HU228780B1 - Use of interleukin-18 inhibitors to inhibit tumor metastasis - Google Patents

Description

A ttetesstesy wteteaa wtmsetesateávaS és ássák gásfete? stóg$á eszkézökkte ksgsfesto. KfeíafeteU a íteil.fe?ev tárgyi képezi sütetem tö®ös»e»sx&íssa kl&feslfesjsk tssegteefee tetóetsklfeS (II.-? 8) íeíssteléfeétsek és/vagy hsafesek gtestes testei?. Az ILtekfefete ítehltei a ktektete ks?fe vtetete H.-lfetles'K ateltesk, n.-?,fe<stetrtegységek tettetekké tetei teltette lIMteseeeptíss' Istetekl, É,4teete .tesspteskten léte teltetegostítek, 11,4 S-tekl? te&jtek átestek. Etetek lehésjek,, fektetette átereszé* kök. sskitv tekétek vagy este öisteitefei pmteák ttezsstzékte, latyak 11,4 tetei feteyfel 4E4 tetei esze· ste skteiitessl ÍUftelkstete

A.ltibtewMtete

Ktfegis teksejtek ksplfeis aseteélfetesz fe? stehésAéiss. ktekes lépés a sfeasztezte kfekezéséter 4, te As kte&sgktelteteftetelád tagja, sz tea kpte; vststetelsis ssfeteézié>s ssvstekste (VCAM4) tetesr tetetes spjte és tettek tetskettek gsteiattekete eltelte ilksl testek stetelsejltete veié tetetek?? tóswf· Ú <3-te A VCAM4 tetess tetskete(á SAstes?; bssjMks^B klte ss festett estette tetetitek etetetssfelssae (teteetesattt) tetetett ötetefetete; «tetess iztsmfe lelsaktvé tételété ? A.s.

teste festek kegy az te-ΐβ és a TN'F-ö leltelte letek a VtAfeet expsztefelé Áeís^tfetfetek: Astssfetete? a teteteteetes «tett öteektsfesssssssssk asteytes; ím^í jdtek; * VCAM4 «testesetek tetei etetesfeéiítesk telte? szfetlyefet? {???}. Xfessteííéfc mis, Esgy &g tel és aTtete jtessstes söfeékbea teésagé ii ts Bfei-fete: íteiktesltekijáí (öseglteeitateeséi) tsöítfe & .?sy»tells;?seckteslás? kezeli egerek eteébett is (?, É 1444;. RtetMte a ssasstewpw éte kteetlife « sfeesfestl? femuzsÁfes xfe (EBE) stteitesiélfess ?®e· s-epte kittek a HBS-tsgtek lt-4(? éltei teM, tettes stssely ösegsteeketfe tekéké

Alékhaalk-sátezteitez és stsatetezkfes vsm (TI), Átestetek ezt te. Itögy az 11.4(1 kitel tetei HéE-seJiek VLAtefetetete? fetefesi kwtete ks_} sstejte léteiévé teszik s Eltelte H8B-sa(Ssktssz veié telsétefe Így sz 11-1(1 § HSB-feíektet VEAMfesszttste? tetess· fcfessatfe? és VCAMte^zpsressssséi teltek sssetv testeteölx? sztegeltézé tetetette Itetelte vak? képttsséfe kéteteskiate ssekik toej?» isktess.Ateil.fes lélttetete fezetefe VLA-fet «gstcmáM stesa(tek §sefefe.

Az 11,44? As « 'telte lsks.kke.lsss tettesstt csak stezlegas mcktótó-gétóm vezette. az? jelezve, hegy W te* Itete .taapwáSa^áfc Iteytei, vagy sttetete etettetek? efelé telteit teste swgset jtteák. Rtefe? s. ttsetastetetelé fezetek As a célstevetet iélsteége aess képes c gystksteskte? ssteifek tezssetefe Ezsss itel tsz sstetete vtsgy a asw^u'seqmará^sadsms kösvtttefepia tesfeztest m ekegste? este tetei tetetek & gfelafeteié eslökifetefetes Issteksifetez. így t? VCAM4 ettek? aztsbsiyuzáaéi kfelits teteie sztsfete’ és a tettetek tefeltifests teé tetltesfes jétete .«esttelk aincs .léi jetietetes.

A Cytetöm S(4) festem 8kT. ssktets a kivetitek tefefe) tessktes piteiikkk teástó tóyss, «ísef sttsvetitetes Jetet? steg. isseeteík, ksgy s. Elé tselststes ttetsfetkfe. és sfeeketee ÍL4§* tevéitek? steskte (?C.E> teste Ekéttetektei. gsróíltó lOtestelektete testtel? Élteitek teltetek· sfe_s tetette? Bitetek (tetetette? fetefestete.

Az IL-18 telEfetekék? itetet) agy tsj ektsktsp ss-ssely ⁸® IfeMtefetekttest teltteste tetetette fcá^áö»tetette (3¾ ék az 1L*I2 tv (éltesé? fektetette tetetetetekte sfetektek (te tetei ssfetete fcs fekte tstéeteste, kögy a IkteAmstefe st TW«a te a l’ABAifefesss AAte tefekete tefefefes .tfetetsfei ss feivtete etatesfe sslkte itstesktel ískljséséite sssetékess (te bjstlte ksstisítete btsgy ss: 11,-4 § gyalÁfestefessk; kélfeTikfete ψφφφ φφφ* ·ΐ*φφ istestete etejéostegnkte.í ís sstestkstek Cítete'tMtestek és tessstesseées kltegsek esteéteet e gánazpzesszM teste stiessistesAvd, és YRéte stteteítete és s CDtebpeHáte 1L4 β és ÍL4 ste kteste iseeesésévet eeste sz ÍLA ekoksssktesítteséten beiteké vámban, skteé iteioteigé piteeléte soeiteák ki (25). A oteeiss.«te;tetess teisékbit ieteoégss wepe éensstess n«m testesít ik-'lk'esstepkilseitel tegzek tesetestgskbtesti itesjésokleAteksko étekiét (ÍL48BP) tíszttetek vteteifeőb .ysekvenéíi.ék_s kiteoste és GO.é'-'Aesjtektee,

Az IL-Í48P íssegtelótets a testetesst (ÍFN-yX «ζ fí.4 ÍL4§ éitei étdoteíéjét és az NéteB te teste skbvsíkétetei. B.-4§BF sgektete; s-w testekéi megazSIstóks szJFN-y L.Pteí ktesíö keetegteé-t így es ϊί-Ί^ΒΡ a teste Thiteioklosesteki stesiktesskésk esteitek, Az )L4kBit ssstsely a iéptee tested tetese sxpsessséistek, az ieitenoglotelíetesepsseseiéséte istietek és teáMte stetektes teeteóg sz 1L4Aípste ílvessptesssé. Öá»j& a ílgltess kentei temteste tekiéisétek, és s O tte gemlmmáB setevsescisteio iwa tteteissfc ísstsssotsiefetesteeeésk tetteké este teéhéey pssstess sz ILteBPte Íteíohsióen nagymáná&ő teisssítegilt mutató iéhssiékte tettek ami tó sstetete, hogy s vteisteoéksk gysssgsihete sz 11,44® és tete'teéihteste ss tteöxte Ttextete (24,, a WÖteteteteo, tó eiweikíh'é stes&te bejeíetes). Amim sz e W<.VteW63.. tó nemzettel szabadalmi tejeieetésbón tetetete is ven íte az IL44Bk és nnsteistek fnzl· onéii műtejét tenkóteoéiis tesnszéksi.. tev részes kspesst (1,45 kbíészs'e és/vagy az ik.45 aktivitásának mteétete. éstesgy az Π.44 sstete-sséssstk hlektetea.

A WO W4Í232 sz, ssesestektei ktezéisteii te öíyw gyógyászati készítményt te fej, amely B..44sotegonisiik ísftslmaz tesitsteesektskte szemte válasz wteáfctóa.

Az Bí-te.te.ék tó ssiíéspsi kteteéte kte tekésjss teste silkssijesszátei ií.,4 tesssspiossní szemben B.,44steéviiés gésiktea.

Az ieesesteogy testen; ég 115-139 itektei helyes ss; tetessteás éFR-gsiínoes szprasssteé és a n-séte ssysk-ksiteiteínsibss vagy steagte-itetetesttes sKseesteé ptetek kezelése khssites kimenetele tetei összefüggést vizsgálták, Ismertetik, kegy ss; Wótegsmma expmsszi^ának ksényz kósnüéí s táwií nssíssssésésok tetei és a rassz pengtetek

A iaiélmkay ístegytí képesé Π..-1 A-tettete ésévsgy tete tebtetesk ksossmeisszsfstes gátlását szolgáié gységyssssník dttetesteó tette kteteöte,

Ate4 tettess testesei pélsteinkssszpste4 kstekcte.

Az II.4tes.te testesei sz B.,4testei etesteek., vagy bstesly iL4tesssopSsete>gyssg elírni antitestek, vagy .es; Ik42-s:sl teszteteken kte ss ss IL-ltet kkskteisé 4,4g-tóaganisták, v,egy sz 11,44844, ^k stetegsé. tetessék tenésjéi, a éteteteális szznsszéksi este steiév tette vagy B,44® kőié tefetésissn permukik ísstessítete ssteypk sitii testes «gyasszz, mint .es; ü,44-kBte teteje ekiístess.,

Blteyítes az séteissssiste. testietek IteltBBte vege sete eteeisyek tetetek testest ihtestetete stes-wteksf ekéd séteé vssgy esséoééAsset psemtedt sternsstestk seteysk az B,-teBPnte saws steteitete feíi'-sste.,

Az il..4temns;iés gétetese ésteegy « ssteesssénee tesratsstessstekisss fteitekisíéssss) gstestsste sstegekt gypgyteteí kteteo íáay stestet s teás séseé-t kéjete

A ttsoess-totetetess géktes. testeséi ss: IL4§terateés étvágy tettes s® esteik máája - steísstesez mmsewissteéejteteí gtetest éteskéteo ~ teteteisseteésí tetesgy tettet gteé tetekop petitet it,4 tete'-t kskfete tftftftf tftftf* tftftftf tf tf tf tf tf tf tf tf tf ♦* szafevaoeiát ífafafa «sfafaás fatsa jssfa íSSttéoö ke^másss,

1, fa: Esfafífaáls isAfafafafa BHfafafa Rfa «fe5 fafafas atitt vad iipfa, Π,-ίβΑ egerek ás Rir'''«g«?ek fafa». A a Β1áfa-sefM^faás fass Rí. afaj« távdtomfc R ás 1.0% formai fafaj wíefazd fafaji pfasfai sWdatfa Bsáfa. Ofaesa sMb «jf^dstólUs fafafeb (Mete, fa&fafas sss«fa) wfaKtsfaB aa IRA^fagfaí ás RBÁ-gyfa fapbssj.

X áfa: fewsáfas XCHfafafa ás «gfarefal Hfa fafaj fafaj fafa XIBáMfat HBEfafahes; w m ssfaá^im ás 8 SláAfaM«jsss;j tedt BSB faÍ|R ás IRfafafaáfas, Teajfafod HSBfaísfa fafofask B RAI'CM jdfafafa; 18 áfa át Mfay kfeásRi fa a m kezek & a kezek RSlfaj-fafas 18 μΜ ÍOB-j vagy egáaefaaiá 11..-1 Mfa a«afaj«j afasA 8 B18MCM fafadfa d$& A BAB-ssÁíSSásfaís; tapadt IfaMfaiák ss«fafass «fafaj. a fasfató ssjssk assfa s&fafa vmateststva sfasfajisk kk BAsfaaj a tojyásjíjáRjkfaáfa: az faRfa faji tefaA: «ζ Π,Μβ ás a 'TNFa-fes^fafa» BJSA-val fafa ssefasfaafa cá§fak As .fafa 4 BAfafa fafaj faigfalfasfaái áápfafa mbdea fafa fai faüifaá j>AM). A BláMfaMABRSHACM-fa kfal Bfafas vfa fafaö «fafafa ás az ΙΙΒβ ás4TWfasssfaás mfasfa·s jsm kezek: HBEAes vfaasvifa íRMfa/) sjsfafafafa «MgARRfa a fafafasé (iw-fafaj, pfatfa fafaafaáfa sssfal fafasfafag ws sAgsúfMss fakfafa. fafa ss lt-ΐβ- ás & TNF«^«mfafa ás- a 8 láAfajGk RRfagfafa vfa fabásRjáfat bs <sfa a sfaífa B RIM-CM ifafaáfai RBB-vel vagy R..fa A fal sjadw«s fasáfa <«s afafa nem faARA be).

3« áfa: Aa ICgj fate fafaj Blfafalfafa fafa HSEfa vak) faáfafa fo fa>, RBfagjfasj fokakfcak fa|fafafaggsá vagy BlfaíRAfafa 4 fa» A. Rfafay fafa a RSáfasfafa, B3 μΜ RAB·»: ad» kfa M Mfa falfal-CM tozfafe»«fa. Rfafaid ? s^fasfafaMfa egfafafa fal$4 B sfayfa ssáfasy fafa a RSBfafate s. BfaRCM'fa O® s fa Rfafasass Más fafafafa a BBIAssfafa 1 sgfa sfasafatb Rfafa vagy BXs pgfa fafaj .fafa á fa fatfafa ás R? pgfa ífafafafa Bfafafaí §faRfafaR «fafaj fafa;, Illetve sas» adtaek 1 fafa a faífafafaB sfa, Nfa spfasfa, pfafafak IgG· fafafa »s fafaj a sasa fafaj ás & fafasfa fafaj HSBfafafa, Ifafa a Hfafaefas »wtó> SCBBCfa AM~sfa jsfaj RMMfaifaá sfafa bsfa ás sasa taoM § $fa sfaGfa, A RRB-sssfafafas fafaj BtB·^ sejtek sfafaáfa «farfa a fafafa fafafasa fafa fafafa-ϊ fassfafa sfasfafa: ki As fafafaysk 3 fafasfe faáfa átfafaDfasfa fafafafa faííifa fafas fa sfafafa <S«!8}. As aátetó fefafa smfafefa kbfasbságfa a »w» fafaj BBBAss: {*} ás az R,faAvd vagy THXfafa fafaj KS&te (**) vfarnyfas sfafafa faBag fagfa'Aifafa:: fa® (*/><0/},. a kájfafabá, fa-fasa Sffaasfafafa ssfaat, BfasssMfaRg sem fagfalk&as vátatoak wkak a SRSM-ssjífa aíás, RTR-fa fasfal teáfal HSfafas· faá fafafajsfas, j&fayfafas s-áfasfa 1 »sgAsl «gfafafa Ilfaifa fafa vs§y m adfemk § «Rás fafajaim fa fafafat utat swfafal

4. áfa: BRfafassdfefaá RfaMfa fafaj HRRfas; ís fafa BSBfafafa: ifafafafa S ífassí faisfífasfa «fassfafa fa faifa á áfa ál Afafa fafafa esette i§ jfafa IfafaRfaAfa vagy Í8@ xtgfal faHfa «fafaj 18 fawl ss: fafafafa fafa, Más Mfafafafas 38 fafa VCRWfafaRfa sfaMifa vagy fa íssfa faasfafafajfa »w» s^faBfas, yfaafaa fafaj «fafa a lófasfafafa 38 pssfa a BRfaAfafa; fajfa aRása «fa. fasfa a B AfafaRÁ fasásAsja sfafafas ásfaáí ss afabfasss, a yfafafa fafa afasú hstósez* fa ö«x As «s«dífaífa: 3 «áfaajjssi Wfai álfaRMAfafei fafafa. ssfate fafa fa fafafa fa.fa As MfaA fafaj fafafaB fafaisáfa as: áiafaAfafai fafa Hfafa <»> ás as jtAfaR Áfa KBB-te <**) fafayfa: faifafaRg: sSfaffaas wk <*/*«& §// a fakfaM. pfafa fafafafa sfa?st ~ 4 Aoiáfehiü!fosna.i^^

Néhány gyulíadáskeitö citokin, többek között az mterieukin-lβ (IL-Ιβ) és a tumor-nekrózisiaksor-alíá (TNF-α) elősegítik a ráksejtek endotélsejtekhez való adhézióját, ezáltal tumorok metasztatikus terjedéséhez vezetve. Ezek a gyaiiadáskeitö ciíokinek valószínűleg úgy segítik eiö az adbéziót és metasztázást, hogy indukálják az 1es vaszkuláris sejíadhéziós molekulát (VCAM-1). Bemutatjuk, hogy elsődleges, tenyésztett, egéreredetö HSEsejtek Bió-melanomasejlekből (B16M) származó, kondicionált tápközeggei (CM) (vagyis B16M-CM) történő kezelése elősegíti a N16M és a HSE-sejtek közötti adbéziótv/íro, A B16M-CM a HSE-sejtek. /« váró IL-Kitermelését és TN'P-u-termelését is indukálja. 'Nem bizonyították azonban egyértelműen, hogy a tumormetasztázlst valóban 1L-1 β és TNF-α közvetíti.

.Bemutatjuk, hogy a BlőM-CM indukálja a HSE-sejtek iL-18-termelé$ét, és azt, hogy az ÍI.·-18 az. a citokin, amely szerepet játszik a BlőM-sejtek. HSE-sejtekhcz való nagyobb mértékű adhéziósában. Az 11.-18 az adhézió mértékét ágy növeli, hogy a HSE-sejtekben a VCAM-1-expressziét a INF-a közreműködése nélkül aktiválja. A HSE-sejtek specifikus kaszpáz-l-inbibitorrai í 10 gg/ml, 18 h) való inkubálása teljes mértében megszűnteti a B16M-CM-meí indukált adhéziós képességei, anélkül, hogy csökkentené a INF-«-terme!ést, és a hatást nem fordítja meg egéreredetö ÍL-i β hozzáadása. Egér IL-18-ellen! antitest HSE-sejtekhez vaió adása megakadályozza a 816M-CM áltól indukált adhéziós képességet, anéikül, hogy beavatkozna az JL-Ιβ és a TNFa BlóM-CM-általi indukciójába. Hasonló módon az újabban kiónozott IL-18-kötő fehérje 1IL-18BP) szintén megakadályozza a BlóM 816M-CM által indukált, HSE-sejtekhez való adhézióját /« víoo. A TNP« és azíL-ip inhibitorai, mint például a p55 szoiubiiis TN'F-receptor vagy az IL-lrteceptor-antagonlsia nem volt képes az IL-5 8 által indukált adhézió visszaállítására. így a találmány tárgyát képezik ÍL-iS-tetmelés és -hatás inhibitorai, mint. a meianőroa, tumormgtasztázisának gáílóeszközei, Az lL-18-termelés inhibitorai többek között a kaszpáz-í inhibitora. Az IL-18iermeiés inhibitorai EL-lS-eHeni antitestek, vagy a két Ismert lL-18-recepter-alegység bármelyike elleni antitestek, vagy Il-38-antagönisták, amelyek az IL-iS-cal vannak kompetíetóban és blokkolják az IL-18-receptort és az II,18-kötó fehérjék, amelyek kötődnek az 11,-18-hoz és blokkolják biológiai aktivitását.

A találmány az Ϊ1..-18-nak a VCAM-1-expresszió gyuilatiáskeltő citokin által közvetített erősítő szabályozásában játszott lehetséges, más cítokinekkei való kölcsönhatására vonatkozik, és a találmány tárgyát képezik a VCAM-1 ilyen indukciója megakadályozására szolgáló eszközök. Azt tapasztaltuk a találmány szerinti megoldásnak megfelelően, hogy az ÍL-i 8 döniő szerepet játszik (operait) a VCAM erősítő szabályozásához vezető gyulladáskeltö események iniciálásban a máj szinusziodális falában, és igy lehetővé teszi a ráksejtadhéziót ás metasztázisL Egéreredetö, elsődleges, tenyésztett BlőM-CM-rael kezel; HSE-sejteket alkalmaztunk ráksejtfüggő endotéisejt-aktívácíós modellként abból a célból, hogy feltárjuk a BlóM-sejt által indukált IL-18 szerepéi a B56M HSE-hez való, VCAM-fÜggő mechanizmussal történő adhézióját. Az IL-Í8 specifikus szerepét a következő körülmények között vizsgáltuk: az IL-l-receptor specifikus blokkolása IL-iRa alkalmazásával, érett IL-l-p-szekréció és IL-18-szekréeió gátlása tsreverabífis IL-l-konvettálóenzím-inhibifor (ICEi) alkalmazásával, TN'F-biokkoíás a p5S szoiubiiis ΥΝΡ-rcceptor (TNF-sR-pSS) alkalmazásával és 11,-1 S-funfcciő blokkolása IL-l'S-elleni antitestek és 5L-18-kotö fehérje alkalmazásával. Ráadásul 816M-sejieket adtunk be ÍCE’'-egereknek és IL-ip’''-egereknek íépbs történő injektálással. A defictens egereiméi megfigyelt, a normál konttollállatoldsoz viszonyított alacsony metasztázissöröség valószlnúsííi az IL-Ιβ, és valószínűleg az 51.,-18 részvéteiét a gyulladás metasztázist megelőző szerepében (1. táblázat).

Az /« vitro végrehajtott kísérletek azt mutatják, hogy a B16M-sejtekbői származó félülúszók által indukált

Α«>Χ «Χ«« Φφ*Χ

HSE--adhszi6t slhrttdálo hatásért az 1L-1Ő-termelés tehető felelőssé, Mível a BlőM-CM-mel kezelt HSE teljes adbóziőí sbomiálő akbődtásáért a VCA.M-1 erősítő szabályozása tehető felelőssé, az· adalék tok jeizik, hogy az ALIS kösvethi a etíokift által índakáll. HEE VCAM-l-expresszlőj^· Ráadásul Π--1 S-ellerti antitestek ágy esökkemették a Slöhí-CM áltat gátolt sejtadhézióí, hogy nem gyakoroltak hutást a HSE-sejtek TNF-g- és az ÍL-10·tenneiésére, Ezáltal a HSE-sejtek lt-10- és TNF-a-ienxselése SE- tk-tő! fdggetle» volt és nem járult hozzá az abbé» zlőhoz. Ezzel tsxemhen a TMF-$R-p55 és az IL-lRa sem vök képes az adhörsó (mértéke) növekadésánek gátlására 1L-1 8-enl kezelt HSE-sgfeátbea, azt megerősítve, hogy sem az autohns jellegű TNF-m séta az 1E-10 w lehet felelős a KSE ΪΕ-18 által indukált adhéziós képességéért.

A BSE-sejtek esetedet:- kapott eredményéit ellentétesek a más sejles rendszarekben, mint péádánl a humán eredőid, moxíoouklsáns, nem CD 14 vétsejtek (25) esetében kapott eredményekkel, ahol az IL-lk 11.-10-4 indukált TblP-u-temdésea át. ValóadnŐ, hogy létezik olyasa DbE-speeiők«s gyalia<teskeltőeltokíí;-hieinrebin, amelyben a TNF-a és az 1Ε-1β az IL-ik-kottmolttői íbggeítee,k, azonban II.-18 a jeltovábbító (áj*®»*») közvetítőjük a VCAM-j erősítő szobáiyoaasban.

Az egéreredstü HSE-sejüsktŐl eltérően a 8 lőhi-sejtek nem espresszáMk az It-í S-gént az A?’-ίΌ-rel törtéig ellenőrzés alapján, és iCEi-voi, IS őrá» át történő laknbálás nem módosította $ B1ŐM-CM HSE-sejlekre gyakorolt eltölti»- és ahhfeiősfetolálá aktivitásait. Az IL-1S lokális tara-elése amnhan hatással lehet a RlÓM-sejtek. viselkedésére a máj m.ikraerazettlbeu történő tbjnsása vagy íéharKsstetása során. További felismerés volt .az, hogy a EíóM-selt 1 ngőn! egéreredeöi ll.- l 8-mti 6 őrá» át való inknbálása 2~sw«séfe növelte kezeletlen KSE-hez való adhéziós kórmsségükey és VCAM-í-ellenl tertiiest HBE-tez való adása SOőv-kal esőkkestette az. 11,-18 által közvetített adhéziót, valőszhsösítve a VífÁM-i/VLA-l-köiesönhatás szerepéi. Ehhez hasrmiő&rs BlőM-CM-mel ö érán át kezelt HSE-ről ssámsoő fclSlőszöval kezelt ElőM-sejtttk esetében sztpsiskáste (*P<Ö.Ö/> módon kétszeresére növekedett a VCAM-l-íkggö meuteizmuső HSE-fcez való sábéssórs való képességük, és iL-lb-el.lsmi omkest megszüntette ezt az adhásiöí stmmiáló hatást.

Fehartjerésemk azt sugallják, hogy az Π..-18 ói kapocs a gyttllsehbhehó emtklnek májban történő Iblszabudulása és a metasidÁsisfejiődés között A tumor által aktivált HSB-sehekben történő termelése két, a meiaaomaseítek HSB-sejtekhez való adhéziósának rmhályozásáhss szerepet játszó, komplementer nKtehanixmesl határéit meg: a HSB-bea autokris mechanizmust, ameíy a TKP-ödE-Ιβ által közvetítet;, V'üAM-i erősítő szabályozását kontrollálja, és a BíóM-sejt«&be» pazaknn mechanizmust amely a ntekmomsejtekben a VLA-4-eí tartja erősítő szabályozás aktié lehetővé téve VCAhí-í-higgö adhéziós kapssitástíknt Ez a mindkét adhéziós partnerben történő szumdián molekuláris erősítő szabályozás nagyon értékessé teszi a ráksejt és a kapilláris endoléisejt közötti kölesőnhatásl reakulóutat.

A BlőM-seytek ΪΕ-1.8 által Indukált ssihéziőjáí az ll.-18-tertnelés és/vagy hálás inhibitorai gátolják. Az IL~ 1 S-termelés inhtbhersá többek között a ksszpás-1 --mhlbhorpk. Az U-íb-httlás ísirtbííorái sz Πtfe-efei atttstesfek, vagy 82 IL-lb-reeepter bármely Ismert, két alegysége elleni antitestek, vagy nz tL-lb-anfagonisták, amelyek az ILIS-sai kenrpetkdőbstn vannak és blokkoljál az ΪΕ-18-raogptort, vagy az lL-18-kőtő Mérjék, átnsíysk ködktek az IL-lS-hozés blokkolják bisdogko aktivitását,

Az 11.-1 bkertttelés és/vagy ll<-18-haíssa Inhibitorai közsunlea alktámazása mellett ráadástól a tahkmáoy sas-rinti megoldás obija a sejtekbe történő bétekatás, ahol itz, h,-4hdewlés ékvsgy hatás gátlása ktvátssíos. .Ebből a eélből szbkség van olyan teodsznrre, amely sgechtkns, pl, IL-lhSlM héáohs DNS bgttttaíásár szolgálja, Btzoek végrtésajtására rtéhsny lehetőség Ismert a teeimtkábsn, Eeldánl fesimte&teó a ssjtbe a lenti OhS-t hordozó aíkakoss vektor, amely képes a DNS sejtekbe történő beépülését úgy végrehajtat??, hogy a DNS a sejtekben expresszáiódjon. A sejtbe történő bejtittssfc&sra -szolgáló eljárások leírását megtaláljuk többek között az 5.91Ö.487. sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban, a WO99/29349. sz. nemzetközi közzététel! iraiban és máshol.

Az IL-ÍS-tetroelés és/vagy Ib-18-hatás gátlására szolgáié, találmány szerinti alkalmazás céljára szolgáló gyógyászati készitmények azok, amelyek hatóanyagként tartalmaznak irthíblfórt, amely k&szpáz.-l-inhibitor, vagy iL-18-elleni antitest, vagy az. IL-18-receptor bármelyik alegysége elleni antitest, vagy az Π..Κ-18-receptof jelátviteli reakciöútja inhibitora, vagy az íl..-18-cal konspetícíóhan levő antagonista, amely blokkolja az ÍL-lS-teceptort, vagy IL-18BP vagy muteinje, fuzionált muteinje, íttokdetiális származékai, aktív részei vagy cirkulárisán permutáit származékai, amelyek IL-ÍSBP-ével azonos aktivitással rendelkeznek.

A mutein, fuzionált mutein, íűrske.íonális származék, aktív rész és keringő permusált származék kifejezések értelmezése a WO99/Ö9Q63. nemzetközt közzétételi iratban leírtakkal megegyezik.

/t gyógyászati készítmény hatóanyag előnyösen IL-1S és ÍL-ÍSBP elleni antitestek.

A gyógyászati készítmény tartalmazhat hagyományos hordozókat, excipienseket is, és a technikában Ismert más összetevőket, az alkalmazás módjától függően, amely lehet például injekció, orális alkalmazás, vagy a technikában ismert bármely más eljárás.

A konkrét dózis fíigg az alkalmazás módjától, a beteg testtömegétől és más faktoroktól, és bármely minden esetben a kezelőorvos határozza meg.

A találmány leírása után az alábbi, illusztrációnak szántás az oltalmi kört nem szűkítő példákon keres zltil a találmány könnyebben érthetővé válik.

PÉLDÁK

RgíSSSssk

Patkányban termeltetett, egéreredetü IgG-elleni, valamint egérercdető VCAM-l-elleni monokionális antitesteket a Sbf-otec ő&f-tőí (öy/oroj όόί»/ίίκ<ί) szereztük be. A rekombináns, egéreredetü ÍL·-ίβ-ί az ΛΆ.0 /»<?tői (Aíimjeopo/íy. A/iV) szereztük be. A rekombináns, humán eredetű IL-í-receptor-antagonlsta (IL-lRaj az C^oáh Co. (ATz/ötozőo, AfZ), és a humán eredetű p55, a szoíubilis TNF-receptor (TNfsR-p55) a Se/vnű fnc, OVorw/7, ALI) adománya volt. Az EL-iP-t konvertáló enzim inhibitorát tiCKí) az/ifads Co.-tói (.%;« £>«?go, Cd) szereztük be. A rekombináns, egéreredetü IL-lS-at és a patkányban termeltetett, egéreredetü IL-18-elíení políklonális IgGsníitestel. a frenro/heh £Cőtó-$öl (.Őíwk&w, tVA) szereztük be. Az IL-IS-köíő fehérje (IL-í8BP) előállítása a leírtak szerint (2S) törlőm.

A B ipM-seítek.tenyésztése: A BíóM-sejteket a korábban leírtak szerit?! I 11) tenyésztettük, tartottuk fenn és oltottuk át. A BióM-mel kondicionált tápközegei (BÍ6M-CM) a következőképpen állítottuk elő: Sxiö* sejtet lemezeltünk 25ctn‘-cs T-edényre és 24 órán át tenyésztettük. Ezután a sejteket további 24 órán át tenyésztettük 5 ml szémmmentes tápközegben fa végső sejtsűröség ős.10* sejt/cmj. A reiülúszókat összegyűjtöttük, 3:1 arányban hígítottuk friss, szérurnmentes Iápközegben és Ö.22 /aw-es pórusméretű szűrőn sStszűrtük.

Cifokli^anaiízis: Az elsődleges, tenyésztett KSE-sejtek és a 'BlőM-sejtek citokinklboesátását specifikus, egére!leni IL-lö-elíeo! antitesten TNF-«-gíieni antitesten alapuló E/JSd-reagenskészietteí mértük meg, a gyártó (AÓ-LD őysíe.w.s. Aókhcíjpo/A, A-í-V) javaslatai szerint.

ííSE-sejtcket választottunk el szingén egerekből, azonosítottuk azokat és tenyésztettük a korábban leírtak

ΦΧΦΦ ΦΦ ΦΦ ΦΦΦ-Φ satósá (28). Β1 éM-sejlekal jetélélsk ékAMsaAé.kseíXsstelbésöktóoédtmrésaoelítvteeviJtim^liésetssxiidséal <B€B£F-AM« Aéteodor Pwtós·, .éergtai CM), a lekérk sasras (lé). Rwitó 2x1(9 sejdéreg tetetófo» 24. tótgS tea» teoyéseselt ΗΒΒΌ. tótó, di 8 peroai tóéW hatösrsera mostak tte tágAbeeggei. A kiragadt sejtek meaoyiségét a kssosbbstt 08} itót éorveseeeia-laovlféses slagok! kvaeétatlv eljárás atkaksasásévsl hatásért:tó ste-g, A klsAéetek sóstó ss^-feAny etess® s BbE-iadtekeí KI8MA'M-osei ^bbstóitótó »áhá.»y drásr ál a Β1tóisejtek hmtóates eléd.

Vtó égte, hír®, CáÖBIAd lld jó és ÍCB^v'-v«itó áítetésok 08 s totóban leste: sete (2?). Kste etetésst Steévei eihelystet dtesetex egereket tótótsstóssk. A m^mmtótósoto «itótósst (Atótetó, 5b o-sgéeg btógwkoaeétets) egeretek teld⁵ életképes, 8,1 mi Aétedéls togyensóiyotoi oldatban BI6osdejsoisttel légbe (értei miaitótótó Mtottó Λ Αχ egereket § «faajtó Injektálása mám 10. tsagori altatásba» elélték, Wísxtteískst késüiettérsk elé tetelg®» eékskrs. A digteíxák mitesteges képek sietetoroetbás sssteöset teteteok. s BlSM-vBebtekAs tsxotél tójsstótóili teó megbOabtóette séljábok és a seséjotetete-xéréságsé, amely s rrsetsssskbsek tóma a 18b toré¹ májban, a korábban tót, sxtemolá^ás eljárások aikaimtótóai tómtótó ki 07}.

1,2090

Ite&tetete&átetetete.tetetete ksásss

Kát Alggstle» kísértei hsjtottte végre sgy év ebolédéssol, josssos BléM-sejtek kel kiütóbtóé tékáét lei:«M, vad bgosé, - ΗΓ» és 19-1100100.08 egerek légébe Hátóhm. A bontón! xrertée tséstde® vlxsgáli egér esetébe» a lágéso ládtalé, trattóáolsös étoteikxl mottótól, a otesltk sere kitón^Mtt sxlgráékéos mértékbe» a lép sáiya alagjás klsteasíve (1, iátááxsi), teel sasothes o meiasteds kíteja-te teteoése jeles» tnag as IL-φ’és kteétse» se; 1(00-egerek tógában a vad Ügesd egerek toéjáte vtevtylíva 0, alva), A rrsetastetlkos górok aeámánsk és sséteraár kvantitatív léssteádgtal aealbtet hajtsalak végre s vkesgált egéneájak etesxtáols- (s górok tótonötem?) és tértbgod {«tósdékos sxarvbeéütdéség) paraméternek ovtghatéroaásít eéijábék A vtó tlgosé agetekbex (L tálkától vissooyitva s to05satssxtá0s-sÓ0ság sságráSkéss (tóé 82} roéstdkbeo, tetek-kai exékkeor a® IVIjl'- és ICB^'-ageeek esetébe», tó lelesve, hogy ss injaidéit Blébl-sejtok tSbbsage sere volt képes íBegtetteéö ex Ilyess egerek tréjtólveisbe». Btetel a .atetetós-iéBogal tóeiélrs sssgskskáos (B<d.t7(i ote tóban, 8-?-ssteresére osókkesg az ILüjtó tü IBtó-egerak tsteben eved ügesé ag&rínáják értekeivel tetóaso®iltvay ősi tó jelei, tógy sség a tokiba» slkesvatas sragtepedes BKéd-sejíak is tektestótességgü rtesfeedlek, KkdéBheéget Isgyütes öreg sx IL-tjl'- gg ICtrtógerak «smtóe» a í»eiasepé8s-psea»séteki>e-a_s és ae: I. ks stetbets sete tótate a oaéasetásbs megssitesélt .Lüiáfcd ·'' .x-.»v.>.^ssx5s-í.\.^s.v.·

| Sgfeopon	Mígaaaelsméréség (gáaA88 sós5)	Meksvbásis'-téi'ésgat (otakérlsgai %)
) k kkóáot
| ^dégttsá egerek		88,18%

φ φφφ φφ φφ ****

φ φ Ö φφ

Bte^geteí	25Λ%Μ.δ2*	KkÉSte
ίΐ’-'ϊ?'·'' »>.XOu<vAÍ« iVl<	b vteOte	3,)33
A kteö'te
Vte itessk ®ssteí	ikk.40riöö.S4	te.OB
Ikéytegste	33.7kteS9.Sk*	thtete
iCE'Bgggí-g;	'27.?:.teb,é§'	kÁtete ~

Αχzdsiök ké liggsfes feStetet i/M$ egér kúé'fets esqseíteatóai}áÜag&^Mrí&efekste'iteík,, *A wá Slpasá steteijtete tefoéteéag tegssEktes [tétetek kékteiséi υ»ΑΗ .teteS/} varlartdwalím (étetek) ás s testeié—tele-F-Assöá· ékkteatetete sssegkétessste kétehsé^étejéié·' jök tetette tek éltessé

A 8Ι.ΛΕ«€5Μ sxiúiilskfes eséSétess (F< O/} sstekke a hltesaíúk TteF-sS és IL-EpRartad^át utersshst s sgfos srste ElBte^ísktes: véó asStófe készségé é W» (1 fe), A BEE ίδ μΜ tCBBvétk teste é vét ktetetete tdjea rséSéktes sssagméteiét® a B SteteCM fel M&& astóááa kéystegte a BÚB TNteatesísséé® ítektssssites rsétkk). A ktekktei tesstssSi, sgtesstetei )1,-3.() m tas^ia^a ax ΚΈ-Í H$B*ra gystaaét bkskkssks hadúr ssms éksrsSétesa él sex IteStees) tesztet teBEtessxkstetrsé sgstssté BIBM-égttetéés) ségteiíkfe ttertétte sévetetesévé (3, teste?. Ax a tésy, Ee® « ElEM-CM tel ksteétei dtezsteteé^aséte^vztedés sssegedtst s:< etegéa totteáM W«e és a ttehhte testeséi B-éf m^fSWí· teasetedói jtesteé-étesz ss&jdxt, .te® e tetehtesk tetet s®ik sasa ttewmss mtea steteh & KSE te&áős képesfeé.. Nagy a)etetetege ásását, tegy .telkM'Cktesste tetete sttesséétes «kik a DIEtee® tetet agdesteesk IteSé-tekte sasBtest sssisgakssteitetesi a Β(ΒΜ32Μ-«>«) tekéét sétetetes tegxssségé: úgy, te® sem ÍWk a HEE telteik Β.,~)β- és ThSMe Setsssédée (2. késs), Rétetek ax B.MRtekte steiiste testéi megakteályáx&i aa egársmHS Β,.~)β és TNF»« HSS-re gyaktsK)h tehéteteissteskb tetet <3, étek te jeteve, begy « tetetek HSB^a®atemk akkéstetete tette tetete estében R.-1S été tesztetek Ast BfhEOtessgésS magerőstette, te® s IteB-agte; esptmsBafc tlMtegtei {as teteké sm tetette tek Etel sfstwfeea ax syétss'tetes SL-SS ségéteste (EteW) rtertéktea tetem a ΜδΜ^φύ FiBB-te steá tehteksjé (4, étek te m a TNF-tetete sem ax MU sexe vefc kápes ereste gélétek msgsrEatee te, te® sem «m sstekte TNF-m «a as )'),-)[) ssem ntete testesé a HEE It-U test kém ksit teteted késeategsdi, .tetess; asmsst a 4. teste tessssstejssk, a VCAM-Etestte aesktes t<te sstetáktea gte kste a Etete-séRtk te)teste tettei NSB-tes s-ssé tetetette, A tetetette, stetete, ssrnss spteűtes Igö sssm gyetek teste aBtishtesejt Btetete tetei IteB-teasteútetetette.

Aséte a X htektetesi tettelyte se Ib® Sltetetetete étetek FteBtess stek temteáteí a kkte pte sejtet steé&ss sstesmytegé {tetet k. Wtea. teteted® (étetek & Ete/tes gtete )tessh teste ax teéte testé w teteWtexg ékahmtetete ette teltetes átess éés steS. Ez aa erstetey « vteteteiskk te® a BlBteteteé tessssate tessgéE IL-lk &x W? aategfe Stete kteí. tetetek a BteMtetetea jates kte Etek síteite φ-φφφ- ΦΦΦΦ ΦΦΦΦ· φ φ ΦΦ

	MsIs.is:msssej00kblO %
AttpÓéttW	KX0±iO
SÍOCM	MlOpU
ttXOOTOLAWO WÓ)	1S.0M2,0*
K«WW (KI ssgistt	4.700,0*

Az sdstok FA ttiggeittíí kttértti. (7 mttóvtt, H42) átb^SD-értátóS. fc^vbeljX ** A. B.UAüM-'híKS Ossodtttt, ttoisOkósg saága^tóas [kéóktttt, Otd&lttO LimöSkkKO /»<0/1 vHoittsooktttt (lAOtt!) és & ttteO^FOTFtt ttlsso st&a&wste?s$ OíSpiiMwGj kOTMépfepttttjisk

Itetaste tt KsM B,C, ttttttm L,A, Λ»fe, WO92 (X99O

3« HMttöm au WisésMM Att, Ifi: 330232 0973}

3. Fwte, Á, tan, M, ttkp aU BHHspm M,tt, ttteksaí». €,, BAF, RhynteL K, Fste,

LS, A Wfc, LM, Sete®» gág: ttöOKSg W

4. Μα?;Ο«, M„ Fychtwm, S, Mígski, H, Maissfan, R, SdeMSü, tt, BMoatss, M, és önts, tt, tt.es. Gm &» BkOk FtaaceL ?k 29300? <Ι99Γ>

5. tea®» FI, Msd.wsky_f tt., U^meste·, BM, Swws, tt, IHok-SkH, tt, és Gáitó, WM, ttkxA

W)^; 3«s 0 992)

O RM, &E, ésttmksqBs, Μ£» Seim%: BBOOkOWj

?. OkttWx. H, YspM H., Msyaks, R,· & Oam, K, össs? Ms, St 33330238 (O9SS

8, OTméfe, A, C&ttsó, tt.O.tt., FögFssk, C., OpA M, ttkWÁk, 2, MsBö-OTta, L, AOOkk A, őesrng» A L, Psofeí'Mssóá: tt, Οφ88, tt. és te< tt, Csssos- ttss, gp 4)4018 (1993)

9« MMottsdos, L, MsMMl, B, Issstt, IX, Borassos, tt, RwHMlsóiM F, PmöskL ö, Msa&vsas, A. ás DtfsNt, tt, Ctess ttss„gb 22391341099!)

10, lAttrí, tt, Bertmo, M.-C és Öt?» FAV, Ctts. Β$φ· WkAtó §: 27O2 0990)

FL Aimsgsstt, MJ, Aíwes, A, ttfeAss, JJ, Metste, F, & VíéittOHMttsvs, tt,, Hqssmfegy lg: 94ÖO4é 0§9?)

12,ttom M.tt, Ösittbfe», A, ttcssPH, tt, O ökvmstt, R, L N< ttóssolsó, 03 1 )9022 (39FÍ)

1.3, BttttWtt, M&, Pók, tt, Lásd, 0, IHs, T,A, LH FAR, Bssttstt, tt, és BiMsmu BLB, Ctts: HpMsttssttstt Οι 243030 0.893}

14, Bmwsm ttl, Omsttsítt., Ö..O, Ββζ Léi, ttfeMtt, Itt, SskiA, S, ttsmtt, tt, és Wvps, Cssí®' ttes. gb 470947?S<mi>

0, ÖÁM R,G.tt„ GoöttM A, Mss, .00, Ffewoms, A. oÖHwó R, Cmt Rsa S>í .WL0084 0993} O. VttttttVouHmbi, F, Asséssgm C, AsöísssOF A, Kspkmskk 0, ó IMwelk, €,A, Cter tt.«s, gl; 30030720994}

17, Vkts.tV'afSi.sfeshz, Ρ,, .Aivassa:, A,, Awassdl, A,, ÍAsdáy, ík, Tsafea, P, ás DMabks, CA., )'. 'Ns.it C&gw XskXt m«S82 (1988)

Itt, Maiik, RT·, W5w. MKx Bssí, R, Ol< A, ás SdkPÍÍ, FJt, Bm. X Cms»2R 183M8M (1998)

XX Omaz, P., Batewbesr, FA, FPk, W„ RtóöX X, Wxa, O. ás MM, ÍXR, 1 &ψ> IS: t39M39tt

0993)

28« örm. P.> Kntgm A., Hűbbe, M., PXsehiAX X, V<m ifoegsr. P< ás MfecX CR, M X Ojrw .§2' WM21 <WS)

2L Mmtet, L,, Ota>, R, Amsagssb, M.A, Fwtes, A. és Yiásá>Vmsd»d?a, F.. X CGI PbysAi, JJ4: 322-338 (199tt)

22. Bam 3,F„ Tirnsss, J.C ás RaskXsö, R,A., Ram 3»8^>: 591 (1998)

23« ÖkssíiSssA H,« TsAsP, XX, KösííPsíí, T„ YöiSixks. XX, Rskm, A„ Testem, T., Y«rígee> R, Ökam, T„ RikaAs, Y., Hites, XX, Akim, R,, Wte, M,« TAssím, F., Rmióh, R., Pmköda, S, ás kurfmte M., Mtee a»91 0995)

24, TsííísíA, XX, Maiam, R., KM», XX, Hysxfe, V,, XXmXXR, ök&mta, H„ Rípsshssxs, R< ás RskaöRki,. Κ,. X teste, mg): 39810 (199?)

23. Pmss, A.X, Festess, ÍX, Gm Y,, Sö, M, 8,~R és DXstefe, CA., 1. C3b, fowtffi: 7ΠΟ24 <199tt)

24. YkXiS'VsrseWsa,. P,< Röte, XX, Asssssete, A, ás BaetesAAsílkm, XX, BepiRbögy ÍR 32S-339 (1993)

27, Fsmte, ÍX, XYmss, A,X, Hsteig, M.W., XiviögkCT D.X és Dtedh, CA., Hite §1;. 2) 14-2 125 (1994)

25. Növkik, ÍX, Rím 8ΎΗ,, F&tett), CC Ráta, XX., ömPes, A., Disarelb» CA. ss Rsbisumisi, NX, ísssmmsiy > 122-134 (1999)

Claims (6)

1. Ιί,ΑΑ-ί^χϊΐΡ áuMg? hatás tsRibmmsisssk stetates ssseLixXsa misxAsmtassfeíssfssX gáiíkss:rs saPgáiő mXawxssX dSátestee, tel ss a»Ott-terteá$ btetaa a kbwlta&k köziii válastet· iX.4 ttellen? estettek, iX.-4§-m\pmö«iögj'Ságsk báöveiyiks' eHeal tettek, tL-Hkeeep&r böktök), IXXtt-esi kxsispAieiölam ÍXA iCÍCrikipösísiák, It-ltt-kSSő Wpék, setete, teteit Wgék, teketote sstezisX fe>k, skbv tesíák vs©' ssssk sA'WXAsííö pefteáR sxüisszdm, siödyek lt-ltt4te sWakPsi (It-lttBF) ass>ats sktividssai festetettek,

2. Att í. igóivpöm sasste sikstettás,. tel a ísalatev mágustetea.

3. Att í. ípXgxmi sxeduti slkslmste, ahöí sz XGétomXó Xehlbíwa ksmz|üz-í AökibíSös, amely spécilikasa® ás Ít-Wbött· k4i6Xk.

4. Αχ X ígCTpsmí szemAi atówás. tel sz. ÍX-íXAskR íaWte XX-X4<feÍ smíikAX

5. A 3. igsmypxii smíims dXsXsmzAú sírni sx ILGS-NOés iöhíWw R,4©R vágy ássak öRam üxksmjs, sxánssttáks vág? íogmcssc msmíyíisX skiivíiiss az í 1.,- í 3SP-vei

8« ÍX'Xá msssskYéisX ásAa©» XstPXiak X Igfeymuk smiXk megirissmzöíi. iöhifeXvkí k«4«iá «scgmsste vakfei' aikaiimszXss rnl«8íát»a-m«»?ísms^á^s gáGástet szöígák) spépA®' sóWiiAPksss,