FR2784027A1

FR2784027A1 - Utilisation d'un extrait de boldo dans un produit cosmetique ou dermatologique et produit comportant un tel extrait

Info

Publication number: FR2784027A1
Application number: FR9812532A
Authority: FR
Inventors: Gilles Pauly
Original assignee: Laboratoires Serobiologiques SA
Current assignee: BASF Health and Care Products France SAS
Priority date: 1998-10-05
Filing date: 1998-10-05
Publication date: 2000-04-07
Anticipated expiration: 2018-10-05
Also published as: AU6331499A; ID28486A; CN1329482A; KR20010079933A; EP1117376A1; FR2784027B1; JP2002526395A; WO2000019973A1

Abstract

La présente invention concerne l'utilisation d'un extrait de Boldo dans un produit cosmétique ou dermatologique et un produit comportant un tel extrait.L'invention concerne plus particulièrement l'utilisation d'un extrait de Boldo en tant qu'agent actif, seul ou associé à au moins un autre agent actif, pour la préparation d'un produit cosmétique ou dermatologique pour le traitement préventif ou curatif du vieillissement des tissus, à usage topique externe pour la peau, les ongles et/ ou les cheveux.

Description

DESCRIPTION
La présente invention concerne le domaine des produits ou préparations cosmétiques et dermatologiques, notamment ceux ou celles efficaces pour le traitement du vieillissement tissulaire, et a pour objet l'utilisation d'un extrait de Boldo pour le traitement du vieillissement tissulaire et un produit cosmétique ou dermatologique comprenant un tel extrait.

Le Boldo (Peumus boldus Mol.) est un petit arbre buissonnant, appartenant à la famille Monimiaceae et poussant de manière spontanée sur les collines ensoleillées du Chili. Le Boldo est utilisé en tant que plante médicinale en médecine traditionnelle.

Ainsi, dans les Andes, les feuilles de Boldo sont employées en infusion contre les affections hépatiques et les intoxications intestinales, en cataplasmes sur les tempes contre les maux de tête et les migraines, en bain contre les rhumatismes et en décoction comme vomitif. Les feuilles de Boldo sont utilisées comme diurétique, stomachique et sédatif.

En outre, les feuilles sont utilisées comme anthelmintique et le jus extrait de feuilles est utilisé, en instillation dans l'oreille, pour soigner l'otite.

D'après la littérature, les feuilles de Boldo contiennent 1,2 % de tanins, 2-3 % d'huiles essentielles (dont 45 % d'ascaridol et 30 % de cinéole et un mélange de nombreux terpènes), des flavonoïdes ou des glycosides flavoniques (ont été isolés : le pneumoside, le boldoside, le fragoside...) et 0,25-0,50 % d'alcaloïdes aporphiniques avec la boldine comme alcaloïde principal (25 % de la teneur totale en alcaloïdes).

Il a été indiqué récemment que la boldine exerçait un effet cholérétique et cholagogue (DE-2 547 243), ainsi qu'un effet relaxant sur le muscle lisse (Speisky et Cassels, Pharmacological Research, vol. 29, n I, 1-12, 1994).

De plus, on a également relevé pour la boldine une activité antioxydante, un effet de neutralisation des radicaux libres et un effet d'inhibition de la peroxydation (système de cytochrome P-450, membranes microsomales).

En outre, un effet hépatoprotecteur et anti-inflammatoire des extraits hydroalcooliques des feuilles de Boldo a été signalé (Bruneton, "Pharmacognosie, Phytochimie, Plantes médicinales", 2ème Ed., Lavoisier, Paris, 1993,737-739 / Wichtl, "Teedrogen und Phytopharmaka", 3. Aufl., Wissenschaftliche Verlagsgesellschaft, 1997, 110-112) et la boldine a été proposé dans le traitement

de l'hépatotoxicité médicamenteuse et dans les maladies auto-immunes et inflammatoires (Speisky et Cassels, 1994 - mentionné ci-dessus).

Enfin, par le document US-5 348 755 on connaît l'utilisation de la boldine comme agent anti-oxydant dans les huiles alimentaires et les documents US-4 185 119 et US-5 594 033 font état, respectivement, d'une activité antiallergisante et d'une activité anti-arythmique pour la boldine.

Toutefois, malgré ces multiples applications pharmaceutiques et thérapeutiques, aucune application ciblée dans le domaine des produits cosmétiques ou en dermatologie n'a été mentionnée à ce jour.

Or, les auteurs de la présente invention ont constaté, de manière inattendue et surprenante, que les extraits de Boldo, notamment constitués d'alcaloïdes aporphiniques et plus particulièrement de boldine, présentaient, en plus des activités indiqués précédemment, de nombreuses autres propriétés et effets remarquables, rendant ces extraits particulièrement efficaces pour combattre différents phénomènes et réactions intervenant dans le vieillissement tissulaire, notamment ceux provoqués ou accélérés par le rayonnement solaire.

Ainsi, le principal objet de la présente invention consiste en l'utilisation d'un extrait de Boldo en tant qu'agent actif, seul ou associé à au moins un autre agent actif, pour la préparation d'un produit cosmétique ou dermatologique pour le traitement préventif ou curatif du vieillissement des tissus, à usage topique externe pour la peau, les ongles et/ou les cheveux.

Conformément à un mode de réalisation préférentiel de l'invention, l'extrait de Boldo utilisé consiste en de la boldine ou en un extrait enrichi en boldine, en particulier extrait des feuilles de Boldo.

Les propriétés et effets remarquables des extraits de Boldo, plus particulièrement de la boldine, ont été relevés par l'intermédiaire de différents tests décrits plus en détail ci-après.

1) EFFETS SUR LA CROISSANCE DES FIBROBLASTES HUMAINS EN CULTURE IN VITRO
1) Mode opératoire
Des fibroblastes humains ont été ensemencés dans un milieu de culture défini (DMEM). Après incubation de 24 heures à 37 C dans une atmosphère à 5 % de CO2, la boldine (par exemple - non limitatif - la Boldine commercialisée par la société SIGMA, référence B3916, lot 94H10481) a été ajoutée à deux concentrations différentes.

Après incubation de 3 jours à 37 C et dans une atmosphère à 5 % de C02, la croissance des fibroblastes a été évaluée par dénombrement des cellules à l'aide d'un compteur de particules et par dosage enzymatique de l'ATP.

Le sérum de veau foetal (SVF), qui contient de nombreux facteurs de croissance (IGF, PDGF, etc...) et nutriments (glucose, protéines, acides aminés, etc...), a été utilisé comme étalon positif dans ces tests sur fibroblastes humains (en croissance et en survie) in vitro.

2) Résultats obtenus avec la boldine (en % par rapport au témoin)

<tb>
<tb> Concentration <SEP> de <SEP> boldine <SEP> Nombre <SEP> de <SEP> fibroblastes <SEP> Taux <SEP> d'ATP
<tb> (% <SEP> p/v) <SEP> (*) <SEP> (*)
<tb> 0 <SEP> % <SEP> = <SEP> témoin <SEP> 100 <SEP> 100
<tb> 0,001 <SEP> % <SEP> 105 <SEP> 116
<tb> 0,003 <SEP> % <SEP> 110 <SEP> 124
<tb>
(*) Moyenne de 3 essais en triplicate
3) Résultats obtenus avec le sérum de veau foetal (SVF) (en % par rapport au témoin)

<tb>
<tb> Concentration <SEP> de <SEP> SVF <SEP> Nombre <SEP> de <SEP> fibroblastes <SEP> Taux <SEP> d'ATP
<tb> (%v/v) <SEP> (*)
<tb> 0 <SEP> % <SEP> = <SEP> témoin <SEP> 100 <SEP> 100
<tb> 0,1 <SEP> % <SEP> 112 <SEP> 125
<tb> 0,3 <SEP> % <SEP> 135 <SEP> 155
<tb>
(*) Moyenne de 3 essais en triplicate
L'examen de ces tableaux montre que la boldine a nettement stimulé la croissance et le métabolisme des fibroblastes humains in vitro. Bien que testée à des doses 100 fois moindres que celles de SVF, la boldine a montré un effet comparable au SVF bien que d'intensité plus modérée.

II) EFFET D'AMELIORATION DE LA SURVIE SUR FIBROBLASTES HUMAINS IN VITRO
L'amélioration de la survie a été évaluée sur une culture saturée de fibroblastes. A saturation, la prolifération des fibroblastes subit une inhibition dite de "contact". Le test permet de quantifier sur les cellules quiescentes un certain nombre de paramètres : - activité métabolique générale par mesure du taux d'ATP, - synthèse des protéines,

- synthèse du glutathion.

I) Mode opératoire
Les fibroblastes ont été ensemencés dans le milieu de culture défini (DMEM). La boldine a été ajoutée dans la culture 72 heures après l'ensemencement. Les paramètres cités ont été évalués après une incubation de 72 heures à 37 C dans une atmosphère à 5 % de C02.

L'ATP a été dosé par un système enzymatique chimiluminescent (Kemp, 1986), les protéines ont été dosées par la réaction colorimétrique de Bradford (Bradford, 1986) et le glutathion réduit (GSH) a été mesuré par une sonde fluorescente, l'orthophtalaldéhyde (Hissin et Hilf, 1976).

N.B. : le taux de GSH est exprimé par mg de protéines puis en % / témoin non traité.

2) Résultats obtenus avec la boldine (en % par rapport au témoin)

<tb>
<tb> Concentration <SEP> de <SEP> Taux <SEP> d'ATP <SEP> Taux <SEP> de <SEP> protéines <SEP> Taux <SEP> de <SEP> GSH
<tb> boldine <SEP> (% <SEP> p/v) <SEP> (*) <SEP> (*) <SEP> (*)
<tb> 0 <SEP> % <SEP> = <SEP> témoin <SEP> 100 <SEP> 100 <SEP> 100
<tb> 0,002 <SEP> % <SEP> 131 <SEP> 157 <SEP> 96
<tb> 0,005 <SEP> % <SEP> 166 <SEP> 201 <SEP> 100
<tb>
(*) Moyenne de 2 essais en triplicate
3) Résultats obtenus avec le sérum de veau foetal (SVF) (en % par rapport au témoin)

<tb>
<tb> Concentration <SEP> de <SEP> Taux <SEP> d'ATP <SEP> Taux <SEP> de <SEP> protéines <SEP> Taux <SEP> de <SEP> GSH
<tb> SVF <SEP> (% <SEP> v/v) <SEP> (*) <SEP> (*) <SEP> (*)
<tb> Témoin <SEP> 100 <SEP> 100 <SEP> 100
<tb> 0,1 <SEP> % <SEP> 123 <SEP> 108 <SEP> 105
<tb> 0,3 <SEP> % <SEP> 140 <SEP> 117 <SEP> 120
<tb>
(*) Moyenne de 3 essais en triplicate
La boldine a stimulé la synthèse de l'ATP, des protéines et du GSH.

Pour l'ATP et le GSH, et bien que testée à des doses 50 fois moindres que celles de SVF, la boldine a montré des effets comparables à ceux du SVF. De plus, pour les protéines, la stimulation de la boldine était supérieure à celle observée pour le SVF.

Les résultats des paragraphes 1 et II montrent l'intérêt de l'utilisation de la boldine en Cosmétologie de soin (soins de la peau, soins capillaires, soins

des ongles) et son efficacité prévisible dans les préparations cosmétiques topiques destinées à combattre le vieillissement cutané et capillaire ou dans le traitement des peaux, cheveux, phanères fatigués nécessitant une stimulation de leurs métabolismes et de leurs synthèses protéiques.

III) ACTIVITE "ANTI-PROTEASES"
Les protéases sécrétées par les polymorphonucléaires neutrophiles (PMN) lors de l'inflammation ou par les fibroblastes soumis à une irradiation par les UV-A, provoquent une dégradation des protéines qui structurent la matrice extracellulaire du derme.

1) Test anti-collagènase in tubo (Van Wart et al., Anal. Biochem., 113,356-365, 1981)
Les leucocytes polymorphonucléaires (PMN) au cours d'une inflammation et les fibroblastes "âgés" ou irradiés sécrètent des collagènases. Les tests ont été réalisés avec une collagènase de Clostridium histolyticum et un substrat synthétique chromogène : le FALGPA. L'incubation est de 30 minutes à température ambiante et la densité optique est mesurée à 324 nm. L'inhibiteur étalon testé comparativement est la cystéine.

Concentrations <SEP> en <SEP> % <SEP> (p/v) <SEP> Résultats <SEP> en <SEP> % <SEP> d'inhibition
<tb> Témoin <SEP> 0
<tb> Boldine <SEP> à <SEP> 0,03 <SEP> % <SEP> 1
<tb> Boldine <SEP> à <SEP> 0,1 <SEP> % <SEP> 40
<tb> Boldine <SEP> à <SEP> 0,3 <SEP> % <SEP> 100
<tb> CI,;() <SEP> en <SEP> % <SEP> p/v <SEP> 0,12 <SEP> % <SEP>
<tb> Concentrations <SEP> de <SEP> cystéine <SEP> (en <SEP> % <SEP> p/v <SEP> Résultats <SEP> en <SEP> % <SEP> d'inhibition <SEP> (p/v)
<tb> 0 <SEP> 0
<tb> 1,8 <SEP> 44
<tb> 2,6 <SEP> 63
<tb> 3,5 <SEP> 77
<tb> CI$0 <SEP> en <SEP> % <SEP> p/v <SEP> 2,0 <SEP> %
<tb>

Ces résultats illustrent une autre propriété avantageuse de la boldine, en faveur de l'utilisation de la boldine en cosmétologie pour combattre le vieillissement cutané et/ou des phanères, photoinduit ou intrinsèque.

IV) ACTIVITE "ANTI-SUBSTANCE P"
1) Inhibition de la substance P "ex vivo" (Ebertz et al., Journal of Investigative Dermatology, 88 (6), 682-685, 1987)
La substance P est un neuropeptide libéré par certaines fibres nerveuses sensorielles de la peau après irritation. Ce peptide agit sur des récepteurs spécifiques présents sur les cellules de la peau (fibroblastes, kératinocytes, cellules de Langerhans) pour induire soit une prolifération (fibroblastes et kératinocytes) soit une immunomodulation (cellules de Langerhans). Sur les mastocytes, la substance P induit la libération d'histamine responsable de l'érythème observé in vivo. C'est ce phénomène qui a été évalué sur des biopsies de peau incubées à 37 C en présence de substance P. L'histamine libérée est dosée par une technique ELISA.

Concentrations <SEP> en <SEP> % <SEP> (p/v) <SEP> Taux <SEP> d'histamine <SEP> libérée <SEP> % <SEP> /témoin
<tb> en <SEP> micromole <SEP> par <SEP> litre <SEP> par
<tb> biopsie
<tb> Témoin <SEP> 0,8 <SEP> 0
<tb> Témoin <SEP> + <SEP> Substance <SEP> P <SEP> 1,4 <SEP> 100
<tb> Substance <SEP> P <SEP> + <SEP> Boldine <SEP> à <SEP> 0,01 <SEP> % <SEP> 1,3 <SEP> 81
<tb> Substance <SEP> P <SEP> + <SEP> Boldine <SEP> à <SEP> 0,1 <SEP> % <SEP> 1,2 <SEP> 69
<tb>

Ces résultats indiquent nettement l'avantage d'une utilisation topique de la boldine en cosmétologie pour apaiser les peaux sensibles irritées par des substances chimiques (pollution) ou par des stress physiques (UV, chaleur, sécheresse) ou psychosomatiques.

V) ACTIVITE "ANTI-GLYCATION"
1) Inhibition de la glycation "in tubo" (Deyl et al., Mechanisms of Aging & Development, 55 (1), 39-47, 1990 / Monnier et al., Proceedings of the National Academy of Sciences of the USA, 81 (1), 583-587, 1984)
La glycation non-enzymatique des protéines est un processus déterminant du vieillissement des tissus humains et explique la réticulation des matrices extracellulaires et des membranes basales, responsable en grande partie des pathologies observées chez les diabétiques. De plus, les bases de Schiff catalysent la production de formes réactives de l'oxygène, qui aggravent les effets de la glycation non-enzymatique. Les tests in tubo ont été réalisés sur du collagène type 1 incubé 21 jours à 45 C en présence de glucose à 1 %. Le taux de bases de

Schiff a été évalué par fluorimétrie à 430 nm (excitation à 350 nm). Le taux de glucose fixé par le collagène a été évalué par l'acide thiobarbiturique (densitométrie à 443 nm).

Concentrations <SEP> en <SEP> % <SEP> Résultats <SEP> en <SEP> % <SEP> par <SEP> rapport <SEP> au <SEP> témoin
<tb> (p/v) <SEP> Fluorescence <SEP> -I--- <SEP> Glucose <SEP> fixé
<tb> 0 <SEP> % <SEP> = <SEP> témoin <SEP> 100 <SEP> 100
<tb> Boldine <SEP> à <SEP> 0,01 <SEP> % <SEP> 78 <SEP> 77
<tb> Boldine <SEP> à <SEP> 0,1 <SEP> % <SEP> 48 <SEP> 42
<tb>

L'aminoguanidine a été également testée comme étalon positif dans ce modèle de glycation in tubo.

Concentrations <SEP> en <SEP> Résultats <SEP> en <SEP> % <SEP> par <SEP> rapport <SEP> au <SEP> témoin
<tb>

aminoguanidine ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~

<tb>
<tb> (en <SEP> % <SEP> p/v) <SEP> Fluorescence <SEP> Glucose <SEP> fixé
<tb> 0 <SEP> % <SEP> = <SEP> témoin <SEP> 100 <SEP> 100
<tb> 0,003 <SEP> % <SEP> 98 <SEP> 101
<tb> 0,01% <SEP> 95 <SEP> 115
<tb> 0,03% <SEP> 70 <SEP> 112
<tb> 0,1 <SEP> % <SEP> 24 <SEP> 126
<tb>

L'examen de ces tableaux montre qu'à 0,01 %, la boldine est plus active que l'aminoguanidine sur la fluorescence des bases de Schiff et sur le taux de glucose fixé sur le collagène.

Ces résultats montrent l'intérêt de l'utilisation topique de la boldine en cosmétologie de soin pour réduire les effets du vieillissement (intrinsèque ou photo-induit) sur les protéines de la matrice extracellulaire de la peau (soins de la peau et des cheveux).

VI) INHIBITION DE L'INDUCTION DE L'APOPTOSE
1) Principe
L'apoptose est un processus biologique actif utilisé par les organismes vivants pour éliminer certaines cellules de leur tissu, par autolyse avec en particulier une destruction des protéines et de l'ADN nucléaire en petits fragments relargués dans le cytoplasme.

L'apoptose peut être induite par un stress oxydatif (UV-R, inflammation), par une privation en facteurs de croissance ou par des substances toxiques (polluants, agents génotoxiques, etc...).

Le principe de ces essais a été de mettre en évidence les capacités d'une substance à réduire le taux d'apoptose induite dans une culture de cellules in vitro.

L'inducteur de l'apoptose retenu pour cette étude était la privation en facteurs de croissance : ce mécanisme serait responsable au moins en partie du vieillissement des tissus par disparition des cellules vivantes.

2) Mode opératoire a) Préparation des cellules
Des cellules épithéliales humaines A549 en tapis cellulaires saturés ont été utilisées pour ce test.

A JO, les cellules ont reçu un milieu de culture sans sérum contenant les diverses concentrations des substances à tester et ont été incubées durant 4 jours à 37 C. Un lot de cellules recevant un milieu avec du sérum de veau (contenant les facteurs de croissance) a été pris comme témoin négatif. Ensuite les cellules ont été récupérées par trypsination pour être colorées et analysées en cytométrie de flux. b) Quantification du nombre de cellules apoptotiques en cytométrie de flux (R. Olivier. Methods in Enzymol.. vol. 251. Chapter 24. 270-278. 1995)
Dans les études sur l'apoptose, il est indispensable d'évaluer non seulement le taux de cellules en apoptose mais aussi le taux de cellules en nécrose pour confirmer que l'inhibition de l'induction de l'apoptose n'est pas due à un passage en nécrose.

* Méthode 1 : coloration par des sondes fluorescentes
Dans cette méthode, les cellules sont colorées simultanément par une solution de bromure d'éthidium (5 microgrammes/ml) et d'acridine orange (1,5 microgrammes/ml).

Les cellules nécrotiques sont colorées par le bromure d'éthidium tandis que les cellules vivantes ne sont colorées que par l'acridine orange. De plus, les cellules vivantes sont séparées en deux populations selon l'intensité de fluorescence de l'acridine orange proportionnelle à la quantité d'ADN : les cellules apoptotiques avec une faible fluorescence et les cellules non-apoptotiques avec une forte fluorescence.

* Méthode 2 : par le pic "sub-G 1

Dans cette méthode une partie des cellules est traitée par le bleu trypan pour colorer et dénombrer sous microscope classique, le nombre de cellules nécrotiques.

L'autre partie des cellules est perméabilisée puis colorée par une solution de bromure d'éthidium (5 microgrammes/ml) et quantifiée en cytométrie de flux. Dans cette partie, les cellules apoptotiques apparaissent sous forme d'un pic appelé "sub-G1" car elles présentent un taux d'ADN réduit par rapport aux cellules non-apoptotiques. Le pic est appelé "sub-Gl" car il apparaît juste avant le pic Gdans l'histogramme de fréquence des études sur le cycle cellulaire. Le pic GO/Gcorrespond aux cellules au repos ou en début de cycle qui ne contiennent qu'un exemplaire de leur matériel génétique. Le pic G2/M correspond aux cellules ayant leur matériel génétique en double exemplaire ou déjà en cours de mitose (séparation des deux cellules filles). Les pics G0/G1et G2/M sont séparés par un plateau comprenant les cellules en phase intermédiaire S de synthèse de leur deuxième exemplaire de matériel génétique (selon F. Lacombe, 1992).

3) Résultats
Les figures 1 et 2 des dessins annexés représentent graphiquement l'inhibition par la boldine de l'apoptose induite dans des cellules humaines A549 par privation en facteurs de croissance, révélé par cytométrie de flux (Statistiques : Moyenne +/- SEM sur 3 essais/ Test t de Student / (*) = p < 0,05).

Les graphiques des figures 1 et 2 doivent être interprétés en relation avec les résultats déterminés pour les lots témoins indiqués dans les tableaux ciaprès.

Taux <SEP> en <SEP> % <SEP> (moyenne <SEP> +/- <SEP> SEM <SEP> sur <SEP> 3 <SEP> essais)
<tb> Coloration <SEP> Témoin <SEP> Référence
<tb> (sans <SEP> sérum <SEP> de <SEP> veau) <SEP> (sérum <SEP> de <SEP> veau)
<tb> Cellules <SEP> vivantes <SEP> 67 <SEP> +/- <SEP> 3 <SEP> 70 <SEP> +/- <SEP> 3
<tb> non <SEP> apoptotiques
<tb> Méthode <SEP> 1 <SEP> Cellules <SEP> vivantes <SEP> 15 <SEP> +/- <SEP> 4 <SEP> 2 <SEP> +/- <SEP> 0 <SEP>
<tb> apoptotiques
<tb> Cellules <SEP> 16 <SEP> +/- <SEP> 2 <SEP> 25 <SEP> +/- <SEP> 3
<tb> nécrotiques
<tb>

<tb>
<tb> Taux <SEP> en <SEP> % <SEP> (moyenne <SEP> +/- <SEP> SEM <SEP> sur <SEP> 3 <SEP> essais)
<tb> Coloration <SEP> Témoin <SEP> Référence
<tb> (sans <SEP> sérum <SEP> de <SEP> veau) <SEP> (sérum <SEP> de <SEP> veau)
<tb> Cellules <SEP> 74 <SEP> +/- <SEP> 7 <SEP> 79 <SEP> +/- <SEP> 5 <SEP>
<tb> vivantes
<tb> Méthode <SEP> 2 <SEP> Cellules <SEP> vivantes <SEP> 16 <SEP> +/- <SEP> 4 <SEP> 2 <SEP> +/- <SEP> 0 <SEP>
<tb> apoptotiques
<tb> Cellules <SEP> 26+/-7 <SEP> 21 <SEP> +/- <SEP> 5 <SEP>
<tb> nécrotiques
<tb>

Avec la méthode 1 (Fig. 1), la privation des cellules en facteurs de croissance a fait passer le taux d'apoptose de 2 à 15 %. Dans les cellules traitées par la boldine, le taux d'apoptose a chuté à 4 % pour la dose de 5 mg/1.

Avec la méthode 2 (Fig. 2), la privation des cellules en facteurs de croissance a fait passer le taux d'apoptose de 2 à 16 %. Dans les cellules traitées par la boldine, le taux d'apoptose a chuté à 4 % pour la dose de 5 mg.1.

Ces résultats montrent que la boldine présente comme le sérum de veau, des capacités significatives à réduire le taux d'apoptose induite dans une culture de cellules humaines privées de facteurs de croissance.

De plus, cet effet de la boldine n'est pas dû à un transfert de l'apoptose vers la nécrose car les taux de cellules en nécrose changent peu selon la dose de boldine.

Les effets et activités bénéfiques de la boldine ou d'un extrait enrichi en boldine nouvellement relevés par les inventeurs et mentionnés ci-dessus, comprennent donc notamment une très forte activité stimulante du métabolisme (en particulier stimulation de la synthèse de l'ATP, du glutathion réduit GSH et des protéines), une activité anti-glycation du collagène et des protéines cutanées et un effet prononcé de stimulation de la croissance cellulaire.

Cette conjonction surprenante d'effets avantageux sur des mécanismes intervenant concomitamment dans les processus du vieillissement cellulaire, souligne l'intérêt de l'utilisation de la boldine, même en faible quantité, pour pallier préventivement ou curativement le vieillissement des tissus, en particulier des tissus cutanés.

Par ailleurs, les activités additionnelles de la boldine ou d'un extrait enrichi en boldine, également mentionnées ci-dessus et nouvellement relevées ou

vérifiées par les inventeurs, à savoir, activité anti-protéases (notamment anticollagènase), activité anti-substance P et inhibition de l'induction de l'apoptose, confèrent à la boldine des propriétés biologiques supplémentaires, notamment des effets anti-stress, apaisant, protecteur et réparateur au niveau de la peau, en particulier après exposition au rayonnement solaire.

L'invention concerne par conséquent également l'utilisation particulièrement avantageuse de la boldine dans un produit traitant préférentiellement le vieillissement tissulaire intrinsèque ou photo-induit, notamment au niveau de la peau.

Par ailleurs, l'invention a également pour objet un produit cosmétique ou dermatologique pour le traitement du vieillissement tissulaire, notamment photo-induit, caractérisé en ce qu'il contient à titre d'agent actif, unique ou associé à au moins un autre agent actif, une quantité cosmétiquement ou dermatologiquement efficace d'un extrait de Boldo, préférentiellement de la boldine ou un extrait enrichi en boldine.

Selon une caractéristique de l'invention, tenant notamment compte des résultats expérimentaux exposés ci-dessus, ledit produit cosmétique ou dermatologique contient avantageusement entre 0,0001 % et 10 % en poids, préférentiellement entre 0,001 % et 2 % en poids, de boldine.

Conformément à une première variante de réalisation de l'invention, la boldine est présente sous forme de soluté hydropolyolique ou sous forme vectorisée (liposomes, nanosphères, nanocapsules, microsphères, microcapsules, micelles ou analogues).

Conformément à une seconde variante de réalisation de l'invention, la boldine est présente sous une forme greffée, par exemple par des acides aminées, des sucres, des lipides ou des peptides.

A titre d'exemples non limitatifs de réalisations pratiques de l'invention, on décrira ci-après différents produits ou compositions cosmétiques comprenant de la boldine en tant qu'agent actif unique ou associé à au moins un autre.

Exemple 1 : Un produit cosmétique conforme à l'invention, sous forme de lotion capillaire protectrice et stimulante pourra, par exemple, présenter une composition pondérale telle qu'indiquée ci-après.

Formule : - Hydroxyéthylcellulose 0,20 - Propylèneglycol 2,00 - Alcool cétostéarylique (et) Ceteareth-20 5,00 - Lipodermol 1,00 - Chlorure de cétrimonium 1,00 - Stéarate de glycol 2,00 - Conservateur qs - Protéine de blé hydrolysée 1,00 - Boldine 0,005 - Eau qsp 100,00
Le procédé de préparation et de fabrication de la lotion précitée consiste essentiellement à porter l'ensemble des corps gras (alcool cétostéarylique (et) ceteareth-20, lipodermol et stéarate de glycol) à 75 C, à porter le mélange eau et propylèneglycol à 70 C, à dissoudre dans ce mélange à cette température l'hydroxyéthylcellulose, le chlorure de cétrimonium, le conservateur, la boldine et la protéine de blé hydrolysée, à verser la phase grasse dans la phase aqueuse sous agitation et à poursuivre l'agitation jusqu'au refroidissement complet de la lotion résultante.

Exemple 2 : Un produit cosmétique conforme à l'invention, sous forme de crème de nuit, stimulante, reparatrice et antirides pourra, par exemple, présenter une composition pondérale telle qu'indiquée ci-après.

Formule : Phase grasse - Stéarate de glycérol (et) alcool cétostéarylique (et) palmitate cétylique (et) glycérides de coco 12,00 - PEG-20 stéarate de glycérol 2,00 - Ceteareth 20 1,00 - Octyldodécanol 3,00 - Huile de karité 3,00 - Dioctylcyclohexane 4,00 Phase aqueuse - Glycérine 3,00

- Vegeseryl # HGP : protéine de soja (soja glycine) 5,00 - Boldine 0,20 - Elestab # 388 (conservateur) 1,50 - Eau qsp 100,00 - Parfum qs
Le procédé de préparation et de fabrication de la crème précitée consiste essentiellement à chauffer les constituants de la phase grasse à 80 C, à chauffer le mélange eau + glycérine + conservateur à 80 C et à y dissoudre par agitation la boldine, à verser la phase grasse dans la phase aqueuse sous agitation turbine, à laisser refroidir le mélange résultant, à ajouter vers 60 C Vegeseryl # HGP, à ajouter vers 45 C le parfum et enfin à poursuivre le refroidissement jusqu'à température ambiante.

Exemple 3 : Un produit cosmétique conforme à l'invention, sous forme de crème de jour protectrice anti-irritante pour peaux sensibles pourra, par exemple, présenter une composition pondérale telle qu'indiquée ci-après.

Formule : Phase grasse - Stéarate de glycérol SE 16,00 - Ceteareth-12 1,00 - Octyldodécanol 6,00 - Myristate d'isopropyle 4,00 Phase aqueuse - Glycérine 6,00 - Boldine 0,30 - Méthylparabène 0,20 - Propylparabène 0,10 - Urée d'imidazolidinyle 0,30 - Eau 65,80 - Parfum 0,30
Le procédé de préparation et de fabrication de la crème précitée, pourra consister à chauffer les constituants de la phase grasse à 80 C, à chauffer l'eau et la glycérine à 75 C et à dissoudre dans ce mélange à cette température le méthylparabène et le propylparabène, puis l'urée d'imidazolidinyle, à dissoudre ensuite dans ce mélange, juste avant la mise en émulsion, la boldine, à verser la phase grasse dans la phase aqueuse sous agitation turbine, puis à refroidir

progressivement le mélange obtenu par agitation planétaire et turbine, à ajouter vers 45 C le parfum et enfin à laisser refroidir à température ambiante.

Exemple 4 : Un produit cosmétique conforme à l'invention, sous forme de crème protectrice anti-âge antiglycation et antiproteases pourra, par exemple, présenter une composition pondérale telle qu'indiquée ci-après.

Formule : Phase grasse - Alcool stéarique (et) Steareth-7 (et) Steareth-10 4,00 - Stéarate de glycéryle (et) Ceteth 20 2,00 - Huile d'avocats 3,00 - Alcool stéarylique 2,00 - Triglycérides capryliques/capriques 3,00 - Laurate d'hexyle 2,00 - Stéarate d'isopropyle 2,00 - Huile de paraffine Il,00 - Cétyldiméticone 1,00 Phase aqueuse - Allantoïne 0,10 - Boldine 0,30 - Butylèneglycol 5,00 - Elestab # 4112 (conservateur) 0,35 - Eau qsp 100,00
Le procédé de préparation et de fabrication de la crème précitée, pourra consister à chauffer les constituants de la phase grasse à 80 C sous agitation, à porter le mélange eau + butylèneglycol + conservateur à 80 C et à y dissoudre l'allantoïne et la boldine, à verser la phase grasse dans la phase aqueuse sous agitation turbine et enfin, à refroidir progressivement le mélange résultant sous agitation jusqu'à température ambiante.

Exemple 5 : Un produit cosmétique conforme à l'invention, sous forme de lotion tonique visage pourra, par exemple, présenter une composition pondérale telle qu'indiquée ci-après.

Formule : - Propylèneglycol 5,00 - Eau d'Hamamélis Virginiana 5,00

- Boldine 0,10 - Elestab # 50J (conservateur) 0,40 - Parfum qs - PEG-40- huile de ricin hydrogénée qs - Eau distillée qsp 100,00
Le procédé de préparation et de fabrication de la lotion précitée consiste essentiellement à porter l'eau distillée et le propylène glycol à 50 C et à y dissoudre le conservateur et la boldine, puis à dissoudre sous agitation le parfum et le solubilisant (huile de ricin), à y ajouter l'eau d'hamamélis, à agiter jusqu'à refroidissement et enfin à filtrer.

Exemple 6 : Un produit cosmétique conforme à l'invention, sous forme d'émulsion antiapoptose pourra, par exemple, présenter une composition pondérale telle qu'indiquée ci-après.

Formule : Phase grasse - PEG-25 PABA 5,00 - Ceteareth-6 (et) alcool stéarylique 2,00 - Ceteareth-25 2,00 - Alcool cétylique 1,00 - Stéarate de glycéryle SE 6,00 - Huile de paraffine 5,00 - Triglycérides capryliques/capriques 5,00 - Diméthicone 0,20 Phase aqueuse - Boldine 0,20 - Butylèneglycol 5,00 - Elestab # 388 (conservateur) 1,50 - Allantoïne 0,15 - Parfum 0,20 - Eau distillée qsp 100,00
Le procédé de production et de fabrication de l'émulsion précitée pourra consister à chauffer les constituants de la phase grasse à 80 C sous agitation, à porter l'eau à 80 C et à y ajouter sous agitation le butylèneglycol, le conservateur, l'allantoïne et la boldine, à verser la phase grasse dans la phase aqueuse sous agitation turbine, à refroidir progressivement le mélange obtenu, à

ajouter le parfum vers 45 C et enfin, à poursuivre l'agitation jusqu'au refroidissement complet.

Bien entendu, l'invention n'est pas limitée aux modes de réalisation décrits. Des modifications restent possibles, notamment du point de vue de la constitution des divers éléments ou par substitution d'équivalents techniques, sans sortir pour autant du domaine de protection de l'invention.

Claims

REVENDICATIONS

1) Utilisation d'un extrait de Boldo en tant qu'agent actif, seul ou associé à au moins un autre agent actif, pour la préparation d'un produit cosmétique ou dermatologique pour le traitement préventif ou curatif du vieillissement des tissus, à usage topique externe pour la peau, les ongles et/ou les cheveux.

2) Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que l'extrait de Boldo consiste en de la boldine ou en un extrait enrichi en boldine.

3) Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 et 2, caractérisée en ce que l'extrait présente une activité stimulante du métabolisme et une activité stimulante de la croissance cellulaire.

4) Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que l'extrait présente également une activité anti-glycation du collagène et des protéines cutanées.

5) Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisée en ce que l'extrait présente également une activité anti-collagénase.

6) Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que l'extrait présente également une activité anti-apoptose.

7) Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisée en ce que l'extrait présente également une activité anti-substance P.

8) Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisée en ce que le produit cosmétique ou dermatologique consiste en un produit traitant plus particulièrement le vieillissement tissulaire intrinsèque ou photo-induit.

9) Produit cosmétique ou dermatologique pour le traitement du vieillissement tissulaire, notamment photo-induit, caractérisé en ce qu'il contient à titre d'agent actif, unique ou associé à au moins un autre agent actif, une quantité cosmétiquement ou dermatologiquement efficace d'un extrait de Boldo.

10) Produit cosmétique ou dermatologique selon la revendication 9, caractérisé en ce que l'extrait de Boldo consiste en de la boldine ou en un extrait enrichi en boldine.

11) Produit cosmétique ou dermatologique selon l'une quelconque des revendications 9 et 10, caractérisé en ce qu'il contient entre 0,0001 % et 10 % en poids, préférentiellement entre 0,001 % et 2 % en poids, de boldine.

12) Produit cosmétique ou dermatologique selon l'une quelconque des revendications 10 et 11, caractérisé en ce que la boldine est présente sous forme de soluté hydropolyolique ou sous forme vectorisée.

13) Produit cosmétique ou dermatologique selon l'une quelconque des revendications 10 et 11, caractérisé en ce que la boldine est présente sous une forme greffée, par exemple par des acides aminées, des sucres, des lipides ou des peptides.