-3 antitest (rekombináns human syndecan-3 Gln48-Lys383 régiója ellen termelt poliklonális kecske IgG, gyártó R&D Systems, cat. no. FAB3539A) SH-SY5Y sejtekhez adva (1.25 ug/mL) csökkenti a sejtek felszínéhez kapcsolódó és ott aggregálódó Αβ1-42 mennyiségét (az SH-SY5Y 5 pM Αβ1-42-vel 18 órán át inkubáltuk 37C°C-on syndecan-3 jelenlétében vagy nélküle - 5B. ábra).
Találmányunk alapja az a meglepő felismerés, hogy a
a.) a syndecan-3 45-384 aminosav közti régiójára specifikus mono vagy bispecifikus antitestek, nanotestek, makromolekuláris ligandok (együttesen ligandok) a syndecan-3-on keresztül képesek az agyba jutni és képesek a hozzájuk kötött vér-agy-gát impermeábilis hatóanyagokat az agyba juttatni,
b.) a syndecan-3 antitestet, nanotestet, makromolekuláris ligandot (együttesen ligandok) a szisztémás keringésbe juttatva a syndecan-3 antitest, nanotest, makromolekuláris ligand a vér-agy-gáton átjutva az agyba kerül, ahol a syndecan-3-hoz kötődve gátolja a syndecan-3 neurodegenerációban betöltött szerepét, így a neurodegenerációs (Alzheimer / Parkinson-kór) kórképek kezelésére alkalmazható.
Syndecan-3 ligandként (antitestként, ellenanyagként) polipeptidek, poliszacharidok, nukleinsavak vagy más kis molekulájú, valamely élő szervezetben előforduló, vagy szintetikusan előállított olyan anyagok, amelyek a syndecan-3 45-384 aminosav közti régiójához specifikusan kapcsolódni képesek, alkalmazhatóak. A technika állása ismeretében szakember ezen ligandokat ki tudja választani.
Találmányunk syndecan-3 45-384 aminosav közti régiójára specifikus antitestek, nanotestek, makromolekuláris ligandok (együttesen ligandok) önmagukban vagy egy aktív hatóanyaggal együtt neurodegenerativ kórképek kezelésére való alkalmazására vonatkozik.
A találmány szerint a vér-agy-gát endotel sejtjei által expresszált syndecan-3 molekulákhoz való kötődésre specifikusan alkalmas, a syndecan-3 45-384 aminosav közti régiójára specifikus antitestek, nanotestek, makromolekuláris ligandok önmagukban vagy egy aktív hatóanyaggal együtt való agyba juttatására a szisztémás keringés kerül alkalmazásra.
Bispecifikus antitest, nanotest vagy makromolekuláris ligand alkalmazásakor a vér-agy gáton történő átjutást az antitest, nanotest vagy makromolekuláris ligand a syndecan-3 45-384 aminosav közti régiójára való specifitása biztosítja, míg az antitest, nanotest
IK
W w
ft © ft w ft vagy makromolekuláris ligand egyéb célpontra vonatkozó specifitása biztosítja az agyba jutott antitest egyéb célponthoz történő kötődését.
A syndecan-3 támadáspontú antitest, nanotest vagy makromolekuláris ligand önmagában vagy hatóanyaghoz kapcsolva a vér-agy-gáton történő áthaladás után az idegsejteken kifejeződő endogén syndecan-3-hoz kötődve megakadályozza a syndecan-3 neurodegenerációs kórképekben kifejtett szerepét, így az agyba jutva neurodegenerációs kórképekben terápiás ágensként alkalmazható.
A syndecan-3 antitestet, nanotestet (melyek lehetnek vagy mono vagy bispecifikusak) vagy makromolekuláris ligandot (mely lehet mono vagy bispecifikus), illetve a hozzájuk kapcsolt hatóanyagot előnyösen hordozóhoz (liposzóma, nanohordozó, peptid) kötve alkalmazzuk.
Claims (4)
- Szabadalmi igénypontok1 .) Syndecan-3 45-384 aminosav közti régiójára specifikus antitestek, nanotestek, makromolekuláris ligandok önmagukban vagy egy aktív hatóanyaggal együtt neurodegenerativ kórképek kezelésére való alkalmazásra.
- 2 .) Az 1. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy syndecan-3 45-384 aminosav közti régiójára specifikus antitestet alkalmazunk.
- 3 .) Az 1. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy a vér-agy-gát endotel sejtjei által expresszált syndecan-3 molekulákhoz való kötődésre specifikusan alkalmas, a syndecan-3 45-384 aminosav közti régiójára specifikus antitestek, nanotestek, makromolekuláris ligandok önmagukban vagy egy aktív hatóanyaggal együtt való agyba juttatására a szisztémás keringés kerül alkalmazásra.
- 4 .) A 3. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy az adott esetben hatóanyaghoz kapcsolt syndecan-3 antitestet, nanotestet vagy makromolekuláris ligandot egyéb hordozóhoz (liposzóma, nanohordozó, pepiid) kötve alkalmazzuk.a meghatalmazott ft © ft © ft ftIHIIHIIHISZTNH-100369150
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| HUP1800420A HU231426B1 (hu) | 2018-12-05 | 2018-12-05 | Syndecan-3 45-384 aminosav közti régiójára specifikus ligandok alkalmazása neurodegenerativ kórképek kezelésére |
| PCT/HU2019/000041 WO2020115513A1 (en) | 2018-12-05 | 2019-12-05 | Brain targeted drug delivery method via syndecan-3 |
| US17/311,193 US20220002433A1 (en) | 2018-12-05 | 2019-12-05 | Brain targeted drug delivery method via syndecan-3 |
| EP19842611.6A EP3911362A1 (en) | 2018-12-05 | 2019-12-05 | Brain targeted drug delivery method via syndecan-3 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| HUP1800420A HU231426B1 (hu) | 2018-12-05 | 2018-12-05 | Syndecan-3 45-384 aminosav közti régiójára specifikus ligandok alkalmazása neurodegenerativ kórképek kezelésére |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HUP1800420A1 HUP1800420A1 (hu) | 2020-06-29 |
| HU231426B1 true HU231426B1 (hu) | 2023-08-28 |
Family
ID=89992809
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HUP1800420A HU231426B1 (hu) | 2018-12-05 | 2018-12-05 | Syndecan-3 45-384 aminosav közti régiójára specifikus ligandok alkalmazása neurodegenerativ kórképek kezelésére |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20220002433A1 (hu) |
| EP (1) | EP3911362A1 (hu) |
| HU (1) | HU231426B1 (hu) |
| WO (1) | WO2020115513A1 (hu) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| HU231462B1 (hu) * | 2020-07-22 | 2024-01-28 | Pharmacoidea Kf | Diagnosztikai eljárás az Alzheimer-kór vérből történő kimutatására |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102333447B (zh) * | 2008-12-04 | 2018-07-31 | 兰肯瑙医学研究所 | 用于治疗和预防晶状体纤维化疾病的组合物和方法 |
| US10059761B2 (en) * | 2014-03-12 | 2018-08-28 | Prothena Biosciences Limited | Anti-Laminin4 antibodies specific for LG4-5 |
-
2018
- 2018-12-05 HU HUP1800420A patent/HU231426B1/hu unknown
-
2019
- 2019-12-05 WO PCT/HU2019/000041 patent/WO2020115513A1/en unknown
- 2019-12-05 EP EP19842611.6A patent/EP3911362A1/en active Pending
- 2019-12-05 US US17/311,193 patent/US20220002433A1/en active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP3911362A1 (en) | 2021-11-24 |
| WO2020115513A1 (en) | 2020-06-11 |
| US20220002433A1 (en) | 2022-01-06 |
| HUP1800420A1 (hu) | 2020-06-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK2760463T3 (en) | REGULATION OF SODIUM CHANNELS USING PLUNC PROTEINS | |
| Yang et al. | Enhanced nose-to-brain delivery of siRNA using hyaluronan-enveloped nanomicelles for glioma therapy | |
| Rawat et al. | Inflammasome up-regulation and activation in dysferlin-deficient skeletal muscle | |
| Qosa et al. | Enhanced brain amyloid-β clearance by rifampicin and caffeine as a possible protective mechanism against Alzheimer's disease | |
| Kanda et al. | (Pro) renin receptor is associated with angiogenic activity in proliferative diabetic retinopathy | |
| US20200407726A1 (en) | Methods and pharmaceutical compositions for treating tubulin carboxypeptidases associated diseases | |
| US20100216703A1 (en) | Inhibitors of PDE4 and Methods of Use | |
| US9549967B2 (en) | Regulation of sodium channels by PLUNC proteins | |
| Lenhart et al. | GRAF1 deficiency blunts sarcolemmal injury repair and exacerbates cardiac and skeletal muscle pathology in dystrophin-deficient mice | |
| Maldonado et al. | Systemically administered wound-homing peptide accelerates wound healing by modulating syndecan-4 function | |
| HU231426B1 (hu) | Syndecan-3 45-384 aminosav közti régiójára specifikus ligandok alkalmazása neurodegenerativ kórképek kezelésére | |
| Gretenkort et al. | Neuroimmunomodulatory properties of polysialic acid | |
| Aoki et al. | Close association of aquaporin-2 internalization with caveolin-1 | |
| US20080027025A1 (en) | Protection From And Treatment Of Prion Protein Infection | |
| Jiang‐Shieh et al. | Distribution and expression of CD200 in the rat respiratory system under normal and endotoxin‐induced pathological conditions | |
| Vieweg et al. | Towards deciphering the Nt17 code: How the sequence and conformation of the first 17 amino acids in Huntingtin regulate the aggregation, cellular properties and neurotoxicity of mutant Httex1 | |
| Loers et al. | Interplay in neural functions of cell adhesion molecule close homolog of L1 (CHL1) and Programmed Cell Death 6 (PDCD6) | |
| US9217013B2 (en) | Treatment of amyloidoses using myelin basic protein and fragments thereof | |
| US8399416B2 (en) | Method of using heparin binding motif for treating asthma | |
| CN113748123B (zh) | 用于治疗肺部炎症的组合物 | |
| TWI334784B (en) | Compositions and methods for suppression of amyloid plaque formation associated with neurodegenerative disorders | |
| US20230296629A1 (en) | A diagnostic blood test method for the detection of alzheimer's disease | |
| Kim et al. | Suppression of receptor for advanced glycation end products improves angiogenic responses to ischemia in diabetic mouse hindlimb ischemia model | |
| Kakogiannos et al. | GPR126 is a specifier of blood-brain barrier formation in the mouse central nervous system | |
| HK40061949A (en) | Composition for treatment of lung inflammation |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FA9A | Lapse of provisional patent protection due to relinquishment or protection considered relinquished |