FR2628215A1 - Procede et appareil automatique d'electrophorese - Google Patents

Abstract

L'appareil comprend un dispositif 30 équipé de pipettes 32 pour automatiquement prélever des échantillons liquides 26-28 sur un plateau d'échantillons 14 et les déposer sur un milieu-support microporeux 12, des moyens automatiques pour appliquer un courant d'électrophorèse audit milieu-support et pour le refroidir en même temps, des moyens automatiques pour appliquer et étaler un réactif de coloration fluorescent et des moyens automatiques d'incubation puis de séchage. Une caméra-vidéo 114 montée fixe dans une chambre de balayage 100 équipée de lampes fluorescentes 110 produit des signaux représentatifs des composants desdits échantillons longitudinalement déplacés par électrophorèse. Un ordinateur associé calcule ensuite les densités optiques de ces composants. Application : Recherche médicale et mesures de laboratoire.

Description

() RÉPUBLIQUE FRAN CAISE N de publication: 2 628 215 (à n'utiliser que

pour les INSTITUT NATIONAL commandes de reproduction) DE LA PROPRIETÉ INDUSTRIELLE( NO d'enregistrement national: 88 02606 PARIS

Int CI': G 01 N 27/26, 33/96.

@ DEMANDE DE BREVET. D'INVENTION A1

) Date de dépôt: 2 mars 1988.) Demandeur(s): HELENA LABORATORIES CORPORA-

T/ON. -US.

Priorité: US. 16 mars 1987, n 026.465.

Inventeur(s): Robert J. Sarrine: Henry A. Garsee:

Charles D. Kelley; Philip A. Guadagno.

(4 Date de la mise à disposition du public de la

demande: BOPI " Brevets " n 36 du 8 septembre 1989.

Références à d'autres documents nationaux appa-

rentés: r s Titulaire(s):

Q Mandataire(s): Roger Le Cren.

Procédé et appareil automatique d'électrophorèse. () L'appareil comprend un dispositif 30 équipé de pipettes pour automatiquement prélever des échantillons liquides 26-28 sur un plateau d'échantillons 14 et les déposer sur un milieu-support microporeux 12, des moyens automatiques pour ' appliquer un courant d'électrophorèse audit milieu-support et pour le refroidir en même temps; des moyens automatiques pour appliquer et étaler un réactif de coloration fluorescent et Dû. ' des moyens automatiques d'incubation puis de séchage. Une = caméra-vidéo 114 montée fixe dans une chambre de balayage t- 100 équipée de lampes fluorescentes 110 produit des signaux

représentatifs des composants desdits échantillons longitudina-

Ilement déplacés par électrophorèse. Un ordinateur associé

calcule ensuite les densités optiques de ces composants.

LT> Application: Recherche médicale et mesures de laboratoire.

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PROCEDE ET APPAREIL AUTOMATIQUE D'ELECTROPHORESE

DOMAINE DE L'INVENTION

L'invention concerne d'une manière générale le domaine de l'analyse

d'échantillons liquides par électrophorèse.

Plus particulièrement l'invention se rapporte à un procédé et à un appareil pour totalement automatiser le processus d'électrophorèse dès l'étape d'application des échantillons liquides sur un milieu-support d'électrophorèse puis, sans déplacer ce milieu-support, en y incluant les étapes d'électrophorèse, de coloration, d'incubation, de séchage, de balayage optique et de mesure densimétrique des échantillons ainsi balayés.

DESCRIPTION DE LA TECHNIQUE CONNUE

L'électrophorèse est la science du déplacement de particules chargées dans un champ électrique, à travers un milieu solide ou semi-solide. La technique est plus particulièrement utilisée dans la recherche médicale et dans les laboratoires médicaux pour analyser les

différentes protéines du sang.

Dans le diagnostic des maux des êtres humaines et des animaux, on sait qu'un grand nombre d'informations peut être obtenu par une analyse de certains fluides biologiques tels que les protéines du sérum sanguin, les lipoprotéines, l'hémoglobine et les isoenzynes. Il est connu que l'électrophorèse est une méthode efficace pour séparer les composants respectifs de tels fluides en vue d'une analyse microscopique ou d'une mise en oeuvre des techniques - de densimétrie optique d'analyse d'échantillons. Dans la méthode de base de l'électrophorèse, les molécules électriquement chargées des fluides de l'échantillon sont séparées sous l'influence d'un champ électrique auquel l'échantillon liquide à examiner est soumis, grace à un milieu support comportant une surface poreuse humide. Du fait que les différents composants du fluide se déplacent à des vitesses différentes à travers le milieu-support, l'échantillon liquide peut être séparé en ses composants fractionnels. Une coloration ultérieure de ces composants étalés sur le milieu- support peut ensuite être soumise à des mesures de densimétrie optique ou à d'autre type de mesures. Le procédé d'électrophorèse est mis en oeuvre depuis de nombreuses années au moyen d'une série d'opérations manuelles. Le procédé manuel commence d'une manière typique avec l'opérateur préparant une chambre d'électrophorèse en remplissant des cavités appropriées de la chambre avec une solution intermédiaire. Une solution intermédiaire est un liquide utilisé dans le procédé d'électrophorèse pour maintenir la surface du milieu-support dans une condition d'humidité convenable et pour constituer une interface électrique à une source de puissance appliquée à la chambre, de façon qu'un champ électrique puisse être appliqué au milieu-support. Le milieu-support est typiquement une feuille de MYLAR (marque déposée) revêtue d'un gel tel que de l'acétate de cellulose ou de l'agarose. L'échantillon liquide à examiner est typiquement du sérum sanguin mais bien entendu ce peut être d'autres liquides dont les composants peuvent être déplacés à travers un champ électrique. Lorsque l'opérateur a préparé la chambre d'électrophorèse, il applique alors aussi précisément qu'il le peut, des volumes déterminés

d'échantillons à des emplacements précis sur le milieu-support.

L'opérateur place ensuite le milieu-support dans la chambre d'électrophorèse de façon que les bords du milieu-support soient immergés dans les deux cavités intermédiaires disposées à chacune de ses extrémités longitudinales. L'électrophorèse est alors réalisée en utilisant une haute tension précise, appliquée pendant un intervalle de

temps précis relativement long à ces deux cavités intermédiaires.

Lorsque l'électrophorèse a été effectuée, l'opérateur applique d'une

manière uniforme un réactif de coloration sur la surface du milieu-

support de façon que, après un intervalle de temps déterminé relativement long, le réactif et l'échantillon se combinent chimiquement. Le réactif de coloration est un liquide utilisé après l'électrophorèse, qui se combine chimiquement avec les différents composants de l'échantillon de fluide analysé et leur permet ainsi de présenter des caractéristiques optiques. Ensuite, l'opérateur place le milieu-support dans un four à température contrôlée et lui fait subir une incubation pendant un intervalle de temps précis déterminé. L'incubation est le procédé qui contrôle la réaction chimique entre les composants de l'échantillon liquide et le réactif de coloration, au moyen de chaleur appliquée

pendant un intervalle de temps déterminé.

Ensuite, l'opérateur sèche le plateau d'échantillon en augmentant la température du four jusqu'à une seconde valeur déterminée et pendant une second intervalle de temps déterminé. Cette étape de séchage arrête la réaction entre les composants de l'échantillon et le réactif de

coloration en enlevant l'eau du milieu-support.

Un des problèmes rencontrés dans la préparation manuelle du milieusupport vient de ce que plusieurs échantillons liquides à analyser sont appliqués à la fois au milieu-support qui doit être soumis à l'électrophorèse. Les échantillons peuvent être appliqués au milieusupport l'un après l'autre au moyen d'une pipette à main mais cette pipette à main doit être rincée avec un liquide de purification puis séchée avant qu'un nouvel échantillon soit aspiré puis appliqué à une bande de milieu-support. Des applicateurs ont été développés afin d'appliquer plusieurs échantillons de fluide simultanément aux bandes supports. Des tels applicateurs sont décrits à la page 61 du Général Products Catalog 1984-1985 de la Société Helena Laboratoire Corporation de Beaumont (Texas). De tels applicateurs peuvent appliquer au moins huit ou douze échantillons à un milieu-support microporeux et ont l'avantage de rendre la technique d'électrophorèse plus aisée à mettre en oeuvre et

plus reproductible.

De tels applicateurs toutefois, sont essentiellement non-automatiques et requièrent une purification des cols de pipettes après chaque application sur le milieu-support. Un inconvénient des applicateurs usuels est qu'il n'y a aucun moyen pour nettoyer et purifier automatiquement les tubes des pipettes durant chaque temps du cycle afin de prévenir la contamination de chacun de ces tubes lors de l'application d'une nouvelle série d'échantillon de fluides à un nouveau milieu-support. Un autre inconvénient des applicateurs usuels est qu'il n'y a aucun moyen pour appliquer automatiquement une très petite quantité - de l'ordre d'un microlitre - d'un échantillon liquide à un milieu-support. Un autre inconvénient de ces applicateurs est qu'il n'y a aucun moyen pour diluer automatiquement et d'une manière précise une très petite quantité - de l'ordre du microlitre - d'un échantillon liquide avec un fluide de dilution et pour appliquer avec précision une telle

quantité très petite de l'échantillon dilué à un milieu-support.

Des procédés et des appareils pour réaliser automatiquement les opérations d'électrophorèse et de coloration d'une pluralité d'échantillons appliqués à un milieu-support sont cependant connus. A titre d'exemples, on citera les deux brevets américains n 4.360.418 et

4.391.689 accordés à Golias.

Un tel appareil automatique comporte une chambre d'électrophorèse et une rangée de cuvettes disposées sur une plateforme, adaptées à contenir respectivement un réactif de coloration liquide et une série de solutions de traitement du plateau d'échantillons. Le tiroir de soutien du plateau, ayant un chassis ouvert horizontal, supporte un plateau ou un milieusupport d'électrophorèse vertical sur lequel a été appliqué un

échantillon en vue d'un fractionnement par électrophorèse.

Un tel plateau d'électrophorèse doit avoir été préalablement préparé par l'application d'échantillon liquides soit manuellement soit au moyen des applicateurs en parallèle décrits ci-dessus. Le plateau est placé dans la chambre en série avec un circuit d'électrophorèse pendant une période de temps prédéterminée. Un dispositif automatique de transfert et de levage est adapté à lever, transférer et abaisser le tiroir de soutien du plateau et le plateau lui-même depuis la chambre jusqu'à chacune des cuvettes disposées en-dessous pendant une période de temps prédéterminée au cours d'un mouvement linéaire pas à pas, en maintenant constamment le plateau dans une position verticale. On notera que l'étape de coloration fait appel à un processus chimique alors que dans le procédé manuel décrit plus haut, une incubation et un séchage sont utilisés. Bien que l'appareil décrit ci-dessus comporte des caractéristiques intéressantes, il présente néanmoins des inconvénients, notamment parce qu'il requiert une pluralité de produits chimiques et de solutions de nettoyage, ce qui

nécessite une vérification périodique de l'état de l'appareil.

Les appareils et les procédés connus utilisés pour le balayage optique du milieu-support qui a été soumis à une électrophorèse et à une coloration font appel à des dispositifs tels que des tubes photomultiplicateurs, des photodiodes ou des dispositifs semblables qui produisent un courant ou une tension électrique de sortieproportionnel à l'intensité de la lumière tombant sur un tel dispositif. Ces dispositifs sont généralement appelés détecteurs. Les instruments de type connu employant ces détecteurs sont utilisés pour déterminer les différentes propriétés physiques des échantillons qui ont été soumis à une électrophorèse. Les propriétés intéressantes des bandes séparées de l'échantillon sont la taille et la densité ou intensité optique de la lumière émise, laquelle possède une longueur d'onde différente de celle de la source lumineuse d'excitation. Des bandes séparées de chaque échantillon soumis a une électrophorèse sont des composants connus de l'échantillon en cours de test et il est souhaitable que ces composants soient quantifiés en vue

d'aider la recherche ou le diagnostic médical.

5. Les instruments connus qui utilisent les détecteurs visés ci-dessus font généralement usage d'une fenêtre étroite de collimation. L'objet de cette fenêtre est de permettre au détecteur de voir un instant une partie du plateau d'échantillons qui a la même forme et les mêmes dimensions relatives que la fenêtre. Le détecteur produit alors un courant ou une tension électrique dont l'amplitude est proportionnelle à la lumière détectée. Ce courant ou cette tension est ensuite converti en un signal numérique au moyen d'un convertisseur analogique/numérique. Ce signal numérique qui est représentatif de l'amplitude de la lumière reçue est

ensuite stocké sous un format déterminé dans la mémoire d'un ordinateur.

Bien qu'une des formes de réalisation de l'invention qui sera décrite ciaprès, utilise des détecteurs connnus en combinaison avec un autre appareil automatique d'électrophorèse, une forme de réalisation préférée de l'invention fait appel à un balayage vidéo-électronique des échantillons placés sur le milieu-support qui ont été soumis à une électrophorèse. Un balayage vidéo-électronique est préféré du fait des problèmes bien connus que présentent les détecteurs à balayage de type connu. Un de ces problèmes vient de ce que le fenêtre de collimation doit avoir une largeur et une longueur de très précise. Si la longueur est trop grande, une partie de la lumière détectée peut en fait provenir d'un échantillon voisin. Si la longueur est trop petite, toute la lumière provenant de l'échantillon balayé peut ne pas être détectée. Avec une pluralité d'échantillons sur un plateau, il peut être nécessaire de changer les dimensions physiques de la fenêtre pour s'adapter aux

différents échantillons.

Si la largeur de la fenêtre est trop grande il est possible que la lumière venant de bandes adjacentes de la pluralité d'échantillons soumis à balayage optique, soit détectée, ce qui entraine une difficulté ou même une impossibilité de détermination des limites de l'échantillon concerné. Si la largeur de la fenêtre est trop petite, il est possible que le signal de sortie du détecteur soit erratique et ne fournisse pas

des résultats proportionnels corrects.

Un autre inconvénient du détecteur à fenêtre utilisé jusqu'à présent vient de ce que, afin de pouvoir observer l'échantillon tout entier il est nécessaire que chaque échantillon soit mécaniquement balayé en déplacant soit le détecteur soit le plateau d'échantillons. Ce mouvement doit se faire à une vitesse constante, exempte de toute vibration afin que les données numériques fournies par le convertisseur

analogique/numérique soient une représention précise de la densité opti-

que et de la taille physique des composants de l'échantillon.

Afin que la pluralité d'échantillons puisse être optiquement balayée, il est nécessaire que le détecteur ou le plateau d'échantillons puisse avancer d'un pas jusqu'à l'échantillon suivant et continuer le processus. Ce mouvement d'avancement par pas doit être précis et répétable afin d'être assuré que le détecteur est réellement en vue d'un

échantillon tout entier mais seulement de l'échantillon concerné.

OBJET DE L'INVENTION

En conséquence, l'objet général de la présente invention est de combiner dans un appareil unique, des moyens pour automatiquement appliquer une pluralité d'échantillons liquides à un milieu-support, des moyens pour automatiquement soumettre ces échantillons ainsi placés sur le milieusuppoprt à un processus d'électrophorèse, des moyens pour automatiquement colorer, incuber et sécher le milieu-support sur lequel les composants des échantillons liquides ont été séparés en bandes longitudinales, des moyens pour automatiquement balayer par voie électronique ces différentes bandes et des moyens pour automatiquement effectuer une analyse densimétrique des données qui résultent de tels

balayages, réalisant ainsi une analyse de chaque échantillon liquide.

Un autre objet de l'invention est de disposer d'un appareil et d'un procédé grâce auxquels le processus d'électrophorèse peut être accompli sans qu'il soit nécessaire d'immerger le milieu-support dans un liquide intermédiaire afin de constituer une interface électrique pour la source

de tension utilisée en électrophorèse.

Un autre objet de l'invention est de fournir des moyens pour

automatiquement colorer un milieu-support après l'étape d'électro-

phorèse, et, sans intervention humaine, appliquer le réactif au milieu-

support, incuber ce milieu puis le sécher.

Un autre objet de l'invention est de fournir des moyens pour balayer électroniquement le milieu-support préalablement coloré sans faire appel à une manutention humaine du milieu-support après l'étape de

coloration.

Une autre objet de l'invention est de fournir un procédé pour calibrer le système de balayage électronique utilisé pour analyser un

milieu-support préalablement soumis à une électrophorèse.

Un autre objet de l'invention est de combiner avec un appareil réduit un dispositif mécanique de balayage comportant un détecteur à fenêtre de type connu afin de constituer une variante de l'appareil, selon l'invention, pour appliquer automatiquement une pluralité d'échantillons liquides à un milieu-support, pour automatiquement soumettre ces échantillons à une électrophorèse, pour automatiquement colorer, incuber et sécher le milieu-support sur lequel les composants des échantillons liquides ont été séparés en bandes longitudinales et pour automatiquement balayer ces bandes avec le dispositif mécanique

de balayage équipé d'un détecteur à fenêtre.

BREVE DEFINITION DE L'INVENTION

Les objectif exprimés ci-dessus, de même que d'autres avantages et :aractéristlques de l'invention, sont réalisés dans une machine automatique d'électrophorèse qui rend entièrement automatiques les

opérations d'analyse par électrophorèse des échantillons liquides.

La machine comprend une embase sur laquelle un plateau d'application est disposé. Une bande de milieu-support en matériau microporeux est placée sur le plateau d'application. Une chambre de balayage enferme le plateau d'application. Un plateau d'échantillons liquides est supporté par l'embase en un emplacement longitudinalement séparé du plateau d'application. Le plateau d'échantillons comprend une pluralité de godets pour échantillons liquides, disposés en une ou plusieurs rangées transversales. Avant la mise en marche de la machine, des échantillons liquides à analyser sont placés dans les godets. Un robot de manutention est prévu qui se déplace en translation entre le

plateau d'échantillons et le plateau d'application, à travers une ouver-

ture pratiquée dans une paroi latérale de la chambre de balayage. Le robot de manutention porte une rangée' de pipettes, une ou plusieurs bouteilles de réactif de coloration et un ou plusieurs solénoïdes équipés

de noyaux plongeurs.

Sous la dépendance d'un ordinateur, les échantillons liquides du plateau d'échantillons sont appliqués en une rangée transversale à la surface de la bande de milieu-support. Des barres-électrodes coopérant avec des plots-électrodes aimantés verticaux établissent une nappe

transversale de courant électrique à travers la bande de milieu-

support pour longitudinalement déplacer par électrophorèse les composants des échantillons liquides, cependant que le plateau d'échantillons est

simultanément refroidi.

Sous la dépendance d'un ordinateur, du réactif est déversé depuis les bouteilles de réactif sur la surface de la bande-support, les noyaux plongeurs des solénoides sont actionnés et une barre-électrode est déplacée sur la surface de la bande de façon à étaler le réactif. Sous la dépendance d'un ordinateur, la bande-support est ensuite incubée et séchée. Une vidéo-caméra placée en haut de la chambre de balayage, éclairée par fluorescence, engendre un signal analogique

représentatif des composants longitudinalement déplacés des échantil-

lons liquides. Dans une variante, un dispositif de balayage mécanique, monté sur le robot de manutention, peut être utilisé pour produire ce signal analogique. Sous la dépendance d'un ordinateur, la représentation analogique des composants longitudinalement déplacés des échantillons liquides, est convertie en une représentation numérique de leur densité ou de leur intensité lumineuse en fonction de leurs coordonnées longitudinales et transversales sur le milieu-support. Des moyens de traitement par ordinateur déterminent la séparation transversale et la densité correspondante de chaque composant de chaque échantillon individuel.

BREVE DESCRIPTION DES DESSINS

Les objets,avantages et autres caractéristiques de l'invention, deviendront plus clairs en référence aux dessins annexés dans lesquels

une forme particulière de réalisation de l'invention est illustrée.

Dans ces dessins: La figure 1 est une vue perspective d'une machine automatique d'électrophorèse selon l'invention qui comporte un robot de manutention entre un plateau d'échantillons et un milieu-support microporeux placé dans une chambre de balayage optique, la porte avant de cette chambre ayant été enlevée pour permettre de montrer son intérieur; La figure lA représente une machine automatique d'électrophorèse associée à un ordinateur qui fournit des signaux de commande et de vérification aux circuits de commande et de vérification de la machine et qui réalise une analyse densimétrique des échantillons après balayage électronique; La figure 2 est une vue latérale en coupe partielle de la machine

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automatique d'électrophorèse, montrant le robot de manutention, le plateau d'échantillons avec ses cuvettes de lavage et sa zone de séchage, le plateau d'application de l'électrophrèse, le milieu-support microporeux, la chambre de balayage optique et la caméra-vidéo placée en haut de cette chambre; La figure 3 est une vue en plan de la machine automatique d'électrophorèse selon l'invention prise le long d'une ligne 3-3 tracée sur la figure 2, qui montre le plateau d'échantillons avec ses cuvettes de lavage et la zone de séchage, le milieu-support microporeux, la barre-électrode également et le robot de manipulation; La figure 3A est un schéma électrique montrant une source de tension

d'électrophorèse, disposée entre les paires de plots-électrodes aux ex-

trémités longitudinales du milieu-support et illustrant le courant d'élec-

trophorèse circulant en une nappe transversale à travers la dimension longitudinale du milieu-support; La figure 3B illustre l'application simultanée de courant à un dispositif de chauffage et de. refroidissement alterné, disposé sous le plateau d'application sur lequel le milieusupport est placé pendant l'application du courant d'électrophorèse et montre que ce courant peut être appliqué dans une direction opposée à ce dispositif pour obtenir un effet contraire; Les figures 3C et 3D représentent les barres selon l'invention utilisée soit en électrodes soit en épandeurs; La figure 3E représente le déplacement des composants des échantillons appliqués au milieu-support après la réalisation de l'étape d'électrophorèse; La figure 3F représente une autre manière d'appliquer le courant d'électrophorèse à un milieu-support; La figure 4 est une vue en bout prise le long d'une ligne 4-4 tracée sur la figure 2, qui montre à la fois le robot de manutention plus en détail, la construction d'un radiateur utilisé pour le refroidissement du plateau sur lequelle milieu-support microporeux est fixé et le système de conduits de séchage grâce auquel le milieu-support est séché après application du réactif et après incubation; Lha figure 5 est une vue d'en- dessous prise le long de la ligne 5-5 tracée sur la figure 2, qui montre le réseau de conduits grâce auquel le plateau d'application et le milieu- spport microporeux sont séchés et celui grâce auquel de l'air de refroidissement pris à l'extérieur de la machine traverse la radiateur afin d'emmener la chaleur dégagée par le plateau d'application pendant l'étape d'électrophorèse; ha figure 6 est une représentation schématique des circuits de commande numérique et de leurs interfaces avec les circuits du robot de manutention et ceux de la chambre d'électrophorèse; La figure 7 est une représentation schématique d'un ordinateur associé avec la machine automatique d'électrophorèse selon l'invention - illustrant ses interfaces avec les circuits de commande numérique de la machine, avec la caméra-video et avec.les dispositifs périphériques assurant les liaisons d'entrée et de sortie avec l'ordinateur; Les figures 8 à 13 sont des représentations des étapes au cours desquelles - le robot de manutention applique des échantillons au milieu-support microporeux puis un réactif à la fin de l'étape d'électrophorèse et de celles au cours desquelles le réactif est répandu sur le milieu-support microporeux, puis le balayage électronique du milieu-support est réalisé après incubation et séchage de ce milieu; Les figures 14A à 14F représentent le diagramme des étages fonctionnels du logiciel stocké dans la mémoire de l'ordinateur et celui des circuits de commande numérique du procédé automatique d'électrophorèse selon l'invention; La figure 15 A représente un milieu-support uniforme utilisé pour calibrer le système formé par la caméra-vidéo et son optique associée et montre les gabarits de l'ordinateur établis autour des pistes de balayage correspondant aux rangées d'échantillons d'un milieu-support d'électrophorèse réel; La figure 15 B représente des gabarits électroniques créés sous la commande de l'ordinateur pour produire des frontières de pixels autour de chacune des images électroniques des figures d'électrophorèse après la réalisation automatique du processus d'électrophorèse d'une pluralité d'échantillons; et La figure 16 représente une autre forme de réalisation de l'invention dans laquelle un dispositif mécanique de balayage optique est associé au robot de manutention pour constituer une variante à l'appareil selon les figures 1 à 15 qui comporte un dispositif

électronique de balayage par caméra-vidéo.

DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION

Robot de Manutention Selon la figure 1, la machine automatique d'électrophorèse 10 comporte une embase 16 sur laquelle est monté.un plateau d'échantillons 14 et une chambre d'électrophorèse 13 adaptée à recevoir un milieu-support microporeux 12. Les milieux-supports qui peuvent être utilisées dans un procédé d'électrophorèse comprennent de préférence un dos en MYLAR sur lequel un revêtement d'acétate de cellulose, d'aragose ou de gel d'agar est déposé. Une construction particulière du

milieu-support selon l'invention est décrite ci-après.

La machine automatique d'électrophorèse 10 comprend un robot de manutention 30 adapté à se déplacer longitudinalement entre le plateau d'échantillons 14 et la chambre d'électrophorèse 13. La machine 10 comporte une chambre de balayage 100 ayant une paroi latérale 106, une paroi d'entrée et une paroi arrière. La face avant de la chambre de balayage 109 comporte des rainures 104 dans lesquelles une porte (non représentée) peut être montée. Cette porte est enlevée pour donner accès à la chambre de balayage 100 et elle est mise en place pendant les étapes d'électrophorèse, de coloration et de balayage électronique des échantillons appliqués au milieu-support 12. La porte peut comporter un dispositif de sécurité de verrouillage en série avec l'alimentation à haute tension nécessaire à l'électrophorèse, de telle sorte que, porteouverte, la tension d'électrophorèse n'est pas appliquée à la chambre 13. Des lampes fluorescentes 110A - 11OD sont disposées en haut de la chambre de balayage afin d'éclairer en fluorescence le milieu-support 12 pendant le balayage électronique par l'ensemble caméra 114 et lentille 112, sous le contrôle de l'ordinateur 400 (voir fig. 1 A). Les circuits de commande numérique 300 utilisés pour commander le robot de manutention 30 et le processus d'électrophorèse seront discutés en détail ci-après. Un tube cathodique de visualisation 406 est monté sur la machine automatique d'électrophorèse et sous le contrôle de l'ordinateur 400, il fournit des informations de surveillance à l'opérateur. Selon la figure 2, une vue en coupe frontale de la machine 10 montre les détails du plateau d'échantillons 14, du robot de manutention 30, de la chambre d'électrophorèse 13 et de l'ensemble caméra 114et lentille 112, placé dans la chambre de balayage 100. La machine 10 comporte une embase 16 sur laquelle un plateau de montage horizontal 15 est disposé afin de supporter le plateau d'échantillons 14. Le plateau d'échantillons 14 est semblable à celui décrit dans la demande de

brevet français nO 87.05149 déposé le 10 avril 1987 par la demande-

resse. Cette demande est incorporée à la présente afin de montrer comment

sont automatiquement appliqués à un milieu-support éloigné, les échantil-

lons prélevés sur un plateau d'échantillons.

Le plateau d'échantillons 14; qui peut être pourvu manuellement en échantillons liquides avant d'être placé dans la machine 10, comporte deux rangées 26 et 28 de godets à échantillons dans lesquels des échantillons liquides sont placés en vue d'être automatiquement appliqués au milieu-support 12. Un espace de séchage 22 est prévu sur lequel du papier buvard peut être placé. Bien entendu plusieurs espaces de séchage peuvent être prévus qui comportent chacun leur feuille de papier buvard. Une cuvette de décharge et une cuvette de lavage 20 sont prévues sur le plateau d'échantillons 14 grâce auxquelles les pipettes 32 (comprenant des tubes et des pistons) portées par le robot de manutention 30 sont purifiées et les fluides en excès déversés au cours

de l'application automatique des échantillons.

Le groupe de pipettes 32 porté par le robot de manutention 30 est de construction et de fonctionnement semblables à celui qui est décrit dans la demande de brevet français n.87.05149 citée ci-dessus, laquelle à nouveau est incorporée à la présente pour présenter la construction et le fonctionnement du dispositif d'application automatique d'échantillons

depuis les godets d'échantillons des rangées 26 et 28 jusqu'au milieu-

support 12 disposé dans la chambre d'électrophorèse 13. Comme cela est représenté plus en détail sur les figures 2 et 4, le robot de

manutention 30 comprend un chassis 40 monté en translation sur des glis-

sières 34 au moyen de galets 36. Les glissières 34 sont supportées par l'embase 16. Comme cela se voit sur la figure 4, les galets 36 sont fixés au chassis 40 au moyen d'axes 38. Les galets 36 comportent des rainures dans lequelles les bords des glissières 34 sont insérés, ce qui permet au robot de manutention 30 d'être déplacé longitudinalement

entre le plateau d'échantillons 14 et la chambre d'électrophorèse 13.

Les glissières 34 sont portées par des pièces horizontales 4 fixées à

des pièces verticales 3 soutenues par l'embase 16.

Comme cela se voit sur la figure 4, un moteur 208 monté sur l'embase 16 comporte un arbre de sortie 209 sur lequel s'appuie une poulie d'entrainement 210. Comme cela se voit sur la figure 3, une poulie de retour 210A est placée à l'extrémité longitudinalement opposée de la machine. Une courroie continue 212 entrainée par la poulie 210 et enroulée autour de la poulie de retour 210 A est pincée par une extension 214 de l'arbre 38. De la sorte, par la mise en marche du moteur 208, la poulie 210 entraine la.courroie 212 autour de la poulie de retour 210 A, assurant par là la translation du robot de manutention auquel sont fixées les extrémités de la courroie 212, par rapport à

l'embase 16.

Comme représenté aux figures 2, 3 et 4, le robot de manutention 30 comporte un élément vertical 56 porté par le chassis 40. Des plateaux horizontaux 58 solidaires des éléments verticaux 56, supportent les arbres 52 d'une plateforme porte-bouteille 50 (voir fig. 4). Deux bouteilles de réactif liquide 48 sont fixées à la plateforme porte- bouteilles 50 par un ensemble de vis 61. Un moteur 60 d'épandage de réactif est monté sur le chassis 40 et son arbre de sortie est relié à l'arbre 52 de la plateforme porte-bouteilles 50. La mise en marche du moteur 60 amène le porte-bouteille 50 à tourner jusqu'à ce que le réactif de coloration contenu dans les bouteilles 48 soit déversé sur le milieu- support 12 lorsque le robot de manutention 30 a été placé

au-dessus de la chambre d'électrophorèse 13.

Comme cela se voit sur les figures 2 et 3, une plaque verticale 46 fixée au chassis 40 du robot de manutention 30, sert d'appui à deux solénoïdes 42. Chacun de ces solénoïdes comporte un noyau plongeur

terminé par un fourchette à deux doigts 44. Les doigts de cette four-

-25 chette 44 présentent un écartement 44A qui correspond au diamètre.des barres 74 et 76 utilisées en électrodes et en épandeurs dans la chambre d'électrophorèse qui sera décriteen détail ci-après. Ces fourchettes 44 sont en outre adaptées à s'engager dans des trous 93 pratiqués dans le

couvercle 92 de la chambre d'électrophorèse 13.

A partir de ce qui précède, on voit que le robot de manutention selon l'invention est adapté à se déplacer longitudinalement entre le plateau d'échantillons 14 et la chambre d'élctrophorèse 13 et qu'il comporte un ensemble de pipettes 32, une paire de solénoïdes 42 et une paire de bouteilles de réactif 48. La commande de I'ensemble de pipettes en vue de l'application d'échantillons liquides depuis les godets 26 et 28 jusqu'à la chambre d'électrophorèse, celle des solénoïdes 42 avec leurs fourchettes à'deux doigts 44 afin d'épandre le réactif et de fermer le couvercle 92 de la chambre d'électrophorèse 13 et celle des bouteilles de réactif 48 afin d'appliquer le réactif au milieu-support 12 sont décrits en détail ci-après en référence à la

figure 6.

Une autre caractéristique du robot de manutention 30 est décrite en référence aux figures 1, 2 et 4. Le robot de manutention 30 est adapté à se déplacer depuis l'extérieur de la chambre de balayage 100 jusqu'à son intérieur, à travers une ouverture 101 pratiquée dans la paroi d'entrée 102 de cette chambre. On peut voir que le sommet 32' de l'ensemble de pipettes possède un profil transversal qui correspond sensiblement à l'ouverture 101, lorsque le robot de manutention 30 pénètre à l'intérieur de la chambre de balayage. Pendant le balayage électronique du milieusupport 12 par la caméra 114 équipée d'une lentille 112, la lumière venant de l'extérieur de la chambre de balayage est presque totalement empêchée d'entrer dans cette chambre du

fait des dimensions extérieures du robot de manutention 30, qui corres-

pond à celles de l'ouverture 101 de la paroi d'entrée 102.

Chambre d'électrophorèse Selon les figure 2, 3 et 4, le plateau de montage 15 supporte un plateau d'application 80 qui est disposé transversalement entre les glissières de guidage 34 du robot de manutention, lequel peut se déplacer longitudinalement sur ces glissières 34, au-dessus du plateau d'application 80. Selon la figure 3, le plateau d'application 80 comporte au moins deux pointes 68 destinées à aligner et à fixer d'une manière amovible un milieu-support 12 tel qu'une feuille d'agarose. Une telle feuille comporte deux réservoirs à fluide 64A et 64B à ses extrémités longitudinales. Ces réservoirs à fluides sont chacun constitués par une bande transversale en surépaisseur du matériau gélatineux (tel que de l'agarose) formant le milieu-support 12.Ce milieu- support 12 comporte de préférence deux rangées transversales d'alvéoles 62 et 63 aménagées dans le matériau du milieu-support et

destinées à recevoir les échantillons qui seront soumis à l'électro-

phorèse.

La chambre d'électrophorèse 13 comporte une première et une seconde paire de plots-électrodes verticaux 94 et 96 s'étendant verticalement jusqu'au niveau du milieu-support 12 et par ailleurs transversalement disposées aux extrémités de ce milieu-support. Ces deux paires 94-96 de plotsélectrodes sont de préférence réalisées en un matériau conducteur de l'électricité constituant en outre un aimant permanent (du fer, par exemple). Deux barres 74 et 76 utilisables en électrodes et en épandeurs

sont disposées aux extrémités longitudinales du milieu- support 12.

Les barres 74 et 76 sont de préférences réalisées en un matériau ferromagnétique (fer ou acier). De la sorte, lorsque les barres 74-76 sont disposées comme sur la figure 3, elles sont maintenues en place par les paires de plots-électrodes aimantés 94-96 respectivement, grâce aux

forces d'attraction magnétique de ces plots 94-96 sur les barres 74-76.

La figures 3A montre les plots 94 connectés à la borne positive d'une source de potentiel d'électrophorèse VE et les plots 96 connectés à

la borne négative.

La barre 74 alimentée par la paire de plots 94 distribue transver-

salement un courant d'électrophorèse à la bande-réservoir 64A et au milieu-support 12. Ce courant se déplace longitudinalement en nappe transversale à travers le milieu-support 12 jusqu'à ce qu'il atteigne la bande-réservoir 64B d'o il passe à travers la barre-76 à la paire de

plots 96 complétant ainsi le circuit d'électrophorèse.

Les figures 3C et 3D montrent que les barres 74 et 76 peuvent être réalisées soit entièrement en matériau ferro-magnétique (en fer par exemple) comme cela se voit sur la figure 3 soit partiellement seulement (fig. 3C), avec une partie centrale en graphite ou en acier inoxydable et des extrémités en matériau ferro-magnétique. Sous l'influence du courant

d'électrophorèse s'écoulant à travers le milieu-support 12, les compo-

sants des échantillons liquides placés dans les rangées d'alvéoles 62 et 63 sont soumis à une électrophorèse longitudinale.La figure 3E illustre le déplacement des composants, dans le milieu-support 12, en bandes transversales 62A et 62B pour ce qui concerne la rangée d'alvéoles 62 et en bandes 63A et 63B pour les fluides contenus dans la rangée

d'alvéoles 63.

D'autres moyens pour établir un courant transversal à travers le milieusupport 12 à partir d'unebande-réservoir en surépaisseur 64A jusqu'à l'autre bande semblable 64B sont bien entendu possibles. A titre d'ensemble la figure 3F représenté des charnières conductrices 75 et 77

respectivement connectées aux bornes d'une source de potentiel VE.

Les charnières s'écartent du plateau 80 préalablement découvert pour permettre d'y placer le milieu-support 12. Ce milieu-support étant en place, les charnières sont abaissées afin d'établir un contact électrique

avec les bandes en surépaisseur 64A et 64B respectivement.

Lorsque les composants des échantillons liquides déposés dans les alvéoles des rangées 62 et 63 ont été longitudinalement déplacés comme cela est représenté par les tracés des figures 3A et 3E, le milieu- support 12 doit ensuite être coloré au moyen d'un réactif de

coloration préalablement appliqué, incubé et sèché, avant que ces compo-

sants puissent être balayés optiquement comme cela sera expliqué ci-

après.

Afin que l'étape d'électrophorèse puisse être exécutée plus rapidement grâce à l'application d'un courant d'électrophorèse plus élevé (qui entraine un échauffement par effet Joule du milieu-support 12 et du plateau d'application 80), des dispositifs thermo-electriques 70 de refroidissement et de chauffage alterné sont disposés sous.le plateau d'application 80 (deux de ces dispositifs sont ici représentés parmi les six utilisés). Les dispositifs thermo-électriques 70 sont de préférence des éléments Peltier. De tels éléments ont pour fonction de transférer la chaleur depuis leur surface supérieure vers leur surface

inférieure lorsqu'ils sont parcourus par un premier courant et de réa-

liser un transfert inverse lorsqu'ils sont parcourus par un second cou-

rant de sens oppposé au premier. Le schéma électrique de la figure 3B

montre que l'application d'un premier courant aux dispositifs 70 trans-

fère la chaleur depuis le plateau d'application 80 jusqu'à un radiateur

84 thermiquement et mécaniquement raccordé à sa face inférieure. Un se- -

cond courant circulant dans la direction opposée, transfère de la

chaleur depuis le radiateur 84 jusqu'au plateau d'application 80.

La figure 4 montre clairement l'emplacement des dispositifs Peltier sous le plateau d'application 80, les conducteurs métalliques 82 et le radiateur à ailettes 84 placés sous ces dispositifs 70. Un isolant 78 remplit l'espace compris entre les dispositifs thermo-électriques 70 et

autour d'eux.

Comme cela se voit sur la vue en coupe de la figure 5, le radiateur

à ailettes 84 est disposé à l'entrée d'un conduit de refroidissement 206.

De l'air de refroidissement est aspiré dans le conduit 206 par des ventilateurs 204, qui passe au travers des ailettes du radiateur 84 et s'échappe à l'arrière de la machine automatique d'électrophorése 10, à travers un conduit de sortie 208. Quand les circuits représentés aux figures 3A et 3B sont activés, c'est-à-dire pendant le processus d'électrophorèse, un courant est appliqué dans le premier sens aux d'électrophorèse, un courant est appliqué.dans le premier sens aux dispositifs thermo-électriques Peltier 70, grâce à quoi la- chaleur engendrée par le processus d'électrophorèse est transférée à l'extérieur de la machine 10 par l'air de refroidissement venant du conduit 206 et sortant par le conduit 208, sous l'action des ventilateurs de refroidissement 204. Le dispositif de refroidissement ainsi représenté apporte à la machine 10 l'avantage de pouvoir opérer avec un courant d'électrophorèse plus élevé, ce qui réduit d'autant le temps nécessaire à l'exécution de l'étape d'électrophorèse. La chaleur supplémentaire créée par un tel courant plus élevé est effectivement évacuée par les

éléments Peltier 70 opérant en dispositif de refroidissement.

Après exécution de l'étape d'électrophorèse et de celles de l'application et de l'étalement du réactif sur la surface du milieu-support 12, toutes étapes qui seront décrites en détail ci-après, il est nécessaire d'incuber le milieu-support 12 en même temps que le réactif de coloration étalé sur sa surface. Une telle incubation comprend tout d'abord la fermeture du couvercle 92 afin de constituer

en chambre close la chambre d'électrophorése 13.

Selon la figure 4, deux poutres horizontales 88 montées sur le plateau d'application 80 encadrent ce plateau. Des rainures longitidinales 90 sont pratiquées dans ces poutres 88, le couvercle 92 étant adapté à coulisser dans ces rainures 90 afin de couvrir ou de découvrir le plateau d'électrophorèse 80. La figure 3 présente le couvercle 92 en position ouverte et montre des trous 93 aménagés à son extrèmité, ces trous étant adaptés à coopérer avec les doigts de la fourchette 44 du noyau plongeur des solénoides 42 pour ouvrir ou fermer

le couvercle 92.

Comme cela a été indiqué ci-dessus, les éléments Peltier 70, alimentés par un courant électrique de direction opposée à celle qui les fait opérer en dispositifs de refroidissement, produisent de la

chaleur pendant les étapes d'incubation et de séchage du milieu-support.

Lorsque l'on applique un tel courant de chauffage (voir fig. 3B et 6) de la chaleur est directement transmise au plateau 80, età travers lui, au rilieu-support 12 afin d'incuber le réactif de coloration-étalé sur ce milieu-support. Les figures 2,3 et 4 montrent les moyens grâce auxquels de l'air de sèchage est appliqué à la surface du milieu-support 12, après que l'étape d'incubation a été exécutée. Des fenêtres longitudinales étroites 86 sont pratiquées sur les bords du plateau 80 en dehors de la zone sur laquelle le milieu-support 12 est disposé. De telles fenêtres se voient sur la figure 3 et elles apparaissent en coupe sur la vue enbout du plateau d'application représenté à la figure 4. Sur cette figure, la fenêtre 86 de droite communique avec un conduit d'entrée de séchage 98

et la fenêtre 86 de gauche, avec le conduit de sortie de séchage 99.

Un élément chauffant 202 et un ventilateur de séchage 200 sont placés dans le conduit d'entrée de séchage 98. Ce conduit d'entrée de séchage est tenu par une équerre 218 fixée sur une ailette du radiateur métallique 84. Le conduit de sortie de séchage est de même

fixé par une équerre 216 à une autre ailette du radiateur 84.

Pendant l'étape de séchage, de l'air est introduit depuis l'avant de la machine, au moyen du ventilateur de séchage 200, à travers le conduit d'entrée de séchage 98 et l'élément chauffant 202, appliquant

ainsi de la chaleur sèche à la surface du milieu-support 12.

Chambre de balayage En référence aux figures 2 et 4, la chambre de balayage -100 comporte quatre lampes à fluorescence ultraviolette 110Aà 11OD montées suivant les côtés d'un carré, au proche voisinage de la paroi supérieure 109 de cette chambre. Une caméra-vidéo 114 équipée d'une lentille 112 est montée sur la paroi supérieure 109 de la chambre 100 en regard de

la surface du milieu-support 12 disposé dans lachambre d'électrophorèse.

Pendant l'opération de balayage de ce milieu-support, le couvercle 92 a été déplacé vers l'extérieur et, par ailleurs, la lumière extérieure à la machine est empêchée d'y pénétrer grâce à la présente d'une plaque opaque insérée dans les rainures 104 représentées à la figure 1 et grâce au robot de manutention 30 obturant aussi complètement que possible l'ouverture 101 pratiquée dans la paroi d'entrée 102 de la machine. Circuits de commande et interfaces La figure 6 illustre sous forme de blocs-diagrammes, les interconnections entre les circuits de commande numérique 300 représentés à la figure 1 et les éléments du robot de manutention 30 qui en contrôlent les déplacements. Différents circuits d'information et de commande disposés à l'intérieur de la chambre d'électrophorèse 13 sont également illustrés. Les circuits de commande numérique 300 sont connectés à l'ordinateur associé 400 au moyen d'un bus 410. La liaison entre l'ordinateur 400 et les circuits 300 est représentée physiquement à la figure 1A et schématiquement aux figures 6 et 7 qui seront

* commentées plus en détail ci-après.

Les circuits de commande numérique 300 comporte une unité centrale de traitement (CPU) 301 qui, de préférence, est un microprocesseur du type MC 6802, frabriqué et commercialisé par Motorola. Une mémoire passive (ROM) 302 est prévue pour stocker les instructions du logiciel de commande. Une mémoire active (RAM) 303 est prévue pour stocker les données temporaires. Un interface d'entrée/sortie (VIA) 304 comporte un interface programmable d'entrée/sortie et un circuit de cadencement utilisé pour établir des fonctions de commande de sortie, de communication et/ou de vérification d'entrée ainsi que des intervalles de temps programmables. Un convertisseur numérique/analogique (DAC) 305 est utilisé pour fournir des tensions analogiques aux circuits analogiques de la chambre d'électrophorèse 13. Un convertisseur analogique/numérique (ADC) 306 est utilisé pour fournir des signaux numériques de vérification à partir de circuits situés dans la chambre d'électrophorèse. Un interface entrée/sortie principal (I/0) 328 placé en série est utilisé pour interfacer les commandes d'entrée et les signaux de sortie entre l'ordinateur 400 et les circuits 300, à travers lie bus 310. Un bus de données 320 est prévu à titre de connexion numérique bidirectionnelle entre les éléments CPU, ROM, RAM,.VIA, CNA et CAN visés ci-dessus et le circuit interface d'entrée/sortie principal 328. Un bus d'adresse 330 est utilisée à titre de connexion numérique unidirectionnelle depuis le CPU 301 jusqu'aux cicrcuits 302 à. 306, ROM, RAM, VIA, DAC et ADC et l'interface d'entrée/sortie principal 328. Le bus d'adresse 330 est utilisé par le CPU 301 uniquement pour sélectionner un dispositif à partir duquel ou auquel des données numériques seront transférées. Un bus d'interface de sortie 331 connecté au circuit 304 est utilisé pour relier la sortie numérique du CPU à l'entrée numérique des circuits contrôlés par le CPU. De même, le bus d'interface d'entrée 332 est utilisé pour cbnnecter le moniteur et les circuits de détection à l'entrée numérique du CPU à travers le circuit

interface d'entrée 304.

On va maintenant s'intéresser au robot de manutention 30 dans lequel cinq éléments séparés sont contrôlés: le chassis 40, les tubes et les pistons des pipettes de l'ensemble 32, la plateforme

porte-bouteilles 50 et les solénoïdes 42. Une description détaillée du

système de contrôle des tubes et des pistons des pipettes ne sera pas fournie ici puisqu'en effet elle apparait dans la demande de brevet

français nO 87.05149 visée ci-dessus.

La commande du chassis- 40 est faite au moyen d'un circuit 307 d'alimentation et de freinage du moteur 208. Le détecteur de position 316 représenté schématiquement à la figure 6, est physiquement réalisé au moyen de la came des. échantillons 201, de la came d'application 203 et des contacteurs électriques de fin de course 205 et 207 représentés à la figure 3. Le détecteur de position fonctionne en comptant les interruptions des contactBurs 205. et 207 lorsqu'ils franchissent les

bossages de la came d'échantillons 201 et de la came d'application 203.

Le circuit 308 d'alimentation et de freinage du moteur de déplace- ment des tubes des pipettes et leur détecteur de position 317 tout comme le circuit semblable 309 afférent aux pistons des pipettes et leur détecteur de position 318, sont décrits dans la demande de brevet

français visée ci-dessus.

En ce qui concerne, la plateforme 50 portant les bouteilles de réactif 48, un circuit 310 d'alimentation de moteur placé sous la dépendance du CPU 301 et du circuit VIA 304, est prévu pour faire tourner le moteur 60 dans l'une ou l'autre direction lorsque le chassis est placé au-dessus du milieu-support 12 et que le couvercle 92 est dégagé.Un contacteur électrique (non représenté) sert de détecteur de position 319 associé à l'arbre 52 de la plateforme

porte-bouteilles 50 (voir fig. 4).

Un circuit 311 d'alimentation des solénoides 42 est prévu qui commande l'enfoncement de la fourchette 44 lorsqu'un signal de commande

lui est appliquée.

Un circuit de sécurité 323 est prévu sous le plateau d'échantillons 124 afin de signaler au CPU via l'interface d'entrée/sortie 304 que le plateau 14 est en position et que la machine 10, est prête à recevoir un

signal de commande de démarrage venant de l'ordinateur 400.

Dans la chambre d'électrophorèse 13 sont disposés une source de haute tension 325 et un circuit 326 de surveillance de cette source qui sont utilisés pour fournir un courant d'électrophorèse au milieu-support 12, comme cela est illustré à la figure 3A. La source de haute tension 325 fonctionne en réponse à une commande venant du CPU 301 à travers le convertissseur DAC 305, le bus 333 et le circuit de sécurité 373 de la porte de la chambre de balayage. Le signal de surveillance provenant du circuit de surveillance 326 est appliqué au

convertisseur ADC 306 via le bus 334.

De même, un circuit de surveillance de température 327 applique son signal analogique au convertisseur ADC 306 via le bus 334 afin d'être pris en compte par le CPU 301. Le capteur de température 327 apparait dans la chambre d'électrophorèse 13 représentée à la figure 2. Les signaux de contrôle numérique adressés aux éléments Peltier 70 opérant en dispositif de refroidissement ou de chauffage, sont appliqués depuis un bus de sortie 331 jusqu'à un circuit 313 de commande de chauffage et

à un circuit 314 de commande de refroidissement.

Le circuit 315 d'alimentation des lampes fonctionne en réponse à des commandes numériques transmises via le bus 331 et il alimente les

lampes 110OA à 110OD placées dans la chambre de balayage 100.

On va maintenant s'intéresser à la figure 7. Selon cette figure, une représentation schématique des éléments de l'ordinateur 400 montre ses connexions avec les circuits de commande numérique 300 via l'interface d'entrée/sortie principal 328et le bus 410. Un interface d'entrée/sortie 401 est disposé entre le bus 410 et l'ordinateur 400. De préférence l'ordinateur 400 est un "Personal Computer" tel que le Compact Desk Pro Model (Marque déposée). L'ordinateur 400 est utilisé pour communiquer les ordres adressés, par l'opérateur du système de la figure 1A, à la machine automatique d'électrophorèse 10 et pour reporter à cet opérateur les données produites par cette machine, pour analyser les données numériques stockées dans l'ordinateur et pour produire des rapports comprenant à la fois des graphiques et des textes à l'intention

de l'opérateur, au moyen de dispositifs de sortie adaptés à cet effet.

L'opérateur communique avec l'ordinateur au moyen du clavier 407 et inversement l'ordinateur communique avec l'opérateur par le moyen d'une imprimante 408. Un tube cathodique de visualisation de textes 405 peut être associé à l'ordinateur 400 cependant qu'un autre tube cathodique de visualisation de graphiques peut être connecté à la machine automatique

d'électrophorèse 10, comme cela est illustré à la figure 1A.

Balayage électronique et calibration La caméra-vidéo 114 est de préférence un tube vidicon de télévision qui produit une tension analogique représentative des pixels successivement balayés. Un numérisateur d'images 403 sert d'interface a la caméra 114 pour convertir son signal analogique de sortie en un signal numérique. De plus le numérisateur d'images 403 stocke ce signal

numérique dans une mémoire 405 laquelle par la suite, fournit les rap-

ports d'analyse sous forme de graphiques et de textes.

En fonctionnement, la caméra 114 voit une surface quelque peu similaire à la figure 35 après que le processus d'électrpphorèse et de coloration a été automatiquement exécuté sous le contrôle de l'ordinateur 400 et des circuits numériques de commande 300. Lorsque les lampes fluorescentes 11OA-11OD sont allumées, la caméra balaie la totalité du milieu-support 12 et produit un signal analogique vidéo et des signaux de synchronisation. L'amplitude instantanée de cette tension vidéo est une représentation de la valeur de la lumière émise par la sur face du milieu- support; cette tension analogique de sortie est alors convertie, comme indiqué plus haut, en une représentation numérique constituée par une matrice de 512 colonnes et de 512 rangées de pixels, au moyen du numérisateur d'images 403. Les signaux de synchronisation sont utilisés pour rattacher les données analogiques à des emplacements

précis sur le milieu-support 12.

Avant que le plateau d'échantillons 14 ne soit mis en place et avant quel'opération automatique d'électrophorèse ne commence dans la machine 10, une calibration de la caméra 114 équipée de sa lentille 112 est réalisée. Une telle calibration corrige les effets paraboliques non-linéaires qui peuvent produire une réponse non. uniforme des niveaux d'intensité des pixels individuels qui forment la matrice à 512 colonnes

et 512 rangées, élaborée par le numérisateur d'images 403.

Afin de calibrer l'ensemble caméra 114 et lentille 112, un milieu-support de référence 12' tel que représenté à la figure 15A est placé dans la chambre de balayage 100.sur le plateau d'application 80. Le milieusupport de référence 12' est un milieu-support sur lequel aucun échantillon n'a été appliqué et qui n'a, bien entendu, pas été soumis à une électrophorèse, à uneincubation ou à une coloration. ha porte frontale de la chambre de balayage 100 est fermée et le robot de manutention 30 est introduit dans l'ouverture 101, de façon à simuler les conditions réelles de balayage pour lesquelles la lumière extérieur est

en pratique empêchée de pénétrer dans la chambre de balayage 100.

Ensuite les lampes à fluorescence ultra-violette 110A - 110OD sont allumées et l'ensembe caméra 114 et lentille 112 mis en marche. Le numérisateur d'images 403 (voir fig. 7) reçoit une vue complète du plateau, gràce àquoi les intensités respectives des pixels de référence

(matrice 512 x 512) sont stockées dans la mémoire 409.

Ensuite, des gabarits 801, 802----815 représentés à la figure 15A sont électroniquement définis sous le contrôle de l'ordinateur 400 afin d'encadrer les quinze plages de balayage correspondant aux quinze lignes d'échantillons d'un milieu-support réel 12, placésur le plateau d'application 80. La hauteur ou la dimension en y de chaque plage est approximativement le quinzième de la hauteur de la matrice stockée dans la mémoire 409 (soit approximativement 34 pixels). La largeur ou la dimension en x de chaque plage est égale à la largeur totale (soit 512 pixels) de la matrice stockée dans la mémoire d'images 409. Ces quinze plages correspondent à la position des quinze lignes d'échantillons étalés sur un milieu-support après électrophorèse qui, par la suite,

feront l'objet d'un balayage électronique.

* Dans chacune des quinze plages, les données en deux dimensions représentatives de l'intensité des pixels de référence sont converties en une suite de données à une dimension en additionnant et en moyennant les valeurs des pixels dans chacune des 512 colonnes verticales, à l'intérieur de chacune des plages de 34 pixels. De la sorte, pour chaque plage et pour chaque colonne verticale, les intensités des 34 pixels de chaque plage sont additionnées et le résultat est divisé par le nombre de rangées de pixels dans 1a plage soit 34. En fin de compte,

chacune des quinze plages est représentée par un vecteur de rang repré-

sentatif des intensités moyennes en fonction de la dimension en x des pixels depuis x = i jusqu'à x = 512. Une recherche parmi toutes ces intensités moyennes de cette matrice de 15 x 512 valeurs d'intensité moyenne est alors effectuée pour en déterminer la plus grande, IMAX. Ensuite, chaque intensité de pixel moyen dans la matrice de 15 x 512 valeurs d'intensité moyenne, est divisée par la valeur IMAx.Et chaque élément de la matrice est remplacé par le résultat de cette division. De la sorte, chaque élément de la matrice devient un facteur de correction qui, par la suite, sera appliqué à un milieu-support réel au cours d'opérations de balayage de milieux-supports 12 ayant été soumis aux différentes étapes d'un processus complet d'analyse par

électrophorèse automatique.

La figure 15B représente les gabarits électroniques tels que 601, 612, 616 et 623 qui sont formés sous le contrôle d'un ordinateur

programmé pour définir automatiquement les zones d'analyse de chacun des-

512 x 512 pixels stockés dans la mémoire du numérisateur d'image 403,

pour un milieu-support réel 12 ayant subit une électrophorèse automa-

tique. La dimension axiale y des gabarits est la même que celle de chacun des autres plages de calibration décrites ci-dessus en référence de la figure 15A. Par exemple, le gabarit 601 est agencé pour encadrer le tracé longitudinal d'électrophorèse de l'échantillon placé

sur le milieu-support 12 dans l'alvéole 701. Du fait que le milieu-

support 12 est physiquement situé en un emplacement prédéterminé sur le

plateau d'application 80 et du fait que l'ensemble caméra 114 et len-

tille 112 est fixe par rapport au plateau d'application 80, le gaba-

rit électronique 601 est assuré de précisément encadrer le tracé d'électrophorèse de l'échantillon liquide placé dans l'alvéole 701. Des

gabarits électroniques sont prévus pour. ehacun des échantillons.

Les données dans chacun des gabarits sont ensuite moyennées sur les pixels des y rangées à l'intérieur du gabarit, afin de produire une représentation unique de la densité, en fonction de la distance x d'étalement de l'électrophorèse pour chacun des échantillons. Ensuite, la valeur d'intensité moyenne pour chaque pixel de position x dans chaque gabarit, est multipliée par le facteur de correction correspondant, stocké dans la matrice de facteurs de correction décrite plus haut. Ces données sont alors stockées suivant un format déterminé dans la mémoire 409 de l'ordinateur 400 dans lequel une analyse densimétrique peut alors être réalisée. Le brevet américain nO 4.242.730 appartenant à la présente demanderesse, décrit un densimètre piloté par ordinateur. Ce brevet, incorporé aux présentes à titre de document annexe, décrit comment des représentations numériques d'échantillons balayés peuvent être traitées pour fournir une représentation analogique sur un tube cathodique, tel que la tube 405 représenté à la figure 1A. Un opérateur peut ensuite commander l'édition de la courbe de densité représentée sur

le tube.

Il est avantageux d'utiliser une caméra-vidéo ou un dispositif semblable tel qu'une barrette d'éléments photosensibles à charge capacitive CCD parce que le plateau d'échantillons tout entier peut être balayé en une trentième de seconde. Un tel balayage produit des informations concernant tous les échantillons. Les données peuvent être organisées par l'ordinateur en un réseau à deux dimensions, ce qui permet à l'ordinateur non seulement de définir les.composents longitudinaux individuels de l'échantillon mais également de déterminer exactement les frontières de l'échantillon dans le cas o les séparations de l'échantillon ne se sont pas produites d'une manière parallèle. De plus, les données relatives aux échantillons peuvent être améliorées en enlevant ou en réduisant les sources de bruit en répétant

le balayage et en en moyennant les résultats.

Balayage mécanique Il peut y avoir des circonstances dans lesquelles les avantages d'un balayage électronique d'un milieu-support venant d'être soumis à une électrophroèse, ne sont pas évidents. Des coûts de fabrication plus faibles peuvent imposer le montage d'un dispositif de balayage mécanique 500 équipé d'un détecteur à fenêtre de type connu, sur un robot de manutention 30' représenté à la figure 16. La machine automatique d'électrophorèse 10' représentée à la figure 16 est sensiblement la même que la machine 10 de la figure 1, sous réserve qu'un dispositif de balayage 900, par détecteur électronique à déplacement mécanique, a pris la place du dispositif de balayage électronique fixe, constitué

parl'ensemble caméra-vidéo 114 et lentille 112 de la figure 1.

Le dispositif de balayage 900 est de préférence monté sur l'avant du robot de manutention 30' et il comprend un tube fluorescent fixe 901, un collimateur 903 et un tube photomultiplicateur 905. Le tube 901 est disposé à l'intérieur d'un capot 906. Le collimateur 903 est engagé dans une découpe transversale 904 pratiqué dans le capot 906 et est disposé en regard du milieu-support 12 pendant une opération de balayage. Le photomultiplicateur 905 produit un signal analogique représentatif de la

lumière qui lui est transmise à travers le collimateur 903.

Un moteur (non représenté) placé sous le contrôle d'un microprocesseur est prévu pour déplacer pas à pas le détecteur formé par le collimateur 903 et le tube photomultiplicateur 905. Ce détecteur est de la sorte déplacé transversalement au-dessus du milieu-support

12 après l'application des échantillons fluides, l'électrophorèse, l'éta-

lement de réactif de coloration, l'incubation et le séchage, comme cela a été décrit ci-dessus. Un cable électrique souple 907 est prévu entre le tube photomultiplicateur 905 et un convertisseur analogique/numérique (non représenté), pour transmettre les signaux de balayage à l'entrée de l'ordinateur 400. Le câble de liaison 907 peut égalEvent être relié aux

circuits de commande numérique 300 (voir fig. 6) pour commander l'al-

lumage de la lampe fluorescente 901 pendant les étapes de balayage.

L'avancement longitudinal pas-à pas au-dessus du milieu-support 12 pendant le balayage est réalisé en déplaçant par bonds le robot de manutention 30' sous l'action du moteur 210 (voir fig. 3). Comme cela

a été montré ci-dessus, le dispositif de balayage 900, équipé d'un détec-

teur à fenêtre de collimation, produit des signaux électriques représen-

tatifs de l'intensité des composants longitudinalement séparés d'échan-

tillons soumis à une électrophorèse et à une coloration, après avoir été

disposés sur un milieu-support 12.

La figure 16 représente le robot de manutention 30' avant qu'il ait été translaté au-dessus du milieu-support 12. On notera que la chambre de balayage 909 peut être moins haute que la chambre de balayage 100 de la figure 1, du fait qu'il n'y a pas d'ensemble caméra-lentille dans le

dispositif de balayage de l'appareil de la figure 15.

Fonctionnement de la machine d'électrophorèse Après mise en place par l'opérateur du plateau d'échantillons 14 sur l'embase de la machine 10 (voir figure 1) et d'une bande de milieu-support 12 sur le plateau applicateur 80 (voir fig. 3) une porte est fermée à l'avant de la chambre de balayage 100 et l'opérateur envoie un ordre de démarrage au moyen du clavier 407 de l'ordinateur 400. Les échantillons liquides à analyser ont été préalablement placés dans les deux rangées de godets 26 à 28 du plateau d'échantillons 14, chacune de ces rangées comprenant de préférence quinze godets séparés. Un échantillon liquide de référence peut être placé dans un de ces godets à fin de comparaison d'analyse. De mème,du papier buvard a préalablement été placé sur l'espace de séchage 22 etla cuvette de lavage 20 apréalablement été remplie d'eau de lavage. La mise en -place du plateau d'échantillons 14 sur l'embase de la machine 10 provoque l'envoi d'un signal par le bus 332 aux circuits de commande numérique 300 représentés à la figure 6. L'ordinateur 400 reçoit alors un signal lui indiquant que le processus automatique peut être mis en oeuvre

sous contrôle numérique.

Les figures 8 à 13représentent les étapes principales de processus automatique d'analyse par électrophorèse des échantillons liquides

placés dans les godets des rangées 26 et 28 du plateau d'échantillons 14.

La figure 8 montre l'ensemble de pipettes 32 aspirant une quantité prédéterminée de liquide dans chacune des pipettes individuelles. Cette opération est décrite en détail dans la demande de brevet français citée

ci-dessus déposée par la demanderesse.

La figure 9 montre que le robot de manutention 30 s'est déplacé longitudinalement jusqu'à la zone occupée par le milieu-support 12 et que des échantillons de fluides sont appliqués en rang sur la surface de ce milieu-support. On notera que le couvercle 92 de la chambre

d'électrophorèse est alors dans la position ouverte.

La figure 10 montre la fermeture du couvercle 92 après que les fourchettes 44 ont été actionnées par les solénoïdes 42 et ont été engagées dans les trous 93 pratiqués dans le couvercle 92. La figure 10 montre également que le robot de manutention 30 s'est déplacé longitudinalementet s'est engagé dans la chambre d'électrophorèse,

fermant ainsi le couvercle 92.

On supposera qu'après la fermeture du couvercle 92, le processus d'électrophorèse des échantillons a été exécuté. Ce processus a déjà été décrit ci-dessus mais en résumé on rappellera qu'il comprend l'application d'une tension d'électrophorèse au milieu-support au moyen, de plots et de barres-électrodes. En même temps que cette tension d'électrophorèse appliquée au milieu-support 12, du courant est appliqué au dispositif Peltier 70 de refroidissement/chauffage. Le refroidissement du milieu-support 12 permet d'utiliser un courant d'électophorèse plus élevé, ce qui a pour résultat d'augmenter la vitesse de réalisation du

processus d'électrophorèse.

La figure 11 représente l'application du réactif de coloration 47 à partir des bouteilles 48 le contenant. Le réactif contenu dans ces bouteilles 48 est déversé sur la surface du milieu-support 12 en tournant le porte-bouteilles 50 au moyen du moteur 60. La figure 11 indique que le couvercle 92 a préalablement été placé dans sa position

ouverte, par une opération inverse de celle décrite à la figure 10.

La figure 12 illustre l'étalement du réactif sur la surface du milieusupport 12. De préférence, cet étalement est réalisé par l'activation des fourchettes 44 de telle sorte que les deux doigts de chacune de ces fourchettes soient engagés autour d'une barre telle que 76. Le robot de manutention 30 est alors mis en marche. Il se déplace longitudinalement au-dessus du milieu-support 12, entrainant ainsi la barre 76 en rotation sur ce milieu-support, ce qui a pour effet d'étaler le réactif sur la surface de ce milieu-support. En lieu et place de cette barre 76, il aurait bien entendu été possible d'utiliser de la

même façon la barre 74.

Ensuite, le. couvercle 92 est placé dans une position fermée, à

l'occasion d'une opération semblable à celle représentée à la figure 11.

Les étapes d'incubation puis de séchage peuvent alors commencer. Au

cours de l'étape d'incubation, le dispositif Peltier 70 fonctionne en.

inverse, de telle sorte que de la chaleur soit transmise au plateau d'application 80 pendant un intervalle de temps prédéterminé. Au cours de l'étape de sèchage, de l'air chaud et sec est amené à travers un conduit sur le milieu-support comme cela apparait plus clairement sur la

figure 4.

Après l'exécution des étapes d'incubation et de séchage, le balayage électronique du milieu-support 12, toujours en place sur le plateau d'application 80, commence. Comme le montre la figure 13, l'ensemble caméra 114 et lentille gi2 produit un signal analogique représentatif du champ de vision du milieu-support 12 illuminé par les lampes fluorescentes 110A-110D. Une image de ce signal peut être représentée sur un tube cathodique 406 directement monté sur la machine 10. La figure 13 montre également que le robot de manutention 30 est engagé dans l'ouverture 101 de la paroi d'entrée de la chambre de balayage 100, ce qui à pour effet de sensiblement réduire la quantité de lumière qui pénètre dans le chambre de balayage pendant le balayage

optique réalisé par la caméra-vidéo 114.

Commande par ordinateur de la machine Les figures 14A-14F représentent le diagramme des étages fonctionnels des commandes de la machine 10. La figure 16A montre qu'un signal émis par l'ordinateur 400 est appliqué aux circuits de commande numérique (300) afin de commander automatiquement l'exécution du processus d'électrophorèse. L'étage fonctionnel 500 correspond à la mise

au repos de l'ensemble des- pipettes, tubes levés et pistons descendus.

Une telle opération est décrite dans la demande de brevet français cité plus haut à titre de référence. Le chassis 40 est amené dans sa position initiale en appliquant un signal de commande au circuit 307 d'alimentation et de freinage du moteur et en détectant sa position grâce au détecteur de position 316. Ensuite l'ordinateur attend un signal de départ via l'interface entrée/sortie principal 328,comme cela est indiqué en 501. L'ordinateur détermine alors au moyen de l'étape logique 502 si le plateau d'échantillons 14 a été placé sur le plateau de la machine. Si un signal est fourni par le circuit de sécurité 323, la commande du processus continue. Si un tel signal est absent, un signal d'erreur est adressé à l'ordinateur 400 afin qu'un message signalant cette erreur soit imprimé ou visualisé à l'intention de l'opérateur de la machine. Comme cela se voit sur la ligne 14B, l'étage 'fonctionnel 503 applique des échantillons liquides pris dans les godets 26 ou 28 sur le milieu-support 12. Comme indiqué,les fonctions de nettoyage et de séchage des cols de pipettes précèdent l'application des échantillons sur le milieu-support et sont renouvelées après chaque application. Les échantillons liquides des godets de la rangée 28 sont alors appliqués aux rangs 63 des alvéoles d'échantillons du milieu-support 12. Les cols de pipettes sont à nouveau nettoyés. Comme indiqué, ces étapes de nettoyage, de séchage et d'application sont semblables à celle décrites dans la demande de brevet français cité ci-dessus. Ensuite dans l'étage fonctionnel 505, les tubes des pipettes de l'ensemble de pipettes 32

sont levés et les pistons descendus.

Comme cela est représenté à la figure 14C, une série d'étapes 506 sont réalisées sous le contrôle des circuits de commande numérique 300 afin de fermer le couvercle 92 sur la chambre d'électrophorèse 13. Ces étapes commencent avec l'étage fonctionnel 507 dans lequel le chassis 40 est déplacé afin de mettre le couvercle 92 en position ouverte. Ensuite au cours de l'étape 508 le courant est appliqué au circuit 311 d'alimentation des solénoides42 de façon que les doigts 44 de la fourchette soient descendus jusqu'à s'engager dans les trous 93 pratiqués dans le couvercle 92. Ensuite, dans l'étage fonctionnel 509, le chassis 40 est introduit dans la chambre d'électrophorèse 13, afin de mettre le couvercle 92 en position fermée. Dans l'étage fonctionel 510, le circuit 311 d'alimentation des solénoïdes 42 est bloqué, cequi a

pour effet d'amener la fourchette 44 à reprendre sa position de repos.

Dans l'étage fonctionnel 511, le chassis 40 est déplacé jusqu'à ce qu'iL

prenne sa positon d'attente.

Les étages fonctionnels 512. sont misen oeuvre pour, àla fois, appliquer un courant d'électrophorèse au milieu-support 12 et refroidir ce milieusupport, L'étage fonctionnel 513 détermine la longueur de l'intervalle de temps d'application du courant d'électrophorèse et, en outre, ajuste et applique une haute tension entre les paires' de plots-électrodes 94 et 96. Dans l'étage fonctionnel 514, le circuit de commande de refroidissement 314 est activé afin de mettre en marche le

dispositif de refroidissement à effet Peltier 70 et le ventilateur 204.

L'étage fonctionnel 516 surveille la tension fournie par le circuit 325 (voir fig. 6), vérifie le temps d'électrophorèse et ensuite coupe la

tension et le refroidissement.

Selon la figure 14D, les étages fonctionnels groupés sous la référence 517 décrivent les étapes nécessaires pour ouvrir le couvercle 92. Ces étapes sont semblables à celles mise en oeuvre pour fermer ce couvercle et ne seront donc pas décrites plus en détails. Les étages fonctionnels regroupés sous la références 518 produisent les commandes pour appliquer le réactif de.coloration sur la surface du milieu-support i2. Dans l'étage fonctionnel 519, le chassis 40 est déplacé jusqu'au milieu- support 12 de façon à occuper une position médiane au-dessus de ce milieu, entre les barres 74 et 76. Dans l'étage fonctionnel 520, le moteur de commande de basculement du support 50 des bouteilles 48 est misen marche, ce quià pour effet de déverser du réactif sur la surface supérieure du milieu-support 12. Après cela, ce même moteur est alimenté à sens inverse, ce qui a pour effet d'amener le porte-bouteilles 50 dans

sa position de repos.

Lesétages fonctipnnels groupés sous la référence 521 décrivent les étapes nécessaires pour étaler le réactif de coloration sur la surface supérieure du milieu-support 12. Dans l'étage 522, le chassis 40 est

26282 15

déplacé jusqu'à ce que les solénoïdes 42 soient directement au-dessus de la barre 74. Dans l'étage 523, le circuit 311 d'alimentation des solénoïdes 42 est activé de façon que les doigts de la fourchette 44 soient abaissés jusqu'à être engagés autour de la barre 74. Dans l'étage fonctionnel 524, le chassis 40 est déplacé vers. la seconde rangée d'alvéoles 63 du milieu-support 12 puis ramené dans l'autre sens jusqu'à ce que la barre 74 utilisée ici en épandeur soit en

contact avec les plots-électrodes aimantés 94. Le circuit 311 d'ali-

mentation des solénoïdes est alors bloqué dans l'étage fonctionnel 525, ce qui a pour effet d'amener la fourchette 44 à reprendre sa position de repos. Les étages fonctionnels 526, 527, 528 et 529 commandent l'étalement du réactif de coloration en déplaçant la barre 76 utilisée

en épandeur sur la surface du milieu-support puis en ramenant les four-

chettes 44 des solénoïdes dans leur position de repos.

Le couvercle 92 est alors fermé dans l'étage fonctionnel 530, identique à ceux référencés 506, mis en oeuvre plus tôt au cours du

processus automatique.

Selon la figure 14E, le processus continue dans les étages fonctionnels regroupés sous la référence 531 et une imprégnation du milieu-support 12 par le réactif liquide est réalisée. Les circuits de commande numérique 300 fonctionnent dans ces étages 531 et laissent s'écouler un temps suffisant entre le moment d'application du réactif sur la surface du milieu-support et le moment de démarrage de la période d'incubation. Les étapes successives regroupées- sous la référence 532 et collectivement appelées Incubation de Coloration, comportent tout d'abord une étape 533 de détermination du temps d'incubation puis une étape 524 de détermination de la température d'incubation. Le circuit 313 de - chauffage d'incubation est mis en marche au cours de l'étape 535. Les étapes 536 consistent à surveiller la température d'incubation mesurée par le capteur 327 et à adresser une commande aux etages

fonctionnels de séchage 538.

Les étages fonctionnels 538, collectivement appelés Séchage, comportent tout d'abord des étages 539 et 540 dans lesquels le temps de séchage et la température de séchage sont déterminés. Dans l'étage 541, les circuits 340 de commande de séchage sont activés afin de mettre en marche le dispositif de chauffage 202 et les ventilateurs 200. L'étage fonctionnel 542 surveille la température de séchage mesurée par le capteur 327 et le temps de séchage. L'étage 543 coupe ensuite le circuit

313 de chauffage d'incubation et le circuit de séchage 340.

La figure 14F montre qu'ensuite le couvercle 92 est à nouveau ouvert sous le contrôle des étages fonctionnels collectivement référencés 544. Ces étages sont identiques à ceux référencés 517 ci-dessus. Ensuite l'étage fonctionnel 545 entre en jeu, grace à quoi l'ordinateur 400 détermine si les lampes 100A-lOOD sont allumées. S'il n'en est pas ainsi, l'ordinateur 400 produit un signal à l'intention de l'étage fonctionnel 546 qui en réponse, allume ces lampes. Dès réception d'un signal fourni par l'étage fonctionnel 547 indiquant que les lampes sont allumées, la suite des commandes est transmise à l'étage fonctionnel 548 dans lequel les signaux d'image fournis par la

caméra-vidéo 114 sont produits puis stockés dans la mémoire associée.

Les lampes 110 A-110l D sont alors éteintes sous la commande de l'étage

fonctionnel 549.

L'ordinateur 400 réalise ensuite un traitement de densimétrie sur les données disponibles. Ce traitement est fait dans l'étage fonctionnel 550 en accord avec les procédés connus de détermination des densités relatives des composants d'échantillons qui ont été longitudinalement séparés les uns des autres au cours d'un processus d'électrophorése. Des résultats graphiques sont affichés sur les tubes cathodiques 405 et 406 et des rapports sont édités par l'imprimante 408, comme cela est indiqué

par les étages fonctionnels 551 et 552.

Diverses modifications peuvent être apportées à la machine automatique d'électrophorèse selon l'invention décrite ci-dessus et à son procédé de mise en oeuvre. Ces modifications sont évidentes pour l'homme de métier et ne s'écartent bien entendu pas de l'esprit de

l'invention. La description ci-dessus a été fournie pour présenter une

forme de réalisation préférée de l'invention et elle doit être

interprétée à titre d'exemple non limitatif.

Claims (28)

REVENDICATIONS

1. Appareil d'électrophorèse de genre comprenant un plateau d'application(80) disposé sur une embase (16), un milieu-support microporeux (12) ayant des dimensions longitudinales et transversales, fixé d'une manière amovible sur ledit plateau (80) et des moyens pour longitudinalement appliquer un courant d'électrophorèse audit milieusupport en une nappe transversale uniforme, caractérisé en ce qu'il comprend des moyens (30-32) de manutention pour déposer automatiquement au moins un échantillon liquide sur ledit milieu-support (12) ainsi

placé sur ledit plateau (80).

2. Appareil selon la revendication 1 caractérisé en ce que ledit milieusupport (12) comporte à ses extrémités longitudinales, deux bandesrésevoirs (64 A et 64 B) en matériau électriquement conducteur et

en ce que lesdits moyens pour appliquer un courant d'électrophorèse-

audit milieu-support comprennent deux systèmes d'électrodes (74-94/75

et 76-96/77) disposés transversalement par rapport audit milieu-

support et adaptés à être respectivement mis en contact avec lesdites

deux bandes-réservoirs.

3. Appareil selon la revendication 2, caractérisé en ce que lesdites systèmes d'électrodes comportent chacun une paire d'électrodes (94-96) disposées près des bords transversaux opposés desdites bandes-réservoirs (64A et 64B) et une barre-électrode (74-76) adaptée à être à la fois placée d'une manière amovible au travers dudit milieu-support (12) et en contract électrique à la fois avec une'

desdites paires d'électrodes (94-96) et avec une desdites bandes-réser-

voir (64 A-64 B).

4. Appareil selon la revendication 2 caractérisé à ce que les deux systèmes d'électrodes comprennent chacun un élément latéral (75-77) adap té à être alternativement placé dans une position ouverte autorisant la

mise en place manuelle dVdit milieu-support (12) sur le dit plateau d'ap-

plication (80) et dans une position fermée, en contact électrique avec ladite bande-réservoir (64a-64b), mettant ainsi ledit milieu-support (12)

en circuit avec ladite source de tension électrique (VúE).

5. Appareil selon la revendication 1 caractérisé en ce qu'il com-

prend des moyens automatiques (30-50-60) pour appliquer audit milieusupport (12) placé sur le plateau d'application (80), un réactif de

coloration après passage du courant d'électrophorèse.

6. Appareil selon les revendications 3 et 5 caractérisé en ce que,

auxdits moyens pour appliquer un réactif de coloration (48) sur la surface dudit milieu-support (12) sont associés des moyens (30-42) de manutention automatique pour déplacer une desdites barres-électrodes (74- 76) au travers de la surface dudit milieu-support (12) entre les dites bandes-réservoirs (64A-64B) après application dudit réactif et

pour ramener la barre-électrode concernée à sa position initiale,.

au-dessus d'une desdites bandes-réservoirs en contact avec l'une des

deux paires d'électrodes (94-96).

7. Appareil selon la revendication'1 caractérisé en ce qu'il comprend des moyens thermo-électriques de transfert de chaleur (70-84) en contact thermique avec le fond dudit plateau d'application (80) et des moyens (314) pour appliquer un courant électrique auxdits moyens thermoélectriques (70) de manière qu'au moins une partie de la chaleur résultant du passage du courant d'électrophorèse,dans ledit milieu- support (12) disposé sur ledit plateau d'application (80) soit

évacuée par lesdits moyens thermoélectriques (70).

8. Appareil selon la revendication 7 caractérisé en ce que lesdits moyens thermoélectriques de transfert de chaleur comprennent: au moins un élément Peltier (70) fixé audit plateau d'application (80), des moyens (314) pour appliquer audit élément Peltier un courant électrique ayant une première direction afin de refroidir ledit plateau d'application (80), un conduit (206-208) disposé sous ledit plateau d'application établissant un passage d'air entre une entrée et une sortie d'air pratiqué dans l'enbase (16) dudit appareil, un radiateur (84) en contact thermique avec ledit élément Peltier (70) disposé dans le passage d'air établi par ledit conduit (206-208) et un ventilateur (204) pour produire un courant d'air entre ladite entrée et ladite

sortie d'air et autour dudit radiateur (84).

9. Appareil selon la revendication 5 caractérisé en ce qu'il comporte des moyens automatiques pour faire incuber sur place ledit milieu-support (12) après application dudit réactif, comprenant des moyens (90-92) pour enfermer ledit milieu-support (12) dans une enceinte et des moyens (70) pour chauffer ladite enceinte, disposés en

contact thermique avec ledit plateau d'application (80).

10. Appareil selon la revendication 9 caractérisé en ce que lesdits moyens pour enfermer ledit milieu-support (12) comprenant un cadre (88-89) solidaire dudit plateau d'application (80) et entourant ledit milieusupport (12), un couvercle plat (92) est adapté à glisser dans des rainures (90) pratiquées dans les deux morntants longitudinaux (88) dudit cadre, de manière à enfermer ledit milieu-support ou à le laisser

à découvert.

11. Appareil selon la revendication 10 caractérisé en ce qu'il comporte des moyens (30-42-93) de manutention automatique pour déplacer

ledit couvercle plat (92) entre ses positions ouverte et fermée.

12. Appareil selon la revendication 9 caractérisé en ce que les moyens pour chauffer ladite enceinte sont des élements Peltier (70) associés à des moyens (313) pour leur appliquer pendant un intervalle de temps déterminé un courant électrique d'une seconde direction, de façon à chauffer la face desdits éléments placés en contact thermique

avec le fond.dudit plateau d'application (80).

13. Appareil selon la revendication 9 caractérisé en ce qu'il comprend des moyens de séchage pour faire sècher sur place ledit milieu-support (12) après incubation dudit réactif de coloration et

dudit milieu-support.

14 Appareil selon le revendication 13 caractérisé en ce que lesdits moyens de séchage comprennent des moyens pour faire passer de l'air sec sur ledit milieu-support incluant: deux fenêtres (86) d'entrée et de sortie pratiquéesdans ledit plateau d'application (80), un conduit d'entrée (98), un conduit de sortie (99), un ventilateur (200) et un

élément chauffant (202) disposé dans ledit conduit d'entrée (98).

15. Appareil selon la revendication 13 ou 14, caractérisé en ce que lesdits moyens de séchage sont placés sous la dépendance de moyens de commande automatique déterminant le moment de leur mise en marche et la

durée de leur fonctionnement.

16. Appareil selon la revendication 3, caractérisé en ce que lesdites paires d'électrodes (94-96) sont constituées par des plots aimantés et en ce que lesdites barres-électrodes (74-76) comprennent,

au moins à leurs extrémités, des sections en matériau ferromagnétique.

17. Appareil selon la revendication 1, caractérisé en ce que lesdits moyens de manutention automatique pour déposer au moins un échantillon liquide sur ledit milieu-support (12) comprennent un plateau d'échantillons (14) comportant au moins un godet (26/28) rempli

d'échantillon liquide, ledit plateau d'échantillons étant longitudinale-

ment disposé sur ladite base (16) et séparé dudit plateau d'application

(80), des glissières (34) fixées à ladite base (16), un robot de manu-

tention (30) supporté par lesdites glissières et adapté à se déplacer

longitudinalement entre.ledit plateau d'échantillons (14) et ledit pla-

teau d'application (80), un ensemble de pipettes (32) solidaire dudit robot de manutention (30), adapté à prélever un échantillon liquide dans ledit godet (26/28) lorsque ledit robot de manutention (30) est longitudinalement disposé au-dessus dudit plateau d'échantillons (14) et à appliquer ledit échantillon liquide sur ledit milieu-support (12) lorsque ledit robot de manutention (30) est longitudinalement

disposé au-dessus dudit plateau d'application (80).

18. Appareil selon la revendication 5 caractérisé en ceque lesdits moyens automatiques pour appliquer un réactif de coloration audit milieu-support (12) comprennent des glissières -(34) fixées à ladite base (16), un robot de manutention (30) supporté par lesdites glissières, adapté à se déplacer longitudinalement au-dessus dudit plateau d'application (80), un dispositif porte-bouteilles (50) solidaire d'un arbre de rotation (52) monté tournant dans des paliers (58) supportés par ledit robot (30), au moins une bouteille de réactif (48) placée d'une manière amovible sur ledit dispositif porte-bouteilles (50) des moyens (60) pour faire tourner ledit dispositif porte-bouteilles autour de son arbre lorsque ce dispositif est longitudinalement disposé au-dessus dudit milieu-support d'électrophorèse (12), grâce à quoi le réactif contenu dans ladite bouteille estdéversé sur la surface dudit

milieu-support d'électrophorèse.

19. Appareil selon la revendication 6 caractérisé en ce que les moyens pour déplacer ladite barre-électrode au travers dudit milieu-support comprennant unrobot de manutention (30)supporté par des glissières (34) solidaires de l'embase (16) et adapté à se déplacer longitudinalement audessus dudit plateau d'application (80), au moins un solénoide (42) étant monté sur ledit robot (30), ledit solénoïde étant équipé d'un noyau plongeur muni d'une fourchette (44) à deux doigts, des moyens étant prévus pour déplacer ledit robot (30) jusqu'à ce que ledit noyau plongeur soit situé au-dessus d'une desdites barres-électrodes (74-76), pour activer ledit solénoïde (42) de façon que les doigts de ladite fourchette (44) s'engagent autour de la barre-électrode (74-76) concernée et finalement pour faire avancer ledit robot (30) vers l'autre barre- électrode et pour le ramener à sa position initiale, grâce à quoi le réactif liquide est étalé sur la surface dudit

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milieu-support (12).

20. Appareil selon la revendication 11 caractérisé en ce que lesdits moyens de manutention automatique pour déplacer le couvercle (92) de l'enceinte enfermant le milieu-support d'électrophorèse (12) comprennent au moins un trou (93) aménagé à une extrémité longitudinale dudit couvercle, un robot de manutention (30) supporté par des glissières (34) solidaires de l'embase (16), et adapté à se déplacer

longitudinalement depuis une position écartée dudit plateau d'appli-

cation (80), au moins un solénoïde (42) monté sur ledit robot (30), ledit solénoïde étant équipé d'un noyau plongeur dont l'extrémité est adaptée à s'engager dans ledit trou (93) lorsque ledit solénoïde est activé, des moyens pour déplacer ledit robot (30) jusqu'à ce que ledit noyau plongeur soit disposé au-dessus dudit trou (93), activer ledit solénoide (42) afin que ledit noyau plongeur s'abaisse et s'engage dans ledit trou et, dans cet état, déplacer ledit robot (30) et ledit couvercle (92) entre les positons ouverte et fermée dudit couvercle. 21 Appareil selon la revendication 1 caractérisé en ce qu'il comporte des moyens pour colorer, incuber et sécher automatiquement sur place ledit milieu-support (12) et des moyens pour engendrer

automatiquement sur place une image de la surface dudit milieu-support.

22. Appareil selon la revendication 21 caractérisé en ce qu'il comprend des moyens pour créer automatiquement un gabarit électronique autour de l'image électronique du tracé longitudinal formé par les composants de l'échantillon liquide soumis à une électrophorèse et des moyens de traitement pour déterminer, à partir de ladite image comprise dans ledit gabarit, un signal représentatif de la densité optique desdits composants, en fonction de leur déplacement longitudinal sur

ledit tracé.

23. Appareil selon la revendication 21 caractérisé en ce qu'ii comprend au-dessus du plateau d'application (80) une chambre de balayage fermée (100), équipée d'une ouverture d'entrée adaptée a être sensiblement obturée par lesdits moyens de manutention (30)- et d'une paroi latérale amovible pour permettre la mise en place d'un milieu-support (12) sur ledit plateau d'application, la paroi supérieure de ladite chambre de balayage supportant des moyens d'éclairage fluorescent (110) et des moyens de balayage optique (114-112) de la surface dudit milieu-support (12) ainsi éclairé en fluorescence, afin d'engendrer des signaux représentatifs de l'image du tracé des composants de l'échantillon liquide soumis à une électrophorèse.

24. Appareil selon les revendications 22 et 23 caractérisé en ce

que lesdits moyens de balayage optique comprennent une caméra-vidéo

(114) et en ce que lesdits moyens de traitement sont adaptés à traiter.

les signaux produits par ladite caméra-vidéo de façon à déterminer la séparation transversale et la densité optique correspondante desdits

composants longitudinalement séparés le long desdits tracés.

25. Appareil selon la revendications 23 caractérisé en ce que

lesdits moyens de balayage optique comprennent un capot (900) comportant une fenêtre transversale étroite (904), ledit capot étant adapté à être déplacé au-dessus dudit milieu-support (12), un tube fluorescent (901) étant disposé à l'intérieur dudit capot, un collimateur (903) engagé dans ladite fenêtre (904) avec une extrémité regardant ledit milieu-support (12) éclairé par ledit tube fluorescent et l'autre débouchant sur un photomultiplicateur (905), ledit collimateur étant adapté à être déplacé le long de ladite fenêtre (904) de façon à engendrer une suite de signaux représentatifs des intensités des points

lumineux vus au travers dudit collimateur.

26. Milieu-support d'électrophorèse comprenant un matériau microporeux conducteur de l'électricité ayant des dimensions longitudinales et latérales, caractérisé en ce que ledit matériau est solidaire d'un dos en matériau isolant et en ce que ledit milieu-support (12) comporte à ses extrémités longitudinales une bande-réservoir (64A-64B) en matériau conducteur de l'électricité, transversalement 5.disposée et, parailleurs, électriquement reliée audit matériau microporeux. 27. Milieu-support d'électrophorèse selon la revendication 26 caractérisé en ce qu'il comporte entre lesdites bandes-réservoirs (64A-64B),au moins une alvéole adaptée à recevoir un échantillon

liquide.

28. Milieu-support d'électrophorèse selon la revendication 26 caractérisé en ce que ledit matériau microporeux est de l'agarose et ledit dos isolant une feuille de Mylar, ledit matériau étant un revêtement d'épaisseur uniforme disposé sur ladite feuille pour former une surface plane, lesdites bandes-réservoirs présentant une

surépaisseur par rapport à ladite surface plane.

29. Procédé pour déterminer les teneurs en composants d'un échantillon liquide au moyen d'un appareil d'électrophorèse comportant un plateau d'application longitudinalement disposé sur une embase un milieu-support d'électrophorèse fixé d'une manière amovible sur la face supérieure dudit plateau d'application, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes: - appliquer automatiquement un échantillon liquide audit milieu-support ainsi placé sur ledit plateau d'application; - appliquer automatiquement un courant longitudinal d'électrophorèse

audit milieu-support ainsi placé, de façon à produire un tracé longi-

tudinal formé des composants dudit échantillon liquide déplacés par électrophorèse; - automatiquement colorer, incuber, et sécher ledit milieu-support ainsi placé et - automatiquement engendrer une image électronique de la face

supérieure dudit milieu-support ainsi placé.

30. Procédé annexe de mise en oeuvre d'un système d'analyse optique

comprenant une chambre de balayage en fermant un plateau adapté à rece-

voir un milieu-support, ledit milieu-support comportant une pluralité

de lignes d'échantillons transversalement espacées, s'étendant longitu-

dinalement au travers dudit milieu-support, ledit système comprenant des moyens d'éclairage par fluorescence montés fixes dans ladite chambre de balayage afin d'éclairer par fluorescence ledit milieu-support et un dispositif capteur d'image dirigé vers ledit milieu-support pour engendrer des signaux vidéo représentatifs de l'intensité lumineuse des pixels dudit milieu-support, ledit système comprenant en outre des moyens de traitement informatique adaptés à mettre en mémoire une matrice des signaux-pixels représentatifs de ladite intensité lumineuse, ledit procédé annexe ayant pour objet de produire une matrice de correction des effets non-linéaires des signaux vidéo produits par ledit dispositif capteur d'images est caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes - placer un milieu-support de référence sur ledit plateau; - illuminer ledit milieu-support de référence avec lesdits moyens d'éclairage fluorescent; engendrer des signaux vidéo représentatifs de l'intensité lumineuse des pixels de la surface dudit milieu-support de référence; - stocker dans lesdits moyens de traitement informatique, une matrice de signaux pixels correspondant aux niveaux d'intensité lumineuse des pixels de la surface du milieu-support de référence; - séparer ladite matrice de signaux-pixels en une pluralité de lignes

longitudinales comprenant chacune une pluralité de rangées de pixels cor-

respondants auxdites lignes d'échantillons; - former la moyenne des signaux-pixels transversaux pour chaque ligne et pour chaque position longitudinale de la matrice - stocker une matrice d'intensité moyenne incluant une valeur de pixel d'intensité moyenne pour chaque ligne, à chaque position longitudinale de la matrice; - repérer dans chaque matrice d'intensité moyenne, lé pixel ayant la plus grande valeur d'intensité moyenne; - diviser chaque valeur de pixel d'intensité moyenne par ladite plus grande valeur d'intensité moyenne et - remplacer chaque valeur d'intensité de ladite matrice d'intensité moyenne par le résultat d'une telle division pour créer une matrice de correction. 31. Procédé pour déterminer les teneurs en composants d'un échantillon liquide au moyen d'un appareil d'électrophoèse comportant un plateau d'application longitudinalement disposé sur une embase et un milieu-support d'électrophorèse fixé d'une manière amovible sur la face

supérieure dudit plateau d'application, ledit milieu-support com-

portant un pluralité de lignes d'échantillons transversalement espacées

s'étendant longitudinalement au travers dudit milieu-support, ledit ap-

pareil comportant une chambre de balayage enfermant pratiquement ledit milieu-support, des moyens d'éclairage fluorescent montés fixes dans ladite chambre pour illuminer en fluorescence ledit milieu-support d'élec

trophorèse et un dispositif capteur d'image dirigé vers ledit milieu-sup-

port afin d'engendrer des signaux vidéo représentatifs de l'intensité lumineuse des pixels de surface dudit milieu-support préalablement soumis à une électrophorèse, ledit appareil comprenant en outre un ordinateur équipé de mémoires, ledit procédé étant caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes: - illuminer ledit milieu-support préalablement soumis à une électrophorèse avec lesdits moyens d'éclairage fluorescents; - engendrer des signaux d'image représentatifs de l'intensité lumineuse des pixels de surface dudit milieu-support ainsi illuminé; - stocker dans ladite mémoire- d'ordinateur une matrice des signaux - pixels des niveaux d'intensité desdits signaux d'image; - séparer ladite matrice de signauxpixels en une pluralité de lignes longitudinales comprenant une pluralité de rangées de signaux- pixels correspondant auxdites lignes d'échantillons; - former la moyenne des signaux-pixels transversaux de chaque ligne à chaque position longitudinale de la matrice; - stocker une matrice d'intensité moyenne incluant une valeur d'intensité moyenne de pixels pour chaque ligne à chaque position longitudinale de la matrice; multiplier chaque élément de la matrice, d'intensité moyenne par un élément correspondant d'une matrice de correction préalablement mise en mémoire à la suite de la mise en oeuvre du procédé selon la revendication 30; - de remplacer chaque élément de ladite matrice d'intensité moyenne par le produit d'une telle multiplication, afin de produire une matrice d'intensité corrigée des pixels dudit milieu-support

préalablement soumis à une électrophorèse.

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328 302I 1 32

I I

Circuit Détecteur 1329- 303 Commande Position ICirculits M voteur: Commande 309 318, Numérique R.A.M. SUPPOKl KUAl1it 50 Circuit Détecteur 1 30M0 l-1 Command Position I oo L ? oteur /

--330 60 319 I

[31o, OLElNUiUb$.4

304 4

Commande I

3 304 1

Interfaces ROBOT MANUTENTION 0 CPU Entrée / 1331 - Sortie = - -r

313 31 315

IIj1 Circuit Circuit rct (;nauf. el / | I l I 1 1 1 701| -_ __ ? If l _, Circuit 110 F 305 A-OD Securi tes I 373 - secna Plateau Convert. I I i,,, 32 Echantillons jCnv e t.- CAircuit I,325 L I333 |Haute Tension Surveillance 1 j 306 Surveillance 4 Survellanc Température 327 1 Cnvert 326 '

_ A/N',34 CHAMBRE D'ELECTROPHORESE 13

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FIG. 14A

ORDINATEUR

LEVER TUBES

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ABAISSER P[STONS

___. __500

PLACER CHASSIS 40

EN POSITION DE REPOS

D/ \ Non Départ ?

1 5

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FG14C c

DEPLACER CHASSIS 40 SUR

POSITION OUVERTE COUVERCLE 92 507

lF

AI IMENTER SOLENOIDES 42

POUR ENGAGER DOIGTS 44 08

DANS TROUS 93 COUVERCLE 92

l FERMER

DEPLACER CHASSIS 40 POUR COUVERCLE

FERMER COUVERCL.E 92 509

I l 506

DECONNE.CTER SOLENO1IDES 42 506

POUR DESENGAGER DOIGTS 44 510

DES TROUS 93 COUVERCLE 92

I

DEPLACER CHASSIS 40 SUR

POSITION ATTENTE

FIXER DUREE ELECTROPHORESE

REGLER PUIS APPLIQUER

HAUTE TENSION A 513

PLOTS-ELECt'RODES 94-96

I BRANCHER CIRCUIT 314 POUR

ACTIVER PELTIER-VENTIL.204 514 512

2 Oui ELECTROPHORESE

"T O.. * AVEC

REFROIDISSEMENT

on16 O.3 ui

CO AJUP.ER HAUTE TENSION

DEBRANCHER PELTIER 70

s

FIG. 14D

DEPLACER CHASSIS 40 SUR POSITION FERMEE COUVERCLE 92

ALIMENTER SOLENOIDES 42 POUR ENGAGER

DOIGTS 44 DANS TROUS 93 COUVERCLE 92

DEPLACER CHASSIS 40 SUR POSITION OUVERTE COUVERCLE 517

OUVRIR

DCONNECTER-S-OLENOIDE42-P OUL-R --5Ef'NG-E- COUVERCLE

DOIGTS 44 DES TROUS 93 COUVERCLE 92

PLACER CHASS-- -40-N P F i N--U'I-9

PLACER CHASSIS 40 AU-DESSUS MILIEU- SUPPORT 12 519

ALIMENTER MOTEUR 60 DU SUPPORT DE REACI'IF POUR 518

DEVERSER REACTIF SUR SURFACE MILIEU-SUPPORT 12 APPLIQUER

__- _ ___ ___ ___ __REACTIF

PLACER CHASSIS 40 AU-DESSUS BARRE 74 522

ALIMENTER SOLENOIDES 42 POUR ENGAGER DOIGTS 4423

AUTOUR BARRE-EPANDEUR 74

DEPLACER CHASSIS 40 SUR ALVEOLES 63 PUIS RAMENER 524

DECONNECTER SOLENOIDES 42 POUR RAMENER DOIGTS 44

EN POSITION DE REPOS - _525

PLACER CHASSIS AU-DESSUS BARRE 76 526 ETALER

ALIMENTER SOLENOIDES 42 POUR ENGAGER DOIGTS 44 REACTIF

AUTOUR BARRE-EPANDEUR 76 527

DEPLACER CHASSIS 40 SUR ALVEOLES 62 PUIS RAMENER -528

DECONNECTER SOLENOIDES 42 POUR RAMEN-ER DOIGTS 44

EN POSITION DE REPOS 29

DEPLACER CHASSIS 40 SUR POSITION OUVERTE COUVERCLE

ALIMENTER SOLENOIDES 42 POUR ENGAGER

* DOIGTS 44 DANS TROUS 93 DU COUVERCLE 92

DEPLACER CHASSIS 40 SUR POSITION COUVERCLE EERME 530

DECONNECTER SOLENOIDES 42 POUR RAMENER DOIGTS 44 FERMER

EN POSITION DE REPOS COUVERCLE

PLACER CHASSIS 40 EN POSITION D'ATrENTE

FIG. 14 E

FIXER DUREE IMPREGNATION

Non IMPREGNATION

REACTIF

Fui

FIXER DUREE INCUBATION 533

FIXER TEMPERATURE INCUBATION 53

INCUBATION

DE COLORATION

[AJUSTER T"MPERATURE 313 536

Non F

FIXER DUREE SECHAGE

FIXER TEMPERATURE SECHAGE 5

ACTIVER CIRCUITS 340 POUR

ALIMENTER RAD.202-VENT.200

543 538

SECHAGE

COUPER CIRCUIT 31:

OHAUFF.INCUB.

COUPER CIRCUIT

340 SECHAGE

542 AJUSTER TEMPERATURE

F = Non F i Z'SSIdNJ Q1flS SLIOddVl 90t'HIVD S311,--lS I{ M3W1MdS | lqS S"lOIHdV iD - ÂlOWL3WISN3O

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