[go: up one dir, main page]
More Web Proxy on the site http://driver.im/

HU220251B - Fényérzékenyítő anyagok in vivo transzkután aktiválása a vérben - Google Patents

Fényérzékenyítő anyagok in vivo transzkután aktiválása a vérben Download PDF

Info

Publication number
HU220251B
HU220251B HU9500814A HU9500814A HU220251B HU 220251 B HU220251 B HU 220251B HU 9500814 A HU9500814 A HU 9500814A HU 9500814 A HU9500814 A HU 9500814A HU 220251 B HU220251 B HU 220251B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
bpd
light
blood
cells
mice
Prior art date
Application number
HU9500814A
Other languages
English (en)
Other versions
HUT70966A (en
Inventor
Anna M. Richter
Original Assignee
Quadra Logic Technologies Inc.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Quadra Logic Technologies Inc. filed Critical Quadra Logic Technologies Inc.
Publication of HUT70966A publication Critical patent/HUT70966A/hu
Publication of HU220251B publication Critical patent/HU220251B/hu

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K41/00—Medicinal preparations obtained by treating materials with wave energy or particle radiation ; Therapies using these preparations
    • A61K41/0057—Photodynamic therapy with a photosensitizer, i.e. agent able to produce reactive oxygen species upon exposure to light or radiation, e.g. UV or visible light; photocleavage of nucleic acids with an agent
    • A61K41/0071—PDT with porphyrins having exactly 20 ring atoms, i.e. based on the non-expanded tetrapyrrolic ring system, e.g. bacteriochlorin, chlorin-e6, or phthalocyanines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/365—Lactones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/409—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil having four such rings, e.g. porphine derivatives, bilirubin, biliverdine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Radiation-Therapy Devices (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

A találmány fényérzékennyé tevő farmakoterápiás anyagokkal kapcsolatos. Specifikusan, a találmány olyan módszerrel kapcsolatos, melyben vér eredetű célsejteket pusztítunk el vagy gyengítünk, mely célsejtek fényérzékennyé tevő anyagot vesznek fel a transzkután besugárzás hatására; ezzel a módszerrel a célsejteket gyengítjük vagy elpusztítjuk, és a nem célsejteket viszonylag érintetlenül hagyjuk.
A fotodinamikus terápia egy fényérzékennyé tevő vegyület bejuttatását, majd ezt követően a szövet mely szövet a fényérzékennyé tevő vegyületet szelektíven magában foglalja - fénnyel való besugárzását foglalja magában. A megfelelően magas koncentrációjú fényérzékennyé tevő vegyületet tartalmazó célszövet szelektíven abszorbeálja a fényt, mely azt eredményezi, hogy a közvetlen környezetében levő sejtek gyengülnek vagy elpusztulnak. Az 5,095, 030 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás olyan eljárásokat ír le, melyekben fényérzékennyé tevő vegyületet adnak állatoknak, melyeket ezután külső fényforrással sugároznak be. Például ezen találmány 5. példája egerek P815 tumorsejtekkel való szubkután injektálását írja le, melyek aztán kitapintható tumorrá fejlődnek. Ezután fényérzékennyé tevő vegyületet injektálunk az egerekbe, majd az állatok 3 órán keresztül sötétben való tartása után tumorjaikat erős fénynek tesszük ki. A kezelt állatok túlélési aránya a kezeletlen kontrollokéhoz képest megnő. Hasonlóképpen a találmány 8. példája rhabdomyosarcoma rendszert ír le egerekben, hasonló eljárással. így ezek a példák lokalizált szilárd tumorok kezelésére irányulnak, ahol a kívülről alkalmazott fényt irányítjuk a tumorra. Ezekben az esetekben a célszövet nem a véráramban található, ahol a kezelés során el kell kerülni a véredények és a nem célsejtek károsítását.
A 4,960,408 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás a véráram tartalmának (HIV-vírus és fertőzött T-sejtek) fotoferezissel való kezelését írja le. Ebben a technikában a beteg vérét egy testen kívüli készüléken vezetik keresztül, melyben a vér fehérvérsejtfrakcióját UV fénynek teszik ki, mielőtt a sejtek visszakerülnek a betegbe.
A benzoporfirinszármazékok (BPD) vörös fénnyel (400-900 nm) való kombinálásáról azt írják, hogy hatékonyan távolítja el a szabad vírusokat és a vírusok által fertőzött sejteket a rögzített vérkészítményekből és a virémiás macskákból nyert teljes vérből. A vörösvértestek életképesnek tűnnek a vírusölő kezelés után is (North és munkatársai, Blood cells, 18:129-40,1992).
A BPD magasabb affinitást mutat a tumorszövetekkel szemben, ideértve a leukémiás sejteket is, mint a normális nem rosszindulatú sejtekkel szemben (Jaimeson és munkatársai, Leukémia Rés., 14:209-219,1990).
Az 1992. március 10-én megjelent 5,095,030 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás különböző hullámhossz-specifikus citotoxikus anyagokat ír le, melyeket általánosan „zöld porfirinekként” jelöl. Ezek a vegyületek porfirinszármazékok, melyeket a Diels-Alder-reakcióval módosítottak, az abszorpciós hullámhossz hosszabb hullámhosszra való emelésének céljából. Ez néhány kedvező tulajdonságot eredményez a hematoporfirinszármazékokhoz képest, például ezen vegyületek általános fotodinamikus terápiában való használatakor. Ahogy a találmányban is részletezzük, ezek a citotoxikus anyagok szisztematikus alkalmazásukkor nemkívánatos sejtekben lokalizálódnak, különösen tumorsejtekben vagy patogén vírusokban, és az ezt követő fénnyel való besugárzás - amit ezek a vegyületek abszorbeálnak - olyan átalakulást okoz bennük, ami a citotoxicitásukat befolyásolja.
Az 1992. február 5-én bejelentett 6,074,666 lajstromszámú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás porfirin fényérzékennyé tevő anyagok liposzómáinak előállítását írja le.
A találmány eljárást biztosít a fényérzékennyé tevő anyagot szelektíven akkumuláló célsejtek elpusztítására vagy gyengítésére, ahol a célsejtek egy intakt állat véráramában vannak. A véráramban és az állatban azonban vannak nem célsejtek is. A találmány magában foglalja az intakt állat legalább egy részének transzkután módon való, olyan tetszőleges intenzitású besugárzását, mely hatékony a célsejtek szelektív gyengítésében vagy elpusztításában, és a nem célsejteket viszonylag érintetlenül hagyja.
Egy másik találmány szerinti megoldásban a találmányt olyan célsejtek esetében használjuk, melyek sokkal gyorsabban szaporodnak, mint a nem célsejtek. Egy másik megoldásban a célsejtek lehetnek leukémiasejtek, vírust tartalmazó sejtek, parazitát, baktériumot, szabad vírusokat, a véren belüli fertőző anyagokat tartalmazó sejtek.
Míg a találmány bármely fényérzékennyé tevő anyag használatát biztosítja, előnyösen az anyagot a klorinok (mint például a klorin e6), a bakterioklorinok, a ftalocianinok, a porfirinek, a purpurinek, merocianinok, pszoralének és prodrogok (mint például a δaminolevulinsav - mely a szövetben protoporfirin drogot képes létrehozni - közül szelektáljuk. Egy másik megoldás szerint a BPD-MA és nátrium-porfimer a fényérzékennyé tevő anyagok.
Az 1A. ábra a fénykamra által sugárzott fény spektrumát mutatja, az 1B. ábra a BPD-t aktiváló fény spektrumát mutatja.
A 2. ábra a liposzómás BPD egérbe való injektálása [20 pg/egér (0,9 mg/kg)] után különböző időpontokban mért egérplazma BPD-koncentrációkat mutatja.
A 3. ábra a liposzómás BPD egérbe való injektálása [20 pg/egér (0,9 mg/kg)] után különböző időpontokban mért egérplazma BPD-koncentrációit mutatja olyan egerek esetében, melyeket fénynek tettünk ki, valamint a kontrollegerek esetében, melyeket sötétben tartottuk.
A 4. ábra a különböző időpontokban fénynek kitett egerek vérében lévő BPD (1 pg/ml) in vitro fotodegradációját mutatja.
Az 5. ábra a fénynek kitett egérvérben levő fotodegradált BPD in vivő és in vitro százalékát ábrázolja a fénynek ki nem tett vérben levő BPD-lebontáshoz viszonyítva.
A 6. ábra a vörös fénynek (600-900 nm) kitett egérvérben levő fotodegradált BPD in vitro és in vivő (tel2
HU 220 251 Β jes vérbesugárzás) százalékát ábrázolja a fénynek ki nem tett vérben levő BPD-lebontáshoz viszonyítva.
A találmány a fényérzékennyé tevő anyagot szelektíven akkumuláló vér eredetű célsejtek elpusztításának vagy gyengítésének módszere, miközben a nem célsejteket viszonylag érintetlenül hagyja. A találmány magában foglalja az intakt állat legalább egy részének transzkután módon való, olyan tetszőleges intenzitású besugárzását, mely hatékony a célsejtek szelektív gyengítésében vagy elpusztításában.
A találmány szerinti használatban a „célsejtek” azok a sejtek, melyeket ezzel a kezelési módszerrel szándékozunk gyengíteni vagy elpusztítani. A célsejtek felveszik a fényérzékennyé tevő anyagot; majd ha megfelelő besugárzást alkalmazunk, a célsejtek elpusztulnak vagy meggyengülnek. Célsejt lehet bármely, a vérben található sejt. A célsejtek közé tartoznak az ezekre való korlátozás nélkül a leukémia-sejtek, a vírust tartalmazó sejtek, a parazitát tartalmazó sejtek. A célsejtek közé tartoznak azok a sejtek is, melyek gyors osztódáson mennek keresztül a nem célsejtekhez viszonyítva. A „célsejt” kifejezés magában foglalja az ezekre való korlátozás nélkül a mikroorganizmusokat is, mint például baktériumokat, vírusokat, parazitákat és más fertőző anyagokat. így a „célsejt” fogalom nem korlátozódik csupán élő sejtekre, magában foglal olyan fertőző részecskéket is, mint a vírusok.
A „nem célsejt” kifejezés olyan intakt állatok sejtjeit jelenti, mely sejteket nem szándékozunk gyengíteni vagy elpusztítani ezzel a kezelési eljárással. Ezen nem célsejtek közé tartoznak az ezekre való korlátozás nélkül az egészséges vérsejtek, a sugárzásnak kitett véredényeket felépítő normális sejtek és a sugárzásnak kitett véredényeket körülvevő szövetek sejtjei.
Az „elpusztítás” kifejezés a kívánt célsejtek megsemmisítését jelenti. A „gyengítés” a célsejt oly módon való megváltoztatását jelenti, hogy gátolja annak funkcióját. Például North és munkatársai megfigyelték, hogy a BPD-vel kezelt, vírussal fertőzött T-sejtek fénynek való kitevése után lyukak fejlődtek ki a T-sejtmembránon, melyek addig nőnek, míg az egész membrán teljesen le nem bomlik (Blood Cells, 18:129-40, 1992). A célsejteket akkor is gyengítettnek vagy elpusztítottnak tekintjük, ha a célsejteket végül a makrofágok tüntetik el.
A „fényérzékennyé tevő anyag” olyan kémiai vegyület, mely egy vagy több típusú szelektált célsejtben lokalizálódik és amikor besugárzásnak tesszük ki, elnyeli a fényt, ami a célsejtek gyengítését vagy elpusztulását eredményezi. Gyakorlatilag bármely olyan kémiai vegyület felhasználható a találmányban, mely a szelektált célsejtben lokalizálódik és abszorbeálja a fényt. Előnyösen a kémiai vegyület nem toxikus arra az állatra nézve, mely esetében használjuk, vagy elő lehet állítani nem toxikus készítmények formájában is. Előnyösen a kémiai vegyület fotodegradáló formája sem toxikus. A fényérzékennyé tevő vegyületek átfogó listája a Kreimer-Bimbaum-leírásban (Sem. Hematol., 26:157-73,1989) található meg. A fényérzékeny vegyületek közé tartoznak az ezekre való korlátozás nélkül a klorinok, bakterioklorinok, a ftalocianinok, a porfirinek, a purpurinek, a merocianinek, a pszoralének és a prodrogok, mint a δaminolevulinsav - mely olyan drogokat hozhat létre, mint a protoporfirin. Előnyben részesítjük a benzoporfirinszármazékokat (BPD) és a porfimer-nátriumot. A leginkább előnyben részesített vegyület a benzoporfirinszármazék monosavas A-gyűrű (BPD-MA).
A „besugárzás” a találmány szerinti használatban a teljes hullámhossz-tartományt magában foglalja. Előnyösen a besugárzási hullámhosszot úgy választjuk meg, hogy megfeleljen a fényérzékeny vegyület gerjesztési hullámhosszával. Még előnyösebben a besugárzási hullámhossz megfelel a fényérzékeny vegyület gerjesztési hullámhosszával és a nem célsejtek és az intakt állat többi része - ideértve a vérproteineket is - kismértékben abszorbeálja. Például az előnyben részesített hullámhossz a BPD-MA esetében a 600-900 nm hullámhossz-tartomány.
A besugárzást a találmány szerinti használatban a továbbiakban az intenzitás, az időtartam és a besugárzás időzítése szerint határozzuk meg, a fényérzékeny anyaggal való dózisok tekintetében.
Az intenzitás elegendő kell legyen a sugárzás bőrön való keresztülhatolásához és a vér eredetű célsejtek eléréséhez. Az időtartam elegendő kell legyen a célsejtekre ható fényérzékeny anyag fotoaktiválásához. Mind az intenzitást, mind az időtartamot úgy kell megválasztani, hogy elkerüljük az állat túlkezelését. A fényérzékeny anyaggal való dózist figyelembe véve az alkalmazás időzítése szintén fontos, mivel 1. a fényérzékeny anyag alkalmazása után bizonyos időre van szükség ahhoz, hogy az anyag a célsejtekben lokalizálódjon, 2. számos fényérzékeny anyag vérben való előfordulási szintje az idő múlásával gyorsan csökken.
A találmány egy állat kezelésére szolgáló módszert biztosít, mely állat körébe, az ezekre való korlátozás nélkül a következők tartoznak: az ember és más emlősök. Az „állat” fogalma magában foglalja a gazdasági állatokat, mint például a szarvasmarhát, a sertést és a juhot, valamint a kedvenc háziállatokat vagy sport célú állatokat, mint a lovakat, a kutyákat és macskákat.
Az „intakt állat” fogalmán azt értjük, hogy az egész, osztatlan állat alávethető besugárzásnak. Az állat semmilyen részét nem távolítjuk el az elkülönített besugárzáshoz, szemben a fotoforézissel, ahol az állat vérét annak testén kívül keringtetjük a besugárzás céljából. Az egész állatot azonban nem szükséges besugározni. Csupán az intakt állat egy részét lehet vagy kell sugárzásnak alávetni. Gyakorlati szempontból a felszínhez közel levő véredényekkel ellátott területek besugárzása előnyösebb lehet a szelektív besugárzáshoz.
A „transzkután” fogalma a találmányban azt jelenti, hogy az állat bőrén keresztül történik a besugárzás.
Röviden, a fényérzékennyé tevő anyagot az állatnak általában az állat sugárzásnak való alávetése előtt adjuk be.
Az előnyben részesített fényérzékennyé tevő anyagok közé, az ezekre való korlátozás nélkül a klorinok, a bakterioklorinok, a ftalocianinek, a porfirinek, a pupurinek, a merocianinek, a pszoralének és prodrog anya3
HU 220 251 Β gok - mint a δ-aminolevulinsav, mely olyan drogokat képes előállítani, mint a protoporfirinek - tartoznak. Még inkább előnyben részesülnek a benzoporfirinszármazékok (BPD) és a porfimer-nátrium. A leginkább előnyben részesített vegyület a benzoporfirinszármazék monosavas A-gyűrű (BPD-AM).
A fényérzékennyé tevő anyagot lokálisan vagy szisztémásán alkalmazzuk. A fényérzékennyé tevő anyagot orálisan vagy injekcióval juttatjuk be, mely injektálás lehet intravénás, szubkután, intramuszkuláris vagy intraperitoneális. A fényérzékennyé tevő anyagot adhatjuk enterálisan vagy topikálisan is, tapaszok vagy beültetés segítségével is.
A fényérzékennyé tevő anyag dimerként is előállítható, több fény/mól abszorbeálása céljából. A fényérzékennyé tevő anyag specifikus ligandumokhoz is konjugálható, melyek a céllal reakcióba lépnek, ilyenek például a receptorspecifikus ligandumok vagy az immunoglobulinok, vagy az immunoglobulinok immunospecifikus részei, lehetővé téve, hogy ezek egy kívánt célsejtben vagy mikroorganizmusban még koncentráltabban legyenek jelen. Ez a konjugálás lehetővé teszi, hogy a szükséges dózisszinteket csökkentsük, mivel az anyag sokkal szelektívebb a célra, és kevésbé vész el a többi szövetben való eloszlás során, mely szövetek károsítása kerülendő.
A fényérzékennyé tevő anyag adható száraz készítményként, mint például tabletta, kapszula, kúp vagy tapasz formájában. A fényérzékennyé tevő anyag adható folyadékkészítmény formájában is, magában vagy vízzel, vagy gyógyszerészetileg elfogadható hatásjavítóval, mint amilyenek például a Remington’s Pharmaceutical Sciences című műben kerültek leírásra. A folyadékkészítmények lehetnek szuszpenziók vagy emulziók. Különösen, a leginkább előnyben részesített készítmények a liposzómás vagy lipofil készítmények. Ha szuszpenziókat vagy emulziókat alkalmazunk, a megfelelő kötőanyagok közé a következők tartoznak: a víz, a sóoldat, a dextróz, a glicerin és a hasonló vegyületek. Ezek a készítmények tartalmazhatnak kisebb mennyiségű nem toxikus segédanyagokat, mint nedvesítő- vagy emulgeálószereket, antioxidánsokat, pH-pufferelő anyagokat és hasonló szereket.
A fényérzékennyé tevő anyag dózisa a keresett célsejtektől, az optimális vérszinttől (lásd a 2. példát), az állat súlyától és a besugárzás időzítésétől függ. Az alkalmazott fényérzékennyé tevő anyagtól függően egy azonos optimális terápiás szintet is meg kell állapítani. Előnyösen a dózist úgy állapítjuk meg, hogy egy 0,01-100 pg/ml közé eső vérszintet kapjunk. Előnyösen a dózis 0,01-10 pg/ml vérszintet fog eredményezni. Ha a fényérzékennyé tevő anyag a BPD-MA, a vérszint előnyösen 0,01-4 pg/ml. Még előnyösebben egy 0,01-2 pg/ml BPD-MA vérszintet valósítunk meg.
A véráramon belüli besugárzási intenzitás előnyösen 2-150 mW/cm2. Még előnyösebben a besugárzás intenzitása a véráramon belül 10-100 mW/cm2. Legelőnyösebben a véráramon belüli besugárzási intenzitás 15-70 mW/cm2.
A besugárzás időtartama előnyösen 0,25 perc és óra között változik. Még előnyösebben a sugárzás időtartama 0,25 perc és 6 óra között változik. Legelőnyösebben a besugárzás időtartama 0,25 perc és 2 óra között változik.
Anélkül, hogy találmányunkat valamilyen elmélettel korlátoznánk, a feltalálók feltételezik, hogy a BPD alapjában véve viszonylag rövid idő alatt fotoaktiválható a vérben, felesleges toxicitás nélkül. így úgy tűnik, hogy létezik egy terápiás lehetőség, melyet a BPDdózis és besugárzási dózis határoz meg. A BPD fotodegradációs termékeinek képződése a fotoaktiválás indikátoraként használható. A BPD fotoaktiválásáról feltételezzük, hogy szabad oxigénatom képződéséhez vezet, mely viszont citotoxikus hatású. A vér extrakorporális kezelésével vagy a száloptikás, intravénás fényaktiválással kapcsolatos problémák miatt a BPD-vel beinjekciózott betegek egész testének „vötörs fényágyban” való besugárzása jó megoldásnak tűnik a vérben levő fertőző anyagok kezelése esetében.
A felsorolt példákkal a találmány hatékonyságát szeretnénk demonstrálni, valamint segítséget szeretnénk nyújtani a találmány gyakorlati megvalósításában. A következőkben leírt példákban egy fényérzékennyé tevő anyagot mutatunk be, és eszközt biztosítunk más fényérzékennyé tevő anyagok vagy új, a találmány módszerében használatos vegyületek szkríneléséhez. A következőkben leírt példákat csupán példáknak szántuk, és nem akarjuk velük a találmányt semmilyen módon korlátozni.
Az 1-4. példákban alkalmazott anyagok
A BPD-AM vegyületet a 4,920,143 és 4,883,790 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmakban leírtak szerint állítjuk elő, mely szabadalmak a hivatkozás révén részét képezik a találmánynak. A BPD-AM vegyületet a QadraLogic Technologies Inc. cégtől szerezzük be, és DMSO-ban oldott állapotban (4,5 mg/ml) tároljuk -70 °C hőmérsékleten. A liposzómás BPD-t (4,95 mg/ml) az 1992. február 5-én bejelentett 6,704,666 lajstromszámú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban leírtak szerint állítjuk elő. A következő készítményeket használjuk:
Alkotórész Mennyiség (mg/ml)
BPD-MA 4,95
Dimiristoil foszfatidil kolin 23,27
Tojás foszfatidil glicerin 16,09
Laktóz vagy trehalóz 148,50
Aszkorbil palmitát 0,05
Butilált hidroxi-toluén 0,005
Víz az injektáláshoz Q.S.
A liposzómás BPD-t megszárítjuk és fagyasztott ál-
lapotban -20 °C hőmérsékleten 1 ml azonos mennyiségekben tároljuk. A megfelelő számú azonos mennyiségeket közvetlenül a felhasználás előtt olvasztjuk ki és ekkor hígítjuk 5%-os dextrózzal vízben az állatokba való injektáláshoz.
Ezekben a vizsgálatokban hím Balb/c egereket (7-11 hetesek; Charles River, Canada) használunk, hacsak másként nem jelöljük. A Balb/c egereket a bőrükben levő pigmenthiány miatt választjuk. A szőrt hatáso4
HU 220 251 Β san leborotvájuk vagy depilálással eltávolítjuk az egész testről, a fejet kivéve. Ekkor az egér bőre teljesen áttetszőnek tűnik. A belső szervek, különösen a sötétvörös szervek, mint a máj és a lép, láthatóvá válnak a bőrön keresztül. Az egereket a kereskedelemben beszerezhető depilálóeszközzel (NeetR vagy NairR) depiláljuk vagy borotváljuk 5 nappal a kísérletekben való felhasználás előtt. A kontroliegereket, melyeket BPD-vel szintén injektálunk, azonban fénynek nem tesszük ki, nem borotváljuk meg. Az injektálás után az egereket különböző ideig sötétben tartjuk a fentiekben leírtak szerint. A vizsgálatok előtt és után az egereket az állatoknak kedvező 12 órás világos és 12 órás sötét, napi periódusban tartjuk. A vizsgálatok után az egereket érő fény mennyiségének csökkentése céljából a ketreceket a legalsó polcra helyezzük és alufóliával letakaquk.
A fénykamrákat a University of British Columbia műhelyében készítették rendelésre. Kétrétegű 14 75 W tungsram halogén reflektorégőkkel (General Electric) szerkesztették meg, mely a kezelési területet felülről és alulról világítja meg. A fényt szűrőn vezetjük át, 1. egy sárga és piros műanyag filmrétegen keresztül, mely a 600 nm hullámhosszúságúnál rövidebb sugarak többségét szűri ki, és 2. 15 mm vastag vízszűrőn keresztül, mely a 900 nm hullámhosszúságnál nagyobb sugarakat abszorbeálja. A hűtést folyamatosan áramoltatott hideg vízzel biztosítjuk a vízszűrőn keresztül, valamint 5 ventilátorral. A fény intenzitását egy IL 1350 Fotométerrel (International Light) mérjük.
A fénykamra által biztosított fény spektrumát az 1 A. ábrán mutatjuk be. Összehasonlítás céljából a BPD abszorpciós spektrumát az IB. ábrán mutatjuk be. Megközelítően a kibocsátott fény 1/3-a a BPD-aktiváló spektrumtartományon belül van.
A felső és alsó égősorozat által biztosított fény intenzitása nem egyforma. Az alsó sorozat 33-40 mW/cm2 intenzitást biztosít, ahogy azt az expozíciós kamra padlószintjén mérjük, míg a felső égősorozat 27-33 mW/cm2 intenzitást biztosít az állatok hátbőrének felszínén mértek szerint. A leírt tartomány a besugárzási horizontális sík egyenetlenségéből adódik. Továbbá az egerek a fénykezelés ideje alatt mozognak, így különböző időpontokban bőrük különböző mennyiségű fénymennyiséget kap. így az egerek bőrét érő dózisokat megközelítően számítjuk ki a 30 mW/cm2 fényintenzitást alapul véve.
Eljárások
Vértesztek: A vért 50 μΐ heparint tartalmazó (1000 egység/ml sóoldat) injekcióstűkbe szívjuk le. A mintavételenként! legalább egy egérből származó vérmintákat (0,45 ml) a Diagnosztikai Laboratóriumnak küldjük el (University Hospital, University of British Columbia) egy Coulter Counterrel való analizálás céljából. A vér morfológiáját vérkenetkészítményben határozzuk meg, mely keneteket a laboratórium technikusai a szelektált vérmintákból készítenek.
A plazmában levő BPD-koncentráció meghatározása: A plazmamintákat az egerekből gyűjtött és -20 °C hőmérsékleten a felhasználásig tárolt vérből centrifugálással nyerjük ki. A mintákban levő BDP koncentrációját fluorometriával határozzuk meg egy Jacso Model FP-770 (Japan Spectroscopic Co.) spektrofluorométert és egy mikroküvettát (Far UV Qartz Cell, Stama Cell Inc.) használva. A gerjesztési és emissziós hullámhosszok sorrendben 439 és 699 nm hullámhosszokat jelentenek. A plazmamintákat húszszorosukra hígítjuk 1% Triton Χ-100-at tartalmazó PBS-sel, közvetlenül a fluoreszcencia meghatározása előtt. A BPD-standardokat 5% egérplazmából, BPS-ből és 1% Triton X-100ból állítjuk elő. Ilyen körülmények között a BPD-koncentráció és a fluoreszcencia egység közötti kapcsolat lineáris (a korrelációs koefficiens >0,99) a 0,1 bgf/ml és az 1 pg/ml koncentrációk között. A detektálási határérték 0,1 ng/ml minta értéknek felel meg, ami ng/ml plazmának felel meg. A maximális plazma-autofluoreszcenciát 52 nm hullámhosszon figyeljük meg. A 699 nm hullámhosszon mért BPD fluoreszcenciacsúcs gyakorlatilag mentes egyéb hatásoktól.
1. példa
A bőrfotoszenzitivitási teszt
Hat Balb/c egeret (22 ±1 g) készítünk elő a fent leírtak szerint. Két egeret kétszer injekciózunk (24 órás időközökben) DMSO törzsoldatból származó (nem liposzómás) BPD-vel és az injektálás után 1 órával fénykezelésnek vetjük alá őket. Egy egeret nem injekciózunk be, azonban fénykezelésnek alávetjük ezt az állatot is (csak fénykontroll). Az első kezelés alatt az egereket 200 μΐ PBS-ben levő 15 pg BPD/egér oldattal injektáljuk. Egy egeret használunk a kezelések során kontrollként.
A kezelés után azonnal sötétbe helyezzük az állatokat 1 óra időtartamra (mindkét alkalommal), majd egyenként műanyag tárolókba helyezzük őket és így tesszük a fénykamrába és fénnyel kezeljük őket. Az egyes egereket a fénykamrából különböző időpontokban vesszük ki: sorrendben 15,30,45,60 és 75 perc elteltével. A bőr felületére juttatott fénydózis sorrendben 27, 54, 81, 108 és 135 J/cm2. A második alkalommal ugyanezeket a fénydózisokat használjuk, azonban az első nap nagyobb fénydózist kapott állatok a második napon kisebb dózist kapnak. A kontroliegér mind a két alkalommal 60 perces besugárzást kap. A besugárzás alatt az egereket végig megfigyelés alatt tartjuk a kényelmetlen helyzetre utaló jelek, illetve vakaródzás észleléséhez. A második fénykezelés után az állatoknak naponta figyeljük a bőrkülalakját és általános viselkedési mintáit két héten keresztül.
A kezelés után két héttel vérmintát veszünk az állatokból szívpunktúrával, melyet halotán anesztézia alatt végzünk. Ezután az állatokat elpusztítjuk és autopsiának vetjük alá. Lépüket, májukat és veséiket lemérjük (súlymérés).
A BPD-vel beinjekciózott egerek jól viselik a kapott fénydózisokat (27, 54, 81, 108 és 135 J/cm2) és az ismételt kezelést is. Mindkét kezelési napon normálisan viselkednek a fény alatt, a kényelmetlen érzés bármilyen tünete nélkül, csupán alkalomszerű vakaródzás jelentkezik, melynek a bőrben levő drog aktiválódása lehet az oka. Durva változás nem figyelhető meg az ege5
HU 220 251 Β rek bőrében sem közvetlenül a fénykezelés után, sem a kéthetes, ezt követő periódus elteltével. Viselkedésbeli eltérések sem észlelhetők. Meglepő módon a fénykontrollegér az egyetlen egér, melyen a kényelmetlen érzés tünetei megfigyelhetők (nyugtalanság és vakaródzás). 5 így ezt az állatot fény alatt csupán 60 percig tartjuk (az eredetileg tervezett 75 perctől eltérően).
Az egerek száma túl kevés ahhoz, hogy határozott következtetéseket vonjunk le a kezelés belső szervekre, mint a májra, lépre és vesékre kifejtett hatásáról, azon- 10 bán ebben a tesztcsoportban, melyet a kettős kezelés után két héttel vetünk vizsgálat alá, a durva morfológia és a súly normális. A teljes testsúly és a megfelelő belső szervi súlyok a 2. táblázatban láthatók.
A 3. táblázat az egérvér-paramétereket mutatja a kezelés után két héttel, ideértve a fehérvérsejtszámot (WBC), a vörösvértestszámot (RBC), a hemoglobint (HB), a hematokritértéket (Hct), az átlag alaki testtérfogatot (MCV) és a vérlemezkeszámot (PLT). A kezelés után két héttel meghatározott vérmorfológia a 4. táblázatban látható. Az összes érték a normális határok közé esik. A vérlemezke-aggregáció valamelyest hozzájárulhat a vérlemezkeszám enyhe csökkenéséhez és a magasabb WBC-számhoz.
1. táblázat
1. nap (15 pg/cgér 0,68 mg/kg) 2. nap (20 pg/egér 0,9 mg/kg)
Egérszám BPD mg/kg fény J/cm2 BPD mg/kg fény J/cm2
1 0,75 27 1,0 135
2 0,71 54 0,95 108
3 0,71 81 0,95 81
4 0,63 108 0,87 54
5 0,71 135 0,95 27
6 0 108 0 108
2. táblázat
Súly (g)
Egerek Teljes test Máj Lép Vesék
Drog+fény 22 1,105 0,077 0,172(1)
23 1,190 0,106 0,343
24 1,208 0,094 0,380
25 1,348 0,108 0,396
21 0,958 0,078 0,310
Csak fény 22 1,125 0,05 0,371
3. táblázat
Egérszám WBC 106/ml RBC 109/ml HBg/1 Hct MCV fi PLT 106/ml
1 4,0 7,11 122 0,352 49,5 328
2 14,7* 7,76 126 0,382 49,2 274
3 8,2 7,46 124 0,365 48,9 119
4 7,6 7,65 123 0,364 47,6 438
5** 2,9 6,47 108 0,316 48,8 134
6*** 5,3 5,97 109 0,297 49,8 388
* A vérlemezke-aggregátum hozzájárulhat ehhez a számhoz. ** Néhány kettős térfogatú heparinnal hígított vér adatai.
*** Kontrollfény csupán
HU 220 251 Β
4. táblázat 5. táblázat
% WBC
Egérszám Granulociták Limfociták Monociták
1 9 90 1
2 11 88 1
3 19 78 3
4 36 62 2
5 7 92 1
Normál (tartomány) 12-15 65-85 N/A
Egérszám BPD-dózis (mg/kg) Az injekciózás után eltelt idő Plazma- koncentráció (pg/ml)
1 0,87 15 perc 6,32
2 0,83 20 perc 4,68
3 0,95 1 óra 23 perc 3,26
4 0,91 1 óra 24 perc 2,92
5 0,91 1 óra 32 perc 2,98
6 0,87 1 óra 38 perc 1,80
7 0,87 1 óra 42 perc 3,22
8 0,83 2 óra 5 perc 2,44
2. példa
Farmakokinetikai (PK) vizsgálatok
A fénykezelés alatt a plazmában levő BPD szintjének meghatározásához a következő vizsgálatot végez- 20 zük el. Tizennégy Balb/c egeret (22 ±1 g súlyú) injektálunk 200 μΐ PBS-ben levő liposzómás BPD-vel (20 mg/kg) egerenként. Vérmintákat szívpunktúrával nyerünk 15 perc és 2 órás intervallumon belül az injektálás után. Néhány egér esetében a fénykezelés az injek- 25 tálás után 15 perccel kezdődik meg. A plazmában levő BPD koncentrációját a fentiekben leírtak szerint határozzuk meg. Az eredményeket az 5. táblázatban és a
2. ábrán mutatjuk be.
Ezeket az adatokat a fénykezelés időzítése hatásá- 30 nak tesztelésére használjuk. Az első példában leírt, a kezelés után két órával, azaz az egyórás fénykezelés végén (108 J/cm2) a plazma BPD-szintje 2,44 pg/ml. Ugyanebben a példában a fénykezelés elkezdésekor a plazma BPD-szintje 4 μ g/ml. A bőrfotoszenzitivitás 35 ilyen alacsony szinteken levő további becsléséhez az egereket az injektálás után korábban vetettük fény kezelés alá, azaz 15 perc elteltével, amikor a plazma BPDszintje 6,32 pg/ml. Azonban a kezelés után 15 perc elteltével megkezdett fénykezelésnek alávetett állatok 40 majdnem azonnal kényelmetlenül érzik magukat, és 30 perces kezelés (54 J/cm2) után elpusztulnak. Ez azt jelzi, hogy a körülbelül 6,5 pg/ml-es induló plazmaBPD-szint és a körülbelül 50 J/cm2 teljes testbesugárzás letális az egerekre. Azonban, ahogy az 1. példában 45 bemutatjuk, ha a plazmaszintek alacsonyabbak, ugyanezen fénydózis egyértelműen ártalmatlan.
3. példa
A BPD transzkután aktiválása
Tizennégy egeret (22 ±1 g súlyú) használunk ebben a vizsgálatban. Tizenkét egeret injektálunk 20 pg (0,9 mg/kg) liposzómás BPD-vel (200 μΐ-ben) és a fénykezelés előtt 1 órára sötétbe helyezzük őket. Az egereket egyenként 30 perces, 1 órás vagy másfél órás fénykezelésnek vetjük alá, ami sorrendben 54, 108 és 162 J/cm2 bőrfelszíni fénydózist jelent. A fénykezelés után azonnal vérmintákat veszünk. A megfelelő időpontokban két BPD-vel injektált, azonban fénykezelésnek nem alávetett egértől vérmintákat nyerünk. Két további egeret tesztelünk az injektálás után egy órával.
Ezen vizsgálat célja a BPD-aktiváláshoz szükséges szövetbe való fénypenetráció meghatározása. Azt feltételeztük, hogy a vérben levő BPD lényeges fotodegradációja a BPD lényeges aktiválását jelzi.
A plazma-BPD-koncentrációt ezután fluoreszcenciával határozzuk meg. A fénynek kitett és ki nem tett kontrollegerek plazmájában a változatlan BPD-koncentrációkat összehasonlítjuk. Az eredményeket (melyeket a 6. táblázatban és a 3. ábrán mutatunk be) azt jelzik, hogy az 54-162 J/cm2 fénydózisok által fotodegradált BPD 36-76%-os. A fotodegradáció ilyen mértéke azt jelzi, hogy elegendő fény hatolt be a szövetekbe és fejtett ki aktiváló hatást, és így fotodegradálta a BPD-t a véredényekben. Fontos, hogy ezek a fénybesugárzási és a drogdózisok nem okoznak fényérzékenységet, ami megerősíti az 1. példában talált biztonságot. Továbbá nem figyelhető meg akut hatás a vérparaméterek esetében (7. táblázat) sem.
6. táblázat
Csoport Fénydózis J/cm2 Injektálás utáni idő A plazmában levő BPD pg/ml Átlag ±SD Fotodegradálódott BPD (%)
Oh-C 0 lh 1,428 1,058 l,243±0,262 -
30 perc-C 0 l^h 0,618 1,242 0,930±0,441 -
1 h-C 0 2h 0,646 1,242 0,944±0,421 -
HU 220 251 Β
6. táblázat (folytatás)
Csoport Fénydózis J/cm2 Injektálás utáni idő A plazmában levő BPD pg/ml Átlag ±SD Fotodegradálódott BPD (%)
l^h-C 0 2Xh 0,724 0,656 0,690+0,048 -
30 perc 54 l^h 0,566 0,626 0,596+0,042 36%
lh 108 2h 0,258 0,344 0,301+0,061 68%
1Λ h 162 2Xh 0,191 0,145 0,168+0,033 76%
7. táblázat
BPD mg/kg Fény J/cm2 Az inj. utáni idő Vérparamétcrck
WBC 106/ml RBC 109/ml HBg/1 Hét MCVfl Pl.T 106/ml
0 0 - 4,5 6,58 113 0,326 49,5 417
0 0 - 2,3 7,53 127 0,370 49,1 399
0 0 - 6,0 7,61 132 0,378 49,7 498
0 0 - 7,3 7,64 133 0,382 50,0 613
0,87 0 lh 5,5 7,61 124 0,368 48,4 608
0,87 0 IX h 4,4 6,77 117 0,329 48,7 428
0,93 0 2h 11,4 7,79 129 0,382 49,1 475
0,87 0 2Xh 3,9 7,68 129 0,372 48,5 447
0,95 54 IX h 7,0 7,28 127 0,363 49,9 613
0,95 108 2h 8,5 7,53 131 0,378 50,1 440
0,93 162 2Xh 4,9 7,17 116 0,353 49,2 506
Az ebben a példában kapott adatokat összehasonlítjuk a korábban publikált vizsgálatok [Photochem. Photobiol. (1991), 53:281-286] adataival, miután a fénydozimetriát újraszámoltuk ugyanazt a fotométert használva, mint amit ebben a vizsgálatban használtunk. A korábban publikált vizsgálatokban DBA/2 egereket (borotvált és depilált) injektáltak 4 mg/kg, és lokálisan 153 J/cm2 széles spektrumú fénykezelésnek vetették alá (a fényintenzitás 170 mW/cm2) az injektálás után 3 órával. A 2. ábrából való extrapolálás maximális 2,987+312 (SD) pg/ml plazmakoncentrációt eredményezne a 3 óra esetében (egy 30 perces fénykezelés kezdete). Eredményként azonban nem figyelhető meg fénykezelés után azonnal bőrelváltozás. A fénykezelés utáni első 24 órában az egerek súlyos bőmekrózisos tüneteket mutattak, ami a 96. óráig fejlődött, és melyet egy gyógyulási periódus követett. Végül a sérülések begyógyultak, és a szőrzet újranőtt.
A jelen leírásban a fénykezelés kezdetén a plazma BPD-koncentrációja 3 pg/ml érték fölötti, és nem figyelhető meg bőrelváltozás sem azonnal, sem a fénykezelést követő kéthetes időszakban. A jelen és a korábbi vizsgálatok közötti különbség a következőket foglalja magában: 1. magasabb maximális plazmakoncentrációt a magasabb BPD-dózisnak köszönhetően (4 mg/kg, illetve 0,9 mg/kg), 2. az injektálás és a fénykezelés közötti hosszabb idő (3 óra, illetve 1 óra), ami több BPD-felhalmozódást tesz lehetővé a bőrben (a BPD nyilvánvalóan 5 óráig halmozódik fel a bőrben), és 3. a nagyobb fényintenzitás (170 mW/cm2, illetve 30 mW/cm2). Az adatok azt sugallják, hogy ezeket a tényezőket figyelembe kell venni az egész test besugárzására vonatkozó terápiás lehetőség meghatározásánál.
4. példa
In vitro BPD-aktiválás egérvérben
A szövetekbe behatoló fény mennyiségének meghatározásához egérvérrel végzett in vitro vizsgálatokat hajtunk végre. Ugyanazt a fényforrást használjuk, így a fény spektruma is azonos. A fény dózisát úgy választjuk meg, hogy az in vivő kísérletek dózisaihoz hasonlítsanak.
A frissen nyert heparinizált egérvérhez liposzómás BPD-t adunk az 1 pg/ml koncentráció eléréséhez, ezután 0,85 pl azonos mennyiségű vért oszlatunk el 35 mm átmérőjű Petri-csészékben, melyeket fénykamrában helyezünk el és vörös fénnyel kezelünk. A Petricsészéket a fénykamrában csupán alulról világítjuk
HU 220 251 Β meg. A fény intenzitása 35 mW/cm2. Három különböző fénydózist használunk - ami 30 perces, 1 órás és másfél órás besugárzási időket von maga után - sorrendben 63, 126 és 189 J/cm2. A duplikát Petri-csészéket alufóliával letakarjuk. A besugárzást követően a vért azonnal összegyűjtjük a Petri-csészékből. Ezután a plazmát centrifúgálással elkülönítjük. A kontroll-, nem besugárzott mintákat a fénnyel kezelt mintáknak megfelelő időpontokban dolgozzuk fel.
A besugárzott és a fénnyel nem kezelt vérből elkülö- 10 nített plazmában levő BPD-koncentrációkat fluoreszcenciával határozzuk meg. Az eredményeket a 8. táblázat és a 4. ábra szemlélteti. A BPD körülbelül 51-83%-a lebomlik az alkalmazott fénydózis hatására.
Az in vitro BPD fotodegradáció mértékét az in vivő lebomlással hasonlítjuk össze, annak meghatározása céljából, hogy valójában mennyi fény hatol át a szövetekbe és éri el a véráramban levő BPD-t. Amikor a vizsgálatokban a fotodegradált BPD mennyiségeit a lebomlás százalékában fejezzük ki a fénnyel nem kezelt plazmában jelen levő változatlan BPD-mennyiségekhez viszonyítva, az in vitro és in vivő meghatározott százalékok viszonylag hasonlóak (9. táblázat, 5. ábra). Azonban, amikor a lebomlott BPD mennyiségeit pg lebomlott BPD/ml plazmaértékként fejezzük ki, nyilvánvaló5 vá válik, hogy a bőrfelszínre juttatott fénydózis körülbelül 65%-a in vivő valójában eléri a véredényekben levő BPD-t (9. táblázat, 6. ábra).
8. táblázat
Idő Fénydózis (J/cm2) BPD-dózis (pg/ml) Fotodegradált BPD (%)
0 óra 0 0,760 -
Xóra 0 0,806 -
Λ óra 63 0,394 51
1 óra 0 0,810 -
1 óra 126 0,220 73
IX óra 0 0,830 -
lj^óra 189 0,144 83
9. táblázat
In vitro In vivő
Fény (J/cm2) Fotodegradált (%) Dózis (pg/ml) Fény (J/cm2) Fotodegradált (%) Dózis (pg/ml)
63 51 0,412 54 36 0,334
126 73 0,590 108 68 0,643(?)
189 83 0,686 162 76 0,522
A plazmában levő BPD fénykezelés alatti szintjé- 35 nek meghatározásához a következő vizsgálatot végezzük el.
A korábban elvégzett vizsgálatok eredményei azt mutatják, hogy a vérben levő BPD aktiválásához terápiás lehetőség létezik az egész test besugárzása révén. Miután 40 az egereket vörös fénnyel kezeljük (600-900 nm) egy órával a 0,9 mg/kg BPD injektálása után, a 27-135 J/cm2 fény dózisok közé eső tartományban (a fény intenzitása a bőr szintjén körülbelül 30 mW/cm2), az egerek nem mutatnak semmilyen, a bőr fényérzékennyé válására utaló jelet a kezelés utáni két hétben. Továbbá nem találhatók toxicitásra utaló jelek sem a máj, a lép és a vesék esetében, sem a vérparaméterekben bekövetkező változások két héttel a kezelést követő vizsgálatkor. A plazma megközelítő szintje a fénykezelés alatt 2,5 és 4 pg/ml érték között alakul.
A BPD legmagasabb plazmakoncentrációja (közvetlenül a beadás után 6,3 pg/ml), valamint az 54 J/cm2 fényintenzitás együttesen letális az egerekre. Az in vivő fénykezelés 36-76%-os BPD-fotodegradációt eredményez a vérben. Az egérvérben levő BPD in vitro fotodegradációjával való összehasonlítás azt jelzi, hogy a bőrfelszínre juttatott fénydózis 65%-a bejut a szövetekbe és eléri a véredényekben levő BPD-t. Ezen adatok korábban publikált vizsgálatok eredményeivel való összehasonlítása azt jelzi, hogy a bőrfotoszenzitivitást a maximális plazmakoncentráció, az injektálással kapcsolatos fénykezelési idő és a fény intenzitása határozza meg.
5. példa
Kifejlett hím DBA/2 és Balb/c egereket injektálunk intravénásán, sorrendben P815 és L1210 sejtekkel, melyeket 1 órán keresztül (liposzómás) BPD-vel (100 ng/ml) előinkubáltunk. Az állatok injektálása előtt 45 közvetlenül további 2 pg BPD-t juttatunk a sejteket tartalmazó injekcióstűkbe. Ez közvetlenül az injektálás után 1 pg BPD/ml egérplazma-koncentrációt eredményez (feltételezve, hogy az egér teljes vérmennyisége 2 ml). Egy egércsoportot (borotvált és depilált) azonnal 50 vörös fénnyel való kezelésnek vetünk alá (600-900 nm) a fénykamrában, ami másfél óráig tart (162 J/cm2); a másik csoportot kontrollként sötétben tartjuk.
A fénnyel való kezelés után azonnal vérmintákat veszünk szívpunktúrával halotán anesztézia alatt. 55 A fénnyel kezelt és a kontrollállatok plazmájában levő BPD-koncentrációkat fluoreszcenciával határozzuk meg. Az egérvérben levő klóngenikus tumorsejtek számát a vérminták 10% szarvasmarhaszérumot tartalmazó tenyésztápközegben való tenyésztésével határozzuk 60 meg, határhígításos vizsgálati eljárást alkalmazva.
HU 220 251 Β
A kezelés után a kontroll- és a vizsgálati csoportból származó egereket két hétig figyeljük a bőrváltozások és az általános viselkedési változások észlelése céljából. Az eredményeket a 10. és 11. táblázatokban összegezzük.
10. táblázat
L1210 sejtekkel injektált Balb/c egerek 1 óra BPD-liposzómákkal
A plazmában levő BPD-koncentráció
Kezelés ng/ml %
Sötét kontroll 126,45 100
Fénynek kitett 52,23 41
Fotodegradált % 59
A túlélősejtek a vérben (3 egér/csoport átlaga): Sötét kontroll: 234 L1210 sejt/2 ml vér/egér Fénynek kitett: 21 L1210 sejt/2 ml vér/egér
11. táblázat
P815 sejtekkel injektált DBA/2 egerek
A plazmában levő BPD
Kezelés ng/ml %
Sötét kontroll 94,09 100
Fénynek kitett 58,19 62
Fotodegradált % 38
A túlélősejtek a vérben (3 egér/csoport átlaga):
Sötét kontroll: 50 P815 sejt/2 ml vér/egér Fénynek kitett: 8 P815 sejt/2 ml vér/egér A korábbi példákban bemutatott eredmények azt demonstrálják, hogy az egész test vörös fénnyel való besugárzása a BPD-vel való injektálás után a vérben levő BPD aktiválását eredményezi. Eredményként a BPD egy része fotodegradálódott, és ugyanakkor a BPD-vel előkezelt tumorsejtek nagy száma megsemmisült. A kezelés után nem figyelhető meg sem a bőr fotoszenzitivitásában, sem az állatok viselkedésében változás (a maximális megfigyelési időszak két hét). Az eredmények azt jelzik, hogy létezik egy olyan terápiás lehetőség, mellyel a vér eredetű fertőző anyagok terápiás szabályozása befolyásolható a véredények és a bőr károsítása nélkül.
A találmányt közvetlen leírással és példákkal szemléltettük. Ahogy fent említettük, a példákat csupán példáknak szántuk és nem a találmány korlátozása céljából adtuk meg. Továbbá a tudomány e területén képzett szakember számára a specifikációk és igénypontok áttekintése után észrevehető, hogy a találmány igénypontjainak szempontjaira vannak megfelelő alternatívák. A feltalálók ezen megfelelő alternatívákat a találmány igénypontjainak ésszerű körébe tartozónak tartják.

Claims (13)

  1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK
    1. Fény érzékeny ítő szer alkalmazása egy élőlény véráramában levő célsejtek transzkután besugárzással történő elpusztítására vagy gyengítésére alkalmas gyógyászati készítmény előállítására.
  2. 2. Az 1. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a célsejtek olyan aktivált sejtek, amelyek a nem célsejtekhez képest gyors osztódásra képesek; vagy vírust, parazitát vagy mikroorganizmust tartalmaznak.
  3. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a fényérzékenyítő szer egy klorin, bakterioklorin, ftalocianin, porfirin, benzoporfirin, purpurin vagy merocianin.
  4. 4. Az előző igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, ahol a klorin klorin e6, a porfirin BPD vagy nátrium-porfimer és/vagy a célsejtek leukémiás sejtek.
  5. 5. A 4. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a BPD BPD-MA.
  6. 6. A fényérzékenyítő szer prodrugjának alkalmazása egy élőlény véráramában levő célsejtek transzkután besugárzással történő elpusztítására vagy gyengítésére alkalmas gyógyászati készítmény előállítására.
  7. 7. A 6. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a prodrug δ-aminolevulinsav.
  8. 8. Az előző igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, ahol az élőlény egy emlős.
  9. 9. A 8. igénypont szerinti alkalmazás, ahol az emlős egy ember.
  10. 10. Az előző igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, ahol a fényérzékenyítő szer koncentrációja a véráramban 0,01-10 pg/ml.
  11. 11. Az 1-9. igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, ahol a fényérzékenyítő szer koncentrációja a véráramban 0,01-4 pg/ml.
  12. 12. Az 1-9. igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, ahol a fényérzékenyítő szer koncentrációja a véráramban 0,01-2 pg/ml.
  13. 13. Az 1. vagy a 3. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a célsejtek leukémiás sejtek.
HU9500814A 1992-09-21 1993-09-20 Fényérzékenyítő anyagok in vivo transzkután aktiválása a vérben HU220251B (hu)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US94811392A 1992-09-21 1992-09-21
PCT/CA1993/000382 WO1994006424A1 (en) 1992-09-21 1993-09-20 Transcutaneous in vivo activation of photosensitive agents in blood

Publications (2)

Publication Number Publication Date
HUT70966A HUT70966A (en) 1995-11-28
HU220251B true HU220251B (hu) 2001-11-28

Family

ID=25487290

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU9500814A HU220251B (hu) 1992-09-21 1993-09-20 Fényérzékenyítő anyagok in vivo transzkután aktiválása a vérben

Country Status (21)

Country Link
US (2) US5484803A (hu)
EP (1) EP0660712B1 (hu)
JP (2) JP3598306B2 (hu)
AT (1) ATE201596T1 (hu)
AU (1) AU681088B2 (hu)
CA (1) CA2144327C (hu)
DE (1) DE69330277T2 (hu)
DK (1) DK0660712T3 (hu)
ES (1) ES2160600T3 (hu)
FI (1) FI951295A (hu)
GR (1) GR3036479T3 (hu)
HU (1) HU220251B (hu)
IL (1) IL107035A (hu)
NO (1) NO951066L (hu)
NZ (1) NZ255302A (hu)
PL (1) PL308116A1 (hu)
PT (1) PT660712E (hu)
SK (1) SK35295A3 (hu)
TW (1) TW241204B (hu)
WO (1) WO1994006424A1 (hu)
ZA (1) ZA936968B (hu)

Families Citing this family (51)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20020058008A1 (en) * 1989-07-28 2002-05-16 Kennedy James C. Photochemotherapeutic method using 5-aminolevulinic acid and other precursors of endogenous porphyrins
US6710066B2 (en) * 1989-07-28 2004-03-23 Queen's University At Kingston Photochemotherapeutic method using 5-aminolevulinic acid and other precursors of endogenous porphyrins
US5955490A (en) * 1989-07-28 1999-09-21 Queen's University At Kingston Photochemotherapeutic method using 5-aminolevulinic acid and other precursors of endogenous porphyrins
US5587490A (en) * 1990-04-16 1996-12-24 Credit Managers Association Of California Method of inactivation of viral and bacterial blood contaminants
US5798238A (en) * 1990-04-16 1998-08-25 Baxter International Inc. Method of inactivation of viral and bacterial blood contaminants with quinolines as photosensitizer
US20040110819A1 (en) * 1991-10-28 2004-06-10 Queen's University At Kingston Photochemotherapeutic method using 5-aminolevulinic acid and other precursors of endogenous porphyrins
AU679016B2 (en) * 1992-11-20 1997-06-19 University Of British Columbia, The Method of activating photosensitive agents
WO1996039188A1 (en) * 1995-06-05 1996-12-12 Queen's University At Kingston Photochemotherapeutic method using 5-aminolevulinic acid and other precursors of endogenous porphyrins
US6008211A (en) * 1995-07-27 1999-12-28 Pdt Pharmaceuticals, Inc. Photoactivatable compounds comprising benzochlorin and furocoumarin
CA2236873A1 (en) * 1995-11-06 1997-05-15 New York Blood Center, Inc. Viral inactivation treatment of red blood cells using phthalocyanines and red light
US5895786A (en) * 1996-05-08 1999-04-20 New York Blood Center, Inc. Method for treating viral infections
US6159733A (en) * 1996-06-20 2000-12-12 New York Blood Center, Inc. Method for photoinactivating malignant cells
US5922278A (en) † 1996-11-19 1999-07-13 Baxter International Inc. Method and apparatus for inactivating contaminants in biological fluid
US5742380A (en) * 1996-12-31 1998-04-21 Ronn Avigdor M Plasma assay spectrometer
US6103706A (en) * 1997-04-29 2000-08-15 New York Blood Center, Inc. Methods for treating viral infections
US6010890A (en) * 1997-04-29 2000-01-04 New York Blood Center, Inc. Method for viral inactivation and compositions for use in same
US5856566A (en) 1997-09-02 1999-01-05 Dusa Pharmaceuticals, Inc. Sterilized 5-aminolevulinic acid
US6159178A (en) 1998-01-23 2000-12-12 Heartport, Inc. Methods and devices for occluding the ascending aorta and maintaining circulation of oxygenated blood in the patient when the patient's heart is arrested
US6096066A (en) * 1998-09-11 2000-08-01 Light Sciences Limited Partnership Conformal patch for administering light therapy to subcutaneous tumors
US6183773B1 (en) 1999-01-04 2001-02-06 The General Hospital Corporation Targeting of sebaceous follicles as a treatment of sebaceous gland disorders
CA2356532A1 (en) * 1999-01-15 2000-07-20 Light Sciences Corporation Noninvasive vascular therapy
US6602274B1 (en) 1999-01-15 2003-08-05 Light Sciences Corporation Targeted transcutaneous cancer therapy
ATE234114T1 (de) * 1999-01-15 2003-03-15 Light Sciences Corp Therapeutische zusammensetzungen fur knochenstoffwechselstörungen oder knochenmetastasen enthaltend einen photosensitizer und ein bisphosphonat
US6454789B1 (en) * 1999-01-15 2002-09-24 Light Science Corporation Patient portable device for photodynamic therapy
US6376483B1 (en) 1999-05-27 2002-04-23 Miravant Pharmaceuticals, Inc. Bacteriochlorins and bacteriopurpurins useful as photoselective compounds for photodynamic therapy and a process for their production
US20030114434A1 (en) * 1999-08-31 2003-06-19 James Chen Extended duration light activated cancer therapy
DE19960705A1 (de) * 1999-12-16 2001-06-21 Laser & Med Tech Gmbh Verfahren und Vorrichtung zur Herstellung eines autologen Immunisierungsimpfstoffes gegen Krebserkrankungen (Tumorvakzine)
US7897140B2 (en) 1999-12-23 2011-03-01 Health Research, Inc. Multi DTPA conjugated tetrapyrollic compounds for phototherapeutic contrast agents
US7166719B2 (en) 2002-06-27 2007-01-23 Health Research, Inc. Fluorinated photosensitizers related to chlorins and bacteriochlorins for photodynamic therapy
EP1267935A2 (en) * 2000-01-12 2003-01-02 Light Sciences Corporation Novel treatment for eye disease
KR100365151B1 (ko) * 2000-05-08 2003-02-11 김형락 어류 병원성 세균과 바이러스의 감염 예방 및 치료를 위한δ-아미노레불린산의 신규한 용도
DE10034673C1 (de) 2000-07-17 2002-04-25 Medac Klinische Spezialpraep Dermales Applikationssystem für Aminolävulinsäure und seine Verwendung
EP2248536A3 (en) 2000-12-14 2010-12-08 The General Hospital Corporation doing business as Massachusetts General Hospital Topical Aminolevulinic acid-photodynamic therapy for acne vulgaris
AU2001291260A1 (en) 2000-08-16 2002-02-25 The General Hospital Corporation D/B/A Massachusetts General Hospital Topical aminolevulinic acid-photodynamic therapy for acne vulgaris
US7498029B2 (en) * 2001-05-01 2009-03-03 The General Hospital Corporation Photoimmunotherapies for cancer using combination therapies
AU2002327180A1 (en) * 2001-06-04 2003-01-21 The General Hospital Corporation Detection and therapy of vulnerable plaque with photodynamic compounds
DE10162712A1 (de) * 2001-12-19 2003-07-17 Blutspendienst Der Landesverba Verfahren zur Inaktivierung von Bakterien und Leukozyten in Blut oder Blutprodukten
WO2003061696A2 (en) * 2002-01-23 2003-07-31 Light Sciences Corporation Systems and methods for photodynamic therapy
US7053210B2 (en) 2002-07-02 2006-05-30 Health Research, Inc. Efficient synthesis of pyropheophorbide a and its derivatives
US7659301B2 (en) * 2003-04-15 2010-02-09 The General Hospital Corporation Methods and devices for epithelial protection during photodynamic therapy
US7220778B2 (en) * 2003-04-15 2007-05-22 The General Hospital Corporation Methods and devices for epithelial protection during photodynamic therapy
US20070020272A1 (en) * 2003-04-30 2007-01-25 Tayyaba Hasan Indirectly linked photosensitizer immunoconjugates, processes for the production thereof and methods of use thereof
JP2007500227A (ja) * 2003-05-29 2007-01-11 ミトス・ファーマシューティカルズ・インコーポレーテッド 光増感剤及び音増感剤と関連してのニトロキシドの使用方法
FR2857264A1 (fr) * 2003-07-09 2005-01-14 Maco Pharma Sa Procede d'inactivation photodynamique des pathogenes au moyen d'ala
GB0424833D0 (en) 2004-11-10 2004-12-15 Photocure Asa Method
US8585707B2 (en) 2006-06-07 2013-11-19 Gary S. Rogers Continuous low irradiance photodynamic therapy method
US20080164224A1 (en) * 2007-01-04 2008-07-10 Whirlpool Corporation System for connecting mechnically dissimilar consumer electronic devices to an adaptor or a host
EP2164418B1 (en) 2007-06-27 2014-01-08 The General Hospital Corporation Apparatus for optical inhibition of photodynamic therapy
US20090062724A1 (en) * 2007-08-31 2009-03-05 Rixen Chen System and apparatus for sonodynamic therapy
US8835104B2 (en) * 2007-12-20 2014-09-16 Fenwal, Inc. Medium and methods for the storage of platelets
JP2014518547A (ja) 2011-04-07 2014-07-31 フェンウォール、インコーポレイテッド 削減された残存血漿容積を有する血小板濃縮物を提供するための自動化方法とシステムおよびそのような血小板濃縮物のための貯蔵媒体

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4649151A (en) * 1982-09-27 1987-03-10 Health Research, Inc. Drugs comprising porphyrins
US5095030A (en) * 1987-01-20 1992-03-10 University Of British Columbia Wavelength-specific cytotoxic agents
US4961920A (en) * 1988-12-08 1990-10-09 Luminis Pty, Ltd. Phototherapeutic monovinyl and divinyl ether-linked dimers
US4960408A (en) * 1989-01-10 1990-10-02 Klainer Albert S Treatment methods and vaccines for stimulating an immunological response against retroviruses

Also Published As

Publication number Publication date
SK35295A3 (en) 1996-05-08
CA2144327A1 (en) 1994-03-31
NO951066L (no) 1995-05-19
FI951295A0 (fi) 1995-03-20
DE69330277D1 (de) 2001-07-05
AU681088B2 (en) 1997-08-21
JP2001316288A (ja) 2001-11-13
JP3598306B2 (ja) 2004-12-08
US5736563A (en) 1998-04-07
DE69330277T2 (de) 2002-04-18
NZ255302A (en) 2001-04-27
IL107035A0 (en) 1993-12-28
IL107035A (en) 1998-12-27
ATE201596T1 (de) 2001-06-15
PL308116A1 (en) 1995-07-24
EP0660712B1 (en) 2001-05-30
HUT70966A (en) 1995-11-28
WO1994006424A1 (en) 1994-03-31
FI951295A (fi) 1995-05-17
NO951066D0 (no) 1995-03-20
ZA936968B (en) 1994-04-12
GR3036479T3 (en) 2001-11-30
TW241204B (hu) 1995-02-21
DK0660712T3 (da) 2001-08-27
ES2160600T3 (es) 2001-11-16
PT660712E (pt) 2001-11-30
CA2144327C (en) 2002-08-06
EP0660712A1 (en) 1995-07-05
JPH08501301A (ja) 1996-02-13
US5484803A (en) 1996-01-16
AU4940593A (en) 1994-04-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU220251B (hu) Fényérzékenyítő anyagok in vivo transzkután aktiválása a vérben
EP0680365B1 (en) Activation of photosensitive agents
Reddi et al. Liposome-or LDL-administered Zn (II)-phthalocyanine as a photodynamic agent for tumours. I. Pharmacokinetic properties and phototherapeutic efficiency
AU2001229674B2 (en) Local drug delivery using photosensitizer-mediated and electromagnetic radiation-enhanced vascular permeability
US20050004510A1 (en) Noninvasive vascular therapy
JP2005513001A (ja) 脱毛治療のための光力学療法
AU2001229674A1 (en) Local drug delivery using photosensitizer-mediated and electromagnetic radiation-enhanced vascular permeability
JP3174821B2 (ja) 血液中の選択的な細胞不活性化用医薬組成物
Powers et al. Laser photochemotherapy of rhodamine-123 sensitized human glioma cells in vitro
Bayley et al. Photoactivatable drugs
Richter et al. Activation of benzoporphyrin derivative in the circulation of mice without skin photosensitivity
Brasseur et al. Photodynamic activities and skin photosensitivity of the bis (dimethylthexylsiloxy) silicon 2, 3‐naphthalocyanine in mice
Nyamekye Vascular and other non-tumour applications of photodynamic therapy
Dubbelman et al. Photosensitizers
JPS61240970A (ja) 悪性腫瘍抑制方法
Jori et al. Molecular and cellular mechanisms in photomedicine: porphyrins in cancer treatment
Bissonnette et al. Systemic sensitization—non-oncologic indications in dermatology

Legal Events

Date Code Title Description
HMM4 Cancellation of final prot. due to non-payment of fee